MXPA00012286A - Peptide-1 similar a glucagon mejora la respuesta celular beta a glucosa en sujetos con tolerancia danada de glucosa. - Google Patents

Abstract

Una composicion para el tratamiento de tolerancia disminuida a la glucosa (TDG) incluyendo un compuesto el cual se enlaza a un receptor para peptide-1 similar a glucagon y un portador farmaceutico. La cantidad del compuesto presente es una cantidad efectiva para mejorar la sensitividad de celulas P pancreaticas a los niveles de glucosa en sangre en un humano con TDG. Tambien, un metodo para mejorar el patron de respuestas secretorias de insulina en un humano con TDG al administrar a 1 humano una composicion que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para peptide-1 similar a glucagon y un portador farmaceutico.

Description

PEPTIDE-1 SIMILAR A GLUCAGON MEJORA LA RESPUESTA CELULAR ß A GLUCOSA EN SUJETOS CON TOLERANCIA DAÑADA DE GLUCOSA DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La tolerancia disminuida a la 'glucosa (IGT) es común en la población de los Estados Unidos. La prevalencia de la tolerancia disminuida a la glucosa se incrementa de 11% en la población general en edad de 20-74 años a 24% en aquellos de 40-75 años de edad con una historia familiar de diabetes y un peso corporal mayor de 120% de lo normal. Los sujetos con tolerancia disminuida a la glucosa están en riesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares asi como diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM) , también conocida como diabetes Tipo 2. La tolerancia disminuida a la glucosa se caracteriza por defectos sutiles tempranos en la función de las células ß pancreáticas, acompañada por resistencia a la insulina. Estos defectos tempranos incluyen una habilidad disminuida de las células ß para sentir y responder a pequeños cambios en las concentraciones de glucosa en plasma con niveles apropiados de secreción de insulina, y un cambio ligero a la derecha de la curva de respuesta a la secreción de dosis de insulina para glucosa. Las capacidades de respuesta a la sensación de glucosa y secreción de insulina rápida de las células ß se pierden muy tempranamente en el curso de IGT cuando los niveles de glucosa de 2 horas se elevan mínimamente. El deterioro del control de glucosa en IGT con el tiempo se debe predominantemente a la disminución progresiva de la función de las células ß. Esto conduce, en muchos casos, a condiciones deteriorantes de hiperinsulinemia, obesidad, y enfermedad cardiovascular, algunas veces conocida como síndrome X. En muchos casos, condiciones IGT avanzadas conducen a la pérdida definitiva del control de glucosa y al surgimiento nocivo de NIDDM. Como se indicó, la condición de IGT lleva serios riesgos de salud. El paciente IGT es frecuentemente obeso y tiene niveles altos de insulina en plasma, los cuales son frecuentemente tóxicos. Estos altos niveles de insulina resultan generalmente de la continuadamente creciente inhabilidad del músculo, otros tejidos y células grasas para utilizar la insulina para efectuar la toma de glucosa en plasma sanguíneo. La condición IGT da origen a riesgos incrementados de un rango completo de enfermedades cardiovasculares . El péptido-1 similar a glucagon (GLP-1), un péptido entérico natural, se secreta de las células L del intestino, y actúa como una hormona incretina que estimula las células ß pancreáticas para secretar insulina en una forma dependiente de glucosa. Su potencial terapéutico en NIDDM ha sido previamente demostrada, porque infusiones exógenas de dosis farmacológicas de GLP-1 generalmente reducen los niveles de glucosa en plasma. Sin embargo, GLP-1 no mejora significativamente la función de la célula ß en NIDDM. Nathan flfe DM, Schreiber E, Fogel H, Mojsov S, Habener JF. Insulinotropic action of glucagon-like peptide-1 (7-37) in 5 diabetic and nondiabetic subjects. Diabetes Care 15:270-276, 1992; Gutniak M, 0rskov C, Holst JJ, Ahrén B, Efendric S. Antidiabetogenic effects of glucagon-like peptide-1 (7-36) amide in normal subjects and patients with diabetes mellitus. N Engl J Med 326:1316-1322, 1992; ?auck MA, Kleine ?. Orskov C, Holst JJ, illms B, Creutzfeldt W. ?ormalization of fasting hyperglycemia by exogenous glucagon-like peptide-1 (7-36 amide) in type II (non-insulin-dependent) diabetic patients. Diabetologia 36:741-744, 1993; Gutniak MK, Linde B, Holst JJ, Efendie S. Subcutaneous injection of the incretin hormone glucagon-like peptide-1 abolishes postprandial glycemia ?IDDM. Diabetes Care 17:1039-1044, 1994; Rachman J, Gribble FM, Barrow BA, Levy JC, Buchanan KD, Turner RC . ?ormalization of insulin responses to glucose by overnight infusión of glucagon-like peptide 1 (7-36) amide in patients with ?IDDM. Diabetes 45:1524-1530, 1996; Rachman J, Barrow BA, Levy JC, Turner RC. ?ear-normalization of diurnal glucose concentrations by continuous administration of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) in subjects with ?IDDM, Diabetologia 40:205-211, 1997. 25 La condición IGT ' no es actualmente tratable. Es, sin embargo, una condición afectiva reconocible asociada con serios riesgos para la salud. En general, la condición IGT deteriora progresivamente en términos de sus síntomas y frecuentemente conduce a la pérdida del control de glucosa en plasma lo cual constituye diabetes tipo 2. Existe una necesidad para una terapia. Numerosos estudios durante los diversos años pasados han demostrado que la aplicación de GLP-1 en casos de NIDDM disminuye los niveles de glucosa e insulina en sangre, y en consecuencia debería ser una terapia promisoria para esa enfermedad. Sin embargo, ningún estudio a la fechar ha demostrado que GLP-1 tenga un potencial para corregir la pérdida de la habilidad de las células ß para sentir y responder rápidamente con la secreción de insulina cuando se incrementa la glucosa en sangre. Es este deterioro en la habilidad para responder y para enlazar estrechamente la sensibilidad de los incrementos de glucosa en sangre a la secreción de insulina de las células ß que es la causa principal de la condición IGT. En estudios previos la aplicación de GLP-1 a sujetos NIDDM no mejoró la respuesta de glucosa en las comidas del día siguiente. Cuando GLP-1 se administró por infusión durante 19 horas, durante la noche y durante tres comidas estándar en sujetos con NIDDM, los niveles de glucosa en plasma se redujeron, pero la disminuida función de la célula ß pos-prandial se mejoró solamente ligeramente . Las respuestas de la célula ß a la infusión prolongada de GLP-1 no se ha estudiado previamente en sujetos con IGT y, mientras que no ha habido indicación que el resultado sería diferente que con infusiones GLP-1 en los NIDDM, los estudios detallados del efecto de GLP-1 en las respuestas de la célula ß a pequeños incrementos y decrementos de las concentraciones de glucosa en plasma no han sido realizados hasta ahora. En consecuencia, un método para detener la progresión de IGT y restablecer las condiciones de metabolismo de glucosa normal se necesita. Es por lo tanto un objeto de la presente invención proporcionar un método para restablecer o mejorar la función y sensibilidad de la célula ß, y así los patrones de secreción de insulina, en respuesta a los niveles de glucosa en plasma en un huésped que tiene tolerancia disminuida a la glucosa . Un objeto adicional de la invención es proporcionar un método para retrasar o prevenir el deterioro de la función de la célula ß el cual es responsable de la progresión de la tolerancia disminuida a la glucosa dentro de la pérdida del control de la glucosa en plasma lo cual caracteriza el surgimiento de NIDDM. Un objeto aún adiciona de la invención es mejorar los efectos de la enfermedad cardiovascular de IGT, disminuyendo con eso los riesgos cardiovasculares y de • ataque . El método para lograr éstos y otros objetos estarán 5 aparente de la siguiente descripción detallada. Se ha descubierto que la aplicación de GLP-1 en sujetos con tolerancia disminuida a la glucosa restablece la respuesta coordinada estrecha de la secreción de insulina a los incrementos de los niveles de glucosa en plasma, restableciendo con eso los patrones de respuesta de secreción de insulina de la célula ß a los incrementos del nivel de glucosa en plasma que son característicos de sujetos normales sin IGT. Así la presente invención se dirige a un método para tratar un huésped que tiene tolerancia disminuida a la glucosa y resistencia a la insulina con GLP-1 en una cantidad efectiva para restablecer, mejorar o normalizar la • sensibilidad de la célula ß y los patrones de función y secreción de insulina en ese huésped. La invención se dirige también a un método para reducir el nivel de insulina en plasma en personas con IGT y reducir concurrentemente la condición de la resistencia a la insulina y su condición concomitante de enfermedad cardiovascular. Al llevar a cabo los ejemplos descritos en la presente, se ha observado sorprendentemente que la aplicación de GLP-1 en sujetos con IGT, en contraste con la respuesta al azar y no coordinada de insulina característicamente encontrada en sujetos IGT, dramáticamente recrea secreciones de insulina sensibles, rápidas y coordinadas de las células ß en respuesta a incrementos pulsátiles en glucosa en plasma similares a los patrones de secreción de insulina encontrados en pacientes normales BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra las respuestas de glucosa, insulina y GLP-1 a la administración oral de 75 mg de glucosa en cinco sujetos con tolerancia disminuida a la glucosa (IGT •) y cinco sujetos con diabetes mellitus no dependiente de insulina (NIDDM ) . La Figure ÍA muestra la respuesta de glucosa media. La Figure IB muestra la respuesta de insulina. La Figure 1C muestra la respuesta de GLP-1. La Figure 2 proporciona una comparación de las velocidades de secreción de insulina media (ISR) y las concentraciones de glucosa media en cada sujeto durante la infusión de glucosa con infusión salina (O) o infusión GLP-1 (•) . La Figure 2A muestra la comparación en sujetos con IGT. La Figure 2B muestra la comparación en sujetos con NIDDM. La Figure 3 proporciona perfiles de las velocidades de secreción de insulina (ISR) , glucosa, y concentraciones de insulina en dos sujetos con IGT, los sujeto DOl y D02. Las Figuras 3A y 3C muestran las respuestas a la infusión salina.

Las Figuras 3B y 3D muestran las respuestas a la infusión GLP-1. La Figura 4 proporciona una comparación de los niveles de glucosa, velocidades de _ secreción de insulina (ISR) y los niveles de insulina en dos sujetos con NIDDM, los sujetos D07 y D09. Las Figuras 4A y 4C muestran los perfiles durante la infusión salina. Las Figuras 4B y 4D muestran los perfiles durante la infusión GLP-1. La Figura 5 proporciona una comparación de los análisis espectrales de la secreción de insulina en sujetos durante las infusiones de solución salina y GLP-1. Los resultados mostrados en el lado izquierdo de los análisis espectrales son de sujetos con IGT. Los resultados mostrados en el lado derecho de los análisis espectrales son de sujetos con NIDDM. La Figure 6 proporciona una comparación de poder espectral normalizado durante la infusión de solución salina y durante la infusión GLP 1. La Figure 6A muestra una comparación de poder espectral normalizado durante la infusión de solución salina y la infusión GLP-1 en un sujeto con IGT (D02) . La Figure 6B muestra una comparación de poder espectral normalizado durante la infusión de solución salina e infusión GLP-1 en un sujeto con NIDDM (D07) . Se ha descubierto que la administración de GLP-1 en sujetos con tolerancia disminuida a la glucosa (IGT) restablece o mejora la función de la célula ß pancreática y la habilidad de la célula ß para responder rápidamente en la • secreción de insulina en una forma coordinada en respuesta a pequeños incrementos o cambios en concentraciones de glucosa 5 en plasma, es decir secreciones pulsátiles de insulina, similares a los patrones de secreción de insulina encontrados en sujetos sin IGT. Este patrón de secreción de insulina no se restablece en sujetos que ya han desarrollado NIDDM, lo cual se caracteriza por pérdida del control de glucosa en • 10 plasma. La función de la célula ß se cuantifica por poder espectral normalizado. El poder espectral mide la función de la célula ß lo cual no confía en el ajuste de la sensibilidad de insulina. Se ha encontrado que en sujetos con IGT, GLP-1 mejora el poder espectral dentro de un rango normal. Los perfiles de poder espectral indican que el arrastre o coordinación cercana de las oscilaciones de glucosa en plasma y secreción de insulina se restablecieron a niveles normales en sujetos IGT después de la administración de GLP-1. Esta mejoría en el patrón oscilatorio de la secreción de insulina es importante para el mantenimiento de la homeostasis normal de glucosa. Por ejemplo, se ha mostrado que las infusiones de insulina que imitan las oscilaciones ultradianas dentro de un periodo de 120 minutos son más efectivas que las infusiones constantes de insulina en la reducción de las concentraciones de glucosa en plasma (27) . La presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para péptido-1 similar a glucagon y es efectivo para mejorar la habilidad de la células ß para sentir y responder a pequeños cambios en las concentraciones de glucosa en plasma en sujetos con IGT. En una modalidad, el compuesto de enlace receptor es péptido-1 similar a glucagon. En otra modalidad, el compuesto de enlace receptor es un péptido variante en el cual la combinación de las sustituciones, delesiones y variantes no difiere en más de diez aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon. El compuesto de enlace receptor puede comprender adicionalmente un polinucleótido o un agente el cual activa la liberación de GLP-1, una molécula que activa el receptor GLP-1, o un compuesto de enlace receptor GLP-1 que comprende una molécula químicamente construida, análogos peptídicos, o agonistas de GLP-1. Se ha descubierto que la administración de GLP-1 humana mejora o restablece el arrastre de las respuestas de secreción de insulina en pequeños cambios o incrementa la glucosa en plasma. En consecuencia, la composición de' la presente invención es útil en el tratamiento terapéutico para normalizar la tolerancia disminuida a la glucosa. Se ha demostrado en la presente que una infusión de dosis baja de GLP-1 puede mejorar la función de las células ß para secretar insulina en respuesta a incrementos en los niveles de glucosa en plasma. Así, GLP-1 también puede usarse • para mejorar la conservación de la función de la célula ß en sujetos con IGT. La administración de GLP-1 también regula o 5 normaliza los patrones de secreción de insulina lo cual resultará en una reducción total de insulina en plasma en IGT. Esta normalización a su vez reducirá la condición de resistencia a la insulina. El término "GLP-1", o péptido similar a glucagon, • 10 incluye miméticos de GLP-1, y como se usa en el contexto de la presente invención puede estar comprendido de péptidos similares a glucagon y péptidos relacionados y análogos de peptido-1 similares a glucagon que se enlazan a una proteína receptora peptido-1 (GLP-1) similar a glucagon tal como la proteína receptora amida GLP-1 (7-36) y tiene un efecto biológico correspondiente sobre la secreción de insulina como amida GLP-1 (7-36) , la cual es una forma nativa, biológicamente activa de GLP-1. Ver Góke, B and Byrne, M, Diabetic Medicine . 1996, 13:854-860. Los receptores GLP-1 son proteínas de la superficie celular encontradas, por ejemplo, sobre células ß pancreáticas que producen insulina. Los péptidos similares a glucagon y análogos incluirán especies que tienen actividad insulinotrópica y que son agonistas de, es decir activa, la molécula receptora de GLP-1 y su segunda actividad mensajera sobre, inter alia , células ß que producen insulina. Los agonistas del péptido similar a glucagon que presentan actividad a través de este receptor se han descrito: EP 0708179A2; Hjorth, S.A. et al., J. Biol . Chem . 269 (48) :30121-30124 (1994); Siegel, E.G. et al. Amer. Diabetes Assoc. 57th Scientific Sessions, Boston (1997); Hareter, A. et al. Amer. Diabetes Assoc. 57th Scientific Sessions, Boston (1997); Adelhorst, K. et al. J. Biol . Chem . 269 (9) : 6275-6278 (1994); Deacon C.F et al. 16th International Diabetes Federation Congress Abstracts, Diabetologia Supplement { 1991 ) ; Irwin, D.M. et al., Proc . Na ti . Acad. Sci . USA. 94:7915-7920 (1997); Mosjov, S. Int. J. Peptide Protein Res . 40 : 333-343 (1992). Las moléculas similares a glucagon incluyen polinucleótidos que expresan agonistas de GLP-1, es decir activadores de la molécula receptora de GLP-1 y su segunda actividad mensajera encontrada sobre, inter alia, células ß que producen insulina. Los miméticos de GLP-1 que también son agonistas de células ß incluyen, por ejemplo, compuestos químicos diseñados específicamente para activar el receptor GLP-1. Los antagonistas peptido-1 similares a glucagon también son conocidos, por ejemplo, ver por ejemplo Watanabe, Y, et al., J. Endocrinol . 140(1) :45-52 (1994), e incluyen exendina (9-39) amina, un análogo de exendina, que es un potente antagonista de receptores GLP-1 (ver, por ejemplo W097/46584) . Publicaciones recientes describen Black Widow GLP-1 and Ser2 GLP-1, see G.G. Holz, J. F.

Hakner/Comparative Biochemistry and Physiology, Part B 121(1998)177-184 and Ritzel, et al., A synthetic glucagon- • like peptide-1 analog whit improved plasma stability, J. Endocrinol 1998 Oct.; 159 (1) : 93-102. 5 Modalidades adicionales incluyen polipéptidos similares a glucagon químicamente sintetizados así como cualesquier polipéptidos o fragmentos de los mismos los cuales sean sustancialmente homólogos. "Sustancialmente homólogo", lo cual puede referirse a secuencias de ácido • 10 nucleico y de aminoácido, significa que una secuencia objeto particular, por ejemplo, una secuencia mutante, varía de una secuencia de referencia por una o más sustituciones, de lesiones o adiciones, el efecto neto de lo cual no resulta en una desigualdad funcional adversa entre las secuencias de referencia y objeto. Para los propósitos de la presente invención, las secuencias que tienen más del 50% de homología, y preferentemente más del 90% de homología, actividad biológica equivalente al aumentar las respuestas de célula ß a los niveles de glucosa en plasma, y las características de expresión equivalentes se consideran sustancialmente homologas. Para propósitos de determinar homología, debe desecharse el troncado de la secuencia madura. Las secuencias que tienen grados menores de homología, bioactividad comparable, y características de expresión equivalentes se consideran equivalentes.

El glucagon y los péptidos GLP de mamífero están codificados por el mismo gen. En el ileon el fenotipo se procesa en dos clases principales de hormonas peptídicas GLP, es decir GLP-1 y GLP-2. Existen cuatro péptidos referidos a GLP-1 conocidos los cuales se procesan de los péptidos fenotípicos. El GLP-1 (1-37) tiene la secuencia His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT N0:1). El GLP-1 (1-37) se amida por procesamiento pos-traslacional para producir GLP-1 (1-36) NH2 el cual tiene la secuencia His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO:2) o se procesa enzimáticamente para producir GLP-1 (7-37) que tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT. NO: 3) . La GLP-1 (7-37) también puede amidarse para producir amida de GLP-1 (7-36) que es la forma natural de la molécula GLP-1, y que tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO: 4) y en la forma natural de la molécula GLP-1. Las células de L del intestino secretan GLP.l (7-37) (SEC. DE IDENT. NO:3) y GLP-1 (7-36) NH2 (SEC . DE IDENT.

NO: 4) en una relación de 1 a 5, respectivamente. Estas formas truncadas de GLP-1 tienen vidas medias cortas in situ, es decir menos de 10 minutos, y se inactivan por una aminodipeptidasa IV para producir Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe lie Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT. NO:5); y Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO: 6), respectivamente. Los péptidos Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT. NO: 5) y Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO: 6), se ha especulado que afecta la producción de glucosa hepática, pero no estimula la producción o liberación de insulina del páncreas. Existen seis péptidos en los venenos del monstruo de Gila que son homólogos a GLP-1. Sus secuencias se comparan con la secuencia de GLP-1 en la Tabla 1.

Tabla 1 a. H A E G T F T S D V S S Y L E G Q A A K E F I A W L V K G R NH2 b. H S D G T F T S D L S K Q M E E E A V R L F I E W L K N G G P S S G A P P P S NH2 c. D L S K Q M E E E A V R L F I E W L K N G G P S S G A P P P S NH2 d. H G E G T F T S D L S K Q M E E E A V R L F I E W L K N G G P S S G A P P P S NH2 e. H S D A T F T A E Y S K L L A K L A L Q K Y L E S I L G S S T S P R P P S S f. H S D A T F T A E Y S K L L A K L A L Q K Y L E S I L G S S T S P R P P S g. H S D A I F T E E Y S K L L A K L A L Q K Y L A S I L G S R T S P P P NH2 h. H S D A I F T Q Q Y S K L L A K L A L Q K Y L A S I L G S R T S P P P NH2 a=GLP-l(SEC. DE IDENT. NO:4). b=Exendina 3 (SEC. DE IDENT. NO: 7). c=Exendina 4 ( 9-39 (NH2 (SEC . DE IDENT. NO: 8). d=Exendina 4(SEC. DE IDENT. NO:9). e=Helospectin I (SEC. DE IDENT. NO:10). f=Helospectin II(SEC. DE IDENT. NO:ll). g=Helodermina(SEC. DE IDENT. NO:12). h=Q8, Q9 Helodermina(SEC. DE IDENT. No:13). Las principales homologías como se indican por las áreas representadas en la tabla 1 son: los péptidos c y h se derivan de b y g, respectivamente. Todos los 6 péptidos que ocurren naturalmente (a, b, d, e, f y g) son homólogos en las posiciones 1, 7, 11 y 18. El GLP-1 y las extendidas 3 y 4 (a, b y d) son homólogos adicionales en las posiciones 4, 5, 6, 8, 9, 15, 22, 23, 25, 26 y 29. En la posición 2, A, S y G son estructuralmente similares. En la posición 3, los residuos D árido E (Asp y Glu) son estructuralmente similares. En las posiciones 22 y 23 F (Phe) y I (He) son estructuralmente similares a Y (Tyr) y L(Leu), respectivamente. De la misma forma, en la posición 26 L e I son estructuralmente equivalentes . Así, de los 30 residuos de GLP-1, las exendinas 3 y 4 son idénticas en las posiciones 15 y son equivalentes en las posiciones adicionales 5. Las únicas posiciones en donde los cambios estructurales radicales son evidentes son en los residuos 16, 17, 19, 21, 24, 27, 28 y 30. Las exendinas también tienen 9 residuos extra en el término carboxilo. Los péptidos similares a GLP-1 pueden hacerse por síntesis peptídica química de estado sólido. El GLP-1 también puede hacerse por técnicas recombinantes convencionales usando procedimientos estándar descritos en, por ejemplo, Sambrook y Maniaitis . El término "Recombinante", como se usa en la presente, significa que una proteína se deriva de sistemas de expresión recombinantes (por ejemplo, microbianos o mamíferos) los cuales se han modificado genéticamente para contener un gen de expresión de GLP-1 o sus análogo biológicamente activos. Los péptidos similares a GLP-1 pueden recuperarse y purificarse de cultivos celulares recombinantes por métodos que incluyen, pero no se limitan a, precipitación por sulfato de amonio o etanol, extracción {acida, cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxilapatita y cromatografía de lectina. La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) puede emplearse para las etapas finales de purificación . Los polipéptidos de la presente invención pueden ser un producto naturalmente purificado, o un producto de procedimientos sintéticos químicos, o producido por técnicas recombinantes de huéspedes procarióticos o eucarióticos (por ejemplo por células de bacterias, levaduras, plantas superiores, insecto y mamíferos en cultivo o in vivo) . Dependiendo del huésped empleado en un procedimiento de producción recombinante, los polipéptidos de la presente invención son generalmente no glicosilados pero pueden ser glicosilados . La actividad de GLP-1 puede determinarse por métodos estándar, en general, por procedimientos de selección de actividad de enlace receptor lo cual involucra proporcionar células apropiadas que expresen el receptor GLP-1 sobre su superficie, por ejemplo, líneas de células de insulinoma tales como células RINmSF o INS-1. Ver también Mosjov, S. (1992) y EP0708170A2. Además de medir el enlace específico del marcador a la membrana usando métodos de radioinmunoensayo, la actividad de cAMP o la producción de insulina dependiente de glucosa también puede medirse. En un método, un polinucleótido que codifica al receptor de la presente invención se emplea para transfectar células para expresar con eso la proteína receptora GLP-1. Así, por ejemplo, estos métodos pueden emplearse para seleccionar un agonista receptor al contactar tales células con compuestos a ser seleccionados y determinar si tales compuestos generan una señal, es decir activan el receptor. Los anticuerpos policlonales y monoclonales pueden utilizarse para detectar purificar e identificar péptidos similares a GLP-1 para uso en los métodos descritos en la presente. Anticuerpos tales como ABGA1178 detectan GLP-1 (1-37) sin dividir intacto o amiga de GLP-1 (7-37) o (7-36) truncado N-terminalmente . Otros anticuerpos detectan en el verdadero extremo del C-terminal de la molécula precursora, un procedimiento el cual permite por sustracción calcular la cantidad de péptido truncado biológicamente activo, es decir amida de GLP-1 (7-37) o (7-36) (Orskov et al. Diabetes, 1993, 42:658-661; Orskov et al. J. Clin . Invest . 1991, 87:415-423). Otras técnicas de selección incluyen el uso de células que expresan el receptor GLP-1, por ejemplo, células CHO transfectadas, en un sistema que mide los cambios iónicos o de pH extracelular causados por la activación del receptor. Por ejemplo, los agonistas potenciales pueden ponerse en Bf contacto con una célula que exprese el receptor de proteína GLP-1 y una segunda respuesta mensajera, por ejemplo los 5 cambios de transducción de señal o iónicos o de pH, pueden medirse para determinar si el agonista potencial es efectivo. Las proteínas de enlace al receptor péptido-1 similar a glucagon de la presente invención pueden usarse en combinación con un portador farmacéutico adecuado, r 10 Tales composiciones comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva del polipéptido, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Tal portador incluye, pero no se limita a, solución salina, solución salina regulada, dextrosa, agua, glicerol, etanol, lactosa, fosfato, manitol, arginina, trehalosa y combinaciones de los mismos. Las formulaciones deben adecuar el modo de administración y son fácilmente averiguadas por aquellos de experiencia en la técnica. El péptido GLP-1 también puede usarse en combinación con agentes conocidos en la técnica que aumentan la vida media in vivo del péptido para aumentar o prolongar la vida actividad biológica del péptido. Por ejemplo, una molécula o porción química puede unirse covalentemente a la composición de la presente invención antes de la administración del mismo. Alternativamente, el agente que aumenta puede administrarse concurrentemente con la composición. Aún adicionalmente, el agente puede comprender una molécula que se conoce inhibe la degradación enzimática de los péptidos • similares a GLP-1 concurrentemente con o después de la administración de la composición peptídica GLP-1. Tal 5 molécula puede administrarse, por ejemplo, oralmente o por inyección. GLP-1 puede administrarse intravenosamente o subcutáneamente, y puede administrarse continuamente o por inyección de bolo. La administración total puede juntarse con, antes de o después de la inyección o infusión de glucosa. Las dosis siguientes pueden usarse: Para infusión continua por intravenosa (I.V.) 0.1 pmol/kg/min a 10 pmol/kg/min y por subcutánea (S.C.) 0.1 pmol/kg/min a 75 pmol/kg/min, y para inyección sencilla (bolo) por I.V. 0.005 nmol/kg a 20 nmol/kg y S.C. 0.1 nmol/kg a 100 nmol/kg. El método preferido de administración del péptido GLP-1 es a través de una aplicación continua. Sin embargo, el GLP-1 puede suministrarse por un depósito inyectado subcutáneo, intramuscular, intraperitoneal con liberación sostenida, insuflación pulmonar profunda con liberación sostenida así como por intravenoso, bucal, parche u otro método de suministro. El tratamiento efectivo de IGT también disminuye el riesgo de eventos cardiovasculares y cerebrovasculares . Por lo tanto puede proporcionarse como un preventivo para pacientes de alto riesgo conocido para tales eventos. Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente un aspecto de la presente invención. Sin embargo, estos ejemplos de ninguna forma deben tomarse como una limitación de las enseñanzas o descripción de la presente invención a los límites de los ejemplos en términos de alcance. EJEMPLOS Los estudios descritos en la presente se realizaron en 10 sujetos que se dividieron en dos grupos sobre la base de su respuesta a la glucosa en plasma a una prueba de tolerancia a la glucosa oral usando el criterio de la World Healt Organization (21) para definir el grado de intolerancia a la glucosa. Cinco sujetos tenían IGT, y cinco sujetos tenían NIDDM. El género, edad, índice de masa corporal (BMK) , niveles base de glucosa en ayuno, glucosa de 2 horas, insulina en ayuno, y HBAlc para cada sujeto se presentan en la Tabla 2. Los sujetos diabéticos eran de más edad que aquellos con IGT, pero los grupos se igualaron para BMI . La media de los niveles de glucosa medios en ayuno y las concentraciones de hemoglobina glicosiladas fueron menores en el qrupo IGT comparados con los sujetos con NIDDM. Los niveles de insulina en ayuno no difirieron entre los grupos. Tabla 2 Parámetros clínicos de línea base de sujetos IGT y NIDDM Los niveles de glucosa en plasma se midieron por la técnica de glucosa oxidasa (YSI, 1500 G, Schlag Company, Bergisch-Gladbach, Germany) . El coeficiente de variación de este método fue <2%. La insulina en plasma se midió por el Abbott IMx Microparticle Enzyme Immunoassay. El coeficiente de variación de la introprueba promedio fue 5%. El C-péptido en plasma se midió como se describió previamente en (22), Faber OK, Binder C, Markussen, J, Heding LG, Naithani VK, Kuzuya H, Blix P, Horwitz DL, Rubenstein AH . Caracterización de siete antisueros c-péptido. Diabetes 27, Suppl 1:170-177, 1978. El límite inferior de la sensibilidad de la prueba fue 0.02 pmol/ml y el coeficiente de variación intraprueba promedió 6%. El glucagon se midió al usar un equipo de radioinmunoensayo comercialmente disponible (Biermann, Bad Nauheim, Germany) y el coeficiente de variación intraprueba promedió 8%. el IR-GLP-1 se midió usando el anticuerpo policlonal específico GA 1178 (Affinity Research, Nottingham, UK) (23) tiene 100% de reactividad con amida de GLP-1 (1-36) y la amida GLP-1 (7-36) truncada. El material similar a GLP-1 inmunoreactivo se extrajo de muestras de plasma sobre cartuchos C-18 empleando acetonitrilo para la elusión de las muestras. El límite de detección de la prueba fue 2 fmol/tubo. El antisuero no reaccionó en forma cruzada con GIP, glucagon pancreático, glicentina, oxintomodulina o GLP-2. Los coeficientes de variación intra- e interprueba fueron 3.4% y 10.4%, respectivamente. Todos los resultados se expresan como media ± SEM. El análisis de los datos se realizó usando el Statistical Analysis System (SAS Versión 6 Edition, for Personal Computers, SAS Institute, Inc., Cary, NC) . La significancia de las diferencias dentro del individuo inducido por GLP-1 se determinó usando pruebas t en pares. Las diferencias se consideraron significativo si P < 0.05. Se utilizaron parámetros cinéticos estándar para depuración de C-péptidos ajustados para edad, sexo y área de superficie corporal (24), Van Cauter E, Mestrez, F, Sturis J, Polonsky KS . La estimación de las proporciones de secreción Vp de insulina de niveles C-péptido: comparación de parámetros cinéticos individuales y estándar para depuración de C- 5 péptido. Diabetes 41:368-377 , 1992. Estos parámetros se usaron para derivar, a cada intervalo de 15 minutos entre muestreo de sangre, el ISR de las concentraciones de C- péptido en plasma por deconvolución como se describió previamente (25,26) . ^r 10 Los sujetos diabéticos se trataron solo con dieta con excepción de un sujeto D07, que fue previamente tratado con un agente hipoglicémico oral que se discontinuó cuatro semanas antes del estudio. Ninguno de los pacientes diabéticos había recibido insulina. Todos los sujetos se colocaron en una dieta de mantenimiento de peso que contiene al menos 200g de carbohidratos por día durante dos semanas antes del estudio. ™ Cada sujeto se estudió en tres ocasiones separadas. Todos los estudios se realizaron después de un ayuno de 12 horas durante la noche comenzando a las 0700 a menos que se indique lo contrario con sujetos en la posición recumbente . Un catéter intravenoso se colocó en cada antebrazo, uno para muestreo de sangre y uno para administración de glucosa y GLP-1 como se necesite. En todos los experimentos, el brazo que contiene el catéter de muestreo se mantuvo en una sábana de calentamiento para asegurar la arterialización de la muestra venosa. En los siguientes ejemplos, el GLP-1 se administró a los sujetos en la forma de amida de GLP-1 (7-36) . EJEMPLO 2 (Prueba de Tolerancia a la Glucosa Oral) Las muestras de sangre se tomaron para la medición de glucosa, C-péptido, insulina, glucagon y GLP-1 a intervalos de 30 durante 120 minutos después de la ingestión de 75 g de glucosa (Boehringer, Mannheim, Mannheim, Germany) . Las áreas de incremento bajo la curva (AUC) de 0 a 120 minutos se calcularon para glucosa, insulina, C-péptido, glucagon y GLP-1. Las concentraciones de glucosa se usaron para definir el grado de intolerancia a la glucosa de acuerdo al criterio de la World Health Organization. La respuesta de los grupos IGT y NIDDM a la glucosa oral se indica en la Tabla 3. Las respuestas a glucosa, insulina y GLP-1 de sujetos a 75 mg de glucosa se muestra en la Figura 1. El AUC para glucosa de 0 a 120 minutos fue menor en el grupo IGT pero la AUC para insulina, C-péptido, glucagon, y GLP-1 no difirió. TABLA 3 P < 0.05 para IGT vs NIDDM Cuando las ISRs medias se graficaron en contra de los niveles de glucosa media se observó que el GLP-1 causó una reducción significativa en los niveles de glucosa sin alterar significativamente las proporciones de secreción media de insulina (Figura 2). EJEMPLO 3 (Administración de una infusión de glucosa oscilatoria) La administración periférica de la glucosa en un patrón oscilatorio resulta en oscilaciones regulares de la glucosa en plasma. En sujetos normales, la célula ß es capaz de detectar y responder a incrementos y decrementos repetitivos en glucosa con cambios paralelos en secreciones de insulina. Este ajuste de las oscilaciones de secreción de insulina a las oscilaciones de glucosa se denomina arrastre.

La falta de arrastre para glucosa es una manifestación temprana de disfunción de célula ß en individuos con IGT y NIDDM moderada. Se usa un protocolo de infusión de glucosa oscilatorio de baja dosis puesto que es una prueba muy sensible de la habilidad de la célula ß para sentir y responder a pequeños cambios en las concentraciones de glucosa en plasma. Prueba la integridad del bucle de retroalimentación de glucosa de enlace y secreción de insulina. Una respuesta normal requiere una habilidad para sentir la glucosa intacta. Para determinar si las células ß eran capaces de detectar y responder a oscilaciones de glucosa, la glucosa se infundio en un patrón oscilatorio con un pequeño volumen de solución salina durante 12 horas. La amplitud de las oscilaciones administradas fue 33% arriba y abajo de la velocidad media de 4 mg/kg/min y su periodicidad fue 144 minutos . Para establecer el efecto de GLP-1 en la habilidad de la célula ß para responder a oscilaciones de glucosa, la glucosa se infundió en la misma forma y el GLP-1 se infundió a una velocidad constante de 0.4 pmol/kg/min durante las 12 horas completas. Cada estudio consistió de un periodo inicial de 2-horas (0700-0900) para permitir lograr un estado continuo. Esto fue seguido por un periodo subsecuente de 10 horas (0900-1900) tiempo durante el cual se sacaron muestras de sangre con intervalos de 15 minutos para glucosa, insulina, C-péptido, y glucagon y a intervalos de 60 minutos para GLP-1. Los niveles de glucosa media fueron significativamente más bajos en ambos grupos durante la infusión de GLP-1 comparada con la solución salina, con una caída promedio de 2.4 ± 0.6 mM en los sujetos IGT (P < 0.02) # y 5.2 ± 0.5 mM en los diabéticos (P < 0.0005). A pesar de esta reducción significativa en la concentración de glucosa en plasma, las ISRs medias no fueron significativamente diferentes durante la infusión de GLP-1 comparadas con la infusión salina en ambos grupos (Tabla 4). TABLA 4 # 10 *P < 0.05, por prueba t en pares, se refiere a la comparación entre solución salina e infusión GLP-1. Los niveles medios de insulina también se mantuvieron durante la infusión de GLP-1 comparados con la solución salina, creciendo en 102 ± 90 pmol/L; P=0.32 en sujetos con IGT y creciendo 7 + 12 pmol/L P=0.56 en sujetos con NIDDM. Los niveles medios de glucagon tampoco fueron diferentes durante la infusión de GLP-1 comparados con los de solución salina (39.3 ± 5.4 pg/ml vs . 39.4 ± 5.9 pg/ml; P=0.94) en sujetos con IGT y (46.4 ± 3.2 pg/ml vs . 42.8 ± 5.4 pg/ml; P=0.4) en sujetos con NIDDM. Los niveles de GLP-1 logrados durante la infusión de GLP-1 fueron 15.6 + 4.6 pmol/L comparados con 2.0 ± 0.8 pmol/L durante la infusión de solución salina (P < 0.001). Estos niveles corresponden a niveles fisiológicos pos-prandiales .

EJEMPLO 4 (relación entre glucosa e ISR en sujetos individuales con IGT) En sujetos normales, cada pulso de glucosa se acopla fuertemente a un pulso en ISR. Este acoplamiento ha mostrado ser previamente defectuoso en sujetos con IGT. Los perfiles de glucosa e ISR durante la infusión oscilatoria de glucosa con solución salina de algún sujeto representativo con IGT, D02, se muestra en las Figuras 3A y 3C. Estos resultados demuestran que en sujetos con IGT, durante la infusión de solución salina, existe una pérdida del acoplamiento fuerte entre glucosa e ISR con muchas • oscilaciones independientes de glucosa en ISR. En la presencia de niveles pos-prandiales fisiológicos de GLP-1 5 (Figuras 3B y 3D) , el patrón de respuestas de secreción de insulina a glucosa se mejora en el sujeto con IGT, con cada pulso en glucosa seguida por un pulso en ISR. En consecuencia, GLP-1 mejora la habilidad de la célula ß para arrastrar una infusión exógena de glucosa en el sujeto con 10 IGT. EJEMPLO 5 (Relación entre glucosa e ISR en sujetos individuales con NIDDM) La Figure 4 muestra los perfiles de glucosa e ISR de algún sujeto con NIDDM, D07. En marcado contraste con los 15 sujetos con IGT, a pesar de la disminución de glucosa en plasma y el mantenimiento de ISR, el patrón de respuestas de secreción de insulina a la glucosa no se mejoró durante la infusión de GLP-1 (Figuras 4B y 4D) , con muchas oscilaciones de glucosa independientes al persistir ISR. Los perfiles de 20 glucosa e ISR durante la infusión de glucosa oscilatoria con solución salina se muestra en las Figuras 4A y 4C. EJEMPLO 6 (Efecto de GLP-1 sobre el poder espectral en IGT y NIDDM) Para determinar si la secreción de insulina fue 25 arrastrada por la glucosa en sujetos individuales, los perfiles temporales de secreción de insulina se analizaron por análisis espectral. El análisis de potencia espectral se usó para evaluar la presencia de acoplamiento fuerte entre oscilaciones en glucosa y oscilaciones en ISR. Este método evaluó la regularidad de las oscilaciones de secreción de insulina a una frecuencia predeterminada. Los picos espectrales corresponden a la periodicidad dominante y la altura de los picos corresponde a la potencia espectral. Cada espectro se normalizó suponiendo ser la varianza total de cada serie 100% y se expresó como la potencia espectral normalizada . La potencia espectral normalizada media para la glucosa en sujetos con IGT fue 11.2 ± 1.5 durante la infusión salina y 13.2 ± 1.6 durante la infusión GLP-1 (P=0.19), y en sujetos con NIDDM 6.5 ± 1.8 durante la infusión de solución salina y 9.8 ± 0.7 durante la infusión de GLP-1 (P=0.18). La Figure 5 demuestra claramente que la infusión de GLP 1 en sujetos con IGT aumenta la respuestas de secreción de insulina a las oscilaciones de glucosa en plasma, resultando en un grado mayor de arrastre de secreción de insulina a glucosa. El efecto se cuantificó al comparar la potencia espectral normalizada de los perfiles de secreción de insulina. La potencia espectral para ISR se incremento de 2.9 ± 1.4 durante la infusión de solución salina a 8.9 ± 1.7 durante la infusión de GLP-1; (P < 0.006) y no cambió en sujetos con NIDDM (1.1 ± 0.5 a 1.5 ± 0.8; P=0.6). El análisis espectral de los perfiles de glucosa osciladora confirmaron la existencia de picos en el espectro • de glucosa en plasma a los 144 minutos que corresponde al 5 periodo de infusión de glucosa exógena. El espectro de poder individual para glucosa e ISR en un sujeto con IGT (Figura 6A) y algún sujeto con NIDDM (Figura 6B) durante la infusión de solución salina y durante la infusión de GLP-1 se muestran en la Figura 6. Estas corresponden a los datos mostrados en • 10 las Figuras 3C y 3D, y las Figuras 4A y 4B. El poder espectral incrementó de 0.6 a 8.9 en el sujeto IGT y cambió mínimamente de 0.28 a 1.51 en el sujeto con NIDDM. Los picos en el espectro de glucosa en plasma ocurrieron a los 144 minutos. Durante la infusión de solución salina el pico espectral dominante para ISR no ocurrió a los 144 minutos, sino más bien a 0.2. El poder espectral con infusión GLP-1 fue 1.5. Durante la infusión de solución salina tuvo un arrastre pobre (Figura 3A) puesto que la potencia espectral para ISR a 144 fue 0.6. Durante la infusión de GLP-1 (Figura 3B) la periodicidad del pico espectral dominante en ISR ocurrió a los 144 minutos, demostrando que el GLP-1 causó el arrastre de la célula ß en este sujeto. El valor medio para el poder espectral normalizado en sujetos control igualados en peso histórico (BMI 28.3) con tolerancia normal a la glucosa fue 7.2 ± 0.6(9) . Los resultados de este estudio demostraron que la # infusión continua de niveles pos-prandiales fisiológicos de GLP-1 redujeron las concentraciones de glucosa en plasma y 5 estimularon la secreción de insulina en sujetos IGT y NIDDM. Mas importante, GLP-1 restableció la habilidad de la célula ß para sentir y responder a la glucosa en plasma en todos los sujetos IGT (cuantificado por poder espectral normalizado), con una respuesta variable en sujetos que ya habían • 10 desarrollado NIDDM. Los posibles mecanismos por medio de los cuales la función de la célula ß se mejora por GLP-1 incluye regulación hacia arriba de los elementos sensibles a la glucosa, eliminación de glucotoxicidad, y mejoría en la resistencia de insulina. El GLP-1 en la glucosa ejercen acciones insulinotrópicas sinergísticas sobre las células ß, que incluyen la estimulación de la formación de AMP cíclica, secreción de insulina, biosíntesis de insulina, y expresión del gen proinsulina. 20 Estos ejemplos demuestran que la infusión continua de niveles fisiológicos de GLP-1 reducen las concentraciones de glucosa de plasma y estimulan la secreción de insulina en sujetos IGT y NIDDM. Más importante, GLP-1 restablece la habilidad de la célula ß para sentir y responder a cambios pequeños en las concentraciones de glucosa en plasma en sujetos IGT, con solamente una respuesta variable en sujetos NIDDM. En sujetos IGT, observamos un incremento significativo en el poder espectral, una medida de la función de la célula ß que no descansa en el ajuste de los cambios en la sensibilidad a la insulina.

Claims (40)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para "GLP-1", y un portador farmacéutico, estando presente el compuesto en una cantidad efectiva para mejorar la sensibilidad y la respuesta de células ß pancreáticas a cambios de glucosa en plasma, medida conforme la frecuencia y cantidad de secreciones de insulina en respuesta a incrementos de glucosa en plasma, en un humano con tolerancia disminuida a la glucosa.
2. 2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto enlazante receptor se selecciona de (a) un péptido el cual comprende la secuencia de aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon, y (b) una variante peptídica que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia del péptido-1 similar a glucagon por una o más sustituciones , delesiones o inserciones .
3. 3. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el compuesto enlazante receptor es el ?éptido-1 similar a glucagon.
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1 (7-37) similar a glucagon el cual tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT. N0:3) .
5. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1 amida (7-36) similar a glucagon el cual tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO: 4) .
6. 6. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el compuesto enlazante receptor es una variante peptídica en la cual la combinación de las sustituciones, delesiones e inserciones en la secuencia de aminoácidos no difiere en más de diez aminoácidos de la secuencia de aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon.
7. 7. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende adicionalmente un agente el cual aumenta la vida media in vivo del compuesto.
8. 8. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto enlazante receptor se expresa por un polinucleótido.
9. 9. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto enlazante receptor es una molécula orgánica que tiene un peso molecular no mayor de aproximadamente 5000.
10. 10. Un método para tratar a un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa que comprende: administrar al individuo una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para el péptido-1 similar a glucagon, y un portador farmacéutico, conteniendo la composición una cantidad del compuesto efectiva para aumentar la regularidad de las respuestas de insulina, y la amplitud de las mismas, en reacción a cambios de glucosa en plasma.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor se selecciona de (a) un péptido el cual comprende la secuencia de aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon y (b) una variante peptídica que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia del péptido-1 similar a glucagon por una o más sustituciones, delesiones o inserciones.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1.
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1 (7-37) similar a glucagon el cual tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT. NO:3) .
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1 (7-36) similar a glucagon el cual tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO:4).
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es una variante peptídica en la cual la combinación de las sustituciones, delesiones e inserciones en la secuencia de aminoácidos no difiere en las de diez aminoácidos de la secuencia de aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon.
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 10 caracterizado porque el compuesto enlazante receptor se expresa por un polinucleótido.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es una molécula orgánica que tiene un peso molecular no mayor de aproximadamente 5000.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la etapa de administración se selecciona del grupo que consiste de depósito inyectado intravenoso, subcutáneo, intramuscular, interperiotoneal, con liberación sostenida, insuflación pulmonar profunda con liberación sostenido, bucal o de parche.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque comprende adicionalmente administrar un agente que aumenta la vida media in vivo del compuesto enlazante receptor.
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el agente se administra concurrentemente con la composición.
21. 21. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el agente se une covalentemente al compuesto enlazante receptor.
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la administración intravenosa está en un rango de dosis de aproximadamente 0.3 hasta aproximadamente 2.0 pmol/kg por minuto.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 18 caracterizado porque la administración subcutánea continua está en un rango de dosis de aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 20.0 pmol/kg por minuto.
24. 24. Un método para tratar a un humano con tolerancia disminuida a la glucosa, que comprende: administrar al humano una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para el péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, conteniendo la composición una cantidad del compuesto efectiva para retardar o detener la pérdida del control de glucosa en plasma y el desarrollo de diabetes mellitus no dependiente de insulina.
25. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor se • selecciona de (a) un péptido el cual comprende la secuencia de aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon, y (b) una 5 variante peptídica que comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia del péptido-1 similar a glucagon en una o más sustituciones , delesiones o inserciones. 26 El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es • 10 el péptido-1 similar a glucagon. 27. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1 (7-37) el cual tiene la secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala 15 Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly (SEC. DE IDENT. NO: 3) . 28. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es el péptido-1 amida (7-36) similar a glucagon el cual tiene la 20 secuencia His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe He Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg (NH2) (SEC. DE IDENT. NO:4). 29. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque el compuesto enlazante receptor es 25 una variante peptídica en la cual la combinación de las sustituciones, delesiones e inserciones en la secuencia de aminoácidos no difiere en más de cinco aminoácidos de la secuencia de aminoácidos del péptido-1 similar a glucagon. 30. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor se expresa por un polinucleótido. 31. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el compuesto enlazante receptor es una molécula orgánica que tiene un peso molecular no mayor de aproximadamente 5000. 32. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la etapa de administtración se selecciona del grupo que consiste de depósito inyectado intravenoso, subcutáneo, intramuscular, interperiotoneal, con liberación sostenida, insuflación pulmonar profunda con liberación sostenido, bucal o de parche. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la administración intravenosa está en un rango de dosis de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 10.0 pmol/kg por minuto. 34. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la administración subcutánea continua está en un rango de dosis de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 75.0 pmol/kg por minuto. 35. Un método para tratar a un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa que comprende: administrar al individuo una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para el péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, caracterizado porque la composición contiene una cantidad del compuesto efectiva para mejorar el arrastre de las respuestas de secreción de insulina de la célula ß a las oscilaciones de glucosa exógena . 36. Un método para tratar un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa que comprende: administrar al individuo una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, caracterizado porque la composición contiene una cantidad del compuesto efectiva para aumentar una normalización de los patrones de secreción de insulina en la tolerancia disminuida a la glucosa. 37. Un método para tratar a un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa que comprende: administrar al individuo un compuesto el cual se enlaza a un receptor para el péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, caracterizado porque la composición contiene una cantidad del compuesto efectiva para reducir los niveles de insulina en plasma en un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa. 38. Un método para tratar a un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa que comprende: administrar al individuo una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para el péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, caracterizado porque la composición contiene una cantidad del compuesto efectiva para reducir la resistencia de insulina en un individuo con tolerancia disminuida a la glucosa. 39. Un método para tratar a un individuo cuyos síntomas indican riesgo incrementado de un evento cardiovascular que comprende: administrar al individuo una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, caracterizado porque la composición contiene una cantidad del compuesto efectiva para aumentar la regularidad de las respuestas de insulina, y la amplitud de las mismas, en reacción a cambios de glucosa en plasma, y para reducir los niveles de insulina en plasma. 40. Un método para tratar a un individuo cuyos síntomas indican riesgo incrementado de un evento cerebrovascular que comprende: administrar al individuo una composición que comprende un compuesto el cual se enlaza a un receptor para péptido-1 similar a glucagon y un portador farmacéutico, caracterizado porque la composición contiene una cantidad del compuesto efectiva para aumentar la regularidad de las respuestas de insulina, y la amplitud de las mismas, en reacción a cambios de glucosa en plasma, y para reducir los niveles de insulina en plasma.