MXPA00012034A - Nuevas secuencias de nucleotido que codifican para los genes sdha, sdhb y sdhc - Google Patents

Abstract

La invención se relaciona con polinucleótidos aislados que contienen una secuencia de polinucleótido aislados que contienen,--una secuencia de polinucleótido seleccionada del grupo que comprende a)polínucleótido que es al menos 70%idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 3, b) polinucleótido que es al menos 70%idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 5, c) polinucleótido que es al menos 70%idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 7, d) polínucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70%idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 3, e) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminácido que es al menos 70%idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 5, f) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70%idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 25 7, g) polinucleótido complementario a los polinucleótidos de a),b)c),d),e)o f), y h) polinucleótido que contiene al menos 15 nucleótidos sucesivos de la secuencia de polinucleótido de a),b),c) d),e)o f) , y procesos para la preparación mediante fermentáción de L-aminoácidos con la atenuación del gen sdhA, sdhB o sdhC que codifica para la subunidad A, B o C de la enzima succinato dehidrogenasa.

Description

NUEVAS SECUENCIAS DE NUCLEOTIDO QUE CODIFICAN PARA LOS GENES sdhA, sdhB Y sdhC.

CAMPO DE LA INVENCIÓN El objeto de la invención son las secuencias de polinucleótido de baterías corineformes que codifican para los genes sdhC, sdhA y sdhB, y un método para la producción mediante fermentación de L-aminoácidos, en particular L- lisina, mediante la atenuación del gen sdhC y/o del gen sdhA y/o del gen sdhB. ESTADO DE LA TÉCNICA Los L-aminoácidos, en particular la lisina se emplean en la medicina humana y en la industria farmacéutica, en la industria alimenticia y muy especialmente en la alimentación de animales. Se sabe que los L-aminoácidos se producen mediante la fermentación de cepas de bacterias corineformes, en particular Corynebacterium glutamicum. Debido a la gran significancia se trabaja continuamente en el mejoramiento de los procesos de producción. Las mejoras de los procesos se pueden relacionar con medidas referentes a las técnicas de la fermentación, como por ejemplo la agitación y el suministro de oxigeno, o a la composición de los medios de cultivo, como por ejemplo la concentración de azúcar durante la fermentación, o a la elaboración a la Ref. 125666 Me.» *-~ ••""*"' forma de producto mediante, por ejemplo, cromatografía de intercambio de iones, o a las características intrínsecas de capacidad del microorganismo mismo. Para mejorar las características de capacidad de estos microorganismos se emplean métodos de la mutagenésis, selección y elección de mutantes. De esta manera se obtienen cepas que son resistentes contra antimetabolitos o auxotrópicas para metabolitos de importancia regulatoria, y que producen L-aminoácidos. Desde hace algunos años también se aplican métodos de la técnica DNA recombinante para el perfeccionamiento de las cepas de cepas de Corynebacterium que producen L-aminoácido. OBJETO DE LA INVENCIÓN Los inventores se propusieron la tarea de proporcionar nuevas medidas para mejorar la producción de aminoácidos por fermentación, en particular L-lisina. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los L-aminoácidos, en particular la lisina se emplean en la medicina humana, en la industria farmacéutica, en la industria alimenticia y muy especialmente en la alimentación de animales. Por consiguiente existe un interés general en proporcionar nuevos procesos mejorados para la producción de L-aminoácidos, en particular L-lisina.

El objeto de la invención es un polinucleótido aislado que contiene una secuencia de polinucleótido seleccionada del grupo que comprende a) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 3, b) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 5, c) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 7, d) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 3, e) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 5, f) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 7, g) polinucleótido complementario a los polinucleótidos de a) , b) c) , d) , e) o f ) , y h) polinucleótido que contiene al menos 15 nucleótidos sucesivos de la secuencia de polinucleótido de a), b) , c), d), e) o f) . Asimismo es objeto de la invención un polinucleótido que es un DNA, de preferencia recombinante, replicable en bacterias corineformes, en particular que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido representada en SEQ ID No. 2. Asmismo es objeto de la invención un polinucleótido que es un RNA. Asimismo es objeto de la invención un polinucleótido, siendo que de preferencia se trata de un DNA replicable, que contiene (i) la secuencia de nucleótido que se muestra en SEQ ID No . 1 , o (ii) al menos una secuencia que corresponde a la secuencia (i) dentro de la zona de la degeneración del código genético, o (iii) al menos una secuencia que hibridiza con la secuencia complementaria a la secuencia (i) o (ii), y/o eventualmente (iv) mutaciones de orientación funcionalmente neutrales en (i) . ¿, .l,i_ Otros objetos son un vector que contiene uno de los polinucleótidos mencionados, y bacterias corineformes que sirven como célula huésped, las cuales contienen el vector. Objeto de la invención son también los polinucleótidos constituidos sustancialmente por una secuencia de polinucleótido, que se pueden obtener mediante rastreo por medio de la hibridización de un banco de genes correspondiente que contiene el gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB completo con la secuencia de polinucleótido correspondiente a SEQ ID No. 1, con una sonda que contiene la secuencia del polinucleótido según SEQ ID No. 1 mencionado, o un fragmento de ella, y aislamiento de la secuencia de DNA mencionada. Las secuencias de polinucleótidos según la invención son adecuadas como sondas de hibridización para RNA, cDNA y DNA, para aislar en toda su longitud cDNA que codifica para succinato dehidrogenasa o sus subunidades A, B o C, y aislar aquellos cDNA o genes que muestran una gran similitud de la secuencia con aquella de los genes de la succinato dehidrogenasa o sus subunidades A, B o C. Las secuencias de polinucleótidos de acuerdo a la invención son además adecuadas como cebadores con cuyo auxilio, mediante la reacción en cadena de polimerasa (RCP), se puede preparar DNA de genes que codifican para la succinato dehidrogenasa. Tales oligonucleótidos que sirven como sondas o cebadores contienen al menos 30, preferiblemente al menos 5 20, en particular muy preferiblemente al menos 15 nucleótidos sucesivos. También son adecuados los oligonucleótidos con una longitud de al menos 40 ó 50 nucleótidos. "Aislado" significa separado de su entorno 10 natural. "Polinucleótido" se refiere en general a poliribonucleótidos o polideoxiribonucleótidos, siendo que se puede tratar de RNA y DNA no modificados o RNA y DNA modificados. 15 Por "polipéptidos" se entienden péptidos o proteinas que contienen dos o mas aminoácidos ligados a través de enlaces peptídicos. Los polipéptidos según la invención incluyen los polipéptidos de acuerdo a la SEQ ID No. 3 y a la SEQ ID No. 20 5, y de acuerdo a la SEQ ID No.7, en particular aquellos con la actividad biológica de la succinato dehidrogenasa, y también aquellos que son al menos idénticos en un 70 % con el polipéptido de acuerdo a la SEQ ID No. 3 y la SEQ ID No. 5 y la SEQ ID No. 7, preferiblemente al menos en un 80 %, y 25 particularmente aquellos que presentan al menos 90 % a 95 % ;i^i¡¡ jáSs&*^ de identidad con el polipéptido de acuerdo a SEQ ID No. 3 y SEQ ID No. 5 y SEQ ID No. 7, y la actividad mencionada. La invención se relaciona además con un método para la producción mediante fermentación de L-aminoácidos, en particular lisina, mediante el empleo de bacterias corineformes que en particular ya producen los L-aminoácidos, en particular la L-lisina, y en las cuales se atenúan, en particular expresan a niveL reducido las secuencias de nucleótido que codifican para el gen sdhC y/o el gen sdhA y/o el gen sdhB. El concepto "atenuación" describe en este contexto la disminución o eliminación en un microorganismo, de la actividad intracelular de una o varias enzimas (proteinas) que se codifican mediante los DNAs correspondientes al emplear, por ejemplo, un promotor débil o un gen o alelo que codifica para una enzima correspondiente con una baja actividad o bien que inactiva la enzima (proteina) correspondiente y que eventualmente combina estas medidas. Los microorganismos que son objeto de la presente invención pueden producir L-aminoácidos, en particular L-lisina a partir de glucosa, sacarosa, lactosa, fructosa, maltosa, melaza, fécula, celulosa o de glicerina y etanol. Se puede tratar de representantes de bacterias corineformes, en particular de la especie Corynebacterium.

En la especie Corynebacterium se debe mencionar en particular el tipo Corynebacterium glutamicum, que es conocido en el ámbito especializado por su capacidad de producir L-aminoácidos. Las cepas adecuadas de la especie Corynebacterium, en particular del tipo Corynebacterium glutamicum, son por ejemplo las conocidas cepas de tipo salvaje Corynebacterium glutamicum ATCC13032 Corynebacterium acetoglutamicum ATCC15806 Corynebacteriüm acetoacidofilu ATCC13870 Corynebacterium melassecola ATCC17965 Corynebacterium termoaminogenes FERM BP-1539 Brevibacterium flavum ATCC14067 Brevibacterium lactofermentum ATTCC13869 y Brevibacterium divaricatum ATTCC14020 y los mutantes y cepas productores de L-aminoácidos, producidos a partir de estas, como por ejemplo las cepas que producen L-lisina Corynebacterium glutamicum FERM-P 1709 Brevibacterium flavum FERM-P 1708 Brevibacterium lactofermentum FERM-P 1712 Corynebacterium glutamicum FERM-P 6463 Corynebacterium glutamicum FERM-P 6464 y Corynebacterium glutamicum DSM5714.

Los inventores tuvieron éxito en aislar los nuevos genes sdhC, sdhA y sdhB de C. glutamicum que codifican para la enzima succinato dehidrogenasa (EC 1.3.99.1) . Para aislar el gen sdhC y/o el gen sdhA y/o el gen sdhB, o también otros genes de C. glutarrucum se instala primero un banco de genes de este microorganismo en E. coli. La instalación de bancos de genes se describe en libros de enseñanza y manuales generalmente conocidos. Como ejemplo mencionaremos el libro de enseñanza de Winnacker: Gene und Klone, Eine Einführung in die Gentechnologie (editorial Chemie, Weinheim, Alemania, 1990) o el manual de Sambrook et al.: Molecular Cloning, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbour Laboratory Press, 1989) . Un banco de genes muy conocido es el de la cepa W3110 de E. coli K-12, el cual fue instalado por Kohara et al. (Cell 50, 495 - 508 (1987)) en vectores ?. Bathe et al. (Molecular an General Genetics, 252:255-265, 1996) describen un banco de genes de C. glutamicum ATCC13032 que se instaló con el auxilio del vector cosmido SuperCos I (Wahl et al., 1987, Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 84:2160-2164) en la cepa NM 554 de E.coli K-12 (Raleigh et al., 1988, Nucleic Acids Research 16:1563-1575). A su vez, Bdrmann et al. (Molecular Microbiology 6 (3), 317-326)) describen un banco de genes de C. glutamicum ATTCC13032 mediante el empleo -del cósmido pHC79 (Hohn y Collins, Gene 11, 291-298 (1980)). O'Donohue (The Cloning and Molecular Analysis of Four Common Aromatic Amino Acid Biosynthetic Genes from Corynebacterium glutamicum. Ph.D. Thesis, National University of Ireland, Galway, 1997) describe la clonación de genes de C. glutamicum mediante el empleo del sistema de expresión ? Zap descrito por Short et al. (Nucleic Acids Research, 16: 7583) . Para establecer un banco de genes de C. glutamicum en E. coli también se pueden usar plásmidos, como pBR322 (Bolívar, Life Sciences, 25, 807-818 (1979)) o ?UC9 (Vieira et al., 1982, Gene, 19:259-268). Como huespedes son especialmente adecuadas aquellas cepas de E. coli con deficiencia de restricción y recombinación, como por ejemplo la cepa DH5a (Jeffrey H. Miller: "A short Course in Bacterial Genetics, A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and Related Bacteria", Cold Spring Harbour Laboratory Press, 1992) . Los fragmentos largos de DNA clonados con ayuda de comidos u otros vectores ? se pueden subclonar a continuación a vectores convencionales, adecuados para la secuenciación de DNA. Los métodos para la secuenciación de DNA se describen entre otros en Sanger et al. (Proceedings of the National (Academy) of Sciences of the United States of America USA, 74:5463-5467, 1977). Las secuencias de DNA obtenidas se pueden entonces investigar con los algoritmos o programas de análisis de secuencia conocidos, como por ejemplo el de Staden (Nucleic Acids Research 14, 217-232(1986)), el programa GCG de Butler (Methods of Biochemical Analysis 39, 74-97 (1998)), el algoritmo FASTA de Pearson y Lipman (Proceedings of the National Academy of Sciences USA 85, 2444-2448 (1988)) o el algoritmo BLAST de Altschul et al. (Nature Genetics 6, 119-129 (1994)), y compararse con los inscriptores de secuencias que existen en bancos de datos accesibles al público. Los bancos de datos accesibles al público para secuencias de neuclotidos son por ejemplo los del European Molecular Biologies Laboratories (EMBL, Heidelberg, Alemania) o los del National Center for Biotechnology Information (NCBI, Bethesda, MD, USA) . De esta manera se obtuvo la nueva secuencia de DNA de C. glutamicum que codifica para el gen sdhC y el gen sdhA y el gen sdhB, la cual es parte integrante de la presente invención como SEQ ID No. 1. Además, a partir de la presente secuencia de DNA se derivó con los métodos previamente descritos la secuencia de aminoácido de la proteina correspondiente. En SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 5 y SEQ ID No. 7 se representan las secuencias de aminoácido resultantes del producto del gen sdhC, sdhA y sdhB.

Las secuencias de DNA codificadoras que resultan de SEQ ID No. 1 mediante la degeneración del código genético son igualmente parte integrante de la invención. Además, en el ámbito especializado los intercambios conservadores de aminoácidos en proteinas, como, por ejemplo, el intercambio de glicina por alanina, o de ácido asparagínico por ácido glutámico se conocen "mutaciones de orientación" (sense mutations), que no conducen a un cambio fundamental de la actividad de la proteina, es decir, que son neutrales con respecto a la función. Se sabe además que los cambios en las terminales N y/o C de una proteina no menoscaban sustancialmente su función, e inclusive la pueden estabilizar. Las indicaciones con respecto a esto las encuentra el experto en Ben-Bassat et al. (Journal of Bacteriology 169: 751-757 (1987)), en 0' Regan et al. (Gene 77: 237-251 (1989)), en Sabin-Toth et al. (Protein Sciences 3: 240-247 (1994)), en Hochuli et al. (Bio/Technology 6: 1321-1325 (1988)) y en libros de enseñanza conocidos de la genética y la biología molecular. Las secuencias de aminoácidos que resultan de la manera correspondiente a partir de SEQ ID No. 1, y las secuencias de DNA que codifican estos aminoácidos son asmimismo parte integrante de la invención. Igualmente son parte integrante de la invención las secuencias de DNA que hibridizan con la SEQ ID No. l o partes de SEQ ID No. 1. Finalmente son parte integrante de la invención las secuencias de DNA que se producen mediante la reacción en cadena de polimerasa (RCP) utilizando cebadores que resultan de la SEQ ID No. 1. 5 Las instrucciones para la identificación de las secuencias de DNA mediante hibridización las encuentra el experto entre otros en el manual "The DIG System Users Guide for Filter Hybridization" de la compañía Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim, Alemania, 1993) y en Liebl et al.

(International Journal of Systematic Bacteriology (1991) 41: 255-260). Las instrucciones para la amplificación de secuencias de DNA con ayuda de la reacción en cadena de polimerasa (RCP) las encuentra el experto entre otros en el manual de Gait: Oligonukleotide synthesis: a practical approach (IRL Press, Oxford, UK, 1984) y en Newton y Graham: PCR (Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg, Alemania, 1994) . Los inventores descubrieron que después de la atenuación del gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB, las bacterias corineformes producen de mejor manera los L-aminoácidos, en particular la L-lisina. Para lograr un debilitamiento se pueden disminuir o suprimir, ya sea la expresión del gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB o bien las propiedades catalíticas del producto génico. En dado caso se combinan ambas medidas. - é*^?^* **,> La expresión del gen se puede disminuir mediante una forma adecuada de llevar el cultivo o mediante modificación genética (mutación) de las estructuras de señal de la expresión génica. Las estructuras de señal de la expresión génica son, por ejemplo, genes represores, genes activadores, operadores, promotores, atenuadores, sitios de unión de ribsomas, el codón de iniciación y los terminadores. Los datos con respecto a esto los encuentra en experto, por ejemplo, en la solicitud de patente W096/15246, en Boyd y Murphy (Journal of Bacteriology 170: 5949 (1988)), en Voskuil y Cha bliss (Nucleic Acids Research 26: 3548 (1998)), en Jensen y Hammer (Biotechnology and Bioengineering 58: 191 (1998)), en Patek et al. (Microbiology 142: 1297 (1996)) y en libros de texto conocidos de la genética y biología molecular, como por ejemplo el libro de texto de Knippers ("Moleculare Genetik", 6. edición, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Alemania, 1995) o el de Winnacker ("Gene und Klone", VCH Verlagsgesellschaft, Weinheim, Alemania, 1990) . Las mutaciones que conducen a una modificación o bién disminución de las propiedades catalíticas de las proteinas enzimáticas son conocidas por el estado de la técnica; como ejemplos mencionaremos los trabajos de Qiu y Goodman (Journal of Biological Chemistry 272: 8611-8617 (1997)), Sugimoto et al. (Bioscience Biotechnology and Biochemistry 61: 1760-1762 (1997)) y Móckel ("Die Threonindehydratase aus Corynebacterium glutamicum: Aufhebundg der allosterischen Regulation und Struktur des Enzyms", Berichte des Forschungszentrums Jülichs, Jül-2906, ISSN09442952, Jülich, Alemania, 1994). Las exposiciones sumarizadas se pueden recabar de libros de texto conocidos de la genética y la biología molecular, como por ejemplo el de Hagemann ("Allgemeine Genetik", Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1986). Como mutaciones entran en consideración transiciones, transversiones, inserciones y deleciones. En función del efecto del intercambio de aminoácido sobre la actividad enzimática se habla de mutaciones de orientación contraria (missense mutations) o mutaciones sin orientación (nonsense mutations) . Las inserciones o deleciones de al menos un par de bases en un gen conducen a mutaciones por cambio en el marco de lectura (frame shift mutations), en cuya secuencia se insertan aminoácidos erróneos o se trunca prematuramente la traslación. Las deleciones de varios codones típicamente conducen a una pérdida total de la actividad enzimática. Las instrucciones para producir este tipo de mutaciones pertenecen al estado de la técnica y se pueden recabar de libros de texto conocidos de la genética y la biología molecular, como por ejemplo el libro de texto de Knippers ("Moleculare Genetik", 6. edición, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Alemania, 1995), el de Winnacker ("Gene und Klone", VCH Verlagsgesellschaft, Weinheim, Alemania, 1990) o el de Hagemann ("Allgemeine Genetik", Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1986) . Un método usual para mutar genes de C. glutamicum es el método de la disrupción del gen ("gene disruption") y del reemplazo del gen ("gene replacement"/ descrito por Schwarzer y Pühler (Bio/Technology 9, 84-87 (1991). En el caso del método de la disrupción del gen se clona una parte central de la región de codificación del gen interesante en un vector plasmídico que puede replicar en un huésped (típicamente E. coli) pero no en C. glutamicum. Como vectores entran en consideración, por ejemplo, pSUP301 (Simón et al., Bio/Technology 1, 784-791 (1983)), 784-791 (1983)), pkldmob o pkl9mob (Scháfer et al., Gene 145, 69-73 (1994)), pkldmobsacB o pkl9mobsacB (Jager et al., Journal of Bacteriology 174: 5462-65 (1992)), pGEM-T (Promega Corporation, Madison, Wl, USA), PCR2.1-T0P0 (Shuman (1994). Journal of Biological Chemistry 269:32678-84; US-Patent 5,487,993) pCRTBlunt (Firma Invitrogen, Groningen, Países Bajos: Bernard et al., Journal of Molecular Biology, 234: 534-541 (1993)) o pEMl (Schrumpf et al, 1991, Journal of Bacteriology 173: 4510-4516) . El vector plasmídico que contiene la parte central de la región de codificación del gen se transforma a k i i continuación a la cepa deseada de C. glutamicum mediante conjugación o transformación. El método de la conjugación se describe, por ejemplo en Scháfer et al. (Applied and Environmental Microbiology 60, 756-759(1994)). Los métodos para la transformación se describen, por ejemplo en Thierbach et al. (Applied Microbiology and Biotechnology 29, 356-362 (1988)), Dunican y Shivnan (Bio/Technology 7, 1067-1070 (1989)) y Tauch et al (FEMS Microbiological Letters 123, 343-347) (1994)). Después de la recombinación homologa por medio de un evento "cross over"' se interrumpe la región de codificación del gen respectivo mediante la secuencia vector, y se obtienen dos alelos incompletos a los cuales les falta respectivamente la terminal 3' y 5' . Este método fue empleado, por ejemplo, por Fitzpatrick et al. (Applied Microbiology and Biotechnology 42, 575-580 (1994)) para eliminar el gen recA de C. glutamicum. El gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB se pueden eliminar de esta manera. En el método del reemplazo del gen ("gene replacement") se produce una mutación in vLtro, como por ejemplo una deleción, inserción o reemplazo de bases en el gen interesante. El alelo producido se clona a su vez en un vector no replicable para C. glutamicum y este se transforma a continuación mediante transformación o conjugación en el huésped de C. glutamicum deseado. Después de la recombinación homologa mediante un primer evento "cross-over" que produce la integración, y un segundo evento "cross over" adecuado que produce la escisión en el gen diana o bien en la secuencia diana se consigue la inserción de la mutación o bien del alelo. Este método fue empleado, por ejemplo por Peters-Wendisch (Microbiology 144, 915-927 (1998)) para eliminar el gen pyc de C. glutamicum mediante una deleción. De esta manera es posible insertar una deleción, inserción o reemplazo de bases en el gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB. Por consiguiente, otro objeto de la invención es un proceso para la producción mediante fermentación de L-aminoácidos, en particular L-lisina, en el cual o bién se emplea una cepa transformada con un vector píasmídico, y el vector plasmídico porta secuencias de nucleótido de los genes que codifican para la enzima succinato-dehidrogenasa, o bién la cepa tiene una deleción, inserción o un reemplazo de bases en el gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB. Los métodos para la producción mediante fermentación de L-aminoácidos, en particular L-lisina, comprenden las etapas siguientes: a) fermentación de bacterias corineformes que producen el L-aminoácido en las que se atenúa al menos uno de los genes seleccionado de aquellos que codifican para la enzima succinato-dehidrogenasa o sus subunidades A, B y C, b) concentración del L-aminoácido en el medio o en las células de las bacterias, y c) aislamiento del L-aminoácido. Para la producción de aminoácidos, en particular 5 de L-lisina puede ser adicionalmente conveniente, además de atenuar el gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB, reforzar, en particular sobreexpresar una o varias enzimas de la respectiva ruta de la biosíntesis, de la glicólisis, de la anaplerótica, del ciclo de ácido cítrico o de la 10 exportación del aminoácido. Así, por ejemplo, para la producción de L-lisina se puede sobreexpresar • simultáneamente el gen dapA que codifica para la dihidrodipicolinato ligasa (EP-B 0 197 335), y/o 15 • simultáneamente el gen gap que codifica para la gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenasa (Eikmanns (1992), Journal of Bacteriology 174: 6076-6086), o • simultáneamente el gen pyc que codifica para la piruvato carboxilasa (Eikmanns (1992), Journal of Bacteriology 174: 6076-6086), o • simultáneamente el gen mqo que codifica para la malato: quinona oxidoreductasa (Molenaar et al., European Journal of Biochemistry 254, 395 - 403 (1998)), o 25 • simultáneamente el gen lysE que codifica para la «faafe. átate exportación de lisina (DE-A-195 48 222). Para la producción de L-aminoácidos, en particular la L-lisina, puede ser conveniente, además de los genes reivindicados, atenuar simultáneamente 5 • el gen pck que codifica para la fosfoenolpiruvato- carboxicinasa (DE 199 50 409.1, DSM 13047) y/o • el gen pgi que codifica para la glucosa-6-fosfato iso erasa (US 09/396,478, DSM 12969). Para la producción de aminoácidos, en particular 10 de L-lisina puede ser además conveniente, además de atenuar el gen sdhC y/o sdhA y/o sdhB, suprimir reacciones secundarias indeseables (Nakayama: "Breeding of Amino Acid Producing Micro-organisms", in: Overproduction of Microbial Products, Krumphanzl, Sikyta, Vanek (eds.), Academic Press, 15 London, UK, 1982) . También son objeto de la invención los microorganismos que contienen el polinucleótido de acuerdo a la reivindicación 1 y se pueden cultivar en forma continua o discontinua en el cultivo por lotes o en el 20 cultivo en discontinuo con afluencia o en el cultivo en discontinuo con reciclaje para el fin de la producción de L-aminoácidos, en particular L-lisina. Un resumen sobre los métodos de cultivo conocidos se describe en el libro de texto de Chmiel (Bioprozesstechnik 1. Einführung in die 25 Bioverfahrenstechnik (editorial Gustav Fischer, Stuttgart, <¿L>a 1991)) o en el libro de texto de Storhas (Bioreaktoren und periphere Einrichtungen (editorial Vieweg, Braunschweig/Wiesbaden, 1994) ) . El medio de cultivo que se emplea debe satisfacer de manera adecuada a los requisitos de las cepas respectivas. Las descripciones de medios de cultivo de diversos microorganismos se encuentran contenidas en el manual "Manual of Methods for General Bacteriology" de la American Society for Bacteriology (Washington D.C., E.U.A., 1981) . Como fuente de carbono se pueden emplear azúcar y carbohidratos como por ejemplo glucosa, sacarosa, lactosa, fructosa, maltosa, melaza, fécula y celulosa, aceites y grasas como, por ejemplo, aceite de soya, aceite de girasol, aceite de cacahuate y aceite de coco, ácidos grasos como, por ejemplo, ácido palmítico, ácido esteárico y ácido linólico, alcoholes como, por ejemplo, glicerina y etanol, y ácidos orgánicos como, por ejemplo, ácido acético. Estas sustancias se pueden usar en forma individual o como mezcla. Como fuente de nitrógeno se pueden emplear compuestos orgánicos que contienen nitrógeno, como peptonas, extracto de levadura, extracto cárnico, extracto de malta, licor de maíz empapado, harina de frijol de soya y urea, o compuestos inorgánicos como sulfato de amonio, cloruro de amonio, fosfato de amonio, carbonato de amonio y nitrato de amonio. Las fuentes de nitrógeno se pueden emplear en forma individual o como mezclas. Como fuente de fósforo se pueden emplear ácido fosfórico, dihidrogenofosfato de potasio o hidrogenofosfato dipotásico, o las sales de sodio correspondientes. El medio de cultivo debe contener además, sales de metales como, por ejemplo, sulfato de magnesio o sulfato de hierro, las cuales son necesarias para el crecimiento. Finalmente es posible, adicionalmente a las sustancias precedentemente mencionadas, aplicar sustancias esenciales para el crecimiento como aminoácidos y vitaminas. Al medio de cultivo se le pueden agregar además etapas preliminares adecuadas. Las sustancias de aplicación mencionadas se pueden adicionar al cultivo en forma de una preparación única o ser alimentadas en forma adecuada durante el cultivo. Para el control del pH del cultivo se aplican en forma adecuada compuestos básicos como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, amoniaco o agua amoniacal, o compuestos ácidos como ácido fosfórico o ácido sulfúrico. Para el control de la espumación se pueden aplicar agentes antiespumantes como por ejemplo esteres poliglicólicos de ácidos grasos. Para mantener la estabilidad de los plásmidos se le pueden adicionar al medio sustancias adecuadas que actúan selectivamente como, por ejemplo, los antibióticos. Para mantener las condiciones aeróbicas se _^ » ~* introducen al cultivo oxígeno o mezclas gaseosas que contienen oxígeno como, por ejemplo, aire. La temperatura del cultivo normalmente es de 20°C a 45°C, y de preferencia de 25°C a 40°C. Se prosigue tanto tiempo con el cultivo hasta que se forma un máximo del producto deseado. Esta meta se alcanza normalmente dentro de 10 horas a 160 horas. Los métodos para determinar los L-aminoácidos son conocidos por el estado de la técnica. El análisis se puede efectuar como se describe en Spackman et al. (Analytical Chemistry, 30, (1958), 1190), mediante cromatografía de intercambio de aniones con subsecuente derivación de ninhidrina, o se puede efectuar mediante HPLC de fase inversa, tal como se describe en Lindroth et al. (Analytical Chemistry (1979) 51: 1167-1174). EJEMPLOS La presente invención se explica con mas detalle a continuación en base a los siguientes ejemplos de realización. Ejemplo 1 Elaboración de un banco de genes cósmido genómico a partir de Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 Se aislaron DNA cromosonales de Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 como se describe en Tauch et al. (1995, Plasmid 33:168-179) y se cortaron parcialmente con la enzima de restricción Sau3AI (Amersham Pharmacia, Freiburg, Alemania, descripción del producto: Sau3AI, clave No. 27-0913-02). Los fragmentes de DNA se desfosforilaron con fosfatasa alcalina de camarón (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Alemania, descripción del producto: SAP, clave No. 1758250) . Los DNA del vector cósmido SuperCosl (Wahl et al. (1987) Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 84:2160-2164), adquirido de la compañía Stratagene (La Jolla, USA, descripción del producto: SuperCosl Cosmid Vector Kit, clave No. 251301) se cortó con la enzima de restricción Xbal (Amersham Pharmacia, Freiburg, Alemania, descripción del producto: Xbal, clave No. 27-0948-02) y se desfosforilaron asimismo con fosfatasa alcalina de camarón. A continuación se cortó el DNA cósmido con la enzima de restricción Ba Hl (Amersham Pharmacia, Freiburg, Alemania, descripción del producto: BamHl, clave No. 27-0868-04). El DNA cósmido tratado de esta manera se mezcló con el DNA de ATCC13032 tratado, y la preparación se trató con la de T4-DNA-ligasa (Amersham Pharmacia, Freiburg, Alemania, descripción del producto: T4-DNA-ligasa, clave No. 27-0870-04). La mezcla de ligamiento se empacó a continuación en fagos con el auxilio del extracto de empacamiento Gigapack II XL (Stratagene, La Jolla, USA, descripción del producto: Gigapack II XL Packing Extract, clave No. 200217). Para la infección de la cepa E. coli NM554 (Raleigh et al. 1988, Nucleic Acid Res. 16:1563-1575) se suspendieron las células en 10 mM de MgS04 y se mezclaron con una alícuota de la suspensión de fagos. La infección y titulación del banco cósmido se efectuó como se describe en Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor), siendo que las células se extendieron sobre placas de LB-Agar (Lennox, 1955, Virology, 1:190) con 100 µg/ml de ampicilina. Después de incubar durante la noche a 37°C se seleccionaron clones individuales recombinantes. Ejemplo 2 Aislamento y secuenciación de los genes sdhC, sdhA y sdhB El DNA cósmido de una colonia individual se aisló con el Qiaprep Spin Miniprep Kit (Producto No. 27106, Qiagen, Hilden, Alemania) de acuerdo a las indicaciones del fabricante y se cortó parcialmente con la enzima de restricción Sau3AI (Amersham Pharmacia, Freiburg, Alemania, descripción del producto: Sau3AI, clave No. 27-0913-02) . Los fragmentos de DNA se desfosforilan con fosfatasa alcalina de camarón (Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Alemania, descripción del producto: SAP, clave No. 1758250) . Después de la separación electroforética en gel se llevó a cabo el aislamiento de los fragmentos de cósmidos de la gama de tamaño de 1500 a 2000 bp con el QiaExII Gel Extraction Kit (Producto No. 20021, Qiagen, Hilden, Alemania) . El DNA del vector de secuenciación pZerol, adquirido a través de la compañía Invitrogen (Groningen, Países Bajos, descripción del producto: Zero Rackground Cloning Kit, No. de producto K2500-01) se cortó con la enzima de restricción BamHl (Amersham Pharmacia, Freiburg, Alemania, descripción del producto: BamHl, No. de producto 27-0868-04). El ligamiento de los fragmentos cósmidos en el vector secuenciador pZerol se llevó a cabo como lo describe Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor) , siendo que la mezcla de DNA con T4-ligasa (Pharmacia Biotech, Freiburg, Alemania) se incubó durante la noche. Esta mezcla de ligamiento se electroporó (Tauch et al., 1994, FEMS Microbiol Letters, 123: 343-7) a continuación en la cepa E. coli DH5otMCR (Grant, 1990, Proceedings of the National Academy of Sciences USA, 87: 4645-4649) y se extendió sobre placas de agar LB (Lennox, 1955, Virology, 1: 90) con 50 µg/ml de Zeocina. La preparación plásmida de los clones recombinantes se llevó a cabo con el Biorobot 9600 (Producto No. 900200, Qiagen, Hilden, Alemania) . La secuenciación se llevó a cabo de acuerdo al método de interrupción de cadena dideoxi de Sanger et al. (Proceedings of the National (Academy) of Sciences of the United States of America USA, 74:5463-5467) con modificaciones según Zimmermann et al. (1990,, Nucleic Acids Research, 18: 1067). Se empleó el Kit "RR dRhoda in ^ktí^ ^^^^^ái^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^¡^^^^ Ter inator Cycle Sequencing Kit" de PE Applied Biosystems (Producto No. 403044, Weiterstadt, Alemania) . La separación y análisis electroforéticos en gel de la reacción de secuenciación se llevaron a cabo en un gel "Rotiphorese NF Acrylamid/Bisacrylamid" (29:1) (producto No. A124.1, Roth, Karlsruhe, Alemania) con el aparato de secuenciación "ABl Prism 377" de PE Applied Biosystems (Weiterstadt, Alemania) . Los datos obtenidos de la secuencia cruda se procesaron a continuación empleando el paquete de programa Staden (1986, Nucleic Acids Research, 14: 217-231) versión 97-0. Las secuencias individuales de los derivados de pZerol se ensamblaron para obtener un Contig continuo. El análisis de la región de codificación apoyado por computadora se elaboró con el programa XNIP (Staden, 1986, Nucleic Acids Research, 14: 217-231). Otros análisis se llevaron a cabo con los "BLAST search programs" (Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Research, 25: 3389-3402), con respecto al banco de datos no redundante del "National Center for Biotechnology Information" (NCBIr Bethesda, MD, USA) . La secuencia de nucleótidos obtenida se representa en SEQ ID No. 1. El análisis de la secuencia de nucleótidos dio por resultado un marco de lectura abierto de 879 pares de bases que se caracterizó como gen sdhC, así como un marco de lectura abierto de 1875 pares de bases que se caracterizó como sdhA, así como un marco de lectura abierto de 852 pares de bases" que se caracterizó como sdhB.

El gen sdhC codifica para un polipéptido de 293 5 aminoácidos, el cual se representa en la SEQ ID No. 3. El gen sdhA codifica para un polipéptido de 625 aminoácidos que se representa en la SEQ ID No. 5. El gen sdhB codifica para un polipéptido de 284 aminoácidos, el cual se representa en la SEQ ID No. 7. 10 Ejemplo 3 3.1 Elaboración de un vector de integración para la mutagénesis de integración del gen sdhA A partir de la cepa ATCC 13032 se aisló DNA cromosonal de acuerdo al método de Eikmanns et al 15 (Microbiology 140: 1817-1828 (1994)). Tomando como base la secuencia del gen sdhA para C. glutamicum conocida por el ejemplo 2 se seleccionaron los siguientes oligonucleótidos para la reacción en cadena de polimerasa: sdhA-ini : 0 5' CGT CAT TGT CAC CGA ACG TA 3' sdhA-in2: 5' TCG TTG AAG TCA GTC CAG AG 3' Los cebadores representados fueron sintetizados por la compañía MWG Biotech (Ebersberg, Alemania) y la 5 reacción en cadena de polimerasa se llevó a cabo de acuerdo ? ?á . - al método de RCP estándar de Innis et al. (PCR Protocols. A Guide to Methods and Applications, 1990, Academic Press) con la polimerasa Pwo de la compañía Boehringer Mannheim (Alemania, descripción del producto: Pwo DNA Polimerase, producto No. 1 644 947). Con el auxilio de la reacción en cadena de polimerasa, los cebadores permiten la amplificación de un fragmento interno de aproximadamente 0.67 kb de tamaño del gen sdhA. El producto amplificado de esta manera se ensayó electroforéticamente en un gel de agarosa al 0.8%. El fragmento de DNA amplificado se ligó al vector pCR®Blunt II (Bernard et al., Journal of Molecular Biology, 234: 534:541 (1993)) con el Kit Zero Blunt™ de la compañía Invitrogen Corporation (Carlsbad, CA, USA; número de catálogo K2700-20) . A continuación se electroporó la cepa E. coli TOP10 con la preparación de ligamiento (Hanahan, en: DNA Cloning. A Practical Approach, Vol. I, IRL-Press, Oxford, Washington DC, USA, 1985) . La selección de células portadoras de plásmidos se llevó a cabo extendiendo la preparación de transformación sobre agar LB (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989) que se complementó con 25 mg/l de canamicina. El DNA plásmido se aisló a partir de un transformado con el auxilio del Kit "QIAprep Spin Miniprep Kit" de la compañía Qiagen, y se examinó mediante restricción con la enzima de restricción EcoRI y subsecuente electroforésis con gel de agarosa (0.8%). El plásmido se nombró pCRBluntsdhAint y se representa en la figura 1. Ejemplo 4 Mutagénesis de integración del gen sdhA en la cepa DSM 5715 El vector pCRBluntsdhAint mencionado en el ejemplo 3 se electroporó en C. glutamicum DSM 5715 según el método de electroporación de Tauch et al. (FEMS Mícrobiological Letters, 123: 343-347 (1994)). La cepa DSM 5715 se describe en el documento EP-B-0435132. El vector pCRBluntsdhAint no puede replicar independientemente en DSM5715 y solo se conserva en la célula si se ha integrado al cromosoma de DSM 5715. La selección de clones con pCRBluntsdhAint integrado al cromosoma se llevó a cabo extendiendo la preparación de electroporación sobre agar LB (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.) que se complementó con 15 mg/l de canamicina. Para la comprobación de la integración el fragmento sdhAint se marcó con el Kit de hibridización Dig de la compañía Boehringer de acuerdo al método "The DIG System Users Guide for Filter Hybridization" de la compañía Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim, Alemania, 1993) . El DNA cromosomal de un inegrante potencial se aisló según el método de Eikmanns et al. (Microbiology 140: 1817-1828 (1994)) y se cortó respectivamente con las enzimas de restricción Sphl y HindIII. Los fragmentos resultantes se separaron mediante la electroforésis de gel de agarosa y se hibridizaron a 68°C con el Kit de hibridización Dig de la compañía Boehringer. El plásmido pCRBluntsdhAint mencionado en el ejemplo 3 se había insertado en el cromosoma de DSM5715 dentro del gen sdhA cromosomal. La cepa se caracterizó como DSM5715: :pCRBluntsdhAint . Ejemplo 5 Elaboración de ácido L-glutámico con la cepa DSM5715: :pCRBluntsdhAint La cepa DSM5715: :pCRBluntsdhAint de C. glutamicum obtenida en el ejemplo 4 se cultivó en un medio de cultivo adecuado para la producción de ácido glutámico, y se determinó el contenido de ácido glutámico en el sobrenadante del cultivo. Para este propósito la cepa primero se incubó sobre placa de agar durante 24 horas a 33°C con el antibiótico correspondiente (agar de cerebro-corazón con canamicina (25 mg/l) . A partir de este cultivo de placas de agar se inoculó un precultivo (10 ml de medio en un matraz Erlenmeyer de 100 ml) . Como medio para el precultivo se empleó el medio integral Cg III. Medio Cg III NaCl 2.5 g/1 5 Bacto-peptona 10 g/1 Extracto de bacto-levadura 10 g/1 Glucosa (tratada en autoclave por separado 2% (p/v) El valor pH se ajustó en pH 7.4 A este (medio) se le adicionó canamicina (25 mg/l) . El precultivo se incubó durante 16 horas a 33°C a 240 rpm en el agitador. A partir de este precultivo se inoculó un cultivo principal, de manera que la OD inicial (660 nm) del cultivo principal fué de 0.1 de OD. Para el cultivo principal se empleó el medio MM. 15 Medio MM CSL (Licor de maíz empapado) 5 g/1 MOPS (ácido morfolinopropansulfónico) 20 g/1 Acetato de sodio (filtrado a esterilidad) 20 g/1 Sales: 20 (NH4)2S04) 25 g/1 KH2P04 0.1 g/1 MgS04 * 7 H20 l.O g/1 CaCl2 * 2 H20 10 mg/l FeS04 * 7 H20 10 mg/l 25 MnS04 * H20 5.0 mg/l ^ -¿^ ^^ÍA ^M^^m^.

Biotina (filtrada a esterilidad) 0.3 mg/l Tiamina * HCl (filtrada a esterilidad) 0.2 mg/l Leucina (filtrada a esterilidad) 0.1 g/1 CaC03 25 g/1 5 El CSL, el MOPS y la solución salina se ajustan con agua amoniacal a pH 7 y se tratan en autoclave. A continuación se adicionan las soluciones estériles de sustrato y vitaminas, así como el CaC03 tratado en autoclave en seco. 10 El cultivo se lleva a cabo en 10 ml de volumen de un matraz Erlenmeyer de 100 ml con serpentines. Se adicionó canamicina (25 mg/l) . El cultivo se efectuó a 33°C y 80% de humedad ambiente. Después de 24 horas se determinó la OD a una longitud de onda de 660 nm con el aparato Biomek 1000 (Beckmann Instruments GmbH, Munich) . La cantidad de ácido glutámico formada se determinó con un analizador de aminoácidos de la compañía Eppendorf-Biotronik (Hamburgo, Alemania) mediante cromatografía de intercambio de iones y derivación posterior en columna con detección mediante ninhidrina. En la tabla 1 se representa el resultado de la prueba.

Tabla 1 Se anexan las figuras siguientes: Figura 1: Mapa del plásmido pCRBluntsdhAint Las abreviaturas y designaciones usadas tienen los significados siguientes. En las indicaciones de los números de pares de bases se trata de valores aproximados que se obtienen dentro del marco de la reproducibilidad de las mediciones : Km: Gen resistente a la canamicina Zeocin: Gen resistente a la zeocina HindIII Sitio de corte de la enzima de restricción HindIII Sphl Sitio de corte de la enzima de restricción Sphl EcoRI Sitio de corte de la enzima de restricción EcoRI SdhAint : Fragmento interno del gen sucC ColEl ori Origen de la replicación del plásmido ColEl PROTOCOLO DE SECUENCIA <110> Degussa-Hüls AG <110> Nuevas secuencias de nucleótido gue codifican para los genes sdhA, sdhB y sdhC <130> 990170 BT <140> <141> <160> 7 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 4080 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> genes <222> (288) .. (1169) <223> adhC <220> <221> genes <222> (1330) .. (3207) <223> adhA <220> <221> genes <222> (3102) .. (3956) <223> adhB <400> 1 gtgcccggcg tggtcgggcc acatccgccc cgggaacttt ttaggcacd: acggtgcaac 60 tgttgggata attgtgtcac ctgcgcaaag ttgctccctg gatcggaagg ttgggctgtc 120 taaacttttt ggttgatacc aaacggggtt agaaactgtt cggatcggta tcctgtgagg 180 aagctcacct tggttttaga atgttgaaaa ggcctcacgt ttccgcaggt agagcacact 240 caattaaatg agcgtcaaac gacaataaag taaggctatc ctaataagtg gggttttatg 300 tctctaaaca gccagttggg ggtcatgggg gagcgccccg tgactggtta atgccccgat 360 ctgggacgta cagtaacaac gacactggag gtgccatgac tgttagaaa cccgaccgtg 420 aggcaatccg tcacggaaaa attacgacgg aggcgctgcg tgagcgtccc gcatacccga 490 cctgggcaat gaagctgacc atggccatca ctggcctaat gtttggtggc ttcgttcttg 540 ttcacatgat cggaaacctg aaaatcttca tgccggacta cgcagccgat tctgcgcatc 600 cgggtgaagc acaagtagat gtctacggcg agttcctgcg tgagatcgga tccccgatcc 660 tcccacacgg ctcagtcctc tggatcctac gtattatcct gctggtcgca ttggttctgc 720 acatctactg tgcattcgca ttgaccggcc gttctcacca gtcccgcgga aagttccgcc 780 gtaccaacct cgttggcggc ttcaactcct tcgcgacccg ctccatgctg gtgaccggaa 840 tcgttctcct tgcgttcatt atcttccaca tcctcgacct gaccatgggt gttgctccag 900 cagccccaac ctcattcgag cacggcgaag tatacgcaaa catggtggct tcctttagcc 960 gctggcctgt agcaatttgg tacatcattg ccaacctggt cctgttcgtc cacctgtcac 1020 acggcatctg gcttgcagtc tctgacctgg gaatcaccgg acgccgctgg agggcaatcc 1080 tcctcgcagt tgcgtacatc gttcctgcac tggtcctgat cggcaacatc accattccgt 1140 tcgccatcgc tgttggctgg attgcgtaaa ggttaggaag aatttatgag cactcactct 1200 gaaaccaccc gcccagagtt catccaccca gtctcagtcc tcccagaggt ztcagctggt 1260 acggtccttg acgctgcaga gccagaagga gttcccacca aagatatgtg ggaataccaa 1320 aaagaccaca tgaacctggt ctccccactg aaccgacgca agttccgtgt cctcgtccgt 1380 ggcaccggcc tgtccggtgg tgctgcagca gcagccctcg gcgaactcgg atacgacgtc 1440 aaggcgttca cctaccacga cgcacctcgc cgtgcgcact ccattgctgc acagggtggc 1500 gttaactccg cccgcggcaa gaaggtagac aacgacggcg cataccgcca cgtcaaggac 1560 accgtcaagg gcggcgacta ccgtggtcgc gagtccgact gctggcgtct cgccgtcgag 1620 tccgtccgcg tcatcgacca catgaacgcc atcggtgcac cattcgccc?i cgaatacggt 1680 ggcgccttgg caacccgttc cttcggtggt gtgcaggtct cccgtaccta ctacacccgt 1740 ggacaaaccg gacagcagct gcagctctcc accgcatccg cactacagcg ccagatccac 1800 ctcggctccg tagaaatctt cacccataac gaaatggttg acgtcattgt caccgaacgt 1860 aacggtgaaa agcgctgcga aggcctgatc atgcgcaacc tgatcaccgc cgagctcacc 1920 gcacacaccg gccatgccgt tatcctggca accggtggct acggcaacgt gtaccacatg 1980 tccaccctgg ccaagaactc caacgcctcg gccatcatgc gtgcatacga agccggcgca 2040 tacttcgcgt ccccatcgtt catccagttc cacccaaccg gcctgcctgt gaactccacc 2100 tggcagtcca agaccattct gatgtccgag tcgctgcgta acgacggccg catctggtcc 2160 cctaaggaac cgaacgataa ccgcgatcca aacaccatcc ctgaggatga gcgcgactac 2220 ttcctggagc gccgctaccc agcattcggt aacctcgtcc cacgtgacgt tgcttcccgt 2280 gcgatctccc agcagatcaa tgctggtctc ggtgttggac ctctgaacaa cgctgcatac 2340 ctggacttcc gcgacgccac cgagcgcctc ggacaggaca ccatccgcga gcgttactcc 2400 aacctcttca ccatgtacga agaggcaatt ggcgaggacc catactccag cccaatgcgt 2460 attgcaccga cctgccactt caccatgggt ggcctctgga ctgacttcaa cgaaatgacg 2520 tcactcccag gtctgttctg cgcaggcgaa gcatcctgga cctaccacgg tgcaaaccgt 2580 ctgggcgcaa actccctgct ctccgcttcc gtcgatggct ggttcaccct gccattcacc 2640 atccctaact acctcggccc attgcttggc tccgagcgtc tgtcagagga tgcaccagaa 2700 gcacaggcag cgattgcgcg tgcacaggct cgcattgacc gcctcatggg caaccgccca 2760 gagtgggtcg gtgacaacgt tcacggacot gagtactacc accgccagct tggcgatatc 2820 ctgtacttct cctgtggcgt ttcccgaaac gtagaagacc tccaggatgg catcaacaag 2880 atccgtgccc tccgcgatga cttctggaag aacatgcgca tcaccggcag caccgatgag 2940 atgaaccagg ttctcgaata cgcagcacgc gtagccgact acatcgacct cggcgaactc 3000 atgtgtgtcg acgccctcga ccgcgacgag tcctgtggcg ctcacttccg cgacgaccac 3060 ctctccgaag atggcgaagc agaacgtgac gacgaaaact ggtgcttcgt ctccgcatgg 3120 gaaccaggcg agaacggaac cttcgtccgc cacgcagaac cactgttctt cgaatccgtc 3180 ccactgcaga caaggaacta caagtaatga aacttacact tgagatctgg cgtcaagcag 3240 gcccaactgc ggaaggcaag ttcgaaaccg tccaggttga cgacgccgtc gcgcagatgt 3300 ccatcctgga gctgcttgac cacgtaaaca acaagttcat cgaagaaggc aaagaaccac 3360 tcgcgttcgc ctctgactgc cgcgaaggca tttgtggtac ctgtggtctc ctcgtgaacg 3420 gtcgccctca cggcgccgac cagaacaagc ctgcctgtgc gcagcgcctg gtcagctaca 3480 aggaaggcga caccctcaag atcgaaccac tgcgttccgc cgcataccca gtgatcaagg 3540 acatggtcgt cgaccgctcc gcactggacc gtgtcatgga acagggtggc tacgtgacca 3600 tcaacgcagg taccgcacct gacgctgata ccctccacgt caaccacgaa accgcagaac 3660 tcgcacttga ccacgcagcc tgcatcggct gtggcgcatg tgttgctgcc tgccctaacg 3720 gcgcagcaca cctgttcacc ggcgcaaagc ttgttcacct ctccctcctc ccactgggta 3780 aggaagagcg cggactgcgt gcacgtaaga tggttgatga aatggaaacc aacttcggac 3840 actgctccct ctacggcgag tgcgcagatg tctgccccgc aggcatccca ctgaccgctg 3900 tggcagctgt caccaaggaa cgtgcgcgtg cagctttccg aggcaaagac gactagtctt 3960 taatccaagt aagtaccggt tcagacagtt aaaccagaaa gacgagtgaa caccatgtcc 4020 tccgcgaaaa agaaacccgc accggagcgt atgcactaca tcaagggcta tgtacctgtg 4080 <210> 2 <211> 882 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221 > CDS «fc.é * <222> (1) .. (879) <223> sdhC <400> 2 gtg ggg ttt tat gtc tct aaa cag cea gtt ggg ggt cat ggg gga gcg 48 Val Gly Phe Tyr Val Ser Lys Gln Pro Val Gly Gly Hia Giy Gly Ala 1 5 10 15 ccc cgt gac tgg tta atg ccc cga tct ggg age tac agt aac aac gac 96 ProArg Asp Trp Leu Met Pro Arg Ser Gly Thr Tyr Ser Asn Asn Asp 20 25 30 act gga ggt gcc atg act gtt aga aat ccc gac cgt gag gca ate cgt 144 Thr Gly Gly Ala Met Thr Val Arg Asn Pro Asp Arg Glu Alalle Arg 35 40 45 cav gga aaa att acg acg gag gcg ctg cgt gag cgt ccc gca tac ccg 192 Hís Gly Lys lie Thr Thr Glu Ala Leu Arg Glu Arg Pro Ala Tyr Pro 50 55 60 acc tgg gca atg aag ctg acc atg gcc ate act ggc cta atg ttt ggt 240 Thr Trp Ala Met Lys Leu Thr Met Ala lie Thr Gly Leu Met Phe Gly 65 70 75 80 ggc ttc gtt ctt gtt cae atg ate gga aac ctg aaa ate ttc atg ccg 288 Gly Phe Val Leu Val His Met He Gly Asn Leu Lys He Phe Met Pro 85 90 95 gac tac gca gcc gat tct ccg cat ccg ggt gaa gca caá gta gat gtc 336 Asp Tyr Ala Ala Asp Ser Ala His Pro Gly Glu Ala Gln Val Asp Val 100 105 110 tac ggc gag ttc ctg cgt gag ate gga tcc ccg ate etc cea cae ggc 384 Tyr Gly Glu Phe Leu Arg Glu He Gly Ser Pro He Leu Pro His Gly 115 120 125 tea gtc etc tgg ate cta cgt att ate ctg ctg gtc gca ttg gtt ctg 432 5 Ser Val Leu Trp He Leu Arq He He Leu Leu Val Ala Leu Val Leu 130 135 140 cae ate tac tgt gca ttc gca ttg ace ggc cgt tct cae cag tcc cgc 480 His He Tyr Cys Ala Phe Ala Leu Thr Gly Arg Ser Hís Gln Ser Arg 145 150 155 160 10 gga aag ttc cgc cgt acc aac etc gtt ggc ggc ttc aac tcc ttc gcg 528 Gly Lys Phe Arg Arg Thr Asn Leu Val Gly Gly Phe Asn Ser Phe Ala 165 170 175 acc cgc tcc atg ctg gtg acc gga ate gtt etc ctt gcg ttc att ate 576 Thr Arg Ser Met Leu Val Thr Gly He Val Leu Leu Ala Phe He He 15 180 185 190 ttc cae ate etc gac ctg acc atg ggt gtt gct cea gca gcc cea acc 624 Phe His He Leu Asp Leu Thr Met Gly Val Ala Pro Ala Ala Pro Thr 195 200 205 tea ttc gag cae ggc gaa gta tac gca aac atg gtg gct tcc ttt age 672 20 Ser Phe Glu His Gly Glu Val Tyr Ala Asn Met Val Ala Ser Phe Ser 210 215 220 cgc tgg ect gta gca att tgg tac ate att gcc aac ctg gtc ctg ttc 720 Arg Trp Pro Val Ala He Trp Tyr He He Ala Asn Leu Val Leu Phe 225 230 235 240 25 gtc cae ctg tea cae ggc ate tgg ctt gca gtc tct gac tg gga ate 768 Val His Leu Ser His Gly He Trp Leu Ala Val Ser Asp Leu Gly He 245 250 255 acc gga cgc cgc tgg agg gca ate etc etc gca gtt gcg tac ate gtt 816 5 Thr Gly Arg Arg Trp Arg Ala He Leu Leu Ala Val Ala Tyr He Val 260 265 270 ect gca ctg gtc ctg ate ggc aac ate acc att ccg ttc gcc ate gct 864 Pro Ala Leu Val Leu He Gly Asn He Thr He Pro Phe Ala He Ala 275 280 285 10 gtt ggc tgg att gcg taa 002 Val Gly Trp He Ala 290 <210> 3 <211> 293 15 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 3 Val Gly Phe Tyr Val Ser Lys Gln Pro Val Gly Gly His Gly Gly Ala 1 5 10 15 20 Pro Arg Asp Trp Leu Met Pro Arg Ser Gly Thr Tyr Ser Asn Asn Asp 20 25 30 Thr Gly Gly Ala Met Thr Val Arg Asn Pro Asp Arg Glu Ala He Arg 35 40 45 His Gly Lys He Thr Thr Glu Ala Leu Arg Glu Arg Pro Ala Tyr Pro 25 50 55 60 «^^ Thr Trp Ala Met Lys Leu Thr Met Ala He Thr Gly Leu Met Phe Gly 65 70 75 80 Gly Phe Val Leu Val His Met He Gly Asn Leu Lys He Phe Met Pro 85 90 95 Asp Tyr Ala Ala Asp Ser Ala Hís Pro Gly Glu Ala Gln Val Asp Val 100 105 110 Tyr Gly Glu Phe Leu Arg Glu He Gly Ser Pro He Leu Pro His Gly 115 120 125 Ser Val Leu Trp He Leu Arg He He Leu Leu Val Ala Leu Val Leu 130 135 140 His He Tyr Cys Ala Phe Ala Leu Thr Gly Arg Ser His Cln Ser Arg 145 150 155 160 Gly Lys Phe Arg Arg Thr Asn Leu Val Gly Gly Phe Asn Ser Phe Ala 165 170 175 Thr Arg Ser Met Leu Val Thr Gly He Val Leu Leu Ala Phe He He 180 185 190 Phe His He Leu Asp Leu Thr Met Gly Val Ala Pro Ala Ala Pro Thr 195 200 205 Ser Phe Glu His Gly Glu Val Tyr Ala Asn Met Val Ala Ser Phe Ser 210 215 220 Arg Trp Pro Val Ala He Trp Tyr He He Ala Asn Leu Val Leu Phe 225 230 235 240 Val His Leu Ser His Gly He Trp Leu Ala Val Ser Asp Leu Gly He 245 250 255 Thr Gly Arg Arg Trp Arg Ala He Leu Leu Ala Val Ala Tyr He Val 260 265 270 Pro Ala Leu Val Leu He Gly Asn He Thr He Pro Phe Ala He Ala 275 280 285 Val Gly Trp He Ala 290 <210> 4 <211> 1878 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (1) .. (1875) <223> sdhA <400> 4 atg aac ctg gtc tcc cea ctg aac cga cgc aag ttc cgt gtc etc gtc 46 Met Asn Leu Val Ser Pro Leu Asn Arg Arg Lys Phe Arg Val Leu Val 1 5 10 15 gtt ggc acc ggc ctg tcc ggt ggt gct gca gca gca gcc etc ggc gaa 96 Val Gly Thr Gly Leu Ser Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Glu 20 25 30 etc gga tac gac gtc aag gcg ttc acc tac cae gac gca ect cgc cgt 144 Leu Gly Tyr Asp Val Lys Ala Phe Thr Tyr His Asp Ala Pro Arg Arg 35 40 45 gcg cae tcc att gct gca cag ggt ggc gtt aac tcc gcc cgc ggc aag 192 Ala His Ser He Ala Ala Gln Gly Gly Val Asn Ser Ala Arg Gly Lys 50 55 60 aag gta gac aac gac ggc gca tac cgc cae gtc aag gac acc gtc aag 240 Lys Val Asp Asn Asp Gly Ala Tyr Arg His Val Lys Asp Thr Val Lys 65 70 75 80 ggc ggc gac tac cgt ggt cgc gag tcc gac tgc tgg cgt etc gcc gtc 288 Gly Gly Asp Tyr Arg Gly Arg Glu Ser Asp Cys Trp Arg Leu Ala Val 85 90 95 gag tcc gtc cgc gtc ate gac cae atg aac gcc ate ggt gea cea ttc 336 Glu Ser Val Arg Val He Asp "His Met Asn Ala He Gly Ala Pro 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Pro Leu Asn Asn Ala Ala 325 330 335 tac ctg gac ttc cgc gac gcc acc gag cgc etc gga cag gac acc ate 1056 Tyr Leu Asp Phe Arg Asp Ala Thr Glu Arg Leu Gly Gln Asp Thr He 340 345 350 cgc gag cgt tac tcc aac etc ttc acc atg tac gaa gag gca att ggc 1104 Arg Glu Arg Tyr Ser Asn Leu Phe Thr Met Tyr Glu Glu Ala He Gly 355 360 365 gag gac cea tac tcc age cea atg cgt att gca ccg acc tfe cae ttc 1152 Glu Asp Pro Tyr Ser Ser Pro Met Arg He Ala Pro Thr Cys His Phe 370 375 380 acc atg ggt ggc etc tgg act gac ttc aac gaa atg acg tea etc cea 1200 Thr Met Gly Gly Leu Trp Thr Asp Phe Asn Glu Met Thr Ser Leu Pro 385 390 395 400 ggt ctg ttc tgc gca ggc gaa gca tcc tgg acc tac cae ggt gca aac 1248 Gly Leu Phe Cys Ala Gly Glu Ala Ser Trp Thr Tyr His Gly Ala Asn 405 410 415 cgt ctg ggc gca aac tcc ctg etc tcc gct tcc gtc gat ggc tgg ttc 1296 Arg Leu Gly Ala Asn Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Asp Gly Trp Phe 420 425 430 acc ctg cea ttc acc ate ect aac tac etc ggc cea ttg ctt ggc tcc 1344 Thr Leu Pro Phe Thr He 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Glu Ser Leu Arg Asn Asp 260 265 270 Gly Arg He Trp Ser Pro Lys Glu Pro Asn Asp Asn Arg Asp Pro Asn 275 280 225 Thr He Pro Glu Asp Glu Arg Asp Tyr Phe Leu Glu Arg Arg Tyr Pro 10 290 295 300 Ala Phe Gly Asn Leu Val Pro "Arg Asp Val Ala Ser Arg Ala He Ser 305 310 315 320 Gln Gln He Asn Ala Gly Leu Gly Val Gly Pro Leu Asn Asn Ala Ala 325 330 335 15 Tyr Leu Asp Phe Arg Asp Ala Thr Glu Arg Leu Gly Gln Asp Thr He 340 345 350 Arg Glu Arg Tyr Ser Asn Leu Phe Thr Met Tyr Glu Glu Ala He Gly 355 360 365 Glu Asp Pro Tyr Ser Ser Pro Met Arg He Ala Pro Thr Cys Hís Phe 20 370 375 380 Thr Met Gly Gly Leu Trp Thr Asp Phe Asn Glu Met Thr Ser Leu Pro 395 390 395 400 Gly Leu Phe Cys Ala Gly Glu Ala Ser Trp Thr Tyr Hís Gly Ala Asn 405 410 415 25 MÉég^!^^^^^^^^»^^» fo^^ ^^^^^^g¿^^ £ ¡u*.ít¡? Arg Leu Gly Ala Asn Ser Leu Leu Ser Ala Ser Val Asp Gly Trp Phe 420 425 430 Thr Leu Pro Phe Thr He Pro Asn Tyr Leu Gly Pro Leu Leu Gly Ser 435 440 445 Glu Arg Leu Ser Glu Asp Ala Pro Glu Ala Gln Ala Ala He Ala Arg 450 455 460 Ala Gln Ala Arg He Asp Arg Leu Met Gly Asn Arg Pro Glu Trp Val 465 470 475 480 Gly Asp Asn Val His Gly Pro Glu Tyr Tyr His Arg Gln Leu Gly Asp 485 490 495 He Leu Tyr Phe Ser Cys Gly Val Ser Arg Asn Val Glu Asp Leu Gln 500 505 510 Asp Gly He Asn Lys He Arg Ala Leu Arg Asp Asp Phe Trp Lys Asn 515 520 525 Met Arg He Thr Gly Ser Thr Asp Glu Met Asn Gln Val Leu Glu Tyr 530 535 540 Ala Ala Arg Val Ala Asp Tyr He Asp Leu Gly Glu Leu Met Cys Val 545 550 555 560 Asp Ala Leu Asp Arg Asp Glu Ser Cys Gly Ala His Phe Arg Asp Asp 565 570 575 His Leu Ser Glu Asp Gly Glu Ala Glu Arg Asp Asp Glu Asn Trp Cys 580 585 590 Phe Val Ser Ala Trp Glu Pro Gly Glu Asn Gly Thr Phe Val Arg His 595 600 605 Ala Glu Pro Leu Phe Phe Glu Ser Val Pro Leu Gln Thr Acg Asn Tyr 610 615 620 Lys 625 <210> 6 <211> 855 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (1) .. (852) <223> sdhB <400> 6 gtg ctt cgt etc cgc atg gga acc agg cga gaa cgg aac ctt cgt ccg 48 Val Leu Arg Leu Arg Met Gly Thr Arg Arg Glu Arg Asn Leu Arg Pro 1 5 10 15 cea cgc aga acc act gtt ctt cga ate cgt ccc act gca gac aag gaa 96 Pro Arg Arg Thr Thr Val Leu Arg He Arg Pro Thr Ala Asp Lys Glu 20 25 30 cta caá gta atg aaa ctt acá ctt gag ate tgg cgt caá gca ggc cea 144 Leu Gln Val Met Lys Leu Thr Leu Glu He Trp Arg Gln Ala Gly Pro 35 40 45 act gcg gaa ggc aag ttc gaa acc gtc cag gtt gac gac gcc gtc gcg 192 Thr Ala Glu Gly Lys Phe Glu Thr Val Gln Val Asp Asp Ala Val Ala cag atg tcc ate ctg gag ctg ctt gac cae gta aac aac aag ttc ate 240 Gln Met Ser He Leu Glu Leu Leu Asp His Val Asn Asn Lys Phe He 65 70 75 80 gaa gaa ggc aaa gaa cea ttc gcg ttc gcc tct gac tgc cgc gaa ggc 288 Glu Glu Gly Lys Glu Pro Phe Ala Phe Ala Ser Asp Cys Arg Glu Gly 85 90 95 att tgt ggt acc tgt ggt etc etc gtg aac ggt cgc ect cae ggc gcc 336 He Cys Gly Thr Cys Gly Leu Leu Val Asn Gly Arg Pro HLS Gly Ala 100 105 1L0 gac cag aac aag ect gcc tgt gcg cag cgc ctg gtc age tac aag gaa 384 Asp Gln Asn Lys Pro Ala Cys Ala Gln Arg Leu Val Ser Tyr Lys Glu 115 120 125 ggc gac acc etc aag ate gaa cea ctg cgt tcc gcc gca tac cea gtg 432 Gly Asp Thr Leu Lys He Glu Pro Leu Arg Ser Ala Ala Tyr Pro Val 130 135 140 ate aag gac atg gtc gtc gac cgc tcc gca ctg gac cgt gtc atg gaa 480 He Lys Asp Met Val Val Asp Arg Ser Ala Leu Asp Arg Val Met Glu 145 150 155 160 cag ggt ggc tac gtg acc ate aac gca ggt acc gca ect gac gct gat 528 Gln Gly Gly Tyr Val Thr He Asn Ala Gly Thr Ala Pro Asp Ala Asp 165 170 175 acc etc cae gtc aac cae gaa acc gca gaa etc gca ctt gac cae gca 576 Thr Leu His Val Asn His Glu Thr Ala Glu Leu Ala Leu Asp His Ala 180 185 190 gcc tgc ate ggc tgt ggc gca tgt gtt gct gcc tgc ect aac ggc gca 624 Ala Cys He Gly Cys Gly Ala Cys Val Ala Ala Cys Pro Asn Gly Ala 195 200 205 gca cae ctg ttc acc ggc gca aag ctt gtt cae etc tcc etc etc cea 672 5 Ala His Leu Phe Thr Gly Ala Lys Leu Val His Leu Ser Le>u Leu Pro 210 215 220 ctg ggt aag gaa gag cgc gga ctg cgt gca cgt aag atg gtt gat gaa 720 Leu Gly Lys Glu Glu Arg Gly Leu Arg Ala Arg Lys Met Val Asp Glu 225 230 235 240 10 atg gaa acc aac ttc gga cae tgc tcc etc tac ggc gag tgc gca gat 766 Met Glu Thr Asn Phe Gly His Cys Ser Leu Tyr Gly Glu Cys Ala Asp 245 250 255 gtc tgc ccc gca ggc ate cea ctg acc gct gtg gca gct gtc acc aag 816 Val Cys Pro Ala Gly He Pro Leu Thr Ala Val Ala Ala Val Thr Lys 15 260 265 270 gaa cgt gcg cgt gca gct ttc cga ggc aaa gac gac tag 855 Glu Arg Ala Arg Ala Ala Phe Arg Gly Lys Asp Asp 275 280 <210> 7 20 <211> 284 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 7 Val Leu Arg Leu Arg Met Gly Thr Arg Arg Glu Arg Asn Leu Arg Pro 25 1 5 10 15 ,-. ¡x3MÉtmw ¡.¡&i?%iíaí & t i, *, • Pro Arg Arg Thr Thr Val Leu Arg He Arg Pro Thr Ala Asp Lys Glu 20 25 30 Leu Gln Val Met Lys Leu Thr Leu Glu He Trp Arg Gln Ala Gly Pro 35 40 45 5 Thr Ala Glu Gly Lys Phe Glu Thr Val Gln Val Asp Asp Ala Val Ala 50 55 60 Gln Met Ser He Leu Glu Leu Leu Asp His Val Asn Asn Lys Phe He 65 70 75 80 Glu Glu Gly Lys Glu Pro Phe Ala Phe Ala Ser Asp Cys Arg Glu Gly 10 85 90 95 He Cys Gly Thr Cys Gly Leu Leu Val Asn Gly Arg Pro His Gly Ala 100 105 110 Asp Gln Asn Lys Pro Ala Cys Ala Gln Arg Leu Val Ser Tyr Lys Glu 115 120 125 15 Gly Asp Thr Leu Lys He Glu Pro Leu Arg Ser Ala Ala Tyr Pro Val 130 135 140 He Lys Asp Met Val Val Asp Arg Ser Ala Leu Asp Arg Val Met Glu 145 150 155 160 Gln Gly Gly Tyr Val Thr He Asn Ala Gly Thr Ala Pro Asn Ala Asp 20 165 170 175 Thr Leu His Val Asn His Glu Thr Ala Glu Leu Ala Leu Asp His Ala 180 185 190 Ala Cys He Gly Cys Gly Ala Cys Val Ala Ala Cys Pro Asn Gly Ala 195 200 205 25 ?.afe.w> Ala His Leu Phe Thr Gly Ala Lys Leu Val His Leu Ser Leu Leu Pro 210 215 220 Leu Gly Lys Glu Glu Arg Gly Leu Arg Ala Arg Lys Met Val Asp Glu 225 230 235 240 Met Glu Thr Asn Phe Gly His Cys Ser Leu Tyr Gly Glu Cys Ala Asp 245 250 255 Val Cys Pro Ala Gly He Pro Leu Thr Ala Val Ala Ala Val Thr Lys 260 265 270 Glu Arg Ala Arg Ala Ala Phe Arg Gly Lys Asp Asp 275 280

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES 1. Polinucleótido aislado de bacterias corineformes, que contiene una secuencia de polinucleótido seleccionada del grupo que comprende 5 a) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 3, b) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que 10 contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 5, c) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 7, d) polinucleótido que codifica para un polipéptido que 15 contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 3, e) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 20 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 5, f) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 25 7, ^^ sg^^j^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^g^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^j^^^jjBSStó g) polinucleótido complementario a los polinucleótidos de a) , b) c) , d) , e) o f) , y h) polinucleótido que contiene al menos 15 nucleótidos sucesivos de la secuencia de polinucleótido de a), b), c) , d), e) o f) .
2. 2. Polinucleótido según la reivindicación 1, caracterizado porque el polinucleótido es un DNA replicable en bacterias corineformes, de preferencia recombinante.
3. 3. Polinucleótido según la reivindicación 1, caracterizado porque el polinucleótido es un RNA.
4. 4. DNA replicable según la reivindicación 2, caracterizado porque contiene (i) la secuencia de nucleótido que se muestra en SEQ ID No. 1, o (ii) al menos una secuencia que corresponde a la secuencia (i) dentro de la zona de la degeneración del código genético, o (iii) al menos una secuencia que hibridiza con la secuencia complementaria a la secuencia (i) o (ii), y/o eventualmente (iv) mutaciones de orientación funcionalmente neutrales en (i) .
5. 5. Secuencia de polinucleótido según la reivindicación 2, caracterizada porque codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido ^^^^^^^^^^r^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^&^a^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ representada en SEQ ID No. 2.
6. 6. Vector, caracterizado porque contiene una secuencia de polinucleótido según la reivindicación 1, en particular 1 h) . 5
7. 7. Bacteria corineforme, caracterizada porque contiene un vector según la reivindicación 6.
8. 8. Método para la producción por fermentación de L- a inoácidos, caracterizado porque se llevan a cabo las etapas siguientes 10 a) se fermentan bacterias corineformes que producen el L- aminoácido en las que se atenúa al menos uno de los genes seleccionado de aquellos que codifican para la enzima succinato-dehidrogenasa o sus subunidades A, B y C, 15 b) se concentra el L-aminoácido en el medio o en las células de las bacterias, y c) se aisla el L-aminoácido.
9. 9. Método según la reivindicación 8, caracterizado porque se emplean bacterias en las que adicionalmente se 20 refuerzan otros genes del curso de la bioslntesis del L- aminoácido deseado.
10. 10. Método según la reivindicación 8, caracterizado porque se emplean bacterias en las que se eliminan al menos parcialmente los cursos del metabolismo que disminuyen la 25 formación del L-aminoácido.
11. 11. Método según la reivindicación 8, caracterizado porque se emplea una cepa transformada con un vector plásmido, y el vector plásmido porta la secuencia de nucleótido del gen que codifica para la enzima succinato- dehidrogenasa.
12. 12. Método según una o varias de las reivindicaciones 8 a 11, caracterizado porque se emplean bacterias corineformes que producen L-lisina.
13. 13. Método según la reivindicación 9, caracterizado porque simultáneamente se sobreexpresa el gen dapA que codifica para la dihidrodipicolinato-sintasa.
14. 14. Método según la reivindicación 9, caracterizado porque simultáneamente se sobreexpresa el gen gap que codifica para la gliceraldehido-3-fosfato-dehidrogenasa.
15. 15. Método según la reivindicación 9, caracterizado porque simultáneamente se sobreexpresa el gen pyc que codifica para la piruvato carboxilasa.
16. 16. Método según la reivindicación 9, caracterizado porque simultáneamente se sobreexpresa el gen mqo que codifica para la alato-quinona-oxidoreductasa.
17. 17. Método según la reivindicación 9, caracterizado porque simultáneamente se sobreexpresa el gen lysE que codifica para la exportación de la lisina.
18. 18. Método según la reivindicación 10, caracterizado porque simultáneamente se atenúa el gen pgi que codifica para la glucosa-6-fosfato isomerasa.
19. 19. Método según la reivindicación 10, caracterizado porque simultáneamente se atenúa el gen pck que codifica para la fosfoenol-piruvatocarboxicinasa. —¡^te-Ma-i RESUMEN La invención se relaciona con polinucleótidos aislados que contienen una secuencia de polinucleótido seleccionada del grupo que comprende a) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 3, b) polinucleótido que es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 5, c) polinucleótido qu'e es al menos 70 % idéntico a un polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene la secuencia de aminoácido de SEQ ID No. 7, d) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 3, e) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 5, f) polinucleótido que codifica para un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácido que es al menos 70% idéntica a la secuencia de aminoácido de SEQ ID No 7, g) polinucleótido complementario a los polinucleótidos de a) , b) c) , d) , e) o f) , y h) polinucleótido que contiene al menos 15 nucleótidos sucesivos de la secuencia de polinucleótido de a), b) , c), d), e) o f), y procesos para la preparación mediante fermentación de L- aminoácidos con la atenuación del gen sdhA, sdhB o sdhC que codifica para la subunidad A, B o C de la enzima succinato dehidrogenasa. 10 ¿?£*yyyy r mwydl??£y£!ißs.