MXPA98007497A - Compuestos y metodos para inmunoterapia e inmunodiagnostico de cancer de prostata - Google Patents

Abstract

Se proveen compuestos y métodos para tratar y diagnosticar cáncer de próstata. Los compuestos de la invención incluyen polipéptidos que contienen por lo menos una porción de una proteína de próstata. También se proveen vacunas y composiciones farmacéuticas para inmunoterapia de cáncer de próstata que comprenden dichos polipéptidos o moléculas de ADN que codifican dichos polipéptidos. Los polipéptidos de la invención también se pueden utilizar para generar anticuerposútiles para el diagnóstico y monitoreo de cáncer de próstata. También se proveen secuencias deácidos nucléicos para preparar sondas, iniciadores y polipéptidos.

Description

COMPUESTOS Y MÉTODOS PARA INMUNOTERAPIA E INMUNODIAGNÓSTICO DE CÁNCER DE PRÓSTATA CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere generalmente al tratamiento, diagnóstico y monitoreo de cáncer de próstata. La invención se refiere más particularmente a polipéptidos que comprenden por lo menos una porción de una proteína de próstata. Dichos polipéptidos se pueden utilizar en vacunas y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de cáncer de próstata. Los polipéptidos también se pueden utilizar para la producción de compuestos, tales como anticuerpos, útiles para diagnosticar y monitorear la progresión de cáncer y posiblemente otros tipo de tumores en un paciente. ANTECEDENTE DE LA INVENCIÓN El cáncer de próstata es la forma más común de cáncer entre hombres, con una incidencia calculada del 30% en hombres sobre la edad de 50 años. La evidencia clínica arrolladora muestra que el cáncer de próstata humana tiene la propensión a que el hueso sufra metástasis y la enfermedad parece progresar inevitablemente del estado dependiente de andrógrenos a Ireceptor de andrógrenos, conduciendo a la mortalidad creciente de pacientes. Esta enfermedad prevaleciente actualmente es la segunda causa principal de cáncer entre hombres en los Estados Unidos. A pesar de la investigación considerable en terapias para la enfermedad, el cáncer de próstata sigue siendo difícil de tratar Comúnmente, el tratamiento está basado en cirugía y/o terapia por radiación, pero sus métodos no son efectivos en un porcentaje significativo de casos. Tres proteínas específicas para próstata, antígeno específico para próstata (AEP) y fosfatasa acida prostática (FAP), tienen un potencial de diagnóstico terapéutico limitado. Los niveles de AEP no siempre se correlacionan bien con la presencia de cáncer de próstata, siendo positivo en un porcentaje de casos de cáncer que no es de próstata, incluyendo hiperplasia prostática benigna (HPB). Además, las mediciones de AEP se correlacionan con el volumen de la próstata, y no indican el nivel de metástasis. Consecuentemente, sigue existiendo una necesidad en la técnica de vacunas mejoradas y métodos de diagnóstico para cáncer de próstata. COM PEN DIO DE LA I NVENC IÓN La presente invención provee compuestos y métodos para inmunoterapia y diagnóstico para cáncer de próstata . En un aspecto , se proveen polipéptidos que comprenden por lo menos una porción inm unogénica de una proteína de próstata que tienen una secuen cia parcial como se provee en SEQ I D Nos. 2 y 4-8 , o una variante de dicha proteína que difiere únicamente en substituciones conservadoras y/o modificaciones. En aspectos relacionadas, las secuencias de ADN que codifi can los polipéptidos anteriores , los vectores de expresión q ue comprenden las secuencias de ADN y las células h ués ped transformadas o transfectadas con dichos vectores de expres ión también son provistos . En modalidades preferidas, se seleccionan células huésped del grupo que consiste de E. coli, levadura y células de mamíferos. La presente invención también provee composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más de los polipéptidos de SEQ ID Nos. 1-8, 20, 21 , 25-31 o 44-57, o ácidos nucleicos de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24 o 32-43 y un vehículo fisiológicamente aceptable. La invención también provee vacunas que comprenden uno o más de dichos polipéptidos o ácidos nucleicos en combinación con un mejorador de respuesta inmune no específica. En aún otros aspectos, se proveen métodos para inhibir el desarrollo de cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo administrar una cantidad efectiva de uno o más de los polipéptidos de SEQ I D Nos. 1 -8, 20, 21 , 25-31 o 44-57, o ácidos nucleicos de SEQ I D Nos. 9-19, 22-24 o 32-43 a un paciente que necesita del mismo. En aspectos adicionales, se proveen métodos para detectar cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo : (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida de un paciente con un agente de unión que es capaz de unirse a un polipéptido de SEQ I D Nos. 1 -8, 20, 21 , 25-31 o 44-57; y (b) detectar en la muestra una proteína o polipéptido que se une al agente de unión . En aspectos relacionados, se proveen métodos para monitorear la progresión de cáncer de próstata en una paciente , comprendiendo (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida de un paciente con un agente de unión que es capaz de unirse a un polipéptido de SEQ ID Nos. 1-8, 20, 21, 25-31 o 44-57; (b) determinar en la muestra una cantidad de una proteína o un p lipéptido que se une al agente de unión; (c) repetir los pasos (a) y (b); y comparar las cantidades del polipéptido detectado en los pasos (b) y (c). Dentro de los aspectos relacionados, la presente invención provee anticuerpos, preferiblemente anticuerpos monoclonales, que se unen a los polipéptidos descritos antes, así como equipos de diagnósticos que comprenden dichos anticuerpos, y métodos para usar dichos anticuerpos con el fin de inhibir el desarrollo de cáncer de próstata. La presente ¡nvención también provee métodos para detectar cáncer de próstata que comprenden: (a) obtener una muestra biológica de un paciente; (b) poner en contacto la muestra con por lo menos dos iniciadores de oligonucleótidos en una reacción en cadena de polimerasa, por lo menos uno de los iniciadores de oligonucleótidos siendo específico para una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos 9-19, 22-24 y 32-43; y (c) detectar en la muestra una secuencia de ADN que se amplifica en presencia del iniciador de oligonucleótidos. En una modalidad, el iniciador de oligonucleótidos comprende por lo menos aproximadamente 10 nucleótidos contiguos de una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos 9-19, 22-24 y 32-43. En un aspecto adicional, la presente invención provee un método para detectar cáncer de próstata en un paciente que comprende: (a) obtener una muestra biológica de un paciente; (b) poner en contacto la muestra con* una sonda de oligonucleótidos específica para una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24 y 32-53; y (c) detectar en la muestra una secuencia de ADN que se hibridiza a la sonda de oligonucleótidos. En una modalidad, la sonda de oligonucleótidos comprende por lo menos 15 nucleótidos contiguos de una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24 y 32-43. Estos y otros aspectos de la presente invención serán evidentes por referencia a la siguiente descripción detallada y dibujos anexos. Todas las referencias descritas en la presente por lo tanto se incorporan aquí por referencia en su totalidad como si cada una se incorporara individualmente. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1, ilustra un análisis de manchas Western de suero obtenido de ratas inmunizadas con el extracto de próstata de ratas.

La Figura 2, ilustra un SDS PAGE no reducido de la preparación de inmunización de ratas de la Figura 1. La Figura 3, ilustra la unión de un homólogo humano putativo de proteína de unión de esteroide de ratas a progesterona y a estramustina. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se observó antes, la presente invención generalmente se dirige a composiciones y métodos para la inmunoterapia, diagnóstico y monitoreo de cáncer de próstata. Las composiciones de invención generalmente son polipéptidos que' comprenden por lo menos una porción de una proteína de próstata humana, la proteína demostrando inmunorreactividad con suero de próstata humana. También se incluyen dentro de la presente invención, moléculas (tales como un anticuerpo o fragmento de las mismas) que se unen a los polipéptidos de la invención. Dichas moléculas son denominadas en la presente como "agentes de unión". En particular, la presente invención describe polipéptidos que comprenden por lo menos una porción de una proteína de próstata humana provista en S EQ I D Nos . 2 y 4-8, o una variante de dicha proteína que difiere únicamente en substituciones y/o modificaciones conservadoras. Como se usa en la presente, el término "polipéptido" abarca cadenas de aminoácidos de cualquier longitud, incluyendo proteínas de longitud completa, en donde los residuos de aminoácidos se ligan por uniones de péptidos covalentes. Por lo tanto, un polipéptido que comprende una porción de una o más de las proteínas de próstata anteriores puede consistir completamente de la porción , o la porción puede estar presente dentro de un polipéptido más grande que contiene secuencias adicionales. Las secuencias adicionales pueden dividirse desde la proteína nativa o pueden ser heterólogas , y dichas secuencias pueden ser inmunorreactivas y/o antigénicas . Como se usa en la presente , una "porción inm unogénica" de una proteína de próstata humana es una porción que reacciona ya sea con suero derivado de un individuo que sufre de prostatitis autoinmune o con suero derivado-' de un modelo de ratas con prostatitis autoinmune. En otras palabras, una porción inmunogénica es capaz de producir una respuesta inmune y como tal se une a los anticuerpos presentes dentro del suero de prostatitis. Las prostatitis autoinmune puede presentarse, por ejemplo, después del tratamiento de cáncer de vejiga por la administración de Bacilus Calmette-Guerin (BCG) , una cepa avirulenta de Mycobacterium bovis. En el modelo de ratas con prostatitis autoinmune, la ratas se inmunizan con un extracto de detergente de próstata de rata. El suero de cualquiera de estas fuentes puede utilizarse para hacerlo reaccionar con polipéptidos derivados de próstata humana descritas en la presente. Los análisis de unión de anticuerpos generalmente se pueden llevar a cabo utilizando cualquier variedad de medios conocidos por aquellos con experiencia ordinaria en la materia, como se describió, por ejemplo, en Harlow y Lañe, Antibodies: A. Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1988. Por ejemplo, un polipéptido puede inmovilizarse sobre un soporte sólido (como se describe más adelante) y ponerse en contacto con el suero del paciente para permitir la unión de anticuerpos dentro del suero al polipéptido inmovilizado. El suero no unido entonces puede removerse y se pueden detectar los anticuerpos unidos utilizando , por ejemplo , proteína A marcada con 125l . Una "variante", como se usa en la presente, es un polipéptido que difiere del polipéptido recitado únicamente en substituciones y/o modificaciones conservadoras, de manera que se retienen las propiedades inmunoterapéuticas, arit?génicas y/o de diagnóstico del polipéptido o moléculas que se unen al polipéptido. Para proteínas de próstata con propiedades inmunorreactivas, las variantes generalmente pueden identificarse modificando una de las secuencias de polipéptidos anteriores y evaluando la inmunorreactividad del polipéptido modificado. Para las proteínas de próstata útiles para la generación de agentes de unión de diagnóstico, se puede identificar una variante evaluando un polipéptido modificado para la capacidad de generar anticuerpos que detectan la presencia o ausencia de cáncer de próstata. Dichas secuencias modificadas pueden prepararse y probarse utilizando, por ejemplo, los procedimientos representativos descritos en la presente.

Como se usa en la presente, una "substitución conservadora" es una en la cual se substituye un aminoácido por otro aminoácido que tiene propiedades similares, de manera que alguien experto en la materia de la qu ím ica de péptidos podría esperar q ue la estructu ra secundaria y naturaleza hidropática del polipéptido no sea cambiada substancialmente. En general, los siguientes grupos de aminoácidos representan cambios conservadores: ( 1 ) ala , pro, gly, glu , asp, gln , asn , ser, th r; (2) cys, ser, tyr, th r; (3) val , ile , leu , met, ala, phe ; (4) lys, arg, his; y (5) phe, tyr, trp, his. También o alternativamente, las variantes pueden contener otras modificaciones, incluyendo la supresión o adición de aminoácidos que tienen una influencia m ínima sobre las propiedades antigénicas, estructura secundaria y naturaleza hidropática del polipéptido. Por ejemplo, se puede ' conjugar un polipéptido a una secuencia de señal (sólida) en el extremo N-terminal de la proteína que dirige co-translacionalmente o post-translacionalmente la transferencia de la proteína. El polipéptido también se puede conjugar a un enlazador u otra secuencia para facilidad de síntesis, purificación o identificación del polipéptido (v.gr. , poli-H is), o para aumentar la unión del polipéptido a un soporte sólido. Por ejemplo, un polipéptido se puede conjugar a una región Fe de inmunoglobulina. Los polipéptidos que tienen una de las secuencias provistas en SEQ ID Nos. 1 a 8, 20, 21 y 25-31 pueden aislarse de u na línea de células de adenocarcinoma de próstata humana adecuado, tal como LnCap.fgc (ATCC No. 1740-CRL) . LnCap.fgc es una l ínea celular de adenocarcinoma de próstata que es una representación particularmente buena de cáncer de próstata humano . Como el cáncer humano , las células de LnCap.fgc forman tumores progresivamente crecientes como xenoinjertos en ratones SCI D , responden a la testosterona, secretan AEP y responden a la presencia de componentes de médula ósea (v.gr. , transferina) . En particular, los polipéptidos se pueden aislar por tamizado de expresión de un banco de AD Nc de LnCap.fgc con suero de prostatitis humana utilizando técnicas descritas , por ejemplo , en Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories , Cold Spring Harbor, N Y (y referencias citadas en la presente), y como se describe en detalle más adelante. Los polipéptidos de SEQ ID No. 48 y' 49 pueden aislarse de la línea celular de LnCap/fgc tamizando con suero de modelol de rata con prostatitis autoinmune tratado antes. Los polipéptidos de SEQ ID Nos. 50-56 se pueden aislar de la línea celular LnCap/fgc tamizando con suero de prostatitis humana como se describe en detalle en el Ejemplo 4. Los polipéptidos de SEQ ID No. 44-47 pueden aislarse del fluido seminal humano como se describe en detalle en el Ejemplo 2. Una vez que se obtiene una secuencia de ADN que codifica un polipéptido, se pueden introducir fácilmente cualquiera de las modificaciones anteriores utilizando técnicas de mutagénesis, tales como mutagénesis específica para sitio dirigida a oligonucleótidos. Los polipéptidos tratados en la presente, también se pueden generar mediante medios sintéticos o recombinantes. Los polipéptidos sintéticos que tienen menos de aproximadamente 100 aminoácidos y generalmente menos de alrededor de 50 aminoácidos, pueden generarse utilizando técnicas bien conocidas para los de experiencia ordinaria en la materia. Por ejemplo, dichos polipéptidos se pueden sintetizar utilizando cualquiera de las técnicas de fase sólida comercialmente disponibles, tales como el método de síntesis de fase sólida de Merrifield, en donde los aminoácidos se agregan secuencialmente a una cadena de aminoácidos creciente. Ver Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2146, 1963. El equipo para la síntesis automática de polipéptidos está comercialmente disponible de proveedores tales como Applied BioSystems, Inc.. (Foster City, CA) y se pueden operar de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Alternativamente, cualquiera de los polipéptidos anteriores pueden producirse recombinantemente insertando una secuencia de ADN que codifica al polipéptido en un vector de expresión y expresando la proteína en un huésped apropiado. Cualquiera de una variedad de vectores de expresión conocidos por los de experiencia ordinaria en la materia se pueden emplear para expresar polipéptidos recombinantes de está invención. La expresión puede lograrse en cualquier célula huésped apropiada que se ha transformado o transfectado con un vector de expresión que contiene una molécula de ADN que codifica un polipéptido recombinante. Las células huésped adecuadas incluyen procariotes, levaduras y células ecuarióticas superiores. Preferiblemente, las células huésped empleadas son E. coli, levadura o una línea celular de mamíferos, tal como células de CHO. Las secuencias de ADN expresadas de esta manera pueden codificar polipéptidos presentes en la naturaleza, porciones de polipéptidos presentes en la naturaleza u otras variantes de los mismos. En general, sin importar el método de preparación, los polipéptidos descritos en la presente se prepararan en una forma substancialmente pura (es decir, los polipéptidos son homogéneos como se determinó por la composición de aminoácidos y el análisis se secuencia primaria). Preferiblemente, los polipéptidos por lo menos son 90% puros, más preferiblemente por lo menos aproximadamente 95% puros y más preferiblemente por lo menos aproximadamente 99% puros. En ciertas modalidades preferidas, descritas en más detalle más adelante, los polipéptidos substancialmente puros se incorporan en las composiciones o vacunas farmacéuticas para usarse en uno o más de los métodos descritos en la presente. Los polipéptidos de la presente invención que comprenden una porción inmunogénica de una proteína de próstata generalmente se pueden utilizar para inmunoterapia de cáncer de próstata, en donde el polipéptido estimula la respuesta inmune propia del paciente a las células del tumor. En aspectos adicionales, la presente invención provee métodos para utilizar uno o más de los polipéptidos inmunorreactivos de SEQ ID Nos. 1 a 8, 20 , 21 , 25-31 y 44-57 (o ADN que codifica dichos polipéptidos) para inmunoterapia de cáncer de próstata en un paciente. Como se usa en la presente, un "paciente" se refiere a cualquier animal de sangre caliente , preferiblemente un ser humano. U n paciente puede sufrir de una enfermedad o puede estar libre de una enfermedad detectable . Consecuentemente, los polipéptidos inmunorreactivos anteriores pueden utilizarse para tratar cáncer de próstata o para inh ibir el desarrollo de cáncer de próstata. Los polipéptidos pueden administrarse ya sea antes o después de la remoción quirúrgica de tumores primarios y/o tratamiento por la administración de radioterapia y fármacos quimioterapéuticos convencionales.

En estos aspectos, el polipéptido generalmente está presente dentro de una composición farmacéutica y/o una vacuna. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender uno o más polipéptidos, cada uno de los cuales puede contener una o más de las secuencias anteriores (o variantes de los mismos), y un vehículo fisiológicamente aceptable. Las vacunas pueden comprender uno o más de los polipéptidos y un mejorador de respuesta inmune no específica, tal como un auxiliar, microesfera biodegradable (v.gr. , galactido poliláctico) o un liposoma (en el cual se incorpora el polipéptido) . Las composiciones farmacéuticas y vacunas también pueden contener otros epítopes de antígenos de células de próstata, ya sea incorporados en un polipéptido de combinación (es decir, un polipéptido solo que contiene múltiples epítopes) o presente dentro de un polipéptido separado. Alternativamente, una composición farmacéutica o vacuna puede contener un ADN que codifica uno o más de los polipéptidos anteriores, de manera que el polipéptido se genere in situ. En dichas composiciones farmacéuticas y vacunas, el ADN puede estar presente dentro de cualquiera de una variedad de sistemas de suministro conocidos por los de experiencia ordinaria en la materia, incluyendo sistemas de expresión de ácidos nucleicos, apropiados contienen las secuencias de ADN necesarias para la expresión en el paciente (tal como un promotor adecuado) . Los sistemas de suministro bacteriano implican la adm inistración de u na bacteria (tal como Bacillus-Calmette-Guerrin) que expresan un epítope de u n antígeno de célula de próstata en su superficie celular. En una -modalidad preferida, el ADN puede introducirse utilizando un sistema de expresión viral (v.gr., vacuna u otros pox virus, retrovirus o adenovirus), que pueden implicar el uso de un virus competente de replicación no patogénica (defectuosos). Los sistemas adecuados se describen, por ejemplo, en Fisher-Hoch y otros, PNAS 86:317-321, 1989; Flexner y otros, Ann. N.Y. Acad. Sci. 569:86-103, 1989; Flexner y otros, Vaccine 8:17-21, 1990; Patentes de E.U.A. Números 4,603,112, 4,769,330 y 5,017,487; WO 89/01973; Patentes de E.U.A. Números 4,777,127; GB 2,200,651; EP 0,345,242; WO 91/02805; Berkner, Biotechniques 6:616-627, 1988; Rosenfeld y otros, Science 252:431-434, 1991; Kolls y otros, PNAS 91:215-219, 1994; Kass-Eisler y otros, PNAS 90:11498-11502, 1993; Guzman y otros, Circulation 88:2838-2848, 1993; y Guzman y otros, Cir. Res. 73:1202-1207, 1993. Las técnicas para incorporar ADN en dichos sistemas de expresión son bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la materia. El ADN también puede ser "puro" como se describió, por ejemplo, en la solicitud de PCT publicada WO 90/11092, y Ulmer y otros Science 259:1745-1749, 1993, la absorción del ADN puro puede incrementarse revistiendo el ADN sobre perlas biodegradables, que se transportan eficientemente en las células. Las rutas y frecuencia de administración, así como la dosis, variará de individuo a individuo y pueden ser paralelas a aquellas que se están utilizando actualmente en inmunoterapias de otras enfermedades. En general, las composiciones farmacéuticas y vacunas pueden administrarse por inyección (v.gr., intracutánea^ intramuscular, intravenosa o subcutánea), intranasalmente (v.gr., por aspiración) u oralmente. Entre 1 y 10 dosis pueden administrarse durante un período de 3-24 semanas. Preferiblemente, se administran 4 dosis, en un intervalo de 3 meses y después se pueden dar administraciones de refuerzo periódicamente. Los protocolos alternos pueden ser apropiados para pacientes individuales. Una dosis adecuada en una cantidad de polipéptido o ADN que es efectivo para elevar una respuesta inmune (celular y/o humoral) contra células de tumores de próstata en un paciente tratado. Una respuesta inmune adecuada es de por lo menos 10-50% por arriba del nivel basal (es decir, no tratado). En general, la cantidad de polipéptido presente en una dosis (o producido in situ por el ADN en una dosis) varia de aproximadamente 1 pg a alrededor de 100 mg por kg de huésped, normalmente de aproximadamente 10 pg a alrededor de 1 mg, y preferiblemente de aproximadamente 100 pg a aproximadamente de 1 µg. Los tamaños de dosis adecuados variaran con el tamaño del paciente, pero normalmente varían de 0.01 ml a alrededor de 5 mL. Mientras que cualquier vehículo adecuado conocido por los de experiencia ordinaria en la materia puede emplearse en las composiciones farmacéuticas de esta invención, el tipo de vehículo variará dependiendo del modo de administración. Para la administración parenteral, tal como inyección subcutánea, el vehículo preferiblemente comprende, agua, solución salina, alcohol, una grasa, una cera y/o una solución reguladora de pH. Para la administración oral, puede emplearse cualquiera de los vehículos anteriores o un vehículo sólido, tal como manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, talco, celulosa, glucosa, sacarosa y/o carbonato de magnesio. Las microesferas biodegradables (v.gr., glicoluro poliláctico) también se pueden emplear como vehículos para las composiciones farmacéuticas de esta ¡nvención. Las microesferas biodegradabes adecuadas se describen, por ejemplo, en las Patentes de E.U.A. Números 4,897,268 y 5,075,109. Cualquiera de una variedad de mejoradores de respuesta inmune no específica pueden emplearse en las vacunas de esta invención. Por ejemplo, se puede incluir un auxiliar. La mayoría de los auxiliares contienen una substancia diseñada para proteger al antígeno de catabolismo rápido, tal como hidróxido de aluminio o aceite mineral, y un estimulador no específico de respuesta inmune, tal como lípido A, Bordella pertussis o Mycobacterium tuberculosis. Dichos auxiliares están comercialmente disponibles como, por ejemplo, Auxiliar Incompleto y Auxiliar completo de Freund (Difco Laboratories, Detroit, Ml) y Auxiliar 65 de Merck (Merck and Company, Inc., Rahway, NJ). Los polipéptidos descritos en la presente también se pueden emplear en el tratamiento ex vivo de cáncer de próstata. Por ejemplo, las células del sistema inmune, tales como células T, se pueden aislar de la sangre periférica de un paciente, utilizando un sistema de separación de células comercialmente disponibles, tal como sistema CellPro Incorporated's' (Bothell, WA) CEPRATE™ (ver Patente de E. U .A. No. 4,240,856; ver Patente de E.U .A. No. 5,215,926, WO 89/06280; WO 91/16116 y WO 92/07243). Las células separadas se estimulan con uno o más de los polipéptidos inmunorreactivos contenidos dentro de un vehículo de suministro, tal como una microesfera, para proveer células T específicas de antígeno. La población de células T específicas para antígeno del tumor se expande entonces utilizando técnicas normales y las células se administran de nuevo al paciente. Los polipéptidos de la presente invención también, o alternativamente, se pueden utilizar para generar agentes de unión , tales como anticuerpos y fragmentos de los mismos , que son capaces de detectar tumores de próstata humana metastasicos. Los agentes de unión de la presente invención generalmente se pueden preparar utilizando métodos conocidos para los de experiencia ordinaria en la materia, incluyendo los procedim ientos representativos descritos en la presente. Los agentes de unión son capaces de diferenciar entre pacientes con y sin cáncer de próstata , utilizando los análisis representativos descritos en la presente. En otras palabras, los anticuerpos u otros agentes de unión surgidos contra una proteína de próstata , o una poción adecuada de la misma generarán una señal que indica la presencia de cáncer de próstata primario o metastásico en por lo menos aproxi madamente el 20% de pacientes que sufren de la enfermedad y generarán una señal que indica la ausencia de la enfermedad en por lo menos aproximadamente el 90% de individuos sin cáncer de próstata primario o metastásico. Las pociones adecuadas de dichas proteínas de próstata son porciones que son capaces de generar un agente de unión que indica la presencia de cáncer de próstata primario o metastásico en substancialmente todo (es decir, por lo menos aproximadamente el 80%, y preferiblemente por lo menos aproximadamente el 90%) de los pacientes para los cuales el cáncer de próstata podría indicarse utilizando la proteína de longitud completa y que indica la ausencia de cáncer de próstata en substancialmente todas las muestras que podrían ser negativas cuando se prueban con proteína de longitud completa. Los análisis representativos descritos más adelante, tales como el análisis de emparedado de dos anticuerpos, generalmente se pueden emplear para evaluar la capacidad de un agente de unión para detectar tumores de próstata humana metastásicos. La capacidad de un polipéptido preparado como se describe en la presente para generar anticuerpos capaces de detectar tumores de próstata humana primarios o metastásicos generalmente se puede evaluar surgiendo uno o más anticuerpos contra el polipéptido (utilizando, por ejemplo, un método representativo descrito en la presente) y determinando la capacidad de dichos anticuerpos para detectar dichos tumores en pacientes. Esta determinación puede hacerse analizando las muestras biológicas de pacientes con y sin cáncer de próstata primario o metastásico para la presencia de un polipéptido que se une a los anticuerpos generados. Dichos análisis de prueba pueden realizarse, 'por ejemplo, utilizando un procedimiento representativo descrito más adelante. Los polipéptidos que generan anticuerpos capaces de detectar por lo menos el 20% de tumores de próstata primarios o mestatásicos por dichos procedimientos se consideran capaces de generar anticuerpos que pueden detectar tumores de próstata humana primarios o metastásicos. Los anticuerpos específicos de polipéptidos pueden utilizarse solos o en combinación con sensibilidad mejorada. Los polipéptidos capaces de detectar tumores de próstata humana primarios o metastásicos se pueden utilizar como marcadores para diagnosticar cáncer de próstata o para monitorear la progresión de la enfermedad en pacientes. En una modalidad, el cáncer de próstata en un paciente se puede diagnosticar evaluando una muestra biológica obtenida del paciente para el nivel de uno o más de los polipéptidos anteriores, en relación con un valor de reducción predeterminado. Como se usa en la presente "muestras biológicas" adecuadas incluyen, sangre, suero, orina y/o secreciones de próstata. El nivel de uno o más de los polipéptidos anteriores puede evaluarse utilizando cualquier agente de unión específico para los polipéptidos. Un "agente de unión", en el contexto de esta invención, es cualquier agente (tal como un compuesto o una célula) que se une a un polipéptido como se describió antes. Como se usa en la presente, "unión" se refiere a una asociación no covalente entre dos moléculas separadas (cada una de las cuales puede estar libre (es decir, en solución) o presente sobre-la superficie de una célula o un soporte sólido), de manera que se forma un "complejo". Dicho complejo puede estar libre o inmovilizado (ya sea covalente o no covalentemente) sobre un material de soporte. La capacidad de unión generalmente se puede evaluar determinando una constante de unión para la formación del complejo. La constante de unión es el valor obtenido cuando la concentración del complejo se divide por el producto de las concentraciones del componente. En general, dos compuestos son tales que se "unen" en el contexto de la presente invención cuando la constate de unión para la formación del complejo excede aproximadamente 103 L/mol . La constante de un ión puede determinarse utilizando métodos bien conocidos por aquel l os de experiencia ordinaria en la materia. Cualquier agente que satisface los requerimientos anteriores puede ser un agente de unión . Por ejemplo, un agente de un ión puede ser un ribosoma con o sin un componente de péptido , u na molécula de ARN o un péptido. En una modalidad preferida , la pareja de unión es un anticuerpo o un fragmento del mismo. Dichos anticuerpos pueden ser policlonales o monoclonales. Además, los anticuerpos pueden ser de una sola cadena, quiméricos, insertados con CDR o humanizados. Los anticuerpos pueden prepara rse mediante los métodos descritos en la presente y mediante cualesquiera otros métodos bien conocidos por aquellos con experiencia en la materia.

Hay una variedad de formatos de análisis conocidos por los de experiencia ordinaria en la materia para utilizar una pareja de unión para detectar marcadores de polipéptidos en la muestra. Ver, por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988). En una modalidad preferida, el análisis implica el uso de pareja de unión inmovilizada en un soporte sólido para unir y remover el polipéptido del resto de la muestra. El polipéptido unido entonces puede detectarse utilizando una segunda pareja de unión que contiene un grupo reportero. Las segundas parejas de unión adecuadas incluyen anticuerpos que se unen al complejo de pareja de unión/polipéptido. Alternativamente, se puede utilizar un análisis competitivo, en el cual se maraca un polipéptido con un grupo reportero y se deja unir a la pareja de unión inmovilizada después de la incubación de la pareja de unión con la muestra. El grado al cual los componentes de la muestra inhiben la unión del polipéptido marcado a la pareja de unión indica la reactividad de la muestra con la pareja de unión inmovilizada. El soporte sólido puede ser cualquier material conocido para aquellos con experiencia ordinaria en la materia al cual se puede unir el antígeno. Por ejemplo, el soporte sólido puede ser un pozo de prueba en una placa de microtitulación o una nitrocelulosa u otra membrana adecuada. Alternativamente, el soporte puede ser una perla o disco, tal como vidrio, fibra de vidrio, látex o material de plástico tal como poliestireno o cloruro de polivinilo. El soporte también puede ser una partícula magnética o un sensor de fibra óptica, tal como aquellos descritos, por ejemplo, en la Patente de E.U.A. No 5,359,681 . El agente de unión se puede inmovilizar sobre el soporte sólido utilizando una variedad de técnicas conocidas para los expertos en la materia que son ampliamente descritos en la patente y literatura científica. En el contexto de la presente invención, el término "inmovilización" se refiere a la asociación no covalente, tal como adsorción y unión covalente (que puede ser una ligadura directa entre el antígeno y grupos funcionales sobre el soporte o pueden ser una ligadura por medio de un agente de entrelazamiento) . Se prefiere la inmovilización por adsorción a un pozo en una placa de microtitulación o a una membrana. En dichos casos, la adsorción puede lograrse poniendo en contacto el agente de unión en una solución reguladora de pH adecuada, con el soporte sólido durante un tiempo adecuado. El tiempo de contacto varía con la temperatura, pero normalmente está entre aproximadamente 1 hora y alrededor de 1 día. En general , al poner en contacto un pozo de una placa de microtitulación de plástico (tal como poliestireno o cloruro de polivini lo) en una cantidad de agente de unión que varia de entre 10 ng a alrededor de 10µg, y preferiblemente de aproximadamente 100 ng a alrededor de 1 µg, es suficiente para inmovil izar una cantidad adecuada de agente de unión La unión covalente de agente de unión a un soporte sólido generalmente se puede lograr haciendo reaccionar primero el soporte con un reactivo bifuncional que reaccionará tanto con el soporte como con un grupo funcional tal como un grupo hidroxiio o amino , sobre el agente de unión. Por ejemplo, el agente de unión puede unirse covalentemente a los soportes, teniendo un revestimiento de polímero apropiado utilizando benzoquinona o por condensación de un grupo de aldehido sobre el soporte con una amina y un hidrógeno activo sobre la pareja de unión (ver, por ejemplo, Pierce Immunotechnology Catalog and Handbook, 1991, en A12-A13). En ciertas modalidades, el análisis es un análisis de emparedado de dos anticuerpos. Este análisis puede realizarse poniendo en contacto primero un anticuerpo que se ha inmovilizado sobre un soporte sólido, comúnmente el pozo de una placa de microtitulación, con la muestra, de manera que los polipéptidos dentro de la muestra se dejan unir al anticuerpo inmovilizado. La muestra no unida entonces se remueve de los complejos de polipéptido inmobilizado-anticuerpo y se adiciona un segundo anticuerpo (conteniendo un grupo reportero) capaz de unirse a un sitio diferente sobre el polipéptido. La cantidad del segundo anticuerpo que permanece unido al soporte sólido se determina entonces utilizando un método apropiado para el grupo reportero específico. Más específicamente, una vez que el anticuerpo se inmoviliza sobre el soporte como se describió antes, normalmente se bloquea los sitios de unión de la proteína restante sobre el soporte. Cualquier agente de bloqueo adecuado conocidos por los de experiencia ordinaria en ia materia, tal como albúmina de suero de bovino o Tween 20™ (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). El anticuerpo inmovilizado entonces se incuba con la muestra, y se deja que el polipéptido se una al anticuerpo. La muestra puede diluirse con un diluyente adecuado, tal como solución salina regulada con fosfato (SRF) antes de la incubación. En general, un tiempo de contacto apropiado (es decir, tiempo de incubación) es el período de tiempo que es suficiente para detectar la presencia del polipéptido dentro de una muestra obtenida de un individuo con cáncer de próstata. Preferiblemente, el tiempo de contacto es suficiente para lograr un nivel de unión que por lo menos es de aproximadamente 95% del logrado en equilibrio entre el polipéptido unido y no unido. Aquellos con experiencia ordinaria en la materia reconocerán que el tiempo necesario para lograr el equilibrio puede determinarse fácilmente analizando el nivel de unión que se presenta durante un tiempo. A temperatura ambiente, un tiempo de incubación de aproximadamente 30 minutos es generalmente suficiente. La muestra no unida entonces se puede remover lavando el soporte sólido con una solución reguladora de pH, tal como SRF conteniendo 0.1% de Tween 20™. El segundo anticuerpo, el cual contiene un grupo reportero, entonces puede agregarse al soporte sólido. Los grupos reporteros preferidos incluyen enzimas (tales como peroxidasa de rábano), substratos, cofactores, inhibidores, colorantes, radionuclidos, grupos luminiscentes, grupos fluorescentes y biotina. La conjugación de anticuerpo a grupo reportero puede lograrse utilizando métodos normales conocidos por los de experiencia ordinaria en la materia.

El segundo anticuerpo se incuba entonces con el complejo de anticuerpo-polipéptido durante un tiempo suficiente para detectar el polipéptido unido. Una cantidad apropiada de tiempo generalmente será determinada analizando el nivel de unión que ocurre durante un tiempo. El segundo anticuerpo no unido entonces se remueve y el segundo anticuerpo unido se detecta utilizando el grupo reportero. El método empleado para detectar el grupo reportero depende de la naturaleza del grupo reportero. Para grupos radioactivos, el conteo por centelleo o métodos autoradiográficos generalmente son apropiados. Los métodos espectroscópicos pueden utilizarse para detectar colorantes, grupos luminiscentes y grupos fluorescentes. La biotina puede detectarse utilizando avidina, acoplada a un grupo reportero diferente (comúnmente un grupo radioactivo o fluorescente o una enzima). Los grupos reporteros de enzima generalmente se pueden detectar por la adición de substrato (generalmente durante un tiempo específico), seguido por la espectroscopia u otros análisis de los productos de reacción. Para determinar la presencia o ausencia de cáncer de próstata, la señal detectada del grupo reportero que permanece unida al soporte sólido generalmente se compara una señal que corresponde a un valor de reducción predeterminado. En una modalidad preferida, el valor de reducción es la señal media promedio obtenida cuando el anticuerpo inmovilizado se incuba con las muestras de pacientes sin cáncer de próstata. En general, una muestra que genera una señal está tres desviaciones normales por arriba del valor de disminución predeterminado, se considera positiva para cáncer de próstata. En una modalidad alterna preferida, el valor de diminución se determinó utilizando una Curva Operadora de Recepción, de acuerdo con el método de Sackett y otros., Clinical Epidemilogy: A Basic Science for Clinical Medicine, Little Brown and Co., 1985, p. 106-7. En resumen, en esta modalidad el valor de recorte puede determinarse de una gráfica de pares de regímenes positivos verdaderos (es decir, sensibilidad) y regímenes positivos falsos (especificidad al 100%) que corresponden a cada valor de disminución posible para el resultado de prueba de diagnóstico. El valor de disminución sobre la gráfica que es el más cercano a la esquina superior (es decir, el valor que abarca el área más grande) es el valor de disminución más preciso, y una muestra que genera una señal que es superior al valor de disminución determinado por este método se puede considerar positivo. Alternativamente, el valor de disminución puede cambiarse a la izquierda de lo largo de la gráfica, para reducir al mínimo el régimen positivo falso, o a la derecha, para reducir al mínimo el régimen de falsos negativos. En general, una muestra que genera una señal que es superior al valor de recorte determinado por este método se considera positivo para el cáncer de próstata. En una modalidad relacionada, el análisis se lleva a cabo en un formato de prueba de flujo de paso o separación, en donde el anticuerpo se inmoviliza sobre una membrana, tal como nitrocelulosa. En la prueba de flujo de paso, los polipéptidos dentro de la muestra se unen al anticuerpo inmovilizado a medida que la muestra pasa a través de la membrana. Un segundo anticuerpo marcado que se une al complejo de anticuerpo-polipéptido como una solución que contiene el segundo anticuerpo fluya a través de la membrana. La detección del segundo anticuerpo unido entonces puede realizarse como se describió antes. En el formato de prueba de separación, uno extremo de la membrana al cual se une el anticuerpo se sumerge en una solución que contiene la muestra. La muestra migra a lo largo de la membrana a través de una región que contiene el segundo anticuerpo y al área de anticuerpo inmovilizado. La concentración del segundo anticuerpo en el área del anticuerpo inmovilizado indica la presencia de cáncer de próstata. Normalmente, la concentración del segundo anticuerpo en ese sitio genera un patrón, tal como una línea, que puede leerse visualmente. La ausencia de dicho patrón indica un resultado negativo. En general, la - cantidad de anticuerpo inmovilizada en la membrana se selecciona para generar un patrón visualmente discernible cuando la muestra biológica contiene un nivel de polipéptido que podría ser suficiente para generar una señal positiva en el análisis de emparedado de dos anticuerpos, en el formato tratado antes. Preferiblemente, la cantidad de anticuerpo inmovilizado sobre la membrana varía de aproximadamente 25 ng a alrededor de 1 µg, y más preferiblemente de aproximadamente 50 ng a alrededor de 500 ng Dichas pruebas pueden realizarse normalmente con una cantidad muy pequeña de muestra biológica Desde luego, existen otros numerosos análisis, los cuales son adecuados para usarse con los ántígenos o anticuerpos de la presente invención. Las descripciones anteriores se pretende que únicamente sean ilustrativas. En otra modalidad, los polipéptidos anteriores pueden utilizarse como marcadores para la progresión de cáncer de próstata. En esta modalidad, los análisis, como se describió antes para el diagnóstico de cáncer de próstata, pueden realizarse con el tiempo, y se puede evaluar el cambio en el nivel de polipéptidos reactivos. Por ejemplo, los análisis pueden realizarse cada 24-72 horas durante un período de 6 meses a 1 año , y después realizarse según sea necesario. En general, el cáncer de próstata progresa en aquellos pacientes en quienes se incrementa con el tiempo el nivel de polipéptidos detectados por agente de unión . En contraste, el cáncer de próstata no progresa cuando el nivel de polipéptido reactivo permanece constante o disminuye con el tiempo. Los anticuerpos para usarse en los métodos anteriores pueden prepararse mediante cualquiera de una variedad de técnicas conocidas por los de experiencia ordinaria en la materia. Ver, por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. En una de dichas técnicas, u n inmunogeno que comprende el polipéptido antigénico inicialmente se inyecta en cualquiera de una variedad de mam íferos (v. gr. , ratones , ratas, conejos, ovejas y cabras) . En este paso , los polipéptidos de esta invención pueden servir como el inmunógeno sin modificación .

Alternativamente, de manera particular para polipéptidos relativamente cortos, puede producirse una respuesta inmune superior si el polipéptido se une a una proteína del vehículo, tal como albúmina de suero de bovino o hemocianina de limpeto de orificio. El inmunógeno se inyecta en ei huésped animal , preferiblemente de acuerdo con un programa predeterminado incorporando una o más inmunizaciones de refuerzo y los animales se sangran periódicamente. Los anticuerpos policlonales específicos para el polipéptido entonces pueden purificarse a partir de dicho antisuero, por ejemplo, mediante cromatografía de afinidad utilizando el polipéptido acoplado a un soporte sólido adecuado. Los anticuerpos monoclonales específicos para el polipéptido antigénico de interés pueden prepararse, por ejemplo, utilizando la técnica de Kohier and Milstein , Eur. J. Immunol. 6:51 1 -519, 1976, y mejoras de la misma . En resumen , estos métodos implican la preparación de líneas celulares inmortales capaces de producir anticuerpos que tienen especificidad deseada (es decir, reactividad con el polipéptido de interés) . Dichas l íneas celulares pueden producirse, por ejemplo , de células del vaso, obtenidas de un animal inmunizado como se describió antes. Las células del bazo se inmortalizan entonces, por ejemplo, mediante fusión con una pareja de fusión de células de mieloma , preferiblemente una que es singénica con el animal inm unizado . U na variedad de técnicas de fusión pueden emplearse. Por ejemplo , las células del bazo y célu las de mieloma pueden combinarse con un detergente no iónico durante unos cuantos minutos y después sembrarse en placas de baja densidad sobre un medio selectivo que soporta el crecimiento de células híbridas, pero células de mieloma. Una técnica de selección preferida utiliza selección de HAT (hipoxantina, aminopterina, timidina). Después de un tiempo suficiente, usualmente de aproximadamente 1 a 2 semanas, se observan colonias de híbridos. Las colonias solas se seleccionan y se prueban para actividad de unión contra el polipéptido. Los hibridomas que tienen alta reactividad y especificidad son los preferidos. Los anticuerpos monoclonales pueden aislarse de los sobrenadantes desarrollando colonias de hibridomas. Además, se pueden emplear varias técnicas para mejorar el rendimiento, tales como inyección de la línea celular de hibridoma en la cavidad peritoneal de un huésped vertebrado adecuado , tal como un ratón . Los anticuerpos monoclonales pueden recuperarse entonces de fluido de ascitos o la sangre. Los contaminantes pueden removerse de anticuerpos mediante técnicas convencionales, tales como cromatografía, filtración de gel , precipitación y extracción. Los polipéptidos de esta invención se pueden utilizar en los procesos de purificación , en , por ejemplo, un paso de cromatografía de afinidad .

Los anticuerpos monoclonales de la presente invención también se pueden utilizar como reactivos terapéuticos, para disminuir o eliminar tumores de próstata . Los anticuerpos pueden utilizarse sobre ellos mismos (por ejemplo , para inhibir metástasis) o acoplarse a uno o más agentes terapéuticos . Los agentes adecuados a este respecto incluyen radionuclídos, inductores de diferenciación, fármacos, toxinas y derivados de 'los mismos. Los radionuclidos preferidos incluyen 90Y, 123l, 125l, 131l, 186Re, 188Re, 211At, y 212Bi. Los fármacos preferidos incluyen metotrexato y pirimidina y análogos de purina. Los inductores de diferenciación preferidos incluyen esteres de forbol y ácido butirico. Las toxinas preferidas incluyen ricina, abrina, toxina de difteria, toxina de cólera, gelonina, Pseudomonas de exotoxina, toxina de Shigella y proteína antiviral de grana. Un agente terapéutico se puede acoplar (v.gr., unido covalentemente) a un anticuerpo monoclonal adecuado ya sea directa o indirectamente (v.gr., vía un grupo enlazador). Una reacción directa entre un agente y un anticuerpo es posible cuando cada uno tiene un substituyente capaz de reaccionar con el otro. Por ejemplo, un grupo nucleofílico, tal como un grupo amino o sulfohidrilo, en uno puede ser capaz de reaccionar con un grupo que contiene carbonilo. tal como un anhídrido o un haluro de ácido, en el otro o con un grupo alquilo que contiene un grupo saliente bueno (v.gr., un haluro) Alternativamente, puede ser conveniente acoplar un agente terapéutico y un anticuerpo vía un grupo enlazador. Un grupo enlazador puede funcionar como separador para distanciar un anticuerpo de un agente con el fin de evitar interferencia con capacidades de unión. Un grupo enlazador puede servir también para incrementar la reactividad química de un substituyente en un agente o un anticuerpo, y por lo tanto incrementar deficiencia de acoplamiento. Un incremento en la reactividad química también puede facilitar el uso de agentes o grupos funcionales sobre agentes, que de alguna otra manera o podría ser posible. Será evidente para los expertos en la materia que se puede emplear una variedad de reactivos bifuncionales o polifuncionales, tanto homo como hetero-funcionales (tales como aquellos descritos en el catalogo de Pierce Chemical Co., Rockford, IL), como el grupo enlazador. El acoplamiento puede efectuarse, por ejemplo, a través de grupos amino, grupos carboxilo, grupos sulfohidrilo o residuos de carbohidratos oxidados. Hay numerosas referencias que describen dicha metodología, v.gr., Patente de E.U.A. número 4,671,958, de Rodwell y otros. Cuando un agente terapéutico es más potente cuando está libre de la porción del anticuerpo de los inmunoconjugados de la presente invención, puede ser conveniente utilizar un grupo enlazador que se separa durante o por la internalización en una célula. Se ha descrito un número de diferentes grupos enlazadores separables. Los mecanismos para liberación intracelular de un agente de estos grupos enlazadores incluyen la separación por la reducción de una unión de dísulfuro (v.gr., Patente de E.U.A. No. 4,489,710, de Spitler), por irradiación de una unión fotolabil (v.gr.. Patente de E.U.A. No. 4,625,014, de Senter y otros), por hidrólisis de cadenas laterales de aminoácidos derivatizadas (v.gr., Patente de E.U.A. No. 4,638,045, de Kohn y otros), por hidrólisis medida por complemento de suero (v.gr., Patente de E.U.A. No. 4,671,958, de Rodwell y otros.), e hidrólisis catalizada por ácido (v.gr. , Patente de E. U .A. No. 4,569,789, de Blattler y otros). Puede ser conveniente acoplar más de un agente a un anticuerpo. En una modalidad, las moléculas múltiples de un agente se acoplan a una molécula de anticuerpo. En otra modalidad, más de un tiempo de agente para acoplarse a un anticuerpo. Sin importar la modalidad particular, los inmunoconjugados con más de un agente pueden prepararse en una variedad de maneras. Por ejemplo, más de un agente puede acoplarse directamente a una molécula de anticuerpos o se pueden usar enlazadores que proveen múltiples sitios para la unión. Alternativamente, se puede usar un vehículo. Un vehículo puede portar los agentes en una variedad de maneras, incluyendo unión covalente ya sea directa o vía un grupo enlazador. Los vehículos adecuados incluyen proteínas tal como albúminas (v.gr. , Patente de E. U .A. No. 4,507,234, de Kato y otros) , péptidos y polisacáridos tal como aminodextrano (v. gr. , Patente de E. U .A . No. 4,699,784, de Shih y otros). U n veh ículo también puede contener un agente por unión no covalente o por encapsulación , tal como dentro de una vesícula de liposomas (v. gr. , Patente de E. U .A . Nos. 4,429,008 y 4,873,088) . Los vehículos específicos para gentes de radionuclidos incluyen moléculas pequeñas radiohalogenadas y compuestos quelantes. Por ejemplo, la Patente de E. U .A. No. 4,735,792 describe moléculas pequeñas radiohalogepadas representativas y su síntesis. U n q uelante de radionuclidos puede formarse de los compuestos quela ntes que incluyen aquellos que contienen átomos de nitrógeno y azufre como los átomos donadores para unir el metal, u oxido metálico, radionuclido. Por ejemplo, la Patente de E.U.A. No. 4,673,562, a Davison y otros, describe compuestos quelantes representativos y su síntesis. Se puede utilizar una variedad de rutas de administración para los anticuerpos e inmunoconjugados. Normalmente, la administración será intravenosa, intramuscular, subcutánea o en el lecho de un tumor reseccionado. Será evidente que la dosis precisa del anticuerpo/inmunoconjugado variará dependiendo del anticuerpo utilizando, la densidad del antígeno sobre el tumor, y el régimen de eliminación del anticuerpo. Los reactivos de diagnóstico de la presente invención también pueden comprender secuencias de ADN que codifican uno o más de los polipéptidos anteriores, o una o más porciones de ios mismos. Por ejemplo, se pueden emplear por lo menos dos iniciadores de oligonucleótidos en un análisis basado en reacción en cadena de polimerasa (RCP) para aplicar ADNc específico para tumor de próstata derivado de una muestra biológica, en donde por lo menos uno de los iniciadores de oligonucleótidos es específico para una molécula de ADN que codifica un polipéptido de la presente invención. La presencia del ADNc amplificado se detecta entonces utilizando técnicas bien conocidas en la materia, tales como electroforesis de gel. Similarmente, las sondas de oligonucleótidos específicas para una molécula de ADN que codifica una hibridización para detectar la presencia de un polipéptido inventivo en una muestra biológica. Como se usa en la presente, el término "iniciador/sonda de oligonucleótido específico para una molécula de ADN" significa una secuencia de oligonucleótidos que tiene los menos aproximadamente el 80% de identidad, preferiblemente por lo menos aproximadamente el 90% y más preferiblemente por lo menos aproximadamente el 95% de identidad a la molécula de ADN en cuestión. Los iniciadores y/o sonda de oligonucleótidos que pueden emplearse útilmente en los métodos de diagnóstico de la invención, tienen preferiblemente por lo menos aproximadamente 10-40 nucleótidos. En una modalidad preferida, los iniciadores de oligonucleótidos comprenden por lo menos aproximadamente 10 nucleótidos contiguos de una molécula de ADN que codifica uno de los polipéptidos descritos en la presente. De preferencia, las sondas de oligonucleótidos para usarse e? los métodos de diagnóstico de la invención comprenden por lo menos aproximadamente 15 oligonucleótidos contiguos de una molécula de ADN que codifica uno de los polipéptidos descritos en la presente. Las técnicas para los análisis basados en RCP y análisis de hibridización son conocidos en la materia (ver, por ejemplo. Mullís y otros, Ibid; Ehrlich, Ibid). Los iniciadores o sondas por lo tanto se pueden utilizar para detectar secuencias de próstata y/o tumores en muestra biológicas, preferiblemente sangre, semen, o tejido de próstata y/o tumor de próstata.

Los siguientes Ejemplos se ofrecen a manera de ilustración y no a manera de limitación. EJEMPLOS Eiemplo 1 A. Aislamiento de Polipéptidos de LnCap.fgc utilizando suero de prostatitis humana Los polipéptidos representativos de la presente invención se aislaron tamizando una línea celular de cáncer de próstata humana con suero de prostatitis humana de la siguiente manera. Un banco de expresión de ADNc de adenocarcinoma de próstata humana se construyó por síntesis de transcriptasa de ARNm purificado de un la línea celular de adenocarcinoma de próstata humana LnCap.fgc (ATCC No. 1740-CRL), seguido por la inserción de los clones de ADN c resultantes en Lambda ZAP II (Stratagene, La Jolla, CA). El suero de prostatitis humana se obtuvo de un paciente al que se le diagnosticó prostatitis autoinmune y después del tratamiento de carcinoma de vejiga mediante la administración de BCG. Este suero se utilizó para tamizar el banco de ADNc LnCap como se describió en Sambrook y otros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY. 1989.

Específicamente, las placas de LB se cubrieron con aproximadamente 104 pfu del banco de ADNc LnCap y se incubaron a 42°C durante 4 horas antes de obtener una primera elevación de placa sobre filtros de nitrocelulosa impregnados con isopropiltio-beta-galctosidasa (IPTG) las placas se incubaron entonces durante 5 horas adicionales a 42°C y se separó una segunda elevación de placa por incubación durante la noche a 37°C. Los filtros se lavaron tres veces con PBS-T, se bloquearon durante 1 hora con SRF (conteniendo 1% de Tween 20™) y de nuevo se lavaron tres veces con PBS-T, antes de incubación con suero de prostatitis humana a una dilusión de 1:200 con agitación durante la noche. Los filtros después se lavaron tres veces con PBS-T y se incubaron con proteína A marcada con 12SI (1 µl/15 ml) PBS-T) durante una hora con agitación. Los filtros se expusieron a la película durante tiempos variables, variando de 16 horas a 7 días. Las placas que dan señales en elevaciones por duplicado se volvieron a sembrar en placas sobre placas LB. Las placas resultantes se elevaron con filtros duplicados y estos filtros se trataron como antes. Los filtros se incubaron con suero de prostatitis humana (dilusión 1:200) a 4°C con agitación durante la noche. Las placas positivas se visualizaron con proteína A de 125l como se describió antes con los filtros estando expuesta a la película por tiempos variables, variando de 16 horas a 11 días. La extirpación in vivo de antígeno de prostatitis humana positivo ADNc se llevó a cabo de acuerdo con el protocolo del fabricante. B. Caracterización de Polipéptidos La secuencia de ADN para clones positivos se obtuvo utilizando iniciadores hacia adelante y a la inversa sobre una Secuencia Automática Modelo 373A de Applied Biosystems Inc. (Foster City. CA). Las secuencias de ADNc que codifican los polipéptidos aislados, de aquí en adelante denominados como HPA8, HPA13, HPA15 - HPA17, HPA20, HPA25, HPA28, HPA29, HPA32 - HPA38 y HPA41 se presentaron en SEQ ID Nos. 32 y 33, 34 y 35, 36, 9 y 10, 11, 12, 13 y 14, 15, 37 y 38, 16, 39, 22 y 23, 17 y 18, 19, 24, 40 y 41, 42 y 43, respectivamente. Las secuencias 3' de HPA16 y HPA20 son idénticas. HPA13, HPA16, HPA20, HPA29 y HPA33 se piensa que son clones de translapamiento con puntos extremos 5' novedosos. Dos clones positivos se determinaron por ser idénticos a HPA15. También, HPA15, HPA34 y HPA37 se encontró que son clones de translapamiento. Las secuencias de aminoácidos N-terminal esperados de los polipéptidos aislados HPA16, HPA17, HPA20. HPA25, HPA28, HPA32, HPA35, HPA36, HPA34, HPA37, HPA8. HPA13, HPA15, HPA29, HPA33, HPA38 y HPA41, basados en la secuencias de ADNc determinadas en el marco con la porción N-terminal de ß-galactosidasa (lacZ) se presentan en la SEQ ID Nos. 1-8, 20, 21, y 25-31, respectivamente. El ADNc determinado y las secuencias de aminoácidos para los polipéptidos aislados se compararon con las secuencias conocidas en el banco de genes utilizando las bases de datos de EMBL y GenBank (Liberación 91), y también el sistema de ADN STAR. El sistema de ADN STAR es una combinación de las bases de datos PIR, Swiss, junto con las secuencias de proteínas traducidas (Liberación 91). No se encontraron homologías significantes a HPA17, HPA25, HPA28, HPA32, HPA34 y HPA36. La secuencia de ADNc se determinó para HPA8 se encontró que tiene aproximadamente 100% de identidad con el proto-oncogeno humano BMI-1 (Alkema, M.J. y otros, Hum. Mol. Gen. 2:1597-1603, 1993). La investigación de base.de datos de ADN con la secuencia de ADNc 5' y 3' que codifica HPA13 reveló 100% de identidad con una secuencia de ADNc conocida de una línea celular mieloide inmadura humana (GenBank Acc. No. D63880). La investigación de la base de datos de la proteína con la secuencia de aminoácidos deducida para HPA13 reveló 100% de identidad con el marco de lectura abierto codificado por la misma secuencia de ADNc humana. La investigación de la base de datos de proteína con la secuencia de aminoácidos esperada para HPA15, reveló alta homología (identidad al 60%) con un marco de lectura abierto previsto de Saccharomyces cerevisiae (Swiss/PIR Acc. No. S46677), y 100% de identidad con una proteína humana de la secreción de fluido intestinal que modula la glándula pituitaria (Lonnroth, I., J. Biol. Chem. 35:20615-20620, 1995). La secuencia de aminoácido deducida para HPA38 se encontró que tiene 100% de identidad con proteína 2 de factor de choque de calor humano (Schuetz, T.J. y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:6911-6917, 1991). La investigación de la base de datos de ADN con la secuencia de ADN 5' para HPA41 y ia investigación de la base de datos de proteína con la secuencia de aminoácidos deducida reveló 100% de identidad con una proteína de LIM humana (Rearden, A., Biochem. Biophys. Res. Commun. 201:1124-1131, 1994). Al mejor saber de los inventores, se prepara la proteína LIM, previamente no se ha mostrado que alguno de los polipéptidos de la invención están presentes en la próstata humana.

Las partículas vírales de fagemidos positivas se utilizaron para infectar E. coli XL-1 Blue MRF1,. cómo se describió en Sambrook y otros, supra. La inducción de proteína recombinante se logró por la adición de IPTG. Los listos inducidos y no inducidos se corrieron por duplicado sobre SDS-PAGE y se transfirieron a filtros de nitrocelulosa. Los filtros se hicieron reaccionar con suero de prostatitis humana (dilusión al 1:200) y un suero de conejo (dilusión de 1:200 o 1:250) reactivo con la porción de 4 Kd N-terminal de lacZ. Las incubaciones de suero se realizaron durante 2 horas a temperatura ambiente. El anticuerpo unido se detectó por la adición de Proteína A marcada con 125l y exposición subsecuente a la película durante tiempos variables variando de 16 horas a 11 días. Los resultados de los inmunoanálisis se resumen en la Tabla I, en donde (+) indica una reacción positiva y (-) indica sin reacción. TABLA I Suero de Suero de Masa de Antíqeno Próstatitis Anti-la cZ Proteína/Kd Humana HPA8 (-) (-) HPA13 (+) (+) HPA15 ( + ) (+) 50 HPA16 (+) (+) 40 HPA17 ( + ) (-) 40 HPA20 ( + ) (+) 38 HPA25 (-) 32 HPA28 (-) HPA29 (+) HPA32 (-) HPA33 (+) HPA34 no probado 50 HPA35 (-) HPA36 (-) HPA37 no probado 50 HPA38 (-) HPA41 no probado La reacción positiva de los antígenos de prostatitis humana recombinantes con suero de prostatitis humana y suero anti-lacZ indican que la reactividad del suero de prostatitis humana se dirige a la proteína de fusión. Los antígenos clonados que muestran reactividad para el suero prostatitis humana pero no para el suero anti-lacZ indican que la proteína reactiva probablemente se inicia dentro del clon. Los antígenos reactivos con el suero anti-lacZ pero no con el suero de prostatitis humana pueden dar como resultado el suero de prostatitis humana que reconoce epitopes conformacionales o la cinética de unión de antígeno-anticuerpo puede ser tal que la exposición durante 2 horas al suero en el inmunoanálisis no es suficiente. Los antígenos que no son reactivos con el suero no están siendo expresados en E. coli, y los epitopes reactivos pueden estar dentro de la proteína de fusión o dentro de un marco de lectura abierto interno. Debido a la . inestabilidad de los antígenos recombinantes de HPA13, HPA29 y H PA33, no fue posible determinar el tamaño de los antígenos recombinantes. La expresión de antígenos de prostatitis humana representativos se investigó oor RT-PCR en cuatro líneas celulares humanas diferentes (incluyendo dos líneas de tumores de próstata metastásicos LNCaP y DU 145) , próstata normal, mama, colón, riñon , estómago, pulmón y tejido de músculo esquelético, nueve diferentes muestras de tumores de próstata y tres diferentes muestras de tumor de mama. Los resultados de estos estudios se muestran en la Tabla I I .

. : Tabla II Análisis de expresión de ARNm del clon HPA por RT-RCP en líneas celulares, tejidos normales y tumores humanos Clon LNCaP DU145 MCF-12A HBL-100 Próstata Mama Colón Riñon Estómago Pulmón Músculo Esquel. hpa-17 + ++ + + + - + - - + + hpa-20 + + + + + + + NP NP + NP NP NP + NP hpa-28 + + + + + + + - + + - + + Tumores de próstata (n = 9) Tumores de Mama (n=3) Clon Tumor 1 Tumor 2 Tumor 3 Tumor 4 Tumor 5 Tumor 6 Tumor 7 Tumor 8 Tumor 9 Tumor 1 Tumor 2 Tumor 3 hpa-17 + + + - + + + - - + ++ ' ++ ., ji. ? hpa-20 + + NP NP NP NP NP NP NP + + '' + + + hpa-28 + + + - + + ++ + - ++ + + + + La expresión de ARNm de antígenos representativos en LNCaP y próstata, riñon, hígado, estómago,' pulmón y páncreas normales se investigó por protección de RNasa. Los resultados de estos estudios se proveen en la Tabla lll. Tabla lll Análisis de expresión de ARNm del clon de HPA por la protección de RNasa en LNCaP y tejidos humanos normales Clon LNCaP Próstata Riñon Hígado Estómaqo Pulmón Páncreas hpa-15 + - + + ++ + - + + hpa-20 + + + + + + + + + NP NP hpa-25 + + + + + + + + NP hpa-32 NP + + + + NP + + NP hpa-35 + + + + + + NP + + + + + + hpa-36 + + NP NP + + + Eiemplo 2 A. Aislamiento y Caracterización de Proteína de Unión de Esteroides de Ratas Se obtuvieron sueros inmunes de ratas inmunizadas con extracto de próstata de ratas para generar anticuerpos para autoantígenos de próstata. Específicamente, las ratas se sangraron previamente para obtener suero de control antes de ser inmunizadas con un extracto de detergente de próstata de ratas (en SRF conteniendo 0.1% de Tritón) en auxiliar completo de Freund. Un refuerzo de auxiliar incompleto de Freund se dio 3 semanas después de la inmunización inicial y el suero se recuperó a las 6 semanas. El suero así obtenido se sometió a análisis de manchas Western ECL (Amersham International, Arlington Heights, lll) utilizando el protocolo del fabricante y una proteína de próstata de rata se identificó, como se muestra en la Figura 1. Después de la reducción, SDS-PAGE reveló una banda amplia de tinsión de placa emigrando a 7kD. Después de la reducción, se observó una fuerte banda a 24kD (Figura 2). Esta proteína se purificó por cromatografía de intercambio iónico y se sometió a electroforesis de gel bajo condiciones reducidas. Se observaron tres bandas, indicando la presencia de tres cadenas dentro de la proteína: una cadena de 6-8 kD (C1), una cadena de 8-10 kD (C2) y una cadena de 10-12 kD (C3). La proteína se purificó además por CLAR de fase inversa en una coiumna de 5 µm Delta™ C18 300 A°, tamaño de columna 3.9 x 300 mm (Waters-Millipore, Milford, MA). La muestra que contiene 100 µg de la proteína se disolvió en 0.1% de ácido trifluoroacético (TFA), pH 1.9 y los polipéptidos se eluyeron con un gradiente lineal de acetonitrilo (0.60%) en 0.1% de TFA pH 1.9 a un régimen de flujo de 0.5 mL/min. durante 1 hora. El eluyente se monitoreó a 214 nm. Los picos se obtuvieron, un dímero de C1-C3 y un dímero de C2-C3. La terminación amino de la cadena C2 se encontró bloqueada. Las cadenas de C1 y C3 se secuenciaron en un secuenciador de proteína Modelo 494 Perkin Elmer/Applied Biosystems Inc. Procise y se encontró que tienen las siguientes secuencias amino terminales (SEQ. I D Nos. 44 y 45, respectivamente). (a) Ser-GIn-lle-Cys-Glu-Leu-Val-Ala-His-Glu-Thr-lle-Ser-Phe-Leu; y (b) Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-lle-Leu-Asp-Glu-Val-lle-Arg-GIy-Thr, En donde Xaa puede ser cualquier aminoácido. Estas secuencias se compararon con secuencias conocidas en el banco de genes utilizando las bases de datos tratadas en el Ejemplo 1 y se encontró que fueron idénticas a la proteína de unión de esteroides de ratas, también conocida como proteína de unión de estramustina (PUEM) (Forsgren, B. y otros, Prog. Clin. Biol. Res. 75A: 391 -407, 1981 ; Forsgren, B. y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 76: 3149-53, 1979). Esta proteína es una proteína principal secretada en fluido seminal de ratas y se ha mostrado que se une a proteínas ricas en esteroides, colesterol y prol ina. Se ha mostrado que PU EM se une a estramustina y estromustina, los metabolitos activos de fosfato de estramustina. El fosfato de estram ustina se ha encontrado que es clínicamente útil para tratar cáncer de próstata avanzado en pacientes que no responden a terapia de erosión de hormona normal (ver, por ejemplo, Van Poppel, H . y otros , Prog. Clin. Biol. Res. 370 : 323-41 , 1 991 ) . B. Aislamiento de homólogo humano putativo para proteína de unión de esteroide de rata La proteína de unión de esteroide de rata purificada se obtuvo de próstata de ratas recién extirpada y se utilizó para inmunizar subcutáneamente un conejo hembra virgen blanco New Zealand ( 1 50 µg de proteína de unión de esteroide de rata purificada en 1 ml de SRF y 1 ml de auxiliar de Freund incompleto conteniendo 100 µg de dipéptido de muramilo (auxiliar de péptido, Calbiochem, La Jolla, CA). Seis semanas después el conejo se reforzó subcutáneamente con la misma dosis de proteína en auxiliar de Freund incompleto. Finalmente, el conejo se reforzó intravenosamente dos semanas después con 100 µg de proteína en SRF y el suero se recogió dos semanas después de la inmunización final. El anticuerpo de conejo resultante se utilizó para tamizar la línea celular LnCap.fgc sin éxito. El antisuero de conejo se utilizó subsecuentemente para tamizar combinaciones de cromatografía de cambio anionico de fluido seminal humano utilizando el protocolo detallado más adelante en el Ejemplo 3. Este análisis indicó una proteína reactiva cruzada de aproximadamente 18-22 kD. La fracción - de fluido seminal de interés (Fracción 1 ) se separó en componentes individuales por SDS-PAG E bajo condiciones no reductoras, se gráfico en una mem brana de PVDF, se extirpó y se digirió con CN Br en 70% de ácido fórmico. Los fragmentos de CN Br resultantes se resolvieron en un sistema de gel de tricina, de nuevo se electrograficaron para PVDF y se extirparon . La secuencia para un péptido se determinó de la siguiente manera: Val-Val-Lys-Thr-Tyr-Leu-lle-Ser-Ser-lle-Pro-Leu-GIn-Gly-Ala-Phe- Asn-Tyr-Lys-Tyr-Thr-Ala (SEQ. ID No. 46). Esta secuencia se com paró con secuencias conocidas en el banco de genes util izando las bases de datos identificadas antes y se encontró inesperadamente que es idéntica a la proteína de fluido de enfermedad cística grave, una" proteína cuya expresión se encontró previamente que se correlaciona con la presencia de cáncer de mama metastásico (Murphy, L.C. y otros, J. Biol. Chem. 262: 15236-15241 , 1987) . Al mejor saber y entender de los inventores, esta proteína no se ha identificado previamente en tejidos masculinos. La capacidad de la Fracción 1 como se describió antes, para unirse al esteroide se investigó de la siguiente manera. La proteína de unión de esteroides de rata purificada (PUER) y la fracción 1 se sometieron a SDS-PAGE y se transfirieron en filtros de nitrocelulosa Específicamente, 1 .5 µg de PU ER/l ínea de gel y 4 µg de fracción 1 /línea de gel se electroforaron en paralelo en un gel Laemmli de 4-20% de gradiente (BioRad) , después se transfirieron electroforéticamante a nitrocelulosa. Después de la transferencia de proteínas , la nitrocelulosa se bloqueó durante 1 hora a temperatura ambiente en 1 % de Tween 20 en SRF, se enjuagó tres veces durante 10 minutos cada una en 10 ml de 0.1 % de Tween 20 en SR F más 0.5 M de NaCI, después se probó con 1 ) 0.87 µM de progesterona conjugado con peroxidasa de rábano (H R P, Sigma) diluido en solución reguladora de enjuague; 2) 0.87 µM de progesterona H R P con 200 µM de estramustina; o 3) 0.87 µM de progesterona H R P más 400 µM de progesterona no marcada y 200 µM de estramustina. Cada mezcla de reacción se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente y se lavó tres veces durante 10 min. cada una con 0.1% de Tween 20, SRF, y 0.5 M de NaCl. Las gráficas después se desarrollaron (Sistema de ECL, Amersham) para revelar proteínas de unión HRP de progesterona que también fueron capaces de unir estramustina. Tanto con proteína de unión de esteroide como con Fracción 1, se obtuvieron tres bandas que unen progesterona de HRP y que compitieron con progesterona no marcada y estramustina (Figura 3). Estos resultados indican que las tres bandas aisladas de fluido seminal humano como se describió antes se unen a la hormona y corresponden al número de polipéptidos de las cadenas C1, C2 y C3 de la proteína de unión de esteroides de ratas, y son ligeramente más grandes en tamaño, ya sea debido a la secuencia primaria o modificaciones post-translacionales secundarias. Este homólogo putativo de proteína de unión de esteroide de rata también se identificó en un tamiz subsecuente de fluido seminal humano utilizando el anticuerpo de conejo detallado antes.

Específicamente, una proteína de agregado de 22kD/65kD hidrofóbica se obtuvo la cual, después de la digestión CNBr de la banda de 22kD, proveyó un péptido que tiene la siguiente secuencia: Vai-Val-Lys-Thr-Tyr-Leu-lle-Ser-Ser-lle-Pro-Leu-GIn-Ala-Phe- Asn-Tyr-Lys-Tyr-Thr-Ala (SEQ. ID No. 47). Este péptido se encontró que corresponde a los residuos 67 a 87 de la proteína de fluido de enfermedad cística grave y se identificó de nuevo utilizando suero de prostatitis autoinmune humano como se trata más adelante en el Ejemplo 4.

Eiemplo 3 Aislamiento y Caracterización de Polipéptidos Aislados de LnCaP.fac Utilizando Suero de Próstatitis de Ratas Una pella de células LnCap.fgc se homogeneizó (10 gm de pella de célula en 10 ml) por resuspensión en SRF, 1% de NP-40 y 60 µg/ml de floruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) (Sigma, St. Louis, MO) después de 10 pulsaciones en el homogenizador Dounce. Esto se siguió por un tratamiento con sonido de sonda de 30 segundos y otros 10 choques en el homogeneizador Dounce. La lechada resultante se centrifugó a 10,000 x G, y el sobrenadante se filtró con un filtro de 0.45 µM (Amicon, Beverly, MA) después se aplicó a una resina de intercambio anionico Macro-Prep Q-20 de BioRad (Hercules, CA). Las proteínas se eluyeron con un gradiente de 0 a 0.8 M de NaCI 70 minutos en 20 mM de tris pH 7.5 a un régimen de - flujo de 8 ml/min. Las fracciones se enfriaron, se concentraron con concentradores Centriprep MWCO de 10 Kd (Amicon) y se almacenaron a -20°C en presencia de 60 µg/ml de PMSF. Las combinaciones de intercambio iónico después se examinaron por electrofóresis en 4-20% de tris glicina Ready-Gels (BioRad) y se transfirieron después a filtros de nitrocelulosa. Las combinaciones de intercambio iónico de interés se identificaron por Análisis Western de ECL (Amersham International), utilizando el suero de rata descrito antes en el Ejemplo 3a. Este análisis indicó una proteína de aproximadamente 65 kD eluyendo a 0.08 a 0.13 M de NaCl. La combinación de intercambio iónico reactivo de suero de ratas se sometieron a CLAR y análisis Western subsecuente para identificar la fracción de proteína de interés. Esta proteína se dirigió después durante 24 horas a 25°C en 70% de ácido fórmico saturado con CNBr para separarse en residuos de metionina. Los fragmentos de CNBr resultantes se purificaron por CLAR de microorificios utilizando una columna Vydac C18 (Hesperia, CA), tamaño de columna 1x150 mM en un CLAR de división Modelo 172 de Biosystems Inc. (Foster City, CA). Las fracciones se eluyeron de la columna con un gradiente de 0 a 60% de acetonitrilo a un régimen de flujo de 40 µl por minuto. El eluyente se monitoreó a 214 nm. Las fracciones resultantes se cargaron directamente en un secuenciador de proteínas Perkin Elmer/Applied Biosystems Inc. Procise 494 y se secuencia utilizando química de Edman normal del extremo terminal amino. Se obtuvieron dos diferentes péptidos teniendo las siguientes secuencias: (a) Xaa-Ala-Lys-Lys-Phe-Leu-Asp-Ala-Glu-His-Lys-Leu-Asn-Phe-Ala (SEQ. ID No.48); y (b) Xaa-Xaa-Xaa-Lys-IIe-Lys-Phe-IIe-GIn-Glu-Asn-lle-Phe-Gly, en donde Xaa puede ser cualquier aminoácido (SEQ ID No. 49). Estas secuencias se compararon con secuencias conocidas en el banco de genes utilizando las bases de datos identificadas antes e identificadas como residuos 286 a 300 y 228 a 242 respectivamente, del precursor ER-60 isomerasa de disulfuro de proteína denominado de aquí en adelante como ER-60 (Bado, R. J. y otros, Endocrinology 123:1264-1273, 1988). Este antígeno también se conoce como C-alfa fosfolipasa (ver PCT WO 95/08624). Los residuos 285 y 227 de ER-60 son metloninas, que concuerdan con las secuencias anteriores siendo fracciones de bromuro de cianogeno. ER-60 es una proteína endoplásmica residente con múltiples actividades biológicas, incluyendo isomerasa de disulfuro y actividad de proteasa de cisteina restringida. En particular, ER-60 se ha mostrado que degrada preferencialmente calnexina, una proteína implicada en la presentación de antígenos vía la ruta de complejo de histocompatiblidad principal Clase I, MHC. ER-60 y un miembro de la familia relacionada, ER-72, han mostrado que se sobre-expresan en cáncer de colón, con formas truncadas de ER-60 exhibiendo actividad enzimática incrementada (Egea, G. y otros, J. Cell. Sci (England) 105:819-30, 1993). Sin embargo, al mejor saber de los inventores, no se ha mostrado previamente que este polipéptido está presente o sobrexpresado en próstata humana. Recientemente, la expresión del gen ER-60 se ha correlacionado con la inducción de inhibición de contacto de proliferación de células (Greene, J.J. y otros, Cell. Mol. Biol. 41:473-80, 1995). Por lo tanto, si ER-60 también está truncado y es no funcional en el cáncer de próstata, como está en el cáncer de colon, la pérdida resultante de inhibición de contacto podría conducir a la transformación neoplástica y progresión tumoral. Eiemplo 4 Aislamiento y Caracterización de Polipéptidos Aislados de LnCaP.fgc Utilizando Suero de Próstatitis Humana El suero de prostatitis humana descrito antes en el Ejemplo 1 , se utilizó para tamizar la línea celular LnCaP.fgc utilizando las técnicas de intercambio iónico descritas antes en el Ejemplo 3. Las combinaciones de intercambio iónico reactivas se purificaron por CLAR en fase inversa como se describió previamente y los polipéptidos mostrados en SEQ ID Nos. 50-51 se aislaron utilizando reactividad cruzada con dicho antisuero como el criterio de selección. La comparación de estas secuencias con secuencias conocidas en el banco de genes utilizando las bases de datos descritas antes revelaron las homolog ías mostradas en la Tabla I I . Sin embargo , ninguno de estos polipéptidos ha sido asociado previamente con próstata humana. TABLA IV SEQ I D No. I dentificación de I nvestigación de Base de datos 53 gliceraldehido-3-fosfato-desh id rog renasa 54 bifosfato de alfa-fructosa aldolasa humana 55 calreticulina 56 calreticul ina 57 malato deshidrogrenasa 58 proteína de fluido de enfermedad cística 59 proteína de fluido de enfermedad cística Eiemplo 5 Aislamiento y Caracterización de Polipéptidos de Fluido Seminal H u mano Los polipéptidos de fluido seminal humano se purificaron para homogeneidad por cromatografía de intercambio anionica. Específicamente, las muestras de fluido seminal se diluyeron de 1 a 100 con 0.1 mM de solución reguladora de pH de Bis-Tris propano, pH 7 antes de cargar en la columna. Los polipéptidos se fraccionaron en combinaciones utilizando cromatografía de profusión de gel sobre una columna de intercambio anionico Poros (Perseptive Biosystems) 146 II Q/M de 4.6 mm x 100 mm equilibrada en 0.01 mM de solución reguladora de pH de Bis-Tris propano, pH 7.5. Las proteínas se eluyeron con un gradiente lineal de 0-0.5 M de NaCI en la solución reguladora de pH interior. El eluyente de columna se monitoreó a una longitud de onda de 220 nm. Las fracciones individuales se purificaron además por CLAR de fase inversa en una columna de C18 Vydac (Hesperia, CA). Las fracciones resultantes se secuenciaron como se describió antes en el Ejemplo 3. Se obtuvo un péptido que tiene la siguiente secuencia N-termínal: (c) Met-Asp-IIe-Pro-GIn-Thr-Lys-GIn-Asp-Leu-Glu-Leu-Pro-Lys-Leu (SEQ ID NO: 57). La comparación de esta secuencia con aquellas secuencias conocidas en el banco de genes como se describió antes revelaron 100% de identidad con proteína placental humana 14 (PP14). Eiemplo 6 Síntesis de Polipéptidos Los polipéptidos se pueden sintetizar en un sintetizador de péptidos Applied Biosystems 430A utilizando química de FMOC con activación de HPTU (hexafluorofosfato O-Benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio). Una secuencia de Gly-Cys-Gly se puede unir a la terminación amino del péptido para proveer un método de conjugación, uniéndose a una superficie inmovilizada o marcando el péptido. La separación de los péptidos del soporte sólido se puede llevar a cabo utilizando la siguiente mezcla de separación: ácido trifluoroacético:etanodiol:tioanisol:agua:fenol (40:1:2:2:3). Después de separar durante 2 horas, los péptidos se pueden precipitar en metil-t-butil-éter frío. Las pellas de péptidos se pueden disolver entonces en agua conteniendo 0.1% de ácido trifluoroacético (TFA) y se liofilizan antes de la purificación por CLAR en fase inversa de C18. Un gradiente de 0%-60% de acetonitrilo (conteniendo 0.1% de TFA) en agua (conteniendo 0.1% de TFA) se pueden utilizar para eluir los péptidos. Después de la liofilización de las fracciones puras, los péptidos se pueden caracterizar utilizando electrorociado de otros tipos de espectrometría de masa y por análisis de aminoácidos. A partir de lo anterior, será apreciado que, aunque las modalidades específicas de la invención se han descrito en la presente con el fin de ilustración, se pueden hacer varias modificaciones sin desviarse del espíritu y alcance de la ¡nvención.

LISTA DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL () SOLICITANTE: Corixa Corporation (ii) TITULO DE LA INVENCIÓN: COMPUESTOS Y MÉTODOS PARA INMUNOTERAPIA E INMUNODIAGNÓSTICO DE CÁNCER DE PRÓSTATA (iü) NUMERO DE SECUENCIAS: 57 (iv) DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA: (A) DESTINATARIO: SEED and BERRY LLP (B) CALLE: 6300 Columbia Center, 701 Fifth Avenue (C) CIUDAD: Seattle (D) ESTADO: Washington (E) PAÍS: E.U.A. (F) ZP: 98104-7092 (v) FORMA LEÍBLE EN COMPUTADORA: (A) TIPO DE MEDIO: Disco blando (B) COMPUTADORA: PC compatible con IBM (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Reléase #1.0, Versión #1.30 (vi) DATOS DE SOLICITUD ACTUAL: (A) NUMERO DE SOLICITUD (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 14-MARZO-1997 (C) CLASIFICACIÓN: (vii) INFORMACIÓN DE APODERADO/AGENTE: (A) NOMBRE: Maki, David J.

(B) NUMERO DE REGISTRO: 31,392 (C) NÚMERO REFERENCfA/CASO: 210121.424PC (ix) INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN: (A) TELÉFONO: (206) 622-4900 (B) TELEFAX: (206) 682-6031 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:1: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 89 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:1: Ala Arg Ala Ser Val Met Leu Leu Gly Met Met Ala Arg Gly Lys Pro 1 5 10 15 Glu lie Val Gly Ser Asn Leu Asp Thr Leu Met Ser lie Gly Leu Asp 20 25 30 Glu Lys Phe Pro Gln Asp Tyr Arg Leu Ala Gln Gln Val Cys His Ala 35 40 45 He Ala Asn He Ser Asp Arg Arg Lys Pro Ser Leu Gly Lys Ars His 50 55 60 Pro Pro Phe Arg Leu Pro Gln Glu His Arg Leu Phe Glu Arg Leu Ara 65 70 75 80 Glu Thr Val Thr Lys Gly Phe Val His 85 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:2: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 89 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:2: Ala Arg Gly Arg Phe Gly Arg Leu Gly Val Gly Gly Glu Pro His Pro 1 5 10 15 Arg Arg Asn Pro Ala Leu Pro Thr Glu Leu Ala Glu Leu Thr Pro Gln 20 25 30 Val Arg Arg Ala Ala Xaa Lys Thr Gln Arg Ser Gln Val Lys Pro Arg 35 40 45 His Arg Arg Gly Trp Pro Pro Thr Val Pro Leu Ala Gly Arg Leu Glu 50 55 60 Glu Leu Lys Thr Pro Arg Ser Pro Arg Pro Pro Glu Gln Gly Leu Asp 65 70 75 80 Pro Ser Pro Cys Ser Leu Pro Ser Pro 85 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:3: - - (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 858 aminoácidos 0 (B) TIPO, aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO 3.

Gln Glu Ser Glu Pro Phe Ser His He Asp Pro Glu Glu Ser Glu Glu 1 5 10 15 Thr Arg Leu Leu Asn He Leu Gly Leu He Phe Lys Gly Pro Ala Ala 20 25 30 5 Ser Thr Gln Glu Lys Asn Pro Arg Glu Ser Thr Gly Asn Met Val Thr 35 40 45 Gly Gln Thr Val Cys Lys Asn Lys Pjro Ásn Met Ser Asp Pro Glu Glu 50 55 60 Ser Arg Gly Asn Asp Glu Leu Val Lys Gln Glu Met Leu Val Gln Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Asp Ala Tyr Ser Phe Ser Arg Lys He Thr Glu Ala He Gly 85 90 95 He He Ser Lys Met Met Tyr Glu Asn Thr Thr Thr Val Val Gln Glu 100 105 110 Val He Glu Xaa Phe Val Met Val Phe Gln Phe Gly Val Pro Gln Ala 115 120 125 Leu Phe Gly Val Arg Arg Met Leu Pro Leu He Trp Ser Lys Glu Pro 130 135 140 Gly Val Arg Glu Ala Val Leu Asn Ala Tyr Arg Gln Leu Tyr Leu Asn 145 150 155 160 Pro Lys Gly Asp Ser Ala Arg Ala Lys Ala Gln Ala Leu He Gln Asn 165 170 175 Leu Ser Leu Leu Leu Val Asp Ala Ser Val Gly Thr He Gln Cys Leu 180 185 190 Glu Glu He Leu Cys Glu Phe Val Gln Lys Asp Glu Leu Lys Pro Ala 195 200 205 Val Thr His Leu Leu Trp Glu Arg Ala Thr Glu Lys Val Ala Cys Cys 210 215 220 Pro Leu Glu Arg Cys Ser Ser Val Met Leu Leu Gly Met Met Ala Arg 225 230 235 240 Arg Lys Pro Glu He Val Gly Ser Asn Leu Asp Thr Leu Met Ser He 245 250 255 Gly Leu Asp Glu Lys Phe Pro Gln Asp Tyr Arg Leu Ala Gln Gln Val 260 265 270 Cys His Ala He Ala Asn He Ser Asp Arg Arg Lys Pro Ser Leu Gly 275 280 285 Lys Arg His Pro Pro Phe Arg Leu Pro Gln Glu His Arg Leu Phe Glu 290 295 300 Arg Leu Arg Glu Thr Val Thr Lys* Gly Phe Val His Pro Asp Pro Leu 305 310 315 320 Trp He Pro Phe Lys Glu Val Ala Val Thr Leu He Tyr Gln Leu Ala 325 330 335 Glu Gly Pro Glu Val He Cys Ala Gln He Leu Gln Gly Cys Ala Lys 340 345 350 Gln Ala Leu Glu Lys Leu Glu Glu Lys Arg Thr Ser Gln Glu Asp Pro 355 360 365 Lys Glu Ser Pro Ala Met Leu Pro Thr Phe Leu Leu Met Asn Leu Leu 370 375 .,- 380 Ser Leu Ala Gly Asp Val Ala Leu Gln Gln Leu Val His Leu Glu Gln 385 390 395 400 Ala Val Ser Gly Glu Leu Cys Arg Ar-9 Arg Val Leu Arg Glu Glu Gln 405 410 415 Glu His Lys Thr Lys Asp Pro Lys Glu Lys Asn Thr Ser Ser Glu Thr 420 425 430 Thr Met Glu Glu Glu Leu Gly Leu Val Gly Ala Thr Ala Asp Asp Thr 435 " 440 445 Glu Ala Glu Leu He Arg Gly He Cys Glu Met Glu Leu Leu Asp Gly 450 455 460 Lys Gln Thr Leu Ala Ala Phe Val Pro Leu Leu Leu Lys Val Cys Asn 465 470 475 480 Asn Pro Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asp Leu Ser Ala Ala Ala Ser Leu 485 490 495 Ala Leu Gly Lys Phe Cys Met He Ser Ala Thr Phe Cys Asp Ser Gln 500 505 510 Leu Arg Leu Leu Phe Thr Met Leu Glu Lys Ser Pro Leu Pro He Val 515 520 525 Arg Ser Asn Leu Met Val Ala Thr Gly Asp Leu Ala He Arg Phe Pro 530 535 540 Asn Leu Val Asp Pro Trp Thr Pro His Leu Tyr Ala Arg Leu Arg Asp 545 550 555 560 Pro Ala Gln Gln Val Arg Lys Thr Ala Gly Leu Val Met Thr His Leu 565 570 575 He Leu Lys Asp Met Val Lys Val Lys Gly Gln Val Ser Glu Met Ala 580 585 590 Val Leu Leu He Asp Pro Glu Pro Gln He Ala Ala Leu Ala Lys Asn 595 600 605 Phe Phe Asn Glu Leu Ser His Lys Gly Asn Ala He Tyr Asn Leu Leu 610 615 620 Pro Asp lie He Ser Arg Leu Ser Asp Pro Glu 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INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:14: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 720 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:14: TAATCACCAT CTGTTTTTGT GGGATGTGCT GCAGCATTTC CCAAAAAACT TNACGTGTAA 60 TGTTGCAAAA TGAATGTACT CAGACATTNT TAATXTTTAC TTAGGGCAGA CCAACTCTTT 120 GAGTCTCTCT TGGACTTATA TATACAGATA TCTTAAGAGT GGGAATGTAA AGCATAACCT 180 AATTNTCTTT CCTATAGAGA TTCTATTTTA TTTAAAATNT ATTTNTACAC TAGTTAGAAT 240 CCTGCTGTTT TGGCCAAGTA CTTGTCTTGC ATGTCTGACC TTGCAGAAGC TGGGGTGGAT 300.

CATAGCATAC TAATGAAGAG AATTAGAAGT AGTTTACAAA GCTCGCTCAC TCCTCATTTC 360 TCTGTGATCC CTTCTATCCA GTGGCCCCAC CACCACCTGG GAAAACAGAT TTTTCAGTAC 420 AGGTGGGATA AATGCTCTGA AAGGCTGTGC CCAGAGGAAT GAGCAAATAG GCAAGTGTTT 480 CCAAACTACT TGGAGGTTTA CAAAAAATAT GTCCCAGAAA AAAAAAAAAT CTTACCAAGA 540 TACGTAAAGA AAAAAAAATT TTTTTTTAAA CAGTCAAAGA GTCATGTTTG AATTTCACAA 60C AATCACATCA GACAGAAGTT GTTTTCTTCA GGAGGGAAAT GAACCACTTA ATATACCCAT 660 ACTACCTTGA ACAATGAAAT TGAATTAAAA TAGCCAAACT TTGAAAAAAA AAAAAAAAAA 720 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:15: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1996 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi ) D ESC R I PC I Ó N D E S EC U E N C IA: SEQ I D N O : 1 5 : CAGAAGTGCA GCGGTGGCGG CGGCTGGTTG CGGGCCGGCG GCGGGCTGGC GGAGATGGAG 60 GTAACTCAGG ATCTTGTTCA AGATGGGGTG GCTTCACCAG CTACCCCTGG GACCGGGAAA 120 TCTAAGCTGG AAACATTGCC CAAAGAAGAC CTCATCAAGT TTGCCAAGAA ACAGATGATG 180 CTAATACAGA AAGCTAAATC AAGGTGTACA GAATTGGAGA AAGAAATTGA AGAACTCAGA 240 TCAAAACCTG TTACTGAAGG AACTGGTGAT ATTATTAAGG CATTAACTGA ACGTCTGGAT 300 GCTCTTCTTC TGGAAAAAGC AGAGACTGAG CAACAGTGTC TTTCTCTGAA AAAGGAAAAT 360 ATAAAAATGA AGCAAGAGGT TGAGGATTCT GTAACAAAGA TGGGAGATGC ACATAAGGAG 420 TTGGAACAAT CACATATAAA CTATGTGAAA GAAATTGAAA ATTTGAAAAA TGAGTTGATG 48 GCAGTACGTT CCAAATACAG TGAAGACAAA GCTAACTTAC AAAAGCAGCT GGAAGAACAA 5 TGAATACGCA ATTAGAACTT TCAGAACAAC TTAAATTTCA GAACAACTCT GAAGATAATG 60 TTAAAAAACT ACAAGAAGAG ATTGAGAAAA TTAGGCCAGG CTTTGAGGAG CAAATTTTAT 66 ATCTGCAAAA GCAATTAGAC GCTACCACTG ATGAAAAGAA GGAAACAGTT ACTCAACTCC 72 AAAATATCAT TGAGGCTAAT TCTCAGCATT ACCAAAAAAA TATTAATAGT TTGCAGGAAG 78 AGCTTTTACA GTTGAAAGCT ATACACCAAG AAGAGGTGAA AGAGTTGATG TGCCAGATTG 84 AAGCATCAGC TAAGGAACAT GAAGCAGAGA TAAATAAGTT GAACGAGCTA AAAGAGAACT 90 TAGTAAAACA ATGTGAGGCA AGTGAAAAGA ACATCCAGAA GAAATATGAA TGTGAGTTAG 96 AAAATTTAAG GAAAGCCACC TCAAATGCAA ACCAAGACAA TCAGATATGT TCTATTCTCT 102 TGCAAGAAAA TACATTTGTA GAACAAGTAG TAAATGAAAA AGTCAAACAC TTAGAAGATA 108 CCTTAAAAGA ACTTGAATCT CAACACAGTA TCTTAAAAGA TGAGGTAACT TATATGAATA 114 ATCTTAAGTT AAAACTTGAA ATGGATGCTC AACATATAAA GGATGAGTTT TTTCATGAAC 120 GGGAAGACTT AGAGTTTAAA ATTAATGAAT TATTACTAGC TAAAGAAGAA CAGGGCTGTG 126 TAATTGAAAA ATTAAAATCT GAGCTAGCAG GTTTAAATAA ACAGTTTTGC TATACTGTAG 132 AACAGCATAA CAGAGAAGTA CAGAGTCTTA AGGAACAACA TCAAAAAGAA ATATCAGAAC 138 TAAATGAGAC ATTTTTGTCA GATTCAGAAA AAGAAAAATT AACATTAATG TTTGAAATAC 144 AGGGTCTTAA GGAACAGTGT GAAAACCTAC AGCAAGAAAA GCAAGAAGCA ATTTTAAATT 150 ATGAGAGTTT ACGAGAGATT ATGGAAATTT TACAAACAGA ACTGGGGGAA TCTGCTGGAA 156 AAATAAGTCA AGAGTTCGAA TCAATGAAGC AACAGCAAGC ATCTGATGTT CATGAACTGC 162 AGCAGAAGCT CAGAACTGCT TTTACTGAAA AAGATGCCCT TCTCGAAACT GTGAATCGCC 168 TCCAGGGAGA AAATGAAAAG TTACTATCTC AACAAGAATT GGTACCAGAA CTTGAAAATA 174 CCATAAAGAA CCTTCAAGAA AAGAATGGAG TATACTTACT TAGTCTCAGT CAAAGAGA A 180 CCATGTTAAA AGAATTAGAA GGAAAGATAA ATTCTCTTAC TGAGGAAAAA GATGATTTTA 186 TAAATAAACT GAAAAATTCC CATGAAGAAA TGGATAATTT CCATAAGAAA TGTGAAAGGG 192 AAGAAAGATT GATTCTTGAA CTTGGGAAGA AAGTAGAGCA AACTATCCAG TACAACAGTG 1 8 AACTAGAACA AAAGGT 199 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:16: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 3642 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:16: GTCCTGCTGA AGCTCACTCA GATTCCCTCA TTGATACCTT TCCTGAGTGT AGTACGGAAG 60 GCTTCTCCAG TGACAGTGAT CTGGTATCTC TTACTGTTGA TGTGGATTCT CTTGCTGAGT 120 TAGATGATGG AATGGCTTCC AATCAAAATT CTCCCATTAG AACTTTTGGT CTCAATCTTT 180 CTTCGGATTC TTCAGCACTA GGGGCTGTTG CTTCTGACAG TGAACAGAGC AAAACAGAAG - 240 AAGAACGGGA AAGTCGTAGC CTCTTTCCTG GCAGTTTAAA GCCGAAGCTT GGCAAGAGAG 30? ATTATTTGGA GAAAGCAGGA GAATTAATAA AGCTGGCTTT AAAAAAGGAA GAAGAAGACG 360 ACTATGAAGC TGCTTCTGAT TTTTATAGGA AGGGAGTTGA TTTACTCCTA GAAGGTGTTC 420 AAGGAGAGTC AAGCCCTACC CGTCGAGAAG CTGTGAAGAG AAGAACAGCC GAGTACCTCA 480 TGCGGGCAGA AAGTATCTCT AGTCTTTATG GGAAACCTCA GCTTGATGAT GTATCTCAGC 540 CTCCAGGATC ACTAAGTTCA AGGCCCCTTT GGAACC AAG GAGCCCTGCC GAGGAGCTGA 600 AGGCCTTCAG AGTCCTTGGG GTGATTGACA AGGTTTTACT TGTAATGGAC ACAAGGACAG 660 AACACACTTT CATTTTAANA GGTCTAAGGA AAAGCAGTGA ATACAGCAGG AACAGAAAGA 720 CCATCCNCCC CCGCTGTGTG CCCANCATGG TGTGTCTGCA TAAGTACATC ATCTCTGAAG 780 AGTCANTATT TCTTGTGCTG CAGCATGCGG AANGTGGCAA ACTGTGGTCA TATATCAGTA 840 AATTTCTAAA CAGAAGTCCT GAAGAAAGCT TTGACATCAA GGAAGTGAAA AAACCTACAC 900 TTGCAAAAGT TCACCTGCAG CAGCCAACTT CTAGTCCTCA GGACAGCAGT AGCTTTGAAT 960 CCAGAGGAAG TGATGGTGGA AGCATGCTTA AAGCTCTGCC TTTGAAGAGT AGTCTTACTC 1020 CAAGTTCTCA AGATGACAGC AACCAGGAAG ATGATGGCCA AGATAGCTCT CCAAAGTGGC 1080 CAGATTCTGG TTCAAGTTCA GAAGAAGAAT GTACTACTAG TTATTTAACA TTATGCAATG 1140 AATATGGGCA AGAAAAGATT GAACCAGGGT CTTTGAATGA GGAGCCCTTC ATGAAGACTG 120 C AAGGGAATGG TGTTGATACA AAAGCTATTA AAAGCTTCCC AGCACACCTT GCTGCTGACA 1260 GTGACAGCCC CAGCACACAG CTGAGAGCTC ACGAGCTGAA GTTCTTCCCC AACGATGACC 1320 CAGAAGCAGT TAGTTCTCCA AGAACATCAG ATTCCCTCAG TAGATCAAAA AATAGCCCCA 138 C TGGAATTCTT TAGGATAGAC AGTAAGGATA GCGCAAGTGA ACTCCTGGGA CTTGACTTTG 14 4 GAGAAAAATT GTATAGTCTA AAATCAGAAC CTTTGAAACC ATTCTTTACT CTTCCAGATG 150 GAGACAGTGC TTCTAGGAGT TTTAATACTA GTGAAAGCAA GGTAGAGTTT AAAGCTCAGG 156 ACACCATTAG CAGGGGCTCA GATGACTCAG TGCCAGTTAT TTCATTTAAA GATGCTGCTT 162 TTGATGATGT CAGTGGTACT GAGAAGGAA GACCTGATCT TCTTGTAAAT TTACCTGGTG 1680 AATTGGAGTC AACAAGAGAA GCTGCAGCAA TGGGACCTAC TAAGTTTACA CAAACTAATA 170 TAGGGATAAT AGAAAATAAA CTCTTGGAAG CCCCTGATGT TTTATGCCTC AGGCTTAGTA 1800 CTGAACAATG CCAAGCACAT GAGGAGAAAG GCATAGAGGA ACTGAGTGAT CCC CTGGGC 1860 CCAAATCCTA TAGTATAACA GAGAAACACT ATGCACAGGA GGATCCCAGG ATGTTATTTG 1920 TAGCANCTGT TGATCATAGT AGTTCAGGAG ATATGTCTTT GTTACCCAGC TCAGATCCTA 1980 AGTTTCAAGG ACTTGGAGTG GTTGAGTCAN CAGTAACTGC AAACAACACA GAAGAAAGCT 2040 TATTCCGTAT TTGTAGTCCA CTCTCAGGTG CTAATGAATA TATTGCAAGC ACAGACACTT . 2100 TAAAAACAGA AGAAGTATTG CTGTTTACAG ATCAGACTGA TGATTTGGCT AAAGAGGAAC 2160 CAACTTCTTT ATTCCANAGA GACTCTGAGA CTAAGGGTGA AAGTGGTTTA GTGCTAGAAG 2220 GAGACAAGGA AATACATCAG ATTTTTGAAG GACCTTGATA AAAAATTAGC ACTANCCTCC 2280' AGGTTTTACA TCCCAGAGGG CTGCATTCAA AGNTGGGCAG CTGAAATGGT GGTAGCCCTT 2340 NGATGCTTTA ACATAGAGAG GGAATTGTGT GCCGCGATTG AACCCAAACA ANATNTTATT 24CO GAATGATAGA GGACACATTC AGNTAACGTA TTTTAGCAGG TGGAGTGAGG TTGAAGATTC 2460 CTGTGACAGC GATGCCATAG AGAGAATGTA CTGTGCCCCA GAGGTTGGAG CAATCACTGA 2520 AGAAACTGAA GCCTGTGATT GGTGGAGTTT GGGTGCTGTC CTCTTTGAAC TTNTCACTGG 2580 CAAGACTCTG GTTGAATGCC ATCCAGCAGG AATAAATACT CACACTACTT TGAACATGCC 2640 AGAATGTGTC TCTGAAGAGG CTCGCTCACT CATTCAACAG CTCTTGCAGT TCAATCCTCT 2700 GGAACGACTT GGTGCTGGAG TTGCTGGTGT TGAAGATATC AAATCTCATC CATTTTTTAC 2760 CCCTGTGGAT TGGGCAGAAC TGATGAGATG AACGTAATGC AGGGTTATCT TCACACATTC 2820 TGATCTTCTC TGTGACAGGC ATCTCCAGCA CTGAGGCACC TCTGACTCAC AGTTACTTAT 2880 GGAGCACCAA AGCATTTGGA TAAGGACCGT TATAGGAAAT GGGGGGGAAA TGGCTAAAAG 29 0 AGAACAATTT GTTTACAATT ACAAGATATT AGCTAATTGT GCCAGGGGCT GTTATATACA 3000 TATATACACA ACCAAGGTGT GATCTGAATT TAATCCACAT TTGGTGTTGC AGATGAGTTG 3060 TAAAGCCAAC TGAAAGAGTT CCTTCAAGAA GTTCCTCTGA TAGGAAGCTA GAAGTG AGA 3120 ATGAAGTTTT ACTTGACAGA AGGACCTTTA CATGGCAGCT AACAGTGCTT TTTGCTGACC 3180 AGGATTGGTT TATATGATTA AATTAATATT TGCTTAATAA TACACTAAAA GTATATGAAC 3240 AATGTCATCA ATGAAACTTA AAAGCGAGAA AAAAGAATAT ACACATAATT TCTGACGGAA 330 AACCTGTACC CTGATGCTGT ATAATGTATG TTGAATGTGG TCCCAGATTA TTTCTGTAAG 336C AAGACACTCC ATGTTGTCAG CTTTGTACTC TTTGTTGATA CTGCTTATTT AGAGAAGGGT 3420 TCATATAAAC ACTCACTCTG TGTCTTCAAC AGCATCTTTC TTTCCCCATC TTTCTATTTT 3480 CTGCACCCTC TGCTTGTTCC CTCATATTCT GTTCTTCCGA CTCCTGCTAA CACACATGCA 3540 ACAAAAAAGG GAAGGGAGTG CTTATTTCCC TTTGTGTAAG GACTAAGAAA TCATGATATC 3600 AAATAAACAT GGTGAAACAT TNANAAAAAA AAAAAAAAAA AA 3642 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:17: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1397 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:17: GTTCAACTCA ATAGAAGATG ACGTTTGCCA GCTAGTGTAT GTGGAAAGAG CTGAAGTGCT 60 CAAATCTGAA GATGGCGCCA GCCTCCCAGT GATGGACCTG ACTGAACTCC CCAAGTGCAC 120 GGTGTGTCTG GAGCGCATGG ACGAGTCTGT GAATGGCATC CTCACAACGT TATGTAACCA 180 CATCTTCCAC AGCCAGTGTC TACAGCGCTG GGACGATACC ACGTGTCCTG TTTGCCGGTA 240 CTGTCAAACG CCCGAGCCAG TAGAAGAAAA TAAGTGTTTT GAGTGTGGTG TTCAGGAAAA 300 TCTTTGGATT TGTTTAATAT GCGGCCACAT AGGATGTGGA CGGTATGTCA GTCGACATGC 360 TTATAAGCAC TTTGAGGAAA CGCAGCACAC GTATGCCATG CAGCTTACCA ACCATCGAGT 420 CTGGGACTAT GCTGGAGATA ACTATGTTCA TCGACTGGTT GCAAGTAAAA CAGATGGAAA 480 AATAGTACAG TATGAATGTG AGGGGGATAC TTGCCAGGAA GAGAAAATAG ATGCCTTACA 540 GTTAGAGTAT TCATATTTAC TAACAAGCCA GCTGGAATCT CAGCGAATCT ACTGGGAAAA 600 CAAGATAGTT CGGATAGAGA AGGACACAGC AGAGGAAATT AACAACATGA AGACCAAGTT 660 TAAAGAAACA ATTGAGAAGT GTGATAATCT AGAGCACAAA CTAAATGATC TCCTAAAAGA 720 AAAGCAGTCT GTGGAAAGAA AGTGCACTCA GCTAAACACA AAAGTGGCCA AACTCACCAA 780 CGAGCTCAAA GAGGAGCAGG AAATGAACAA GTGTTTGCGA GCCAACCAAG TCCTCCTGCA 840 GAACAAGCTA AAAGAGGAGG AGAGGGTGCT GAAGGAGACC TGTGACCAAA AAGATCTGCA 900 GATCACCGAG ATCCAGGAGC AGCTGCGTGA CGTCATGTTC TACCTGGAGA CACAGCAGAA 960 AGATCAACCA TCTGCCTGCC GAGACCCGGC AGGAAATCCA GGAGGGACAG ATCAACATCG 1020 CCATGGCCTC GGCCTCGAGC CCTGCCTCTT CGGGGGGCAG TGGGAAGTTG CCCTCCAGGA 1080 AGGGCCGCAG CAAGAGGGGC AAGTGACCTT CAGAGCAACA GACATCCCTG AGACTGTTCT 1140 CCCTGACACT GTGAGAGTGT GCTGGGACCT TCAGCTAAAT GTGAGGGTGG GCCCTAATAA 1200 GTACAAGTGA GGATCAAGCC ACAGTTGTTT GGCTCTTTCA TTTGCTAGTG TGTGATGTAG 1260 TGAATGTAAA GGGTGCTGAC TGGAGAGCTG ATAGAAAGGC GCTGCGTTCG AAAAGGTCTT 1320 AAGAGTTCAC TAACCTCACA TTCTAATGAC CANTTTGCCT TCCTGCTTGG TAGAAGCCCC 1380 ACACTCTGCT GTGCATT 1397 ) I N FO R MA C I Ó N PA RA SEQ I D N O : 1 8 : (i) CA RACTE R ÍST I CAS D E S EC U E N C IA : (A) LO N G I TU D : 800 pa res de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:18: CGGTAATTGA GCANACTTAA AATAAGACCT GTGTTGGAAT TTAGTTTCCT CTGAAGAGGT 60 AGAGGGATAG GTTAGTAAGA TGTATTGTTA AACAACAGGT TTTAGTTTTT GCTTTTATAA 120 TTAGCCACAG GTTTTCAAAT GATCACATTT CAGAATAGGT TTTTAGCCTG TAATTAGGCC 180 TCATCCCCTT TGACCTAAAT GTCTTACATG TTACTTGTTA GCACATCAAC TGTATCACTA 240 ATCACCATCT GNTTTTGTGG GATGTGCTGC AGCATTTCCC AAAAAACTTT ACGTGTAATG 300 TTGCAAAATG AATGTACTCA GACATTCTTA ATTTTTACTT AGGGCAGACC AACTCTTTGA 360 GTCTCTCTTG GACTTATATA TACAGATATC TTAAGAGTGG GAATGTAAAG CATAACCTAA 420 TTCTCTTTCC TATAGAGATT CTATTTTATT TAAAATCTAT TTTTACACTA GTTAGAATCC 480 TGCTGTTTTG GCCAAGTACT TGTCTTGCAT GTCTGACCTT GCAGAAGCTG GGGTGGATCA 540 TAGCATACTA ATGAAGAGAA TTAGAAGTAG TTTACAAAGC TCGCTCACTC CTCATTTCTC 600 TGTGATCCCT TCTATCCAGT GGCCCCACCA CCACCTGGGA AAACAGATTT TTCAGTACAG 660 GTGGGATAAA TGCTCTGAAA GGCTGTGCCC AGAGGAATGA GCAAATAGGC AAGTGTTTCC 720 AAACTACTTG GAGGTTTACA AAAAATATGT CCCAGAAAAA AAAAAAATCT TACCAAGATA 780 CGTAAAAAAA AAAAAAAAAA 800 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:19: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1810 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:19: GCAGCTCCCA GGTGCGTGTT AAñAGCTGGA GGGGGGATAT GTGATCCCAG GACCAAAAGC 60 GCGGGGCCAG ACTCATCGGT TCATTCAACA ACCAGTATTT AGTGCCTGCT GTGTTCTGCA 120 GGCCCTGCCA TAGGCGCTTG ATACAGCGGT GCATAGCGTA TGAAAAAGAT CTGTCCTGGC 180 TGAGCATCCG TAATATAAAA ATCTGAAATC TGAAATGCTC CAAAATCCTA AACTTTTTGA 24 GTGCTGACAT TATGCCACAA ATGGAAAATT TCATACCTGA CCTTATGTGG GTTGCANTCA 300 AAACACAGGT GCACAACACC CAGTTCATGC AACATCCCCA ATGGGAAAAA AGACCCCCCC 36 AGCTCTCTTC TGCTGCAGTT TTTCTGCTCA CACCTGGATT TCCCCATGCA TTCCCACAAA 42 AAGTAATTAA ATGGCATGCG TGCAGGCTGG ACACGCCAAC AACAGGTTTC CCACAATGCC " 48 CCACATGGGG CCAAGACCTG TGTGCATTAC TCATTGCATT TTTTTGCTTA TTCTCTGCTG 54 TGTGGTATAA ATATATTGTT GAAAATGTCA AAAAGACCTA AAGATACCCC TGTGAATATC 60 AGTGATAAGA AAAAGAGGAA GCATTTATGT TTATCTATAG CACAGAAAGT CAAGTTGTTG 66 GAGAAACTGG ACAGTGGTGT AAGTGTGAAA CATCTTACAG AAGAGTATGG TGTTGGAATG 72 ACCACCATAT ATGACCTGAA GAAACAGAAG GATAAACTGT TGAAGTTTTA TGCTGAAAGT 78 GATGAGCAGA TATTAATGAA AAATAGAAAA ACACTTCATA AAGCTAAAAA TGAAGATCTT 84 GATCGTGTAT TGAAAGAGTG GATCCGTCAG CGTCGCAGTG AACACATGCC ACTTAATGGT 90 ATGCTGATCA TGAAACAAGC AAAGATATAT CACAATGAAC TAAAAATTGA GGGGAACTGT 96 GAATATTCAA CAGGCTGGTT GCAGAAATTT AAGAAAAGAC ATGGCATTAA ATTTTTAAAG 102 ACTTGTGGCA ATAAAGCATC TGCTGGTCAT GAAGCAACAG AGAAGTTTAC TGGCAATTTC 108 AGTAATGATG ATGAACAAGA TGGTAACTTT GAAGGATTCA NTATGTCAAG TGAGAAAAAA 114 ATAATGTCTG ACCTCCTTAC ATATACAAAA AATATACATC CAGAGACTGT CAGTAAGCTG 120 GAAGAAGAGG ATATCTTTNA TGTTTTTAAC AGTAATAATG AGGCTCCAGT TGTTCATTCA 126 TTGTCCAATG GTGAAGTAAC AAAAATGGTT CTGAATCAAG ATGATCATGA TGATAATGAT ' 132 AATGAAGATG ATGTTAACAC TGCAGAAAAA GTGCCTATAG ACGACATGGT AAAAATGTGT 138 GATGGGCTTA TTAAAGGACT AGAGCAGCAT GCATTCATAA CAGAGCAAGA AATCATGTCA 144 GTTTATAAAA TCAAAGAGAG ACTTCTAAGA CAAAAAGCAT CATTAATGAG GCAGATGACT 150 CTGAAAGAAA CÁTTTAAAAA AGCCATCCAG AGGAATGCTT CTTCCTCTCT ACAGGACCCA 156 CTTCTTGGTC CCTCAACTGC TTCTGATGCT TCTTCTCACC TAAAAATAAA ATAAAA ACA 162 GTGTACAG A ACCTTTTAGT CAAAACAGCA TCATACTTGG AAACTGAAAG CCTACTGTTA 168 TTTGTTATTG TTGCTTAACA GCTGATACAG GTATTCTGGT GACACTACTG TGCTGGCT A 174 CTTAACCTGA ATACACTATT TTTTTCGTTG TAAAAAAAAA AAAAAAANAA NAAAAAAAAA 180 AAAAAANANA 181 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:20: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 70 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:20: Ala Arg Glu Gly Gly Lys Met Val Leu Glu Ser Thr Met Val Cys Val 5 10 15 Asp Asn Ser Glu Tyr Met Arg Asn Gly Asp Phe Leu Pro Thr Arg Leu 20 25 30 Gln Ala Gln Gln Asp Ala Val Asn He Xaa Cys His Ser Lys Thr Arg 35 40 45 Ser Asn Pro Glu Asn Asn Val Gly Leu He Thr Leu Ala Asn Asp Cys 50 55 60 Glu Val Leu Thr Thr Leu 65 70 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:21: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 100 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:21: Ala Arg Glu Ser Thr Met Val Cys Val Asp Asn Ser Glu Tyr Met Arg 1 5 10 15 Asn Gly Asp Phe Leu Pro Thr Arg Leu Gln Ala Gln Gln Asp Ala Val 20 25 30 Asn He Val Cys His Ser Lys Thr Arg Ser Asn Pro Glu Asn Asn Val 35 40 45 Gly Leu He Thr Leu Ala Asn Asp Cys Glu Val Leu Thr Thr Leu Thr 50 55 60 Pro Asp Thr Gly Arg He Leu Ser Lys Leu His Thr Val Gln Pro Lys 65 70 75 80 Gly Lys He Thr Phe Cys Thr Gly He Arg Val Ala His Leu Ala Leu 85 90 95 Lys His Arg Gln 100 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:22: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 214 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:22: CGGCACGAGA AGGTGGCAAG ATGGTGTTGG AAAGCACTAT GGTGTGTGTG GACAACAGTG 60 AGTATATGCG GAATGGAGAC TTCTTACCCA CCAGGCTGCA GGCCCAGCAG GATGCTGTCA 120 ACATANTTTG TCATTCAAAG ACCCGCAGCA ACCCTGAGAA CAACGTGGGC CTTATCACAC 180 TGGCTAATGA CTGTGAAGTG CTGACCACAC TCAC 214 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:23: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 375 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal ' (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:23: TATGGACACA TTTGAGCCAG CCAAGGAGGA GGATGATTAC GACGTGATGC AGGACCCCGA 60 GTTCCTTCAG AGTGTCCTAG AGAACCTCCC AGGTGTGGAT CCCAACAATG AAGCCATTCG 120 AAATGNTATG GGCTCCCTGG CCTCCCAGGC CACCAAGGAC GGCAAGAAGG ACAAGAAGGA 180 GGAAGACAAG AAGTGAGACT GGAGGGAAAG GGTAGCTGAG TCTGCTTAGG GGACTGCATG 240 GGAAGCACGG AATATAGGGT TAGATGTGTG TTATCTGTAA CCATTACAGC CTAAATAAAG 300 CTTGGCAACT TTTTAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 360 AAAAAAAAAC TCGAG 375 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:24: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 304 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:24 CGGCACGAGA AAGCACTATG GTGTGTGTGG ACAACAGTGA GTATATGCGG AATGGAGACT 60 TCTTACCCAC CAGGCTGCAG GCCCAGCAGG ATGCTGTCAA CATAGTTTGT CATTCAAAGA 120 CCCGCAGCAA CCCTGAGAAC AACGTGGGCC TTATCACACT GGCTAATGAC TGTGAAGTGC 180 TGACCACACT CACCCCAGAC ACTGGCCGTA TCCTGTCCAA GCTACATACT GTCCAACCCA 240 AGGGCAAGAT CACCTTCTGC ACGGGCATCC GCGTTGCCCA TCTGGCTCTG AAGCACCGAC 300 AAGG 3C4 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.25: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 22 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:25: Val Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly Val Gly Gly 1 5 10 15 Arg Cys Gly Gly Gly Gly 20 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:26: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 78 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:26: Ala Arg Ala Ala Arg Ala Lys Ala Gln Ala Leu He Gln Asn Leu Ser 1 5 10 15 Leu Leu Leu Val Asp Ala Ser Val Gly Thr He Gln Cys Leu Glu Glu 20 25 30 He Leu Cys Glu Phe Val Gln Lys Asp Glu Leu Lys Pro Ala Val Thr 35 40 45 Xaa Leu Leu Trp Glu Arg Ala Thr Glu Lys Val Ala Cys Cys Pro Leu 50 55 60 Glu Arg Cys Ser Ser Val Met Leu Leu Gly Met Met Ala Arg 65 70 75 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO.27 (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA.

(A) LONG ITU D: 384 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE H I LO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRI PCIÓN DE SECU EN CIA: SEQ I D NO:27: Lys Met Val Leu Glu Ser Thr Met Val Cys Val Asp Asn Ser Glu Tyr 1 5 10 15 Met Arg Asn Gly Asp Phe Leu Pro Thr Arg Leu Gln Ala Gln Gln Asp 25 30 Ala Val Asn He Val Cys His Ser Lys Thr Arg Ser Asn Pro Glu Asn 35 40 45 Asn Val Gly Leu He Thr Leu Ala Asn Asp Cys Glu Val Leu Thr Thr 50 55 60 Leu Thr Pro Asp Thr Gly Arg He Leu Ser Lys Leu His Thr Val Gln 65 70 75 80 Pro Lys Gly Lys He Thr Phe Cys Thr Gly He Arg Val Ala His Leu 85 90 95 Ala Leu Lys His Arg Gln Gly Lys Asn His Lys Met Arg He He Ala 100 105 110 Phe Val Gly Ser Pro Val Glu Asp Asn Glu Lys ASD Leu Val Lys Leu 115 120 " 125 Ala Lys Arg Leu Lys Lys Glu Lys Val Asn Val Aso He He Asn Phe 130 135 140 Gly Glu Glu Glu Val Asn Thr Glu Lys Leu Thr Ala Phe Val Asn Thr 145 150 155 160 Leu Asn Gly Lys Asp Gly Thr Gly Ser His Leu Val Thr Val Pro Pro 165 170 175 Gly Pro Ser Leu Ala Asp Aia Leu He Ser Ser Pro He Leu Ala Gly 180 185 190 Glu Gly Gly Ala Met Leu Gly Leu Gly Ala Ser Aso Phe Glu Phe Gly 195 200 * 205 Val Asp Pro Ser Ala Asp Pro Glu Leu Ala Leu Ala Leu Arg Val Ser 210 215 220 Met Glu Glu Gln Arg Gln Arg Gln Glu Glu Glu Ala Arg Arg Ala Ala 225 230 235 240 Ala Ala Ser Ala Ala Glu Ala Gly He Ala Thr Thr Gly Thr Glu Asp 245 250 255 Ser Asp Asp Ala Leu Leu Lys Met Thr He Ser Gln Gln Glu Phe Gly 260 265 270 Arg Thr Gly Leu Pro Asp Leu Ser Ser Met Thr Glu Glu Glu Gln He 275 280 285 Ala Tyr Ala Met Gln Met Ser Leu Gln Gly Ala Glu Phe Gly Gln Ala 290 295 300 Glu Ser Ala Asp He Asp Ala Ser Ser Ala Met Asp Thr Ser Glu Pro 305 310 315 320 Ala Lys Glu Glu Asp Asp Tyr Asp Val Met Gln Asp Pro Glu Phe Leu 325 330 335 Gln Ser Val Leu Glu Asn Leu Pro Gly Val Asp Pro Asn Asn Glu Ala 340 345 350 He Arg Asn Ala Met Gly Ser Leu Pro Pro Arg Pro Pro Arg Thr Ala 355 360 365 Arg Arg Thr Arg Arg Arg Lys Thr Arg Ser Glu Thr Gly Gly Lys Gly 370 375 380 (2) .INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:28: (i) CARACTERÍSTICAS 6878 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:28: Ala Arg Asp Ala Tyr Ser Phe Ser Arg Lys He Thr Glu Ala He Gly 1 5 10 15 He He Ser Lys Met Met Tyr Glu Asn Thr Thr Thr Val Val Gln Glu 20 25 30 Val He Glu Phe Phe Val Met Val Phe Gln Phe Gly Val Pro Gln Ala 35 40 45 Leu Phe Gly Val Arg Arg Met Leu Pro Leu He Trp Ser Lys Glu Pro 50 55 60 Gly Val Arg Glu 65 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:29: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 97 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:29: Ala Arg Ala Gln Ala Leu Phe Gly Val Arg Arg Met Leu Pro Leu He 1 5 10 15 Trp Ser Lys Glu Pro Gly Val Arg Glu Ala Val Leu Asn Ala Tyr Arg 20 25 30 Gln Leu Tyr Leu Asn Pro Lys Gly Asp Ser Ala Arg Ala Lys Ala Gln 35 40 45 Ala Leu He Gln Asn Leu Ser Leu Leu Leu Val Asp Ala Ser Val Gly 50 55 60 Thr He Gln Cys Leu Glu Glu He Leu Cys Glu Phe Val Gln Lys Asp 65 70 75 80 Glu Leu Lys Pro Ala Val Thr Gln Leu Leu Trp Glu Pro Ala Thr Glu 85 90 95 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:30: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 116 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:30: Ala Arg Ala Thr Thr Ala Phe Gly Cys Arg He Trp Asn Pro Cys Ala 1 5 10 15 Ala Leu Thr Met Lys Gln Ser Ser Asn Val Pro Ala Phe Leu Ser Lys 20 25 30 Leu Trp Thr Leu Val Glu Glu Thr His Thr Asn Glu Phe He Thr Trp 35 40 ' 45 Ser Gln Asn Gly Gln Ser Phe Leu Val Leu Asp Glu Gln Arg Phe Ala 50 55 60 Lys Glu He Leu Pro Lys Tyr Phe Lys His Asn Asn Met Ala Ser Phe 65 70 75 80 Val Arg Gln Leu Asn Met Tyr Gly Phe Arg Lys Val He His He Asp 85 90 95 Ser Gly He Val Lys Gln Glu Arg Asp Gly Pro Val Glu Phe Gln His 100 105 no Pro. Tyr Phe Gln 115 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:31: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 124 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:31 Ala Arg Gly Ala Thr Cys Glu Arg Cys Lys Gly Gly Phe Ala Pro Ala 1 5 10 15 Glu Lys He Val Asn Ser Asn Gly Glu Leu Tyr His Glu Gln Cys Phe 20 25 30 Val Cys Ala Gln Cys Phe Gln Gln Phe Pro Glu Gly Leu Phe Tyr Glu 35 40 45 Phe Glu Gly Arg Lys Tyr Cys Glu His Asp Phe Gln Met Leu Phe Ala 50 55 60 Pro Cys Cys His Gln Cys Gly Glu Phe He He Gly Arg Val He Lys 65 70 75 80 Ala Met Asn Asn Ser Trp His Pro Glu Cys Phe Arg Cys Asp Leu Cys 85 90 95 Gln Glu Val Leu Ala Asp He Gly Phe Val Lys Asn Ala Gly Arg His 100 105 110 Leu Cys Arg Pro Cys His Asn Arg Glu Lys Ala Arg 115 120 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:32: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 768 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:32: TACGAGGAGG AGGAGGAGGA GGCCCCGGAG GAGGAGGCGT TGGAGGTCGA TGCGGAGGCG 60 GAGGATGAGG AGGCCGAGGC GCCGGAGGAG GCCGAGGCGC CGGAGCAGGA GGAGGCCGGC 120 CGGAGGCGGC ATGAGACGAG CGTGGCGGCC GCGGCTGCTC GGGGCCGCGC TGGTTGCCCA 180 TTGACAGCGG CGTCTGCAGC TCGCTTCAAG ATGGtCGCTT GGCTCGCATT CATTTTCTGC 240 TGAACGACTT TTAACTTTCA TTGTCTTTTC CGCCCGCTTC GATCGCCTCG CGCCGGCTGC 300 TCTTTCCGGG ATTTTTTATC AAGCAGAAAT GCATCGAACA ACGAGAATCA AGATCACTGA 360 GCTAAATCCC CACCTGATGT GTGTGCTTTG TGGAGGGTAC TTCATTGATG CCACAACCAT 420 AATAGAATGT CTACATTCCT TCTGTAAAAC GTGTATTGTT CGTTACCTGG AGACCAGCAA 480 GTATTGTCCT ATTTGTGATG TCCAAGTTCA CAAGACCAGA CCACTACTGA ATATAAGGTC 540 AGATAAAACT CTCCAAGATA TTGTATACAA ATTAGTTCCA GGGCTTTTCA AAAATGAAAT 600 GAAGAGAAGA AGGGATTTTT ATGCAGCTCA TCCTTCTGCT GATGCTGCCA ATGGCTCTAA 669 TGAAGATNGA GGAGAGGTTG CAGATGAAGA TAAGAGAATT ATAACTGATG ATGAGATAAT 720 AAGCTTATCC ATTGAATTCT TTGACCAGAA CAGATTGGAT CGGAAAGT 768 (2) I N FO RMACIÓN PARA SEQ I D NO:33: (i) CARACTER ÍSTICAS DE SECU ENCIA: (A) LONG ITU D: 642 pares de base (B) TI PO: ácido nucleico (C) FORMA DE H I LO: sencillo (D) TOPOLOG ÍA: lineal (xi) DESCR I PC IÓ N DE SECU ENC IA: SEQ I D NO: 33 : TTTAAATAAA CCAGCAGGTT GCTAAAAGAA GGCATTTTAT CTAAAGTTAT TTTAATAGGT 60 GGTATAGCAG TAATTTTAAA TTTAAGAGTT GCTTTTACAG TTAACAATGG AATATGCCTT 120 CTCTGCTATG TCTGAAAATA GAAGNTATTT ATTATGAGCT TNTACAGGTA TTTTTAAATA 180 GAGCAAGCAT GTTGAATTTA AAATATGAAT AACCCCACCC AACAATTTTC AGTTTATTTT 2 0 TTGCTTTGGT CGAACTTGGT GTGTGTTCAT CACCCATCAG TTATTTGTGA GGGTGTTTAT 300 TCTATATGAA TATTGTTTCA TGTTTGTATG GGAAAATTGT AGCTAAACAT TTCATTGTCC 360 CCAGTCTGCA AAAGAAGCAC AATTCTATTG CTTTGTCTTG CTTATAGTCA TTAAATCATT 20 ACTTTTACAT ATATTGCTGT TACTTCTGCT TTCTTTAAAA ATATAGTAAA GGATGTTTTA 480 TGAAGTCACA AGATACATAT ATTTTTATTT TGACCTAAAT TTGTACAGTC CCATTGTAAG 540 TGTTGTTTCT AATTATAGAT GTAAAATGAA ATTTCATTTG TAATTGGAAA AAATCCAATA 600 AAAAGGATAT TCATTTAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 642 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:34: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 236 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:34 CGGCACGAGC TGCCAGAGCC AAGGCCCAGG CTTTGATTCA GAATCTCTCT CTGCTGCTAG 60 TGGATGCCTC GGTTGGGACC ATTCAGTGTC TTGAGGAAAT TCTCTGTGAG TTTGTGCAGA 120 AGGATGAGTT GAAACCAGCA GTGACCCANC TGCTGTGGGA GCGGGCCACC GAGAAAGTCG 180 CCTGCTGTCC TCTGGAACGC TGTTCCTCTG TCATGCTTCT TGGCATGATG GCACGA 236 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:35: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 333 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: serreNlo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:35: CCGGGCGTAT TGGCGTGCGC CTGTAATCCC AGCTAACTCA AGAGGCTGAG GCAGGAGAAT 60 CGCCTGAACC CAGAGGCGGA GGTTGTAGTG AGCCGAAATC ACACCATTGC ACTCCAGCTT 120 GGGCAACAAT AGCGAACCTC CATCTCAAAT TAAAAAAAAA AATGCCTACA CGCTCTTTAA 180 AATGCAAGGC TTTCTCTTAA ATTAGCCTAA CTGAACTGCG TTGAGCTGCT TCAACTTTGG 240 AATATATGTT TGCCAATCTC CTTGTTTTCT AATGAATAAA TGTTTTTATA TACTTTTAGA 300 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAACTC GAG 333 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:36: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1272 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:36: GCAAGATGGT GTTGGAAAGC ACTATGGTGT GTGTGGACAA CAGTGAGTAT ATGCGGAATG 60 GAGACTTCTT ACCCACCAGG CTGCAGGCCC AGCAGGATGC TGTCAACATA GTTTGTCATT 120 CAAAGACCCG CAGCAACCCT GAGAACAACG TGGGCCTTAT CACACTGGCT AATGACTGTG 180 AAGTGCTGAC CACACTCACC CCAGACACTG GCCGTATCCT GTCCAAGCTA CATACTGTCC 240 AACCCAAGGG CAAGATCACC TTCTGCACGG GCATCCGCGT GGCCCATCTG GCTCTGAAGC 300 ACCGACAAGG CAAGAATCAC AAGATGCGCA TCATTGCCTT TGTGGGAAGC CCAGTGGAGG 360 ACAATGAGAA GGATCTGGTG AAACTGGCTA AACGCCTCAA GAAGGAGAAA GTAAATGTTG 420 ACATTATCAA TTTTGGGGAA GAGGAGGTGA ACACAGAAAA GCTGACAGCC TTTGTAAACA 480 CGTTGAATGG CAAAGATGGA ACCGGTTCTC ATCTGGTGAC AGTGCCTCCT GGGCCCAGTT 540 TGGCTGATGC TCTCATCAGT TCTCCGATTT TGGCTGGTGA AGGTGGTGCC ATGCTGGGTC 600 TTGGTGCCAG TGACTTTGAA TTTGGAGTAG ATCCCAGTGC TGATCCTGAG CTGGCCTTGG 66Q CCCTTCGTGT ATCTATGGAA GAGCAGCGGC AGCGGCAGGA GGAGGAGGCC CGGCGGGCAG 720 CTGCAGCTTC TGCTGCTGAG GCCGGGATTG CTACGACTGG GACTGAAGAC TCAGACGATG 780 CCCTGCTGAA GATGACCATC AGCCAGCAAG AGTTTGGCCG CACTGGGCTT CCTGACCTAA 840 GCAGTATGAC TGAGGAAGAG CAGATTGCTT ATGCCATGCA GATGTCCCTG CAGGGAGCAG 900 AGTTTGGCCA GGCGGAATCA GCAGACATTG ATGCCAGCTC AGCTATGGAC ACATCTGAGC 960 CAGCCAAGGA GGAGGATGAT TACGACGTGA TGCAGGACCC CGAGTTCCTT CAGAGTGTCC 1020 TAGAGAACCT CCCAGGTGTG GATCCCAACA ATGAAGCCAT TCGAAATGCT ATGGGCTCCC 1080 TGCCTCCCAG GCCACCAAGG ACGGCAAGAA GGACAAGAAG GAGGAAGACA AGAAGTGAGA 11 0 CTGGAGGGAA AGGGTAGCTG AGTCTGCTTA GGGGACTGCA TGGGAAGCAC GGAATATAGG 1200 GTTAGATGTG TGTTATCTGT AACCATTACA GCCTAAATAA AGCTTGGCAA CTTTTAAAAA 1260 AAAAAAAAAA AA 1272 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:37: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 206 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:37 CGGCACGAGA TGCCTACAGC TTCTCCCGGA AGATTACAGA GGCCATTGGC ATCATCAGCA 60 AGATGATGTA TGAAAACACA ACTACAGTGG TGCAGGAGGT GATTGAATTC TTTGTGATGG 120 TCTTCCAATT TGGGGTACCC CAGGCCCTGT TTGGGGTGCG CCGTATGCTG CCTCTCATCT 180 GGTCTAAGGA GCCTGGTGTC CGGGAA 206 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:38: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 341 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:38: TACTAAAAAT AAAAAATTAG CCGGGCGTAT TGGCGTGCGC CTGTAATCCC AGCTACTCAA 60 GAGGCTGAGG CAGGAGAATC GCCTGAACCC AGAGGCGGAG GTTGTAGTGA GCCGAAATCA 120 CACCATTGCA CTCCAGCTTG GGCAACAATA GCGAACCTCC ATCTCAAATT AAAAAAAAAA 180 TGCCTACACG CTCTTTAAAA TGCAAGGCTT TCTCTTAAAT TAGCCTAACT GAACTGCGTT 240 GAGCTGCTTC AACTTTGGAA TATATGTTTG CCAATCTCCT TGTTTTCTAA TGAATAAATG 300 TTTTTATATA CTTTTAANGA GAGAAAAAAA ANAAACTCGA G 341 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:39: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 293 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:39: CGGCACGAGC CCAGGCCCTG TTTGGGGTGC GCCGTATGCT GCCTCTCATC TGGTCTAAGG 6C AGCCTGGTGT CCGGGAAGCC GTGCTTAATG CCTACCGCCA ACTCTACCTC AACCCCAAAG 120 GGGACTCTGC CAGAGCCAAG GCCCAGGCTT TGATTCAGAA TCTCTCTCTG CTGCTAGTGG 180 ATGCCTCGGT TGGGACCATT CAGTGTCTTG AGGAAATTCT CTGTGAGTTT GTGCAGAAGG 240 ATGAGTTGAA ACCAGCAGTG ACCCAGCTGC TGTGGGAACC GGCCACCGAG AAA 293 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:40: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 350 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:40: CGGCACGAGC TACCACCGCG TTCGGGTGTA GAATTTGGAA TCCCTGCGCC GCGTTAACAA 60 TGAAGCAGAG TTCGAACGTG CCGGCTTTCC TCAGCAAGCT GTGGACGCTT GTGGAGGAAA 120 CCCACACTAA CGAGTTCATC ACCTGGAGCC AGAATGGCCA AAGTTTTCTG GTCTTGGATG 180 AGCAACGATT TGC-AAAA8AA ATTCTTCCCA AATATTTCAA GCACAATAAT ATGGCAAGCT 2 0 TTGTGAGGCA ACTGAATATG TATGGTTTCC GTAAAGTAAT ACATATCGAC TCTGGAATTG 300 TTAAGCAAGA AAGAGATGGT CCTGTAGAAT TTCAGCATCC TTACTTCCAA 350 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO-41: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 377 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal §9 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:41: TCCTAAAGCT TTCTCTGCTC CAGTTATTTT TATTAAATAT TTTTCACTTG GCTTATTTTT 60 AAAACTGGGA ACATAAAGTG CCTGTATCTT GTAAAACTTC ATTTGTTTCT TTTGGTTCAG 120 AGAAGTTCAT TTATGTTCAA AGACGTTTAT TCATGTTCAA CAGGAAAGAC AAAGTGTACG 180 TGAATGCTCG CTGTCTGATA GGGTTCCAGC TCCATATATA TAGAAAGATC GGGGGTGGGA 240 TGGGATGGAG TGAGCCCCAT CCAGTTAGTT GGACTAGTTT TAAATAAAGG TTTTCCGGTT 300 TGTGTTTTTT TGAACCATAC TGTTTAGTAA AATAAATACA ATGAATGTTG NAAAAAAAAA 360 AAAAAAAAAA ACTCGAG 377 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:42: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 374 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:42: CGGCACGAGG CGCCACTTGC GAGCGCTGCA AGGGCGGCTT TGCGCCCGCT GAGAAGATCG 60 TGAACAGTAA TGGGGAGCTG TACCATGAGC AGTGTTTCGT GTGCGCTCAG TGCTTCCAGC 120 AGTTCCCAGA AGGACTCTTC TATGAGTTTG AAGGAAGAAA GTACTGTGAA CATGACTTTC 180 AGATGCTCTT TGCCCCTTGC TGTCATCAGT GTGGTGAATT CATCATTGGC CGAGTTATCA 240 AAGCCATGAA TAACAGCTGG CATCCGGAGT GCTTCCGCTG TGACCTCTGC CAGGAAGTTC 300 TGGCAGATAT CGGGTTTGTC AAGAATGCTG GGAGACACCT GTGTCGCCCC TGTCATAATC 360 GTGAGAAAGC CAGA 374 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:43: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONG ITU D: 492 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico -' (C) FORMA DE H ILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRI PCIÓN DE SECUENCIA: SEQ I D NO:43: CTTTGCATTT TACAGTAAGA ATCAAAGTCC CTTCAGTGTG CCTTTGTCAG CTAATATGTG 60 ACCAGCAATG ACAACCTTGG GAGTATTTAT TAAATATTAT GCTATGAATA TAGGCAACAC 120 AGAACAGGGT TTGCAGTATA GCGTCTTGAT GCTAAATTCT CATATACCTC TACACGAGAA 180 ATATGGAGGA GAAAAACAAG CATTTACATA TATTCTTCGT CACTTTGAAG ATGCATGACC 240 TGAACTCGAC TGCTTGTGTT TGTTTACATA TCAGGCATAC CCAGGCATCT CCTGCAGCCA 300 GAGGTTCCAT TGCTGTCTTT GCTCAGTCCT CTTTTAAAAT ATGAATTAGT GGACAGGCAC 360 GGTGCCTCAC ACCTGTAATC CCAGCACTTT GGGAGGTCGA GGCAGGTGGA TCACGAGGTC 420 AGGAGATCAA GACCATCCTG GCTACCACTG AAACCCCATC TCTACTACAA AAAAAAAAAA 480 AAAAAACTCG AG 492 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:44: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:44: Ser Gln He Cys Glu Leu Val Ala His Glu Thr He Ser Phe Leu 1 5 10 15 (2) I N FO R MAC IÓN PARA S EQ I D NO :45 : (i) CARACTER ÍSTICAS D E SEC U ENC IA : (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:45: Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser He Leu Asp Glu Val He Arg Gly Thr 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:46: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:46: Val Val Lys Thr Tyr Leu He Ser Ser He Pro Gln Gly Ala Phe Asn 1 5 10 15 Tyr Lys Tyr Thr Ala 20 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:47: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:47: Val Val Lys Thr Tyr Leu He Ser Ser He Pro Leu Gln Ala Phe Asn 1 5 10 15 Tyr Lys Tyr Thr Ala 20 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:48: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:48: Xaa Ala Lys Lys Phe Leu A=p Ala Glu His Lys Leu Asn Phe Ala 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:49: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:49: Xaa Xaa Xaa Lys He Lys Lys Phe He Gln Glu Asn He Phe Gly 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:50: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA.

(A) LONGITUD: 18 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:50: Xaa Lys Val Lys Val Gly Val Asn Gly Phe Gly Arg He Gly Arg Leu 1 5 ?o 15 Val Thr (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:51: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:51: Xaa Tyr Gln Tyr Pro Ala Leu Thr Xaa Glu Gln Lys Lys Glu Leu 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:52: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 14 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:52: Xaa Pro Ala Val Tyr Phe Lys Xaa Xaa Phe Leu Asp Xaa Asp 1 5 10 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:53: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:53: Xaa Pro Ala Val Tyr Phe Lys Glu Gln Phe Leu Asp Gly Asp Gly 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:54: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 18 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:54: Xaa Xaa Val Ala Val Leu Xaa Ala Ser Xaa Xaa He Gly Gln Pro Leu 1 5 10 15 Ser Leu (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:55: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal ' (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:55: Val Val Lys Thr Tyr Leu He Ser Xaa He Pro Leu Gln Gly Ala 1 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:56: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:56: Xaa Xaa Lys Thr Tyr Leu He Ser Ser He Pro Leu Gln Gly Ala l ' 5 10 15 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:57: (i) CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA: (A) LONGITUD: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) FORMA DE HILO: sencillo (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:57: Met Asp He Pro Gln Thr Lys Gln Asp Leu Glu Leu Pro Lys Leu 1 5 10 15

Claims (31)

1. REIVINDICACIONES 1. Un polipéptido que comprende una porción inmunogénica de una proteína de próstata que tiene una secuencia parcial seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 2, 4, 5, 6, 7 y 8 o una variante de dicha proteína que difiere únicamente de substituciones y/o modificaciones.
2. 2. Un polipéptido que comprende una porción inmunogénica de una proteína de próstata o una variante de dicha proteína que difiere únicamente en substituciones y/o modificaciones conservadoras en donde dicha proteína comprende una secuencia de aminoácidos de una porción de la misma codificada por una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste de las secuencias recitadas en SEQ ID Nos. 11 y 13-29, los complementos de dichas secuencias, y secuencias de ADN que se hibrizan a una secuencia recitada en SEQ ID Nos. 11 y 13-19, o un complemento de las mismas bajo condiciones estrictas.
3. 3. Una molécula de ADN que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2.
4. 4. Un vector de expresión que comprende la molécula de ADN de la reivindicación 3.
5. 5. Una célula huésped transformada con un vector de expresión de la reivindicación 4.
6. 6. Una célula huésped de la reivindicación 5, en donde la célula huésped se selecciona del grupo que consiste de E. coli, levadura y líneas celulares de mamíferos.
7. 7. Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2 y' un vehículo fisiológicamente aceptable.
8. 8. Una vacuna que comprende el polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2 y un mejorador de respuesta inmunoespecíf ica.
9. 9. La vacuna de la reivindicación 8, en donde el mejorador de respuesta inmune no especifica es un auxiliar.
10. 10. Una vacuna que comprende una molécula de ADN y un mejorador de respuesta inmune no específica, la molécula de ADN comprendiendo una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2.
11. 1 1 . La vacuna de la reivindicación 10, en donde el mejorador de respuesta inmune no específica es un auxiliar.
12. 12. Una composición farmacéutica para el tratam iento de cáncer de próstata que comprende un polipéptido y un vehículo fisiológicamente aceptable , el polipéptido comprendiendo una porción inmunogénica de una proteína de próstata teniendo una secuencia seleccionada del grupo que consiste de SEQ I D Nos . 1 , 3 , 20, 21 , 25-31 y 44-57.
13. 13. Una vacuna para el tratamiento de cáncer de próstata comprendiendo un polipéptido y un mejorador de respuesta inmune no específica , el polipéptido comprendiendo una porción inmunogénica de una proteína de próstata teniendo una secuencia > . 108 parcial seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 1 , 3, 20, 21 , 25-31 y 44-57.
14. 14. La vacuna de la reivindicación 13, en donde el mejorador de respuesta inmune no específico es un auxiliar. 5
15. 15. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, para usarse en la manufactura de un medicamento para inhibir el desarrollo de cáncer de próstata.
16. 16. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 8, para usarse en la manufactura de un medicamento para inhibir el desarrollo de 10 cáncer de próstata.
17. 17. U n método para detectar cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida de u n paciente con un agente de unión que es capaz de unirse al 15 polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2; y (b) detectar en una muestra una proteína o polipéptido que se une al agente de unión , detectando as í cáncer de próstata en el paciente.
18. 18. El método de la reivindicación 17, en donde el agente de 20 unión es un anticuerpo monoclonal.
19. 19. El método de la reivindicación 17, en donde el agente de unión es un anticuerpo policlonal .
20. 20. U n método para monitorear la progresión de cáncer de próstata en un paciente , comprendiendo : (a) poner en contacto la muestra biológica de un paciente con un agente de unión que es capaz -de unirse al polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2; (b) determinar en la muestra una cantidad de una proteína o polipéptido que se une al agente de unión; (c) repetir los pasos (a) y (b); y (d) comparar la cantidad de polipéptido detectada en los pasos (b) y (c) para monitorear la progresión de cáncer de próstata en el paciente.
21. 21 . Un método para detectar cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida de un paciente con un agente de unión que es capaz de unirse a un polipéptido, el polipéptido comprendiendo una porción inmunogénica de una proteína de próstata ten iendo una secuencia parcial seleccionada del grupo que consiste de SEQ I D Nos . 1 -3, 20, 21 , 25-31 o 44-57; y (b) detectar en la muestra una proteína o polipéptido que se une al agente de unión, detectando así cáncer de próstata en el paciente.
22. 22. El método de la reivindicación 21 , en donde el agente de unión es un anticuerpo monoclonal .
23. 23. El método de la reivindicación 21 , en donde el agente de unión es un anticuerpo policlonal .
24. 24. Un método para monitorear la progresión de cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida de un paciente con un agente de unión que es capaz de unirse a un polipéptido, el polipéptido comprendiendo una porción inmunogénica de una proteína de próstata teniendo una secuencia parcial seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 1, 3, 20, 21, 25-31 ó 44-57; (b) determinar en la muestra una proteína o polipéptido que se une al agente de unión; (c) repetir los pasos (a) y (b); y (d) comparar la cantidad de polipéptido detectada en los pasos (b) y (c) para monitorear la progresión de cáncer de próstata en el paciente.
25. 25. Un anticuerpo monoclonal que se une al polipéptido de las reivindicaciones 1 ó 2.
26. 26. Un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 25, para usarse en la manufactura de un medicamento para inhibir el desarrollo de cáncer de próstata.
27. 27. El anticuerpo monoclonal de la reivindicación 26, en donde el anticuerpo monoclonal se conjuga a un agente terapéutico.
28. 28. Un método para detectar cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra biológica de un paciente con por lo menos dos iniciadores de oligonucleótidos en una reacción en •K 111 cadena de polimerasa, en donde por lo menos uno de los iniciadores de oligonucleótidos es específico " para una molécula de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24 y 32-43; y 5 (b) detectar en la muestra una secuencia de ADN que se amplifica en presencia del iniciador de oligonucleótidos, detectando así cáncer de próstata.
29. 29. El método de la reivindicación 28, en donde por lo menos los iniciadores oligonucleótidos comprenden por lo menos 10 10 oligonucleótidos contiguos de una molécula de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24 y 32-43.
30. 30. Un método para detectar cáncer de próstata en un paciente, comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra biológica de un paciente con 15 por lo menos dos iniciadores de oligonucleótidos en una reacción en cadena de polimerasa, en donde por lo menos uno de los iniciadores de oligonucleótidos es específico para una molécula de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24 y 32-43; y 20 (b) detectar en la muestra una secuencia de ADN que se hibridiza a la sonda de oligonucleótidos, detectando así cáncer de próstata.
31. 31. El método de la reivindicación 30, en donde la sonda comprende por lo menos aproximadamente 15 oligonucleótidos contiguos de una molécula de ADN seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID Nos. 9-19, 22-24- 'y 32-43.