MXPA00000747A - Control biologico para plantas con paenibacillus macerans, pseudomonas putida y sporobolomyces roseus. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a Paenibacillus macerans, Pseudomonas putida y Sporobolomyces roseus que son utiles como agentes de control biologico. Estos organismos son utiles en un metodo para impartir a las plantas proteccion en contra de patogenos de plantas al aplicarlos a las plantas, semillas del plantas o suelos que rodean a las plantas bajo condiciones efectivas para impartir proteccion para las enfermedades de las plantas o plantas producidas de las semillas de las plantas. Los agentes de control biologico son tambien utiles en un metodo para incrementar el crecimiento de la planta el cual involucra su aplicacion a las plantas, semillas de las plantas o suelos que rodean a las plantas bajo condiciones efectivas para incrementar el crecimiento en las plantas o plantas producidas de las semillas de la planta.

Description

CONTROL BIOLÓGICO PARA PLANTAS CON PAENIBACI LUS MACERANS , PSEUDOMONAS PUTIDA Y SPOROBOLOMYCES ROSEUS Campo de la Invención La presente invención se refiere al control biológico para plantas con Pa en iba ci l l u s ma cerans , Pse udomona s pu t ida y Sporobol omyces roseus .

Antecedentes de la Invención Existen aproximadamente 40 productos de control biológico comercialmente disponibles para el control de las enfermedades de las plantas en todo el mundo. Los productos de control biológico están disponibles para controlar muchos patógenos diversos, como se -revisó recientemente por Fravel, et al., "Disponibilidad y Aplicación de Productos de Control Biológico", Biological and Culture Tests for Control of Plant Diseases, 11: 1-7 (1996) . Al menos 27 géneros de hongos, 3 géneros de bacterias y 4 géneros de nemátodos son objetivos para control con estos productos. Más de la mitad de estos productos controlan hongos que REF. : 32666 se alojan en el suelo. Los agentes de control biológico por si mismos son también diversos e incluyen al menos 9 géneros de hongos, 4 géneros de bacterias y un act inomiceto . Los productos de control biológico se usan en una gran variedad de cultivos incluyendo cultivos de invernadero, cultivos en hilera, cultivos de campo, cultivos de campo perennes, y árboles y maderas, asi como en sistemas especiales de cultivo tales como el cultivo de setas. Los productos se aplican de diversas maneras. Pueden atomizarse sobre las plantas o frutos cosechados, empapados en frutos cosechados o sobre las plantas, incorporados dentro del suelo, aplicados como inmersiones en la raiz, usados para tratar semillas o insertados en los árboles o productos de madera. Los productos de control biológico actualmente en el mercado de los Estados Unidos incluyen Aspire, AQ-10, Galltrol A, Norbac 84C, Bio-Save 10, Bio-Save 11, Blightban A506, Victus, Epic, Kodiak, Deny, Mycostop, Binab-T y , T-22G y T-22HB y SoilGard.

Los patógenos se controlan por agentes de control biológico de la misma especie y género que el patógeno en diversos casos. Por ejemplo, el Agrobacterium radiobacter no patógeno se usa para controlar la agalla de corona (Galltrol-A, Nogall, Diegall) . El Fusarium oxysporum no patógeno se usa para controlar F. oxysporum (Biofox C, Fusaclean) y F. moniliforme (Biofox C) . La Pseudomonas solanacearum controla P. solanacearum patógeno (PSSOL), mientras que el P. fluorescens se usa para controlar P. tolass ii (Conquer, Victus) . El Pythium ol igandrum se usa para controlar P. ultimum ( Polygandron ) . Estos agentes pueden trabajar a través de la antibiosis (A . radiobacter; Kerr, A. "Control Biológico de la Agalla Corona a través de la Producción de Agrocin 84", Plant Dis . , 64:25-30 (1980), competencia y resistencia sistémica inducida (Fusaclean; Alabouvette, et al., "Avances Recientes en el Control Biológico de Marchitos de Fusarium" Pestic. Sci., 37:365-373 (1993)), parasitismo (Polygandron; Vesely, D. "Poder Germinador de los Oosporos de Pythium olígandrum en una Preparación en Polvo", Folia Microbiol., 32:502 (1987)) .

Algunos agentes de control biológico controlan solamente un patógeno. Por ejemplo, Conquer y Victus contienen ambos P. fluorescens usado para controlar manchas en setas causadas por P. tolas ii . Los agentes de control biológico se perciben algunas veces como que sirven solamente a mercados de nichos ya que muchos productos tienen una aplicabilidad muy estrecha. En parte debido a esta percepción, diversos productos de control biológico se fabrican por pequeñas compañías. Sin embargo, la mayoría de los agentes de control biológico tienen múltiples patógenos y usos en cultivos. Por ejemplo, el Soil Gard controla el exceso de humedad incitado por Rhizoctonia solani y especies Pythium , sobre plantas en lechos y transplantes de vegetales, asi como Solero tium rolfsii sobre la zanahoria y el pimiento en el campo (Lumsden et al., "Control Biológico del Exceso de Humedad provocado por Pythium ultimum y Rhizoctonia solani con Gl iocladium virens en Mezclas sin Suelos", Phytopathology, 79:361-66 (1989); Ristaino et al., "Influencia de los Aislados de Gliocladium virens y Sistemas de Entrega sobre el Control Biológico de Plagas Sureñas sobre la Zanahoria y el Tomate en el Campo", Plant Dis . , 78:153-56(1994); Ristaino et al., "Solarización del Suelo y el Gliocladium virens Reducen la Incidencia de Plagas Sureñas en el Pimiento Morrón en el Campo", Phytopathology, 84:1114 (1994) ) . Algunos productos aún controlan patógenos disimiles. El Deny controla Rhizoctonia, Pythium r Fusarium, asi como diversos nemátodos. El BlightBan A506 se puede atomizar sobre los árboles, plantas de fresa, tomate y papa, para evitar el daño por heladas y las plagas de fuego causadas por la Erwinia amylovora . La especie Trichoderma puede controlar una gran variedad de patógenos y aparecer en más productos que cualquier otro microbio (Ant i -Hongos ; Binab T; Supresivit; T-22G y T-22HB; Trichopel, Trichoject; Trichodowels, y Trichoseal; TY) . Los productos que contienen especies de control para la especie Trichoderma de Amillaria, Botrytis , Chondrostrenum , Colletotr ichum , Fulvia, Fusarium , Monilia , Nectria , Phytophtora , Plasmopara , Pseudoperonospora , Pythium , Rhizoctonia , Rhizopus , Sclerotinia Scclerotium , Verticillium y hongos de la morriña de la madera.

Diversos productos de control biológico se aplican en medios agricolas de baja diversidad ecológica con objeto de facilitar el establecimiento del agente de control biológico.

Por ejemplo, el SoilGard y T-22G se mezclan con una mezcla de maceta sin tierra. Similarmente el Anti-Fungus se aplica al suelo seguido de vaporización o fumigación. Otros agentes de control biológico se usan para proteger partes de las plantas. El GallTrol-A, Nogall, Diegall y Norbac 84C se aplican todos como inmersiones de raiz en el transplante para prevenir la agalla de corona. El Aspire, Bio-Save 10 y Bio-Save 11 se aplican post-cosecha a cítricos o frutos de poma para proteger estos frutos de las enfermedades post-cosecha. Diversos agentes de control biológico incluyendo el BlueCircle, Epic, kodiak y T-22HB, se aplican como tratamientos de semillas. El Binab se aplica por atomización, mezclado con mezcla de maceta sin tierra, pintándolo en superficies o insertando peletizados en la madera para controlar la morriña en la madera y productos de la madera. El Mycostop se aplica como atomizador, empapado o mediante irrigación'.

Con objeto de que el control biológico sea un componente útil de un sistema integral de administración de plagas, se necesita investigación en diversas áreas criticas. Este enfoque integral se soporta en evaluaciones precisas de las poblaciones de patógenos presentes en un campo agrícola y en el conocimiento de los umbrales económicos del daño de los patógenos. La investigación necesita dirigirse a un entendimiento de los parámetros ecológicos importantes para la producción de los cultivos y la supervivencia y eficacia de los agentes de control biológico, y en identificar y desarrollar nuevos agentes de control biológico para el control de las enfermedades de las plantas. El conocimiento de la biología y ecología del agente de control biológico, patógeno y planta huésped puede ayudar a explotar las fortalezas o debilidades de estos organismos para mejorar el desempeño del control. Similarmente, el conocimiento de las condiciones ecológicas, biológicas y físicas necesitadas para un control biológico exitoso, permitirá la optimización de estas condiciones para alcanzar los mejores niveles posibles de control.

La influencia de la planta huésped en la composición y el tamaño de las comunidades de microbios ha recibido poca atención hasta ahora.

Larkin y colaboradores (Larkin et. al., "Ecología del Fusa ri um oxysporum , especie de hongo. Ni ve um en Suelos Supresores y Conductores al Marchito de Fusa ri um en Sandia", Phytopathology, 83:1105-16 (1993); Larkin et al., "Efecto de las Plantaciones Sucesivas de Sandia en el Fusa ri um oxysporum y otros Microorganismos en Suelos Supresores y Conductores al Marchito del Fusa ri um en Sandia", Pa thology , (1993) ) reportaron un efecto de rizósfero especifico en el cultivo sobre el suelo y comunidades microbianas de rizósferos asociadas con diferentes cultivos de sandia. Un cultivo en particular, Crimson Sweet, promovió el desarrollo de microorganismos antagonistas del patógeno del marchito de Fusa ri um . Se necesita más investigación para determinar el papel de este tipo de interacción en el enriquecimiento del control biológico.

Una barrera para adquirir un entendimiento de los sistemas microbianos del suelo ha sido la falta de técnicas apropiadas para ensayar las muestras de suelos. Los tamaños de la población de muchos microbios de suelo, especialmente hongos, son difíciles de medir precisamente por diversas razones. El término "unidad formadora de colonia" refleja el hecho de que las colonias que se elevan en una placa pueden proceder de por ejemplo, microconidia , macroconidia , clamidós feros , ascosporos, fragmentos hifales u otros propágulos. Además, la eficiencia de recuperación de los propágulos puede diferir de un suelo al siguiente. En algunos casos, tales como con la especie Fusa ri um , los patógenos no se pueden distinguir morfológicamente de otros no patógenos. Además, muchos microbios no son fácilmente cultivados en medios normales, aunque pueden jugar papeles importantes en la supresión de enfermedades, como con el mi croparás i to Sporidesm i um s cl ero t i vorum para el control de caida de lechuga (Adams et al., "Control Biológico Económico de la Caida de Lechuga Sclerotinia por Spori desm i um s cl ero t i vorum" Phytopathology, 80:1120-24 (1990)) . Finalmente, aún cuando los números de propágulos se puedan estimar precisamente, la efectividad de estos propágulos depende de su estado nutricional y de los tipos y tamaños de la población de otros microbios presentes en el sistema de suelos. Todos estas deficiencias se componen por la dificultad de muestreo, particularmente el muestreo de micrositios. Se necesita investigación para desarrollar técnicas precisas, rápidas y confiables para ensayar las comunidades microbianas de suelos .

En el futuro, la investigación debe enfatizar las combinaciones de dos o más agentes de control biológico, ya que las combinaciones pueden proporcionar un control más eficiente o más consistente que un agente simple de control biológico. Por ejemplo, los agentes de control biológico con condiciones ambientales óptimas diferentes, o los agentes de control biológico con mecanismos diferentes de acción se pueden combinar. Los agentes de control biológico pueden actuar aún de forma sinérgica tal como la combinación de Fus a ri um oxysporum con la especie Ps e udom ona s para controlar el marchitamiento por Fusa ri um (Lemanceau et al., "Control Biológico de las Enfermedades por Fusa ri um de las Ps e udomona s Fluorescentes y la Fu sa ri um no patógena, " Crop Prot. 10:279-86 (1991)) . La investigación también se necesita al combinar agentes de control biológico con otros métodos de control. Por ejemplo, el calor subletal ( solari zación ) o la tensión por pesticidas puede debilitar un patógeno, haciéndolo más vulnerable a la acción de los agentes de control biológico (Lifshit-- et al., "El Efecto del Calentamiento Subletal en la Sclerotia de Sclerotium rolfsii", Can. J.

Microbiol., 29:1607-10 (1983); Tjamos et al. "Efectos Nocivos del Calentamiento Subletal y el Talaromyces flavus en Microsclerotia de Verticillium dahliae" . Phytopathology, 85:388-92 (1995) ) . Los sistemas apropiados también necesitan desarrollarse para producción, formulación y entrega de los agentes de control biológico, debido a que estos procesos pueden afectar de forma importante la eficacia del agente de control biológico .

Independientemente de la existencia y uso de los agentes de control biológico en la agricultura, continúa una necesidad de desarrollar agentes de control biológico para nuevas plantas. La presente invención se dirige al cumplimiento de esa necesidad.

Breve Descripción de la Invención La presente invención se dirige a Pa en iba cil l u s ma ceran s , Ps e udomon a s pu t i da y Sporobol omyces ros e u s aislados que son útiles como agentes de control biológico.

Los agentes de control biológico son útiles en un método para impartir a las plantas la protección en contra de los patógenos de las plantas. Este método involucra la aplicación de agentes de control biológico para plantas, semillas de plantas o suelos que rodean a las plantas bajo condiciones efectivas para impartir protección a enfermedades a las plantas y a las plantas producidas de las semillas de las plantas.

La presente invención también se dirige a un método para aumentar el crecimiento de la planta. Esto involucra la aplicación de agentes de control biológico a las plantas, semillas de las plantas y al suelo que rodea a las plantas bajo condiciones efectivas para enriquecer el crecimiento en las plantas o en las plantas producidas de las semillas de las plantas.

Los agentes de control biológico de la presente invención, son altamente útiles en la agricultura para proteger las plantas de una variedad de enfermedades bacterianas, de hongos o virales. Además, estos agentes pueden aumentar el crecimiento de las plantas tratadas. Significativamente, estos efectos se alcanzan sin ser peligrosos a animales o humanos.

Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 muestra ensayos en parejas in vitro para la antibiosis de Fusarium graminearum y F. monili forme por los siguientes protectores biológicos candidatos: A) F. graminearum con y sin Paenibacillus macerans ; B) F. monili forme con y sin Pseudomonas putida y C) F. graminearum con y sin Sporobolomyces roseus .

La Figura 2, muestra semillas de trigo infectadas naturalmente con F. graminearum . La planta a la derecha crece de semilla tratada con Paenibacillus macerans , mientras que la planta a la izquierda crece de semilla sin tratar.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención se dirige a Paenibacillus macerans , Pseudomonas putida y Sporobolomyces roseus aislados, cada uno de los cuales son útiles como agentes de control biológico para impartir protección para las enfermedades de las plantas y para aumentar el crecimiento de las plantas .

El Paenibacillus macerans es una bacteria Gram de vastago variable, formadora de esporas. Se conoce como el aislado 144 y tiene No. de Acceso Embrapa Trigo 144/88.4 Lev, No. Acceso de Cornell Pma007BR-97 y No. Acceso de ATCC . Esta bacteria muestras fuerte antibiosis en contra de Cochl iobolus sativus (mancha /morriña común de la raiz de los cereales), Col letotrichum graminicola (antracnosa del maiz), Fusarium graminearum (costra de cereales, morriña de mazorca/ tallo del maiz) , Fusarium moniliforme (morriña de mazorca/ tallo de maiz), Pyrenophora tritici-repentis (mancha café claro del trigo), Stagonospora nodorum (mancha de Stagonospora nodorum del trigo) , Stagonospora avenae, especie de hongo tritícea (mancha de trigo de Stagonospora avenae) y Stenocarpella maydis (morriña de la mazorca/tallo del maiz) . El Paenabacillus macerans de la presente invención muestra un excelente control de la transmisión a la semilla que transporta Cochliobolus sativus, Pyrenophora triticiriepentis, y Fusarium graminearum en el trigo y de Fusarium monili forme en el maiz. También evita la inoculación aérea de espigas florecientes de trigo con Fusarium graminearum, disminuye la frecuencia de infección del grano por Fusarium, reduce la reducción de peso del grano por Fusarium , y reduce dramáticamente la contaminación del grano por la micotoxina de Fusarium desoxinivalenol . Además, esta bacteria puede usarse para reducir la contaminación de granos y otros productos de plantas con metabolitos secundarios de hongos dañinos. La capacidad endofitica de esta bacteria sugiere aplicaciones adicionales para control de enfermedades en plantas. Las plantas de semilla y otras unidades propagadoras de plantas se pueden inocular para protección de largo plazo de la planta.

La Pseudomonas p tida, es una bacteria de vastago Gram positiva, no formadora de esporas. Se conoce como biotipo B aislado 63 y tiene el No. de Acceso Embrapa Trigo 63/88 4 B, No. de Acceso de Cornell Ppu002BR-97 y No. de Acceso de ATCC . Esta bacteria muestra fuerte antibiosis contra Cochliobolus sativus , Colletotrichum graminicola , Fusarium monili forme , Stagonospora nodorum y Stenocarpel la maydis (morriña de la mazorca/tallo del maiz) . El Pseudomonas putida de la presente invención es efectivo al controlar la transmisión transportada en semillas de Bipolar is sorokinianum y Fusarium graminearum en el trigo y de Fusarium moniliforme en el maiz. También muestra excelente control de Fusarium graminearum en el maiz, actividad en contra de la inoculación aérea de espigas florecientes de trigo con Fusarium, y reduce fuertemente la contaminación de granos por la micotoxina de Fusarium desoxinivalenol .

El Sporobolomyces roseus es una levadura de pigmento rojo. Se conoce como aislado 53 y tiene el No. de Acceso Embrapa Trigo 53/94.535, el No. de Acceso de Cornell Sro001BR-97 y el No. de Acceso ATCC No. . Este agente de control biológico es útil contra la inoculación aérea de las espigas florecientes con Fu sa ri um gram in ea rum , disminuye la frecuencia de infección de granos por Fusa ri um y reduce la contaminación de granos por la micotoxina de Fusa ri um desoxinivalenol . Este es un organismo fuertemente competitivo en substratos orgánicos de colonización y es un esporulador profuso. Puede suprimir la supervivencia y esporulación de patógenos de planta transportados en desperdicios en el residuo de los cultivos y por lo cual reduce la enfermedad en un cultivo plantado posteriormente, especialmente bajo agricultura de conservación de labranza.

Los agentes de control biológico de la presente invención son útiles en un método para impartir a las plantas protección en contra de los patógenos de las plantas. Este método involucra la aplicación de agentes de control biológico a las plantas, semillas de las plantas o suelo que rodea a las plantas bajo condiciones efectivas para impartir la protección a las enfermedades a las plantas y a las plantas producidas a partir de las semillas de las plantas.

El método para impartir la protección de patógenos de las plantas de conformidad con la presente invención, es útil en la protección de las plantas contra una amplia variedad de patógenos incluyendo viruses, bacterias y hongos. Las plantas se pueden proteger en contra de entre otros, los siguientes hongos mediante el uso de la presente invención: Fusarium oxysporum, Fusarium graminearum, Fusarium monili forme , Cochliobolus sativus , Colletotrichum graminicola , Stagonospora nodorum, Stagonospora avenae, Stenocarpel la maydis y Pyrenophora tritici-repentis.

La presente invención también se dirige a un método para aumentar el crecimiento de la planta por la aplicación de agentes de control biológico de la presente invención a las plantas, semillas de las plantas y suelos que rodean a las plantas bajo condiciones efectivas para aumentar el crecimiento de las plantas o de las plantas que resultan de las semillas tratadas.

Con respecto al uso de los agentes de control biológico de la presente invención para aumentar el crecimiento de la planta, diversas formas de promoción o aumento del crecimiento de la planta se pueden alcanzar. Esto puede suceder tan pronto cuando el crecimiento de la planta comienza desde las semillas o después en la vida de la planta. Por ejemplo, el crecimiento de la planta de conformidad con la presente invención, abarca mayor rendimiento, mayor cantidad de semillas producidas, mayor porcentaje de semillas germinadas, tamaño de planta aumentado, mayor biomasa, mayor fruto y más grande, coloración más temprana del fruto y maduración más temprana de la planta y del fruto. Como resultado, la presente invención proporciona un beneficio económico importante a los cultivadores. Por ejemplo, la germinación temprana y la maduración temprana permiten que los cultivos crezcan en áreas en donde las estaciones cortas de cultivo imposibilitarían de otra manera su crecimiento en esa localidad. Un porcentaje aumentado de la germinación de la semilla resulta en cultivos mejorados y en un uso más eficiente de semillas. El mayor rendimiento, tamaño aumentado y producción incrementada de biomasa permiten una mayor generación de utilidad desde una extensión dada de tierra.

Los métodos de la presente invención se pueden utilizar para tratar una amplia variedad de plantas o sus semillas, para impartir protección a las enfermedades y/o aumentar el crecimiento. Las plantas apropiadas incluyen dicotiledóneas y monocotiledóneas . Más particularmente, las plantas de cultivo útiles pueden incluir: alfalfa, arroz, trigo, cebada, centeno, algodón, girasol, cacahuate, maiz, papa, camote, frijol, chícharo, achicoria, lechuga, endibias, col, col de Bruselas, betabel, chirivia, nabo, coliflor, brócoli, rábano, espinaca, cebolla, ajo, berenjena, pimiento, apio, zanahoria, calabacita, calabaza, zuccini, pepino, manzana, pera, melón, cítricos, fresa, uvas, frambuesa, pina, soya, tabaco, tomate, sorgo y caña de azúcar. Ejemplos de plantas ornamentales apropiadas son: Arabidops i s th a l i a na , Sa i n tpa ul i a , petunia, pelargonio, Flor de la Pascua, crisantemo, clavel y z innia .

Los métodos de la presente invención se pueden llevar a cabo a través de una variedad de procedimientos cuando se trata toda o parte de la planta, incluyendo las hojas, vastagos, raices, productos de plantas (por ejemplo, granos, frutos, follaje, desperdicios del cultivo), propágulos (por ejemplo esquejes), etc. Los métodos apropiados de aplicación incluyen atomizado de alta o baja presión, empapado e inyección. Cuando se tratan las semillas de las plantas de conformidad con la presente invención, el agente de control biológico se puede aplicar por atomizado de alta o baja presión, recubrimiento, inmersión o inyección. Los agentes de control biológico también se pueden aplicar al rastrojo del cultivo infestado con patógenos con objeto de reducir el inoculo disponible para infectar el cultivo posterior, especialmente bajo agricultura de labranza de conservación. Otros procedimientos apropiados de aplicación se pueden vislumbrar por aquellos hábiles en el arte. Una vez tratados con los agentes de control biológico de la presente invención, las semillas se pueden plantar en suelo natural o artificial y cultivar usando procedimientos convencionales para producir plantas. Después de que las plantas se han propagado a partir de las semillas tratadas de conformidad con la presente invención, las plantas se pueden tratar con una o más aplicaciones de los agentes de control biológico de la presente invención para impartir la protección de enfermedades a las plantas y/o aumentar el crecimiento de las plantas.

Los agentes de control biológico se pueden aplicar a las plantas o las semillas de las plantas de conformidad con la presente invención solos o en una mezcla con otros materiales. Alternativamente, el agente de control biológico se puede aplicar separadamente a las plantas con otros materiales que se aplican en tiempos diferentes .

Una composición apropiada para tratar plantas o semillas de plantas de conformidad con la presente invención contiene un agente de control biológico en un portador. Los portadores apropiados incluyen agua, soluciones acuosas, suspensiones espesas, sólidos (por ejemplo, turba, trigo, salvado, vermiculita, y suelo pas teuri zado ) o polvos secos. En esta modalidad, la composición contiene 106 hasta 108, preferiblemente 107, unidades formadoras de colonias del agente de control biológico por mililitro del portador.

Aunque no se requiere, esta composición puede contener aditivos adicionales incluyendo fertilizante, insecticida, nematicida y mezclas de los mismos. Los fertilizantes apropiados incluyen (NH )2N0 . Un ejemplo de un insecticida apropiado es el Malathion. Los fungicidas útiles incluyen Captan .

Otros aditivos .apropiados incluyen agentes amortiguadores, agentes humectantes, agentes de recubrimiento y agentes de raspado. Estos materiales se pueden usar para facilitar el proceso de la presente invención. Además, el agente de control biológico se puede aplicar a las semillas de las plantas con otras formulaciones convencionales de semillas y materiales de tratamiento, incluyendo arcillas y polisacáridos.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Ensayos In Vitro para Antibiosis de F. g-ram±near m por protectores biológicos.

En tratamientos a la par, el crecimiento radial (mm.) del F. gram in ea rum en presencia o ausencia de Paeniba cill us ma cerans , Pseudomonas pu t ida o Sporobol omyces roseus se midió como un medio de asegurar la antibiosis del patógeno por los protectores biológicos candidatos. Cada aislado bacteriano o de levadura se transfirió sobre un agar dextrosa de papa de de resistencia (esto es, PDA) en un patrón circular por medio de un embudo de vidrio estéril pequeño. Después de 2 dias de incubación a temperatura ambiente, un disco de agar conteniendo micelios del patógeno se transfirió dentro del centro de la colonia formada por anillos del protector biológico o, en el tratamiento de control, sobre una placa de medios no inoculados. El crecimiento radial del patógeno se midió después de 5 dias de incubación. Hubo un minimo de cuatro réplicas por tratamiento.

Ejemplo 2_. Efecto de los Protectores Biológicos en la Infección de Semilla de Maiz infestada con F. mon±l±formß .

La semilla de maiz naturalmente infectada con F. moníliforme y tratada con Paenibacillus macerans y Pseudomonas putida se ensayaron para recuperación del patógeno. Cien semillas se colocaron en platos de cultivo llenos con 25% de PDA (10 semillas /pía to ) . Las placas se dimensionaron en presencia del patógeno después de la incubación durante 5 dias bajo luces fluorescentes a temperatura ambiente. Hubo cuatro réplicas por tratamiento.

Ejem lo 3. Efecto de los Protectores Biológicos sobre la Emergencia de Semilla de Maiz plantada en Suelo Infestado con F. graminearum La semilla de maiz tratada con Paenibacillus macerans y Pseudomonas putida se plantaron en suelo de invernadero de autoclave (Metro Mix) mezclado 9:1 en volumen con semillas de avena inoculadas con F. graminearum de autoclave. Hubo cuatro réplicas de 100 semillas (10 semillas por envase) por tratamiento. Todos los tratamientos se dimensionaron por el % de emergencia 21 dias después de la plantación.

Ejemplo 4. Efecto de los Protectores Biológicos Aplicados a la Semilla en la Emergencia de Semillas de Trigo infectadas con F. graminearum Trigo, cultivo NY Batavia, infectado naturalmente con F. graminearum , se trató con suspensiones espesas de Paenibacillus macerans y Pseudomonas putida y se plantó después en suelo de invernadero (Metro Mix) . Habla cuatro réplicas de 100 semillas (10 semillas por envase) por tratamiento. Todos los tratamientos se calificaron por el % de germinación 21 dias después de su plantación .

Ejemplo 5. Efecto de los Protectores Biológicos Aplicados a las Semillas en la Emergencia de Trigo Plantado en Suelo infestado con F. gramínearum.

Semilla de trigo tratada con suspensiones espesas de Paenibacillus macerans, Pseudomonas putida, o tiabendazol (Gustafson LSP 0.25 oz. Fl . por 100 Ib de semillas) se plantó en suelo de invernadero (Metro Mix) . Habla cuatro réplicas por tratamiento. Todos los tratamientos se calificaron por el % de germinación 7 dias después de la plantación .

Como se muestra abajo en la Tabla I, el Paenibacillus macerans y P. putida, pero no el tratamiento de S. roseus, se mostraron que reduelan significativamente el crecimiento radial del F. graminearum in vitro.

Tabla I. Efecto de los protectores biológicos en el crecimiento de Fusarium graminearum y F. moniliforme en Cultivo.

Como se muestra debajo en la Tabla 2, todos los tratamientos redujeron significativamente la recuperación de F. moniliforme de la semilla de maiz naturalmente infectada. El Paenibacillus macerans da el control más grande. En esta tabla, los significados dentro de una columna son significativamente diferentes (a P=0.05) uno del otro si se siguen por letras diferentes, según la prueba de importancia de intervalo múltiple de Duncan. Little et al., Agricul ture Experimentation, p. 350 (1978), la cual se incorpora aqui como referencia.

Tabla 2. Efecto de los protectores biológicos en el crecimiento de F. moniliforme a partir de semilla de maiz naturalmente infestada.

Como se muestra en la Tabla 3, todos los tratamientos resultaron en la emergencia significativamente mayor que en el control no tratado. En esta tabla, las medias dentro de una columna son significativamente diferentes (en P=0.05) a partir de cada una si se siguen por letras diferentes, según la prueba de importancia de intervalo múltiple de Duncan.

Tabla 3. Efecto de los protectores biológicos aplicados a las semillas en la emergencia de maiz plantado en suelo infestado con F. Gramin ea rum .

Tratamientos con Paeniba cil l us ma cerans y Ps eudom ona s p u t i da resultaron en una emergencia significativamente mayor que el control no tratado, como se muestra en la Tabla 4. En esta tabla, las medias dentro de una columna son significativamente diferentes (a P=0.05) a partir de cada una si se siguen por letras diferentes, según la prueba de importancia de intervalo múltiple de Duncan.

Tabla 4. Efecto de los protectores biológicos aplicados a las semillas en la emergencia de semillas de trigo infectado con F. Graminearum en el suelo .

Tratamiento % de emergencia No tratado 63 c Paenibacillus macerans 72 a Pseudomonas putida 69 ab Como se muestra en la Tabla 5, todos los tratamientos resultaron en la emergencia significativamente mayor que en el control no tratado. El Paenibacillus dio el mayor % de emergencia después del tratamiento con tiabendazol. En esta tabla, las medias dentro de una columna son significativamente diferentes (en P= 0.05) a partir de cada una si se siguen por letras diferentes, según la prueba de importancia de intervalo múltiple de Duncan.

Tabla 5. Efecto de los protectores biológicos aplicados a las semillas en la emergencia de semillas de trigo plantadas en suelo infestado con F. graminearum .

Todos los protectores biológicos probados mostraron algún control de la morriña de la semilla y del manchado de las plantas de semilla provocado por el Fusarium graminearum o F. Moniliforme . La bacteria formadora de esporas, Paenibacillus macerans , mostró la mayor promesa como protector biológico en contra de las especies Fusarium transportadas en semillas y en suelo.

Ejemplo 6. Protección Biológica del Trigo Semillas del cultivo de trigo Embrapa 24 infectadas por Pyrenphora tritici-repentis, se obtuvieron del servicio de producción básico de semillas, Embrapa, Passo Fundo, RS, Brasil. Los siguientes protectores biológicos y de hongos se aplicaron a la semilla: Pa en iba ci l l us ma ceran s y Ps e udomona s p u t i da biotipo B. La iprodiona más semillas no tratadas y tratadas con tiram se usaron como controles. Las colonias de cada bacteria se hicieron crecer en de agar de dextrosa de papa (esto es, PDA) durante 24 hr a 24 +/- 2 C. Las células bacterianas se separaron de la superficie del medio de cultivo con un cepillo y se colocaron en agua destilada estéril. La concentración de cada bacteria fue de aproximadamente 106 CFU/ml. Se aplicó después una suspensión al sumergir las semillas durante 3 min, y dejándolas secar a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de fungicidas se probó a una dosis de 150 g de Rovrin WP por cada 100 kg de semillas. Las semillas no tratadas se empaparon en agua destilada estéril durante 3 min, y se dejaron secar de la misma manera que las semillas tratadas con microbios. Para el experimento de laboratorio, cada tratamiento se replicó cuatro veces (cada réplica 100 granos, 10 granos por plato) y se colocó bajo luz negra bajo un fotoperiodo de 12 horas a 24 +/- 2 C. El arreglo experimental fue un diseño completamente aleatorio. La presencia de P . tri t i ci -repen t i s se determinó 5 dias después de la formación de placas. Los datos se expresaron como porcentaje de las semillas de las cuales se recuperaron los patógenos. Se hizo un experimento para evaluar la incidencia de la transmisión en un lote de semillas altamente infectado. La transmisión se registró como el porcentaje de plantas de semilla con lesiones características de coleóptilos .

El crecimiento radial en la prueba de laboratorio se midió usando el método del embudo (Luz, W.C., "Controle biológico das doencas na espermos fera" , Controle biológico de doencas de plantas, EMBRAPA-CNPDA, Jaguari na, Brasil, páginas 25-31 (1991) la cual se incorpora aqui como referencia) .

Para el experimento de campo, las semillas con cada tratamiento se sembraron manualmente en extensiones de 12 hileras, 3 m largo. El espacio entre las hileras fue de 20 cm y la cantidad de semillas fue equivalente a 120 kg por ha. Las semillas tratadas en cada experimento se colocaron en un diseño de bloque aleatorio. La emergencia se midió 21 dias después de la siembra. En la madurez, ocho hileras centrales de cada extensión se cosecharon y el rendimiento se determinó como kg/ha. Los datos se sometieron a análisis de varianza y los medios separados por la prueba de intervalo múltiple de Duncan (P=0.05) .

Ambas bacterias protectoras biológicas inhibieron fuertemente el crecimiento radial de P. tritici-repentis y su recuperación de la semilla infectada (Tabla 6) . Los tratamientos con Paenibacillus macerans y Pseudomonas putida biotipo B, inhibieron completamente la transmisión de P. tritici-repentis a las plantas de semilla (Tabla 6) .

Tabla 6. Efecto de los Protectores Biológicos en el Crecimiento Radial, Recuperación de las Semillas Infectadas y Porcentaje de Transmisión de la Semilla de Pyrenophora tritici-repentis .

Las semillas también se infectaron naturalmente, pero a una menor incidencia por Fusarium graminearum Scha abe y Bipolaris sorokinianum (Sacc.) Shoem; las dos bacterias también inhibieron la recuperación de estos patógenos de la semilla.

Los datos del experimento de campo se muestran en la Tabla 7 Tabla 7. Efecto de Protectores Biológicos aplicados a la Semilla en la Emergencia de Plantas de Semilla y Rendimiento de Trigo en el Campo.

Todos los tratamientos químicos aumentan significativamente la emergencia de la planta de semilla de trigo sobre aquellos en las extensiones no protegidas. La Paenibacillus macerans y Pseudomonas putida biotipo B proporcionaron el mayor incremento al rendimiento sobre aquel de las extensiones no protegidas (Tabla 7) .

Los efectos benéficos de rizobacterias que promueven y protegen biológicamente el crecimiento de la planta (esto es PGPBR) sobre las plantas, se ha revisado (Bakker et al. "Supresión de Patógenos de Plantas Transportados en el Suelo por Pseudomonados Fluorescentes: Mecanismos y Prospectos" Interacciones Bióticas y Enfermedades Transportadas en el Suelo, Ed. A. B. R. Beemster, et al., pp . 217-23, Amsterdam, Paises Bajos, Elsevier (1991); Kloepper, J.W. "Ri zobacterias Promotoras del Crecimiento en Plantas como Agentes de Control Biológico en Enfermedades Transportadas en el Suelo", El Control Biológico de las Enfermedades de las Plantas, pp . 142-52 (1991); Luz, W.C. "Microbiolizacao de sementes para o controle de doencas das plantas", Revisao Annual de patología de Plantas, Passo Fundo, Brasil, W.C. da Luz, J.M.C. Fernandes, A.M. Prestes y E.C. Picinini, ed., páginas 35-77 (1993); Luz W.C., "Rizobacterias promotoras de crescimento de plantas e bioprotecao" . Revisao Annual de patología de Plantas, Passo Fundo, Brasil, W.C. da Luz, J.M.C. Fernandes, A.M. Prestes y E.C. Picinini, ed., páginas 1-49 (1996), las cuales se incorporan aqui como referencia) que tienen los beneficios de los protectores biológicos de hongos (Harman, G.E., "Tratamientos de Semillas para el Control Biológico de la Enfermedad de las Plantas", Crop. Prot., 10:166-71 (1991), la cual se incorpora aqui como referencia) . Los agentes microbianos que se usan como protectores biológicos y estimulantes del rendimiento serán una táctica importante en la administración de enfermedades en el próximo siglo (Luz, W.C. da Rizabacterias promotoras de crescimiento de plantas e de bioproteao, páginas 1-49 en W.C. da Luz, J.M.C. Fernandes, A.M. Prestes y E.C. Picinini, ed. Revis,, o Anual de Patología de Plantas., Passo Fundo, Brasil (1996), que se incorporan aqui como referencia) '. Los dos PGPBRs reportados aqui muestran grandes promesas como estimuladores del rendimiento y protectores biológicos del trigo en contra de enfermedades.

Ejemplo 7. Control Biológico de la En ermedad por Hongos de Trigo con Antagonistas Microbianos.

Planta de trigo de primavera ND594 crecieron en un invernadero de vidrio en la Universidad de Cornell, Ithaca, NY. En la etapa de media antitesis, las espigas de las plantas se atomizaron con agua o con suspensiones de células de microorganismos protectores biológicos potenciales. Todas las espigas se inocularon por desafio 24 hr después con una suspensión de esporas de F. Gram in ea rum , y las plantas se incubaron durante la noche a humedad relativa elevada. Después, las plantas se dejaron crecer en un banco del invernadero de vidrio bajo condiciones ambientes a través de la maduración del grano. Las espigas cosechadas se evaluaron para la incidencia de semillas infectadas por Fusarium, peso de 100 semillas y contenido de desoxini va lenol (DON) . La infección con Fusarium se determinó por el crecimiento característico del patógeno de la semilla incubada en papel secante después de comenzar la germinación seguida de congelación para matar los embriones de las semillas. El DON se analizó por cromatografía liquida de alta presión en el Laboratorio de Diagnóstico Veterinario de Cornell.

El Paenibacillus macerans ( Embrapa-Trigo ) , Pseudomonas putida biotipo B (Embrapa-Trigo) y Sporobolomyces roseus (Embrapa-Trigo) consistentemente protegen las espigas y resultaron en incrementos promedio (tres experimentos) en el peso de la semilla sobre aquellos de las semillas no protegidas. La Tabla 8 muestra la protección de los granos de trigo por -cepas microbianas contra la reducción de peso, infección por Fusarium y contaminación por la micotoxina de Fusarium, desoxinivalenol . (Medias de cuatro réplicas con errores estándar en paréntesis; resultados de uno de tres experimentos se muestran) Tabla 8 Ejemplo 8. Inhibición del Crecimiento Micelial (Antibiosis) de Patógenos de Hongos de Cereales por Paenibac±llus macerans Aislado 144 de Brasil.

Una indicación de que una cepa de microorganismo puede ser útil para el control biológico de patógenos formadores de hongos en plantas es su capacidad para inhibir el crecimiento micelial (filamentoso) de los hongos in vitro. El aislado 144 de Pa en iba ci l l us ma ceran s , una bacteria formadora de esporas aislada de las raices de plantas de trigo en Brasil, se probó para antibiosis in vi t ro contra un amplio intervalo de patógenos de hongos económicamente importantes del trigo y el maiz.

En tratamientos en paralelo, en presencia o ausencia de P. macerans aislado 144, el crecimiento radial (mm) de los patógenos formadores de hongos se midió como un medio para estimar la antibiosis. Las células bacteriales se transfirieron encima de una caja de Petri de de resistencia de agar de dextrosa de papa por medio de un embudo pequeño de vidrio. Después de dos dias de incubación a temperatura ambiente, un disco de agar conteniendo los micelios del hongo se transfirió dentro del centro de la colonia formada de anillos del protector biológico o, en el no tratado, sobre una placa de medios no inoculados. El crecimiento radial se midió después de 5 dias. Habla un minimo de cuatro réplicas por experimento .

El aislado 144 del Paenibacillus macerans inhibió fuertemente el crecimiento micelilal de varios patógenos de cereales in vitro (Tabla 9) . Esto indica la producción de antibiótico ( s ) activos contra un amplio intervalo de hongos patogénicos de plantas. La antibiosis es una caracteristica útil para una cepa de control biológico de trastorno de plantas. El (los) ant ibiótico ( s ) también pueden encontrar usos directos como antimicót icos en agricultura o medicina .

Tabla 9. Inhibición In vitro por Paenibacillus macerans Aislado 144 del Crecimiento Micelial de Hongos Patogénicos para Cereales.

*Media dentro de una hilera (mismo hongo) y siguiendo las diferentes letras difiere significativamente según la prueba de intervalo múltiple protegida de Duncan.

Ejemplo 9. Control de Enfermedades Transportadas en la Semilla de Cereal por Tratamiento de la Semilla con antagonistas Microbianos Los protectores biológicos microbianos pueden proporcionar una alternativa segura y efectiva o complemento, para los fungicidas químicos para el control de los patógenos de hongos transportados en la semilla en cereales u otras plantas de cosecha .

Los lotes de semilla de trigo y maiz infectados naturalmente por hongos patogénicos se localizaron y usaron para probar la eficacia de los protectores biológicos aplicados a la semilla. Las semillas fueron ya sea empapadas en agua o en suspensiones de células de Pa en iba ci l l us ma ceran s aislado 144 o Ps e udomona s p u t i da biotipo B aislado 63, se permitió después secar brevemente antes de la incubación en papeles secantes húmedos (para aislamiento del hongo) o sembrado en el suelo. Las plantas de semilla se calificaron para el porcentaje de emergencia y transmisión de patógeno (con base en lesiones de coleóptilo) .

El aislamiento 144 del Paenibacillus macerans y Pseudomonas putida biotipo B aislado 63 se aplicó a semillas infectadas con hongos de maiz y trigo cada una resultó en significativamente menos inóculos transportados en la semilla y menos transmisión de enfermedades de las plantas de semilla a la semilla de diversos patógenos de hongos (Tabla 10) . También resultaron en la emergencia en aumento de plantas de semilla infectadas en suelos. Ambas muestran un considerable potencial como protectores de semillas biológicas para las semillas de cereales.

Tabla 10. Control Biológico de Patógenos de Hongos Transportados en Semillas como se midieron por la Recuperación Disminuida de Hongos de la Semilla, Transmisión Disminuida de Hongos a las Plantas de Semilla y Emergencia de Plantas de Semilla Aumentada .

Tratamiento de semillas Hongos transportados No Paeníbacillu Pseudomona en semillas Tratados s macerans s putida Fu sa ri um 50 c 76 a 69 b gram in ea rum ( semilla de trigo en suelo ) S t a gon o spora 88 c 94 a 91 b nodorum ( semilla de trigo en suelo ) Media dentro de una hilera (mismo lote de semilla) y seguida por diferentes letras difieren significativamente según la prueba de intervalos múltiples de Duncan protegida.

Aunque la invención se ha descrito en detalle para el propósito de ilustración, se entiende que tal detalle es solamente para ese propósito, y se pueden hacer variaciones en la misma por aquellos hábiles en el arte sin alejarse del espíritu y alcance de la invención la cual se define por las siguientes reivindicaciones.

Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido para llevar a cabo la invención es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (29)

1. REIVINDICACIONES Un Paenibacillus macerans aislado caracterizado porque tiene el número de acceso ATCC . Un Pseudomonas putida aislado caracterizado porque tiene el número de acceso ATCC Un Sporobolomyces roseus aislado caracterizado porque tiene el número de acceso ATCC Una composición caracterizada porque comprende un Paenibacillus macerans aislado de conformidad con la reivindicación 1 y un portador . La composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque comprende además un fertilizante, insecticida, fungicida, nematicida o mezclas de los mismos. La composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque comprende además agentes de amortiguamiento, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, agentes de abrasión, arcilla, polisacáridos o mezclas de los mismos. Una composición caracterizada porque comprende un Pseudomona s pu t i da aislado de conformidad con la reivindicación 2 y un portador. La composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque comprende además un fertilizante, insecticida, fungicida, nematicida o mezclas de los mismos. La composición de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque comprende además agentes de amortiguamiento, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, agentes de abrasión, arcilla, polisacáridos o mezclas de los mismos . . Una composición caracterizada porque comprende un Sporobol omyces rose us aislado de conformidad con la reivindicación 3 y un portador . 11. La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracte izada porque comprende además un fertilizante, insecticida, fungicida, nematicida o mezclas de los mismos. 12. La composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque comprende además agentes de amortiguamiento, agentes humectantes, agentes de recubrimiento, agentes de abrasión, arcilla, polisacáridos o mezclas de los mismos. 13. Un método para impartir protección a las plantas en contra de los patógenos de plantas caracterizada porque comprende: la aplicación a plantas, semillas de las plantas o suelo que rodea a las plantas o semillas de las plantas, de un agente de control biológico seleccionado del grupo que consiste de Paenibacillus macerans , Pseudomonas putida , Sporobolomyces roseus y mezclas de los mismos bajo condiciones efectivas para impartir protección a las enfermedades de las plantas o plantas producidas de las semillas de las plantas . 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente de control biológico es Paenibacillus macerans que tiene el No. de acceso ATCC No. 15. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente de control biológico es Pseudomonas putida que tiene el No. de acceso ATCC No. 16. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente de control biológico es Sporobolomyces roseus que tiene el No. de acceso ATCC No. 17. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente de control biológico se usa para tratarlas plantas por aplicación tópica. 18. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente de control biológico se usa para tratar semillas de plantas por aplicación tópica, el método además comprende: la propagación de las plantas de las semillas tratadas en forma tópica con el agente de control biológico 19. El método de conformidad con la reivindicación 13, ca acterizado porque el agente de control biológico se usa para tratar suelo alrededor de las plantas. 20. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la planta se selecciona del grupo que consiste de alfalfa, arroz, trigo, cebada, centeno, algodón, girasol, cacahuate, maiz, papa, camote, frijol, chícharo, achicoria, lechuga, endibias, col, col de Bruselas, betabel, chirivia, nabo, coliflor, brócoli, rábano, espinaca, cebolla, ajo, berenjena, pimiento, apio, zanahoria, calabacita, calabaza, zuccini, pepino, manzana, pera, melón, cítricos, fresa, uvas, frambuesa, pina, soya, tabaco, tomate, sorgo y caña de azúcar. 21. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la planta se selecciona del grupo que consiste de Arabidops is thal iana , Sa intpaul ia , petunia, pelargonio, Flor de Pascua, crisantemo, clavel y zinnia . 22. Un método para aumentar el crecimiento de una planta caracterizado porque comprende: la aplicación a las plantas, semillas de las plantas o suelo que rodea a las plantas de un agente de control biológico seleccionado del grupo que consiste de Paenibacillus macerans , Pseudomonas putida, Sporobolomyces roseus y mezclas de los mismos bajo condiciones efectivas para aumentar el crecimiento en las plantas o plantas producidas de las semillas de plantas. . El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el agente de control biológico es el Paenibacillus macerans que tiene el No. de Acceso ATCC . El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el agente de control biológico es el Pseudomonas putida que tiene el No. de Acceso ATCC . El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el agente de control biológico es el Sporobolomyces roseus que tiene el No. de Acceso ATCC . El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el agente de control biológico se usa para tratar plantas por aplicación tópica. . El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el agente de control biológico se usa para tratar semillas de plantas por aplicación tópica, el método además comprende: la propagación de las plantas de las semillas tratadas en forma tópica con el agente de control biológico 28. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el agente de control biológico se usa para tratar suelo alrededor de las plantas. 29. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la planta se selecciona del grupo que consiste de alfalfa, arroz, trigo, cebada, centeno, algodón, girasol, cacahuate, maíz, papa, camote, frijol, chícharo, achicoria, lechuga, endibias, col, col de Bruselas, betabel, chirivia, nabo, coliflor, brócoli, rábano, espinaca, cebolla, ajo, berenjena, pimiento, apio, zanahoria, calabacita, calabaza, zuccini, pepino, manzana, pera, melón, cítricos, fresa, uvas, frambuesa, pina, soya, tabaco, tomate, sorgo y caña de azúcar. . El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la planta se selecciona del grupo que consiste de Arabidopsis thaliana , S.a intpaulia , petunia, pelargonio, Flor de Pascua, crisantemo, clavel y zinnia .