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MXPA02000054A - Conjugados de farmaco-oligomero anfifilicos con componentes lipofilos hidrolizables y metodos para preparar y usar los mismos. - Google Patents

Conjugados de farmaco-oligomero anfifilicos con componentes lipofilos hidrolizables y metodos para preparar y usar los mismos.

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MXPA02000054A
MXPA02000054A MXPA02000054A MXPA02000054A MXPA02000054A MX PA02000054 A MXPA02000054 A MX PA02000054A MX PA02000054 A MXPA02000054 A MX PA02000054A MX PA02000054 A MXPA02000054 A MX PA02000054A MX PA02000054 A MXPA02000054 A MX PA02000054A
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MX
Mexico
Prior art keywords
drug
group
oligomer conjugate
peg
insulin
Prior art date
Application number
MXPA02000054A
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English (en)
Inventor
Nnochiri Ekwuribe
Original Assignee
Nobex Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

En terminos generales, la presente invencion se refiere a conjugados farmaco-oligomero hidrolizables, composiciones farmaceuticas que comprenden dichos conjugados, y metodos para preparar y usar dichos conjugados y composiciones farmaceuticas; por ejemplo, un conjugado de insulina, PEG y acido oleico se puede administrar oralmente.

Description

CONJUGADOS ANFIFILICOS FARMACO-OLIGOMERO CON COMPONENTES LIPÓFILOS HIDROLIZABLES, Y MÉTODOS PARA PREPARAR Y USAR LOS MISMOS 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN En términos generales, la presente invención se refiere a conjugados fármaco-oligómero hidrolizables, composición farmacéuticas que comprenden dichos conjugados, y a métodos para preparar y usar dichos 10 conjugados y composiciones farmacéuticas. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Muchos péptidos y proteínas (denominados aquí colectivamente , | 15 como "polipéptidos") son potencialmente útiles como agentes terapéuticos, i pero se carece de un método de administración adecuado para los mismos.
* La utilidad de los polipéptidos como agentes terapéuticos está limitada por las barreras biológicas que deben atravesar antes de alcanzar su objetivo especifico in vivo. Los polipéptidos administrados parenteralmente 20 son metabolizados rápidamente por las proteasas del plasma. La administración oral, que es quizás es la vía de administración más atractiva, es aun más problemática. En el estomago, los polipéptidos administrados oralmente están expuestos a proteólisis enzimática y degradación acida. La supervivencia en el intestino es aun más improbable debido a proteólisis excesiva. En el lumen, los polipéptidos son continuamente atacados por una variedad de enzimas que incluyen enzimas gástricas y pancreáticas, exo- y endopeptidasas, y peptidasas del borde en cepillo. Como resultado, el pasaje de polipéptidos del lumen a la corriente sanguínea es severamente limitado. Por lo tanto, existe la necesidad en la técnica de medios que permitan la administración parenteral y oral de polipéptidos terapéuticos. 2.1 Vías de administración de fármacos de polipéptido Los problemas asociados con la administración oral y parenteral de los polipéptidos son bien conocidos en la industria farmacéutica. Se han usado varias estrategias para intentar mejorar la administración oral y parenteral de los polipéptidos. Se han investigado incrementadores de penetración (por ejemplo salicilatos, micelas mixtas de lípido y sal biliar, glicéridos y acilcamitinas) para mejorar la administración oral. Sin embargo, los incremetadores de penetración frecuentemente ocasionan problemas serios de toxicidad local tales como irritación y toxicidad local, abrasión parcial o completa de la capa epitelial, así como también inflamación de tejido. Además, los incrementadores de penetración se co-administran usualmente con el fármaco polipéptido y son comunes las fugas de la forma dosificada. Otra estrategia común para mejorar la administración oral es la coadministración del fármaco polipéptido con un inhibidor de proteasa (por ejemplo aprotinina, inhibidor de tripsina de soya y amastatina). Desafortunadamente, los inhibidores de proteasa también inhiben los efectos deseables de las proteasas. Por lo tanto, se requieren métodos y composiciones para administrar efectivamente fármacos polipéptidos en ausencia de inhibidores de proteasa. También se han emprendido esfuerzos para modificar las propiedades fisicoquímicas de fármacos polipéptidos para incrementar la penetración de dichos fármacos a través de las membranas mucosas. Uno de estos enfoques ha sido conjugar fármacos polipéptidos con moléculas lipofílicas; sin embargo, los resultados han sugerido que el solo elevar la lipofilicidad no es suficiente para aumentar el transporte paracelular. Se han descrito otros métodos para estabilizar polipéptidos. De esta manera, por ejemplo, Abuchowski y Davis han descrito varios métodos para derivar enzimas y proveer productos solubles en agua no immunogénicos, estabilizados in vivo ("Soluble polymers-Enzyme adducts", "Enzymes as Drugs", Eds. Holcenberg y Roberts, J. Wiley and Sons, New York, NY, (1981 )). Abuchowski y Davis describen varias maneras de conjugar • enzimas con materiales poliméricos, tales como dextrano, polivinilpirrolidonas, glicopéptidos, polietilenglicol y poliaminoácidos. Se reporta que los polipéptidos conjugados resultantes retienen sus actividades biológicas y solubilidad en agua en aplicaciones parenterales. Además, la patente de E.U.A. No. 4,179,337 describe que el polietilenglicol hace solubles y no immunogénicas a las proteínas. Sin embargo, estos materiales poliméricos no contienen componentes que mejoren la unión a la mucosa intestinal o que faciliten o incrementen la penetración de la membrana. De esta manera, estos conjugados no están destinados para administración oral. Meiser y otros, patente de E.U.A. No. 4,585,754, enseñan que las proteínas pueden ser estabilizadas conjugándolas con sulfatos de condroitina. Los productos de esta combinación son usualmente polianiónicos, muy hidrofílicos, y carecen de capacidad de penetración celular; usualmente no están destinados para administración oral. Mili y otros, patente de E.U.A. 4,003,792, enseñan que ciertos polisacáridos ácidos tales como pectina, ácido algésico, ácido hialurónico y carragenano, pueden acoplarse a proteínas para producir productos tanto solubles como insolubles. Dichos polisacáridos carecen de capacidad para mejorar las características de penetración celular y no están destinados para administración oral. Otros investigadores han mostrado que el polietilenglicol enlazado a una proteína mejora la estabilidad contra desnaturalización y digestión enzimática (Boccu y otros, Pharmacological Research Communication 14, 11-120 (1982)). Sin embargo, estos polímeros no contienen componentes para incrementar la interacción con la membrana. De esta manera, los conjugados resultantes tienen los mismos problemas indicados arriba y no son adecuados para administración oral. También se ha descrito la conjugación de polipéptidos con compuestos de bajo peso molecular (por ejemplo, aminolecitina, ácidos grasos, vitamina B12 y glicósidos; R. Igarishi y otros, Proceed. Intern. Symp. Control. Reí. Bioact. Mataterials, 17,366, (1990); T. Taniguchi y otros Ibidem 19, 104, (1992); G. J. Russel-Jones, Ibídem, 19, 102, (1992); M. Baudys y otros, Ibídem, 19, 210, (1992)). Los polímeros resultantes no contienen componentes necesarios para impartir tanto la solubilidad como la afinidad de membrana necesarias para la biodisponibilidad después de la administración oral. También se ha empleado encapsulación de fármacos proteínicos en una película de azopolímero, como un medio para permitir la administración oral de fármacos polipéptidos (M. Saffan y otros, en Science, 223, 1081 , (1986)). Se reporta que la película sobrevive la digestión en el estómago, pero es degradada por la microflora en el intestino grueso, mientras que la proteína encapsulada es liberada. Este enfoque también es conocido para alargar la duración de la acción in vivo del fármaco polipéptido. Sin embargo, la técnica utiliza una mezcla física y no facilita la absorción de proteína liberada a través de la membrana. De manera similar, se han usado liposomas para estabilizar fármacos polipéptidos para administración tanto oral como parenteral. Una revisión del uso de liposomas se encuentra en Y. W. Chien, "New Drug Delivery Systems", Marcel Dekker, New York, NY, 1992. Los complejos liposomas-proteína son mezclas físicas. Los resultados de la administración basada en liposomas son frecuentemente erráticos e impredecibles. Además, el uso de liposomas puede dar como resultado la acumulación indeseada del fármaco polipéptido en ciertos órganos. Otras desventajas de las formulaciones a base de liposomas incluyen alto costo, procesos de fabricación complicados que requieren ciclos complicados de lipofilización e incompatibilidad de solventes. Otro enfoque para facilitar el suministro oral de fármacos polipéptidos es el uso de "protenoides" (Santiago, N. y otros "Oral Immunization of Rats with Influenza Virus M Protein (M1 ) Microspheres", Abstract #A 221 , Proc. Int. Symp. Control. Reí. Bioac. Mater., 19, 116 (1992)). Los protenoides encapsulan el fármaco de interés en una cubierta polimérica compuesta de aminoácidos altamente ramificados. Como con los liposomas, los fármacos polipéptidos no se enlazan químicamente a la esfera proteinoide; es posible la fuga de componentes activos de la forma dosificada. Se han hecho esfuerzos para utilizar emulsiones como matrices para la administración de fármacos lábiles (por ejemplo, fármacos como la insulina, que son susceptibles de degradación enzimática, química o física). Sin embargo, a pesar de los reportes preliminares sobre la eficacia de las formulaciones de emulsión para promover la absorción intestinal de insulina en ratas y conejos (véase Engel, S. y otros, "Insulin: intestinal absorbtion as water-in-will-in-water emulsions," Nature, 219:856-857 (1968); Shichiri, Y. y otros, "Enteral absorption of water-in-oil-in-water insulin emulsions and rabbits," Diabetologia, 10: 317-321 (1974)), la investigación subsecuente fue abandonada debido a la inestabilidad de la insulina y la necesidad de dosis excesivas para mantener la homeostasis de glucosa (Shichiri, Y. y otros, "Increased intestinal absorbtion of insulin: an insulin suppository," J. Pharm. Pharamcol., 30:806-808 (1978); Block, L. y otros "Pharmaceutical Emulsions and Microemulsions, Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Sistems", Vol.2, p. 71 (1996)). Por lo tanto, persiste la necesidad en la técnica de métodos y composiciones que permitan el uso de emulsiones y microemulsiones para suministrar fármacos lábiles tales como insulina. Existe claramente una necesidad en la técnica de medios que (1 ) permitan que fármacos polipéptidos sobrevivan en el intestino y penetren el epitelio del intestino para entrar a la corriente sanguínea; (2) permitan a fármacos polipéptidos sobrevivir en la corriente sanguínea en una forma activa, y (3) provean fármacos polipéptidos con un inicio de acción retardado, y/o duración de acción incrementada. La presente invención provee medios para resolver cada uno de estos tres importantes problemas. 2.2 Diabetes e Insulina La diabetes, un trastorno del metabolismo de carbohidratos, ha sido conocida desde la antigüedad. La diabetes se origina de la producción insuficiente o de sensibilidad reducida de insulina. La insulina es sintetizada en las células beta de las isletas de Langerhans del páncreas, y es necesaria para la utilización normal de glucosa para la mayor parte de las células en el cuerpo. En personas con diabetes está inhibida la capacidad normal para usar glucosa, aumentando con ello los niveles de azúcar en la sangre (hipergiucemia). Conforme la glucosa se acumula en la sangre, los niveles en exceso de azúcar son excretados en la orina (glucosuria). Otros síntomas de la diabetes incluyen volumen y frecuencia urinaria incrementada, sed, comezón, hambre, pérdida de peso y debilidad. Hay dos variedades de diabetes. El tipo I es diabetes mellitus dependiente de insulina, o IDDM. La IDDM fue referida inicialmente como diabetes de aparición juvenil. En la IDDM, la insulina no es secretada por el páncreas y debe ser provista de una fuente externa. La diabetes de tipo II de aparición en adulto puede ser controlada ordinariamente por la dieta, aunque en algunos casos avanzados se requiere de insulina. Antes del aislamiento de la insulina en los años 1920, la mayoría de los pacientes morían dentro de un período corto después de la aparición. La diabetes no tratada conduce a cetosis, la acumulación de cetonas, productos de degradación de la grasa, en la sangre; esto es seguido por acidosis (acumulación de ácidos en la sangre), con náusea y vómito. Conforme los productos tóxicos del metabolismo desordenado de carbohidratos y grasas continúan acumulándose, el paciente entra en coma diabético. El tratamiento de la diabetes requiere típicamente inyecciones regulares de insulina. El uso de insulina como un tratamiento para la diabetes data de 1922, cuando Banting y otros ("Pancreatic extracts in the Treatment of Diabetes Mellitus," Can. Med. Assoc. J., 12,141-146 (1922)) mostraron que el extracto activo del páncreas tenía efectos terapéuticos en perros diabéticos. El tratamiento de un paciente diabético ese mismo año con extractos pancreáticos, dio como resultado un mejoramiento clínico dramático de salvamento. Debido a la inconveniencia de las inyecciones de insulina, la insulina ha sido el foco de esfuerzos masivos para mejorar su administración y su bioasimilacion. La molécula de insulina consiste de dos cadenas de aminoácidos ligadas por enlaces disulfuro (PM 6000). Las células beta de las isletas pancreáticas secretan un percusor de insulina de una sola cadena, conocida como proinsulina. La proteólisis de insulina da como resultado la remoción de cuatro aminoácidos básicos (números 31 , 32, 64 y 65 en la cadena de proinsulina: Arg, Arg, Lys, Arg respectivamente) y el polipéptido conectivo ("C"). En la molécula de insulina resultante de dos cadenas, la cadena A tiene glicina en el extremo amino, y la cadena B tiene fenilalanina en el extremo amino. La insulina puede existir como un monómero, dímero o un hexámero formado de tres de los dímeros. El hexámero está coordinado con dos átomos de Zn++. La actividad biológica reside en el monómero. Aunque hasta hace poco se usó insulina bovina y porcina casi exclusivamente para tratar la diabetes en humanos, se conocen numerosas variaciones de insulina entre las especies. La insulina porcina es más similar a la insulina humana, de la cual difiere solo por tener una alanina en lugar de un residuo de treonina en el extremo C de la cadena B. A pesar de estas diferencias, la mayoría de insulina de mamífero tiene actividad especifica comparable. Hasta hace poco los extractos animales suministraron toda la insulina utilizada para el tratamiento de la diabetes. La aparición de tecnología recombinante permite la fabricación a escala comercial de insulina humana (por ejemplo la insulina Humulin ™, disponible comercialmente de Eli Lilly and Company, Indianapolis, IN). Los problemas asociados con la administración oral de insulina para lograr euglucemia en pacientes diabéticos, están bien documentados en la literatura farmacéutica y médica. La insulina es degradada rápidamente por enzimas digestivas en el tracto intestinal, lo que da como resultado un fármaco biológicamente inactivo. La permeabilidad de ia membrana también es baja debido a la falta de lipofilicidad suficiente (1 ). Los sistemas de administración oral que manejan efectivamente estos dos grandes problemas deben mejorar la absorción intestinal. En patentes previas del solicitante (patentes de E.U.A. Nos. 5,359,030; 5,438,040; y 5,681 ,811 ), los autores de la presente han mostrado que la modificación anfifílica de insulina mejora su lipofilicidad y la estabiliza contra la degradación enzimática. Sin embargo, los inventores presentes han descubierto sorprendentemente conjugados de insulina que permiten la administración oral, proveen inicio retardado y/o duración prolongada de acción, así como también mejoramiento dramático de la actividad de insulina. 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los presentes inventores han descubierto sorprendentemente una nueva serie de oligómeros que comprenden un componente hidrofílico y un componente lipofílico enlazados por un enlace hidrolizable (por ejemplo un enlace éster). Cuando se conjugan con un fármaco (como se define aquí) y se formulan adecuadamente, estos oligómeros pueden facilitar la administración oral e inicio retardado y/o duración prolongada de la actividad en la corriente sanguínea. Para facilidad de referencia, los conjugados serán descritos en la presente como conjugados fármaco-oligómero; sin embargo, como será evidente para los expertos en la materia, el componente de fármaco puede estar conjugado con más de un componente hidrófilo-lipófilo, y/o puede estar conjugado con componentes individuales hidrófilo y lipófilo. Los oligómeros de la presente invención comprenden un componente hidrofílico y un componente lipofílico. Los componentes lipofílicos adecuados incluyen por ejemplo cadenas de ácidos grasos o alquilo, rectas o ramificadas. Los lipófilos preferidos son cadenas de ácidos grasos o alquilo naturales. El componente de ácido graso puede ser una molécula recta o ramificada (saturada o insaturada) que tiene átomos de carbono que varían adecuadamente de dos (2) a veintiocho (28). De preferencia, el ácido graso tiene de doce (12) a veintidós (22) átomos de carbono. El componente hidrofílico es preferiblemente un polímero de polietilenglicol (PEG) recto o ramificado, que tiene preferiblemente 2-130 unidades de PEG, y preferiblemente 1-100 unidades de PEG. En una modalidad específica, el componente fármaco es insulina y el hidrófilo es una cadena de PEG que tiene 2-7, de preferencia 2-6, preferiblemente 3, 4 o 5 unidades de PEG. Los componentes hidrofílicos y lipofílicos están unidos preferiblemente por medio de un enlace hidrolizable tal como un enlace éster o carbonato. El uso de un enlace hidrolizable asegura que cuando el conjugado haya cruzado el epitelio del intestino hacia el medio hidrofílico de la corriente sanguínea, el componente lipofílico será cortado por hidrólisis del enlace hidrolizable, liberando con ello el componente fármaco-hidrófilo del conjugado. Esto es particularmente importante cuando el componente fármaco es insulina y el componente hidrofílico es una cadena de PEG que incrementa la actividad de insulina. En un modo preferido, cuando el conjugado se ha de administrar oralmente, la longitud y composición de los componentes lipofílicos y los componentes hidrofílicos, se pueden ajustar para asegurar (1 ) que el conjugado tenga suficiente anfifilicidad para a atravesar el epitelio del intestino, y (2) que la actividad de la porción terapéutica no sea eliminada una vez que el lipófilo ha sido atacado por hidrólisis del enlace hidrolizable que conecta el hidrófilo y el lipófilo. Además, la anfifilicidad del conjugado fármaco-oligómero puede ser ajustada conforme sea necesario para permitir la formulación del fármaco en un vehículo lipofílico o hidrofílico, o en una emulsión o microemulsión.
En un aspecto preferido, el conjugado polipéptido-oligómero de la presente invención tiene la siguiente fórmula general: L'm— D-H'n (Fórmula 1 ) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H es una porción hidrofílica seleccionada del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L y L' son cada uno una porción lipofílica, seleccionada independientemente del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; y p tiene un valor de por lo menos uno, y m+n+p tienen juntos un valor de por lo menos uno, y no sobrepasan el número total de sitios de enlace covalente sobre D para dichos sustituyentes; el o los enlaces H-L son hidrolizables, y el o los enlaces D-L', cuando están presentes, son hidrolizables. En un aspecto más reducido, los conjugados fármaco-oligómero de la presente invención tienen la fórmula: D-[H-L0]P (Fórmula 2) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H es una porción hidrofílica seleccionada del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; y o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; p es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre D; el enlace H-L es hidrolizable. En un aspecto, los oligómeros de la presente invención comprenden una subunidad seleccionada del grupo que consiste de: CH3(CH2)n(OC2H4)mOH (Fórmula 3); en donde n=3 a 25 y m=1 a 7; CH3(CH2)n(OC2H4)mOCH2CO2H (Fórmula 4); en donde n=3 a 25 y m=1 a 6; CH3(CH2)nCX(OC2H4)mOH (Fórmula 5); en donde n=3 a 25, m=1 a 7 y X=O; R-(OC2H4)mCH2C02H (Fórmula 6); en donde m=0 a 5 y R=colesterol o adamantano; R-OCO(C2H4O)mCH2CO2H (Fórmula 7); en donde m=0 a 14; CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CH2(OC2H4)rtlOH (Fórmula 8); en donde m=0 a 7; CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CX(OC2H4)mOH (Fórmula 9); en donde m=1 a 7 y X=N o O.
Otros componentes de ácido graso insaturado que se pueden usar de acuerdo con la presente invención, incluyen los ácidos oleico, linoleico y linolénico. Los presentes inventores también han encontrado que la pegilacion de insulina por medio de PEG2- , preferiblemente PEG3, incrementa dramáticamente la actividad de insulina. La presente invención toma ventaja de este sorprendente descubrimiento proveyendo un conjugado de insulina-PEG2-7-lipófiIo en el cual el enlace PEG-lipófilo es hidrolizable. En la corriente sanguínea, el enlace PEG-lipófilo hidrolizable es hidrolizado, dejando el compuesto insulina-PEG altamente activo circulando en la sangre. En otras modalidades, los conjugados de la presente invención tienen la fórmula: D-[(H-H'q)-L0]p (Fórmula lO) en donde D, H, L y p son como se describió arriba, y H' es como se descubrió para H arriba; y en donde el enlace H-H' es hidrolizable y el enlace H'-L no es hidrolizable; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H en el cual H' puede estar unido a H; y o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales un sustituyente L puede estar unido a H'. Esta disposición permite que las entidades H y H' sean seleccionadas a fin de balancear la hidrofilicidad del conjugado contra la lipofilicidad del conjugado y (explicando la hidrofilicidad o lipofilicidad de D) permitiendo la producción de un conjugado anfifílico, y permitiendo al mismo tiempo el uso de una porción H pequeña (por ejemplo, H puede ser una cadena corta de PEG que tiene 2 a 10 unidades PEG), que habilita o retiene la actividad de la porción D-H hidrolizada. En otras palabras, el enlace hidrolizable puede ser colocado en cualquier punto a lo largo de la porción hidrofílica que provee una porción D-H hidrolizada con actividad máxima. Cuando D es insulina, H es preferiblemente PEG2-7; preferiblemente PEG2, PEG3, PEG o PEG5; muy preferiblemente PEG3; y H' y L se seleccionan para balancear la lipofilicidad e hidrofilicidad del conjugado para proveer un conjugado anfifílico que tiene la capaciad de pasar desde el lumen del intestino hacia la corriente sanguínea. En otras modalidades, los conjugados de la presente invención tienen las fórmulas: D— [(H-SnJ- Jp (Fórmula 11) D_[(H-Sn-H'q)— L0]p (Fórmula 12); y D— [(H— H'q— Sn)— L0]P (Fórmula 13) en donde D, H, H' y L son como se definió arriba; S es un grupo separador seleccionado del grupo que consiste de azúcares, carbohidratos y glicerol; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; n es un número de 0 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H'; o es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre S, cuando S está presente, o sobre H' cuando cuando S no está presente; p es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre D; cuando S no está presente, L es está unido a H o H' (como en las fórmulas 1 y 2, respectivamente). Cada una de las fórmulas, 11 , 12 y 13, tiene por lo menos un enlace hidrolizable. En la fórmula 11 , el enlace hidrolizable puede ser S-L o S-H; en la fórmula 12, el enlace hidrolizable puede ser S-H o S-H'; en la fórmula 13, el enlace hidrolizable puede ser H-H'. La presente invención también provee formulaciones farmacéuticas que comprenden los conjugados fármaco-oligómero. En un aspecto preferido, las formulaciones farmacéuticas son emulsiones o microemulsiones. Los conjugados fármaco-oligómero de la presente invención tienen la ventaja importante de que se incorporan más fácilmente en formulaciones de emulsión y microemulsión. Además, la lipofilicidad/hidrofilicidad de los conjugados se puede ajustar fácilmente variando el peso molecular y la estructura de los componentes hidrofílicos y lipofílicos del oligómero, para facilitar la solubilidad en una formulación especifica de emulsión o microemulsión. La presente invención también provee métodos para preparar y usar los conjugados polipéptido-oligómero, y formulaciones farmacéuticas que comprenden estos conjugados. 3.1 Definiciones Los términos "péptido", "polipéptido" y "proteína", se usan intercambiablemente en la presente y se refieren a secuencias de aminoácidos de cualquier longitud. Como se usa aquí, el término "PEG" se refiere a polímeros y monómeros rectos o ramificados de polietilenglicol. El término "subunidad de PEG" se refiere a una sola unidad de polietilenglicol, esto es: -(CH2CH2O)— Como se usa aquí, el término "lipofílico" se refiere a la capacidad para disolverse en lípidos y/o la capacidad para penetrar, interaccionar y/o atravesar las membranas biológicas; y el término "porción lipofílica " o "lipófilos" se refiere una porción que es lipofílica y/o que cuando está unida a otra entidad química, incrementa la lipofilicidad de dicha entidad química, por ejemplo, ácido graso, colesterol. Los lipófilos están representados en las fórmulas de la presente como "L". Como se usa aquí, el término "hidrofílico" se refiere a la capacidad para disolverse en agua, y el término "porción hidrofílica " o "hidrófilos" se refiere a una porción que es hidrofílica y/o que cuando está unida a otra entidad química, incrementa la hidrofilicidad de dicha entidad química, por ejemplo, azúcares, PEG. Los hidrófilos están representados en las fórmulas de aquí como "H" o " H' ". Como se usa aquí, el término "anfifílico" se refiere a la capacidad para disolverse tanto en agua como en lípidos, y los términos "porción anfifílica" y "anfífilos" se refieren a una porción que es anfifílica y/o que cuando está unida a un fármaco polipéptido o no polipéptido, incrementa la anfifilicidad del conjugado resultante, por ejemplo oligómero PEG-ácido graso, oligómero-azúcar-ácido graso. Como se usan aquí, los términos "acoplado covalentemente", "enlazado", "unido", "ligado", y similares, con referencia a los componentes de fármaco, hidrófilo y lipófilo de los conjugados fármaco-oligómero de la presente invención, se refieren a que los componentes especificados están unidos covalentemente de manera directa entre sí, o unidos covalentemente de manera indirecta uno con otro a través de una porción o componentes intermedios tales como un puente, separador, enlazador o similar; por ejemplo, una porción de azúcar o una porción de glicerina pueden actuar como un separador entre un polímero de PEG y una porción de ácido graso (es decir, PEG-azúcar-ácido graso o PEG-glicerina-ácido graso). Como se usan aquí, el término "no hidrolizable" y la frase "no es hidrolizable" se usan para referirse a enlaces que no pueden ser hidrolizados bajo ninguna condición, así como enlaces de carbamato, amida y otros enlaces que no son hidrolizados rápidamente bajo condiciones fisiológicas normales. Como se usa aquí, el término "fármaco" significa una sustancia usada para diagnosticar, caracterizar, curar, mitigar, prevenir o retardar la aparición de una enfermedad, estado patológico u otra condición fisiológica, o para mejorar el funcionamiento fisiológico normal en humanos y/o en animales no humanos. El término incluye profármacos, sales, esteres y otras varias formas de sustancias de fármaco administrables. Los fármacos están representados en las fórmulas en la presente como "D". Una "cantidad terapéuticamente efectiva" es una cantidad necesaria para prevenir, o retardar o reducir la severidad del inicio de la enfermedad, o una cantidad necesaria para detener o reducir la severidad de una enfermedad iniciada, y también incluye una cantidad necesaria para mejorar el funcionamiento fisiológico normal. El término "equivalente funcional" se usa aquí para referirse a un polipéptido que es un análogo activo, derivado, fragmento, isoforma de truncado o similar, de un polipéptido nativo. Un polipéptido es activo cuando retiene toda o parte de la actividad biológica del polipéptido nativo correspondiente. El término "inmunológicamente efectivo" se usa aquí para referirse a una respuesta inmune que confiere memoria celular inmunológica en el sujeto de dicha respuesta inmune, con el efecto de que una respuesta secundaria (al mismo inmunógeno o uno similar) está caracterizada por uno o más de lo siguiente: fase de retraso más corta en comparación con la fase de retraso que se origina de una exposición correspondiente en ausencia de inmunización; producción de anticuerpo que continúa por un período más largo que la producción de anticuerpo para una exposición correspondiente en ausencia de dicha inmunización; un cambio en el tipo y calidad de anticuerpo producido en comparación con el tipo y calidad de anticuerpo producido de dicha exposición en ausencia de inmunización; un cambio en la clase de respuesta, apareciendo anticuerpos IgG en concentraciones más altas y con mayor persistencia que IgM; una afinidad promedio incrementada (constante de unión) de los anticuerpos por el antígeno, en comparación con la afinidad promedio de los anticuerpos para el antígeno de dicha exposición, en ausencia de inmunización; y/o otras características conocidas en la técnica para caracterizar una respuesta inmune secundaria. Como se usa aquí, componente "farmacéuticamente aceptable" (tal como una sal, un vehículo, excipiente o diluyente) de una formulación de acuerdo con la presente invención, es un componente (1) que es compatible con los otros ingredientes de la formulación porque puede ser combinado con el conjugado fármaco-oligómero de ia presente invención sin eliminar la actividad biológica de los conjugados fármaco-oligómero; y (2) que es adecuado para usarse con animales (incluyendo humanos) sin efectos secundarios adversos indebidos (tales como toxicidad, irritación y respuestas alérgicas). Los efectos secundarios son "indebidos" cuando su riesgo sobrepasa el beneficio provisto por la composición farmacéutica. Ejemplos de componentes farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándares tales como soluciones amortiguadoras salinas de fosfato; agua; emulsiones tales como emulsión aceite/agua, microemulsiones y varios tipos de agentes de mojado. Como se usa aquí, el término "nativo" usado con referencia a un polipéptido tal como insulina, se usa para indicar que el polipéptido señalado tiene la secuencia de aminoácidos del polipéptido correspondiente encontrado en la naturaleza. Los términos "antígeno" y "antigénico" como se usan aquí, describen una sustancia que induce una respuesta inmune cuando se presenta a las células inmunes de un organismo. Un antígeno puede comprender un solo epítope inmunogénico o una multitud de epítopes inmunogénicos reconocidos por un receptor de células B (es decir, anticuerpo sobre la membrana de la célula B) o un receptor de la células T. De esta manera, como se usan aquí, estos términos se refieren a cualquier sustancia capaz de provocar una respuesta inmune, por ejemplo, antígenos del virus de inmunodeficiencia humana (VIH), antígenos del virus de hepatitis (HCV, HBV, HAV), y antígenos de Toxoplasmosis gondii, Cytomegalovirus, Helicobacter pylori, de rubéola y similares; así como también haptenos que pueden hacerse antigénicos bajo condiciones adecuadas conocidas para los expertos en la materia. 4. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En su sentido amplio, la presente invención se refiere a conjugados fármaco-oligómero terapéuticos y/o diagnósticos, en donde una molécula de fármaco está unida covalentemente a un oligómero para formar un conjugado anfifílico. Los oligómeros comprenden por lo menos una porción hidrofílica y por lo menos una porción lipofílica. Las porciones están enlazadas de manera variada por medio enlaces hidrolizables, para que por hidrólisis del enlace hidrolizable permanezca el conjugado fármaco activo-hidrófilo (D-H). Los oligómeros pueden facilitar ventajosamente la administración oral, mientras que alargan el inicio de la actividad del conjugado polipéptido-oligómero en la corriente sanguínea. 4.1 Conjugados fármaco-oliqómero Los conjugados fármaco-oligómero están dispuestos generalmente como D-H-L o D-H-H'-L, en donde los enlaces H-L y H-H' pueden ser hidrolizados en la corriente sanguínea para dejar el conjugado D-H circulando en la corriente sanguínea. Será apreciado que los varios oligómeros descritos aquí (por ejemplo, -H-L; -H-H'-L; -H-S-L; -H-S-H'-L; y H-H'-S-L) no son considerados como exclusivos; cualquier D particular puede tener uno o más de estos oligómeros unidos al mismo, siempre que estén presente sitios de enlace covalente apropiados. De esta manera, por ejemplo, la insulina nativa tiene 3 sitios de enlace covalente que pueden ser ocupados por un, dos o tres oligómeros idénticos o cualquier combinación de los oligómeros descritos en la presente. Adicionalmente, los sitios de enlace covalente pueden ser ocupados por cualquiera de los componentes hidrófilo y lipófilo descritos en la presente. Los conjugados de la presente invención tienen la siguiente fórmula general: L'm— D— H'n I (Fórmula 1 ) [H-Lo]p en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son porciones hidrofílicas, seleccionadas independientemente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L y L' son porciones lipofílicas, seleccionadas independientemente del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; y p tiene un valor de por lo menos 1 , y m+n+p juntos tienen un valor de por lo menos uno y no sobrepasan el número total de sitios de enlace covalente sobre D para dichos sustituyentes; en donde los enlaces H-L son hidrolizables y los enlaces D-L', cuando están presentes, son hidrolizables. Los números m+n+p no pueden sobrepasar el número de posiciones sobre D en el cual dichas porciones pueden estar unidas. Por ejemplo, la insulina humana nativa tiene 3 sitios de enlace covalente; por lo tanto, m+n+p no pueden sobrepasar 3, en donde D es insulina humana nativa. Sin embargo, se apreciará que la insulina y otros fármacos pueden ser modificados químicamente para proveer sitios de enlace covalente adicionales. Preferiblemente, m+n+p estará en la escala de 1 a 10; de preferencia 1-8, de preferencia 1-5, y es muy preferido 1 , 2, 3 o 4. En donde H del grupo H-L es un polímero de PEG (recto o ramificado) o es preferiblemente de 1 a 3, preferiblemente de 1 a 2, muy preferiblemente 2. En un modo preferido, m+n=0, y p es por lo menos 1. En un aspecto alternativo, p=0 y m y n son cada uno por lo menos 1. En este aspecto alternativo, los enlaces H-D no son hidrolizables y el enlace L-D es hidrolizable. En un aspecto más reducido, la presente invención provee conjugados fármaco-oligómero que tienen la fórmula: D— [H— L0]p (Fórmula 2) en donde D es una porción de fármaco terapéutico; H es una porción hidrofílica seleccionada del grupo que consiste de polímeros PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades PEG y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen 2-24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; y o es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; p es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre D; en donde el enlace H-L0 es hidrolizable. En la fórmula 2, o es preferiblemente 1-3, de preferencia 1 o 2, y p es preferiblemente 1-5, de preferencia 1 , 2 o 3.
El enlace hidrolizable se selecciona preferiblemente del grupo que consiste de éster y carbonato. Los presentes inventores también han encontrado que la pegilación de insulina por medio de PEG2-7 (preferiblemente PEG3) aumenta dramáticamente la actividad de insulina. La presente invención toma ventaja de este sorprendente descubrimiento suministrando un conjugado insulina-PEG-lipófilo en el cual el enlace PEG lipófilo es hidrolizable. En la corriente sanguínea, el enlace PEG-lipófilo hidrolizable será hidrolizado, dejando el compuesto ¡nsulina-PEG altamente activo circulando en la sangre. El lipófilo del conjugado insulina-PEG-lipófilo se selecciona preferiblemente a fin de hacer la insulina inactiva antes de la hidrólisis del enlace hidrolizable PEG-lipófilo. Como resultado, la forma activa (insulina-PEG) es liberada lentamente en la sangre conforme el enlace PEG-lipófilo es hidrolizado, proveyendo así una liberación gradual de insulina activa-PEG y una duración de acción prolongada. Los conjugados insulina-PEG-lipófilo de la presente invención pueden ser formulados además con suficiente anfifilicidad para permitir que los conjugados atraviesen el epitelio del intestino, permitiendo así la administración oral de los conjugados. La anfifilicidad puede ser ajustada por medios conocidos en la técnica para reducir, alargar y/o cambiar de otra manera la conformación y/o estructura del PEG y/o el lipófilo. La presente invención también provee métodos para preparar y usar los conjugados polipéptido-oligómero. 4.1.1 Componente de fármaco de los conjugados fármaco-oliqómero Los conjugados fármaco-oligómero de la presente invención comprenden un componente de fármaco. El componente de fármaco puede ser una porción de fármaco terapéutica de la molécula pequeña o un polipéptido biológicamente activo. Los fármacos adecuados son aquellos que (1 ) son conjugables con el oligómero de la presente invención; y (2) retienen parte o toda su actividad después de la remoción hidrolítica del componente lipófilo de los conjugados fármaco-oligómero (esto es, en la forma de fármaco-hidrófilo). En circunstancias en las cuales es preferible que el componente de fármaco permanezca unido al hidrófilo mientras circula en la corriente sanguínea (por ejemplo, en donde los fármacos lipófilos se benefician de la mayor hidrofilicidad aportada por el hidrófilo, y/o en donde el hidrófilo aumenta la actividad del fármaco), el hidrófilo debe estar unido al componente de fármaco del oligómero por medio de un enlace no hidrolizable. Los enlaces hidrolizables preferidos incluyen carbamato, amida y amina secundaria. Sin embargo, será apreciado por los expertos en la materia que puede ser conveniente en ciertas circunstancias unir uno o más hidrófilos al fármaco por medio de un enlace hidrolizable. De esta manera, por ejemplo, puede ser ventajoso retener no todos los componentes hidrofílicos durante la circulación para optimizar la hidrofilicidad y mejorar la circulación o para optimizar la actividad del fármaco circulante. Además, se puede emplear la unión de hidrófilos hidrolizables múltiples con el fármaco para mejorar la circulación y retrasar el inicio de la acción del fármaco. De esta manera, por ejemplo, la administración de una mezcla de conjugados fármaco-oligómero aseguraría que algunos de los conjugados tengan actividad casi inmediata (es decir, solo unos pocos enlaces a hidrolizar), mientras que otros se harían activos en base retardada conforme los enlaces hidrolizables múltiples (uniendo el lipófilo al hidrófilo y/o el hidrófilo al fármaco) son hidrolizados. El fármaco puede estar unido (1 ) directamente al componente hidrófilo del oligómero por enlace covalente, o (2) indirectamente a través de grupos separados apropiados (por ejemplo, grupos de azúcar como se describe abajo). El complejo conjugado de preferencia está dispuesto estructuralmente de tal manera que la porción hidrofílica está unida directamente al fármaco, y la porción lipofílica está unida a la porción hidrofílica. Además, el fármaco puede estar unido a una o más porciones lipofílicas adicionales y/o porciones hidrofílicas, en ausencia de, o en combinación con los oligómeros. Aunque los ejemplos señalados aquí están dirigidos ilustrativamente al uso de insulina como componente de fármaco de los conjugados fármaco-oligómero, será apreciado por los expertos en la materia que la utilidad de la invención no está limitada de esa manera. Se puede usar una amplia variedad de especies de fármaco en la práctica amplia de la presente invención. Los componentes de fármaco adecuados son los que pueden ser conjugados con el componente hidrofílico de los oligómeros descritos en la presente. Los componentes de fármaco preferidos son activos cuando el componente lipófilo de los conjugados fármaco-oligómero es cortado por hidrólisis del enlace hidrolizable, dejando intacto el componente fármaco-hidrófilo. Sin embargo, en una modalidad alternativa, el hidrófilo puede estar unido al componente de fármaco por medio de un enlace hidrolizable, de tal manera que por hidrólisis se libera el fármaco activo libre no conjugado. En un aspecto, el componente de fármaco de los conjugados fármaco-oligómero es un polipéptido. Los polipéptidos adecuados son aquellos que son biológicamente activos, por ejemplo: hormona adrenocorticotrópica (ACTH); derivados de hormona adrenocorticotrópica (por ejemplo, ebiratide); angiotensina; angiotensina II; asparaginasa; péptidos natriuréticos atriales; péptidos diuréticos de sodio atriales, bacitracina; beta-endorfinas; factores de coagulación sanguínea Vil, VIII y IX; factor tímico sanguíneo (FTS); derivados del factor químico sanguíneo (véase la patente de E.U.A. No. 4,229,438); bombesina, factor morfogénico de hueso (BMP); proteína morfogénica de hueso; bradiquinina; caruleina; polipéptido relacionado con el gen de calcitonina (CGRP); calcitoninas; CCK-8; factores de crecimiento celular (por ejemplo, EGF; TGF-alfa; TGF-beta; PDGF; FGF; ácido; FGF básico); ceruleina; quimocinas, colecistoquinina; colecistoquina-8; colecistoquinina-pancreozimina (CCK-PZ); colistina; factores estimuladores de colonia (por ejemplo CSF; GCSF; GMCSF; MCSF); factor de liberación de corticotropina (CRF); citocinas; desmopresina; dinorfina; dipéptido dismutasa; dinorfina; eledoisina; endorfinas; endotelina; péptidos antagonistas de endotelina; (véase la publicación de patente Europea No. 436189; 457195 y 496452 y la publicación no examinada de patente Japonesa No. 94692/1991 y 130299/1991); endoterinas; encefalinas; derivados de encefalinas (véase la patente de E.U.A. No. 4,277,394 y la publicación de patente Europea No. 31567); factor de crecimiento epidérmico (EGF); eritropoyetina (EPO); hormona estimulante del folículo (FSH); galanina; polipéptido inhibidor gástrico; polipéptido liberador de gastrina (GRP); gastrinas; G-CSF; glucagon; glutation peroxidasa; gonadotropinas (por ejemplo gonadotropina coriónica humana y las subunidades alfa y beta de la misma); gramicidina; gramicidinas; factor de crecimiento (EGF); factor liberador de hormona de crecimiento (GRF); hormonas de crecimiento; hormona liberadora de hormona (LHRH); polipéptido natriurético artrial humano (h-ANP); lactógeno placentario humano; insulina; factores de crecimiento semejantes a insulina (IGF-I; IGF-II); interferón; interferones (por ejemplo alfa-, beta-, gamma-interferones); interieucinas (por ejemplo 1 , 2; 3; 4; 5, 6; 7; 8; 9; 10; 11 y 12); polipéptido intestinal (VIP); calicreina; quiotorflna; luliberina; hormona luteinizante (LH); hormona liberadora de hormona luteinizante (LH-RH); lisozima cloruro; hormona estimulante de melanocito (MSH); hormona estimulante de melanoforo; melitina; motilina; muramilo; muramildipéptido; factor de crecimiento de nervio (NGF); factores de nutrición de nervio (por ejemplo NT-3; NT-4; CNTF; GDNF; BDNF); neuropéptido Y; neurotensina; oxitocina; pancreastatina; polipéptido pancreático; pancreozimina; hormona paratiroide (PTH); pentagastrina; polipéptido YY; polipéptidos activadores de adenil ciclasa de pituitaria (PACAPs); factor de crecimiento derivado de plaqueta; polimixina B; prolactina; polipéptido estimulante de sínstesis de proteína; proteína relacionada con PTH; relaxina; renina; secretina; factor tímico del suero; somatomedinas; derivados de somatostatinas (Sandostatin; véase las patentes de E.U.A. Nos. 4,087, 390; 4,093,574; 4,100,117 y 4,253,998); substancia P, superóxido dismutasa; taftsin; tetragastrina; trombopoyetina (TPO); factor humoral tímico (THF); timopoyetina; timosina; timoestimulina; hormona liberadora de la hormona tiroidea; hormona estimuladora de tiroides (TSH); hormona liberadora de tirotropina (TRH); tripsina; tuftsin; factor de crecimiento de tumor (TGF-alfa); factor de necrosis tumoral (TNF); tirocidina; urogastrona; uroquinasa; polipéptido intestinal vasoactivo; vasopresinas y equivalentes funcionales de dichos polipéptidos. En otro aspecto, el polipéptido es un antígeno. Muchos antígenos adecuados son conocidos en la técnica, por ejemplo antígenos que pueden provocar una respuesta inmune incrementada, incrementar una respuesta inmune y/o ocasionar una respuesta inmunizante efectiva a las siguientes enfermedades y agentes causantes de enfermedad: adenovirus; ántrax; Bordetella pertussis botulismo; rinotraqueitis bovina; Branhamella catarrhalis; hepatitis canina; moquillo canino; Chlamydiae; cólera; coccidiomicosis; viruela; citomegalovirus; fiebre de dengue; toxoplasmosis de dengue; difteria; encefalitis; E. coli enterotoxigénica; virus de Epstein Barr; encefalitis equina; anemia infecciosa equina; influenza equina; pneumonía equina; rinovirus equino; Escherichia coli; leucemia felina; flavivirus; globulina; Haemophilus influenza tipo b; Haemophilus influenzae; Haemophilus pertussis; Helicobacter pylori; Hemophilus; hepatitis; hepatitis A; hepatitis B; hepatitis C; virus de herpes; virus VIH, VIH-1 ; virus VIH-2; HTLV; Influenza; encefalitis Japonesa; especies de Klebsiellae; Legionella pneumophila; leishmania; lepra; enfermedad de limus; inmunógeno de malaria; sarampión; meningitis; meningococos; polisacárido meningocócico del grupo A; polisacáriddo meningocócico del grupo C; paperas; virus de paperas; micobacterias y Mycobacterium tuberculosis; Neisseria; Neisseria gonorrhoeae; Neisseria meningitidis; lengua azul de ovino; encefalitis ovina; papiloma; parainfluenza; paramixovirus; tos ferina; plaga; Pneumococcus; Pneumocystis carinii; pneumonía; poliovirus; especies de proteus; Pseudomonas aeruginosa; rabia; virus sincitial respiratorio; rotavirus; rubéola; salmonela; esquistosomiasis; Shigellae; virus de inmunodeficiencia de simio; viruela; Staphylococcus aureus; especies de estafilococos; Streptococcus pneumoniae; Streptococcus pyogenes; especies de estrepcocos; influenza del cerdo; tétanos; Treponema pallidum; tifoidea; Vaccinia; virus de varicela-zoster; y Vibrio cholerae. Los antígenos preferidos son aquellos que son conocidos en la técnica por ser útiles como componentes de vacunas. El antígeno puede incluir por ejemplo varios toxoides; antígenos virales y/o antígenos bacterianos. Por ejemplo, los antígenos pueden incluir antígenos empleados comúnmente e las siguientes vacunas: vacuna de varicela; difteria; tétanos y vacunas de tos ferina; vacuna de Haemofilus influenzae tipo b (Hib); vacuna de hepatitis A; vacuna de hepatitis B; vacuna de influenza; vacunas de sarampión; paperas y rebeola (MMR); vacuna pneumocócica; vacunas de la polio; vacunas de rotavirus; vacunas de ántrax; y vacuna de tétanos y difteria (Td). En un aspecto preferido, el componente de fármaco de los conjugados fármaco-oligómero, es insulina o un equivalente funcional de la misma, de preferencia insulina de mamífero o un equivalente funcional de la misma, de preferencia insulina humana o un equivalente funcional de la misma. Una forma alternativa de insulina adecuada para usar en los conjugados fármaco-oligómero de la presente ¡nvención, es insulina lispro, un análogo recientemente desarrollado de insulina humana en la cual posiciones de los aminoácidos lisina y prolina han sido cambiados en el extremo de la cadena beta de la cadena de insulina (Koivisto, V.A. "The human insulin analoguee insulin lispro" Ann Med 1998 Jun 30:3 260-6). La insulina lispro con lisina en la posición B28 y prolina en la posición B29, tiene una tendencia más débil a la autoasociación que la insulina humana. Esto conduce a tres diferencias mayores en la farmacocinética: la acción comienza más rápido, tiene un pico más alto y la duración es más corta que la insulina humana. De esta manera, la insulina lispro tiene un perfil más preciso de acción a la hora de comer, que la insulina regular humana. La insulina lispro es recomendada para inyectarse en el transcurso de 15 minutos antes de la comida, a diferencia de 30 a 40 minutos para la insulina humana. La insulina lispro fue diseñada para ser usada como una insulina de la hora de la comida. En otro aspecto, se puede administrar a un paciente (ya sea secuencialmente o simultáneamente) un conjugado fármaco-oligómero que comprende una insulina de acción rápida (por ejemplo lispro), y un conjugado fármaco-oligómero que tiene una insulina de acción lenta (por ejemplo insulina ordinaria). De esta manera, los niveles de glucosa en un sujeto pueden ser (1 ) puestas rápidamente bajo control y (2) mantenidos durante un período prolongado, una ventaja que no es posible solo con una insulina de acción rápida sola. 4.1.2 Componente oligómero Los farmaco-oligómeros de la presente invención comprenden un componente oligómero. Los oligómeros de la presente invención comprenden un componente hidrofílico (hidrófilos) y un componente lipofílico (lipófilos). Los componentes lipofílicos adecuados incluyen por ejemplo cadenas de ácidos grasos o alquilo naturales. Preferiblemente, el componente de ácido graso es una molécula de cadena recta que tiene átomos de carbono (saturados o insaturados), y varía convenientemente de dos (2) a veintiocho (28) átomos de carbono. De preferencia, el ácido graso tiene de doce (12) a veintidós (22) átomos de carbono. Los ácidos grasos ¡nsaturados que pueden emplearse como el componente lipofílico del oligómero incluyen por ejemplo oleico, linoleico y linolénico.
El componente hidrofílico es por lo regular un polímero de PEG recto o ramificado y/o un azúcar. Cuando el componente hidrofílico es un polímero PEG, el polímero PEG tiene preferiblemente de 1 a 130 unidades PEG; de preferencia de 1 a 100 unidades PEG. El componente hidrofílico es preferiblemente un segmento pequeño de polietilenglicol (PEG), que tiene de preferencia de 1 a 10 unidades de PEG, y de preferencia de 2 a 8 unidades de PEG. En un aspecto muy preferido, el fármaco es insulina o un equivalente funcional de insulina, y el polipéptido PEG tiene 3, 4, 5, 6, o 7 unidades de PEG. La longitud y composición de los componentes lipofílicos y los componentes hidrofílicos se pueden seleccionar para proveer el grado deseado de lipofilicidad, hidrofilicidad o anfifilicidad. Las cadenas de carbono de los componentes de ácido graso o alquilo pueden alargase para aumentar la lipofilicidad, mientras que los componentes de PEG pueden alargarse para aumentar la hidrofilicidad. Cuando el conjugado fármaco-oligómero se administra oralmente, el grado de anfifilicidad del conjugado fármaco-oligómero se debe ajustar para permitir que el conjugado fármaco-oligómero atraviese el epitelio del intestino hacia la corriente sanguínea. Además, un componente lipofílico puede estar unido a un componente hidrofílico por medio de un enlace no hidrolizable, o por medio de un enlace que no sea rápidamente hidrolizable. El componente hidrofílico del lipófilo puede entonces estar unido mediante un enlace hidrolizable con el componente hidrófilo del oligómero. Por ejemplo: CH3(CH2)15OCH2CH2OCH2CH2OC(O)-CH2OCH2CH2C(O)-NH-Proteína De esta manera, el aspecto hidrofílico del oligómero se puede balancear aumentado el tamaño de la porción hidrofílica sobre el lado lipofílico del enlace hidrolizable. Así, la invención reclamada puede ser descrita alternativamente de acuerdo con la siguiente fórmula general: D— [(H— H'q)— L0]P (Fórmuia lO) en donde D, H y L son como se describió arriba; H' es como se describió para H arriba; y en donde el enlace H-H es hidrolizable y el enlace H'-L no es hidrolizable; q es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalentes sobre H en el cual un H' puede estar unido a H; y L es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en el cual un sistituyente L puede estar unido a H'. Esta disposición permite que las entidades H y H' sean seleccionadas a fin de balancear la hidrofilicidad de H contra la lipofilicidad de L y (representando la hidrofilicidad o lipofilicidad de D), permitiendo la producción de un conjugado anfifílico y al mismo tiempo permitiendo el uso de una porción H pequeña (por ejemplo, H puede ser una cadena corta de PEG que tiene de 2 a 10 unidades PEG) que habilita o retiene la actividad de la porción D-H hidrolizada. En otras palabras, el enlace hidrolizable puede estar colocado en cualquier punto a lo largo de la porción hidrofílica que provee una porción D-H hidrolizada con actividad máxima.
De esta manera, cuando D es insulina, es preferible que la porción H sea un polímero de PEG con 2 a 7 unidades de PEG, de preferencia 3, 4, 5 o 6 unidades PEG, muy preferiblemente 3 unidades de PEG; mientras que H' puede ser de cualquier longitud necesaria para balancear la lipofilicidad de los componentes restantes del conjugado, lo que resulta en un conjugado anfifílico que puede atravesar la pared intestinal (por ejemplo, interaccionando con la membrana biológica de las células del intestino) para entrar en la corriente sanguínea. En la corriente sanguínea, el enlace H-H' será hidrolizado, produciendo con ello un conjugado insulina-PEG con actividad mejorada en comparación con un polipéptido de insulina no conjugado. Una porción de colesterol o adamantano puede sustituir al ácido graso de cadena recta como el componente lipofílico de los oligómeros. Los oligómeros preferidos de la presente invención comprenden un componente seleccionado de los siguientes componentes: CH3(CH2)n(OC2H4)mOH (Fórmula 3); en donde n=3 a 25 y m=1 a 7; CH3(CH2)n(OC2H4)mOCH2CO2H (Fórmula 4); en donde n=3 a 25 y m=1 a 6; CH3(CH2)nCO(OC2H4)mOH (Fórmula 5); en donde n=3 a 25, y m=1 a 7; R-(OC2H4)mCH2CO2H (Fórmula 6); en donde m=0 a 5 y R=colesterol o adamantano; o R-OCO(C2H4O)mCH2CO2H (Fórmula 7); en donde m=0 a 5; CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CH2(OC2H4)mOH (Fórmula 8); en donde m=1 a 7; CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CO(OC2H4)mOH (Fórmula 9); en donde m=1 a 7.
La fórmula 5 es representativa de oligómeros que tienen la configuración H-L en la cual el enlace H-L es hidrolizable. Las fórmulas 3, 4, 6, 7, 8, y 9, son representativas del componente H'-L de los oiigómeros que tienen la configuración H-H'-L; el componente H'-L presentado es para ser unido al componente H por medio de un enlace hidrolizable, produciendo un oligómero H-H'-L en donde el enlace H-H' es hidrolizable. Los enlaces hidrolizables preferidos incluyen por ejemplo éster (un grupo carboxi del lipófilo ligado covalentemente a un grupo hidroxilo del hidrófilo, o un grupo carboxi del oligómero ligado covalentemente a un grupo hidroxilo del lipófilo), y carbonato. El uso de un enlace hidrolizable provee la ventaja de que cuando el conjugado D-H-L o D-H-H'-L ha atravesado el epitelio del intestino hacia el medio hidrofílico de la corriente sanguínea, el componente H-L o H-H' será cortado por hidrólisis del enlace hidrolizable, liberando con ello el componente D-H del conjugado. En un modo preferido, cuando el conjugado se va a administrar oralmente, se puede variar la longitud y composición de los componentes lipofílicos y los componentes hidrofílicos para asegurar que (1 ) el conjugado tenga suficiente anfifilicidad para atravesar el epitelio del intestino, y (2) la porción H no elimine la actividad de la porción terapéutica una vez que la porción L o H'-L ha sido separada por hidrólisis del enlace hidrolizable H-L o H-H'. Adicionalmente, se puede ajustar la longitud y composición del H para optimizar la actividad del componente fármaco-hidrófilo del conjugado fármaco-hidrófilo. Los enlaces D-H y H'-L son preferiblemente no hidrolizables.
Ejemplos de enlaces no hidrolizables adecuados incluyen por ejemplo amida (un grupo carboxi del hidrófilo enlazado a un grupo amina del fármaco) y carbamato (un grupo cloroformiato del hidrófilo enlazado a un grupo amina del fármaco). Grupos amina preferidos de fármacos polipéptidos para unión por medio de enlaces amida o carbamato, son la amina del extremo N del polipéptido o de un residuo amino nucleofílico, encontrado usualmente sobre el residuo -amino de un residuo de lisina.
Azúcares y otros carbohidratos pueden formar grupos separadores convenientes entre los grupos H-L, H-H' y/o H'-L del oligómero, dando como resultado las configuraciones H-S-L, H-S-H' y/o H'-S-L, respectivamente, en donde S representa un grupo separador. Los grupos -OH múltiples de estos compuestos forman sitios de enlace covalente convenientes para múltiples componentes lipofílicos. Los carbohidratos preferidos son mono- y disacáridos. Un grupo separador particularmente preferido es el glicerol, ilustrado con el siguiente ejemplo: l3(CH2)m(OC2H4)nOCH2C(O)(OC2H4)qOCH2 V_(OC2H4)qOC(O)NH-Proteína l3(CH2)m(OC2H4)nOCH2C(O)(OC2H4)qOCH2 En este ejemplo, el enlace hidrolizable está sobre el lado opuesto de la molécula de glicerina del fármaco de proteína. De esta manera, por hidrólisis, el componente glicerina permanece como parte del conjugado fármaco-hidrófilo, dando como resultado una configuración D-H-S o D-H-S-H'. Sin embargo, será apreciado que el enlace hidrolizable se puede colocar en cualquier lado del grupo separador, y así, cuando se hidroliza, puede dar como resultado conjugados que tienen la configuración D-H. Consecuentemente, la presente invención también provee conjugados que tienen las siguientes fórmulas generales: D-[(H-Sn)-L0]p (Fórmula 11) D-[(H-Sn-H'q)-L0]p (Fórmula 12); y D-[(H-H'q-Sn)-L0]p (Fórmula 13) en donde D, H, H' y L son como se definió arriba, y S es un grupo separador seleccionado del grupo que consiste de azúcares, carbohidratos y glicerol; q es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; n es un número de 0 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H'; o es un número de 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre S, cuando S está presente, o sobre H' cuando S no está presente; y p es un número del 1 al número máximo de sitios de enlace covalente sobre D; cuando S no está presente, L está unido a H o H', como en las fórmulas 1 y 2. Cada una de las fórmulas 11 , 12, y 13 tiene por lo menos 1 enlace hidrolizable. En la fórmula 11 , el enlace hidrolizable puede ser S-L o S-H; en la fórmula 12, el enlace hidrolizable puede ser S-H o S-H'; en la fórmula 13, el enlace hidrolizable es H-H'. 4.2 Preparación de conjugados fármaco-oligómero 4.2.1 Preparación del componente polipéptido de los conjugados fármaco-oligómero.
Cuando el componente fármaco de la presente invención es un polipéptido, el polipéptido se puede preparar de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica. Además de los métodos recombinantes, los componentes polipéptidos se pueden hacer mediante técnicas sintéticas conocidas, por ejemplo mediante el uso de un sintetizador de polipéptidos u otros métodos químicos estándares conocidos en la técnica (por ejemplo, véase Hunkapiller, M. y otros, 1984, Nature 310:105-111 ; Clark-Lewis y otros, 1991 , Biochem. 30:3128-3135 y Merrifield, 1963, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2156). Por ejemplo, los polipéptidos se pueden sintetizar mediante técnicas de fase sólida, separarse de la resina y purificarse por medio de cromatografía de líquidos de alto rendimiento (véase por ejemplo Creighton, 1983, "Proteins, Structures and Molecular Principies", W. H. Freeman y Co., N. Y., p. 50-60). La composición de los polipéptidos se puede confirmar mediante análisis o secuenciación de aminoácidos (por ejemplo, el procedimiento de degradación de Edman; véase Creighton, 1983, "Proteins, Structures and Molecular Principies", W. H. Freeman and Co., N. Y., p. 34-49) o mediante mapeo de proteína. Los polipéptidos de la invención se pueden sintetizar en su totalidad mediante la adición secuencial de residuos de aminoácido, o alternativamente como subcomponentes de fragmentos que pueden combinarse usando técnicas bien conocidas en la materia tales como condensación de fragmentos (Shin y otros, 1992, Biosci. Biotech. Biochem. 56:404-408; Nyfeler y otros, 1992, Peptides, Proc. 12th Amer. Pep. Soc, Smith y River (eds.), Leiden, p. 661-663; y Nokihara y otros, 1990, "Protein Research Foundation", Yanaihara (ed.), Osaka, p. 315-320). En una modalidad alternativa, se pueden purificar polipéptidos nativos de fuentes naturales usando métodos estándares (por ejemplo purificación por inmunoafinidad). Se puede purificar un polipéptido recién sintetizado usando cualquier método disponible, por ejemplo usando cromatografía de líquidos de alto rendimiento de fase inversa (RP-HPLC) u otros métodos de separación basados en el tamaño o carga del polipéptido. Además, el polipéptido purificado se puede caracterizar usando estos y otros métodos bien conocidos tales como análisis de aminoácidos y espectometría de masas. Los componentes de fármacos de los conjugados fármaco-oligómero de la presente invención se pueden modificar para facilitar el acoplamiento del componente oligómero. Cuando el componente fármaco es un polipéptido, se puede agregar un grupo funcional al extremo C o al extremo N del polipéptido, o una cadena lateral del polipéptido para proveer un punto de unión con el oligómero. Por ejemplo, se puede agregar un residuo de prolina o alanina al extremo N de un polipéptido terapéutico para facilitar la unión del componente oligomérico. Las modificaciones adecuadas son tales que no eliminan la actividad del fármaco. De manera similar, se pueden insertar aminoácidos específicos dentro de la cadena de aminoácidos del polipéptido, o se puede reemplazar un aminoácido del polipéptido terapéutico para facilitar la unión del oligómero, siempre que dicha modificación no elimine la actividad del polipéptido.
De esta manera, por ejemplo, se pueden modificar o sustituir uno o más aminoácidos dentro de un fármaco polipéptido, como por ejemplo, mediante una sustitución conservativa de uno o más aminoácidos. Una sustitución conservativa de aminoácidos puede incluir por ejemplo la sustitución de un aminoácido ácido por otro aminoácido ácido, de un aminoácido hidrofóbico por otro aminoácido hidrofóbico, u otras sustituciones conservativas conocidas en la técnica, incluyendo el uso de aminoácidos no naturales, tal como Nie por Leu, u ornitina (Orn) o homoarginina (homoArg) por Arg. Además de los tipos anteriores de modificaciones o sustituciones, también se puede usar un mimético de uno o más aminoácidos, conocidos de otra manera como un polipeptidomimético o peptidomimético. Como se usa aquí, el término "mimético" significa un aminoácido o análogo de aminoácido que tiene la misma característica funcional de un aminoácido o una similar. De esta manera, por ejemplo, un análogo de (D)arginina puede ser un mimético de (D)arginina si el análogo contiene una cadena lateral que tiene una carga positiva a pH fisiológico, como es característico del grupo reactivo de la cadena lateral de guanidinio de la arginina. Un polipeptidomimético o peptidomimético es una molécula orgánica que retiene grupos farmacóforos similares de la cadena del polipéptido como están presentes en el polipéptido correspondiente. La sustitución de aminoácidos con aminoácidos no naturales y peptidomiméticos como se describió arriba, puede mejorar la actividad general o las propiedades de un polipéptido individual en base a las modificaciones de las funcionalidades de la cadena lateral. Por ejemplo, estos tipos de alteraciones se pueden emplear junto con los componentes oligómeros de la presente invención para incrementar adicionalmente la resistencia del polipéptido a rompimiento enzimático y/o para mejorar la actividad biológica. 4.2.2 Síntesis de Conjugados Fármaco-oiigómero En el esquema 1 se muestra una síntesis general de preparación de los conjugados fármaco-oligómero de la presente invención.
ESQUEMA 1 ROCI + HO(C2H4O)nH RBr + HO(C2H4O)nH TEA THF NaH THF ROO(OC2H4)nOH R(OC2H4)nOH COCI2 NHS COCI2 NHS ROO(OC2H4)nOCONHSH R(OC2H4)nOCONHS DMF/TEA Insulina DMF/TEA Insulina ROO(OC2H4)nOCONH-lnsulina R(OC2H4)nOCONH-lnsulina R=C1 a C17; n=3,9,10 R=C1 a C17; n=3,9,10 R1-GAL-NCOCH2(OC2H4)14OCH2CO2NHS DMF/TEA Insulina R1-GAL-NCOCH2(OC2H4)14OCH2CONH-lnsulina R1-GAL-NH = tetra-O-pivaloilgalactosamina En la síntesis de oligómeros que contienen ácidos grasos y polietilenglicoles, en donde el etilenglicol está conectado al ácido graso en un enlace éster hidrolizable, es conveniente empezar con el cloruro de ácido del ácido graso o su anhídrido de ácido. Un polietilenglicol conveniente que tiene dos hidroxilos libres en los extremos es tratado entonces en solvente inerte con un equivalente molar igual de ácido clorhídrico o anhídrido acético. Primero se disuelve la unidad de glicol en un solvente inerte y se trata con una base orgánica antes de ia adición del cloruro de ácido o anhídrido de ácido. El producto se extrae del medio de reacción y se purifica adicionalmente usando cromatografía en columna: CH3(CH2)nCOCI + HOCH2CH2(OC2H4)mOH CH3(CH2)nC 1O(OC2H4)mOH en donde n=0 a 24, y m=2 a 130.
En algunos casos, es conveniente preparar oligómeros que tienen un enlace hidrolizable más fuerte, tal como amida. El cloruro de ácido o el anhídrido de ácido del ácido graso seleccionado se trata con un derivado amino de polietilenglicol en una condición controlada de reacción para afectar solamente el residuo amino y no la porción hidroxilo. La selectividad también se puede asegurar convirtiendo el ácido graso en éster de N- hidroxisuccinimida y haciendo reaccionar con el residuo amino del polietiienglicol.
CH3(CH2)nCOCI + NH2CH2CH2(OC2H4)mOH Piridina CH3(CH2)nCONHCH2CH2(OC2H4)mOH en donde n=0 a 24, y m=2 a 130; CH3(CH2)nCOONSU + NH2CH2CH2(OC2H4)mOH THF/TEA CH3(CH2)nCONHCH2CH2(OC2H4)mOH en donde n=0 a 24, y m=2 a 130.
El oligómero se puede acoplar con el fármaco péptido convirtiendo la porción de hidroxilo libre del oligómero en éster de N-hidroxisuccinimida (NSU). El grupo N-hidroxisuccinimida reacciona rápidamente con el residuo amino nucleofílico del péptido.
CH3(CH2)mCONHCH2CH2(OC2H4)nOCONSU + Péptido CH3(CH2)mCONHCH2CH2(OC2H4)nOCO-Péptido en donde n=0 a 24, y m=2 a 130.
En la síntesis de oligómeros en la cual la porción lipofílica de los oligómeros se conecta a la porción hidrofílica mediante enlace éter, primero se protege el polietilenglicol deseado (hidrófilo). Uno de los dos hidroxilos libres en los extremos se protege con un grupo trifilo en piridina usando un mol de cloruro de tritilo. El polietilenglicol protegido se disuelve en un solvente inerte adecuado y se trata con hidruro de sodio. El derivado bromo o tosilato de la porción lipofílica se disuelve en solvente inerte y se agrega la solución del polietilenglicol protegido. El producto se trata con una solución de ácido para-toluenosulfónico en un solvente inerte anhidro a temperatura ambiente. El producto deseado se extrae en un solvente inerte y se purifica mediante cromatografía en columna. Las estructuras de la transformación se representan a continuación: CH3(CH2)nBr + HO(C2H4O)mTritilo CH3(CH2)n(OC2H4)OmTritilo CH3(CH2)n(OC2H4)mOH en donde n=0 a 24, y m=2 a 130.
La porción lipofílica se selecciona preferiblemente del grupo que consiste de porciones de alquilo, colesterol adamantilo. En la síntesis de los oligómeros en donde la porción lipofílica del oligómero es conectada a la porción hidrofílica por medio de un enlace éter y los extremos terminales en una porción de ácido carboxílico, es conveniente proteger el grupo carboxílico. Se selecciona polietilenglicol que tiene un grupo hidroxilo libre en un extremo y un grupo carboxílico en el otro extremo. El grupo carboxílico se protege por medio de esterificación. El polietilenglicol protegido se disuelve en un solvente inerte adecuado (por ejemplo THF) y se trata con hidruro de sodio. Los derivados bromo o tosilato de la porción lipofílica se disuelven en un solvente inerte y se agregan a la solución del polietilenglicol protegido. El producto se trata con solución de hidróxido de sodio para liberar ácido libre. El producto deseado se extrae en un solvente inerte y se purifica mediante cromatografía en columna. Las estructuras de la transformación se representan a continuación: CH3(CH2)nBr + HO(C2H4O)mCH2CO2C2H5 I NaH, THF CH3(CH2)n(OC2H4)mOCH2CO2C2H5 NaOH CH3(CH2)n(OC2H4)mOCH2CO2H en donde n=0 a 24, y m=2 a 130.
La porción lipofílica se selecciona preferiblemente del grupo que consiste de porciones alquilo, colesterol y adamantilo. Este grupo de oligómeros ácidos se puede acoplar a fármacos péptidos haciendo reaccionar primero el grupo carboxílico con N-hidroxisuccinimida (NSU) para formar un grupo fácilmente saliente. Una solución de los oligómeros activados en un solvente inerte, se trata entonces con el fármaco péptido deseado disuelto en un solvente adecuado. Se puede seleccionar la adición inversa.
CH3(CH2)n(OC2H4)mOCH2COH2 + NSU CH3(CH2)n(OC2H4)mOCHCO2NSU Fármaco péptido CH3(CH2)n(OC2H4)OCH2CO-Péptido Algunas veces es conveniente remplazar la porción lipofílica con azúcares lipofílicos. Primero se esterifica la porción de azúcar con el cloruro de ácido graso deseado para obtener acilación selectiva o parcial. El producto se trata en solvente inerte con cloruro de diácido del derivado de ácido dicarboxílico deseado de polietilenglicol. La reacción se realiza con un equivalente molar de cada porción reaccionante. Esta reacción deja un extremo del hidrófilo llevando cloruro de ácido, que es convertido después al éster N-hidroxisuccinimida. El éster activado se hace reaccionar con el fármaco péptido en un solvente inerte adecuado.
CH2(OC2H2)mOCH2CCl + NSU Péptido H2(OC2H,)mOCH2C- Fármaco Péptido En donde R se selecciona del grupo que consiste de ácido graso, alquilo de C?-26, colesterol y adamantano, y en donde m es un número de l a 130. 4.3 Métodos Terapéuticos La invención provee métodos de tratamiento y prevención mediante la administración a un sujeto de una cantidad efectiva de los conjugados fármaco-oligómero de la invención. Una modalidad de la invención provee métodos de administración de una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado fármaco-oligómero de acuerdo con la presente invención. Los métodos de introducción incluyen sin limitación, administración oral, parenteral, rectal, tópica, sublingual, mucosal, nasal, oftálmica, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica espinal, intratecal, intraarticular, intraarterial, subaracnoide, bronquial, linfática e intrauterina. Los conjugados se pueden administrar mediante cualquier vía conveniente, por ejemplo por infusión o inyección de bolo, por absorción a través de los revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo la mucosa oral, la mucosa rectal y la mucosa intestinal, etc.), y se pueden administrar junto con otros agentes biológicamente activos. Las vías preferidas son la oral y la parenteral; muy preferiblemente oral. La administración puede ser sistémica o local.
En ciertas circunstancias, puede ser conveniente introducir las composiciones farmacéuticas de la invención directamente en el sistema nervioso central mediante cualquier vía adecuada, incluyendo inyección intraventricular e intratecal; la inyección intraventricular se puede facilitar mediante un catéter intraventricular, por ejemplo unido a un depósito tal como un depósito Ommaya. También se puede emplear la administración pulmonar o nasal, por ejemplo usando un inhalador o nebulizador, y la formulación con un agente de aerosol. En otra modalidad los conjugados se pueden suministrar en un sistema de liberación controlada. En una modalidad, se puede usar una bomba (véase Langer, citado arriba; Sefton, CRC Crit.Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald y otros, Surgery 88:507 (1980); Saudek y otros, N. Engl. J. Med. 321 :574 (1989)). En otra modalidad, se puede poner un sistema de liberación controlada en la cercanía del blanco terapéutico, esto es, el cerebro, requiriendo así solo una fracción de la dosis sistémica (véase por ejemplo, Goodson, en "Medical Applications of Controlled Reléase", citado arriba, vol. 2, pp. 1 15-138 (1984)). Otros sistemas de liberación controlada son descritos en la revisión de Langer (Science 249:1527-1533 (1990)). El sujeto es preferiblemente un animal, que incluye sin limitación animales tales como vacas, cerdos, caballos, pollos, gatos, perros, etc., y preferiblemente es un mamífero, de preferencia un humano. 4.4 Composiciones Farmacéuticas La presente invención contempla el uso de composiciones farmacéuticas para uso veterinario y médico. Las composiciones farmacéuticas comprenden generalmente uno o más conjugados fármaco-oligómero de la presente invención como ingredientes terapéuticos. Dichas composiciones farmacéuticas pueden incluir vehículos farmacéuticamente efectivos, y pueden incluir opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. El vehículo o vehículos deben ser farmacéuticamente aceptables en el sentido que sean compatibles con ios ingredientes terapéuticos y que no sean nocivos para el receptor de los mismos. Los vehículos compatibles son aquellos que no eliminan la actividad de los ingredientes terapéuticos. Los vehículos preferidos son los que no disminuyen significativamente la actividad de los ingredientes terapéuticos. Los ingredientes terapéuticos se proveen en una cantidad terapéuticamente efectiva. En un aspecto preferido, los ingredientes terapéuticos de las composiciones farmacéuticas incluyen un conjugado insulina-PEG-Mo-lipófilo. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención contendrán una cantidad terapéuticamente efectiva de los conjugados fármaco-oligómero, de preferencia en forma purificada, junto con una cantidad adecuada de un vehículo a fin de proveer la forma de administración adecuada para el paciente. La formulación se debe adecuar al modo de administración.
Se conocen y usan varios sistemas de liberación para administrar un conjugado de la invención, por ejemplo, encapsulación en microcápsulas. Las formulaciones farmacéuticas preferidas de acuerdo con la presente invención incluyen emulsiones y microemulsiones. Son muy preferidas las microemulsiones. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente u otro vehículo con el cual se administra el conjugado. Dichos vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles tales como agua y aceites, incluyendo los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético, tal como aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de ajonjolí y similares. Otros vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E. W. Martin. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, creta, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerilo, talco, cloruro de sodio, leche descremada seca, glicerol, propilenglicol, agua, etanol y similares. En una modalidad preferida, la composición se formula de acuerdo con procedimientos de rutina como una composición farmacéutica adaptada para administración intravenosa a seres humanos. El agua es un vehículo preferido cuando la composición farmacéutica se administra intravenosamente. También se pueden emplear soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como vehículos líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Típicamente, las composiciones para administración intravenosa son soluciones en un amortiguador acuoso isotónico estéril. Cuando sea necesario, la composición puede incluir también un agente solubilizante y un anestésico local, tal como lignocaína, para reducir el dolor en el sitio de la inyección. Por general, los ingredientes se suministran separadamente o mezclados en una forma de dosis unitaria, por ejemplo como un polvo seco liofilizado o concentrado libre de agua en un recipiente sellado herméticamente tal como una ampolleta o sachet, indicando la cantidad de ingrediente activo. Cuando la composición se administra por infusión, se puede dispensar con un frasco de infusión que contiene agua o solución salina estériles grado farmacéutico. Cuando la composición se administra mediante inyección, se puede proveer una ampolleta de agua estéril para inyección o solución salina, de tal manera que los ingredientes puedan mezclarse antes de la administración. Las formulaciones orales pueden incluir vehículos estándares tales como grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa, carbonato de magnesio, etc. Si se desea, la composición puede contener también agentes humectantes o emulsionantes, o agentes amortiguadores de pH. Las composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, jarabes, emulsiones, microemulsiones, elíxires, tabletas, pildoras, cápsulas, trociscos, polvos, formulaciones de liberación sostenida y similares. La composición se puede formular también como supositorios, con los aglutinantes y vehículos tradicionales tales como triglicéridos. Por lo general, los supositorios contienen ingrediente activo en la escala de 0.5% 10% en peso, las formulaciones orales contienen preferiblemente 10% a 95% de ingrediente activo. En un aspecto preferido, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se formulan como emulsiones o microemulsiones; las mícroemulsiones son especialmente preferidas. Las emulsiones son dispersiones coloidales que comprenden líquidos inmiscibles (por ejemplo aceite y agua), uno de los cuales se dispersa como gotitas dentro del otro (Block, L. y otros "Pharmaceutical Emulsions and Microemulsions," "Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Sistems", Vol. 2, p. 47-109 (1996)). Las emulsiones se preparan generalmente sometiendo los componentes de la emulsión a procedimientos de molienda o trituración. Las emulsiones incluyen sistemas que son extensiones de emulsiones de dos fases en las cuales una fase discontinua o interna comprende por sí sola sistemas emulsionados. Cada fase interna, a su vez, puede estar polidispersa, dando como resultado emulsiones terciarias, cuaternarias o de orden superior. Las emulsiones útiles de la presente invención incluyen por lo tanto, por ejemplo, W/O, O/W, W/O/W, O/W/O, y similares. Las composiciones en emulsión de la invención también pueden comprender una tercera fase no líquida, por ejemplo una fase que incluye partículas sólidas o cristales líquidos liotrópicos.
Generalmente una microemulsión se define como un sistema de agua, aceite y anfífilo, que es solo un líquido ópticamente isotrópico y termodinámicamente estable. Las microemulsiones se preparan generalmente dispersando primero un aceite en una solución tensioactiva acuosa y después agregando una cantidad suficiente de un alcohol de cadena intermedia para formar un sistema transparente. Está disponible una amplia variedad de componentes químicos polares y no polares para usar como la fase inmiscible de una emulsión. Los componentes polares incluyen por ejemplo polioles (por ejemplo butilenglicol, glicerina, polietilenglicol, propilenglicol) y agua. Los componentes no polares incluyen por ejemplo esteres (por ejemplo grasas, lanolina, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, monoestearato de glicerilo y aceites vegetales), éteres (por ejemplo perfluoropoliéteres y polioxipropilenos), ácidos grasos, alcoholes grasos, hidrocarburos (por ejemplo butano, propano, ceras microcristalinas, aceites minerales, petrolato y escualeno), haiohidrocarburos (por ejemplo perfluorocarbonos y clorofluorocarbonos), ceras vegetales y animales, y fluidos de silicón. La emulsión también puede comprender varios estabilizadores de emulsión, conservadores, antioxidantes y otros ingredientes funcionales. Los agentes tensioactivos son útiles en las emulsiones y microemulsiones de la presente invención para reducir la energía requerida para interrumpir la continuidad de fase y lograr la completa dispersión de fase reduciendo la tensión interfacial. Los agentes tensioactivos adecuados para usar en las composiciones de emulsión de la presente invención pueden comprender agentes tensioactivos aniónicos, catióticos, Zwitteriónicos, anfotéricos y no iónicos. Los agentes tensioactivos preferidos son aquellos que tiene un balance hidrofílico-lipofílico (HLB) en la escala de 6-20; de preferencia los que tienen un HLB en la escala de 8-20; de preferencia los que tienen un HLB en la escala de 10-20, y muy preferiblemente los que tienen un HLB en la escala de 13 a 20. Alternativamente, los agentes tensioactivos preferidos son los que producen una solución estable, traslúcida a transparente; son muy preferidos los que producen una solución transparente. Los estabilizadores de emulsión adecuados incluyen por ejemplo: coloides liofílicos, polisacáridos, acacia, agar, ácido algínico, carragenano, goma aguar, goma de karaya, tragacanto, goma de xantano, arcillas, celulosa microcristalina, óxidos e hidróxidos, sílice pirogénica o fumante, gelatina, resinas de carbómero, éteres de celulosa y similares. También se pueden emplear conservadores (por ejemplo agentes antimicrobianos) y antioxidantes (por ejemplo ácido cítrico, EDTA, fenilalanina, ácido fosfórico, ácido tartárico, triptofano, ácido ascórbico, bisulfato de sodio y sulfito de sodio) en las emulsiones y microemulsiones de la presente invención. El modo de administración y las formas de dosis, desde luego, afectan las cantidades terapéuticas deseables y eficaces de los compuestos para la aplicación terapéutica dada. Será fácilmente evidente para el experto en la materia que una cantidad terapéuticamente efectiva ha de variar en base a factores tales como el peso y la salud del receptor, el modo de administración y el tipo de trastorno médico a tratar. Por ejemplo, las dosis adecuadas de un conjugado de insulina pueden estar en general en la escala de 0.1 mg/kg a 5 mg/kg, de preferencia 0.1 mg/kg a 2 mg/kg, muy preferiblemente 0.2 mg/kg a 0.3 mg/kg. Las dosis efectivas se pueden extrapolar de curvas dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba en modelos de animal o in vitro. Los ingredientes accesorios pueden incluir sin limitación diluyentes, amortiguadores, agentes saborizantes, desintegrantes, agentes tensioctivos, espesantes, lubricantes, conservadores y/o antioxidantes. Los conjugados fármaco-oligómero de la ¡nvención se pueden formular como formas neutras o de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las formadas con grupos amino libres tales como las derivadas de ácidos clorhídricos, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc, y los formados con grupos carboxilo libres tales como los derivados de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxidos férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilaminoetanol, histidina, procaína, etc. La invención también provee un empaque o equipo farmacéutico que comprende uno o más recipientes llenos con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la invención. Se puede asociar opcionalmente dichos recipientes con un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos. Dichos avisos pueden reflejar la aprobación de la agencia para la fabricación, uso o venta para administración humana. La presente invención no está limitada en su alcance por las modalidades específicas descritas en la presente. En realidad, varias modificaciones de la invención además de las descritas en la presente se harán evidentes para el experto en la materia a partir de la descripción anterior y las figuras acompañantes. Dichas modificaciones se consideran dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. En toda esta especificación se ha hecho referencia a varias patentes y referencias no patentes. La descripción completa de cada una de estas referencias se incorpora aquí como referencia, como la descripción completa de cada una de las siguientes referencias: patente de E.U.A. No. 5,681 ,811 titulada "Conjugation-Stabilized Therapeutic Agent", expedida el 28 de octubre de 1997; patente de E.U.A. No. 5,438,040, titulada "Conjugation-Stabilized Polypeptide Compositions, Therapeutic Delivery and Diagnostic Formulations Comprisig Same, and Method of Making and Using the Same", expedida el 1 de agosto de 1995; patente de E.U.A. No. 5,359,030 titulada "Conjugation-Stabilized Polypeptide Compositions, Therapeutic Delivery and Diagnostic Formulations Comprising Same, and Method of Making and Using the Same", expedida el 25 de octubre de 1994; solicitud de patente de E.U.A. No. 08/958,383, titulada "Hidrophilic and Lipophilic Balanced Microemulsion Formulations of Free-Form and/or Conjugation-Stabilized Therapeutic Agents such as Insulin" presentada el 27 de octubre de 1997; solicitud de patente de E.U.A. No. 09/135,803, titulada "Blood-Brain Barrier Therapeutics" presentada el 14 de agosto de 1998; Chien, Y. W. y otros, Drug Dev. Ind. Pharm. 15:1601-1634 (1989); Radhakrishnan, B. y otros Proc. Int'l Symp. Control Reí. Bioactive Mater. 25:124-125 (1998); y Ekwuribe, N. AAPS Ann. Meeting Abst. S-102-S-103 (1998). 5. EJEMPLOS Los conjugados de la presente invención se evaluaron en una prueba de glucosa en sangre en ratón para examinar su potencia. Se evaluó también la actividad oral de conjugados formulados en microemulsión en perros diabéticos pancreatomizados. 5.1 Síntesis y caracterización de insulinas de oliqómero hidrolizables y no hidrolizables. Se sintetizaron oligómeros hidrolizables acoplando cloruros de ácidos grasos con un mol equivalente de polietilenglicol. Se sintetizaron oligómeros no hidrolizables acoplando bromuro de alquilo con la sal monosodio del polietilenglicol apropiado. Los oligómeros se activaron con N-hidroxisuccinimida y se acoplaron con insulina; se purificaron y caracterizaron por medio de MALDI(TOF)-MS para determinar el número de oligómeros sobre un mol de insulina. El esquema básico sintético se ilustra en el esquema 1. 5.2 Trietilenqlicol v PEGg Se pesó trietilenglicol (100g, 0.67 moles) en un matraz Erlenmeyer, se disolvió en cloruro de metileno y se trató con MgSO4. El MgSO4 se filtró usando un embudo de vidrio concrecionado con celita. Se removió el cloruro de metileno y la composición se secó durante la noche sobre P2O5 al alto vacío. En un matraz de fondo redondo de dos cuellos, seco y limpio, equipado con una barra de agitación, un tubo de sulfato de calcio y un embudo de adición, se pesó trietilenglicol seco (49.72g, 0.33 moles) y se le agregó THF anhidro (200ml). Se agregó al recipiente un mol equivalente de trietilamina (15.8 ml, 0.11 moles). El matraz de reacción se enfrió a 5°C. Desde un embudo de adición se le agregó gota a gota cloruro de oleilo (33.10g, 0.11 moles) durante 10 minutos, en dos veces el volumen de THF. Después de la adición, la reacción se agitó durante 3 horas; se formó un precipitado. TLC: gel de sílice; Eluyente: acetato de etilo: hexano, 3:2. Se removió el THF del precipitado del filtro por evaporación rotativa. Se le agregó cloruro de metileno al residuo y se lavó con agua desionizada (2x50ml), salmuera (2x75ml) y agua desionizada (3x50ml). El producto se purificó usando una columna de gel sílice de 4.6x39.0 cm, y de eluyente se usó acetato de etilo.hexano, 3:2. En un matraz de dos cuellos se pesó el PEG3 oleato (2.0g, 4.8 mmoles). Se le agregó cloruro de metileno y se agitó para disolver el polímero. Se le agregó trietilamina (0.7ml, 4.9 mmoles) y la mezcla de reacción se enfrió. El recipiente de reacción se enfrió completamente y se le agregó lentamente cloroformiato de nitrofenilo (1.0g, 4.9 mmoles)) disuelto en cloruro de metileno, dando como resultado una reacción exotérmica. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Después de 6 horas, el cloruro de metileno se eliminó mediante evaporación rotativa. Se le agregó éter al matraz y se formó un precipitado. La solución se filtró para remover el precipitado. El filtrado se secó sobre MgSO , después el éter se filtró y se removió, produciendo un aceite de color naranja-amarillo. Se preparó una columna de fase inversa C18 en el laboratorio y se equipó con una bomba peristáltica de 2.5x26.5cm. Eluyente: agua desionizada al 30% en isopropanol. Se pesó insulina (1.503g, 0.26 mmoles)en un matraz de fondo redondo equipado con una barra de agitación. Al agitar, se le agregó cuidadosamente DMSO (5ml) y se dejó agitando hasta disolverse. Se le agregó trietilamina (2.08 mmoles) y se agitó durante 10 minutos. Se le agregó cuidadosamente oleato-trietilenglicol activado en una cantidad mínima de DMSO (2ml), todo en una vez, y se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó mediante HPLC cada 30 minutos. El conjugado se purificó usando una HPLC preparativa. 5.2.1 Laurato y oleato de PEGa Los polímeros (disponibles comercialmente) se disolvieron en cloruro de metileno y se lavaron con NaCI saturado (3x50ml), bicarbonato de sodio (3x50ml) y agua desionizada (3x50ml) para remover cualquier PEG's libre. La solución se secó como se describió arriba para el trietilenglicol. En un matraz de dos cuellos se pesó el laurato de PEG5 (21.72g, 54.3 mmoles). Se le agregó cloruro de metileno y se agitó para disolver el polímero. Después, se le agregó trietilamina (7.56ml, 54.3 mmoles), y la mezcla de reacción se enfrió y se le agregó cloroformiato de 4-nitrofenilo (10.72g, 53.0 mmoles). Una vez completa la adición, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Después de 6 horas el cloruro de metileno se removió por evaporación rotativa. Se le agregó éter al matraz; se formó un precipitado y se filtró. El filtrado se secó sobre MgSO y se filtró para remover el solvente. Se obtuvo un aceite de color naranja-amarillo. Se preparó una columna de fase inversa de C18 y se equipó con una bomba peristáltica de 2.5x26.5cm, usando agua desionizada al 30% en ¡sopropanol como eluyente. Se pesó insulina (1.52g, 0.262 mmoles) en un matraz de fondo redondo con una barra agitadora. Se le agregó cuidadosamente con agitación DMSO (5ml). Se le agregó trietilamina (2.1 mmoles) y se agitó durante 10 minutos. Se disolvió el laurato PEG5 activado (0.152g, 0.262 mmoles) en una cantidad mínima de DMSO (2ml). Este se agregó cuidadosamente todo en una sola vez, y se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó mediante HPLC cada 30 minutos. El conjugado se purificó usando una HLPC preparativa Vydac C18 HPLC 22¡dmm x 250mml. 5.3 Preparación de formulación usada para insulina TEG hidrolizable Primero se preparó una microemulsión de blanco que tiene la siguiente composición: 5.3.1 Preparación de la microemulsión de blanco La microemulsión de blanco se preparó en una base de peso a peso usando un procedimiento de cinco pasos.
Paso 1. Preparación de la mezcla de aceite: Una mezcla de aceite de soya, Capmul MCM, aceite de cártamo, metilparabeno NF, propilparabeno NF, y palmitato de L-ácido ascórbico NF, se sometió a sonicación a 50°C bajo nitrógeno durante 10 minutos, para obtener una solución amarilla clara. Paso 2. Preparación de la mezcla emulsionante: Un recipiente de vidrio que contenía una mezcla de labrasol y vitamina E-TPGS, se sometió a sonicación a 50 °C durante 10 minutos, para obtener una solución clara. Paso 3. Preparación de amortiguador de fosfato de sodio 100 mM, pH 7.4: Se disolvieron fosfato monobásico de sodio anhidro y fosfato dibásico de sodio anhidro en agua desionizada, y la solución se filtró a través de un filtro de 0.2 m. El pH final de la solución fue de aproximadamente 7.4. Paso 4. Preparación de la formulación final: Se disolvió hexil-insulina M2 en un frasco estéril de 150ml que contenía amortiguador de fosfato de sodio, agua estéril, solución de gelatina y mezcla emulsionante. La mezcla de aceite se agregó gota a gota del paso 1 a la mezcla anterior. Se roció nitrógeno sobre el espacio superior y el frasco se selló con un tapón de fondo plano revestido con Teflon. La solución se sometió a sonicación a temperatura ambiente durante 2 minutos. La composición final era una solución clara. Paso 5. Llenado y sellado de la solución de producto de fármaco: Diez ml de la solución de producto de fármaco a granel se dividieron en alícuotas en frascos de 10 ml, y se sellaron con un tapón de fondo plano revestido con Teflon. El espacio superior se roció con nitrógeno NF. 5.3.2 Preparación de oligómeros TEG de insulina Todos los compuestos usados en esta serie tienen solubilidad limitada en agua. Preparación de la mezcla formulada de oleato de TEG de insulina: Se disolvieron 58.6 mg (85 % pureza) de la mezcla de oleato de TEG en 5 ml de microemulsión de blanco ME 365. Preparación de conjugados de monooleato de PEG3 insulina (M1 + M2) en microemulsión: Se disolvieron 65.8 mg (85 % pureza) en 12.5g (12 ml) de la formulación, 4.23 mg/ml. Preparación de la mezcla de octanoato de TEG insulina en la microemulsión: Se disolvieron 57.3 mg (85 % pureza) en 5ml de la formulación. Preparación de la mezcla de palmitato de TEG Insulina en microemulsión: Se disolvieron 58.9 mg (85 % pureza) en 5 ml de la formulación. Preparación de la mezcla de conjugados de monooleato de PEG9 insulina (M1 + M2) en microemulsión: Se disolvieron 2 mg (85 % pureza) en 0.2 ml de la formulación, 9.17 mg/ml.
Preparación del diconjugado de oleato de PEGg insulina en microemulsión: Se disolvieron 2 mg (85 % de pureza) en 0.2 ml de la formulación, 5.78 mg/ml. Preparación de la mezcla de conjugado de DHA TEG insulina: Se disolvieron 70 mg de mono- y diconjugado en 50 ml de emulsión de blanco. 5.4 Evaluación de la potencia Grupos de seis pares de dosis de 5 ratones macho CF-1 (~25g, no en ayuno), recibieron inyecciones subcutáneas de insulina bovina o insulina modificada. Se establecieron líneas básales pre- y pos-experimentales con dos grupos de vehículos. Un grupo adicional de dosis de 25µg/kg de insulina sirvió como control interno. Finalmente los ratones se sangraron 30 minutos después de la dosis y se midió la glucosa en sangre con un glucómetro (ONE TOUCH®). La potencia biológica de la insulina modificada se calculó entonces con respecto a una curva estándar de insulina bovina. Los cálculos se basaron en la suposición de que la insulina bovina tuviera una potencia de 27.5 lU/mg. 5.5 Evaluación en perros diabéticos Se usaron dos perros para cada compuesto. Los compuestos se formularon en una microemulsión de agua en aceite y se evaluaron a una dosis de 1-2mg/kg. Se administraron oralmente veinte mililitros de la formulación a cada perro, y las formulaciones se diluyeron con 20 ml de agua. Se monitorearon los niveles de glucosa e insulina en plasma a diferentes intervalos de tiempo.
Todos los conjugados estudiados fueron mezclas de insulina mono-, di- y tri-conjugada. ?La estructura básica del conjugado galactosamida-PEG14-insulina es como sigue: for pag 47 en donde R es -OC(O)C(CH3)3. 5.6 Resultados v Discusión Evaluación de la potencia: La comparación de las actividades de los conjugados hidrolizables y no hidrolizables muestra que los conjugados con enlaces éster hidrolizables producen buena actividad biológica in vivo (cuadro 2). La actividad surge del conjugado de insulina que ha perdido la porción de ácido graso mediante hidrólisis química o biológica. El almacenamiento prolongado de una muestra en amortiguador produce incremento de actividad. El análisis por HPLC revela que la porción de ácido graso es hidrolizada. Los conjugados no hidrolizables, con un ácido graso de cadena larga y PEG de cadena corta, producen actividad despreciable. Evaluación en Perros Pancreatomizados: La prueba de potencia muestra que el conjugado de metiltrietilenglicol produce el mejor resultado (cuadro 2). En esta base, los autores de la presente han elegido cadenas cortas de polietilenglicol para esterificación de ácido graso para formar componentes oligómeros. Se presentan los resultados de cuatro conjugados diferentes formulados en microemulsión. Los conjugados de metiltrietilenglicol producen una buena reducción de glucosa (cuadro 3). Otros dos conjugados que llevan una alta proporción de componentes de ácido graso hidrolizables producen una reducción de glucosa prolongada (figuras 1 , 2). Conclusiones: Se ha realizado síntesis de insulina modificada químicamente con oligómeros anfifílicos hidrolizables. Los productos formulados en microemulsión han sido evaluados oralmente en perros diabéticos (es decir, pancreatomizados). Se ha logrado la reducción prolongada de glucosa después de la administración oral de los productos insulina-oligómero.

Claims (55)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: L'm— D— H'n I (Fórmula 1 ) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son cada uno una porción hidrofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L y L' son cada uno una porción lipofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 26 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; y m+n+p tienen juntos un valor de por lo menos uno, y no sobrepasan el número total de sitios de enlace covalente sobre D para los sustituyentes -H', -L' y -H-L; y en donde m y n son cada uno por lo menos 1.
2.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde p es 0, y m y n son cada uno por lo menos 1.
3.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el o los enlaces H-L y el o los enlaces D-L', cuando están presentes, son hidrolizables.
4.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde los enlaces D-H y D-H', cuando están presentes, no son hidrolizables.
5.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el enlace D-L', cuando está presente, no es hidrolizable.
6.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde los enlaces D-H y D-H', cuando están presentes, se seleccionan independientemente del grupo que consiste de carbamato, amida y amida secundaria.
7.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el enlace H-L está presente y se selecciona del grupo que consiste de éster y carbonato.
8.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el enlace D-L' se selecciona del grupo que consiste de éster y carbonato.
9.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde D es un polipéptido biológicamente activo.
10.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 9, en donde el péptido biológicamente activo tiene por lo menos una porción disponible para conjugación, seleccionada del grupo que consiste de -NH2; -OH y -SH; y en donde por lo menos una de las porciones disponibles está conjugada con la porción H-L.
11.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la porción de fármaco terapéutico se selecciona del grupo que consiste de: hormona adrenocorticotrópica; ebiratide; angiotensina; angiotensina II; asparaginasa; péptidos natriuréticos atriales; péptidos diuréticos de sodio atriales, bacitracina; beta-endorfinas; factores de coagulación sanguínea Vil, VIII y IX; factor tímico sanguíneo; factor morfogénico de hueso; proteína morfogénica de hueso; bradiquinina; caruleina; polipéptido relacionado con el gen de calcitonina; calcitoninas; CCK-8; factores de crecimiento celular; TGF-alfa; TGF-beta; FGF ácido; FGF básico; quimocinas; colecistoquinina; colecistoquina-8; colecistoquinina-pancreozimina; colistina; factores estimuladores de colonia; GMCSF; MCSF; factor de liberación de corticotropina; citocinas; desmopresina; dipéptido; dismutasa; dinorfina; eledoisina; endorfinas; endotelina; péptidos antagonistas de endotelina; endoterinas; encefalinas; factor de crecimiento epidérmico; eritropoyetina; hormona estimulante del folículo; galanina; polipéptido inhibidor gástrico; polipéptido liberador de gastrina; gastrinas; G-CSF; glucagon; glutation peroxidasa; glutatio-peroxidasa; gonadotropina; gramicidina; gramicidinas; factor de crecimiento; factor liberador de hormona de crecimiento; hormonas de crecimiento; h-ANP; hormona liberadora de hormona; gonadotropina coriónica humana; cadena ß de gonadotropina coriónica humana; lactógeno placentario humano; insulina; factores de crecimiento semejantes a insulina; IGF-I; IGF-II; interferones; interieucinas; polipéptido intestinal; calicreina; quiotorfina; luliberina; hormona luteinizante; hormona liberadora de hormona luteinizante; lisozima cloruro; hormona estimulante de melanocito; hormona estimulante de melanóforo; melitina; motilina; muramilo; muramildipéptido; factor de crecimiento de nervio; factores de nutrición de nervio; NT-3; NT-4; CNTF; GDNF; BDNF; neuropéptido Y; neurotensina; oxitocina; pancreastatina; polipéptido pancreático; pancreozimina; hormona paratiroide; pentagastrina; polipéptido YY; polipéptidos activadores de adenil ciclasa de pituitaria; factor de crecimiento derivado de plaqueta; polimixina B; prolactina; polipéptido estimulante de sínstesis de proteína; proteína relacionada con PTH; relaxina; renina; secretina; factor tímico del suero; somatomedinas; somatostatinas; sustancia P; superóxido; superóxido dismutasa; taftsin; tetragastrina; trombopoyetina; factor humoral tímico; timopoyetina; timosina; timoestimulina; hormona liberadora de la hormona tiroidea; hormona estimuladora de tiroides; hormona liberadora de tirotropina TRH; tripsina; tuftsin; factor de crecimiento de tumor; factor de necrosis tumoral; tirocidina; urogastrona; uroquinasa; polipéptido intestinal vasoactivo; vasopresinas y equivalentes funcionales de dichos polipéptidos.
12.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde D es un antígeno de un organismo o un antígeno asociado a un estado de enfermedad, seleccionado del grupo que consiste de: adenovirus; ántrax; Bordetella pertussis; botulismo; rinotraqueitis bovina; Branhamella catarrhalis; hepatitis canina; moquillo canino; Chlamydiae; cólera; coccidiomicosis; viruela; citomegalovirus; fiebre de dengue; toxoplasmosis de dengue; difteria; encefalitis; E. coli enterotoxigénica; virus de Epstein Barr; 5 encefalitis equina; anemia infecciosa equina; influenza equina; pneumonía equina; rinovirus equino; Escherichia coli; leucemia felina; flavivirus; globulina; Haemophilus influenzae tipo b; Haemophilus influenzae; Haemophilus pertussis; Helicobacter pylori; Hemophilus; hepatitis; hepatitis A; hepatitis B; hepatitis C; virus de herpes; virus VIH, virus VIH-1 ; virus VIH-2; HTLV; 10 influenza; encefalitis Japonesa; especies de Klebsiellae; Legionella pneumophila; leishmania; lepra; enfermedad de limo; ¡nmunógeno de malaria; sarampión; meningitis; meningococos; polisacárido meningocócico del grupo A; polisacáriddo meningocócico del grupo C; paperas; virus de paperas; micobacterias y Mycobacterium tuberculosis; Neissería; Neisseria 15 gonorrhoeae; Neisseria meningitidis; lengua azul de ovino; encefalitis ovina; papiloma; parainfluenza; paramixovirus; tos ferina; plaga; Pneumococcus; •v Pneumocystis carínii; pneumonía; poliovirus; especies de proteus; Pseudomonas aureginosa; rabia; virus sincitial respiratorio; rotavirus; rubéola; salmonela; esquistosomiasis; Shigellae; virus de inmunodeficiencia de simio; 20 viruela; Staphylococcus aureus; especies de estafilococos; Streptococcus pneumoniae; Streptococcus pyogenes; especies de estrepcocos; influenza del cerdo; tétanos; Treponema pallidum; tifoidea; Vaccinia; virus de varicela- zoster; y Vibrio cholerae.
13.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma.
14.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde H y H' se seleccionan independientemente del grupo que consiste de PEG1-3o recto o ramificado, y azúcares.
15.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde H y/o H' es un azúcar seleccionado independientemente del grupo que consiste aminoazúcares, glicerol y monosacáridos naturales.
16.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 1 , en donde L y L' son cada uno una porción lipofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de: grupos alquilo que tienen de 2 a 24 carbonos; ácidos grasos que tienen de 4 a 26 carbonos; colesterol y adamatina.
17.- Una composición farmacéutica que comprende el conjugado fármaco-oligómero que se reclama en la reivindicación 1 , en asociación con un vehículo farmacéutico.
18.- Una composición farmacéutica que comprende el conjugado fármaco-oligómero que se reclama en la reivindicación 1 , en asociación con una emulsión.
19.- Una composición farmacéutica que comprende el conjugado fármaco-oligómero que se reclama en la reivindicación 1 , en asociación con una microemulsión.
20.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: D— [(H— Sp)— L0]p (Fórmula 11 ) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H es una porción hidrofílica seleccionada del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; S es un grupo separador seleccionado del grupo que consiste de azúcares, carbohidratos y glicerol; n es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales S puede estar unido a H; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales L puede estar unido a S; p es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales -[(H-Sn)-L0] puede estar unido a D; y el enlace S-H es hidrolizable.
21.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 20, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma. 22.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: D— [(H— Sn— H'q>— L0]p (Fórmula 12) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son porciones hidrofílicas seleccionadas individualmente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos;
S es un grupo separador seleccionado del grupo que consiste de azúcares, carbohidratos y glicerol; n es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales S puede estar unido a H; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales H' puede estar unido a S; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales L puede estar unido a S; p es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales - [(H-Sn-H'q)-Lo] puede estar unido a D; y el enlace S-H es hidrolizable.
23.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 22, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma. 24.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: D— [(H— H'q— Sn)— L0]p (Fórmula 13) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son porciones hidrofílicas seleccionadas individualmente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos;
S es un grupo separador seleccionado del grupo que consiste de azúcares, carbohidratos y glicerol; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covaiente en los cuales H' puede estar unido a H; n es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales S puede estar unido a H'; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales L puede estar unido a S; p es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales - [(H-H'q-Sn)-Lo] puede estar unido a D; y el enlace H-H' es hidrolizable.
25.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 24, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma.
26.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 24, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma, y H es PEG2-7.
27.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 24, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma, y H es PEG3.
28.- Un método para solubilizar un fármaco en una formulación farmacéutica que contiene aceite, que comprende: (a) proveer un conjugado fármaco-oligómero que tiene la fórmula: L'm— D— H'n I (Fórmula 1) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son cada uno una porción hidrofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L y L' son cada uno una porción lipofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; m+n+p es por lo menos uno, y no sobrepasan el número de sitios de enlace covalente sobre D para los sustituyentes -H', -L' y -H-L; y en donde m y n son cada uno por lo menos 1 ; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; y el enlace H-L y el enlace D-L', cuando están presentes, son hidrolizables; y (b) poner el conjugado fármaco-oligómero de (a) en asociación con una formulación farmacéutica que contiene aceite.
29.- El método de conformidad con la reivindicación 28, en donde la formulación farmacéutica que contiene aceite es una microemulsión.
30.- El método de conformidad con la reivindicación 28, en donde la formulación farmacéutica que contiene aceite es una emulsión.
31.- El método de conformidad con la reivindicación 28, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma.
32.- El uso de un conjugado fármaco-oligómero que tiene la fórmula: L'm-D— H'n I (Fórmula 1) [H-Lo]P en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son cada uno una porción hidrofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L y L' son cada uno una porción lipofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; m+n+p es por lo menos uno, y no sobrepasa el número de sitios de enlace covalente sobre D para los sustituyentes -H', -L' y -H-L; y en donde m y n son cada uno por lo menos 1 ; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; y el enlace H-L y/o el enlace D-L', cuando están presentes, son hidrolizables en un sujeto; para preparar una composición farmacéutica para suministrar un conjugado fármaco-hidrófilo en un lugar de un sujeto.
33.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma.
34.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde H es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene de 2 a 7 subunidades de PEG.
35.- El uso de conformidad con la reivindicación 32, en donde H es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene de 3 a 6 subunidades de PEG.
36.- El uso de conformidad con la reivindicación 33, en donde H es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene de 2 a 7 subunidades de PEG.
37.- El uso de conformidad con la reivindicación 33, en donde H es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene de 3 a 6 subunidades de PEG.
38.- El uso de un conjugado fármaco-PEG-lipófilo que tiene la fórmula: D— [(H— H'q)— L0]p (Fórmula 10) en donde: D es una porción terapéutica; H es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene de 2 a 7 subunidades de PEG; H' es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene de 0 a 130 subunidades de PEG; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen 2-24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales H' puede estar unido a H; o es un número desde 1 hasta ei número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales L puede estar unido a H'; p es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales -[(H-H'q)-Lo] puede estar unido a D; y el enlace H-H' es hidrolizable en un sujeto; para preparar una composición farmacéutica para suministrar un conjugado fármaco-PEG en un lugar de un sujeto, en donde el componente fármaco del conjugado fármaco-PEG se selecciona del grupo que consiste de insulina y equivalentes funcionales de insulina, y en donde el conjugado fármaco-PEG tiene actividad mejorada en comparación con una molécula de fármaco correspondiente no conjugado.
39.- El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde H es un polímero de PEG recto o ramificado que tiene 2, 3, 4, 5 o 6 subunidades de PEG.
40.- El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde el conjugado fármaco-PEG se administra en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable como una composición farmacéutica.
41.- El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde el conjugado fármaco-PEG se administra en asociación con una emulsión como una composición farmacéutica.
42.- El uso de conformidad con la reivindicación 38, en donde el conjugado fármaco-PEG se administra en asociación con una microemulsión como una composición farmacéutica.
43.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: D— [(H— H'q)— L0]P (Fórmula 10) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son porciones hidrofílicas seleccionadas individualmente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo que tienen de 2 a 24 átomos de carbono, colesterol y ácidos grasos; el enlace H-H' es hidrolizable y el enlace H'-L no es hidrolizable; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales H' puede estar unido a H; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales un sustituyente L puede estar unido a H'; y p es un número desde 1 hasta el número máximo de posiciones de enlace covalente en las cuales -[(H-H'q)-L0] puede estar unido a D.
44.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 43, en donde D, H, H' y L están seleccionados y dispuestos de tal manera que el conjugado fármaco-oligómero es anfifílico.
45.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 43, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma, y H es PEG2-7.
46.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 43, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma, y H es PEG3.
47.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 44, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma, y H es PEG2- .
48.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 44, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma, y H es PEG3.
49.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: D— [(H— Sn— H'q)— L0]p (Fórmula 12) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son porciones hidrofílícas seleccionadas individualmente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; L es una porción lipofílica seleccionada del grupo que consiste de grupos alquilo, colesterol, adamantano y ácidos grasos; S es un grupo separador seleccionado del grupo que consiste de azúcares, carbohidratos y glicerol; n es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales S puede estar unido a H; q es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales H' puede estar unido a S; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales L puede estar unido a S; p es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente en los cuales - [(H-Sn-H'q)-L0] puede estar unido a D; y el enlace S-H es hidrolizable; y en donde el enlace H'-L no es hidrolizable, y en donde el oligómero -[(H-Sn- H'q)-L0] comprende una subunidad H'-L seleccionada del grupo que consiste de CH3(CH2)n(OC2H4)mOH (Fórmula 3); en donde n=3 a 25 y m=1 a 7; CH3(CH2)n(OC2H4)mOCH2CO2H (Fórmula 4); en donde n=3 a 25 y m=1 a 6; R-(OC2H4)mCH2CO2H (Fórmula 6); en donde m=0 a 5 y R=colesterol o adamantano; CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CH2(OC2H4)mOH (Fórmula 8); en donde m=1 a 7; y CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CX(OC2H4)mOH (Fórmula 9); en donde m=1 a 7 y X=NH.
50.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 49, en donde D es insulina o un equivalente funcional de la misma.
51.- Un conjugado fármaco-oligómero que tiene la siguiente fórmula general: L'm— D— H'n I (Fórmula 1 ) en donde: D es una porción de fármaco terapéutico; H y H' son cada uno una porción hidrofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de polímeros de PEG rectos o ramificados que tienen de 2 a 130 subunidades de PEG, y azúcares; los enlaces H-L son hidrolizables y los enlaces D-L', cuando están presentes, son hidrolizables; L y L' son cada uno una porción lipofílica seleccionada independientemente del grupo que consiste de grupos alquilo, colesterol, adamantano y ácidos grasos; o es un número desde 1 hasta el número máximo de sitios de enlace covalente sobre H; m+n+p tienen juntos un valor de por lo menos uno, y no sobrepasan el número total de sitios de enlace covalente sobre D para los sustituyentes -H', -L' y -H-L; y en donde m y n son cada uno por lo menos 1 ; y en donde H-L se selecciona del grupo que consiste de: CH3(CH2)nCX(OC2H4)mOH (Fórmula 5); en donde n=3 a 25, m=1 y X=O; R-OCO(C2H4O)mCH2CO2H (Fórmula 7); en donde m=0 a 5 y R=colesterol o adamantano; y CH3(CH2— CH=CH)6(CH2)2CX(OC2H4)mOH (Fórmula 9); en donde m=1 a 7 y X=O.
52.- El conjugado fármaco-oligómero de conformidad con la reivindicación 51 , en donde m y n son cada uno por lo menos 1 y p=0.
53.- Una composición farmacéutica que comprende el conjugado fármaco-oligómero que se reclama en la reivindicación 51 , en asociación con un vehículo farmacéutico.
54.- Una composición farmacéutica que comprende el conjugado 5 fármaco-oligómero que se reclama en la reivindicación 51 , en asociación con una emulsión.
55.- Una composición farmacéutica que comprende el conjugado fármaco-oligómero que se reclama en la reivindicación 51 , en asociación con una microemulsión. ***
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Families Citing this family (152)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020156434A1 (en) * 1998-03-13 2002-10-24 Minimed Inc. Stabilizing catheter for protein drug delivery
US6703381B1 (en) 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
US7375096B1 (en) * 1998-12-04 2008-05-20 California Institute Of Technology Method of preparing a supramolecular complex containing a therapeutic agent and a multi-dimensional polymer network
US7060708B2 (en) * 1999-03-10 2006-06-13 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US6716452B1 (en) * 2000-08-22 2004-04-06 New River Pharmaceuticals Inc. Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US7169889B1 (en) 1999-06-19 2007-01-30 Biocon Limited Insulin prodrugs hydrolyzable in vivo to yield peglylated insulin
US6713454B1 (en) * 1999-09-13 2004-03-30 Nobex Corporation Prodrugs of etoposide and etoposide analogs
JP4027663B2 (ja) * 1999-10-04 2007-12-26 ネクター セラピューティックス エイエル，コーポレイション ポリマー安定化神経ペプチド
US6638906B1 (en) 1999-12-13 2003-10-28 Nobex Corporation Amphiphilic polymers and polypeptide conjugates comprising same
US6596306B1 (en) * 2000-07-07 2003-07-22 David Ho Sue San Ho Drug delivery system:formulation for fat-soluble drugs
US20020099013A1 (en) * 2000-11-14 2002-07-25 Thomas Piccariello Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
US7163918B2 (en) 2000-08-22 2007-01-16 New River Pharmaceuticals Inc. Iodothyronine compositions
CA2423354C (en) * 2000-09-20 2009-12-15 Lee Shahinian Jr. Self-preserved nasal, inhalable, and topical ophthalmic preparations and medications
FR2814951B1 (fr) * 2000-10-06 2003-01-17 Flamel Tech Sa Suspension colloidale de particules submicroniques de vectorisation de principes actifs hydrophiles (insuline) et leur mode de preparation
US8394813B2 (en) 2000-11-14 2013-03-12 Shire Llc Active agent delivery systems and methods for protecting and administering active agents
TWI321054B (en) 2000-12-19 2010-03-01 California Inst Of Techn Compositions containing inclusion complexes
US7060675B2 (en) 2001-02-15 2006-06-13 Nobex Corporation Methods of treating diabetes mellitus
US6867183B2 (en) 2001-02-15 2005-03-15 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US8889163B2 (en) 2001-03-08 2014-11-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Facially amphiphilic polymers as anti-infective agents
FR2822834B1 (fr) * 2001-04-02 2005-02-25 Flamel Tech Sa Suspension colloidale de nanoparticules a base de copolymeres amphiphile pour la vectorisation de principes actifs et leur mode de preparation
BR0209896A (pt) * 2001-05-21 2004-08-17 Nektar Therapeutics Composição de insulina para administração pulmonar, e, métodos para suprir insulina a um indivìduo mamìfero, para prover uma composição de insulina não-imunogênica e uma composição de insulina de efeito prolongado para administração ao pulmão de um indivìduo
US6828297B2 (en) 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of insulin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6713452B2 (en) * 2001-06-04 2004-03-30 Nobex Corporation Mixtures of calcitonin drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US6835802B2 (en) 2001-06-04 2004-12-28 Nobex Corporation Methods of synthesizing substantially monodispersed mixtures of polymers having polyethylene glycol moieties
US6828305B2 (en) 2001-06-04 2004-12-07 Nobex Corporation Mixtures of growth hormone drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US7713932B2 (en) 2001-06-04 2010-05-11 Biocon Limited Calcitonin drug-oligomer conjugates, and uses thereof
US6858580B2 (en) 2001-06-04 2005-02-22 Nobex Corporation Mixtures of drug-oligomer conjugates comprising polyalkylene glycol, uses thereof, and methods of making same
US7198945B2 (en) * 2001-08-09 2007-04-03 Teruyuki Nagamune Cell having modified cell membrane
US7169752B2 (en) 2003-09-30 2007-01-30 New River Pharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for prevention of overdose of oxycodone
US20070066537A1 (en) * 2002-02-22 2007-03-22 New River Pharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for prevention of overdose of oxycodone
US20060014697A1 (en) 2001-08-22 2006-01-19 Travis Mickle Pharmaceutical compositions for prevention of overdose or abuse
US7338939B2 (en) * 2003-09-30 2008-03-04 New River Pharmaceuticals Inc. Abuse-resistant hydrocodone compounds
US7375082B2 (en) * 2002-02-22 2008-05-20 Shire Llc Abuse-resistant hydrocodone compounds
US7196059B2 (en) 2001-09-07 2007-03-27 Biocon Limited Pharmaceutical compositions of insulin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US6770625B2 (en) 2001-09-07 2004-08-03 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of calcitonin drug-oligomer conjugates and methods of treating diseases therewith
US7030082B2 (en) 2001-09-07 2006-04-18 Nobex Corporation Pharmaceutical compositions of drug-oligomer conjugates and methods of treating disease therewith
US7166571B2 (en) 2001-09-07 2007-01-23 Biocon Limited Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
MY127575A (en) * 2001-09-07 2006-12-29 Biocon Ltd Methods of synthesizing insulin polypeptide-oligomer conjugates, and proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US7312192B2 (en) 2001-09-07 2007-12-25 Biocon Limited Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
US6913903B2 (en) * 2001-09-07 2005-07-05 Nobex Corporation Methods of synthesizing insulin polypeptide-oligomer conjugates, and proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same
UA78726C2 (en) * 2001-11-01 2007-04-25 Sciclone Pharmaceuticals Inc Pharmaceutical composition of thymosin alpha 1 conjugated with polyethylene glycol, method for production, and method for treatment
US20030114460A1 (en) * 2001-12-14 2003-06-19 Allergan Sales, Inc. Pharmaceutical conjugates with enhanced pharmacokinetic characteristics
IL163667A0 (en) * 2002-02-22 2005-12-18 New River Pharmaceuticals Inc Novel sustained release pharmaceutical compounds to preventabuse of controlled substances
EP1490090A4 (en) * 2002-02-22 2006-09-20 New River Pharmaceuticals Inc SYSTEMS FOR DELIVERING ACTIVE AGENTS AND METHODS FOR PROTECTING AND DELIVERING ACTIVE AGENTS
US7105486B2 (en) * 2002-02-22 2006-09-12 New River Pharmaceuticals Inc. Abuse-resistant amphetamine compounds
US7700561B2 (en) 2002-02-22 2010-04-20 Shire Llc Abuse-resistant amphetamine prodrugs
US7659253B2 (en) 2002-02-22 2010-02-09 Shire Llc Abuse-resistant amphetamine prodrugs
FR2840614B1 (fr) 2002-06-07 2004-08-27 Flamel Tech Sa Polyaminoacides fonctionnalises par de l'alpha-tocopherol et leurs applications notamment therapeutiques
WO2003105768A2 (en) * 2002-06-13 2003-12-24 Nobex Corporation Methods of reducing hypoglycemic episodes in the treatment of diabetes mellitus
FR2843117B1 (fr) * 2002-07-30 2004-10-15 Flamel Tech Sa Polyaminoacides fonctionnalises par au moins un groupement hydrophobe et leurs applications notamment therapeutiques
ES2377318T3 (es) 2002-09-06 2012-03-26 Cerulean Pharma Inc. Polímeros a base de ciclodextrina para el suministro de los agentes terapéuticos enlazados covalentemente a ellos
AU2003285200A1 (en) * 2002-11-09 2004-06-03 Nobex Corporation Modified carbamate-containing prodrugs and methods of synthesizing same
JP2006507349A (ja) * 2002-11-25 2006-03-02 サイクローン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド アルファ・チモシンを用いて放射線損傷を防護するための方法
CA2504287A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-10 Nobex Corporation Natriuretic compounds, conjugates, and uses thereof
US7648962B2 (en) * 2002-11-26 2010-01-19 Biocon Limited Natriuretic compounds, conjugates, and uses thereof
US8133881B2 (en) 2003-01-13 2012-03-13 Shire Llc Carbohydrate conjugates to prevent abuse of controlled substances
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
HUE058897T2 (hu) 2003-02-26 2022-09-28 Nektar Therapeutics Polimer VIII-as faktor egység konjugátumok
CA2518406A1 (en) * 2003-03-10 2004-09-23 Biogen Idec Ma Inc. Thiol-mediated drug attachment to targeting peptides
WO2004082634A2 (en) * 2003-03-17 2004-09-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Facially amphiphilic polymers and oligomers and uses thereof
US20100311656A1 (en) * 2003-04-23 2010-12-09 Sciclone Pharmaceuticals, Inc. Treatment or prevention of respiratory viral infections with alpha thymosin peptides
CA2525631C (en) * 2003-05-13 2012-12-18 Medtronic, Inc. Moisture curable materials for delivery of agents, methods, and medical devices
DK1644019T4 (en) * 2003-05-29 2018-04-23 Shire Llc AMPHETAMINE COMPOUNDS RESISTANT TO ABUSE
ES2436152T3 (es) 2003-07-23 2013-12-27 Novartis Ag Uso de calcitonina en osteoartritis
ES2328579T3 (es) * 2003-07-25 2009-11-16 Conjuchem Biotechnologies Inc. Derivados de insulina de larga duracion y procedimientos asociados.
BRPI0414876A (pt) * 2003-09-30 2006-11-21 New River Pharmaceuticals Inc compostos e composições farmcêuticas para prevenção de overdose ou abuso e respectivos usos
EP1525890A1 (en) 2003-10-02 2005-04-27 Complex Biosystems GmbH Protein-Proteophore complexes
FR2860516B1 (fr) * 2003-10-03 2006-01-13 Flamel Tech Sa Homopolyaminoacides telecheliques fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques
KR20120107142A (ko) * 2004-01-23 2012-09-28 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 표면적으로 친양쪽성인 폴리아릴 및 폴리아릴알키닐 중합체와 올리고머, 그리고 이들의 용도
DE102004009287A1 (de) * 2004-02-26 2005-09-15 Institut Für Neue Materialien Gem. Gmbh Amphiphile Nanopartikel
US8329958B2 (en) 2004-07-02 2012-12-11 Biocon Limited Combinatorial synthesis of PEG oligomer libraries
RU2527893C2 (ru) 2004-07-19 2014-09-10 Биокон Лимитед Инсулин-олигомерные конъюгаты, их препараты и применения
AU2005271526B2 (en) * 2004-08-03 2011-12-08 Emisphere Technologies, Inc. Antidiabetic oral insulin-biguanide combination
US9028852B2 (en) * 2004-09-07 2015-05-12 3M Innovative Properties Company Cationic antiseptic compositions and methods of use
US20060063834A1 (en) * 2004-09-09 2006-03-23 Frangioni John V Substituted adamantanes, and methods of making the same
US7402652B2 (en) * 2004-09-14 2008-07-22 Miller Landon C G Baclofen conjugate and a pharmaceutical composition for treatment of neuronal disorders
WO2006076471A2 (en) * 2005-01-12 2006-07-20 Nobex Corporation Bnp conjugates and methods of use
WO2006079641A2 (en) * 2005-01-27 2006-08-03 Novo Nordisk A/S Insulin derivatives conjugated with structurally well defined branched polymers
US20090220587A1 (en) * 2005-02-01 2009-09-03 United State Army Liposomal drug delivery constructs targeted by lipid-conjugated peptide ligands
US7741431B2 (en) * 2005-02-01 2010-06-22 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Liposomes containing novel targeting and/or fusogenic peptides, preparations containing them and therapeutic use thereof
US20080171695A1 (en) * 2005-02-02 2008-07-17 Novo Nordisk A/S Insulin Derivatives
KR20080004475A (ko) * 2005-02-25 2008-01-09 유니버시티 오브 매사추세츠 표면적으로 양친매성인 중합체 및 올리고머, 그 조성물 및암치료방법으로서의 그 용도
ES2361166T3 (es) * 2005-07-08 2011-06-14 Biocon Limited Conjugados de insulina.
CN101291952B (zh) 2005-10-13 2016-02-03 拜奥康有限公司 制备胰岛素缀合物的方法
BRPI0618723A2 (pt) 2005-11-17 2011-09-06 Novartis Ag composição farmacêutica oral na forma de um comprimido prensado
US20070142287A1 (en) * 2005-12-20 2007-06-21 Biomed Solutions, Llc Compositions And Methods For Treatment Of Cancer
US8334257B2 (en) 2005-12-20 2012-12-18 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
AR059809A1 (es) 2006-03-10 2008-04-30 Wyeth Corp Anticuerpos anti-5t4 y sus usos
US8580746B2 (en) * 2006-03-30 2013-11-12 Palatin Technologies, Inc. Amide linkage cyclic natriuretic peptide constructs
WO2007115182A2 (en) * 2006-03-30 2007-10-11 Palatin Technologies, Inc. Linear natriuretic peptide constructs
CA2647143A1 (en) 2006-03-30 2007-10-11 Palatin Technologies, Inc. Cyclic natriuretic peptide constructs
EP2049149B1 (en) 2006-07-31 2015-04-15 Novo Nordisk A/S Pegylated extended insulins
AU2007298919C1 (en) 2006-09-22 2014-02-06 Novo Nordisk A/S Protease resistant insulin analogues
WO2008049711A1 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Novo Nordisk A/S Peptide extended insulins
JP2010516625A (ja) 2007-01-24 2010-05-20 インサート セラピューティクス， インコーポレイテッド 制御された薬物送達のためのテザー基を有するポリマー−薬物コンジュゲート
EP2152245B1 (en) 2007-04-30 2015-12-02 Novo Nordisk A/S Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein
US8969514B2 (en) 2007-06-04 2015-03-03 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of hypercholesterolemia, atherosclerosis, coronary heart disease, gallstone, obesity and other cardiovascular diseases
CA2688161C (en) 2007-06-04 2020-10-20 Kunwar Shailubhai Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders
CN101790379A (zh) * 2007-06-27 2010-07-28 萨摩斯药品有限责任公司 生物活性物质的多日传递
US7776827B2 (en) * 2007-07-27 2010-08-17 Immuneregen Biosciences, Inc. Method of using substance P analogs for treatment amelioration of myelodysplastic syndrome
NZ585135A (en) 2007-10-16 2012-08-31 Biocon Ltd An orally administerable solid pharmaceutical composition comprising in-105 and a process thereof
EP2254905B1 (en) 2008-03-14 2016-12-14 Novo Nordisk A/S Protease-stabilized insulin analogues
KR101755434B1 (ko) 2008-03-18 2017-07-10 노보 노르디스크 에이/에스 프로테아제 안정화되고, 아실화된 인슐린 유사체
US20090271021A1 (en) * 2008-04-28 2009-10-29 Popp Shane M Execution system for the monitoring and execution of insulin manufacture
EP2328910B1 (en) 2008-06-04 2014-08-06 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders
EP3241839B1 (en) 2008-07-16 2019-09-04 Bausch Health Ireland Limited Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal, inflammation, cancer and other disorders
WO2010120365A2 (en) * 2009-04-16 2010-10-21 Wu Nian Protein-carrier conjugates
WO2011003633A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Alize Pharma Ii Pegylated l-asparaginase
BR112012012945A2 (pt) 2009-11-25 2020-12-29 Arisgen Sa Composição de liberação mucosal, seu método de produção, complexo de peptídeo pré-formado, kit e uso de um agente ativo de peptídeo
EP2550362B1 (en) 2010-03-25 2017-01-04 Oregon Health&Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
US9616097B2 (en) 2010-09-15 2017-04-11 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Formulations of guanylate cyclase C agonists and methods of use
US20120202890A1 (en) * 2011-02-08 2012-08-09 Nian Wu Polymer-carbohydrate-lipid conjugates
EP3566711A1 (en) * 2011-05-18 2019-11-13 Eumederis Pharmaceuticals, Inc. Improved peptide pharmaceuticals
KR20230023059A (ko) * 2011-05-18 2023-02-16 메더리스 다이어비티즈, 엘엘씨 인슐린 저항성에 대한 개선된 펩티드 제약
RS57397B8 (sr) 2011-06-10 2020-01-31 Univ Oregon Health & Science Cmv glikoproteini i rekombinantni vektori
US8883177B2 (en) 2011-06-28 2014-11-11 Nian Wu Pharmaceutical compositions for parenteral administration
EP3797824B1 (en) 2011-06-28 2024-06-12 Inovio Pharmaceuticals, Inc. A miniminally invasive dermal electroporation device
US20130189754A1 (en) 2011-09-12 2013-07-25 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
US9402894B2 (en) 2011-10-27 2016-08-02 International Aids Vaccine Initiative Viral particles derived from an enveloped virus
ES2721882T3 (es) 2011-12-23 2019-08-06 Pfizer Regiones constantes de anticuerpo modificadas por ingeniería genética para conjugación específica de sitio y procedimientos y usos de las mismas
KR20150002777A (ko) 2012-04-11 2015-01-07 노보 노르디스크 에이/에스 인슐린 제제
ES2631608T3 (es) 2012-06-27 2017-09-01 International Aids Vaccine Initiative Variante de la glicoproteína Env del VIH-1
US20140094432A1 (en) 2012-10-02 2014-04-03 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for polymer precipitation and generation of particles
KR102365582B1 (ko) 2012-11-20 2022-02-18 메더리스 다이어비티즈, 엘엘씨 인슐린 저항성에 대한 개선된 펩티드 약제
EP4047023A1 (en) 2012-11-20 2022-08-24 Eumederis Pharmaceuticals, Inc. Improved peptide pharmaceuticals
JP6735561B2 (ja) 2012-12-03 2020-08-05 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． Ｏ−グリコシル化カルボキシ末端部分（ｃｔｐ）ペプチド系のインスリンおよびインスリン類似体
CA2902348C (en) 2013-02-25 2021-11-30 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase and their uses
WO2014151206A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Synergy Pharmaceuticals Inc. Agonists of guanylate cyclase and their uses
HK1220611A1 (zh) 2013-03-15 2017-05-12 Bausch Health Ireland Limited 用於治疗胃肠道病症的组成物
CN113388007A (zh) 2013-06-05 2021-09-14 博士医疗爱尔兰有限公司 鸟苷酸环化酶c的超纯激动剂、制备和使用所述激动剂的方法
BR112016002789A2 (pt) 2013-08-09 2017-11-21 Ardelyx Inc compostos e métodos para inibir transporte de fosfato
EP2848937A1 (en) 2013-09-05 2015-03-18 International Aids Vaccine Initiative Methods of identifying novel HIV-1 immunogens
US10058604B2 (en) 2013-10-07 2018-08-28 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
RS57004B1 (sr) 2013-10-07 2018-05-31 Novo Nordisk As Novi derivat analoga insulina
WO2015054649A2 (en) 2013-10-10 2015-04-16 Synergy Pharmaceuticals, Inc. Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of opioid induced dysfunctions
EP3065780A1 (en) 2013-11-04 2016-09-14 Pfizer Inc. Anti-efna4 antibody-drug conjugates
CN113274506A (zh) * 2013-12-05 2021-08-20 念·吴 聚合物-碳水化合物的缀合物的药物转递技术
US10092891B2 (en) * 2014-04-25 2018-10-09 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Controlling the activity of growth factors, particularly TGF-β, in vivo
AU2015253422B2 (en) 2014-04-30 2020-09-03 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-PTK7 antibody-drug conjugates
CN113264994A (zh) 2014-05-28 2021-08-17 梅德瑞斯糖尿病有限责任公司 针对胰岛素抵抗的改良肽药物
KR101770664B1 (ko) * 2014-06-13 2017-08-23 주식회사 휴메딕스 멜리틴-폴리에틸렌글리콜 배합체 및 그를 포함하는 약제학적 조성물
US10174292B2 (en) 2015-03-20 2019-01-08 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
US9931394B2 (en) 2015-03-23 2018-04-03 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
TWI778491B (zh) 2015-11-30 2022-09-21 美商輝瑞股份有限公司 位點專一性ｈｅｒ２抗體藥物共軛體
US20170216452A1 (en) 2015-11-30 2017-08-03 Pfizer Inc. Antibodies and antibody fragments for site-specific conjugation
EP3402804A1 (en) 2016-01-11 2018-11-21 Synergy Pharmaceuticals Inc. Formulations and methods for treating ulcerative colitis
KR102692762B1 (ko) 2016-09-02 2024-08-08 사노피 파스퇴르 인크 네이세리아 메닌기티디스 백신
DK3554534T3 (da) 2016-12-16 2021-08-23 Novo Nordisk As Farmaceutisk sammensætning omfattende insulin
US10174302B1 (en) 2017-06-21 2019-01-08 Xl-Protein Gmbh Modified L-asparaginase
US11364303B2 (en) 2017-09-29 2022-06-21 Pfizer Inc. Cysteine engineered antibody drug conjugates
HUE069178T2 (hu) 2018-01-03 2025-02-28 Mederis Diabetes Llc Javított peptidgyógyszerek NASH és egyéb rendellenességek kezelésére
US12171806B2 (en) 2021-09-28 2024-12-24 Spitfire Pharma Llc Therapeutic regimens and methods for lowering blood glucose and/or body weight using GLP-1R and GCGR balanced agonists

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3256153A (en) 1963-02-08 1966-06-14 Smith Kline French Lab Method of stabilizing wax-fat coating materials and product thereof
US4003792A (en) 1967-07-01 1977-01-18 Miles Laboratories, Inc. Conjugates of acid polysaccharides and complex organic substances
GB1381274A (en) * 1971-01-28 1975-01-22 Nat Res Dev Insulin derivatives
US4044196A (en) 1972-03-30 1977-08-23 Bayer Aktiengesellschaft Crosslinked copolymers of α,β-olefinically unsaturated dicarboxylic anhydrides
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
FR2408387A2 (fr) 1975-06-30 1979-06-08 Oreal Compositions a base de dispersions aqueuses de spherules lipidiques
US4093574A (en) 1977-02-02 1978-06-06 Eli Lilly And Company Somatostatin analogs and intermediates thereto
US4087390A (en) 1977-02-02 1978-05-02 Eli Lilly And Company Somatostatin analogs and intermediates thereto
JPS53116315A (en) 1977-03-17 1978-10-11 Ueno Seiyaku Oyo Kenkyujo Kk Powder or granular containing improved sorbinic acid
US4100117A (en) 1977-04-21 1978-07-11 Eli Lilly And Company Somatostatin analogs and intermediates thereto
US4253998A (en) 1979-03-09 1981-03-03 American Home Products Corporation Peptides related to somatostatin
JPS54148722A (en) 1978-05-12 1979-11-21 Takeda Chem Ind Ltd Nonapeptide and its preparation
US4277394A (en) 1979-04-23 1981-07-07 Takeda Chemical Industries, Ltd Tetrapeptidehydrazide derivatives
JPS5692846A (en) 1979-12-27 1981-07-27 Takeda Chem Ind Ltd Tetrapeptide derivative and its preparation
US4698264A (en) 1982-08-02 1987-10-06 Durkee Industrial Foods, Corp. Particulate composition and process for making same
US4585754A (en) 1984-01-09 1986-04-29 Valcor Scientific, Ltd. Stabilization of proteins and peptides by chemical binding with chondroitin
US4717566A (en) 1984-03-19 1988-01-05 Alza Corporation Dosage system and method of using same
US4684524A (en) 1984-03-19 1987-08-04 Alza Corporation Rate controlled dispenser for administering beneficial agent
US4849405A (en) 1984-05-09 1989-07-18 Synthetic Blood Corporation Oral insulin and a method of making the same
US4963367A (en) 1984-04-27 1990-10-16 Medaphore, Inc. Drug delivery compositions and methods
US4622392A (en) 1984-06-21 1986-11-11 Health Research Inc. (Roswell Park Division) Thiophospholipid conjugates of antitumor agents
US4629621A (en) 1984-07-23 1986-12-16 Zetachron, Inc. Erodible matrix for sustained release bioactive composition
US4797288A (en) 1984-10-05 1989-01-10 Warner-Lambert Company Novel drug delivery system
US4946828A (en) * 1985-03-12 1990-08-07 Novo Nordisk A/S Novel insulin peptides
SE457326B (sv) 1986-02-14 1988-12-19 Lejus Medical Ab Foerfarande foer framstaellning av en snabbt soenderfallande kaerna innehaallande bl a mikrokristallin cellulosa
US5093198A (en) 1987-06-19 1992-03-03 Temple University Adjuvant-enhanced sustained release composition and method for making
DE3721721C1 (de) 1987-07-01 1988-06-09 Hoechst Ag Verfahren zur Umhuellung von Granulaten
JPH01308231A (ja) 1988-06-03 1989-12-12 Takeda Chem Ind Ltd 安定化された医薬組成物および製造法
US5055300A (en) 1988-06-17 1991-10-08 Basic Bio Systems, Inc. Time release protein
JPH04502465A (ja) 1988-12-23 1992-05-07 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ ヒトインシュリン類似物質
JP2662311B2 (ja) * 1989-08-07 1997-10-08 デビオファルム ソシエテ アノニム 生物学的に活性な新規薬剤・ポリマー誘導体およびその製造方法
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
ES2113879T3 (es) * 1990-01-24 1998-05-16 Douglas I Buckley Analogos de glp-1 utiles para el tratamiento de diabetes.
US5545618A (en) * 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
US5693769A (en) * 1991-12-13 1997-12-02 Transcell Technologies, Inc. Glycosylated steroid derivatives for transport across biological membranes and process for making and using same
CA2149048A1 (en) * 1992-11-25 1994-06-09 George N. Cox Modified insulin-like growth factors
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5681811A (en) * 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
EP0722434B1 (en) 1993-10-06 1998-07-29 Nicox S.A. Nitric esters having anti-inflammatory and/or analgesic activity and process for their preparation
US5605976A (en) * 1995-05-15 1997-02-25 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkylene oxide carboxylic acids
EP0759899B1 (en) 1994-05-10 1999-09-15 Nicox S.A. Nitro compounds and their compositions having anti-inflammatory, analgesic and anti-thrombotic acitivities
US5693609A (en) * 1994-11-17 1997-12-02 Eli Lilly And Company Acylated insulin analogs
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5907030A (en) * 1995-01-25 1999-05-25 University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
US5606038A (en) * 1995-04-10 1997-02-25 Competitive Technologies, Inc. Amphiphilic polyene macrolide antibiotic compounds
US5824638A (en) 1995-05-22 1998-10-20 Shire Laboratories, Inc. Oral insulin delivery
US6180604B1 (en) * 1996-08-21 2001-01-30 Micrologix Biotech Inc. Compositions and methods for treating infections using analogues of indolicidin
US5830918A (en) 1997-01-15 1998-11-03 Terrapin Technologies, Inc. Nonpeptide insulin receptor agonists
ATE200030T1 (de) * 1997-01-29 2001-04-15 Polymasc Pharmaceuticals Plc Pegylationsverfahren
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier

Also Published As

Publication number Publication date
BR0011772A (pt) 2002-04-02
JP2003502364A (ja) 2003-01-21
CN1368877A (zh) 2002-09-11
IL146898A0 (en) 2002-08-14
HUP0203745A2 (en) 2003-04-28
CZ20014597A3 (cs) 2002-05-15
ZA200110099B (en) 2003-03-07
CA2778826C (en) 2014-07-22
CA2778826A1 (en) 2000-12-28
WO2000078302A1 (en) 2000-12-28
NO20016143L (no) 2002-02-18
NO20016143D0 (no) 2001-12-17
NZ516109A (en) 2004-04-30
EP1196157A4 (en) 2004-10-20
CA2377517C (en) 2013-04-23
KR20020012278A (ko) 2002-02-15
US6309633B1 (en) 2001-10-30
JP5013642B2 (ja) 2012-08-29
EP1196157A1 (en) 2002-04-17
PL352995A1 (en) 2003-09-22
HK1042046A1 (zh) 2002-08-02
CA2377517A1 (en) 2000-12-28
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