MXPA98008971A - Arroz resistente a herbicidas - Google Patents

Abstract

Se describen plantas de arroz con dos mecanismos separados pero sinergísticos para resistencia a herbicidas que normalmente inhiben una enzima de acetohidroxiacido sintasa (AHAS) de la planta. La resistencia a herbicidas de plantas con ambos mecanismos de resistencia es sustancialmente mayor de lo que se podría esperar de una sin recombinación de los dos tipos de resistencia. El primero de los dos mecanismos de resistencia es una ruta metabólica que no se entiende completamente, pero que por símisma no implica una enzima de AHAS mutante. El segundo mecanismo de resistencia en una enzima de AHAS mutante, una enzima que muestra resistencia directa a niveles de herbicida que normalmente inhiben la enzima, tanto en análisis in vivo como in vitro. Además de controlar el arroz rojo, muchos herbicidas que inhiben a AHAS también controlan efectivamente otras malezas que son comunes en campos de arroz. Varios de estos herbicidas tienen actividad residual, de manera que un tratamiento controla tanto las malezas existentes como las malezas quese desarrollan después. Ningún herbicida actualmente disponible para usarse sobre el arroz tiene actividad residual contra un amplio espectro de malezas incluyendo arroz rojo. Con la actividad residual efectiva contra el arroz rojo y otras malezas, los productores de arroz ahora tienen un sistema de control de malezas superior a aquellos utilizados actualmente.

Description

ARROZ RESISTENTE A HERBICIDAS CAMPO TÉCNICO Esta invención se refiere a arroz resistente a herbicidas, particularmente a arroz resistente a los herbicidas imazetapir, imazaquina, nicosulfurona, ppmisulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, derivados de estos herbicidas u otros herbicidas que interfieren con la enzima de planta de acetohidroxiacido sintasa ANTECEDENTE DE LA INVENCIÓN El desarrollo de resistencia a herbicidas novedosos en plantas ofrece ventajas de producción y económicas significativas La producción de arroz frecuentemente se restringe por la prevalencia de una especie cubierta de maleza del arroz que florece en los campos de arroz comerciales La maleza comunmente se l lama "arroz rojo ' y pertenece a la misma especie del arroz cu ltivado (Oryza sativa L ) La simi litud genética del arroz rojo y el arroz comercial ha hecho difícil el control herbicida del arroz rojo Los herbi cidas Ord ra (moli nato hexah?dro- 1 -H-azep?na-1 -carbot?oato de S-eti lo) y Bolero (tiobencarb dietilcarbamotioato de S-[( . -clorofen?l ) met?lo] ) ofrecen la supresión parcial del arroz rojo pero ningún herbici da que actualmente controla el arroz rojo se puede utilizar actualm ente en campos de arroz debido a la sensibi lidad simu ltanea de l arroz comercial a dichos herbicidas El desarrol lo de un arroz comercia l m utante q ue es resistente a un herbicida efectivo para el arroz rojo incrementará en gran parte la capacidad de controlar las infestaciones de arroz rojo Los productores de arroz en el sur de los Estados Unidos normalmente rotan los cultivos de arroz con soya para ayudar a controlar las infestaciones con arroz rojo Mientras que esta rotación no es económicamente deseable de manera usual, frecuentemente es necesario, dado que no hay herbicidas actualmente disponibles para controlar selectivamentelas infestaciones del arroz rojo en cultivos de arroz comerciales Durante la rotación de soya , el productor tiene una amplia escala de herbicidas disponibles que se pueden utilizar sobre el arroz rojo, de manera que el arroz de nuevo crecerá el año siguiente Los productores de arroz de los Estados U nidos pueden perder 200-300 dolares por acre por año cultivando soya en lugar de arroz, una perdida potencial que afecta alrededor de 2 5 millones de acres anualmente Las pérdidas adicionales en los Estados Unidos calculadas a 50 millones de dolares por año resultan del precio inferior pagado por los molinos para em barques de granos contaminados con arroz rojo Las perdidas económ i cas totales debid o al arroz rojo en la producción de arroz en el Sur de los Estados Unidos se calcula que son de 500 dolares a 750 millones de dolares al año Los productores de arroz normalmente util izan los herbicidas de propanilo (nombre comercial Stam) o molinato (nombre comercial Ordram) para controlar malezas en la producción del arroz El propan ilo no tiene actividad residual El mol inato es toxico para los peces. Ninguno de estos herbicidas controla el arroz rojo. El i aze tapir (ácido (+)-2-[4,5-d¡h¡dro-4-metil-4-(1 -metí let il)-5-oxo-1 H-imidazol-2-il]-5-et¡l-3-piridinocarboxílico) ofrece una alternativa ambientalmente aceptable para el molinato, tiene actividad de control de maleza residual de la cual carece el propanilo y es un herbicida muy efectivo sobre el arroz rojo Imazetapir también ofrece excelente control de otras malezas importantes en la producción de arroz, incluyendo pastura de corral La pastura de corral es una maleza principal en la producción del arroz y actualmente se controla con propanilo o molmato. Sin embargo, hay reportes de que la pastura de corral está desarrollando resistencia al propanilo El mercado potencial total para variedades de arroz que son resistentes a un herbicida q ue puede controlar el arroz rojo y aproximadamente 2 43 millones de hectáreas en los Estados U nidos y el mercado afuera de Estados U nidos es potencialmente mucho mayor La producción de arroz mundial ocupa aproximadamente 161 m il lones de hectá reas El arroz rojo es una grave plaga de maleza en la producción de arroz en los Estados Unidos Brasil, Australia , España, y en la mayoría de los otros países productores de arroz Los herbicidas que inhiben la enzima de acetohidroxiacido sintasa podrían ofrecer un número de ventajas sobre los herbicidas actualmente disponibles si pud ieran utilizarse en la producción de arroz comercial Las ventajas potenciales i nclu yen la actividad resid ua l larga contra las malezas , control efectivo de las malezas más importantes en la producción de arroz, incluyendo arroz rojo, y aceptabilidad ambiental relativa La Patente de los Estados Unidos número 4,761 ,373 describe el desarrollo de plantas de maíz resistentes a herbicidas mutantes a través de la exposición de los cultivos de tejidos a los herbicidas Las plantas de maíz mutantes fueron las que tienen una enzima alterada, a saber, acetohidroxiacido sintasa, la cual confirió resistencia a ciertos herbicidas de imidazolinona y sulfonamida Lee y otros , "The Molecular Basis of Sulfonylurea Herbicide Resistance in Tobacco", The EWIBO J , vol 7, no 5 pp 1241 -1248 ( 1988) , describe el aislam iento y caracterización de Nicotiana tabacum de genes mutantes especificando las formas resistentes de herbicidas de acetolactato smtasa (también conocido como acetohidroxiacido sintasa) y la reintroduccion de estos genes en l ineas sensibles de tabaco Saxena y otros, "Herbicide Resistance in Datura innoxia' Plapt Physiol , vol 86, pp 863-867 ( 1988) describe varias l i neas de Datura innoxia resistentes a herbicidas de sulfonilurea, algunos de los cuales también se encontraron con resistencia cruzada a los herbicidas de imidazolinona azur y otros, "Isolation and Charactepzation of Plant Genes Coding for Acetolactate Syntasa the Target Enzyme for Two Classes of Herbicides ' Plant Physiol vol 85 pp 1 1 10- 1 1 17 (1987) tratan investigaciones en el grado de ho molog ía entre acetolactato si ntasas de d iferentes especies También se hace referencia a la Solicitud de Patente de E U A comunmente asignada S N 07/657,429 presentada el 19 de Febrero de 1991 , que describe plantas transformadas con resistencia a imidazolinona tratada genéticamente, conferida a través de un gen clonado de una planta tal como una Arabtdopsis thaltana mutada También ver un documento relacionado con Sathasivan y otros, "Nucleotide Sequence of a Mutant Acetolactate Synthasa Gene from an I midazol inone-resistant Arabidopsis thaliana var Col u mbia", Nucleic Acids Research vol 18, no 8, p 2188 (1990) Ejemplos de enzimas de AHAS resistentes a herbicidas en plantas diferentes al arroz se describen en la Patente de E U A numero 5,013,659 , K Newhouse y otros, "Mutations in corn (Zea mays L ) Conferpng Resistance to Imidazolmone Herbicides" Theor Appl Genet , vol 83, pp 65-70 (1991 ) K Sathasivan y otros "Molecular Basis of Imidazolinone Herbicide Resistance in Arabidopsis thaliana var Columbia ', Plant Physiol Vol 97 pp 1044-1050 (1991 ) , B Miki y otros , Transformation of Brassica napus cañóla cultivars with Arabidopsis thaliana Acetohidroxyacid Synthas e Genes and Analysis of Herbicide Resistance" Theor Appl Genet vol 80 pp 449-458 ( 1990) , P Wiersma y otros, "I solation Exp ression and Phylogenetic Inheptance of an Acetolactate Synthase Gen e from Brassica napus", Mo l Gen Genet vol 219, pp 413-420 ( 1989) y J Odell y otros Co mpa psop of I n creased Expression of Wi ld-Type and Herbicide-Resista nt Acetolactato Synthase G en es m Transgen?c Plants , and Indication of Postranscriptional Limitation on Enzyme Activity", Plant Physiol. , vol. 94, pp. 1647-1654 (1990) . S. Sebastian y otros, "Soybean Mutants with Increased Tolerance for Sulfonylurea Herbicides", Crop. Sci. , vol. 27, pp. 948- 5 952 (1987) describe mutantes de soya resistentes a herbicidas de sulfonilurea mediante un mecanismo diferente a una forma alterada de la enzima AHAS K. Shimamoto y otros, "Fertlle Transgenic Rice Plants Regenerated from Transformed Protoplasts", Nature, vol 338, pp 10 274-276 (1989) descpbe un protocolo de transformación genético en el cual la electroporación de protoplastos se util izó para transformar un gen que codifica ß-glucuronidasa en arroz T Terakawa y otros, "R ice Mutant Resistant to the Herbicide Bensulfurona Methyl (BSM) by m vitro Selection" , Japan , J Breed , 15 vol 42, pp 267-275 ( 1992) describe una mutante de arroz resistente a un herbicida de sulfonilurea , derivado por presión selectiva en cultivo de tejidos cal losos La resistencia se atribuyo a u na enzi ma d e AHAS mutante Enseguida se dan las publicaciones por el inventor (o el 20 inventor y otros autores) que se refieren a la investigación sobre variedades de arroz resistentes a herbicidas Estas publicaciones son T. Croughan y otros , "R ice and Wheat I mprovement throug h Biotechnology", 84th Annual Research Report. Rice Research Station, 1992, pp 100- 103 (1993) , T Crough an y otros , "Rice and 25 Wheat I m provement through Biotechn ology", 85Í? Annual Research Report, Rice Research Station, 1993, pp. 116-156 (1994); T. Croughap, "Application of Tissue Culture Techniques to the Development of Herbicide Resistant Rice", Louisiana Agriculture, vol. 37, no. 3, pp 25-26 (1994); y T. Croughan y otros, "Rice Improvement through Biotechnology", 86th Annual Research Report, Rice Research Station, 1994, pp. 461 -482 (Septiembre 1995) (Observar que el Annual Research Reports del Rice Research Station se publicaron en el año después del año calendario para el cual se reportan las actividades. Por ejemplo, el 84-/7 Annual Research Report, Rice Research Station, 1992, que resume la investigación conducida en 1992, se publicó en 1993) . En seguida se dan solicitudes de patentes de Estados Unidos cedidas comúnmente que se refieren al arroz resistente a herbicidas también presentadas por el presente inventor S N 08/345,213 presentada el 28 de Noviembre de 1994, ahora patente de Estados Unidos número 5,545,822, y S N 08/628,031 , presentada el 4 de A b ril de 1996 DESCRIPC IÓN DE LA I NVEN CIÓN En la presente invención , se ha desarrollado resistencia a herbicidas novedosos y se ha expresado en plantas de arroz S e piensa que el a rroz novedoso es el primero que tiene resistencia a herbicidas, tanto antes de su surgi miento, como después de s u surgimiento, que son efectivos contra el arroz rojo El arro z novedoso ha demostrado resistencia, o se espera que d emuestre resi stencia a cada uno de los siguientes herbicidas i mazetap i ' imazaquina, nicosulfurona, ppmisulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet e imazamox El arroz novedoso también se espera que sea resistente a derivados de estos herbicidas y por lo menos a algunos de otros herbicidas que normalmente inhiben acetohidroxiacido sintasa (AHAS), particularmente herbicidas de imidazolmona y sulfopilurea La actividad de herbicida de cada una de los herbicidas anteriores se conoce debido a su efecto sobre la enzima acetohidroxiacido sintasa (AHAS) Esta enzima cataliza el primer paso en la síntesis de los aminoácidos leucina, valina e isoleucina La inhibición de la enzima AHAS normalmente es fatal para plantas Las plantas de arroz, de acuerdo con esta invención , tienen dos mecanismos separados para resistencia a herbicidas que normalmente inhiben AHAS Se ha descubierto inesperadamente que la incorporación de dos mecanismos de resistencia a herbicidas en una sola planta es sinergística la resistencia a herbicidas de plantas con ambos mecanismos es substancial mente mayor que lo que se podría esperar para una sola combinación de dos tipos d e resistencia El primero de los dos mecanismos de resistencia es una ruta metabol ica que no se entiende completamente pero que no implica por si misma u na enzima a AHAS m utante El ppmer mecanis mo confiere resistencia a herbicidas aun a plantas con una enzima de AHAS no resistente de tipo silvestre El segundo mecanismo de resistencia es una enzima de AHAS mutante una enzima que muestra resistencia directa a niveles de herbicida que normalmente inhiben la enzima tanto en análisis tn vivo como m vitro El sinergismo de la combinación de dos mecanismos de resistencia fue sorprendente Las plantas de arroz no resistentes de control positivo se murieron completamente por el herbicida aplicado a un régimen equivalente a 0 07 kg del ingrediente activo imazetapir por hectárea (régimen recomendado para controlar malezas) En contraste las plantas que tienen ambos mecanismos de resistencia no mostraron daño visible 36 días después del tratamiento aun cuando se rociaron con cinco veces el nivel de imazetapir (0 35 kg de ingrediente activo por hectárea) Treinta y seis d ías después de tratamiento los h íbridos tuvieron una clasificación de 10 sobre una escala de 0- 10 en la cual "0 denota una planta muerta y "10 daño no visible equivalente a una planta de control negativo rociada sin herbicida Para comparación al mismo nivel de tratamiento (0 35 kg i a /hec) las plantas con solamente uno de los dos mecanismos de resistencia exh ibieron daño substancial 36 d ías después del tratam iento Las plantas con solamente el pri mer mecanismo de resistencia tuvieron una clasificación de aproximadamente 0 6 sobre la mis ma escala de 10 puntos y las plantas que tienen solamente e l seg undo mecanismo de resistencia tuvieron un régimen de aproximadamente 4 0 Fue totalmente inesperado que las plantas con ambos mecanismos de resistencia no exhibieran daño por herbicida bajo condiciones que causaron daño substancial a plantas que tienen un solo mecanismo de resistencia Además de controlar el arroz rojo, muchos herbicidas de inhibición de AHAS también controlan efectivamente otras malezas que se encuentran comúnmente en campos de arroz. Varios de estos herbicidas tienen actividad residual, de manera que un tratamiento controla tanto las malezas existentes así como malezas que brotan después, en cuanto a que tiene consecuencias significativas para la producción del arroz. Ningún herbicida actualmente disponible para usarse sobre el arroz tiene actividad residual contra un amplio espectro de malezas incluyendo arroz rojo. Con la actividad residual efectiva contra el arroz rojo y otras malezas , los productores de arroz ahora tienen un sistema de control de malezas más superior que aquellos actualmente utilizados. Un papel del agua en la producción de a rroz está en el contro l de malezas, una capa de agua en reposo en e l campo de arroz inh ibe el desarrollo de malezas Con un herbicida qu e tiene propiedades de control de maleza residual , los productores tendrán mucho mayor flexibilidad en el manejo del agua. La inu nda ció n de los campo s ahora puede retardarse, lo cual a su vez ayuda a controlar lo s gusanos del agua de arroz, la plaga principal de insectos del arroz Alternativamente , o tal vez junto con , los costos de bo m beo se pod rían reducir retardando las in undacion es hasta que cayera s uficiente lluvia para i nundar un campo a n ing ún costo para e l productor MODOS PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Mecanismo de Resistencia 1 El primer mecanismo de resistencia de la combinación sinergistica es una resistencia con base metabolica que no ha sido completamente caracterizada pero que actúa independientemente de la enzima de AHAS Este primer mecanismo de resistencia a herbicidas es el expresado por la planta de arroz que tiene numero de acceso de ATCC 75295 Las plantas de arroz que tienen el primer mecanismo de resistencia se desarrollaron a través de cultivo de antera El cultivo de antera es una técnica que puede ocasionar variabilidad genética entre clones Las células no se expusieron al herbicida mientras estaban en cultivo En su lugar la progenie de plantas desarrollada de los cultivos se expuso al herbicida en condiciones de campo Mientras q ue se tamizaba la resistencia a herbicidas a nivel celula r tenia la ventaja de tam izar n úmeros m ucho más grandes de genomas in d ividuales que son ventajas para prueba inicial en el campo como se realizó en la presente En particular no siempre hay correspondencia entre las características expresadas por células de plantas que se desarrollan en cultivo y los rasgos de las plantas completas desarrolladas en condiciones de cam po Esta li nea de resistencia se derivo llevando a cabo cultivo de antera en la progenie F de una cruza de refuerzo hecha pol mand o u na planta de arroz de la variedad "Lemont con polen de la variedad de arroz Mercury seguido por una cruza de refuerzo utilizando polen de este híbrido para polinar una planta de la variedad "Mercury La cruza de refuerzo resultante se describió como Mercury // Lemont / Mercury. Las anteras recuperadas de una planta que resulta de esta cruza de refuerzo se sembraron en placas en medio de inducción de callos y los callos resultantes se transfirieron al medio de regeneración de plantas. Los procedimientos utilizados generalmente fueron como se describió en Croughan and Chu , "Rice (Oryza sativa L.) : Establish ent of Callus Cultures and the Regeneration of Plants" en Bajaj (Ed.), "Biotechnology m Agriculture and Forestry", pp 19-37 (1991 ) . Varias plantas regeneradas se produjeron y se desarrollaron hasta la madurez en un invernadero para producir semillas. Las semillas de progenie se plantaron en campo abierto, y se realizaron aplicaciones de herbicidas utilizando en un equipo de rociado montado en un tractor de jardín Un grupo de hileras de 4 , 193 progenies derivadas de este procedimiento de cultivo de antera se plantaron en un campo abierto y se rociaron con 21 4 g/hec de Pursuit (5 6 g de ingred iente activo i mazetapir por hectárea) en la etapa de cuatro hojas del desarrollo de la plántula Todas las hileras menos una se dañaron o murieron Sin embargo , una hilera no mostró síntomas aparentes, cuatro semanas después del tratamiento in icial , parte de la hilera resi stente se removió del sitio de prueba como una precaución y todo el sito de prueba después se roció con 44 8 g/h ec de Pu rsuit ( 1 1 3 gramos de i ngrediente activo imazetapir por hectárea) Este tratam iento fue letal para todas las h ileras que sobrevivieron al rociado i nicial (pero en un estado dañado) y de nuevo no indujeron síntomas aparentes en la l ínea resistente Para aumentar al máximo la producción de semillas, las plantas individuales de la hilera resistente se separaron y se transplantaron en un espacio muy amplio Todas las plantas probaron ser fértiles Aproximadamente 3 1 kg de semillas fértiles se cultivaron de las plantas resistentes hasta su madurez La resistencia de estas plantas a otros diferentes herbicidas que inhiben a AHAS también fue probada Los puntos de campo de 2 7 metros se plantaron en siete hileras de arroz por muestra La prueba incluyo nueve variedades de arroz de revisión y la l i nea de arroz ATCC 75295 Se utilizo un botalón de rociado protegido para aplicar herbicida, rociando de seis a siete hileras en cada punto Los cuatro herbicidas utilizados fueron Pu rsuit (imazetapir ácido (+J-2-[4 5-d?h?dro-4-met?l-4-( 1 -met?let?l)-5-oxo- 1 H-? m?dazol-2-?l]-5-et? I-3-pi pdinocarboxilico) , Scepter (imazaquin 2-[4,5-d?h?dro-4-met?l-4-(1 -met?let?l)-5-oxo-1 H-?m?dazol-2-?l) ammocarbonilo) amiposulfonil))-N N-d?met?l-3-p?pd?nocarboxam?da) y Beacon (ppmisulfuron 3-[4 6-bis (difluoro metox?)-p?r?m?d?n-2-?l]- 1 (2-metox?carbon?lfen?lsulfon?l)-urea) Los herbicidas se aplicaron a dos parcelas por replicado para cada herbicida cua ndo el arroz estaba en la etapa de mad u rez de tres hojas Dos parcelas por replicado a cada variedad de revisión y de la li nea resistente se dejaron si n rociar como contro les El tratam iento con Accent utilizo 3 75 gramos de producto (2 8 gra mos de ingrediente activo) por hectárea con 0 25% de agente tensoactivo no iónico El trata miento de Pursuit utilizo 22 4 g ramos de p rod ucto (5 69 gramos de ingrediente activo) por hectárea con 0 25% agente tensoactivo no iónico El tratamiento de Scepter utilizó 1 19 litros de producto (6 8 gramos de ingrediente activo) por hectárea con 0 25% de agente tensoactivo no iónico El tratamiento con Beacon utilizó 4 2 g de producto (3 1 gramos de ingrediente activo) por hectárea con 0 25% de agente tensoactivo no iónico Las parcelas de prueba mostraron todas daño extensivo o muerte completa de los tratamientos con herbicida La li nea resistente a herbicida mostró excelente resistencia a Accent y buena resistencia a Scepter y Pursuit La resistencia Beacon fue inferior pero aun fue significativamente mayor que la de las variedades de arroz de prueba Una prueba similar con las mismas variedades de arroz y la linea ATCC 75295 se llevo a cabo en la etapa de desarrollo de cinco hojas (es decir plantas qui nce d ías más grandes que en la prueba descrita antes) util izando Accent Scepter y Pursu it a los reg í menes dados antes Las parcelas de prueba de nuevo mostraron daño extenso o muerte completa de los tratamientos con herbicida La li nea ATCC 75295 de nuevo mostró excelente resistencia a Accent y buena resistencia a Scepter y Pursuit En las pruebas subsecuentes esta linea también exh ibió resistencia a Arsenal (i mazapir) y Cadre (imazamet) La l i nea ATCC 75295 fue resistente únicamente cuand o se aplicó el herbicida después de emerger Los análisis de la enzima AHAS expresada po r la l i nea de arroz de ATCC 75295 mostraron que el primer mecanismo de resistencia fue independientemente de la enzima de AHAS y que el mecanismo provee protección aun cuando la propia enzima AHAS es susceptible al herbicida y no se sobre-expresa. La resistencia a la enzima AHAS de la l ínea de arroz ATCC 75295 se comparó a la resistencia de las enzimas AHAS de las 5 variedades de arroz "Lemont" y "Mercury", la variedades que fueron los ancestros de esta línea de arroz. Los procedimientos utilizados para analizar la actividad de acetohidroxiacido síntasa fueron substancialmente como se describió en B. K. Singh y otros, "Assay of acetohidroxiacid Synthasa", Analitical Biochemistry, vol . 171 , pp. 173- 179 (1988), excepto como se observa. En el primer párrafo de "Materials and Methods" de Sing h en lugar de células en cultivo e n suspensión de maíz, se utilizaron los tejidos de tallo de las plántulas de arroz desarrolladas en invernadero y la etapa d e desarrollo de la cuarta hoja . Se removieron las briznas de las hojas y 40.0 gramos (peso fresco) de tejido se extrajeron de la misma manera para cada una d e las tres variedades. En la sugerencia d el primer autor, B . K. Síngh (comunicación personal) , el paso de desalación mencionado en la parte inferior de la primera columna d e Singh bajo "Materia ls and Methods" se eli minó . El herbicida Pu rsu it (¡mazetapir) se incluyó en la "mezcla de reacción normal" para el a nál isis de AHAS en las concentraciones indicadas en la siguien te Tabla 1. Se realizaron pruebas de formación de acetolna directa du rante el anális is de la enzima . Cada tratam iento se llevó a cabo con dos replicados.

Como se muestra en la Tabla 1 (que expresa actividades de la enzima como un porcentaje de control), la enzima de AHAS de Lemont mostró la mayor resistencia a imazetapir, seguido por el de Mercury, y la AHAS de la línea de arroz ATCC 75295 tuvo la mayor susceptibilidad al tratamiento con imazetapir, por lo menos a la concentración más alta de herbicida probada La absorbancia calorimétrica a 520 mn en la ausencia de herbicida mostró que Lemont y la línea de arroz depositada tuvieron aproximadamente la misma actividad de AHAS no inhibida, mientras que Mercury tuvo ligeramente menor actividad (datos no mostrados) Esta observación m uestra que la resistencia de la línea ATCC 75295 no se debe a los niveles su periores de expresión de la enzima A HAS, pero resulta de otro facto r Este otro factor es actualmente desconocido, pero se piensa que tal vez implica una ruta independiente de A HAS para el metabolismo del herbicida Tabla 1 Efecto de I mazetapir sobre activi dad de AHAS en Extractos de Enzima de Arroz Norma l (Variedades Lemont y Mercu ry) y de la Línea de Arroz ATCC 75295. Actividades Expresadas como Po r ciento de Control Los valores seguidos por la misma letra en la abla 1 no fueron significativamente diferentes de otros (P < 0 05) (DMRT) Una muestra de las semillas de arroz que tienen este primer mecanismo de resistencia se deposito con American Type Culture Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive, Rockville MD 20852 el 20 de Agosto de 1992 y se le asigno el numero de Acceso de ATCC 75295 Este deposito se realizo conforme a un contrato entre ATCC y el cesionario de esta solicitud de patente Boa rd of Supervisors of Louisiana State Umversity and Agpcu ltural and Mechamcal College El contrato con ATCC provee la disponibilidad permanente y no restringida de estas semillas o la progenie de estas semillas al publico al expedirse la patente de E U A q ue describe e identifica el deposito o la publicación o la expedición abierta al publ ico de cualquier solicitud de patente de E U A o extranjera lo primero q ue se presente y la disponibilidad de estas semillas para quien se determine por el Comisionado de Patentes y Marcas de E U A que sea autorizada para lo mismo bajo los estatutos y normas pertinentes El cesionario de la presente solicitud a acordado que al deposita r las semil las se vuelvan no viables o se pierdan o destruyan cuando se cultivan bajo condi ci ones adecuadas se reemplazarán rápidamente por notificación con una muestra viable de las mismas semillas Mecanismo de Resistencia 2 El segundo mecanismo de resistencia resulta de una enzima de AHAS resistente a herbicidas La enzima de AHAS resistente preferida es la expresada por la planta de arroz que tiene el número de acceso de ATCC 97523 Las plantas de arroz que expresan esta enzima mutante se ha mostrado que tienen propiedades de resistencia a herbicidas convenientes tanto en características de invernadero como de campo El segundo mecanismo de resistencia resulto de la inducción de m utaciones en semillas de cada una de las diez variedades de arroz Se i ndujeron m utaciones por exposición ya sea a rayos gama o al m utageno químico de mentansulfonato de etilo (EMS por sus siglas en ingles) Lotes de 4 5 kg de semilla de cada variedad se sometieron a 25 k-rad de irradiación gama de una fuente de Cobalto-60 en Nuclear Science Center Louisiana State U n iversity Baton Rouge Louisiana antes de ser plantada 4 5 kg adicionales de semilla de cada variedad se dividieron en tres porciones iguales, y cada porción se remojó durante 16 horas en 0 1 % 0 5% o 1 % de EMS in mediatamente antes de ser plantad a Vanos cientos de kilogramos de semi l las se cultivaron de plantas desarrolladas de las sem il las omitidas a estos tratamientos mutagen icos La siguiente primavera la semil la cosechada se planto en tiras en un campo de plantío que ocupa un total de a lrededor de 1 38 hectáreas A la etapa de 3-4 hojas de desarrollo de semillas, ios herbicidas se aplicaron para tamizar las mutantes resistentes a herbicidas La mitad de las plántulas de cada variedad se rociaron con un tratamiento doble de nicosulfurona y la mitad se rociaron con u n tratamiento doble de imazetapir en ambos casos por un rociador mutado en tractor La nicosulfurona se aplico a un régimen de 0 01 kg/hec de ingrediente activo (i a ) por hectárea y se aplico imazetapir a 0 14 kg/hec de i a por hectárea El agente tensoactivo no iónico (0 25%) se ag rego a cada solución de rociado Aproximadamente 35 millones de plántulas de arroz se rociaron de esta forma Alrededor de cuatro semanas después solamente se identificó una planta sobreviviente La planta sobreviviente estaba en una ti ra que se había rociado con imazetapir y se derivo de la variedad de arroz madre" AS3510 tratada por exposición a 0 5% de EMS No fueron evidentes los sí ntomas de daño del tratamiento con herbicida sobre esta planta en el momento que se descubrió mientras que las demás plantas fueron severamente dañadas o muertas La planta se transfirió al invernadero para incrementar las sem il las y probarlas adicional mente La prueba subsecuente en el invernadero y campo demostraron que la progenie de esta planta de arroz tiene resistencia a vanos herbicidas que in hiben A HAS incluyendo por lo menos los sig uientes herbicidas imazetapir n icosulfu rona imazaquma imazamet imazapir y imazamox (Imazamox se vende por America n Cyana m id bajo el nombre comercial Raptor y tiene como ingrediente activo ácido (+)-5-metoximetil-2-(4-¡sopropil-4-metil-5-oxo-2-¡midazol¡n-2-il) nicotínico. Imazametes vendido por American Cyanamid bajo el nombre comercial Cadre, y tiene como ingrediente activo ácido (+)-2-[4,5-dihidro-4-metil-4-(1 -met¡l-etil)-5-oxo-1 H-im¡dazol-2-il]-5-met¡l-3-pirídincarboxílico; el nombre químico alternativo es ácido (+J-2-(4-?so?ropil-4-met?l-5-oxo-2-imidazol?n-2-il)-5-metiln?cotínico). I azapir se vende por American Cyapamid bajo el nombre comercial Arsenal, y tiene como ingrediente activo ácido 2-[4,5-d?h?dro-4-met?l-4-( 1 -metilet?l)-5-oxo- 1 H-imidazol-2-il]-3-pir?dinencarboxíl?co) Está línea es resistente a herbicidas aplicados ya sea antes del surgimiento o después del surg imiento. Los análisis de enzima de AHAS indicaro n q ue, a diferencia del caso del primer mecan ismo de resistencia a herbicidas, esta línea de arroz tiene una enzima de AHAS m utante que es responsable de la resistencia a AHAS que inhibe los herbicidas Una m uestra de las sem illas de arroz que tienen este segundo mecanismo de resistencia preferido se depositaron en American Type Culture Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive, Rockvi lle, M D 20852 en 25 de Abril de 1996, y se les asignó el número de Acceso de ATCC 97523. Este depósito se real izó conforme a un contrato entre ATCC y el cesionario de esta solicitud de patente , Board of Supervisors of Lou isiana State University an d Ag pcultural and Mechamcal College El contracto con ATCC provee la dispon i bi lidad permanente y no restringida de todas las semillas o la progenie de estas sem illas ai público para bajo la exped ición de la Patente de E U A que describe e identifica el depósito o la publicación o la abertura al publico de cualquiera de las solicitudes de patentes de Estados Unidos o extranjeras, lo que venga primero y para la disponibilidad de estas semillas para alguien determinado por el Comisionado de Patentes y Marcas de E U A que será autorizada para lo mismo bajo los estatutos y normas pertinentes El cesionario de la presente solicitud a acordado que si las semillas en depósito se vuelven no viables o se pierden o destruyen cuando se cultivan bajo condiciones adecuadas, se reemplazarán rápidamente por notificación con una muestra viable de las mismas semillas Aunque se prefiere que los dos mecan ismos de resistencia se utilicen en combinación como se trata en la sección sig uiente aun cuando se utiliza solo este segundo mecanism o de resistencia tiene propiedades superiores sobre los mecanismos previamente conocidos para resistencia a herbicidas en arroz y por lo tanto se pueden utilizar en variedades de arroz comerciales como el único mecanismo para resistencia a herbicidas La Combinación Sinergisttca Los h íbridos de las li neas de arroz ATCC 97523 y ATCC 75295 se produjeron por polinación cruzada Las pruebas de invernadero mostraron un efecto sinergistico sobre la resistencia a herbicidas La resistencia de los h í bridos fue substancialmente mayor de lo que se podría esperar de una combinación sencilla de los niveles de resistencia individuales En las pruebas de invernadero, se plantaron macetas con semilla F3 de cruzas entre las dos lineas Cada maceta se planto con semilla de una sola canícula de una sola planta, cada maceta por lo tanto fue el equivalente de hilera principal Un total de 140 macetas se plantaron en esta manera, junto con 40 macetas de vanos genotipos no resistentes para comparación Se aplico imazetapir en la etapa de 2-3 semanas después de la plantación a regímenes eq uivalentes a 0 07 kg/hec de ingrediente activo (i a ) por hectárea, 0 14 kg a i/hectarea y 0 35 kg i a /hectárea Debido a que el material que se esta probando tuvo u na población de F3 con genes aun en segregación las plantas individuales tuvieron diferentes niveles de resistencia En el momento de que esta solicitud madre esta siendo presentada no h ubo suficiente tiempo para que crecieran li neas de arroz que fuera n demostrablemente homozígoticas para ambos mecanismos de resistencia El desarro llo de dichas l ineas homoci goticas demostrablemente sera rutina para alguien con experiencia ordinaria en la materia pero requerirán tiempo adicional Algunas plantas de F3 no heredaron genes de resistencia y fueron tan suscepti bles como las variedades de prueba sufriendo de mortalidad al 100% en todos lo tratamientos En el otro extremo del espectro las plantas que heredaron am bos mecanismos de resistencia y exhi bieron tolera ncia a todos los niveles del herbicida probado incluyeron el tratamiento mas alto de 0 35 kg de i a por hectárea La resistencia de estas plantas fue substancialmente supepor que la resistencia de ia línea madre y también fue substapcialmente superior de lo que se podría esperar de una simple combinación de los dos niveles de resistencia El sinergismo de la combinación de dos mecanismos de 5 resistencia fue sorprendente Las plantas de arroz no resistentes de control positivo se murieron completamente por el herbicida aplicado a un régimen equivalente a 0 07 kg de ingrediente activo imazetapir por hectárea En contraste, las plantas que tienen ambos mecanismos de resistencia no mostraron daño visible 36 días después del tratamiento aun cuando se rociaron con el nivel mas alto de imazetapir (0 35 kg de ingrediente activo por hectárea) Estos h íbridos tuvieron una clasificación de 10 en una escala de 0- 10 en la cual 0" denoto una planta muerta, y " 10" denoto sin daño visible equivalente a una planta de control negativo rociada sin herbicida Por comparación, al mismo nivel de tratamiento (0 35 kg i a /hec) las plantas con solamente uno de los dos mecanismos de resistencia exh ibió daño substa ncial 36 dí as después de tratamiento Las plantas con solamente el primer mecanismo de resistencia tuvieron una clasificación de aproxi madamente 0 6 sobre la misma escala de 10 puntos y las plantas que tienen solamente el segundo mecanismo de resistencia tuvieron u na clasificación 4 0 (Ver la colum na derecha en siguiente Tabla 2) Fue totalmente inesperado que las plantas con ambos mecanismos de resistencia no exh ibieran daño con herbicida a todas las condiciones que ocasionaron daño substancial a las plantas teniendo un solo mecanismo de resistencia La Tabla 2 resume mediciones tomadas 36 días después de rociar ef arroz en la etapa de 2-3 hojas de desarrollo Tabla 2 Clasificaciones de Vigor de Plantas de Arroz 36 Días después de Tratamiento con Varios Niveles de Imazetapir, en una escala de 10 puntos *Nota Todos los controles no resistentes murieron por la aplicación de imazetapir a cada una de las clasificaciones que no son de cero listadas en la Tabla 1 Imazetapir es un herbicida de acción lenta Cuando las clasificaciones anteriores se asignaron 36 d ías después del tratamiento, unas cuantas plantas control no resistentes subsistieron en un estado enormemente debilitado y subsecuentemente murieron También se observó que las plantas F3 resistentes recuperaron de la aplicación de herbicida y reasumieron el crecimiento mucho más rápidamente Las plantas F3 resistentes empezaron a reasumir el crecimiento dentro de aproximadamente una semana después de la aplicación del herbicida, mientras que las plantas ATCC 97523 requirieron aproximadamente dos semanas, y las plantas ATCC 75295 requirieron alrededor de tres semanas para reasumir el crecimiento visible. Las pruebas de campo de las dos líneas "madres" y de los h íbridos de F- confirmaron los estudios de invernadero Vanos miles de h ileras principales se plantaron en bloques de 1000 hileras cada uno Las variedades de prueba se intercalaron incluyendo tanto las variedades madres de ATCC 97523 y ATCC 75295, así como vanos cultivos no resistentes. Los bloques se rociaron con diferentes herbicidas que inhiben a AHAS a vanas resistencias y varías etapas de desarrollo Una vez q ue se identificó que las progenies son demostrablemente homocigóticas para ambos mecanismos d e resistencia, esas progenies se utilizaron para producir variedades para uso comercial La cruza del arroz resistente homocigótico con variedades establecidas o cultivos a través de medios normales producirá variedades de arroz resistentes a herbicidas e híbridos con buena productividad y otras propiedades comercial mente deseables.

Otros genes que codifican enzi mas de AHAS resistentes a herb icidas se pueden utilizar en lugar de la enzima A HAS resistente preferida para la línea de arroz ATCC 97523 en la combinación sinergística. Cualquiera de estos genes puede transformarse en las plantas de arroz a través de los protocolos de transformación genéticos de plantas que son bien conocidos en la materia Varios de dichos genes son conocidos en la materia e incluyen aquellos, por ejemplo, descritos por la Patente de E U A No 4,761 ,373, Lee y otros, "The Molecular Basis of Sulfonylurea Herbicide Resistance in Tobacco", The EMBO J., vol 7, no 5, pp 1241 - 1248 (1988), Saxena y otros, "Herbicide Resistance m Datura innoxia", Plant Physiol , vol 86, pp 863-867 (1988), Solicitud de patente de E U A S N 07/657,429, Sathasivan y otros , "N ucleotide Sequence of a Mutant Acetolactate Synthase Gene from an Imidazolinone-resistant Arabidopsis thaliana var Columbia", N ucleic Acids Research vol 18 , no 8, p 2188 (1990) , Patente de E U A 5, 01 3 ,659, K Newhouse y otros, "Mutations in corn (Zea mays L ) Conferring Resistance to Im idazolinone Herbicides", Theor Appl Genet , vol 83 pp 65-70 ( 1991 ) , K Sathasivan y otros 'Molecular Basis of I midazol mon e H erbicide Resistance in Arabidopsis thaliana var Col umbia" , Plant Physiol Vol 97, pp 1044- 1050 ( 1991 ) B Miki y otros , "Transformation of Brassica napus cañóla cultivars with Arabidopsis thaliana Acetohydroxyacid Synthasa Genes and Analysis of Herbicid e Resistance", Theor Appl Genet , vol 80, pp 449-458 ( 1990) P Wiersma y otros, "Isolation, Expression and Ph ylogenetic Inheptance of an Acetolactate Synthase Gene from Brassica napus" Mol Gen Genet , vol 219 , pp 413-420 ( 1989) , J Odell y otros "Com papson of Increased Expression of Wild-Type and Herbicide-Resistant Acetolactate Synthase Genes in Transgenic Plants, and Indication of Postranscpptional Limitation on Enzyme Activity", Plant Physiol vol 94, pp 1647-1654 (1990), y T Terakawa y otros "Rice M utant Resistant to the Herbicide Bensulfurona Methyl (BSM) by m vitro Selection" , Japan J Breed , vol 42, pp 267-275 (1992) Diversos Debido a que el arroz rojo y el arroz comercial pertenecen a la m isma especie la plantación de un cultivo de arroz comercial resistentes a herbicidas abarca algunos riesgos de que la resistencia de herbicidas podría transferirse a arroz rojo Sin embargo el arroz es de auto-polinación y la frecuencia de cruzamiento exogeno es baja aun entre plantas inmediatamente adyacentes que florecen en sincronía La probabilidad de transferir la resistencia al arroz roj o podrí a reducirse al m ínimo produciendo variedades resistentes q ue florecen significativamente después de aquellas del arroz rojo (v g r utilizando técnicas de producción convencionales o mediante cualquier cultivo de anteras) La l i nea "madre de ATCC 97523 casualmente madura muy tempranamente de hecho sus semillas están listas para cosecharse antes de que empieza a florear el arroz rojo Manteniendo este fenotipo de maduración temprana en variedades resistentes derivadas de la li nea de arroz híbrida sera conveniente para producir la probabili dad de cruzas exogenas con el arroz rojo Si una cepa de arroz rojo se desarrollará la cual fuera resistente a los mismos herbicidas que el arroz comercial resistente, las plantas siempre se pueden tratar con una amplia escala de otros herbicidas disponibles, particularmente si el arroz rojo resistente se descubriera tempranamente, antes de tener oportunidad de propagarse. Debido a que imazetapir, imazaquina, nicosulfurona, primisulfurona, imazamet, imazamox e imazapir inhiben la actividad de acetohidroxiacido sintasa, y debido a que la resistencia a cada uno de estos herbicidas se ha demostrado en ATCC 75295, ATCC 97523, o su híbrido resistente al herbicida novedoso, se espera que el arroz sea resistente a herbicidas que normalmente inhiben esta enzima Además de aquellos tratados antes, dichos herbicidas incluyen por lo menos los siguientes sulfometurona (nombre comercial Oust, nombre químico éster metílico de ácido 2-[[[[(4,6-dimet?l-2-pír¡midinil)am?no]carbonil]am?no]sulfon?l]benzo?co), metsulfurona de metilo (nombre comercial Ally, nombre químico benzoato de 2-[[[[(4-metox?-6-metil-1 ,3,5-tr?az?n-2-il)am?no]carbon?l]am?no]sulfonilo]), mezcla de tpfensulfuron-metilo y tpbenuron metilo (nombre comercial Harmony Extra, mezcla de 3-[[[[(4-metox?-6-met?l-1,3,5-tr?az?n-2-?l) am?po]carbon?l]am?no]sulfon?l]-2-t?ofencarboxilato de metilo y 2-[[[[(N-(4-metoxi-6-met?l-1 ,3,5-tpaz?n-2-¡l)met?lam?no]carbon?l]am?no]sulfon?l]2-t?ofepcarbox?lato) de metilo, clorosulfuropa (nombre comercial Glean o Telar, nombre químico 2-cloro-N-[(4-metox?-6-met?l-1,3-5-tr?azm-2-?l)am?no- carboniljbencensulfonamida) ; clorimuron etilo (nombre comercial Classic, nombre quím ico 2-[[[[(4-cloro-6-metox¡pipmidin-2-il)amíno]carbonil]amino]sulfonil benzoato) de etilo; tribenuron metilo (nombre comercial Express, nombre químico 2-[[[[(N-(4-metox¡-6-metil- 1 , 3, 5-tríazin-2-il)met?lam ino]carbonil]amino]sulfon?l benzoato) de metilo; imazametabenzo-metilo (nombre comercial Assert, nombre químico éster metílico de m-á'cido (4-?sopropil-4-met?i-5-oxo-2-imidazolin-2-il-toluico) ; y éster metílico de m-ácido 2-(4-isopro??l-4-met?l-5-oxo-2-imidazol¡n-2-?l-toluico) , y tpasulfurona (nombre comercial Amber, nombre químico 3-(6-metoxi-4-met?l-1 ,3,5-triazin-2-il)-1 -[2-(2-cloroetox?)-fen?lsulfon?]-urea Los resultados preliminares de las pruebas que se realizan antes de la fecha en la cual se presenta esta solicitud mostraron que las plantas de arroz novedosas exhibieron por lo menos alguna resistencia a los herbicidas Oust, Ally , Pinnacle, G lean , Express, y Amber Como se usa en las reivindicaciones siguientes, a menos que se indique claramente de otra manera por el contexto, se pretende q ue el término "planta de arroz" abarque plantas de arroz en cualqu ier etapa de madurez, as í como al cualquier célula, tej ido u órgano tomado o derivado de dicha planta, incl uyendo, sin li mitación , cualquier semil la , hojas , tallos, flores, raíces , cé lu las ú n icas , gametos, cultivos de anteras, cultivos de tejidos o protoblastos Las descripciones completas de todas las referencias citadas en esta especificación se incorporan aquí por referencia En el caso de un conflicto irreconciliable de alguna manera, sin embargo , deberá controlar la presente especificación.

Claims (78)

1. REIVINDICAC ION ES 1 . Una planta de arroz en donde: (a) el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz: imazetapir, ¡mazaquina, primisulfurona, nicosulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas; y (b) dicha planta es un derivado de plantas con números de acceso de ATCC 75295 y 97523; y (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de las plantas con números de acceso de ATCC 75295 y 97523.
2. 2. U na planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la in hibición de ¡mazetapir, a niveles de imazetapir que podrían inhibi r normal mente el desarrollo de una planta de arroz.
3. 3 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 1 , en do nde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazaquina, a niveles de imazaq uina que podrían i nh ibi r normal mente el desarrollo de una planta de arroz.
4. 4. U na planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la i nh ibición de primisuifu rona , a n iveles de primis ulfurona q ue podrían inh ibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz.
5. 5. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de nicosulfurona, a niveles de nicosulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz
6. 6. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de sulfometurona, a niveles de sulfometurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz
7. 7 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 1 , e n donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazapir, a niveles de imazapir que podrían i nhibir normalmente e l desarrollo de una planta de arroz
8. 8 Una planta de arroz de acuerdo con la reivind icación 1 , en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición d e imazamet, a n iveles de imazamet q ue podrían inhibi r normal mente el desarrollo de una planta de arroz
9. 9 Una planta de arroz de acuerdo con la reivi ndicación 1 , en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la in hi bición de imazamox, a niveles de imazamox que podrían inhibir normalmente e l desarrollo de una planta de arroz
10. 10 Un proceso para controlar malezas en la cercanía de una planta de arroz, el proceso comprendiendo aplicar un herbicida a la maleza y a la planta de arroz, en donde (a) el desarrol lo de dicha planta es resistente a la in hibici ó n por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, imazaquina, ppmisulfurona, nicosulfurona sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox o un derivado de cualquiera de estos herbicidas, y (b) dicha planta es un derivado de plantas con números de acceso de ATCC 75295 y 97523 (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de las plantas con números de acceso de ATCC 75295 y 97523 y (d) el herbicida comprende imazetapir imazaquina ppmisulfurona nicosulfurona sulfometurona imazapir imazamet imazamox o un derivado de cualquiera de estos herbicidas
11. 11 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazetapir a niveles de imazetapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende imazetapir
12. 12 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazaquma a niveles de imazaquina que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende imazaquina
13. 13 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de ppmisulfurona a niveles de ppmisulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende ppmisulfurona
14. 14 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de nicosulfurona, a niveles de nicosulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende nicosulfurona
15. 15 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de sulfometurona, a niveles de sulfometurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende sulfometurona
16. 16 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazapir a niveles de imazetapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende imazapir
17. 17 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazamet a niveles de imazamet que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende imazameth
18. 18 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazamox a niveles de imazamox que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende imazamox
19. 19 Una planta de arroz en donde (a) el desarrol lo de dicha planta es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, imazaquina, ppmisulfurona , nicosulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas, y (b) dicha planta es un derivado de pla ntas con números de acceso de ATCC 75295 (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de las plantas con números de acceso de ATCC 75295, y (d) la planta expresa una mutante de acetohidroxiacido sintasa que es resistente a la i nh ibición por u no o mas de los sig u ientes herbicidas a niveles de herbicida que podrían inhibir una acetohidroxiacido sintasa de tipo silvestre imazetapir imazaquina , ppm isulfurona, nicosulfu rona, sulfometurona i mazapi r, imazamet, imazamox o un derivado de cualquiera de estos herbicidas
20. 20 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindi cación 19 en do nde el desarrollo de d icha planta es resistente a la i n hi bición por imazetapir a niveles de imazetapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de la planta de arroz
21. 21 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindi cación 19 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por imazaquina, a niveles de imazaquina que podrían inhibir normalmente el desarrollo de la planta de arroz
22. 22 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por ppmisulfurona, a niveles de ppmisulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de la planta de arroz
23. 23 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por nicosulfurona a niveles de imazetapir nicosulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de la planta de arroz
24. 24 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicació n 19 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la i nhibición por su lfometurona a niveles de sulfometurona que podrían i nhibi r normalmente el desarrollo de la planta de arroz
25. 25 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 19 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la i nhibición por im azapir a niveles de i mazapir q ue podrían i nhibi r no rmalmente e l desarrollo de la planta de arroz
26. 26 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 19 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la i nhibición por imazamet a niveles de imazamet que podrían inhibir normalmente el desarrollo de la planta de arroz
27. 27 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicació n 19 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la i nhibici ón por imazamox, a niveles de imazamox que podrían inhibir normalmente el desarrollo de la planta de arroz.
28. 28. Un proceso para controlar malezas en la cercanía de una planta de arroz, el proceso comprendiendo aplicar un herbicida a las malezas y a la planta de arroz, en donde: (a) el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, imazaquina, ppmisu lfurona, nicosu lfurona , su lfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, o u n derivado de cualquiera de estos herbicidas, y (b) dicha planta es un derivado de plantas con número de acceso de ATCC 75295 , (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de las plantas con número de acceso de ATCC 75295, (d) la planta expresa u na mutante de acetohidroxiacido sintasa que es resistente a la inh ibición por uno o más de los sig uientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían i nhi bir un a acetohidroxiacido smtasa de tipo silvestre imazetapir, imazaquina prímisulfurona, nicosulfurona, sulfometurona , imazapir, imazamet imazamox, o un derivado de cualq uiera de estos herbicidas, y (e) el herbicida comprende imazetapir, i mazaq uina ppmisulfurona , nicosulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet imazamox, o un deri vado de cua lq uiera de estos herbicidas
29. 29 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazetapir, a niveles de imazetapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende imazetapir
30. 30 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazaquina, a niveles de imazaquina que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida com prende imazaquin
31. 31 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la in hibición de ppm isulfurona, a niveles de pp misulfurona que podrían inhi bi r normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comp rende ppmisulfuron
32. 32 Un proceso de acuerdo con la reivi ndicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhib i ción de nicosulfurona , a niveles de nicosulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende nicosulfurona
33. 33 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28 en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de sulfometurona, a niveles de sufometurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende sulfometurona
34. 34 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazapir, a niveles de imazapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende imazapir
35. 35 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazamet, a niveles de imazamet que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende imazameth
36. 36 Un proceso de acuerdo con ia reivindicación 28, en donde el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición de imazamox, a n iveles de imazamox que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde el herbicida comprende imazamox
37. 37 Una planta de arroz en donde (a) el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por uno o más de los sigu ientes herbicidas a niveles de herbicida que podrían i nhibir normalmente el desarrol lo una planta de arroz metansulfurona metilo tpbenu ron meti lo tpasulfurona tpfensulfurona meti lo, clorosulfurona cloromu ron etilo i mazameta benzo-metilo o un derivado de cualquiera de estos herbicidas y (b) dicha planta es un derivado de plantas con numero de acceso de ATCC 75295 (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de las plantas con número de acceso de ATCC 75295, y (d) la planta expresa una mutante de acetohidroxiacido sintasa que es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir una acetohidroxiacido sintasa de tipo silvestre metsulfurona metilo, tpbenuron metilo, tpasulfurona, tpfensulfurona metilo, clorosulfurona, cloromuron etilo, imazametabenzo-metilo, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas
38. 38 Un proceso para controlar malezas en ia cercanía de una planta de arroz, dicho proceso aplicar un herbicida a las malezas y a la planta de arroz, en donde (a) el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhi bición por uno o más de los sig uientes herbicidas a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, imazaquina, ppmisulfurona , nicosulfurona , sulfometurona tmazapir imazamet, i mazamox, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas, y (a) el desarrollo de dicha planta es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas, a n iveles de herbicida que podrí an inhibir normalmente el desarrol lo una planta de arroz metansulfurona metilo, tpbenuron metilo tpasulfuropa tpfensulfurona meti lo , clorosulfurona , cloromuron etilo, imazametabenzo-metilo o un derivado de cua lqu i era de estos herbicidas, y (b) dicha planta es un derivado de plantas con numero de acceso de ATCC 75295 (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de las plantas con numero de acceso de ATCC 75295 y (d) la planta expresa una mutante de acetohidroxiacido sintasa que es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas a niveles de herbicida que podrían inh ibir una acetohidroxiacido sintasa de tipo silvestre metsulfurona metilo tpbenuron metilo tpasulfurona tpfensulfurona metilo clorosulfurona cloromuron etilo i azametabenzo-metilo o un derivado de cualquiera de estos herbicidas y (e) el herbicida comprende metsulfurona meti lo tpbenuron metilo tpasulfurona tifep sulfurona metilo clorosulfurona cloromuron etilo i mazam etabenzo metilo o un derivado d e cualquiera de estos herbicidas
39. 39 Una planta de arroz en donde (a) el crecim iento de la planta es resistente a la inhi bi ción por uno o mas de los siguientes herbicidas a niveles de herbicida que podrían inh ibir normalm ente el desarrollo u na planta de arroz imazetapir imazaquina ppmisulfurona nicosulfurona sulfometuron imazapir imazamet i mazamox o u n derivado de cualquiera d e estos herbicidas y (b) la planta la planta con n umero de acceso de ATCC 97523 o es una mutante derivado recom binante o genéticamente tratad o d e la planta con numero de acceso de ATCC 97523 o cualquier progen ie de la planta con un número de acceso de ATCC 97523; o es una planta que es la progenie de cualquiera de estas plantas; y (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de la plantas con número de acceso de ATCC 97523.
40. 40. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39, en donde la planta es la planta con número de acceso ATCC 97523, o cualquier progenie de la planta con un número de acceso ATCC 97523; en donde la planta tiene las características de resistencia al herbicida de la planta con número de acceso de ATCC 97523
41. 41 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por imazetapir, a niveles de imazetapir q ue podrían inhibi r normal mente el desarrollo de una planta de arroz
42. 42 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el desarrol lo de la planta es resistente a la inhibición por imazaquina, a niveles de imazaquina que podrían inh ibir n ormal mente el desarrollo de una planta de arroz
43. 43 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por pp m isulfurona, a niveles de ppm isulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz
44. 44 Una planta de arroz de acuerdo con la reivind icación 39 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la in hibición por p icosulfurona, a n iveles de nicosu lfurona que podrían inhi bir normalmente el desarrollo de una planta de arroz
45. 45. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por sulfometurona, a niveles de sulfometurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz.
46. 46. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por ¡mazapir, a niveles de imazapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz
47. 47 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 39, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la in hibición por i mazamet, a niveles de imazamet que podrían inh ibir normal mente el desarrollo de una planta de arroz
48. 48. U na planta de arroz de acuerdo con la reivind icación 39, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la in hibición por imazamox, a niveles de imazamox que pod rían inhibir normal mente el desarrollo de una planta de arroz
49. 49 Un proceso para controlar malezas en la cercanía de una planta de arroz, el proceso comprendiendo ap licar un herbicida a la maleza y a la planta de arroz, en donde (a) el crecimiento de la planta es resistente a la inhibición por u no o más de los siguientes herbicidas , a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, imazaqui na , ppmisulfurona , nicosulfurona , sulfometu ron imazapir, i mazamet, i mazamox, o un derivado d e cua lq uiera de estos herbicidas, y (b) la planta la planta con número de acceso de ATCC 97523; o es una mutante, derivado recsmbipante o genéticamente tratado de la planta con número de acceso de ATCC 97523 o cualquier progenie de la planta con un número de acceso de ATCC 97523; o es una planta que es la progenie de cualquiera de estas plantas; (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de la plantas con número de acceso de ATCC 97523; y (d) el herbicida comprende imazetapir, imazaquína , primisulfurona, nicosulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas
50. 50 Una planta de arroz de acuerdo con la reivi ndicación 49, en donde la planta es la planta con número de acceso ATCC 97523, o cualquier progenie de la planta con un número de acceso ATCC 97523, en donde la planta tiene las características de resistencia al herbicida de la planta con número de acceso de ATCC 97523.
51. 51 Una planta de arroz de acuerdo con la reivi ndi cación 49, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por imazetapir, a n iveles de imazetapir que podría n inhibi r normal mente el desarrollo de una planta de arroz; y en donde el herbicida comprende imazetapir
52. 52. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 49, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por i mazaqu ina , a niveles de imazaquina que podrían inhi bi r normalmente el desarrollo de u na planta de arroz, y en donde el herbicida comprende imazaquin
53. 53 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 49 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por ppm isulfurona a niveles de ppmisulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende ppmisulfuron
54. 54 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 49 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por nicosulfurona a niveles de nicosulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende nicosulfurona
55. 55 U na planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 49 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por sulfometurona a niveles de sulfometurona que podrían inhibi r normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde ei herbicida comprende sulfometurona
56. 56 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 49 en donde el desarrollo de la pla nta es resistente a la inh ib ición por imazapir a niveles de imazapi r que podrían i nhibir normalmente e l desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprend e imazapir
57. 57 U na planta de arroz de acuerdo con l a reivind icació n 49 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inh ib ición po r imazamet a niveles de imazam et que podrían i nh ibi r norma l mente e l desarrollo de una planta de arroz y en donde el herbicida comprende imazameth
58. 58 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 49, en donde el desarrollo de la planta es resistente a ia inhibición por imazamox, a niveles de imazamox que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz; y en donde el herbicida comprende imazamox.
59. 59. Una planta de arroz, en donde. (a) el crecim iento de la planta es resistente a la inhibición por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, i mazaquina , primisu lfurona , nicosulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas, y (b) la planta es la planta con número de acceso de ATCC 97295, o es una mutante , recombinante o derivado genéticamente tratado de la planta con número de acceso de ATCC 97295 o cualquier progenie de la planta con un número de acceso de ATCC 97295, o es una planta que es la progenie de cualquiera d e estas plantas, y (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de la plantas con número de acceso de ATCC 97295
60. 60 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindi cación 59, en donde la planta es la planta con número de acceso ATCC 97295 , o cualquier progenie de la planta con un n úmero de acceso ATCC 97295, en donde la planta tiene las ca racterí sticas de resistencia al herbicida de la planta con n úmero de acceso de ATCC 97295
61. 61 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por ¡mazetapir, a niveles de imazetapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz.
62. 62. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por imazaquina, a niveles de imazaquina que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz.
63. 63 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por primísulfurona , a niveles de prímisulfurona que podrían inhi bi r normalmente el desarrollo de una planta de arroz
64. 64 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhi bición por nicosulfurona , a n iveles de nicosulfurona q ue podrían in hibir normal mente el desarrollo de una planta de arroz
65. 65 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inh ibición por sulfometurona , a niveles de sulfometurona que podrían inhi bir normalmente el desarrollo de una planta de arroz
66. 66 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59 en donde el desarrollo de la planta es resistente a la i nhibición por imazapir, a niveles de imazapir que podrían inhi bir normalmente e l desarrollo de una pla nta de arroz
67. 67 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la inhibición por imazamet, a niveles de imazamet que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz.
68. 68. Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta es resistente a la in hibición por ¡mazamox, a niveles de imazamox que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz.
69. 69 Un proceso para controlar las malezas en la cercanía de una planta de arroz, el proceso comprendiendo aplicar un herbicida a las malezas y a la planta de arroz, en donde (a) el crecimiento de la planta es resistente a la inhi bición por uno o más de los siguientes herbicidas, a niveles de herbicida que podrían inhibir normalmente el desarrollo una planta de arroz imazetapir, imazaquina, primísulfurona, nicosuífurona , su lfom etu ron , imazapir, imazamet, imazamox, o un derivado de cualquiera de estos h erbicidas , y (b) la planta es la planta con n úmero de acceso de ATCC 97295, o es una mutante, recombinante o derivado genéticamente tratado de la planta con número de acceso de ATCC 97295 o cualquier progenie de la planta con un número de acceso de ATCC 97295, o es una planta que es la progenie de cualquiera de estas plantas, (c) la planta tiene las características de resistencia a herbicidas de la plantas con número de acceso de ATCC 97295 , y (d) el herbicida comprendiendo imazetapir imazaquina ppmisulfurona, micosulfurona, sulfometurona, imazapir, imazamet, imazamox, o un derivado de cualquiera de estos herbicidas
70. 70 Una planta de arroz de acuerdo con la reivindicación 69 en donde la planta es la planta con numero de acceso ATCC 97295, o cualquier progenie de la planta con un numero de acceso ATCC 97295, en donde la planta tiene las características de resistencia al herbicida de ia planta con numero de acceso de ATCC 97295
71. 71 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 59 en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la inhibición por imazetapir a niveles de imazetapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz y en donde le herbicida comprende imazetapir
72. 72 Un proceso de acuerdo con la reivindicación 59 en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la i nh ibición por imazaquina a niveles de imazaquma que podrían inhibir n ormal mente el desarrollo de una pla nta de arroz y en donde l e herbicida comprende imazaquin
73. 73 U n proceso de acuerdo con la reivind icación 59 en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la inhibición por ppmis ulfurona a niveles de ppm is ulfurona q ue podrían in hibir normalmente el desarrollo de una planta de a rroz y en donde l e herbicida comprende ppm isu lfuron
74. 74 Un proceso de acuerdo con la reivind i cación 59 en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la inhibición por nicosulfurona, a niveles de nicosulfurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz; y en donde le herbicida comprende nicosulfurona.
75. 75. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la inhibición por sulfometurona, a niveles de sulfometurona que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz; y en donde le herbicida comprende sulfometurona.
76. 76. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la inhibición por imazapir, a niveles de imazapir que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde le herbicida comprende imazapir
77. 77 U n proceso de acuerdo con la reivind icación 59, en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la in hibición po r imazamet, a niveles de imazamet q ue podrían i nhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde le herbicida comprende imazameth
78. 78. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 59, en donde el desarrollo de la planta de arroz es resistente a la inhibición por imazamox, a niveles de imazamox que podrían inhibir normalmente el desarrollo de una planta de arroz, y en donde le herbicida comprende i mazamox