MXPA00011664A - Vacunas combinadas contra meningitidis b/c - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una vacuna en combinación para Neisseria meningitidis, que comprende las protéinas de la membrana exterior provenientes del serogrupo B y los oligosacáridos del serogrupo C, y su uso para la prevención o tratamiento de la enfermedad.

Description

VACUNAS COMBINADAS CONTRA MENINGITIDIS B/C CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a las composiciones inmunogénicas combinadas y a las vacunas contra Nei sseri a meningi ti di s B y C y a los métodos para inducir una respuesta inmune al administrar las mismas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las cepas del serogrupo B y C de la Nei sseri a meni ngi ti di s (Nm) conjuntamente representan la mayor parte de las enfermedades invasoras en Europa y los Estados Unidos. Las vacunas contra serogrupos individuales de Nm son actualmente disponibles. La vacuna NmB del NIPH (Instituto Nacional de la Salud Pública de Noruega) es segura, promueve la inmunidad específica en niños y adultos, y es eficaz al prevenir la enfermedad de NmB en adolescentes. Esta vacuna ha sido típicamente combinada con la vacuna del polisacárido de meningococo C y se da con alumbre. El componente simple de la vacuna polisacárida, no obstante, no es Ref: 125091 _^^g£ efectivo en infantes y en niños jóvenes. La vacuna conjugada N C de Chiron (conj.) es también segura, promueve altos títulos de anticuerpo bactericida en suero en infantes vacunados tan jóvenes como de dos y tres meses de edad, e induce la memoria de células B inmunológicas para el polisacárido NmC no conjugado. Ya que ambos serogrupos provocan enfermedad, una vacuna en combinación que induzca una respuesta inmune para ambos serogrupos podría ser altamente ventajosa.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención se refiere a una composición inmunogénica o a una vacuna que comprende oligosacáridos NmC conjugados a una proteica portadora, las proteínas de la membrana exterior de NmB, y un portador. En una modalidad preferida, la proteína portadora es CRM?97, una toxina de difteria no tóxica, las proteínas de la membrana exterior de NmB son presentadas como vesículas proteoliposómicas, y el portador es hidróxido de aluminio o MF59. En otro aspecto más, la presente invención se refiere a un método para inducir una respuesta inmune a NmB y NmC, o la vacunación, que comprende la administración de una cantidad inmunológicamente efectiva de una composición inmunogénica que comprende oligosacáridos NmC conjugados a una proteína portadora, las proteínas de la membrana exterior de NmB, y un portador.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las Figuras 1A y IB resumen los títulos de anticuerpo IgG contra NmB e IgG contra NmC, respectivamente, como se determina mediante ELISA. Las Figuras 2A y 2B resumen los títulos del anticuerpo bactericida en suero para NmB y NmC, respectivamente. La Figura 3 resume la comparación de las proporciones de anticuerpo a NmB y NmC inducida por la vacuna en combinación en el adyuvante MF59 vs . alumbre . La Figura 4 resume la comparación de las proporciones de anticuerpo a NmB y NmC inducida por la vacuna en combinación vs . la vacuna monovalente respectiva .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Se describe una vacuna en combinación para NmB y NmC que induzca una respuesta inmune para ambos serogrupos, que no sea significativamente diferente de la respuesta inmune inducida por cada serogrupo solo. La inmunogenicidad de la vacuna NmB de NIPH (denominada en la presente como vacunas "NmB" o "MenB") y la vacuna conjugada de NmC de Chiron (denominada en la presente como "NmC con . " o "MenC conj."), sola, en combinación, y en combinación con el adyuvante MF59 como se describe en la presente. La práctica de la presente invención empleará, a no ser que se indique de otro modo, métodos convencionales de inmunología y microbiología. Tales técnicas son explicadas completamente en la literatura. Ver, por ejemplo Methods In Enzymol ogy (S. Colowick y N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.) y Handbook of Experimen tal Immunol ogy, Vols. I-IV (D.M. Weir y C.C. Blackwell eds., Blackwell Scientific Publications ) . Como se utiliza en la presente, el término "in unogénico" se refiere al material que induce la producción de anticuerpos de la administración a un vertebrado, incluyendo humanos. Como se utiliza en la presente, el término "portador" se refiere a un componente farmacéutico aceptable diferente del componente inmunogénico de NmB o NmC. El portador puede ser orgánico, inorgánico, o ambos. Los portadores adecuados bien conocidos por aquellos expertos en la técnica incluyen, sin limitación, macromoléculas grandes, lentamente metabolizadas tales como proteínas, polisacáridos, ácidos polilácticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos poliméricos, copolímeros de aminoácidos, agregados lipidíeos (tales como gotitas de aceite o liposomas) y partículas virales inactivas. El portador también puede funcionar como un agente inmunoestimulador, por ejemplo, adyuvante. Los adyuvantes adecuados son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Como se utiliza en la presente, el término "cantidad inmunológicamente efectiva" significa la administración de aquella cantidad, ya sea en una dosis simple o como parte de una serie, que es efectiva para inducir la producción de anticuerpo para el tratamiento o prevención de la enfermedad. Esta cantidad variará dependiendo de una variedad de factores, incluyendo la condición física del sujeto, y puede ser fácilmente determinada por alguien de experiencia en la técnica. Como se utiliza en la presente, el término "vacuna" significa una composición inmunogénica que es capaz de inducir una respuesta inmune microbicida. Preferentemente, las vacunas de la presente invención provocan una respuesta de anticuerpo bactericida. La presente invención está dirigida, en parte, a las composiciones inmunogénicas que inducen una respuesta inmune para Meningitidis B y C. En las modalidades preferidas de la invención, la composición inmunogénica comprende la proteína de la membrana exterior NmB, y el oligosacárido de NmC conjugado a un primer portador. La proteína NmB comprende preferentemente las proteínas de la membrana exterior parcialmente purificadas provenientes de la cepa 44/76 (B15.P1.7, 16:L3,7,9). Las proteínas de la membrana exterior, parcialmente purificadas, están preferentemente presentes como vesículas proteoliposómicas como resultado del proceso de extracción utilizando desoxicolato . La dosis de NmB es expresada en µg . Preferentemente, la composición inmune de NmB/los componentes de la vacuna, se puede obtener del Instituto Nacional de la Salud de Noruega (NIPH) . La vacuna de NmB/alumbre comprende 0.05 mg/ml de proteína NmB, 3.33 mg/ml de Al (OH) 3 (alumbre) y 0.10 mg/ml de tiomersalsódico . El oligosacárido de Chiron representa los fragmentos de polisacáridos de NmC preferentemente de aproximadamente 12 a aproximadamente 22 unidades repetidas. Preferentemente, el oligosacárido de NmC es conjugado a un primer portador. La dosis del conjugado NmC o del polisacárido del mismo se expresa en µg de ácido siálico. Una vacuna de NmC que contiene el polisacárido no conjugado (denominado en la presente como "polisacárido NmC" o "MenC Ps") puede también ser utilizada. MenC Ps es un aislado crudo que comprende polisacáridos preferentemente de aproximadamente 60 a aproximadamente 80 unidades repetidas. En modalidades preferidas de la invención, el primer portador es una proteína, polisacárido, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, aminoácidos poliméricos, copolímero de aminoácido, agregado lipídico, o partícula viral inactiva. Más preferentemente, es primer portador es una proteína. Más preferentemente, el primer portador es CRM197.

Se utilizan preferentemente por dosis 10 µg de oligosacárido a 12.5-33 µg de CRM197 (por ejemplo, para mantener una proporción oligo/proteína de aproximadamente 0.3 a aproximadamente 0.8) . Más preferentemente, se puede utilizar aproximadamente En las modalidades preferidas de la invención, la composición inmunogénica comprende un segundo portador, preferentemente, hidróxido de aluminio (alumbre) o MF59. El alumbre puede ser obtenido a partir de Superfos, Bedbaek, Dinamarca, y es una solución al 3%. Cuando está presente, se utiliza por dosis aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1.67 mg de alumbre. MF59 es una emulsión microfluidizada de escualeno en agua que' ha mostrado ser segura y que aumenta las respuestas de anticuerpo en suero a una variedad de vacunas de investigación. MF59 comprende aproximadamente 5% de escualeno, 0.5% de Tween 80 y aproximadamente 0.5% de Span 85. El adyuvante MF59 se describe en la publicación del PCT No. WO 90/14837, incorporada por referencia en la presente en su totalidad. MF59 puede ser elaborado de acuerdo a los procedimientos descritos por ejemplo en Ott y colaboradores, Va ccine desi gn : The Subuni t And Adj uvan t Approach , 1995, M.F. Powell and M.J. Newman, Eds., Plemam Press, New York, p. 277-296; Singh y colaboradores, Va ccine, 1998, 16, 1822-1827; Ott y colaboradores, Va cci ne 1995, 13, 1557-1562; y Valensi y colaboradores, J. Immunol , 1994, 153, 4029-39, las descripciones de las cuales se incorporan por referencia en la presente en su totalidad. La composición inmunogénica de la invención empleará una cantidad inmunológicamente efectiva de los antígenos. Es decir, se incluirá una cantidad de antígeno, la cual en combinación con el adyuvante, provocará que el sujeto produzca una respuesta inmunológica específica y suficiente, preferentemente una respuesta de linfocito T o B, para impartir protección al sujeto a partir de la exposición subsiguiente a Nei sseri a . No se puede asignar una designación de dosis simple que proporcione una guía específica para todos y cada uno de los antígenos que pueden ser empleados en esta invención. La cantidad efectiva del antígeno será una función de su actividad inherente y de la pureza, y es empíricamente determinada por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica por medio de experimentación rutinaria.

Las composiciones inmunogénicas de acuerdo a la presente invención comprenden una cantidad inmunoestimuladora de antígeno de Nei sseri a . Una cantidad inmunoestimuladora es aquella cantidad que es suficiente para inducir una respuesta inmune humoral o celular mensurable. Por ejemplo, las composiciones inmunogénicas de la presente invención comprenden aproximadamente 1 nanogramo a aproximadamente 1000 microgramos de antígeno o aproximadamente 10 nanogramos a aproximadamente 800 microgramos de antígeno. En algunas modalidades preferidas, las composiciones inmunogénicas contienen aproximadamente 0.1 a aproximadamente 500 microgramos de antígeno. En algunas modalidades preferidas, las composiciones inmunogénicas contienen aproximadamente 1 a aproximadamente 350 microgramos de antígeno. En algunas modalidades preferidas, las composiciones inmunogénicas contienen de aproximadamente 25 a aproximadamente 250 microgramos de antígeno. En algunas modalidades preferidas, las composiciones inmunogénicas contienen aproximadamente 100 mocrogramos de antígeno. Un experto en la técnica puede fácilmente formular una composición inmunogénica que comprenda cualquier cantidad deseada de antígeno, que puede ser empíricamente determinada por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica por medio de experimentación rutinaria. Las composiciones inmunogénicas pueden ser convenientemente administradas en forma de dosis unitaria y pueden ser preparadas mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., Easton, PA, 1980), la descripción de la cual se incorpora por referencia en la presente en su totalidad. La presente invención está también dirigida a vacunas que comprenden cualquiera de las composiciones inmunogénicas descritas anteriormente. La presente invención está también dirigida a los métodos para inducir una respuesta inmunológica a NmB y NmC que comprende el administrar una cantidad inmunológicamente efectiva de una composición inmunogénica descrita anteriormente, a un humano. La administración puede ser mediante cualquier modo conocido por aquellos expertos en la técnica, incluyendo mediante las rutas oral, parenteral, pulmonar, transdérmica, rectal, intraperitoneal , intramuscular, o subcutánea.

La invención es además ilustrada a manera de los siguientes ejemplos, los cuales se pretende que eluciden la invención. Se entiende que los siguientes ejemplos ilustran la invención y no han de ser considerados como limitantes de la invención de ningún modo. Aquellos expertos en la técnica reconocerán las modificaciones que están dentro del espíritu y alcance de la invención. Todas las referencias citadas en la presente son incorporadas en la misma por referencia, en su totalidad.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Resultados de ELISA Se asignaron grupos de cobayos (n = 15 animales) para recibir una de las siguientes vacunas descritas en la Tabla 1: Tabla 1 Grupo Component e s Cant i dad po r do s i s Grupo 1 NmC conj . /alumbre 10 µg/1 mg Grupo 2 NmB/alumbre 25 µg/ 1 mg Grupo 3 Polisacárido de 10 µg/25 µg/1 mg NmC/NmB/ alumbre Grupo 4 NmC conj ./NmB/alumbre 10 µg/25 µg/1 mg Grupo 5 NmC conj ./NmB/MF59 10 µg/25 µg/0.5 ml. Grupo 6 (n = 5) comprendió animales control que recibieron alumbre solo. Ochenta cobayos fueron distribuidos aleatoriamente en los grupos descritos anteriormente y recibieron una de seis combinaciones de vacuna. Para los datos presentados en la Tabla 2, cada animal recibió dos inyecciones, IM, separadas por 28 días. Las muestras de suero fueron obtenidas antes de cada inyección, y 18 días después de la segunda inyección. Para los datos presentados en las Figuras 1A y IB, cada animal recibió dos inmunizaciones separadas por seis semanas. Cada dosis consistió de dos inyecciones intramusculares de 0.25 ml . Se obtuvieron muestras de suero inmediatamente antes de cada inyección, y 14 ó 18 días después de la segunda inyección. Las muestras de suero fueron evaluadas para las concentraciones de anticuerpo anticapsular IgG para NmC (Tabla 2 y Figura 1A) y para las concentraciones de anticuerpo IgG anti-vesícula membranal exterior para NmB, mediante ELISA (Figura IB) . Los datos de ELISA fueron generados en un ensayo representativo de sueros de animales individuales (Tabla 2) y también expresados como promedios a partir de una pluralidad de ensayos (Figuras 1A y IB). Los datos resumidos de ELISA descritos en la Tabla 2 son, por lo tanto, expresados como las medias geométricas. Para ELISA, el conjugado MCPS-ADH (polisacárido de NmC-dihidrazida del ácido adípico) 0 los componentes de la vesícula de la membrana exterior (OMV) se recubrieron sobre placas de microtitulación de poliestireno toda la noche a 4°C, 1 µg/ml, 100 µl/pozo. Sobre cada placa recubierta, 100 µg/pozo de cada estándar de referencia (por ejemplo, el suero combinado de los cobayos), un control positivo, un control negativo, y muestras de suero fuero diluidas en serie a la mitad en un amortiguador que contenía tiocianato de amonio 75 µM, y se incubaron por dos horas a temperatura ambiente. El anticuerpo IgG de conejo anti-cobayo conjugado a peroxidasa fue agregado a los pozos (100 µl/pozo) . Después de 2 horas, el substrato colorimétrico 3, 3' , 5, 5' -tetrametilbencidina (TMB) (100 µl/pozo) fue agregado, y el color fue desarrollado por 15 minutos. Los niveles de anticuerpo para MCPS y para OMV presentes en los controles y las muestras, fueron obtenidos a partir de una forma estándar utilizando el estándar de referencia que tiene un valor asignado de 100 unidades de ELISA/ml. Los resultados se muestran en la Tabla 2 y Figuras 1A y IB. Los resultados se resumen en la Tabla 2 y Figuras 1A y IB y revelan que la vacuna en combinación fue inmunogénica, como se midió mediante los títulos de anticuerpo IgG contra NmC y NmC, respectivamente. La Figura 1A muestra que la respuesta específica del anticuerpo anti- eningococo B fue inducida por las combinaciones de vacuna que comprenden NmB. La Figura IB muestra que una respuesta específica del anticuerpo anti-meningococo C fue inducida por las combinaciones de vacuna que comprenden NmC. En particular, la respuesta del anticuerpo inducida por la combinación del conjugado NmC y el NmB en presencia del adyuvante MF59 (Grupo 5) fue significativamente mayor que la respuesta del anticuerpo inducida ya sea por el conjugado NmC solo (Grupo 1) o la combinación del conjugado NmC, y NmB en presencia de alumbre (Grupo 4). Cuando el adyuvante MF59 estuvo presente, el título de anticuerpo para la vacuna en combinación se incrementó aproximadamente seis veces.

Tabla 2: Respuestas del Anticuerpo IgG contra MenC (GMT) Ejemplo 2: Títulos Bactericidas Las muestras de suero fueron probadas para los títulos bactericidas mediados por el complemento para MenC cepa 60E y MemB cepa 44/76. Los títulos bactericidas fueron evaluados sobre sueros combinados provenientes de cada grupo. Los datos bactericidas fueron generados utilizando el complemento humano. Los componentes del ensayo (por ejemplo, amortiguador, anticuerpo, complemento, y bacteria) fueron agregados a placas de cultivo de tejido de 96 pozos, estériles con tapas (Nunc # 167008) . Las placas fueron mantenidas a temperatura ambiente durante el ensayo. A cada pozo, se agregaron secuencialmente 50 µl de amortiguador Gey (Gibco) que contenía 1% de BSA Grado RÍA (Sigma), 25 µl del anticuerpo de prueba diluido, 25 µl de bacterias diluidas a 1:8000 en amortiguador de Gey/1% de BSA. Los pozos control incluyen 1) amortiguador Gey/1% de BSA y bacterias solas (para determinar si los organismos son viables en el diluyente solo); 2) un control de tiempo 0 que contiene 75 µg de amortiguador, 25 µl de complemento humano inactivado por calor (56°C, 30 minutos), y 25 µl de bacterias; y 3) un control de toxicidad que prueba el complemento a 20% y 40% con amortiguador y bacterias, para verificar que la fuente de complemento es no tóxica para la cepa de prueba. Todas las muestras de anticuerpo (a la más alta concentración ensayada) fueron también probados con el complemento inactivado por calor para mostrar que una disminución en las unidades formadoras de colonias (cfu) en presencia del anticuerpo, es dependiente del complemento. Después de que fueron agregados todos los reactivos, se tomaron 22 µl de cada pozo control y se sembraron en placas sobre placas de agar Mueller-Hinton al permitir que la muestra corriera de la parte superior hacia el fondo de la placa, para determinar las cfu en el pozo a 0 minutos. Las placas de microtitulación fueron luego cubiertas y selladas con papel parafilm, y se hicieron girar suavemente por 1 hora a 37°C en una incubadora de 4% de C02. Las placas fueron luego retiradas, y una muestra de 22 µl de cada pozo se sembró sobre agar Mueller-Hinton. Las placas de cultivo fueron incubadas por aproximadamente 18 horas a 37°C con 4% de C02. Las colonias fueron contadas, y el % de supervivencia se determinó para cada pozo de prueba: % de supervivencia = ([cfu del pozo de muestra a 60 minutos]/[cfu en el pozo control con complemento inactivado por calor al tiempo 0 minutos]) x 100. Los títulos bactericidas reportados son aquellos que dieron como resultado 50% de supervivencia. Los resultados provenientes de un experimento simple se presentan en la Tabla 3. Los resultados son también presentados en las Figuras 2A y 2B, con la Figura 2B que representa los títulos promedio a partir de una pluralidad de experimentos. Como lo revelan los resultados resumidos en la Tabla 3, la vacuna en combinación promovió altos títulos de anticuerpo bactericida en suero para NmB y Nmc. El título de anticuerpo bactericida contra NmC fue ligeramente más alto para la vacuna en combinación utilizando MF59 como el portador, pero no existió esencialmente ningún efecto sobre el título bactericida de NmB utilizando MF59. De manera interesante, se obtuvieron títulos bactericidas dos a cinco veces más altos para NmB con la vacuna en combinación que con la vacuna para NmB sola. La figura 2A demuestra que los anticuerpos dirigidos al meningococo B por las combinaciones de vacuna que comprenden NmB fueron bactericidas. La figura 2B demuestra que los anticuerpos dirigidos para el meningococo C inducidos por las combinaciones de vacuna que comprenden el conjugado NmC fueron también bactericidas .

Tabla 3 Tabla 3 (continuación) Ejemplo 3: Comparación de los adyuvantes alumbre y MF59 Los sueros provenientes de los animales descritos anteriormente en las Figuras 1A y IB fueron comparados y las respuestas de anticuerpo MenC y MenB generadas por NmB/NmC conj . ya sea en adyuvante alumbre o MF59 fueron detectadas como se describe anteriormente en los Ejemplos 1 y 2. Los resultados, mostrados en la Figura 3, demuestran que la respuesta del anticuerpo al meningococo C fue aproximadamente 6 veces mayor que las vacunas que comprenden el adyuvante MF59.

Ejemplo 4: Comparación de las Respuestas de Anticuerpo Generadas por la Vacuna en Combinación para Vacunas Monovalentes Los sueros provenientes de los animales descritos anteriormente en las Figuras 1A y IB fueron comparados y las respuestas del anticuerpo MenC y MenB generadas por NmB/NmC conj . fueron comparadas con las respuestas de anticuerpo generadas ya sea por la vacuna NmB sola o el NmC conj . solo en alumbre, como se describe anteriormente en los Ejemplos 1 y 2. Los resultados, mostrados en la Figura 4, demuestran que no existió diferencia significativa en las respuestas de anticuerpo a los componentes de la vacuna Nmb/NmC conj . en comparación a las respuestas inducidas por las vacunas monovalentes respectivas (ya sea NmB o NmC conj . ) .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la. solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención .

Claims (16)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Una composición inmunogénica, caracterizada porque comprende el oligosacárido NmC conjugado a un primer portador y la proteína de la membrana exterior de NmB.

2. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el primer portador se selecciona del grupo que consiste de proteína, polisacárido, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, aminoácidos poliméricos, copolímero de aminoácido, agregado lipídico, y partículas virales inactivadas.

3. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el primer portador es una proteína.

4. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque el primer portador es CRM197.

5. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la proteína de la membrana exterior de NmB se presenta como vesículas proteoliposómicas .

6. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la composición comprende un segundo portador.

7. La composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque el segundo portador es hidróxido de aluminio o MF59.

8. Un método para inducir una respuesta inmunológica para Nmb y NmC, caracterizado el método porque comprende el administrar una cantidad inmunológicamente efectiva de una composición inmunogénica de conformidad con la reivindicación 1.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el primer portador se selecciona del grupo que consiste de proteína, poliscárido, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, aminoácidos poliméricos, copolímero de aminoácido, agregado lipídico, y partículas virales inactivadas.

10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el primer portador es una proteína.

11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el primer portador es CRM197.

12. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la proteína de la membrana exterior de NmB se presenta como vesículas proteoliposómicas.

13. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la composición comprende un segundo portador.

14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el segundo portador es hidróxido de aluminio o MF59.

15. Una vacuna, caracterizada porque comprende una composición inmunogénica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

16. Un método para vacunar a un individuo, caracterizado porque comprende el administrar a dicho individuo una composición inmunogénica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-7.