MXPA00002570A - Uso de ifn-alfa y amantadina para el tratamiento de la hepatitis c cronica - Google Patents

Abstract

La presente invención provee el uso de IFN-a en asociación con Amantadine para la manufactura de medicamentos para el tratamiento de infecciones crónicas de hepatitis C . La presente invención provee también medicamentos que contienen IFN-a- y Amantadine como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en terapia de infecciones crónicas de hepatitis C. La presente invención provee además un método para tratar infecciones crónicas de hepatitis C en pacientes que necesitan dicho tratamiento que comprende administrar una cantidad de IFN-a en asociación con una cantidad de Amantadine que es eficaz para tratar la hepatitis C.

Description

USO DE IFN-ALFA Y AMANTADINA PARA EL TRATAMIENTO DE HEPATITIS C CRÓNICA Campo de la Invención La presente invención está relacionada con el tratamiento de las infecciones de hepatitis 0 crónica, mediante el uso de una cantidad de IFN-a en asociación con Amantadine que es eficaz para tratar hepatitis C.

Antecedentes de la Invención Los interferones (IFNs) son proteínas naturales que tienen actividad antiviral, antiproliferativa e inmunoreguladora . Se conocen cuatro clases distintas de interferones que existen en los seres humanos (Pest a et al (1987) Ann. Rev. Biochem 5_ß 727-777 y Emanual & Pestka (1993) J. Biol. Chem. 266, 12565-12569) . La familia IFN-a representa la clase predominante de IFNs producida por leucocitos periféricos de la sangre estimulados (Pestka et at, loe. cit.; Havell et al (1975) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 72_, 2185-2187; Cavalieri et al. (1977) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 74_ 3287-3291}, y lineas de células linfoblastoideas y mieloblastoideas REF.: 32975 (Familletti et al. (1981) Antimicrob. Agents. Chemother. 2_0 5-9). El efecto antiviral de IFN-a se logra no por la influencia directa de los mismos virus, sino por una actividad en sus células que constituyen el objetivo, en el sentido de una protección contra la infección viral. Los interferones pueden ejercer efectos sobre los tumores cancerosos y pueden influenciar el sistema inmunitario del cuerpo debido a que inactivan, por ejemplo, los macrófagos y las células NK e intensifican la expresión de varios constituyentes inmunológicamente significativos de la membrana celular. Los detalles de la preparación del interferón-ADNc y la expresión directa de los mismos, especialmente en E . Coli, han sido objeto de muchas publicaciones. Es asi, que por ejemplo, la preparación de interferones recombinantes se conocen, por ejemplo, por Nature 295 (1982), 503-508, Nature 284 (1980), 326-320, Nature , 290 (1981), 20-26, Nucleic Acids Res. 8_ (?980), 4057-4074, asi como también las Patentes Europeas Nos. 32134, 43980 y 211148.

Comúnmente se usa monoterapia con IFN-a en el tratamiento de las infecciones crónicas de hepatitis, pero sin embargo, este tratamiento no siempre es eficaz . La amantadine ha sido propuesta como tratamiento de monoterapia para la hepatitis crónica de hepatitis C (JP Smith et al, "Tratamiento de hepatitis C crónica con clorhidrato de amantadina, Abstract of the Annual Meeting of the American Gastreoenterology Association", Mayo 1996). Sin embargo, este tratamiento con monoterapia no siempre responde con un buen resultado para todos los pacientes . La terapia de combinación puede ser por lo tanto más eficaz que cualquier monoterapia.

Descripción de la Invención La presente invención provee por lo tanto el uso de IFN-a en asociación con Amantadine para la manufactura de medicamentos para el tratamiento de las infecciones crónicas de hepatitis C. La presente invención provee también medicamentos que contienen IFN-a y Amantadine como preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en terapia de infecciones crónicas de hepatitis C. Además, la presente invención provee un método para el tratamiento de infecciones crónicas de hepatitis C en pacientes que necesitan dicho tratamiento que comprende administrar una cantidad de IFN-a en asociación con una cantidad de Amantadine que es eficaz para tratar hepatitis crónica C. El término "IFN-a, tal como se usa aqui incluye IFN-as derivados de cualquier material natural (por ejemplo de leucocitos, fibroblastos, linfocitos) o de material derivado de los mismos, (por ejemplo lineas de células), o de los preparados con técnologia de ADN recombinante. Los detalles de la donación de IFN-a y de la expresión directa de la misma, especialmente en E coli , han sido objeto de muchas publicaciones. La preparación de IFN-as recombinantes ha sido dada a conocer, por ejemplo por Goeddel et al. (1980) Nature 284, 316-320 y (1981), Nature 290, 20-26, y Patentes Europeas Nos. 32134, 43980 y 211148. Existen muchos tipos de IFN-a tales como IFN-al, IFN-a2; y además sus subtipos incluyendo pero sin limitarlo a IFN-a2A; y, IFN-a2B, y IFN-a2C e IFN-alI, (también designado IFN-all o ?-IFN) . El término "IFN- a" también incluye IFN- a de consenso obtenible en Amgen o mezclas de IFN- as naturales y/o recombinantes. IFN-as. El USO de IFN- a2A es el preferido. La manufactura de IFN-a2A ha sido descrita en las Patentes Europeas Nos. 43980 y 211148. El IFN- a usado en esta invención puede conjugarse con un polimero tal como un polialquilen glicol (substituido o no substituido), por ejemplo polietilen glicol, para formar PEG IFN-a. La conjugación puede llevarse a cabo mediante varios ligadores conocidos en el arte, en particular, mediante ligadores tales como los descritos en las solicitudes de patentes Europeas, publicación Nos. 0510356 y 593868 y la Solicitud de Patente Europea No. 97108261.5. El peso molecular del polimero, que preferiblemente es polietilen glicol, puede estar comprendido entre 300 hasta 30.000 daltons, y uno o más, preferiblemente uno a tres polimeros pueden conjugarse con IFN- a. Un IFN-a preferido se forma usando IFN- a2A. La Amantadine, que es triciclo [ 3.3.1. I3' 7] decano-1-amina, se describe en el Índice Merck Index, compuesto No. 373, Décima Edición. Su manufactura se describió en la patente norteamericana No. 3.152.180. Para llevar a la práctica la invención, se administran IFN-a y Amantadine a un paciente que sufre infección crónica de hepatitis C, en cantidades suficientes para eliminar o por lo menos para aliviar uno o más de los signos o síntomas de la hepatitis crónica C incluyendo elevado ALT, prueba positiva a los anticuerpos anti-HCV, presencia de HCV demostrada mediante una prueba positiva al HCV-ARN, estigmas clínicos de enfermedades crónicas del higado y deterioro hepatocelular . La dosificación de IFN- a para llevar a la práctica la terapia de combinación de esta invención es de aproximadamente 1 a 6 millones de unidades internacionales (Ul) administradas dos veces o tres veces por semana, dia por medio o diariamente. La dosificación preferida para llevar a la práctica la terapia de combinación de esta invención es de aproximadamente 3 millones de Ul administradas tres veces por semana.

La dosificación de Amantadine para llevar a la práctica esta invención es de aproximadamente 100 a 400 mg por dia, preferiblemente 200 mg . Esta dosificación diaria puede administrarse una vez por dia en una sola dosis o en dosis divididas dos o tres veces por dia. La Amantadine se administra al paciente en asociación con IFN- a, es decir la dosis de IFN- a se administra durante el mismo periodo de tiempo o en periodos diferentes a los periodos en los que el paciente recibe dosis de Amantadine. Actualmente, las formulaciones IFN-a, no son eficaces cuando se administran por via oral, de manera que el método de administración preferido de IFN-a, es el parenteral, preferiblemente mediante inyección (es ) subcutánea ( s ) o intramuscular (es ) . La Amantadine puede administrarse por via oral, en cápsulas o en forma de tabletas en asociación con la administración parenteral de IFN-a. Naturalmente se contemplan otros tipos de administración de ambos medicamentos en la forma en la que son asequibles, tal como en forma de administración como roció nasal, por via transdérmica, mediante supositorios, en forma de liberación sostenida, etc. Será apropiada cualquier forma de administración con la condición de que se administren las dosis adecuadas sin destruir el ingrediente activo. La eficacia del tratamiento puede determinarse mediante pruebas clínicas controladas de la terapia de combinación versus moroterapia. La eficacia de la terapia de combinación para aliviar los signos y síntomas de infecciones crónicas de hepatitis C y la frecuencia y la gravedad de los efectos secundarios se compara con la monoterapia previa con IFN-a, y Amantadire. Se evalúan tres poblaciones que sufren de infecciones crónicas de hepatitis C 1. Pacientes que no fueron previamente tratados. 2. Pacientes que fueron previamente tratados con IFN-a, o con cualquier otra droga y que subsiguientemente sufrieron recaídas. 3. Pacientes que no respondieron a tratamientos previos con IFN-a, o con cualquier otra droga. La eficacia de la terapia de combinación se determinará mediante el grado hasta el cual se aliviaron los signos o síntomas de hepatitis crónica. Ej emplo Efecto Antiviral de Amantadine y de IFN-a, 2A Contra el Virus de la Hepatitis C en Células Mononucleares de Sangre Periférica (PBMC) de Pacientes con Hepatitis Crónica Se analizaron células mononucleares de pacientes con hepatitis crónica C (sero positivos a anti-HCV y HCV ARN, con hepatitis crónica histológicamente demostrada) , con el propósito de determinar la presencia de HCV ARN, usando transcripción inversa y técnicas de PCR con cebadores universales de la región no codificadora 5' altamente conservada del genoma HCV (Navas et al., J. Hepatol. 21, 182-186(1994)). Se efectuó tipificación y subtipificación de genomas HCV mediante análisis RFLP de los productos de PCR (Navas et al, J. Clin. Microbiol. 21, 317-321 (1997)). Para los propósitos de este estudio, únicamente se consideraron los casos infectados por un solo genotipo, con el fin de minimizar la posible interferencia de genotipos múltiples, en la presente población, siendo prevaleciente el subtipo "Ib de HCV (Pernas et al. J. Gen. Virol. 76, 415-420 (1995)). Por lo tanto, las PBMC positivas a HCV ARN obtenidas a partir de 15 pacientes, fueron analizadas i n vi tro para determinar los efectos del tratamiento con PBMC de 10 dadores sanos apareados que se usaron como controles y se analizaron de manera similar Se aislaron PBMC de sangre venosa heparinizada mediante sedimentación con gradiente de Ficoll-Hypaque. Se aislaron las PBMC de irterfase, se lavaron dos veces con solución salina regulada con fosfato, y se suspendieron en RPMI . Se verificó la viabilidad de estas células mediante exclusión con azul tripano. Se cultivaron las PBMC por duplicado en una concentración de 2 x 106 células viables/ml en conjuntos de 6 pozos con cultivos de tejidos bajo atmósfera húmeda con 5 % de C02 durante 7 dias. Los cultivos se mantuvieron sin mitógenos (medio solamente) o se estimularon con mitógenos únicos ( Fitohemaglutinina (PHA) ó Lipopolisacárido (LPS) infecciones crónicas de hepatitis C o con PHA además de LPS (10 µg/ml cada uno) (Martin et al, Cytokine 8, 313-317 (1996)). La proliferación de PBMC, y la posible citotoxicidad inducida por drogas, se midieron usando proliferación de células no isotópicas y ensayos de citotoxicidad El efecto de los tratamientos experimentales con Amantadine solamente, en combinación con IFN-a2A y los de IFN-a2A, solamente, se establecieron mediante el ensayo . de HCV ARN en células mononucleares cultivadas, en comparación con las PBMC no tratadas de pacientes (Martin et al supra); los controles de especificidad fueron tal como los descritos previamente por Navas et al. en J. Hepatol. 21,182-186 (1994). El tratamiento de células mononucleares de dadores sanos con Amantadine solamente, en combinación con IFN-a2A, o de IFN-a2A solo, sirvieron como controles. Los cambios de las concentraciones de HCV ARN se midieron mediante el ensayo AMPLICOR™ HCV MONITOR (Roche Diagnostic System, Inc. Branchburg). Las dosis de amantadine en el rango fisiológico de l-5µM (2µM corresponde al nivel en la sangre, terapéuticamente recomendado; dosis diaria de la droga: 100 mg/12 horas) no afectaron la viabilidad de la célula y tuvieron efectos menores en la respuesta a los mitógenos durante las PBMC aisladas de pacientes con HCV y de dadores sanos. Las dosis más altas de Amantadine (50 y 500µM) se investigaron solamente en PBMC de dadores sanos. La dosis de 50µM disminuyó levemente la proliferacián de PBMC, mientras que la dosis de 500µM mostró un marcado efecto anti-proliferacíßn . Todos los cultivos de PBMC de pacientes con HCV, pero no de los dadores, fueron positivos a HCV ARN con o sin mitógenos, evaluados mediante una modificación el ensayo AMPLICOR™ HCV MONITOR. La dosis de 2µM Amantadine redujo la cantidad promedio da HCV ARN (cantidad de copias/µg ARN) en < 70% solos o en combinación con lOOOUI/ml de IFN-a2A. En un paciente individual se obtuvieron diferentes grados de reducción de la concentración de HCV ARN en PBMC después de tratamiento con 1, 2 y 5 µM de Amantadine solo y en combinación con 1000 ' Ul/ml de IFN-a2A (Tabla 1). Además, HCV ARN fue negativo en hasta 3/15 (20 %) de cultivos de PBMC. (Tabla 1). TABLA 1. Cantidad de casos con reducción o desaparición de HCV ARN en PBMC después de tratamientos experimentales (n = 15) Amantadine IFN-a2A Reducción de la concentración de HCV ARN (µM) (Ul/ml) >25: >50% >75% Negativo 1 0 3 2 3 0 2 0 5 2 4 1 5 0 2 2 3 3 1000 • 0 2 3 2 1000 3 3 4 0 2 1000 3 1 3 3 1000 0 0 2 3 HCVARN resultó negativo en cultivos de PBMC de 1/15 (7%) y 3/15 (20%) pacientes con las dosis de 2 y 5µM de Amantadine respectivamente en comparación con 2/15 (13%) con IFN-a2A solo. Con la combinación de Amantadine y IFN-a2A (20%) los cultivos de PBMC resultaron HCV ARN negativos. La combinación de 2µM de Amantadine / IFN-a2A dio mejores resultados en la desaparición de HCV ARN en PBMC individuales (hasta 20 % de los casos; Tabla 1) mostraron un efecto superior que con las mismas dosis de Amantadine solo.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes :

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Uso de IFN-a en asociación con Amantadine para la manufactura de medicamentos para el tratamiento de infecciones crónicas de hepatitis C.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cantidad de IFN-a aproximadamente 1 a 6 millones de Ul dos veces o tres veces por semana, un día si y un día no.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cantidad de Amantadine es de 100 a 400 mg diaria, preferiblemente 200 mg diarios.

4. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 en el que IFN-µa es IFN-a2A o PEG-IFN-0C2A.

5. Medicamentos caracterizados porque contienen IFN-a y Amantadine como preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en terapia de infecciones crónicas de hepatitis C,

6. Medicamentos de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizados porque IFN-cc es IFN-a2A.

7. Medicamentos de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizados porque IFN-a es PEG-IFN-a.

8. Medicamentos de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizados porque IFN-a es PEG- IFN-0C2A.

9. Un método para tratar infecciones crónicas de hepatitis C, caracterizado porque comprende administrar una cantidad de IFN-a en asociación con una cantidad de Amantadine que es eficaz para tratar hepatitis C crónica.

10. El método de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado porque la cantidad de IFN-a administrada en dicho método es de aproximadamente 1 a 6 millones de Ul dos veces o tres veces por semana.

11 El método de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado porque la cantidad de Amantadine administrada en dicho método es de 100 a 400 mg por dia.

12. El método de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque la IFN-a es IFN-a2A o PEG-IFN-a2A.

13. Uso de IFN-a y amantadine para el tratamiento de infecciones crónicas de hepatitis C. •** ' DE HEPATITIS C CRÓNICA RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee el uso de IFN-a en asociación con Amantadine para la manufactura de 5 medicamentos para el tratamiento de infecciones crónicas de hepatitis C La presente invención provee también medicamentos que contienen IFN-a y Amantadine como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en terapia de infecciones 10 crónicas de hepatitis C. La presente invención provee además un método para tratar infecciones crónicas de hepatitis C en pacientes que necesitan dicho tratamiento que comprende administrar una cantidad de IFN-a en asociación con una cantidad de 15 Amantadine que es eficaz para tratar la hepatitis C.