MXPA98010888A - Estructuras artificiales de acidos nucleicos parala terapia genica, cuya actividad es influida poragentes inhibidores de quinasas dependientes de ciclinas - Google Patents

Abstract

Se divulgan estructuras artificiales deácidos nucleicos para la terapia génica de emfermedades, que contienenácidos nucleicos que codifican una proteína, que inhibe a la proteína celular p27 y con ello suprime la inhibición de la proliferación de la célula que es producida por p27, mutante de esta con carácter en parte interferente dominante y la utilización de estosácidos nucleicos para la profilaxis y terapia de emfermedades.

Description

Estructuras artificiales de ácidos nucleicos para la terapia génica, cuya actividad es influida por agentes inhibidores de quinasas dependientes de ciclinas La presente solicitud se refiere a una proteína, que inhibe a la proteína celular p27 y con ello suprime la inhibición de la proliferación de las células, que es producida por la p27, a mutantes de ella con carácter en parte interférente dominante, a los correspondientes ácidos nucleicos que la codifican, y a la utilización de la proteína y de los ácidos nucleicos para la profilaxia y la terapia de enfermedades. Además, se divulgan estructuras artificiales de ácidos nucleicos para la terapia génica de enfermedades, que contienen los ácidos nucleicos antes mencionados.

A) Introducción El ciclo celular de células eucarióticas es controlado por quinasas dependientes de ciclinas (" cyclin -dependent kinases" = cdk's); éstas son guinasas "que para su actividad necesitan una subunidad reguladora ("ciclina") . Diferentes procesos en el ciclo celular (tales como por ejemplo la replicación, la entrada en la mitosis) son controlados por diferentes cdk's (Morgan, Nature 374 , 131 (1995) ) . Con ello se regula a nivel alto la actividad de las quinasas depen-dientes de ciclinas. En este contexto existen mecanismos internos de control, que impiden por ejemplo la entrada en la mitosis, mientras tanto que el ADN no haya sido replicado completamente. El control por factores externos, tales como por ejemplo factores de crecimiento, tiene lugar exclusiva-mente antes del comienzo de la replicación del ADN, replicación que es iniciada por complejos activos de ciclina E y cdk2. Junto con la cantidad de ciclina existente en la subunidad de quinasa, la actividad de las quinasas dependien-tes de ciclinas es regulada por pequeñas proteínas inhibidoras ( Sherr y Roberts, Gene Dev. 9, 1 . 149 (1995) ) . Por ejemplo, para el compleio de ciclina E y cdk2 son decisivos dos agentes inhibidores, que según su tamaño son designados como p21 y como p27. En células, que expresan grandes cantidades de p27, la quinasa ciclina E/cdk2 es normalmente inactiva y da entrada en la replicación de ADN está bloqueada. En muchos tumores humanos, los reguladores positivos del ciclo celular son sobreexpresados o al menos expresados constitutivamente ( Sherr, Science 274 , 1 . 672 (1996) ) pero los reguladores negativos son frecuentemente mutados o expresados débilmente (Fero y colaboradores, Cell 85., 733 (1996) ) .

Existen correlaciones específicas: por ejemplo, en muchos tumores cervicales se encuentra la sobreexpresión del gen de la ciclina DI. Por lo tanto, existe la esperanza de que las quinasas dependientes de ciclinas y su función pudieran ser estructuras dianas en la búsqueda de nuevas sustancias que sean activas selectivamente y actúen de modo antiproliferativo . El gen para la proteína p27 es conocido desde hace algunos años (K. Polyak y colaboradores, Cell 78_, 59-66 (1994 ) ) y está accesible en el banco de genes [p27 murina; número de acceso (Accession Number) K 09968; p27 humana: número de acceso K 10906] . A pesar de la intensa búsqueda no se encontraron hasta el momento actual mutaciones en el gen para p27 en tumores humanos. Esto resulta tanto más sorprendente por cuanto que los ratones, en los cuales ha sido desactivado el gen para p27, presentan un fenotipo con múltiples displasias e incidencia aumentada de tumores (Fero y colaboradores , Cell 8J5, 733 (1996) , Kiyokawa y colaborado-res, Cell 8J¿, 721 (1996) ) . En lugar de ello, la función de la p27 es manifiestamente regulada en lo esencial posteriormente a la transcripción. Así, la p27 es descompuesta por proteolisis ; esto sucede también al comienzo de la replicación del ADN de células normales. La capacidad de descomponer proteolítica-mente a la p27 está claramente aumentada en muchos tumores en comparación con el tejido normal y esto parece estar directamente correlacionado con un pronóstico desfavorable (Loda y colaboradores, Na ture Med. 3 , 231 (1997) ) . No obstante, tienen que existir todavía otros mecanis-mos que puedan conducir a la desactivación de p27. Por ejemplo, después de la transformación de células por el oncogén Myc, la p27 es en primer lugar desactivada funcionalmente (es decir, ya no se une a complejos de ciclinas y cdk's), pero es descompuesta tan sólo mucho más tarde. Hasta ahora resulta inexplicable por qué en una serie de tumores, por ejemplo los de mama, se expresan elevadas cantidades de proteínas de p27, y estos tumores, a pesar de ello, crecen con mucha rapidez. Los mecanismos, que desactivan a la p27 en estos tumores, son hasta el momento actual desconocidos (Fredersdorf y colaboradores, Proc. Nati . Acad. Sci . USA 94, 6. 380 (1997) ) . Existe por consiguiente un gran interés del mundo científico en descubrir mecanismos o sustancias que sean responsables de la desactivación de la p27 en tumores. Con el presente invento se resolvió este problema. La proteína pl63, descrita en la solicitud, puede unirse a la p27, inhibir la función de esta p27, y conducir la p27 a la proteolisis en el citoplasma.

B) Descripción general del invento 1) La proteína pl63 y su secuencia de ácido nucleico Es objeto del invento un nueva proteína, denominada pl63, que se una a la p27, con ello la inhiba en su función y la conduzca a la proteolisis en el citoplasma. Se determinó la secuencia de aminoácidos de esta proteína. La proteína pl63 se une específicamente a la p27 y no a otras proteínas tales como Myc, Max, Bcl-6 o protimosina-a.

Es objeto del invento además una secuencia de nucleó-tidos que codifica la proteína pl63. Esta secuencia de nucleótidos fue determinada para la proteína pl63 de ratón y, por comparación entre secuencias, también para la proteína l63 humana. 2) Compuestos análogos a pl63 negativos dominantes Son objeto de este invento además secuencias de nucleótidos, que codifiquen péptidos parciales de pl63 y/o proteínas análogas a la pl63 que actúen de modo negativo dominante, es decir que inhiban la unión de la proteína natural pl63 a la proteína p27, sin perjudicar esencialmente a la unión de la proteína p27 con la fusión de ciclina C y cdk2 ni a la inhibición de esta fusión de ciclina C y cdk2 condicionada por ella. - Es objeto del invento además la utilización de secuencias de ácidos nucleicos, que codifiquen mutantes negativas dominantes de la proteína pl63 o secuencias parciales de ésta, implicando esta utilización la introducción de estas secuencias de ácidos nucleicos en una célula diana y la inhibición de la unión entre la proteína pl63 propia de esta célula diana y la proteína p27 propia de esta célula diana, de modo que se inhiba la proliferación de la célula diana por la proteína p27 propia de ésta" célula diana, que se libera. 3) Péptidos, que inhiben a la pl63 Son objeto de este invento, sin embargo, también secuencias de nucleótidos, que codifiquen proteínas o péptidps, que inhiban la función de la pl63. A ellas pertenecen proteínas o péptidos, que se unen al sitio de unión de la proteína pl63 para la proteína p27 o al sitio de unión de la proteína pl63 para la proteína Ran (Loeb y colaboradores Mol . Biol . 4, 209-222 (1993) ) y con ello inhiben a la proteína pl63 interna en la célula. A estas proteínas pertenecen los péptidos, que corresponden al sitio de unión de la proteína p27 o de la proteína Ran para la proteína pl63. A estas proteínas pertenecen además anticuerpos o productos de disociación de anticuerpos, tales como F(ab)2/ Fab, Fv y scFv con especificidad contra la proteína pl63, especialmente contra el sitio de unión de éata para la proteína p27. Es objeto del invento además la utilización de secuencias de ácidos nucleicos que codifiquen tales proteínas o péptidos ir.hibidoras/es, implicando esta utilización la introducción de estas secuencias de ácidos nucleicos en una célula diana y la inhibición de la unión entre la proteína pl63 propia de esta célula diana y la proteína p27 propia de esta célula diana o la proteína Ran propia de esta célula diana, de manera tal que se inhiba la proliferación de la célula diana c:r la proteína p27 propia de esta célula diana, que se libera. 4) Utilización de la pl63 para la estimulación de la división celular Es objeto de este invento además la utilización de la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína pl63, o la de proteína plß3 propiamente dicha, para la inhibición de la proteína p27 interna en la célula y por consiguiente para la estimulación de la división celular de una célula diana.

) Inhibición de la transcripción y la traducción de pl63 Son objete; ?el _r.v-. :.*;_ sin embargo también secuencias de ácidos nucleicos, que inhiban la transcripción y/o la traducción de la secuencia de ácido nucleico, propia de la célula diana, que codifique la proteína pl63, y con ello conduzcan a una liberación de la proteína p27 y por consiguiente a una inhibición de la proliferación de la célula diana. Tales secuencias de ácidos nucleicos conformes al invento pueden constituir por ejemplo un ADN (triplex) antisentido, un ARN antisentido y/o ribozimas. 6) Sistemas de ensayo para el descubrimiento de agentes inhibidores de la pl63 Es objeto del invento además la utilización de la secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína pl63, o la de esta proteína ?l63 propiamente dicha o de secuencias parciales de ésta, para sistemas de ensayo, en los cuales se busquen agentes inhibidores de ia unión entre la proteína pl63 y la proteína p27 o la proteína Ran, y la utilización de los agentes inhibidores de la proteína pl63, encontrados en estos sistemas de ensayo, para la inhibición de la proliferación de una célula diana. 7) Detección de la pl63 para el diagnóstico de una enfermedad Es objeto del invento además la utilización de estructuras artificiales de ácidos nucleicos que codifiquen la proteína pl63 o secuencias parciales de la proteína pl63, o de secuencias de ácidos nucleicos o secuencias de proteínas que se unan a estas secuencias de ácidos nucleicos para la proteína pl63, o de proteínas que se unan a la proteína pl63 para la detección de ácidos nucleicos que codifiquen la pl63 o para la detección de la proteína pl63 en una célula o bien en un tejido o en un líquido corporal, con la finalidad de efectuar la determinación del estado de proliferación de una célula o de un tejido o de efectuar el diagnóstico de un estado morboso (de enfermedad) . 8) Sistemas de expresión que contienen secuencias de unión para la p27 o para complejos de las proteínas pl63 y p27 Es objeto del invento además un sistema de expresión que contiene una secuencia de ácido nucleico, cuya expresión es controlada por la proteína p27 y que en el caso más sencillo contiene los siguientes componentes: Componente a) al menos una secuencia de activación (promotor n° 1) Componente b) - al menos un gen para un factor de transcripción que consta de una proteína de fusión que contiene el componente b-¡_) al menos un dominio de activación de un factor de transcripción el componente b2) 1) al menos una secuencia o al menos una secuencia parcial de la proteína pl63, a la que se une la proteína p27, o 2) al menos un anticuerpo o al menos un fragmento de anticuerpo tal como Fab, Fv o scFv, que se une al sitio • de unión de la proteína p27 para la proteína pl63 , o 3) al menos un anticuerpo o al menos un fragmento de anticuerpo tal como Fab, Fv o scFv, que se une al sitio de unión de la proteína pl63 para la proteína p27, o 4) al menos un anticuerpo o al menos un fragmento de anticuerpo tal como Fab, Fv o scFv, que se une al complejo de pl63 y p27. Componente b3) al menos un dominio de unión a ADN de un factor de transcripción Componente c) - - al- menos una secuencia de activación (promotor n° II), que es activada por unión del factor de transcripción, codificado por el componente b) Componente d) - al menos un gen efector.

La disposición de los componentes individuales se reproduce a modo de ejemplo en la Figura 1. Es premisa para la capacidad funcional del sistema de expresión conforme al invento, que el componente b2l) , b22) o b23) se junte, entre o a los componentes b-j_) y bj) , de tal manera que la unión de la proteína p27 o de la proteína pl63 al producto de expresión del componente b2) inhiba la capacidad funcional del dominio de activación [componente b^) ] y/o del dominio de unión a ADN [componente 3 ) ] . Esta inhibición conduce a una inhibición de la expresión del gen efector en células, en las cuales se presenta p27 libre o pl63 libre. En células, en las que la proteína p27 y/o la proteína pl63 se ha(n) convertido en complejos (complej ado) , de modo tal que ya no pueda (n) interactuar con el componente b2), o sin embargo ya no esté (n) presente (s) o sólo esté(n) escasamente presentéis), falta esta inhibición, de manera tal que el factor de transcripción [componente b) ] pueda activar sin obstáculos a la secuencia de activación [componente c) ] y con ello pueda poner en marcha la transcripción del gen efector. Una particularidad la constituye el componente b24) . Por unión de fusiones de pl63 y p27 con el componente b24; en células que se están dividiendo está inhibido el factor de transcripción ~[componente b) ] , y por el contrario en células que se encuentran en reposo (es decir en el caso de p27 libre) está libre el factor de transcripción [componente b) ] y es plenamente capaz de funcionar. La transcripción del gen efector es iniciada por la activación de la secuencia de activación [componente a) ] , que tiene como consecuencia una expresión del gen para el factor de transcripción [componente b) ] . El factor de transcripción [componente b) ] , a su vez, se une a la secuencia de activa-ción [componente c) ] , que induce una expresión del gen efector [componente d) ] . En una forma especial de realización de este invento, el componente a) es igual al componente c) . En esta forma especial de realización, una pequeña activación de la secuencia de activación [promotor I, componente a)] conduce a una expresión del factor de transcripción [componente b) ] , que activa tanto a la secuencia de activación [promotor I, componente a) ] como también a la secuencia de activación [promotor II, componente c) ] y con ello a la vez induce la expresión del jen para el gen efector [componente d) ] y también refuerza la expresión del factor de transcripción [componente b? ] , con lo cual a su vez se refuerza la expresión del gen efector [componente d) ] . Este sistema de expresión puede ser ampliado medíame la yuxtaposición de varias secuencias iguales o diferentes para genes efectores [componentes d) , d'), d" , que están unidos en cada caso unos con otros mediante secuencias IRES iguales o diferentes o mediante secuencias de activación [componentes c') y c " ) ] ,- mediante la yuxtaposición de varios genes iguales o diferentes para factores de transcripción [componente b) ] , que en cada caso están unidos unos con otros mediante secuencias IRES o secuencias de activación [componente a) o componente c) ] , iguales o diferentes. En ei caso de una yuxtaposición de genes para diferen-tes factores de transcripción, las secuencias de activación han de escogerse de manera tal que contengan secuencias de nucleótidos, a las cuales se pueda unir el factor de transcripción [componente b) ] . Mediante las estructuras artificiales de ácidos nucleicos conformes ai invento se puede expresar un gen efector [componente d) ] dependiendo de la elección de la secuencia de activación [componentes a) o c) ] de manera inespecífica, específica para células o específica para virus, o en determinadas condiciones metabólicas o también de modo específico para un ciclo celular. En el caso del gen efector se trata de un gen, que por su parte codifica una sustancia con actividad farmacológica o sin embargo codifica una enzima, que desdobla a un compuesto inactivo precursor de un fármaco para dar un fármaco activo. Por ejemplo, el gen efector puede ser seleccionado de manera tal que esta sustancia activa o esta enzima sea expresada como proteína de fusión con un ligando, y una a este ligando con la superficie de células, por ejemplo células endoteliales o tumorales, o bien leucocitos. Las estructuras artificiales de ácidos nucleicos conformes al invento, que se han expuesto, constan preferiblemente de ADN. Por el concepto de "estructuras artificiales de ácidos nucleicos" se entienden estructuras artificiales ~a base de ácidos nucleicos, que pueden ser transcritas en las células diana. Éstas son introducidas preferiblemente en un vector, siendo preferidos especialmente vectores plasmídicos o vectores víricos . La estructura artificial de ácido nucleico, eventualmente introducida en un vector, es administrada a un paciente para la profilaxia o terapia de una enfermedad. LA administración puede efectuarse por vía oral, local o bien por inyección o infusión. Son objeto del presente invento también células de mamíferos, que contengan una estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento. En una forma de realización especialmente preferida, las estructuras artificiales de ácidos nucleicos son introducidas en líneas celulares, que después de transfección se pueden utilizar como soportes del sistema de expresión conforme al invento para la expresión del gen efector. Tales células se pueden utilizar para poner a disposición un medicamento para pacientes. Altern tivamen-te, las células o líneas celulares, tales como p. ej . células tumorales, inmunológicas o endoteliales, en las cuales se habían incorporado las estructuras artificiales de ácidos nucleicos conformes al invento, se pueden administrar por vía local o se pueden inyectar por vía parenteral, por ejemplo por vía intravenosa, intraarterial en una cavidad corporal, en un órgano, o se pueden inyectar por vía subcutánea, a los pacientes .

Una utilización preferida de la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento consiste por consiguiente en la profilaxia o el tratamiento de una enfermedad, comprendiendo el invento la introducción in vi tro de una estructura artificial de ácido nucleico en una célula diana, la expresión mespecífica, específica para virus o células dianas, específica metabólicamente y/o específica para ciclos celulares, del medicamento en la célula diana, y la administración por vía local o parenteral de la célula diana a los pacientes, o bien la administración por vía local o parenteral de la estructura artificial de ácido nucleico a los pacientes, para la introducción in vivo de una estructura artificial de ácido nucleico en la célula diana. Las estructuras artificiales de ácidos nucleicos conformes al invento no se presentan en la naturaleza en esta forma, es decir que el gen efector para la sustancia activa, o bien para una enzima o para una proteína de fusión de un ligando y una sustancia activa o de un ligando y una enzima, no está combinado de un modo natural con secuencias de ácidos nucleicos, tal como las contiene la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento. Preferidos genes efectores [componente d) ] , que se incorporan en un sistema de expresión conforme al invento, codifican una sustancia con actividad farmacológica. Éstas son proteínas y glicoproteínas, seleccionadas entre el grupo que contiene citoquinas, factores de crecimiento, receptores para citoquinas o factores de crecimiento, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, proteínas de actúan antiprolifera-tivamente o citostáticamente, proteínas que actúan apoptóti-camente o antiapoptóticamente, antígenos de tumores, agentes inhibidores de la angiogénesis, proteínas inductoras de trombosis, agentes inhibidores de la coagulación, proteínas con actividad fibrinolítica, proteínas de plasma sanguíneo, proteínas activadoras del complemento, sustancias de envoltu-ra -de virus y bacterias, hormonas, péptidos activos sobre la circulación, neuropéptidos, enzimas, mediadores, proteínas reguladoras y ribozimas no modificadas, que se presentan en la naturaleza, o secuencias de nucleótidos (antisentido) que actúan inhibiendo sobre la expresión de genes. Preferiblemente, en el caso del ranssén se trata de un gen efector que codifica una riboz ma, que inactiva al ARNm (ácido ribonucleico mensajero) , que codifica una proteína seleccionada entre el grupo que contiene proteínas que controlan el ciclo celular, especialmente ciclina A, ciclina B, ciclina DI, ciclina E, E2F1-5, cdc2 , cdc25C, pl63 o DPI, o bien proteínas de virus o citoquinas, o bien factores de crecimiento o sus receptores. En otra forma de realización, el gen efector puede codificar una proteína de fusión de un ligando y una sustancia activa, pudiendo el ligando ser un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, una citoquina, un factor de creci-miento, una molécula de adhesión o una hormona peptídica, y pudiendo la sustancia activa ser una sustancia con actividad farmacológica, tal como antes se describe, o una enzima. Por ejemplo, el gen efector puede codificar una proteína de fusión de un ligando y una enzima, desdoblando la enzima a un compuesto precursor de un fármaco para formar el fármaco y uniéndose el ligando a una superficie de células, preferiblemente a la de células endoteliales o células tumorales.

C) Descripción más detallada del invento 1) Caracterización de la proteína pl63 y de la secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína pl63 Con ayuda de la "tecnología de dos híbridos" [= two-hybrid-Technologie] (Fields y Song, Nature 340 , 245 (1989) ) la proteína pl63 se reveló como una nueva proteína participante de p27. Para ello, se clonó toda la secuencia codificadora de la proteína p27 murina con ayuda de una PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en el vector de levadura pGBTIO (Clontech) dentro de cuadro con el dominio de unión a ADN del factor de transcripción GAL4. La cepa de levadura Hf7c (entidad Clontech Heidelberg, Matchmaker two Hybrid, K 1605- 1 ) fue transformada con este vector, se aislaron colonias auxótrofas para triptófano, y la expresión de las proteínas de fusión correctas se detectó en el borrón de transferencia Western con ayuda de específicos anticuerpos contra GAL4 y p27. Esta cepa fue transformada, en una segunda transformación, con una biblioteca de ADNc marcada con VP16, procedente de embriones de ratón ( Voj tek y colaboradores, Cell 7_4 , 205 (1993) ) . Se analizaron adicionalmente 400 colonias, que eran auxótrofas para histidina, en presencia de aminotriazol 15 nM. Se secuenciaron 70 de estos clones; todos ellos codificaban diferentes ciclinas del tipo D; éstas son partícipes conocidos en interacciones de p27. Con ayuda de borrones de transferencia Southern se puso de manifiesto que 390 de las 400 clones resistentes codificaban ciclinas D. Dos de los restantes clones ("número 163") codificaban la misma proteína; éstos fueron secuenciados completamente. A partir de una biblioteca de ADNc ?ZAP, producida a partir de células Balb/c-3T3 se identificaron varios clones, que eran homólogos con pl63. El análisis de las secuencias muestra un cuadro de lectura abierto; éste es utilizado también en la quimera con VP16 procedente de la biblioteca de ADNc. Ambos clones originales codifican los aminoácidos 121 hasta 252 de este cuadro de lectura. Los clones de pl63 fueron caracterizados con mayor detalle con ß-galactosidasa como gen reportero en levaduras. Tal como se representa en la Tabla 1, la proteína codificada interactúa en levaduras específicamente con p27, pero no con otras proteínas, tales como Myc, Max, Bel-6 o protimosina- . La Tabla 1 muestra también una primera delimitación de los dominios de la p27, en los cuales tiene lugar la interacción con pl63. Estos datos apuntan a que la pl63 se une a los mismos dominios de la p27 que las quinasas dependientes de ciciinas (Russo y colaboradores, 382 , 325 (1996) ) . Esto es una indicación de que la pl63 y las quinasas dependientes de ciclinas compiten en cuanto a su unión a la - -p27. Por otro lado, el dominio de la pl63, que interactúa con la p27, se pudo delimitar a los aminoácidos 121 hasta 252.

Para la confirmación de estos resultados a partir de este sistema de ensayo en levaduras, una pl63 expresada recombinantemente [expresada como proteína de fusión con glutatión-transferasa (GST) ] se fijó a una columna y luego se intentó purificar por cromatografía de afinidad en esta columna a la proteína p27 marcada con 35S. Mediante la utilización de la proteína de fusión pl63 con una glutatión-transferasa (GST) fue posible emplear una matriz uniforme para estos experimentos (los denominados "GST-pulldowns " , Hateboer y colaboradores, Proc. Nati . Acad. Sci . US 90, 8. 489 (1993) ) . Para estas investigaciones, el cuadro de lectura se trasladó desde el clon en levadura a un vector pGEX (Pharmacia, Freiburg pGEX-2T; n° de encargo 27-4801-01) , que codifica en E. coli una proteína quimérica con glutatión-S-transferasa (GST) bajo el control del promotor TAC inducible por IPTG (Smi th y Johnson, Gene 67 :31 , 1988) . Las proteínas quiméricas fueron purificadas a partir de cultivos en E. coli inducidos, mediante cromatografía por afinidad en glutatión-agarosa (Smi th y Johnson, 1988) y a continuación fueron dializadas frente a Tris-HCl 100 mM, de pH 7,5, KCl 100 mM, EDTA 20 mM, glicerol al 10 % y PMSF 0,1 mM. Como testigo, la glutatión'-S-transferasa se purificó y dializó de acuerdo con el mismo protocolo; las proteínas purificadas fueron almacenadas a -80°C. En cada caso 10 µg de ambas proteínas se incubaron a continuación durante dos horas a 4°C con 10 µg de BSA [= albúmina de suero bovino] y 20 mg de GST-agarosa hinchada; después de ello la agarosa se separó por centrifugación y se lavó dos veces con un tampón de diálisis. Como testigo para la unión de las proteínas, una parte alícuota de la agarosa se hirvió directamente en un tampón de muestra y las proteínas unidas se detectaron de acuerdo con una SDS-electroforesis en gel. Una p27 marcada con 35S-metionina se preparó mediante traducción in vi tro (de acuerdo con los datos del fabricante: Promega, Mannheim; TNT coupled rete. lys. systems: L 4610) y se incubó con agarosa cargada durante dos horas en un volumen total de 200 1 en un tampón de diálisis con NP40 al 0,1 % a 4°C. La agarosa se lavó cuatro veces con una mezcla de un tampón de diálisis y 0,1 % de NP—40 y a continuación se hirvió en SDS-tampón de muestra. Las proteínas unidas se detectaron mediante electroforesis en SDS-gel y fluorografía. En la Tabla 2 se representan los resultados de estos experimentos. Éstos demuestran que una p27 recombinante, marcada con S, sintetizada in vi tro, se fija selectivamente a una columna, que está cargada con una prcteír.a ?e fusión quimérica de GST y pl63, pero no a una columna que está cargada con la misma cantidad de GST. La Tabla 2 demuestra también que una p27 procedente de un extracto celular se une ineficientemente a una fusión de GST y pl63; en este extracto, la p27 está unida a complejos de quinasas dependientes de ciclinas. Un corto tratamiento por calor pone en libertad la p27 a partir de estos complejos y permite entonces la unión a la pl63. Esto demuestra que la pl63 y las quinasas dependientes de ciclinas compiten en cuanto a la unión a la p27. La secuencia de nucleótidos conforme al invento, que codifica la proteína pl63 murina, está representada en la Tabla 3. Esta secuencia tiene un homólogo en el banco de datos; se trata del gen de nucleoproteína (Nup) 2 de la levadura. La Nup2 es una proteína de la membrana del núcleo, que participa en la formación de la proteína del núcleo y en el transporte de proteínas hacia dentro y hacia fuera del núcleo. La Nup2 participa bien en la levadura, sobre todo en la exportación. Varios dominios funcionales están conservados, aun cuando en conjunto la homología no es alta (Tabla 4) . Así, el sitio de unión para una proteína reguladora (Ran, que es una proteína que se une a GTP) , que regula el transporte en el núcleo, está conservado entre la proteína de unión a Ran (RBP-1) [Ran binding protein] , la Xup2 y la pl63 (Tabla 5) , así como también cortas secuencias de pentapéptidos, a las que se atribuye una función estructural (Tabla 6) . Z Z T. ei fin de comprobar y demostrar que la pl63 consiste sin lugar a dudas en una nucleoporina, se generó un antisuero pol cional contra la proteína [histidina-pl63 (aa [= aminoácidos] 121-252)] y se purificó por afinidad; este antisuero reconoce indudablemente a una nucleoporina, lo cual es reconocible- en la inmunofluorescencia por la coloración típica de los poros en el núcleo (hay "motas" sobre la superficie, y la periferia del núcleo está coloreada) . Para la comprobación de una asociación intracelular entre i l 2 D Nup2 y la p27, ambas proteínas fueron expresadas transitoriamente en células HeLa con vectores de expresión de CMV, 48 horas más tarde las células fueron lisadas e investigadas en cuanto a una posible interacción de ambas proteínas mediante inmunoprecipitación y/o transferencias Western ( Peukert y colaboradores, EMBO, J, 1 , 5. 672 (1997) ) . La asociación entre la p27 y la Nup2 se comprobó con sendos anticuerpos policlonales contra Nup2 y contra p27 murina. La proteína p27 fue bien precipitada solamente en el caso en que había sido expresada la pl63 (véase la Tabla 7) . Ésta es una comprobación de que la Nup2 y la p27 se pueden asociar entre sí in vi vo en el seno de células HeLa. Mediante comparación entre secuencias y búsqueda de datos con EST's humanos, se identificó la secuencia de ácido nucleico para la proteína pl63 humana. Para el dominio de unión a Ran, ésta se encuentra en la secuencia AA161285 en las posiciones 173 = 575, para el dominio de unión a p27 en la secuencia R62312 en las posiciones 318 ¿ 486, y para los otros segmentos parciales de pl63 en la secuencia THC199124 en las posiciones 348 > 489. Para definir con mayor exactitud con qué aminoácidos de p27 tiene lugar la interacción entre la Nu 2 y la pl63 se buscaron en levaduras los mutantes que ya no interactuasen con la pl63. Para ello el ADNc, que codificaba la p27, fue sometida a una reacción de PCR inductora de defectos (condiciones de la PCR según " PCR- technology, Principies and Applications for DNA amplif ication " , R.A . Eriich, Stockton press, NY, 1989) y los clones resultantes, que contienen defectos aleatorios, se ensayaron en cuanto a una interacción con Nup2 y, como testigo, con ciclina DI. Las condiciones de esta PCR (que se desviaban del patrón) eran: 40 ciclos en presencia de 1 U de polimerasa de Taq de GIBCO y de MnCl2 0,1 mM. El fragmento obtenido de ADNc se transformó conjuntamente en el seno de la cepa de levadura HF7c-pl63/ Nup2 con un vector pGBTIO, que había sido linealizado con BamHl y EcoRI y purificado. Las colonias transformadas fueron seleccionadas por selección a partir de un medio con falta -Leu-Trp. Se aislaron 960 clones individuales y se sembraron en placas sobre un medio selectivo (-Leu-His-Trp) . Con los clones, que no crecieron sobre este medio selectivo, se llevó a cabo -un ensayo con ß-galactosidasa como segundo ensayo de interacción. Los clones negativos fueron identificados y a partir de ellos se aisló el plásmido pGBT10-p27. Los plásmidos obtenidos fueron vueltos a transformar en primer lugar con un plásmido de expresión en levadura, que expresa la fusión de pl63 y Nup2 como quimera con un dominio transactivador, y en segundo lugar como testigo con un plásmido que expresa ciclina DI como quimera con un dominio transactivador. Se obtuvieron tres clones, que ya no interactúan selectivamente con Nup~2 , pero sí con ciclina DI . Estos plásmidos fueron secuenciados conjuntamente con algunos testigos. Una selección del fenotipo obtenido está recopilada en la Tabla 13. En estos experimentos una interacción se pone de manifiesto como crecimiento en ausencia de histidina (-Trp-Leu-His, "selectivo"), mientras que el testigo (-Trp-Leu,-"no selectivo") muestra que ambas proteínas habían sido expresadas en levadura. De 1.000 clones se encontraron 3, que ya no interactúan específicamente con la fusión de pl63 y Nup2 pero sí perfectamente con ciclina DI. Las secuencias están mostradas en la Tabla 14. Los tres clones, pero no una serie de clones testigos, son portadores de la misma mutación en el aminoácido arginina 90 (rautadc a glicina) . Las secuencias muestran también que los cienes se han formado independientemente, puesto que son portadores de otras diversas mutaciones. Por consiguiente, la arginina 90 es definida inequívocamente como aminoácido central en la interacción de p27 con Nup2. Las mutantes están a disposición para una validación de la relevancia biológica de esta interacción. 2) Secuencias de nucleótidos para compuestos análogos a la proteína pl63 qtie actúan de modo negativo dominante Mediante los análisis funcionales que antes se describen se han conocido dos dominios de la proteína pl63, que son decisivos para su función. Por una parte, se trata del dominio (aminoácidos 121-252) para la unión a la p27. Por otra parte, se trata del dominio (aminoácidos 307-467) para la unión a la Ran, que es una proteína que se une a GTP, que regula las funciones de transporte . Son objeto del invento, por consiguiente, secuencias de ácidos nucleicos para la proteína pl63 o para partes de esta proteína, teniendo estas secuencias de ácidos nucleicos mutaciones en el dominio de unión a la p27 y/o en el dominio de unión a la Ran, por lo que está drásticamente disminuida la unión de la proteína mutada expresada o bien a p27 o a Ran. Introducidos en una célula, tales compuestos análogos a pl63 inhiben a la pl63 propia de la célula, capaz de funcionar. Con ello se forma p27 libre, lo cual conduce a la inhibición de la división celular. Ejemplos de tales mutantes de pl63 negativas dominantes se representan en las Tablas 8 y 9. La Tabla 8 muestra la pl63 con una deleción del dominio de unión a la p27 y la Tabla 9 muestra la pl63 sin el dominio de unión a la Ran. Es objeto del invento por consiguiente la introducción de estructuras artificiales de ácidos nucleicos que codifican compuestos análogos a pl63 negativos dominantes en una célula, con la meta de inhibir la proliferación de esta célula. Esta introducción en la célula puede efectuarse in vi tro pero también in vivo . Para la expresión mejor posible y/o controlada de la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento, ésta se encuentra unida preferiblemente con una secuencia de activación. Ejemplos de tales secuencias de activación se exponen en el párrafo 8.3. Para la localizacíón en el núcleo, se ha de adjuntar a la secuencia de ácido nucleico, que codifica la pl63, una señal de localización nuclear (NLS = Nukleáres LokalisationSignal) . Tales NLS son conocidas por un experto en la materia. La estructura artificial de ácido nucleico se incorpora en la célula como ADN "desnudo" o bien con ayuda de un vector no vírico, o con ayuda de, e introducida en, un vector vírico, de acuerdo con procedimientos conocidos por un experto en la materia. 3) Secuencias de nucleótidos para proteínas o péptidos, que se unen al dominio de unión de la pl63 Mediante las investigaciones antes expuestas se pudieron establecer y fijar en los aminoácidos 307-467 el dominio dominio de unión a la p27 de la proteína pl63 en los aminoácidos 121-252 y el dominio de unión a la Ran. Son objeto del invento por consiguiente estructuras artificiales de ácidos nucleicos, que codifican péptidos, los cuales o bien se unen al dominio de unión de la pl63 para la p27, y con ello inhiben la unión de la pl63 a la p27, o se unen al dominio de unión de la pl63 a la Ran y con ello inhiben la unión de la pl63 a la Ran. Mediante esta inhibición se forma p27 libre, que inhibe la prolif ración celular mediante unión, por ejemplo, a la fusión de ciclina E y cdk2. Un ejemplo de un péptido que inhibe de tal manera lo constituyen secuencias de aminoácidos, que corresponden ai dominio de unión a pl63 de la proteína p27 (aminoácidos 69- 178) o de la Ran. Otro ejemplo son anticuerpos o fragmentos de anticuerpos rales crr.o F(ab)2, Fab, Fv o scFv, que se unen a pl63, en especial al ?ominio de unión a la p27 o al sitio de unión a la Ran de ia pl63. Tales anticuerpos pueden obtenerse por ejemplo por inmunización de animales con pl63, o bien con el dominio de un ón a la p27 o con el dominio de unión a la Ran, de pl63. Estos dominios es'tán representados en la Tabla 5 (dominio de -n ón a la Ran) o en la Tabla 10 (dominio de unión a la 2~ . Es objete del invento por consiguiente la introducción de estructuras artificiales de ácidos nucleicos que codifican proteínas que se unen a la pl63, en el seno de una célula, con la meta de inhibir la proliferación de esta célula. Esta introducción en la célula puede efectuarse in vi tro pero también in vi vo . Para la expresión mejor posible y/o controlada de la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento, ésta se encuentra unida preferiblemente con una secuencia de activación. Ejemplos de tales secuencias de activación se exponen en el párrafo 8.3. Para la localización en el núcleo, se ha de adjuntar a la secuencia de ácido nucleico, que codifica la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invente, una señal de localización nuclear (NLS) . Tales NLS son conocidas por un experto en la materia. La estructura artificial de ácido nucleico se introduce en la célula como ADN "desnudo" o bien con ayuda de un vector no vírico, o cotí ayuda de, e introducida en, un vector vírico, de acuerdo con los procedimientos conocidos por un experto en la materia. 4) Secuencias de nucleótidos para pl63 con el fin de estimular la división celular - La introducción en una célula de la secuencia de nucleótidos para pl63 o de la proteína pl63 conduce a la inhibición de la p27 intracelular. Con ello se liberan los complejos de ciclina E y cdk2 (que son inhibidos por la p27) , los cuales inician la división celular. Es objeto del invento por consiguiente la introducción de estructuras artificiales de ácidos nucleicos que codifica pl63 en una célula, con la meta de favorecer la proliferación de esta célula. Esta introducción en la célula puede efectuarse in vi tro pero también in vivo . Para la expresión mejor posible y/o controlada de la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento, ésta es unida preferiblemente con una secuencia de activación. Ejemplos de tales secuencias de activación se señalan en el párrafo 8.3. Para la localización en el núcleo se ha de adjuntar a la secuencia de ácido nucleico, que codifica la pl63, una señal de localización nuclear (NLS) . Tales NLS son conocidas por un experto en la materia. La estructura artificial de ácido nucleico es incorporada en la célula como ADN "desnudo" o bien con ayuda de un vector no vírico, o con ayuda de, e introducida en, un vector vírico de acuerdo con los procedimientos conocidos por un experto en la materia. Por introducción de una estructura artificial de ácido nucleico que codifica la pl63 se pueden incitar a la proliferación por ejemplo células en el cultivo celular o células in vivo, p. ej . en el caso de proliferación celular defectuosa.

) Secuencias de nucleótidos para la inhibición de la transcripción y/o traducción de la proteína pl63 El conocimiento de la secuencia de ácido nucleico de la proteína pl63 ofrece la posibilidad de producir oligonucleótidos con ayuda de los cuales se puede inhibir específicamente la transcripción o traducción de pl63. A estos ácidos nucleicos antisentido pertenecen oligonucleóti-dos, ADN (triplex) antisentido, ribozimas o ARN antisentido. El método para la preparación de oligonucleótidos de ADN triplex ha sido descrito detalladamente por Frank-Kamenetskii y Mirkin, en Ann . Rev. Biochem. 64, 65 (1995) y el método de la preparación de - 1 ;"-. icleétidos de ARN antisentido ha sido descrito por Neckers y colaboradores, en Cri t . Rev. Oncogen. 3, 175 (1992) , Cárter y Lemoine, en Br. ". Cáncer 67, 869 (1993 ) , Mukhdopadhyay y Roth, Crit. Rev. Oncogen . 7, 151 (1996) y Mercóla y Cohén, Cáncer Gene Ther. 2, 47 (1995) . De modo preferido en el sentido del invento se han de utilizar ADN triplex u oligonucleótidos de ARN antisentido, que se hibridan con secuencias de nucleótidos de la pl63 , las cuales codifican zonas parciales del dominio de unión (zona total, aminoácidos 121-252; para ia proteína p27 o zonas parciales del dominio de unión (zona total aminoácidos 307-467) para la proteína Ran. A las secuencias de nucleótidos que inhiben la transcripción y/o la traducción de pl63, pertenecen además ribozimas específicamente para zonas de la secuencia de nucleótidos de la proteína pl63. El método para la preparación de ribozimas fue descrito detalladamente por Burke, en Nucí . Acids . Biol . 8_, 105 (1994) , Christoffersen y Marr, en J. Med . Chem . , 38 , 2. 023 (1995) y Scott y colaboradores, en Science 274 , 2. 065 (1996) . Son preferidas en el sentido del invento las ribozimas ," que se hibridan con secuencias de nucleótidos de la pl63, que se encuentran situadas en la zona de la secuencia de nucleótidos para el dominio de unión (aminoácidos 121-252) para la proteína p27, o para el dominio de unión (aminoácidos 307-467) para la proteína Ran. Ejemplos de secuencias de nucleótidos de la proteína pl63, disociables por ribozimas, se exponen en la Tabla 11.

Los ADN triplex, ARN antisentido o ribozimas, como oligonucleótidos [preparados y protegidos contra la degradación por ADNasas o ARNasas según los métodos conocidos por un experto en la materia (véase la biDliografía antes citada)] o bien se añaden in vi tro a las células diana o -se administran in vivo por inyección o aplicación local. Es objeto del invento sin embargo también la introducción de estructuras artificiales de ácidos nucleicos en una célula, cen la meta de que en la célula se formen por transcripción les ARN antisentido o las ribozimas correspondiendo a los oligonucleótidos conformes al invento, a fin de inhibir la proliferación de esta célula. La introducción en la célula puede efectuarse in vi tro pero también in vivo . Para la expresión mejor posible y/o controlada de la estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento, ésta se encuentra unida preferiblemente con una secuencia de activación. Ejemplos de tales secuencias de activación se exponen er: el párrafo 8.3. La estructura artificial de ácido nucleico se incorpo-ra en la célula como ADN "desnudo" o con ayuda de un vector no vírico, o bien con ayuda de, e introducida en, un vector en este vector, de acuerdo con los procedimientos conocidos por un experto en la materia. 6) Sistemas de ensayo para el descubrimiento de agentes inhibidores de la función de pl63 ?l descubrimiento de la proteína pl63 y de "su interacción con la proteíná p27 hace posible la búsqueda de agentes inhibidores de esta interacción. Para ello son necesarios sistemas de ensayo, en los cuales sea inhibida la unión entre la proteína 27 y la proteína pl63 y esta inhibición sea indicada por un indicador. Se conocen numerosos métodos. Un ejemplo de uno de estos métodos es el "análisis de escrutinio de dos híbridos" [= " Two Hybrid Screen A'ssay" ] (véanse para ello el párrafo Cl y la Tabla 1) . Alternativamente, sin embargo, se puede utilizar para el escrutinio también por ejemplo un sistema de afinidad, en el cual la pl63 [preferiblemente el dominio de unión a la p27 (aminoácidos (121-252)] está unida a una fase sólida, es incubada con la sustancia sometida a prueba, y se determina la unión de la sustancia sometida a prueba por inhibición de la unión de un partícipe marcado en la unión para el dominio de la proteína pl63 que se une a la p27. Este partícipe marcado en la unión puede ser la p27 o un anticuerpo que se una específicamente al dominio de la proteína pl63 que se une a p27. De igual manera que para los inhibidores de la unión entre la pl63 y ia p27 se pueden constituir también sistemas de ensayo para agentes inhibidores de la unión entre la pl63 y la Ran, y se pueden utilizar para el escrutinio. Es objeto del invento por consiguiente la utilización de secuencias de ácidos nucleicos, que codifican pl63 o proteínas parciales de pl63, o la utilización de la proteína pl63 o proteínas parciales de ésta, para la búsqueda en cuanto a agentes inhibidores de pl63. 7) Utilización de la secuencia de ácido nucleico para pl63, o de la secuencia de proteína de pl63, para realizar el diagnóstico del estadio de proliferación de una célula o de un estado morboso Tal como se representa en la introducción, párrafo A) , una serie de tumores se distinguen por una concentración intracelular, aumentada de p27. Por causa del hecho de que estos tumores proliferen, hay que suponer que está inhibida la función de esta p27 aumentada. Correspondientemente a este invento, la pl63 es el agente inhibidor específico de p27. La detección de este agente inhibidor en una célula permite realizar una declaración acerca del estado de proliferación de la célula. Esta declaración puede ser de gran importancia p. ej . para la evaluación de la malignidad de una célula tumoral o de un tej ido tumoral . Por muerte celular se pone en libertad la proteína pl63. La detección de pl63 en un líquido corporal permite por lo tanto realizar la declaración acerca de procesos proliferativos y/o que van acompañados con muerte celular, por ejemplo procesos inflamatorios, en un cuerpo. La detección de la proteína pl63 puede efectuarse por unión específica a sustancias marcadas. A estas sustancias que se unen -especíticamente pertenecen la proteína p27, la proteína Ran y anticuerpos, generados por ejemplo por inmunización de animales con la proteína pl63 o con secuen-cías parciales de esta proteína. La detección del ARNm de pl63 en una célula o en un tejido puede efectuarse sin embargo también por hibridación de la secuencia de ácido nucleico, que codifica la proteína pl63, con el correspondiente ARNm. Una elevación de la sensibilidad de esta detección es posible mediante la tecnología de "reacción en cadena de la polimerasa" [= Polymerase Chain Reaction (PCR) ] , en la cual unas pocas copias de una secuencia de ácido nucleico que se ha detectar pueden ser multiplicadas con ayuda de los denominados pares de cebadores. Ejemplos de pares de cebadores para la multiplicación y para la detección de la secuencia de ácido nucleico que codifica pl63, se representan en las Tablas 12a, b y c. La detección del ARN que codifica la pl63 es sin embargo también posible por ejemplo con la fluorescencia de hibridación in si tu publicada por Gussoni y colaboradores, en Nature Biotechnol . 14, 1 . 012 (1996) . Por consiguiente, es objeto del invento la detección de una secuencia de ácido nucleico que codifica pl63, o de la proteína pl63, para la determinación del estado de proliferación de una célula o de un tejido, o para la detección de las modificaciones proliferativas o que van acompañadas por muerte celular en un mamífero vivo. 8) Particularidades de los sistemas de expresión, que son controlados por pl63, p27 o el complejo de pl63 y p27 8.1. El componente b) 8.1.1. Secuencia de unión para pl63, p27 o el complejo de proteínas pl63 y p27 [componente 2)] En una forma preferida de realización del invento, el sistema de expresión contiene con su componente b2) al menos :r.a secuencia de ácido nucleico para la proteína pl63 o para ia parte de ia proteína pl63, que se une a la proteína p27. En otra forma preferida de realización, el sistema de expresión contiene con su componente b2) al menos una secuencia de "ácido nucleico para un anticuerpo o para una parte de un anticuerpo con las secuencias de unión (VH y VL) para el sitio de unión de la proteína p27 para la proteína pl63, o - - para el sitio de unión de la proteína pl63 para la r-^ír.a p27. ?n estas formas de realización, p. ej . la proteína p27 libre o la pr teína pl63 libre, presente en la célula, se une al producto de expresión del componente b2) e inhibe con ello al factor de transcripción codificado por el componente b) y bloquea con ello al sistema de expresión. Sin embargo, si por ejemplo en una célula la proteína p27 está complejada con la proteína pl63, permanece libre el producto de expresión del componente b2) y por consiguiente el factor de transcripción (componente b) ] y el sistema de expresión es capaz de funcionar. Estos sistemas de expresión conformes al invento son por consiguiente capaces de funcionar en células que se están dividiendo (hay presencia de complejos de pl63 y p27) y son inhibidos en células en reposo (hay p27 libre) . En otra forma especial de realización, el sistema de expresión contiene con su componente b2) contiene al menos una secuencia de ácido nucleico para un anticuerpo o una parte de uñ anticuerpo con las secuencias de unión (VH y VL) para el complejo de p27 y pl63. En esta forma de realización, los complejos de p27 y pl63 se unen al producto de expresión del componente b2) y bloquean con ello al sistema de expresión, mientras que la p27 o pl63 libre no se une al producto de expresión del componente b ) . Este sistema de expresión conforme al invento está bloqueado por consiguiente en células que se están dividiendo (hay presencia de complejos de pl63 y p27) y es capaz de funcionar en células en reposo (hay p27 libre) . En ei caso de la elección de un anticuerpo para un componente b2) se han de emplear preferiblemente las partes del anticuerpo FVLFVH (3ue se unen a epítopos, en el caso de un origen murino en forma humanizada. La humanización se efectúa del modo expuesto por Winter y colaboradores (Nature 349, 203 (1991 ) ) y por Hoogembooms y colaboradores (Rev. Tr.

Transfus . Hemobiol . 36, 19 (1993) ) . Los fragmentos de anticuerpos se producen correspondientemente al estado de la técnica, por ejemplo del modo descrito por Winter y colaboradores, en Na ture 349 , 293 (1991) , Hoogenbooms y colaboradores, en Rev. Tr. Transfus . Hemobiol . 36_, 19 (1993 ) , Girol . Mol . Immunol . 28., 1 - 379 (1991) o por Huston y colaboradores, Jnt. Rev. Immunol 10_, 195 (1993) . Una descripción detallada de la producción de anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y fragmentos de anticuerpos recombinantes se efectuó en la solicitud de patente alemana DE 9649645.4. Los fragmentos de anticuerpos recombinantes se producen directamente a partir de hibridomas existentes o se aislan con ayuda de la tecnología de "presentación visual de fagos" [phage display] a partir de bibliotecas de fragmentos de anticuerpos murinos o humanos ( Winter y colaboradores, Annu . Rev. Immunol . 12, 433 (1994) ) . Estos fragmentos de anticuerpos se emplean entonces en el plano genético directamente para el acoplamiento con los componentes b-j_) y b3). Para la producción de fragmentos de anticuerpos re-combinantes a partir de hibridomas, se obtiene la información genética que codifica los dominios de unión a antígenos ( JJ, V de los anticuerpos, por aislamiento del ARNm, la transcripción inversa del ARN en ADNc y la subsiguiente amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa y los oligonucleótidos completarlos con los extremos 5' o 3' de los fragmentos variables. Los fragmentos de ADN así obtenidos, que codifican los fragmentos V^ y L son luego clonados en vectores de expresión bacterianos y de esta manera se puede expresar p. ej . fragmentos Fv, fragmentos Fv monocatenarios (= scFv) o fragmentos Fab. Nuevos fragmentos de anticuerpos se pueden aislar mediante, la tecnología de "presentación visual de fagos" también directamente a partir de bibliotecas de anticuerpos (inmunobibliotecas, bibliotecas inexpertas) de origen murino o humano. En la "presentación visual de fagos" de fragmentos de anticuerpcs, los dominios de unión a antígenos son clonados como proteínas de fusión con el gen de la proteína de envoltura sjP de bacteriófagos filamentosos o bien en el genoma de fagcs e en vectores de fagómidos en forma de genes de fragmentos scFv o como genes de fragmentos Fab. Los fagos que se unen a antígenos son seleccionados en recipientes de material plástico cargados con antígenos (disposición en bandejas [panning] ) , en "glóbulos" paramagnéticos, conjugados con antígenos, o por unión a superficies de células. Las bibliotecas inmunológicas se producen mediante amplificación por PCR de los genes de los fragmentos variables de anticuerpos procedentes de linfocitos B de animales o pacientes inmunizados. Para ello se utilizan combinaciones de oligonucleótidos, que son específicos para inmunoglobulinas murinas o humanas o para las familias de genes de inmunoglobulinas humanas. Con utilización de donantes no inmunizados como fuente de los genes de inmunoglobulinas, se pueden producir bibliotecas "inexpertas" [naives] . Alternativamente se pueden emplear genes de vías de gérmenes para la producción de repertorios de anticuerpos semisintéticos, siendo complementada la región 3 determinante de complementariedad, de los fragmentos variables, mediante una PCR con ayuda de cebadores degenerados. Estas denominadas bibliotecas "de un único recipiente" [single pot] tienen frente a las bibliotecas inmunológicas la ventaja de que se pueden aislar fragmentos de anticuerpos contra un gran número de antígenos a partir de una única biblioteca.

La afinidad de los fragmentos de anticuerpos se puede aumentar aun más mediante la tecnología de "presentación visual de :a~cs", produciéndose nuevas bibliotecas de fragmentos de anticuerpos ya existentes mediante mutagénesis aleatoria, basada en codones o deliberada, mediante "barajadura de cadenas" [chain shuffling] de dominios individuales con fragmentos procedentes de repertorios "inexpertos" o ayudándose de cepas imitadoras bacterianas, y aislándose por selección renovada en condiciones estrictas fragmentos de anticuerpos que presentan propiedades mejoradas. Adicionalmente, se pueden humanizar fragmentos de anticuerpos murincs mociar-te intercambio gradual de uno de los dominios variables por un repertorio humano y subsiguiente selección con el antígeno original ("selección guiada" [guided selection] ) . Alternativamente, la humanización de anticuerpos murinos se efectúa por intercambio dirigido a una diana de las regiones hipervariables de anticuerpos humanos por las correspondientes regiones del anticuerpo murino original . 8.1.2. El dominio de activación [componente b-j_) ] y el dominio de unión a ADN [componente b3)] En el sentido del invento se pueden utilizar todos los genes disponibles de dominios de activación y dominios de unión a ADN de un factor de transcripción para el componente b) . Ejemplos de ellos, cuya descripción no debe limitar sin embargo al invento, son: - Dominios de activación [componente b-^)] al menos una secuencia del ADNc para el dominio de transactivación (TAD, de TransAktivierungsDománe) ácido de HSV1-VP16 (los aminoácidos 406 hasta 488; Triezenberg y colaboradores, Genes Developm. 2 : 718 (1988) ; Triezenberg, Curr. Opin . Developm. 5 : 190 (1995) , o los aminoácidos 413 hasta 490; Regier y colaboradores, Proc. Nati . Acad .

Sci. USA 90, 883 (1993)) o del dominio de activación de Oct-2 (aminoácidos 438 hasta 479; Tanaka y colaboradores Mol. Cell. Biol. 14: 6.046 (1994) o aminoácidos 3 hasta 154; Das y colabo-radores, Nature 374: 657 (1995)) o del dominio de activación de SP1 (aminoácidos 340 hasta 485; Courey y Tijan, Cell. 55, 887 (1988)) o del dominio de activación de NFY (aminoácidos 1 hasta 233; Li y colaboradores, J. Bíol . Chem. 267 , 8.984 (1992) ; van Hujisduijnen y colaboradores , EMBO, J. 9_, 3.119 (1990); Si?ha y colaboradores, J. Biol. Chem. 92, 1.624 (1995); Coustry y colaboradores, J. Biol.

Chem. 270, 468 (1995)) o del dominio de activación de ITF2 (aminoácidos 2 hasta 452; Seipel y colaboradores, EMBO J. 13 4.961 (1992)) o del dominio de activación de c-Myc (aminoácidos 1 hasta 262; Eilers y colaboradores) o del dominio de activación de CTF (aminoácidos 399 hasta 499; Mermod y colaboradores, Cell 58_, 741 (1989); Das y Kerr, Nature 3 A, 657 (1995)) dominios de unión a ADN [componente b3)] os una secuencia de del ADNc para el dominio de unión a ADN de la proteína Gal4 (aminoácidos 1 hasta 147; Chasman y Kornberg, Mol. Cell. Biol. 10: 2.916 (1990)) o de la proteína LexA (aminoácidos 1 hasta 81; Kim y colaboradores , Science 255 : 203 (1992) , o toda la proteína LexA (aminoácidos 1 hasta 202; Brent y colaboradores, Cell 43, 729 (1985)) o de la proteína del represor lac (lac I) (Brown y colaboradores, Cell 49: 603 (1987); Fuerst y colaboradores, PNAS USA 86: 2.549 (1989)) o de la proteína del represor de tetraciclina (tet-R) ( Gossen y colaboradores, PNAS USA 89; 5. 547 (1992) ; Din ermann y colaboradores, EMBO J. 11 : 1. 487 (1992) ) o de la proteína ZFHD1 ( Pomerantz y colaboradores, Science 267 : 93 (1995) ) . Es ventajoso en el sentido del invento adjuntar al extremo 3 ' del dominio de unión a ADN una señal de localización nuclear (NLS) . 8.2. La secuencia de activación activable por el componente b) unidad promotora II [componente c) ] . La elección de esta secuencia de activación se ajusta a la elección tLel dominio de unión a ADN [componente b3)] en el gen para un factor de transcripción [componente b) ] . Para los ejemplos que se exponen en 8.1.2. para dominios de unión a ADN existen a su vez por ejemplo las siguientes posibilidades: 8.2.1. Posibilidad A) - una secuencia de activación con ai menos una secuencia de unión [secuencia de nucleótidos: 5' -CGGACAACTGTTGACCG-3 ' , SEQ ID NO.: 1] para la proteína Gal4 ( Chasman y Kornberg, Mol . Cell . Biol . 10, 2. 916 (1990) ) y (unido a su extremo 3 ' ) el promotor basal de SV40 (ácidos nucleicos 48 hasta 5.191; Tooze (compilador) , DNA Tumor Viruses (Cold Spring Harbor New York, Nueva York, Cold Spring Harbor Labora tory) o el promotor de c-fos (Das y colaboradores , Nature 374 , 657 (1995) ) o el promotor de ARN U2 sn o el promotor de HSV TK ( Papavassiliou y colaboradores, J". Biol . Chem . 265. 9402 (1990) ; Park y colaboradores, Molec . Endocrinol . 7, 319 (1993 ) ) 8.2.2. Posibilidad B) - una secuencia de activación con al menos una secuencia de unión [secuencia de nucíeótidos 5 ' -TACTGTATGTACATACAGTA-3 ' , SEQ ID NO . : 2] para la proteína LexA [operador de LexA; Brent y colaboradores , Na ture 512 , 312 (1984) ] y (unido a su extremo 1 ' ) el promoter basal de SV40 (ácidos nucleicos 48 hasta 5191 ; Tooze (compilador) , DNA Tumor Viruses (Cold Spring Harbor New York, Nueva York, Cold Spring Harbor Labora tory) u otro promotor (véase la Posibil idad A) . 8.2.3. Posibilidad C) - una secuencia de activación • con al menos una secuencia de unión al operador lac (secuencia de nucleótidos 5 ' -GAATTGTGAGCGCTCACAATTC—3 ' SEQ ID NO. : 3) para la proteína del represor lac I ( Fuers t y colaboradores, PNAS USA 86, 2 . 549 (1989) ; Simons y colaboradores, PNAS USA 81 , 1 . 624 (1984) ) y (unido a su extremo 3 ' ) el promotor basal de SV40 (ácidos nucleicos 48 hasta 5.191); Tooze (compilador) , DNA Tumor Viruses (Cold Spring Harbor New York, Nueva York, N. Y. , Cold Spring Harbor Laboratory) u otro promotor (véase la Posibili- dad A) . 8.2.4. Posibilidad D) - una secuencia de activación con al menos una secuencia de unión al operador tetraciclina (tet O) (secuencia de nucleótidos; 5 '-TCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAAGTGAAAG-3 ' , SEQ ID NO. : 4) para la proteína del represor de tetraciclina (tet R) y (unido a su extremo 3 ' ) el promotor basal de SV40 (ácidos nucleicos 48 hasta 5.191; Tooze (compilador) DNA Tumor Viruses (Cold Spring Harbor New York, N. Y. , Cold Spring Harbor Labora tory) u otro promotor véase la Posibilidad A) 8.2.5. Posibilidad E) - una secuencia de activación con al menos una secuencia de unión [secuencia de nucleótidos 5 ' -TAATGATGGGCG-3 ' , SEQ ID NO.: 5] para la proteína ZFHD-1 ( Pomerantz y colaboradores, Science 267, 93 (1995) ) y (unido a su extremo 3') - el promotor basal de SV40 (ácidos nucleicos 48 hasta 5.191; Tooze (compilador) DNA Tumor Viruses (Cold Spring Harbor New York, N. Y. , Cold Spring Harbor Laboratory) u otro promotor (véase la Posibilidad A) . 8.3. La secuencia de activación I [componente a)] . En el sentido del invento han de utilizarse como secuencias de activación las secuencias de nucleótidos que, después de la unión de factores de transcripción, activan la transcripción de un gen situado contiguamente al extremo 3 ' . La elección de la secuencia de activación se ajusta a la enfermedad que se haya de tratar y a la célula diana que se haya de transducir. Así, la secuencia de activación [componente a)] puede ser activable ilimitadamente, de modo específico para células diana, en determinadas condiciones metabólicas, de modo específico para un ciclo celular o de modo específico para un virus. Una descripción detallada de esta secuencias de promotores se efectuó ya en las solicitudes de patente europeas EP95930524.4 , EP95931933.6 , EP-9?931204.2, EP95931205.9 , EP97101507.8 , EP97102547.3 , y alemanas DE196.39103.2 y DE196.51443.6. A las secuencias de promotores que se pueden seleccionar pertenecen por ejemplo: 8.3.1. promotores y secuencias de activadores, activables ilimitadamente tales como por ejemplo - el promotor de la polimerasa III de ARN - el promotor de la polimerasa II de ARN - el promotor y el intensificador de CMV - el promotor de SV40. 8.3.2. Secuencias de promotores y activadores víricos tales como por ejemplo - HBV - HCV - HSV - HPV - EBV - HTLV - HIV En el caso de utilizarse el promotor HIV ha de emplearse toda la secuencia de LTR, inclusive la secuencia de TAR [posiciones desde -453 hasta -80, Rosen y colaboradores, Cell 41 813 (1985) ] como promotor específico para virus. 8.3.3. Secuencias de promotores e intensificadores activables metabólicamente tales como por ejemplo intensificadores inducibles por hipoxia. 8.3.4. Promotores activables de modo específico para ciclos celulares Éstos son por ejemplo el promotor del gen de cdc25C, del gen de ciclina A, del gen de cdc2, del gen de B-myb, del gen de DHFR, del gen de E2F-1, del gen de cdc25b, o también secuencias de unión para factores de transcripción que aparecen o son activados durante la proliferación celular.

A estas secuencias de unión pertenecen por ejemplo las secuencias de unión para proteínas c-myc. Entre estas secuencias de unión han de contarse monómeros o multímeros de la secuencia de nucleótidos designada como "caja Myc E" [Myc E-Box] [5 ' -GGAAGCAGACCACGTGGTCTGCTTCC-3 ' , SEQ ID NO.: 6 ; Blackwood y Eisenmann, Science 251 : 1 .211 (1991) ] . 8.3.5. Promotores activables por tetraciclina, tales como por ejemplo el operador de tetraciclina en combinación con un correspondiente represor 8.3.6. Promotores quiméricos Un promotor quimérico constituye la combinación de una secuencia de activador situado corriente arriba, activable de modo específico para células, metabólicamente o de modo específico para virus, con un módulo de promotor situado corriente abajo, que contiene la secuencia de nucleótidos CDE-CHR o E2FBS-CHR, a la que se unen proteínas supresoras, que pueden inhibir con ello la activación de la secuencia de activador situada corriente arriba en las fases GQ y G-j_ del ciclo celular (documento PCT/GB9417366.3 ; Lucibello y colaboradores, EMBO J. 14 , 12 (1994) ) . 8.3.7. Promotores activables de modo específico para células Entre éstos se cuentan preferiblemente promotores o secuencias de activadores a base de promotores o intensificadores de tales genes, que codifican proteínas formadas preferiblemente en el seno de células seleccionadas.

Por ejemplo, en el sentido del invento se han de utilizar preferiblemente en las siguientes células promotores para las siguientes proteínas: 8.3.7.1. Secuencias de promotores y activadores, activados en células endoteliales transportador de glucosa- 1 endotelial, específico para el cerebro, endogli a - receptor de VEGF-1 (flt-1) receptor de VEGF-2 (flk-1, KDR) tie-1 o t?e-2 receptor de ?61 receptor de Eck) B61 - endotelma, en especial endotelina B o endotelinad receptores de endotelina, especialmente el receptor de endotelina B receptores de manosa-6-fosfato factor de von Willebrand - IL-lQ, IL-ß, receptor de IL-1 molécula de adhesión a células vasculares (VCAM-1) secuencias sintéticas de activadores Como alternativa a los promotores naturales, específi-eos para células endoteliales, se pueden utilizar también secuencias sintéticas de activadores, que constan de sitios de unión oligomerizados para factores de transcripción, que son activos de modo preferente o selectivo en células endoteliales. Un ejemplo de ello es el factor de transcrip-ción GATA-2, cuyo sitio de unión en el gen de endotelina-1 es 5'-TTATCT-3' es [Lee y colaboradores, Biol . Chem. 266, 16. 188 (1991) , Dor ann y colaboradores, J. Biol . Chem . 267 , 1 . 279 (1992) y Wilson y colaboradores, Mol . Cell Biol . 10., 4 . 854 (1990) ] . 8.3.7.2. Secuencias de promotores y activadores, activados en células en vecindad con células endoteliales activadas - VEGF Las secuencias reguladoras de genes para el gen de VEGF son la región flanqueadora en 5 ' , la región flanqueadora en 3 ' , el gen de c-Src o el gen de v-Src Receptores de hormonas esteroides y sus elementos promotores ( Truss y Beato, Endocr . Rev. 14, 459 (1993 ) ) , especialmente el promotor del virus de tumor de mama de ratón. 8.3.7.3. Secuencias de promotores y activadores, activados en células de músculos, especialmente en células de músculos lisos - tropomiosina - a-actina, - a-miosina, - receptor para PDGF - receptor para FGF - MRF-4 - fosfofructoquinasa A - fosfogliceratomutasa - troponina C - miogenina - receptores para endotelina A - desmina - VEGF Las secuencias reguladoras de genes para el gen de VEGF ya han sido expuestas en el párrafo "Secuencias de promotores activados en células en vecindad con células endoteliales activadas" (véase anteriormente) - promotores "artificiales" Factores de la familia Helix-Loop-Helix (HLH = "hélice -bucle-hélice") (MyoD, Myf-5, miógenos, MRF4) han sido - - - . descritos como factores de transcripción específicos para músculos. Además, pertenece a los factores de transcripción específicos para músculos la "proteína de dedo de zinc" GATA-4. Las proteínas HLH así como GATA-4 manifiestan una transcripción específica para músculos no solamente con promotores de genes específicos para músculos, sino también en el contexto heterólogo, así, también con promotores artificiales. Tales promotores artificiales son por ejemplo copias múltiples del sitio de unión (a ADN) para proteínas HLH específicas para músculos, tales como la caja E (MyoD) (p. ej . 4x AGCAGGTGTTGGGAGGC, SEQ ID NO.: 7) o copias múltiples del sitio de unión a ADN para GATA-4 del gen de cadena pesada de a-miosina ( s-Myosin-Heavy -Chain (p. ej . : 5 ' -GGCCGATGGGCAGATAGAGGGGGCCGATGGGCAGATAGAGG-3 ' , SEQ ID NO. : 8) 8.3.7.4. Secuencias de promotores y activadores, activados en células de glía Entre éstas se cuentan en especial las secuencias reguladoras de genes o los elementos procedentes de genes que codifican por ejemplo las siguientes proteínas: - la proteína específica de células de Schwann, periaxina, - glutamina-sintetasa, - la proteína específica para células de glía ( Glial fibrillary acid protein = GFAP) - la proteína de células de glía SlOOb - IL-6 (CNTF) - receptores de 5HT - TNF a, - IL-10 - receptores I y II del factor de crecimiento similar a insulina - VEGF. Las secuencias reguladoras de genes para el gen de VEGF ya han sido expuestas con anterioridad. 8.3.7.5. Secuencias de promotores y activadores, activados en células formadoras de sangre A tales secuencias reguladoras de genes pertenecen las secuencias de promotores para genes de una citoquina o de su receptor, que se expresan en células formadoras de sangre o en células vecinas, tales como por ejemplo las del estroma.

A éstas pertenecen secuencias de promotores para, por ejemplo, las siguientes citoquinas y sus receptores: - receptor del factor de células tronco ( Stem Cell Factor) - factor de células tronco - IL-la - receptor de IL-1 - IL-3 - receptor de IL-3 (subumdad a) - receptor de IL-3 (subunidad ß) - IL-6 - receptor de IL-6 - GM-CSF - receptor de GM-CSF (cadena a) - factor regulador de interferón 1 (IRF-1 de Interferon Regulatory Factor 1) . El promotor de IRF-1 es activado por IL-6 de igual manera que por IFN? ó IFNß - eptropoyetina - receptor de eritropoyetina. 7.3.7.6. Secuencias de promotores y activadores, activados en linfocitos y/o macrófagos A éstas pertenecen por ejemplo las secuencias de promotores y activadores de los genes para citoquinas, receptores de citoquinas y moléculas de adhesión así como receptores para el fragmento Fe de anticuerpos . A éstos pertenecen por ejemplo: - receptor de IL-1 - IL-la - IL-lß - IL-2 - receptor de IL-2 - IL-3 - receptor de 11-3 (subunidad :••) - receptor de II- 3 (subunidad 3) - IL-4 - receptor de IL-4 - IL-5 - IL-6 - receptor de IL-6 - factor regulador de mterferón 1 (IRF-1) . (El promotor de IRF-1 es activado por IL-6 de igual manera que por IFN, e IFNI - promotor sensible a IFNy - IL-7 ~ J.1_!— 8 - IL-10 - IL-11 - IFN? - GM-CSF - receptor de GM-CSF (cadena a) - IL-13 - LIF - - receptor del factor estimulador de colonias de macrófagos (M-CSF) - receptores de depuradores de macrófagos tipos I y II - MAC-1 (antígeno de funciones de leucocitos) - LFA-la (antígeno de funciones de leucocitos) - pl50,95 (antígeno de funciones de leucocitos) 8.3.7.7. Secuencias de promotores y activadores, activados en células sinoviales A éstas pertenecen las secuencias de promotores para metaloproteinasas de matriz (MMP), por ejemplo para: - MMP-1 (colagenasa intersticial) - MMP-3 (estromelisina/transina) . A éstas pertenecen además las secuencias de promotores - -para inhibidores tisulares de metaloproteinasas (TIMP = Tissue Inhibi tors of Metalloproteinases) , por ejemplo - TIMP-l - TIMP-2 - TIMP-3 8.3.7.8. Secuencias de promotores y activadores, activados en células de leucemia A éstas pertenecen por ejemplo los promotores para - c-myc - HSP-70 - bcl-1/ciclina D-l - bcl-2 - IL-6 - IL-10 - TNFa, TNFß - HOX-11 - BCR-Abl -- E2A-PBX-1 - PML-RARA (receptor de ácido retinoico-leucemia promielocítica de Promyelocytic Leukemia - Retinóle Acid Receptor) - c-myc - las proteínas de c-myc se unen, y activan, a multímeros de la secuencia de nucleótidos designada como caja de Myc-E (5 ' -GGAAGCAGACCACGTGGTCTGCTTCC-3 ' , SEQ ID NO . : 6) . 8.3.7.9. Secuencias de promotores o activadores, activados en células tumorales Como secuencia de un promotor o activador está prevista una secuencia de nucleótidos reguladora de un gen, con la que interactúan factores de transcripción, formados o activos en células tumorales. En el sentido de este invento se cuentan entre las secuencias preferidas de promotores o activadores las secuencias reguladoras de genes o elementos de genes, que codifican especialmente proteínas formadas en células de cáncer o células de sarcoma. Así, por ejemplo en el caso de carcinomas bronquiales de células pequeñas se utiliza preferiblemente el promotor de la proteína N-CAM, en el caso de carcinomas ováricos el promotor del receptor del "factor de crecimiento de hepatitis" [Hepatitis growth factor] o de la plastina L y en el caso de carcinomas de páncreas el promotor de la plastina L o de la mucina epitelial polimorfa (PEM = Polymorphen Epi thelialen Mucin) . 8.4. El gen efector [componente d) ] En el sentido del invento, los genes efectores [componente d) ] codifican una sustancia activa para la profilaxia y/o la terapia de una enfermedad. Los genes efectores y las secuencias de promotores se han de seleccionar con respecto al tipo de la terapia de la enfermedad y tomando en cuenta la célula diana que se ha de transducir. Por ejemplo, en el caso de las siguientes enfermedades han de escogerse las siguientes combinaciones de secuencias de promotores y genes efectores (una descripción detallada ya se efectuó en los documentos de solicitudes de patente EP95930524.4, EP95931933.6 , EP95931204.2 , EP95931205.9 , EP97101507.8, DE196.17851.7 , DE196.39103.2 y DE196.51443.6, a los que se hace referencia) . 8.4.1. Terapia de tumores 1.1. Células diana - células endoteliales en proliferación o - células de estroma y células de músculos contiguas a las células endoteliales o - células de tumores o células de leucemias . • _ . ' ". - 43 - 1.2. Promotores: - específicos para células endoteliales y específicos para ciclos celulares o inespecíficos para células o específicos para 5 células de músculos y específicos para ciclos celulares o - específicos para células de tumores (tumores sólidos, leucemias) y específicos de ciclos celulares. 1.3. Genes efectores para inhibidores de la proliferación celular, por ejemplo para - la proteína de retinoblastoma (pRb = pllO) o las proteínas pl07 y pl30 emparentadas La proteína de retinoblastoma (pRb = pllO) y las 15 proteínas pl07 y pl30 emparentadas" son desactivadas por fosforilación. Preferiblemente han de utilizarse los genes de estos agentes inhibidores del ciclo celular, que presenten mutaciones para los sitios de desactivación de las proteínas expresadas, sin que por ello sean perjudicados en cuanto a su función. Ejemplos de estas mutaciones fueron descritos para la pllO. De manera análoga, es mutada la secuencia de ADN para la proteína pl07 o la proteína pl30. 25 - la proteína p53 La proteína p53 es desactivada en la célula o bien por unión a proteínas especiales tales como por ejemplo la MDM2, o por oligomerización de la p53 a través de la serina terminal de C desfosforilada. Preferiblemente, se utiliza una secuencia de ADN para una proteína p53 que está acortada en el terminal de C por la serina 392 - la p21 (WAF-1) - la proteína pl6 35 - otros agentes inhibidores de cdk - la proteína de GADD45 - la proteína bak - una proteína de unión para una proteína reguladora (véase II . i . ) 1.4. Genes efectores para factores que inducen coagulación e inhibidores de la angiogénesis, por ejemplo - el inhibidor de activador de plasminógeno-1 (PAI-1) - PAI -2 - PAI-3 - angiestatma - interferenes (IFNa, IFNß o IFN?) - factor de plaquetas 4 (de Platelet Factor 4) - TIMP-2 - TIv.F-3 - factor inhibidor de leucemia (LIF de Leukemia Inhibi tory Factor) - factor tisular (TF = tissue factor) y sus fragmentos activos para coagulación .5. Genes efectores para proteínas citostáticas y citotóxicas, por ejemplo para - perforina - granzima - IL-2 - IL-4 - IL-12 - interferones, tales como por ejemplo IFN-a, IFNß o IFN? - TNF, tales como TNFa o TNFß - oncostatina M, - esfingomielinasa - magainina y derivados de magainina Genes efectores para anticuerpos citostáticos o citotóxicos y para proteínas de fusión entre fragmentos de anticuerpos que se unen a antígenos con proteínas o enzimas citostáticas, citotóxicas o provocadoras de inflamaciones - A los anticuerpos citostáticos o citotóxicos pertenecen los que están dirigidos contra estructuras de membranas de células endoteliales, tal como se describieron por ejemplo por Burrows y colaboradores ( Pharmac . Ther. 64., 155 (1994) ) , por Hughes y colaboradores ( Cáncer Res . 49, 6214 (1989) ) y por Maruyama y colaboradores (PNAS USA ß7_, 5744 (1990) ) .

Especialmente se cuentan entre ellos los anticuerpos contra los receptores de VEGF. - Además, pertenecen a ellos los anticuerpos citostá ticos o citotóxicos dirigidos contra estructuras de membranas en células tumorales . Tales anticuerpos fueron presentados recopilativamente por ejemplo por Sedlacek y colaboradores, en Contrib. to Oncol . 32 , Karger Verlag, München (1988) y Contrib. to Oncol . 43 , Karger Verlag, München (1992) . Otros ejemplos los constituyen los anticuerpos contra sialil-Lewis; contra péptidos en tumores, que son reconocidos por células T; contra proteínas expresadas por oncogenes, contra gangliósidos tales como GD3 , GD2, GM2, 9-0-acetil-GD3, fucosil GM1; contra antígenos de grupos sanguíneos y sus precursores; contra antígenos en la mucina epitelial polimorfa; contra antígenos en proteínas de choque térmico (fíeat Shock Proteins) - además pertenecen a ellos los anticuerpos dirigidos contra estructuras de membranas de células de leucemias . Ya se han descrito un gran número de tales anticuerpos monoclonales para procedimientos de diagnóstico y terapéuticos (recopilaciones se hallan en Kristensen, Danish Medical Bulletin 41, 52 (1994) ) ; .Schranz, Therapia Hungarica 38., 3 (1990) ; Drexler y colaboradores, Leuk. Res . 10, 279 (1986) ; Naeim, Dis . Markers . 7, 1 (1989) ; Stickney y colaboradores , Curr. , Opin. Oncol . 4, 847, 1992) ; Drexler y colaboradores, Blut 57, 327 (1988) ; Freedman y colaboradores , Cáncer Invest . 9, 69, 1991 ) ) . Dependiendo del tipo de la leucemia son apropiados como ligandos por ejemplo anticuerpos monoclonales o sus fragmentos de anticuerpos que se unen a antígenos, dirigidos contra los siguientes antígenos de membranas: Células Antígenos de membranas AML CD1 3 CDl 5 CD33 CAMAL S¡aIos¡l-Le B-CLL CD5 CD1 c CD23 Idiotipos e isotipos de las inmunoglobulinas de membranas T-CLL CD33 M38 Receptores de iL-2 Receptores de células T ALL CALLA CD19 Linfoma no de Hodgkin - La humanización de anticuerpos murinos, la preparación y la optimización de genes para fragmentos Fab y Fv rec. se efectúan de modo correspondiente a la técnica conocida por los expertos en la materia (linte y colaboradores, Nature 349 , 293 (1991) ; Hoogenbooms y colaboradores , Rev. Tr.

Transfus . Hemobiol . 3£, 19 1993 ; Girol . Mol . Inmuno 1. 28 1379 (1991) o Huston y colaboradores, Intern . Rev.

Immunol . 10., 195 (1993 ) ) . La fusión de los fragmentos Fv recombinantes con genes para proteínas o enzimas citostáticas, citotóxicas o provocadoras de inflamaciones se efectúa de igual manera de modo correspondiente al estado de la técnica conocido por los expertos en la materia. 1.7. Genes efectores para proteínas de fusión de ligandos que se unen a células diana con proteínas citostáticas y citotóxicas. A los ligandos pertenecen todas las sustancias que se unen a estructuras de membranas o a receptores de membranas en células endoteliales. Por ejemplo pertenecen a ellos - Citoquinas tales como por ejemplo IL-1 o factores de crecimiento, o bien sus fragmentos o secuencias parciales de éstos,, que se unen a receptores que son expresados por células endoteliales tales como por ejemplo PDGF, bFGF, VEGF, TGF. - Además pertenecen a ellos moléculas de adhesión, que se unen a células endoteliales activadas y/o en proliferación. A ellos pertenecen por ejemplo SLex, LFA-1, MAC-1, LECAM-1, VLA-4 o vitronectina. - Pertenecen a ellos además sustancias que se unen a estructuras de membrana o receptores en membranas de células de tumores o leucemias . Por ejemplo pertenecen a ellos hormonas o factores de crecimiento o bien sus fragmentos o secuencias parciales de ellos, que se unen a receptores expresados por células de leucemias o células de tumores. Tales factores de crecimiento ya fueron descritos (recopilaciones en Cross y colaboradores, Cell 64., 271 (1991) , Auli tzky y colaboradores, Drugs 48 , 667 (1994) , Moore, Clin. Cáncer Res . 1 , 3 (1995) , Van Kooten y colaboradores, Leuk. Lymph. 12., 27 (1993) ) . - La fusión de los genes de estos ligandos que se unen a la célula diana con proteínas o enzimas citostáticas, citotóxicas o provocadoras de inflamaciones se efectúa correspondientemente al estado de la técnica con los métodos conocidos por los expertos en la materia. 1.8. Genes efectores para inductores de inflamaciones, por ejemplo para - IL-1 - IL-2 - RANTES (MCP-2) - factor quimiotáctico y activador de monocitos (MCAF = monocyte chemotactic and activating factor) - IL-8 - proteína inflamadora de macrófagos-1 (MIP-loí, -ß = macrophage inflamatory protein- 1) - proteína activadora de neutrófilos-2 (NAP-2 = neutrophil activating protein-2) - IL-3 - IL-5 - factor inhibidor de leucemia humana (LIF = leukemia inhibi tory factor) - IL-7, - IL-11 - IL-13 - GM-CSF - G-CSF - M-CSF - factor de veneno de cobra (CVF = Cobra venom factor) o secuencias parciales deL CVF que corresponden funcionalmente al factor del complemento C3b humano, es decir que se pueden unir al factor del complemento B y que después de disociación por el factor D constituyen una convertasa de C3 - el factor del complemento C3 humano o su secuencia parcial C3b - productos de disociación del factor del complemento C3 humano, que se asemejan funcional y estructuralmente al CVF - proteínas bacterianas que activan al complemento o provocan inflamaciones, tales como por ejemplo porinas de Salmonella typhi murium, factores de conglomeración [ " dumping" ] de Staphylococcus aureus, modulinas especialmente de bacterias gram-negativas, proteína de membrana exterior principal [ "Major outer membrane protein" ] de Legionellas o de Haemophilus influenzae tipo B o de Klebsiellas o moléculas M de Estreptococos del grupo G.

Genes efectores para enzimas para la activación de compuestos precursores de agentes citostáticos, por ejemplo para enzimas, que transforman o desdoblan sustancias precursoras inactivas (profármacos) en agentes citostáticos activos (fármacos) Tales sustancias, y los profármacos y fármacos en cada caso pertinentes ya se han sido descrito de modo recopilativo por Deonarain y colaboradores (Br. J. Cáncer 70, 786 (1994) ) , por Mullen (Pharmac. Ther. 63 , 199 (1994) ) y por Harris y colaboradores (Gene Ther. 1, 170 (1994) ) . Por ejemplo, ha de utilizarse la secuencia de ADN de una de las siguientes enzimas: - timidina-quinasa del virus del herpes simple - timidina-quinasa del virus de varicela Zoster - nitro-reductasa bacteriana - ß-glucuronidasa bacteriana - ß-glucuronidasa vegetal de Sécale cereale - ß-glucuronidasa humana - carboxi -peptidasa (CB) humana, por ejemplo CB-A de la célula de cebado o mastocito, CB-B de la carboxipeptidasa de páncreas o bacteriana - ß-lactamasa bacteriana - citosma-desaminasa bacteriana - catalasa o peroxidasa humana - fosfatasa, en particular fosfatasa alcalina humana, fosfatasa de próstata acida humana o fosfatasa acida del tipo 5 - oxídasa, en particular lisil-oxidasa humana o D-amino-oxidasa acida humana - peroxidasa, en particular peroxidasa de glutatión humana, peroxidasa de eosinófilos humana o peroxidasa de glándula tiroides humana - galactosidasa 8.4.2. Terapia de enfermedades e inflamaciones autoinmunitarias 2.1. Células diana: - células endoteliales en proliferación o - macrófagos y/o linfocitos o - células sinoviales 2.2. Promotores: - específicos para células endoteliales y específicos para ciclos celulares, o específicos para macrófagos y/o linfocitos y/o específicos para ciclos celulares o - específicos para células sinoviales y/o específicos para ciclos celulares 2.3. Genes efectores para la terapia de alergias, por ejemplo para - IFNß - IFN? - IL-10 - anticuerpos o fragmentos de anticuerpos contra IL-4 - receptores de IL-4 solubles - IL-12 - TGFß 2.4. Genes efectores para la inhibición del rechazo de órganos transplantados, por ejemplo para - IL-10 - TGFß - receptores de IL-1 solubles - receptores de IL-2 solubles - antagonistas de receptores de IL-1 - receptores de IL-6 solubles - anticuerpos inmunosupresores o sus fragmentos que contienen H y VL o sus fragmentos H y VL unidos a través de un engarzador. Los anticuerpos inmunosupresores son por ejemplo anticuerpos específicos para el receptor de células T o su complejo con CD3 , contra CD4 o CD8, y además contra el receptor de IL-2, el receptor de IL-1 o el receptor de IL-4 o contra las moléculas de adhesión CD2, LFA-1, CD28 ó CD40. 2.5. Genes efectores para la terapia de enfermedades autoinmunitarias mediadas por anticuerpos, por ejemplo para - TGFß - IFNa - IFNß - IFN? - IL-12 - receptores de IL-4 solubles - receptores de IL-6 solubles - anticuerpos inmunosupresores o sus fragmentos que contienen VH y Vt_, Genes efectores para la terapia de enfermedades autoinmunitarias mediadas por células, por ejemplo - IL-6 - IL-9 - IL-10 - IL-13 - TNFa o TNFß - un anticuerpo inmunosupresor o sus fragmentos que contienen VH y VL Genes efectores para agentes inhibidores de la proliferación celular, proteínas y enzimas citostáticas o citotóxicas para la activación de compuestos precursores de agentes citostáticos Ejemplos de genes que codifican tales proteínas ya han sido señalados en el párrafo "Genes efectores para la terapia de tumores". De igual forma a como ya se ha descrito allí, se pueden utilizar en el sentido del invento genes efectores, que codifiquen proteínas de fusión de anticuerpos o fragmentos Fab o fragmentos Fv rec. de estos anticuerpos u otros ligandos específicos para la célula diana y codifiquen las citoquinas, los factores de crecimiento, los receptores y las proteínas y enzimas citostáticas y citotóxicas antes mencionadas.

Genes efectores para la terapia de las artritis En el sentido del invento se escogen genes efectores, cuya proteína expresada inhibe de manera directa o indirecta una inflamación, por ejemplo en una articulación y/o favorece la reconstitución de la matriz extracelular (cartílago, tejido conjuntivo) en la articulación. A éstos pertenecen por ejemplo - el antagonista del receptor de IL-1 (IL-l-RA) ; el IL-1RA inhibe la unión de IL-la, ß - el receptor de IL-1 soluble; el receptor de IL-1 soluble se une y desactiva a IL-1 - IL-6; la IL-6 aumenta la secreción de TIMP y superóxidos y disminuye la secreción de IL-1 y TNFa por células sinoviales y condrocitos - el receptor de TNF soluble; el receptor de TNF soluble se une y desactiva al TNF - IL-4; la IL-4 inhibe la formación y secreción de IL-1, TNFa y MMP - IL-10; la IL-10 inhibe la formación y secreción de IL-1, TNFa y MMP, y aumenta la secreción de TIMP - factor de crecimiento similar a insulina (IGF-1 = Insulin-like Growth Factor) ; el IGF-1 estimula la síntesis de matriz extracelular - TGFß, en especial TGFßl y TGFß2 ; el TGFß estimula la síntesis de matriz extracelular - Superóxido-dismutasa - TIMP, en especial TIMP-1, TIMP-2 ó TIMP-3.

Terapia de la formación defectuosa de células de la sangre Células diana: - células no maduras en proliferación, del sistema de formación de sangre o - células de estroma vecinas con las células formadoras de sangre Promotores: - específicos para células formadoras de sangre y/o específicos para ciclos celulares - ínespecífieos para células y específicos para ciclos celulares . 3.3. Genes efectores para la terapia de las anemias, por ejemplo para .na 3.4. Genes efectores para la terapia de las leucopenias, por ejemplo para - G-CSF - GM-CSF - M-CSF 3.5. Genes efectores para la terapia de las trombocitopenias, por ejemplo para - IL-3 - factor inhibidor de leucemia (LIF) - IL-11 - trombopoyetina 8.4.4. Terapia de lesiones del sistema nervioso 4.1. Células diana: - células de glía o - células endoteliales en proliferación 4.2. Promotores - específicos para células de glía y específicos para ciclos celulares o - específicos para células endoteliales y específicos para ciclos celulares o - inespecíficos para células y específicos para ciclos celulares 4.3 Genes efectores para factores de crecimiento neuronales , por ej emplo - FGF - factor de crecimiento de nervios (NGF = Nerve growth factor) Factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF = Brain- derived neurotrophic factor) - neurotrofina-3 (NT-3) - neurotrofina-4 (NT-4) - factor neurotrófico ciliar (CNTF = Ciliary neurotrophic factor) Genes efectores para enzimas, por ejemplo para - tirosina-hidroxilasa - dopa-descarboxilasa Genes efectores para citoquinas y sus inhibidores, que inhiben o neutralizan el efecto neurotóxico del TNFOÍ, por ejemplo - TGFß - receptores de TNF solubles los receptores de TNF neutralizan a los TNFa - IL-10 la IL-10 inhibe la formación de IFN?, TNFa, IL-2 e IL-4 - receptores de IL-1 solubles - receptor I de IL-1 - receptor II de IL-1 los receptores de IL-1 solubles neutralizan la actividad de la IL-1 - antagonista de receptores de IL-1 - receptores de IL-6 solubles Terapia de trastornos de los sistemas de coagulación y de circulación de la sangre élulas diana: - células endoteiiaies o - células endoteliales en proliferación - células somáticas en la vecindad de células endoteliales y células de músculos lisos o - macrófagos .2. Promotores : - inespecíficos para células y específicos para ciclos celulares - específicos para células endoteliales, células de músculos lisos o macrófagos y específicos para ciclos celulares .3. Genes estructurales para la inhibición de la coagulación o para la activación de la fibrinólisis, por ejemplo para - el activador de plasminógeno tisular (tPA = Tissue Plasminogen Activator) - - el activador de plasminógeno del tipo de uroquinasa (uPA Urokinase- type Plasminogen Activator) - híbridos de tPA y uPA - proteína C - hirudina - inhibidores de serina-proteinasas (serpinas) , tales como por ejemplo el inhibidor C-1S, antitripsina al o antitrombina III - el inhibidor de la ruta del factor tisular (TFPI = Tissue Factor Pathway Inhibi tor) .4. Genes efectores para el fomento de la coagulación, por ejemplo para - F VIII - F IX - factor de von Willebrand - F XIII - PAI-1 - PAI-2 - factor tisular y fragmentos de éste Genes efectores para factores de angiogénesis, por ejemplo para - VEGF - FGF Genes efectores para la disminución de la presión sanguínea, por ejemplo para - calicreína - óxido nítrico - sintasa [= ni tric oxide synthase] de células endoteliales Genes efectores para la inhibición de la proliferación de células de músculos lisos después de lesiones de la capa endotelial, por ejemplo para una proteína antiproliferativa, citostática o citotóxica o - una enzima para el desdoblamiento de precursores de agentes citostáticos para formar agentes citostáticos tal como ya se ha señalado anteriormente (en el apartado de "tumores") o - una proteína de fusión de una de estas sustancias activas con un ligando, por ejemplo un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que es específico para células de músculos.

Genes efectores para otras proteínas de plasma sanguíneo, por ejemplo para - albúmina - inactivador Cl - colinesterasa de suero - transferrina - 1-antitripsina Vacunaciones Células diana: - células de músculos o - macrófagos y/o linfocitos - células endoteliales Promotores: - inespecíficos y específicos para ciclos celulares o - específicos para células diana y/o específicos para ciclos celulares Genes efectores para la profilaxia de enfermedades infecciosas Las posibilidades de producir vacunas eficaces por vía convencional son limitadas. Como consecuencia de ello se desarrolló la tecnología de las vacunas de ADN. Estas vacunas de ADN plantean sin embargo cuestiones acerca de la intensidad del efecto ( Fynan y colaboradores, Int . J. Immunopharm. 17, 79 (1995) ; Donnelly y colaboradores, Immunol . 2, (1994 ) ) . De acuerdo con este invento, hay que contar con una mayor actividad de las vacunas de ADN. Como sustancia activa ha de escogerse el ADN de una proteína formada por el agente patógeno de infección, que, por provocación de una reacción inmunológica, es decir por formación de anticuerpos y/o mediante linfocitos T citotóxicos, conduce a la neutralización y/o a la aniquilación del agente patógeno. Tales antígenos denominados de neutralización se aplican ya como antígenos para vacunas (véase recopilación en el artículo de Eliis, Adv. Exp. Med. Biol . 327 , 263 (1992) ) .

Se prefiere en el sentido "del invento el ADN que codifica antígenos de neutralización de los siguientes agentes patógenos : - virus de influenza A - HIV [= virus de inmunodeficiencia humana] - virus de la rabia - HSV (virus del herpes simple = Herpes Simplex Virus) - RSV (virus sincitial respiratorio-= Respiratory Syncytial Virus) - virus de parainfluenza - rotavirus - VZV (virus de varicela zoster = Varicella Zoster Virus) - CMV (citomegalovirus CytoMegalo -Virus) - virus del sarampión - HPV (virus de papiloma humano = Human Papilloma Virus) - HBV (virus de la hepatitis B) - HCV (virus de la hepatitis C) - HDV (virus de la hepatitis D) - HEV (virus de la hepatitis E) - HAV (virus de la hepatitis A) - antígeno de Vibrio Cholera - Borrelia Burgdorferi - Heli cobacter pylori - antígeno de malaria - A tales sustancias activas en el sentido del invento pertenece sin embargo también el ADN de un anticuerpo antiidiotípico o de sus fragmentos que se unen a antígenos, cuyas estructuras de unión a antígenos (las "regiones determinantes de complementariedad" complementar i ty determining regions) constituyen copias de la estructura de proteínas o hidratos de carbono del antígeno de neutralización del agente patógeno de infecciones - tales anticuerpos antiidiotípicos pueden reemplazar especialmente a los antígenos de hidratos de carbono en agentes patógenos de infecciones bacterianas . Tales anticuerpos antiidiotípicos y sus productos de disociación fueron descritos recopilativamente por Hawkins y colaboradores (J. Immunother. 14., 273 (1993) ) y por Westerink y Apicella (Springer Seminars in Immunopathol . 15, 227 (1993) ) . 6.4. Genes efectores para "vacunas de tumores" - A éstos pertenecen antígenos situados en células tumorales. Tales antígenos fueron representados recopilativamente por ejemplo por Sedlacek y colaboradores, en Contrib. to Oncol . 32., Karger Verlag, München (1988) y Contrib . to Oncol 43_, Karger Verlag, München, 1992) . Otros ejemplos los constituyen los genes para los siguientes antígenos proteínicos o para la región variable (VL, VH) de anticuerpos antiidiotípicos correspondientemente a los siguientes antígenos no proteínicos : - gangliosidos - sialil-Lewis - péptidos en tumores que son reconocidos por células T - proteínas expresadas por oncogenes - antígenos de grupos sanguíneos y sus precursores - antígenos en mucina asociada a tumores - antígenos en proteínas de choque térmico .4.7. La terapia de enfermedades infecciosas crónicas .1. Célula diana: - célula de hígado - linfocito y/o macrófago - célula epitelial - célula endotelial 7.2. Promotores - específicos para virus o específicos para células y específicos para ciclos celulares 7.3. Genes efectores, por ejemplo para - una proteína, que presenta efectos citostáticos, apoptóticos o citotóxicos. - una enzima, que desdobla a un compuesto precursor de una sustancia antivírica o citotóxica para formar la sustancia activa. 7.4. Genes efectores para proteínas antivíricas citoquinas y factores de crecimiento activas/os antivíricamente. Entre éstas/os se cuentan por ejemplo IFNa, IFNß, IFN?, TNFß, TNFa, IL-1 ó TGFß - anticuerpos con una especificidad que desactiva al respectivo virus o a sus fragmentos que contienen VJJ y VL o a sus fragmentos VH y V^ unidos a través de un engarzador, preparados tal como ya se ha descrito. Anticuerpos contra antígenos de virus son por ejemplo anti HBV anti HCV anti-HSV anti-HPV anti-HIV anti-EBV anti HTLV anti-virus de Coxsackie anti-virus de Hantaan - una proteína que se une a Rev. Estas proteínas se unen al ARN de Rev e inhiben a etapas posteriores a la transcripción, dependientes de Rev, de la expresión de genes de retrovirus. Ejemplos de proteínas que se unen a Rev son : RBP9-27 RBP1-8U RBP1-8D pseudogenes de RBP1-8 - ribozimas que digieren los ARNm de genes para proteínas para el control del ciclo celular o los ARNm de virus. Ribozimas catalíticas para HIV fueron descritas recopilativamente, por ejemplo, por Christoffersen y colaboradores , J. Med. Chem. 38. 2033 (1995) 7.5. Genes efectores para proteínas antibacterianas A las proteínas antibacterianas pertenecen por ejemplo anticuerpos, que neutralizan toxinas bacterianas u opsonizan bacterias. Pertenecen por ejemplo a ellas los anticuerpos contra Meningococos C o B E. coli Borrelia Pseudomonas Helicobacter pylori y Staphylococcus aureus 8.5. Combinación de genes efectores iguales o diferentes Es objeto del invento además un sistema de expresión autorreforzable, eventualmente controlable por vía farmacológica, en el cual se presenta una combinación de las secuencias de ADN de dos genes efectores iguales o de dos genes efectores diferentes [componentes d) y d1)]. Para la expresión de ambas secuencias de ADN, otra secuencia de promotor, o preferiblemente el ADNc de un "sitio de entrada para ribosomas internos" (ínternal ribosome entry si te = IRES) como elemento regulador entre ambos genes efectores. Un IRES hace posible la expresión de dos secuencias de ADN unidas entre sí a través de un IRES.

Tales IRES fueron descritos por ejemplo por Montford y Smith ( TIG 11 , 179 (1995) ) ; Kaufman y colaboradores. Nucí .

Acids . Res . 19, 4. 485 (1991) ; Morgan y colaboradores, Nucí .

Acids Res . 20.. 1.293 (1992) ; Dirks y colaboradores, Gene 128 , 247 (1993) ; Pelletier y Sonenberg, Nature 334 , 320 (1988) ; y Sugitomo y colaboradores, BioTechn . 12, 694 (1994) ) . Así, por ejemplo, se puede utilizar el ADNc de la secuencia del IRES del Poliovirus (posiciones < 140 hasta > 630 del 5 ' UTR) . De modo preferido en el sentido del invento se han de unir, a través de otras secuencias de promotores o una secuencia IRES, genes efectores que presentan un efecto aditivo. En el sentido del invento, combinaciones preferidas de genes efectores son, por ejemplo, para 8.5.1. la terapia de tumores - proteínas iguales o diferentes , citostáticas, apoptóticas, citotóxicas o excitadoras de inflamaciones o - enzimas iguales o diferentes para el desdoblamiento del compuesto precursor de un agente citostático 8.5.2. la terapia de enfermedades autoinmunitarias - citoquinas o receptores diferentes con efecto sinérgico para la inhibición de la reacción inmunológica celular y/o humoral o - TIMP ' s diferentes o iguales 8.5.3. la terapia de la formación defectuosa de células de la sangre - diferentes citoquinas que se suceden jerárquicamente, tales como por ejemplo IL-1, IL-3, IL-6 o GM-CSF y eritropoyetina, GCSF o trombopoyetina 8.5.4. la terapia de lesiones de células nerviosas - un factor de crecimiento neuronal y una citoquina o el inhibidor de una c tcquma, 8.5.5. la terapia de trastornos del sistema de coagulación de la sangre y de la circulación sanguínea - un agente antitrombótico y un agente fibrinolítico (p. ej . tPA o uPA) o - una proteína citostática, apoptótica o citotóxica, y un agente antitrombótico o un agente fibrinolítico - varios diferentes factores de coagulación de la sangre, que actúan sinérg camente , por ejemplo FVIII y vWF o F VIII y F IX 8.5.6. Vacunaciones - un antígeno y una citoquina inmunoestimulante, tal como por ejemplo un receptor de IL-la, IL-lß, IL-2, GM-CSF, IL-3 o IL-4 - diferentes antígenos de un agente patógeno de infecciones o de diferentes agentes patógenos de infecciones o diferentes antígenos de un tipo de tumor o de diferentes tipos de tumores . ~~ 8.5.7. Terapia de enfermedades infecciosas víricas - una proteína antivírica y una proteína citostática, apoptótica o citotóxica - anticuerpos contra diferentes antígenos de superficie de un virus o de varios virus . 8.5.8. Terapia de enfermedades infecciosas bacterianas - anticuerpos contra diferentes antígenos de superficie y/o toxinas de un germen 8.6. Introducción de secuencias de señales y dominios transmembranales 8.6.1. Refuerzo de la traducción Para el refuerzo de la traducción se puede introducir, en el extremo 3 ' de la secuencia de promotor e inmediatamente junto al extremo 5' de la señal de iniciación (ATG) de la secuencia de señal o transmembranal, la secuencia de nucleótidos GCCACC ó GCCGCC (Kozak, J. Cell Biol . 108 , 299 (1989) ) . 8.6.2. Facilitación de la secreción Para facilitar la secreción del producto de expresión del gen efector, se puede reemplazar la secuencia de señal homologa contenida en la secuencia de ADN del gen efector por una secuencia de señal heteróloga, que mejora la secreción extracelular . Así, por ejemplo, se puede introducir la secuencia de señal para la inmunoglobulina (posición en el ADN < 63 hasta >107; Riechmann y colaboradores, Nature, 332 , 323 (1988) ) o la secuencia de señal para la CEA (posición en el ADN = 33 hasta >134; Schrewe y colaboradores, Mol . Cell . Biol . 10 , 2. 738 (1990) ; Berling y colaboradores, Cáncer Res . 50, 6.534 (1990) ) o la secuencia de señal de la glicoproteína del virus sincitial respiratorio humano (ADNc de los aminoácidos < 38 hasta = 50 o 48 hasta 65; Lichtenstein y colaboradores, J.

Gen . Virol . 77, 109 (1996) ) . 8.6.3. Anclaje de la sustancia activa 3.1) Para el anclaje de la sustancia activa en la membrana celular de la célula transducida, que forma la sustancia activa, se puede introducir alternativa o adicicnalmente a la secuencia de señal una secuencia para un dominio transmembranal . Así, por ejemplo, se puede introducir la secuencia transmembranal del factor estimulante de colonias de macrófagos humano (posición en el ADN = 1.485 hasta = 1.554; Cosman y colaboradores, Behring Inst . Mitt . 83., 15 (1988) o la secuencia de ADN para la región de señal y transmembranal de la glicoproteína G del virus sincitial respiratorio (RSV = Respiratory Syncytial Virus) humano (aminoácidos 1 hasta 63. o sus secuencias parciales, aminoácidos 38 hasta 63; Vij aya y colaboradores, Mol . Cell . Biol . 8, 1. 709 (1988) ; Lichtenstein y colaboradores, J. Gen . Virol . 77, 109 (1996) o la secuencia de ADX para la región de señal y transmembranal de la neuramimdasa del virus de la influenza (aminoácidos 7 a 35 o la secuencia parcial de los aminoácidos 7 a 27; Brown y colaboradores, J. Virol . 62 3824 (1988) ) entre la secuencia de promotor y la secuencia del gen efector. 3.2) Para el anclaje de la sustancia activa en la membrana celular de las células transducidas que forman la sustancia activa se puede introducir sin embargo también la secuencia de nucleótidos para un ancla de glicofosfoiípido. La introducción de un ancla de glicofosfolípido se efectúa en el extremo 3 ' de la secuencia de nucleótidos para el gen efector y puede efectuarse adicionalmente a la introducción de una secuencia de señal . Anclas de glicofosfolípidos se han descrito, por ejemplo, para el CEA, para el N-CAM y para otras proteínas de membranas, tales como por ejemplo Thy-1 (véase recopilación en Ferguson y colaboradores, Ann. Rev. Biochem. 57_, 285 (1988) ) . 3.3) Otra posibilidad del anclaje de sustancias activas a la membrana celular correspondientemente al presente invento es la utilización de una secuencia de ADN para una proteína de fusión de un ligando y una sustancia activa. La especificidad del ligando de esta proteína de fusión está dirigida hacia una estructura membranal situada en la membrana celular de la célula diana escogida. A los ligandos, que se unen a la superficie de células, pertenecen por ejemplo anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, dirigidos contra estructuras situadas sobre la superficie por ejemplo - de células endoteliales. Se cuentan especialmente entre ellos anticuerpos contra los receptores de VEGF o contra receptores de quinina - o de células de músculos, tales como anticuerpos contra actina o anticuerpo o anticuerpos contra receptores de angiotensina II o anticuerpos contra receptores para factores de crecimiento, tal como por ejemplo contra receptores de EGF o contra receptores de PDGF o contra receptores de FGF o anticuerpos contra receptores de endotelina A - A los ligandos pertenecen también anticuerpos o sus fragmentos, que están dirigidos contra antígenos específicos de tumores o asociados con tumores situados en la membrana celular de tumores. Tales anticuerpos ya fueron descritos. Los anticuerpos monoclonales murinos han de emplearse preferiblemente en forma humanizada. Los fragmentos Fab y Fv rec. y sus productos de fusión son producidos, tal como ya se ha descrito, con la tecnología conocida por un experto en la materia. A los ligandos pertenecen además todas las sustancias activas, por ejemplo citoquinas o moléculas de adhesión, factores de crecimiento o sus fragmentos o secuencias parciales 'de ellos, mediadores u hormonas peptídicas, que se unen a estructuras membranales o receptores de membranas situados en la respectiva célula escogida. Por ejemplo pertenecen a ellos - ligandos para células endoteliales, tales como IL-1, PDGF, bFGF, VEGF, TGGß o quinina y derivados o compuestos análogos a quinina - además pertenecen a ellos moléculas de adhesión. Tales moléculas de adhesión como por ejemplo SLex, LFA-1, MAC-1, LeCAM-1, VLA-4 o vitronectina o derivados o compuestos análogos a vitronectina, ya se describieron para las células endoteliales (recopilaciones en Augustin-Voss y colaboradores, J". Cell. Biol. 119, 483 (1992); Pauli y colaboradores, Cáncer Metast. Rev. 9, 175 (1990); Honn y colaboradores, Cáncer Metast. Rev. 11, 353 (1992); Varner y colaboradores, Cell. Adh. Commun. 3, 367 (1995)) .

Leyenda de la figura Figura 1 : Estructura artificial de ácido nucleico conforme al invento Tabla 1 Dominio de Molécula Actividad de unión a ADN participe I galactosidasa (Gal) + p27 (1-198) - - + p27 (1-198) - + + p27 (1-198) p163 + + - p163 + + Myc 262-439 p163 + + Max p163 + Protimosima p163 + + LAZ3/Bcl6 p163 + + p27 (1-178) p163 + + + + + p27 (1-94) p163 + + + p27 (69-198) p163 + + + + + p27 (69-94) p163 + n.d. + p27 (1-198) p163(121-252) + + + + Tabla 2 Aplicación a la columna Unión a la columna de cromatografía por afinidad revestida con Proteína de fusión de Glutatión- glutatión-transf erasa- p1 63 transferasa p27 (marcada con :'S) recombinante + + + + Extracto celular (RAT 1 -Myc ER) ( + ) que contiene p27 Extracto celular (RAT 1 -Myc ER), + + + que contiene p27 (calentado a 95"C durante 2 min) cd -2 (extracto celular) cdk-4 (extracto celular) Tabla 3: [SEQ ID NO.: 9} TCGAATTGGG TACCGGGCCC CCCCTCGAGG TCGACCGTAT CGATAAGCTT GATATCGAAT 60 TCGCGGCCGC TCGAGTTACA AGATGGCGGC CCCGGGCGCT CTCTTCACCG TTCTGTAGCA 120 GCTTCGGGCT GAGCGGATGT CTCTTCTTGT CCTCAGTGTC GGACTCAGAG ACACACGGCT 180 CCCGAGTTCT GCTGATCACG AAGTTCCCGG AGGCGCTCGA CGCACCGGAA TCTCCCAGCG 240 GCCGCGACCG CCGCCTCGGC CCTGCTCGCC GCGGCGCCGG GACTCCAGCG TGATCGGCGG 300 CGGCAGTCAA GGTTCACAAA AATGGCGAAG AGAGTTGCGG AGAAGGAGTT GACTGACAGG 360 AACTGGGATG AGGAAGACGA AGTTGAAGAG ATGGGAACAT TCTCAGTGGC CAGTGAGGAA 420 GTCATGAAGA ACAGAGCCGT AAAGAAGGCA AAGCGCAGAA ACGTTGGATT TGAATCTGAT 480 AGCGGAGGAG CCTTTAAAGG TTTCAAAGGT TTGGTTGTGC CTTCTGGAGG AGGAGGGTTT 540 TCTGGATTTG GTGGCTCTGG AGGAAAGCCT CTGGAAGGAC TGACAAATGG AAACAGCACA 600 GACAATGCCA CGCCCTTCTC CAATGTAAAG ACAGCAGCAG AGCCCAAGGC AGCCTTTGGT 660 TCTTTTGCTG TGAATGGCCC TACTACCTTG GTGGATAAAG TTTCAAATCC AAAAACTAAT 720 GGGGACAGCA ATCAGCCGCC CTCCTCCGGC CCTGCTTCCA GTACCGCCTG CCCTGGGAAT 780 GCCTATCACA ASCAGCTGGC TGGCTTGAAC TGCTCCGTCC GCGATTGGAT AGTGAAGCAC 840 GTGAACACAA ACCCGCTTTG TGACCTGACT CCCATTTTTA AAGACTATGA GAGATACTTG 900 GCGACGATCG AGAAGCAGCT TGAGAATGGA GGCGGCAGCA GTTCTGAGAG CCAGACAGAC 960 AGGGCGACGG CTGGAATGGA GCCTCCTTCC CTTTTTGGTT CAACAAAACT ACAGCAAGAG 1020 TCACCATTTT CATTTCATGG CAACAAAGCG GAGGACACAT CTGAAAAGGT GGAGTTTACA 1080 GCAGAAAAGA AATCGGACGC AGCACAAGGA GCAACAAGTG CCTCGTTTAG TTTCGGCAAG 1140 AAAATTGAGA GCTCGGCTTT GGGCTCGTTA AGCTCTGGCT CCCTAACTGG GTTTTCATTC 1200 TCTGCTGGAA GCTCCAGCTT GTTTGGTAAA GATGCTGCCC AGAGTAAAGC AGCCTCTTCG 1260 CTGTTCTCTG CTAAAGCATC CGAGAGTCCG GCAGGAGGCG GCAGCAGCGA GTGCAGAGAT 1320 GGTGAAGAAG AGGAGAATGA CGAGCCACCC AAGGTAGTGG TGACCGAAGT AAAGGAAGAG 1380 GATGCTTTCT ACTCCAAAAA ATGTAAACTA TTTTACAAGA AAGACAACGA ATTTAAAGAG 1440 AAGGGTGTGG GGACCCTGCA TTTAAAACCC ACAGCAACTC AGAAGACCCA GCTCTTGGTG 1500 CGGGCAGACA CCAACCTAGG CAACATACTG CTGAATGTTC TGATCGCCCC CAACATGCCG 1560 TGCACCCGGA CAGGAAAGAA CAACGTCCTT ATCGTCTGTG TCCCCAACCC CCCACTCGAT 1620 GAGAAGCAGC CCACTCTCCC GGCCACCATG CTGATCCGGG TGAAGACGAG CGAGGATGCC 1680 GATGAATTGC ACAAGATTTT ACTGGAGAAA AAGGATGCCT GAGCACTGAG GCTGACCAAG 1740 GCATGTTGCC ACGTTGCTGC TTCCCCTCCG TCCCTAACTT AGTCACATTC TTTCCTCTTC 1800 TACTGTGACA TTCTGAGAAC TTCTAGGTAA CTTGAACTTT TGTGAGGAAG ATTAAGGCCA 1860 ATAAATCCTT TCAGTGGCGG CCGCGAATTC CTGCAGCCCG GGGGATCCAC TAGTTCTAGA 1920 GCGGCCGCCA CCGCGGTGGA GCTCCAGCTT TTGGGAGA 1958 Tabla 4: pl63: 1 MAKRVAEKELTDRNWDEEDEVEEM 24 [SEQ ID NO.: 10] MAKRVA+ ++ +D + +++ YNup2 ¡ 1 MAKRVADAQIQRETYDSNESDDDV 24 [SEQ ID NO.: 11] P163: 137 NQPPSSGPASSTACPGNAYHKQIAGLNCS N+ +G A P + +L LN YNup2: 71 NRADGTGEAQVDNSPTTESNSRLKALNLQ VRDWIVKHVNTNPLCDLTPIFKDYERYLATI 196 [SEQ ID NO.: 12] ++ + V PL DL P+F YE Y+ I FKAKVDDLVLGKPLADLRPLFTRYELYIKNI 130 [SEQ ID NO.: 13] P163: 215 ATAGMEPPSLFGSTKLQQESPFSFHGNKAEDT A + P ST + PF G++ YNup2: 535 ANSSTSPAPSIPSTGFKFSLPFEQKGSQTTTN SEKVEFTAEKKSDAAQGAT 265 [SEQ ID NO.: 14] K E T E + +Q AT DSKEESTTEATGNESQDAT 585 [SEQ ID NO.: 15] P163: 239 HGNKAEDTSEKVEFTAEKKSDAAQGATSASFSFG 272 [SEQ ID NO.: 16] +G++++D+ + +A + + AT +FSFG YNup2: 444 NGSESKDSDKPSLPSAVDGENDKKEATKPAFSFG 477 [SEQ ID NO.: 17] P163: 399 LGNIIÍNVLIAPNMPCTRTGKNNVI.IVCVPNPPLDEKQPT 438 [SEQ ID NO.: 18] +GN+LLN + + N ++ P D K T YNup2: 655 MGNVX-LNATVVDSFKYEPIAPGNDNLIKAPTVAADGK-.VT 694 [SEQ ID NO.: 19] Tabla 5 RBPl (Ratón) 5 DSHADHÜTST ENADESTTHP — QFEESVSVPE RBP1 (Humano) 5 DSHADHQTST ENADESNHDP — QFEEIVSVPE NÜP2p (Levadura) 560 SQTTTNI1SKE ESTT ATGNESQDATKSTOATPBBSKP P163 (Ratón) 307 QSKAASSLFSAKASESPAGGGSSECRDGEEEENDEPPKV RBPl (Ratón) QEi?tr,EEDEKCT.raMga-CTJFRFAfiKtmt.P*^^ RBPl (Humano) QElKTLEEDEEE KlíRAKLER-iOSENDLPEHKERßTsDVEtL HK- NUP2p (Levadura) INLQNGEEDEVALFSQKAKLMTENA — ETKSYDSRGVGEMKLLKKKD pl63 (Ratón) WTEVK — EEDAFYSKKCKLEYKKDNE KEKSVßTLH -ia>T- RBP1 (Ratón) EKGTIBIilfllRDKTIj -C!ANHYITPMMELKP-NAGSDRA V NTHTD RBPl (Humano) EKGTIRIiMRRDKTIj -CA«HYITPMMEia-P--mGSDRA V NTHTD NTJP2p (Levadura) DSPKVRl-LaE?DGMGN?-LLMATVVDSFKYEPIAPGNDNLIKAPTVAA P163 (Ratón) ATQKTQIÍjmADTNLGNIIJjnp.IAPNMPCrpiTGKNNV IVCVPNP — RBPl (Ratón) FADECP — KPELLAIRFT,NABNAQKTKTKFBECRKE [SEQ ID NO. : 20 ] RBPl (Humano) FADECP — KPELLAIRELNABNAQKFKTKFEECRKEI (SEQ ID NO. : 21] K0P2p (Levadura) DG I*XVTYIVEKQK EGRSFTKAIEDAKKEM (SEQ ID NO. : 22] pl63 (Ratón) PLDEKQPTLPATMLIRVKTSEDADELHKILLEKKDAA [SEQ ID NO. : 23 ] Tabla 6 pl63 (Ratón) (SEQ ID NO. : 24] Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 20 25 30 Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 35 40 45 Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 50 55 60 Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 100 105 110 Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser 115 120 125 Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro 130 135 140 Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala 145 150 155 160 Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp Trp He Val Lys His Val Asn Thr 165 170 175 Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro He Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr 180 185 190 Leu Ala Thr He Glu Lys Gln Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser 195 200 205 Glu Ser Gln Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu 210 215 220 Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gln Gln Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly 225 230 235 240 Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys 245 250 255 Lys Ser Asp Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly 260 265 270 Lys Lys He Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu 275 280 285 Thr Gly Phe Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp 290 295 300 Ala Ala Gln Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser 305 310 315 320 Glu Ser Pro Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Asn Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Tbr Glu Val Lys Glu 340 345 350 Glu Asp Ala Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp 355 360 365 Asn Glu Phe Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr 370 375 380 " Ala Thr Gln Lys Thr Gln Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly 385 390 395 400 Asn He Leu Leu Asn Val Leu He Ala Pro Asp Met Pro Cys Thr Arg 405 410 415 Thr Gly Lys Asn Asn Val Leu He Val Cys Val Pro Asn Pro Pro Leu 420 425 430 Asp Glu Lys Gln Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu lie Arg Val Lys 435 440 445 Thr Ser Glu Asp Ala Asp Glu Leu His Lys He Leu Leu Glu Lys Lys 450 455 460 Asp Ala 465 NÜP2 (Levadura) (SEQ ID NO. : 25] Met Ala Lys Arg Val Ala Asp Ala Gln He Gln Arg Glu Thr Tyr Asp 1 5 10 15 Ser Asn Glu Ser Asp Asp Asp Val Thr Pro Ser Thr Lys Val Ala Ser 20 25 30 Ser Ala Val Met Asn Arg Arg Lys He Ala Met Pro Lys Arg Arg Met 35 40 45 Ala Phe Lys Pro Phe Gly Ser Ala Lys Ser Asp Glu Thr Lys Gln Ala 50 55 60 Ser Ser Phe Ser Phe Leu Asn Arg Ala Asp Gly Thr Giy Glu Ala Gln 65 70 75 80 Val Asp Asn Ser Pro Thr Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu 85 90 95 Asn Leu Gln Phe Lys Ala Lys Val Asp Asp Leu Val Leu Gly Lys Pro 100 105 110 Leu Ala Asp Leu Arg Pro Leu Phe Thr Arg Tyr Glu Leu Tyr He Lys 115 120 125 Asn He Leu Glu Ala Pro Val Lys Phe He Glu Asn Pro Thr Gln Thr 130 135 140 Lys Gly Asn Asp Ala Lys Pro Ala Lys Val Glu Asp Val Gln Lys Ser 145 150 155 160 Ser Asp Ser Ser Ser Glu Asp Glu Val Lys Val Glu Gly Pro Lys Phe 165 170 175 Thr He Asp Ala Lys Pro Pro He Ser Asp Ser Val Phe Ser Phe Gly 180 185 190 Pro Lys Lys Glu Asn Arg Lys Lys Asp Glu Ser Asp Ser Glu Asn Asp 195 200 205 lie Glu He Lys Gly Pro Glu Phe Lys Phe Ser Gly Thr Val Ser Ser 210 215 220 Asp Val Phe Lys Leu Asn Pro Ser Thr Asp Lys Asn Glu Lys Lys Thr 225 230 235 240 Glu Thr Asn Ala Lys Pro Phe Ser Phe Ser Ser Ala Thr Ser Thr Thr 245 250 255 Glu Gln Thr Lys Ser Lys Asn Pro Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Lys 260 265 270 Thr Asn Val Asp Asn Asn Ser Lys Ala Glu Ala Ser Phe Thr Phe Gly 275 280 285 Thr Lys His Ala Ala Asp Ser Gln Asn Asp Lys Pro Ser Phe Val Phe 290 295 300 Gly Gln Ala Ala Ala Lys Pro Ser Leu Glu Lys Ser Ser Phe Thr Phe 305 310 315 320 Gly Ser Thr Thr He Glu Lys Lys Asn Asp Glu Asn Ser Thr Ser Asn 325 330 335 Ser Lys Pro Glu Lys Ser Ser Asp Ser Asn Asp Ser Asp Pro Ser Phe 340 345 350 Ser Phe Ser He Pro Ser Lys Asn Thr Pro Asp Ala Ser Lys Pro Ser 355 360 365 Phe Asn Phe Gly Val Pro Asn Ser Ser Lys Asn Glu Thr Ser Lys Pro 370 375 380 Val Phe Ser Phe Gly Ala Ala Thr Pro Ser Ala Lys Glu Ala Ser Gln 385 390 395 400 Glu Asp Asp Asn_Asn Asn Val Glu Lys Pro Ser Ser Lys Pro Ala Phe 405 410 415 Asn Phe He Ser Asn Ala Gly Thr Glu Lys Glu Lys Glu Ser Lys Lys 420 425 430 Asp Ser Lys Pro Ala Phe Ser Phe Gly He Ser Asn Gly Ser Glu Ser 435 440 445 Lys Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala Val Asp Gly Glu Asn 450 ~ 455 460 Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Phe Gly He Asn Thr Asn 465 470 475 480 Thr Thr Lys Thr Ala Asp Thr Lys Ala Pro Thr Phe Thr Phe Gly Ser 485 490 495 Ser Ala Leu Ala Asp Asn Lys Glu Asp Val Lys Lys Pro Phe Ser Phe 500 505 510 Gly Thr Ser Gln Pro Asn Asn Thr Pro Ser Phe Ser Phe Gly Lys Thr 515 520 525 Thr Ala Asn Leu Pro Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser He 530 535 540 Pro Ser Thr Gly Phe Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gln Lys Gly Ser 545 550 555 560 Gln Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr 565 570 575 Gly Asn Glu Ser Gln Asp Ala Thr Lys Val Asp Ala Thr Pro Glu Glu 580 585 590 Ser Lys Pro He Asn Leu Gln Asn Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala Leu 595 600 605 Phe Ser Lys Ala Lys Leu Met Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys Ser Tyr 610 615 620 Asp Ser Arg Gly Val Gly Glu Met Lys Leu Leu Lys Lys Lys Asp Asp 625 630 635 640 Pro Ser Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly Asn Val 645 650 655 Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro Leu Ala 660 665 670 Pro Gly Asn Asp Asn Leu He Lys Ala Pro Thr Val Ala Ala Asp Gly 675 680 685 Lys Thr Tyr He Val Lys Phe Lys Gln Lys Glu Glu Gly Arg Ser Phe 690 695 700 Thr Lys Ala He Glu Asp Ala Lys Lys Glu Lys 705 710 715 - 18 -_ Tabla 7 Detección de asociaciones entre p27 y p163 en células HeLa Precipitación de la proteína total de células HeLa transfectadas con Precipitación con C V-p27 CMV-p27 + CMV-Nap CMV-Nap2 Anticuerpos específicos para - + + Nap2 Anticuerpos específicos para + ++ -p27 Tabla 8: [SEQ ID NO.: 26] Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 20 25 30 Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 35 40 45 Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 50 55 60 Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 100 105 110 Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp 115 120 125 Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly Lys Lys He 130 135 140 Glu ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu Thr Gly Phe 145 150 155 160 Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp Ala Ala Gln 165 170 175 Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser Glu Ser Pro 180 185 190 Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu Asn 195 200 205 Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp Ala 210 215 220 Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu Phe 225 230 235 240 Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr Ala Thr Gln 245 250 255 Lys Thr Gln Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly Asn He Leu 260 265 270 Leu Asn Val Leu He Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly Lys 275 280 285 Asn Asn Val Leu He Val Cys Val Pro Asn Pro Pro Leu Asp Glu Lys 290 295 300 Gln Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu He Arg Val Lys Thr Ser Glu 305 310 315 320 Asp Ala Asp Glu Leu His Lys He Leu Leu Glu Lys Lys Asp Ala 325 330 335 Tabla 9: [SEQ ID NO.: 27] Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 20 25 30 Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 35 40 45 Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 50 55 60 Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 100 105 110 Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser 115 120 125 Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro 130 135 140 Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala 145 150 155 160 Gly Leu Asn Cys Ser. Val Arg Asp Trp He Val Lys His Val Asn He 165 170 175 Asn Pro Leu Cy3 Asp Leu Thr Pro He Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr 180 185 190 Leu Ala Thr He Glu Lys Gln Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser ser Ser 195 200 205 Glu Ser Gln Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu 210 215 220 Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gln Gln Glu Ser Pro Phe ser Phe His Gly 225 230 235 240 - - Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys 245 250 255 Lys Ser Asp Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly 260 265 270 Lys Lys He Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu 275 280 285 Thr Gly Phe Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp 290 295 300 Ala Ala Glu Lys Glu Leu 305 310 Tabla 10: [SEQ ID NO.: 28] Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser 1 5 10 15 Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly 20 25 30 Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala Gly Leu Aen Cys Ser Val Arg Asp 35 40 45 Trp He Val Lys His Val Asn Thr Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro 50 55 60 He Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr Leu Ala Thr He Glu Lys Gln Leu 65 70 75 80 Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser Glu Ser Gln Thr Asp Arg Ala Thr 85 90 95 Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gln Gln 100 105 110 Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu 115 120 125 Lys Val Glu Phe 130 Tabla 11 : Secuencias GUC en pl63 Posiciones de nucleótidos Secuencia El dominio interactuante comprende los aminoácidos 121-252 de la secuencia de ratón, a la que se refiere la numeración. Esto corresponde a los nucleótidos 685-1078 de la secuencia de ratón.

Tabla 12a: pares de cebadores seleccionados "Nota" Longitud GC% Sitio Nombre 5 "* 3 * 5.8 108 43.5 122. .143 Arriba: AGAAAGCAAAGCGCAGAAATGT [SEQ ID NO.: 29] 229. .209 Abajo: CAAATCCAGAAAAGCGTCCTC [SEQ ID NO.: 30] 6.7 119 42.0 104. .127 Arriba: TGAAGAATAGAGCCATAAAGAAAG [SEQ ID NO.: 31] 240. .220 Abajo: AGAAAAGCGTCCTCCTCCAGA [SEQ ID NO. : 32] 23.3 137 43.8 104. .127 Arriba: TGAAGAATAGAGCCATAAAGAAAG [SEQ ID NO.: 33] 204. .220 Abajo: AGCGCCACTAACCAAATCCAGA [SEQ ID NO.: 34] .7 100 44.0 122. .143 Arriba: AGAAAGCAAAGCGCAGAAATGT [SEQ ID NO.: 35] 221. . 200 Abajo: GAAAAGCGTCCTCCTCCAGAAG [SEQ ?D NO.: 36] 48.7 122 46.7 123. .144 Arriba: GAAAGCAAAGCGCAGAAATGTT [SEQ ID NO.: 37] 244. . 224 Abajo: CTCCAGCGCCACTACCAAATC [SEQ ID NO.: 38] Tabla 12b: Un par de cebadores seleccionados ''Nota'' Longitud GC% Sitio Nombre 5* 3* 51.3 193 52.8 34. .53 Arriba CCCGCACGGAGCAGTTCAAG [SEQ ID NO.: 39] 226. .205 Abajo: GCAGCGGCAGATCCCAAGGTAG [SEQ ID NO.: 40] Tabla 12c.

Un par de cebadores seleccionados Nota Long. GC% Sitio Nombre 5" 3* 2.4 136 45.6 4. .20 Arriba: GGCATCCTTTTTCTCCA [SEQ ID NO.: 41] 139. .120 Aba^o: CGTTCTTATCGTCTCTGTGTTC [SEQ ID NO.: 42] 2.5 120 45. .0 5. .23 Arriba: GCATCCTTTTTCTCCAGTA [SEQ ID NO. : 43] 139. .119 Abajo: TGTTCCAAATCCACCAAT [SEQ ID NO.: 44] 2.7 100 48. .0 40. .58 Arriba: GTCTGCATCCTCGCTGGTT [SEQ ID NO.: 45] 139. .119 Abajo: CGTTCTTATCGTCTGTGTTCC [SEQ ID NO.: 46] 50.0 105 44. .8 57. .75 Arriba: TTTTACCCGAATCAACAT [SEQ ID NO.: 47] 161. .141 Abajo: GTACGCGAACAGGGAAGAATA [SEQ ID NO.: 48] Tabla 13: Resumen de los experimentos de crecimiento Ciclina D1 Nup2 Tabla 14: Secuencias de las proteínas p27 mutadas en comparación con el 11 S D L H H C R D M E E A S Q R 1 G R Y E W Q E V E Mayoría 1 50 60 70 80 ! • 26 L T R D L E K H C R D M E E A S Q R K W N F D F Q H H ÍC P L 2 G R Y E W Q E V E Clon 106 Proteina 37 L T R D L E K H C R D M E E A S Q 0K W N P D F Q N H L ? G R Y E W Q E V E Clon 152 Proteina 37 L T R D L E K H C R D M E E A S Q R K W N F D F Q N H K P L ? G R Y E W Q E V E Clon 294 Proteína 36 L T R D L B K H C R D M E E A S O R K W K F D F O H H K P L Z G R Y E W Q E V S Clon 660 Proteína 38 IR 1. T R D E K H C R D MIÉ lE A S 0 R K W it r D r *' t* -- K F ? G R Y E K O E V | Clon 687 Proteína 26 L T R D L E K H M E E A S Q R K W H F D P Q H H K P -> ? G R Y E W Q E V E Clon 826 Proteina 26 L T R D L E K H C R D M E E A S Q R K W N F D F Q H H r P L ? G R Y E W Q E V E Clon 850 Prot?ína 41 L T R D L E K H C R D M E E A S Q R K W N F D F Q N H K P L E G R Y E H Q E V E Ratón p27 AS R G S L P E F Y Y R ,P P R P P K S A C K , V L A Q E S Q D V S ,S S R Q A V P L I G r Mayoría 90 100 11C 120 1 _ 1 1 1_ 66 R G S L P E F Y Y R P P £JP P K S ? C K Y ? Q E S Q D V S G S R Q ? V P Ií I G Clon 106 Proteina 77 R G S L P E F Y Y R P P R P P K ? A C K V L A Q E S Q D V S G S R Q A V P -. I G Clon 152 Proteína 77 R G S L P E F Y ?Hp P R P P ?C S A C K V I. A Q E S Q D V E-b S R Q A V P L I G Clon 294 Prot?ína 76 R G S L P E F Y Y P R P P K S A C K V L A Q B S Q D V S G S R O A V P t 1 S Clon 660 Proteína 78 |B R G S -. P E F|Y |rlR P P R t? P K S A C K V P A Q E S Q D V S G S R O A V P I- I | Clon 687 Protaína £6 R G S L P E F Y Y R P P R P P K S A C K V L A Q E S Q D V S G S R Q A V P L I G Clon 826 Proteína 66 R G S L P E F Y Y (JP P R P P K S A C K V L A Q E S Q D V S G S R Q A V P L I G Clon 850 Proteína 81 R G S L P E F Y Y R P P R P P K S A C K V L A Q E S Q D V S G S R Q A V P L I G Ratón p27 AS S Q A N S E D R H L V D Q M P D S S D K Q A G L A E Q C P O H R K R P A A E D S Mayoría 130 140 ISO 1S0 105 S Q A N S E D R H L V D Q M P D S S D H Q A G L A E Q C P G R K R P A A E D S Clon 106 Prot?ína 117 S Q A N S E D R H L V D Q M P D S S D N Q A G L A E Q C P G M R K R P A A E D S Clon 152 Proteína 117 S Q A N S E D R H L V D Q M P D S S D N Q A G L A E Q C P G H R K R P A A E D S Clon 294 Proteína 116 S rj A N S E D R H I. V D Q H. P D S S D H Q A G L A E Q C P G M R K R P A A E D S Clon 660 Proteína 118 [S D 0 A G L A S O C P 3 M R *C R f K E D [ Clon 687 Protßma D N Q A G L A E Q C P G M R K R P A A E D S Clon 826 Protaina •O ¡Q A G L A E Q C p (- - - - - - - - - - - 1 clon 850 Proteína 121 S Q A N S E D R H L V D Q M P D S S D N Q A G L A E Q C P G M R K R P A A E D S Ratón p27 AS - Mayoría Clon 106 Proteína Clon 152 Proteína Clon 294 Prot?ína Clon 660 Proteína - R Clon 687 Proteina R - Clon 826 Proteína G - Clon 850 Prot?ína Ratón p27 AS V D L Q P FRAN - FL - FM I P Mayoría Secuencia SEQ ID NO: Mayoría 49 Clon 106 50 Clon 152 51 Clon 294 52 Clon 660 53 Clon 687 54 Clon 826 55 Clon 850 56 p27 (Ratón) 57 PROTOCOLO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: (A) NOMBRE: Hoechst Marión Roussel Deutsc land GmbH (B) CALLE: - (C) CIUDAD: Frankfurt (D) ESTADO FEDERAL: - (E) PAÍS: Alemania (F) CÓDIGO POSTAL: 65926 (G) TELÉFONO: 069-305-305 (H) TELEFAX: 069-35-7175 (I) TELEX: - (ii) TÍTULO DE LA SOLICITUD: Partícipe en una unión para inhibidores de quinasas dependientes de ciclinas y su utilización para la búsqueda de inhibidores, para el diagnóstico o para la terapia de una enfermedad (iii) NÚMERO DE SECUENCIAS: 57 (iv) FORMA DE LECTURA POR ORDENADOR: (A) SOPORTE DE DATOS: disquete (B) ORDENADOR: IBM PC compatible (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SISTEMA LÓGICO: Patentln Reléase n° 1.0, versión n" 1.25 (EPA) (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 17 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal ( ii ) TIPO DE LA MOLÉCULA : ADN (genómico) ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE : exón (B) SITUACIÓN : 1 . . 17 (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 1 : CGGACAACTG TTGACCG 17 - - (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 20 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..20 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 2: TACTGTATGT ACATACAGTA 20 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE ?EQ ID NO : 3: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 3: GAATTGTGAG CGCTCACAAT TC 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 42 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ALN (genómico) ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..42 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 4: TCGAGTTTAC CACTCCCTAT CAGTGATAGA GAAAAGTGAA AG 42 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 5: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 12 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) ( ix) CARÁCTERISTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..12 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 5: TAATGATGGG CG 12 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 6: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 26 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE : exón (B) SITUACIÓN: 1..26 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6: GGAAGCAGAC CACGTGGTCT GCTTCC 26 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 17 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..17 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7: AGCAGGTGTT GGGAGGC 17 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 8: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 41 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..41 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8: GGCCGATGGG CAGATAGAGG GGGCCGATGG GCAGATAGAG G 41 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 9: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1958 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..1958 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 9: TCGAATTGGG TACCGGGCCC CCCCTCGAGG TCGACGGTAT CGATAAGCTT GATATCGAAT 60 TCGCGGCCGC TCGAGTTACA AGATGGCGGC CCCGGGCGCT CTCTTCACCG TTCTGTAGCA 120 GCTTCGGGCT GAGCGGATGT CTCTTCTTGT CCTCAGTGTC GGACTCAGAG ACACACGGCT 180 CCCGAGTTCT GCTGATCACG AAGTTCCCGG AGGCGCTCGA CGCACCGGAA TCTCCCAGCG 240 GCCGCGACCG CCGCCTCGGC CCTGCTCGCC GCGGCGCCGG GACTCCAGCG TGATCGGCGG 300 CGGCAGTCAA GGTTCACAAA AATGGCGAAG AGAGTTGCGG AGAAGGAGTT GACTGACAGG 360 AACTGGGATG AGGAAGACGA AGTTGAAGAG ATGGGAACAT TCTCAGTGGC CAGTGAGGAA 420 GTCATGAAGA ACAGAGCCGT AAAGAAGGCA AAGCGCAGAA ACGTTGGATT TGAATCTGAT 480 AGCGGAGGAG CCTTTAAAGG TTTCAAAGGT TTGGTTGTGC CTTCTGGAGG AGGAGGGTTT 540 TCTGGATTTG GTGGCTCTGG AGGAAAGCCT CTGGAAGGAC TGACAAATGG AAACAGCACA 600 GACAATGCCA CGCCCTTCTC CAATGTAAAG ACAGCAGCAG AGCCCAAGGC AGCCTTTGGT 660 TCTTTTGCTG TGAATGGCCC TACTACCTTG GTGGATAAAG TTTCAAATCC AAAAACTAAT 720 - - GGGGACAGCA ATCAGCCGCC CTCCTCCGGC CCTGCTTCCA GTACCGCCTG CCCTGGGAAT 780 GCCTATCACA AGCAGCTGGC TGGCTTGAAC TGCTCCGTCC GCGATTGGAT AGTGAAGCAC 840 GTGAACACAA ACCCGCTTTG TGACCTGACT CCCATTTTTA AAGACTATGA GAGATACTTG 900 GCGACGATCG AGAAGCAGCT TGAGAATGGA GGCGGCAGCA GTTCTGAGAG CCAGACAGAC 960 AGGGCGACGG CTGCAATGGA GCCTCCTTCC CTTTTTGGTT CAACAAAACT ACAGCAAGAG 1020 TCACCATTTT CATTTCATGG CAACAAAGCG GAGGACACAT CTGAAAAGGT GGAGTTTACA 1080 GCAGAAAAGA AATCGGACGC AGCACAAGGA GCAACAAGTG CCTCGTTTAG TTTCGGCAAG 1140 AAAATTGAGA GCTCGGCTTT GGGCTCGTTA AGCTCTGGCT CCCTAACTGG GTTTTCATTC 1200 TCTGCTGGAA GCTCCAGCTT GTTTGGTAAA GATGCTGCCC AGAGTAAAGC AGCCTCTTCG 1260 CTGTTCTCTG CTAAAGCATC CGAGAGTCCG GCAGGAGGCG GCAGCAGCGA GTGCAGAGAT 1320 GGTGAAGAAG AGGAGAATGA CGAGCCACCC AAGGTAGTGG TGACCGAAGT AAAGGAAGAG 1380 GATGCTTTCT ACTCCAAAAA ATGTAAACTA TTTTACAAGA AAGACAACGA ATTTAAAGAG 1440 AAGGGTGTGG GGACCCTGCA TTTAAAACCC ACAGCAACTC AGAAGACCCA GCTCTTGGTG 1500 CGGGCAGACA CCAACCTAGG CAACATACTG CTGAATGTTC TGATCGCCCC CAACATGCCG 1560 TGCACCCGGA CAGGAAAGAA CAACGTCCTT ATCGTCTGTG TCCCCAACCC CCCACTCGAT 1620 GAGAAGCAGC CCACTCTCCC GGCCACCATG CTGATCCGGG TGAAGACGAG CGAGGATGCC 1680 GATGAATTGC ACAAGATTTT ACTGGAGAAA AAGGATGCCT GAGCACTGAG GCTGACCAAG 1740 GCATGTTGCC ACGTTGCTGC TTCCCCTCCG TCCCTAACTT AGTCACATTC TTTCCTCTTC 1800 TACTGTGACA TTCTGAGAAC TTCTAGGTAA CTTGAACTTT TGTGAGGAAG ATTAAGGCCA 1860 ATAAATCCTT TCAGTGGCGG CCGCGAATTC CTGCAGCCCG GGGGATCCAC TAGTTCTAGA 1920 GCGGCCGCCA CCGCGGTGGA GCTCCAGCTT TTGGGAGA 1958 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 10: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..24 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 10: Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met 20 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 11: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..24 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 11: Met Ala Lys Arg Val Ala Asp Ala Gln lie Gln Arg Glu Thr Tyr Asp 1 5 10 15 Ser Asn Glu Ser Asp Asp Asp Val 20 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 12: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 60 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : proteína (B) SITUACIÓN: 1..60 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 12: Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly 1 5 10 15 Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp 20 25 30 Trp lie Val Lys His Val Asn Thr Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro 35 40 45 lie Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr Leu Ala Thr lie 50 55 60 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 13: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 60 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..60 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 13: Asn Arg Ala Asp Gly Thr Gly Glu Ala Gln Val Asp Asn Ser Pro Thr 1 5 10 15 Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu Asn Leu Gln Phe Lys Ala 20 25 30 Lys Val Asp Asp Leu Val Leu Gly Lys Pro Leu Ala Asp Leu Arg Pro 35 40 45 Leu Phe Thr Arg Tyr Glu Leu Tyr He Lys Asn He 50 55 60 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 51 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : proteína (B) SITUACIÓN: 1..51 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 14: Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu Phe Gly Ser Thr Lys Leu 1 5 10 15 Gln Gln Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr 20 25 30 Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp Ala Ala Gln 35 40 45 Gly Ala Thr 50 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 51 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..51 - - (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 15: Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser He Pro Ser Thr Gly Phe 1 5 10 15 Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gln Lys Gly Ser Gln Thr Thr Thr Asn 20 25 30 Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr Gly Asn Glu Ser Gln 35 40 45 Asp Ala Thr 50 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 34 aminoácidos (3) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..34 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 16: His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala 1 5 10 15 Glu Lys Lys Ser Asp Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser 20 25 30 Phe Gly (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 17: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 34 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple \u¡ ?vrviJ - u ?.. í iucai (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína - . • (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..34 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 17: Asn Gly Ser Glu Ser Lys Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala 1 5 10 15 Val Asp Gly Glu Asn Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Ser 20 25 30 Phe Gly (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 40 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..40 (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 18 : Leu Gly Asn He Leu Leu Asn Val Leu He Ala Pro Asn Met Pro Cys 1 5 10 15 Thr Arg Thr Gly Lys Asn Asn Val Leu He Val Cys Val Pro Asn Pro 20 25 30 Pro Leu Asp Glu Lys Gln Pro Thr 35 40 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 19: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 40 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..40 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 19: Met Gly Asn Val Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr 1 5 10 15 Glu Pro Leu Ala Pro Gly Asn Asp Asn Leu He Lys Ala Pro Thr Val 20 25 30 Ala Ala Asp Gly Lys Leu Val Thr 35 40 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 20: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 157 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: "(A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..157 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 20: Asp Ser His Ala Asp His Asp Thr Ser Thr Glu Asn Ala Asp Glu Ser 1 5 10 15 Thr Thr His Pro Gln Phe Glu Pro He Val Ser Val Pro Glu Gln Glu 20 25 30 - - He Lys Thr Leu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Leu Phe Lys Met Arg Ala 35 40 45 Lys Leu Phe Arg Phe Ala Ser Glu Asn Asp Leu Pro Glu Trp Lys Glu 50 55 60 Pro Arg Hiß Gly Asp Val Lys Leu Leu Lys His Lys Glu Lys Gly Thr 65 70 75 80 He Arg Leu Leu Met Arg Arg Asp Lys Thr Leu Lys He Cys Ala Asn 85 90 95 His Tyr He Thr Pro Met Met Glu Leu Lys Pro Asn Ala Gly Ser Asp 100 105 110 Arg Ala Trp Val Trp Asn Thr His Thr Asp Phe Ala Asp Glu Cys Pro 115 120 125 Lys Pro Glu Leu Leu Ala He Arg Phe Leu Asn Ala Glu Asn Ala Gln 130 135 140 Lys Phe Lys Thr Lys Phe Glu Glu Cys Arg Lys Glu He 145 150 155 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 21: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 157 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..157 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 21: Asp Ser His Ala Asp His Asp Thr Ser Thr Glu Asn Ala Asp Glu Ser 1 5 10 15 Asn His Aap Pro Gln Phe Glu Pro He Val Ser Val Pro Glu Gln Glu 20 25 30 He Lys Thr Leu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Leu Phe Lys Met Arg Ala 35 40 45 Lys Leu Phe Arg Phe Ala Ser Glu Asn Asp Leu Pro Glu Trp Lys Glu 50 55 60 Arg Gly Thr Gly Asp Val Lys Leu Leu Lys His Lys Glu Lys Gly Thr 65 70 75 80 He Arg Leu Leu Met Arg Arg Asp Lys Thr Leu Lys He Cys Ala Asn 85 90 95 His Tyr He Thr Pro Met Met Glu Leu Lys Pro Asn Ala Gly Ser Asp 100 105 110 Arg Ala Trp Val Trp Asn Thr His Thr Asp Phe Ala Asp Glu Cyß Pro 115 120 125 Lys Pro Glu Leu Leu Ala He Arg Phe Leu Asn Ala Glu Asn Ala ßln 130 135 140 Lys Phe Lys Thr Lys Phe Glu Glu Cys Arg Lys Glu He 145 150 155 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 22: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: ÍA) LONGITUD: 158 aminoácidos ;B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple !D) TOPOLOGÍA: lineal (li) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : proteína (B) SITUACIÓN: 1..158 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 22: Ser Gln Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala 1 5 10 15 Thr Gly Asn Glu Ser Gln Asp Ala Thr Lys Val Asp Ala Thr Pro Glu 20 25 30 Glu Ser Lys Pro He Asn Leu Gln Asn Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala 35 40 45 Leu Phe Ser Gln Lys Ala Lys Leu Met Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys 50 55 60 Ser Tyr Asp Ser Arg Gly Val Gly Glu Met Lys Leu Leu Lys Lys Lys 65 70 75 80 Asp Asp Ser Pro Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Mßt Gly 85 90 95 Asn Val Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro 100 105 110 Leu Ala Pro Gly Asn Asp Asn Leu He Lys Ala Pro Thr Val Ala Ala 115 120 125 -_- - - - (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 23: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 160 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..160 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 23: Gln Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser Glu Ser 1 5 10 15 Pro Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu 20 25 30 Asn Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp 35 40 45 Ala Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu 50 55 60 Phe Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr Ala Thr 65 70 75 80 Gln Lys Thr Gln Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly Asn He 85 90 95 Leu Leu Asn Val Leu He Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly 100 105 110 Lys Asn Asn Val Leu He Val Cys Val Pro Asn Pro Leu Asp Glu Lys 115 120 125 Gln Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu He Arg Val Lys Thr Ser Glu 130 135 140 Asp Ala Asp Glu Leu His Lys He Leu Leu Glu Lys Lys Asp Ala Ala 145 150 155 160 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 24: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 466 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína [ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..466 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 24: Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 20 25 30 Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 35 40 45 Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 50 55 60 Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 100 105 110 Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser 115 120 125 Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro 130 135 140 Ala ser ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala 145 150 155 160 Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp Trp He Val Lys His Val Asn Thr 165 170 175 Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro He Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr 180 185 190 Leu Ala Thr He Glu Lys Gln Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser 195 200 205 Glu Ser Gln Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu 210 215 220 Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gln Gln Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly 225 230 235 240 Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys 245 250 255 Lys Ser Asp Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly 260 265 270 Lys Lys He Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu 275 280 285 Thr Gly Phe Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp 290 295 300 Ala Ala Gln Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser 305 310 315 320 Glu Ser Pro Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu 325 330 335 Glu Glu Asn Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu 340 345 350 Glu Asp Ala Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp 355 360 365 Asn Glu Phe Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr 370 375 380 Ala Thr Gln Lys Thr Gln Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly 385 390 395 400 Asn He Leu Leu Asn Val Leu He Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg 405 410 415 Thr Gly Lys Asn Asn Val Leu He Val Cys Val Pro Asn Pro Pro Leu 420 425 430 Asp Glu Lys Gln Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu He Arg Val Lys 435 440 445 Thr Ser Glu Asp Ala Asp Glu Leu His Lys He Leu Leu Glu Lys Lys 450 455 460 Asp Ala 465 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 25: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 715 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO D? LA MOLÉCULA: proceína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: prsteína (B) SITUACIÓN: 1..715 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 25: Met Ala Lys Arg Val Ala Asp Ala Gln He Gln Arg Glu Thr Tyr Asp 1 5 10 15 Ser Asn Glu ser Asp Asp Asp Val Thr Pro Ser Thr Lys Val Ala Ser 20 25 30 Ser Ala Val Met Asn Arg Arg Lys He Ala Met Pro Lys Arg Arg Met 35 40 45 Ala Phe Lys Pro Phe Gly Ser Ala Lys Ser Asp Glu Thr Lys Gln Ala 50 55 60 Ser Ser Phe Ser Phe Leu Asn Arg Ala Asp Gly Thr Gly Glu Ala Gln 65 70 75 80 Val Asp Asn Ser Pro Thr Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu 85 90 95 Asn Leu Gln Phe Lys Ala Lys Val Asp Asp Leu Val Leu Gly Lys Pro 100 105 110 Leu Ala Asp Leu Arg Pro Leu Phe Thr Arg Tyr Glu Leu Tyr He Lys 115 120 125 Asn He Leu Glu Ala Pro Val Lys Phe He Glu Asn Pro Thr Gln Thr 130 135 140 Lys Gly Asn Asp Ala Lys Pro Ala Lys Val Glu Asp Val Gln Lys Ser 145 150 155 160 Ser Asp Ser Ser Ser Glu Asp Glu Val Lys Val Glu Gly Pro Lys Phe 165 170 175 Thr He Asp Ala Lys Pro Pro He Ser Asp Ser Val Phe Ser Phe Gly 180 185 190 Pro Lys Lys Glu Asn Arg Lys Lys Asp Glu Ser Asp Ser Glu Asa Asp 195 200 205 He Glu He Lys Gly Pro Glu Phe Lys Phe Ser Gly Thr Val Ser Ser 210 215 220 Asp Val Phe Lys Leu Asn Pro Ser Thr Asp Lys Asn Glu Lys Lys Thr 225 230 235 240 Glu Thr Asn Ala Lys Pro Phe Ser Phe Ser Ser Ala Thr Ser Thr Thr 245 250 255 Glu Gln Thr Lys Ser Lys Asn Pro Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Lys 260 265 270 Thr Asn Val Asp Asn Asn Ser Lys Ala Glu Ala Ser Phe Thr Phe Gly 275 280 285 Thr Lys His Ala Ala Asp Ser Gln Asn Asn Lys Pro Ser Phe Val Phe 290 295 300 Gly Gln Ala Ala Ala Lys Pro Ser Leu Glu Lys Ser Ser Phe Thr Phe 305 310 315 320 Gly Ser Thr Thr He Glu Lys Lys Asn Asp Glu Asn Ser Thr Ser Asn 325 330 335 Ser Lys Pro Glu Lys Ser Ser Asp Ser Asn Asp Ser Asn Pro S&x: Phe 340 345 350 Ser Phe Ser He Pro Ser Lys Asn Thr Pro Asp Ala Ser Lys Pro Ser 355 360 365 Phe Asn Phe Gly Val Pro Asn Ser Ser Lys Asn Glu Thr Ser Lys Pro 370 375 380 Val Phe Ser Phe Gly Ala Ala Thr Pro Ser Ala Lys Glu Ala Ser Gln 385 390 395 400 Glu Asp Asp Asn Asn Asn Val Glu Lys Pro Ser Ser Lys Pro Ala Phe 405 410 415 Asn Phe He Ser Asn Ala Gly Thr Glu Lys Glu Lys Glu Ser Lys Lyß 420 425 430 Asp Ser Lys Pro Ala Phe Ser Phe Gly He Ser Asn Gly Ser Glu Ser 435 440 445 Lys Aßp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala Val Asp Gly Glu Asn 450 455 460 Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Phe Gly He Asn Thr Asn 465 470 475 480 Thr Thr Lys Thr Ala Asp Thr Lys Ala Pro Thr Phe Thr Phe Gly Ser 485 490 495 Ser Ala Leu Ala Asp Asn Lys Glu Asp Val Lys Lys Pro Phe Ser Phe 500 505 510 Gly Thr Ser Gln Pro Asn Asn Thr Pro Ser Phe Ser Phe Gly Lys T r 515 520 525 Thr Ala Asn Leu Pro Ala Asn ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser He 530 535 540 Pro Ser Thr Gly Phe Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gln Lys Gly Ser 545 550 555 560 Gln Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr 565 570 575 Gly Asn Glu Ser Gln Asp Ala Thr Lys Val Asp Ala Thr Pro Glu Glu 580 585 590 Ser Lys Pro He Asn Leu Gln Asn Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala Leu 595 600 605 Phe Ser Lys Ala Lys Leu Met Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys Ser Tyr 610 615 620 Asp Ser Arg Gly Val Gly Glu Met Lys Leu Leu Lys Lys Lys Asp Asp 625 630 635 640 Pro Ser Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly Asn Val 645 650 655 Leu Leu Aßn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro Leu Ala 660 665 670 Pro Gly Asn Asp Asn Leu He Lys Ala Pro Thr Val Ala Ala Asp Gly 675 680 685 Lys Thr Tyr He Val Lys Phe Lys Gln Lys Glu Glu Gly Arg Ser Phe 690 695 700 Thr Lys Ala He Glu Asp Ala Lys Lys Glu Lys 705 710 715 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 26: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 335 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..335 ( i) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 26: Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asp Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 20 25 30 Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 35 40 45 Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 50 55 60 Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 100 105 110 Gly Ser Phe Ala Val Asn sly Pro Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp 115 120 125 Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly Lys Lys He 130 135 140 Glu Ser Ser Ala Leu Gly ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu Thr Gly Phe 145 150 155 160 Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp Ala Ala Gln 165 170 175 Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser Glu Ser Pro 180 185 190 Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu Asn 195 200 205 Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp Ala 210 215 220 Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu Phe 225 230 235 240 Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr Ala Thr Gln 245 250 255 Lys Thr Gln Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly Asn He Leu 260 265 270 Leu Asn Val Leu He Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly Lys 275 280 285 Asn Asn Val Leu He Val Cys Val Pro Asn Pro Pro Leu Asp Glu Lys 290 295 300 Gln Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu He Arg Val Lys Thr Ser Glu 305 310 315 320 Asp Ala Asp Glu Leu His Lys He Leu Leu Glu Lys Lys Asp Ala 325 330 335 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 27: (í) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 310 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..310 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 27: Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 1 5 10 15 Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 20 25 30 Glu Val Met Lyß Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 35 40 45 Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 50 55 60 Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phß Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 65 70 75 80 Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 85 90 95 Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 100 105 110 Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser 115 120 125 Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro 130 135 140 Ala Ser ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala 145 150 155 160 Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp Trp He Val Lys His Val Asn He 165 170 175 Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro He Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr 180 185 190 Leu Ala Thr He Glu Lys Gln Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser 195 200 205 Glu Ser Gln Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu 210 215 220 Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gln Gln Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly 225 230 235 240 Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys 245 250 255 Lys Ser Asp Ala Ala Gln Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phß Ser Phß Gly 260 265 270 Lys Lys He Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu 275 280 285 Thr Gly Phe Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp 290 295 300 Ala Ala Glu Lys Glu Leu 305 310 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 28: (i) CARACTERÍSTICAS D? LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 132 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..132 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 28: Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser 1 5 10 15 Asn Gln Pro Pro Ser Ser Gly Pro Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly 20 25 30 Asn Ala Tyr His Lys Gln Leu Ala Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp 35 40 45 Trp He Val Lys His Val Asn Thr Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro 50 55 60 He Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr Leu Ala Thr He Glu Lys Gln Leu 65 70 75 80 Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser Glu Ser Gln Thr Asp Arg Ala Thr 85 90 95 Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gln Gln 100 105 110 Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu 115 120 125 Lys Val Glu Phe 130 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 29: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal "" (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE : exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 29: AGAAAGCAAA GCGCAGAAAT GT 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 30: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..21 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 30: CAAATCCAGA AAAGCGTCCT C 21 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 31: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 24 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..24 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 31: TGAAGAATAG AGCCATAAAG AAAG 24 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 32: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) í ix) CARÁCTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..21 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 32: AGAAAAGCGT CCTCCTCCAG A 21 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 33: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 24 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..24 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 33: TGAAGAATAG AGCCATAAAG AAAG 24 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 34: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 34: AGCGCCACTA ACCAAATCCA GA 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 35: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 35: AGAAAGCAAA GCGCAGAAAT GT 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 36: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 36: GAAAAGCGTC CTCCTCCAGA AG 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 37: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 37: GAAAGCAAAG CGCAGAAATG TT 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 38: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) ( ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..21 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 38 : CTCCAGCGCC ACTACCAAAT C 21 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 39: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 20 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..20 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 39: CCCGCACGGA GCAGTTCAAG 20 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 40: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 40: GCAGCGGCAG ATCCCAAGGT AG 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 41: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 17 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..17 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 41: GGCATCCTTT TTCTCCA 1 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 42: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) [ix) CARACTERÍSTICAS : (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..22 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 42: CGTTCTTATC GTCTCTGTGT TC 22 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 43: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 19 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS ( (AA)) NNOOMMBBRREE//CCLLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..19 .- - - - (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 43: GCATCCTTTT TCTCCAGTA 19 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 44: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: ?) LONGITUD: 18 pares de bases ;B) TIPO: ácido nucleico •C) FORMA DE CADENA: simple ID) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) ( i ) CAR CTERISTICAS : A) NOMBRE/CLAVE: exón B) SITUACIÓN: 1..18 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 44: TGTTCCAAAT CCACCAAT 18 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 45: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 19 pares de bases ÍB) TIPO: ácido nucleico •C) FORMA DE CADENA: simple íD) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..19 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 45: GTCTGCATCC TCGCTGGTT 19 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 46: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS. (A) NOMBRE/CLAVE : exón (B) SITUACIÓN: 1..21 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO : 46: CGTTCTTATC GTCTGTGTTC C 21 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 47: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 18 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: exón (B) SITUACIÓN: 1..18 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 47: TTTTACCCGA ATCAACAT 18 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 48: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE CADENA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: ADN (genómico) (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : exón (B) SITUACIÓN: 1..21 (xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA : SEQ ID NO : 48 : GTACGCGAAC AGGGAAGAAT A 21 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 49: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 212 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..212 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 49: Arg Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala Arg Gln 1 5 10 15 Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val 20 25 30 Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met 35 40 45 Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gln Asn His Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu 65 70 75 80 Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys 85 90 95 Val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly Ser Arg Gln Ala Val 100 105 110 Pro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp 115 120 125 Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly Leu Ala Glu Gln Cys 130 135 140 Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gln He 145 150 155 160 Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn 165 170 175 Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg Gln 180 185 190 Thr Arg Val Asp Leu Gln Pro Ser Phe Arg Ala Asn Phe Leu Phe Met 195 200 205 He Phe He Lys (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 50: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 183 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..183 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 50: Met Asp Ala Arg Gln Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn 1 5 10 15 Leu he Gly Pro Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys 20 25 30 His Cys Arg Asp Met Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp 35 40 45 Phe Gln Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val 50 55 60 Glu Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Cys Pro Pro 65 70 75 80 Lys Ser Ala cys Lys val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Gln Ala Val Pro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp 100 105 110 Arg His Leu Val Asp Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly 115 120 125 Leu Ala Glu Gln Cys Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp 130 135 140 ser Ser Ser Gln He Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser 145 150 155 160 Asp Gly Ser Pro Asn Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro 165 170 175 Gly Leu Arg Arg Gln Thr Arg 180 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 51: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 199 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..199 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 51: Arg Val Ser Asn Gly Ser Pro ser Pro Glu Arg Met Asp Ala Arg Gln 1 5 10 15 Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val 20 25 30 Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met 35 40 45 Glu Glu Ala Ser Gln His Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gln Asn His Arg 50 55 60 Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln slu Val Glu Arg Gly Ser Leu 65 70 75 80 Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys 85 90 95 Val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Aap Val Ser Gly Ser Arg Gln Ala Val 100 105 110 Pro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp 115 120 125 Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly Leu Ala Glu Gln Cys 130 135 140 Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gln He 145 150 155 160 Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn 165 170 175 Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro Gly Pro Arg Arg Gln 180 185 190 Thr Arg Val Asp Leu Gln Pro 195 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 52: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 199 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : proteína (B) SITUACIÓN: 1..199 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 52: Arg Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala Arg Gl? 1 5 10 15 Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val 20 25 30 Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met 35 40 45 Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gln Asn His Lys 50 55 60 Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu 65 70 75 80 Pro Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys 85 90 95 Val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Gly Gly Ser Arg Gln Ala Val 100 105 110 Pro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp 115 120 125 Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly Leu Ala Glu Gln Cys 130 135 140 Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gln He 145 150 155 160 Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn 165 170 175 Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg Gln 180 185 190 Thr Arg Val Asp Leu Gln Pro 195 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 53: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 199 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..199 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 53: Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala Arg Gln Ala 1 5 10 15 Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val Asn 20 25 30 His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met Glu 35 40 45 Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gln Asn His Lys Pro 50 55 60 Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu Pro 65 70 75 80 Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys Val 85 90 95 Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly Ser Arg Gln Ala Val Pro 100 105 110 Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp Gln 115 120 125 Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly Leu Ala Glu Gln Cys Pro 130 135 140 Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gln He Lys 145 150 155 160 Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn Ala 165 170 175 Gly Thr Val Giu Gln Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg Gln Thr 180 185 190 Arg Val Asp Leu Gln Pro Ser 195 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 54: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 220 aminoácidos '3) TIPO: aminoácido C) FORRA DE CADENA: monocatenaria ?D) 7CPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE : proteína (B) SITUACIÓN: 1..220 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 54 Asn Val Arg Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala 1 m -i c Arg Gln Ala Asp His Pro Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro 20 25 30 Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp 35 40 45 Met Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gln Asn His 50 55 60 Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val Glu Arg Gly Ser 65 70 75 80 Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys 85 90 95 Lys Val Pro Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly Ser Arg Gln Ala 100 105 110 Val Pro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser slu Asp Arg His Leu Val 115 120 125 Asp Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly Leu Ala Glu Gln 130 135 140 Cys Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gln 145 150 155 160 He Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Aen Val Ser Asp Gly Ser Pro 165 170 175 Asn Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg 180 185 190 Gln Thr Arg Val Asp Leu Gln Pro Ser Phe Arg Ala Asn Phe Leu Phe 195 200 205 Met He Phe He He Lys Val He Lys Lys He Ser 210 215 220 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO: 55: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 183 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria ID) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..183 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 55: Met Asp Ala Arg Gln Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn 1 5 10 15 Leu Phe Gly Pro Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys 20 25 30 His Cys Gln Asp Met Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp 35 40 45 Phe Gln Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val 50 55 60 Glu Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro 65 70 75 80 Lys Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Gln Ala Val Pro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp 100 105 110 Arg His Leu Val Asp Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly 115 120 125 Leu Ala Glu Gln Cys Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp 130 135 140 Ser Ser Ser Gln He Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser 145 150 155 160 Asp Gly Ser Pro Asn Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro 165 170 175 Gly Leu Arg Arg Gln Thr Arg 180 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 56: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 138 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..138 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 56: Met Asp Ala Arg Gln Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn 1 5 10 15 Leu Phe Gly Pro Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys 20 25 30 His Cys Arg Asp Met Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp 35 40 45 P e Gln Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val 50 55 60 Glu Arg Gly ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro Pro 65 70 75 80 Lys Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly 85 90 95 Ser Arg Gln Ala Val j->ro Leu He Gly Ser Gln Ala Asn Ser Glu Asp 100 105 110 Arg His Leu Val Asp Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Ser Gln Ala Gly 115 120 125 Leu Ala Glu Gln Cys Pro sly Met Arg Lys 130 135 (2) INFORMACIÓN ACERCA DE SEQ ID NO : 57: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 197 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE CADENA: monocatenaria (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE LA MOLÉCULA: proteína (ix) CARACTERÍSTICAS: (A) NOMBRE/CLAVE: proteína (B) SITUACIÓN: 1..197 (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 57: Met Ser Asn Val Arg Val Ser Asn Gly ser Pro Ser Leu Glu Arg Met 1 5 10 15 Asp Ala Arg Gln Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu 20 25 30 Phe Gly Pro al Asn His Glu Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His 35 40 45 Cys Arg Asp Met Glu Glu Ala Ser Gln Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe 50 55 60 Gln Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gln Glu Val Glu 65 70 75 80 Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lye 85 90 95 Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gln Glu Ser Gln Asp Val Ser Gly Ser 100 105 110 Arg Gln Ala Val Pro Leu lie Gly Ser Gln Ala Asn Ser Olu Asp Arg 115 120 125 His Leu Val Asp Gln Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gln Ala Gly Leu 130 135 140 Ala Glu Gln Cys Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser 145 150 155 160 Ser Ser Gln Asn Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp 165 170 175 Gly Ser Pro Asn Ala Gly Thr Val Glu Gln Thr Pro Lys Lys Pro Gly 180 185 190 Leu Arg Arg Gln Thr 195

Claims (28)

1. Reivindicaciones 1.- Estructura artificial de ácido nucleico que contiene los siguientes constituyentes: componente a) : una secuencia de activación para la transcripr.ír. ¿el crpcr.ente b) componente b) : un gen para un factor de transcripción que contiene b-j_) un dominio de activación b2 ) una secuencia de unión para un inhibidor b3 ) un dominio de unión para ADN componente c) : una secuencia de activación, que es activada por unión del producto de expresión del cc- :r.--r."= d y que induce la transcripción del componente d) componente d) un gen efector.
2. 2.- Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 1, caracterizada porque el componente a) es igual al .componente c) .
3. 3. - Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque el componente a) constituye una secuencia de promotor activable inespecífica, específica para células, específica metabólicamente, específica para virus y"/o específica para ciclos celulares.
4. 4.- Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 3, caracterizada porque el componente a) está seleccionado entre el grupo que consta de promotores activados en células endoteliales, células peritoneales, células pleurales, células epiteliales de la piel, de los pulmones, del tracto gastrointestinal, de los ríñones y de las vías eferentes de orina, en células de músculos, en células de tejido conjuntivo, en células formadoras de sangre, en macrófagos, en linfocitos, en células de leucemia, en células de tumores o en células de glla, secuencias de promotores de virus, tales como HBV, HCV, HSV, HPV, EBV, HTLV, CMV o HIV. - - secuencias de promotores o intensificadores, activadas por hipoxia, o secuencias de activación específicas para un ciclo celular de los genes para cdc225C, ciclina A, cdc2 , ?2F-1, B-Myb, DHFR y - ¿ec e":: 3 de r.icr. para factores de transcripción que "srar-rT-r. z son activados de modo dependiente de la proliferación celular, tales como monómeros o multímeros de la caja Myc E.
5. 5.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque el dominio de activación [componente bl) del componente b) ] está seleccionado entre los dominios de activación de los factores de transcripción que abarcan Oct-2, Spl , NFY, ITF-2, VP-16, c-Myc y CTF.
6. 6.- Esti". _": ra artificial de ácido nucleico según una de las reiv r.d _-acicr.es 1 a 5, caracterizada porque la secuencia de unión para un inhibidor (b2) está seleccionada entre un grupo que abarca proteínas que inhiben a p27 y con ello suprime la inhibición de la proliferación celular producida por la proteína p27.
7. 7.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones l a 5, caracterizada porque la secuencia de unión para un inhibidor (b2) contiene la secuencia de aminoácidos- de p!63 según la Tabla 6 [SEQ ID ÑO. : 24] o partes de ésta.
8. 8.- Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 7, caracterizada porque las partes de la secuencia de aminoácidos de pl63 se seleccionan entre el grupo que consta de péptidos con las secuencias de aminoáci-dos de las posiciones 1 a 24 [SEQ ID NO..- 10] , de las posiciones 137 a 196 [SEQ ID NO. : 12] , de las posiciones 215 a 265 [SEQ ID NO. : 14] , de las posiciones 239 a 272 [SEQ ID NO. : 16] , de las posiciones 399 a 438 [SEQ ID NO. : 18] y de las posiciones 307 a 469 [SEQ ID NO. : 20] referidas a la numeración según la Tabla 6.
9. 9.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque la secuencia de unión para un inhibidor (b2) se obtiene por deleción de dominios funcionales a partir de la proteína según la reivindicación 7, habiéndose suprimido a partir de la [SEQ ID NO. : 24] de la Tabla 5 el dominio de unión a p27 ? o el dominio de unión a Ran.
10. 10.- Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 9, caracterizada porque después de deleción del dominio de unión a p27 se presenta una proteína con la secuencia de aminoácidos según la Tabla 8 [SEQ ID NO. : 26] 0 y en el caso de deleción del dominio de unión a Ran se presenta una proteína con la secuencia de aminoácidos según la Tabla 9 [SEQ ID NO. : 27] .
11. 11.- Estructura artificial de ácido nucleico según una i- las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque la ? secuencia de unión para Un inhibidor (b2) se puede obtener por deleción de todas las secuencias de aminoácidos excepto la zona del dominio de unión a p27 de la proteína según la reivindicación 2.
12. 12. - Estructura artificial de ácido nucleico según la 0 reivindicación 11, caracterizada porgue la secuencia de unión para un inhibidor contiene la secuencia de aminoácidos según la Tabla 10 [SEQ ID NO. : 28] . '
13. 13.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de ias reivindicaciones 1 a '5, caracterizada porque la 5 secuencia de unión para un inhibidor (b2) está seleccionada entre ei grupc que consta de la correspondiente proteína homologa del inhibidor o de las partes correspondientes a ésta de otra especie distinta de animal mamífero o de un ser humano según una de las reivindicaciones 6 a 12. 0
14. 14.- Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 13, caracterizada porque la secuencia de aminoácidos del inhibidor es la homologa humana de la pl63.
15. 15.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones l a 14, caracterizada porque el componente c) contiene al menos una secuencia (de unión) a ADN para la unión del componente b) y es activada por esta unión . _
16. 16.- Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 15, en la cual la secuencia de unión a ADN está seleccionada entre el grupo que consta de la secuencia de unión (5 ' -CGGACAACTGTTGACCCG-3 * , £?Q ID ::<D ..* X para la proteína Gal 4 ; la secuencia de unión (5 ' -TACTGTATGTACATACAGTA-3 ' , SEQ ID NO. : 2) para la proteína LexA; la secuencia de unión ( 5 ' -GAATTGTGAGCGCGCACAATTC-3 , SEQ ID NO. : 3) para la proteína del represor Lac I; la secuencia de unión 5 ' -TCGAGTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGA-GAAAAGTGAAAG-3 ' , SEQ ID NO..* 4) para la proteína del represor de tetraciclina y la secuencia de unión (5 ' -TAATGATGGGCG-3 ' , SEQ ID NO.: 5) para la proteína ZFHD-1.
17. 17.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones l a 16, caracterizada porque en cuanto al gen efector (componente d) se trata de un gen que codifica una sustancia activa, que está seleccionada entre el grupo que consta de citoquinas, quimioquinas , factores de crecimiento, receptores para citoquinas, quimioquinas o factores de crecimiento, proteínas que actúan antiprolifera-tivamente o bien citostaticamente o apoptóticamente, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, agentes inhibidores de la angiogénesis, hormonas peptídicas, factores de coagulación, agentes inhibidores de la coagulación, proteínas fibrinolíticas, péptidos o proteínas que actúan sobre la circulación sanguínea, proteínas del plasma sanguíneo y antígenos de agentes patógenos de infecciones o de células o de tumores, produciendo el antígeno seleccionado una reacción inmunológica.
18. 18.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizada porque al referirse al gen efector se txata de un gen, que codifica una enzima que transforma a un compuesto precursor de un fármaco en un fármaco.
19. 19.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones l a 14, caracterizado porque en cuanto al gen efector se trata de un gen, que codifica una proteína de fusión de ün ligando y una sustancia activa, o una proteína de fusión de un ligando y una enzima, estando seleccionado el ligando entre un grupo que comprende citoqui-ñas, factores de crecimiento, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, hormonas peptídicas, mediadores y moléculas de adhesión a células.
20. 20.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las precedentes reivindicaciones, caracterizada porque en cuanto al ácido nucleico se trata de un ADN.
21. 21.- Estructura artificial según una de las precedentes reivindicaciones, caracterizada porque la estructura artificial de ácido nucleico está introducida en un vector.
22. 22. - Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 21, caracterizada porque se trata de un vector plasmídico .
23. 23. - Estructura artificial de ácido nucleico según la reivindicación 21, caracterizada porque se trata de un vector vírico.
24. 24.- Estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizada porque se administra por vía externa, peroral, intravesical, nasal, intrabronquial o al tracto gastrointestinal, o se inyecta en un órgano, en una cavidad del cuerpo, en la musculatura, por vía subcutánea o en la circulación sanguínea, para la profilaxia o terapia de una enfermedad.
25. 25.- Célula aislada, caracterizada porque contiene una estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 24.
26. 26.- Utilización de una estructura artificial de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 24, o de una célula según la reivindicación 25 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de una enfermedad seleccionada entre el grupo que consta de infecciones, tumores, leucemias, enfermedades autoinmunatarias, alergias, artritis, inflamaciones, rechazos de órganos, reacciones de trasplante frente a hospedante, enfermedades de coagulación de la sangre, enfermedades de la circulación, pobreza de sangre (anemia) , enfermedades hormonales y lesiones del sistema nervioso central .
27. 27.- Procedimiento para la preparación de las estructuras artificiales de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 1 a 24, en la que los elementos individuales se ligan conjuntamente de modo escalonado.
28. 28.- Utilización de una célula según la reivindicación 25, para la preparación de un medicamento destinado a la terapia de enfermedades según la reivindicación 24, caracterizada perqué al menos una célula se administra por vía externa, r.traves cai , nasal, intrabronquial , oral o en el tracto gastrointestinal, o se inyecta en un órgano, en una cavidad corporal, en la musculatura, por vía subcutánea o en la circulación sanguínea para la profilaxia o terapia de una enfermedad .