MXPA98010748A - Procedimiento para tratar proteinas de planta yproductos nutricionales hechos de las mismas - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere generalmente a un procedimiento para aislar isoflavones/fitoestrógenos de una proteína de planta y producir proteínas de planta para utilizarse en productos nutricionales que tengan niveles reducidos de fitoestrógenos, manganeso y/o nucleótidos. Más específicamente, esta invención estádirigido a un procedimiento para utilizar tecnología de intercambio de ion para remover fitoestrógenos, manganeso o nucleótidos de proteínas de planta. Tanto los fitoestrógenos removidos como las proteínas de planta tratada pueden ser retenidos para procesamiento adicional. Los fitoestrógenos tiene utilidad como productos farmacéuticos. La proteína de planta tratada tiene utilidad en productos nutricionales. Esta invención también estádirigida a isoflavones preparados a través del procesamiento, a productos de proteína de planta que resultan del procedimiento de la invención, y a productos nutricionales que utilizan el producto de proteína de planta como una fuente de amino-nitrógeno.

Description

PROCEDIMIENTO PARA TRATAR PROTEÍNAS DE PLANTA Y PRODUCTOS NUTRICIONALES HECHOS DE LAS MISMAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere generalmente a un procedimiento para tratar proteínas de planta para utilizarse en productos nutricionales. El procedimiento utiliza tecnología de intercambio de ion para remover fitoestrógenos (también conocidos como "isoflavones"), manganeso, nucleótidos, nucleósidos y ARN de proteínas de planta, para producir un producto de proteínas de planta que tenga niveles reducidos de fitoestrógenos, manganeso y ácidos nucleicos. La invención también está dirigida a productos nutricionales que utilizan el producto de proteína de planta como una fuente de amino-nitrógeno. El mismo procedimiento también puede ser utilizado para extraer fitoestrógenos de materiales de planta, y a composiciones <$ue contienen los fitoestrógenos de planta aislados.

ANTECEDENTES Los fitoestrógenos o estrógenos de planta ocurren en una variedad de plantas, incluyendo materiales de proteína vegetal tales como aquellos derivados de soyas. Los fitoestrógenos son definidos como substancias de planta que son estructural y funcionalmente similares al esteroide gonadal 17ß-estradiol o que producen efectos estrogénicos. Existen tres puntos principales de estrógenos de dieta no esteroidal, los cuales son: 1) los isoflavones, 2) los coumestanos y 3) los micoestrógenos (hongos). La similitud estructural entre estas substancias y los estrógenos de mamífero endógenos ha sido estudiada. Una revisión de fitoestrógenos y sus efectos en mamíferos se reporta por Kaldas y Hughes en una artículo intitulado, "Reproductive and General Metabolic Effects of Phytoestrogens in Mammals", Reproductive Toxicology, Vol. 3, pág. 81-89, 1989. Las enseñanzas de este artículo son del dominio público y no necesitan ser repetidas aquí. Como se utiliza en esta especificación y las reivindicaciones anexas, el término "isoflavones" es equivalente al término "fitoestrógenos" ya que ese término es definido y utilizado en la técnica (por ejemplo, el artículo de Kaldas et al.). Los flavonoides y los isoflavones son producidos a través de numerosas leguminosas y grasas, incluyendo muchas plantas comúnmente consumidas por el ser humano y ganado. Los isoflavones de soya incluyen compuestos tales como daidzina, genistina, daidzeína y genisteína. Una fórmula estructural general para estos compuestos que es: Compuesto R R1 daidzeína H H genisteína H OH daidzina G H qenistina G OH en donde G = glucosilo Recientemente se ha reconocido que los isoflavones contenidos en proteínas vegetales pueden tender un impacto dañino en los mamíferos que consumen la proteína de vegetales, ver, Kaldas et al., supra. La concentración de isoflavones en aislados o concentrados de proteínas de planta, tales como aislados se proteína de soya, pueden ser tan altos como 3,000 µg/g de proteína. Los isoflavones también proporcionan el sabor amargo o de "tipo frijol" a las proteínas vegetales, (ver, Ewan et al., infra) pueden reducir la biodisponibilidad de minerales esenciales y pueden tener influencia en el valor nutricional de las proteínas (ver, Kaldas et al., supra). El consumo de isoflavones por el hombre y ganado también ha estado relacionado con sistemas de reproducción comprometidos en mamíferos. Existe cierta preocupación que el consumo de fórmulas para infantes a base de soya actuales que contienen isoflavones de soya pueda tender un impacto fisiológico no deseado en el desarrollo del sistema neuro-endócrino del bebé. Esta preocupación se basa en parte, en la evidencia de que el alimento animal a base de soya puede ocasionar problemas de efectividad en una especie de leopardos ("chita"). Setchell et al., 1987: "Gastroenterology" 93:225-33. En contraste, también se ha sugerido que los isoflavones pueden tener efectos positivos de tipo farmacéutico, en algunos casos. Los estrógenos tienen dos efectos opuestos sobre el cáncer, dependiendo de la dosis. Las grandes dosis inhiben el desarrollo de tumor de cáncer de pecho, mientras que las dosis pequeñas parece que promueven el crecimiento del tumor. Esta dualidad se extiende a fitoestrógenos o isoflavones. Los isoflavones pueden estimular o inhibir el crecimiento de tumor. Setchell KDR, y Welch, MB J. Chrom. 386 (1987) 315-323: "Naturally Ocurring Non-Steroidal Estrogens of Dietary Origin". En McLachlan J.A., ed., "Estrogens in the Environment", Nueva York: Elsevier Press; 1985: 69-85 y Setchell, el al., "Nonsteroidal Estrogens of Dietary Origin: Possible Roles in Hormone-Dependent Diasease", Am. J. Clin. Nutr. 1984; 40: 569-578. Un mecanismo a través del cual los isoflavones pueden manifestar su efecto anti-tumor es el bloqueo de receptores de estrógenos y la separación de lá respuesta mediada por el receptor. De esta manera, la habilidad de los estrógenos endógenos para soportar el crecimiento de tumor puede ser reducida. Existe también el soporte indirecto, demográfico para una reducción mediada por isoflavones en cáncer de tejidos de respuesta de hormona a partir de la observación de que mujeres en países que consumen dietas vegetarianas tienen una incidencia menor de cáncer de pecho comparadas con los países que consumen carne. Adlercreutrz et al., "Determination of Urinary Lignans and Phytoestrogen Metabolites, Potential Antiestrogens and Anticarcinogens, en Uriñe of Women on Various Habitual Diets", Steroid Biochem. 1986; 25: 791-797. Los isoflavones también pueden tener propiedades anti-virales y fúngicas. Los isofiavones también han sido aplicados en la reducción de niveles de colesterol en el suero en seres humanos, efectos inmunológico positivos y actividad como un antioxidante. Un efecto de isoflavones benéfico final es el alivio de síntomas vasomotores en mujeres menopaúsicas. Históricamente, los chinos han utilizado medicina de hierbas para tratar "bochornos". De esta manera, un procedimiento que fácilmente aisla y concentra los isoflavones del material de planta puede ser de gran valor para la comunidad científica y la industria farmacéutica. La presencia de altos niveles de manganeso en los tejidos del cuerpo ha sido sospechada en el desarrollo del comportamiento criminal. Ver, Gottschalk et al., "Abnormalities in Hair Trace Elements as Indicators of Aberrant Behaivor", Compr. Psychiatry 1991; 32:229-237, y Scientific America, Marzo de 1995, pág. 104-105. Además, también se ha reportado que la incapacidad de aprendizaje en niños puede estar asociada con niveles incrementados de manganeso en el cabello según reportado por Collipp et al., en un artículo intitulado, "Manganese in Infant Formula and Learning Disabilities", Ann. Nutritional Metals, 27:488-494, 1983. Los aislados se proteínas de planta típicos contienen hasta 1000 µg de manganeso por gramo de proteína. De esta manera, existe la necesidad de procedimientos que económicamente y a una escala comercial proporcionen la reducción del contenido de isoflavones y manganeso en la proteína de planta. El uso de nucleótidos y nucleósidos (o equivalentes de nucleótido como se define más adelante) en las fórmulas nutricionales ha recibido mucha atención en los últimos años. Se ha sugerido que ciertos niveles y relaciones de los varios ácidos nucleicos pueden tener un impacto positivo en el sistema inmune de mamíferos y aún evitar ciertas dolencias, tales como diarrea. El problema al utilizar la proteína de planta en dichas fórmulas nutricionales es que la proteína de planta contiene típicamente un nivel inherente muy alto de ácidos nucleicos que puede no ser la forma más útil (por ejemplo, como ARN) y no puede estar a las relaciones más deseables. Además, el alto nivel de variación en el contenidos de ácido nucleico ocasiona problemas en la fabricación comercial. Los aislados de proteína de planta típicos contienen hasta aproximadamente 15 mg de equivalentes de nucleótido por gramo de proteína. De esta manera, la industria nutricional desea una fuente de proteína de planta que tenga niveles substancialmente reducidos de ácidos nucleicos inherentes. Durante muchos años se ha conocido la tecnología de intercambio de ion. Las resinas de intercambio de ion típicamente son polímeros sintéticos, insolubles, entrelazados, que llevan grupos laterales ácidos o básicos. Tienen altas capacidades de intercambio y pueden ser utilizadas para un número casi ilimitado de reacciones.

Las resinas de intercambio de ion son utilizadas en tratamiento de agua, extracción, separación, análisis y catálisis. Las resinas de intercambio de ion tienen una estructura molecular abierta, extendida que incluye grupos iónicos eléctricamente cargados. Un cambiador de catión intercambia iones positivos y, por lo tanto, tiene iones negativos desarrollados en su estructura. Un cambiador de anión tiene iones positivos en su estructura. Los iones de la red de estructura cristalina son denominados como los iones fijos; los iones más pequeños de carga opuesta que pueden cambiar sitios con iones en la solución son denominados contraiones. Los problemas comunes encontrados con procedimientos de intercambio de ion conducidos en proteínas incluyen una pobre recuperación de proteína (es decir, proteína adherida a la resina) y la incapacidad de la lechada de proteína para pasar a través del lecho de resina dando como resultado una alta caída de presión a través del lecho de resina. El procedimiento, el cual se describe en la presente, satisface la necesidad en la industria nutricional de un procedimiento económico y comercialmente viable, el cual claramente separa isoflavones de la proteína de planta, dejando una fuente económica de isoflavones así como una alta producción de un producto de proteína de planta que tenga niveles altamente reducidos de ¡soflavones, manganeso y nucleótidos. La patente de E.U.A. No. 5,352,384 de Shen describe un procedimiento para producir una fibra de proteína vegetal enriquecida con isoflavones. Esta patente describe el uso de una glucosidasa para convertir los isoflavones de glucona (es decir, daidzena) en una lechada de proteína a los isoflavones de aglucona. La fracción de fibra después es recuperada de la lechada a través de centrífuga acción para proporcionar una fibra rica en aglucona. Un artículo escrito por Ewan et al., en Journal of Food Science, Vol. 57, No. 2, 1992, intitulado "Isoflavone Aglucones Y Volatile Organic Compounds in Soybeans; Effects of Soaking Treatments", describe los efectos benéficos del remojo de soyas en soluciones de NaHCO3 moderadamente alcalinas a temperaturas elevadas, para fabricar leche de soya con sabor mejorado. Esta publicación no sugiere mi describe el uso de una resina de intercambio de ¡on para remover isoflavones, manganeso y ácidos nucleicos de la proteína de planta. En un artículo publicado en el volumen 47 (1982) del Journal Of Food Science, pág. 933-940, por J. How y C. Morr, intitulado "Removal of Phenolic Compounds from Soy Protein Extracts Using Activated Carbón", se reporta someter estratos de proteína de soya a carbono activado y tratamientos de procedimiento de intercambio de ion para remover compuestos fenólicos que han sido reportados como posibles responsables de las características adversas de color y sabor de los productos de proteína de soya. Los estratos de proteína fueron sometidos a un tratamiento de intercambio de ion secuencial, de dos etapas, antes de la precipitación de la proteína. El extracto de proteínas se bombeó como "flujo descendente" a través de una columna de intercambio de catión en la forma de Na+ y después un cambiador de anión en la forma de hidroxilo y cloruro para remover los aniones polivalentes incluyendo ácidos fenólicos, fitato y otros. 5 La patente de E.U.A. No. 5,248,804 de Nardelli et al., describe un procedimiento para la remoción de fitato de la proteína de planta utilizando resinas de intercambio de ion. El procedimiento utiliza una resina de intercambio de anión macroporosa (base de débil o base | fe fuerte), la cual ha sido a condicionada a través de, 1) la conversión a la forma de hidróxido; 2) la conversión a la forma de cloruro o sulfato; y 3) posteriormente la conversión de los sitios de base fuerte a las forma de carbonato y los sitios de base débil a la forma de base libre. La proteína de planta que contiene fitato después se pone en contacto con la resina tratada para remover el fitato. 15 El fitato comprende las sales de ácido fítico. El ácido fítico también es conocido como hexafosfato de inositol. De esta manera, al utilizar una resina de intercambio de avión, los grupos fosfato altamente aniónicos proporcionan el manejo a través del cual la resina puede extraer el fitato de la lechada de proteínas. En contraste, los isoflavones y nucleótidos son moléculas neutras y no se puede esperar que se unan a la resina o se intercambien con los aniones en la resina. La patente de E.U.A. No. 5,492,899 de Masor et al., describe una fórmula para infantes con ribonucleótidos. Esta patente enseña el uso de ciertos niveles y relaciones de equivalentes de nucleótido en fórmulas para infantes y describe una étnica analítica para identificar y cuantificar los equivalentes de nucleótido en una matriz nutricional. Como se utiliza en la presente y en las reivindicaciones de esta invención, el término "nucleótido" es igual al término "equivalente de nucleótido", según definido en la patente de E.U.A. 5,492,899. La patente de E.U.A. 5,492,899 define equivalentes de nucleótido como ARN polimérico, ribo-nucleósidos, ribo-nucleósidos que contienen aductos y ribonucleótidos de mono-, di- y trifosfato.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención comprende un procedimiento a través del cual se pueden fabricar proteínas de planta con un bajo contenido de isoflavones, con un bajo contenido de manganeso y/o con un bajo contenido de nucleótido. La invención además comprende los mismos aislados de proteína con un bajo contenido de isoflavones, con un bajo contenido de manganeso y con un bajo contenido de nucleótidos, y dichos aislados de proteína son producidos de acuerdo con el procedimiento de la presente invención. La presente invención además comprende productos nutricionales hechos con los aislados de proteína producidos de acuerdo con la invención. Un beneficio adicional del procedimiento de esta invención es que, no solamente los isoflavones y el manganeso pueden ser removidos a través de la columna de intercambio de ion, sino que también una porción substancial de los ácidos nucleicos inherentes. Un aspecto adicional de la invención es que los mismos isoflavones pueden ser aislados a través de un tratamiento adicional de la resina de intercambio con un agente de liberación de isoflavones. Estos, y otros aspectos de la invención son específicamente descritos con detalle en la descripción que se establece más adelante. De esta manera, en un primer aspecto amplio, la invención proporciona un procedimiento para tratar una proteína de planta que comprende: a) proveer una lechada de proteína de planta que contenga isoflavones, manganeso o nucleótidos; b) proveer por lo menos una resina de intercambio de anión capaz de unir isoflavones, manganeso o nucleótidos presentes en dicha lechada de proteína; c) poner en contacto dicha lechada con la resina de intercambio de anión; y d) separar dicha lechada de la resina de intercambio de anión, por lo que la lechada de proteína de planta tiene un contenido reducidos de isoflavones, manganeso o nucleótidos. En una modalidad preferida, la resina de intercambio es pre-acondicionada exponiendo la resina antes del contacto del paso c) a un agente que coloca sobre la resina un anión intercambiable que: i) no cambia el pH de la lechada de proteína en contacto fuera de la escala de 6.0 a 9.5; y ii) no añade un anión objecionable a la lechada de proteína en contacto en el paso d). Más específicamente, una resina que tenga sitios ele base fuerte y sitios de base débil puede ser pre-acondicionada sometiendo la a los pasos de: i) conversión a una forma de hidróxido; ii) conversión a una forma de cloruro o sulfato; y iii) conversión de por lo menos algunos de los sitios de base fuerte a la forma de carbonato y por lo menos algunos de los sitios de base débil a la forma de base libre. De esta manera, los agentes útiles para este pre-acondicionamiento incluyen hidróxido de sodio e hidróxido de potasio para el paso i); ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y cloruro de sodio para el paso ii); y carbonato de sodio, y carbonato de sodio e hidróxido de amonio para el paso ¡ii). El paso de poner en contacto puede comprender colocar la resina de intercambio de anión en la lechada; o, alternativamente, hacer pasar la lechada a través de una estructura (tal como una columna vertical), la cual contiene la resina de intercambio de anión y tiene por lo menos una entrada y una salida. Preferiblemente, la entrada está ubicada más abajo que la salida en dicha columna vertical. El procedimiento opcionalmente puede comprender los pasos adicionales de reacondicionamiento de la resina de intercambio utilizando pasos similares a aquellos descritos anteriormente, y volviendo a utilizar la resina para la separación adicional. Otros pasos opcionales incluyen tratamientos con calor de la proteína e/o hidrólisis de la proteína antes del contacto con la resina de intercambio. Otro paso adicional opcional implica tratar la resina de intercambio con por lo menos un agente de liberación de isoflavones; y separar el agente de liberación de isofiavones que contiene isoflavones de dicha resina de intercambio de anión y recoger los isoflavones. Los agentes de liberación de isoflavones representativos incluyen, por ejemplo, soluciones acuosas de ácidos (por ejemplo, HCl), soluciones acuosas de bases (por ejemplo, NaOH o KOH), alcoholes (por ejemplo, metanol o etanol), mezclas de alcohol/agua, solvente es que orgánicos y mezclas de los mismos. La presente invención también se refiere a una composición de proteína de planta que tiene un contenido reducido de por lo menos un componente de isoflavones, manganeso o nucleótido seleccionado del grupo que consiste de: (i) menos de 30 µg de isoflavones por gramo de proteína; (ii) menos de 450 µg de manganeso por gramo de proteína; y (iii) menos de 10 mg de nucleótidos por gramo de proteína. Dicha proteína de planta puede hacerse, pero no necesariamente, a través de procedimiento de la presente, ya que hasta ahora no ha existido ningún extrato de proteína de planta que tenga niveles de fitoestrógenos tan bajos como aquellos de la presente invención. Muy preferiblemente, la composición de proteína de planta comprende menos de 20 µg de isoflavones por gramo de proteína; y menos de 400 µg de manganeso por gramo de proteína. También se describen alimentos para ganado, fórmulas para infantes, y productos nutricionales que utilizan la proteína de planta de acuerdo con la invención. Las fórmulas para infantes, por ejemplo, contienen menos de 600 µg de isoflavones por litro de fórmula lista para comer, muy preferiblemente menos de 200 µg, y de preferencia menos de 100 µg. Finalmente, la invención se refiere a composiciones que contienen isoflavones aislados de acuerdo con el procedimiento de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Típicamente, el procedimiento de esta invención se conduce colocando la resina de intercambio de anión en un lecho, columna o reactor a través del cual la lechada de proteína se hace pasar. El lecho, columna o reactor tiene por lo menos una entrada y por lo menos una salida, y preferiblemente se opera como una columna vertical en el modo de "flujo ascendente". En otra modalidad, la resina preacondicionada puede ser añadida a un tanque conteniendo la lechada de proteína y después de período apropiado para que se presente la reacción, la resina conteniendo los isoflavones atrapados es filtrada de la lechada. La resina de intercambio de anión típicamente es una resina macroporosa y es preferiblemente una resina macroporosa de tipo I o II. En una modalidad preferida, la resina de intercambio de anión se selecciona de resinas de intercambio de anión de base débil, resinas de intercambio de anión de base fuerte y mezcla de las mismas. Los ejemplos representativos de las resinas de intercambio de anión en la presente invención incluyen Amberlite® RA95, IRA-910, e IRA-900 vendidas por Rohm and Haas Company, Dowex™-22 y MSA™-1 vendidas por Dow Chemical y Purolite™ A510 y A500 vendidas por Purolite Company. Como se utiliza de la presente y en las reivindicaciones, el término resina significa que incluye geles, los cuales aquellos expertos en la técnica podrían entender que son útiles en el procedimiento descrito en la presente. Los ejemplos representativos de dichos geles son Amberlite® IRA 410 (gel de Tipo II, anión de base fuerte) vendido por Rohm and Haas Comany, IRA 402 es un gel de intercambio de anión de base fuerte de Tipo I que no es macroporoso que podría ser útil. Los contraiones representativos útiles en la resina de intercambio de anión de acuerdo con esta invención, incluyen acetato, citrato, cloruro, bisulfato, carbonato y bicarbonato. Ya que la mayoría de las resinas de intercambio de anión son suministradas en la forma de cloruro, es posible utilizar dichas resinas de cloruro directamente sin pre-tratamiento. Como se discute más adelante, un procedimiento preferido para el pre-tratamiento de resina lava la resina de cloruro con una substancia cáustica para limpiar la resina, después se conduce un lavado con HCl para limpiar y controlar el crecimiento de microbios y después la resina es convertida a la forma de carbonato y/o bicarbonato. En la producción de proteína de planta utilizando el procedimiento de acuerdo con esta invención, el anión que es liberado de la resina como resultado del atrapamiento de los isoflavones, manganeso o nucleótidos es importante para la calidad del producto terminado. Es decir, la proteína resultante no debe ser desnaturalizada, no debe contener niveles inaceptables de grupos hidroxilo libres u otros aniones ofensivos (es decir, cloruro) que puedan producir un producto de proteína que sea inaceptable para uso en un producto nutricional. Por ejemplo, el aislado de proteína de soya típico contiene niveles suficientes de ¡soflavones, manganeso y nucleótidos, que el tratamiento con una resina de intercambio de anión que tenga cloruro como el contra ion, pueda producir una proteína resultante que tenga niveles excesivos de cloruro. En una forma similar, fiel contra ion es hidroxilo, el producto resultante puede necesitar ser tratado con ácido para neutralizar el producto básico, incrementando así inaceptablemente la carga mineral asociada con la proteína. En una modalidad preferida de esta invención, la resina de intercambio de anión utiliza un contraion, tal como carbonato con bicarbonato, el cual evita los problemas antes mencionados. Como se utilizan en la especificación y en las reivindicaciones anexas, el término "carbonato" significa carbonato y bicarbonato. Las proteínas que pueden ser utilizadas en el procedimiento de esta invención incluyen cualquier proteína de planta que contenga niveles detectables de isoflavones, manganeso y nucleótidos. Más específicamente, la proteína se puede obtener de soya, maíz, trigo, chícharos, frijoles, semilla de algodón, cacahuates, zanahorias, alfalfa, manzanas, cebada, género de hierbas sedoso, clavos, café, ajo, lúpulos, mariguana, avena, algas, pasto de huerto, perejil, arroz, centeno, salvia, ajinjolí, levadura, hongos, papas, hidrolizatos de los mismos y mezclas de los mismos. Se prefiere que la proteína sea un concentrado o aislado de proteína, en donde los niveles de grasas, aceites y carbohidratos hayan sido reducidos. Se ha determinado que la presencia de grasas y aceites reduce la eficiencia del procedimiento del invención. No se requiere de una proteína intacta en el producto final, el procedimiento de la invención puede ser utilizado en hidrolizatos de proteína y/o aislados, también. Los agentes químicos útiles para convertir la resina a la forma que hidróxido incluyen hidróxido de sodio, hidróxido de calcio, hidróxido de potasio, e hidróxido de magnesio. El agente más preferido es hidroxilo de sodio. Los agentes químicos útiles para convertir la resina a la forma de cloruro o sulfato incluyen ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, y cloruro de sodio. El agente preferido es ácido clorhídrico. Los agentes químicos útiles para convertir la resina a la forma de carbonato o base libre incluyen cualquiera de las sales de base débil tales como carbonato de sodio, bicarbonato de sodio e hidróxido de amonio. El bicarbonato de sodio es el agente más preferido para la recuperación de proteína ya que produce un efluente de proteína a una escala de pH de 6.6-9.5. Para la recuperación de isoflavones, esto no es crucial. Aquellos expertos en la técnica de la tecnología de intercambio de ion apreciarán que la lechada de proteína que contiene los isoflavones, manganeso o nucleótidos, aunque está en contacto con la resina de intercambio de anión, debe estar a un pH que no desnaturalice la proteína, que puede ocasionar la obturación de la columna. Además, el ajuste del pH más allá de neutro, agregará niveles significativos de aniones a la lechada, los cuales competirán para sitios de contraion. Típicamente, un pH de aproximadamente 5.5 a 10 es satisfactorio. Preferiblemente, el pH de la alimentación de lechada de proteína puede variar de 6.0 a 8.0. El pH del efluente de lechada de proteína (que deja la columna o el lecho) debe estar cerca al pH al cual la proteína será utilizada en un producto final. De esta manera, si una proteína de planta tratada de acuerdo con esta invención va a ser utilizada en una fórmula para infantes, el pH del efluente debe ser de aproximadamente 6.0 a 7.5. En una modalidad preferida, la alimentación de proteína de planta a la resina debe estar lo más libre posible de aniones añadidos (es decir, -OH, -Cl, y similares). La adición de ácidos, bases, sales y similares a la alimentación de lechada de proteína reduce la eficiencia de la columna para remover los isoflavones, manganeso o nucleótidos de la lechada de proteína. Como aquellos expertos en la técnica apreciarán, las resinas de intercambio tiene en una capacidad limitada y pueden ser regeneradas a un estado activo después del agotamiento o casi agotamiento. De esta manera, como se contempla en esta invención, las resinas de intercambio después de hacer contacto con la proteína de planta son regeneradas o reacondicionadas a través de pasos conocidos a la forma aniónica o muy preferiblemente a través de los pasos que comprenden: 1) separar ia resina de cualquier residuo (es decir, proteína) y convertir a la forma de hidróxido, por ejemplo, a través del uso de hidróxido de sodio; 2) convertir la resina a la forma de cloruro o sulfato; y 3) convertir los sitios de base fuerte sobre la resina a la forma de carbonato y convertir los sitios de base débil a la forma de base libre. Aquellos expertos en la técnica de resina intercambio de ion apreciarán que se pueden utilizar regeneraciones no acuosas y de alcohol-agua. Una modalidad preferida del procedimiento de acuerdo con la presente invención incluye el paso de homogeneizar la lechada de proteína de planta antes de hacer contacto con la resina. Se ha encontrado que la homogeneización o tratamientos similares a la misma en el procedimiento de esta invención, incrementa la remoción efectiva de isoflavones, manganeso y nucleótidos de la lechada. Además, la homogeneización de la lechada de proteína antes de hacer contacto con la resina, reduce la caída de presión a través del lecho o columna de la resina, lo cual facilita la producción fácil y económica de una proteína de planta para utilizarse en productos nutricionales. En algunas modalidades, el objetivo es recuperar los compuestos de isoflavones o fitoestrógenos separados del material de proteína de planta. En este caso, la resina es tratada con un agente de liberación de isoflavones, el cual hace que los isoflavones se eluyan de la resina. Los agentes de liberación de isoflavones representativos que son útiles en la presente invención incluyen alcoholes tales como etanol, metanol, propanol, pentanol y similares; solventes orgánicos tales como heptano, decano, ciciohexano, benceno, tolueno y similares; soluciones alcalinas a base de agua tales como NaOH, KOH, e hidróxido de amonio; soluciones acidas a base de agua tales como HCl, y similares. En general, el agente de liberación de isoflavones debe separar los isoflavones de la resina y solubilizar los isoflavones. Aquellos expertos en la técnica fácilmente pueden determinar los agentes de liberación de isoflavones apropiados sin experimentación indebida. La presente invención también está dirigida a un islado de proteína de planta que tiene niveles específicos de isoflavones y a una proteína de planta que ha sido sometida al procedimiento descrito en la presente y a productos nutricionales que se hacen a partir de dichas proteínas. También se contemplan aquí alimentaciones para animales que están substancialmente libres de isoflavones. Más específicamente, la presente invención se refiere a una proteína de planta que contiene menos de aproximadamente 30 µg de isoflavones por gramo de proteína, menos de aproximadamente 450 µg de manganeso y menos de aproximadamente 10 µg de equivalentes de nucleótido por gramo de proteína. En una modalidad muy preferida, la proteína se deriva de soya y contiene menos de 20 µg de isoflavones por gramo de proteína. En una modalidad muy preferida, la proteína de planta contiene menos de 10 µg de isofiavones por gramo de proteína, menos de 5 mg de nucleótidos por gramo de proteína y menos de 200 µg de manganeso por gramo de proteína. Los siguientes ejemplos describen modalidades específicas, pero no limitantes, de la presente invención. Los aspectos de la presente invención, los cuales se cree que son novedosos, se establecen con particularidad en las reivindicaciones anexas y deben entenderse como una estructura y forma de operación a través de los siguientes ejemplos detallados.

EJEMPLO 1 Procedimiento para Tratar Proteína de Planta El procedimiento de acuerdo con la presente invención se utilizó para aislar isoflavones y para producir un total de 221 kg de un polvo de aislado de soya con un bajo contenido de isoflavones, un bajo contenido de manganeso y un bajo contenido de nucleótido, que se utilizó en la fabricación de una fórmula para infantes. Se requirió un total de seis (6) operaciones de fabricación para producir el aislado de proteína de soya requerido. Una cantidad substancial de experimentación fue conducida en una escala de 50 litros para dar como resultado el mejor modo, descrito la presente. El material de partida de proteína de soya utilizado en este ejemplo se obtuvo de Archer Daniels Midland, Inc. (ADM) de Decatur, IL, en forma cuajada. La cuajada o leche de proteína fue del producto de aislado de proteína de soya comercialmente disponible conocido como Ardex F®. En un procedimiento comercial típico, se extrajeron proteínas de soya a un pH ligeramente alcalino de hojuelas de soya desgrasada o de harina de soya desgrasada. La fracción de proteína después se precipitó del extracto ajustando el pH al punto isoeléctrico de las proteínas (pH de 3.8 a 6.0). Ya que la mayoría de las proteínas son ¡nsolubles a este pH, se forma una cuajada y la cuajada de proteína puede ser separada de los azúcares solubles, sales, etc., a través de centrifugación. Para completar la purificación, la cuajada de proteína se lava con agua por lo menos una vez a este pH isoeléctrico, después la proteína es secada por aspersión ya sea como tal o después de volver a suspender a un pH neutro. En los siguientes experimentos, ADM suministró la cuajada isoeléctrica a un contenido de sólidos total de 10 a 14% y a un pH de aproximadamente 4.5. La cuajada de soya suministrada se diluyó a un contenido de sólidos total de aproximadamente 6.5% con agua y se colocó en recipientes encamisados con vapor. Cada lote de la lechadas de proteína en agua pesó aproximadamente 908 kg. La lechada después se calentó a aproximadamente 49°C y se neutralizó a un pH de 6.8 con NaOH. La lechada después se filtró a través de colador de 60 mallas, se procesó y se homogeneizó a UHTST (tiempo corto a temperatura ultra alta). La inyección de vapor a UHTST fue de 152°C y se mantuvo durante 10 segundos. Se determinó que la exposición de intercambio de anión después del tratamiento a UHTST produce una proteína con propiedades organolépticas no deseadas. La lechada después se enfrió a 55°C y se homogeneizó a 6895 que kPa. La lechada después fue transferida al sistema de intercambio de ion. Un aspecto de la presente invención reside en el descubrimiento de que los tratamientos de tiempo corto a temperatura ultra alta (UHTST) necesitan ser conducidos antes del contacto de la lechada con la resina para evitar el deterioro de la lechada durante tiempos de procesamiento extendidos. El procedimiento es conducido a temperaturas en donde puede ocurrir un rápido crecimiento microbiológico. Representativo de las condiciones a UHTST útiles en la presente invención son temperaturas de 120°C a 155°C y tiempos de 1 a 60 segundos. Las temperaturas más bajas están asociadas con los tiempos de mantenimiento más largos. Este tratamiento a UHTST, antes de poner en contacto a la lechada con la resina, proporcionan estabilidad microbiológica, mientras reduce al mínimo la degradación de nutrientes. El sistema de intercambio de ion comprendió una columna forrada de la con hule, de acero inoxidable teniendo puertos de entrada y de salida y una altura de 401 cm y un diámetro de 30.5 cm. Se colocaron en la columna 70 litros de la resina de intercambio de anión Amberlite® IRA-910 de Rohm and Haas Co. de Philadelphia, Pennsylvania. IRA-910 es una resina de intercambio de anión fuertemente básica macroreticular. La basicidad de esta resina se deriva de la funcionalidad de amonio cuaternario con una resistencia básica ligeramente más baja que una resina de intercambio de anión de tipo 1. Esta resina es suministrada en la forma de cloruro y está aprobada por la United States Food and Drug Administration (FDA) (después de la ciclización de condición) para utilizarse en el procesamiento de productos comestibles. Antes de hacer contacto con la cuajada de proteína, la resina fue preacondicionada. La resina fue preacondicionada a través del contacto en un modo de flujo ascendente con 6% de peso de NaOH a una velocidad de flujo de 4.6 a 5.7 litros por minuto durante 30 minutos. El lecho de resina después se lavó con agua desionizada durante 10 a 15 minutos en el modo de flujo ascendente. La resina después se puso en contacto con 1.0% en peso de HCl en un modo de flujo descendente a 16 litros por minuto. La resina después se lavó con agua desionizada en el modo el flujo descendente durante aproximadamente 30 minutos. Se añadieron 2.8 kg de bicarbonato de sodio a aproximadamente 196 litros de agua y se agitó para disolver. Esta solución después fue bombeada hacia la columna en un modo de flujo descendente a aproximadamente 4 litros por minuto. El lecho otra vez fue enjuagado con agua desionizada hasta que la conductividad del efluente fue de 300 µmhos o menos. El lecho de resina después se lavó contracorriente para remover el aire y volver a clasificar la resina. El lecho de resina se dejó sedimentar naturalmente y el agua se drenó de la columna. La columna ahora está lista para el ciclo del servicio después de drenar el agua hacia la parte superior del lecho de resina. La lechada de proteína fue bombeada como flujo ascendente a través de la columna de intercambio de ion a una velocidad de flujo de 3.6 a 3.8 kg por minuto. La temperatura de entrada de la lechada fue de 55-60°C y el tiempo de contacto fue de aproximadamente 20 minutos como mínimo. La lechada de proteína que sale de la columna fue enfriada, se tomaron muestras y después se secaron por aspersión utilizando técnicas y equipo convencionales. La columna antes del siguiente lote fue regenerada con 6% de NaOH, 1% de HCl y 1.5% de NaHCO3 (bicarbonato de sodio), como se describió anteriormente para la preparación inicial del lecho de resina. Todas las soluciones fueron preparadas con agua desionizada.

RESULTADOS Un total de seis lotes fueron fabricados para producir un total de aproximadamente 221 kg de polvo de aislado de soya con intercambio de ion. Se tomaron tres (3) muestras a varios tiempos durante el procesamiento de cada lote: 1) la lechada de proteína alimentada hacia la columna de intercambio de ion; 2) efluente desde la columna; y 3) polvo seco. Las muestras fueron analizadas para perfiles minerales de sodio, potasio, fósforo, cloro, calcio, magnesio, manganeso, aluminio y flúor. Las muestras también fueron analizadas para isoflavones y nucleótidos. Con el fin de hacer comparaciones entre los líquidos y los polvos posibles, la concentración del polvo fue normalizada a 6.5% como un contenido total de sólidos. Los niveles medios y desviaciones normales para cada analito antes y después del intercambio de ion fueron calculados para las seis operaciones. Los resultados que se presentan en el Cuadro I. Observar que la reducción está expresada como un valor positivo, mientras que un valor negativo representa un incremento en la concentración de analito.

CUADRO I Perfil Mineral Mineral % de Reducción Fósforo 73.3 ± 3.4 Calcio 16.5 + 4.2 Magnesio 11.4 ± 5.1 Sodio -6.3 ± 3.9 Potasio -7 ± 21 Manganeso 31 ± 10 Aluminio 6 ± 15 Cloruro -270 ± 110 Flúor 48 ± 29 La reducción más significativa en la concentración del tratamiento de intercambio de ion fue observada en el total de fósforo, flúor y manganeso. La reducción en el fósforo es consistente con las enseñanzas de la patente de E.U.A. 5,248,804, ya que una gran porción del fósforo inherente en la soya existe como una sal de fitato. En contraste, el efluente mostró un incremento significativo en el cloruro. Esto es consistente con el hecho de que HCl es uno de los regeneradores utilizados después del enjuague con una solución cáustica y la resina de base fuerte tiene algunos sitios de base débil.

Los perfiles de calcio, magnesio, manganeso, flúor y aluminio antes y después del tratamiento mostraron una reducción. De este grupo, el manganeso mostró una reducción significativa (31 ± 10%). Sorprendentemente, cuando se comparó con otros metales multivalentes, el aluminio (carga +3) permaneció esencialmente sin cambio. Además, la remoción del calcio y magnesio puede ser explicada como la adsorción o quelatación con fitato. Los que acciones monovalentes, sodio y potasio, fueron relativamente no afectados por el tratamiento de intercambio de ion (-6.3 ± 3.9% y -7 ± 21%, respectivamente). Los valores negativos en realidad indican un consumo ligero tanto de sodio como de potasio. Estos datos soportan el comportamiento típico de la resina de intercambio de anión ya que los cationes monovalentes no pueden ser intercambiados o adsorbidos por la resina aniónica. Un beneficio importante del procedimiento de la presente invención es que se recuperan altos niveles de proteína a partir de los aislados de proteína de planta tratados. Esto significa que se pierde muy poca proteína en la columna por lecho de resina. En estos experimentos, sobre el 90 por ciento de la proteína que entra a la columna de resina fue recuperado en el efluente. Es importante observar que la eficiencia total del procedimiento de esta invención se mejora cuando la solubilidad y ia homogeneidad de la lechada de proteína es mejorada. De esta manera, la pre-filtración (a través de un filtro de 60 mallas) y la homogeneización enormemente reducen la caída de presión a través de la columna, la cual incrementó la eficiencia del procedimiento de la invención. En comparación, el procedimiento sin la pre-filtración y homogeneización dio como resultado una caída de presión inicial de aproximadamente 138 kPa, mientras que la pre-filtración y homogeneización dieron como resultado una caída de presión inicial de aproximadamente 14 a 35 kPa. Después de aproximadamente 4 a 6 horas de operación sin pre-filtración y homogeneización, se experimentaron caídas de presión de 276 a 414 kPa, mientras que con la pre-filtración y homogeneización, las caídas de presión fueron de aproximadamente 55 a 83 kPa. El procedimiento de esta invención también fue muy efectivo para remover nucleótidos. Los procedimientos analíticos utilizados son como se describe en la patente de E.U.A. 5,492,899 de Masor et al. La remoción que total de los nucleótidos potencialmente disponibles (TPAN) se encontró que fue de aproximadamente 57.4 ± 7.2%. Los isoflavones fueron casi completamente removidos a través del procedimiento de la presente invención. El Cuadro II establece ios isoflavones específicos, el nivel de la lechada de alimentación, el nivel en el efluente y el nivel en el polvo.

CUADRO II % de Reducción ISOFLAVONES AUMENTACIÓN EFLUENTE POLVO AUMENT. ALIMENT. µgte* µg * µg/g VS. POLVO VS. EFLUENTE Daidzin 4.12 + 0.8 0.51 ± 0.21 0.68 ± 0.37 83.5 ± 6.8 87.6 Genistina 10.0 ±2.8 0.82 ± 0.55 0.87 ±0.72 91.4 ±5.9 91.8 Daidseína 3.0 ±6.5 0.10 ±0.0 0.10 ±0.0 97.4 ±4.3 97.4 Genisteína 3.7 ±1.4 0.10 ±0.0 0.10 ±0.0 97.3 ±1.4 97.3 EJEMPLO II Aislamiento de Isoflavones - Lavado con Alcohol En este experimento, se aislaron un isoflavones de cuajada de soya utilizando la resina de intercambio de ion previamente descrita y después enjuagando o liberando los isoflavones de la resina con una solución de alcohol/agua. En una columna de laboratorio, se pre-acondicionó Amberlite® IRA-910 (80 litros) como se describió en el Ejemplo I y la cuajada de soya, como se describió en el Ejemplo I, se hizo pasar sobre la columna hasta que los niveles de fósforo en el efluente se acercaron a la ruptura (es decir, niveles de alimentación). La columna se enjuagó con agua caliente (49°C) para remover la proteína atrapada y después con agua fría (19°C). Después, se bombeó una solución es 50% en peso de etanol y agua a través de la columna a aproximadamente cuatro litros por minuto en el modo de flujo descendente. La solución de alcohol/agua se recirculó a través de la columna durante aproximadamente una hora (3 volúmenes el lecho). Durante la recirculación, el contenido de alcohol fue diluido a aproximadamente 5% a través de la mezcla con agua en la columna. Aproximadamente 100 litros de la solución rica en isoflavones fueron recuperados. El procedimiento analítico para el análisis de isoflavones se establece en el Ejemplo IV. La alimentación de proteína de soya contuvo 2.7% en peso de daidzina y 0.6% de genistina. La solución de la columna contuvo 850 µg/l de daidzina y 380 µg/l de genistina. La extracción puede ser mejorada remojando la resina en el agente de liberación de isoflavones (es decir, una solución de alcohol) e incrementando el porcentaje de alcohol hasta aproximadamente 80% en peso. También se pueden observar incrementos en la producción de isoflavones cuando el agente de liberación de isoflavones es calentado a aproximadamente 49°C.

EJEMPLO lll Aislamiento de Isoflavones - Regeneración En este experimento, se analizó el contenido del efluente de regeneración. Se siguió el procedimiento del Ejemplo I, excepto que durante la regeneración de la resina en el tratamiento con NaOH, se retiraron 240 gramos de muestra. El análisis de esta muestra para isoflavones se establece en el Cuadro lll.

CUADRO lll Isoflavones de la Regeneración Daidzin Genistina Daidzeína Genisteína µg/g 2.6 1.2 <0.1 <0.1 nanomoles/g 6.2 2.8 <0.2 <0.2 Como los datos de los Ejemplos II y lll indican, el procedimiento de acuerdo con esta invención proporciona medios efectivos económicos para el aislamiento y la concentración de compuestos de isoflavones.

EJEMPLO IV Producto Nutricional Utilizando Proteína de Soya con un Bajo Contenido de Isoflavones La proteína de soya producida en el Ejemplo I se utilizó para producir una fórmula para infantes. Después se analizaron para el contenido de isoflavones un producto de control y la fórmula para infantes de acuerdo con esta invención. El procedimiento utilizado para producir los productos experimental y de control fue aquel descrito en la patente de E.U.A. 5,021,245 de Borsche et al., excepto que la fibra fue omitida. Típicamente, las fórmulas para infantes a base de proteína de planta contienen de 1.5 a 2.0% en peso de proteína como alimento (lista para comer o "RTF"). Una modalidad preferida es de 1.6 a 1.8% en peso de proteína como alimento. De esta manera, como se describe más adelante, una fórmula para infantes hecha con una proteína de planta tratada de acuerdo con esta invención generalmente tendrá un contenido de isoflavones menor que 600 µg/litro de fórmula. (30 µg de isoflavones por gramo de proteína x 20 gramos de proteína por litro de fórmula (RTF) = 600 µg de ¡soflavones por litro de fórmula de RTF). Se utilizó un método de HPLC (cromatografía de líquido de alta presión), como se describe más adelante, para cuantificar los ¡soflavones de soya principales (genistina, daidzina, genisteína y daidzeína) utilizando un método adaptado de los tres siguientes artículos (3), cuyas enseñanzas son conocidas en la técnica. 1) Setchell, KDR y Welch, MB J. Chrom. 386 (1987) 315-323 2) Wang, G., Kuian, SS, Francis, OJ, Ware, GM y Corman, AS J. Agrie. Food Chem. 38 (1990) 185-190 3) Barnes, S., Kirk M., y Coward, L. J. Agrie. Food. Chem. 42 (1994) 2466-2474. Las muestras de la fórmula para infantes experimental y de control lista para comer fueron obtenidas y 20 ml de cada una se cargaron con un matraz de fondo redondo de 250 ml tarado. Después se añadieron 80 ml de alcohol etílico y la mezcla se agitó. Se unió un condensador al matraz y las muestras se llevaron a reflujo a 80°C durante dos horas. Las mezclas después se enfriaron a temperatura ambiente y se transfirieron cuantitativamente a un matraz volumétrico de 100 ml. El precipitado y el matraz fueron enjuagados con 15 ml de 80% de alcohol (v/v). Los matraces volumétricos se llevaron a un volumen con 80% de alcohol y las muestras después se mezclaron muy bien. Las muestras se filtraron a través de un papel Whatman™ No. 41 y después se colocaron 15 ml de cada filtrado en un tubo de ensayo de vidrio tapado de 15 mi cónico graduado. Cada tubo se colocó en un baño de agua caliente y se utilizó una corriente de nitrógeno para el vapor a cada muestra a 3 ml. Después, los tubos fueron enfriados a temperatura ambiente y se añadió 1 ml de metanol a cada tubo y después se diluyó a 10 ml con agua y se mezcló bien. Después, se filtraron 1.5 ml de cada muestra a través de una membrana de polipropileno de 0.45 µm a un frasco de automuestra de HPLC. El análisis de prueba para ¡soflavones utilizando HPLC de fase inversa fue conducido con el sistema de HPLC como sigue: Columna Vydac™ C18 Pharmaceutical;250x4.6 mm;5 µm Detección absorbancia UV a 254/280 nm Inyección 50 mcL Temperatura ambiente Velocidad de flujo 0.8 ml/min Tiempo de operación 120 minutos Eluyente A 950 volúmenes de agua; 50 volúmenes de CH3CN; 1 volumen de ácido trifluoroacético Eluyente B 400 volúmenes de agua; 600 volúmenes de CH3CN; 1 volumen de TFA Programa de Gradiente: Tiempo (minutos) 0 5 95 100 102 120 % de Eluyente B 0 0 60 100 100 0 Los resultados, establecidos en el Cuadro IV, indican que el procedimiento del invención puede ser utilizado para producir un producto nutricional que tenga nivel es enormemente reducidos de isoflavones.

CUADRO IV Isoflavones de soya Control µg/g Experimental µg/g* Daidzina 11.6 < 1.0 Daidzeína 1.0 <1.0 Genistina 19.4 < 1.0 Genisteína 2.2 < 1.0 TOTAL 34\2 < 1.0 N/A * a límite de detección.

EJEMPLO V Estudio de Tolerancia En el momento de presentar esta solicitud, se realizó un estudio clínico de los efectos fisiológicos de estrógenos o isoflavones en plantas en la fórmula para infantes hecha de acuerdo con esta invención. Antes de este estudio extensivo, se condujo un estudio de tolerancia más pequeño para determinar la tolerancia total de las fórmulas de soya con un contenido reducido de ¡soflavones en bebés saludables. El estudio de tolerancia fue un estudio de tres semanas, doblemente enmascarado, aleatorio, utilizando 145 bebés saludables con una edad de dos a cinco semanas. Los bebés fueron alimentados con una fórmula a base de leche normal durante un período de línea de base de una semana, y después fueron alimentados con una fórmula de soya normal durante dos semanas, una fórmula a base de aislado de soya que fitato con un bajo contenido de isoflavones, una fórmula a base de aislado de soya hidrolisada con un contenido reducido de fitato e isoflavones o una fórmula utilizando la proteína producida en el Ejemplo I. Las variables de salida principales fueron características de evacuación, consumo de fórmula e incidencia de arrojar y vómito. Las variables secundarias fueron ganancias de peso y respuestas parenterales al cuestionario de tolerancia de alimentación. El consumo de fórmula y la incidencia de arrojar y vómito no difirieron entre los grupos en la línea de base o durante período del estudio. La consistencia de rango de evacuación media fue más suave para bebés alimentados con la fórmula hidrolizada comparado con los otros experimentos. Los padres asociaron evacuaciones aguadas y más frecuentes con la fórmula hidrolizada. Los bebés alimentados con la fórmula utilizando la proteína producida en el Ejemplo I presentaron menos constipación que la línea de base. Las ganancias de peso medio fueron similares para todos los grupos de estudio. La conclusión de este estudio fue que la remoción de fitato y/o isoflavones de la fórmula a base de soya tuvieron un impacto mínimo en la tolerancia.

APLICABILIDAD INDUSTRIAL El procedimiento descrito en esta invención es un procedimiento muy efectivo, no costoso y confiable para la remoción comercial de isoflavones, manganeso y nucleótidos de las proteínas de planta. El procedimiento produce un producto de proteína de planta que tiene características altamente deseables tales como un contenido de isoflavones menor que 30 µg/g de proteína, menor que 450 µg de manganeso por gramo de proteína y menor que 10 mg de nucleótidos por gramo de proteína. La proteína resultante del tratamiento con el procedimiento descrito en la presente también tiene un mejor sabor (menos favor de "tipo frijol"), un color mejorado (más claro) y funcionalidad mejorada (es decir, habilidad para formar una emulsión estable). Además, los isoflavones recuperados del procedimiento de liberación de regeneración/alcohol después de hacer contacto con la resina son valiosos como compuestos potenciales contra el cáncer. El uso a escala comercial del procedimiento de esta invención es mejorado cuando la lechada de proteína es pre-filtrada y homogeneizada antes de hacer contacto con el lecho de resina. Las resinas macroporosas en la forma de bicarbonato son muy preferiblemente utilizadas. Como resultado del avance del inventor de la presente para el estado de la técnica, la industria nutricional ahora será capaz de producir económicamente productos que contengan niveles reducidos de isoflavones, manganeso y nucleótidos. Finalmente, los seres humanos y animales que consumen los productos producidos de acuerdo con esta invención se verán beneficiados por la abstinencia desiertos elementos nocivos contenidos en las proteínas de planta. Ya que ciertas modalidades representativas y detalles han sido presentados con el propósito de ilustrar la invención, será evidente para aquellos expertos en la técnica que se pueden hacer varios cambios y modificaciones en la misma sin apartarse del espíritu o alcance de la invención, como se establece en las reivindicaciones anexas.

Claims (24)

REIVINDICACIONES

1.- Un procedimiento para tratar una proteína de planta, que comprende: a) proporcionar una lechada de la proteína de planta que contiene isoflavones, manganeso o nucleótidos; b) proporcionar por lo menos una resina de intercambio de anión capaz de unir isoflavones, manganeso o nucleótidos presentes en dicha lechada de proteína; c) poner en contacto la lechada con dicha resina de intercambio de anión; y d) separa a la lechada de la resina de intercambio de anión, por lo que la lechada de proteína de planta tiene un contenido reducido de isoflavones, manganeso con nucleótidos.

2.- Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además los pasos de exponer la resina antes del contacto del paso c) a un agente que coloca sobre la resina un anión intercambiable que: i) no cambie el pH de la lechada de proteína en contacto fuera del escala de 6.0 a 9.5; y ii) no añada un anión objecionable a la lechada de proteína en contacto en el paso d).

3.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el paso de proveer por lo menos una resina de intercambio de anión comprende proporcionar una resina de intercambio de anión que contenga sitios de base fuerte y sitios de base débil, y que haya sido sometida a los pasos de: i) convertir a una forma de hidróxido; ii) convertir a una forma de cloruro o sulfato; y iii) convertir por lo menos algunos de los sitios de base fuerte a la forma de carbonato y por lo menos algunos de los sitios de base débil a la forma de base libre.

4.- Un procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque comprende además los pasos de: e) después del paso d), poner en contacto dicha resina de intercambio de anión, por lo menos un agente de liberación de isoflavones; y f) separar el agente de liberación de ¡soflavones que contiene isoflavones de dicha resina de intercambio de anión y recoger los ¡soflavones.

5.- Un procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque comprende los pasos de: e) después determinar el paso d), re-acondicionar la resina: i) exponiendo la resina a un agente, el cual separe la superficie de la resina del residuo y convierta a la resina a una forma de hidróxido; ii) exponiendo después la resina a un agente, ei cual convierta la resina ya sea a una forma de cloruro o a una forma de sulfato; y iii) exponiendo después la resina a un agente, el cual convierte por lo menos algo de la resina a una forma de carbonato; y f) llevar a la lechada de proteína de planta adicional a contacto con la resina re-aconclicionada; g) separar la lechada adicional de la resina.

6.- Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque comprende además la homogeneización de la lechada de la proteína que planta antes de poner en contacto la lechada con la resina de intercambio de anión.

7.- El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque comprende además un tratamiento de tiempo corto de temperatura ultra alta antes de poner en contacto la lechada con la resina de intercambio de anión.

8.- Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el paso c) comprende colocar la resina de intercambio de anión en la lechada.

9.- Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde los pasos c) y d) comprenden hacer pasar la lechada a través de una estructura, la cual contiene la resina de intercambio de anión y tiene por lo menos una entrada y una salida.

10.- Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la estructura es una columna vertical y en donde la lechada entra a dicha columna vertical a través de la entrada y expulsa dicho volumen a través de la salida, la entrada estando ubicada más abajo que la salida.

11.- Un procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3 a 10, en donde dicha resina de intercambio de anión es una resina macroporosa y el carbonato es bicarbonato.

12.- Una composición que comprende una planta de proteína que tiene un contenido reducido de isoflavones, manganeso o nucleótidos, dicha proteína de planta hecha de acuerdo con el procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.

13.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con la reivindicación 12, en donde dicha proteína tiene un contenido reducido de por lo menos un componente de isoflavones, manganeso o nucleótido seleccionado del grupo que consiste de: (i) menos de 30 µg de isoflavones por gramo de proteína; (ii) menos de 450 µg de manganeso por gramo de proteína; y (iii) menos de 10 mg de nucleótidos por gramo de proteína.

14.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con la reivindicación 13, donde dicha proteína comprende menos de 20 µg de isoflavones por gramo de proteína; y menos de 400 µg de manganeso por gramo de proteína.

15.- Una composición de proteína de planta que comprende proteína y menos de 30 µg de isoflavones por gramo de proteína.

16.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con la reivindicación 15, en que donde dichos isoflavones están presentes en menos de 10 µg por gramo de proteína.

17.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con la reivindicación 15 o 16, caracterizada porque dicha composición de proteína contiene menos de 250 µg de manganeso por gramo de proteína.

18.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con una de las reivindicaciones 15 a 16, que comprende en menos de 20 µg de isoflavones por gramo de proteína; y menos de 200 µg de manganeso por gramo de proteína.

19.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con una de las reivindicaciones 12 a 18, en donde dicha composición es un alimento para ganado, un producto nutricional o una fórmula para infantes.

20.- Una composición de proteína de planta de acuerdo con la reivindicación 19, en donde dicha composición es una fórmula para infantes que contiene menos de 200 µg de isoflavones por litro de fórmulas listas para comer.

21.- Un aislado de isoflavones obtenido de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 4.

22.- Un aislado de isoflavones obtenido de acuerdo con la reivindicación 21, en donde la lechada de proteína se selecciona de soya o chícharo.

23.- El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el agente de liberación de isoflavones se selecciona de soluciones acuosas de ácidos, soluciones acuosas de bases, alcoholes, mezcla de alcohol/agua, solventes orgánicos, y mezclas de los mismos.

24.- Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3 o 5, en donde el agente empleado en el paso i) se selecciona de hidróxido de sodio e hidróxido de potasio, y en donde el agente empleado en el paso ii) se selecciona de ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y cloruro de sodio; y en donde el agente empleado en el paso iii) se selecciona de carbonato de sodio, bicarbonato de sodio e hidróxido de amonio.