MXPA99001460A - Elementos y aplicaciones de la prueba de ph y amina para el diagnostico de infecciones vaginales - Google Patents

Abstract

Se presentan las pruebas que se realizan ante un pH elevado y aminas volátiles en fluidos, incluyendo las pruebasútiles para el diagnóstico de la vaginosis bacterial y en otras condiciones biológicas. Al utilizar los indicador es formulados y los indicadores que se colocan en matrices, que son permeables al gas pero son impermeables a los líquidos, la prueba proporcionar una transición limpia y directa, la cual se puede detectar por medios visuales o que se pueden leer con una máquina, más que mediante juicio subjetivo como por ejemplo las pequeñas graduaciones en color o determinaciones olfativas. La prueba misma contiene iconos que se pueden leer como indicadores de la prueba e incluye los controles negativos y positivos.

Description

Elementos y aplicaciones de la prueba de pH y amina para el diagnostico de infecciones vaginales Campo de la Invención La presente invención se refiere a dispositivo de prueba para el uso clínico, y en particular se refiere a los dispositivos de prueba para las condiciones que se caracterizan por un pH anormal en una fluido acuoso, y por las condiciones que se caracterizan por la presente de aminas volátiles. Un área particular de interés para el uso de estas pruebas es el diagnóstico de enfermedades vaginales .

Campo de la Invención Un estudio reciente de la vaginosis bacterial (VB) incluye la comparación del pH de los fluidos vaginales de las mujeres que se sabia sufrían de VB, con aquellas mujeres que se sabía no tenían esta enfermedad. Gardner, H.L. et al. Am J. Obstet . Gynecol . 69:962 (1955) . Se determinó que todas las mujeres que dieron positivo en las pruebas VB tenían un fluido vaginal con un pH mayor a 4.5 y 91% de estas mujeres tenían un fluido vaginal con un pH mayor a 5.0. En las mujeres normales (sin la enfermedad) que formaban parte de la prueba, se encontró que el 92% tenía un pH vaginal entre 4.0 y 4.7. La conclusión a la que se llegó luego de realizar el estudio fue que el pH vaginal igual o mayor a 5.0, junto con otros criterios clínicos indicaban la presente de VB. Estudios subsecuentes culminaron en un reporte de Amsel, R. et al, Am J. Med 74:14-22 (1983), que dio como resultado la reducción del umbral del pH para la VB en 4.5 y estableció que el criterio remanente para la homogeneidad del fluido vaginal, la prueba de soplo (tratamiento con álcali seguido de una prueba olfatoria para detectar un olor amina) y la presencia de células clave. Esto se conoce, comúnmente como criterio clínico Amsel para la VB. La conclusión se basó en un grupo de estudio formado por 397 mujeres, de las cuales el 81% presentó un pH mayor a 4.5, mientras que solamente el 23% de las mujeres presentaban un fluido vaginal con un pH mayor a 4.5. En estudios subsecuentes al reporte de Amsel et al, el umbral del pH se ajustó a 4.7. Uno de estos estudios fue el de Holst E. J. Clin Microbiol, 28:2030-2039 (1990), en que el 100% de las mujeres a quienes se diagnosticó con VB positivo de acuerdo con el criterio de Amsel se reportó que tenían un pH del fluido vaginal mayor a 4.7. Otro de estos estudios, realizado por Eschenbach, D.A.., Am. J. Obstet. Gynecol. 158 (4) : 819-828 (1988), en que todas las 257 mujeres estudiadas tenían al menos 20% de células clave, mostraron un pH en el fluido vaginal mayor o igual a 4.7, llevando a la conclusión de que el valor umbral de 4.7 se relacionaba mejor con la evidencia clínica de VB. Krohn, M.A. et al., J. Clin Microbiol. 27 (6) : 1266-1271 (1989), también verificó la correlación entre el umbral del pH del fluido vaginal de 4.7 y la presencia de células clave, y Holmes, K.K., y sus colaboradores además confirmó que el límite de un pH en 4.7 como un indicador de VB -- Holmes, K.K., et al, eds Enfermedades de transmisión sexual (Sexually Transmitted Diseases) , McGraw-Hill, New York (1990), capítulo 46:527-545 (Holmes, K.K. et al) y el capítulo 47:547-559 (Hillier, S.L. et al) . Las pruebas de colorimetría para determinar un pH elevado del fluido vaginal utilizan amarillo de nitrazina como un indicador. El amarillo de nitrazina es un tinte monoazo que es amarillo brillante cuando el pH es 6.0 y azul brillante cuando el valor del pH es 7.2 y tiene un punto medio con un gris verdoso para un pH de 6 . 6 . Sin embargo, en el rango de interés para la evaluación del fluido vaginal, que es de aproximadamente 3.5 hasta 6.0, el cambio ocurre en progresiones sutiles de grises verdosos los cuales son difíciles de interpretar. Los limites o umbrales del pH son indicadores útiles en el diagnóstico de una variedad de condiciones biológicas, tanto en humanos como en animales, y un gran número de indicadores colorimétricos se conocen y están disponibles comercialmente. Sin embargo, la selección del indicador apropiado no es siempre una tarea fácil, y, frecuentemente las selecciones están limitadas, en particular cuando se desea un cambio de color específico y cuando la estabilidad del indicador es una consideración. Por ejemplo, la leche de vaca entera tiene un pH de 6.5 a 6.8 y se ha reportado (N.Z.J. Sci. Technol . 27:258 (1945)) que la leche de vaca con un pH mayor a 6.8 puede indicar la presencia de mastitis bovina. A continuación se discutirán las dificultades para detectar la deviación del pH, en una magnitud tan pequeña, utilizando los indicadores de bandas o tiras de papel convencionales. Un estudio específicamente dirigido a la mastitis bovina se reportó en Dairy Sci. 68:1263-1269 (1985). El propósito del estudio era determinar si es adecuado el uso de papel secante impregnado con azul de bromotimol, como indicador del pH, para verificar el pH de la leche de vaca, en el método para detectar la mastitis bovina. Se agregó leche al papel tratado con el indicador, y se determinó que el color del pH estaba en la escala de 1 a 4, en donde 1 (verde pálido) se determinó como normal (negativo) y 2, 3 y 4 (un aumento desde el verde moderado hasta el azul verdoso obscuro) se consideraba como anormal (positivo) . También se determinó de forma electrónica el pH de la leche, con un medidor cuidadosamente calibrado. Los resultados de la prueba ilustraron la dificultad para definir la exactitud del color del área de prueba: el valor predictivo de una prueba colorimétrica positiva varía desde 49% hasta 52% (es decir 51% hasta 48% de los resultados son falsos positivos) . Como se esperaba, el aumento en las mediciones de la prueba se comparaban con un aumentos de la severidad de la mastistis como se define mediante las mediciones de otros diagnósticos. Sin embargo, en la leche de los animales con una mastitis menos severa, la superposición considerable de los resultados "realzaban la posibilidad de un error en la interpretación de las mediciones del indicador. La amplia variación del pH de la leche (como se determinó electrónicamente) detrás de cada medición con BTB (color azul Brom Timol) muestra que los resultados del indicador no se relacionaban al del pH." Los investigadores subrayaron la importancia de utilizar los comparadores de color que se acerque tanto como sea posible al método de la prueba del pH actual . Si los resultados de las pruebas de pH de la leche con un colorímetro no se interpreta inmediatamente, era importante utilizar comparadores que también se humedecieran con leche . Si los resultados de la prueba del pH con un colorímetro se determinan después de que las manchas de leche se hayan secado, era ventajoso utilizar comparadores secos. De regreso a la vaginosis bacterial, la prueba de soplo, que es uno de los criterios de Amsel, originado en un estudio realizado por Pheifer, et al, N. Engl J. Med 298;1429-1434 (1978), reportó la presencia de un olor de amina característico, parecido al olor del pescado, luego que se agrega KOH al 10% en el fluido vaginal de una mujer con VB. El olor es causado por la volatilización alcalina de las sales de amina en el fluido vaginal de una mujer con VB. Desafortunadamente, la prueba es altamente subjetiva, expone la salud de la persona que realiza la prueba a un riesgo biológico potencial, y es susceptible a errores, ya que se lleva a cabo en un porta objeto el cual, debido a la naturaleza efímera del olor de la amina, se debe colocar directamente debajo de la nariz y olfatearse inmediatamente después de la adición del KOH. Las alternativas a las pruebas de soplo son los procedimientos analíticos como por ejemplo electroforésis de alto voltaje (Chem, K.C.S. et al J. Clin Invest. 63:828-835 (1979), la cromatografía de capa delgada (Chem, K.C.S. et al, J. Infect Dis. 145:337-345 (1982), y Sanderson , B.E. et al, Br. J. Vener. Dis. 59:302-305 (1983), la cromatografía de gas (Gravett, M.G. et al. Obstet, Gynecol. 67:229-237 (1986) y Dravenieks, A. et al., J. Pharma. Se 59:495-501 (1970), y la cromatografía líquida de alto desempeño (Cook R.L. et al, J. Clin Microbiol. 30:870-877 (1992). Estos procedimientos, a pesar de ser más exactos y confiables que la prueba de soplo, son costosos, requieren mas tiempo y no son adecuados para pruebas en sitio en una consultorio médico o clínica.

Las células clave o guía, que constituyen otro criterio de Amsel, se correlacionan independientemente con la Vb, y en las manos de un microscopista experto son indicadores muy sensibles y específicos de esta infección. Las células clave o guía son células escamosas del epitelio vaginal que se encuentran en el fluido vaginal cuando hay una VB. Las células se cubren con numerosas bacterias, que les da una apariencia granular, y sus bordes se obscurecen o se arrugan debido a la adherencia de numerosas barras o cocci. De acuerdo con la práctica médica normal, el diagnóstico de Vb se establece cuando, al menos el 20% de las células epiteliales detectadas son células clave o guía. Homes et al, Enfermedades de Transmisión Sexual (Sexually Transmitted Diseases) , 2d de., McGraw-Hill, Inc. New York, 1990. El distinguir entre las células clave verdaderas, en las cuales una bacteria ha obscurecido completamente los bordes de las células y las células que simplemente tienen una pocas bacterias adheridas requiere entrenamiento y experiencia. Una fuente de error es la similitud en la apariencia entre las células clave y las tricomonas, células de glóbulos blancos y otros componentes del fluido vaginal, que frecuentemente dan como resultado una identificación incorrecta de estas células como células clave, y por lo tanto dan un falso resultado positivo. Otro aspecto es que cuando las células clave están presente, frecuentemente están obscurecidas por numerosos componentes del fluido vaginal, lo que ocasionan que el médico no considere todas las células clave o las cuantifique en niveles inferiores a los actuales. Estos puede dar un falso negativo como resultado de la prueba. Por lo tanto, es altamente deseado tener un análisis distintivo que sea preciso y se controle convenientemente y cuya presencia se relacione con las células clave.

Prueba de amina Al igual que en el dispositivo de prueba de pH de la presente invención, el dispositivo de prueba para la amina o la porción de prueba para la amina del dispositivo de prueba, el cual combina ambas pruebas, tiene una estructura laminada. Las láminas individuales en la estructura desempeñan funciones distintas y complementarias, las láminas se recubren de forma colectiva para proporcionar una prueba exacta y que se pueda reproducir, cuyos resultados se lean en su totalidad mediante indicaciones visuales. Las dos láminas principales son una lámina liberadora de gas que tiene acceso inmediato al espécimen de fluidos y una lámina indicadora permeable al gas pero impermeable a los especímenes líquidos en si o a cualquiera de sus componentes que no están en forma gaseosa. La lámina liberadora de gas es una lámina sólida de álcali que reacciona con las sales de amina en el espécimen y las convierte en aminas volátiles. Luego, las aminas volatizadas penetran la lámina indicadora permeable al gas, en donde causan un cambio en el color del indicador. Los términos "aminas volátiles" y "aminas volatizadas" incluyen las aminas que son solo ligeramente volátiles así como aquellas que son suficientemente volátiles para escapar hacia la atmósfera a promedios substanciales. Las aminas ligeramente volátiles son aquellas que solo forman una capa delgada de gas en la superficie líquida sin que se difundan cantidades significativas a la atmósfera. Sin embargo, esta delgada capa de película es suficiente para penetrar en la lámina indicadora permeable al gas. La selección de álcali sólido para la lámina liberadora de gas no es crítico y puede variar. En general, se pueden usar los aluminatos de metal terroso alcalino, carbonatos e hidróxidos. Con frecuencia, se obtendrán mejores resultados utilizando bien sea aluminato de sodio, carbonato de sodio o hidróxido de magnesio. Se prefiere particularmente, el aluminato de sodio. La permeabilidad únicamente para los gases en la lámina indicadora permeable al gas, se puede lograr de varias formas, dependiendo de la naturaleza de las muestra. Un método conveniente para los especímenes acuosos es el uso de un polímero hidrofóbico poroso. Los polímeros adecuados son aquellos que son sólidos, insolubles en fluidos acuosos, particularmente fluido vaginal y toman la forma de capas fácilmente, el recubrimiento o la lámina que no se disuelve, se dispersa en forma de partículas, o se desintegra luego de entrar en contacto con estos fluidos. Ejemplos de estos polímeros son la celulosa de etilo, celulosa de acetato y nitrato de celulosa. Particularmente se prefiere la celulosa de etilo. Alternativamente, el indicador puede ser un polímero permeable al agua, hidrofílico que se cubre con una lámina hidrofóbica. Se puede usar cualquier indicador que cambie de color, luego se expone a las aminas, y preferiblemente a las aminas en una muestra de fluido que también puede ser ácido. El verde de bromocresol es un ejemplo y se puede utilizar en la presente, así como en la prueba de pH. Otros ejemplos son el azul de bromofenol, el morado de bromocresol, en azul de broraoclorofenol , el amarillo de nitrazina y varios otros indicadores . La lámina liberadora de gas y la lámina indicadora permeable al gas se disponen en el dispositivo de prueba de forma que el contacto entre el álcali en la lámina liberadora de gas y el indicador en la lámina permeable al gas no ocurra si no hay una muestra de fluido. La disposición es tal que permite al usuario un primer contacto de la lámina liberadora de gas con la muestra (preferiblemente utilizando un intercambio, y luego poner la lámina indicadora permeable al gas en contacto con la muestra, de forma que el gas presente en la muestra penetre en la lámina indicadora de gas. Así, la lámina indicadora, permeable al gas puede ser la lámina inferior en el dispositivo, estando alejada de la superficie en la cual se aplica la muestra, y la última lámina que toca la muestra. Opcionalmente, esta lámina se puede aplicar en una base o lámina de soporte, como en la lámina indicadora de pH. Sin embargo, con el uso de un polímero como celulosa de etilo en la matriz de la lámina, ésta es estructuralmente estable y confiable sin el uso de una lámina base subyacente. Adicional a las disposiciones de estas dos láminas en relación entre sí, se mejora la generación de aminas volátiles mediante el dispositivos y la penetración de estas aminas en el indicador, mediante el uso de láminas intermedias que también pueden servir para definir las regiones geométricas en donde puede ocurrir un cambio de color, además el mismo tipo de información se proporciona mediante la prueba de pH. Como en la prueba de pH, el cambio de color en la prueba de amina se dispone, preferiblemente, de forma tal que cause la aparición de un indicio geométrico particular, el cual, de otra forma no es visible. Un medio para lograr esto es restringir el acceso de las aminas volátiles hacia una región geométrica definida en el indicador permeable al gas de forma que las regiones restantes de la lámina aún son visibles. Estos se puede lograr aplicando una lámina canalizadora del gas directamente sobre la lámina permeable al gas, esta lámina canalizadora del gas es ligeramente transmisiva a la luz o transparente y se hace de un material impermeable al gas, excepto en una abertura o pasaje dentro de sus bordes. Por lo tanto, las aminas volátiles que se canalizan a través de la abertura, y la única porción de la lámina indicadora de gas permeable que muestra un cambio de color es el área directamente debajo de la abertura. Hay varios polímeros que son ejemplos de materiales trasmisivos de luz los cuales además son impermeables al gas, particularmente poliamidas, poliacrilatos, selladores y barnices . Como una protección adicional del indicador en la lámina permeable al gas de aminas líquidas, una lámina que es permeable al gas, pero impermeable al líquido se puede colocar directamente sobre la lámina canalizadora de gas. Por conveniencia, esta lámina protectora se puede construir del mismo polímero utilizar en la lámina indicadora permeable al gas. Nuevamente, se prefiera la celulosa de etilo. Se puede incluir una segunda región indicadora en el dispositivo de prueba de amina para responder a la presencia de una muestra sin considerar si hay o no aminas volátiles o volatilizables en la muestra. Como en la prueba de pH, esta segunda región indicadora sirve como un control positivo activado de la muestra, y se puede aplicar como una lámina adicional designada como una lámina de control positivo. El indicador en esta lámina se puede inmovilizar en una matriz que permita la penetración de la muestra de fluido, y el indicador en sí puede ser cualquier indicador que cambien de color luego de la aplicación de la muestra. El cambio de color se puede deber a las aminas no volátiles en la muestra, o al álcali sólido en la lámina liberadora de gas a medida que el álcali se introduce en la muestra con el uso de una escobilla aplicadora. La matriz de inmovilización puede ser un polímero hidrofílico, ejemplos de los cuales se mencionaron anteriormente cuando se habló de las preferencias para el uso de la lámina indicadora del pH en la prueba del pH. El indicador puede ser el mismo utilizado en la lámina indicadora, permeable al gas, a pesar de que se puede usar cualquier indicador que produce un cambio de color luego de que entra en contacto con las muestra. Como en la prueba del pH, los dos indicadores (es decir el indicador accesible solamente mediante las aminas volatizadas y el indicador en la lámina de control positiva que es adecuada tanto para las aminas volátiles como para las no volátiles, así como la muestra alcalinizada) se disponen de forma tal que los dos cambios de color se aprecian de forma independiente. Además, se prefiere que el dispositivo incluya una tercera región indicadora que permanece visible pero protegida de la muestra de forma que no cambia de color bajo ninguna circunstancia. Así, esta región que no cambia sirve como un fondo negativo de control por las mismas razones que el control negativos en la prueba del pH. De igual forma, la configuración preferida de los indicadores es en barras cruzadas formando un signo de más. En referencia a las Figuras 3, 4a, y 4b, esto se puede lograr con la lámina indicadora, permeable al gas 21 como la lámina inferior, y la lámina canalizadora del gas 22 aplicada directamente sobre ésta. Una separación alargada 23 en la lámina canalizadora divide en dos las áreas separadas. La separación permite el paso de las aminas volatilizadas y forma la barra o línea vertical de un signo más. Una lámina con barrera líquida protectora 24 (transparente) también puede cubrir la lámina canalizadora del gas 22, así como la separación 23. Luego, la lámina de control positivo 25 (que permite la penetración por medio de la muestra líquida) se aplica sobre la lámina de barrera líquida 24, la lámina de control positivo tiene la forma de una barra que traza la porción horizontal del signo más. Finalmente, la lámina liberadora de gas 26 se aplica como una capa separada en el dispositivo, bien sea sobre la barrera protectora de líquido 24 o fuera de todas las láminas. La lámina liberadora de gas en la disposición que se muestra en los dibujos forma un anillo alrededor de la barra o línea horizontal de la lámina de control positivo, preferiblemente sin tocar la barra. Una pequeña separación entre el anillo y la barra evita un cambio prematuro de color en la barra. Para utilizar la prueba de amina que tiene la configuración que se describió en el párrafo anterior, se sacude una escobilla humedecida con fluido vaginal alrededor del anillo liberador de gas 26, luego se pasa a través de toda el área circular dentro del anillo, por lo que entre en contacto con la barra horizontal de control positivo 25 y las regiones encima y debajo de esta. La barra horizontal 25, cambiará de color luego de entrar en contacto con cualquier muestra y cualquier amina volátil liberada por el contacto de la escobilla con el anillo liberador del gas penetrando la lámina de la barrera líquida 24 y pasando a través de la separación de la barra vertical 23 en la lámina canalizadora hacia la lámina indicadora, permeable al gas 21. El cambio de color, en esta última se restringe a la región de la barra vertical 27, mientras que el resto del indicador en la lámina permeable al gas (el área 28 alrededor del signo más) se protege de la muestra y por lo tanto no cambia de color. Las muestras del fluido vaginal que no contienen aminas volatilizadas producirán una signo menos en el dispositivo (al ocasionar un cambio de color solamente en la barra horizontal 25) , mientras que las muestras que no contienen aminas volatilizables producirán un signo más (al ocasionar cambios en el color tanto en la barra horizontal 25 como en la vertical 27) . Los indicadores que se describieron en relación tanto con la prueba de pH como en la prueba de amina, son indicadores visuales, que producen un cambio de color el cual es detectable a simple vista. Como alternativas, la presente invención además contempla indicadores que se pueden leer con el uso de máquinas, o aquellos que se pueden detectar luego de que se excitan o alteran, como por ejemplo indicadores fluorescentes . En formas de realización preferidas de la invención, las dos pruebas se combinan en una sola tarjeta de prueba 30 como se muestra en la Figura 5. Las dos pruebas aparecen como áreas separadas 31, 32 en una superficie de la tarjeta. Cada una se subraya en un círculo obscuro 33, 34 para mejorar la visibilidad del usuario. El círculo obscuro 34 que rodea la zona de prueba de la amina puede ser más amplia ya que contiene la lámina liberadora de gas que se necesita para llevar a cabo la prueba. Además, la tarjeta puede contener información e instrucciones acerca del uso. La superficie superior 35 de la tarjeta se puede cubrir con una hoja para la protección durante el almacenamiento y el embarque, pero se retira fácilmente antes del uso. La aplicación de una muestra biológica en ambas zonas de prueba se logra fácilmente mediante un cotonete o cualquier escobilla capaz de retener una muestra y aplicarla a la superficie. De acuerdo con la presente invención, una tarjeta de prueba típica, tiene aproximadamente el tamaño de una tarjeta de crédito, o aproximadamente 2 pulgadas (5.1 cm) por 3 pulgadas (7.6 cm) y las zonas de prueba son circulares, con diámetros de aproximadamente 0.25 pulgadas (0.635 cm) . Los siguientes ejemplos se ofrecen solamente como ilustración. En estos ejemplos, los elementos de prueba de acuerdo con la invención se utilizan con la configuración que se muestra en las figuras. En el elemento de la prueba del pH, se utilizaron las láminas que se mencionan a continuación, usando los números de referencia de la Figura 1: lámina base 11: soporte Mylar con un recubrimiento de celulosa de etilo aplicado como un 15 por ciento en pero de la celulosa de etilo en n-propanol lámina indicadora del pH 12 : EUDRAGIT RL PO y amarillo de nitrazina aplicada como una solución con la siguiente composición: 25% EUDRAGIT RL PO, 0.34% amarillo de nitrazina, 8.6% sorbitol (agente humectante y permeabilizante, 70% solución acuosa), 10.0% 2-etoxi etanol, 12.4% agua desionizada, 43.66% 1-propanol (todo por peso) la lámina barrera, canalizadora del líquido 13 : celulosa de etilo, aplicada como 15% de una solución en 30% de n-propanol (todo por peso) que contiene una separación 14 la lámina de control positivo 15: EUDRAGIT RL PO con amarillo de nitrazina y verde de bromocresol, aplicado como una solución con la siguiente composición: 22.8% de n-propanol, 12.40% de agua desionizada, 30.0% 2-etoxietanol, 8.60% sorbitol /70% solución en agua), 25.0% EUDRAGIT RL PO, 0.17% amarillo de nitrazina, 0.30% verde de bromocresol y 0.65% 2 -anhídrido de ácido sulfobenzoico (para resistencia a la humedad) (todos por peso) . En el elemento de prueba de la amina, las láminas fueron las siguientes, utilizando las referencias de la Figura 3 : la lámina indicadora, permeable al gas 21: verde de bromocresol en celulosa de etilo, que se forma a partir de una solución que tiene la siguiente composición: 1.8% de verde de bromocresol, 12% de celulosa de etilo y 86.2% de n-propanol (todo por peso) la lámina canalizadora del gas 22 : poliamida transparente, aplicada como una solución de 20% de resina de poliamida, 50% de acetato n-propilo y 30% n-propanol (todo por peso) barrera líquida 24: celulosa de etilo aplicada como una solución de 10 por ciento en peso de celulosa de etilo en alcohol n-propilo lámina de control positivo 25: EUDRAGIT RL PO y verde de bromocresol aplicado como una solución con la siguiente composición: 25% EUDRAGIT RL PO, 0.1% verde de bromocresol, 30.0% 2. etoxi etanol, 6.0% agua desionizada, 36.9% 1-propanol, 2.0% anhídrido de ácido sulfobenzoico (todo por peso) lámina liberadora de gas 26: alumina de sodio aplicada como una solución de 28% de aluminato de sodio, 18% de polietileno, 3% maltodextrina y 51% de agua desionizada (todo por peso) Para comparar los elementos de prueba con elementos y procedimientos de la técnica anterior, se utilizaron dos procedimientos. Uno consistió en el uso de las bandas para la prueba de pH COLORPHAST®, elaboradas por Em Science, Gibbstown, New Jersey, EUA, que se vende para el uso exclusivo de médicos. El otro procedimiento fue la prueba de soplo referida anteriormente en el Antecedente de la Invención, y que consta de aplicar una porción de la muestra a un porta objeto, aplicando una gota de KOH al 10% y luego llevando a cabo una determinación olfatoria. EJEMPLO 1 El elemento de prueba del pH de acuerdo con la presente invención se comparó con una banda para la prueba del pH COLORPHAST, al realizar pruebas de pH en 607 muestran de fluido vaginal . De las 607 muestran, 298 dieron negativo (pH < 4.7) de acuerdo con la banda de prueba COLORPHAST, y 258 de éstas también dieron negativo de acuerdo con el elemento de prueba de la presente invención. Esto representa el 86.6% de coincidencia en el resultado negativo, con una deviación estándar de 2.0% y 95% de intervalo de confianza de 83.3%. Las muestras que dieron positivo de acuerdo con la banda de prueba COLORPHAST (pH > 4.7) numerado 309, y de estos, 263 fueron positivo de acuerdo con el elemento de prueba de la presente invención. Esto representa 85.1% de coincidencia en el resultado positivo, con una deviación estándar de 2.0% y un intervalo de confianza unilateral del 81.8%. El promedio de coincidencia fue de 85.8%, la deviación estándar fue de 1.4% y el intervalo de confianza 83.5%. EJEMPLO 2 En este ejemplo se utilizó el criterio de Amsel para reconsiderar las muestran que no coincidieron en las pruebas llevadas a cabo en el Ejemplo 1. Los cuatro criterios de Amsel son pH elevado, presencia de aminas mediante la prueba de soplo, homogeneidad en el fluido vaginal y presencia de células clave. LA teoría detrás de esta prueba es que el pH del fluido vaginal era elevado debido a una infección vaginal, luego se esperaría que al menos dos de los otros tres criterios de Amsel dieran positivo, para mantener el diagnóstico clínico de vaginosis bacterial (VB) . Las 86 muestran discordantes (en donde una prueba del pH resultó positivo y la otra negativo) se sometieron a los tres criterios de Amsel restantes. De los 40 especímenes que dieron resultados negativos con la banda de prueba COLORPHAST y positivo de acuerdo con la banda de prueba de la invención, solamente dos dieron clínicamente positivo para VB mediante el criterio de Amsel. De las 46 muestras que dieron positivo mediante la banda de prueba COLORPHAST y negativo de acuerdo con la banda de la invención, 42 eran clínicamente negativo para VB mediante el criterio de Amsel . Esto representa 98.5% de coincidencia positiva, 88.8% de coincidencia negativa y 93.1% en promedio de coincidencia, utilizando el criterio de Amsel para reconciliar los resultados discrepantes. EJEMPLO 3 Este ejemplo compara el elemento de prueba de amina de acuerdo con la presente invención con el de la prueba de soplo. Ambas pruebas se llevan a cabo en un total de 617 muestras de fluido vaginal .

Del número total de muestras que se someten a la prueba, 196 dieron un resultado positivo mediante la prueba de soplo, y de éstas, 166 también dieron positivo con el elemento de prueba de la invención, representando el 84.7% de coincidencia, una deviación estándar de 2.5% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 80.5%. Del número total de pruebas, 421 dieron resultado negativo con la prueba de soplo, y de éstas, 385 también dieron un resultado negativo mediante el elemento de la invención, representando 91.4% de coincidencia en resultados negativo, una deviación estándar de 1.4% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 89.2% El promedio de coincidencia fue de 89.3%, la coincidencia estándar 1.2% y el intervalo de confianza 95% unilateral de 87.3% EJEMPLO 4 De nuevo se utilizó el criterio Amsel para reconsiderar las muestras que no coincidieron en las pruebas de amina. Asimismo, si las aminas fueron detectadas a causa de una infección vaginal, se esperaría que al menos dos de los otros tres criterios de Amsel dieran resultados positivos . Las 66 muestra de la prueba de amina que no coincidieron se sometieron a pruebas siguiente los tres criterios restantes de Amsel. La coincidencia positiva aumentó a 91.2%, la coincidencia negativa aumentó a 91.7% y el promedio de coincidencia fue de 91.6%. EJEMPLO 5 Este ejemplo compara las pruebas de pH y amina combinadas de la presente invención con los resultados combinados de la banda de prueba COLORPHAST y la prueba normal de soplo (las pruebas de referencia) . De acuerdo con esta prueba, el resultados utilizando la presente invención se consideró positivo cuando ambas pruebas dieron resultados positivos, y el resultado se considera negativo en todos los demás casos, es decir, cuando alguna o ambas pruebas arrojan resultados negativos. Las pruebas de referencia se designaron de la misma manera- -positivo cuando ambas son positivas, y negativo cuando cualquiera o ambas son negativo. De las 604 muestras de fluido vaginal, 184 dieron resultados positivos de acuerdo con las pruebas en referencia, y 175 dieron positivo de acuerdo con la prueba de la invención. De igual forma, 420 muestran arrojaron resultados negativos de acuerdo con las pruebas de referencia, y 429 dieron negativo de acuerdo con las pruebas de la invención. El desacuerdo ocurre solamente en 45 casos. Esto representa el 85.3% de coincidencia con una deviación estándar de 2.6% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 81.0%, 95.7% de coincidencia negativa con una deviación estándar de 1.0% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 94.1% y 92.5% de promedio de confianza con una deviación estándar de 1.1% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 90.8% EJEMPLO 6 Como con los elementos de prueba individuales, los resultados discrepantes entre las pruebas combinadas de la invención y las pruebas de referencia combinadas se reconciliaron utilizando el criterio de Amsel para un diagnóstico de presunta VB. De las 18 muestran que resultaron negativo de acuerdo con las pruebas de referencia combinadas, pero que dieron positivo de acuerdo con las pruebas de la invención, solamente dos fueron clínicamente positivo para VB de acuerdo con el criterio de Amsel. De las 27 muestran que dieron positivo de acuerdo con las pruebas de referencia pero negativo de acuerdo con las pruebas de la invención, diez fueron clínicamente negativo para VB de acuerdo con el criterio de Amsel. Así, utilizando el criterio de Amsel para reconciliar los resultados discordantes de las pruebas, la coincidencia positivo aumentó hasta 90.3%, con una deviación estándar de 2.2% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 86.7%; la coincidencia negativa aumentó hasta 96.3%, con una deviación estándar de 0.9% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 94.8% y el promedio de coincidencia aumentó a 94.5% con una deviación estándar de 0.9% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 93.0% EJEMPLO 7 Este ejemplo ilustra el uso de la presente invención junto con los dos criterios adicionales de Amsel para la determinación de la presencia o ausencia de vaginosis bacterial (VB) . Como se indicó anteriormente, los diagnósticos que utilizan el método Amsel se basan en cuatro criterios: (1) la determinación del pH, (2) una prueba de soplo para las aminas volátiles, (3) una evaluación de la homogeneidad del fluido vaginal y (4) una examinación microscópica del fluido vaginal para la presencia de células clave. De acuerdo con los métodos tradicionales de evaluación de los resultados de las pruebas, las mujeres que cumplen o cubren al menos tres de los cuatro criterios se consideran que tienen VB positiva. Primero, todas las mujeres en el grupo de estudio se evaluaron de acuerdo con los cuatro criterios, utilizando la banda de prueba del pH COLORPHAST para la prueba del pH y la prueba de soplo para las aminas. Luego el análisis se repitió en el mismo grupo utilizando los mismos cuatro criterios, pero substituyendo las pruebas de amina y de pH de la presente invención por las pruebas de COLORPHAST y soplo. El grupo de estudio constaba de muestras vaginales de 604 mujeres. En base al criterio Amsel utilizando las pruebas COLORPHAST y de soplo para la determinación del pH y la amina, 161 (26.6%) de las mujeres se consideraron con VB positivo y 443 /73.4%) se clasificaron como VB negativo. De los 161 positivos, 153 también se clasificaron como positivo cuando se volvió a evaluar la prueba utilizando las pruebas de amina y pH de la presente invención. De las 443 negativas, 433 también se clasificaron negativo cuando se volvió a evaluar el criterio de las pruebas de amina y pH de la presente invención. Esto representaba 95.0% de coincidencia positiva, con 1.7% de deviación estándar y un intervalo de confianza 95% unilateral de 92.2%. de igual forma, la coincidencia negativa fue de 97.7%, con 0.7% de deviación estándar y un intervalo de confianza 95% unilateral de 96.6%. La coincidencia total fue de 97.0%, con 0.7% de deviación estándar y un intervalo de confianza 95% unilateral de 95.9%y el coeficiente kappa fue de 0.92, con 0.02 de deviación estándar y un intervalo de confianza 95% unilateral de 0.90. Las 18 muestras que arrojaron resultados discordantes se volvieron a evaluar mediante la prueba de mancha de Gram, según el cual 7 o más fueron considerados VB positiva. De las 10 muestras que fueron VB negativa mediante el criterio de Amsel cuando se utilizaron las pruebas de soplo y COLORPHAST y VB positivo de acuerdo con el criterio de Amsel cuando se usaron las pruebas de amina y de pH de la invención, 8 fueron clínicamente positivo para VB según la prueba de mancha de Gram. De forma contraria, 8 de las muestras que dieron VB negativa mediante el criterio de Amsel cuando se utilizó las pruebas de soplo y de COLORPHAST y VB negativa cuando se utilizaron las pruebas de la presente invención, 1 resultó clínicamente negativo mediante la prueba de Gram. Así, al reconciliar los resultados discordantes con la prueba de mancha de Gram, la coincidencia positiva aumentó hasta 95.8%, la coincidencia negativa aumentó hasta 99.5% y el promedio de coincidencia fue de 98.5% con un coeficiente kappa de 0.96, una deviación estándar de 0.01 y un intervalo de confianza 95% unilateral de 0.94. EJEMPLO 8 Este ejemplo ilustra el uso de las pruebas de amina y pH de la presente invención como el criterio de la prueba para VB. Las comparaciones se hicieron contra el criterio de Amsel (utilizando la banda de COLOPHAST para la prueba de soplo tanto para pH como para las aminas) , y la prueba de mancha de Gram se utilizó de nuevo, para reconciliar los resultados discordantes, en donde la mancha de Gram arrojó un resultado de 7 o más muestras que se consideraron positivo VB. Para las pruebas de pH y amina de la presente invención, el diagnóstico se consideró positivo solamente cuando ambas pruebas dieron resultados positivos. Cuando una o ambas pruebas dieron resultados negativos, el diagnóstico se consideró negativo. De las 607 muestras vaginales evaluadas, 162 dieron positivo mediante el criterio de Amsel, y de éstas 162,139 también dieron positivo mediante las pruebas de pH y aminas de acuerdo con la presente invención (85.8%, deviación estándar 2.7%, un intervalo de confianza 95% unilateral de 81.3%). Aquellas pruebas que resultaron negativo de acuerdo con el criterio de Amsel fueron 445, y de éstas, 445, 408 (91.7%, deviación estándar 1.3%, intervalo de confianza 95% unilateral de 89.5%) también dieron negativo de acuerdo con las pruebas de aminas y pH de la invención. Esto indica un valor predictivo positivo de 79.0% con una deviación estándar de 3.1% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 73.9%, un valor predictivo negativo de 94.7% con una deviación estándar de 1.1% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 92.9%; y una eficiencia de 90.1% con una deviación estándar de 1.2% y un intervalo de confianza 05% unilateral de 88.1% Luego, los 60 resultados discordantes de las pruebas se reconciliaron mediante las pruebas de mancha de Gram. De las 37 que fueron VB negativa mediante el criterio de Amsel y positivo de acuerdo con las pruebas de la presente invención, 24 fueron clínicamente positivo de acuerdo con la prueba de Gram. De los 23 que dieron VB positivo mediante el criterio de Amsel y negativo mediante las pruebas de la invención, 4 fueron clínicamente negativos mediante la mancha de Gram.

Así, al reconciliar los resultados discordantes con la prueba de la macha de Gram, 182 muestras fueron VB positivo mediante el criterio de Amsel reconciliado con Gram, y de estos, 163 dieron positivo mediante las dos pruebas de la invención. De manera similar, 425 muestran arrojaron resultados negativos según el criterio de Amsel reconciliado con Gram, y de estos, 412 también dieron negativo según las dos pruebas de la invención. Este aumento en la coincidencia positiva hasta un 89.6%, con una deviación estándar de 2.3% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 85.8%; y aumentó la coincidencia negativa hasta 96.9%, con una deviación estándar de 0.8% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 95.6%. Estos resultados indican un valor positivo, predecible, de 92.6% con una deviación estándar de 2.0% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 89.4%; y un valor negativo predecible de 95.6%, con una deviación estándar de 1.0% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 94.0% y una eficiencia de 94.7%, con una deviación estándar de 0.9% y un intervalo de confianza 95% unilateral de 93.2%. EJEMPLO 9 Este ejemplo ilustra el uso de las pruebas de amina de la presente invención como una prueba para las células clave. Se hicieron comparaciones en relación con la detección microscópica de las células clave, y se utilizó la prueba de mancha de Gram para reconciliar los resultados discordantes.

La examinación microscópica para las células clave se consideraban positivas cuando las células clave constituían más del 20% de las células epiteliales de la vagina presentes en una muestra de fluido vaginal. Como en los ejemplo anteriores, la prueba de aminas realizadas según las pruebas de la presente invención se consideraron positivas cuando el elemento de prueba de las aminas produce un signo más azul . Alternativamente, la prueba de aminas según la presente invención se consideró negativo cuando el elemento de prueba de las aminas produce un signo menos azul . De las 625 muestras vaginales evaluadas, 167 se interpretaron como positivas para las células clave con el uso del microscopio. De estas 167 muestras de células clave positivas, 135 dieron positivo según la prueba de aminas de la invención (80.8%) . Las muestras que dieron negativo para las células clave con el uso del microscopio fueron 458. De estas 458, 388 dieron negativo según la prueba de aminas de la invención (84.7%) . Esto indica una coincidencia positiva de 80.8%, una coincidencia negativa de 84.7% y una eficiencia de 83.7%. Luego, los 102 resultados discordantes de la prueba se reconciliaron con la prueba de mancha de Gram. De las 70 muestras que dieron negativo para las células clave con el uso del microscopio y positivo con la prueba de amina de la presente invención, 36 fueron clínicamente positivo para VB mediante el análisis de mancha de Gram. Así, mediante la reconciliación de las 70 muestras que dieron resultados negativos para la células clave con la prueba de mancha de Gram, 194 muestras fueron positivo para las células clave mediante el criterio del microscopio reconciliadas con la mancha de Gram, y 171 de estas 194 muestran también fueron positivas según la prueba de amina de la invención. De manera similar, de las 32 muestras positivas según el criterio de microscopio y negativo según la prueba de aminas de la presente invención, 9 muestras dieron clínicamente negativos para VB de acuerdo con la prueba de mancha de Gram. Así, al reconciliar los 32 resultados de las pruebas positivas de las células clave con la mancha de Gram, 431 muestras dieron resultados negativos para las células clave según el criterio del microscopio reconciliado con la mancha de Gram, y 397 de estas 431 muestran también dieron negativo según la prueba de amina de la invención. Esto aumentó la coincidencia positiva hasta 88.1%, la coincidencia negativa hasta 92.1% y el promedio de coincidencia hasta 90.9%. Lo anterior se presenta, principalmente, con el propósito de ilustrar la invención. Resultará aparente para aquellos expertos o conocedores de la técnica que las configuraciones, dimensiones, reagentes y otros materiales, pasos del procedimiento y otros parámetros de la presente invención se pueden modificar o substituir de varias formas, sin alejarse del espíritu y alcance de la presente invención.

Claims (86)

REIVINDICACIONES

1. Un método para inmovilizar un indicador de pH que contiene un grupo fenol que se puede ionizar y un grupo cargado negativamente en una matriz sólida para evitar que el indicador se derrame cuando se humedece con una muestra acuosa líquida, y para proporcionar un indicador con una región de transición con un pH inferior y de rango menor al pH relacionado con el del indicador, cuando este se inmoviliza, este método comprende la formación de una composición sólida que comprende un indicador disperso en un polímero que contiene grupos de amotino cuaternario, prácticamente en ausencia de enlaces covalentes entre el indicador y el polímero. •

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el indicador del pH tiene un punto de transición de rango medio y grupos de amonio cuaternario, los cuales están presentes en el polímero, en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición de rango medio al menos a 1.0 unidad de pH.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio, y los grupos amonio cuaternario están presente en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transmisión de rango medio, aproximadamente, desde 1.0 unidad de pH hasta aproximadamente 3.0 unidades de pH.

4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio y en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición de rango medio desde, aproximadamente 1.5 unidades de pH hasta aproximadamente 2.5 unidades de pH.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio y los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición del rango medio en aproximadamente 2.0 unidades de pH.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad que suministra al polímero un valor álcali en un rango desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 50.

7. El método de acuerdo con la re 1, en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad que suministra al polímero un valor álcali en un rango desde aproximadamente 15 hasta aproximadamente 40.

8. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que los grupos de amonio cuaternario son grupos de trimetilamonio.

9. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el polímero es un polímero acrílico.

10. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el polímero es un copolímero de esteres ácidos acrílicos y metacrílicos y los grupos de amonio cuaternario son grupos de trimetilamonio.

11. El método de acuerdo con la re 1, en que el grupo cargado negativamente del indicador de oh es un miembro seleccionado de un grupo que consta de grupos sulfato y sulfonato.

12. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el indicador de pH es un miembro seleccionado de un grupo que consta de azul de bromofenol, azul de bromoclorofenol, azul de bromocresol, morado de bromocresol, amarillo de nitrazina, azul de bromotimol y amarillo brillante.

13. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en que el indicador de pH es amarillo de nitrazina.

14. Una composición que comprende un indicador de pH que contiene un grupos fenol que se puede ionizar y un grupo cargado negativamente disperso en un polímero sólido que contiene grupos de amonio cuaternario substancialmente en ausencia de enlaces covalentes ente el indicador y el polímero .

15. La composición de acuerdo con la reivindicación 14 en que el indicador del pH tiene un punto de transición de rango medio y los grupos de amonio cuaternario están presentes en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición de rango medio desde aproximadamente 1.0 unidad de pH hasta aproximadamente 3.0 unidades de pH.

16. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio y en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición de rango medio desde, aproximadamente 1.5 unidades de pH hasta aproximadamente 2.5 unidades de pH.

17. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio y los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición del rango medio en aproximadamente 2.0 unidades de pH.

18. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad que suministra al polímero un valor álcali en un rango desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 50.

19. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad que suministra al polímero un valor álcali en un rango desde aproximadamente 15 hasta aproximadamente 40.

20. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que los grupos de amonio cuaternario son grupos de trimetilamonio .

21. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el polímero es un polímero acrílico.

22. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el polímero es un copolímero de esteres ácidos acrílicos y metacrílicos y los grupos de amonio cuaternario son grupos de trimetilamonio.

23. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el grupo cargado negativamente del indicador de oh es un miembro seleccionado de un grupo que consta de grupos sulfato y sulfonato.

24. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el indicador de pH es un miembro seleccionado de un grupo que consta de azul de bromofenol, azul de bromoclorofenol, azul de bromocresol, morado de bromocresol, amarillo de nitrazina, azul de bromotimol y amarillo brillante.

25. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en que el indicador de pH es amarillo de nitrazina.

26. Un dispositivo de prueba para detectar un pH igual o mayor al primer punto de transición seleccionado dentro del rango de 4.6 hasta 4.8 en una muestra de líquido acuoso, este dispositivo de prueba comprende: una primera lámina de polímero, permeable al fluido, hidrofílico sólido y un grupo cargado negativamente, este polímero contiene grupos de amonio cuaternario en una cantidad suficiente para inmovilizar el indicador de pH contra la difusión, cuando se humedece con una muestra de líquido acuoso y se ocasiona que el indicador cambie de color en este primer punto de transición seleccionado,- una segunda lámina de material impermeable que cubre la primera lámina, la segunda lámina tiene una abertura en donde se expone la primera región geométrica de la primera lámina; y una tercera lámina cubre la segunda región geométrica de la segunda lámina, esta tercera lámina comprende un segundo indicador de pH seleccionado para cambiar el color en un pH inferior al primer punto de transición seleccionado, al menos en aproximadamente 0.7 unidades de pH, esta primera y segunda regiones se disponen de forma tal que los cambios de color en ellas son visibles de forma independiente .

27. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que la segunda lámina es transmisiva d'e luz .

28. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que la segunda lámina es un polímero, transmisivo de luz, hidrofóbico.

29. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26 en que el indicador en la tercera lámina se selecciona para que sufra un cambio de color en un pH aproximadamente 4.0 o inferior.

30. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el indicador en la tercera lámina se selecciona para sufrir un cambio de color en un pH de aproximadamente 3.5 o inferior.

31. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que la primera y segunda regiones geométricas forman dos líneas, rectas, cruzadas de forma que un cambio de color en la segunda región geométrica, sin que haya un cambio de color en la primera región geométrica forma un signo menos, mientras que un cambio de color tanto en la primera como en la segunda región geométrica forma un signo de más .

32. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26 en que los cambios de color en la primera y segunda láminas son cambios de color substancialmente iguales .

33. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el polímero hidrofílico, permeable es un polímero acrílico.

34. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que los grupos de amonio cuaternario son grupos trimetilamonio.

35. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el polímero permeable al fluido, hidrofílico, es un copolímero de esteres de ácido acrílico y metacrílico y los grupos de amonio cuaternarios son grupos trimetilamonio .

36. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio, y los grupos de amonio cuaternario están presentes en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición de rango medio al menos aproximadamente en 1.0 unidad de pH.

37. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio, y los grupos amonio cuaternario están presente en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transmisión de rango medio, aproximadamente, desde 1.0 unidad de pH hasta aproximadamente 3.0 unidades de pH.

38. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio y en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en el polímero en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición de rango medio desde, aproximadamente 1.5 unidades de pH hasta aproximadamente 2.5 unidades de pH.

39. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que el indicador de pH tiene un punto de transición de rango medio y los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad suficiente para reducir el punto de transición del rango medio en aproximadamente 2.0 unidades de pH.

40. El método de acuerdo con la reivindicación 26, en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad que suministra al polímero un valor álcali en un rango desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 50.

41. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad que suministra al polímero un valor álcali en un rango desde aproximadamente 15 hasta aproximadamente 40.

42. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26 en que el indicador de la tercera lámina comprende una mezcla de amarillo de nitrazina y verde de bromocresol .

43. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26 en que el polímero permeable, hidrofílico, es un copolímero de esteres de ácido acrílico y metacrílico y los grupos de amonio cuaternario son grupos trimetilamonio y la segunda lámina es celulosa de etilo.

44. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que la tercera lámina comprende un polímero hidrofílico que contiene grupos trimetilamonio cuaternario .

45. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, que además comprende una lámina base que está bajo la primera lámina como soporte de la misma.

46. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 26, en que la primera y segunda regiones se disponen de forma que permiten que la tercera región geométrica de la primera lámina se vea independientemente de la primera y segunda regiones y las protege de que se mojen con la muestra líquida.

47. El dispositivo de prueba para detectar sales de aminas volátiles en una muestra líquida, este dispositivo de prueba tiene una superficie expuesta y comprende: una lámina de indicador, permeable al gas, hecha de un material que el permeable al gas pero impermeable para los líquidos, con un indicador en el mismo que sufre una transición que se puede detectar luego del contacto con las aminas ; y una lámina que libera la amina gaseosa, que comprenden un álcali sólido y forma parte de la superficie expuesta dejando visible, al menos, una porción de dicha lámina del indicador que es permeable al gas.

48. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 47, en que el indicador se define como un primer indicador, el dispositivo de prueba además comprende una lámina indicadora, permeable al líquido, que se impregna con el segundo indicador, el cual presenta una transición que se puede detectar luego de entrar en contacto con un álcali, el primer y segundo indicadores se disponen de forma que las transiciones se pueden detectar de manera independiente.

49. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 48, que además comprende una lámina que canaliza el gas interpuesta entre la lámina del indicador, permeable al gas y la lámina del indicador permeable al líquido, la lámina canalizadora del gas tiene una primera región geométrica definida en la misma, la cual es permeable al gas, el resto de esta lámina canalizadora es impermeable al gas; y la lámina indicadora permeable al gas cubre la segunda región geométrica de la lámina canalizadora, la primera y segunda regiones geométricas son visibles de forma independiente .

50. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 49, en que la primera y segunda regiones geométricas se disponen para dejar la tercera región geométrica, de la lámina indicadora permeable al gas, visible de forma independiente de la primera y segunda regiones y protegidas contra cualquier cambio de color que resulte de la aplicación de la muestra líquida en el dispositivo de prueba.

51. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 47, en que el indicador es un indicador visual que cambia de color luego de entrar en contacto con aminas gaseosas .

52. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 48, en que el primer y segundo indicadores son indicadores visuales que cambian de color luego de entrar en contacto con aminas .

53. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 47, en que el material de la lámina del indicador permeable al gas es de celulosa de etilo.

54. El dispositivo de prueba para detectar sales de aminas volátiles en una muestra de líquido acuoso, este dispositivo de prueba tiene una superficie expuesta y comprende : una lámina indicadora permeable al gas, hecha de un material permeable al gas pero impermeable a los líquidos, impregnada con un primer indicador que cambia de color luego de entrar en contacto con aminas; una lámina que sirve como barrera para los líquidos, canalizadora del gas, que cubre la lámina indicadora permeable al gas, dicha lámina canalizadora del gas tiene una primera región geométrica definida en la misma, y una primera región geométrica que es impermeable para los líquidos acuosos pero permeable para el gas, el resto de la lámina que sirve de barrera para los líquidos acuosos, canalizadora de gas, es impermeable tanto para los líquidos acuosos como para los gases; una lámina indicadora, que es permeable a los líquidos acuosos, la cual cubre una segunda región geométrica de la lámina que sirve como barrera para los líquidos, canalizadora del gas, la lámina indicadora, permeable al líquido comprende un segundo indicador que cambia de color luego de entrar en contacto con el álcali, la primera y segunda regiones geométricas se disponen de forma que el cambio de color en las mismas se puede ver de forma independiente; y la lámina liberadora de amina, gaseosa, forma parte de la superficie expuesta y no cubre o se superpone con la segunda región geométrica, la lámina liberadora de amina gaseosa, comprende un álcali sólido.

55. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que la lámina que sirve como barrera para líquidos, canalizadora del gas, es transmisiva de la luz .

56. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que la lámina que sirve como barrera, canalizadora del gas comprende dos subláminas, una es canalizadora del gas, es decir, es impermeable al gas excepto en una abertura a través de la cual se canaliza la entrada del gas, esta primera región geométrica se define mediante la abertura, y la otra sublámina sirve como barrera para los líquidos, por lo que es impermeable para los líquidos pero permeable para los gases.

57. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que la primera y segunda regiones geométricas forman dos líneas rectas de manera que el cambio de color en la segunda región geométrica sin que ocurra un cambio de color en la primera región geométrica forma un signo menos, mientras que el cambio de color, tanto en la primera y en la segunda regiones geométricas forman un signo más .

58. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que la lámina liberadora de amina gaseosas rodea la primera y segunda regiones .

59. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que el álcali sólido de la lámina liberadora de la amina gaseosa es un miembro seleccionado de un grupo que consta de aluminatos de metal terroso álcali y alcalino, carbonatos e hidróxidos.

60. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que el álcali sólido de la lámina de amina gaseosa es un miembro seleccionado de un grupo que consta de aluminato de sodio, carbonato de sodio e hidróxido de magnesio.

61. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que el álcali sólido de la lámina liberadora de amina es aluminato de sodio.

62. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que los cambios de color en la lámina indicadora, permeable al gas, y la lámina indicadora, permeable al líquido, son substancialmente idénticas en los cambios de color.

63. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que el primer indicador y el segundo indicador son iguales .

64. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que el primer indicador y el segundo indicador son, ambos, verde de bromocresol.

65. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que la lámina indicadora permeable es un polímero hidrofílica impregnado con el segundo indicador.

66 . El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 56, en que la sublámina que sirve como una barrera de líquidos y este material de la lámina indicadora permeable al gas son polímeros hidrofóbicos.

67. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 56, en que la sublámina que sirve como barrera para líquidos y el material de la lámina indicadora, permeable al gas, son polímeros hidrofóbicos y la lámina indicadora, permeable al líquido, constan de un polímero hidrofílico impregnado con un segundo indicador.

68. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 54, en que el material de la lámina indicadora, permeable al gas, comprende celulosa de etilo.

69. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 56, en que la sublámina que sirve como barrera para los líquidos y el material de la lámina indicadora permeable al gas, son de celulosa de etilo y la lámina indicadora permeable a los líquidos comprende un polímero acrílico que contiene grupos de amonio cuaternario.

70. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 56, en que la sublámina que sirve como barrera para los líquidos y el material de la lámina indicadora permeable al gas, son de celulosa de etilo y la lámina indicadora permeable al gas es de un copolímero de esteres de ácido acrílico y metacrílicos que contienen grupos trimetilamonio .

71. El dispositivo de prueba para analizar una muestra líquida tanto para (a) un pH igual o mayor al primer punto de transición, seleccionado dentro de un rango que va desde 4.6 hasta 4.8 y (b) para la presencia de sales de aminas volátiles, y este dispositivo de prueba comprende una primera y segunda zonas de prueba, la primera zona de prueba consta de: una lámina indicadora del pH hecha de un polímero, permeable a los fluidos, hidrofílico, impregnado con un primer indicador que contiene un grupo fenol que se puede ionizar y un grupos cargado negativamente, este polímero contiene grupos de amonio cuaternario en una cantidad suficiente para inmovilizar el primer indicador contra la difusión cuando se humedece con una muestra líquida y para ocasionar este indicador para cambiar el color en el primer punto de transición seleccionado; la lámina canalizadora de líquidos hecha de un material impermeable a los líquidos, que cubre la lámina indicadora del pH, la lámina canalizadora de líquidos tiene una abertura a través de la cual se expone una primera región geométrica de la lámina indicadora del pH; y una primera lámina de control, positiva, que cubre una segunda región geométrica de la lámina canalizadora de líquidos, la primera lámina de control, positiva, comprende un segundo indicador seleccionado para cambiar el color ante un pH inferior al primer punto de transición seleccionado, al menos en, aproximadamente, 0.7 unidades de pH, la primera y segunda regiones geométricas se dispone de forma que el color cambia de manera que es visible independientemente; y la segunda zona de prueba que comprende: una lámina indicadora, permeable al gas, hecha de un material permeable al gas pero impermeable a los líquidos, impregnada con un tercer indicador que sufre un cambio de color luego de entrar en contacto con las aminas; la lámina canalizadora de gas, que esta debajo de la lámina permeable al gas, esta lámina canalizadora del gas tiene una tercera región geométrica definida en la misma, la cual es impermeable antes los líquidos pero es permeable al gas, el resto de la lámina canalizadora del gas es impermeable tanto a los líquidos como a los gases; una segunda lámina de control positivo cubre una cuarta región geométrica de la lámina canalizadora del gas, la segunda lámina de control positivo comprende un cuarto indicador que cambia de color luego de entrar en contacto con un álcali, la tercera y cuarta regiones geométricas se disponen de forma tal que detecta las transiciones y las presenta de manera que sean visibles independientemente; y una lámina liberadora de gas que forma una quinta región geométrica de este dispositivo de prueba, en que se dejan, al menos algunas porciones de la primera, segunda, tercera o cuarta regiones geométricas, sin que la lámina de liberación de gas las cubra, esta lámina liberadora de gas comprende un álcali sólido.

72. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que la lámina canalizadora del gas es impermeable para los gases, excepto en la abertura a través de la cual penetra el gas, la tercera región geométrica definida por esta abertura, y el dispositivo de prueba que además comprende una lámina que sirve como barrera para los líquidos, es impermeable para los líquidos pero permeable para los gases, la cual cubre la lámina canalizadora del gas.

73. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que la primera y segunda regiones geométricas forman líneas rectas, cruzadas, de manera que el color cambia en la segunda región geométrica, sin que cambie en la primera región geométrica, formando un signo menos, mientras que hay un cambio de color tanto en la primera como en la segunda región geométrica y forma un signo más, y en que la tercera y la cuarta regiones geométricas forman dos líneas rectas cruzadas de forma que el color cambia en la cuarta región geométrica sin que haya un cambio de color en la tercera región geométrica formando un signo menos mientras que el cambio del color tanto en la tercera y cuarta regiones geométricas forman un signo más.

74. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que la lámina liberadora de gas rodea la tercera y cuarta regiones geométricas.

75. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que el indicador en la primera lámina de control positivo se selecciona para realizar un cambio de color a un pH de aproximadamente 3.5 o menor.

76. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que el polímero, permeable para los líquidos, hidrofílicos, de la lámina indicadora del pH, es un polímero acrílico que tiene grupos trimetilamonio.

77. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que el polímero permeable a los fluidos, hidrofílicos de la lámina indicadora del pH y la primera y segunda laminas para el control positivo comprende polímeros acrílicos que tienen grupos trimetilamonio.

78. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 72, en que la lámina canalizadora de líquidos, la lámina que sirve de barrera para los líquidos y la lámina indicadora del pH tienen celulosa de etilo.

79. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que el primer indicador es amarillo de nitrazina.

80. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que el primer indicador es amarillo de nitrazina y los grupos de amonio cuaternario están presentes en una cantidad suficiente para causar que el amarillo de nitrazina cambie de color a un pH de aproximadamente 4.7.

81. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71 en que la primera y segunda regiones se disponen para dejar que la sexta región geométrica de la lámina indicadora de pH sea visible de forma independiente de las primera y segunda regiones geométricas y estar protegidas al mojarse con la muestra de líquido.

82. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que la tercera y cuarta regiones geométricas se disponen para dejar que la séptima región geométrica de la lámina indicadora permeable sea visible independientemente de la tercera y la cuarta regiones geométricas y que esté protegida contra cualquier cambio de color que resulte de la aplicación de una muestra líquida que contenga las aminas que se van a analizar.

83. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 71, en que la primera y segunda regiones geométricas se disponen para dejar que la sexta región geométrica de la lámina indicadora del pH sea visible de forma independiente, a la primera y segunda regiones geométricas, y la tercera y cuarta regiones geométricas se disponen para dejar que la séptima región geométrica de la lámina indicadora, permeable al gas, sea visible de forma independiente a la tercera y cuarta regiones geométricas, la sexta y séptima regiones geométricas se protegen para que cualquier cambio de color que resulte de la aplicación de la muestra líquida, que contiene las aminas que se van a analizar.

84. El método para el diagnóstico de vaginosis bacterial en un paciente, mediante el análisis de una muestra de fluido vaginal del paciente, el método comprende la determinación bien sea que el fluido vaginal sea positivo en ambos de los siguientes casos: (1) una prueba para un pH igual o mayor al punto de transición seleccionado dentro del rango desde 4.6 hasta 4.8, llevado a cabo mediante la aplicación de esta muestra a un compuesto que consta de un primer indicador del pH, el cual contiene un grupos fenol ionizare y un grupo cargado negativamente, dispersado en un polímero permeable al fluido, hidrofílico, que contiene grupos amonio cuaternarios en cantidades suficiente para inmovilizar el indicador pH contra la difusión cuando se humedezca con una muestra líquida y para causar que el indicador cambie de color en este primer punto de transición seleccionado; y (2) una prueba para las sales de aminas volátiles, que se lleva a cabo al aplicar esta muestra a un álcali sólido y una lámina indicadora permeable al gas hecha de un material permeable al gas pero impermeable a los líquidos, impregnada con un indicador que sufre una transición detectable luego que entra en contacto con las aminas.

85. El método para el diagnóstico de la vaginosis bacterial en un paciente, al analizar una muestra de fluido vaginal de un paciente, el método comprende la determinación de una prueba del fluido vaginal que de positivo, al menos en tres de las cuatro pruebas siguientes: (1) una prueba para un pH igual o mayor al punto de transición seleccionado dentro del rango que va desde 4.6 hasta 4.8, que se lleva a cabo al aplicar la muestra a una compuesto que comprende un primer indicador del pH que contiene un grupo fenol que se puede ionizar y un grupo cargado negativamente, dispersado en un polímero permeable a los fluidos, hidrofílico, que contiene grupos de amonio cuaternario en una cantidad suficiente para inmovilizar el indicador de pH contra la difusión cuando se humedezca con una muestra líquida para provocar que el indicador cambie de color en el primer punto de transición seleccionado; (2) una prueba para las sales de aminas volátiles, que se lleva a cabo mediante la aplicación de una muestra a una lámina indicadora permeable al gas y de álcali sólido de material permeable al gas pero impermeable a los líquidos, impregnado con un indicador que sufre una transición que se puede detectar al entrar en contacto con las aminas; (3) una prueba para la homogeneidad del fluido vaginal ; y (4) una prueba para detectar la presente de células clave o guía.

86. El método para analizar una muestra de fluido vaginal, para verificar la presencia de células clave, el método comprende la aplicación de la muestra a una lámina indicadora permeable al gas y de álcali sólido, de material permeable al gas pero impermeable a los líquidos, la lámina indicadora permeable al gas impregnada con un indicador que sufre una transición que se puede detectar luego de entrar en contacto con aminas, la penetración de las aminas en la lámina indicadora permeable al gas relacionada con la presente de células clave en la muestra.