MXPA00009804A - Procedimiento para la marcacion de liquidos con por lo menos dos sustancias marcadoras y procedimiento para su deteccion - Google Patents

Abstract

El presente invento se refiere a un procedimiento para la marcación de líquidos con por lo menos dos sustancias marcadoras, procedimiento que estácaracterizado porque las sustancias marcadoras absorben en la zona espectral de 600 hasta 1200 nm, emitiendo, por consiguiente, radiación fluorescente, y la zona de absorción de por lo menos una sustancia marcadora se solapa con la zona de absorción de por lo menos otra sustancia marcadora. Además, se refiere al invento a un procedimiento para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invención, procedimiento que estácaracterizado porque se usa una fuente de radiación, que emite radiación en las zonas de absorción de las sustancias marcadoras, y se comprueba la radiación fluorescente emitida por las sustancias marcadoras, siendo preciso que por lo menos una de las fuentes de radiación emita radiación en la zona de absorción solapante de por lo menos una sustancia marcadora con la de menos otra sustancia marcadora, y el número de las fuentes de radiación es menor o igual que el número de las sustancias marcadoras. Además, se refiere el presente invento a líquidos que han sido marcados según el procedimiento de la invenci

Description

PROCEDIMIENTO PARA LA MARCACIÓN DE LÍQUIDOS CON POR LO MENOS DOS SUSTANCIAS MARCADORAS Y PROCEDIMIENTO PARA SU DETECCIÓN Descripción El presente invento se refiere a un procedimiento para la marcación de líquidos con por lo mentos dos sustancias marcadoras, procedimiento que está caracterizado porque las sustancias marcadoras absorben en la zona espectral de 600 hasta 1200 nm, emitiendo, por consiguiente, radiación fluorescente, Y la zona de absorción de por lo menos una sustancia marcadora se solapa con la zona de absorción de por lo menos otra sustancia marcadora.

Además, se refiere el invento a un procedimiento para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invenición, procedimiento que está caracterizado porque se usa una fuente de radiación, que emite radiación en las zonas de absorción de las sustancias marcadoras, y se comprueba la radiación fluorescente emitida por las sustancias marcadoras, siendo preciso que por lo menos una de las fuentes de radiación emita radiación en la zona de absorción solapante de por lo menos una sustancia marcadora con lá de por lo menos otra sustancia marcadora, y el número de las fuentes de radiación es menor o igual que el número de las sustancias marcadoras.

El presente invento se refiere, además, a líqudios a marcar según el procedimiento del presente invento.

Frecuentemente, es necesario marcar líquidos, para después, por ejemplo en su aplicación, poder detectar los líquidos así marcados nuevamente mediante métodos apropiados. Por ejemplo, se puede distinguir de este modo el aceite combustible, que suele tener una menor imposición fiscal, del aceite Diesel que suele ser sujeto a una mayor imposición fiscal, o se pueden marcar, y por tanto controlar, corrientes de productos líquidos en plantas industriales, por ejemplo en refinerías de petróleo.

Si la marcación debe ser invisible para el ojo humano, entonces, hay que usar sustancias marcadoras que absorben y/o emiten radiación, fuera de la zona visible del espectro. Debido a la alta sensitividad de la comprobación y con ello la posibilidad de alcanzar una marcación fiable con reducidas adiciones de sustancia marcadora, son apropiadas aquí, sobre todo, las sustancias marcadoras que emiten nuevamente la radiación emitida como radiación flurescente. Por regla general, esta radiación emitida posee aquí una frecuencia más baja que la radiación absorbida (radiación de STOKES) , menos frecuentemente la misma frecuencia (fluoresencia de resonancia) o aún una frecuencia más alta (radiación ANTI-STOKES) .

De gran importancia económica y económica-nacional es la marcación de hidrocarburos y mezclas de hidrocarburo {p.ej. diferentes calidades de carburantes Diesel y carburante Otto, así como otros aceites minerales) . Ya que estos líquidos mismos suelen presentar una alta absorción y/o fluorescencia en la zona espectral por encima de aprox. 600 nm, es razonable usar sustancias marcadoras que absorben y/o fluorescen por encima de aprox. 600 nm.

Por tanto, en caso ideal, los compuestos que se desean usar como sustancias marcadoras tendrán las siguientes características básicas: En la zona espectral de 600 hasta 1200 nm presentan una fuerte absorción , por el contrario, en la zona visible del espectro no poseen ninguna o tan sólo una reducida absorción o bien fluorescencia. en la zona espectral de aprox. 600 hasta aprox. 1200 nm presentan una fuerte emisión de radiación fluorescente. la radiación fluorescente emitida puede detectarse fiablemente también con concentraciones (ponderales) de las sustancias marcadoras en el líquido correspondiente de menos de 1 ppm, y son suficientemente solubles en el líquido a marcar.

Dependiendo del uso especial al que están destinados, otros puntos pueden ser importantes para los compuestos a usar como sustancias marcadoras: Son miscibles con otras sustancias marcadoras y eventualmente aditivos presentes (esto vale también para la miscibilidad de los líquidos marcados y con eventuales adiciones entre si) , son estables bajo la acción de influencias externas, tales como temperatura, luz, humedad, etc., tanto como tales, como también disueltos en el líquido a marcar , no son perjudiciales para su entorno, como p.ej. motores de combustión, tanques de depósito, etc. , en los que se usan, y son toxicológica y ecológicamente inofensivos.

En la patente WO 94/02570 se usan para la marcación de líquidos sustancias marcadoras de la clase de las ftalocianinas exentas de o conteniendo metales, de las naftalocianinas exentas de o conteniendo metales, de los complejos de níquel -ditio-leño, de los compuestos de aminio de aminas aromáticas, de los colorantes de metino o los colorantes de azuleno-ácido cuadrático, que presentan su máximo de absorción en la zona de 600 hasta 1 200 nm y/o un máximo de fluorescencia en la zona de 620 hasta 1 200 nm. Además, se describe un procedimiento que consiste, substancialmente, en que se detecta la radiación fluorescente de la sustancia marcadora presente en el líquido, y que absorbe radiación en la zona espectral indicada. También se describe un detector utilizado para la comprobación de la sustancia marcadora. Sin embargo, no se menciona explícitamente el uso de varias sustancias marcadoras simultáneamente.

La patente US 5,525,516 también describe un procedimiento para la marcación de aceites minerales con compuestos, que presentan fluorescencias en el espectro NIR. Como tales sustancias marcadoras son apropiadas las ftalocianinas sustituidas, naf -talocianinas sustituidas, así como los derivados de ácido cuadrático o de ácido crocónico. En la descripción de esta patente estadounidense (columna 3, líneas 35 hasta 40) se manifiesta, que la invención permite marcar uno o más aceites minerales no solamente con uno, sino también con dos o más compuestos, que fluorescen en la zona infrarroja. Además, se menciona en esta patente, que dos o más compuestos se seleccionan de tal manera, que sus longitudes de onda de la absorción de radiación IR y/o emisión de radiación fluorescente sean suficientemente distanciados entre si y que no se influencien mutuamente en la detección individual. Como distancia suficiente entre las longitudes de onda correspondientes (columna 4, líneas 25 y 28) se señalan aquí, considerando los aparatos de detección según el estado de la técnica (de aquél entonces) , aprox, 20 nm. En esta patente se excluye explícitamente el uso de sustancias marcadoras con zonas de absorción solapantes. Además, se indica (columna 3, líneas 41 y 44), que estelos) compuesto (s) fluorescente (s) deben absorber, preferentemente, por debajo de 850 nm, ya que los aceites minerales presentan absorción por encima de esta longitud de onda Adicionalmente, se reivindica en esta patente un procedimiento para la identificación de los aceites minerales, que están marcados con una o varias sustancias marcadoras. Aquí se indica una zona de excitación (zona de absorción) para el aceite marcado, o bien para las sustancias marcadoras contenidas en el mismo, de 670 hasta 850 nm. Pero además de esto no hay indicaciones más detalladas acerca de cómo proceder en caso de la marcación de aceites minerales con más de una sustancia marcadora.

En la patente US 5,710,046 se describe un procedimiento para la marcación de gasolina, que también tiene por fin la detección de un colorante fluorescente substancialmente exento de metales. Aquí se excita una muestra de gasolina marcada en forma correspondiente con radiación de una banda de longitud de onda de 600 hasta 2500 nm, que detecta la luz fluorescente emitida por el colorante en la banda de longitud de onda de aprox. 600 hasta 2500 nm y se vale de la señal de detección resultante para la identificación de la muestra marcada. Además, se describe en esta patente la composición del detector para la detección de los colorantes fluorescentes en las muestras de gasolina marcadas. Sin embargo, no se hace referencia alguna al uso de varias sustancias marcadoras (colorantes) .

Si se desean marcar líquidos, como p.ej. hidrocarburos y mezclas de hidrocarburo (por ejemplo, carburantes Diesel y carburantes Otto) , de diferente origen y diferentes fabricantes, se necesitan, cuando se usa tan sólo una sustancia marcadora, un sinnúmero de sustancias marcadoras diferentes. Siendo preciso, que estos se distingan suficientemente entre si con respecto a su comportamiento de absorción y/o fluorescencia, para permitir una identificación de los líquidos con respecto a su proveniencia y/o su fabricante. Además, marcando líqudiso con únicamente una sustancia marcadora es más fácil para terceros "falsificar" líquidos sin marcar adicionándoles la sustancia marcadora correspondiente. Esto es sumamente importante cuando líqudiso química y calicativamente equivalentes están sujetos a diferente imposición fiscal. Aquí sean mencionados como ejemplos el aceite combustible y los carburantes Diesel.

Por tanto, el presente invento tiene por objeto marcar líqui dos con más de dos sustancias marcadoras, a saber caracterizarlos con un "índice digital" tal, que sea más difícil copiarlos .

Este objeto se alcanza con un procedimiento para la marcación de líquidos con por lo menos dos sustancias marcadoras, que está caracterizado porque las sustancias marcadoras absorben en la zona espectral de 600 hasta 1200 nm y, por tanto, emiten radiación fluorescente, la zona de absorción de por lo menos una sustancia marcadora se solapa con la zona de absorción de por lo menos otra sustancia marcadora.

Pref rentemente, se usan en el procedimiento de la invención sustancias marcadoras, cuya longitud de onda correspondiente del máximo de absorción se encuentra en la zona espectral de 600 hasta 1200 nm.

El uso de dos o más sustancias marcadoras, en las cuales la zona de absorción de por lo menos una sustancia marcadora se solapa con la zona de absorción de por lo menos otra sustancia marcadora, permite, por una parte, emplear un mayor número de sustancias marcadoras en la zona de longitud de onda mencionada. Pero lo que es más importante, los compuestos ("falsos") utilizados por terceros para fines de falsificación no sólo deben tener máximos de absorción similares que las sustancias marcadoras originales, sino que estos compuestos falsos deben comportarse también en la zona de absorción en forma similar que los primeros.

Por ejemplo, suponiendo que cada sustancia marcadora "falsa" tenga solamente un máximo de absorción limitado a un estrecho margen dé longitud de onda, que corresponda al máximo de absorción de una sustancia marcadroa original. Suponiendo, además, que las sustancias marcadoras originales tengan zonas de absorción en partes solapantes, es decir, la marcación se haya realizado en el sentido del presente invento. Usando, ahora, fuentes de radiación que sólo emiten radiación en las zonas de los máximos de absorción, entonces hay que contar en los dos casos con espestros de fluoresencia similares. Pero si se usan fuentes de radiación, que emiten a longitudes de onda a las que las sustancia marcadoras "falsas" no presentan ninguna absorción, pero las sustancias marcadoras originales presentan zonas de absorción solapantes, en-tonces se puede contar en el último caso, con una radiación fluorescente emitida por estas sustancias marcadoras.

Tomando otro ejemplo: suponiendo que el máximo de absorción de una sustancia marcadora original Ml se encuentre en la zona de absorción solapante a partir de Ml y aquella de la otra sustancia marcadora original M2. Cuando se excita, ahora, las sustancias marcadoras Ml y M2 cada vez en su máximo de absorción, entonces resulta la señal de fluorescencia de Ml únicamente de su excitación, pero la señal de fluorescencia de la sustancia marcadora M2 se compone de la parte resultante de su excitación individual (en el máximo de absorción de M2) y de otra parte, que proviene de la excitación da. la otra sustancia marcadora Ml (en el máximo de absorción de ésta y simultáneamente en la zona de absorción solapante de las sustancias marcadoras Ml y M2) . En comparación, las correspondientes sustancias marcadoras "falsas", que no presentan ninguans zonas de absorción así solapantes, presentan al ser excitadas en sus máximos de absorción, únicamente sus correspondientes señales de fluorescencia, individuales. Esto se describirá más abajo en más detalle.

En el procedimiento de la invención para la marcación de líquidos se usa, preferentemente, una combinación de n sustancias marcadoras, representando n un número entero de 2 hasta 10, a saber, valores de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10.

Muy preferentemente, se usa en el procedimiento de la invención para la marcación de líquidos una combinación de n sustancias marcadoras, representando n un número entero de 2 hasta 6, a saber, valores de 2, 3, 4, 5 ó 6.

Aún más preferentemente, se usa en el procedimiento de la invención para la marcación de líquidos una combinación de n sustancias marcadoras, representando n un número entero de 2 hasta 4, a saber, valores de 2, 3 ó 4.

Como sustancias marcadoras se usan en el procedimiento de la invención, así como en sus modalidades preferidas, en las que se emplea una combinación de n igual a 2 hasta 10, n igual a 2 hasta 6 o n igual a 2 hasta 4 sustancias marcadoras, preferentemente, compuestos seleccionados del grupo que comprende las ftalocianinas exentas y conteniendo metales, naftalocianinas exentas o conteniendo metales, complejos de níquel-ditioleno, compuestos de aminio de aminas aromáticas, colorantes de me-tino, colotantes de ácido cuadrático y colorantes de ácido crocónico.

Ftalocianinas apropiadas obedecen p.ej. a la fórmula la en la que Me1 significa dos veces hidrógeno, dos veces litio, magnesium, cinc, cobre, níquel, VO, TiO, A1C1, A10-C?-C2o-alquilo, A1NH-C?-C20-alquilo, AlNÍCx-Carj-alquilo) 2, A10-C6-C2o-arilo, Al-NH- -C6-C20-arilo o A1N (-C6-C2o_arilo) , AIN-Het, representando n-Het un anillo heterocíclico saturado o sin saturar de cinco, seis o siete miembros, que además de un átomo de nitrógeno puede contener aún uno o dos átomos de nitrógeno adicionales y/o un átomo de oxígeno o de azufre adicional en el anillo, que eventualmente está mono hasta trisustituido por C?-C4-al-quilo, fenilo, bencilo o feniletilo, y que está ligado por vía de un (o bien dos) átomos de nitrógeno anulares con el átomo de aluminio, o Si(0H)2, como mínimo, 4 de los radicales R1 hasta R16, cada uno independientemente del otro, significa un radical de la fórmula W-X1, donde W significa un enlace químico, oxígeno, azufre imino, C?-C -alquilimino o feniloimino y X1 significa C?-C2o-alquilo o C3-C?o-cicloalquilo, que eventualmente está interrumpido por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter y puede estar sustituido por fenilo, anillos heterocíclicos, saturados de cinco, seis o siete miembros, que pueden contener aún uno o dos átomos de nitrógeno adicionales y/o un átomo de oxígeno o de azufre adicional en el anillo, que eventualmente están mono a trisustituidos por C?-C -alquilo, fenilo, bencilo o feniletilo y que están ligados por vía de un (o bien el) átomo de nitrógeno anular con el anillo benceno, y los otros radicales R1 hasta R16 significan, eventualmente, hidrógeno, halógeno, hidroxisulfonilo o C?-C4-dialquilsulfa-moilo.

Ftalocianinas apropiadas obedecen, además, p.ej. a la fórmula Ib en la que R17 y R18 o R18 y R19 o R19 y R20 forman juntos un radical de la fórmula X2— C2H4— X3 , donde uno de los radicales X2 y X3 signi fica oxígeno y el otro imino o C?-C4-alquilimino , y R19 y R20 o R17 y R20 o R17 y R18 significan, cada uno independientemente del otro, hidrógeno o halógeno y Me1 tiene el significado arriba indicado.

Otras ftalocianinas apropiadas, siempre que no se hayan mencionado ya entre las ftalocianinas arriba indicadas, se describen en la que patente US 5,526,516 bajo la fórmula general I y como ejemplos en la tabla 3, así como en la que patente US 5,703,229 bajo la fórmula general II y como ejemplos en la tabla 3.

Naftalocianinas apropiadas obedecen p.ej. a la fórmula II en la que Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7 e Y8 significan, cada uno independientemente del otro, hidrógeno, hidroxi, C?-C2o~alquilo, C3-C?o-cicloalquilo o C?-C2o-alcoxi , pudiendo los grupos alquilo estar en cada caso interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter y estar, eventualmente, sustituidos por fenilo, anillos heterocíclicos, saturados de cinco, seis o siete miembros, que pueden contener aún uno o dos átomos de nitrógeno adicionales y/o un átomo de oxígeno o de azufre adi-cional en el anillo, que eventualmente están mono a trisustituidos por C?-C4-alquilo, fenilo, bencilo o feniletilo y que están ligados por vía de un (o bien el) átomo de nitrógeno anular con el anillo benceno, Y9, Y10, Y11 e Y12 significan, cada uno independientemente del otro, hidrógeno, C?-C2o_alquilo o C?-C2o_alcoxi, pudiendo los grupos alquilo estar cada vez interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, halógeno, hidroxisulfonilo o C?-C4-dialquilsulfamoilo y Me2 tiene el significado de Me1 o signif ica el radical Y17 Si \ ?l8 donde ?i7 e yiß significan, cada uno independientemente del otro , hi droxi, C?-C2o~alcoxi, C -C2o-alquilo, C2-C2o-alquenilo, C3-C2o-alqueniloxi o un radical de la fórmula ?20 I O-Si-O-Y19 ?21 donde Y19 tiene el signif icado de C?-C2o_alquilo , C2-C2o--alque -nilo o C4-C2o-alcadienilo e Y20 e Y21 signif ican, cada uno in dependientemente del otro, C?-C?2-alquilo, C2-C?2_ l uenilo o tienen el signif icado del radical OY19 arriba indicado .

Son especialmente interesantes las naf alocianinas de la fórmula II, en la que por lo menos uno de los radicales Reste Y1 hasta Y8 no significa hidrógeno.

Otras naf talocianinas apropiadas, siempre que no se hayan mencionada ya entre las naftalocianinas arriba indicadas, se encuentran descritas en la patente US 5,526,516 bajo la fórmula general II y como ejemplos en la tabla 4, así como en la patente US 5,703,229 bajo la fórmula general III y como ejemplos en la tabla 4.

Complejos de níquel-ditioleno apropiados obedecen p.ej. a la fórmula III en la que L1, L2, L3 y L4 significan, cada uno independientemente del otro, C?-C2o~alquilo, que eventualmente está interrumpido por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, fenilo, C?-C2o~alquilfenilo, C?-C2o- lcoxifenilo, pudiendo los grupos alquilo estar cada vez interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, o L1 y L2 y/o L3 y L4 forman cada vez juntos el radical de la fórmula Compuestos de aminio apropiados obedecen p.ej. a la fórmula IV en la que Z1, Z2, Z3 y Z4 significan, cada uno independientemente del otro, C1-C2o_alquilo, que eventualmente está interrumpido por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, C?-C2o-alcanoilo o un radical de la fórmula donde Z5 significa hidrógeno, C?-C2o_alquilo, que eventualmente está interrumpido por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éte, o C?-C2o~alcanoilo, Z7 significa hidrógeno o C1-C2o-al-quilo, que eventualmente está interrumpido por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, y Z8 significa hidrógeno, C?-C2o-alquilo, que eventualmente está interrumpido por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, o halógeno, y &t& representa el equivalente de un anión.

Colorantes de metino apropiados obedecen p.ej. a la fórmula V en la que los anillos A y B están, cada uno independientemente del otro, benzoanelado y susitutido, E1 y ?2 significan, cada uno independientemente del otro, oxígeno, azufre imino o un radical de la fórmula -C(CH3)2- ;H=CH—, D significa un radical de la fórmula donde E3 significa hidrógeno, Ci-Cg-alquilo, cloro o bromo y E4 significa hidrógeno o Ci-Ce-alquilo, Q1 y Q2 significan, cada uno independientemente del otro, fenilo, C5-C7-cicloalquilo, C1-Ci2-alquilo, que puede estar interrumpido por 1 hasta 3 átomos de oxígeno en función de éter y estar eventualmente sustituido por hidroxi, cloro, bromo, Carboxil, C?-C4-alcoxicarbonil, acriloiloxi, metacriloiloxi, hidroxisulfonil, C?-C7-alcanoiloamino, Ci-Cß-alquilcarbamoilo, Ci-Ce-alquilcarbamoiloxi o un radical de la fórmula G©(K)3, donde G signifca für nitrógeno o fósforo y K significa fenilo, C5-C7-cicloalquilo o C?-Ci2-alquilo, A*® significa el equivalente de un anión, y n significa 1, 2 ó 3.

Colorantes de ácido cuadrático apropiados son, p.ej. aquellos compuestos representados en la patente US 5,526,516 bajo la fórmula general III y como ejemplos en la tabla 2, así como en la patente US 5,703,229 bajo la fórmula general IV y como ejemplos en la tabla 2.

Colorantes de ácido cuadrático apropiados también son los colorantes de azuleno-ácido cuadrático, que obedecen, p.ej. a la fórmula VI siguiente en la que J signif ica C?-C?2-alquileno , T1 significan hidrógeno, halógeno, amino, hidroxi, C?-Ci2-al-coxi, fenilo, fenilo sustituido, carboxilo, C?-C?_2-alcoxicarbo-nilo, ciano o un radical de la fórmula -NT7-CO-T6, -CO-NT6T7 u 0-CO-NTeT7, donde T6 y T7 significan, cada uno independientemente del otro, hidrógeno, C?-Ci2-alquilo, C5-C7-cicloalquilo, fenilo, 2, 2, 6, 6-tetrametilpiperidin-4-ilo o ciclohexilamino-carbonilo, y T2, T3, T4 y T5 significan, cada uno independientemente del otro, hidrógeno o C?-C?2-alquilo, que eventualmente está susti tuido por halógeno, amino, Ci-C^-alcoxi, fenilo, fenilo susti' tuido, carboxilo, C?-Ci2~ lco icarbonilo o ciano, siendo preciso, que cuando T5 significa hidrógeno, entonces los sustituyentes J-T1 y t4 dentro pueden tener cada vez una posición opuesta en el anillo de azuleno.

Colorantes de ácido cuadrático apropiados son, p.ej., también aquellos compuestos que obedecen a la fórmula Vía siguiente, 0 en la que Ar significan cada uno independientemente un anillo aromático o heteroaromático de cinco o seis miembros, eventualmente sustituido por C?-C2o-alcoxi, C?-C2o~alquilamino, Ci-C2o-dialquilamino o C?-C2o~alf-liltio, como p.ej. fenilo, naftilo, tiofeno, piridina o tiazol. Los grupos alquilo pueden estar en cada caso interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter y estar, eventualmente sustituidos por fenilo.

Ar significa, preferentemente, fenilo, que en la posición 2, 2,4 ó 2,4,6 está mono, di o bien trisustituido por los radicales mencionados. En caso de polisustitución del anillo fenilo, estos radicales son, preferentemente, idénticos. Son especialmente apropiados, aquellos compuestos en los que ambos Ar son idénticos .

Colorantes de ácido crocónico apropiados son, por ejemplo, aquellos compuestos descritos en la patente US 5,526,516 bajo la fórmula general IV y como ejemplos .en la tabla 5.

Todos los radicales alquilo, alquileno o alquenilo prsentes en las fórmulas arriba indicadas pueden ser tanto lineales como ramidicados.

En la fórmula la, II, ITI, IV o Vía son radicales C?-C o~ l-quilo apropiados, que eventualmente están interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxigeno en función de éter, p.ej.: metilo, etilo, propilo, ixopropilo, butilo, ixobutilo, sec-butilo, tere. -butilo, pentilo, ixopentilo, neopentilo, tere. -pentilo, hexilo, 2-metilpentilo, heptilo, octilo, 2-etilhexilo, ixooc-tilo, nonilo, ixononilo, decilo, ixodecilo, undecilo, dodecilo, tridecilo, 3 , 5 , 5 , 7-tetrametilnonilo, isotridecilo (los nombres isooctilo, isononilo, isodecilo y isotridecilo arriba mencionados son nombres triciales y provienen de los alcoholes obtenidos tras oxisíntesis - véase al respecto: Ullmanns Encyklopadie der technischen Chemie, 4a edición, vol. 7, páginas 215 hasta 217, así como vol. 11, páginas 435 y 436), tetradecilo, pentadecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo, nonadecilo, eicosilo, 2-metoxietilo, 2-etoxietilo, 2-propoxie-tilo, 2-isopropoxietilo, 2-butoxietilo, 2- ó 3-metoxipropilo, 2- ó 3-etoxipropilo, 2- ó 3-propoxipropilo, 2- ó 3-butoxipro-pilo, 2- ó 4-metoxibutilo, 2- oder 4-etoxibutilo, 2- ó 4-pro-poxibutilo, 2- ó 4-butoxibutilo, 3, 6-dioxaheptilo, 3,6-dio-xaoctilo, 4, 8-dioxanonilo, 3 , 7-dioxaoctilo, 3, 7-dioxanonilo, 4, 7-dioxaoctilo, 4 , 7-dioxanonilo, 4 , 8-dioxadecilo, 3,6,8-trio-xadecilo, 3, 6, 9-trioxaundecilo, 3, 6, 9, 12-te.traoxatridecilo ó 3,6,9, 12-tetraoxatetradecilo.

En la fórmula la o II son radicales C3 -Cío -cicloalquilo apropiados, radicales cicloalquilo ramificados o sin ramificar, que eventualmente están interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, p.ej. ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, tetrahidrofuranilo, ciciohexilo, tetrahidropiranilo, cicloheptilo, oxepanilo, 1-metilciclo?ropilo, 1-etilci-clopropilo, 1-propilciclopropilo, 1-butilciclopropilo, 1-pen-tilciclopropilo, 1 -metil-1 -butilciclopropilo, 1, 2 -dimetilci -clopropilo, l-metil-2 -etilciclopropilo, ciclooctilo, ciclono-n±lo o ciclodecilo.

En la fórmula la, Ib o II son radicales C6-C2o-arilo apropiados en. los grupos A10-C6-C2o_aril-, Al-NH-C6-C2o-aril- o A1N(-C6-C2Q-arilo) 2 de Me1 o bien Me2, p.ej.: fenilo eventualmente sustituido por hasta dos radicales C?-C7-alquilo, por hasta_ tres radicales C?-C4-alquilo, hasta cuatro radicales C?-C3-al-quilo o por hasta cinco radicales metilo o etilo, o naftilo eventualmente sustituido por hasta dos radicales Ci-Cs-al-quilo, hasta tres radicalesC?-C -alquilo o por hasta cuatro radicales metilo o etilo, habiéndose mencionado estos szsuti-tuyentes alquilo eventualmente presente ya bajo los radicales c?_c20~alquilo arriba mencionados.

En la fórmula la, Ib o II se derivan los N-Het apropiados en los grupos AIN-Het de Me1 o bien Me2, p.ej., del pirrol, pirrolidina, pirazol, pirazolidin, imidazol, imidazolina, 1H-1, 2, 3-triazol, 1, 2, 3-triazolidina, 1H-1, 2, 4-triazol, 1, 2, 4-triazolidina, piridina, piperidina, piracina, pipera-cina, piridacina, morfolina, lH-azepina, 2H-azepina, azepano, oxazol, oxazolidina, tiazol, tiazolidina, 1,2,3-, 1,2,4- ó 1, 3, 4-oxadiazol, 1,2,3-, 1,2,4- ó 1 , 3 , 4-oxadiazolidina, 1,2,3-, 1,2,4- ó 1,3,4-tiadiazol ó 1,2,3-, 1,2,4- ó 1,3,4-tia-diazolidina, pudiendo los anillos heterocíclicos estar, eventualmente, mono a trisustituidos por C?-C4-alquilo, fenilo, bencilo o feniletilo. Radicales C?-C4-alquilo correspondientes, apropiados ya se han mencionado arriba en relación con los radicales C?-C2o~alquilo.

En la fórmula la o II se derivan los radicales anulares, heterocíclicos, para R1 hasta R16 o bien Y1 hasta Y8 de anillos heterocíclicos saturados con cinco, seis o siete miembros, que pueden contener aún uno o dos átomos de nitrógeno adicionales y/o un átomo de oxígeno o de azufre adicional en el anillo, p.ej. pirrolidina, pirazolidina, imidazolina, 1, 2, 3-triazoli -dina, 1, 2 , 4-triazolidina, piperidina, piperacina, morfolina, azepan, oxazolidina, tiazolidina, 1,2,3-, 1,2,4- ó 1,3,4-oxa-diazolidina, ó 1,2,3-, 1,2,4- ó 1, 3 , 4-tiadiazolidina, pudiendo los anillos heterocíclicos estar, eventualmente, mono a trisustituidos por C?-C4-alquilo, fenilo, bencilo o feniletilo. Radicales C;?_-C4-alqui?o correspondientes, apropiados ya se han mencionado arriba en relación con los radicales C?-C2o_alquilo.

En la fórmula la, II o Vía se deriva C?-C2o~alquilo apropiado, que está susituido por fenilo, p.ej. de bencilo ó 1- ó 2-feni-letilo.

En la fórmula II, III, IV o Vía son radicales C?-C2o_ lcoxi apropiados, que eventualmente están interrumpidos por 1 hasta 4 átomos de oxígeno en función de éter, p.ej.: metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, pentiloxi, hexiloxi, heptiloxi, octiloxi, 2-etilhexiloxi, isooctiloxi, noniloxi, isononiloxi, decíloxi, isodeciloxi, undeciloxi, dodeciloxi, trideciloxi, isotrideciloxi, tetradeciloxi, pentadeciloxi, he-xadeciloxi, heptadeciloxi, octadeciloxi, nonadeciloxi, eicosi-loxi, 2-metoxietoxi, 2-etoxietoxi, 2-propoxietoxi, 2-isopropo-xietoxi, 2-butoxietoxi, 2- ó 3-me oxipropoxi, 2- ó 3-etoxipro-poxi, 2- ó 3-propoxipropoxi, 2- ó 3-butoxipropoxi, 2- ó 4-me-toxibutoxi, 2- ó 4-etoxibutoxi, 2- ó 4-propoxibutoxi, 2- ó 4-butoxibutoxi, 3, 6-dioxaheptiloxi, 3 , 6-dioxaoctiloxi, 4, 8-dioxanoniloxi, 3, 7-dioxaoctiloxi, 3 , 7-dioxanoniloxi, 4, 7-dioxaoctiloxi, 4, 7-dioxanoniloxi, 4, 8-dioxadeciloxi, 3, 6, 8-trioxadeciloxi , 3, 6, 9-trioxaundeciloxi, 3, 6, 9 , 12-tetrao-xatrideciloxi ó 3 , 6 , 9 , 12-tetraoxatetradeciloxi.

En la fórmula II o VTa es C?-C2o- l'oxi apropiado, sustituido por fenilo,, p.ej.: benciloxi ó 1- ó 2-feniletoxi.

En la fórmula la, III o VI fenilo sustituido apropiado es, p.ej.: fenilo sustituido por Ci-Cg-alquilo, C -C6-alcoxi, hidroxi o halógeno. Por regla general, pueden estar presentes 1 hasta 3 sustituyentes. Especialmente, el fenilo estará sustituido por 1 o por 2 sustituyentes Ci-Cd-alquilo o C?-C6-alcoxi En caso de monosustitución. el sustituyente se encuentra, preferentemente, en la posición para. En caso de disustitución, los sustituyentes se encuentran, preferentemente, en las posiciones 2,3, 2,4, 3,4 y 3,5.

Halógeno en la fórmula Ib, II, IV o VI es, p.ej. flúor, cloro o bromo.

Los radicales W en la fórmula la, así como X2 o X3 en la fórmula Ib significan, p.ej. metilimino, etilimino, propili-mino, isopropilimino o butilimino.

Los radicales R1 hasta R16 en la fórmula la, así como Y9 hasta Y12 en la fórmula II son, p.ej. dimetilsulfamoilo, dietilsul-famoilo, dipropilsulfamoilo, dibutilsulfamoilo o N-metil-N-etílsulfamoilo .

C ~C2o~Alquenilo v C4-C2o-alcandienilo en la fórmula II es, p.ej. vínilo, alilo, prop-1-en-l-ilo, metallilo, etallilo, but-3-en-l-ilo, pentenilo, pentadienilo, hexadienilo, 3,7-di-metilocta-1, 6-dien-l-ilo, yec-10-en-l-ilo, 6, 10-dimetilun-deca-5, 9-dien-2-ilo, octadec-9-en-l-ilo, octadeca-9 , 12-dien-1-ilo, 3 , 7 , 11, 15-tetrametilhexadec-l-en-3-il o ei-cos-9-en-l-ilo.

C3-C2o-alqueniloxi en la fórmula II es, p.ej. aliloxi, etali-loxi, but-3-en-l-iloxi, undec-10-en-l-iloxi, octa-dec-9-en-l-iloxi o eicos-9-en-l-iloxi .

Z6 en la fórmula IV significa, p.ej. formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, pentanoilo, hexanoilo, hepta-noilo, octanoilo ó 2-etilhexanoilo.

Cuando los anillos A y/o B en la fórmula V están sustituidos, entonces son apropiados como sustituyentes, p.ej. Ci-Cß-al-quilo, fenilo-Ci-Cs-alcoxi, fenoxi, halógeno, hidroxi, amino, Ci-Cß-mono- o dialquilamino o ciano. Por regla general, los anillos están mono a trisustituidos.

Los radicales E3, E4, Q1 y Q2 en la fórmula V son, p.ej. metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, tere. -pentilo o hexilo.

Los radicales Q1 y Q2 son, además, p.ej. hexilo, 2-metilpen-tilo, heptilo, octilo, 2-etilhexilo, isooctilo, nonilo, isono-nilo, decilo, isodecilo, undecilo, dodecilo, ciclopentilo, ciciohexilo, 2-metoxietilo, 2-etoxietilo, 2- ó 3-metoxipropilo, 2- ó 3-etoxipropilo, 2-hidroxietilo, 2- ó 3-hidroxipropilo, 2-cloroetilo, 2-bromoetilo, 2- ó 3-cloropro?ilo, 2- ó 3-bromo-propilo, 2-carboxietilo, 2- ó 3-carboxipropilo, 2-metoxicarbo-niletilo, 2-etoxicarboniletilo, 2- ó 3-metoxicarbonilpropilo, 2- ó 3-etoxicarbonilpropilo, 2-acriloiloxietilo, 2- ó 3-acri-loiloxipropilo, 2-metacriloiloxietilo, 2- ó 3-metacriloiloxi -propilo, 2-hidroxisulfoniletílo, 2- ó 3-hidroxisulfonilpro-pilo, 2-acetilaminoetilo, 2- ó 3-acetilaminopropilo, 2-metil- . carbamoiletilo, 2-etilcarbamoiletilo, 2- ó 3-metilcarbamoil-propilo, 2- ó 3-etilcarbamoilpropilo, 2-metilcarbamoiloxie-tilo, 2-etilcarbamoiloxietilo, 2- ó 3-metilcarbamoiloxi- pro -pilo, 2- ó 3-etilcarbamoiloxipropilo, 2- (trimetilamonio) etilo, 2- (trietilamonio) etilo, 2- ó 3- (trimetilamonio) propilo, 2- ó 3- (trietilamonio)propilo, 2- (trifenilfosfonio) etilo ó 2- ó 3- (trifenilfosfonio) propilo.

AnT en la fórmula IV o V se deriva, p.ej. de aniones de ácidos orgánicos o inorgánicos. Son especialmente preferidos, p.ej. el metanosulfonato, 4-metilbencenosulfonato, acetato, trifluoroacetato, heptafluorobutirato, cloruro, bromuro, yoduro, perclorato, tetrafluoroborato, nitrato, hexafluorofosfato o tetrafenilborato.

Los radicales J en la fórmula VI son, p.ej. metileno, etileno, 1,2- ó 1, 3-propileno, 1,2-, 1,3-, 2,3- ó 1, 4-butileno, pentametileno, hexametileno, hepta etileno, octametileno, nonameti-leno, decametileno, undecametileno o dodecametileno.

Los radicales T2, T3, T4 y T5 en la fórmula VI son, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, tere. -butilo, pentilo, isopentilo, neopen-tilo, tere. -pentilo, 2-metilbutilo, hexilo, 2-metilpentilo, heptilo, octilo, 2-etilhexilo, isooctilo, nonilo, isononilo, decilo, undecilo, dodecilo, Fluormetilo, clorometilo, difluor-metilo, trifluormetilo, triclorometilo, 2-Fluoretilo, 2-clo-roetilo, 2-bromoetilo, 1, 1, 1-trifluoretilo, heptafluorpropilo, 4-clorobutilo, 5-Fluorpentilo, 6-clorohexilo, cianometilo, 2-cianoetilo, 3-cianopropilo, 2-cianobutilo, 4-cianobutilo, 5-cianopentilo, 6-cianohexilo, 2-aminoetilo, 2 -aminopropilo, 3-aminopropilo, 2-aminobutilo, 4-amínobutilo, 5-aminopentilo, 6-aminohexilo, 2-hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxipro-pilo, 2-hidroxibutilo, 4-hidroxibutilo, 5-hidroxipentilo, 6-hidroxihexilo, 2-metoxietilo, 2-etoxietilo, 2-propoxietilo, 2-isopropoxietilo, 2-butoxietilo, 2-metoxipropilo, 2-etoxipro-pilo, 3-etoxipropilo, 4-etoxibutilo, 4-isopropoxibutilo, 5-etoxipentilo, 6-metoxihexilo, bencilo, l-feniletilo, 2-feniletilo, 4-clorobencilo, 4-metoxibencilo, 2- (4-metilfe-nil) etilo, carboximetilo, 2-carboxietilo, 3-carboxipropilo, 4-carboxibutilo, 5-carboxipentilo, 6-carboxihexilo, metoxicar-bonilmetilo, etoxicarbonilmetilo, 2-metoxicarboniletilo, 2-etoxicarboniletilo, 3-metoxicarbonilpropilo, 3-etoxicarbo-nilpropilo, 4-metoxicarbonilbutilo, 4-etoxicarbonilbutilo, 5-metoxicarbonilpentilo, 5-etoxicarbonilpentilo, 6-metoxicar-bonilhexilo o 6-etoxicarbonilhexilo.

T1 en la fórmula VI es, p.ej. metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, isopropoxicarbonilo, butoxicarbonilo, isobu-. toxicarbonilo, sec-butoxicarbonilo, tere. -butoxicarbonilo, pentiloxicarbonilo, isopentiloxicarbonilo, neopentiloxicarbo-nilo, tere. -pentiloxicarbonilo, hexiloxicarbonilo, heptiloxi -carbonilo, octiloxicarbonilo, isooctiloxicarbonilo, noniloxicarbonilo, isononiloxicarbonilo, deciloxicarbonilo, isodecilo-xicarbonilo, undeciloxicarbonilo, dodeciloxicarbonilo, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, pentiloxi, hexiloxi, acetilamino, carbamoilo, mono- o dimetilcarbamoilo, mono- o dietilcarbamoilo, monociclohaxilcarbonilo, fenilocar-bamoilo, dimetilcarbamoiloxi o dietilcarbamoiloxi.

Como sustancias marcadoras sean destacadas, además, especialmente las naftalocianinas de la fórmula lia (Ha) en la que Y1, Y2, Y3, Y4, Y5, Y6, Y7 y Y8 significan, cada uno independientemente del otro, hidrógeno, hidroxi, C?-C4-alquilo o C?-C2o-alcoxi y Me2 tiene el significado de Me1 o significa el radical y20 Si—(—O—Si— _Y19; ? 1 donde R19 signif ica C?~C?3-alquilo o C?o-C2o~alcadienilo e Y20 e Y21signif ican, cada uno independientemente del otro, C?-C?3-alquilo o C2-C4-alquenilo .

Aquí sean destacadas, especialmente, las naftalocianinas de la fórmula lia, en la que ?i, Y2, ?3, ? , ?s/ y6r Y7 e yß significan, cada uno independientemente del otro, hidroxi, C?-C2o-al-coxi, especialmente C?_-C?o-alcoxi . Los radicales alcoxi pueden ser idénticos o diferentes. Además, sean destacadas, sobre todo las naf talocianinas de la fórmula lia, en la que Me2 significa dos veces hidrógeno.

Como sustancias marcadoras sean destacadas, además, los complejos de níquel-ditioleno de la fórmula III, en la que L1, L2, L3 y L4 significan, cada uno independientemente del otro, fenilo, C?-C2o-alquilfenilo, Cj.-C2o-alcoxifenilo o fenilo su- stituido por hidroxi y C?-C2rj-alquilo, o L1 y L2 , así como L3 y L4 forman cada vez juntos el radical de la fórmula Aquí hay que destacar, especialmente los complejos de níquel-ditioleno de la fórmula III, en la que L1 y L4 significan cada vez fenílo y L2 y L4 significan cada vez un radical de la fórmula 4- [C2H5-C (CH3) 2] -C6H4.

Preferentemente, se usan en el procedimiento de la invención y en sus modalidades preferidas como sustancias marcadoras las ftalocianians arriba indicadas que corresponden a la fórmula la, así como las ftalocianinas indicadas en la patente US 5,525,516 en la tabla, las naf talocianinas arriba indicadas de la fórmula II, las naftalocianinas indicadas en la patente US 5,525,516 en la tabla 4, y muy preferentemente, las naf talocianinas arriba indicadas de la fórmula lia. Sean destacadas aquí, especialmente, las ftalocianinas y naftalocianinas , en las que Me1 o bien. Me2 significan dos veces hidrógeno.

En la zona espectral de 600 hasta aprox. 850 nm se suelen usar ftalocianinas, en la zona espectral por encima de aprox. 800 nm se suelen usar naftalocianinas .

Las ftalocianinas de la fórmula la son en si conocidas y están descritas, p.ej. in DE-B-1 073 739 o EP-A-155 780 o pueden ser preparadas según los métodos conocidos, tal y como se usan para la obtención de ftalocianinas o naftalocianinas y tal y como están descritas en F.H. Moser, A. . Thomas "The Phthalo-cyanines", CRC Press, Boca Rota, Florida, 1983, o J. Am. Chem. Soc. vol. 106, páginas 7404 hasta 7410, 1984. Las ftalocianinas de la fórmula Ib también son en si conocidas y se encuentran descritas, p.ej. en la EP-A-155 780, o pueden ser obtenidas según los métodos conocidos del estado de la técnica arriba indicado (Moser, J.Am. Chem. Soc.).

Las naf talocianinas de la fórmula II también son en si conocidas y se encuentran descritas, por ejemplo, en la EP-A-336 213, EP-A-358 080, GB-A-2 168 372 o GB-A-2 200 650, o pueden ser obtenidas segúnlos métodos del estado de la técnica arriba descritos (Moser, J.Am. Chem. Soc.) erhalten werden.

Los complejos de níquel-ditioleno de la fórmula III también son en si conocidos y se encuentran descritas, por ejemplo, en la EP-A-192 215.

Los compuestos de aminio de la fórmula IV también son en si conocidos yestán descritos, p.ej. in US-A-3 484 467, o pueden ser obtendios según los métodos allí descritos.

Los colorantes de metino de la fórmula V también son en si conocidas y están descritas, p.ej. en la EP-A-464 543, o pueden ser obtendios según los métodos allí descritos.

La obtención de los colorantes de ácido cuadrático estás descritas en las patentes US 5,525,516 y US 5,703,229 y en la literatura correspondiente allí citada.

La obtención de los colorantes de ácido crocónico está descrita en la patente US 5,525,516 y la literatura allí citada.

Los colorantes de azuleno-ácido cuadrético de la fórmula VI también son en si conocidos y están descritas, p.ej. en la EP-A-310 080 o US-A-4 990 649, o pueden ser obtendios según los métodos allí descritos.

Líquidos que pueden ser marcados según el procedimiento de la invención con una combinación de por lo manos dos de los compuestos arriba detallados como sustancias marcadoras son, por ejemplo alcoholes, tales como metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, sec-butanol, pentanol, isopentanol, neo-pentanol o hexanol, glicoles, tales como 1, 2-etilenglícol, 1,2- ó 1, 3-propilengli • col, 1,2-, 2,3- ó 1, 4-butilenglicol, di- o trietilenglicol o di- o tripropilenglicol, éteres, tales como, wie metil-terc.butiléter, 1, 2-etilengli-colmono- o -dimetiléter, 1, 2-etilenglicolmono- o -dietiléter, 3-metoxipropanol, 3-isopropoxipropanol, tetrahidrofurano o dioxano, cetonas, tales como acetona, metiletilcetona o diacetonalco-hol, esteres, tales como acetato de etilo, acetato de metilo, acetato de propilo o acetato de butilo, hidrocarburos alifáticos o aromáticos, tales como pentano, hexano, heptano, octano, isooctano, petroléter, tolueno, xileno, etilbenceno, tetralina, decalina, dimetilnaftalina, gasolina de ensayo. aceites naturales, tales como aceite de oliva, aceite de soya o de girasol, o aceites naturales o sintéticos para motores, hidráulicos o para engranajes, p.ej. aceites para motores de automóviles o aceites para máquinas de cocer o aceites para líquidos de freno y aceites minerales, tales como gasolina, queroseno, aceite diesel o aceite combustible.

Los compuestos arriba indicados son especialmente apropiados para la marcación de aceites minerales, que a la vez deben ser marcados, por ejemplo, por razones fiscales. Para mantener los costos de la marcación en un mínimo, pero también para minimizar posibles interacciones de los aceites minerales marcados con otros ingredientes eventualmente presentes, se procura mantener lo más baja posible la cantidad de sustancias marcadoras. Otra razón para mantener lo más baja posible la cantidad de sustancias marcadoras pueder ser el que se desea impedir sus posibles efectos perjudiciales, por ejemplo, sobre los sectores de entrada de carburantes y salida de gases de escape de motroes de combustión.

Como ya se ha mencionado más arriba, es generalmente deseable usar para la marcación de líquidos aquellos compuestos como sustancias marcadoras, que dan un alto rendimiento cuántico de fluorescencia, es decir, los que reemiten la mayor parte de los cuantos de radiación absorbidos como radiación fluorescente.

Estos compuestos útiles como sustancias marcadoras se agregan a los líquidos en tales cantidades, que sea asegurada una detección fiable. Normalmente, asciende el contenido total (con respecto al peso) de sustancias marcadorasn en los líquidos marcados a aprox. 0,1 hasta 5000 ppb, preferentemente, 1 hasta 2000 ppb y muy preferentemente 1 hasta 1000 ppb.

Para la marcación de los líquidos se agregan los compuestos arriba mencionados como sustancias marcadoras (o bien sus combinaciones a partir de por lo menos dos sustancias marcadoras) , generalmente, en forma de soluciones (soluciones madres) . Especialmente, en aceites minerales son apropiados como disolventes para la obtención de estas soluciones madre, preferentemente, los hidrocarburos aromáticos, tales como tolueno, xileno o las mezclas de aromáticos de alto punto de ebullición.

Para evitar que estas soluciones madre sean demasiado viscosas (y con ello difíciles de dosificar y manipular) , se elige, generalmente, una concentración total de las sustancias marcadoras de 0,5 hasta 50% en peso, con respecto al peso total de estas soluciones madre.

Otro objeto del presente invento es un procedimiento para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invenición, procedimiento que está caracterizado porque se usa una fuente de radiación, que emite radiación en las zonas de absorción de las sustancias marcadoras, y se comprueba la radiación fluore-scente emitida por las sustancias marcadoras, siendo preciso que por lo menos una de las fuentes de radiación emita radiación en la zona de absorción solapante de por lo menos una sustancia marcadora con la de por lo menos otra sustancia marcadora, y el número de las fuentes de radiación es menor o igual que el número de las sustancias marcadoras.

Aquí sea definido lo siguiente: la (las) zona(s) de longitudes de onda perteneciente (s) a la sustancia marcadora Mµ, en la (las) que el coeficiente de extinción asciende a x% o más del valor en el máximo de absorción de la sustancia marcadora Mµ, se denomina "intervalo de longitud de onda de x%" Lµ(x). Ya que, por ejemplo, el número n de las sustancias marcadoras en las modalidades preferidas asciende a 2 hasta 10 o bien 2 hasta 6 o bien 2 hasta 4 betr gt, µ puede adoptar valores numéricos de 1 hasta 10 o bien 1 hasta 6 o bien 1 hasta 4 (según las sustancias marcadoras Ml , M2 , M3 , ... , M , MÍO o bien Ml, M2, M3,...,M5, M6 o bien Ml, M2, M3 , M4) . Entonces, los correspondientes intervalos son Ll (x) , L2 (x) , ... , L9 (x) , L10(x) o bien Ll(x), L2 (x) , ... , L5 (x) , L6 (x) o bien Ll (x) , L2 (x) , L3 (x) , L4 (x) . Estos intervalos son, generalmente, continuos, pero también pueden ser discontinuos. Así, un intervalo especial Lµ(x) puede constar también de dos o más intervalos parciales, cuya totalidad (cantidad unificada) se denomina, entonces, Lµfx) .

Según las sustancias marcadoras y/o el líquido a marcar se puede seleccionar el valor de x individualmente, o bien "definir" de este modo la zona de absorción de la sustancia marcadora Mµ, en función de los requisitos especiales. Por ejemplo, dada una alta absorción por el líquido a marcar, pueden ser apropiados valores para x de p.ej. 10, 20, 25 o aún 50. Vice-versa, con sustancias marcadoras con una alta capacidad de absorción y/o con líquidos a marcar, que en las zonas de longitudes de onda consideradas presentan tan sólo una reducida o inguna absorción, ya pueden ser suficientes valores para x de p.ej. 5 ó 3. Según estos valores para x se denominan, entonces, los intervalos de longitudes de onda, en los que el coeficiente de extinción de la sustancia marcadora M3 asciende, como mínimo, a 10 o bien 20 o bien 25% del valor en el máximo de absorción de M3 , por ejemplo, L3(10) o bien L3(20) o bien L3(25). Análogamente, se definen como L3 (5) o bien L3(3) los intervalos de longitudes de onda, en los que el coeficiente de extinción de la sustancia marcadora M3 asciende, como mínimo, a 5 o bien 3% del valor en el máximo de absorción de M3. También puede ser apropiado en un conjunto de sustancias marcadoras usar diferentes valores de x. Para simplificar, en lo sucesivo se ondrá en lugar de Lµ(x) (para el intervalo de x% de la sustancia marcadora Mµ) solamente Lµ.

Además, se usa como base para la definición de los intervalos Lµ(x) de las diferentes sustancias marcadoras Mµ tomadas en consideración para la marcación según la invención sus correspondientes espectros de absorción determinados bajo condiciones comparables, los que han sido corregidos con respecto al valor en blanco del disolvente utilizado.

Según las explicaciones susodichas, el intervalo de longitudes de onda, en el que se encuentra el máximo de absorción de la sustancia marcadora Mµ, puede denominarse también intervalo Lµ(x). En tal caso x puede adoptar, según sea necesario, los valores de p.ej. 80, 90, 95 o también 99.

Para el ejemplo de seis sustancias marcadoras Ml, M2 , M3 , M4 , M5 y M6, de acuerdo con una modalidad preferida, en la que el número n de las sustancias marcadoras adopta el valor de seis, se obtienen los intervalos Ll, L2 , L3 , L4 , L5 y L6. Las zonas de solapa de los intervalos son, desde el punto de vista matemático, cantidades promedios y se denominan aquí Lµv. Pueden relacionarse sistemáticamente como: Ll r> L2 = L12 µ = 1, v = 2) Ll n L3 = L13 µ = i , v = 3) Ll G? L4 = L14 µ = 1, V = 4) Ll G? L5 = L15 µ = 1, V = 5) Ll n L6 = L16 µ = 1, V = 6) L2 n L4 = L24 µ = 2, V = 4) L2 n L5 = L25 µ = 2, V = 5) L2 n L6 = L26 µ = 2, V = 6) L3 r» L4 = L34 µ = 3, V = 4) L3 n L5 = L35 µ = 3, V = 5) L3 r\ L6 = L36 µ = 3, V = 6) L4 n L5 = L45 µ = 4, V = 5) L4 G? L6 = L46 µ = 4, V = 6) L5 n L6 = L56 µ = 5, V = 6) Las zonas de solapa de los intervalos Lµ con si mismos (Lµv con v = µ) pueden definirse en analogía como : Ll n Ll = Lll Ll (µ= 1, v= 1) , L2 n L2 = L22 L2 (µ= 2, v= 2) , L3 n L3 = L33 L3 (µ = 3, v= 3) , L4 n L4 = L44 L4 (µ= 4, v= 4) , L5 n L5 = L55 = L5 (µ= 5, v= 5) y L6 n L6 = L66 = L6 (µ= 6, v= 6) .

El número N de las posibles zonas de solapa entre cada vez dos sustancias marcadoras con, en total, n sustancias marcadoras se calcula, generalmente, como N = n/2 • (n-1) . En el presente caso de n igual a seis, se obtienen, por tanto, los 15 intervalos de solapa arriba indicados. Aquí cabe mencionar, que las correspondientes zonas de solapa Lµv (p.ej. L34) , naturalmente, son análogas a las zonas de solapa Lvµ (p.ej. L43), por lo que no hace falta considerarlos en más detalle.

Según la invención, la zona de absorciónde por lo menos una sustancia marcadora debe solaparse con la zona de absorción de por lo menos otra sustancia marcadora, tomando como ejemplo las seis sustancias marcadoras Ml hasta M6, esto significa, que por lo menos una de las 15 zonas de solapa se diferencian del conjunto nulo.

Se pueden discutir, por ejemplo, los casos siguientes: A) Todos los intervalos de longitudes de onda vecinos Lµ y L(µ+1) forman zonas de solapa (cantidades promedias), que se diferencian del conjunto nulo, todas los intervalos de longitudes de onda no vecinos Lµ y Lv (v > µ + 1) no poseen ningunas zonas de solapa "superiores" (cantidades promedias) , es decir, forman cada vez conjuntos nulos, a saber: Lµv ? {0} para v = µ + l o v = µ - l y Lµv = {0} para v ? µ + l y v ? µ — 1 (zonas de solapa "su periores" ) .

En el ejemplo arriba descrito esto significa, que sólo hay zonas de solapa L12, L23, L34, L45 y L56 (y naturalmente, zonas naturales Lll, L22, L33, L44, L55 y L 66 equivalentes a los intervalos Ll , L2, L3 , L4, L5 y L 6) . Todas las demás zonas de solapa forman conjuntos nulos. Por lo que usando cinco fuentes de radiación, que emiten radiación en estas zonas de solapa, se pueden excitar todas las seis sustancias marcadoras Ml hasta M6 a emitir radiación fluorescente, excitándose en cada caso dos sustancias marcadoras por una fuente de radiación. Es decir, generalmente, se exciten por medio de las fuentes de radiación n-1, que emiten radiación en las zonas L12, L23,..., L(n-2) (n-1) , L(n-l)n , n sustancias marcadoras Mµ. Además, las sustancias marcadoras Ml y Mn (p.ej. M6) poseen cada vez sólo una zona de solapa (L12 o bien L(n-l)n, p.ej. L56) , las demás sustancias marcadoras (p.ej. M2 hasta M5) poseen dos zonas de solapa (p.ej. Mµ posee las uonas L(µ-l)µ y Lµ(µ+1) ) .

Por lo menos una sustancia marcadora Mµ posee un intervalo de longitudes de onda Lµ, que dorma con el intervalo de longitudes de onda L(µ+2) de la sustancia marcadora M(µ + 2) una zona de solapa "superior" Lµ(µ+2) . Siempre que esta zona de solapa "superior" se solape con el intervalo de longitudes de onda L(µ+1) de la sustancia marcadora M(µ+1) , lo que sucede por regal general, entonces se obtiene así una zona de solapa " triple"Lµ(µ+l) (µ+2) de los intervalos Lµ, L(µ+1) y L(µ+2) . Cuando se usa una fuente de radiación , que emite radiación en esta uona, se pueden excitar las sustancias marcadoras Mµ, M(µ+1) yM(µ+2) simultáneamente a emitir radiación fluorescente. Matemáticamente se puede formular esto de la siguiente manera: Lµv ? {0} für v = µ + 2, d.h. (Lµ(µ + 2)= ) Lµ r» L (µ + 2) ? - L (µ + 1 ) n [Lµ L (µ + 2 ) J = L (µ + 1 ) ? µ n (µ + 2 ) Lµ n L (µ + 1 ) n L (µ + 2 ) = Lµ (µ + 1 ) (µ + 2 ) ? {0} .

En el ejemplo arriba discutido de las seis sustancias marcadoras Ml hasta M6 esto significa, que existe, p.ej. una zona de solapa L13, que se solapa con el intervalo L2 (la zona de solapa L22) , a saber, forma una cantidad promedia de (Ll n 3) n L2 = Ll n L3 n L2 = Ll n L2 n 3 , lo que, en analogía a las cantidades opromedias de dos intervalos, puede indicarse más brevemente como cantidad promedia L123 de tres intervalos ( generalmente como Lµv?. Además, se observa, inmediatamente, 'que vale lo siguiente: Lµv? = Lµ?v = Lv?µ = Lvµ? = L?µv = L?vµ, es decir, que todas las zonas "permutadas" son equivalentes entre si .

Usando, p.ej. tres fuentes de radiación, que emiten radiación en las zonas de solapa L123, L45 y L56, se pueden excitar todas las seis sustancias marcadoras Ml hasta M6 a emitir radiación fluorescente, excitándose por la fuente de radiación a(L123) simultáneamente las sustancias marcadoras Ml, M2 y M3 y por la fuente de radiación a(L45) o bien a(L56) simultáneamente las sustancias marcadoras M4 y M5 o bien M5 y M6. Alternativamente, se puede usar en el último caso también una fuente de radiación, que no emite radiación en la zona de L56, sino, p.ej. únicamente en la zona de L66 - L56, a saber, el intervalo L6 menos la zona de solapa (la cantidad promedia) entre L5 y L6. De este modo sólo se escite la sustancia marcadora M6, pero no la sustancia marcadora M5.

Si existe adicionalmente una zona de solapa L456, se puede excitar ya con dos fuentes de radiación, que emiten radiación cada vez en las zonas L123 o bien L456, las fluorescencias de todas las seis sustancias marcadoras MI hasta M6, excitándose cada vez las sustancias marcadoras Ml , M2 y M3 o bien M4 , M5 y M6 simultáneamente.

En lo sucesivo, se denominarán Mµ' aquellas sustancias marcadora, que no presentan ningunas zonas de solapa entre si, pero que presentan longitudes de onda del máximo de absorción comparables con las sustancias marcadoras Mµ.

Para una mezcla como la arriba discutida en el caso A) , es decir, a partir de seis sustancias marcadoras Ml hasta M6 con loas zonas L12, L23, L34, L45 y L56 (y, naturalmente, con las zonas Lll, L22, L33, L44, L55 y L 66 equivalentes a los intervalos Ll, L2, L3, L4, L5 y L 6) y se puede alcanzar con cinco fuentes de radiación comparables (estos sean denominadas a(Lµv), a saber, a(L12), a(L23), a(L34), a(L45) y a(L56)) una excitación de todas las sustancias marcadoras. En comparación, una mezcla a partir de seis sustancias marcadoras MI', M2 ' , M3 ' , M4 ' , M5' y M6 ' no puede excitarse con las fuentes de ra-diación a(L12) hasta a(L56) a emitir radiación de fluorescencia. Una mezcla de este tipo corresponde a una mezcla, tal y como la sugiere el estado de la técnica, p.ej. en la patente US 5,525,516.

Lo mismo vale para el caso B) arriba discutido). Aquí se alcanza con una fuente de radiación a(L123) una excitación de las sustancias marcadoras MI', M2 ' y M3 ' kónnte lediglich eine Anregung de la sustancia marcadora M2 ' , cuando su longitud de onda del máximo de absorción se encuentra en la zona de L123. Sin embargo, las sustancias marcadoras MI' y M3 ' no serán excitadas con und fuente de radiación de este tipo a emitir radiación fluorescente.

Además, se pueden marcar líquidos según la invención de tal manera, que, se usen, p.ej. las sustancias marcadoras Ml hasta M6, que poseen las zonas de solapa L123, L34, L55 (= L5) y L66 (= L6) . Por medio de las fuentes de radiación a(L123), a(L34), a(L55) y a(L66) se excitan todas las sustancias marcadoras. En comparación, en el caso de las sustancias marcadoras MI' hasta M6' se alcanza con estas fuentes de radiación excitar únicamente a las sustancias marcadoras M5 ' , M6 ' y, eventualmente, M ' , pero no a las sustancias marcadoras Ml ' , M3 ' y M4 ' .

Además, se puede usar según la invención, p.ej., una mezcla de sustancias marcadoras Ml y M2, que (según definición) posee una zona de solapa L12. Si el intervalo de longitudes de onda del máximo de absorcións de la sustancia marcadora Ml (según sea necesario, se puede definir esta "zona de absorción principal", p.ej. como Ll(80), Ll (90) , Ll(95) o Ll(99), ver arriba) cae en la zona L12, entonces se pueden usar dos zwei fuentes de radiación a(Ll) y a(L2), que emiten radiación en la zona de correspondiente máximo de absorción (o bien de la correspondiente "zona de absorción principal") de las sustancias marcadoras Ml y M2 (p.ej. Ll(80), Ll(90), Ll(95) o Ll(99) o bien L2(80), L2(90), L2(95) o L2 (99) ) . La intensidad de la radiación fluorescente emitida por MI viene determinada totalmente por la intensidad absorbida por la fuente de radiación a(Ll). Por el contrario, la intensidad de la radiación de fluorescencia emitida por M2 resulta de las proporciones de la intensidad de radiación absorbida por M2 de la fuente de radiación a(L2) y de la fuente de radiación a(LlJ en la zona de solapa L12. En el caso de una mezcla a partir de MI' y M2 ' , la correspondiente intendidad de la radiación fluorescente emitida por MI' o bien M2 ' viene determinada completamente de la intensidad de radiación absorbida por la fuente de radiación a(Ll) o bien a(L2). Una mezcla de este tipo a partir de Ml ' y M2 ' corresponde a una mezcla, tal y como es sugerida por el estado de la téncica, p.ej. en la patente US 5,525,516.

Además, se puede usar una mezcla de sustancias marcadoras correspondiente a los casos A) y/o B) con aquellas sustancias marcadoras, que no poseen ningunas zonas de solapa con las demás sustancias marcadoras. Otra protección frente a falsificaciones puede ser también la comproibación de las sustancias marcadoras por detección de la radiación de fluorescencia excitada por las diferentes combinaciones de fuentes de radiación correspondientes. Esto se explica an lo sucesivo como un ejemplo, sin que esto implique una limitación del presente invento.

Ejemplo 1: Las sustancias marcadoras Ml hasta M4 poseen las zonas de solapa L12, L23 y L34. Los intervalos de longitudes de ondas Ll (x) , L2 (x) , L3 (x) y L4 (x) , en los que se encuentran los correspondientes máximos de absorción de las sustancias marcadoras Ml hasta M4 (estas "zonas principales de absorción" pueden definirse, p.ej. como Lµ(x) con x igual a, p.ej. 80, 90, 95 o 99 (%) , véase arriba) no poseen ninguna zona de solapa (ninguna cantidad promedia) con las zonas L12, L23 y L34.

Combinación 1.1: Se usan las fuentes de radiación a(Ll(x)), a(L2(x)), a(L3(x)) y a(L4(x)). Las sustancias marcadoras emiten su correspondiente radiación de fluorescencia. No tiene lugar ninguna excitación combinada de la fluorescencia.

Combinación 1.2: Se usan las fuentes de radiación a(L12), a(L23) y a(L34. Las sustancias marcadoras emiten su correspondiente radiación de fluorescencia debido a la excitación combinada. Por medio de a{L12) se excitan las sustancias marcadoras Ml y M2, por medio de a(L23) las sustancias marcadoras M2 y M3 y por medio de a(L34) las sustancias • marcadoras M3 y M4 a emitir fluorescencia. Si la excitación de las sustancias marcadoras Ml hasta M4 se efectúa simultáneamente por las fuentes de radiación, entonces contribuyen tanto la excitación por a(L12) y a(L23) o bien por a(L23) y a(L34) a la intensidad de fluoresecencia de la sustancia marcadora M2 o bien M3. Si las sustancias marcadoras son excitadas sucesivamente por las fuentes de radiación, entonces se obtienen cada vez espectros parciales de la radiación de fluorescencia emitida, que presentan una distribución de intensidad diferente de aquella radiación fluorescente emitida por las sustancias marcadoras M2 y M3. Pero estos (tres) espectros parciales se pueden componer {p.ej. calculatoriamente con la ayuda de los correspondientes programas de ordenador) en el espectro total del caso primero. Por regala general, hay que contar con que las distribuciones de la intensidad de las fluorescencias de las sustancias mar-cadoras Ml hasta M4 en el caso de la combinación 1.2 (excitación combinada) difieren de las distribuciones de intensidad de la combinación 1.1. Por la sucesición de las detecciones correspondientes a las combinaciones 1.1 y 1.2 se obtiene, por tanto, un "índice digital doble" de la mezcla de sustancias marcadoras o bien del líquido que contiene tal mezcla de sustancias marcadoras. Naturalmente, también, se pueden combinar las fuentes de radiación descritas en las combinaciones 1.1 y 1.2.

Ejemplo 2: Las sustancias marcadoras Ml hasta M4 poseen las zonas de solapa L12, L23 y L34. Los intervalos de longitudes de ondas Ll (x) , L2 (x) , L3 (x) y L4 (x) , en los que se encuentran los correspondientes máximos de absorción de las sustancias marcadoras Ml hasta M4 (estas "zonas principales dé absorción" pueden definirse, p.ej. como Lµ(x) con x igual a, p.ej. 80, 90, 95 ó 99 (%) , véase arriba) poseen zonas de solapa (cantidades promedias) con las zonas L12 , L23 y L34, p.ej. sean mencionados L12 n Ll (x) ? {0}, L23 n L2 (x) ? {0}, L23 O L3 (x) ? {0} y L34 n L4 (x) ? {0} .

Combinación 2.1: Se usan las fuentes de radiación a(Ll(x)), a(L2(x)), a(L3(x)) y a(L4(x). Las sustancias marcadoras emiten su correspondiente radiación de fluorescencia debido a la excitación combinada. Por medio de a (Ll (x) ) se excitan las sustancias marcadoras Ml y M2 , por medio de a(L2(x)) y a(L3(x)) las sustancias marcadoras M2 y M3 y por medio de a(L4(x)) las sustancias marcadoras M3 y M4 a emitir radiación fluorescente.

Combinación 2.2: Se usan las fuentes de radiación a(Ll(x)), a(L3(x)) y a(L4(x)). Las sustancias marcadoras emiten su correspondiente radiación de fluorescencia debido a la excitación combinada. Por medio de a(Ll(x)) se excitan las sustancias marcadoras Ml y M2, por medio de a (L3 (x) ) las sustancias marcadoras M2 y M3 y por medio de a(L4(x)) las sustancias marcadoras M3 y M4 a emitir radiación fluorescente. En cuanto a la excitación simultánea o bien sucesiva por las fuentes de radiación vale también lo dicho en el Ejemplo 1, combinación 1.2. Sin embargo, las relaciones de intensidad se diferencian de aquellas de la combinación 2.1.

Combinación 2.3: Se usan las fuentes de radiación a(L12), a(L23) y a(L34). Las sustancias marcadoras emiten su correspondiente radiación de fluorescencia debido a la excitación combinada. Por medio de a(L12) se excitan las sustancias marcadoras Ml y M2, por medio de a(L23) las sustancias marcadoras M2 y M3 y por medio de a(L34) las sustancias marcadoras M3 y M4 a emitir fluorescencia. Con respecto a la excitación simultánea o sucesiva por las fuentes de radiación vale aquí lo indicado en el Ejemplo 1, combinación 1.2. Por regla general, hay que contar con que las distribuciones de intensidad de de fluorescencia de las sustancias marcadoras Ml hasta M4 en el caso de la combinación 2.3 difiere de las relaciones de distribución de intensidad de las combinaciones 2.1 y 2.2. Por la sucesión de las detecciones correspondientes a las combinaciones 2.1, 2.2 y 2.3 se genera, por tanto, un "índice digital triple" de la mezcla de sustancias marcadoras o bien del líquido que contiene tal mezcla de sustancias marcadoras. Naturalmente, aquí también se pueden combinar entre si las fuentes de radiación descritas en las combinaciones 2.1, 2.2 y 2.3.

Para la marcación según la invención de los líquidos, naturalmente, también es posible usar combinaciones de sustancias marcadoras, que se diferencian en las cantidades relativas de las sustancias marcadoras entre si. Así se puede marcar, por ejemplo, un líqudiso con una mezcla de las sustancias marcadoras Ml hasta M4 en la relación molar de, p.ej., 2:1:1:1, 4:1:1:1, 8:1:1:1, 2:2:1:1, 2:4:1:1, 2:8:1:1, 4:4:1:1, 4:8:1:1, 8:8:1:1, 2:2:2:1, 2:2:4:1, 2:2:8:1, 2:2:2:2, 2:2:2:4, 2:2:2:8 o también en la relación de una correspondiente permutación.

Cuando se desea marcar líqudiso únicamente por diferentes concentraciones de una mezcla determinada de sustancias marcadoras (p.ej. Ml hasta M4) , se eligirá, generalmente, una concentración tal, que en cada líquido se diferencia por lo menos en el factor dos, para así asegurar que la detección sea unívoca. Pero, preferentemente, se usa para la marcación de diferentes líquidos mezcals de sustancias marcadoras de diferentes rala-ciones molares de las sustancias marcadoras entre si.

La construcción básica de los aparatos para la excitación y detección de la fluorescencia en un líquido marcado según la invención contiene: una cubeta para muestras, que contiene el líquido marcado, una unidad de excitación (A) , que contiene: ai) una fuente de radiación, que generalmente está dotada de una óptica de colimador, y a2) generalmente, un espejo plano, que se encuentra enfrente de la fuente de radiación en el lado opuesto a la fuente de radiación de la cubeta para muestras, y que sirve para aumentar por reflección la intensidad de la radiación transmitida que incide en la muestra, una unidad de detección (D) , que contiene: di) un fotodetector (generalmente dotado de una óptica de colimador) , delante del cual se encuentran, generalmente, filtros ópticos (p.ej. filtros de cantos o filtros de interferencia) y, eventualmente, polarizadores de NIR, y que está dispuesto de tal modo, que la radiación fluorescente emitida en su dirección incida en el mismo (o sea reprodu- cido sobre el) y detectada, y d2) generalmente, un espejo hueco, que se encuentra enfrente del fotodetector en el lado opuesto al fotodetector de la cubeta para muestras y que sirve para reflejar la radiación fluorescente emitida en dirección opuesta (opuesta al fotodetector) , y con ello a aumentar la sensibilidad de detección.

Una construcción de este tipo está representada gráficamente, en principio en la patente WO 94/02570 (divergente a la dirección de radiación de la fuente de radiación) . Pero la detección de la radiación fluorescente no debe realizarse necesariamente perpendicularmente, sino que puede efectuarse en casi cualquier ángulo deseaado a la dirección de radiación. Naturalmente, se debe ex-cluir aquí los ángulos de 0° o -bien 180°.

Con respecto a los detalles siguientes valen las definiciones siguientes : Como unidad de excitación o bien unidad de detección se denominan en términos generales como A o bien D (véase arriba) . Sustancias marcadoras en términos generales se denominan M.

Una unidad de excitación, que por medio de una correspondiente fuente de radiación está regulada especialmente en el intervalo de longitudes de onda Lµ (sinónimo de la "zona de solapa" Lµµ o Lµµµ) , la zona de solapa Lµv o la zona de solapa Lµv? (es decir, la fuente de radiación emite radiación en el intervalo de longitudes de onda Lµ de la sustancia marcadora Mµ, en la zona de solapa der sustancias marcadoras Mµ y Mv o en la zona de solapa de las sustancias marcadoras Mµ, Mv y M? ) , se define uniformante con A (Lµv?) o más brevemente con Aµv?, o bien varios de estas unidades se denominan AµiVi?i, ... , Aµnvn?n, pudiendo, por ejemplo para n igual a 2 hasta 10 o bien 2 hasta 6 o bien 2 hasta 4, y adoptar los parámetros µ, v, y ? (o bien µi, ... , µn, V_, ... , vn y CÚ[ , ... , ?n) en cada caso valores de 1 hasta 10 o bien 1 hasta 6 o bien 1 hasta 4. Naturalmente, aquí varias de las unidades Aµv? son equivalentes debido a la definición de Lµv?, lo que ya se ha mencionado más arriba. Por ejemplo, por las definiciones de L123 ais Ll n L2 n L3 (= L3 O Ll n L2 = L2 n L3 Ll = L2 n Ll n L3 = Ll n L3 n L2 = L3 o L2 n Ll) son idénticas las unidades A123 y ?3=3), A312 (µ3=3, V?=l y ?2=2 ) , A231 (µ2=2, v3=3 y ??=l) , A213 y ??=l) . Estas otras unidades idénticas con una unidad no se toman en consideración en la presente, a como ya se ha hecho en el caso de las zonas de solapa equivalentes Lµv y Lvµ en la definición arriba indicada de las zonas de solapa.

Naturalmente, se pueden usar también "zonas de solapa" superiores, p.ej. Lµv??, etc. o bien correspondientes fuentes de radiación Aµv??, etc. Sin embargo, estos no serán tomadas en consideración en lo sucesivo.

Aµ, Aµµ y Aµµµ deben considerarse como denominaciones sinónimas y definan unidades de excitación idénticas, que emiten radiación en el intervalo de longitudes de onda Lµ (= Lµµ = Lµµµ) de la sustancia marcadora Mµ .

Una unidad de detección especial que está regulada, p.ej. mediante filtros ópticos correspondientes (y eventualmente pola-rizadores) , especialmente a la radiación fluorescente emitida por una de lass sustancias marcadoras Mµ, se caracteriza con Dµ (o también como canal de detección µ) .

Así se pueden asignar, p.ej. a las tres sustancias marcadoras Ml, M2 y M3 las unidades de excitación Al (= All = Allí) , A2 (= A22 = A222), A3 (= A33 = A333), A12 (= A112 = A122), A13 (= A113 = A133), A23 (= A223 = A233) y A123 o bien las unidades de detección DI, D2 y D3 adaptadas a las mismas.

Además, se puede realizar, p.ej. para dos sustancias marcadoras Ml y M2 (ciando existe una zona de solapa L12) la excitación de la radiación fluorescente de las sustancias marcadoras Ml y M2 por la undidad A12 idéntica. La radiación fluorescente se detecta, entonces, mediante las correspondientes unidades DI y D2. Las combinaciones a partir de excitación y detección pueden definirse, entonces, como A12/D1 y A12/D2.

Cuando dentro de una unidad de excitación A se realiza la adaptación a la correspondiente zona de solapa Lµv? tan sólo usando una correspondiente fuente de radiación aiµv? (es decir, esta emite radiación en el intervalo de longitudes de onda Lµ de la sustancia marcadora Mµ, en la zona de solapa de las sustancias marcadoras Mµ y Mv o en la zona de solapa de las sustancias marcadoras Mµ, Mv y M? ) , entonces se caracteriza esto, para el caso de las Fall de n sustancias marcadoras, con A (µivi?i, ... , µnvn?n) , pudiendo adoptar, por ejemplo para n igual a 2 hasta 10 o bien 2 hasta 6 o bien 2 hasta 4 los parámetros µj, ... ,µn, v f ... , vn y ?1 , ... , ?n cada vez los valores de 1 hasta 10 o bien 1 hasta 6 o bien 1 hasta 4. Por ejemplo, A (111, 112 , 223) (= A(l,12,23)) caracteriza una unidad de excitación, que por medio del empleo de las fuentes de radiación ailll (= ail) , a?ll2 (= a?l2) y a223 (= a?23) puede ser adaptada al intervalo de longitudes de onda Ll (la zona de solapa Lili) de la sustancia marcadora Ml y las zonas de solapa L12 o bien L23 de las sustancias marcadoras Ml y M2 o bien M2 y M3.

Para una unidad de detección Dµ, en la que la adaptación a la radiación fluorescente emitida por la correspondiente sustancia marcadora Mµ se realiza sólo usando fotodetectores correspondientes y/o filtros ópticos (y eventualmente polarizado-res) , valen para el caso de las n sustancias marcadoras las caracterizaciones D(l,2), D(l,2,3), etc. hasta D(l, 2,3, ... ,9, 10) o bien D(l,2), D(l,2,3) etc. hasta D(l,2, ...,5,6) o bien D(l,2), D(l,2,3), D(l,2,3,4), pudiendo n ser aquí otra vez igual a 2 hasta 10, o bien 2 hasta 6, o bien 2 hasta 4.

' Cuando las zonas de solapa Lµv? de las n sustancias marcadoras Mµ, siendo n, por ejemplo, igual a 2 hasta 10, o bien 2 hasta 6, o bien 2 hasta 4, son excitadas cada vez sucesivamente por las respectidvas unidades Aµv? adaptadas a las mismas, y la radiación fluorescente emitida por la correspondiente sustancia marcadora Mµ es detectada por Dµ, entonces se caracteriza 10 esto por medio de "Aµ?v???/Dl , Aµ2v?2/D2, ... " etc. hasta "...Aµ9V9?9/D9, AµioVioCOi DlO" o bien "AµtVi?i/Dl, Aµ2v2?2/D2 , ... " etc. hasta " ... µV5?5/D5, Aµv6?6/D6" o bien por "Aµivj?i/Dl, Aµ2v?2/D2 , Aµ3V3?3/D3 , Aµv4?/D4. 15 Cuando las zonas de solapa Lµv? de las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas simultáneamente con un número correspondiente de unidades Aµv? y se detecta simultáneamente la radiación fluorescenteen emitida con n unidades Dµ, entonces se carqcte- riza esto con "Aµ1v1??/Aµ2v2?2/ ... /Aµnvn?n/Dl/D2/ ... /Dn" . 20 Nota: según lo arriba indicado, pueden estar presentes n o menos unidades Aµv?. Sin embargo, para simplificar, se escribe Í :. solamente " µ?v??j/Aµ2v2a>2/ ... /Aµnvn?n/" . 25 Cuando las zonas de solapa Lµv? de las n sustancias marcadoras son excitadas con un número correspondiente de unidades Aµv? y la la radiación fluorescente emitida por las sustancias marcadoras Mµ es detectada por una unidad D, p.ej. eínem detector de múltiples unidades de onda (compuesto de un elemento 30 óptico, como p.ej. un prisma o una rejilla, y un detector de 35 líneas o de superficies) , entonces se caracteriza esto con "Aµ1v1?1/Aµ2v2?2/... /Aµnvn?n/D" .

Substancialmente, hay que distinguier entre los dos casos, en los que la excitación de la muestra marcada por medio de las unidades A I) se realiza en el mismo volumen de muestra, o II) se realiza en diferentes volúmenes de muestra.

En el caso I) se pueden usar los siguientes procedimientos y por ejemplo, las siguientes posibilidades de construcción de los aparatos de detección (n adopta aquí los valores de 2 hasta 10 o bien 2 hasta 6 o bien 2 hasta 4) : 1.1) Aµ1v1?1/Dl,Aµ2v2?2/D2, ... ,Aµn_1vn_??ri_?/Dn-l,Aµnvn?t?/Dn (las n sustancias marcadoras Mµ son detectadas cada caso en las zonas de solapa Lµv? por sus correspondientes unidades Aµv? o bien las fluorescencias de las sustancias marcadoras Mµ son detectadas cada vez por las unidades Dµ) . a) La construcción corresponde, substancialmente a la antes mencionada y describa en la patente WO 94/02570. La diferencia reside en que para cada sustancia marcadora Mµ se usa cada vez una correspondiente unidad Aµv? o bien Dµ. Esto puede realizarse, colocando varios pares de unidades Aµv? y Dµ correspondiente al número de sustancias marcadoras a detectar, al tresbolillo radialmente alrededor de la cubeta para muestras. Esta última posee, entonces, una sección transversal circu- lar. Los volúmenes de muestra (o bien vías de muestra) irradiadas por las unidades Aµv? no son aquí estrictamente idénticos. Sin embargo, los rayos de excitación (que se encuentran en un plano) se cortan en una parte idéntica del volumen de muestra. Varias unidades Aµv? pueden ser idénticas (y por lo general lo son) . Así se pueden usar, p.ej. teniendo tres sustancias marcadoras Ml hasta M3 (p.ej. con las zonas de solapa 10 L12 y L23), para la excitación y detección los correspondientes (tres) pares A12/D1, A12/D2 y A23/D3 o también A12/D1, A23/D2 y A23/D3. La combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ puede realizarse tanto su¬ 15 cesivamente como también simultáneamente. b) La construcción corresponde, substancialmente, a la arriba mencionada y descrita en la patente WO 20 94/02570. La diferencia es que las fuentes de radiación cciµv? o bien fotodetectores 5?µ de las unidades Aµv? o bien Dµ se encuentran cada vez en un carrusel correspondiente (en lugar de espejos planos a2µv? o bien espejos huecos d2µ individua¬ 25 les se usan en este caso, naturalmente, cada vez tan sólo un espejo plano o bien hueco) . Para la detección de la sustancia marcadora Mµ se mueve la correspondiente fuente de radiación aiµv? o bien el correspondiente fotodetector diµ por ro¬ 30 tación del carrusel correspondiente en la posición de excitación o bien detacción. El curso de la radiación a través de la muestra marcada y el 35 volumen de muestra irradiado son idénticos para cada sustancia marcadora a determinar. La combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo puede realizarse sucesivamente. c) Cuando se usa, por ejemplo, una cubeta para muestras cilindrica, que puede ser cerrada en los dos extremos con ventanas a partir del mismo material 10 del que consta la cubeta, o que está cerrada en los dos extremos y posee, preferentemente entradas y salidad laterales para la muestra, se puede hacer una construcción diferente. Como en a) se pueden encontrar las fuentes de radiación ctiµv? 15 der unidades Aµv? sobre un carrusel (en lugar de espejos planos a2µv? individuales es apropiado usar un sólo espejo plano fijo) . La correspondiente unidad Aµv? irradia, entonces, paralelamente al eje longitudinal de la cubeta. Radial¬ 20 mente a esre (y con ello siempre perpendicular - mente a la dirección de rayo de la radicación de excitación) se pueden colocar las correspondientes unidades Dµ (en este caso, obviamente, con sus correspondientes subunidades d2µv?) para la 25 detección de la correspondiente radiación fluorescente emitida, alrededor de la cubeta para muestras. La combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo puede realizarse sucesivamente (potencialmente se puede re¬ 30 alizar la detección, de la radiación emitida por 35 las varias sustancias marcadoras en forma simultánea por las unidades Dµ) . 1.2) A/Dl, /D2, ... , A/Dn-1, A/Dn (todas las n sustancias marcadoras Mµ son escitadas simultáneamente por una fuente de radiación "policromática" y detectadas mediante su correspondiente canal detección Dµ) .

La construcción puede ser similar a la descrita 10 en b) bajo 1.1) . Pero en lugar de un carrusel correspondiente para las subunidades aiµv? se usa únicamente una unidad de excitación policromática A. La detección se realiza con la construcción descrita en b) de 1.1) . La combinación de excita¬ 15 ción y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo puede realizarse sucesivamente. b) Cuando en analogía a la construcción descrita en c) bajo 1.1) se usa , por ejemplo, una cubeta 20 para muestras cilindrica, entonces irradia la unidad A paralelamente al eje longitudinal de la cubeta. Radial dazu (y con ello cada vez perpendicularmente a la dirección de rayo de la radiación de excitación) se pueden colocar otra vez 25 las correspondientes unidades Dµ alrededor de la cubeta para muestras. La combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ puede realizarse tanto sucesivamente como también simultáneamente. 30 35 1.3) Aµ1v1?1/D,Aµ2v2?2/D, ... (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada vez en las zonas de solapa Lµv? por las correspondientes unidades Aµv? o bien las fluorescencias de las sustancias marcadoras Mµ son detectadas cada vez por las unidades Dµ) .

La construcción puede ser similar a la descrita en b) bajo 1.1) . Pero en lugar de un correspon¬ 10 diente carrusel para los fotodetectores diµ se usa tan sólo una unidad de detección D, p.ej. un detector de múltiples unidades de onda. La excitación se realiza con la construcción descrita bajo b) de 1.1) . La combinación de excitación y 15 detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo puede realizarse sucesivamente. b) Cuando en analogía a la construcción descrita en 20 c) bajo 1.1) se usa, por ejemplo, una cubeta para muestras cilindrica, entonces detecta la unidad D la correspondiente radiación fluorescente emitida paralelamente al eje longitudinal de la cubeta. Radialmente a este (y con ello cada vez perpendi- 25 cularmenteal eje longitudinal de la cubeta) se pueden colocar las correspondientes unidades Aµv? (junto con sus correspondientes espejos planos a2µv?) alrededor de la cubeta para muestras. La combinación de excitación y detección de las n 30 sustancias marcadoras Mµ puede realizarse tanto sucesivamente como también simultáneamente. 35 Por lo que las construcciones posible son comparables con aquellas descritae en a) y b) del punto 1.2) y se diferencian solamente en que la(s) unidad (e)s de excitación y de detección está(n) en diferentes lugares). 1. 4 ) A (µ1v1?? , µ2v2?2 , . . . , µn-?vn_??n_? , µnvn?n) /DI , A (µi i?i , µ2V2?2, . . . , µn-?Vn-??n_1, µnvn?n) /D2 , . . . , A (µ?v1?1 , µ2v2?2, . . - , µn-? n-??n_? , µnvn?n) /Dn-1 , A (µivj?. , µ2v2?2 , . . . , µn-?Vn-??n-? , µnVn?n) /Dn ( las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada vez en las zonas de solapa Lµv? y detectadas mediante su correspondiente canal de detección Dµ) . a) La construcción puede ser similar a la descrita en a) bajo 1.2) . Pero en lugar de un carrusel correspondiente para las fuentes de radiación aiµ se usa una unidad de excitación A, que contiene, p.ej. (caso ai) fuentes de radiación aiµv? intercambiables. A puede contener, además, también varias fuentes de radiación ctiµv?, cuya radiación correspondiente, p.ej. (caso a2) mediante fibras guíaondas o haces de fibras guíaonda o superposición colineal de los diferentes rayos de las fuentes de radiación mediante elementos ópticos, como p.ej. divisores de rayo, divisores de rayo dicroicos, rejillas, etc., se dirige de tal modo, que incida cada vez en el mismo lugar de la cubeta para muestras en la misma. La correspondiente radiación fluorescente se detecta con la construcción descrita bajo a) de 1.2). La combinación de excitación y detección de las n sustan - cias marcadoras Mµ sólo puede realizarse sucesivamente.

Cuando en analogía a la construcción descrita en c) bajo 1.1) se usa , por ejemplo, una cubeta para muestras cilindrica, entonces irradia una unidad A como la descrita bajo a) (caso ai o caso a2) paralelamente al eje longitudinal de la cubeta. Radialmente a este (y con ello cada vez 10 perpendicularmente a la dirección de rayo de la radiación de excitación) lse pueden colocar otra vez las correspondientes unidades Dµ alrededor de la cubeta para muestras. La combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras 15 Mµ con una unidad A según el caso ai kann sólo puede efectuarse sucesivamente. Con una unidad A correspondiente al caso a2 se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sucesivamente y poten¬ 20 cialmente también simultáneamente. 1.5) ... ,n-l,n) , Aµ2v2?2/D (1 , 2 , ... ,n-l,n) , ... , Aµn-?Vn-??n-?/D(l,2, ... ,n-l,n) , Aµnvn?n/D (1 , 2 , ... ,n-l,n) (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada 25 vez en las zonas de solapa Lµv? por su correspondiente unidad Aµv? y detectadas) . a) La construcción puede ser similar a la descrita en b) bajo 1.1) . Pero en lugar de un carrusel 30 correspondiente para los fotodetectores diµ se usa una unidad de detección D, que contiene, p.ej. (caso ai), fotodetectores intercambiables 35 y/o filtros ópticos intercambiables (y eventualmente polarizadores) diµ. Pero D puede contener, además, también varios fotodetectores diµ, qa los que se dirige la correspondiente radiación fluorescente emitida, p.ej. (caso a2) , mediante fibras guíaonda o haces de fibras guíaond. La excitación se realiza con la contrucción descrita bajo b) de 1.1) . La combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo 10 puede realizarse sucesivamente. b) Cuando en analogía a la construcción descrita en c) bajo 1.1) se usa, por ejemplo, una cubeta para muestras cilindrica, entonces se detecta una uni¬ 15 dad D, como la descrita bajo a) (caso ai o caso a2) la radiación fluorescente cada vez emitida paralelamente al eje longitudinal de la cubeta. Radialmente a esta (y con ello cada vez perpendicularmente al eje longitudinal de la cubeta) se 20 pueden colocar nuevamente las correspondientes unidades Aµv? alrededor de la cubeta para muestras. Con una unidad D según el caso se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ tan sólo suce¬ 25 sivamente. Con una unidad D según el caso a2 se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sucesivamente y potencialmente también simultáneamente. 30 35 1. 6) A (µ1v1?1 , µ2v2?2, . . . , µn-?Vn-??n-?, µnvn?n) /D (1 , 2 , . . . , n-l , n) (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada vez en las zonas de solapa Lµv? y detectadas) .

La construcción puede realizarse usando una unidad de excitación A, que contiene, p.ej. (caso ai) fuentes de radiación aiµv? intercambiables o fuentes de radiación aiµv?, cuya correspondiente radiación, p.ej. (caso a2) , se dirige mediante fibras guíaonda o haces 10 de fibras guíaonda o superoposición colineal de los diferentes rayos de las fuentes de radiación mediante elementos ópticos, como p.ej. divisores de rayo, divisores de rayo dicroicos, rejillas, etc., de tal manera, que incida cada vez en el mismo lugar de la cu¬ 15 beta para muestras en la misma. En forma correspondiente, se puede usar una unidad de detección D, que contiene, p.ej. (caso ai), fotodetectores intercambiables y/o filtos ópticos intercambiables (y eventual- . mente polarizadores) diµ o también varios fotodetecto¬ 20 res dµ, a los que se dirige la correspondiente radiación fluorescente emitida, p.ej. (caso a2) , mediante fibras guíaonda o haces de fibras guíaonda. Para los casos A(caso a )/D(caso ai), A(caso a?)/D(caso a2) y A (caso a2)/D(caso ai) se puede realizar la combinación 25 de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ tan sólo sucesivamene. En el caso A (caso a2)/D(caso a2) se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sucesivamente y potencialmente también simultánea¬ 30 mente. 35 La relación geométrica de las unidades de excitación y detección entre si corresponde, substancialmente, a las relaciones escritas al comienzo y las indicadas en la patente WO 94/02570. 1.7) Aµ1v1?1/Aµ2v2?2/ ... /Aµn_ vn_??n-?/Aµnvn?n/Dl/D2/ ... /Dn-l/D n (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas simultáneamente en las zonas de solapa por las correspondientes unidades Aµ y al mismo tiempo detectadas por las unidades Dµ) .

La excitación o bien detección simultáneas de las n sustancias marcadoras puede realizarse, en principio, con las relaciones geométricas, tal y como se describen el punto 1.1) en a) , el punto 1.2) en b) , el punto 1.3) en b) , el punto 1.4) en el caso a2 de b) , el punto 1.5) en el caso a2 de b) y el punto 1.6) en el caso A (caso a2)/D(caso a2) .

En el caso II) , es decir, la excitación se realiza en diferentes volúmenes de muestra, se pueden aplicar los procedimientos siguientes y construcciones posibles siguientes de los aparatos de detección (n adopta aquí, p.ej. die valores de 2 hasta 10 o bien 2 hasta 6 o bien 2 hasta 4) : XI.1) Al/D1,A2/D2, ... , An-l/Dn-1 , An/Dn (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada vez en las zonas de solapa Lµv? por las correspondientes unidades Aµv? y detectadas por las correspondientes unidades Dµ) .

La disposición de los correspondientes pares Aµv?/Dµ equivale, substancialmente, a la geometría ilustrada al comienzo y en el punto 1.1) en a) y representada gráficamente en la patente WO 94/02570. Es decir, el eje óptico de la unidad Aµv? (según la dirección del rayo de excitación) y el eje óptico de la correspondiente unidad Dµ se encuentran en un plano, en el que el eje longitudinal de la cubeta para muestras se encuentra perpendicularmente. Estos dos ejes ópticos 10 forman un ángulo ?, que varía de entre 0° y 180°, definiéndose aquí lo siguiente: mirando de la unidad Aµv? en su dirección de radiación este ángulo debe ascender a +? o bien -?, cuando la correspondiente unidad Dµ se encuentra a la dercha o bien a la iz¬ 15 quierda de esta dirección visual. Esto se simboliza mediante la caracterización Aµv?(+)Dµ o bien Aµv?(—)Dµ , es decir, Aµ?v???(+)D1, Aµ2v2?2(-r)D2 , Aµ3V3?3(+)D3 , etc. o bien Aµ2v2?2(-)D2 , Aµ3v3?3(-)D3 , etc. La excitación (y detección) de volúmnes de prueba en dife¬ 20 rentes lugars se realiza de tal manera, que la disposición de los correspondientes pares Aµv?/Dµ tiene lugar en niveles paralelos. La sucesión de los niveles puede realizarse en la forma Aµivt??(+)Dl , Aµ2v2?2(+)D2 , µ3v3?3(+)D3 , ... , Aµnvn?n(+)Dn 25 ( quivalent dazu en der Form AµtVi?jC-jDl, Aµv2?2(-)D2 , Aµ3v3?3(-)D3 , ... , Aµnvn?n(-)Dn) o también, por ejemplo, en la forma Aµ1v1??(+)Dl,Aµ2V2?2(-)D2,Aµ3v3?3(-r-)D3, ... , Aµn-?vn_1?n-?(-/+)Dn -1, Aµnvn?n(+/-)Dn. Cuando las unidades Aµv? están dis¬ 30 puestas, p.ej. en seriem entonces se encuentran las unidades Dµ en el primer caso también en una serie en un lado (el lado "derecho"), en el último caso al er - 35 nando en dos series en los lados opuestos a la cubeta para muestras. También es concebible desplazar los niveles uno contra el otro (translación) . Pero esto sólo es apropiado, generalmente, cuando la radiación de excitación emitida por las unidades Aµv? sigue incidiendo perpendicularmente sobre el lado exterior de la cubeta para muestras. Pero esto está asegurado solamente en caso de cubetas con sección transversal rectangular y no con sección transversal redonda. 10 Además, estos planos también pueden estar torcidos uno hacia el otro (rotación) . Mirando (proyección) a lo largo del eje longitudinal de la cubeta los ejes ópticos que pertenecen a dos unidades Aµv? vecinas 15 forman, por tanto, un ángulo, que varía de entre 0 y 360°, por ejemplo, se obtienen en el caso de n igual a 2, 3, 4, 5 o 6 (y dada una disposición regular, hel- coidal) ángulos correspondienes entre las unidades Aµv? vecinas de 180, 120, 90, 72 o bien 60°. Para n 20 igual a 3, 4, 5 o 6 implican ángulos complementarios de 240, 270, 288 o bien 300° (ó -120, -90, -72 o bien -60°) una correspondiente helicidad contraria en la disposición (no se da en el caso de n igual a 2, es decir, 180°). Cabe mencionar, que, naturalmente, los 25 planos no sólo pueden estar presentes según la sucesión Aµ1v1?1(+)D1, Aµ2v2?2(+)D2 , Aµ3V3?3(-t-)D3 , ... , Aµnvn?n(+)Dn (equivalente a esta en la sucesión µiV???(-)Dl , Aµ2v2?2(-)D2 , Aµ3v3?3(-)D3 , ... , Aµnvn?n(-)Dn) sondern ebencasos , por ejemplo, en la sucesión 30 Aµ1v???(+)Dl,Aµ2v2?2(-)D2,Aµ3v3?3(+)D3, ... , Aµn_?vn-??n-?(-/+)Dn -1, Aµnvn?n(+/-)Dn . Para n igual a 2 (180°) o 4 (90°) entra en consideración, generalmente, una cubeta de 35 sección transversal rectangular, para n igual a 3 (120°), 5 (72°) o 6 (60°) se suele usar (lo mismo vale, naturalmente, también para n igual a 2 o 4) una cubeta de sección transversal circular. La combina - .ción aus excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ puede realizarse con las dispsiciones mencionadas tanto simultánea como sucesivamente.

II.2) AµtV?<»?/D,Aµ?vi??/D, ... , Aµn-?vn_??n-?/D, Aµnvn?n/D (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada vez en las zonas de solapa por la correspondiente unidad Aµv? y detectadas con una unidad de detección D, p.ej. un detector de múltiples unidades de onda. a) La disposición de las unidades Aµv? puede realizarse según la descripción bajo II.1) . Cuando las unidades Aµv? están dispuestas en serie (caso ai) , la unidad D, dado un tamaño suficiente de la ventana de incidencia de radiación o cuando se usa una correspondiente óptica de reproducción, firmamente en la correspondiente posición ?. De lo contrario (caso a2) , debe realizarse una redirección (por translación) en la posición correspondiente. En el caso de las otras disposiciones de las unidades Aµv? (caso a3) debe tener lugar una redireccíón (por translación y rotación) de la unidad D en la correspondiente posición ?. De modo que en el caso a puede realizarse la combinación a partir de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ tanto simultánea como también sucesivamente, en los casos a2 y a3 sólo sucesivamente . b) Básicamente, también es concebible una disposición en analogía a b) bajo el punto 1.3), es decir, el eje óptico de la unidad D se encuentra paralelamente al eje longitudinal de una cubeta para muestras cilindrica, las unidades Aµv? están dispuestas como indicado II.1). Sin embargo, aquí la radiación cada vez emitida por las correspondientes sustancias marcadoras Mµ recorrer diferentes distancias hasta llegar a la unidad D a través de la muestra, o bien se dan diferentes ángulos sólidos, con las que la radiación fluorescente incide en la unidad D (o bien sus ventanas de detección). Esto puede resultar en inexactitudes y debe ser tomado en consideración en forma correspondiente en las evaluaciones. Pero principalmente, se puede realizar con estas disposiciones la combinación a partir de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ tanto simultánea como también sucesivamente.

II.3) Aµ?v???/D(l,2, ... ,n-l,n) , Aµ2v2?2/D (1 , 2 , ... ,n-l,n) , ... , Aµn-? n-??n-?/D(l,2, ... ,n-l,n) , Aµnvn?n/D (1 , 2, ... ,n-l,n) (las n sustancias marcadoras Mµ son excitadas cada vez en las zonas de solapa Lµv? por las correspondientes unidades Aµv? y detectadas) . a) Las disposiciones equivalen, substancialmente, a aquellas decritas en a) bajo el punto II.2) . Pero en lugar una unidad D (p.ej. un detector de múltiples unidades de onda) se usa una unidad de detección, que contiene, p.ej. (caso ai) fotodetectores intercambiables y/o filtros ópticos intercambiables (y eventualmente polarizadores) diµ. Además, D puede contener también varios fotodetectores diµ, a los que se dirige la correspondiente radiación fluorescente emitida, p.ej. (caso a2) mediante fibras guíaonda o haces de fibras guíaonda. Con una unidad D según el caso ai 10 se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo sucesivamente, ya que es necesarios cambiar las subunidades diµ y eventualmente, tamnbién rediri- gir (por translación y rotación) la unidad D. Con 15 una unidad D según el caso a2 se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sucesivamente y potencialmente (dada una disposicón apropiada de las unidades Aµv?) también simultáneamente, cuando se 20 enfocan, p.ej. por medios ópticos apropiados (p.ej. mediante una lente óptica) la radiación fluorescente emitidasimultáneamente por las sustancias marcadoras Mµ sobre las fibras guíaonda o haces de fibras guíaonda. 25 b) Las disposiciones equivalen, substancialmente, a aquellas descritas en b) bajo el punto II.2) . Pero en lugar una unidad D (p.ej. un detector de múltiples unidades de onda) se usa nuevamente una 30 unidad de detección, que contiene, p.ej. (caso ai) fotodetectores intercambiables y/o filtros ópticos intercambiables (y eventualmente polari- 35 zadores) diµ. Además, D puede contener también varios fotodetectores diµ, a los que se dirige la correspondiente radiación fluorescente emitida, p.ej. (caso a ) mediante fibras guíaonda o haces de fibras guíaonda. Con una unidad D según el caso ai se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sólo sucesivamente. Con una unidad D según el caso a2 se puede realizar la combinación de excitación y detección de las n sustancias marcadoras Mµ sucesivamente y potencialmente también simultáneamente. Lo dicho en b) bajo el punto II.2) respceto a las diferentes distancias y ángulos sólidos de la radiación fluorescente emitida por las sustancias marcadoras Mµ valen, naturalmente, también aquí.

II.4) Aµ1v??1/Aµ2v2?2/.../Aµn_?vn_??n-?/Aµnvn?n/Dl/D2/.../Dn-l/D n (las n sustancias marcadoras son excitadas simultáneamente en las zonas de solapa Lµv? por las correspondientes unidades Aµv? y detectadas simultáneamente por las unidades Dµ de ektiert) .

La excitación o bien detección simultáneas de las n sustancias marcadoras puede realizarse, en principio, con las disposiciones y relaciones geonétricas tal y ccomo están descritas en el punto II.1), el punto II.2) en el caso a de a), el punto 11.2) en b) , el punto II.3) en el caso a2 de a) y el punto 11.3) en el caso a2 de b) .

Las disposiciones y construcciones posibles de los aparatos de deteccións en caso I, es decir, en la excitación en el mismo volumen de muestra son apropiadas, por regla general, tan sólo para la excitación sucesiva de las n sustancias marcadoras Mµ.

Las disposiciones y construcciones posibles de los aparatos de deteccións en caso II, es decir, en la excitación en diferentes volúmenes de muestra, son apropiadas, por regla general, para la excitación simultánea de todas las n sustancias marcadoras Mµ. Entre estas disposiciones y construcciones posibles de los aparatos de detección son especialmente apropiadas aquellas, en las que se puede detectar simultáneamente la correspondiente radiación fluorescente emitida en lugares diferentes .

Generalmente, la radiación de excitación de las unidades Aµv? puede ser irradiada en forma pulsada o continua, es decir, en el modo co tinous-wave (CW-) . Además, la intensidad de la radiación de excitación de cada unidad Aµv? puede modularse con una frecuencia fµv?, de modo que esta unidad Aµv? excite también una radiación flourescente de intendsidad modulada con fµv? de la sustancia marcadora Mµ, que puede ser medida selectivamente por Dµ. Generalmente, se usan aquí frecuencias de modulación, que se diferencian de la frecuencia de la red de corriente eléctrica (generalmente, 50 Hz) así como del múltiple semientero y entero de esta frecuencia. En el caso de la excitación y detección simultáneas de la radiación fluorescente emitida por todas las sustancias marcadorasn Mµ, se puede alcanzar por medio de las diferentes frecuencias de modulación fµv? una coordinación de la radiación fluorescente de la sustancia marcadora Mµ respectiva, así como una mejor relación de señal/ruido. Para la detección de las señales de fluo-rescencia de intensidad modulada se suele usar el procedí' miento "lock-in" .

Una modalidad preferida del procedimiento de la invención para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invención, consiste en la excitación sucesiva de las n sustancias marcadoras Mµ por sus correspondientes unidades Aµv? en el mismo volumen de muestra y la detección (sucesiva) detección de la correspondiente radiación fluorescente por Mµ.

Otra modalidad preferida del procedimiento de la invención para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invención, consiste en la excitación simultánea de las n sustancias marcadoras Mµ por sus correspondientes unidades Aµv? en el mismo volumen de muestra y la detección simultánea o sucesiva de la correspondiente radiación fluorescente por Mµ mediante un detector de múltiples longitudes de ondas.

Otra modalidad preferida del procedimiento de la invención para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invención, consiste en la excitación simultánea de las n sustancias marcadoras Mµ por una unidad A policromática en el mismo volumen de muestra y la detección simultánea o bien sucesiva de la correspondiente radiación fluorescente por Mµ mediante un detector de múltiples longitudes de ondas.

Otra modalidad preferida del procedimiento de la invención para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invención, con-siste en la excitación simultánea de las n sustancias marcadoras Mµ por la correspondiente unidad Aµv?, modulada en su intensidad por la frecuencia fµv? en el mismo volumen de muestra y la detección simultánea o sucesiva de la correspondiente radiación fluorescente emitida por Mµ y de intensidad modulada.

Otra modalidad preferida del procedimiento de la invención para la detección de sustancias marcadoras en líquidos, que han sido marcados según el procedimiento de la invención, consiste en la excitación simultánea de las n sustancias marcadoras Mµ por sus correspondientes unidades Aµv? en cada vez diferentes volúmenes de muestra y la detección simultánea o sucesiva de la radiación fluorescente emitida por Mµ, por medio de la correspondiente unidad Dµ.

Preferentemente, se usan en las unidades Aµv? como fuente de radiación ctiµvco láseres semiconductorizados, diodos semiconductores o láseres sólidos. Si se se desea una excitación de todas o una parte de las sustancias marcadoras Mµ en su zona principal de absorciónen Lµ(x) (con x igual a, p.ej. 80, 90, 95 o 99) , entonces se usa en las unidades Aµv? como fuentes de radiación aiµv?, preferentemente, láseres semiconductorizados, diodos semiconductores o láseres sólidos, que presentan una emisión máxima en la zona espectral de ?max - 100 nm hasta ?ma? + 20 nm, representando ?max la longitud de onda del máximo de absorción de la correspondiente sustancia marcadora Mµ. Estas emisiones máximas se encuentran, entonces, generalmente, en la correspondiente zona principal de absorción de las correspondientes sustancias marcadoras. Alternativamente, también se puede adaptar, a como ya se ha mencionado más arriba, la zona principal de absorción Lµ(x), seleccionando un x apropiado.

Como fotodetectores diµ en las unidades Dµ se usan, preferentemente, detectores semiconductores, especialmente, fotodiodos de silicio o fotodiodos de germanio.

Cuando se desea una excitación de todas o una parte de las sustancias marcadoras Mµ en su zona principal de absorciónen Lµ(x) (con x igual a, p.ej. 80, 90, 95 ó 99), entonces se usan como filtros ópticos en los fotodetectores diµ de las unidades Dµ, preferentemente, filtros de interferencia y/o filtors de cantos con un canto de transmisión de onda corta en la región fie ?max hasta ^^x. + 80 nm, representando A^ax la longitud de onda del máximo de absorción de la correspondiente sustancia marcadora Mµ..

En caso dado, se pueden usar aún uno o varios polarizadores de NIR.

El ejemplo siguiente ilustra la invención en más detalle.

Ejemplo 1: Una mezcla a partir de cada vez 0,5 ppm de A (PcH2- (3 ' -metife-niloxi)4) y de B (PcH2- (3 ' -metilpiperidino) 4) es disuelta en carburante otto sin plomo (ROZ 95) (PcH2 caracteriza el sistema de ftalocianina, enel que Me1 (fórmula la) significa dos veces hidrógeno y cada vez un radical de los pares de radicales R1 y R4, R5 y R8, R9 y R12, así como R13 y R16 en la fórmula la significa hidrógeno, el otro radical significa 3 '-metilfen-liloxi o bien 3 ' -metilpiperidino) .

Los espectros de absorción de las sustancias marcadoras A y B presentan a longitudes de onda de 685 y 754 nm de los láseres usados las extinciones indicadas en la tabla 1 (en unidades arbitrarias) : Tabla 1 Se observa, que al exitar A con einem láser de 685-nm se excita simultáneamente también B, pero en menor grado.

Al excitar A con un láser de 685 nm y B con un láser de 754 nm, la señal de fluorescencia de B se compone repectivamente de una proporción obtenida por la excitación de B con el láser de 685 nm y por la excitación de B con el láser de 754 nm.

Usando A y y una sustancia marcadora (flasa) B', que no presenta inguna zona de solapa con A, y se escita A con un láser de 685 nm y B' con un láser de 754 nm, la señal de fluorescencia medida en la zona de fluorescencia de B' sería menor por el monto equivalente a la no excitación de B' con el láser de 685 nm.

Además, para asegurar la identidad de las mzeclas de sustancias marcadoras a partir de A y B (o bien de los líquidos marcados con las mismas) se puede determinar, por una parte, la intensidad total de la radiación fluorescente, que pasa a través de filtors que se encuentran en las zonas de fluorescencia de las sustancias marcadoras A y B, en la excitación simultánea, por otra parte, las intensidades individuales en la excitación con el primer y en la excitación con el otro láser. Estas tres medidas forman juntas un (posible) índice digital inconfundible.

Ejemplo 2: Una mezcla a partir de cada vez 0,5 ppm de B (PcH - (3 ' -metil-piperidino)4) y de C (NcH2- (OC4H9) g) es disuelta en carburante Otto sin plomo (ROZ 95) (NcH2 caracteriza el sistema de nafta-locianina, en el que Me2 (fórmula II) significa dos veces hidrógeno y todos los pares de radicales Y1 e Y2, Y3 e Y4, Y5 e Y6, así como Y7 e Y8 en fórmula II significan OC4H9) .

Los espectros de absorción de las sustancias marcadoras A y B presentan a longitudes de onda de 754 y 855 nm de los láseres usados las extinciones indicadas en la tabla 2 (en unidades arbitrarias) : Tabla 2 Se observa, que al excitar B con un láser de 754 nm se excita también simultáneamente C, pero en menor grado.

En la excitación de B con un láser de 754 nm y de C con un láser de 855 nm, la señal de fluorescencia de C se compone cada vez de una parte obtenida por la excitación de C con el láser de 754 nm y por la excitación de C con el láser de 855 nm.

Usando B y una sustancia marcadora C (falsa) , que no presenta ninguna zona de solapa con B, y se excita B con un láser de 754 nm y de C con un láser de 855 nm,l a señal de fluorescencia medida en la zona de fluorescencia de C sería menor por el monto equivalente a la no excitación de C con el láser de 754 nm.

Además, para asegurar la identidad de la mezcla de sustancias marcadoras a partir de B y C, se puede, a como ya se ha indicado en el ejemplo 1 , una determinación de las señales de fluorescencia de la excitación simultánea y la excitación individual .

Ejemplo 3: Una mezcla a partir de cada vez 0,5 ppm de los compuestos A, B y C es disuelta en carburante Otto sin plomo (ROZ 95) y excitada simultáneamente con 3 láseres a 685, 754 y 855 nm. La luz fluorescente resultante es filtrada por tras filtros de paso de banda (longitudes de onda pasadas a 720, 790 y 860 nm) y detectada con la ayuda de un diodo de pin de silicio. Se obtienen las intensidades de fluorescencia indicada en la tabla 3 (unidades arbitrarias) : Tabla 3 Ejemplo 4: Una mezcla a partir de 2/9 (0,22) ppm del compuesto A, 8/9 (0,88) ppm del compuesto B y 8/9 (0,88) ppm del compuesto C es disuelta en carburante Otto sin plomo (ROZ 95) y excitada simultáneamente con 3 láseres a 685, 754 y 855 nm. La luz fluorescente resultante es filtrada a través de tres filtros de paso de banda (longitud de onda pasada a 720, 790 y 860 nm) y detectada con la ayuda de un diodo de pin de silicio. Se obtienen las intensidades de fluorescencia indicadas en la tabla 4 (unidades arbitrarias) : Tabla 4 De los ejemplos 3 y 4 se observa, que (dada una calibración correspondiente) es posible diferenciar las diferentes relaciones de las sustancias marcadoras entre si y a la vez diferentes cantidades absolutas de las sustancias marcadoras por medio de sus respectivos señales de fluorescencia.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. El método para marcar líquidos (diferentes de los líquidos que consisten o que incluyen el material biológico) utilizando cuando menos dos marcadores, en donde los marcadores absorben en la región de 600-1200 nm del espectro y re-emiten luz fluorescente, y el rango de absorción de cuando menos un marcador se superpone con el rango de absorción de cuando menos otro marcador.

2. El método de la reivindicación 1, en donde se utilizan marcadores cuya longitud de onda de absorción máxima respectiva es en la región de 600-1200 nm del espectro.

3. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde se adicionan n marcadores, siendo n un entero de 2 a 10.

4. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde se adicionan n marcadores, siendo n un entero de 2 a 6.

5. El método de la reivindicación 1 ó 2, en donde se adicionan n marcadores, siendo n un entero de 2 a 4.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde los marcadores adicionados son compuestos que se seleccionan del grupo que consiste en: ftalocianinas sin metal y con metal, naftalocianinas sin metal y con metal, complejos niquel-ditioleno, compuestos aminio de aminas aromáticas, colorantes metino, colorantes del ácido squarico [sic] y colorantes del ácido crocónico [sic].

7. Un método para detectar marcadores en líquidos (diferentes de los líquidos que consisten en o que incluyen el material biológico) marcados por el método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, el cual comprende el uso de fuentes luminosas que emiten radiación en los rangos de absorción de los marcadores y detectar la luz fluorescente remitida por los marcadores, cuando menos una de las fuentes luminosas emitiendo radiación en el rango de absorción traslapado de cuando menos un marcador con el del cuando menos otro marcador y el número de las fuentes luminosas siendo menor que o igual al número de marcadores.

8. El método como se reclama en la reivindicación 7, en donde las fuentes luminosas son rayos láser semiconductores, diodos semiconductores o rayos láser en estado sólido.

9. Los líquidos (diferentes de los líquidos que consisten en o incluyen el material biológico) marcados por el método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.