MXPA01004239A

MXPA01004239A - Compuesto dds y metodo para la medicion del mismo.

Info

Publication number: MXPA01004239A
Application number: MXPA01004239A
Authority: MX
Inventors: Hiroshi Susaki
Original assignee: Daiichi Seiyaku Co
Priority date: 1998-10-30
Filing date: 1999-10-29
Publication date: 2002-06-04
Also published as: HK1042438A1; EP1619210A1; AU765409B2; CN1661044A; NO20012128D0; US7041818B2; CN1191093C; TWI232930B; IL142842A0; AU6488099A; NO20012128L; KR20010090602A; US6811996B1; ID29943A; CA2348931A1; CN1332640A; BR9915198A; EA200100485A1; EP1155702A4; WO2000025825A1

Abstract

Un metodo para probar un compuesto DDS que contiene un compuesto sacarido de un polialcohol de carboxialquildextrano de C1-4 modificado y un residuo del compuesto farmaco enlazado a este polialcohol carboxialquildextrano de C1-4z, o un compuesto DDS en donde un portador polimerico es enlazado a un residuo del compuesto farmaco por medio de un espaciador que contiene 2 a 8 aminoacidos enlazados juntos mediante enlaces peptidicos, el cual involucra la etapa de probar un hidrolizado obtenido tratando el compuesto DDS con peptidasa.

Description

COMPUESTO DDS Y MÉTODO PARA LA MEDICIÓN DEL MISMO DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un compuesto DDS (DDS: sistema de suministro de fármaco) en el cual un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) modificado con un compuesto sacárido y un compuesto fármaco tal como agentes antineoplásticos se unen uno a otro. La presente invención también se refiere a un método para la medición de un compuesto DDS en el cual un portador polimérico y un compuesto fármaco tal como agentes antineoplásticos se unen uno a otro. Los agentes antineoplásticos, usados para el tratamiento de cánceres sólidos tales como cáncer de pulmón o carcinomas de órganos digestivos y cánceres sanguíneos tales como leucemia, se administran sistemáticamente a través de rutas de administración tales como administración intravenosa u oral, y después, se distribuyen a ciertos sitios tumorosos e inhiben o suprimen la proliferación de células cancerosas para presentar su eficiencia terapéutica. Sin embargo, los agentes antineoplásticos sistemáticamente administrados se admiten rápidamente dentro de hígados y órganos retículo endoteliales a partir de la sangre, o se excreta rápidamente en la orina y en consecuencia, sus concentraciones sanguíneas pueden algunas veces disminuirse para hacer que se vuelva insuficiente la distribución dentro de los sitios tumorosos.

Además, los agentes antineoplásticos comunes en sí mismos tienen pobre selectividad de distribución a sitios tumorosos (selectividad tumoral), y por lo tanto, los agentes antineoplásticos se distribuyen uniformemente sobre diversos tejidos y células del cuerpo entero y actúan como citotoxinas también en contra de células y tejidos normales, lo cual resulta en problemas de la aparición de efectos adversos, por ejemplo emesis, pirexia, o alopecia a una velocidad extremadamente alta. Por lo tanto, se ha deseado desarrollar unos medios para distribuir eficiente y selectivamente agentes antineoplásticos a sitios tumorosos. Como uno de tales medios, se propuso un proceso en el cual un derivado de polisacárido que tiene grupos carboxilo se usa como un portador polimérico, y un agente antineoplástico se enlaza al portador polimérico para retrasar la desaparición del agente antineoplástico de la sangre y para mejorar la selectividad en tejidos tumorales. Por ejemplo, la Publicación Internacional 094/19376 describe un compuesto DDS en el cual una cadena peptídica (el número de residuos de aminoácidos: 1 a 8) se enlaza a un grupo carboxilo de un polisacárido que tiene grupos carboxilo, y doxorubicina, daunorubicina, mitomicina C, bleomicina o similares se enlaza adicionalmente por medio de la cadena peptídica. Además, la Publicación de la Patente Japonesa (KOKOKU) No. (Hei) 7-84481/1995 describe un compuesto DDS en el cual el agente antineoplástico antes mencionado se introduce dentro de un derivado de mannoglucana carboximetilado por medio de una base de Schiff o un enlace de amida acida. Estos compuestos DDS (también referidos como "complejos de fármacos") se caracterizan en que tienen más excelente actividad antineoplástica, toxicidad reducida y efectos adversos en comparación con agentes antmeoplásticos, per se, que se enlazan a portadores poliméricos. Se ha proporcionado un compuesto DDS el cual se forma por enlace de un portador polimérico tal como compuestos polisacáridos a un compuesto fármaco tal como agentes antineoplásticos por medio de un espaciador que consiste de 1 a 8 aminoácidos, y el cual puede distribuir selectivamente al sitio el compuesto fármaco tal como agentes antineoplásticos a tejidos objetivo (Publicación Internacional WO97/46260). También han encontrado que un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) tiene características altamente deseables como un portador polimérico, y proporciona un compuesto DDS que contiene un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) como un portador polimérico (lo anterior mencionado en la Publicación Internacional) . En cuanto a las tecnologías que se refieren a compuestos DDS que utilizan derivados polisacáridos polialcoholizados como portadores poliméricos, algunos ,?B á<* &»* <MAtL?,.I . hJM.M.1. ._^i-^tettJla.^. «-..-m-»* «..«.«. ^^|^ reportes están disponibles, por ejemplo, "Researches on polysaccharide-peptide-doxorubicin complexes - Correlations between stabilities of polisaccharide carriers in blood and their anti-neoplastic activities" (Abstracts of lOth Meeting of the Japan Society of Drug Delivery System, 279, 1994); "Researches on polysaccharide-peptide-doxorubicin complexes- Pharmacokinetics and anti-neoplastics activity" (Abstracts of 9th Annual Meeting of Japanese Society for the study of xenobiotics, 292, 1994; Abstracts of 19th Seminar of Trends in Research and Development (mantenido por The Organization for Pharmaceutical Safety and Research), D-9, 1995; y "Researches on drug delivery to a tumor tissue by polysaccharide carriers" (Abstracts of 12th Colloid and Interface Technology Symposium, The Chemical Society of Japan, 51, 1995) . Como medios para mejorar la selectividad orgánica de compuestos polisacáridos y similares, se han conocido, por ejemplo, derivados de ácido poliglutámico modificados por sacáridos (Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 5-178986/1993), derivados de polilisina modificados por sacáridos (Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 5-222187/1993), derivados de ácido D-galactopiranosil-glucónico de una L-lisina poli-e- sustituida (Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 7-70311/1995), derivados de ácido L- IÍÉk2 A &.Á?¿,»áA»l Á*tU .~*.. •«""»»• »'>|lfgfgft»| *-"A*-'-J-J—-—' *»*«"•• -..—--". .».»-......t -..—-»»... -... r .VM-. »» .«..A.JtJJ.. glutámico, poli-?-sustituidos modificados por sacáridos (Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 7-228688/1995), compuestos polisacáridos enlazados a un compuesto sacárido por medio de un enlazante (Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 8-85703/1996), derivados de glucosil-proteína (Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 9-118699/1997) y similares. Sin embargo, cualquier técnica para mejorar la directibilidad orgánica de compuestos DDS no se han reportado hasta ahora en cuál polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) se usa como un portador polimérico . Cuando un compuesto DDS se usa clínicamente en el cual un portador polimérico y un residuo de un compuesto fármaco se enlazan uno a otro por medio de un espaciador que contiene un oligopéptido, es necesario medir precisamente una concentración sanguínea del compuesto DDS, per se, y también medir precisamente un contenido de residuo del compuesto fármaco, tal como agentes antineoplásticos introducidos al compuesto DDS para determinar una dosificación apropiada o para probar diferencias en lotes de productos. Las mediciones de una concentración sanguínea de un compuestos DDS y un contenido de residuo de un compuesto fármaco en el compuesto DDS ha sido realizado convencionalmente midiendo directamente el compuesto DDS per se, en base a la fluorescencia emitida por el compuesto fármaco o su absorción UV sin desdoblar el compuesto fármaco o el compuesto fármaco enlazado con una parte del espaciador del compuesto DDS. Además, también se ha propuesto un método basado en análisis RMN de un compuesto DDS, per se, y un método para medir un producto descompuesto obtenido por un tratamiento ácido de un compuesto DDS. Sin embargo, estos método tienen problemas porque una medición cuantitativa de un producto descompuesto por un tratamiento ácido no puede realizarse cuando el compuesto fármaco es susceptible a un ácido, y el análisis RMN tiene insuficiente precisión. Además, la absorción UV de un residuo de un compuesto fármaco presente en un compuesto DDS puede causar un cambio de longitud de onda de absorción máxima o cambio en el coeficiente de extinción molar en relación al compuesto fármaco en sí mismo debido a los efectos de un portador polimérico o un espaciador peptídico, por lo tanto, es generalmente difícil medir precisamente un contenido de un residuo de unos compuestos fármacos introducidos dentro un compuesto DDS. Es extremadamente difícil medir cuantitativamente un compuesto DDS en los tejidos después de la administración a cuerpos vivos por los métodos basados en análisis RMN o absorción UV. Un objeto de la presente invención es proporcionar un medio para mejorar la selectividad orgánica (por ejemplo, selectividad a hígado o similares) de compuestos DDS que contienen un polialcohol carboxialquildextrano de (C?-4) como un portador polimérico, y para proporcionar un compuesto DDS que tiene las características antes mencionadas. Otro objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto polisacárido útil como una materia prima para la fabricación de compuestos DDS que tienen las características antes mencionadas. Aún un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un método para medir un compuesto DDS en el cual un portador polimérico y un residuo de un compuesto fármaco se enlazan el uno al otro por medio de un espaciador que comprende un oligopéptido . Más específicamente, el objeto de la presente invención es proporcionar un método para medir precisamente el compuesto DDS per se, o un contenido del residuo del compuesto fármaco tal como agentes antineoplásticos introducidos al compuestos DDS. Más específicamente, el objeto de la presente invención es proporcionar un método para determinar una concentración del compuesto DDS en sangre o un tejido después de la administración, o un método para determinar de un contenido del residuo de compuesto fármaco introducido al compuestos DDS con precisión. Se condujeron honestamente estudios intensivos para lograr los propósitos anteriores, y como un resultado encontraron que un compuesto DDS con extremadamente alta selectividad orgánica era obtenible al usar un polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) modificado con un compuesto sacárido como un portador polimérico, y que un compuesto DDS que contiene el polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) enlazado a galactosa, en particular, tenía excelente selectividad al hígado. Además, también se encontró que una concentración sanguínea de un compuesto DDS o un contenido de residuos de un compuesto fármaco introducido al compuesto DDS puede determinarse precisa y fácilmente al tratar un compuesto DDS con una peptidasa en el cual un portador polimérico y un residuo de compuesto fármaco se enlazan uno a otro por medio de un espaciador que contiene un oligopéptido, y midiendo un hidrolizado resultante. La presente invención se logró sobre la base de estos descubrimientos. La presente invención proporciona así un compuesto DDS que comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) modificado con un compuesto sacárido y un residuo de un compuesto fármaco enlazado al polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) . Conforme a las modalidades preferidas del compuesto DDS, se proporciona el compuesto DDS anterior en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se L?Ai^ i;i^ ...,_- .___ »¿. ,. .ÉrfiBMaÉtHfiMUÉÍiK -É-t-A-S-HÍ-Í-9-ril---K-H ..,^ ,.¿.» . -í. i .^.1.,M enlazan el uno al otro por medio de un espaciador; el compuesto DDS anterior en donde el espaciador comprende un aminoácido o de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos; el compuesto DDS anterior en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C?-4) modificado con un compuesto sacáridos se forma al enlazar un compuesto sacárido y un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) por medio de un enlazante; y el compuesto DDS anterior en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) modificado con un compuesto sacárido es un compuesto con modificación de racimo por un compuesto sacárido enlazado por medio de un enlazante. La presente invención también proporciona un compuesto DDS que es obtenible al enlazar un residuo de compuesto fármaco a un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) en el cual una parte de grupos carboxilo de la porción polialcohol carboxialquilo de (C?- ) se modifican con un compuesto sacárido. Conforme a las modalidades preferidas del compuesto DDS, se proporciona el compuesto DDS anterior que es obtenible al enlazar el polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) y el residuo de un compuesto fármaco por medio de un espaciador; y el compuesto DDS anterior que es obtenible al enlazar el residuo de un compuesto fármaco al polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) el cual se produce al enlazar el compuesto sacárido o un enlace enlazante al compuesto tAaaa* • '-.;^»*f—-''^«-¡^»»> *. *-.--'^.-^^ sacárido a una parte de los grupos carboxilo de la porción carboxialquilo de (C1-4) del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) • La presente invención proporciona adicionalmente un compuesto DDS que es obtenible al modificar con un compuesto sacárido, un polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) en el cual un residuo de un compuesto fármaco se enlaza a una parte de los grupos carboxilo de la porción carboxialquilo de (C?_ ) por medio de un espaciador. Conforme a las modalidades preferidas del compuesto DDS antes mencionado, se proporciona el compuesto DDS anterior que es obtenible al enlazar el polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) y el compuesto sacárido por medio de un enlazante; y el compuesto DDS anterior que es obtenible al modificar con un compuesto sacárido, un polialcohol carboxialquildextrano de (C?-4) producido al enlazar un residuo de un compuesto fármaco a una parte de grupos carboxilo de la porción carboxialquilo de (C?- ) por medio de un espaciador que comprende un aminoácido o un espaciador que comprende 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos. Conforme a la modalidad adicionalmente preferida de la presente invención, se proporciona los compuestos DDS anteriores en donde el compuesto sacárido es galactosa o galactosamina o unos derivados de los mismos; los compuestos DDS anteriores en donde el polialcohol dextrano que constituye el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) es un polialcohol dextrano que es obtenido al tratar un dextrano bajo condiciones que permiten completar sustancialmente la polialcoholización; los compuestos DDS anteriores en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) es polialcohol carboximetildextrano; los compuestos DDS anteriores en donde el grado de sustitución de galactosa o galactosamina o un derivado de los mismos, o aquella de una galactosa ramificada o galactosamina o un derivado de los mismos es 0.01 a 1.0 por residuo de sacárido del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4); los compuestos DDS anteriores en donde el compuesto fármaco es un agente antineoplástico o un agente antiinflamatorio; los compuestos DDS anteriores en donde el compuesto fármaco es ( ÍS, 9S) -amino-9-etil-5-fluoro-2 , 3- dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo [de] pirano [3 ' , 4 ' : 6, 7] indolizino [ 1 , 2-b] -quinolina-10, 13 ( 9H, 15H) -diona; y los compuestos DDS anteriores que son un medicamento para tratar cáncer de hígado. Conforme a otros aspectos de la presente invención, se proporciona un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) modificado con un compuesto sacárido; un portador polimérico que comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido; y un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido para un uso en la fabricación de los compuestos DDS anteriores. Conforme a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un uso de un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto 5 sacárido para la fabricación de los compuestos DDS anteriores . Conforme a todavía un aspecto adicional de la presente invención se proporciona un método para medir un compuesto DDS en el cual un portador polimérico y un residuo 10 de un compuesto fármaco se enlazan uno a otro por medio de un espaciador que comprende de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos que comprenden las etapas de tratar el compuesto DDS con una peptidasa, y midiendo un hidrolizado resultante . 15 Conforme a las modalidades preferidas del método antes mencionado, se proporciona el método anterior que se usa para la medición del compuestos DDS contenido en una muestra de un cuerpo viviente; el método anterior el cual se usa para la medición del contenido del residuo de unos 20 compuestos fármacos introducidos al compuesto DDS; el método anterior en donde el hidrolizado es el compuesto fármaco; el método anterior en donde el hidrolizado es un compuesto que consiste del residuo de un compuesto fármaco enlazado con una parte del espaciador; y el método anterior en donde una parte 25 del espaciador es un aminoácido derivado del espaciador. ^«tiaMBÉgi^iiilAfcA^.,^4,¿ ^.....-A.^.. .....—,.,.... ,. -, ^....„ .-,.......—„ . .„.«.....__....-,„.^,., ^^*.mm¡m Conforme a las modalidades adicionalmente preferidas del método antes mencionado de la presente invención, se proporciona el método anterior en donde los portadores poliméricos son aquellos que tienen grupos 5 carboxilo, preferiblemente un derivado polisacárido que tiene grupos carboxilo; el método anterior en donde el portador polimérico es un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) , preferiblemente polialcohol carboximetildextrano; el método anterior en donde el polialcohol dextrano que constituye el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) es un polialcohol dextrano que se obtiene al tratar un dextrano bajo condiciones que permiten sustancialmente la completa polialcoholización; el método anterior en donde el portador polimérico se modifica con un compuesto sacárido; el método anterior en donde el compuestos fármaco introducido al compuesto DDS es un agente antineoplástico o un agente antiinflamatorio; el método anterior en donde el espaciador es un tetrapéptido representado como, del N-terminal, Gly-Gly-Phe- Gly- o un tetrapéptido representado como, del N-terminal, -Gly-Gly-Gly-Phe-; el método anterior en donde el espaciador es un grupo representado como, del N-terminal, -Gly-Gly-Phe- Gly-NH-Y' -CH2-O-CO- o -Gly-Gly-Gly-Phe-NH-Y ' -CH2-0-CO- en donde Y' representa un grupo p-fenileno; el método anterior en donde la peptidasa es a-quimotripsina o papaína; y el método anterior en donde el compuesto fármaco es (1S,9S)-1- amino-9-etil-5-fluoro-2 , 3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de]pirano[3',4' : 6, 7 ] indoli zino [l,2-b]quinolina-10,13 (9H, 15H) -diona. Conforme a una modalidad particularmente preferida del método anterior de la presente invención, el método anterior puede usarse para la medición de un compuesto DDS en el cual un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) y (ÍS, 9S) -l-amino-9-etil-5-fluoro-2 , 3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de]pirano[3',4' : 6, 7] -indol i zino [l,2-b]quinolina-10, 13 ( 9H, 15H) -diona se enlazan uno a otro por medio de un espaciador que comprende un tetrapéptido representado como, del N-terminal -Gly-Gly-Phe-Gly- o un tetrapéptido representado como, del N-terminal -Gly-Gly-Gly-Phe-, y el compuesto DDS o un contenido del agente antineoplástico introducido al compuesto DDS puede medirse al usar a-quimotripsina como la peptidasa, y al medir ( ÍS, 9S) - 9 -etil -5-fluoro- l-glicilamina-2 ,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo [de] pirano [3 ' ,4 ' : 6, 7 ] indolizino [ 1, 2-b] -quinolina-10, 13 ( 9H, 15H) -diona como el hidrolizado. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra concentraciones en sangre y ascitis del compuesto DDS medidas por el método de la presente invención (Ejemplo 4) .

La Figura 2 muestra concentraciones en sangre y ascitis del compuesto DDS medidas por el método de la presente invención (Ejemplo 5) . La Figura 3 muestra un espectro de absorción ultravioleta del compuesto DDS que contiene un portador polimérico modificado con un compuesto sacárido (Ejemplo 6) . La Figura 4 muestra una gráfica GPC del compuesto DDS que contiene un portador polimérico modificado con un compuesto sacárido (Ejemplo 6) . La Figura 5 muestra las propiedades de los compuestos DDS preparados en el (Ejemplo 6 ( (C) y (D)) la cual se acumula en higado. La Figura 6 muestra un espectro de absorción ultravioleta del compuesto DDS de la presente invención (Ejemplo 6, (D) ) . La Figura 7 muestra un espectro de absorción ultravioleta del compuesto DDS de la presente invención (Ej emplo 7 ) . La Figura 8 muestra un espectro de absorción ultravioleta del compuesto DDS de la presente invención (Ejemplo 9) . La Figura 9 muestra una gráfica GPC del compuesto DDS de la presente invención (Ejemplo 6, (D)) . La Figura 10 muestra una gráfica GPC del compuesto DDS de la presente invención (Ejemplo 7) . t*¿A*-'»^" -- "•*»""--- «»..-.»*- »«»« ^.^ . ^ ^ *m*^~t*^ > ** *? ** *á La Figura 11 muestra una gráfica GPC del compuesto DDS de la presente invención (Ejemplo 9) . El compuesto DDS de la presente invención se caracteriza porque comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido y un residuo de un compuesto fármaco enlazado al polialcohol carboxialquildextrano de (C_4) . Más específicamente, el compuesto DDS de la presente invención incluye aquellos (1) en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se enlazan uno a otro sin un espaciador, y (2) en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se enlazan uno a otro por medio de un espaciador. Ejemplos de aquellos en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se enlazan uno a otro por medio de un espaciador incluyen, por ejemplo, aquellos en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se enlazan uno a otro por medio de un espaciador que comprende un aminoácido; aquellos en donde el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se il?A??iItM?J.-.. **a.^ -?Mtál*?+?k**. -~?*. «._<>.____»«.....~M ..»^.,^A»J ..<,A»..«w>J^>a-?^,..*,.*». enlazan uno a otro por medio de un espaciador que comprende 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, o un espaciador que comprende un oligopéptido que comprende 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos y se enlaza a un grupo de enlace representado por -NH-Y-CO- en donde Y representa un grupo alquileno que tiene de 1 a 8 átomos de carbono o -C6H4-CH2-O- en donde -C6H4- representa un grupo fenileno que puede tener uno o más sustituyentes, preferiblemente representa el grupo p-fenileno. El término "modificado" usado en la presente debe interpretarse en su sentido más amplio, que incluye modificaciones con un enlace covalente por enlace directo de, o enlace indirecto por medio de un enlazante de un compuesto sacárido y un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4), y el término no debe interpretarse como limitante en ningún sentido. El residuo de un compuesto fármaco contenido en el compuesto DDS anterior es una estructura parcial principal derivada de un compuesto fármaco usado para tratamiento terapéutico y/o preventivo de enfermedades de mamíferos que incluyen humanos como un medicamento, por ejemplo un agente antineoplástico, un agente anti-inflamatorio, un agente antibacteriano o similares. Sin embargo, un uso del compuesto fármaco del cual se deriva el residuo no se limita a aquellos mencionados anteriormente. Como el compuesto fármaco, pueden usarse cualquier compuestos en tanto que tengan uno o más -~-•'-"*-'• * *-> grupos funcionales reactivos capaces de participar en la formación de enlace con un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) o un espaciador (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo hidroxilo, grupo tiol, grupo éster o similares) . El residuo del compuesto fármaco puede enlazarse a un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) o un grupo reactivo funcional presente en el espaciador (por ejemplo, cuando se usa un péptido espaciador, un grupo amino N-terminal, un grupo carboxilo C-terminal, un grupo reactivo funcional presente en un aminoácido que constituye el espaciador y similares) . El término "compuesto fármaco" usado en la presente especificación también incluye un compuesto por fármaco que contiene, como una parte del mismo, una estructura principal de un compuesto fármaco que tiene actividad farmacológica, per se, y puede reproducir el compuesto in vivo . Más específicamente, el término "residuo de un compuesto fármaco" usado en la presente especificación significa una estructura parcial derivada del compuesto fármaco existente en el compuesto después de la formación del enlace, suponiendo que un enlace entre el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) o el espaciador y el residuo de un compuesto fármaco se forma a través de una reacción de un grupo funcional reactivo del compuesto fármaco y un grupo funcional reactivo del polialcohol carboxialquildextrano de (Cl-4) o el espaciador (por ejemplo condensación por deshidratación y similares). Por ejemplo, cuando el compuesto fármaco está representado por D-NH2, D-COOH, -DCOOR, D-OH, D-SH, D-CONH2 o D-NH-COOR (R es un grupo alquilo inferior o similar) , el residuo del compuesto fármaco está representado por D-NH- (D-NH-CO-Q etc.), D-CO- ( D-CO-NH-Q, D-CO-O-Q, D-CO-S-Q, etc.), D-CO- (D-CO-NH-Q, D-CO-O-Q, D-CO-S-Q, etc.), D-0- (D-O-CO-Q, D-O-Q, etc.), D-S- (D-S-CO-Q, D-S-Q, etc.), D-CONH- (D-CO-NH-CO-Q etc.) y D-NH-CO- ( D-NH-CO-0-Q, D-NH-CO-NH-Q, etc.), respectivamente (las fórmulas entre paréntesis representan los modos de enlace entre el espaciador o el polialcohol carboxialquildextrano de (C?-4) y el residuo del compuesto fármaco, en donde Q representa una estructura parcial del espaciador y el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) excluyendo un grupo funcional reactivo y un grupo carboxilo, respectivamente) . Sin embargo, el tipo de enlace entre el espaciador o el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) y el residuo de compuesto fármaco no se limita a aquellos mencionados anteriormente. Como el residuo del compuesto fármaco, por ejemplo, residuos de agentes antineoplásticos tales como doxorubicina, daunorubicina, mitomicina C, bleomicina, ciclocitidina, vincristina, vinblastina, metotrexato, agentes antineoplásticos de platino (cisplatina o derivados de la misma) , taxol o derivado del mismo, camptotecina o derivados litote i. -.*-^* ... ..... *&*»._.„»-^. . , .,- ^a-^-te*.^-»».» - «M-ri. i».» *M, -..„,__.,.«.^ de la misma (agentes antineoplásticos descritos en la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) No.

(Hei) 6-87746/1994, preferiblemente (ÍS, 9S) -l-amino-9-etil- 5-fluoro-2, 3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo [de] pirano [3 ' , 4 ' : 6, 7] indolizino [1, 2-b] -quinolina-10, 13- ( 9H, 15H) -diona descrita en la reivindicación 2 o similares) puede usarse preferiblemente. Además, los residuos de agentes anti-inflamatorios esteroidales tales como succinato de hidrocortisona y succinato de prednisolona, y agentes anti-inflamatorios no esteroidales tales como ácido mefenámico, ácido flufenámico, diclofenaco, ibuprofen, y tinoridina también se prefieren. En donde un espaciador que comprende un aminoácido o un espaciador que comprenden 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos se usan como el espaciador que enlaza el compuesto fármaco al polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4), el espaciador tiene una forma de un residuo de un aminoácido, lo cual significa un residuo obtenido al retirar un átomo de hidrógeno y un grupo hidroxilo de un grupo amino y un grupo carboxilo del aminoácido respectivamente, o un residuo de un oligopéptido que comprende 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, lo cual significa un residuo obtenido al retirar un átomo de hidrógeno y un grupo hidroxilo del grupo amino N-terminal y el grupo carboxilo C-terminal del oligopéptido, respectivamente. Los espaciadores preferidos son residuos de oligopéptidos que comprenden 2 a 6 aminoácido. Los tipos de aminoácidos que constituyen el espaciador no son particularmente limitados, y por ejemplo, L- o D-aminoácidos preferiblemente L-aminoácidos pueden usarse, y ß-alanina, ácido e-aminocaproico, ácido ?-aminobutírico o similares también puede usarse así como a-aminoácido . Estos aminoácidos distintos de a-aminoácidos se ubican preferiblemente cerca del compuesto polisacárido en el espaciador. Por ejemplo, cuando se usa un oligopéptido espaciador, la dirección del enlace no se limita particular y generalmente, el N-terminal del espaciador puede enlazarse a un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C_4) por medio de un enlace de amida acida, y el C-terminal del espaciador puede enlazarse a un grupo amino del compuesto fármaco. Alternativamente, por ejemplo, en donde un residuo lisina se incorpora como una unidad del espaciador péptidico, el grupo a-amino y el grupo e-amino del residuo de lisina se permiten formar enlaces amida ácido respectivos con grupos carboxilos de otros aminoácidos para formar N-terminales en ambos extremos del espaciador péptidico, lo cual permite la formación de enlace con grupos carboxilo de los compuestos fármacos. Además, al incorporar uno o más residuos de compuestos diamina o compuesto de ácido dicarboxílico (residuos de compuestos diamina tales como compuestos etilendiamina o ácidos dicarboxílicos tales como ácido succínico) como unidades en un espaciador, puede utilizarse un espaciador que tiene N-terminales o C-terminales en ambos extremos . En donde se usa un espaciador que comprende un oligopéptido, la secuencia de aminoácidos del mismo no se limita particularmente. Espaciadores preferiblemente usados, por ejemplo, siendo un espaciador un residuo de un dipéptido representado por -X-Z-, en donde X representa un residuo de un aminoácido hidrofóbico y Z representa un residuo de un aminoácido hidrofílico; y X-Z- significa un residuo que consiste de un dipéptido que se forma por un enlace peptídico entre un aminoácido hidrofóbico (X) y un aminoácido hidrofílico (Z) en el lado N-terminal y el lado C-terminal, respectivamente, y cuyo átomo de hidrógeno y grupo hidroxilo se retiran del grupo amino en el N-terminal y el grupo carboxilo en el C-terminal, respectivamente, y un espaciador que contiene un residuo del dipéptido como una secuencia peptídica parcial. Como el aminoácido hidrofóbico, por ejemplo, puede usarse fenilalanina, quirosina, leucina o similares, y como el aminoácido hidrofílico, por ejemplo, puede usarse glicina, alanina o similares. El espaciador puede tener una secuencia repetida de los residuos dipeptídicos (por ejemplo, X-Z-X-Z-, X-Z-X-Z-X-Z- y similares) . Al usar el espaciador que contiene tal estructura dipeptídica, el espaciador puede hidrolizarse en sitios tumorosos o sitios inflamatorios, que se consideran abundantes en peptidasa, para liberar el compuesto fármaco a una concentración alta en los sitios inmediatamente. En consecuencia, la estructura parcial formada al enlazar el espaciador que contiene el dipéptido anterior y el compuesto fármaco uno a otro es una estructura parcial preferida del compuesto DDS conforme a la presente invención. En donde se usa un residuo de un agente antineoplástico que presenta actividad antineoplástica dependiente de concentración (por ejemplo, doxorubicina) como el residuo del compuesto fármaco, un espaciador compuesto del residuo dipeptídico anterior representado por -X-Z- o un espaciador que contiene el residuo dipeptídico anterior como una secuencia peptídica parcial puede usarse preferiblemente. Además, en donde se usa un agente antineoplástico tipo dependiente del tiempo que requiere un tiempo de trabajo retenido sobre una cierta concentración como el residuo del compuesto fármaco, puede obtenerse algunas veces actividad antineoplástica mejorada al usar el espaciador anterior. Ejemplos de tal agente antineoplástico incluye los agentes antineoplásticos descritos en la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) No, (Hei) 6-87746/1994, preferiblemente el agente antineoplástico descrito en la reivindicación 2. Los espaciadores no se limitan a aquellos mencionados anteriormente, y es generalmente necesario seleccionar un espaciador apropiado desde el punto de vista del modo de acción del agente antineoplástico, caracteristicas farmacocinéticas o apariencia de toxicidad, liberación in vivo del agente antineoplástico y similares. Para carcinomas que presentan proliferación rápida, se prefiere generalmente seleccionar el espaciador anterior capaz de liberar el compuesto fármaco en una alta concentración en un corto tiempo. Ejemplos específicos de oligopéptidos que pueden usarse como el espaciador se muestran en la siguiente tabla; sin embargo, los espaciadores usados para los compuestos DDS de la presente invención no se limitan a aquellos mencionados posteriormente. Puede entenderse fácilmente que alguien con experiencia común en la técnica puede determinar apropiadamente si se usa o no un espaciador, o seleccionar el tipo de un espaciador en donde un espaciador se usa para lograr una velocidad de liberación óptima de un compuesto fármaco. En la tabla, los extremos izquierdos de las secuencias peptídicas son N-terminales y los residuos de compuestos fármaco se enlazan a C-terminal. D-Phe representa el residuo de D-fenilalanina y los otros aminoácidos representa L-aminoácidos . Los grados de la velocidad de liberación se juzgaron a partir del grado de apariencia de eficiencia de los compuestos DDS transportan doxorubicina en contra de ratas Walker 256 que padecen tumor o de concentraciones libres de doxorubicina en sitios tumorosos de ratas Walker 256 que padecen tumor. Para doxorubicina, se usa preferiblemente un espaciador que puede liberar el compuesto fármaco en una alta concentración inmediatamente, por ejemplo, -Gly-Gly-Phe-Gly-, entre los espaciadores enlistados. Tabla 1 (a) Espaciadores que tienen alta velocidad de liberación -Leu-Gly- -Tyr-Gly- -Phe-Gly- -Gly-Phe-Gly- -Gly-Gly-Phe-Gly- -Gly-Phe-Gly-Gly- -Phe-Gly-Gly-Gly- -Phe-Phe-Gly-Gly- -Gly-Gly-Gly-Phe-Gly- (b) Espaciadores que tienen velocidad relativamente alta de liberación -Gly-Gly-Phe-Phe- U*áLíá,?At?**u*». ,t .r. ^Saa:»— ...**»***»*.*. - .—***. , „«_..,..,,,_.., .,.., .»^^*-M»^^au*wm-. ??i¿»?., A. , -Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly- (c) Espaciadores que tienen velocidad relativamente baja de liberación -Phe-Phe- -Ala-Gly- -Pro-Gly- -Gly-Gly-Gly-Phe- (d) Espaciadores que tienen baja velocidad de liberación -Gly- -D-Phe-Gly- -Gly-Phe- -Ser-Gly- -Gly-Gly- -Gly-Gly-Gly- -Gly-Gly-Gly-Gly- El compuesto DDS de la presente invención se caracteriza por tener un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido como un portador polimérico. El grado de polialcoholización del polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) contenido en el compuesto DDS de la presente invención no se limita particularmente. Preferiblemente, polialcoholes dextrano que constituyen el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) pueden ser fc-fcJbaJMfcfci . j,. ?¿m. j . ^- . ,*. .8¿»-t^-*- *~.- . ** n..: „..^, aquellos obtenido al tratar un dextrano bajo una condición que permite la polialcoholización sustancialmente completa. La clase del dextrano usado para la preparación del polialcohol carboxialquildextrano de (C?- ) no se limita particularmente, y el dextrano puede contener enlaces a-D- 1,6-en cualquier proporción. Por ejemplo, dextrano que contiene enlaces a-D-l,6-en una proporción de 85% o más, 90% o más, o 95% o más pueden usarse. El peso molecular del dextrano no se limita particularmente, y por ejemplo, pueden usarse dextranos que tienen un peso molecular de aproximadamente 1,000 hasta aproximadamente 2,000,000, preferiblemente de aproximadamente 3,000 hasta de aproximadamente 800,000. Como el grupo alquilo de C?_4 que constituye el grupo carboxialquilo de (C?_4) del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) , puede usarse un grupo alquilo de C1-4 lineal o ramificado, específicamente, un grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo n-butilo, un grupo sec-butilo o similares, y el grupo metilo puede usarse preferiblemente. Cuando el dextrano se usa como un material inicial, el dextrano puede tratarse sucesivamente con un exceso grande de cantidad de peryodato de sodio y borohidruro de sodio para obtener un polialcohol dextrano sujeto a sustancialmente completa polialcoholización. Sin embargo, el método para la polialcoholización del dextrano no se limita al método mencionado anteriormente, y cualquier método disponible para aquellos expertos en la técnica puede utilizarse. La carboxi alquilación de (C1-4) puede llevarse a cabo por ejemplo, al hacer reaccionar un ácido halogenado alquilocarboxílico de (C1-4) tal como ácido cloroacético, ácido bromoacético, ácido a-cloropropiónico, ácido a-metil- -cloropropiónico, ácido ß- cloropropiónico, ácido a-metil-ß-cloropropiónico, ácido a- clorobutírico, ácido ß-clorobutírico, o ácido ?- clorobutírico, preferiblemente ácido cloroacético, con grupos hidroxilo del polialcohol dextrano para lograr la carboxialquilación (C1-4) parcial o completa de los grupos hidroxilo . Por ejemplo, el polialcohol dextrano se disuelve en un solvente inerte el cual no participa en las reacciones (por ejemplo, agua, N, N-dimetilformamida, o sulfóxido de dimetilo) , y la solución resultante se agrega con un ácido halogenado alquilcarboxilico de (C?_4) o una sal del mismo en la presencia de una base (por ejemplo, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio), y después la mezcla se deja reaccionar durante varios minutos a varios días a una temperatura bajo enfriamiento con hielo hasta aproximadamente 100°C. El grado de introducción del grupo carboxialquilo de (C1-4) puede controlarse fácilmente, por ejemplo, seleccionando adecuadamente la temperatura de reacción de la carboxialquilación de (C?-4) o la cantidad del ácido halogenado alquilcarboxílico de (C?-4) o las bases usadas como reactivos, y estos medios son bien conocido por aquellos expertos en la técnica. El grado de la carboxialquilación (Ci- 4) basada en un residuo de azúcar del polialcohol dextrano no se limita particularmente, y por ejemplo, el grado puede estar en el rango de 0.01 a 2.0, preferiblemente de 0.1 a 1.0. Los tipos del compuesto sacárido usados para la modificación del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) no se limitan particularmente, y aquellos expertos en la técnica pueden seleccionar apropiadamente el compuesto sacárido dependiendo del tipo de órgano para ser un objetivo del compuesto DDS, farmacocinéticos y similares. Como el compuesto sacárido puede usarse cualquiera de los monosacáridos, oligosacáridos, y derivados de los mismos. Además, los tipos de enlace entre el compuesto sacárido y el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-.4) no se limitan particularmente. El compuesto sacárido y el polialcohol carboxialquilodextrano (C1-4) puede ser por ejemplo, directamente unido a través de un enlace O-a-glicosídico o un enlace O-ß-glicosídico, o ambos pueden enlazarse uno a otro por medio de un enlazante apropiado. El término "enlazado" usado en la presente debe interpretarse en su sentido más amplio para incluir cualquier enlazantes que puedan usarse para el enlace entre el residuo de compuesto sacárido y el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-.4) . La cantidad del compuesto sacárido introducido al polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) (grado de sustitución) no se limita particularmente, y la cantidad puede seleccionarse adecuadamente dependiendo de diversas condiciones tales como el tipo de compuesto sacárido, grado deseado de selectividad, y el tipo de compuesto fármaco. La cantidad puede ser generalmente de aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 1.0 por residuo de sacárido del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) . Cuando se usa un enlazante, los tipos de enlazante no se limitan particularmente. Es preferible usar, por ejemplo, un enlazante representado por -O- (CH2) n-NH- (n es un número entero de 1 a 16) o - (0-CH2CH2) m-NH- (m es un número entero de 1 a 10) . El polialcohol carboxi alquildextrano (C1-4) puede modificarse con un compuesto sacárido al enlazar la O-terminal o la N-terminal, preferentemente la N-terminal del enlazante antes mencionado a un compuesto sacárido por medio de un enlace O-a-glicosídico o enlace O-ß-glicosídico, y enlazando el otro extremo del enlazante a un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) por medio de un enlace amida o un enlace éster. También es posible producir un compuesto modificado en racimo al usar un enlazante adecuado para la así llamada modificación racimo. Los compuestos modificados en racimo son -¿ AJ A. -htfae. ....r, JuA,*»**. _.^^__.<M| »M»,..».*..^».^-. ^>4.. aquellos con un montón de compuestos sacáridos unidos al grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (Ci- 4) por medio de un enlazante adecuado para la modificación en racimo, y medios específicos para su fabricación se describen en, por ejemplo, Las Patentes Japonesas Nos. 2774417, 2774429, Biol. Pharm. Bull., 20, pp . 259-266, 1997 y similares. En el compuesto modificado en racimo, los compuestos sacáridos plurales se ubican en un cierto espacio limitado, con lo cual el compuesto tiene rasgos característicos de afinidad mejorada para un receptor y una excelente selectividad a órganos. Un ejemplo de la modificación en racimo en el compuesto DDS de la presente invención se muestra posteriormente (en las fórmulas siguientes, una estructura parcial de la molécula de polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificada con un racimo se muestra, y un residuo del compuesto fármaco se emite) . Sin embargo, el modo de la modificación en racimo usada para el compuesto DDS de la presente invención no se limita al siguiente ejemplo, y debe entenderse que cualquier medio apropiado puede seleccionarse por aquellos expertos en la técnica.

Ejemplos de los monosacáridos incluyen, por ejemplo hexosas tales como glucosa, fructosa, mañosa, galactosa, fucosa, ácido neuramínico y ácido urónico; hexosaminas tales como galactosamina y glucosamina; pentosas tales como ribosa desoxiribosa, arabinosa y xilosa y similares. Como los derivados de los mismos, por ejemplo, derivados N- u 0-acilo, derivado O-alquilo, esteres de ácido sulfúrico, esteres de ácido fosfórico de los mismos y similares pueden usarse. Ejemplos más específicos de los derivados de monosacáridos incluyen ácido N-acetilneuramínico, N-acetilgalactosamina, N- acetilglucosamina, manosa-6-fosfato, galactosa-3-fosfato, 6- O-benzoilglucosa, 6-0-carboximetil-N-acetilglucosamina, 2-N- bencilglucosamina y similares. Como los oligosacáridos, por ejemplo, pueden usarse por ejemplo, eterooligosacáridos u homooligosacáridos lineales o ramificados constituidos por iL& ¡jk?*&. „.,.,..«,.., ., ,-r^.? - .«.-^-fc ,J_^______- ? ^ J...**.C*. .^^. .......... ts*! ,. los monosacáridos antes mencionados o derivados de los mismos. Más específicamente, pueden usarse sacarosa, sialil Lewis A, sialil Lewis X, lactosa, maltosa, Lewis X, sulfato Lewis X, y similares. Entre ellos, como el compuesto sacárido que mejora la selectividad al hígado, se prefiere galactosa o galactosamina o derivados de los mismos, y los oligasacáridos que tiene galactosa o N-acetilgactosamina en el término no reductor (por ejemplo, lactosa), y galactosa y N- acetilgalactosamina son particularmente preferidos. Los métodos para producir el compuesto DDS de la presente invención no se limitan particularmente. Los procesos de fabricación general se muestran posteriormente, y sus ejemplos específicos serán detallados en los ejemplos en la especificación. Aquellos expertos en la técnica pueden fabricar fácilmente un compuesto DDS que caen dentro del alcance de la presente invención al referirse a la explicación general expuesta posteriormente en los métodos de preparación descritos en los ejemplos, y al seleccionar apropiadamente materiales iniciales, reactivos, condiciones de reacción y similares, y si es necesario, al modificar y alterar los métodos. En general, el compuesto DDS de la presente invención puede producirse al modificar un polialcohol carbóxialquildextrano de (C?-4) con un compuesto sacárido conforme a un método adecuado, y dejando al compuesto modificado reaccionar con el residuo del compuesto fármaco, o con un espaciador que se enlace a un residuo de compuesto fármaco. Un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) puede preparase generalmente en la forma de una solución acuosa de una sal de metal álcali tal como sal de sodio o sal de potasio, y la modificación con un compuesto sacárido y la reacción con un compuesto fármaco (o un espaciador enlazado al compuesto fármaco) puede realizarse en agua o un solvente orgánico conteniendo agua. Alternativamente, un polialcohol carboxialquil- dextrano de (C1-4) o un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido puede convertirse en una sal orgánica de amina, y pueden realizarse reacciones subsecuentes en un solvente orgánico que esté sustancialmente libre de agua. Como la sal orgánica de amina, por ejemplo, pueden usarse sales de amina alifáticas tales como trietilamina, trimetilamina o trietanolamina; sales de aminas alicíclicas y aromáticas tales como N-metilpirrolidina, N- metilpiperidina, N-metilmorfolina, o dimetil-aminopiridina; o sales cuaternarias de amonio tales como cloruro de tetrametilamonio o cloruro de tetraetilamonio. La conversión de la sal sódica del polialcohol carboxialguildextrano de (C1-4) o el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-.4) modificado con un compuesto sacárido dentro de una sal correspondiente orgánica de amina puede llevarse a cabo al usar una resina de intercambio iónico o similares. Por JA Aüá ,»^ ->. él*A> &tlUU> -fi-l fci-^-^-fcfc jiat.it.jaM .l i. ejemplo, una sal sódica de polialcohol carboximetildextrano o un compuesto modificado por sacárido del mismo puede disolverse en agua, aplicarse a una columna cargada con resina Bio-Rad AG50W-X2 (malla 200-400 tipo H+) , y eluido con agua, y después el efluente resultante puede agregarse con una amina orgánica tal como trietilamina y liofilizarse . Alternativamente, también es posible llevar a cabo la conversión en una etapa, es decir al disolver una sal sódica de un polialcohol carboximetildextrano o un compuesto modificado por sacárido del mismo en agua y después pasando la solución a través de una resina tipo tietrilamonio . El enlace entre el compuesto fármaco, per se, y un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C_ 4), o el enlace entre el espaciador enlazado al compuesto fármaco y un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) puede realizarse generalmente al enlazar un grupo amino reactivo del compuesto fármaco, per se, o un grupo amino reactivo del espaciador (grupo amino N-terminal o similares en un péptido espaciador) a un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) por medio de un enlace de amida acida. Sin embargo, el enlace entre el compuesto fármaco o el espaciador y el grupo carboxilo de polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) no se limita al enlace descrito anteriormente, y otros enlaces químicos y uniones que utilizan uno o más espaciadores pueden usarse. Por ejemplo, un anhídrido ácido puede formarse entre un grupo carboxilo C-terminal de un espaciador péptidico o un grupo carboxilo del compuesto fármaco y un grupo carboxilo del polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4), o al usar un compuesto de amina tal como etilendiamina usado como un espaciador, cada uno de los grupos carboxilo pueden enlazarse por medio de un enlace de amida acida a cada uno de los grupos amino del compuesto diamina. Cuando un grupo amino reactivo de un compuesto fármaco, per se, o el grupo amino N-terminal de un espaciador se enlaza a un grupo carboxilo de polialcohol carboxi metildextrano por medio de un enlace de amida acida, agentes de condensación por deshidratación comúnmente usados para síntesis de cadenas peptídicas, por ejemplo, N,N'-dicicloalquilcarbodiimidas tales como N,N'-diciclohexicarbodiimida (DCC), derivado de carbodiimida tales como l-et?l-3- (3-dimetilaminopropil ) carbodiimida (EDAPC) , 1-etoxicarbonil-2-etoxi-l, 2-dihidrox?quinolina (EEDQ) y similares pueden usarse. En este caso, pueden agregarse como se requiera derivados de benzotriazol tales como 1-hidroxibenzotriazol (HOBT) . Además, la reacción puede también realizarse por el método de éster activado o el método de haluro ácido. Cuando la reacción se realiza en un sistema no acuoso, cualesquier solventes orgánicos pueden usarse lAjá tAtiL+ij?»? . *~t.. -*?A ?.*, . -"i i naÉMffl mientras que estén sustancialmente libres de agua y puedan disolver los reactivos (una sal orgánica de amina de un polialcohol carboximetildextrano modificado con un compuesto sacárido y un compuesto fármaco o un espaciador en la sal o un compuesto fármaco y similares) . Por ejemplo, pueden usarse preferentemente N, N-dimetilformamida, sulfóxido de dimetilo, acetamida, N-metilpirrolidona, sulfolano y similares. Aunque la cantidad del residuo del compuesto fármaco que se introduce dentro del polialcohol carboxialquildextrano de (Ci-4) modificado con un compuesto sacárido no se limita particularmente, la cantidad debe seleccionarse adecuadamente dependiendo de la clase del residuo de un compuesto fármaco, y desde los puntos de vista de farmacocinética, eficiencia, y toxicidad del compuesto DDS. Generalmente, el rango de aproximadamente 0.1 a 30% en peso, de preferencia aproximadamente de 2 a 15% en peso puede seleccionarse. Cuando el agente antineoplástico descrito en la reivindicación 2 de la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) No. (Hei) 6-87746/1994 se usa como el compuesto fármaco, la cantidad del compuesto fármaco a introducirse puede ser, por ejemplo, aproximadamente 1 a 15% en peso, de preferencia aproximadamente de 4 a 8% en peso. La relación de residuos del compuesto fármaco introducido al polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) puede determinarse ^u^XÉX «MJ..Jllfa..i.l. fácilmente mediante, por ejemplo, análisis espectrométrico de absorción . Por ejemplo, en cuanto se usa el agente antineoplástico descrito en la reivindicación 2 de la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) No. (Hei) 6-87746/1994 como el compuesto fármaco, se conoce que el equilibrio del compuesto fármaco, se sitúa en el compuesto cuyo anillo de lactona está cerrado (el compuesto de anillo cerrado) en un medio acuoso ácido (por ejemplo, aproximadamente a pH 3), mientras que el equilibrio se sitúa en el compuesto cuyo anillo de lactona está abierto (el compuesto de anillo abierto) en un medio acuoso básico (por ejemplo, aproximadamente a pH 10) . Los compuestos DDS introducidos con el residuo que corresponde a cada uno de los compuestos de anillo cerrado y anillo abierto tienen actividad antineoplástica similar. Sin embargo, cuando un reactivo en la forma del compuesto de anillo abierto está presente en un sistema de reacción para la reacción entre el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) modificado con un compuesto sacárido y el espaciador enlazado al compuesto fármaco antes mencionado (por ejemplo, un espaciador oligopéptido) , procederá una reacción de condensación entre un grupo carboxilo derivado del anillo de lactona y un grupo amino derivado del espaciador. Debido a la reacción lateral, un rendimiento puede disminuirse significativamente, y t** *' -t" -'- J—""'' - -~^fc~<«^-^*- —-.- --..-. .„ -.-^ í ...^ . *.....— ». *¡M ^i .J >t . además, un compuesto DDS deseado algunas veces no puede obtenerse uniformemente. Tal reacción lateral puede evitarse usando el compuesto de anillo cerrado como un reactivo en un sistema no acuoso que no permita el equilibrio. El compuesto DDS de la presente invención se caracteriza en que puede presentar específicamente actividad farmacológica deseada en un sitio local tal como sitios tumorosos o sitios inflamatorios dependiendo de la clase de residuo de un compuesto fármaco (por ejemplo, residuos de compuestos fármaco tales como agentes antineoplásticos o agentes anti-inflamatorios) , y puede reducir la toxicidad inherente al compuesto fármaco, per se. Además, el compuesto DDS de la presente invención también tiene excelente permeabilidad a los vasos sanguíneos. Puesto que la proteasa s (peptidasa) se expresa en sitios tumorosos o sitios inflamatorios, el compuesto DDS que tiene un espaciador que comprende un oligopéptido se hidroliza fácilmente en la porción espadadora para permitir que el compuesto fármaco liberado sea incorporado dentro de las células y presente su eficiencia o el compuesto DDS es admitido dentro de las células con el auxilio de un receptor presente en una célula objetivo que reconoce el sacárido, y el compuesto fármaco liberado por la acción de una proteasa presenta su eficiencia . El polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) es difícilmente reconocido como una macromolécula exógena en cuerpos vivientes, por ejemplo, en el hígado, bazo, médula espinal y similares, y por esta razón, los compuestos distribuyen a esos tipos de órganos insuficientemente. Mientras que, dependiendo del tipo de compuesto sacárido, el compuesto puede distribuirse a una alta concentración en órganos abundantes en receptores de sacárido para el compuesto sacárido. Por ejemplo, un compuesto DDS de la presente invención que comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) modificado con galactosa tiene excelente selectividad a hígado. Por lo tanto, el compuesto DDS que se enlaza a un agente antineoplástico como el compuesto fármaco es útil para el tratamiento de cáncer del hígado . Un medicamento que comprende el compuesto DDS de la presente invención puede llenarse generalmente en ampolletas o similares en la forma de un producto liofilizado u otro, y proporcionado para uso clínico como preparaciones para administración parenteral tal como inyecciones o infusiones por goteo que se disuelven al usarse. Sin embargo, la forma de preparaciones farmacéuticas del medicamento no se limita a las formas antes mencionadas. Para la fabricación de las preparaciones farmacéuticas antes mencionadas, los aditivos farmacéuticos disponibles en el campo de la técnica, por ejemplo, solubilizantes, modificadores de pH, estabilizadores . ü£i¿iíl¿»í-, ¿íf. *^*z? .t ..-.*, .» - „...„..-. .-.,. .. ^~ »?Á^A. y similares, pueden usarse, y la preparación farmacéutica puede prepararse como una composición farmacéutica. Aunque la dosis del medicamento anterior no se limita particularmente, debe decidirse normalmente en vista de la dosis del compuesto fármaco que constituye el residuo del compuesto fármaco, la cantidad del residuo del compuesto fármaco introducido dentro del compuesto DDS, la condición de un paciente, la clase de una enfermedad y similares. Por ejemplo, en donde un compuesto DDS introducido con aproximadamente 6% en peso del residuo del agente antineoplástico mencionado en la reivindicación 2 de la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) No. (Hei) 6-87746/1994 se administra parenteralmente, aproximadamente 0.1 a 100 mg, de preferencia aproximadamente 1 a 30 mg por m2 de área de superficie corporal por día, puede administrarse generalmente una vez al día y la administración puede preferentemente repetirse cada 3 a 4 semanas . De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para medir un compuesto DDS en el cual un portador polimérico y un residuo de un compuesto fármaco se enlazan el uno al otro por medio de un espaciador que comprende de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, el cual comprende la etapa de tratar el compuesto DDS con una peptidasa, y midiendo el hidrolizado resultante.

.JM-J b-I.j»- .». ^J-»»-^ <—- ~ 3fafa*i »«*.. .m.-t. n^to. -a.* -». .-««,» .. ~~-~ ^^^.whfc. **?t,±.LA* El término "medición" usada en la presente debe interpretarse en su sentido más amplio que incluye mediciones realizadas para determinaciones cuantitativas y cualitativas. El término significa preferentemente medición cuantitativa. Los compuestos DDS que van a ser medidos por el método de medición de la presente invención son aquellos que comprenden un portador polimérico y un residuo de compuesto fármaco enlazados el uno al otro por medio de un espaciador que comprenden de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, y el compuesto no debe interpretarse en ninguna forma limitativa. Ejemplos del espaciador que comprende de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, por ejemplo, un espaciador que consiste esencialmente de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, así como un espaciador que comprende un oligopéptido que consiste de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos y el oligopéptido está enlazado a un grupo puente representado por -NH-Y-CO- en donde Y representa un grupo puente tal como un grupo alquileno que tiene de 1 a 8 átomos de carbono o -C6H4-CH2-0-en donde -C6H4 representa un grupo fenileno que puede tener uno o más sustituyentes, preferentemente representa el grupo p-fenileno. El método de medición de la presente invención puede usarse, por ejemplo, la medición de una concentración del compuesto DDS, per se, contenido en muestras biológicas .-ir.,*r?—.¿.* * ~ *,.. ^. ,.,, . >.., , .._.....__ •??rtrMiifi tr t - f t - tales como sangre o fluidos corporales. El método de la presente invención también puede usarse para la medición de la cantidad de residuo de unos compuestos fármacos introducidos dentro de un compuesto DDS (por ejemplo, % en peso del residuo de unos compuestos fármacos en relación al peso total del compuesto DDS o similares) . El residuo de un compuesto fármaco contenido en el compuesto DDS que va a ser medido por el método de la presente invención tiene el mismo significado que el explicado anteriormente. Cualquier compuesto fármaco puede usarse mientras que tengan uno o más grupos funcionales capaces de enlazarse al espaciador (por ejemplo, grupo amino, grupo carboxilo, grupo hidroxilo, grupo tiol, grupo éster, etc.) . El residuo de un compuesto fármaco puede enlazarse al grupo amino N terminal o el grupo carboxilo C-terminal del espaciador, o un grupo reactivo funcional presente en un aminoácido que constituye al espaciador. Ejemplos específicos de los residuos de compuesto fármaco son los mismos que aquellos explicados para los compuestos DDS que comprenden un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-.4) modificado con un compuesto sacárido y un residuo del compuesto fármaco enlazado el uno al otro por medio de un espaciador. Los residuos preferidos de los compuestos fármaco son también los mismos que aquellos explicados anteriormente. -Ü-il¡-".ti--i¡l??!?nÉ« - - *^J- - -'^-«'-»-°^ifc'--^-^-*-^-.»-—•— *... .,._...._^.^-J...,^__.__._,_ .. ¡-f-i'iAg-t {*»*.« dLAil El residuo de un compuesto fármaco contenido en el compuesto DDS que va a ser medido por el método de la presente invención se enlaza a un portador polimérico por medio de un espaciador. Un espaciador preferido es un residuo de oligopéptido que consiste de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, o un espaciador que comprende de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos que se enlazan a un grupo puente representado por -NH-Y' -CH2- 0-C0- en donde Y' representa el grupo p-fenileno. El tipo de aminoácidos que constituyen el espaciador, dirección de enlace del espaciador, secuencias de aminoácidos, ejemplos específicos de los mismos y similares son los mismos que aquellos explicados para los compuestos DDS que comprenden un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido y un residuo de compuesto fármaco enlazados uno al otro por medio de un espaciador. Como el portador polimérico que constituye el compuesto DDS que va a ser medido por el método de la presente invención, por ejemplo, pueden usarse polímeros sintéticos y similares así como los derivados polisacárido. Cualesquier derivados polisacárido y polímeros sintéticos pueden usarse mientras que no presenten toxicidad sustancial en contra de los cuerpos vivientes, y puedan funcionar como un portador de fármaco. Por ejemplo, cualesquier derivados polisacáridos y polímeros sintéticos que han sido usados convencionalmente para la producción de compuestos DDS pueden utilizarse como el portador polimérico. Por ejemplo, derivados polisacáridos que tienen grupos carboxilo pueden usarse preferentemente, y derivados polisacáridos polialcoholizados pueden usarse de mayor preferencia. Ejemplos del polímero sintético incluyen, por ejemplo, polietilenglicoles; poliaminoácidos tales como ácidos poliglutámicos , ácidos poliaspárticos y polilisinas; derivados de compuestos polivinilo tales como derivados de N- (2-hidroxipropil) -metacrilamida. Más específicamente, como los derivados polisacáridos que tienen grupos carboxilos, por ejemplo, pueden usarse polisacáridos y derivados de los mismos que estén químicamente o biológicamente modificados, pueden usarse preferentemente aquellos que tienen grupos carboxilo en sus moléculas. Como ejemplos del portador polimérico que tiene grupos carboxilo en la molécula, polisacáridos tales como ácido hialurónico, ácido péptico, ácido algínico, condroitina, y heparina; y polisacáridos tales como pululana, dextrano, mañana, quitina, inulina, levana, xilana, arabana, manoglucana, y quitosana en los cuales todos o una parte de los grupos hidroxilo se introducen con grupos funcionales que tienen grupo carboxilo pueden usarse. Por ejemplo, aquellos que tienen grupos hidroxilo carboxialquilados de (C1-4) o aquellos que tienen grupos hidroxilo esterificados con un grupo carboxilo de un ácido polibásico pueden usarse preferentemente. Además, aquellos obtenidos al polialcoholizar los polisacáridos anteriores e introducir después grupos funcionales que tienen un grupo carboxilo también pueden usarse. Un compuesto DDS que usa un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_ ) como el portador polimérico es un objeto de medición particularmente preferido conforme al método de la presente invención. El grado de polialcoholización del polialcohol carboxialquildextrano de (C?-4), los tipos de dextrano usados para la fabricación de los mismos, el proceso de fabricación y similares son los mismos que aquellos explicados para el compuesto DDS que comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido y un residuo de compuesto fármaco enlazados uno al otro por medio de un espaciador . Además, un compuesto DDS que usa un portador polimérico modificado con un compuesto sacárido como el portador polimérico también es un objeto preferido para el método de medición de la presente invención. Por ejemplo, un polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido pueden usarse adecuadamente como el portador polimérico. El método para modificar un portador polimérico con un compuesto sacárido, el tipo de compuesto t»*A«t»AA-toA.,, .^.Mt... .._^^ _» t.>«^^t^^»i...^^j ^^t^ ,««MrtM»»«fc F*A.Mai sacárido y similares son los mismos que aquellos explicados para el polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) modificado con un compuesto sacárido. El objeto del método de medición de la presente invención puede ser un compuesto DDS producido al usar un enlazador adecuado para la así llamada modificación en racimo (compuesto así llamado modificado en racimo) . El concepto de la modificación en racimo es el mismo que el explicado para el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido. El método de la presente invención se caracteriza en que se mide un hidrolizado que se obtiene al someter un compuesto DDS a un tratamiento con una peptidasa para la medición del compuesto DDS. Los tipos de las peptidasas no se limitan particularmente mientras que puedan hidrolizar la porción oligopeptídica (una porción oligopeptidica que comprende de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos) contenidos en el espaciador del compuesto DDS. Por ejemplo, pueden usarse subtilisina, a-quimotripsina, colagenasa tipo IV, pepsina, termolisina, papaína, elastasa y similares. Entre ellas, se prefiere a-quimotripsina y papaína . Aunque los tipos de hidrolizado no se limitan particularmente, se prefieren aquellos detectables por técnicas espectrofotométricas comunes tales como aquellas que líMá ÉtáÉi* m oM ??m- ?iJ* utilizan espectro de absorción ultravioleta y espectro de fluorescencia. Generalmente, el compuesto fármaco, per se, puede detectarse, así como un compuesto que comprende una parte del espaciador que permanece y se enlaza al residuo de un compuesto fármaco, por ejemplo, un compuesto fármaco al cual se enlaza un derivado de aminoácido del espaciador, un compuesto fármaco al cual se enlaza un oligopéptido que consiste de 2 a 8 aminoácidos derivado del espaciador, un compuesto fármaco al cual se enlaza un aminoácido o el oligopéptido antes mencionado derivado del espaciador por medio de un grupo puente representado por -NH-Y-CO- en donde Y representa un grupo alquileno que tiene de 1 a 8 átomos de carbono o un grupo representado por -C6H4-CH2-O- en donde -C6H4- representa un grupo fenileno el cual puede tener uno o más sustituyentes, preferentemente representa el grupo p- fenileno. En cuanto al hidrolizado antes mencionado, una parte o todos los grupos reactivos funcionales del compuesto fármaco pueden hidrolizarse. Un hidrolizado deseado puede medirse al seleccionar adecuadamente una peptidasa dependiendo de la clase del compuesto DDS. Como un ejemplo para la medición, muestras de cuerpos vivientes que se recoleccionan de animales que incluyen humanos administrados con un compuesto DDS, tal como sangre, linfa, saliva, orina, heces y tejido extraído pueden usarse, así como una solución acuosa de compuesto DDS o una solución de compuesto DDS en un solvente orgánico acuoso que no presente sustancialmente reacción enzimática. Se han conocido condiciones adecuadas en la técnica para diversas peptidasas, y aquellos expertos en la técnica pueden seleccionar fácilmente condiciones de reacción adecuadas tales como concentración de sustrato, pH, un agente regulador, una temperatura de reacción, y un tiempo de reacción dependiendo del tipo de la peptidasa. Normalmente, la muestra se somete a un pretratamiento tal como homogeneización y desproteinización, después se agrega una peptidasa a una mezcla de reacción después de dilución para tener una concentración deseada de un compuesto DDS como un sustrato, y la reacción puede continuarse hasta que el compuesto DDS se hidrolice completamente. El método para medir el hidrolizado no se limita particularmente. Cuando el compuesto DDS o la cantidad de un compuesto fármaco introducido se mide cuantitativamente, es deseable usar técnicas espectrofotométricas comunes tales como aquellas basadas en la medición del espectro de absorción ultravioleta y medición del espectro de fluorescencia, los cuales se usan solos o en combinación. La medición puede realizarse al aplicar opcionalmente una separación tal como al usar una cromatografía líquida de alto rendimiento. Una medición cuantitativa precisa puede realizarse al preparar una curva de calibración de antemano tib.aAAi.?^?.. ..... —..., ^,*¿_ ,.. -"*~»-&<s»-**i *.'*-*« en un sistema de medición. Ejemplos típicos del método de la presente invención se describen específicamente en detalle en los ejemplos de la especificación, y en consecuencia aquellos expertos en la técnica pueden llevar a cabo fácilmente el método de la presente invención al referirse a la explicación general y explicación específica anterior en los ejemplos, y si es necesario, al agregar modificaciones o alteraciones a los métodos descritos . Ej emplos La presente invención se explicará más específicamente por ejemplos; sin embargo, el alcance de la presente invención no se limita a los siguientes ejemplos. Ejemplo 1 Un compuesto DDS (Compuesto 1) en el cual un polialcohol carboximetildextrano (ocasionalmente abreviado como "CM-Dex-PA" o "polialcohol CM-dextrano" más adelante en los ejemplos) como un portador polimérico y un agente antineoplástico ( ( ÍS, 9S) -l-ammo-9-etil-5-fluoro-2 , 3- dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de]-pirano[3' ,4' : 6, 7 ] - indolizino [ 1, 2-b] quinolina-10 , 13 ( 9H, 15H) -diona descrito en la reivindicación 2 de la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 6-87746/1994 (abreviado como DX- 8951" más adelante en los ejemplos. Se enlazaron por medio de un espaciador tetrapeptídico representado como -Gly-Gly-Phe- Gly- (el oligopéptido se muestra como la secuencia a partir de sus N-terminales, y otros se muestran en la misma forma más adelante en los ejemplos) se produjo conforme al método descrito en el Ejemplo 15 de la Publicación Internacional W097/46260. Se usó como el CM-Dex-PA, que tiene un peso molecular promedio de 228K, y un grado de carboximetilación (grado de sustitución con grupos carboximetilo por residuo de sacárido constitucional) de 0.4. 10 µl de una solución del compuesto DDS anterior preparado como 400 µg/ml en agua destilada se agregó a 180 µl de regulador Britton Robinson (pH 6.0), y la mezcla se agregó adicionalmente con 10 µl de una solución de a-quimotripsina preparada como 10 mg/ml en agua destilada. La mezcla de reacción se incubó a 40°C durante 2 horas, y se agregó con 200 µl de solución de HCl 0.5 N que contiene 50% de acetonitrilo, y el hidrolizado liberado (un compuesto en el cual derivado de glicina forma el espaciador se enlazó al grupo amino de DX 8951 por un enlace peptídico el cual es el compuesto mencionado en el Ejemplo 50 de la Publicación Internacional W097/46260, abreviado como "G-DX-8951" más adelante en los ejemplos) se cuantificó por CLAP. Para el análisis CLAP, se usó una columna Symmetry C18 (4.6 x 100 mm; 3.5 µm, Watars Co.), y la elusión se realizó con acetato de sodio 0.1 M (pH 5.0) que contiene 36.5% de solvente orgánico (metanol : acetonitrilo = 1:2), y el hidrolizado se detectó por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm y Em. 445 nm) . Como ÜL iái á?é?- " TniiiBiwi iiíiiiHii'frr -•i^-á-ki ft- -.»*<~*-* -""*- * "* -A- resultado, el contenido de DX-8951 del compuesto DDS antes mencionado se encontró que es 5.7%. Por otro lado, el contenido de DX-8951 del compuesto DDS antes mencionado se calculó que es 4.9% en base a la absorción UV (366 nm) de DX- 8951 medido por un espectrofotómetro. Ejemplo 2 Un compuesto DDS (Compuesto 2) en el cual CM-Dex-PA y DX-8951 se enlazaron por medio de un espaciador representado por -Gly-Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-CO- se preparó como sigue. Se dejaron reaccionar ácido 5-aminopentanoico (1.0 g) , ácido p-toluensulfónico (1.95 g) , y alcohol bencílico (5 ml) en tolueno (50 ml) a 140°C durante 5 horas -jákU ??lA-a?.% , *. ^^J^—J^^-^^^,^^ «a. _,,,., < ..-A...... -___.. ....__. ...^.. ..„ .. . . , ...__;,____.>_.. ^_g.__, . . « ?BiiiS^tS retirando a la vez el agua producida al usar un aparato Dean- Stark. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo resultante se solidificó al agregar éter. El sólido obtenido se filtró, se lavó con éter y se secó para obtener 2.9 g de sal ácido tosílico del éster bencílico de ácido 5- aminopentanoico . Se disolvieron Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-OH (575 mg) , HOSu (182 mg) , y DCC (326 mg) en DMF (20 ml ) , y la mezcla se agitó durante 30 minutos. La solución se agregó con una solución de sal de ácido p-toluensulfónico del éster bencílico de ácido 5-aminopentanoico (500 mg) y trietilamina (0.184 ml) disuelto en DMF (10 ml ) , y la mezcla se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna (CH2Cl2:MeOH = 20:1) para obtener 380 mg de Boc-Gly- Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-COOBzl (Bzl representa grupo bencilo). El Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-COOBzl (380 mg) se disolvió en metanol conteniendo 50% de agua (20 ml), y la solución se agregó con 5% de Pd-C (contenido de agua; 50%, 300 mg) y se agitó durante la noche bajo hidrógeno a presión común. El catalizador en la mezcla de reacción se retiró por filtración, y el filtrado se concentró hasta sequedad para obtener Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-COOH (330 mg) . El Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-COOH (150 mg), DCC (70 mg) y HOSu (40 mg) se disolvieron en DMF, y la solución se agitó durante 30 minutos. Una solución de DX-8951 (160 mg) y trietilamina (0.040 ml) disueltos en DMF se agregó a la solución anterior, y después la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (CH2Cl2:MeOH = 20:1) para obtener Boc-Gly-Gly-Gly-Phe-NH (CH2) 4-CO-DX-8951 (110 mg) . El Boc-Gly- Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951 (110 mg) se disolvió en TFA (2 ml), y la solución se dejo reaccionar durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo resultante se solidificó por adición de éter. Se retiró el sobrenadante, y el sólido se secó para obtener 100 mg de sal de ácido trifluoroacético de H-Gly-Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951. XH-RMN (DMSO-d6) : d 8.45-8.55 (m, 2H), 8.28-8.35 (m, 2H) , 7.95-8.10 (amplio, 2H) , 7.79 (d, 1H, J=10.7Hz), 7.70- 7.75 (m, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.20-7.30 (m, 5H) , 7.15-7.25 (m, 4H) , 6.50-6.60 (amplio, 1H) , 5.50-5.60 (m, 1H) , 5.40-5.50 (m, 2H) , 5.18 (s, 2H) , 4.50-4.60 (m, 1H) , 3.55-3.95 (m, 7H) , 3.00-3.25 (m, 5H) , 2.75-2.85 (m, 1H) , 2.50 (s, 3H) , 2.15-2.25 (m, 4H) , 1.86-2.00 (m, 2H) , 1.55-1.65 (m, 2H), 1.45-1.55 (m, 2H), 0.88 (t, 3H, J=7.35Hz) CM-Dex-PA (350 mg) producido por el método descrito en el Ejemplo 13 de la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 8-144421/1996, que tiene un peso """**** *« a**-"—^-** ML. ~--*^& .-. -- • ... -.-i.. s aUUlUU??hááí-i M molecular promedio de 337K y un grado de carboximetilación (grado de sustitución con grupos carboximetilo por residuo de sacárido constitucional) de 0.4, se disolvió en agua (10 ml ) . A esta solución, se agrega una solución de sal de ácido trifluoroacético de H-Gly-Gly-Gly-Phe-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951 (50 mg) disuelto en metanol (10 ml ) , y la mezcla se agregó adicionalmente con una solución de HOBt (7 mg) disuelto en metanol (5 ml ) . La mezcla de reacción se ajustó a pH 7.0, se agregó con carbodiimida soluble en agua (10 mg) , y después la mezcla se agitó durante 14 horas. La mezcla de reacción se agregó adicionalmente con carbodiimida soluble en agua (10 mg) , se agitó durante 2 horas, y después se agregó con carbodiimida soluble en agua (10 mg) y se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua ultrapura, y las sustancias de peso molecular bajo se retiraron al usar una membrana de ultrafiltración (50K) . El filtrado se liofilizó, y el polvo resultante se disolvió en NaCl acuoso 3M, y la solución se agregó por goteo a etanol. El sólido depositado se separó por centrifugación. Después de que se retiró el sobrenadante, el sólido se disolvió de nuevo en agua. Las sustancias de peso molecular bajo se retiraron con una membrana de ultrafiltración (50K), y el filtrado se pasó a través de un filtro de 0.22 µm, y se liofilizó para obtener 280 mg del compuesto objetivo. Una solución del compuesto DDS antes mencionado preparado como 2.63 mg/ml en agua destilada (10 µl) se agregó con 490 µl de una solución de a-quimotripsina preparada como 2 mg/ml en regulador de Britton Robinson (pH 6), o una solución de subtilisina A preparada como 2 mg/ml en Tris-HCl (pH 9) . La mezcla de reacción se incubó a 40°C durante 2 horas, y se agregó con 500 µl de solución de HCl 0.5 N que contiene 50% de acetonitrilo. El hidrolizado liberado [NH2- (CH2) 4-CO-DX-8951] se midió cuantitativamente por CLAP. Para el análisis CLAP, se usó una columna Symmetry C18 (4.6 x 100 mm; 3.5 µm, Watars Co.), y la elusión se realizó con solución de ácido trifluoroacético al 0.1% conteniendo 32% de solvente orgánico (metanol : acetonitrilo = 1:2), y el hidrolizado se detectó por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm y Em. 445 nm) . Como un resultado, el NH2- (CH2) 4-CO-DX-8951 se eluyó a aproximadamente 4.8 minutos. Y entonces el contenido de DX-8951 en el compuesto DDS anterior se calculó que es 3.2% al usar una curva de calibración preparada con NH2- (CH2) 4-CO-DX-8951. Por otro lado, cuando el contenido de DX-8951 se calculó en base a la absorción UV del compuesto DDS antes mencionado al usar una curva de calibración preparada con DX-8951, el contenido se calculó como 2.9%. Ejemplo 3 El contenido de DX-8951 en el compuesto DDS preparado en el Ejemplo 1 (Compuesto 1) se midió al usar (1) subtilisina A (Tris-HCl 0.1 M, pH 9.0), (2) a-quimotripsina ? ?l*Lj¡?~l**~.., . - -MtA*i.* ^...-^tlH*^.^.*....^^^^ÍMA..^ _?-«A--j-M-fcfcá--tt-ii--áii .-.A.

(Tris HCl 0.1 M, pH 8.0), y (3) termolisina (Tris HCl 0.1 M/l mM de CaCl2, pH 9.0) . 10 µl de una solución del Compuesto 1 preparada como 400 µg/ml se agregó a 180 µl de un regulador para cada enzima (concentración final; 20 µg/ml) . A esta 5 mezcla, 10 µl de cada enzima preparada como 100 mg/ml en cada regulador se agregó (concentración final; 5 mg/ml), y la mezcla se dejó reaccionar durante 3 horas a 40°C. Después de la reacción, 200 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitrilo se agregó a la mezcla y 10 µl de la mezcla se analizó por CLAP. Para el análisis CLAP, se usó una columna Symmetry C18 (4.6 x 250 mm) , y la elusión se realizó con regulador de AcONa 0.1 M (pH 5.0) conteniendo 31% de solvente orgánico (acetonitrilo :metanol = 2:1) . El hidrolizado se midió por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm and Em. 445 nm) , y el hidrolizado en la mezcla de reacción enzimática se determinó cuantitativamente al usar curvas de calibración que se prepararon al usar soluciones conteniendo 2 nmol/ml de cada uno de G-DX-8951, DX-8951 y DX-8951 enlazados con derivados de fenilalanina-glicina a partir del espaciador del Compuesto 1 (FG-DX-8951) . Como resultado, se encontró que la subtilisina A y la a-quimotripsina liberaron 100% de G-DX- 8951 a partir del Compuesto 1 bajo las condiciones antes mencionadas. La termolisina liberó 100% de FG-DX-8951. Ejemplo 4 25 Células met A subcultivadas en cavidades ¿?±. tfti íßámimmml kiá??ak. .?r.x .. ____...^ __.. ^.._,M-., .^,_- , .-.. ... . ._.____..__ — > ,___>-__» ..______»,. _ .,.-«., abdominales se trasplantaron intraperitonealmente dentro de ratones BALB/c ( <? ) (1 x 106 células/ratón). Después de 5 días, el Compuesto 1 (contenido de DX-8951 : 5.2% ) se administró intraperitonealmente a los ratones en una cantidad de 10 ó 2.5 mg/kg (cantidad en términos de DX-8951) . Después de la administración, se recolectó sangre de corazones con tiempo (2, 4, 8, 24, y 48 horas) . La sangre recolectada se dejó durante 10 minutos, y se centrifugó a 12,000 rpm durante 10 minutos para obtener suero sanguíneo. Al mismo tiempo, también se recolectaron ascitis tumorosas. 25 µl del suero y las ascitis tumorosas se agregaron cada uno con 100 µl de agua conteniendo 80% de metanol, y se centrifugaron a 12,000 rpm durante 5 minutos. 25 µl del sobrenadante se agregó con 225 µl de una solución de termolisina preparada como 2 mg/ml en Tris HCl 0.1 M, pH 8.5/CaCl2 0.1 M y la mezcla se dejó reaccionar a 50°C durante 1 hora. Después, la mezcla de reacción se agregó con 250 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitplo, y 20 µl de la mezcla se sometió a análisis por CLAP. Para el análisis por CLAP, se usó una columna Symmetry C18 (4.6 x 100 mm) , y la elusión se realizó con solución AcONa 0.1 M (pH 5.0) conteniendo 41% de una mezcla de metanol y acetonitrilo (1:2), y el hidrolizado se detectó por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm y Em. 445 nm) . Como resultado, cuando se administró 10 mg/kg, la concentración del Compuesto 1 en las ascitis disminuyó con el '-»""•" -••-- •••»*•» «>.«-.^-.«-- - . ---"--'-«'—-'*-*•-tiempo mientras que la concentración sanguínea se incrementó gradualmente después de la administración y alcanzó la concentración máxima a las 24 horas, y luego después la concentración se mantuvo a casi el mismo nivel que la concentración de ascitis (Figura 1) . Cuando se administraron 2.5 mg/kg, los cambios en las concentraciones en sangre y ascitis fueron similares a aquellas observadas con la administración de 10 mg/kg. Ejemplo 5 Células met A subcultivadas en cavidades abdominales se trasplantaron mtraperitonealmente dentro de ratones BALB/c (<?) (1 x 10d células/ratón) . Después de 5 días, el Compuesto 1 (contenido de DX-8951 : 6.6% ) se administró intraperitonealmente a los ratones en una cantidad de 10 ó 2.5 mg/kg (cantidad basada en DX-8951, cada grupo consistió de 3 ratones) . Después de la administración, se recolectó sangre de corazones con tiempo (5 y 30 minutos, y 2, 4, 8, 24, y 48 horas) . La sangre recolectada se dejó durante 10 minutos, y se centrifugó a 12,000 rpm durante 10 minutos para obtener suero sanguíneo. Al mismo tiempo, también se recolectaron ascitis tumorosas. 25 µl del suero y ascitis tumorosas se agregaron cada una con 225 µl de una solución de a-quimiotripsina preparada como 2 mg/ml en regulador de Britton Robinson (pH 6), y la mezcla se dejó reaccionar a 40°C durante 2 horas. Después, la mezcla de tA¿* *•-*"*-* "->--»--*.. ».„.. *.. ~*?* ?*? *at._..kmui? reacción se agregó con 250 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitrilo, y se centrifugó a 12,000 rpm durante 5 minutos, y 10 µl del sobrenadante se sometieron a análisis CLAP. Las concentraciones estimadas del Compuesto 1 se calcularon a partir de la concentración de G-DX-8951 obtenida por el análisis CLAP y el contenido de DX-8951 de Compuesto 1 usado. El análisis CLAP se realizó bajo las mismas condiciones que el Ejemplo 4. Como resultado, cuando se administró 10 mg/kg la concentración del Compuesto 1 en la sangre, disminuyó con el tiempo. La concentración en las ascitis se incrementó gradualmente después de la administración, y alcanzó sustancialmente el mismo nivel que la concentración sanguínea a las 48 horas (Fig. 2) . Cuando se administró 2.5 mg/kg los cambios en concentraciones del Compuesto 1 en sangre y ascitis fueron similares a aquellos observados con la administración de 10 mg/kg. Ejemplo 6 Un compuesto DDS que comprende a un portador polimérico modificado con un compuesto sacárido se preparó como sigue. En el siguiente esquema, solamente una o dos unidades constitucionales introducidas con grupos carboximetilo se ejemplificaron como las unidades constitucionales de la cadena de sacárido, sin embargo, debe entenderse que la porción polialcohol de carboximetildextrano de los compuestos de DDS descritos en los ejemplos no se forman por la repetición de las unidades constitucionales. El grado de carboximetilación (grado de sustitución con grupos carboximetilo por residuo de sacárido como una unidad de construcción) se determinó al convertir la sal sódica del polialcohol carboximetildextrano en forma de ácido libre, y disolviendo después el ácido libre en hidróxido de sodio 0.1 N acuoso y titulando la solución con ácido clorhídrico 0.1 N. Una solución acuosa de la sal sódica del polialcohol carboximetildextrano se aplicó a una columna Bio-Rad AG50W x2 (H+) , y la solución que pasó se liofilizó y usó como una muestra. La muestra se disolvió en un exceso de cantidad dado de hidróxido de sodio acuoso 0.1 N, y se tituló con ácido clorhídrico 0.1 usando la fenolftaleina como un indicador. El grado del carboximetilación se determinó de acuerdo con la ecuación: 13.4 (a—b) / [s—5.8 (a—b) ] en donde el símbolo "s" representa la cantidad de la muestra recolectada (mg) , el símbolo "a" representa el exceso de cantidad dado de hidróxido de sodio acuoso 0.1 N (mi), y el símbolo "b" representa la cantidad de ácido clorhídrico 0.1 N requerida para la titulación (ml) . La cantidad del fármaco introducido (% en peso) se calculó a partir de los resultados de espectrometría de absorción (alrededor de 362 nm) utilizando la absorción característica del fármaco. La filtración del gel se realizó bajo las siguientes condiciones: columna; TSK gel G4000 PWXL, eluato; NaCl, 0.1 M, velocidad de flujo; tfciA¿jbM.fcM.4.t,J-»lM^........-^.^-».......... M M*.^.. ^.?. + **, 0.8 ml/min., y temperatura de la columna; 40°C (A) Síntesis del Compuesto 2-2 ( 2 - 1 ) ( 2 - 2 ) El compuesto 2-1 (5.0 g) y 2-[2-(2 cloroetoxi) etoxi] etanol (3.75 ml) se disolvieron en diclorometano (75 ml), y la solución se agregó con complejo de éter trifluoruro de boro (7.7 g) y se agitó durante 5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con el diclorometano (100 ml), y la capa orgánica se lavó con agua, carbonato ácido de sodio acuoso saturado y después con salmuera, y se secó sobre sulfato de magnesio. Después que se retiró el sulfato de magnesio por filtración, el solvente se evaporó, y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (hexano: acetato de etilo=2:l) usando gel de silice para obtener 3.3 g de compuesto clorinado. El compuesto clorinado obtenido (3.3 g) y NaN3 (2.0 g) se agitaron a 60°C durante 2 días en DMF (15 ml) . El solvente se evaporó, y el residuo se disolvió en una mezcla de acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó con agua, y se secó sobre sulfato de magnesio, y luego el sudlfato de magnesio se retiro por filtración. El solvente se evaporó para obtener 2.8 g del k^k^iA.*.. ^.*. . ._,. ._..,.. ..M-í-ík-É-i-i-á-a H?-É*lMl¿lli--fllÉ.-Ml-ll at-ai-H-uili-aíai ^mm ^? tá^^MMííili compuesto de azida. El compuesto de azida obtenido (1.5 g) se disolvió en metanol (30 ml), y la solución se agregó con una solución al 28% de MeONa en metanol hasta que el pH alcanzó 10, y la mezcla resultante se agitó durante 1 hora. Después, la mezcla de reacción se agregó con Dowex 50 WX8 (H+) hasta que la mezcla se volvió neutra, y la resma se retiró por filtración y el solvente se evaporó. El residuo resultante se disolvió en una mezcla de metanol (50 ml ) y agua (10 ml ) , y la solución se agregó con 5% de Pd-C (contenido de agua; 50%, 2.0 g) y se agitó durante la noche bajo hidrógeno a presión común. El catalizador se retiró por filtración y el solvente se evaporó para obtener 1.2 g del Compuesto 2-2. XH-RMN (DMSO-d6) :d 4.20-4.30 (1H, amplio) 4.00-4.10 (1H, amplio), 3.80-3.85 (1H, amplio), 3.50-3.75 (14H, m) , 2.75-2.90 (2H, m) (B) Síntesis de galactosa modificada por polialcohol M-dextrano tA*ilri-^'- •"- Una solución acuosa (2000 ml) de peryodato de sodio (66.0 g) se agregó a una solución de dextrano 4 0. ÍM (Funakoshi Co . Ltd; el peso molecular promedio; 4000-6000, 20 g) en regulador de acetato (pH 5.5, 2000 ml) . La mezcla se resguardó de la luz y se agitó a 4°C durante 10 días. Después, la mezcla se agregó con el etilenglicol (14.0 ml ) y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se ajustó a pH 7.5 con hidróxido de sodio acuoso 8 M bajo enfriamiento con hielo, y se agregó con el borohidruro de sodio (28 g) . Después de que se disolvió el borohidruro de sodio, la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se ajustó a pH 5.5 con el ácido acético bajo enfriamiento con hielo y se agitó a 4°C durante 1 hora. La mezcla se ajustó a pH 7.5 con hidróxido de sodio acuoso 8 M bajo enfriamiento con hielo. El procedimiento anterior se repitió dos veces y tíitUáí Há?? á los dos lotes de solución acuosa se combinaron, y se retiraron las fracciones de bajo peso molecular por ultrafiltración usando una membrana Biomax-3 (Milipore) para obtener una solución residual. La solución residual se pasó a través de una membrana Biomax 30. La solución de paso fue desalada por ultrafiltración usando una membrana Biomax 3 y liofilizada para obtener polialcohol dextrano purificado (12.0 g) . El peso molecular (filtración en gel, estándar de pululana) del producto resultante fue 9K. El polialcohol dextrano purificado anteriormente (9.4 g) se agregó a una solución acuosa obtenida de disolver hidróxido de sodio (39.3 g) en agua (282 ml), y se disolvió a temperatura ambiente. Se agregó ácido monocloroacético (56.4 g) a la solución bajo enfriamiento con hielo y se disolvió, y la mezcla se dejó reaccionar durante 20 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se ajustó a pH 8 con ácido acético, y se sometió a ultrafiltración usando una membrana Biomax-5 para retirar las fracciones de bajo peso molecular. La solución residual se liofilizó para obtener sal sódica de carboximetilo (abreviado como "CM" más adelante en los ej emplos ) -dextranpolialcohol (12 g) . La sal sódica resultante del polialcohol CM-dextrano (4.0 g) se agregó a una solución acuosa obtenida al disolver hidróxido de sodio (17 g) en agua (120 ml), y se disolvió a temperatura ambiente. Se agregó ácido monocloroacético (24 g) a la ÍSKÍ?M. Í ¡*tt*.. : r w,h. ...,-^^a^,^^^. ,^_.^J. ^ solución bajo enfriamiento con hielo y se disolvió, y después la mezcla se dejó reaccionar durante 20 horas a temperatura ambiente . La mezcla de reacción se ajustó a pH 8 con ácido acético, y se retiraron las fracciones de bajo peso molecular por ultrafiltración usando una membrana Biomax-5. La solución residual se liofilizó para obtener la sal sódica de polialcohol CM-dextrano (4.0 g) . El peso molecular (filtración en gel, estándar de pululana) del producto resultante fue 14K, y el grado de carboximetilación por residuo de sacárido fue 0.7 como se determinó por alcalimetría. La sal sódica de polialcohol CM-dextrano resultante (1.0 g) se disolvió en agua (100 ml) , y la solución se agregó con una solución de metanol (100 ml) del Compuesto 2-2 (800 mg) del Ejemplo 1. La solución se agregó adicionalmente con clorhidrato de carbodiimida soluble en agua (240 mg) 3 veces cada 2 horas, y después la mezcla se agitó durante 6 horas en total. El solvente en la mezcla de reacción se evaporó, y el aceite resultante se disolvió en agua y fue desalada por ultrafiltración usando una membrana Biomax-3. La solución acuosa resultante se liofilizó para obtener 1.1 g del compuesto del título. El contenido de galactosa en el producto fue 1.0 por 10 residuos de sacárido como se determinó por el método de fenol-ácido sulfúrico. (C) Síntesis del polialcohol Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 CM- l<ArÁ,*,a .? M^.. . . , ***,,>.*.«. „ ,._*,*___>«-.„ „«a .......-.>., ***- .*.~~^ t»-^^tfltt-?ng--M----faiiJ-8 dextrano modificado con galactosa La sal sódica (l.Og) del polialcohol CM-dextrano modificado con galactosa obtenido (B) se disolvió en agua (30 ml ) y la solución se agregó con una solución de sal de ácido trifluoroacético de Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 (150 mg) y 1- hidroxibenzotriazol (35 mg) en metanol (40 ml) . La solución se ajustó a pH 7.0, y después se agregó con clorhidrato de carbodiimida soluble en agua (35 mg) 3 veces cada 2 horas y se agitó durante la noche. El solvente en la mezcla de reacción se retiró por evaporación, y el residuo resultante se disolvió en cloruro de sodio acuoso 3 M (20 ml ) , y la solución de agregó por goteo al etanol (100 ml) . Los precipitados depositados se recolectaron por centrifugación (3500 rpm, 8 minutos) . Los precipitados se disolvieron en agua y se desalaron con ultrafiltración usando una membrana Biomax-3. La solución residual, gue no paso a través de la membrana, se filtro a través de un filtro Millipore (0.22 µm) , y se liofilizó para obtener 900 mg del compuesto del titulo. El producto resultante se disolvió en cloruro de sodio acuoso 0.1 M, y se analizó por GPC (columna TOSOH TSK GelPW-4000XL, solvente; NaCl acuoso 0.1 M, velocidad de flujo; 0.8 ml/min) . Los resultados del análisis GPC y un espectro de absorción ultravioleta (el regulador Tris 0.1 M, pH 9.0) de compuesto se muestran en las Figuras 3 y 4, respectivamente. El contenido de DX-8951 al compuesto se encontró con 4.9% (peso/peso) por análisis cuantitativo basado en espectrofotometría de absorción a 366 nm en regulador Tris 0.1 M conteniendo 30% de acetonitrilo (pH 10.0) . (D) Síntesis de polialcohol-Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 de CM-dextrano paso a través de Dowex-50 WX8 para tener la sal de trietilamonio de polialcohol CM-dextrano (1.9 g) . La sal de trietilamonio de polialcohol CM-dextrano resultante (1.9 g) se disolvió en una solución acuosa que contiene 50% de N,N- 5 dimetilformamida. La solución se agregó sucesivamente con una solución de trietilamina (0.112 ml) y la sal de ácido trifluoroacético de Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 (350 mg) en N,N- dimetilformamida (10 ml), l-etoxicarbonil-2-etoxi-l , 2- dihidroxiquinolina, y la mezcla se dejó reaccionar durante la 0 noche a temperatura ambiente con agitación. El solvente en la mezcla de reacción se retiró por evaporación, y el residuo resultante de disolvió en cloruro de sodio acuoso 3M (20 ml), y la solución se agregó por goteo al etanol (100 ml ) . Los precipitados depositados se recolectaron por centrifugación 5 (3500 rpm) . Estos precipitados se disolvieron en agua, y se desalaron por ultrafiltración usando una membrana Biomax-3. La solución residual que no paso a través de la membrana se filtró por un filtro Millipore (0.22 µm) , y se liofilizó para obtener 1.4 g del compuesto del título. El producto 0 resultante se disolvió en cloruro de sodio acuoso 0.1 M, y se analizó por GPC (columna TOSOH TSK GelPW-4000XL, solvente; NaCl acuoso 0.1 M, velocidad de flujo; 0.8 ml/min) . El resultado de los análisis GPC y espectro de absorción ultravioleta (el regulador Tris 0.1 M, pH 9.0) del compuesto 5 se muestran en las Figuras 6 y 9, respectivamente. El contenido de DX-8951 en el compuesto se encontró como 5.2% (peso/peso) por análisis cuantitativo basado en la espectrofotometría de absorción a 366 nm en un regulador Tris 0.1 M conteniendo 30% de acetonitrilo (pH 10.0). (E) medición del compuesto DDS El compuesto DDS modificado por galactosa obtenido en el (C) anterior, y el compuesto DDS del (D) anterior, como un control se disolvieron cada uno en agua destilada para inyección para dar una concentración de 0.5 mg/ml basada en DX-8951. Cada una de las soluciones acuosas de los compuestos DDS se inyectó intravenosamente a ratones C57BL/6 (cada grupo consistiendo de 5 ratones) en las colas. La dosis fue 5 mg/kg en base a DX-8951. Después de la administración, se extrajeron los hígados con tiempo (0.5, 1, 2, 4, y 24 horas), y las cantidades de los compuestos DDS en los hígados se determinaron. El hígado se agregó con 5 veces en peso de agua y se homogeneizo. El homogenado se centrifugó a 3000 rpm durante 10 minutos, y el sobrenadante se centrifugó adicionalmente a 15,000 rpm durante 15 minutos. Se agregó 50 µl del sobrenadante resultante con 450 µl de una solución de a-quimotppsina preparada como 2 mg/ml en regulador Britton-Robinson (B. R. B) , y la mezcla se dejó reaccionar a 40°C durante 2 horas. Luego después, la mezcla de agregó con 500 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitrilo, y se centrifugo a 12,000 rpm durante 5 minutos.

La cantidad de G-DX-8951 liberada se midió al someter 20 µl del sobrenadante a análisis por CLAP para determinar las cantidades de los compuestos DDS. 50, 10, y 2 µg/ml de las soluciones acuosas de cada uno de los compuestos DDS usados para la administración se prepararon en agua destilada, 50 µl y de cada solución se sometió a tratamiento enzimático y se cuantificó G-DX-8951 para preparar curvas de calibración . Condiciones del análisis por CLAP Columna: Symmetry C18 (4.6 x 100 mm) Velocidad de Flujo: 1.0 ml/min Temperatura de la columna: 40°C Detección de longitud de onda (fluorescencia) : Ex. 375 nm y Em. 445 nm Eluato: metanol : acetonitrilo = 1:2(29%), 0.1% de TFA (71%) Los resultados se muestran en la Figura 5. El compuesto DDS modificado por galactosa antes mencionado presentó más alta acumulación en el hígado en comparación con el compuesto DDS control (antes mencionado (D) ) . Ejemplo 7: Síntesis de polialcohol-Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 CM-dextrano modificado con galactosa. Una solución de dextrano T500 (Pharmacia, peso molecular; 500K, 50 g) en regulador de acetato 0.1 M (pH 5.5, 5000 ml) se agregó con una solución acuosa (5000 ml) de peryodato de sodio (165.0 g) . La solución se resguardó de la luz y se agitó a 4°C durante 10 días, y después se agregó con etilenglicol (35.0 ml) y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se ajustó a pH 6.5 con hidróxido de sodio acuoso 8 M bajo enfriamiento con hielo, y se agregó con una suspensión de borohidruro de sodio (70 g) en agua (2000 ml) . Después que se disolvió el borohidruro de sodio, la solución de agitó durante la noche a temperatura ambiente. La solución se enfrió sobre hielo, se ajustó a pH 5.5 con ácido acético, y se agitó a 4°C durante una hora. Las solución se ajustó a pH 7.5 con hidróxido de sodio acuoso 8M bajo enfriamiento con hielo. La solución resultante se sometió a filtración usando una membrana Biomax-50 para retirar las fracciones de bajo peso molecular y se obtuvo una solución residual. La solución residual se paso a través de una membrana de ultrafiltración (1000K, filtron Co . ) . La solución de paso fue desalada por ultrafiltración usando una membrana Biomax-50, y se liofilizó para obtener polialcohol dextrano (21.1 g) . El peso molecular (filtración en gel, estándar de pululana) del producto fue 128 K. El polialcohol resultante (5 g) se agregó a una solución acuosa obtenida al disolver hidróxido de sodio (13.84 g) en agua (150 ml) y se disolvió en la solución a temperatura ambiente. La sal sódica del ácido monocloroacético (61.6 g) se agregó a la solución bajo enfriamiento con hielo y se disolvió en la solución, y ( I III I después la mezcla se dejó reaccionar durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se ajustó a pH 8.5, y después se retiraron las fracciones de bajo peso molecular por ultrafiltración usando una membrana Biomax-50. Las fracciones de alto peso molecular se liofilizaron para obtener la sal sódica de polialcohol CM-dextrano (6.2 g) . El peso molecular (filtración en gel, estándar de pululana) del producto resultante fue 428K, y el grado de carboximetilación por residuo de sacárido se encontró como 0.9 por alcalimetría. La sal sódica resultante de polialcohol CM-dextrano (500 mg) se disolvió en agua (50 ml ) , y la solución se agregó con una solución de compuesto 2-2 (400 mg) del Ejemplo 1 en metanol (20 ml ) y una solución de 1-hidroxibenzotriazol (160 mg) en metanol (20 ml ) . La mezcla se agregó adicionalmente con clorhidrato carbodiimida soluble en agua (120 mg) 3 veces cada 2 horas, y se agitó durante 6 horas en total. El solvente en la mezcla de reacción se retiró por evaporación, y el aceite resultante se disolvió en agua y se sometió a ultrafiltración usando una membrana Biomax-50 para retirar las fracciones de bajo peso molecular. La solución residual se liofilizó para obtener 600 mg del compuesto deseado. El contenido de lactosa del producto se encontró como 1.7 por 10 residuos de sacárido determinado por el método de fenol-ácido sulfúrico.

La sal sódica resultante del polialcohol CM- dextrano modificado con galactosa (200 mg) se disolvió en agua (3 ml), y la solución se agregó con una solución de ácido trifluoroacético de Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 (27 mg) en metanol (3 ml ) y una solución de 1- hidroxibenzotriazol (7 mg) en metanol (3 ml ) . La solución resultante se ajustó a pH 7.0, se agregó con clorhidrato de carbodiimida soluble en agua (7 mg) 3 veces cada 2 horas, y se agitó durante la noche. El solvente en la mezcla de reacción se retiro por evaporación, y el residuo resultante se disolvió en cloruro de sodio acuoso 3M (10 ml), y después la solución se agregó por goteo a etanol (100 ml) . Los precipitados depositados se recolectaron por centrifugación (3500 rpm) . Los precipitados se disolvieron en agua, y se desalaron por ultrafiltración usando una membrana Biomax-50. La solución residual que no paso a través de la membrana se filtró por un filtro Millipore (0.22 µm) , y se liofilizó para obtener 180 mg del compuesto del título. El producto se disolvió en cloruro de sodio acuoso 0.1 M, y se analizó por GPC (columna; TOSOH TSK GelPW-4000XL, solvente; solución acuosa NaCl 0.1 M, velocidad de flujo; 0.8 ml/minuto) . El resultado de los análisis GPC y un espectro de absorción ultravioleta (en regulador Tris 0.1 M, pH 9.0) del producto se muestra en las Figuras 7 y 10 respectivamente. El contenido de DX-8951 en el producto fue y se encontró como 3.7% (peso/peso) por análisis cuantitativo basado en espectrofotometría de absorción a 366 nm en regulador Tris 0.1 M conteniendo 30% de acetonitrilo (pH 10.0). Ejemplo 8: Síntesis de 2- [2- (2-am?noetox?) etoxi] etil-ß-D-2-amino-2-desoxigalactosa . Una solución de 2- [2- (2-azidaetox? ) etoxi] etil-ß-D-2-acetilamina-2-desoxi-3, 4 , 6-triacetilgalactosa (2.64 g) sintetizada por el método descrito en la Publicación No Examinada de la Patente Japonesa (KOKAI) (Hei) No. 5-202085/1993 disuelta en metanol (10 ml) se enfrió sobre hielo. La solución se agregó con una solución de metoxi de sodio al 28% en metanol (0.64 ml), y la mezcla se agitó durante 5 horas bajo enfriamiento con hielo. La mezcla de reacción se agregó con ácido acético (0.186 ml), y se secó bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna en gel de sílice (eluato; solución de diclorometano ¡metanol = 9:1) para obtener 2- [2- (2-azidaetoxi) etoxi] etil-ß-D-2-amino-2-desoxigalactosa ( 1.98 g) . ^-RMN (CD3OD)d: 4.44 (d, 1H, J=8.8Hz), 3.94-3.98(m, 1H) , 3.92 (dd, 1H, J=8.8, 10.7Hz), 3.83(d, 1H, J=2.9Hz), 3.62-3.79 (m, 11H) , 3.58(dd, 1H, J=3.4, 10.7Hz), 3.49 (dd, 1H, J=5.9, 6.3Hz), 3.39 (t, 2H, J=4.9Hz), 1.99(s, 3H) Una solución de la 2- [2- (2-azidaetoxi) etoxi] etil-ß-D-2-amino-2-desoxigalactosa (640 mg) disuelta en etanol (10 ml) se agregó con el catalizador Lindlar (430 mg) , la djk?&*?U** . - -rifa,.. - . - -.fc.^-«- .*. ^..fc.^-..^ ..„,.., r r~rr . ,r~*. ? , „..^^rr_«* ^¡XJ.^.M r~*&*S i. ?.» mezcla se sometió a reducción catalítica durante 1.5 horas bajo hidrógeno a presión común. El catalizador Lindlar (215 mg) se agregó adicionalmente a la mezcla, y la reducción catalítica se realizó durante 3.5 horas bajo hidrógeno a presión común. El catalizador se retiró por filtración, y el filtrado se secó bajo presión reducida para obtener 2- [2- (2-aminoetoxi) etoxi] etil-ß-D-2-amino-2-desoxigalactosa (601 mg) . ^-RMNfCDaODJd: 4.32 (d, 1H, J=7.5Hz), 3.80-3.91 (m, 2H) , 3.30-3.75 (m, 14H), 2.73 (t, 2H, J=6.5Hz), 1.98(s, 3H) Ejemplo 9: Síntesis de polialcohol-Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 CM-dextrano modificado por N-acetilgalactosamina .

La sal sódica del polialcohol CM-dextrano obtenida en el Ejemplo 7 (375 mg) se disolvió en agua (10 ml) , y se agregó con una solución de 2- [2- (2-aminoetoxi) etoxi] etil-ß-D-2-amino-2-desoxigalactosa (300 mg) obtenida en el Ejemplo 8 disuelto en metanol (10 ml ) y una solución de 1- Tiiwiiwfffili -»--* •L- ? hidroxibenzotriazol (120 mg) disuelta en metanol (10 ml ) . La solución resultante se ajustó a pH 7.0, y se agregó con clorhidrato de carbodiimida soluble en agua (90 mg) 3 veces cada 2 horas. La mezcla se agitó durante la noche, y se sometió a ultrafiltración usando una membrana Biomax-50 para retirar las fracciones de bajo peso molecular de la mezcla de reacción. La solución residual que no paso a través de la membrana se liofilizó para obtener polialcohol CM-dextrano modificado con N-acetilgalactosamina (443 mg) . El contenido de N-acetilgalactosamina del producto se determinó como 1.6 por 10 residuos de sacárido por el método de Elson-Morgan . El polialcohol CM-dextrano modificado por N- acetilgalactosamina (200 mg) se disolvió en agua (10 ml), y la solución se agregó con una solución de sal de ácido trifluoroacético de Gly-Gly-Phe-Gly-DX-8951 (30 mg) disuelta en metanol (10 ml), y una solución de 1-hidroxibenzotriazol (30 mg) disuelta en metanol (10 ml ) . La solución se ajustó a pH 7.0, y se agregó con clorhidrato de carbodiimida soluble en agua (10 ml) 3 veces cada 2 horas. La mezcla se agitó durante 2 horas, y se ajustó a pH 8.5. Las fracciones de bajo peso molecular en la mezcla de reacción se retiraron por ultrafiltración usando una membrana Biomax-50. La solución residual que no paso a través de la membrana se filtró a través de un filtro Millipore (0.22 µm) se liofilizó para obtener el compuesto del título (203 mg) . El producto resultante se disolvió en cloruro de sodio acuoso 0.1 M y después se analizó por GPC (columna; TOSOH TSK Gel PW-6000XL, solvente; regulador de acetato 0.1 M (pH 5.0) conteniendo 20% de acetonitrilo, velocidad de flujo; 0.8 ml/minuto) . El resultado de los análisis GPC y un espectro de absorción ultravioleta de este compuesto (regulador Tris 0.1 M (pH 10.0) : acetonitrilo = 7:3, 0.16 mg/ml) se muestran en las Figuras 8 y 11, respectivamente. El contenido del residuo del compuesto fármaco en el producto se encontró como 4.6% (peso/peso) por análisis cuantitativo basado en espectrofotometría de absorción a 366 nm en un regulador Tris 0.1 M (pH 10.0) ¡acetonitrilo = 7:3. Ejemplo 10: Medición del contenido de DX-8951 en CM-Dex-PA- Gly-Gly-Phe-Gly-NH-Y'-CH2-OCO-DX-8951 5 µl de una solución de CM-Dex-PA-Gly-Gly-Phe-Gly- NH-Y' -CH2-OCO-DX-8951 (Y' significa grupo p-fenileno) preparado como 1 mg/ml en agua destilada se agregó con 95 µl de una solución de papaína preparada como 2 mg/ml en regulador de Britton Robinson (pH 6) . La mezcla de reacción se incubó a 40°C durante 4 horas, se agregó con 100 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitrilo, y el contenido del hidrolizado liberado [DX-8951] se determinó por CLAP. Para el análisis por CLAP se usó una columna de Symmetry C18 (4.6 x 100 mm; 3.5 µm, Watars Co.), y la elución se realizó con una solución de ácido trifluoroacético al 0.1% |M^^^ |^|^^^^ .^.,^......,.._... H t1l , g .ngggg suplementada con un solvente orgánico (metanol : acetonitrilo =1:2) para ser un gradiente de 20 a 70% durante 12 minutos, y el hidrolizado se detectó por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm y Em. 445 nm) . Como resultado, DX-8951 se eluyó en aproximadamente 5.7 minutos. El contenido de DX-8951 en el compuesto DDS anterior se calculó como 4.0% al usar una curva de calibración preparada con DX-8951. Por otro lado, el contenido de DX-8951 se calculó como 3.3% basado en la absorción UV del compuesto DDS antes mencionado al usar una curva de calibración preparada con DX-8951. Ejemplo 11: Medición del contenido de DX-8951 en CM-Dex-PA-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-Y'-CH2-OCO-DX-8951 5 µl de una solución de CM-Dex-PA-Gly-Gly-Gly-Phe-PABC-DX-8951 preparada como 1 mg/ml en agua destilada se agregó con 95 µl de una solución de a-quimotripsina preparada como 2 mg/ml en regulador de Britton Robinson (pH 6) . La mezcla de reacción se incubó a 40°C durante 4 horas, se agregó con 100 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitrilo, y el contenido del hidrolizado liberado [DX-8951] se determinó por CLAP. Para el análisis CLAP se usó una columna de Symmetry C18 (4.6 x 100 mm; 3.5 µm, Watars Co.), y la elución se realizó con una solución de ácido trifluoroacético al 0.1% suplementada con un solvente orgánico (metanol : acetonitrilo = 1:2) para ser un gradiente de 20 a 70% durante 12 minutos, y el hidrolizado se detectó ;AA?.t^.¿ -a-A > .. .i ^?-tJ. iA_ .a ..^^.J.^MJ., .^-1.-.- .___...„ ..,.,.,».....„. -^.s*,.....-»^ Í¡U , Í...?. -J por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm y Em. 445 nm) . Como resultado, DX-8951 se eluyó en aproximadamente 5.7 minutos. El contenido de DX-8951 en el compuesto DDS anterior se calculó como 2.5% al usar una curva de calibración preparada con DX-8951. Por otro lado, el contenido de DX-8951 se calculó como 1.7% basado en la absorción UV del compuesto DDS antes mencionado al usar una curva de calibración preparada con DX-8951. Ejemplo 12: Medición del contenido de DX-8951 en CM-Dex-PA- Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951 5 µl de una solución de CM-Dex-PA-Gly-Gly-Phe-Gly- NH- (CH2) 4-CO-DX-8951 preparada como 100 µg/ml en agua destilada se agregó con 95 µl de una solución de papaína preparada como 2 mg/ml en un regulador Britton Robinson (pH 6) . La mezcla de reacción se incubó a 40°C durante 4 horas y después de agregó con 100 µl de solución de HCl 0.5 N conteniendo 50% de acetonitrilo, y el contenido del hidrolizado liberado [NH2- (CH2) 4-CO-DX-8951] se determinó por CLAP. Para el análisis CLAP, se usó una columna Symmetry C18 (4.6 x 100 mm; 3.5 µm, Watars Co . ) , la elución se realizó con solución de ácido trifluoroacético 0.1% conteniendo 32% de solvente orgánico (metanol : acetonitrilo = 1:2), y el hidrolizado se detectó por espectroscopia fluorescente (Ex. 375 nm y Em. 445 nm) . Como resultado, el NH2- (CH2) 4-CO-DX-8951 se eluyó en aproximadamente 5.3 minutos. El contenido de DX- 8951 en el compuesto DDS anterior se calculó como 3.0% al usar una curva de calibración preparada con NH2- (CH2) 4-CO-DX- 8951. Por otro lado el contenido de DX-8951 se calculó como 3.1% basado en la absorción UV del compuesto DDS antes mencionado al usar una curva de calibración preparada con DX- 8951. Ejemplo 13: Medición del contenido de DXR en CM-Dex-PA-Gly- Gly-Phe-Gly-DXR (DXR: doxorubicina) . 10 µl de una solución del compuesto DDS preparada como 1 mg/ml en agua destilada se agregó con 190 µl de una solución de papaína preparada como 2 mg/ml en regulador de Britton Robinson (pH 6) . La mezcla de reacción se incubó a 40°C durante 2 horas, y se agregó con 200 µl de acetonitrilo, y el contenido del hidrolizado liberado [DXR] se determinó por CLAP. Para el análisis CLAP se usó una columna Symmetry C18 (4.6 x 100 mm; 3.5 µm, Watars Co.), la elución se realizó con solución de ácido trifluoroacético al 0.1% conteniendo 34% de solvente orgánico (metanol : acetonitrilo = 1:2), y el hidrolizado se detectó por espectroscopia fluorescente (Ex. 480 nm y Em. 590 nm) . Como resultado DXR se eluyó en aproximadamente 3.8 minutos . El contenido de DXR en el compuesto DDS anterior se calculó como 5.3% al usar una curva de calibración preparada DXR. Por otro lado el contenido DXR se calculó con 4.3% basado en la absorción UV del compuesto DDS antes mencionado al usar una curva de calibración preparada con DXR. Ejemplo 14: Síntesis de polialcohol-Gly-Gly-Phe-Gly-DXR CM- dextrano . Sal sódica del polialcohol carboximetildextrano (30 mg) que tiene un peso molecular promedio de 274K y un grado de carboximetilación (grado de sustitución con grupos carboximetilo o residuo de sacárido constitucional) de 0.4, el cual se preparó conforme al método descrito en el Ejemplo 24 de WO97/46260, se disolvió en un regulador de HCl-colidina 0.05 M (2 ml ) conteniendo 50% de metanol. La solución se agregó con una solución de clorhidrato de Gly-Gly-Phe-Gly-DXR (4 mg) en metanol (400 µl), cuyo clorhidrato se preparó de acuerdo al método descrito en el Ejemplo 43 de WO97/46260, y una solución de clorhidrato de l-etil-3- (3-dimetil- aminopropil) carbodiimida (2.4 mg) en metanol (240 µl ) , y se agitó durante 2 horas. La solución se agregó con 30 ml de salmuera 3 M, y fue desalada por ultrafiltración usando una membrana Biomax-50K. La solución residual que no paso a través de la membrana se filtró por un filtro Millipore (0.22 µm) , y se liofilizó para obtener el compuesto del título (25 mg) . El contenido del residuo del compuesto fármaco en este compuesto se determinó como 4.3% (peso/peso) por espectrofotometría de absorción a 480 nm en PBS (pH 7.4) .

Ejemplo 15: Síntesis de CM-Dex-PA-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951. Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-OH (575 mg) , HOSu (182 mg) , y DCC (326 mg) se disolvieron en DMF (20 ml) , y la solución se agitó durante 30 minutos. La solución resultante se agregó con una solución de sal de ácido p-toluensulfónico de éster bencílico del ácido 5-aminopentanoico (500 mg) y trietilamina (0.184 ml) disueltos en DMF (10 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante tres días. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna (CH2Cl2:MeOH = 20:1) para obtener 560 mg de Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2)4-COOBzl. El Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-COOBzl (560 mg) se disolvió en metanol (60 ml ) conteniendo 50% de agua, y la solución se agregó con 5% Pd-C (contenido de agua; 50%, 1.5 g) y se agitó durante la noche bajo hidrógeno a presión común. Después de que se retiró el catalizador de la mezcla de reacción por filtración, la mezcla se concentró hasta sequedad para obtener 300 mg de Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-COOH. El Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-COOH (300 mg) , DCC (138 mg) y HOSu (77 mg) se disolvieron en DMF, y la solución se agitó durante 30 minutos. La solución resultante se agregó con una solución de DX-8951(317 mg) y trietilamina (0.078 ml) disuelta en DMF, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró, y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (CH2Cl2:MeOH = 10:1) para obtener 400 mg de Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951. El Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2)4-CO-DX-8951 (300 mg) se disolvió en TFA (2 ml ) , y la solución se dejó reaccionar durante una hora, y después la mezcla de reacción se concentro. El residuo resultante se solidificó por adición de éter, y el sobrenadante se retiró. La masa sólida se secó para obtener 250 mg de sal de ácido trifluoroacético de H-Gly-Gly-Phe-Gly-NH- (CH2) 4-CO-DX-8951. 1H-RMN(DMSO-d6) : d 8.45-8.55 (m, 2H) , 8.28-8.35 (m, 2H) , 7.95-8.10 (amplio, 2H) , 7.79 (d, 1H, J=10.7Hz), 7.70-7.75 (m, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.20-7.30 (m, 5H), 7.15-7.25 (m, 4H), 6.50-6.60 (amplio, 1H) , 5.50-5.60 (m, 1H) , 5.40-5.50 (m, 2H) , 5.18 (s, 2H) , 4.50-4.60 (m, 1H) , 3.55-3.95 (m, 7H) , 3.00-3.25 (m, 5H) , 2.75-2.85 (m, 1H) , 2.50 (s, 3H) , 2.15-2.25 (m, 4H) , 1.86-2.00 (m, 2H), 1.55-1.65 (m, 2H) , 1.45-1.55 (m, 2H) , 0.88 (t, 3H, J=7.35Hz) . La sal de trietilamonio de polialcohol carboximetildextrano (200 mg) que tiene un peso molecular promedio de 337K y un grado de carboximetilación (grado de sustitución con grupos carboximetilo por residuo de sacárido constitucional) de 0.4, la cual se preparó conforme al método descrito en el Ejemplo 24 de WO97/46260, se disolvió en DMF (10 ml ) . La solución anterior se agregó con una solución de Í-A.. A^ '•"•»*-• ...«._..... v.-. . ,_.. -..,....._.___ _.,-_. ...J...__tfc--a?iAiuA. sal H-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-(CH2)4-CO-DX-8951 de ácido trifluoroacético (30 mg) , y trietilamina (10 µl) en metanol (4 ml ) , se agregó adicionalmente con una solución de 1-etoxicarbonil-2-etoxi-l, 2-dihidrox?quinolma (200 mg) en metanol (3 ml ) , y se agitó durante la noche a temperatura ambiente con resguardo de luz. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera 3M, y las fracciones de bajo peso molecular se retiraron por una membrana de ultrafiltración (50K), y el residuo resultante se paso a través de un filtro de 0.22 µm y se liofilizó para obtener 178 mg del compuesto obj etivo . Disponibilidad Industrial El compuesto DDS de la presente invención, que utiliza un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido como un portador polimérico, tiene una selectividad orgánica extremadamente alta, y es útil como un medicamento que logra excelente efecto terapéutico. El método para medir un compuesto DDS de la presente invención puede utilizarse como un método extremadamente útil para la aplicación clínica de un compuesto DDS, debido a que el método permite la determinación precisa y simple de la concentración sanguínea del compuesto DDS o el contenido de un residuo de un compuesto fármaco introducido al compuesto DDS. lá?? *?~?** r..~, *>** * ~a ,, ...-.-a.. ?~~, .......*,- .-..M, «..- ...... _.....

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto DDS caracterizado porque comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido y un residuo de un compuesto fármaco enlazado al polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) .
2. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido y el residuo de un compuesto fármaco se enlazan el uno al otro por medio de un espaciador.
3. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el espaciador comprende un aminoácido o de 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos.
4. El compuesto DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido se forma al enlazar un compuesto sacárido y un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) por medio de un enlazante.
5. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido tiene una modificación en racimo por compuestos sacáridos enlazados por medio de un enlazante.
6. Un compuesto DDS caracterizado porque es obtenible al enlazar un residuo de un compuesto fármaco a un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) en el cual una parte de los grupos carboxilo de la porción carboxialquilo de (C1-4) se modifica con un compuesto sacárido.
7. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque es obtenible al enlazar el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) y el residuo del compuesto fármaco por medio de un espaciador.
8. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 6 ó 7, caracterizado porque es obtenible al enlazar el residuo del compuesto fármaco al polialcohol carboxialquildextrano de (C1-.4) que se produce al enlazar el compuesto sacárido o un enlazante enlazado con el compuesto sacárido a una parte de los grupos carboxilo de la porción carboxialquilo de (C?_4) del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) •
9. Un compuesto DDS que es obtenible al modificar con un compuesto sacárido un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) caracterizado porque un residuo de un compuesto fármaco se enlaza con una parte de grupos carboxilo de la porción carboxialquilo (C1-4) por medio de un espaciador.
10. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque es obtenible al -á-H--f-UÍ-i-d-W-H-«l«-M-d-i-l-iá -Étl- -i-i-i-dÉÉ--á--i-i_ -A-i-i-tt-i--^-ri-¡---a-fc-t-i enlazar el polialcohol carboxialguildextrano de (C?_4) y el compuesto sacárido por medio de un enlazante.
11. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, caracterizado porque es obtenible al modificar con un compuesto sacárido un polialcohol carboxi alquildextrano de (C1-4) producido al enlazar un residuo de compuesto fármaco a una parte de grupos carboxilo de la porción carboxialquilo de (C1-4) del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) por medio de un espaciador que comprende un aminoácido o un espaciador que comprende 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos.
12. Los compuestos DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizados porque el compuesto sacárido es galactosa o galactosamina, o un derivado de los mismos.
13. Los compuestos DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizados por que el compuesto sacárido es N-acetilgalactosamina.
14. Los compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 12, caracterizados porque el grado de sustitución de galactosa o galactosamina o un derivado de los mismos, o galactosa en racimo o galactosamina o derivado de los mismos es 0.01-1.0 por residuo de sacárido del polialcohol carboxialquildextrano de (C1-.4) . -*!*--.-»-...-.... » ..... _.^.«».
15. Los compuestos DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizados porque el polialcohol dextrano que constituye el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) es un polialcohol dextrano que es obtenido al tratar dextrano bajo condiciones que permiten sustancialmente la completa polialcoholización.
16. El compuesto DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque el polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) es polialcohol carboximetildextrano.
17. El compuesto DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque el compuesto fármaco es un agente antineoplástico o un agente anti-inflamatorio .
18. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el compuesto fármaco es un agente antineoplástico.
19. El compuesto DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque el compuesto fármaco es (ÍS, 9S) -l-amino-9-etil-5-fluoro-2 , 3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de]pirano[3',4' : 6, 7 ] indolizino [1, 2-b] quinolina-10, 13 ( 9H, 15H) -diona .
20. El compuesto DDS de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque es un medicamento para tratar cáncer del hígado.
21. El polialcohol carboxialquildextrano de (C?_4) para uso en la fabricación del compuesto DDS de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20.
22. Un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido.
23. Un portador polimérico caracterizado porque comprende un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) modificado con un compuesto sacárido.
24. Un método para medir un compuesto DDS caracterizado porque un portador polimérico y un residuo del compuesto fármaco se enlazan el uno al otro por medio de un espaciador que comprende 2 a 8 aminoácidos enlazados por péptido o péptidos unidos, el cual comprende las etapas de tratar el compuesto DDS con una peptidasa y medir el hidrolizado resultante.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque se usa para medición del compuesto DDS contenido en una muestra biológica.
26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque se usa para medición del contenido del residuo de un compuesto fármaco introducido al compuesto DDS.
27. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, caracterizado porque el hidrolizado es el compuesto fármaco.
28. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, caracterizado porque el hidrolizado es un compuesto que comprende el residuo del compuesto fármaco enlazado con una parte del espaciador.
29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la parte del espaciador es un aminoácido derivado del espaciador.
30. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 29, caracterizado porque el portador polimérico es un derivado de polisacárido que tiene grupos carboxilo .
31. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el portador polimérico es un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) .
32. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 31, caracterizado porque el compuesto fármaco introducido al compuesto DDS es un agente antineoplástico o un agente anti-inflamatorio.
33. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 32, caracterizado porque el espaciador es un tetrapéptido representado por -Gly-Gly-Phe-Gly- del N-terminal o un tetrapéptido representado por -Gly-Gly-Gly-Phe-del N-terminal.
34. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 32, caracterizado porque el espaciador .^Jhaufl.*-» -dto&J ^, .....«*-_, ->....,^.^^.».. ,M^^. *, ,>.. .^... <-^».MMh^__µ ~-~- -A»»*... J> es un grupo representado por -Gly-Gly-Phe-Gly-NH-Y ' -CH2-0-CO- del N-terminal o un grupo representado por -Gly-Gly-Gly-Phe- NH-Y' -CH2-0-CO- del N-terminal en donde Y' representa el grupo p-fenileno.
35. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 34, caracterizado porque la peptidasa es a-quimotripsina o papaína.
36. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 35, caracterizado porque el compuesto fármaco es (ÍS, 9S) -l-amino-9-etil-5-fluoro-2 , 3-dihidro-9- hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de] pirano [3 ' , 4 ' : 6, 7 ] indolizino [l,2-b]quinolina-10,13 (9H, 15H) -diona.
37. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 24 a 29, caracterizado porque se usa para medición de un compuesto DDS en el cual un polialcohol carboxialquildextrano de (C1-4) y (ÍS, 9S) -l-amino-9-etil-5- fluoro-2 , 3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de] pirano [3' , 4' :6,7] indolizino[l,2-b]quinolina-10, 13 (9H, 15H) -diona se enlazan el uno al otro por medio de un espaciador que comprende un tetrapéptido representado por -Gly-Gly-Phe-Gly- o un tetrapéptido representado por -Gly-Gly-Gly-Phe- del N- terminal .
38. El método de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque se usa a-quimotripsina o papaína como la peptidasa, y (ÍS, 9S) -9-etil-5-fluoro-1-glicilamino- 2 , 3-dihidro- 9-hidroxi-4-metil-1H, 12H-benzo[de] pirano [3 ' , 4 ' : 6, 7 ] indolizino [ 1, 2-b] quinolina-10, 13 ( 9H, 15H) -diona se mide como el hidrolizado.