COMPOSICIONES Y MÉTODOS DE DESTOXIFICACION DE BEAUVERICINA DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a la detección y aislamiento de organismos de_ degradación de beauvericina y a composiciones y métodos para la destoxificación o degradación de beauvericina en grano. Este método tiene amplia aplicación en biotecnología agrícola y agricultura de grano y en la mejora de la calidad de grano alimenticio y seguridad de alimentación. Las enfermedades fúngicas son problemas comunes en la agricultura de cosechas. Se han hecho muchos avances contra las enfermedades de plantas según ilustrados por el uso de plantas híbridas, pesticidas y prácticas agrícolas no probadas. Sin embargo, como cualquier propietario o jardinero puede atestiguar, los problemas de enfermedad fúngicas en plantas continúan ocasionando dificultades en el cultivo de plantas. De esta manera, existe la necesidad continua de nuevos métodos y materiales para resolver los problemas ocasionados por enfermedades fúngicas de plantas. Estos problemas pueden ser satisfechos a través de una variedad de aspectos. Por ejemplo, los organismos infecciosos pueden ser controlados a través del uso de agentes que son selectivamente biocidicos para los patógenos. Otro método es la interferencia con el mecanismo a través del cual el patógeno invade a la planta cosechada huésped. Otro método más, en el caso de patógenos que ocasionan pérdidas de cosechas, es la interferencia con el mecanismo a través del cual el patógeno ocasiona daño a la planta cosechada huésped. Otro método más, en el caso de patógenos que producen toxinas que no son deseables a mamíferos u otros animales que se alimentan de plantas cosechadas, es la interferencia con la producción de toxina, almacenamiento o actividad. Dentro de Fusarium sp . Existen varios patógenos importantes de maiz y otros cereales en varios países. En el maiz, Fusari um se sabe que ocasiona daño en la raiz, tallo y espiga que da como resultado la severa reducción de la cosecha. La etiología del moho de espiga de Fusari um está pobremente entendida, aunque el daño fisico a la espiga y ciertas condiciones ambientales pueden contribuir a su ocurrencia (Nelson PE (1992) "Taxonomy and Biology of Fusari um moniliforme" . Mycopatholagia 117: 29-36). Fusari um puede ser aislado de la mayor parte del maiz desarrollado en el campo, cuando no está presente ningún moho visible. Esta relación entre la infección de siembra y las enfermedades de tallo y espiga ocasionado por Fusari um no es clara. La resistencia genética al moho de semilla visible ha sido identificada (Gendloff E, Rossman E, Cásale W, Isleib T, Hart P. 1986, "Components of resistance to Fusari um ear rot in field corn*' Phytopathology 76: 684-688; Holley RN, Hamilton PB, Goodman MM, 1989, "Evaluation sf tropical maize germplasm for resistance to kernel colonization by Fusari um moniiiforme" Plant Dis 73:578-580). Las micotoxinas producidas por la especie Fusari um que infectan plantas pueden acumularse en plantas infectadas o en granos almacenados, presentando serias consecuencias de salud para ganado, seres humanos y otros consumidores de carne u otros productos alimenticios de dicho ganado. La infección por Fusari um ha sido asociada con micotoxicosis crónica o aguda tanto en animales de granja como en el hombre (Botallico, et al) . Una micotoxina importante que ha sido encontrada que es producida por ciertos Fusari um sp y ha sido identificada en cultivos infectados por Fusari um es la beauvericina. La beauvericina es una toxina fúngica producida por varias especies Fusarium, asi como el hongo Beauveria bassiana . La beauvericina es un péptido cíclico, con efectos tóxicos en insectos así como líneas de células humanas y de murino. La actividad de beauvericina se debe a las propiedades yonofosfóricas del compuesto. La beauvericina es capaz de formar complejos con cationes de metal alcalino y afecta las membranas de célula de transporte transversal iónico. Además, se ha reportado que la beauvericina es uno de los inhibidores más potentes de acetiltransfera de colesterol. La beauvericina también ha mostrado inducir un tipo de muerte de célula muy similar a apoptosis. La evidencia circunstancial además indica que la beauvericina actúa en conjunto con otras toxinas Fusari um para ocasionar efectos tóxicos adicionales (1) . Se ha reportado que la beauvericina se encuentra en niveles importantes en el maíz de Italia, Perú y Polonia (1, 2, 3) . Probablemente la beauvericina también será encontrada en otras áreas en donde se completen más estudios. La especie Fusari um se encuentra en virtualmente todo el moho así como en maíz saludable. La seguridad alimenticia es un aspecto importante para los productores de grano. La European Commonwealth está considerando imponer limites en varios niveles de micotoxina de grano importado. Existe la necesidad en la técnica de métodos novedosos con los cuales la beauvericina puede ser eliminada de un grano de planta o de cosecha. Se considera importante por aquellos expertos en la técnica continuar el desarrollo de invenciones con el fin de proteger al consumidor final de una planta o grano cosechado. La presente invención proporciona los reactivos y metodología necesarios para mitigar plantas y granos cosechados de beauvericina. En una modalidad, la presente invención proporciona un organismo que tiene la capacidad de degradar o destoxificar la beauvericina o una micotoxina estructuralmente relacionada. La presente invención además puede incluir un mutante del organismo de tipo silvestre que tiene la habilidad de degradar o destoxificar la beauvericina o micotoxina estructuralmente relacionada. La presente invención además proporciona un método para la destoxificación de plantas pre o postcosechadas utilizando un microbio que tiene la habilidad de degradar o -destoxificar la beauvericina ? micotoxina estructuralmente relacionada. La presente invención se basa en -el descubrimiento de un organismo que tiene la habilidad de degradar la beauvericina micotoxina. La presente invención ha resultado de una búsqueda para medios biológicos para destoxificar la beauvericina y comprende varias especies bacterianas, aisladas de trigo, moho, so y composta residencial, capaz de desarrollarse en beauvericina así como una fuente única de carbono, degradándola parcial o completamente en el proceso. La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique otra cosa, técnicas convencionales de botánica, microbiología, química y bioquímica, las cuales están dentro de la experiencia de la técnica. Dichas técnicas se ilustran completamente en la literatura. Ver por ejemplo J.H. Langenheim and K.V. Thimann, Botany: Plant Biology and Its Relation to Human Affairs (1982) John Wiley; Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol. 1 (I.K. Vasil, ed. 1984) ; R.V. Stanier, J.L. lngraharn, M.L. Wheelis, and P.R. Painter, The Microbial World, (1986) 5th Ed., Prentice-Hall; O.D. Dhringra and J.B. Sinclair, Basic Plant Pathology Methods, (1985) CRC Press; Maniatis, Fritsch & Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982) ; DNA Cloning,
Vols. I and il (D.N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide
Synthesis (M.J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization
(B.D. Hames & S.J. Higgins eds. 1984); the series in Methods in Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, ads . , Academic
Press, Inc.); and Current Protocols in Molecular Biology
(John Wiley & Sons, Inc. 1996) . Para describir la presente invención, se emplearán los siguientes términos y están destinados a ser definidos como se indica más adelante. Un microbio está definido como cualquier microorganismo (incluyendo organismos eucarióticos y procarióticos) tales como hongos, levaduras, bacterias, actinomicetos, algas y protosuarios, así como otras estructuras unicelulares capaces de desarrollarse en cultivo. Un microbio productor de beauvericina es cualquier microbio capaz de producir ia beauvericina de micotoxina o análogos de la misma. Dichos microbios generalmente son miembros del género fúngico Fusari um, así como organismos recombinantemente derivados los cuales han sido genéticamente alterados para que puedan producir beauvericina o análogos del mismo. Por degradación de beauvericina teniendo la habilidad de degradar beauvericina, se entiende cualquier modificación o habilidad para hacer cualquier modificación a la molécula de beauvericina o molécula estructuralmente relacionada que ocasiona una reducción en o pérdida de su actividad tóxica. Dicho cambio puede comprender el desdoblamiento de cualquiera de las uniones, oxidación, reducción, la adición o eliminación de una porción química, o cualquier otro cambio que afecte la actividad de la molécula. Además, la beauvericina químicamente alterada puede ser aislada de cultivos de microbios que produzcan una enzima de esta invención, tal como desarrollando los organismos en medios conteniendo beauvericina radioactivamente marcada, rastreando la marca y aislando la toxina degradada de un estudio adicional. La beauvericina degradada puede ser comparada con el compuesto activo para su fitotoxicidad o toxicidad de mamífero en especies sensibles conocidas tales como porcinos. Por micotoxina estructuralmente relacionada se entiende cualquier micotoxina que tiene una estructura química relacionada con la beauvericina o análogo de beauvericina, así como otras micotoxinas que tienen estructuras químicas similares que puede esperar que se destoxifiquen a través de la actividad de enzimas de degradación de beauvericina. Grano cosechado se define como cualquier forma de grano que ha sido algo removido del ambiente en donde se ha desarrollado. Por ejemplo, el grano cosechado puede comprender espiga de maíz, o semillas de maíz, por ejemplo. El grano cosechado además puede comprender aquel de almacenamiento o el procesado. El grano procesado es un grano que ha sido llevado a través de alguna forma de procesamiento y será utilizado en la producción de alimento para consumo humano o será utilizado como alimento para animales ("grano de alimentación") . Dentro de esta solicitud, planta se refiere a un organismo fotosintético incluyendo, pero no limitándose a algas, musgo, helécho, gimnosperma, o angiosperma. Preferiblemente, dicha planta es una a partir de la cual el grano de alimentación (preferiblemente para consumo humano o animal) puede ser cosechado ("grano cosechado") . Muy preferiblemente, dicha planta incluye cualquier variedad de maiz (maiz) trigo, sorgo, arroz y cebada. Una planta madura es definida como una planta en donde ha ocurrido el desarrollo normal de todos los órganos vegetativos y reproductores. Una cél ula de planta incluye cualquier célula derivada de una planta incluyendo el callo asi como protoplastos, y células embriónicas o gaméticas. La presente invención comprende una metodología para el aislamiento de un microorganismo que tenga la habilidad de degradar beauvericina o una micotoxina estructuralmente relacionada, un microorganismo que tenga la habilidad de degradar beauvericina o una micotoxina estructuralmente relacionada, y una metodología para la degradación de beauvericina o una micotoxina estructuralmente relacionada en una planta en el campo así como en un grano cosechado. Dicho microorganismo puede incluir, pero no se limita a bacterias y hongos. Con el fin de aislar dicho organismo teniendo la habilidad de degradar beauvericina o una micotoxina estructuralmente relacionada, se desarrolló un ensayo en donde un microorganismo es - inicialmente aislado de un material fuente. Dicho material fuente puede comprende cualquier planta o material asociado con plata incluyendo, pero no limitándose a, cualquier tejido verde tal como el tallo, hoja espiga o semilla. El material asociado con la planta puede incluir, pero no se limita al suelo en acercamiento próximo a la planta. Dicho microorganismo después es cultivado en el medio que tenga beauvericina como la única fuente de carbono. El medio después es observado para la desaparición de los cristales de_ beauvericina que están inicialmente presentes en el medio antes de cultivar el microorganismo en el medio. La desaparición de los cristales se entiende que indica que el microorganismo en el cultivo tiene la habilidad de degradar beauvericina. El ensayo es denominado un ensayo de desaparición de cristal. Para probar la habilidad de dicho microorganismo aislado por la metodología anteriormente descrita para degradar o destoxificar beauvericina o una micotoxina estructuralmente relacionada en una planta, una planta madura es inoculada con un organismo productor de beauvericina y después tratada con una cantidad apropiada de bacterias teniendo la habilidad de degradar o destoxificar beauvericina o sus derivados o análogos . El tratamiento puede comprender la aplicación de una composición que comprende una cantidad eficaz de un organismo que tiene la habilidad de degradar beauvericina a dicha planta por lo que la beauvericina presente es degradada. Preferiblemente, dicha aplicación consiste de aplicar tópicamente la composición sobre los tejidos de la planta, de manera que la beauvericina sobre los tejidos es degradada. Alternativamente, la planta puede ser tratada con dicho organismo después de la cosecha (tratamiento de grano cosechado) . Una utilidad importante de la presente invención es la destoxificación de zearalenona presente en el grano después de la cosecha. Un material o "muestra" de alimentación adecuado es lavado con una cantidad conocida de micotoxinas suministrada en un solvente adecuado, preferiblemente etanol, a una velocidad apropiada, de preferencia 1 ml de solvente por gramo, seguido por un mezclado suficiente para distribuir la micotoxina a través del material. Una muestra de control preferiblemente recibe solo el solvente. La concentración final de la micotoxina de preferencia está dentro 0.1 y 1.0 mg por gramo de material de alimentación. La mezcla después puede ser secada con aire para remover el exceso de solvente. La muestra después de ser inoculada con 105-107 unidades formadoras de colonia (cfu) g de células de fase log de un microorganismo que tiene la habilidad de degradar dicha micotoxina, a una velocidad suficiente, preferiblemente 1 ml de células por gramo, seguido por un mezclado suficiente para distribuir las células a través de la muestra. Una muestra de control puede comprender células que han sido aniquiladas por calentamiento, preferiblemente alrededor de 80°C. Una muestra de control además puede comprender células de un microorganismo que no es capaz de degradar dicha micotoxina. Las muestras después son colocadas en un recipiente, el recipiente cerrado e incubado durante un tiempo suficiente a una temperatura apropiada. El periodo de preferencia está dentro de la escala de 1 día a dos semanas y la temperatura preferiblemente es de temperatura ambiente o aproximadamente 28 °C. Después de la incubación, los contenidos del recipiente son extraídos en un solvente orgánico adecuado (o mezcla acuosa orgánica) para recuperar la micotoxina. El extracto resultante después es concentrado y sometido a análisis cualitativo y cuantitativo para la presencia de dicha micotoxina. La cantidad de micotoxina detectada en el extracto después es comparada con la cantidad de micotoxina detectada en la muestra de control y la eficacia de remoción de la micotoxina expresada como porcentaje de reducción en el nivel de micotoxina en el extracto experimental según comparado con el nivel de micotoxina en la muestra de control. En la presente invención, dicha micotoxina preferiblemente es beauvericina. Estas metodologías permiten la degradación de beauvericina en o dentro de la planta o grano cosechado, proporcionando de esta manera mejora en la calidad de grano alimenticio y seguridad alimenticia. Esta invención se puede entender mejor haciendo referencia a los siguientes ejemplos no limitantes. Se apreciará por aquellos expertos en la técnica que otras modalidades de la invención pueden ser practicadas sin apartarse del espíritu y el alcance de ia invención como se describe y reclama en la presente. EJEMPLO I AISLAMIENTO DE BACTERIAS QUE DEGRADAN LA BEAUVERICINA Varias fuentes de material de planta que probablemente contienen naturalmente beauvericina fueron recolectadas como material de fuente para clasificación. Se obtuvieron semillas de trigo infestadas con Fusari um graminearum (F. graminearum; 140 muestras independientes) de una estación de crianza de trigo Pioneer Hi-Bred International, Inc. ("Pioneer") en Indiana. Se obtuvieron muestras de ensiiaje de Microbial Genetic división de Pioneer y muestras de composta de residencias locales (126 muestras independientes en total) . El metabolismo de beauvericina se midió utilizando un ensayo de desaparición de cristal. Los microbios fueron lavados del material fuente colocando una pequeña cantidad en un tubo de Falcon de siete mililitros y agregando de 1 a 2 mililitros de agua destilada estéril (produciendo "fluido de lavado") . Se dividieron las semillas de maíz con una cuchilla rasuradora y se utilizaron de una a dos semillas. Los tubos se taparon y se agitaron durante una a- tres horas a temperatura ambiente. Se preparó beauvericina (Sigma Cat. No. B7510) como una suspensión en un medio de sales minerales, y se utilizó como la única fuente de carbono. La concentración de beauvericina utilizada incluye pero no se limita a 0.75-1.0 miligramos/mililitros en un medio de sales minerales. El medio de sales minerales se preparó a través de la combinación de reactivos incluyendo, pero no limitándose a un 1.0 g/L de sulfato de amonio, 1.0 g/L de cloruro de sodio, 1.0 g/L de fosfato de potasio, dibásico, 0.2 g/L de sulfato de magnesio. La esterilización de la solución _se logró a través de filtración mediante un filtro de 0.2 mieras, aunque están disponibles varios métodos de esterilización para aquellos expertos en la técnica. Se agregaron 100 microlitros de la suspensión de beauvericina/sales minerales a cada cavidad de una placa de microtitulación (placa de 96 cavidades) . Se agregó a cada cavidad un microlitro de fluido de lavado fresco. Las cavidades de control recibieron un microlitro de agua. Después de dos semanas, un microlitro de cada cavidad se transfirió a una nueva placa de microtitulación conteniendo 100 microlitros de beauvericina/medio de sales minerales. La transferencia después se repitió cuatro semanas después. Después de seis semanas, las cavidades fueron clasificadas para desaparición parcial de cristales de beauvericinas . Típicamente, los cristales pequeños fueron solubilizados y metabolizados y solamente permanecieron los cristales de beauvericina más grandes. Este efecto se visualizó utilizando un microscopio invertido o examinado la placa visualmente desde la parte de abajo . La presente invención comprende un cultivo biológicamente puro de un microorganismo responsable de la degradación de beauvericina. Dicho microorganismo se aisló utilizando el siguiente procedimiento. Se tomó un microlitro de cavidades positivas y se agregó a un mililitro de agua estéril. Se hicieron varias diluciones de diez veces en agua estéril y se colocaron en placas 100 microlitros de cada dilución fueron puestos sobre placas y se extendieron sobre en placas de agar YDP . Las placas de agar YDP se prepararon a través de la combinación de 10 g de extracto de levadura (Difco), 20 g de peptona Bacto, 0.5 g de dextrosa, 15 g de agar Bacto en agua seguido por la esterilización mediante autoclave. A partir de estas placas de extensión de cultivo de mezcla, se rayaron colonias individuales para aislamiento en nuevas placas YDP. Se hizo un esfuerzo para seleccionar por lo menos una de cada tipo de bacterias representadas en las placas de extensión. Cada bacteria se utilizó para ser una suspensión diluida en agua estéril, y un microlitro de esta suspensión se utilizó para inocular cavidades de microtitulación conteniendo beauvericina en sales minerales como se describió anteriormente. Se realizó la caracterización inicial de bacterias a través de muestras de Gram. Se realizó una identificación más definitiva utilizando una combinación de técnica. Las placas de tallo de colonias de bacteria individuales se enviaron a Microbe Inotech Laboratories, Inc. (St. Louis, MO) para identificación tentativa. El análisis incluyó la comparación de esteres metílicos de ácido graso bacteriano con bases ole datos Aerobe and Clinical Aerobe, y la comparación de utilización del sustrato Biolog™ con una base de datos positiva Gram. Los resultados de dichas pruebas han identificado tres especies de Nocardia globulera , Rhodococcus fascians , y Bacill us sphaeri cus Gram negativas o Gram variables y se demuestra a continuación en la Tabla 1. Estos cultivos fueron depositados en American Type Culture Collection (ATCC; 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD 20852 USA) el 15 de octubre de 1996 de acuerdo con el Tratado de Budapest en el International Recognition of the Deposit of Microorganisms para Propósitos de Procedimiento de Patente . Tabla 1. Aislados Microbianos que tienen la habilidad de degradar beauvericina Número ATCC Nombre Identificación Tentativa Fuente 55850 BEA(2)2904.G4 Nocardia globulera o Semillas de trigo Rhodococcus fascians infestadas con F. Graminearum 55849 BEA(1)2904.A12 Nocardia globulera o Semillas de trigo Rhodococcus fascians infestadas con F. Graminearum 55848 BEA(1)2905.5D1 Nocardia globulera o Bacillus Semillas de trigo sphaericus infestadas con F. Graminearum 55847 BEA(1)2904.B11 Nocardia globulera o Semillas de trigo Rhodococcus erythropolis infestadas con F. graminearum EJEMPLO II TRATAMIENTO DE MAÍZ CONTAMINADO CON BEAUVERICINA A. Tratamiento de maíz contaminado en el campo Para probar la habilidad de las bacterias aisladas por la metodología antes descrita para degradar o destoxificar la beauvericina o sus derivados o análogos en maíz, se inocularon plantas maduras con una Fusari um sp productora de beauvericina, y después se trataron con una cantidad apropiada de bacterias teniendo la habilidad de degradas o destoxificar beauvericina o sus derivados o análogos. El tratamiento consiste de aplicar tópicamente una composición que comprende una cantidad eficaz de bacterias sobre los tejidos de planta de maíz de manera que la beauvericina, incluyendo cualquier derivado o análogo de beauvericina es parcial o completamente degradada o destoxificada . B. Tratamiento de maíz contaminado después de la cosecha Una muestra de uno a diez gramos de maíz triturado se combinó o "se clavó" con una cantidad conocida de beauvericina en etanol a una concentración de un gramo de beauvericina por ml de etanol, seguido por- el mezclado para distribuir la beauvericina a través de la mezcla. Una muestra o muestras de control se mezclaron solamente con el solvente. La muestra después se secó con aire para remover el exceso de solvente. Las muestras después se inocularon con 106 cfu/g de células de fase de registro de un microorganismo que tiene la habilidad de degradar beauvericina, designado BEA(2) 2904. G4
(depositado con ATCC bajo el nombre de acceso ATCC 55850) a un régimen de un ml de células por gramo, y se mezclaron bien para distribuir las células dentro de la muestra. Los controles se mezclaron con ambas células de dicho microorganismo [designado BE (2) 2904G4, depositado con el ATCC bajo el número de acceso ATCC 5585Q] que se hablan calentado a 80°C, de manera que la células están no viables o con células de un microorganismo que no tienen la habilidad de degradar beauvericina. Dicha mezcla, se colocó en un recipiente, el cual después se cerró y se incubó durante dos semanas a temperatura ambiente. Al final del periodo de incubación, el recipiente se abrió y todos los contenidos se extrajeron en un solvente orgánico adecuado para recuperar la beauvericina. El extracto se concentró y se sometió a análisis cualitativo y cuantitativo para la detección de beauvericina. La cantidad de beauvericina se determinó y se comparó con los controles. La eficacia de remoción de beauvericina se determinó a través de la comparación del porcentaje de reducción (si hay) de la cantidad de beauvericina en la muestra comprendiendo un microorganismo que tiene la habilidad de degradar beauvericina a la reducción de la cantidad de beauvericina presente en la muestra de control. Los microorganismos designados
BEA(l) 2904.A12 (ATCC número de acceso 55849), BE (1) 2905.DI
(ATCC número de acceso 55848), o BE (1) 2904.Bll (ATCC número de acceso 55847) también son capaces de degradar beauvericina y se pueden utilizar para el propósito anteriormente descrito . Aunque una forma preferida de la invención ha sido mostrada en los dibujos y descrita, ya que serán evidentes variaciones en formar preferida para aquellos expertos en la técnica, la invención no debe ser construida como limitada a la forma específica mostrada y descrita, sino que más bien como se establece en las reivindicaciones.