MXPA98009292A - Benzotiofenos, formulaciones que los contienen, ymetodos - Google Patents

Abstract

La invención proporciona los compuestos de la fórmula I, en donde R1 es hidrógeno, hidroxilo, alcoxi de 1 a 4átomos de carbono, -OCOO(alquilo de 1 a 6átomos de carbono), -OCO(alquilo de 1 a 6átomos de carbono), -OCOAr en donde Ar es fenilo o fenilo opcionalmente sustituido, -OSO2 (alquilo de cadena lineal de 4 a 6átomos de carbono), o -OSO3H;R2 es R1, Cl o F;con la condición de que al menos uno de R1 o R2 sea -OSO3H;R3 es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidino, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, diisopropilamino, o 1-hexametilenimino;y n es 2ó3;o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. La presente invención se refiere además a las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la fórmula (I), que contienen opcionalmente estrógeno o progestina, y el uso de tales compuestos, solos, o en combinación con estrógeno o progestina, para aliviar los síntomas del síndrome post-menopáusico, particularmente la osteoporosis, condiciones patológicas relacionadas al sistema cardiovascular, y cáncer dependiente de estrógeno. Los compuestos de la presente invención son tambiénútiles para inhibir la enfermedad fibroide uterina y la endometriosis en mujeres y la proliferación de células del músculo liso aórtico, particularmente restenosis, en humanos.

Description

BENZOTIOFENOS, FORMULACIONES QUE LOS CONTIENEN, Y MÉTODOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a los campos de la química farmacéutica y orgánica - y proporciona compuestos de benzotiofeno, los cuales son útiles para el tratamiento de las diversas indicaciones médicas asociadas con el síndrome post-menopáusico, y enfermedad fibroide uterina, endometriosis, y proliferación de células del músculo liso aórtico. La invención se refiere además a las composiciones farmacéuticas .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El "síndrome post-menopáusico" es un término utilizado para describir diversas condiciones patológicas que f ecuentemente afectan a las mujeres quienes han entrado a o completado la metamorfosis fisiológica conocida como menopausia. Aunque son contempladas numerosas patologías por el uso de este término, tres efectos mayores del síndrome post-menopáusico son la fuente del mayor interés médico a REF: 28605 largo plazo: la osteoporosis, los efectos cardiovasculares tales como la hiperlipidemaa, y el cáncer dependiente de estrógeno, particularmente cáncer de mama y de útero. La osteoporosis describe un grupo de enfermedades que surgen de diversas etiologías, pero las cuales están caracterizadas por la pérdida neta de la masa ósea por unidad de volumen. La consecuencia de esta pérdida de la masa ósea y la fractura ósea resultante es la falla del esqueleto para proporcionar soporte estructural adecuado para el cuerpo. Uno de los tipos más comunes de la osteoporosis es aquel asociado con la menopausia. La mayoría de las mujeres pierden desde aproximadamente 20% hasta aproximadamente 605 de la masa ósea en el compartimiento trabecular del hueso dentro de 3 a 6 años después del cese de las menstruaciones. Esta pérdida rápida está en general asociada con un incremento de la resorción y formación ósea. No obstante, el ciclo resortivo es más dominante y el resultado es una pérdida neta de la masa ósea. La osteoporosis es una enfermedad común y seria entre las mujeres post-menopáusicas . Existen un estimado de aproximadamente 25 millones de mujeres en los Estados Unidos, solamente, quienes están afectadas con esta enfermedad. Los resultados de la osteoporosis son personalmente dañinos y también explican una gran pérdida económica debido a su cronicidad y a la necesidad para apoyo extenso y a largo plazo (hospitalización y cuidado doméstico de enfermería) por las secuelas de la enfermedad. Esto es especialmente cierto en los pacientes de mayor edad. Además, aunque no se piense en general que la osteoporosis sea una condición que amenaza la vida, una tasa de mortalidad de 20% a 30% está relacionada con las fracturas de la cadera en mujeres de edad avanzada. Un gran porcentaje de esta tasa de mortalidad puede estar directamente asociado con la osteoporosis post-menopáusica. La mayor parte del tejido vulnerable en el hueso para los efectos de la osteoporosis postmenopáusica es el hueso trabecular. Este tejido es frecuentemente denominado como hueso esponjoso o canceloso y está particularmente concentrado cerca de los extremos del hueso (cerca de las coyunturas) y en las vértebras de la espina. El tejido trabecular está caracterizado por pequeñas estructuras osteoides las cuales se interconectan una con la otra, así como el tejido cortical más sólido y denso el cual constituye la superficie exterior y el eje central del hueso. Esta red interconectada de trabéculas da soporte lateral a la estructura cortical externa y es crítica para la resistencia biomecánica de la estructura completa. En la osteoporosis post- enopáusica, es principalmente la resorción neta y la pérdida de las trabéculas las que conducen a la falla y a la fractura del hueso. A la luz de la pérdida de las trabéculas de las mujeres post-menopáusicas, no es sorprendente que la mayoría de las fracturas sean aquellas asociadas con los huesos que son altamente dependientes del soporte trabecular, por ejemplo las vértebras, el cuello de los huesos que soportan peso, tales como el fémur y el antebrazo. Por supuesto, la fractura de la cadera, las fracturas de Colles y las fracturas por trituración vertebral son marcas distintivas de la osteoporosis post-menopáusica. A este tiempo, el método más predominante para el tratamiento de la osteoporosis postmenopáusica es la terapia de reemplazo de estrógeno. Aunque esta terapia es en general exitosa, el cumplimiento del paciente con la terapia es principalmente bajo debido a que el tratamiento con estrógeno frecuentemente produce efectos colaterales indeseables. Recientemente, ha sido logrado un nuevo tratamiento para la osteoporosis post-menopáusica, por ejemplo, el tratamiento con bis-fosfonatos . Aunque esta terapia es efectiva, ésta sufre la desventaja del tratamiento únicamente del aspecto de la osteoporosis del síndrome post-menopáusico. Además, muchos reportes sobre el uso de los bisfosfonatos han revelado efectos colaterales gastrointestinales, indeseables. A todo lo largo del tiempo post-menopáusico, la mayoría de las mujeres tienen menor incidencia de enfermedad cardiovascular que los hombres de igual edad. Después de la menopausia, no obstante, la tasa de enfermedad cardiovascular en mujeres se incrementa lentamente para igualar la tasa observada en los hombres. Esta pérdida de protección ha sido ligada a la pérdida de estrógeno y, en particular, a la pérdida de la habilidad del estrógeno para regular los niveles de lípidos en suero. La naturaleza de la habilidad del estrógeno' para regular los lípidos en suero no es todavía bien comprendida, pero la evidencia a la fecha indica que el estrógeno puede sobrerregular los receptores de los lípidos de baja densidad (LDL) en el hígado para eliminar el exceso de colesterol. Además, el estrógeno parece tener algún efecto sobre la biosíntesis del colesterol, y otros efectos benéficos sobre la salud cardiovascular . Se ha reportado en la literatura que las mujeres pos t-menopáusicas que tienen terapias de reemplazo de estrógeno tienen un retorno de los niveles de lípidos séricos a las concentraciones del estado pre-menopáusico . De este modo, el estrógeno parecería ser un tratamiento razonable para esta condición. No obstante, los efectos colaterales de la terapia de reemplazo de estrógenos no son aceptables para muchas mujeres, limitando de este modo el uso de esta terapia. Una terapia ideal para esta condición sería un agente que pudiera regular el nivel de lípidos en suero como lo hace el estrógeno, pero que estuviera desprovisto de los efectos colaterales y los riesgos asociados con la terapia de estrógeno . La tercera patología mayor asociada con el síndrome post-menopáusico es el cáncer de mama dependiente del estrógeno y, a un grado menor, los cánceres dependientes del estrógeno de otros órganos, particularmente el útero. Aunque tales neoplasmas no están únicamente limitados a una mujer postmenopáusica, y el uso de los compuestos en la presente no está limitado a tales, éstos son más prevalentes en la población post-menopáusica más anciana. La quimioterapia actual de estos cánceres ha confiado fuertemente en el uso de los compuestos anties trogénicos tales como, por ejemplo, tamoxifeno. Aunque tales agonistas-antagonistas mixtos tienen efectos benéficos en el tratamiento de estos cánceres, y los efectos colaterales estrogénicos son tolerables en situaciones agudas que amenazan la vida, éstos no son ideales. Por ejemplo, estos agentes pueden tener efectos estimuladores sobre ciertas poblaciones de células cancerosas en el útero, debido a sus propiedades estrogénicas (agonistas) y pueden, por lo tanto, ser contraproducentes en algunos casos. Una mejor terapia para el tratamiento de estos cánceres sería un agente que es un compuesto antiestrogénico que tiene propiedades agonistas despreciables o no estrogénicas sobre los tejidos reproductores. En respuesta a la clara necesidad para nuevos agentes farmacéuticos que sean capaces de aliviar los síntomas de, entre otras cosas, el síndrome post-menopáusico, - la presente invención proporciona compuestos de benzotiofeno, las composiciones farmacéuticas de los mismos, y los métodos para utilizar tales compuestos para el tratamiento del síndrome post-menopáusico y otras condiciones patológicas relacionadas al estrógeno, tales como aquellas mencionadas más adelante. La fibrosis uterina (enfermedad fibroide uterina), es un problema clínico viejo e incluso actual que presenta una variedad de nombres, incluyendo enfermedad fibroide uterina, hipertrofia uterina, lieomiomata uterina, hipertrofia miometrial, útero fibroso, y metritis fibrótica. Esencialmente, la fibrosis uterina es una condición donde existe una deposición inapropiada de tejido fibroide sobre la pared del útero. Esta condición es una causa de la dismenorrea y de la infertilidad en mujeres. La causa exacta de esta condición es pobremente comprendida, pero la evidencia sugiere que es una respuesta inapropiada del tejido fibroide al estrógeno. Tal condición ha sido producida en conejos mediante la administración diaria de estrógeno por 3 meses. En cobayos, la condición ha sido producida por la administración diaria de estrógeno por 4 meses. Además, en ratas, el estrógeno provoca hipertrofia similar. El tratamiento más común de la fibrosis uterina involucra procedimientos quirúrgicos ya sea costosos y algunas veces una fuente de complicaciones tales como la formación de adherencias e infecciones abdominales. En algunos pacientes, la cirugía inicial es únicamente un tratamiento temporal y los fibroides vuelven a desarrollarse. En esos casos se realiza una histerectomía la cual efectivamente termina con los fibroides pero también con la vida reproductiva de la paciente. También, los antagonistas de la hormona de liberación de gonadotropina pueden ser administrados, pero su uso es disminuido por el hecho de que éstos conducen a la osteoporosis. De este modo, existe todavía una necesidad para nuevos métodos para el tratamiento de la fibrosis uterina, y los métodos de la presente invención satisfacen esa necesidad. La endometriosis es una condición de d"¡ smenorrea severa, la cual está acompañada por dolor severo, sangrado dentro de las masas endometriales o de la cavidad peritoneal y frecuentemente conduce a infertilidad. La causa de los síntomas de esta condición parece ser los desarrollos endometriales ectópicos que responden inapropiadamente al control hormonal normal y están localizados en los tejidos inapropiados . Debido a las localizaciones inapropiadas para el desarrollo endometrial, el tejido parece iniciar respuestas locales similares a las inflamatorias provocando infiltración de macrófagos y una cascada de eventos que conducen al inicio de la respuesta dolorosa. La etiología exacta de esta enfermedad no es bien comprendida y su tratamiento mediante terapia hormonal es diverso, pobremente definido, y marcado por numerosos efectos colaterales no deseados y quizás peligrosos. Uno de los tratamientos para esta enfermedad es el uso del estrógeno a baja dosis para suprimir el desarrollo endometrial a través de un efecto de retroalimentación negativa sobre la liberación de la gonadotropina central y la producción subsecuente de estrógeno en el ovario; no obstante, es algunas veces necesario utilizar estrógeno continuo para controlar los síntomas. Este uso del estrógeno puede frecuentemente conducir a efectos colaterales indeseables e incluso a riesgo de cáncer endometrial. Otro tratamiento consiste de la administración continua de progestinas las cuales inducen amenorrea, y al suprimir la producción de estrógenos ováricos pueden provocar regresiones de los desarrollos endometriales. El uso de terapia crónica con progestina está frecuentemente acompañado por los efectos colaterales de las progestinas, no placenteros en el sistema nervioso central, y frecuentemente conduce a la infertilidad debido a la supresión de la función ovárica. Un tercer tratamiento consiste de la administración de andrógenos débiles, los cuales son efectivos para controlar la endometriosis; sin embargo, éstos inducen severos efectos de masculinización . Varios de estos tratamientos para la endometriosis han estado también implicados en provocar un grado leve de pérdida ósea con terapia continua. Por lo tanto, los nuevos métodos de tratamiento de la endometriosis son deseables. La proliferación de las células del músculo aórtico liso juega un papel importante en las enfermedades tales como la aterosclerosis y la restenosis. La restenosis vascular después de la angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA) ha mostrado que es una respuesta tisular caracterizada por una fase temprana y una fase tardía. La fase temprana que ocurre de horas a días después de la PTCA es debida a la trombosis con algunos vasoespasmos, mientras que la fase tardía parece ser dominada por proliferación excesiva y migración de células del músculo liso aórtico. En esta enfermedad, la mortalidad celular incrementada y la colonización por tales células musculares y macrófagos contribuyen significativamente a la patogénesis de la enfermedad. La proliferación excesiva y la migración de las células del músculo liso aórtico vascular, pueden ser el mecanismo primario para la reoclusión de las arterias coronarias después de PTCA, aterectomía, angioplastia con láser y cirugía de injerto de derivación arterial. Ver "Intimal Proliferation of Smooth Muscle Cells as an Explanation for Recurrent Coronary Artery Stenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty", Austin y colaboradores, Journal of the American College of Cardi ology, 8: 369-375 (Agosto 1985) . La restenosis vascular permanece siendo una complicación mayor a largo plazo después de la intervención quirúrgica de las arterias bloqueadas, mediante angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA) , aterectomía, angioplastia con láser y cirugía de injerto de derivación arterial. En aproximadamente 35% de los pacientes quienes sufren PTCA, la reoclusión ocurre dentro de tres a seis meses después del procedimiento. Las estrategias actuales para tratar la restenosis vascular incluyen la intervención mecánica por los dispositivos tales como stents o terapias farmacológicas que incluyen heparina, heparina de bajo peso molecular, cumarina, aspirina, ceite de pescado, antagonista de calcio, esteroides y prostaciclina . Estas estrategias han fallado para disminuir la tasa de reoclusión y no han sido efectivas para el tratamiento y prevención de la restenosis vascular. Ver "Prevention of Restenosis after Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty: The Search for a ?Magic Bullet'", Hermans y colaboradores, Ameri can Heart Journal , 122: 171-187 (Julio 1991) . En la patogénesis de la restenosis ocurre proliferación y migración celular excesiva como resultado de los factores de crecimiento producidos por los constituyentes celulares en la sangre y la pared dañada de los vasos arteriales, lo cual es mediador de la proliferación de la célula del músculo liso en la restenosis vascular. Los agentes que inhiben la proliferación y/o la migración de las células del músculo liso aórtico son útiles en el tratamiento y prevención de la restenosis. La presente invención proporciona el uso de compuestos como inhibidores de la proliferación de la célula del músculo aórtico y, de este modo los inhibidores de la restenosis.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona los compuestos de la fórmula I (I. en donde R1 es hidrógeno, hidroxilo, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, -OCOO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCOAr en donde Ar es fenilo o fenilo opcionalmente sustituido, -OS02 (alquilo de cadena lineal de 4 a 6 átomos de carbono) , o -0S03H; R2 es R1, Cl o F; con la condición de que al menos uno de R1 o R2 sea -OSO3H; R3 es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil- 1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidino, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, diisopropilamino, o 1-hexametilenimino ; y n es 2 ó 3 ; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo . La presente invención se refiere además a las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la fórmula I, que contienen opcionalmente estrógeno o progestina, y el uso de tales compuestos, solos, o en combinación con estrógeno o progestina, para aliviar los síntomas del síndrome post-menopáusico, particularmente la osteoporosis, las condiciones patológicas relacionadas al sistema cardiovascular, y el cáncer dependiente del estrógeno. Como se utiliza en la presente, el término "estrógeno" incluye los compuestos esteroides que tienen actividades estrogénicas, tales como, por ejemplo, 17-b-estradiol, estrona, estrógeno conjugado (Premarin®), estrógeno equino, 17-b-etinilestradiol, y similares. Como se utiliza en la presente, el término "progestina" incluye los compuestos que tienen actividad progestacional tales como, por ejemplo, progesterona, noretilnodrel , nongestrel, acetato de megestrol, noretindrona, y similares. Los compuestos de la presente invención también son útiles para la inhibición de la enfermedad fibroide uterina y la endometriosis en mujeres y la proliferación de célula del músculo liso aórtico, particularmente restenosis, en humanos.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención está relacionada al descubrimiento de que un grupo selecto de 2-aril-3-arilbenzo[b]tiofenos , por ejemplo, los compuestos de la fórmula I, son útiles para el tratamiento o prevención de los síntomas y patologías de: síndrome post-menopáusico-osteoporosis e hiperlipidemia, cánceres dependientes del estrógeno, fibrosis uterina, endometriosis, "o restenosis en mamíferos, incluyendo humanos . El término inhibir se define para incluir su significado en general aceptado el cual incluye la prohibición, prevención, restricción, y retardo, detención o progresión de la reversión, o severidad, o una acción tal sobre un síntoma resultante. Como tal, la presente invención incluye la administración terapéutica y/o profiláctica médica, como sea apropiado . En la fórmula anterior, el término "alquilo de 1 a 6 átomos de carbono" representa una cadena de alquilo lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquilo típicos de 1 a 6 átomos de carbono incluyen metilo, etilo, n-propilo y n-butilo. El término "alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono" representa los grupos tales como metoxi, etoxi, n-propoxi, y n-butoxi. El fenilo opcionalmente sustituido incluye fenilo y fenilo sustituido una vez o dos veces con alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxilo, nitro, cloro, fluoro, o tri (cloro o fluoro) metilo . El término "solvato" representa un agregado que comprende una o más moléculas del soluto, tales como un compuesto de la fórmula I, con una o más moléculas del solvente. El material inicial para la preparación de los compuestos de la presente invención es un compuesto de la fórmula II II en donde Rla es hidrógeno, hidroxilo, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, R2a es hidrógeno, hidroxilo, -Cl, -F, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, con la condición de que al menos uno de Rla o R2a sea hidroxilo; y R3 y n tienen sus significados previos. Los compuestos de la fórmula II son bien conocidos en la técnica y son preparados esencialmente como se describe en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,133,814, 4,418,068, y 4,380,635 todas las cuales se incorporan por referencia en la presente. Ver, también, Jones, C.D. y colaboradores, J. Med . Chem . , 27:1057-66 (1984).

En la preparación de los compuestos de la presente invención, en general, un compuesto monofenólico de la fórmula II es sulfatado, proporcionando un derivado de sulfato ácido de la fórmula la. El producto monosulfato puede ser purificado como tal, con lo cual se produce la forma anfotérica neutra. Ésta puede también ser convertida a una variedad de sales farmacéuticamente aceptables. la en donde Rlb es hidrógeno, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, o -0S03H; R2b es hidrógeno, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, Cl, -F o -OS03H, con la condición de que R Ib o R2 deben ser -OS03H; y R" y n tienen sus significados previos. Otros compuestos (fórmula Ib) de la presente invención pueden ser preparados a partir de los compuestos de la fórmula II, donde Rla y R2a son ambos hidroxilos. Estos compuestos pueden ser monosulfatados utilizando un equivalente simple del reactivo de sulfatación y un equivalente simple de una base fuerte para ionizar uno de los fenoles que producirán una mezcla de isómeros. La mezcla resultante de derivados (mono-sulfato- ono-hidroxi ) puede ser directamente aislada mediante las técnicas tales como precipitación o recristalización, las cuales son bien conocidas para aquellos de experiencia en la técnica. Alternativamente, los derivados pueden ser purificados mediante cromatografía en fase normal o en fase inversa. Los derivados mono-sulfato-mono-hidroxi, obtenidos de este modo, pueden ser además convertidos a otros compuestos de la fórmula Ib mediante acilación apropiada o sulfonación del hidroxilo fenólico mediante los métodos conocidos en la técnica. Tales métodos pueden ser encontrados en las referencias citadas anteriormente o en la Patente Norteamericana No. 5,482,949. Mediante tales transformaciones químicas, los compuestos de la fórmula la y Ib, los cuales conjuntamente constituyen los compuestos de la fórmula I, pueden ser obtenidos.

Ib en donde Ric es hidroxilo, -OCOO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCOAr en donde Ar es fenilo o fenilo opcionalmente sustituido, -OS02 (alquilo de cadena lineal de 4 a 6 átomos de carbono) , o -OS03H; R2c es Rlc, con la condición de que al menos uno de Rlc o R2c sea -0S03H; R3 es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidino, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, diisopropilamino, o 1-hexametilenimino ; y n es 2 ó 3. En el paso de sulfatación del presente proceso, un compuesto fenólico de la fórmula II es convertido a su derivado mono- (o di-) sulfato, vía un protocolo de un paso, esencialmente como se describe por Gilbert, E. E. y colaboradores, Ch emi cal Rev. , 62:549-589 (1962). En esencia, un material inicial fenólico de la fórmula II se pone en contacto con un reactivo de sulfatación tal como trióxido de azufre (S03), S03-piridina, S03-trimetilamína, S03-trietilamina, S?3-dimetilanilina, S03-dioxano, S03-tioxano, S03-2-metilpiridina, S03-quinolina, S03-dimetilformamida, S03-trimetílamina que es particularmente preferida, y similares, en un solvente inerte apropiado, en presencia de un depurador de ácido, tal como una base de metal alcalino o una amina terciaria. Los solventes inertes apropiados incluyen, por ejemplo, alcoholes, éteres, solventes polares tales como dimetilformamida o sulfóxido de dimetilo y particularmente agua. Una solución alcalina preferida para la reacción de sulfatación contiene hidróxido de sodio o de potasio en un solvente inerte tal como agua. En esta solución, el o los grupos hidroxilo del material inicial de fenol de la fórmula II existen como un ion fenóxido el cual participa fácilmente en la -reacción de sulfatación mediante reacción con trióxido de azufre o un derivado del mismo. Cuando se corre bajo las condiciones de reacción preferidas, la presente reacción de sulfatación toma de aproximadamente 12 hasta aproximadamente 72 horas para completarse. Los siguientes ejemplos son presentados para ilustrar adicionalmente la preparación de los compuestos de la presente invención. No se pretende que la invención sea limitada en alcance en virtud de ninguno de los siguientes ejemplos. Los datos de resonancia magnética nuclear (RMN) para los siguientes ejemplos fueron generados sobre un instrumento de RMN GE a 300 MHz, y se utilizó d-6 DMSO anhidro como el solvente, a no ser que se indique de otro modo.

Ejemplo 1A [2- (4-hidroxif enil) -6-hidrogensulf oiloxibenzo[b]tien- 3-il][4-[2- ( 1-piperidinil) etoxi]f enil]metanona La sal de clorhidrato de la [6-hidroxi-2- ( 4-hidroxifenil ) benzo[b]tien-3-il][4-[2-(l-piperidinil ) etoxijfeniljmetanona, (clorhidrato de Raloxifeno; 2.02 g, 4 mmol) se mezcló con 16 ml de hidróxido de sodio ÍN, para proporcionar una solución café rojizo oscura a la cual se agregó S?3~Me3N (0.566 g, 4 mmol) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 4 días, tiempo en el cual la cromatografía en capa delgada (gel de sílice, 8:1:1 v/v cloroformo ¡metanol : trietilamina) indicó una mezcla de material inicial (Rf 0.7), el 4'-monosulfato (Ejemplo IB) (Rf 0.5), el 6-monosulfato (Ejemplo ÍA) (Rf 0.4), y el 4 ' , 6-disul fato (Ejemplo 2) que había sido formada. El análisis cromatográfico mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) (columna C-18 Novapak) , 3.9 mm x 150 mm; con equipo de detección por UV a 280 nm, y una velocidad de flujo de 1 ml/minuto de amortiguador acuoso isocrático de acetonitrilo :NH4H2P04 al 0.5%, 20:80) indicó que los compuestos fueron formados en una proporción porcentual de área de 1.0:0.5:1.2:0.2, respectivamente. Un cuarto de la mezcla de reacción, la cual fue una solución café-amarillo, oscura, se aplicó directamente a dos cartuchos RPC18 Waters para la purificación sobre el instrumento LC2000. Los cartuchos fueron preequilibrados con amortiguador acuoso de acetonitrilo : NH4H2P04 al 0.5%, 10:90 y 5 ml de agua desionizada fue aplicada justo antes y justo después de la introducción de la muestra para minimizar la precipitación de la muestra. La columna fue luego eluida a una velocidad de 150 ml por minuto con un sistema en gradiente el cual consistió inicialmente de acetonitrilo : amortiguador de fosfato diácido de amonio 10:90 (como se describe anteriormente) y elevando linealmente hasta 40:60 de acetonitrilo : amortiguador . La elución fue luego continuada constantemente a una mezcla de 40:60 por un periodo adicional de 10 minutos. Las fracciones de aproximadamente 200 ml fueron recolectadas y analizadas mediante cromatografía líquida de alta resolución, y se combinaron fracciones apropiadas. El resto de la mezcla de reacción fue purificada eñ lotes de una manera similar. No obstante que existió traslape considerable de los picos correspondientes a los dos monosulfatos , el eluyente enriquecido en el 6-monosulfato fue separado de aquel enriquecido en el 4 ' -monosulfato . Las fracciones enriquecidas de cada isómero fueron separadamente concentradas hasta casi sequedad y el residuo se lavó con agua para eliminar las sales inorgánicas, y los monosulfatos escasamente solubles fueron recolectados mediante filtración. En la purificación final, cada monosulfato se redisolvió en NaOH acuoso (pH 11) y se volvió a someter a cromatografía esencialmente como ya se describió. Después de la combinación y concentración de las fracciones apropiadas, se repitió el procedimiento de precipitación para proporcionar 142 mg (7%) de [2-(4-hidroxifenil)-6-hidrogensulfoiloxibenzo[b]tien-3-il][4-[2- ( 1-piperidinil) etoxi]feniljmetanona como un sólido amorfo blanquecino, con tintes rosados el cual tuvo una pureza >97% determinada mediante el ensayo de HPLC. :H RMN (DMSO-d6) d 9.79 (s, ÍH) , 9.17 (s amplio, ÍH) , 7.84 (d, J = 2.2 Hz, 1H) , 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.30 (d, J = 8.7 Hz, ÍH) , 7.24 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.19 (dd, J = 2.2 Hz, J = 8.7 Hz, ÍH) , 6.99 (d, J,= 8.7 Hz, 2H) , 6.70 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 4.38 (t, J = 4.8 Hz, 2H) , 3.48-3.33 (m, 4H) , 2.97 (m, 2H) , 1.80 (m, 2H) , 1.65 (m, 3H) , 1.37 (m, ÍH) ; MS (FAB" + modo iónico) m/e 554 (MH+); Análisis Calculado para C28H-27N0 S2: C, 60.74; H, 4.92; N, 2.53. Encontrado C, 60.03; H, 5.02; N, 2.14.

Ejemplo IB [2 - (-4 -hidrogensul f o iloxi f eni l ) - 6-hidroxibenzo[b]tien- 3- i l][4-[2- ( 1-piperidini l ) etoxijf enil]metanona A partir del Ejemplo ÍA, en un procedimiento de purificación final similar, recromatografía, concentración y precipitación, se obtuvieron 196 mg (9%) del compuesto del título, como un sólido amorfo de color crema con una pureza >98% mediante análisis de -HPLC. H RMN (DMSO-d6) d 9.84 (s, 1H) , 9.16 (s amplio, 1H) , 7.70 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.38 (d, J = 2.2 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 8.7 Hz, ÍH) , 7.25 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.08 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 6.96 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 6.90 (dd, J = 2.2 Hz, J = 8.7 Hz, ÍH) , 4.35 (t, J = 4.8 Hz, 2H) , 3.48 (m, 4H) , 2.98 ( , 2H) , 1.80 (m, 5H) , 1.66 (m, ÍH) , 1.38 (m, ÍH);' MS (FAB + modo iónico) m/e 554 (MH+); Análisis Calculado para C i.H -N07S2 : C, 60.74; H, 4.92; N, 2.53. Encontrado C, 60.78; H, 5.11; N, 2.33.

Ejemplo 2 Sal de trietilamina de la [2- (4- hidrogensulfoiloxifenil ) -6- hidrogensul foi loxibenzo[b]tien-3- il][4-[2- ( l- piperidinil ) e t ox i] f enil ]met anona La sal de clorhidrato de la [6-hidroxi-2- ( 4-hidroxifenil ) benzo[b]tien-3-il][4-[2-(l-piperidinil) etoxijfeniljmetanona, (clorhidrato de raloxifeno; 1.02 g, 2.0 mmol) se combinó con 8.0 ml de NaOH 1 N, y agua (30 ml ) y la mezcla se calentó bajo una atmósfera de nitrógeno en un baño de aceite a 60°C hasta que se obtuvo una solución café amarillenta oscura. Sin enfriamiento de la solución, se agregó S03-Me3N (1.11 g, 8.0 mmol) y se continuó el calentamiento en un baño a 60°C por 72 horas, tiempo durante el cual la mayor parte del color oscuro desapareció. El ensayo de HPLC utilizando acetonitrilo : amortiguador acuoso de NH4H2P04 al 0.5% 30:70 indicó una formación de más del 96% del derivado de disulfato deseado. Menos del 2% del material inicial o de los monosulfatos permanecieron al final de la reacción. La mezcla de reacción color amarillo pálido se ajustó a pH 8.4 con ácido clorhídrico 3N, se filtró y se aplicó directamente a dos cartuchos de RPC18 (instrumento Waters LC2000; los cartuchos habían sido preequilibrados con acetonitrilo : amortiguador acuoso al 0.5% de NH4H2P04 10:90. La elución a una velocidad de flujo de 125 ml/min. empleó un sistema en gradiente que consistió inicialmente de acetonitrilo : amortiguador acuoso al 0.5% de NH4H2P04 10:90, y luego cambiando linealmente en 40 minutos a la mezcla de acetonitrilo : amortiguador 30:70 y finalmente a acetonitrilo : amortiguador 50:50 en 5 minutos. Las fracciones de aproximadamente 200 ml cada una fueron recolectadas y aquellas consideradas que contenían únicamente el 4 ' , 6-disulfato fueron combinadas y evaluadas mediante HPLC, lo cual indicó una pureza mayor de 98%. Las fracciones combinadas fueron evaporadas bajo presión reducida y la temperatura se mantuvo por debajo de 30°C para eliminar la mayor parte del acetonitrilo. El concentrado, el cual representó aproximadamente 450 ml, fue inmediatamente aplicado a dos cartuchos Waters C18 y los cuales habían sido preequilibrados con acetonitrilo : agua 10:90. La elución prolongada de la columna con 3 litros de acetonitrilo : agua 10:90 sirvió para eliminar las sales inorgánicas. Posteriormente un sistema en gradiente lineal que consistió inicialmente de acetonitrilo : agua 10:90, y luego cambió linealmente en 40 minutos a una mezcla de acetonitrilo : agua 30:70 y finalmente a una mezcla 50:50 de los mismos solventes en 5 minutos, sirvió para eluir el producto deseado. Las fracciones apropiadas (aproximadamente 200 ml cada una) fueron combinadas para proporcionar un total de aproximadamente 1.1 litro _que contenía un componente simple mediante ensayo de HPLC. Una alícuota de 300 ml de las fracciones combinadas se trató a temperatura ambiente con una solución de 1 ml de trietilamina y 9 ml de agua. La solución clara e incolora resultante fue evaporada casi hasta sequedad sobre un evaporador rotatorio al tiempo que se mantenía la temperatura por debajo de 45°C. El residuo incoloro fue secado bajo un alto vacío a temperatura ambiente para proporcionar uh sólido amorfo, 295 mg (74% de rendimiento), el cual fue un componente simple mediante análisis de HPLC. lE RMN (DMSO-d6) d 9.16 (s amplio, 1H) , 8.82 (s amplio ÍH) , 7.86 (d, J = 2.2 Hz, ÍH) , 7.72 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.38 (d, J = 8.7 Hz, ÍH) , 7.31 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 7.22 (dd, J = 2.2 Hz, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.10 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 6.98 (d, J = 8.7 Hz, 2H) , 4.37 (m, 2H) , 3.55-3.32 ( , 4H) , 3.18-3.05 (m, 6H) , 3.05-2.88 (m, 2H) , 1.85-1.57 (m, 5H) , 1.50-1.25 (m, ÍH) ; MS (FAB + modo iónico) m/e 735.3 (MH+); Un análisis elemental exacto para el carbono no fue obtenido: Análisis Calculado para C34H42 2O10S3 : C, 55.57; H, 5.76; N, 3.81. Encontrado C, 53.89; H, 5.67; N, 3.85.

Los siguientes ejemplos ilustran los métodos para el uso de los compuestos de la fórmula I en modelos experimentales o en estudios clínicos.

Procedimiento de Prueba Procedimiento de Preparación General En los ejemplos que ilustran los métodos, se utilizó un modelo post-menopáusico en el cual se determinaron los efectos de los diferentes tratamientos sobre los lípidos circulantes. Ratas hembra Sprague Da ley de setenta y cinco días de edad (intervalo en peso de 200 a 225 g) se obtuvieron de los Laboratorios Charles River (Portage, MI). Los animales se ovariectomizaron bilateralmente (OVX) o se expusieron a un procedimiento quirúrgico falso en los Laboratorios Charles River, y luego se embarcaron después de una semana. Después de la llegada, éstos se alojaron en jaulas metálicas colgantes en grupos de 3 ó 4 por jaula y tuvieron acceso a la comida ad l ibi t um (contenido de calcio de aproximadamente 0.5%) y agua por una semana. La temperatura ambiente se mantuvo a 22.2°C ± 1.7°C con una humedad relativa mínima de 40%. El fotoperiodo en la habitación fue de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad.

Recolección de Tejido en el Régimen de Dosificación. Después de una semana de tiempo de aclimatación (por lo tanto, dos semanas después de la OVX) se inició la dosificación diaria con el compuesto de prueba. El 17a-etiniles tradiol o el compuesto de prueba se administraron oralmente, a no ser que se indique de otro modo, como una suspensión en carboximetilcelulosa al 1% o disuelto en ciclodextrina al 20%. Los animales fueron dosificados diariamente por 4 días. Después del régimen de dosificación, los animales se pesaron y se anestesiaron con una mezcla de cetamina : xilazina (2:1, V:V) y se recolectó una muestra de sangre mediante punción cardiaca. Los animales fueron luego sacrificados mediante asfixia con C02, los úteros fueron retirados a través de una incisión en la línea intermedia, y se determinó el peso de un útero húmedo .

Análisis de Colesterol. Las muestras sanguíneas se dejaron coagular a temperatura ambiente por 2 horas, y se obtuvo el suero después de la centrifugación por 10 minutos a 3000 rpm. El colesterol se determinó utilizando un ensayo de colesterol de alta precisión de Boehringer Mannheim Diagnostics. Brevemente el colesterol se oxida a colest-4-en-3-ona y a peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno se hace luego reaccionar con fenol y 4-aminofenazona en presencia de peroxidása para producir un colorante de p-quinona-imina, el cual se lee espectrofotométricamente a 500 nm. Se calcula luego la concentración del colesterol contra una curva estándar. El ensayo completo es automatizado utilizando una Estación de Trabajo Automatizada Biomek .

Ensayo de Peroxidasa de Eosinófilos Uterinos (EPO) . Los úteros se mantuvieron a 4°C hasta la hora del análisis enzimático. Los úteros se homogenizaron luego en 50 volúmenes de amortiguador Tris 50 mM (pH 8.0) que contenía 0.005% de Tritón X-100. Después de la adición de peróxido de hidrógeno al 0.01% y 0-fenilendiamina 10 mM (concentraciones finales) en amortiguador Tris, se verificó periódicamente el incremento en absorbancia por un minuto a 450 nm. La presencia de los eosonófilos en el útero es una indicación de la actividad estrogénica de un compuesto. La velocidad máxima de un segundo intervalo de 15 minutos es determinada sobre la porción lineal inicial de la curva de reacción.

Fuente del Compuesto: 17-a-etiniles tradiol que fue obtenido de Sigma Chemical CO., Saint Louis, MO .

Hiperlipidemia : Los datos presentados en la Tabla 1 muestran los resultados comparativos entre las ratas ovariectomizadas, las ratas tratadas con 17-a-etinilestradiol (EE;) y las ratas tratadas con ciertos compuestos de esta invención. Aunque EE2 provocó una disminución en el colesterol sérico cuando se administró oralmente a 0.1 mg/kg/día, éste también ejerció un efecto simulador sobre el útero de modo que el peso uterino de EE2 fue sustancialmente mayor que el peso uterino de los animales ovariectomizados . Esta respuesta uterina a un estrógeno es bien reconocida en la técnica. No solamente los compuestos de la presente invención redujeron el colesterol sérico en comparación a los animales ovariectomizados, sino que el peso del útero fue únicamente incrementado de manera mínima. En comparación a los compuestos estrogénicos conocidos en la técnica, el beneficio de la reducción del colesterol sérico sin afectar de manera adversa el peso del útero, es inusual y deseable .

Como se expresa en los datos siguientes, la es trogenicidad también fue evaluada mediante la evaluación de la respuesta de la infiltración de eosinófilos en el útero. Los compuestos de esta invención no provocaron un incremento grande en el número de eosinófilos observados en la capa estromal de los úteros de ratas ovariectomizadas . EE2 provocó un incremento sustancial y esperado en la infiltración de eosinófilos. Los datos presentados en la Tabla 1 reflejan la respuesta de cinco o seis ratas por grupo de tratamiento .

Tabla 1 Compuesto No. Dosis Peso Uterino Eosinófilos Colesterol (Ejemplo No. ) mg/kg % Incb Uterinos Sérico % de (Vmax) c Desc.d EE.a 0.1 227.1* 392.7* 71.9* Raloxifeno 0.1 75.4* 8.4* 60.0* la 0.01 46.0* 4.8 -20.5 0.1 17.7* 3.9 -2.8 1 40.6* 3.0 14.8 Ib 0.01 3 3.9 -34.6 0.1 46.2* 4.2 12.6 1 60.5* 4.8 49.1* a 17-a-etinilestradiol b incremento % del peso uterino versus los controles ovariectomizados c Vmáxima de la peroxidasa de eosinófilo d Disminución del colesterol sérico versus los controles ovariectomizados * p<.05 Procedimiento de Prueba de Osteoporosis Siguiendo el Procedimiento de Preparación General descrito más adelante, las ratas se trataron diariamente por 35 días (6 ratas por grupo de tratamiento) y se sacrificaron mediante asfixia con dióxido de carbono en el día 36. El periodo de tiempo de 35 días es suficiente para permitir la reducción máxima en la densidad ósea, medida como se describe en la presente. Al tiempo del sacrificio, los úteros fueron retirados, disectados para liberarlos del tejido extraño, y el contenido fluido fue expulsado antes de la determinación del peso seco, con el fin de confirmar la deficiencia de estrógeno asociada con la ovariectomía completa. El peso del útero se redujo rutinariamente en aproximadamente 75% en respuesta a la ovariectomía. Los úteros fueron luego colocados en formalina amortiguada neutra al 10%, para permitir el análisis histológico subsecuente. Los fémures derechos fueron extirpados y se generaron rayos X digitalizados y se analizaron mediante un programa de análisis de imágenes (imagen NIH) en la metáfisis distal. El aspecto proximal de las tibias de estos animales fueron también explorados mediante tomografía computarizada cuantitativa . De acuerdo con los procedimientos anteriores, los compuestos de la presente invención y el etiniles tradiol (EE;) en hidroxipropil-ß-ciclodextrina al 20%, se administraron oralmente a los animales de prueba. En resumen, la ovariectomía de los animales de prueba provoca una reducción significativa en la densidad del fémur en comparación a los controles tratados con vehículo, intactos. El etinilestradiol (EE_) administrado oralmente previno esta pérdida, pero estuvo todavía presente el riesgo de estimulación uterina con este tratamiento.

Los compuestos de la presente invención previenen la pérdida ósea de una manera en general dependiente de la dosis. En consecuencia, los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento del síndrome post-menopáusico, particularmente la osteoporosis.

Ensayo de Proliferación MCF-7 Las células de adenocarcinoma de mama MCF-7 (ATCC HTB 22) fueron mantenidas en MEM (medio esencial mínimo, libre de rojo de fenol, Sigma, Saint Louis, MO) suplementado con suero fetal bovino al 10% (FBS) (V/V), L-glutamina (2 mM) , piruvato de sodio (1 mM) , HEPES {ácido (N-[2 -hidroxietil]piperazin-N' -[2-etansul fónico] 10 mM}, aminoácidos no esenciales e insulina bovina (1 µg/ml) (medio de mantenimiento) . Diez días antes del ensayo, las células MCF-7 fueron cambiadas a medio de mantenimiento complementado con suero fetal bovino depurado con carbón mineral recubierto con dextrano al 10% (DCC-FBS) (medio de ensayo) en lugar de 10% de FBS para agotar los almacenes internos de esteroides. Las células MCF-7 fueron retiradas de los matraces de mantenimiento utilizando el medio de disociación celular (HBSS libre de Ca'VMg"" (libre de rojo fenol) complementado con H?P?S 10 M y EDTA 2 M) . Las células se lavaron dos veces con el medio de ensayo y se ajustaron a 80,000 células/ml. Se agregaron aproximadamente 100 ml (8,000 células) a los pozos de microcultivo de fondo plano (Costar 3596) y se incubaron a 37°C en una incubadora humidificada con 5% de CO; por 48 horas, para permitir la adherencia celular y el equilibrio después de la transferencia. Se prepararon diluciones en serie de los fármacos o DMSO como un control diluyente, en el medio de ensayo, y se transfirieron 50 ml a microcultivos por triplicado, seguido por 50 ml de medio de ensayo para un volumen final de 200 ml . Después de un periodo adicional de 48 horas a 37°C en una incubadora humidificada con CO; al 5%, los microcultivos se pulsaron con timidina tritiada (1 µCi/pozo) por 4 horas. Los cultivos se terminaron mediante congelamiento a -70°C por 24 horas, seguido por descongelamiento y cosecha de los microcultivos utilizando un Cosechador de Células Semiautomático Skatron. Las muestran se contaron mediante cintilación líquida utilizando un contador ß Wallace BetaPlace .

Inhibición de Tumor Mamario Inducido por DMBA Se produjeron tumores mamarios dependientes de estrógeno en ratas hembra Sprague Dawley las cuales fueron adquiridas de Harían Industries, Indianapolis, Indiana. Aproximadamente a los 55 días de edad, las ratas recibieron una alimentación oral simple de 20 mg de 7 , 12-dimetilbenz[a]antraceno (DMBA) . Aproximadamente 6 semanas después de la administración de DMBA, se palparon las glándulas mamarias a intervalos semanales para la aparición de tumores. Siempre que apareció uno o más tumores, se midieron los diámetros más largo y más corto de cada tumor con un calibrador, las mediciones se registraron, y ese animal se seleccionó para la experimentación. Se realizó un intento para distribuir uniformemente los diversos tamaños de tumores en los grupos tratados y control, tal que los tumores de tamaño promedio fueron equivalentemente distribuidos entre los grupos de prueba. Los grupos control y los grupos de prueba para cada experimento contenían 5 a 9 animales. Los compuestos de la fórmula I se administraron ya sea a través de inyecciones int rape itoneales en 2% de acacia, u oralmente. Los compuestos administrados oralmente fueron ya sea disueltos o suspendidos en 0.2 ml de aceite de maíz. Cada tratamiento, que incluía los tratamientos control con acacia y aceite de maíz, se administraron una vez al día a cada animal de prueba. Después de la medición del tumor inicial y la selección de los animales de prueba, los tumores fueron medidos cada semana mediante el método anteriormente mencionado. El tratamiento y las mediciones de los animales continuaron por 3 a 5 semanas, tiempo en el cual se determinaron las áreas finales de los tumores. Para cada tratamiento con compuesto y control, se determinó el cambio en el área tumoral media.

Procedimientos de Prueba de Fibrosis Uterina Prueba 1 Entre 3 y 20 mujeres que tenían fibrosis uterina fueron administradas con un compuesto de la presente invención. La cantidad del compuesto administrado es de 0.1 a 1000 mg/día, y el periodo de administración es de 3 meses. Las mujeres se observaron durante el periodo de administración, y hasta 3 meses después de la descontinuación de la administración, para los efeccos sobre la fibrosis uterina.

Prueba 2 Se utilizó el mismo procedimiento que en la Prueba 1, excepto que el periodo de administración fue de 6 meses .

Prueba 3 Se utilizó el mismo procedimiento que en la Prueba 1, excepto que el periodo de administración fue de 1 año .

Prueba 4 A. Inducción de tumores fibroides en cobayos.

Se utilizó la estimulación prolongada con estrógenos para inducir leiomiomata en cobayos hembra sexualmente maduras. Los animales fueron dosificados con estradiol 3 a 5 veces por semana mediante inyección por 2 a 4 meses o hasta que surgieron los tumores. Los tratamientos que consistieron de un compuesto de la invención o de vehículo se administraron diariamente por 3 a 16 semanas, y luego los animales fueron sacrificados y los úteros cosechados y analizados para la regresión del tumor.

B. Implante del tejido fibroso uterino humano en ratones desnudos El tejido proveniente de leiomiomas humanos fue implantado en la cavidad peritoneal y/o en el miometrio uterino de ratones desnudo hembras, castradas, sexualmente maduras. El estrógeno exógeno se suministró para inducir el crecimiento del tejido explantado. En algunos casos, las células tumorales cosechadas fueron cultivadas in vi tro antes del implante. El tratamiento que consistió de un compuesto de la presente invención o de vehículo, se suministró mediante lavado gástrico en una base diaria por 3 a 16 semanas y los implantes fueron retirados y medidos para el desarrollo o regresión. Al tiempo del sacrificio, los úteros se cosecharon para evaluar el estado del órgano.

Prueba 5 A. El tejido proveniente de tumores fibroides uterinos humanos se cosechó y se mantuvo in vi tro , como cultivos primarios no transformados. Los especímenes quirúrgicos fueron empujados a través de una malla o tamiz estéril, o alternativamente desmenuzados para separarlos del tejido circunvecino, para producir una suspensión de células simples. Las células se mantuvieron en medio que contenía 10% de suero y antibiótico. Se determinaron, las velocidades de desarrollo en presencia y ausencia de estrógeno. Las células se evaluaron para su habilidad de producir el componente C3 del complemento y su respuesta a los factores de crecimiento y a la hormona del crecimiento. Los cultivos in vi tro fueron evaluados para su respuesta proliferativa después del tratamiento con progestina, GnRH, un compuesto de la presente invención y vehículo. Se evaluaron semanalmente los niveles de receptores de hormonas esteroides, para determinar si se mantenían las características importantes de la célula, in vi tro . El tejido proveniente de 5 a 25 pacientes fue utilizado . La actividad en al menos una de las pruebas anteriores indica que los compuestos de la presente invención son de potencial en el tratamiento de la fibrosis uterina.

Procedimiento de Prueba de Endometriosis En las Pruebas 1 y 2, pueden ser e aminados los efectos de la administración de los compuestos de la presente invención a los 14 y a los 21 días, sobre el desarrollo del tejido endometrial explantado.

Prueba 1 De doce a treinta ratas hembra adultas de cepa CD fueron utilizadas como animales de prueba. Éstos son divididos en tres grupos de igual número. El ciclo estral de todos los animales fue verificado periódicamente. En el día del proestro, se realizó la cirugía en cada hembra. Las hembras en cada grupo tuvieron el cuerno uterino izquierdo extirpado, seccionado en pequeños cuadros, y los cuadros fueron suturados sueltamente en diversos sitios adyacentes al flujo sanguíneo mesentérico. Además, las hembras en el Grupo 2 tuvieron los ovarios extirpados. En el día después de la cirugía, los animales en los Grupos 1 y 2 recibieron inyecciones intraperitoneales de agua por 14 días, mientras que los animales en el Grupo 3 recibieron inyecciones intraperitoneales de 0.1 mg de un compuesto de la presente invención por kilogramo -de peso corporal por la misma duración. Después de 14 días de tratamiento, cada hembra se sacrificó y los explantes endometriales, las glándulas adrenales, los úteros remanentes, y los ovarios, donde fue aplicable, fueron extirpados y preparados para el examen histológico. Los ovarios y adrenales se pesaron.

Prueba 2 De doce a treinta ratas hembra, adultas, de la cepa CD se utilizaron como los animales de prueba. Éstos se dividieron en dos grupos iguales. El ciclo estral de todos los animales se verificó periódicamente. En el día de proestro, se realizó la cirugía en cada una de las hembras. Se retiró el cuerno uterino izquierdo de las hembras en cada grupo, se seccionó en cuadros pequeños, y los cuadros fueron sueltamente suturados en diversos sitios adyacentes al flujo de sangre mesentérica. Aproximadamente 50 días después de la cirugía, los animales asignados al Grupo 1 recibieron inyecciones intraperitoneales de agua por 21 días, mientras que los animales en el Grupo 2 recibieron inyecciones intraperitoneales de 1.0 mg de un compuesto de la presente invención por kilogramo de peso corporal por la misma duración. Después de 21 días de tratamiento, cada hembra se sacrificó y se retiraron y se pesaron los explantes endometriales y las adrenales. Los explantes se midieron como una indicación del desarrollo o crecimiento. Se verificaron periódicamente los ciclos .estrales .

Prueba 3 A. Inducción quirúrgica de endometriosis Se utilizaron autoinjertos de tejido endometrial para inducir la endometriosis en ratas y/o conejos. Los animales hembra en la madurez reproductiva sufrieron ooforectomía bilateral, y el estrógeno se suministró exógenamente proporcionando de este modo un nivel específico y constante de hormona. El tejido endometrial autólogo se implantó en el peritoneo de 5-150 animales y el estrógeno se suministró para inducir el desarrollo del tejido explantado. El tratamiento que consistió de un compuesto de la presente invención, se suministró mediante lavado gástrico en una base diaria por 3 a 16 semanas, y los implantes se retiraron, y se midieron para el desarrollo o regresión. Al tiempo de sacrificio, el cuerno intacto del útero se cosechó para evaluar el estado del endometrio.

B. Implante de tejido endometrial humano en ratones desnudos El tejido proveniente de lesiones endometriales humanas se implantó en el peritoneo de ratones desnudos hembra, castradas, sexualmente maduras. El estrógeno exógeno se suministró para inducir el desarrollo del tejido explantado. En algunos casos, las células endometriales cosechadas se cultivaron in vi tro antes de la implantación. El tratamiento que consistió de un compuesto de la presente invención suministrado mediante lavado gástrico en una base diaria por 3 a 16 semanas, y los implantes se retiraron y se midieron para el crecimiento o la regresión. Al tiempo del sacrificio, los úteros se cosecharon para evaluar el estado del endometrio intacto.

Prueba 4 A. Tejido proveniente de lesiones endometriales humanas se cosechó y se mantuvo in vi tro como cultivos no transformados primarios. Los especímenes quirúrgicos se empujaron a través de una malla o tamiz estéril, o alternativamente se cortaron del tejido circunvecino para producir una suspensión de células simples. Las células se mantuvieron en medio que contenía 10% de suero y antibiótico. Las velocidades de desarrollo o crecimiento en presencia y ausencia de estrógeno fueron determinadas. Las células se evaluaron para su habilidad de producir el componente C3 del complemento y su respuesta a los factores del crecimiento y a la hormona del crecimiento. Los cultivos in vi tro fueron evaluados para su respuesta proliferativa después del tratamiento con progestinas, GnRH, un compuesto de la invención, y vehículo. Los niveles de receptores de hormona esteroide se evaluaron semanalmente para determinar si las características celulares importantes fueron mantenidas in vi tro . Se utilizó el tejido proveniente de 5 a 25 pacientes. La actividad en cualquiera de los ensayos anteriores indica que los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de la endometriosis .

Inhibición de Proliferación de Células del Músculo Liso Aórtico/Procedimiento de Prueba de Restenosis Los compuestos de la presente invención tienen la capacidad para inhibir la proliferación de células del músculo liso aórtico. Esto puede ser demostrado mediante el uso de las células cultivadas del músculo liso derivadas de aortas de conejo, siendo determinada la proliferación mediante la medición de la síntesis de ADN. Las células se obtienen mediante el método de explante como se describe en Ross, J. of Cell Bi o . 50: 172 (1971). Las células se siembran en placas de microcultivo de 96 pozos por cinco días. Los cultivos se vuelven confluentes y el desarrollo se detiene. Las células son luego transferidas a medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) que contiene 0.5-2% de plasma pobre en plaquetas, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina, 1 mC/ml de 3H-timidina, 20 ng/ml de factor de crecimiento derivado de plaquetas, y concentraciones variantes de los presentes compuestos. La solución de reserva de los compuestos se prepara en sulfóxido de dimetilo y luego se diluye a la concentración apropiada (0.01 -30 mM) en el medio de ensayo anterior. Las células se incuban luego a 37°C por 24 horas bajo 5% de CO;/95% de aire. Al final de las 24 horas, las células se fijan en metanol. Se determina luego la incorporación 3H-timidina en el ADN mediante conteo de cintilación como se describe en Bonin y colaboradores, Exp. Cell Res. 181: 475-482 (1989). La inhibición de la proliferación de las células del músculo liso aórtico por los compuestos de la presente invención, se demuestra además' mediante la determinación de sus efectos sobre las células en crecimiento exponencial. Las células de músculo liso provenientes de aortas de conejo se siembran en placas de cultivo de tejido de 12 pozos en DMEM que contiene suero fetal bovino al 10%, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, y 100 mg/ml dc estreptomicina. Después de 24 horas, las células se acoplan y el medio se reemplaza con DMEM que contiene 10% de suero, L-glutamina 2 mM, 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina, y las concentraciones deseadas de los compuestos. Las células se dejan desarrollar por cuatro días. Las células se tratan con tripsina y se determina el número de células en cada cultivo mediante el conteo utilizando un contador ZM-Coulter. La actividad en los ensayos anteriores indica que los compuestos de la presente invención son de uso potencial en el tratamiento de la restenosis . La presente invención también proporciona un método para aliviar el síndrome post-menopáusico en mujeres, el cual comprende el método anteriormente mencionado utilizando los compuestos de la fórmula I, y comprende además la administración a una mujer, "de una cantidad efectiva de estrógeno o progestina. Estos tratamientos son particularmente útiles para el tratamiento de la osteoporosis y la disminución del colesterol en suero debido a que el paciente recibirá los beneficios de cada agente farmacéutico, mientras que los compuestos de la presente invención podrían inhibir los efectos colaterales indeseables del estrógeno y la progestina. La actividad de estos tratamientos en combinación en cualquiera de las pruebas post-menopáusicas, más adelante mencionadas, indica que los tratamientos en combinación son útiles para aliviar los síntomas post-menopáusicos en uj eres . Son comercialmente disponibles diversas formas de estrógeno y progestina. Los agentes basados en estrógeno incluyen, por ejemplo, etinilestrógeno (0.01 - 0.03 mg/día), mestranol (0.05 - 0.15 mg/día), y hormonas estrogénicas conjugadas tales como Premarin® (Wyeth-Ayerst; 0.3 - 2.5 mg/día) . Los agentes basados en progestina incluyen, por ejemplo medroxiprogesterona tal como Provera® (Upjohn; 2.5 - 10 mg/día), noretilnodrel (1.0 - 10.0 mg/día), y nonetindrona (0.5 - 2.0 mg/día). Un compuesto preferido basado en es.trógeno es el Premarin, y noretilnodrel y la noretindrona son agentes preferidos basados en progestina. El método de administración de cada agente basado en estrógeno y en progestina es consistente con aquel que es conocido en la técnica. Para la mayoría de los métodos de la presente invención, los compuestos de la fórmula I son administrados continuamente, de 1 a 3 veces al día. No obstante, la terapia cíclica puede ser especialmente útil en el tratamiento de la endometriosis o puede ser utilizada agudamente durante ataques dolorosos de la enfermedad. En el caso de restenosis, la terapia puede estar limitada a intervalos cortos (1-6 meses) siguiendo los procedimientos médicos tales como angioplastia . Como se utiliza en la presente, el término "cantidad efectiva" significa una cantidad de compuesto de la fórmula I que es capaz de aliviar los síntomas de las diversas condiciones patológicas descritas en la presente. La dosis específica de un compuesto administrado de acuerdo a esta invención, por supuesto, será determinada por las circunstancias particulares que rodean al caso incluyendo, por ejemplo, el compuesto administrado, la ruta de administración, el estado de salud del paciente, y la condición patológica que se trata. Una dosis diaria típica contendrá un nivel de dosis no tóxico de aproximadamente 0.1 mg hasta aproximadamente 1000 mg/día de un compuesto de la presente invención, y más particularmente será de aproximadamente 15 mg hasta aproximadamente 80 mg/día. Como será reconocido por alguien de experiencia ordinaria en la técnica, los compuestos de la fórmula I existen más probablemente como anfóteros o zwiteriones que involucran la estructura de amina terciaria de R3 y un grupo monohidrogenosulfato . Los compuestos de esta invención también forman las sales por adición de base y de ácido farmacéuticamente aceptables, (por ejemplo en el grupo R3, en la porción de sulfato ácido, o en una porción de sulfato ácido de un anfótero) , con una amplia variedad de ácidos y bases orgánicas e inorgánicas, e incluyen las sales fisiológicamente aceptables que son frecuentemente utilizadas en química farmacéutica. Tales sales son también parte de esta invención. Los ácidos inorgánicos típicos utilizados para formar tales sales incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hipofosfórico y similares. Las sales derivadas de los ácidos orgánicos, tales como los ácidos alifáticos mono- y dicarboxílicos, los ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, los ácidos hidroxialcanoicos e hidroxialcandioicos, los ácidos sulfónicos alifáticos y aromáticos, pueden también ser utilizados. Tales sales ' farmacéuticamente aceptables incluyen de este modo las sales de acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetonxibenzoato, naftalen-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, ß-hidroxibutirato, butin-1,4-dioato, hexin-1 , 4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinamato, citrato, formiato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, fosfato monoácido, fosfato diácido, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, bencensulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobencensulfonato, etansulfonato, 2-hidroxietansulfonato, metansulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, p-toluensulfonato, xilensulfonato, tartrato, y similares. Una sal preferida es la sal de clorhidrato. Las sales por adición de ácido farmacéuticamente aceptables son típicamente formadas mediante la reacción de un compuesto de la formula I con una- cantidad equimolar o en exceso de ácido. Los reactivos se combinan en general en un solvente mutuo tal como éter dietílico o benceno. La sal se precipita normalmente de la solución dentro de aproximadamente una hora hasta 10 días, y puede ser aislada mediante filtración o el solvente puede ser eliminado por medios convencionales. Las bases comúnmente utilizadas para la formación de sales incluyen hidróxido de amonio e hidróxidos de metal alcalino y alcalinotérreo, carbonatos, así como aminas alifáticas y primarias, secundarias y terciarias, diaminas alifáticas, etc.

Las bases especialmente útiles en la preparación de las sales de adición incluyen hidróxido de amonio, carbonato de potasio, metilamina, dietilamina, etilendiamina y ciclohexilamina . Las sales por adición de base, farmacéuticamente aceptables son típicamente formadas mediante la reacción de un compuesto de la fórmula I con una cantidad equimolar o en exceso de base. Los reactivos se combinan en general en un solvente mutuo tal como éter dietílico, aceto de etilo, alcoholes o benceno. La sal normalmente precipita de la solución dentro de aproximadamente una hora a 10 días y puede ser aislada mediante filtración o el solvente puede ser eliminado mediante medios convencionales. Los compuestos que tienen dos porciones sulfato pueden ser convertidos a una sal por adición de base y una sal anfotérica mediante la reacción del anfótero con un equivalente de base. Los reactivos son en general combinados en un solvente mutuo tal como éter dietílico, acetato de etilo, alcoholes o benceno. La sal precipita normalmente de la solución dentro de aproximadamente una hora a 10 días y puede ser aislada mediante filtración o el solvente puede ser eliminado por medios convencionales. Las sales farmacéuticamente aceptables en general tienen características de solubilidad mejoradas en comparación al compuesto a partir del cual éstas se derivan, y de este modo son frecuentemente más adecuadas para la formulación como líquidos o emulsiones. Es usualmente preferido el administrar un compuesto de la fórmula I en la forma de una sal por adición de ácido, como es acostumbrado en la administración de productos farmacéuticos que poseen un grupo básico, tal como e? anillo de piperidino. Es también ventajoso el administrar tal compuesto mediante la ruta oral. Para tales propósitos son disponibles las siguientes formas de dosificación oral . Los compuestos de esta invención pueden ser administrados mediante una variedad de rutas incluyendo oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Estos compuestos son preferentemente formulados antes de la administración, la selección de los cuales será decidida por el médico que atiende. De este modo, otro aspecto más de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que contiene opcionalmente una cantidad efectiva de estrógeno o progestina, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Los ingredientes activos totales en tales formulaciones comprenden de 0.1% a 99.9% en peso de la formulación. Por "farmacéuticamente aceptable" se entiende que el portador, diluyente, excipiente y la sal, deben ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación, y no dañinos para el recipiente de los mismos . Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser preparadas mediante procedimientos conocidos en la técnica utilizando ingredientes bien conocidos y fácilmente disponibles. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula I con o sin un compuesto de estrógeno o progestina, pueden ser formulados con excipientes, diluyentes, o portadores comunes, y formados en tabletas, cápsulas, suspensiones, polvos, y similares. Los ejemplos de excipientes, diluyentes, y portadores que son adecuados para tales formulaciones incluyen los siguientes: rellenadores y extensores tales como almidón, azucares, manitol, y derivados silícicos; agentes aglutinantes tales como carboximetilcelulosa y otros derivados de celulosa, alginatos, gelatina, y polivinilpirrolidona; agentes humectantes tales como glicerol; agentes desintegradores tal.es como carbonato de calcio y carbonato ácido de sodio; agentes para retardar la disolución tales como parafina; aceleradores de la resorción tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes activos de superficie tales como alcohol cetílico, monoestearato de glicerol; portadores adsortivos, tales como caolín y bentonita; y lubricantes tales como talco, estearato de calcio y de magnesio, y polietilenglicoles sólidos. Los compuestos también pueden ser formulados como elíxires o soluciones para "la administración oral conveniente o como soluciones apropiadas para la administración parenteral, por ejemplo, mediante las rutas intramuscular, subcutánea o intravenosa. Además, los compuestos son muy adecuados para la formulación como formas de dosis de liberación sostenida y similares. Las formulaciones pueden ser constituidas de tal modo que éstas liberen el ingrediente activo única o preferentemente en un sitio fisiológico particular, posiblemente en un periodo de tiempo. Los recubrimientos, envolturas, y • matrices protectoras pueden ser elaborados, por ejemplo, a partir de sustancias poliméricas o ceras.

Los compuestos de la fórmula I, solos o en combinación con un agente farmacéutico de la presente invención, serán en general administrados en una formulación conveniente. Los siguientes ejemplos de formulación únicamente son ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de la presente invención .

Formulaciones En las formulaciones siguientes, "ingrediente activo" significa un compuesto de la fórmula I, o una sal o solvato del mismo.

Formulación 1: Cápsulas de Gelatina Se preparan cápsulas de gelatina dura utilizando lo siguiente : Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente activo 0.1 - 1000 Almidón, NF 0 - 650 Almidón en polvo fluible 0 - 650 Fluido de silicona de 350 centistokes 0 - 15 La formulación anterior puede ser cambiada en cumplimiento con las variaciones razonables proporcionadas . Se prepara una formulación de tabletas utilizando los siguientes ingredientes: Formulación 2: Tabletas Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente activo 2.5 - 1000 Celulosa microcristalina 200 - 650 Dióxido de silicio, ahumado 10 - 650 Ácido esteárico 5 - 15 Los componentes se mezclan y se comprimen para formar tabletas. Alternativamente, las tabletas que contienen cada una 2.5 - 1000 mg de ingrediente activo son constituidas como sigue: Formulación 3: Tabletas Ingrediente Cantidad (mg/tableta; Ingrediente activo 25 - 1000 Almidón 45 Celulosa microcristalina 35 Polivinilpirrolidona (como una 4 solución al 10% en agua) Carboximetilcelulosa de sodio 4.5 Estearato de magnesio 0.5 Talco 1 El ingrediente activo, el almidón, y la celulosa se hacen pasar a través de un tamiz de malla norteamericana No. 45 y se mezclan perfectamente. La solución de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes los cuales se hacen pasar luego a través de un tamiz de malla norteamericano No. 14. Los granulos producidos así son secados a 50°C-60°C y se hacen pasar a través de un tamiz de malla norteamericano No. 18. La carboximetilcelulosa de sodio, el estearato de magnesio, y el talco, previamente pasados a través de un tamiz de malla norteamericano No. 60, se agregan luego a los granulos, después del mezclado, son comprimidos en una máquina formadora de tabletas, para producir tabletas . Las suspensiones que contienen cada una 0.1 a 1000 mg de medicamento por 5 ml de dosis, son elaboradas como sigue: Formulación 4 : Suspensiones Ingrediente Cantidad (mg/5 ml) Ingrediente activo 0.1 - 1000 mg Carboximetilcelulosa de sodio 50 mg Jarabe 1.25 mg Solución de ácido benzoico 0.10 ml Saborizante c.s. Color c.s. Agua purificada hasta 5 ml El medicamento se hace pasar a través de un tamiz de malla norteamericano No. 45 y se mezcla con la carboximetí Icelulosa de sodio y con el jarabe, para formar una pasta suave. La solución de ácido benzoico, el saborizante y el color se diluyen con algo del agua y se agregan, con agitación. Se agrega luego suficiente agua para producir el volumen requerido . Se prepara una solución de aerosol que contiene los siguientes ingredientes: Formulación 5: Aerosol Ingrediente Cantidad (% en peso) Ingrediente activo 0.25 Etanol 25.75 Propelente 22 (clorodifluorometano) 70.00 El ingrediente activo se mezcla con etanol y la mezcla se agrega a una porción de propelente 22, se enfría a 30°C, y se transfiere a un dispositivo de llenado. La cantidad requerida es luego alimentada a un recipiente de acero inoxidable y se diluye con el propelente restante. Las unidades de válvula son luego ajustadas al recipiente. Se preparan supositorios como sigue: Formulación 6: Supositorios Ingrediente Cantidad (mg/supositorio) Ingrediente activo 250 Glicéridos de ácido graso saturados 2,000 El ingrediente activo se hace pasar a través de un tamiz de malla norteamericano No. 60 y se suspende en los gliceridos de ácido graso saturados previamente fundidos, utilizando el calor necesario mínimo. La mezcla se vacía luego en un molde para supositorios de capacidad nominal de 2 gramos y se de a enfriar. Se prepara una formulación intravenosa como sigue : Formulación 7: Solución intravenosa Ingrediente Cantidad Ingrediente activo 50 Solución salina isotónica 1,000 ml La solución de los ingredientes anteriores se administra intravenosamente a un paciente a una velocidad de aproximadamente 1 ml por minuto Formulación 8 : Cápsula en Combinación I Ingrediente Cantidad (mg/cápsula; Ingrediente activo 50 Premarin 1 Avicel pH 101 50 Almidón 1500 117.50 Aceite de silicona 2 Tween 80 0.50 Cab-O-Sil 0.25 Formulación 9: Cápsula en Combinación II Ingrediente Cantidad (mg/cápsula; Ingrediente activo 50 Noretilnodrel 5 Avicel pH 101 82.50 Almidón 1500 90 Aceite de silicona 2 Tween 80 0.50 Formulación 10: Tableta en Combinación Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente activo 50 Premarin 1 Almidón de maíz NF 50 Povidona, K29-32 6 Avicel pH 101 41.50 Avicel pH 102 136.50 Crospovidona XL10 2.50 Estearato de magnesio 0.50 Cab-O-Sil 0.50 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional para la manufactura de los objetos a que la misma se refiere.

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula I (I) caracterizado porque R1 es hidrógeno, hidroxilo, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, -OCOO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono ) , -OCO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCOAr en donde Ar es fenilo o fenilo opcionalmente sustituido, -OSO; (alquilo de cadena lineal de 4 a 6 átomos de carbono), o -OS03H; R2 es R1, Cl o F; con la condición de que al menos R1 o R2 sea -OSO3H; R3 es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimeti 1-1-pirrolidino, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, diisopropilamino, o 1-hexamet ilenimino ; y n es 2 ó 3 ; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 y R2 son cada uno -OSO,H.

3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R es hidroxilo y R" es -OS03H.

4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R2 es hidroxilo y R1 es -OS03H.

5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n = 2.

6. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R3 es 1-piperidinilo.

7. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ,o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y, opcionalmente, una cantidad efectiva de estrógeno o progestina, en combinación con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

8. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para aliviar los síntomas del síndrome post-menopáusico en una mujer.

9. El uso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición patológica del síndrome post-menospáusico es la osteoporosis.

10. El uso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la condición patológica del síndrome post-menopáusico está relacionada a una enfermedad cardiovascular.

11. El uso de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la enfermedad cardiovascular es hiperlipidemia.

12. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para inhibir el cáncer dependiente de estrógeno en un paciente.

13. El uso "de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para inhibir la enfermedad fibroide uterina en una mujer.

14. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para inhibir la endometriosis en una mujer.

15. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para inhibir la proliferación de células del músculo liso aórtico en un humano.

16. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para inhibir la restenosis en un humano.

17. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y estrógeno para la preparación de un medicamento para aliviar los síntomas del síndrome post-menopáusico en una mujer.

18. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y progestina para la preparación de un medicamento para aliviar los síntomas de síndrome post-menopáusico en una mujer. RESUMEN DE LA INVENCIÓ La invención proporciona los compuestos de la fórmula I, en donde R1 es hidrógeno, hidroxilo, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, -OCOO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCO (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -OCOAr en donde Ar es .fenilo o fenilo opcionalmente sustituido, -OSO; (alquilo de cadena lineal de 4 a 6 átomos de carbono), o -OS03H; R" es R1, Cl o F; con la condición de que al menos uno de R1 o R2 sea -0S03H; R3 es 1-piperidinilo, 1-pirrolidinilo, metil-1-pirrolidinilo, dimetil-1-pirrolidino, 4-morfolino, dimetilamino, dietilamino, diisopropila ino, o 1-hexametilenimino; y n es 2 ó 3; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo. La presente invención se refiere además a las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la fórmula (I), que contienen opcionalmente estrógeno o progestina, y el uso de tales compuestos, solos, o en combinación con estrógeno o progestina, para aliviar los síntomas del síndrome post-menopáusico, particularmente la osteoporosis, condiciones patológicas relacionadas al sistema cardiovascular, y cáncer dependiente de estrógeno. Los compuestos de la presente invención son también útiles para inhibir la enfermedad fibroide uterina y la endometriosis en mujeres y la proliferación de células del músculo liso aórtico, particularmente restenosis, en humanos.