MXPA99010058A - Radionuclido asociado con polifosfato de nucleotidos como agentes de reproduccion de imagenes de tumores - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a agentes de reproducción de imágenes de tumores que comprenden un radionúclido en relación con una molécula que se dirige a polifosfatos de nucleótidos. También se proveen métodos para usar los agentes de reproducción de imágenes de tumores y equipos que contienen los agentes de reproducción de imágenes de tumores o componentes adecuados para la producción de los agentes de reproducción de imágenes de tumores.

Description

RADIONÚCLIDO ASOCIADO CON POLIFOSFATO DE NUCLEÓTIDOS COMO AGENTES DE REPRODUCCIÓN DE IMÁGENES DE TUMORES La presente invención se refiere al campo de medicina nuclear. Más específicamente, la invención se refiere a la reproducción de imágenes para diagnóstico de tumores. Antecedente de la Invención La tecnología de reproducción de imágenes clínicas juega un papel significativo en el diagnóstico de daños y procesos de enfermedad. Muchas partes del cuerpo humano ahora pueden examinarse con fines de diagnóstico. Muchas partes del cuerpo humano ahora pueden examinarse con fines de diagnóstico usando una variedad de técnicas de reproducción de imágenes. Durante mucho tiempo se ha utilizado la radiografía para representar por imágenes partes del cuerpo a través de la cual se transmiten rayos-x generados. La tomografía axial computarizada (TAC) provee imágenes de rayos X en sección transversal de un plano del cuerpo. Se puede dirigir a tejidos u órganos específicos en la tomografía de emisión de positrones (TEP), tomografía computarizada de emisión de un solo fotón (TCESF) y escintigrafía gama. En TEP, TCESF, y escintigrafía gama, los agentes radiofármacos capaces de ser secuestrados (concentrados) a algún grado en el tejido u órgano blanco se administran internamente al paciente y las imágenes se generan detectando las emisiones radioactivas del agente radiofármaco concentrado. Algunos de los agentes radiofármacos utilizados actualmente para la reproducción de imágenes incluyen núclidos tales como 201TI, 99mTc, 233Xe, y similares; quelatos de núclidos, agentes metabólicos radiomarcados tales como 11D-desoxi-D-glucosa, 8F-2-fluorodesoxi-D-glucosa, análogos de ácidos grasos de [l-11C]- y [123l]-ß-metilo, 113N-amoníaco, y similares; los agentes afines a infarto tales como 99mTc-tetraciclina, 99mTc-pirofosfato, 203-Hg-mercuriales, 67Ga-citrato y similares, y ligandos, proteínas, péptidos y anticuerpos monoclonales radiomarcados. Las células completas tales como eritrocitos, plaquetas, leucocitos, y otras células también se pueden marcar con un radionúclido y funcionan como agentes radiofármacos. La cantidad y tipo de información clínica que puede derivarse de TEP, TCESF, de imágenes escintigráficas gama se refiere en parte a la capacidad de concentrar agente radiofármaco en el tejido u órgano blanco. Aunque están disponibles muchos radiofármacos para uso clínico, la resolución de la imagen generada puede limitarse dependiendo de varios factores. La resolución de un agente de reproducción de imágenes particular para representar imágenes de tejido muerto o dañado depende, en parte, de la afinidad del radiofármaco para el sitio de daño o enfermedad, comparado con su afinidad para rodear el tejido saludable. Los radiofármacos se usan para diagnosticar y tratar tumores. D.R. Elmaleh, y otros (1984) Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 81, 918-921 describe Ap4A marcado con 99mTc (99 Tc-Ap4A), usado para representar imágenes de tumores se implantó en ratas. El método usado para quelar el 99mTc al Ap A en este estudio, produjo una mezcla, en la cual 99mTc se unió a Ap A-dinucleótido y que también puede contener 99 Tc no quelado. Este estudio se basó en la premisa de que algunas células de tumores humanos son permeables a ATP y ADP exógeno y que estas células se incorporan a los nucleótidos intactos en combinaciones intracelulares, en contraste con las células normales. Se mostró que Ap4A se permea en células de hepatoma pero no en un número de líneas celulares de mamíferos no transformadas. Además de acumularse en tumores implantados, en el estudio de 1984, 99 Tc-Ap4A también se acumuló en el riñon, hígado, hueso, músculo y pulmón. Compendio de la Invención Los polifosfatos de nucleótidos marcados con radionúclidos se acumulan con alta especificidad en tumores, y una modalidad de la invención caracteriza generalmente los agentes de formación de imágenes tumorales que incluyen un radionúclido asociado con un polifosfato de nucleótido, el último siendo una porción que se dirige al blanco. El agente de reproducción de imágenes tiene una relación mejorada de radioactividad de dirigida al blanco a no dirigida al blanco, como resultado del uso de un co-eluyente tal como manitol. En otra modalidad, la invención provee un agente de reproducción de imágenes de tumores que incluye un radionúclido asociado con una porción de dirección al blanco de polifosfato de nucleótidos. El agente de reproducción de imágenes normalmente se eluye con un eluyente como se describió en la presente, y la formulación del agente puede incluir trazas de ese agente. Normalmente, la porción que se dirige la blanco es un residuo de un precursor que se dirige al blanco; por ejemplo, un precursor que se dirige al blanco se hace reaccionar con una entidad de marcado que incluye el radionúclido y un quelante para el radionúclido. El agente de reproducción de imágenes es el producto de reacción que incluye un residuo del precursor de dirección al blanco y el quelante, en asociación con el radionúclido. La asociación puede implicar uno o más de: quelatación, unión covalente o unión electrostática, o puede implicar otras fuerzas o combinación de fuerzas que mantiene el nucleosido en proximidad espacial a una molécula de dirección al blanco. El agente de reproducción de imágenes puede ser el producto de reacción del precursor de dirección al blanco con una porción que contiene radionúclidos y dicha reacción puede implicar la formación de un quelato o un producto de reacción covalente, o un producto en el cual están implicadas tanto la quelatación como las uniones covalentes. Normalmente, el precursor de dirección al blanco es una molécula de la fórmula A) o fórmula B), o dímeros o trímeros de los mismos tal como las moléculas de las fórmulas C) o D): A) Nu?-(p)m-X B) Nu1-(p)„-X-(p)m-Nu2 C) Nu?-(p)„-X?-(p)m-Nu2 I NU3-(p)r-X2-(p)q-NU4, D) NUi-ÍpJn-Xí-ÍpJm- Uz X3 Nu3-(p)p-X2-(p)q-Nu4l en donde (1) cada uno de Nu?-Nu es un nucleosido seleccionado independientemente; (2) p se selecciona del grupo que consiste de una porción de fosfato, una porción de fosforotioato, una porción de alquilfosfonato, una porción de fosforoditioato, una porción de fosforamidato, una porción de aminoalquilfosforoamidato, una porción de aminoalquilfosfotriester, una porción de aminoalquilfosforotioamidato y una porción de tiofosfato; (3) cada uno de X, X,, X , y X3 se selecciona del grupo que consiste de un grupo alquilo, un grupo alquilo halogenado, un grupo alquilo que contiene nitrógeno, un grupo alquilo que contiene azufre, un grupo alquileno, un grupo alquileno halogenado, un grupo alquileno que contiene nitrógeno y un grupo alquileno que contiene azufre; (4) (n + m) es de 2 a 8; y (r+q) es de 2 a 8. Otros agentes (o residuos de ellos hechos reaccionar con la roción de dirección al blanco) para promover la quelatación o unión pueden estar presentes en el agente de reproducción de imágenes.

En una fórmula preferida de acuerdo con B), X no es opcional y NUÍ y Nu2 son iguales y son adenosina, guanina, histidina, timidina, uracilo o inosina. De preferencia, por lo menos uno de Nu!- (más preferiblemente cada uno de Nu-?-Nu4) es adenosina. Las porciones preferidas para x (cuando está presente) son las porciones alquilo o porciones de cloroalquilo y p preferiblemente es una porción de fosfato. Cuando X no está presente, la estructura que contiene radionúclidos puede quelarse vía un átomo de oxígeno del (los) fosfato(s). De preferencia, el nucleosido es adenosina, p es un fosfato, n = 2, y m=2. El radionúclido (Z) que finalmente está asociado o formado en complejo con el precursor de dirección al blanco puede ser 131l, 99m- Tc, ,4F, oeGa, "Cu, y , ln, aunque se prefiere aamTc. Si el radionúclido está asociado vía una estructura quelante opcional (R), particularmente para 99 Tc, la estructura quelante puede ser una estructura de -N3S2, una estructura de -NS3, una estructura de -N4, un ¡sonitrilo, una hidrazina, una estructura que contiene ácido nicotínico (HYNIC, por sus siglas en inglés) una estructura que contiene ácido 2-metiltionicotínico, un grupo que contiene fósforo, o un grupo carboxilato. En una modalidad específica, Z es 99mTc, y es parte de un complejo de 99mtc que tiene la siguiente fórmula: Ad-(p)2-CH-(p)3-Ad R-Z Ad - (p)2-CH-(p)2-Ad en donde Ad es adenosina, p es PO2H, y R es una porción que forma complejos. Los agentes anteriores pueden administrarse para reproducir imágenes de tumores en un mamífero. Un método para reproducir imágenes específicas detecta tumores administrando el agente de reproducción de imágenes al mamífero y detectando la distribución espacial del agente. La acumulación diferencial del agente indica un tumor. La invención también caracteriza equipos para reproducción de imágenes de tumores que comprende el agente de reproducción de imágenes. El equipo puede incluir un agente quelante y/o una molécula auxiliar seleccionada del grupo que consiste de manitol, gluconato, glucoheptonato, y tartrato; y un agente de reducción que contiene estaño, tal como SnCI2 o tartrato de estaño. Breve Descripción de los Dibujos Los anteriores y otros objetivos de esta invención, los diferentes aspectos de la misma, así como la propia invención, se puede entender más fácilmente a partir de la siguiente descripción, cuando se lee junto con los dibujos anexos en los cuales: La Figura 1, muestra un cromatograma de CLAR de una mezcla de reacción obtenida cuando se usaron 50 mg de manitol como una molécula auxiliar. Los picos del perfil de elución se extrapolan, con áreas bajo los picos del cromatograma tabulado debajo del perfil de elución.

La figura 2, muestra un cromatograma de CLAR de una mezcla de reacción alternativa, en la cual 10 mg de manitol se usaron como una molécula auxiliar. Los picos del perfil de elución se extrapolaron, con las áreas bajo los picos del cromatograma tabuladas debajo del perfil de elución. La figura 3, es un conjunto de radio-imágenes de tumores en ratones enfermos. Descripción Detallada de las Modalidades Preferidas La patente y la literatura científica denominada en la presente establece el conocimiento de que está disponible para aquellos expertos en la materia. Las patentes de E.U.A. y las solicitudes permitidas citadas en la presente se incorporan aquí por referencia.

La presente invención agentes novedosos de reproducción de imágenes de tumores en los cuales los análogos de polifosfatos de nucleótidos están asociados con un radionúclido. Los agentes de reproducción de imágenes de la invención se acumula específicamente en los tumores. Los agentes de reproducción de imágenes de la invención contienen una molécula que se dirige al blanco la cual se acumula específicamente en los tumores. En general, moléculas que se dirigen al blanco preferidos tienen la fórmula (o dímeros u otros multímeros del mismo) Nu-(p)n-X-(p)m-Nu en donde Nu es un radionucleosido seleccionado del grupo que consiste de adenosina, guanina, histidina, timidina, uracilo, e inosina; p se selecciona del grupo que consiste de una porción de fosfato, una porción de fosforotioato, una porción de alquilfosfonato, una porción de fosforodíotioato, una porción de fosforoamidato, una porción de aminoalquilfosforoamidato, una porción de aminoalquilfofotriéster, y una porción de aminoalquilfosforotioamidato; X se selecciona del grupo que consiste de un oxígeno, un grupo alquilo, un grupo alquilo halogenado, un grupo alquilo que contiene nitrógeno, un grupo alquilo que contiene azufre, un grupo alquileno, un grupo alquileno halogenado, un grupo alquileno que contiene nitrógeno, un grupo alquileno que contiene azufre, y (n + m) es de 2 a 8. Las formulaciones de más de una molécula que se dirige a un blanco marcado con un núclido. Se puede usar cualquier nucleosido como el componente "Nu" de la molécula que se dirige al blanco. Además de los ribonucleosidos listados antes, el componente de "Nu" de la molécula que se dirige al blanco puede ser desoxinucleosido, un ribonucleosido no substituidos, o un desoxiribunucleosido substituido, un ribonucleosido substituido, o un desoxiribunucleosido substituido.. Pueden presentarse de acuerdo con la invención en la porción de base de ácidos nucleicos o sobre la porción de azúcar del nucleosido. Los azúcares diferentes a ribosa o desoxirribosa pueden estar presente en el componente de "Nu" de la molécula que se dirige al blanco. De preferencia, el nucleosido de la molécula que se dirige al blanco es adenosina.

Cualquier molécula puede usarse como la porción "p" al enlace de los componentes de nucleósidos de la molécula que se dirige al blanco. La molécula que se dirige al blanco puede contener porciones de enlace de internucleosidos sintéticos diferentes a las porciones "p" listadas antes, en las cuales la porción "p" es un fosfato substituido. Por ejemplo, la porción "p" de fosfato substituido puede contener uno de más grupos alquilo, grupos carbamato, grupos de acetamidato y similares. La porción "p" puede ser adicionalmente un grupo que no contiene fósforo tal como un éster de carboximetilo o un carbonato, mientras la conformación de la molécula que se dirige al blanco resultante se aproxime a la de un dinucleosido regulador tal como Ap4A. Cualquier porción puede usarse como el componente de "X" de la molécula que se dirige al blanco mientras la conformación de la molécula que se dirige al blanco resultante se aproxima a la de un dinucleosido regulador tal como Ap4A o dimeros de Ap A. Los métodos para sintetizar la molécula que se dirige al blanco generalmente se exhiben en G.M. Blackburn, y otros (1966) en Biofhosfhates and Their Analogues--Synthesis, Structure, Metal and activity, eds. Bruzik, K.S. & Stec, W.J. (Elsevier, Ámsterdam) págs. 451-464; G.M. Blackburn, y otros, (1987) Nucleic Acids Res. 17, 6991-7004; A. Guranowski y otros 81987) Biochemistry 26, 3425-3429; y G.M. Blackburn, y otros 81992) en Dinucleoside Polyphosphates, ed. McLennan, A.G. (CRC, Boca Ratón, Fl) Chapter De cuerdo con la invención, la molécula que se dirige al blanco está asociada con el núclido (proximidad espacial). La proximidad espacial entre la molécula que se dirige al blanco y el núclido puede efectuarse en cualquier forma que conserva la especificidad de la molécula que se dirige al blanco para su tejido blanco. Por ejemplo, la proximidad espacial entre el núclido y la molécula que se dirige al blanco puede efectuarse por una unión química no covalente. De manera que se puede efectuar una unión química a través de una substancia quelante y/o una molécula auxiliar tal como manitol, gluconato, glucoheptonato, tartrato y similares. Alternativamente, la proximidad espacial entre el núclido y la molécula que se dirige al blanco puede efectuase incorporando el núclido y la molécula que se dirige al blanco en un micelo o liposoma, en tal forma que se mantiene la afinidad de la molécula que se dirige al blanco para su tejido blanco. La proximidad espacial entre el núclido y la molécula que se dirige al blanco también puede efectuarse uniendo el núclido y la molécula que se dirige al blanco a una matriz tal como una microesfera o liposomas. Los expertos en la materia reconocerán que existe cierto número de formas para sintetizar los agentes de formación de imágenes. En una síntesis, Nu-p2-CHCI-p2Nu se hace reaccionar con X-R, en donde X se define como X?-3, antes, y R es un radionúclido o un agente quelante de radionúclido tal como un agente quelante de 99mTc. Los agentes quelantes normales de 99mTc incluyen alil o aril aminas o alquil o aril tioles. Otros grupos quelantes de 99mTc incluyen N2S2, S4. Se formará un precursor que contiene el agente quelante -R, el cual a su vez contiene el agente quelante -R, el cual a su vez se hace reaccionar con 99mTc de un equipo de reducción de 99mTc normal. Por ejemplo, cuando -R es un tilo de alquilo, la reacción de quelante de -NS3 forma: Nu-p2-CH"p2~Wu ÍCH2)n S 0=w"TC»0 (CHa)-S S- (CH,) N Si la composición incluye una estructura quelante, particularmente para 99mTc, la estructura quelante puede ser una estructura de N2S2, una estructura de -NS3, una estructura de N4, un isonitrilo, una hidrazina, un grupo de HYNIC (ácido hidrazinonicotínico), un grupo que contiene fósforo, o un grupo de carboxilato. Los expertos en la materia entenderán que se pueden usar bastantes otras reacciones de quelatación. Los agentes de reproducción de imágenes descritos antes, pueden contener cualquier radionúclido de acuerdo con la invención. De preferencia, los agentes de reproducción de imágenes de la invención contienen radionúclidos adecuados para usarse en TEP o TCESF que reproducen imágenes. Más preferiblemente, el radionúclido (Z) usado en el agente de reproducción de imágenes es un radionúclido seleccionado del grupo que consiste de 123l, 99mTc, 18F, 68Ga, 62Cu, 111ln, y similares. Dichos radionúclidos se pueden incorporar en el agente de reproducción de imágenes por unión covalente directamente a un átomo de la molécula que se dirige al blanco, o el radionúclido puede estar asociado no covalente o covalentemente con la molécula que se dirige al blanco a través de una estructura quelante o a través de una molécula auxiliar tal como manitol, gluconato, glucoheptonato, tartrato y similares. Cuando se usa una estructura quelante para proveer proximidad espacial entre el radionúclido y la molécula que se dirige al blanco, la estructura quelante puede asociarse directamente con la molécula que se dirige al blanco o puede asociarse con la molécula que se dirige al blanco a través de una molécula auxiliar tal como manitol, gluconato, glucoheptonato, tartrato y similares. Cualquier estructura quelante adecuada puede usarse para proveer proximidad espacial entre el radionúclido y la molécula que se dirige al blanco del agente a través de la asociación no covalente. Muchas estructuras quelantes se conocen en la materia. De preferencia, la estructura quelante es una estructura de N2S2, una estructura de NS3, una estructura de N , una estructura que contiene isonitrilo, una estructura que contiene hidrazina, una estructura que contiene el grupo de HYNIC (ácido hidrazinonicotínico), una estructura que contiene un grupo de ácido 2-metiltionicotínico, una estructura que contiene un grupo de carboxilato, y similares. En algunos casos, la quelatación puede lograrse sin incluir una estructura de quelatación separada, debido a que el radionúclido quelatan directamente los átomos en la porción que se dirigen al blanco, por ejemplo, a átomos de oxígeno en los grupos fosfato o en los grupos carboxilato. La estructura de quelatación, la molécula auxiliar, o el radionúclido se pueden colocar en proximidad espacial para cualquier posición de la molécula que se dirige al blanco que no interfiere con la interacción de la molécula blanco con su receptor en tumores. La estructura de quelatación, molécula auxiliar, o radionúclido puede asociarse covalente o no covalentemente con cualquier porción de la molécula que se dirige al blanco excepto la porción de unión al receptor. Por ejemplo, la estructura de quelatación, la molécula auxiliar, o radionúclido puede asociar con la porción de fosfato de I a molécula que se dirige al blanco, con la porción -X- de la molécula que se dirige al blanco. Los radionúclidos pueden colocarse en proximidad espacial a la molécula que se dirige al blanco usando procedimientos conocidos que efectúan u optimizan la quelatación, asociación o unión del radionúclido específico a los ligandos. Por ejemplo, cuando 123l es el radionúclido, el agente de formación de imágenes puede marcarse de acuerdo con los procedimientos de radioyodación conocidos tales como radioyodación directa con cloramina T, intercambio de radioyodación para un halógeno o un grupo organometálico, y similares. Cuando el radionúclido es 99rnTc, el agente de reproducción de imágenes puede marcarse usando cualquier método adecuado para unir 99mTc a una molécula de ligando. De preferencia, cuando el radionúclido es 99mTc, una molécula auxiliar tal como manitol, gluconato, glucoheptonato, o tartrato se incluye en la mezcla de reacción de marcado, cono sin una estructura de quelatación. Más preferiblemente, 99mTc se coloca en proximidad espacial a la molécula que se dirige al blanco reduciendo 99mTCO4 con estaño en presencia de manitol y la molécula que se dirige al blanco. Cuando Ap A o un análogo de Ap4A es la molécula que se dirige al blanco, preferiblemente se realizó reduciendo aproximadamente de cincuenta a 100 mCi de 99 TcO4 con 0.05-1 mg SnCI2 en presencia de aproximadamente 1 a 20 mg de manitol, para cada mg de o análogo de Ap4A. Más preferiblemente, para cada mg de Ap A o análogo de Ap4A, aproximadamente 0.05 mg SnCI2 y aproximadamente 10 mg de manitol se usan para reducir el 99mTcO . Otros agentes de reducción, v.gr., tartrato de estaño, también se pueden usar para formar el agente de reproducción de imágenes de la invención. Un procedimiento ilustrativo para colocar 99mTc en proximidad espacial a Ap A y el análogo de Ap A en el cual la porción de "X" es -CHCI- se exhibe en el Ejemplo 1. Después de que se completa la reacción de marcado, la mezcla de reacción opcionalmente se puede purificar usando uno o más pasos de cromatografía de líquidos de alto rendimiento (CLAR). Cualquier sistema adecuado de CLAR puede usarse si se lleva a cabo un paso de purificación, y el rendimiento o agente de reproducción de imágenes de la invención. Por ejemplo, el pH puede varar, v.gr., surgir para disminuir el tiempo de elución del pico que corresponde al agente de formación de imágenes de la invención. La invención se modaliza en un equipo para reproducir imágenes comprende uno o más de los agentes de reproducción de imágenes descritos antes, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como albúmina de suero humana. La albúmina de suero humana para usarse en el equipo de la invención se puede hacer de cualquier forma, por ejemplo, a través de la purificación de la proteína de suero humana o a través de la expresión recombinante de un vector que contiene un gen que codifica albúmina de suero humana. Otras substancias también se pueden usar como vehículos de acuerdo con esta modalidad de la invención, por ejemplo, detergentes, alcoholes diluidos, carbohidratos, moléculas auxiliares y similares. El equipo de la invención, desde luego, también puede contener otros artículos que puede facilitar su uso, tales como jeringas, instrucciones, frascos de reacción y similares. En una modalidad, un quipo de cuerdo con la invención contiene de aproximadamente 1 a alrededor de 30 mCi del agente de reproducción de imágenes de tumores marcado con radionúclidos descrito antes, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los equipos de la invención pueden incluir análogos de Ap A marcados con radionúclidos. El agente de reproducción de imágenes de tumores y vehículo pueden proveerse en solución o en forma liofilizada. Cuando el agente de formación de imágenes de tumores y vehículo del equipo están en forma liofilizada, el equipo puede contener opcionalmente un medio de reconstitución estéril y fisiológicamente aceptable tal como agua, solución salina, solución salina con pH regulado, y similares. En otra modalidad, el equipo de la invención puede contener la molécula que se dirige al blanco no marcada la cual se ha combinado covalente o no covalentemente con un agente quelante; una molécula auxilia tal como manitol, gluconato, glucoheptonato, tartrato y similares; y un agente reductor tal como SnCI2 o tartrato de estaño. En esta modalidad, el equipo puede incluir Ap4A no marcado o un análogo de Ap4A no marcado. La molécula de dirección al blanco/agente quelante no marcados, la molécula auxiliar y el agente reductor pueden proveerse en solución o en forma liofilizada y estos componentes del equipo de la invención opcionalmente pueden contener estabilizadores tales como NaCI, silicato, soluciones reguladoras de fosfato, ácido ascórbico, ácido gentisico y similares. La estabilización adicional de los componentes de equipos puede proveerse en esta modalidad, por ejemplo, proveyendo el agente reductor en una forma resistente a la oxidación. La determinación y optimización de dichos estabilizantes y métodos de estabilización están dentro del nivel de experiencia de la técnica. Cuando la molécula de dirección al blanco/agente quelante no margados de esta modalidad tienen forma liofilizada, el equipo puede contener opcionalmente un medio de reconstitución estéril y fisiológicamente aceptable, tal como agua, solución salina, solución salina con pH regulado, y similares. Las cantidades de la molécula de dirección al sitio/agente quelante no marcados, molécula auxiliar, y agente reductor en esta modalidad se optimizan de acuerdo con los métodos para formar el conjunto de agente de reproducción de imágenes de tumores exhibido antes. Los radionúclidos, tales como 99mTc de un generador de Mo/ Te comercialmente disponible o 123, I comercialmente disponible, puede combinarse con la molécula de dirección al blanco/agente quelante no marcado y el agente reductor durante un tiempo y a una temperatura suficientes para quelar el radionúclido a la molécula de dirección al blanco/agente de quelatación y el agente de formación de imágenes así formado se inyectó en el paciente. Los agentes de reproducción de imágenes de tumor de la invención pueden usarse de acuerdo con los métodos de la invención por los expertos en la materia, v.gr., por especialistas en medicina nuclear, para reproducir una imagen de tejido en un mamífero. Cualquier tumor de mamífero puede ser reproducido en la imagen de agentes de formación de imágenes de la invención son adecuados para reproducir las imágenes de tumores de mama, melanomas de tumores de próstata, tumores de colon, etc. Los métodos de la invención pueden emplear Ap4A marcado con radionúclidos o un análogo de Ap A marcado con radionúclidos. Las imágenes son generadas en virtud de las diferencias en la distribución espacial de los antes de formación de imágenes que se acumulan en los diferentes tejidos u órganos del mamífero. La distribución espacial del agente de formación de imágenes acumuladas en un mamífero en un órgano, o en un tejido puede medirse usando cualquier medio adecuado, por ejemplo, una cámara gama, un aparato de TEP, un aparato de TCEUF, y similares. Algunos tumores pueden ser evidentes cuando un punto menos intenso aparece dentro de la imagen, por ejemplo, dentro de un Ap4A marcado con 99mTc que indica la presencia de tejido en el cual una concentración inferior de agente de reproducción de imágenes se acumula en relación con la concentración de agente de formación de imágenes la cual se acumula en el tumor. Alternativamente, un tumor puede detectarse como un punto más intenso dentro de la imagen, indicando una región de concentración incrementada del agente de reproducción de imágenes ene I sito del tumor en relación con la concentración del agente que se acumula en el tejido circundante. El grado de acumulación del agente de reproducción de imágenes puede cuantificarse usando métodos conocidos para cuantificar emisiones radioactivas. Un enfoque de reproducción de imágenes particularmente útil emplea más de un agente de reproducción de márgenes para llevar a cabo estudios simultáneos. Los agentes de formación de márgenes de la invención se usan de la siguiente forma. Una cantidad efectiva de un agente de formación de imágenes que comprende por lo menos una molécula que se dirige al blanco y un núclido (de 1 a 50 mCi) se pueden combinar con un vehículo farmacéuticamente aceptable para usarse en los estudios de formación de imágenes. De acuerdo con la invención, "una cantidad efectiva" del agente de reproducción de imágenes de la invención se define como una cantidad suficiente para dar una imagen aceptable usando equipo que está disponible para uso clínico. Una cantidad efectiva del agente de reproducción de imágenes de la invención se puede administrar en más de una inyección. Las cantidades efectivas del agente de formación de imágenes de la invención variarán de acuerdo con los factores tal como el grado de susceptibilidad del individuo, la edad, sexo y peso del individuo, respuestas idiosincrátícas del individuo, la dosimetría. Las cantidades efectivas del agente de formación de imágenes de la invención también variarán de acuerdo con el instrumento y factores relacionados con la película. La optimización de dichos factores está dentro del nivel de experiencia en la materia. Como se usa en la presente, "vehículo farmacéuticamente aceptable incluye cualesquiera y otros los solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos, agentes de retardo de absorción y similares. La formulación usada en la presente invención también puede contener estabilizantes, conservadores, soluciones reguladoras de pH, antioxidantes, u otros aditivos conocidos por los expertos en la materia. El uso de dichos medios y agentes para substancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica. Los compuestos activos suplementarios también pueden incorporarse en el agente de formación de imágenes de la invención. El agente de reproducción de imágenes de la invención puede administrarse además a un individuo en un diluyente o adyuvante apropiado, coadministrado con inhibidores de enzima o en un vehículo apropiado tal como albúmina de suero humano o liposomas. Los diluyentes farmacéuticamente aceptables incluyen solución salina estéril y otras soluciones reguladoras acuosas. Los adyuvantes contemplados en la presente incluyen resorcinoles, agentes tensoactivos no iónicos, tales como éter de polioxietileno oleilo y éter n-hexadecilo polietileno. Los inhibidores de enzimas incluyen inhibidor de tripsina pancreática, pirocarbonato de dietilo, y trasilol. Los inhibidores de liposomas incluyen emulsiones de agua en aceite en agua CGF así como liposomas convencionales (Strejan y otros, (1984) J. Neuroimmunol. 7, 27). Preferiblemente, el agente de reproducción de imágenes de la invención se administró intravenosamente y el agente de reproducción de imágenes se formulará como una solución acuosa parenteralmente aceptable, libre de pirógeno, estéril. La preparación de dichas soluciones parenteralmente aceptables, tomando en cuenta el pH, isotonicidad, estabilidad y similares, están dentro de la experiencia en la materia. Una formulación preferida para la inyección intravenosa deberá contener, además del agente de reproducción de imágenes, un vehículo isotónico tal como Inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer Lactatada, u otro vehículo como se conoce en la materia. La cantidad del agente de reproducción de imágenes usados para fines de diagnóstico y la duración del estudio de reproducción de imágenes dependerá de la naturaleza y severidad de la condición que está siendo tratada, de la naturaleza de los tratamientos terapéuticos a los que se ha sometido el paciente, y de las respuestas idiosincráticas del paciente. Finalmente, el médico decidirá la cantidad de agente de reproducción de imágenes para administrar a cada paciente individual y la duración del estudio de reproducción de imágenes. Los siguientes ejemplos se incluyen con fines ilustrativos únicamente y no se pretende que limiten el alcance de la invención. EJEMPLO 1 SÍNTESIS DE 99mTc-Ap4A-coligando (manitol o gluconato) y 99mTc- Ap2CHCIp2A-coligando (manitol o gluconato) Se obtuvieron de cincuenta a 100 mCi de 99mTc de un generador de 99Mo/99 Tc (DuPont Merk, Billerica, MA) en 1.5 mi de agua estéril y se mezcló con una solución de un mg de Ap4A (Sígma, St. Louis, MO), 50 mg de manitol y 100 µg SnCI2 en 200 µg de agua estéril. La solución se agitó y se dejó reaccionar durante diez minutos a temperatura ambiente. La mezcla de reacción luego se purificó con CLAR por adsorción en una columna de fase inversa de C8-ODS de 25 cm de largo y 5 mm de diámetro (Waters, Milford, MA) y elución con CH3CN: solución reguladora de pH 2.4. La Figura 1 muestra un perfil de elución usando este procedimiento con un material no marcado mostrado por la línea negra (medido por A254), y el material marcado mostrado en la línea sólida más clara (medido por t-emisiones). La línea punteada en la Figura 1, es el perfil de elución de radioactividad. El pico de elución radioactivo a 15.826 minutos es 99mTc-Ap4A, que se inyectó en ratones enfermos como se exhibió en el Ejemplo 2, para reproducir las imágenes del tejido. El pico radioactivo que eluye a 1-3 minutos en este cromatograma fue 99mTc-manitol, que se usó como un control en los experimentos descritos en el Ejemplo 2. Un procedimiento similar se usó para marcar el análogo de Ap4A de la fórmula: A-(p)2-CHCI-(p)2-A Con 99mTc. La Figura 2, es un perfil de elución de CLAR de fase inversa de una preparación de 99mTc-Ap A en el cual 10 mg de manitol y 40 µg de SNCI2 se usó para llevar a cabo la reducción de un mg de Ap A. Esta mezcla de reacción también se agitó y se dejó reaccionar durante diez minutos a temperatura ambiente. La purificación de CLAR de la mezcla de reacción se llevo a cabo como antes, con excepción de que la relación de CH3CN:solución reguladora de pH fue de 15:85 y la solución reguladora de pH de elució contuvo 3.0 mi de H3PO4 concentrado y 3.36 mi de hidróxido de t-butilamonio titulado con NaOH a pH 3.4. La Figura 2, muestra el perfil de elución de la mezcla de reacción, teniendo elución pico en 13.430 minutos que corresponde a 99mTc-Ap4A.

Cuando se usó un mg de manitol como una molécula auxiliar en la reacción de marcado, se obtuvieron rendimientos muy bajos de 99mTc-Ap4A. EJ EM PLO 2 Se marcó Ap A con Tc-99m por reacción con gluconato de Tc- 99m y el producto se purificó por columna C-8-9ds de CLAR de fase inversa (0.5 x 25 cm). El producto se eluyó con CH3CN/solución reguladora de pH (20:80 en volumen): La solución reguladora de pH se preparó mezclando H3PO4 (3.1 mi) con hidróxido de t-butilamonio (3.9 mi) y se ajustó el pH a 2.4 agregando hiróxido de t-butilamonio adicional. El sistema de CLAR que usó Tc-99m-AP4A-glico eluido con un tiempo de retención de 16 minutos. Los rendimientos radioquímicos fueron de 10-30% y la pureza radioquímica fue de >95%. EJ EMPLO 3 REPRODUCCIÓN DE IMÁGEN ES DE TUMORES Un modelo de tumor se preparó inoculando BT20 de células de tumor de mama humano en la región del hombro de ratones enfermos. Cuando los tumores alcanzaron 0.5 cm, los grupos de ratones (n = 14) se inyectaron con 0.5 m-Ci de TC-99m-AP4A-gluco o Tc-99,\m-manitol (control), preparado como se describió antes. En 0, 5, 3 y 5 horas, se adquirieron imágenes de cámara gama y se calcularon relaciones de tumor a contralateral. En 5 y 8 horas, los grupos de 9 y 5 animales se sacrificaron y se midió biodistribución. En todos los animales, los tumores se visualizaron claramente en 0.5 horas a T/S (relación de tumor a sangre) aumentado en las últimas imágenes. En las tres representaciones de imágenes, hubo un nivel muy bajo de acumulación traza en tejidos normales. Los estudios de biodistribución demostraron concentraciones altas (%ID/gramos) de TC-99m-AP4-A-manitol en los tumores: 7.3+3.2 y 11.0+2.8 en 5 y 8 horas, respectivamente. En contraste, la concentración de Tc-99m-manitol fue de 0.9%. La Fig. 3, es una imagen producida generalmente usando la técnica anterior.

Claims (21)

1. REIVINDICACIONES 1. Un agente de reproducción de imágenes de tumor comprendiendo un radionúclido asociado con una porción de dirección a blanco, dicha porción de dirección a blanco comprendiendo un residuo de polifosfato de nucleótidos. 2. Un agente de reproducción de imágenes de tumores que comprende un radionúclido asociado con una porción de dirección a blanco, la porción de dirección a blanco comprendiendo un residuo de precursor de polifosfato de nucleótidos incluyendo la fórmula A), B), C), o D): A) NUl-(p)m-X B) Nu1-(p)„-X-(p)m-Nu2 C) Nu1-(p)„-X1-(p)m-Nu2
2. Nu3-(p)r-X2-(p)q-Nu4, D) Nu1-(p)„-X1-(p)m-Nu2
3. X3 Nu3-(p)p-X2-(p)q-Nu4, en donde (1) cada uno de Nu-?-Nu es un nucleosido seleccionado independientemente; (2) p se selecciona del grupo que consiste de una porción de fosfato, una porción de fosforotioato, una porción de alquilfosfonato, una porción de fosforoditioato, una porción de fosforamidato, una porción de aminoalquilfosforoamidato, una porción de aminoalquilfosfotriester, una porción de aminoalquilfosforotioamidato y una porción de tiofosfato; (3) cada uno de X, Xi, X2, y X3 se selecciona del grupo que consiste de un grupo alquilo, un grupo alquilo halogenado, un grupo alquilo que contiene nitrógeno, un grupo alquilo que contiene azufre, un grupo alquileno, un grupo alquileno halogenado, un grupo alquileno que contiene nitrógeno y un grupo alquileno que contiene azufre; (4) (n + m) es de 2 a 8; y (r+q) es de 2 a 8. 3. El agente de la reivindicación 2, en donde cada uno de Nu2-Nu4 se selecciona independientemente del grupo de nucleósidos que consiste de adenosina, guanina, histidina, timidina, uracilo e i n o s i n a .
4. 4. El agente de la reivindicación 2, en donde por lo menos uno de Nu!-N es adenosina.
5. 5. El agente de al reivindicación 4, en el cual cada uno de Nu-?-Nu4 es adenosina.
6. 6. El agente de al reivindicación 1 o reivindicación 2, en donde el radionúclido se selecciona del grupo que consiste de 123l, 99mt T„e, 18, F-, 68^ Ga„, 62 C,u,, 111 I l „n.
7. 7. El agente de la reivindicación 2, en donde el agente de reproducción de imágenes comprende el producto de combinación del precursor de dirección al blanco con una estructura quelante que quelata dicho radionúclido.
8. 8. El agente de la reivindicación 7, en donde la estructura quelante se selecciona del grupo que consiste de una estructura de H2S2, una estructura de -NS3, una estructura de -N , un isonitrilo, una hidrazina, una estructura que contiene un grupo de HYNIC, grupo de ácido 2-metiotiolnicotínico y una estructura que contiene un grupo carboxilato.
9. 9. El agente de cualquiera de las reivindicaciones 7-8, en donde el radíonúclido es 99mTc.
10. 10. El agente de cualquiera de las reivindicaciones 2-5, en la cual x es una porción alquilo o una porción cloroalquilo y p es una porción fosfato.
11. 11. Un agente de formación de imágenes de tumores que comprende un complejo de 99 Tc: Ad-(p)2-CH-(p)3-Ad X Ad - (p)2-CH-(p)2-Ad en donde Ad es adenosina, y p es PO2H, y X es una porción quelante que contiene 99mTc.
12. 12. Un método para reproducción de imágenes de tumores en un mamífero que comprende los pasos de administrar al mamífero el agente de formación de imágenes de la reivindicación 1, reivindicación 2, o reivindicación 11.
13. 13. El método de la reivindicación 12, en el cual el método detecta un tumor en un mamífero, el método comprendiendo los pasos de administrar al mamífero el agente de formación de imágenes, detectando la distribución espacial del agente acumulado en el mamífero.
14. 14. Un método para reproducción de imágenes de un tumor en un mamífero que comprende los pasos de administrar al mamífero un agente de reproducción de imágenes de acuerdo con la reivindicación 1, reivindicación 2, o reivindicación 11.
15. 15. El método de la reivindicación 14, en la cual el agente de formación de imágenes es el agente de representación de imágenes de la reivindicación 10.
16. 16. El método de la reivindicación 14, que comprende además hacer reaccionar el precursor de dirección al blanco con una porción que contiene radionúclidos.
17. 17. Un equipo para reproducción de imágenes de tumores que comprende un suministro de un precursor de dirección al blanco, el precursor de dirección al blanco teniendo la fórmula A), B), C), o D): A) NUl-(p)m-X B) Nu1-(p)p-X-(p)m-Nu2 C) Nu1-(p)n-X1-(p)m-Nu2 Nu3-(p)r-X2-(p)q-Nu4, D) Nu?-(p)„-X?-(p)m-Nu2 X3 Nu3-(p)p-X2-(p)q-Nu4, en donde (1) cada uno de Nu?-Nu4 es un nucleosido seleccionado independientemente; (2) p se selecciona del grupo que consiste de una porción de fosfato, una porción de fosforotioato, una porción de alquilfosfonato, una porción de fosforoditioato, una porción de fosforamidato, una porción de aminoalquilfosforoamidato, una porción de aminoalquilfosfotriester, una porción de aminoalquilfosforotioamidato y una porción de tiofosfato; (3) cada uno de X, X1f X2, y X3 se selecciona del grupo que consiste de un grupo alquilo, un grupo alquilo halogenado, un grupo alquilo que contiene nitrógeno, un grupo alquilo que contiene azufre, un grupo alquileno, un grupo alquileno halogenado, un grupo alquileno que contiene nitrógeno y un grupo alquileno que contiene azufre; (4) (n + m) es de 2 a 8; y (r+q) es de 2 a 8.
18. 18. El equipo de la reivindicación 17, que además comprende un agente quelante, el agente quelante comprendiendo una molécula auxiliar seleccionada del grupo que consiste de manitol, gluconato, glucoheptonato y tartrato; y b) un agente de reducción que contiene estaño.
19. 19. El equipo de la reivindicación 17, en donde por lo menos uno de NUÍ-N4 es adenosina.
20. 20. El equipo de la reivindicación 19, en donde por lo menos uno de Nu?-N4 es adenosina.
21. 21. El equipo de la reivindicación 19, en donde dicho equipo comprende además por lo menos una substancia de formación de quelantes. 24. El equipo de la reivindicación 23, en donde la substancia de formación de quelantes se selecciona del grupo que consiste de una estructura de -N2S2, una estructura de -NS3, una estructura de -N4, un isonitrilo, una hidrazina, una estructura que contiene un grupo de HYNIC, grupo de ácido 2-metiotiolnicotínico y una estructura que contiene un grupo carboxilato. 25. El equipo de cualquiera de las reivindicaciones 23 ó 24, en donde el radionúclido es 99mTc. 26. El equipo de cualquiera de las reivindicaciones 2-5, en la cual x es una porción alquilo o una porción cloroalquilo y p es una porción fosfato. 27. El equipo de la reivindicación 17, en donde el nucleosido es adenosina, p es un fosfato, n = 2 y m=2.