MXPA98004261A

MXPA98004261A - Composiciones terapeuticas y diagnosticas

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Publication number: MXPA98004261A
Application number: MXPA/A/1998/004261A
Authority: MX
Inventors: Panaccio Michael; Hasse Detief
Original assignee: Daratech Pty Ltd; Hasse Detlef; Panaccio Michael; Pig Research And Development Corporation
Priority date: 1995-11-30
Filing date: 1998-05-28
Publication date: 1999-07-06

Abstract

La presente invención se refiere de manera general a composiciones terapéuticas para el tratamiento y/o profilaxis de condiciones de enfermedad intestinal en animales y aves causadas o exacerbadas por Lawsonia intracellularis o similar o microorganismo reaccionado de otra manera. La presente invención también contempla método para el tratamiento y/o profilaxis de tales condiciones de enfermedad intestinal y agentes diagnósticos y procedimientos para detectar Lawsonia intracellularis o similar o microorganismo relacionado de otra manera.

Description

COMPOSICIONES TERAPÉUTICAS Y DIAGNOSTICAS La presente invención se refiere de manera general a composiciones terapéuticas para el tratamiento y/o profilaxis de condiciones de enfermedad intestinal en animales y aves causadas o exacerbadas por Lawsonia intracellularis o similar o microorganismo relacionado de otra manera. La presente invención también contempla métodos para el tratamiento y/o profilaxis de tales condiciones de enfermedad intestinal y para agentes de diagnóstico y procedimientos para detectar Lawsonia intracellularis o similar o microorganismo relacionado de otra manera. Los detalles bibliográficos de las publicaciones numéricamente referidas en esta especificación se reúnen al final de la descripción. Los Números de Identidad de Secuencia (SEQ ID Nos.) para las secuencias de nucleótidos y aminoácidos referidas en la especificación están definidas después de la bibliografía. A lo largo de esta especificación, a menos que el contexto lo requiera de otra manera, la palabra "comprende", o variaciones tales como "comprende" o "comprendiendo", se entenderá que implica la inclusión de un elemento declarado o entero o grupo de elementos o enteros, pero no la exclusión de ningún otro elemento o entero o grupo de elementos o enteros. La industria de la carne en Australia y, verdaderamente, en la mayoría de los países del mundo, es un aspecto importante de la industria ganadera global. Sin embargo, la industria de la carne está sujeta a rápidas bajas económicas en respuesta a condiciones de enfermedades que afectan a los animales así como enfermedades humanas putativamente portadas por los animales. Por lo tanto, es importante tener procedimientos de tratamiento, profilácticos y diagnósticos bien definidos disponibles para tratar infecciones o infecciones potenciales en animales y humanos. Los cerdos forman un componente principal en la industria de la carne. Sin embargo, los cerdos son sensibles a un amplio espectro de enfermedades intestinales colectivamente referidas como enteropatía proliferativa porcina (PPE). Esta enfermedad ha sido previamente conocida como complejo de adentomatosis intestinal (1 ), adenomatosis intestinal porcina (PÍA), enteritis necrótica (2), enteropatía hemorrágica proliferativa (3), ileitis regional (4), síndrome de intestinos hemorrágicos (5), enteritis proliferativa porcina y enteritis inducida por Campylobacter spp (6). Existen dos formas principales de PPE: una forma no hemorrágica representada por adenomatosis intestinal, la cual frecuentemente provoca retardación de crecimiento y diarrea suave; y una forma hemorrágica, la cual frecuentemente es fatal, representada por enteropatía hemorrágica proliferativa (PHE) donde lumen de intestino delgado distal se vuelve congestionado con sangre. La PPE ha sido reportada en un número de especies animales incluyendo cerdos (14), hámsters (7), hurones (15), conejillos de Indias (16), conejos (17) así como especies avícolas (18). El organismo provocador de PPE es un organismo similar a Campylobacter referido en la presente como "Lawsonia intracellularis" (26). El organismo también ha sido previamente referido como lleal symbiont intracellularis (7). Las enfermedades similares a PPE en cerdos también pueden ser provocadas por otros patógenos tal como varias especies de Campylobacter (8). La Lawsonia intracellularis es una bacteria intracelular, posiblemente intracelular ligado. Solo puede cultivarse in vitro con células de cultivo de tejido (9, 26). Los cerdos que sufren de PPE están caracterizados por múltiples criptas inmaduras anormales y la L. intracellularis se ubica en el citoplasma de estas células de cripta. La PPE es un importante componente de costo asociado con la industria de los cerdos, especialmente en términos de peraiaas ae auasio, costos de medicación, velocidades de crecimiento reducidas de cerdos y costos de alimentación incrementados. La PPE también contribuye a costos indirectos corriente abajo en, por ejemplo costos de trabajo adicionales y costos ambientales para tratar sobre contaminación de residuos antibióticos y para medidas de control para evitar que el organismo sea pasado o portado a otros animales o humanos. Las estrategias de control actuales para PPE dependen del uso de antibióticos. Sin embargo, tal estrategia es considerada por ser de plazo corto a medio, especialmente conforme las presiones de regulación gubernamental tienden a prácticas de manejo de animales objetivo, las cuales solo son soportadas por antibióticos profilácticos. En consecuencia, existe una necesidad para desarrollar alternativas efectivas, seguras y de bajo costo para el uso de antibióticos. Existe también una necesidad para extender esta alternativa a antibióticos para organismos similares, los cuales infectan otros animales tales como humanos.

En el trabajo que conduce a la presente invención, los inventores buscaron desarrollar vacunas para la profilaxis y tratamiento de PPE en animales y aves. Las vacunas de la presente invención proporcionan una alternativa eficaz para el uso de antibióticos con un rango de manejo consecuencial y beneficios médicos. De acuerdo a esto, un aspecto de la presente invención proporciona una composición de vacuna para la profilaxis o tratamiento de infección en un animal o ave por L. intracellularis o similar o microorganismo relacionado de otra manera, comprendiendo dicha composición de vacuna una forma inmonogénica, no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado o un componente inmunogénico del mismo y uno o más portadores, diluyentes y/o auxiliares adecuados para uso veterinario o farmacéutico. La presente invención es particularmente útil y es ejemplificada de aquí en adelante en relación a la protección y/o tratamiento de cerdos de la infección con L. intracellularis. Sin embargo, esto se hace en el entendimiento de que la presente invención se extiende a la profilaxis y tratamiento de todos los animales incluyendo humanos y aves de infección con L. intracellularis y/o microorganismos relacionados. Los animales contemplados por la presente invención incluyen, pero no están limitados a, humanos, primates, animales de compañía (por ejemplo, gatos, perros), animales de abastecimiento (por ejemplo, cerdos, borregos, ganado, caballos, burros, cabras), animales de pruebas de laboratorio (por ejemplo, ratones, ratas, conejillos de Indias, conejos) y animales salvajes cautivos (por ejemplo, canguros, zorras, venados). La presente invención también se extiende a aves tales como aves de corral, aves de caza y aves enjauladas. Adicionalmente, la presente invención se extiende a todos los aislados y sub-tipos de L. intracellularis así como también otras especies del género Lawsonia u otros microorganismos relacionados al mismo al nivel de nucleótido, bioquímico, estructural, fisiológico y/o inmunointeractivo. La referencia más adelante a "Lawsonia intracellularis" o su abreviatura "L. intracellularis", incluye todos los microorganismos similares a o relacionados de otra manera a este microorganismo. Por ejemplo, un microorganismo relacionado puede tener una similitud de secuencia de nucleótidos al nivel de cromosoma o extracromosomal de por lo menos aproximadamente 60%, más preferiblemente por lo menos aproximadamente 70% y aún más preferiblemente mayor que por lo menos 80% con respecto a toda o parte de la secuencia de nucleótidos dentro de los elementos de cromosoma o extracromosomales de L. intracellularis. Por ejemplo, estas similitudes de porcentaje puede relacionar a la secuencia expuesta en SEQ ID NO:5. Esta secuencia es una porción del cromosoma de L. intracellularis. De acuerdo a esto, este aspecto de la presente invención está dirigido a una composición de vacuna para la profilaxis y/o tratamiento de infección en un cerdo por L. intracellularis, comprendiendo dicha composición de vacuna una forma inmunogénica, no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado o un componente inmunogénico del mismo y uno o más portadores, diluyentes y/o auxiliares adecuados para uso veterinario o farmacéutico.

El término "componente inmunogénico" se refiere a L. intracellularis (en una forma no patogénica atenuada o muerta) o un componente de L. intracellularis incluyendo un péptido, polipéptido o una proteína codificada por DNA de o derivada de L. intracellularis, el cual es capaz de inducir una respuesta inmune protectora en un cerdo. Una respuesta inmune protectora puede ser al nivel humoral y/o celular y generalmente resulta en una reducción substancial en los síntomas de PPE en cerdos. Las composiciones de vacuna comprenderán una cantidad efectiva de componente inmunogénico de manera que permite la inducción de una respuesta inmune protectora. De acuerdo a este aspecto de la presente invención, se proporciona una composición de vacuna para la profilaxis y tratamiento de un cerdo por L. intracellularis, comprendiendo dicha composición de vacuna una cantidad de por lo menos un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado efectivo para inducir una respuesta inmune protectora en dicho cerdo contra L. intracellularis o microorganismo relacionado, comprendiendo además dicha composición de vacuna uno o más portadores, auxiliares y/o diluyentes adecuados para uso veterinario o farmacéutico. El componente inmunogénico puede ser un péptido, polipéptido o proteína que ocurre de manera natural, un carbohidrato, lípido o ácido nucleico (por ejemplo, DNA) o cualquier combinación de los mismos aislada de L. intracellularis o un cultivo de célula de la misma, o una forma recombinante de un péptido, polipéptido o proteína codificado por DNA de o derivado de L. intracellularis, o es un derivado de dicho péptido, polipéptido o proteína. Un componente aislado de L. intracellularis es un componente el cual ha experimentado por lo menos un paso de purificación, o el cual ha experimentado por lo menos concentración parcial de un cultivo de celda comprendiendo L. intracellularls o de una preparación Usada de células de L. intracellularis. La pureza de tal componente de L. intracellularis, el cual tiene las propiedades inmunogénicas requeridas es de preferencia por lo menos aproximadamente 40%, más preferiblemente por lo menos aproximadamente 50%, aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente 60%, todavía más preferiblemente por lo menos aproximadamente 70% y aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente 80-90% o mayor con relación a otros componentes en una preparación como es determinada por el peso molecular, actividad inmunogénica u otros medios adecuados. Una forma particularmente útil de la vacuna es una vacuna de célula completa, la cual comprende L. intracellularis en una forma atenuada o de otra manera no patogénica o células muertas o varias fracciones de las mismas. Las células atenuadas o no patogénicas incluyen células de L. intracellularis muertas preparadas, por ejemplo, mediante calentamiento, formalina u otro tratamiento químico, choque eléctrico o presión y tales células son particularmente útiles en la práctica de la presente invención.

De acuerdo a este aspecto de la presente invención, se proporciona una composición de vacuna para la profilaxis y/o tratamiento de infección en un cerdo por L. intracellularis o microorganismo relacionado, comprendiendo dicha composición de vacuna una preparación muerta de L. intracellularis o microorganismo relacionado o una fracción inmunogénica del mismo y uno o más portadores, diluyentes y/o auxiliares adecuados para uso veterinario o farmacéutico. En una modalidad alternativa, una vacuna recombinante puede ser empleada. La vacuna recombinante puede comprender uno o más péptidos, polipéptidos o proteínas recombinantes derivados de L. intracellularis o es una molecular recombinante inmunológicamente relacionada a un péptido, polipéptido o proteína derivada de L. intracellularis, o puede ser una molécula de fusión que tiene una primera porción que comprende un péptido, polipéptido o proteína derivado de L. intracellularis y segundo péptido, polipéptido o proteína heterelógo el cual puede ser útil, por ejemplo, como una molécula portadora o un auxiliar o una molécula estimulante inmune tal como citoquina. Una proteína recombinante particularmente útil de L. intracellularis comprende un péptido, polipéptido o proteína derivada de la superficie o membrana celular de L. intracellularis, es una enzima en una ruta metabólica dentro de L. intracellularis o es una proteína redoblada y/o de choque de calor. En una modalidad preferida, la proteína es una proteína redoblada/choque de calor tal como, pero no limitada a, GroEL y GroES. Otros candidatos de vacuna putativos incluyen proteína de bastoncito de cuerpo basal flagelar, S-adenosilmetionina: tRNA ribosiltransferasa-isomerasa, enoil-(acil-portador-proteína) reductasa, N-acetil muramoil-L-alanina amidasa (autolisina), UOP-3-0-[3-hidroximiristoil]glucosamina N-acetiltransferasa y un transportador de glucarato. De acuerdo con una modalidad preferida, la presente invención se refiere a una composición de vacuna para la profilaxis y/o tratamiento de infección en un cerdo mediante L. intracellularis o microorganismo relacionado, comprendiendo dicha composición de vacuna por lo menos un péptido, polipéptido o proteína recombinante de L. intracellularis y en donde dicho péptido, polipéptido o proteína recombinante es capaz de inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis en cerdos, comprendiendo además la composición de vacuna uno o más portadores, diluyentes y/o auxiliares adecuados para uso veterinaria o farmacéutico. En una modalidad particularmente preferida, la proteína recombinante es GroEL teniendo una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO:2 o es una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos predicha con por lo menos aproximadamente 40%, por lo menos aproximadamente 60%, o más preferiblemente por lo menos aproximadamente 70% y aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente 80-90% o mayor de similitud a toda o parte de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:2. En otra modalidad, la molécula recombinante es GroES teniendo una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO:4 o es una molecular que tiene una secuencia de aminoácidos por lo menos aproximadamente 40%, por lo menos aproximadamente 60%, más preferiblemente por lo menos aproximadamente 70% y aún más preferiblemente por lo menos aproximadamente 80-90% o mayor de similitud a toda o parte de la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:4. Otra modalidad de la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 1 o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:3, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:5, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:6, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:8, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 1 1 , o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 13, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 15, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 17, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 18, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO: 19, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:20, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:21 , o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:22, o que tiene por lo menos 40% de similitud a la misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. En una modalidad relacionada, la presente invención incluye y comprende un péptido, polipéptido o proteína codificado por una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO:23, o que tiene por lo menos 40% de similitud a ia misma o capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y cuya secuencia de nucleótidos codifica un componente inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado. Los porcentajes de similitudes preferidos incluyen por lo menos aproximadamente 50% o por lo menos aproximadamente 60% o por lo menos aproximadamente 70-90%. En la presente, la referencia a una severidad baja a 42°C incluye y abarca desde por lo menos aproximadamente 1 % v/v a por lo menos aproximadamente 15% v/v de formamida y desde por lo menos aproximadamente 1 M a por lo menos aproximadamente 2M de sal para hibridación, y por lo menos 1 M a por lo menos aproximadamente 2M de sal para condiciones de lavado. Condiciones de severidad alternativas pueden aplicarse donde sea necesario, tal como severidad media, la cual incluye y abarca desde por lo menos aproximadamente 16% v/v a por lo menos aproximadamente 30% v/v de formamida y desde por lo menos aproximadamente 0.5M a por lo menos aproximadamente 0.9M de sal para hidridación, y por lo menos aproximadamente 0.5M a por lo menos aproximadamente 0.9M de sal para condiciones de lavado, o severidad alta, la cual incluye y abarca desde por lo menos aproximadamente 31 % v/v a por lo menos aproximadamente 50% v/v de formamida y desde por lo menos aproximadamente 0.01 a por lo menos aproximadamente 0.15M de sal para hibridación, y por lo menos aproximadamente 0.01 M a por lo menos aproximadamente 0.15M de sal para condiciones de lavado. La presente invención también contempla péptidos, polipéptidos o proteínas que tienen una secuencia de aminoácidos substancialmente como se expone en una de las SEQ ID NO:7 o 9 o 10 o 12 o 14 o 16 o que tiene por lo menos 40% de similitud de las mismas o toda o parte de las mismas. Los porcentajes de similitudes preferidos incluyen por lo menos aproximadamente 50%, o por lo menos aproximadamente 60% o por lo menos aproximadamente 70-90%. La presente invención se extiende además a una vacuna que comprende un vector de vacuna recombinante que codifica un péptido, polipéptido o proteína derivado de L. intracellularis o microorganismo relacionado como se describió antes. El vector de vacuna puede ser de origen viral, de levadura o bacteriano y sería capaz de expresión de una secuencia genética que codifique un péptido, polipéptido o proteína de L. intracellularis en una manera efectiva para inducir una respuesta inmune protectora. Por ejemplo, una bacteria no patogénica podría ser preparada conteniendo una secuencia recombinante capaz de codificar un péptido, polipéptido o proteína de L. intracellularis. La secuencia recombinante estaría en la forma de un vector de expresión bajo el control de un promotor constitutivo o inducible. Entonces se permitiría que la bacteria colonizara ubicaciones adecuadas en una tripa de cerdo y se permitiría que creciera y produjera el péptido, polipéptido o proteína recombinante en una cantidad suficiente para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis. En una modalidad alternativa, la vacuna puede ser una vacuna de DNA comprendiendo una molécula de DNA codificando un péptido, polipéptido o proteína de L. intracelfularis y la cual es inyectada en un tejido muscular u otro tejido adecuado en un cerdo bajo condiciones suficientes para permitiré la expresión transiente de dicho DNA para producir una cantidad de péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora. Las vacunas de la presente invención pueden contener un solo péptido, polipéptido o proteína o un rango de péptidos, polipéptidos o proteínas cubriendo diferentes o similares epitopes. Además, o de manera alternativa, un solo polipéptido puede ser proporcionado con múltiples epitopes. El último tipo de vacuna es referido como una vacuna polivalente. Un epitope múltiple incluye dos o más epitopes repetitivos. La formación de vacunas generalmente es conocida en la técnica y convenientemente se puede hacer referencia a Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Co. , Easton, Pennsylvania, USA. La presente invención, por lo tanto, contempla una composición farmacéutica o composición de vacuna que comprende una cantidad efectiva que desarrolla inmunidad de uno o más de: (i) un componente inmunogénico de L. intracellularis; (ii) un péptido, polipéptido o proteína recombinante de L. intracellularis teniendo propiedades inmunogénicas; y/o (iii) células completas o un componente o fracción de las mismas de L. intracellularis.

Los componentes anteriores son referidos de aquí en adelante como "ingredientes activos". Los ingredientes activos de una composición de vacuna como se contemplan en la presente exhiben una actividad terapéutica excelente, por ejemplo, en el tratamiento y/o profilaxis de PPE cuando se administran en una cantidad la cual depende del caso particular. Por ejemplo, para moléculas recombinantes, desde aproximadamente 0.5 µg hasta aproximadamente 20 mg pueden ser administrados. Otras cantidades efectivas útiles incluyen 1 µg hasta aproximadamente 10 mg, 10 µg hasta aproximadamente 5 mg y 50 µg hasta aproximadamente 1 mg. La característica importante es administrar suficiente para inducir una respuesta inmune protectora efectiva. Las cantidades anteriores pueden ser administradas como se declaró o pueden ser calculadas por kilogramo de peso corporal. El régimen de dosificación puede ser ajustado para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, varias dosis divididas pueden administrarse diariamente o la dosis puede ser proporcionalmente reducida como se indica por las exigencias de la situación terapéutica. La administración de refuerzo también puede ser requerida. Los ingredientes activos pueden ser administrados en una manera conveniente tal como mediante las rutas, oral, intravenosa (donde es soluble en agua), intramuscular, subcutánea, intranasal, intradermal o supositoria o implante (por ejemplo, usando tecnología de liberación lenta). Dependiendo de la ruta de administración, los ingredientes activos los cuales comprenden, por ejemplo, péptidos, polipéptidos o proteínas puede requerirse que estén cubiertos en un material para proteger dichos ingredientes de la acción de enzimas, ácidos y otras condiciones naturales, las cuales pueden inactivar dichos ingredientes. El término "auxiliar" es usado en su sentido más amplio e incluye cualquier compuesto estimulador inmune tal como interferón. Los auxiliares contemplados en la presente incluyen resorcinoles, surfactantes no iónicos tal como polioxietilen oleil éter y n-hexadecil polietilen éter y auxiliar de Freund completo e incompleto. Los compuestos activos también pueden ser administrados parenteral o intraperitonealmente. Las dispersiones también pueden ser preparadas en glicerol, polietilen glicoles líquidos, y mezclas de los mismos y en aceites. Bajo condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservador para prevenir el crecimiento de microorganismos. Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones acuosas estériles (donde es soluble en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de dispersiones o soluciones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser fluida al grado que sea fácilmente manejable en la jeringa a menos que la forma farmacéutica sea un sólido o semi-sólido, tal como cuando la tecnología de liberación lenta es empleada. En cualquier caso, debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento y debe preservarse contra la acción contaminante de microorganismos.

El portador puede ser un solvente o medio de dispersión conteniendo, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido, y similares), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. La fluidez adecuada puede ser mantenida, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como licitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de superfactantes. Las prevenciones de la acción de microorganismos pueden lograrse mediante varios agentes antibacterianos y antifungales, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede alcanzarse mediante el uso en las composiciones de agentes retardadores de absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Las soluciones inyectables pueden preparase al incorporar los compuestos activos en la cantidad requerida en el solvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados antes, según se requiera, seguido por esterilización filtrada. Generalmente, las dispersiones son preparadas al incorporar los diversos ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril, el cual contiene el medio de dispersión básico y los demás ingredientes requeridos de aquéllos enumerados antes. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación con secado a vacío y la técnica de deshidratación por congelación, la cual produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de la solución estéril filtrada previamente de los mismos. Los portadores y diluyentes incluyen cualquier y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacteríanos y antifungales, agentes isotónicos y retardadores de absorción y similares. El uso de tales medios y agentes en las vacunas es bien conocido en la técnica. Excepto hasta donde cualquier medio o agente convencional es incompatible con un ingrediente activo, el uso del mismo en las composiciones terapéuticas es contemplado. Los ingredientes activos complementarios también pueden ser incorporados en las composiciones.

Todavía otro aspecto de la presente invención está dirigido a anticuerpos para los péptidos, polipéptidos o proteínas de L. intracellularis o formas recombinantes de los mismos o moléculas no proteínicas tales como carbohidratos. Tales anticuerpos pueden ser monoclonales o policlonales y pueden seleccionarse de los anticuerpos que ocurren de manera natural para L. intracellularis o pueden ser específicamente cultivados para moléculas específicas o células completas o componentes o fracciones de las mismas. Los anticuerpos de la presente invención son particularmente útiles para inmunoterapia y vacunación, y también pueden ser usados como una herramienta diagnóstica para infección o para revisar el progreso de una vacunación o régimen terapéutico. Por ejemplo, los péptidos, polipéptidos o proteínas de L. intracellularis recombinante también pueden ser usadas para clasificar examinar para anticuerpos que ocurren de manera natural para L. intracellularis. De manera alternativa, los anticuerpos específicos pueden ser usados para examinar para L. intracellularis. Las técnicas para tales ensayos son bien conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, ensayos de sandwich y ELISA. Más adelante, un componente inmunogénico es considerado que abarca un componente inmunogénico de L. intracellularis e incluye moléculas recombinantes, células completas y extractos de células. De acuerdo con este aspecto de la presente invención, los componentes inmunogénicos son particularmente útiles en la examinación para anticuerpos para L. intracellularis y, de ahí, proporcionan un protocolo de diagnóstico para detectar infección de L. intracellularis. De manera alternativa, muestras biológicas pueden ser directamente examinadas para L. intracellularis usando anticuerpos cultivados para componentes inmunogénicos. De acuerdo a esto, se proporciona un método para el diagnóstico de infección de L. intracellularis en un cerdo, comprendiendo poner en contacto una muestra biológica de dicho cerdo con un componente inmunogénico que liga una cantidad efectiva de un anticuerpo durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para que se forme un complejo componente inmunogénico-anticuerpo, y entonces detectar dicho complejo. La presencia de componentes inmunogénicos (o anticuerpos para los mismos) en sangre, suero u otro fluido corporal de cerdo, puede ser detectada usando un amplio rango de técnicas de inmunoensayo tales como aquéllas descritas en las patentes estadounidenses Nos. 4,016,043 4,424,279 y 4,018,653. Esto incluye tanto ensayos de un solo sitio y de dos sitios, como "sandwich", de los tipos no competitivos, así como en los ensayos de ligadura competitiva tradicionales. Los ensayos de sandwich están entre los más útiles y comúnmente usados y son favorecidos para usarse en la presente invención. Un número de variaciones de la técnica de ensayo de sandwich existe, y todas pretenden ser abarcadas por la presente invención. Brevemente, en un típico ensayo adelantado, un anticuerpo de componente inmunogénico específico es inmovilizado sobre un substrato sólido para formar un primer complejo y la muestra a ser probada para el componente inmunogénico se pone en contacto con la molécula ligada. Después de un periodo adecuado de incubación, durante un periodo de tiempo suficiente para permitir la formación de un complejo secundario anticuerpo-componente inmunogénico, un segundo anticuerpo de componente inmunogépico, marcado con una molécula reportadora capaz de producir una señal detectable, es adicionado entonces e incubado, permitiendo tiempo suficiente para la formación de un complejo terciario. Cualquier material sin reaccionar es separado mediante lavado y la presencia de anticuerpo marcado ligado es determinada mediante observación de una señal producida por la molécula reportadora. Los resultados pueden ser ya sea cualitativos, mediante simple observación de la señal visible, o pueden ser cuantitativos al comparar con una muestra de control. La presente invención contempla un rango de variaciones para el ensayo en cuestión incluyendo un ensayo para anticuerpos de L. intracellularis usando, por ejemplo, péptidos, polipéptidos o proteínas recombinantes de ese organismo.

El substrato sólido típicamente es vidrio o un polímero, siendo los polímeros más comúnmente usados celulosa, poliacrilamida, nylon, poliestireno, cloruro de polivinilo o polipropileno. Los soportes sólidos pueden estar en la forma de tubos, perlas, discos o microplatas, o cualquier otra superficie adecuada para conducir un inmunoensayo. Los procesos de ligadura son bien conocidos en la técnica y generalmente consisten de reticular ligadura covalentemente o físicamente adsorber la molécula al portador insoluble. Por "molécula reportadora", como se usa en la presente especificación, se quiere decir una molécula la cual, por su naturaí --.-. química, produce una señal analíticamente identificable la cual permite la detección de anticuerpo ligado al antígeno. La detección puede ser ya sea cualitativa o cuantitativa. La molécula reportadora más comúnmente usada en este tipo de ensayo son ya sea enzimas, fluoroforos o moléculas que contienen radionúclido (es decir, radioisótopos). En el caso de un inmunoensayo de enzima, una enzima es conjugada al segundo anticuerpo, generalmente por medio de glutaraldehído o periodato. Sin embargo, como será fácilmente reconocido, existe una amplia variedad de diferentes técnicas de conjugación, las cuales están fácilmente disponibles para alguien experto en la técnica. Las enzimas comúnmente usadas incluyen peroxidasa de rábano picante, glucosa oxidasa, ß-galactosidasa y fosfatasa alcalina, entre otras Los substratos a ser usados con las enzimas específicas generalmente son elegidas para la producción, sobre la hidrólisis mediante la enzima correspondiente, de un cambio de color detectable. También es posible emplear substratos fluorogénicos, los cuales producen un producto fluorescente. De manera alternativa, compuestos fluorescentes, tal como fluoresceína y rodamina, pueden ser químicamente acoplados a anticuerpos sin alterar su capacidad de ligadura. Cuando se activan mediante iluminación con luz a una longitud de onda particular, el anticuerpo marcado con fluorocromo adsorbe la energía de luz, induciendo un estado de excitabilidad en la molécula, seguido por la emisión de la luz a un color característico visualmente detectable con un microscopio de luz. Como en el EIA, el anticuerpo marcado fluorescente se permite que se ligue al primer complejo anticuerpo-hapteno. Después de lavar el reactivo sin ligar, el compuesto ternario restante se expone entonces a la luz de la longitud de onda apropiada, la fluorescencia observada indica la presencia del hapteno de interés. Las técnicas de inmunofluorescencia y ElA son ambas bien establecidas en la técnica y son particularmente preferidas por el presente método. Sin embargo, otras moléculas reportadoras, tal como moléculas de radioisótopo, quimiluminiscentes o bioluminiscentes, también pueden ser empleadas. Será fácilmente aparente para el técnico experto como variar el procedimiento para adecuar el propósito requerido. Un rango de ensayos diagnósticos genéticos puede ser empleado, tal como ensayos de reacción de cadena de polimerasa (PCR), ensayos de hibridación o ensayos de truncamiento de proteínas. Todos estos ensayos son contemplados en la presente invención. La presente invención es descrita adicionalmente mediante las siguientes, no limitantes, Figuras y/o Ejemplos.

En las Figuras: La Figura 1 es una representación fotográfica que muestra el análisis "Western" de antígenos de L. intracellularis reconocidos por cerdos vacunados. La huella 1 (395) fue probada con suero de cerdo de un cerdo (395) que había sido inmunizado tres veces con la vacuna de L. intracellularis completa muerta en formalina. Las huellas 2 a 5 (Y10, Y12, Y14, Y16) fueron probadas con suero obtenido de los cerdos Y10, Y12, Y14 y Y16, respectivamente en el día 0. La Figura 2 es una representación fotográfica del intestino delgado del cerdo Y1 en el día 20. La Figura 3 es una representación fotográfica del intestino delgado del cerdo Y2 en el día 20. La Figura 4 es una representación fotográfica del intestino delgado del cerdo Y4 en el día 20.

Las siguientes abreviaturas de una y tres letras son usadas para los residuos de aminoácidos: Aminoácido Abreviatura de tres letras Símbolo de una letra Alanina Ala A Arginina Arg R Asparagina Asn N Acido aspártico Aps D Cisteína Cys C Glutamina Gln Q Acido glutámico Glu E Glicina Gly G Histidina His H Isoleucina He I Leucina Leu L Lisina Lys K Metionina Met M Fenilalaina Phe . F Prolina Pro P Serina Ser S Treonina Thr T Triptófano Trp W Tirosina Tyr Y Valina Val V Cualquier residuo Xaa X RESUMEN DE LOS NÚMEROS DE IDENTIDAD DE SECUENCIA SEQ ID NO. Descripción 1 Secuenc a de nucleótidos de GroEL 2 Secuenc a de aminoácidos de GroEL 3 Secuenc a de nucleótidos de GroES 4 Secuenc a de aminoácidos de GroES 5 Secuenc a de nucleótidos de componente de L. intraceful/aris 6 Secuenc a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 7 Secuenc a de aminoácidos de SEQ ID NO 6 8 Secuenc a de nucleótidos de componente de L. intracelullarís 9 Secuenc a de aminoácidos de SEQ ID NO:8 (primer secuenci a de codificación) 10 Secuenc a de aminoácidos de SEQ I D NO:8 (segunda secuenci a de codificación) 11 Secuenci a de nucleótidos de componente de L . intracelullaris 12 Secuenci a de aminoácidos de SEQ ID NO 1 1 13 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 14 Secuenci a de aminoácidos de SEQ ID NO 13 15 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 16 Secuenci a de aminoácidos de SEQ ID NO: 15 17 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 18 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 19 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 0 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 1 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intraceluHarís 2 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris 3 Secuenci a de nucleótidos de componente de L. intracelullaris EJEMPLO 1 FUENTES DE TEJIDO DE CERDO Intestinos de cerdo infectados Secciones de ¡leones espesados excesivamente fueron tomadas de cerdos afectados de manera natural o experimental por PPE. La presencia de bacteria L. intracellularis en los ¡leones fue confirmada usando manchado inmunofluorescente con anticuerpos monoclonales específicos (10). Un ejemplo de un anticuerpo adecuado es el anticuerpo monoclonal IG4 de University of Edinburgh, UK.

EJEMPLO 2 AISLAMIENTO DE BACTERIA LAWSONIA INTRACELLULARIS DEL ÍLEON DE CERDO INFECTADO Las bacterias Lawsonia intracellularis fueron extraídas directamente de lesiones de PPE en cerdos mediante filtración y purificadas adicionalmente sobre un gradiente de Percoll (Pharmacia, Uppsala, Suecia). Los ¡leones infectados fueron recolectados de cerdos y la presencia de L. intracellularis fue confirmada histológicamente antes del almacenamiento a -80CC. Las secciones de íleon fueron descongeladas y aproximadamente 8 g de mucosas infectadas fueron raspadas de la pared intestinal. La mucosa se homogeneizó con 40 ml de solución salina amortiguada de fosfato estéril (PBS) a velocidad media por 10 s usando un omnimezclador Sorvall. Esta suspensión se centrifugó a 2000 xg durante 4 minutos. El sobrenadante se descartó y la pella de célula se volvió a suspender en 40 ml de PBS y se volvió a centrifugar. Este paso de lavado se repitió dos veces. La pella de célula se volvió a suspender en 20 ml de PBS y se homogeneizó a velocidad completa durante un minuto para liberar la bacteria L. intracellularis. Este homogeneizado se centrifugó a 1000 xg durante 4 minutos dando una pella que contenía una mezcla cruda de bacterias intestinales y células epiteliales homogeneizadas. El sobrenadante se filtró usando filtros con poro de tamaño de 3 µm, 1 .2 µm y 0.8 µm (Millipore Corporation, MA, USA). El filtrado se centrifugó a 8000 xg durante 30 minutos, resultando en una pequeña pella de bacterias L. intracellularis. Las bacterias L. intracellularis fueron purificadas adicionalmente usando un gradiente Percoll de autoformación de 45%: 2 ml de preparación bacteriana se mezclaron mediante inversión en 30 ml de un gradiente Percoll de autoformación de 45% (Pharmacia LKB, Uppsala, Suecia) (45% v/v de Percoll, 150 mM de NaCI). Los gradientes fueron centrifugados en una centrífuga Sorval usando el rotor SS34, a 20,000 rpm durante 30 minutos a 4°C. Usualmente un número de bandas se forman dentro del gradiente. La banda (usualmente ubicada aproximadamente 10-20 mm desde la base del tubo) conteniendo las bacterias L. intracellularis fue recolectada y se aforó a 16 ml con PBS. La solución se centrifugó entonces durante 15 minutos a 8000 rpm. La pella resultante se lavó con PBS antes de volver a ser suspendida en un volumen final de aproximadamente un ml.

EJEMPLO 3 PURIFICACIÓN DE DNA GENOMICO DE LAWSONIA INTRACELLULARIS Se extrajo DNA genómico de las bacterias Lawsonia intracellularis purificadas mediante gradiente de Percoll, recuperadas de raspados de ¡leones de cerdos infectados (Ejemplo 2), mediante los métodos descritos por Anderson et al (1 1 ) & Sambrook et al (12).

EJEMPLO 4 INMUNOEXAMINACION DE GENOTECAS GENOMICAS Una genoteca genómica de L. intracellularis lambda ZAP II fue platinada en un campo de células de Escherichia coli XLI-Blue (23) a una densidad de 2,000 unidades formadoras de placa (pfu) por 150 mm de placa de agar de caldo L. La genoteca se examinó con un suero anti- L. intracellularis de conejo usando el método descrito en Protoblot Technical Manual (Promega, Wl, USA). Los filtros fueron bloqueados en un amortiguador conteniendo 10 mM Tris HCl, pH 8.0, 150 mM de NaCI, 0.05% de Tween 20, 1 % p/p de gelatina. Las placas positivas identificadas en una examinación primaria fueron tomadas, replatinadas a una densidad menor y se volvieron a examinar hasta que placas positivas individuales fueron identificadas.

EJEMPLO 5 AISLAMIENTO Y SECUENCIACION DE I NSERCION ES DE cDNA "phagemid" de DNA de clones de fagos ?ZAPII positivos fue aislado mediante excisión in vivo del "phagemid" pBluescript bajo las condiciones recomendadas por Stratagene (CA, USA). El DNA de plásmido fue extraído ya sea mediante el método de Brinboim y Doly como las inserciones de cDNA secuenciadas mediante el método de terminación de cadena (21 ), o mediante el método de precipitación por PEG y ciclo-secuenciadas mediante el método de terminador de tintura, como es recomendado por el fabricante (Applied Biosystems).

EJEMPLO 6 ANTISUEROS Los antisueros para bacterias L. intracellularis fueron cultivados en conejos y cerdos. Los conejos fueron inyectados intramuscularmente con una preparación de bacterias L. intracellularis purificadas por gradiente de Percoll mezcladas con una doble emulsión hecha al procesar con auxiliar de aceite (auxiliar incompleto de Freund, CSL Limited, Melbourne, Australia), y entonces con intensificador Tween 80. Dos inyecciones de 3 ml, conteniendo 9 mg de proteína, fueron proporcionadas con cuatro semanas de separación. Se recolectaron muestras de sangre de la vena marginal del oído antes de la inmunización y dos semanas después de la segunda inyección. Un cerdo de seis semanas de edad (395) fue hiperinmunizado mediante inyección intramuscular de bacterias L. intracellularis purificadas por gradiente de Percoll preparada con auxiliar incompleto de Freund por lo que respecta al conejo. Tres inyecciones de antígeno preparado fueron administradas con separación de cuatro semanas, y se recolectó sangre de la vena yugular dos semanas después de la inyección final. Los sueros de cerdo diluidos (1 ml, 1 en 200) fueron pre-absorbidos con 100 µl de lisado de E. coli DH5a (24) durante 1 h a temperatura ambiente con mezclado suave. El lisado fue preparado mediante congelación-descongelación de una suspensión de E. coli en PBS.

EJEMPLO 7 ELECTROFORESIS DE GEL DE DODECIL SULFATO DE SODIO- POLI ACR I LAM I DA Muestras de proteína fueron resuspendidas en 50 µl de amortiguador de muestra (62.4 mM de HCl, 2% p/v de SDS, 10% v/v de glicerol, 5% v/v de 20 mercaptoenaol, 0.002% de azul de bromofenol, pH 8.6) y se calentaron a 95°C durante 5 minutos antes de separar las proteínas solubilizadas electroforéticamente en un gel de placa vertical de 0.1 % p/v de SDS-12% p/v de PAGE (13).

EJEMPLO 8 "WESTERN BLOTTING" Las proteínas fueron transferidas electroforéticamente a membranas Immobilon-P (Millipore Corporation, MA, USA) en una Trans-Blot Cell (BioRad, CA, USA) a 100 V durante 1 h en un amortiguador conteniendo CAPS (ácido 3-[ciclohexilamino]-1 -propanosulfónico, pH 11 , Sigma, Ml, USA) y 10% v/v de metanol. Las membranas fueron bloqueadas entonces con 5% p/v de Blotto (polvo de leche descremada Diploma, Melbourne, Australia) en PBS durante 30 min a temperatura ambiente con mecido suave. Los filtros fueron transferidos entonces a antisueros diluidos en 5% p/v de Blotto, PBS. El antisuero de cerdo pre-absorbido fue diluido 1 en 200. Los filtros fueron incubados en antisueros de cerdo durante 1 h seguido por lavado tres veces en PBST. Las inmunoglobulinas anti-puerco conjugadas de HRP (DAKO, CA, USA) fueron aplicadas a una dilución de 1 :2000. Se usó quimiluminiscencia intensificada (ECL, Amersham, IL, USA) para discriminar proteínas de L. intracellularis. Antes de la detección ECL, se lavaron las manchas tres veces durante 7 minutos cada una. Los filtros se expusieron a película autoradiográfica (Agfa, NJ; USA) por menos de 1 minuto antes de desarrollarse.

EJEMPLO 9 IDENTIFICACIÓN DE GroEL Y GroES Clones encontrados positivos de acuerdo al método de inmunoexaminación descrito en el Ejemplo 4 fueron secuenciados usando el protocolo detallado en el Ejemplo 5. Un clon aislado representó la proteína GroEL. La secuencia de nucleótidos y secuencia de aminoácidos correspondientes de GroEL se muestran en SEQ I D NO: 1 y SEQ ID NO:2.

Otro clon aislado representó la proteína GroES. La secuencia de nucleótidos de GroES y secuencia de aminoácidos correspondientes se muestran en SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO:4.

EJEMPLO 10 DETECCIÓN INMUNOFLUORESCENTE DE BACTERIA LA WSONIA INTRACELLULARIS EN HECES DE CERDO Tapones fecales de cerdo fueron tomadas usando torundas con punta de algodón y entonces la muestra se embarró sobre un portaobjetos de vidrio. Después de permitir diez minutos de secado por aire, las embarraduras fijadas por calor mediante calentamiento a 60°C durante aproximadamente 10 segundos. Los portaobjetos fueron enjuagados entonces en PBS. Una cantidad de 30 µl de una dilución 1/200 de ascitis de ratón conteniendo anticuerpo monoclonal IG4 (ver el Ejemplo 1 ) se adicionó, una tira de cubierta de vidrio se aplicó, y los portaobjetos se incubaron a temperatura ambiente durante 40 minutos. La tira de cubierta se removió y los portaobjetos fueron lavados (PBST durante 7 minutos, tres veces). Una cantidad de 30 µl de una dilución 1/40 de un antisuero anti-ratón conjugado FITC (Silenus, Melbourne, Australia) se adicionó, un tira de cubierta de vidrio se aplicó y los portaobjetos fueron incubados a temperatura ambiente durante 40 minutos. La tira de cubierta se removió y los portaobjetos fueron lavados (PBST durante 7 minutos X3). Se dio un enjuague final en PBS a los portaojbetos. Una gota de 10% v/v de glicerol PBS se adicionó y una tira de cubierta de vidrio se aplicó. Las bacterias fluorescentes fueron visualizadas bajo un microscopio Lietz laborlux S de alto poder (X1200) a 340 nm. Veinte campos fueron contados y los resultados (ver Tabla 1 ) fueron expresados como el número promedio de bacteria L. intracellularis por campo de gran potencia.

EJEMPLO 11 VACUNA DE L. INTRACELLULARIS MUERTA EN FORMALINA La pella de L. intracellularis bacteriana purificada por gradiente de Percoll se volvió a suspender en 1 ml de 1 % de formalina en solución salina y se incubó durante la noche a 4°C. La bacteria L. intracellularis purificada por gradiente de Percoll se mezcló entonces en una doble emulsión hecha al procesar con auxiliar de aceite (auxiliar incompleto de Freund, Commonwealth Serum Laboratories, Melbourne, Australia), y entonces con intensificador Tween 80.

EJEMPLO 12 PROTOCOLO DE VACUNACIÓN Doce cerdos destetados (Landrace cruzado con Large White) fueron tomadas de una porqueriza de Pig Improvement Company y fueron tratados con Neo-Terramicina (0.25 g/kg) durante 5 días. Siete días después los cerdos (de 40 días) Y10, Y12, Y14 y Y16 fueron vacunados como se describió. Los cerdos Y3, Y1 1 y Y13 fueron tratados por absecso con terramicina de larga actuación en el día 34.

Los doce cerdos fueron divididos en tres grupos y tratados como sigue: Grupo 1 Controles infectados Cuatro cerdos (Marca de oreja No. Y1-Y4) fueron alojados con cerdos vacunados. Grupo 2 Vacuna de bacteria completa Cuatro cerdos (Marca de oreja No. Y10, Y12, Y14 y Y16) fueron inmunizados con 0.5 ml de bacteria L. intracellularis muerta en formalina emulsficada en 0.5 ml de PBS/auxiliar incompleto de Freunden los días 33 y 12. Grupo 3 Controles sin infectar Cuatro cerdos (Marca de oreja No. Y9, Y1 1 , Y13 y Y15) no recibieron tratamiento y fueron alojados en un área separada de los cerdos vacunados y los cerdos de control infectados.

EJEMPLO 13 VALORACIONES ORALES DE CERDOS INFECTADOS Neones infectados fueron recolectados de cerdos como se describió en el Ejemplo 1 y la presencia de L. intracellularis fue confirmada histológicamente antes de almacenamiento a -80°C. Secciones de íleon fueron descongeladas y aproximadamente 150 g de mucosa infectada fue raspada de la pared intestinal. La mucosa se homogeneizó con un volumen igual de PBS estéril a velocidad media durante 20 s usando un omnimezclador Sorvall. Esta suspensión se diluyó dos veces con PBS estéril para formar la suspensión de valoración. En el día 0 cada cerdo de los Grupos 1 y 2 fue dosificado con una solución al 5% p/v con bicarbonato de sodio (10 ml/kg) seguido por 30 ml de suspensión de valoración. Esto se repitió el día 1 y el día 2. Del día 11 en adelante, el número de bacterias L. intracellularis en las heces fecales de cada cerdo fue verificado mediante inmunoflorescencia. Los cerdos fueron revisados por signos de enfermedad y derramamiento de bacterias L. intracellularis. El derramamiento de cerdos mayor a 100 bacterias por campo de gran potencia y diarrea fueron sacrificados por razones éticas. En el día 22 los cerdos sobrevivientes fueron humanamente sacrificados y los intestinos delgados fueron recuperados. Las dos secciones de intestino delgado fueron removidas 5 cm y 17 cm proximalmente de la unión ¡leocecal. Estas secciones fueron fijadas en 10% v/v de formalina, la cera incrustada y secciones fueron enviadas a un patólogo veterinario independiente para su análisis.

EJEMPLO 14 PROTEÍNAS DE LAWSONIA INTRACELLULARIS RECONOCIDAS POR CERDOS VACUNADOS Los anticuerpos cultivados por cerdos para proteínas de L. intracellularis post vacunación fueron analizados mediante Western blotting seguido por detección ECL (Amersham, IL, USA) como se describió en el Ejemplo 8. Los resultados se muestran en la Figura 1. Los cerdos vacunados producen anticuerpos a un rango de proteínas de L. intracellularis. Las proteínas más inmunodominantes reconocidas fueron aproximadamente 62.7 Kda, 58.7 Kda, 57.2 Kda, 44 Kda. 36.7 Kda y dos embarraduras de 24-26 Kda y 22-23.5 Kda. Las bandas inmunoreactivas menores tienen aproximadamente los siguientes pesos moleculares 67 Kda, 52.5 Kda, 50.5 Kda, 48.2 Kda, 47.9 Kda, 44.7 Kda, 43.5 Kda, 42.5 Kda, 41.5 Kda, 40.5 Kda, 39 Kda, 35.3 Kda, 17 Kda, 15.5 Kda, 12 Kda y 7 Kda. El peso molecular de las proteínas reconocidas variará hasta 5% dependiendo del método usado para la estimación.

EJEMPLO 15 DERRAMAMIENTO DE BACTERIAS L. INTRACELLULARÍS POR CERDOS DURANTE EL ENSAYO Tres de los cerdos del Grupo 1 (control infectado) en el Ejemplo No. 12 (Y1 , Y2 y Y4) derramaron más de 100 bacterias L. intracellularis por campo de gran potencia en sus heces por el día 19 post valoración oral (Tabla 1 ). Dos de estos cerdos (Y2 y Y4) tuvieron diarrea con sangre. Los tres cerdos fueron humanamente sacrificados el día 20. Y3 derramó bajos niveles de bacterias L. intracellularis durante el curso del ensayo de infección. El máximo derramamiento bacteriano para Y3 fue 16 bacterias por campo de gran potencia. Todos los cerdos en el grupo 3 vacunados con la bacteria completa como se expuso en el Ejemplo 12, nunca derramaron más de 3 bacterias L. intracellularis por campo de gran potencia. La vacunación con la vacuna de L. intracellularis muerta en formalina redujo el derramamiento bacteriano total de bacterias L. intracellularis por cerdos vacunados por 98.5% cuando se comparó con los cerdos del grupo 1. Ninguno de los cerdos del grupo 3 (controles sin infectar) derramó ninguna bacteria L. intracellularis durante el curso del ensayo. Los resultados de derramamiento de bacterias L. intracellularis por cerdo se muestran en la Tabla 1 .

EJEMPLO 16 PATOLOGÍA GENERAL PARA LA PRUEBA A Grupo 1 Controles infectados Y1 Aproximadamente 5 cm de íleon terminal fue espesado excesivamente. Ningún otro signo de PPE fue evidente macroscópicamente. Los hallazgos son consistentes con adenomatosis intestinal (Ver Figura 2) Y2 Se encontró que el intestino fue espesado excesivamente y la serosa tuvo las formas cerebriformes características (Figura 3). Sobre 2.5 metros del intestino fue involucrado. Se encontró que el lumen del intestino contenía carne fresca y vaciados fibrinosos fueron evidentes. Enteropatía hemorrágica proliferativa. Y3 Ningún signo excesivo de PPE fue evidente. Y4 Se encontró que el intestino tenía enteritis necrótica (Figura 4). La superficie de la mucosa fue reemplazada con una pseudomembrana fibrinosa. Edema del mesentérico fue claramente evidente. Sobre 2.0 metros de intestino fue involucrado.

Grupo 2 Vacuna de célula de L. intracellularis completa Y10 Sin signos generales de PPE Y12 Sin signos generales de PPE Y14 Sin signos generales de PPE Y15 Sin signos generales de PPE Grupo 3 Controles sin infectar Y9 Sin signos generales de PPE Y1 1 Sin signos generales de PPE Y13 Sin signos generales de PPE Y15 Sin signos generales de PPE EJEMPLO 17 REPORTE DE HISTOPATOLOGIA PARA LA PRUEBA Los reportes se basan en las descripciones histopatológicas establecidas en Jubb et al (20).

Grupo 1 Grupo de control infectado Y1 Numerosas lesiones microfocales/confluentes de Adenomatosis Intestinal Porcina (PÍA) están asociadas con Parches Peyers Y2 Lesiones generalizadas (anulares) serias de Adenomatosis Intestinal Porcina. Y3 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Lesiones microfocales dispersas sugestivas de una hiperplasia (reparacional) reactiva suave no específica (en lugar de una adenomatosis). Y4 Lesiones (anulares) generalizadas severas de PÍA.

Grupo 2 Vacuna de célula de L. intracellularis completa Y10 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Y12 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Y14 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Y15 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Posible microfoco sencillo de PÍA está asociado con Parche Peyers.

Grupo 3 Controles sin infectar Y9 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Y1 1 Ninguna evidencia concluyente de PÍA. Y13 El intestino no fue recuperado ya que el cerdo fue matado debido a debilidad el día 15. Y15 El diagnóstico no fue posible debido a las secciones de baja calidad.

EJEMPLO 18 INMUNOEXAMI NACION DE UNA GENOTECA DE L. INTRACELLULARIS USANDO SUEROS EXPERIMENTALES DE CERDOS VACUNADOS Se purificó DNA genómico de L. intracellularis como se describió en el Ejemplo 3. El DNA fue parcialmente digerido con la endonucleasa de restricción Sau3A (Promega) y se ligó en Lambda ZAP II Express (Stratagene). La genoteca lambda fue platinada en un campo de células de E. coli XLI-Blue a una densidad de 10,000 pfu por 150 Mm de placa de agar de caldo L. La genoteca se examinó, como se describió en el Ejemplo 4, con sueros de Y12. El cerdo Y12 fue inmunizado con L. intracellularis muerta en formalina, como se describió en el Ejemplo 1 1 & 12. Los cerdos vacunados produjeron anticuerpos para un rango de proteínas de L. intracellularis, como se describió en el Ejemplo 14. Un número de clones de fagos que expresan proteínas de L. intracellularis fue identificado.

EJEMPLO 19 ANÁLISIS DE CLONES DE FAGOS QUE EXPRESAN L. INTRACELLULARIS "phagemid" de DNA de clones de fagos ?ZAP II Express fue aislado mediante excisión in vivo, mediante las condiciones recomendadas por el fabricante (Stratagene). El DNA del plásmido, para análisis de restricción fue extraído mediante lisis alcalina, como se describió por Sambrook et al (12), y para secuenciación automatizada, usando el High Puré Plasmid Kit, como se recomienda por el fabricante (Boehringer Mannheim). La secuenciación de DNA de inserciones fue realizada mediante el método terminador de tintura de secuenciación automatizada (ABI Biosystems).

Las secuencias identificadas se exponen en las SEQ ID NOS: 5-23 (ver el Ejemplo 20).

EJEMPLO 20 IDENTIFICACIÓN DE COMPONENTES L. INTRACELLULARIS La similitud de secuencias de las moléculas de DNA que codifican candidatos de vacunas putativas identificadas a partir del Ejemplo 18 y 19, fue identificada usando BLAST (27). La secuencia de nucleótidos SEQ ID NO:6 y su secuencia de aminoácidos correspondiente SEQ ID NO:7 tiene la similitud de secuencia para una proteína de bastoncito de cuerpo basal flagelar. La SEQ ID NO:8 (nucleótidos) y las SEQ ID NOS: 9 y 10 (aminoácidos) tienen similitud de secuencia a autolisina. La SEQ ID NO: 1 1 (nucleótidos) y SEQ ID NO: 12 (aminoácidos) muestran similitud de secuencia a S-adenosilmetionina: tRNA ribosiltranferasa-isomerasa (proteína de biosíntesis de queuosina queA). SEQ ID NO: 13 (nucleótidos) y SEQ ID NO: 14 (aminoácidos muestran similitud de secuencia a enoil-(acil-portador-proteína) reductasa. SEQ ID NO: 15 (nucleótidos) y SEQ ID NO: 16 (aminoácidos) muestran similitud de secuencia a un transportador de glucarato. Otras secuencias de nucleótidos codificando candidatos de vacuna son SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21 , SEQ ID NO:22, y SEQ ID NO:23. Aquéllos expertos en la técnica apreciarán que la invención descrita en la presente es susceptible a variaciones y modificaciones diferentes de aquéllas específicamente descritas. Se entenderá que la invención incluye todas esas variaciones y modificaciones. La invención también incluye todos los pasos, características, composiciones y compuestos referidos a o indicados en esta especificación, individual o colectivamente, y cualquier y toda combinación de cualquiera de dos o más de dichos pasos o características.

TABLA 1 TABLA 1 Vacunación Valoración Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día Día -40 -33 -26 -12 0 1 2 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 1 Controles infectados 1 + 1 + 0 0 5+ 10+ 50+ 100+ 15 5 cn. de espesamiento 2 Controles Infectados 0 1 + 1 + 1 + 3+ 1 + 70+ 100+ 100 PHE 2.5 M 3 Controles infectados 0 0 0 0 0 0 1 + 4 16 1+ 0 1 4 Controles infectados 1 + 0 0 10+ 0 5+ 60+ 200+ 80 PHE 2.0 4 . s .

Bacterias 1ml de cel. completa muerta 1 ml de cel. completa muerta 0 0 0 0 0 1 + 1 + 0 0 0 0 0 completas 12 Bacterias 1 ml de cel. completa muerta 1 ml de cel. completa muerta 1 + 0 0 0 0 2+ 0 0 0 0 0 0 completas 14 Bacterias 1ml de cel. completa muerta 1 ml de cel. completa muerta 0 0 0 0 0 1 + 0 <1 <1 o o o completas 16 Bacterias 1 ml de cel. completa muerta 1 ml de cel. completa muerta 0 0 0 0 0 0 0 3 <1 o o o completas 9 Controles no 0 0 0 0 o 0 0 0 0 0 0 0 infectados 11 Controles no 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 infectados 13 Controles no 0 0 0 0 Pista muerta infectados 15 Controles no 0 0 0 0 o 0 0 0 0 0 0 0 infectados -4 BIBLIOGRAFÍA Barker, I. K. y Van Dreumel, A.A (1985) en "Pathology of Domestic Animáis," 3a edición, Vol. 2 p. 1-237, eds K.V.F. Jubb, P.C. Kennedy y N. Palmer. (Academic Press: Orlando). Rowland, A.C. y Lawson, G.H. K. (1976) Veterinary Record 97:178-180. Love, R.J. y Love, D.M. (1977) Veterinary Record 100:473 Jonsson, L. y Martinsson, K. (1976) Acta Veterinaria Scandinavica 17:223-232. O'Neil, I. P.A. (1970) Veterinary Record 87:742-747. Straw, B. E. (1990). Journal of American Veterinary Medical Association 197:355-357. Stills, H.F. (1991). Infection and inmunology 59:3227-3236. Gebhert, C.J. , Ward, G. E. , Chang, K. y Kurtz, J.H. (1983). American Journal of Veterinary Research 44:361-367. Lawson, G. H. K., McOrist, S., Jansi, S. y Mackie, R.A. (1993) Journal of Clinical Microbiology 31 :1 136-1 142. McOrist, S., Boid, R., Lawson, G. H.K. y McConnell, I. (1987) The Veterinary Record 121 :421 -422. Anderson, B.J. , M.M. Bills, J. R. Egerton, y J.S. Mattick. (1984) Journal of Bacteriology 160:748-754. Sambrook, J. , E. F. Fritsch, y T. Maniatis. (1989) Molecular cloning. A laboratory manual. Segunda edición. Cold Spring Harbour Laboratory, Cold Spring Harbour, N.Y. 13 Laemmli, U. K. (1970) Nature 227:680-685. 14 McOrist, S, Jasni, S, Mackie, RA, Maclntyre, N, Neef, N. y Lawson GHK (1993) Infection and ¡mmunity 61 :4286-4292. 15 Fox, JG, Murphy, JC, Otto, G Pecquet-Goad, ME, Larson, QHK y Scott JA (1989) Veterinary Pathology 26:515-517. 16 Elwell, MR, Chapman, AL y Frenkel, JK (1981) Veterinary Pathology 18: 136-139. 17 Schodeb, TR y Fox JG (1990) Veterinary Pathology 27:73-80. 18 Masón, RW, Monkton, P y Hasse D (1995) Australian Veterinary Journal (en prensa). 19 Manthorpe, M, Cornefert-Jensen, F. , Hartikka, J., Felgner, J, Rundell, A, Margalith, M y Dwarki, V. (1993) Human Gene Therapy 4:419-431 . 20 Jubb KVC, Kennedy, PC y Palmer, NC (1993). The Pathology of Domestic Animáis, 4a ed. San Diego, CA, Academic Press, pp 229- 233. 21 Birnboim, HC y Doly J (1979) Nucleic Acids Research 7: 1513. 22 Sanger, F, Nicklen, S y Coulson, AR (1977) Proceedings of the National Academy of Science 74:5463. 23 Block, WO, Femandes, JM y Short, JM (1987) Biothecnics 5:376-79. 24 Woodcock, DM et al (1989) Nucleic Acids Research 17:3469-78. 25 Studier, FW et al (1990) Methods in Enzymology 185:60-89. 26 McOrist, S et al (1995) International Journal of Systematic Bacteriology 45:820-825. 27 Gish, W y States, D.J. (1993) Nature Genetics 3: 266-272.

LISTADO DE SECUENCIAS (1 ) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: (OTRO DIFERENTE A NOSOTROS) DARATECH PTY LTD y PIG RESEARCH (SOLO US): MICHAEL PANACCIO y DETLEF HASSE (ii) TITULO DE LA INVENCIÓN: COMPOSICIONES TERAPÉUTICAS Y DIAGNOSTICAS (iii) NUMERO DE SECUENCIAS: 23 (iv) DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA: (A) DESTINARIO: DAVIES COLLISON CAVE (B) CALLE: 1 LITTLE CQLLÍNS STREET (C) CIUDAD: MELBOURNE (D) ESTADO: VICTORIA (D) PAÍS: AUSTRALIA (E) CÓDIGO POSTAL: 3000 (v) FORMA LEGIBLE DE COMPUTADORA: (A) TIPO DE MEDIO: DISCO FLEXIBLE (B) COMPUTADORA: IBM PC compatible (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) PAQUETERÍA: Patente en liberación #1 .0, versión #1.25 (vi) DATOS DE SOLICITUD ACTUAL: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 29-NOV-1996 (vi) DATOS DE SOLICITUD ANTERIOR: (A) NUMERO DE SOLICITUD: PN691 1/95 (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 30-NOV-1995 (A) NUMERO DE SOLICITUD: PN6910/95 (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: 30-NOV-1995 (viii) INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE: (A) NOMBRE: HUGHES DR, E JOHN L (C) NUMERO DE REFERENCIA/CASO: EJH/AF (ix) INFORMACIÓN DE TELECOMU NICACIONES: (A) TELEFONO: +61 3 9254 2777 (B) TELEFAX: +61 3 9254 2770 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1647 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN: 1..1647 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:1 ATG GCT TCT AAA GAA ATC CTT TTT GAT GCT AAA GCC CGT GAA AAA CTT 48 Met Ala Ser Lys Glu lie Leu Phe Asp Ala Lys Ala Arg Glu Lys Leu 1 5 . 10 15 TCA CGA GGT GTA GAT AAA CTT GCA AAT GCT GTT AAA GTA ACA CTT GGA 96 Ser Arg Gly Val Asp Lys Leu Ala Asn Ala Val Lys Val Thr Leu Gly 20 25 30 CCT AAA GGC CGT AAT GTC GTT ATT GAA AAG TCT TTT GGT TCC CCA GTT 144 Pro Lys Gly Arg Asn Val Val lie Glu Lys Ser Phe Gly Ser Pro Val 35 40 45 ATT ACA AAA GAT GGT GTA TCT GTT GCA AAA GAA ATT GAA CTT GAA GAT 192 lie Thr Lys Asp Gly Val Ser Val Ala Lys Glu lie Glu Leu Glu Asp 50 55 60 AAG TTT GAA AAT ATG GGC GCT CAÁ ATG GTT AAA GAA GTA GCT CCC AAA 240 Lys Phe Glu Asn Met Gly Ala Gln Met Val Lys Glu Val Ala Pro Lys 65 70 75 80 ACT AGC GAT ATT GCT GGT GAT GGA ACT ACA ACA GCA ACA GTC CTT GCA 288 Thr Ser Asp lie Ala Gly Asp Gly Thr Thr Thr Ala Thr Val Leu Ala 85 90 95 CAÁ GCT ATT TAT CGT GAA GGT GTA AAA CTT GTA GCA GCT GGT CGT AAT 336 Gln Ala lie Tyr Arg Glu Gly Val Lys Leu Val Ala Ala Gly Arg Asn 100 105 110 CCT ATG GCC ATT AAA CGT GGC ATA GAT AAA GCT GTT GTT GCT GTT ACT 38 ' Pro Met Ala lie Lys Arg Gly He Asp Lys Ala Val Val Ala Val Thr 115 120 125 AAA GAA CTA AGC GAC ATT ACA AAG CCT ACT CGT GAC CAÁ AAA GAA ATA 432 Lys Glu Leu Ser Asp He Thr Lys Pro Thr Arg Aßp Gln Lys Glu He 130 135 140 GCT CA GTT GGA ACC ATT TCT GCA AAC TCT GAT ACA ACA ATA GGT AAT 480 Ala Gln Val Gly Thr He Ser Ala Asn Ser Asp Thr Thr He Gly Asn 145 150 155 160 ATC ATA GCT GAA GCT ATG GCT AAA GTT GGA AAA GGA GGT GTT ATC ACA 528 He He Ala Glu Ala Met Ala Lys Val Gly Lys Gly Gly Val He Thr 165 170 175 GTT GAG GAA GCT AAA GGT CTT GAA ACT ACA T?A GAT GTG GTT GAA GGA 576 Val Glu Glu Ala Lys Gly Leu Glu Thr Thr Leu Asp Val Val Glu Gly 180 185 190 ATG AAG TTT GAC CGT GGC TAC CTC TCT CCA TAC TTT GTA ACT AAT CCT 624 Met Lys Phe Asp Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Tyr Phe Val Thr Asn Pro 195 200 205 GAG AAA ATG GTT TGT GAA CTT GAT AAC CCT TAT ATC CTT TGT AAT GAG 672 Glu Lys Met Val Cys Glu Leu Asp Asn Pro Tyr He Leu Cyß Asn Glu 210 215 220 AAA AAG ATT ACT AGC ATG AAA GAC ATG CTA CCA ATC TTA GAA CAÁ GTT 720 Lys Lys He Thr Ser Met Lys Asp Met Leu Pro He Leu Glu Gln Val 225 230 235 240 GCT AAA GTA AAC CGT CCA CTC CTT ATT ATT GCT GAA GAC GTA GAA GGT 768 Ala Lyß Val Asn Arg Pro Leu Leu He He Ala Glu Aßp Val Glu Gly 245 250 255 GAA GCA CTT GCA ACA CTT GTA GTC AAT AAG CTC CGT GGA GCA CTC CAÁ 816 Glu Ala Leu Ala Thr Leu Val Val Asn Lys Leu Arg Gly Ala Leu Gln 260 265 270 GTT GTA GCC GTA AAA GCT CCT GGT TTT GGT GAA CGC CGT AAA GCT ATG 864 Val Val Ala Val Lys Ala Pro Gly Phe Gly Glu Arg Arg Lys Ala Met 275 280 285 CTT GAA GAT ATT GCT ATC CTT ACT GGA GGA GAA GCA ATA TTT GAA GAT 912 Leu Glu Asp He Ala He Leu Thr Gly Gly Glu Ala He Phe Glu Asp 290 295 300 CGT GGT ATA AAG CTT GAA AAT GTA AGC TTG TCT TCT TTA GGA ACÁ GCT 960 Arg Gly He Lys Leu Glu Asn Val Ser Leu Ser Ser Leu Gly Thr Ala 305 310 315 320 AAA CGT GTA GTT ATT GAC AAA GAA AAT ACT ACT ATC GTT GAT GGT GCT 1008 Lys Arg Val Val He Aep Lys Glu Asn Thr Thr He Val Asp Gly Ala 325 330 335 GGA AAA TCA GAA GAT ATT AAA GCT CGA GTT AAA CAÁ ATT CGT GCA CAÁ 1056 Gly Lys Ser Glu Asp He Lys Ala Arg Val Lys Gln He Arg Ala Gln 340 345 350 ATT GAA GAA ACA AGC TCA GAT TAT GAT CGT GAA AAA CTT CAÁ GAA CGT 1104 He Glu Glu Thr Ser Ser Asp Tyr Asp Arg Glu Lys Leu Gln Glu Arg 355 360 365 CTT GCA AAA CTT GTT GGT GGA GTA GCT GTT ATC CAT GTT GGA GCT GCT 1152 Leu Ala Lys Leu Val Gly Gly Val Ala Val He His Val Gly Ala Ala 370 375 380 ACT GAA ACT GAA ATG AAA GAG AAG AAG GAT CGT GTA GAA GAT GCT CTA 1200 Thr Glu Thr Glu Met Lyß Glu Lys Lys Asp Arg Val Glu Aßp Ala Leu 385 390 395 400 AAT GCA ACA AGA GCT GCG GTT GAA GAA GGT ATT GTC CCT GGT GGT GGT 1248 Asn Ala Thr Arg Ala Ala Val Glu Glu Gly He Val Pro Gly Gly Gly 405 410 415 ACT GCT TTT GTC CGC TCC ATT AAA GTC CTT GAT GAT ATT AAA CCT GCT 1296 Thr Ala Phe Val Arg Ser He Lys Val Leu Asp Asp He Lys Pro Ala 420 425 430 GAT GAT GAT GAA CTT GCT GGA CTT AAT ATC ATC CGT CGT TCT CTT GAA 1344 Asp Asp Asp Glu Leu Ala Gly Leu Asn He He Arg Arg Ser Leu Glu 435 440 445 GAG CCT TTA CGT CAÁ ATT GCT GCA AAT GCT GGC TAT GAA GGT TCT ATT 1392 Glu Pro Leu Arg Gln He Ala Ala Asn Ala Gly Tyr Glu Gly Ser He 450 455 460 GTT GTA GAA AAA GTT CGT GAA CCA AAA GAT GGT TTT GGA TTT AAT GCT 1440 Val Val Glu Lys Val Arg Glu Pro Lys Asp Gl-'- Phe Gly Phe Asn Ala 465 470 475 480 GCA TCA GGA GAA TAT GAA GAC CTT ATT AAA GCT GGT GTC ATT GAT CCT 1488 Ala Ser Gly Glu Tyr Glu Asp Leu He Lys Ala Gly Val He Aep Pro 485 490 495 AAA AAA GTT ACA CGT ATT GCA TTA CAÁ AAT GCA GCA TCA GTA GCC TCC 1536 Lys Lys Val Thr Arg He Ala Leu Gln Asn Ala Ala Ser Val Ala Ser 500 505 510 TTA CTT CTA ACT ACA GAA TGC GCT ATT GCT GAA AAA CCA GAA CCT AAA 1584 Leu Leu Leu Thr Thr Glu Cys Ala He Ala Glu Lys Pro Glu Pro Lys 515 520 525 AAA GAT ATG CCT ATG CCT GGC GGT GGT ATG GGT GGT ATG GGT GGT ATG 1632 Lys Asp Met Pro Met Pro Gly Gly Gly Met Gly Gly Met Gly Gly Met 530 535 540 GAC GGT ATG TAC TAG 1647 Asp Gly Met Tyr 545 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 548 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:2 Met Ala Ser Lys Glu He Leu Phe Asp Ala Lys Ala Arg Glu Lys Leu 1 5 10 15 Ser Arg Gly Val Asp Lys Leu Ala Asn Ala Val Lys Val Thr Leu Gly 20 25 30 Pro Lys Gly Arg Asn Val Val He Glu Lys Ser Phe Gly Ser Pro Val 35 40 45 He Thr Lys Aep Gly Val Ser Val Ala Lys Glu He Glu Leu Glu Asp 50 55 60 Lye Phe Glu Asn Met Gly Ala Gln Met Val Lys Glu Val Ala Pro Lye 65 70 75 80 Thr Ser Asp He Ala Gly Asp Gly Thr Thr Thr Ala Thr Val Leu Ala 85 90 95 Gln Ala He Tyr Arg Glu Gly Val Lys Leu Val Ala Ala Gly Arg Asn 100 105 110 Pro Met Ala He Lyß Arg Gly He Asp Lyß Ala Val Val Ala Val Thr 115 120 125 Lys Glu Leu Ser Asp He Thr Lyß Pro Thr Arg Asp Gln Lys Glu He 130 135 140 Ala Gln Val Gly Thr He Ser Ala Asn Ser Asp Thr Thr He Gly Asn 145 150 155 160 He He Ala Glu Ala Met Ala Lys Val Gly Lys Gly Gly Val He Thr 155 170 175 Val Glu Glu Ala Lys Gly Leu Glu Thr Thr Leu Asp Val Val Glu Gly 180 185 190 Met Lys Phe Asp Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Tyr Phe Val Thr Asn Pro 195 200 205 Glu Lys Met Val Cys Glu Leu Asp Asn Pro Tyr He Leu Cys Asn Glu 210 215 220 Lys Lys He Thr Ser Met Lys Aep Met Leu Pro He Leu Glu Gln Val 225 230 235 240 Ala Lys Val Asn Arg Pro Leu Leu He He Ala Glu Asp Val Glu Gly 245 250 255 Glu Ala Leu Ala Thr Leu Val Val Asn Lys Leu Arg Gly Ala Leu Gln 260 265 270 Val Val Ala Val Lys Ala Pro Gly Phe Gly Glu Arg Arg Lys Ala Met 275 280 285 Leu Glu Asp He Ala He Leu Thr Gly Gly Glu Ala He Phe Glu Asp 290 295 300 Arg Gly He Lys Leu Glu Asn Val Ser Leu Ser Ser Leu Gly Thr Ala 305 310 315 320 Lys Arg Val Val He Asp Lys Glu Asn Thr Thr He Val Aep Gly Ala 325 330 335 Gly Lys Ser Glu Asp He Lys Ala Arg Val Lys Gln He Arg Ala Gln 340 345 350 He Glu Glu Thr Ser Ser Asp Tyr Asp Arg Glu Lys Leu Gln Glu Arg 355 360 365 Leu Ala Lys Leu Val Gly Gly Val Ala Val He His Val Gly Ala Ala 370 375 380 Thr Glu Thr Glu Met Lys Glu Lys Lys Asp Arg Val Glu Asp Ala Leu 385 390 395 400 Asn Ala Thr Arg Ala Ala Val Glu Glu Gly He Val Pro Gly Gly Gly 405 410 415 Thr Ala Phe Val Arg Ser He Lys Val Leu Asp Asp He Lys Pro Ala 420 425 430 Aep Asp Asp Glu Leu Ala Gly Leu Asn He He Arg Arg Ser Leu Glu 435 440 445 Glu Pro Leu Arg Gln He Ala Ala Asn Ala Gly Tyr Glu Gly Ser He 450 455 460 Val Val Glu Lys Val Arg Glu Pro Lyß Asp Gly Phe Gly Phe Asn Ala 465 470 475 480 Ala Ser Gly Glu Tyr Glu Asp Leu He Lys Ala Gly Val He Asp Pro 485 490 495 Lys Lys Val Thr Arg He Ala Leu Gln Asn Ala Ala Ser Val Ala Ser 500 505 510 Leu Leu Leu Thr Thr Glu Cys Ala He Ala Glu Lys Pro Glu Pro Lys 515 520 525 Lys Asp Met Pro Met Pro Gly Gly Gly Met Gly Gly Met Gly Gly Met 530 535 540 Asp Gly Met Tyr 545 (2) IN FORMACIÓN PARA SEQ ID NO:3: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 306 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (ix) CARACTERÍSTICA: (C) NOMBRE/CLAVE: CDS (D) UBICACIÓN: 1..306 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:3 ATG AAC CTG AAA CCT TTG AAT GAC CGT GTT TTA GTA AAA CGT CTT GAA 48 Met Asn Leu Lys Pro Leu Asn Asp Arg Val Leu Val Lys Arg Leu Glu 1 5 10 15 TCT GAA GAA AAA AC GCT GGT GGA CTC TAT ATC CCT GAT ACT GCT AAA 96 Ser Glu Glu Lys Thr Ala Gly Gly Leu Tyr He Pro Asp Thr Ala Lys 20 25 30 GAA AAA CCA TCT CGT GGT GAA GTT GTT GCT GTT GGA CCT GGT AAA CAT 144 Glu Lys Pro Ser Arg Gly Glu Val Val Ala Val Gly Pro Gly Lys His 35 40 45 ACA GAT GAT GGT AAA TTA ATA CCT ATG GCT GTA AAA GCA GGA GAT ACA 192 Thr Asp Asp Gly Lys Leu He Pro Met Ala Val Lys Ala Gly Asp Thr 50 55 60 GTT CTT TTT AAT AAG TAT GCA GGA ACA GAA GTA AAG CTT GAT GGT GTA 240 Val Leu Phe Asn Lys Tyr Ala Gly Thr Glu Val Lys Leu Asp Gly Val 65 70 75 80 GAG CAT CTA GTT ATG CGT GAA GAT GAC ATC CTA GCT GTT ATT ACT GGA 288 Glu His Leu Val Met Arg Glu Asp Asp He Leu Ala Val He Thr Gly 85 90 95 GAA ACT GGC CGC AAG TGA 306 Glu Thr Gly Arg Lys * 100 (2) IN FORMACIÓN PARA SEQ ID NO:4: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 101 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:4 Met Asn Leu Lys Pro Leu Asn Asp Arg Val Leu Val Lys Arg Leu Glu 1 5 10 15 Ser Glu Glu Lys Thr Ala Gly Gly Leu Tyr He Pro Aßp Thr Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Pro Ser Arg Gly Glu Val Val Ala Val Gly Pro Gly Lys His 35 40 45 Thr Asp Asp Gly Lyß Leu He Pro Met Ala Val Lys Ala Gly Asp Thr 50 55 60 Val Leu Phe Asn Lyß Tyr Ala Gly Thr Glu Val Lys Leu Asp Gly Val 65 70 75 80 Glu His Leu Val Met Arg Glu Asp Asp He Leu Ala Val He Thr Gly 85 90 95 Glu Thr Gly Arg Lys 100 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:5: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 4972 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simpIe (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:5 AACTCCTGGT CTATCAAGAT CAACTAAAAA ATATTCTTTA TCTAATAGTT 50 GCTCAAAAAT AATTGTACCT ACAGGTAAAT GAAGAATCAA ATCTTCCCCT 100 TTTTTACCAT GACGCTGGCT CCCTTTACCA CCTTCTCCAT TTTGAGCTCT 150 ATAGTGACGT TGCACACGAA AATCATAAAG GGTTAACAAA CGTGAATCAG 200 CTTTAAAAAT TATATTACCT CCATCTCCTC CATCCCCTCC ATTAGGTCCA 250 CCTTTAGGTA TAAACTTTTC GCGTCTAAAT GAAACACATC CATTTCCACC 300 TTTTCCTGCG CTCACGCTAA TAGTTACTTC ATCAACAAAA CGCATGATTA 350 TCCTTTCAAT AACAAATATC TATTCAATAC TGTTACTAAC TTGTTTACTG 400 TTTTTTCTAG AAAATTACCT GGCTAATTAT TATAGTTATA TCTAGATTAA 450 TGAAAAAGGA AGAAGTCATT ACACTCCTTC CTTATTAATA GAATCCTGGA 500 ATAATTATTA TACGGTGGGT TGTATATGCA CTCTACTATA TCTTTTACAT 550 TTACGAAAAT ATGTTTCATA AGTTACTATA CCATTAACTT TTGCAAATAA 600 AGTATAGTCT CTTCCCATTC CAACATTTTC TCCAGGATGA ATTTTTGTAC 650 CTAGTTGACG AACAAGGATA TTGCCTGCCA AGACTTTCTG GCCGCCGAAA 700 CGCTTTATAC CACGACGTTG TCCTGGACTA TCTCTACCAT TGCGAGAACT 750 TCCACCAGCT TTCTTATGGG CCATTTTAAT ATCTCCTTAA AGCTGAATAC 800 CTGTTACTTT TAGAGCTGTA TAGTC--TGAC GATGACCTTG GAGTTTACGT 850 GAGTCATTTC TTCTCCACTT TTTAAAAACA AGAATTTTTT TATCACGACC 900 ATGCTCAAGA ACTTTAGCTA TAACTTTAGC ATTATTAATA TATGGTGTTC 950 CAATTTGAGG AGATGAACCA CCAATCATAA AAATTTTATC AAAAAAAATT 1000 TCTGTTCCAA CTTCAGCGTC TATTTTAGAA ACAAAAATTT TAGAACCCTC 1050 TTCAACACAG AATTGTTTTC CACCAGCTTC AATAATTGCG TACATAAATA 1100 ATGTGCCTCC CAAAAAAGAC AAGAAATACT AATTTGATAT TTTCAATATT 1150 GTCAAGTAGG AACTTTATCT TTAGAATGTT AGATGTAACA ATTTTTTTAG 1200 AAAAAAAATA TTTTCAATAC AATAGGAAAA GAGGAAAAAA AAAAAGATTT 1250 TTAGAAAAAA TTTTTATTTC TCCAAAAAAT GCAAAAATAT AAAAAATTCT 1300 AATAGGATAG AAGTTATTAC TGTATTGATT TTCAAGACTT ACTTAAAAAT 1350 TTTTATAAAA AAATTTGCAT TCCCCT TTC CCAATTCCCA TAGAGAAGAT 1400 TATTTATCCT AACGATTGGT GGACGCTAAG TCCCTGCTGT TTTGATTATA 1450 TATCAAATGT TGAAACAAAT TTTGTTTAGT TTCTTTTTGT ACTCTAAAAA 1500 GAAGACAAAA AATTCTTTAT AAACTGTACA CTCTAAACAA AATAGTTCAC 1550 AATAAACAGC AATACATTAT AATTAATTGG AGGATACTAT TGTCATGAAC 1600 CTGAAACCTT TGAATGACCG TGTTTTAGTA AAACGTCTTG AATCTGAAGA 1650 AAAAACAGCT GGTGGACTCT ATATCCCTGA TACTGCTAAA GAAAAACCAT 1700 CTCGTGGTGA AGTTGTTGCT GTTGGACCTG GTAAACATAC AGATGATGGT 1750 AAATTAATAC CTATGGCTGT AAAAGCAGGA GATACAGTTC TTTTTAATAA 1800 GTATGCAGGA ACAGAAGTAA AGCTTGATGG TGTAGAGCAT CTAGTTATGC 1850 GTGAAGATGA CATCCTAGCT GTTATTACTG GAGAAACTGG CCGCAAGTGA 1900 AAAAGGCGTA AATAAAAAGA TCGGTGATCT TTAATAATTT TATTCAGTTA 1950 TAATGAAAAC ACTAATTACA CGCACTCTCT GAGAATTTTC TCAGAAAACT 2000 ATATTTAACA ATTCTAAAAT CGATATGTTT TTAGGAGGAA AACCCTAATG 2050 GCTTCTAAAG AAATCCTTTT TGATGCTAAA GCCCGTGAAA AACTTTCACG 2100 AGGTGTAGAT AAACTTGCAA ATGCTGTTAA AGTAACACTT GGACCTAAAG 2150 GCCGTAATGT CGTTATTGAA AAGTCTTTTG GTTCCCCAGT TATTACAAAA 2200 GATGGTGTAT CTGTTGCAAA AGAAATTGAA CTTGAAGATA AGTTTGAAAA 2250 TATGGGCGCT CAAATGGTTA AAGAAGTAGC TCCCAAAACT AGCGATATTG 2300 CTGGTGATGG AACTACAACA GCAACAGTCC TTGCACAAGC TATTTATCGT 2350 GAAGGTGTAA AACTTGTAGC AGCTGGTCGT AATCCTATGG CCATTAAACG 2400 TGGCATAGAT AAAGCTGTTG TTGCTGTTAC TAAAGAACTA AGCGACATTA 2450 CAAAGCCTAC TCGTGACCAA AAAGAAATAG CTCAAGTTGG AACCATTTCT 2500 GCAAACTCTG ATACAACAAT AGGTAATATC ATAGCTGAAG CTATGGCTAA 2550 AGTTGGAAAA GGAGGTGTTA TCACAGTTGA GGAAGCTAAA GGTCTTGAAA 2600 CTACATTAGA TGTGGTTGAA GGAATGAAGT TTGACCGTGG CTACCTCTCT 2650 CCATACTTTG TAACTAATCC TGAGAAAATG GTTTGTGAAC TTGATAACCC 2700 TTATATCCTT TGTAATGAGA AAAAGATTAC TAGCATGAAA GACATGCTAC 2750 CAATCTTAGA ACAAGTTGCT AAAGTAAACC GTCCACTCCT TATTATTGCT 2800 GAAGACGTAG AAGGTGAAGC ACTTGCAACA CTTGTAGTCA ATAAGCTCCG 2850 TGGAGCACTC CAAGTTGTAG CCGTAAAAGC TCCTGGTTTT GGTGAACGCC 2900 GTAAAGCTAT GCTTGAAGAT ATTGCTATCC TTACTGGAGG AGAAGCAATA 2950 TTTGAAGATC GTGGTATAAA GCTTGAAAAT GTAAGCTTGT CTTCTTTAGG 3000 AACAGCTAAA CGTGTAGTTA TTGACAAAGA AAATACTACT ATCGTTGATG 3050 GTGCTGGAAA ATCAGAAGAT ATTAAAGCTC GAGTTAAACA AATTCGTGCA 3100 CAAATTGAAG AAACAAGCTC AGATTATGAT CGTGAAAAAC TTCAAGAACG 3150 TCTTGCAAAA CTTGTTGGTG GAGTAGCTGT TATCCATGTT GGAGCTGCTA 3200 CTGAAACTGA AATGAAAGAG AAGAAGGATC GTGTAGAAGA TGCTCTAAAT 3250 GCAACAAGAG CTGCGGTTGA AGAAGGTATT GTCCCTGGTG GTGGTACTGC 3300 TTTTGTCCGC TCCATTAAAG TCCTTGATGA TATTAAACCT GCTGATGATG 3350 ATGAACTTGC TGGACTTAAT ATCATCCGTC GTTCTCTTGA AGAGCCTTTA 3400 CGTCAAATTG CTGCAAATGC TGGCTATGAA GGTTCTATTG TTGTAGAAAA 3450 AGTTCGTGAA CCAAAAGATG GTTTTGGATT TAATGCTGCA TCAGGAGAAT 3500 ATGAAGACCT TATTAAAGCT GGTGTCATTG ATCCTAAAAA AGTTACACGT 3550 ATTGCATTAC AAAATGCAGC ATCAGTAGCC TCCTTACTTC TAACTACAGA 3600 ATGCGCTATT GCTGAAAAAC CAGAACCTAA AAAAGATATG CCTATGCCTG 3650 GCGGTGGTAT GGGTGGTATG GGTGGTATGG ACGGTATGTA CTAGTCCTAT 3700 CTTCAGTACA ACTTAGATGT ATAAAAACCC CAGAAGCAAT GCTTCCGGGG 3750 TTTTATACTT TCAGCATAAA AAATTAATAT TTAATATACA GACACATTAT 3800 TTTGGTATTT ATTATTTATT ATGATCAAAT ATATAGACTG GATACAAAAA 3850 ACAACAATGA TGTTTAAAAA GGCAGGGATA GATTCACCAA AACTCTCTGC 3900 AGAACTTATA TTAAGTCATG TTTTAAATAT TACACGATTA CAAATAATAA 3950 TGACTCCTTT TGAACCTATT CCAACTAATA GCTACTCAAC GCTTAATGAT 4000 ATCATGTTAA GAAGACTCCA TGGAGAACCA ATTGCATATC TCACAGGGAA 4050 AAAAGAATTT TTTTCACGAG AATTTAAAGT CACTCAAGCC ACACTTATCC 4100 CTCGCCCAGA GACAGAGTTA CTTATAGAAT TTGTATTAAA CCATATTAAC 4150 CCAACACAAC AAATATACTT TGCAGACTTA GGTACAGGTA GTGGGTGTAT 4200 TGCAATTACA CTAGCTGCTG AAAGAAAAAA TTGGTTAGGT ATTGCTACTG 4250 ATATCTCTAG TGAAGCATTA AAAATAGCTA AACTTAATAG TTTAAAAAAT 4300 AACACTCATA GTCAACTACA GTTTCTTCAA TCAGATTTTA CACAACCACT 4350 CTGTCTACCC TCTTCATTAG ACTTATATAT CAGTAATCCT CCATATATAA 4400 GTGAAAATGA ACTGACCTCT CTTCCGCATG AAGTAATATC TTTTGAACCT 4450 AAAATAGCTC TTACACCACA TAAATGTATT CATCTTGATG AAATAAATAC 4500 CGTTTTACAC TGCTATAAAA AAATTATTAC CCAAGCAGAG ATATCCCTTA 4550 AGCCTGGAGG AATAATAATT TTAGAACATG GAGCAACACA AGCAGAAGCT 4600 ATCTTATTGT TGTTAAAAAA CAACATATGG ACAAATGTAA TAAGTCATAC 4650 TGATCTTACA AATAAAAATC GTTTTATTAC AGCATATAAG TATAAAATAT 4700 AACTTAATTA TGTTGkagAa AAAACAAAAA ATAAAAATAA GATATtAAaT 4750 ATTTtttttA aTAAAATTAA GCAAtTACTA ATATCTTTTT TTGGrTCGtt 4800 yaTtGsATwA GAAACTTTGG rGGrTrrCTa TGAACAAACA ACCATnCAAC 4850 GGCCAAnTAC ATnnCAGGnT TGGGGTCATA GGGGCCACGC TTTATGTACG 4900 TACAACCCCn ACTGAAATTC TGGnTTGnTT TGGGGGGnAA nTGGGTATCG 4950 CAACnCTnTC CCCCCCCCCT GG 4972 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:6: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 569 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (x) CARACTERÍSTICA: (E) NOMBRE/CLAVE: CDS (F) UBICACIÓN:209..569 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:6 GGTTAAAAAG TAAGGAGAAA AGGTTGGTTA AACCAAGTTT AAAAAATTAA TTTTTTTTTA 60 TTACCCAAAA AAGTTTATTA GATTAAGTAA TATTAATTTG GCCCAAAAAT TTTTTTGGGC 120 ATGGGTTTTT TGCTTTTAAA ATAGAGATGT GTAGGTAACA TTTTTTCCTC CATGAAATTA 180 TTTTTTAGGA GATGTTATCA TGATGGGG AGT TTG TTT ATT GNT GCG AAC AGG 232 Ser Leu Phe He Xaa Ala Asn Arg 1 5 TAT GAA AAC CCA TAG NAC AGG GNT GGT ACT GTC TCC AAT AAT ATT GCT 280 Tyr Glu Asn Pro * Xaa Arg Xaa Gly Thr Val Ser Asn Asn He Ala 10 15 20 AAC GCA AAT ACC ATT GGG TAT AAG CAG CA CAG GTA GTG TTT CAÁ GAC 328 Asn Ala Asn Thr He Gly Tyr Lys Gln Gln Gln Val Val Phe Gln Aßp 25 30 35 40 CTG TTT AGT CAÁ GAT TTA GCA ATA GGT TTT ACT GGA AGT CAG GGG CCA 376 Leu Phe Ser Gln Asp Leu Ala He Gly Phe Thr Gly Ser Gln Gly Pro 45 50 55 AAC CAG GCT GGT ATG GGA GCA CAG GTG GGA AGT GTT CGC ACA ATT TTT 424 Asn Gln Ala Gly Met Gly Ala Gln Val Gly Ser Val Arg Thr He Phe 60 65 70 ACA CAG GGT GCT TTT GAA CCT GGC AAT AGT GTA ACA GAT CCT GCT ATT 472 Thr Gln Gly Ala Phe Glu Pro Gly Asn Ser Val Thr Asp Pro Ala He 75 80 85 GGT GGA AAA GGT TTT TTT CAG GTT ACA TTA GAG GAT AAA GTA CAC TAT 520 Gly Gly Lys Gly Phe Phe Gln Val Thr Leu Glu Asp Lys Val His Tyr 90 95 100 ACA CGA GCA GGG AAT TTT CGT TTT ACT CAÁ GAT GGT TTT TTA AAT GAT C 569 Thr Arg Ala Gly Asn Phe Arg Phe Thr Gln Asp Gly Phe Leu Asn Asp 105 110 115 120 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:7: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 123 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:7 Ser Leu Phe He Xaa Ala Asn Arg Tyr Glu Asn Pro * Xaa Arg Xaa 1 5 10 15 Gly Thr Val Ser Asn Asn He Ala Asn Ala Asn Thr He Gly Tyr Lys 20 25 30 Gln Gln Gln Val Val Phe Gln Asp Leu Phe Ser Gln Asp Leu Ala He 35 40 45 Gly Phe Thr Gly Ser Gln Gly Pro Asn Gln Ala Gly Met Gly Ala Gln 50 55 60 Val Gly Ser Val Arg Thr He Phe Thr Gln Gly Ala Phe Glu Pro Gly 65 70 75 80 Asn Ser Val Thr Asp Pro Ala He Gly Gly Lys Gly Phe Phe Gln Val 85 90 95 Thr Leu Glu Asp Lys Val His Tyr Thr Arg Ala Gly Asn Phe Arg Phe 100 105 110 Thr Gln Asp Gly Phe Leu Asn Asp (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:8: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1450 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN:3..414 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN.- 1083..1450 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:8 GA TCT AAA GAG TCT ACA TAT ATT GCC CGA Í.TT GAA AAT TCT ACA AGT 47 Ser Lyß Glu Ser Thr Tyr He Ala Arg He Glu Asn Ser Thr Ser 1 5 10 15 GAA AAA ACA CTA AAT GAT CTT GAT ATA CTT TTA AAA GAT GTG ATG TTA 95 Glu Lys Thr Leu Asn Asp Leu Asp He Leu Leu Lys Asp Val Met Leu 20 25 30 ACA TCA AAA AAG CAT GAA TCA CGT AGA CTT GCA GAG TCT GTA CAT CAÁ 143 Thr Ser Lys Lys His Glu Ser Arg Arg Leu Ala Glu Ser Val His Gln 35 40 45 AAT ATT CTT ACC CAC CTT ATA CAÁ AAA AAT TAT AAT ACT CAC AAT GGT 191 Asn He Leu Thr His Leu He Gln Lys Asn Tyr Aßn Thr His Asn Gly 50 55 60 GGG ATA AAA TCT GCA CCT TTT CAT GTT CTT ATA GGA CCC AAA ATA CCA 239 Gly He Lys Ser Ala Pro Phe His Val Leu He Gly Pro Lys He Pro 65 70 75 AGT ATT CTT GTT GAA GTA GGT TAC TGT AGT AAT AAA GCT GAA GCA CAG 287 Ser He Leu Val Glu Val Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Ala Glu Ala Gln 80 85 90 95 CGT CTG GCA TCT AGT AAT TAC CAÁ AAA GCA TTA ATA GAA GGA TTA GCT 335 Arg Leu Ala Ser Ser Asn .Tyr Gln Lys Ala Leu He Glu Gly Leu Ala 100 105 110 AAA GGT ATT TTC TGT TAC CTA AAA AAA CTA CAT CAC CTT GAT ATT TAC 383 Lyß Gly He Phe Cys Tyr Leu Lyß Lys Leu His His Leu Asp He Tyr 115 120 125 TCT AGT TTT ATY CTA TCT AAT TGC ACT TAA T AGCTTGGACA ATTATTATAT 434 Ser Ser Phe He Leu Ser Asn Cys Thr * 130 135 GAAGGGTATC CATGTGAAGG TACCTGGTTA AGCTTTTAAA TGTAAAAATT ATGCAACCAT 494 ACYTTATTCC TTCAGAGGAG CTTCATTATG AAAGTAAAAA CTCTTTCCAT GGCTATTTTA 554 GCTTGTTTAT TAGTAGCTAA CAGTGCATTT TCGGCTGACT TCCCTATTGG TGTCTTTAAT 614 TCTCAATCCA TTGCCATGGA GAGTGAAGCA GCTAAGGCCG CTCAAAAAAA ATTACAATCA 674 GAATTTGGTA ATGAAAAAAC ACAACTTGAA AACAAGCAAA AGWTTGCMAA CAAAAGCTGA 734 TGATTTACAA GCTWAGTCAG CAGCTATGTY TAACCAAGCA CGTGAAGATA AACAAAGAGA 794 ATTTCTTGAA CTTCGTCGTA ATTTCGAAGA AAAATYTCGT GACTTTGCAA TACGTGTCGA 854 ACAAGCTGAA AACACATTAC GTCAATATNT AGCTGAACAA ATNTATNTTG CTGCTGAAAC 914 TATAGCAAAA AAGAAAGGGT TAAACTTGTT TTGATAGTGT TAGGGAAGTG TAATGTACCT 974 TGAAAAAAAT TTAGATATTA CAAAGAAATT YTTGAAGCCA TAAATGCTGC ATGGAAAAAA 1034 GGTGGAAGTA AACTTCCAGA GATGGCAAAC CGGAAAAAAT AACAG ATG CCC CAG TAT 1091 Met Pro Gln Tyr 1 AAA CTT TCA GAA ATT GCT AAA CTT TTA AAC TTA ACA TTA CAÁ GGT GAT 1139 Lys Leu Ser Glu He Ala Lys Leu Leu Asn Leu Thr Leu Gln Gly Asp 5 10 15 20 GAT ATT GAA GTT GTA GGC GTA AAT ACA CTT CAÁ GAT GCA TCA CCA AAT 1187 Asp He Glu Val Val Gly Val Asn Thr Leu Gln Asp Ala Ser Pro Asn 25 30 35 GAG ATA AGT TTT CTA GCA AAT GCT AAA TAT ATT CAC CAG CTT GTT TTG 1235 Glu He Ser Phe Leu Ala Asn Ala Lys Tyr He His Gln Leu Val Leu 40 45 50 TCA CAG GCT GGT GCT ATT ATT CTT TCA AAA GAA TAT GCT AGT CGT GTT 1283 Ser Gln Ala Gly Ala He He Leu Ser Ly«« Glu Tyr Ala Ser Arg Val 55 60 65 CCA CGA GCA CTA ATC AGT ACT GAA CCA TAT AGA GAT TTT GGT AGA GTT 1331 Pro Arg Ala Leu He Ser Thr Glu Pro Tyr Arg Asp Phe Gly Arg Val 70 75 80 CTT TCT TTA TTC TCT ATA CCT CAÁ GGA TGT TTT GAT GGT ATA AGT CAT 1379 Leu Ser Leu Phe Ser He Pro Gln Gly Cys Phe Asp Gly He Ser His 85 90 95 100 CAÁ GCT TAT ATA CAC CCT ACA GCA CAÁ GTC TCT AAA ACA GCT ACT ATC 1427 Gln Ala Tyr He Hiß Pro Thr Ala Gln Val Ser Lyß Thr Ala Thr lie 105 110 115 TAT CCT TTn GTT TTT ATA GGA TC 1450 Tyr Pro Xaa Val Phe He Gly 120 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:9: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 137 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:9 Ser Lys Glu Ser Thr Tyr He Ala Arg He Glu Asn Ser Thr Ser Glu 1 5 10 15 Lys Thr Leu Asn Asp Leu Asp He Leu Leu Lys Asp Val Met Leu Thr 20 25 30 Ser Lys Lys His Glu Ser Arg Arg Leu Ala Glu Ser Val His Gln Asn 35 40 45 He Leu Thr His Leu He Gln Lys Asn Tyr Asn Thr His Aen Gly Gly 50 55 60 He Lys Ser Ala Pro Phe His Val Leu He Gly Pro Lys He Pro Ser 65 70 75 80 He Leu Val Glu Val Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Ala Glu Ala Gln Arg 85 90 95 Leu Ala Ser Ser Asn Tyr Gln Lys Ala Leu He Glu Gly Leu Ala Lys 100 105 110 Gly He Phe Cys Tyr Leu Lys Lys Leu His His Leu Asp He Tyr Ser 115 120 125 Ser Phe He Leu Ser Asn Cys Thr * 130 135 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 10: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 123 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 10 Pro Gln Tyr Lys Leu Ser Glu He Ala Lys Leu Leu Asn Leu Thr Leu 1 5 10 15 Gln Gly Asp Aep He Glu Val Val Gly Val Asn Thr Leu Gln Asp Ala 20 25 30 Ser Pro Aen Glu He Ser Phe Leu Ala Aen Ala Lys Tyr He His Gln 35 40 45 Leu Val Leu Ser Gln Ala Gly Ala He He Leu Ser Lys Glu Tyr Ala 50 55 60 Ser Arg Val Pro Arg Ala Leu He Ser Thr Glu Pro Tyr Arg Asp Phe 65 70 75 80 Gly Arg Val Leu Ser Leu Phe Ser He Pro Gln Gly Cys Phe Asp Gly 85 90 95 He Ser His Gln Ala Tyr He His Pro Thr Ala Gln Val Ser Lys Thr 100 105 110 Ala Thr He Tyr Pro * Val Phe He Gly 115 120 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 1 1 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 559 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simpIe (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN.-3..557 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 1 1 GA TCA AAG CCG CAT TTA CNG CAÁ GAG T.'A GAA ATT GAA GTT TTG AAA 47 Ser Lys Pro His Leu Xaa Gln Glu Leu Glu He Glu Val Leu Lys 1 5 10 15 AAA GAA GAC TTT GGG CGT CAT ATT GTT AAA TTA TGC TGG AAA GGT TCT 95 Lys Glu Asp Phe Gly Arg His He Val Lys Leu Cys Trp Lys Gly Ser 20 25 30 TTA TCA AAT ATC TTT TTT TCC TAT GGG GAT ATC CCG CAC CCA CCT TAT 143 Leu Ser Asn He Phe Phe Ser Tyr Gly Asp He Pro His Pro Pro Tyr 35 40 45 ATA CAT CAÁ AGT AAT AAG GTT CAG GAT AAG GAA AGA TAT CNT ACN GTA 191 He His Gln Ser Asn Lys Val Gln Asp Lys Glu Arg Tyr Xaa Xaa Val 50 55 60 TAC TCT ATA TTA CAT AAN CTG GGT TCT GTA GCA GCT CCT ACA GCT GGA 239 Tyr Ser He Leu His Xaa Leu Gly Ser Val Ala Ala Pro Thr Ala Gly 65 70 75 TTA CNC TTT TCT GAA ACT AGC CGT NAT AAA TTA CAC AAA NAT GGT ATT 287 Leu Xaa Phe Ser Glu Thr Ser Arg Xaa Lys Leu His Lyß Xaa Gly He 80 85 90 95 AGT TGG GCA TAA ATC CCT CTT CAC GTG GGA TAT GGA ACA TTC AGT CCC 335 Ser Trp Ala * He Pro Leu Hiß Val Gly Tyr Gly Thr Phe Ser Pro 100 105 110 GTC CTC TGC AAT GAC ATC CCA AAA CAT CTT ATC CNT TCT GAG TTT GTT 383 Val Leu Cyß Aßn Asp He Pro Lys His Leu He Xaa Ser Glu Phe Val 115 120 125 CAC TTT CCT GAA ACT ACN TTT TCC ACT ATA TTA AAT GCA CGG TTT GCA 431 His Phe Pro Glu Thr Xaa Phe Ser Thr He Leu Asn Ala Arg Phe Ala 130 135 140 NGG GAA TAC CTA TGT TCT GCC ATA GGG GAC CCA CTG TTG TCC CCA CCA 479 Xaa Glu Tyr Leu Cys Ser Ala He Gly Asp Pro Leu Leu Ser Pro Pro 145 150 155 TTG GAN GGG TGT TAT CTT ACC CCT TTC GCC CGG GGT TCC CCT CCC CAÁ 527 Leu Xaa Gly Cys Tyr Leu Thr Pro Phe Ala Arg Gly Ser Pro Pro Gln 160 165 170 175 CCC TAT TCC ATT GNG TTT TCC TCT CAÁ ATT AT 559 Pro Tyr Ser He Xaa Phe Ser Ser Gln He 180 185 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:12: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 185 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (x) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 12 Ser Lys Pro His Leu Xaa Gln Glu Leu Glu He Glu Val Leu Lye Lys 1 5 10 _-> Glu Asp Phe Gly Arg His He Val Lys Leu Cys Trp Lys Gly Ser Leu 20 25 30 Ser Asn He Phe Phe Ser Tyr Gly Aßp He Pro His Pro Pro Tyr He 35 40 45 His Gln Ser Asn Lys Val Gln Asp Lys Glu Arg Tyr Xaa Xaa Val Tyr 50 55 60 Ser He Leu 2-ie Xaa Leu Gly Ser Val Ala Ala Pro Thr Ala Gly Leu 65 70 75 80 Xaa Phe Ser Glu Thr Ser Arg Xaa Lys Leu His Lys Xaa Gly He Ser 85 90 95 Trp Ala * He Pro Leu His Val Gly Tyr Gly Thr Phe Ser Pro Val 100 105 110 Leu Cys Asn Asp He Pro Lyß His Leu He Xaa Ser Glu Phe Val His 115 120 125 Phe Pro Glu Thr Xaa Phe Ser Thr He Leu Aßn Ala Arg Phe Ala Xaa 130 135 140 Glu Tyr Leu Cys Ser Ala He Gly Aßp Pro Leu Leu Ser Pro Pro Leu 145 150 155 160 Xaa Gly Cys Tyr Leu Thr Pro Phß Ala Arg Gly Ser Pro Pro Gln Pro 165 170 175 Tyr Ser He Xaa Phe Ser Ser Gln He 180 185 (2) IN FORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 13: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SEC UENCIA: (A) LONGITUD: 477 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN:2..294 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 13 T ATA AAA CA'i' TAG CGN CTT TNG TAT TTG GAC TTC AAA AAA ATT TTT 46 He Lys His -* * Leu * Tyr Leu Asp Phe Lys Lys He Phe 1 5 10 15 AAT TAT ATA GGA GAA CAT TCA CCA TTA AAA CGT AAT GTA ANT ATG GAA 94 Asn Tyr He Gly Glu His Ser Pro Leu Lys Arg Asn Val * Met Glu 20 25 30 GAT GTA GGT AAA TCT GCT GTT TTT TTA GCT TCA GAC CTN TCA TCA GGA 142 Asp Val Gly Lys Ser Ala Val Phe Leu Ala Ser Asp * Ser Ser Gly 35 40 45 GTA ACC GGT GAA TTN TTT TTG TTG ATG CTG GNA CAÁ TAA TTT AGG TAT 190 Val Thr Gly Glu * Phe Leu Leu Met Leu * Gln * Phe Arg Tyr 50 55 60 TTA ACC ATA CAT GCT TTA TAC AAC ATA TTG TGA GTT ACA ATA GCC ATA 238 Leu Thr He Hie Ala Leu Tyr Asn He Leu * Val Thr He Ala He 65 70 75 ACA CAT TTA TAT TCT ATA TAA TAA CAG TAG AAT AAT AAT AGA ATA TTT 286 Thr Hie Leu Tyr Ser He * * Gln * Asn Asn Asn Arg He Phe 80 85 90 95 TTT ATG ACC ATTTGTATCT ATACAATAGT AAATAGATTA ATACATATAA GACTATATTC 344 Phe Met Thr TTTTTGAGAG CAACTTAAAG GAGCGGTTAT GGCTTTAGTT ACAAAAGAAG AAGTACTTCA 404 ATACCATAGT GAACCCCGAC CAGGTAAACT TGAAGTATTT TCTATAAAAC CATGTAAAAC 464 ACAAAAAGAT CC 477 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 97 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 14 He Lys His * Xaa Leu Xaa Tyr Leu Asp Phe Lyß Lys He Phe Asn 10 15 Tyr He Gly Glu His Ser Pro Leu Lys Arg Aßn Val Xaa Met Glu Asp 20 25 30 Val Gly Lyß Ser Ala Val Phe Leu Ala Ser Aßp Xaa Ser Ser Gly Val 35 40 45 Thr Gly Glu Xaa Phe Leu Leu Met Leu Xaa Gln * Phe Arg Tyr Leu 50 55 60 Thr He His Ala Leu Tyr Asn He Leu * Val Thr He Ala He Thr 65 70 75 80 His Leu Tyr Ser He * * Gln * Asn Asn Asn Arg He Phe Phe 85 90 95 Met (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 525 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:sim?le (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: CDS (B) UBICACIÓN:2..525 (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 15 G GAA TTG TTA GTA TTC TCC CAG AAC AGA AGC CAÁ AAT ATT TGG CTA 46 Glu Leu Leu Val Phe Ser Gln Asn Arg Ser Gln Asn He Trp Leu 1 5 10 15 CTT ACA TTA CCT ATT TTT GTG TTA GGT ATA GCA CAÁ GGT ATA TCA TTT 94 Leu Thr Leu Pro He Phe Val Leu Gly He Ala Gln Gly He Ser Phe 20 25 30 CCT TTA GTA AAC AGC CAC ATT ACA TCA CTT GCA CCA ACA TCC AAC AGA 14"> Pro Leu Val Asn Ser His He Thr Ser Leu Ala Pro Thr Ser Asn Arg 35 40 45 GCT ATT GTT ATG GCT ATA AAC AGT ACA TTT ATG AGG TTA AGT CAG AGT 190 Ala He Val Met Ala He Asn Ser Thr Phe Met Arg Leu Ser Gln Ser 50 55 60 ATT TCG CAÁ ATG GTT TTT GGT ATT GGA TGG TCA TTT TTT GGT TGG CCT 238 He Ser Gln Met Val Phe Gly He Gly Trp Ser Phe Phe Gly Trp Pro 65 70 75 GGT CCT TTT ATA TTT GGT CTT TTT ACT TCT ATT ATA TTA GCC CTC TTA 286 Gly Pro Phe He Phe Gly Leu Phe Thr Ser He He Leu Ala Leu' Leu 80 85 90 95 ATT ATG AAG TAT TTT CAÁ GAT GTA ACC CAÁ TAT CAC CTA TTT TTG ATA 334 He Met Lys Tyr Phe Gln Asp Val Thr Gln Tyr His Leu Phe Leu He 100 105 110 AGT AGT AAA TTT TAT TAT TAA AAA GCT TAG TTA GTT AAG ATT ACA TAT 382 Ser Ser Lys Phe Tyr Tyr * Lys Ala * Leu Val Lys He Thr Tyr 115 120 125 ATT ATA TAC AAT TAC TAT AAC ATT AAC TAA TTA CTA ACT ATT ACT TCC 430 He He Tyr Asn Tyr Tyr Asn He Asn * Leu Leu Thr He Thr Ser 130 135 140 AAT TGA TTA ATT GAT GCT ATT TAA AGA GGA TAT ATT AAT GAT GTC ATG 478 Asn * Leu He Asp Ala He * Arg Gly Tyr He Asn Asp Val Met 145 150 155 GCT CAC AAT AGG TGT TAT CCT TGG ATT AGT GCA TGG GAT CCA GGT CC 525 Ala His Asn Arg Cys Tyr Pro Trp He Ser Ala Trp Asp Pro Gly 160 165 170 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 174 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 16 Glu Leu Leu Val Phe Ser Gln Asn Arg Ser Gln Asn He Trp Leu Leu 1 5 10 15 Thr Leu Pro He Phe Val Leu Gly He Ala Gln Gly He Ser Phe Pro 20 25 " 30 Leu Val Asn Ser His He Thr Ser Leu Ala Pro Thr Ser Asn Arg Ala 35 40 45 He Val Met Ala He Asn Ser Thr Phe Met Arg Leu Ser Gln Ser He 50 55 60 Ser Gln Met Val Phe Gly He Gly Trp Ser Phe Phe Gly Trp Pro Gly 65 70 75 80 Pro Phe He Phe Gly Leu Phe Thr Ser He He Leu Ala Leu Leu He 85 90 95 Met Lyß Tyr Phe Gln Asp Val Thr Gln Tyr His Leu Phe Leu He Ser 100 105 110 Ser Lyß Phe Tyr Tyr * Lyß Ala * Leu Val Lyß He Thr Tyr He 115 120 125 He Tyr Asn Tyr Tyr Aßn He Asn * Leu Leu Thr He Thr Ser Asn 130 135 140 * Leu He Asp Ala He * Arg Gly Tyr He Asn Asp Val Met Ala 145 150 155 160 His Asn Arg Cye Tyr Pro Trp He Ser Ala Trp Asp Pro Gly 165 170 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:17: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 846 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 17 TATTTACTCG CGCGGCCGGG CGTCTTACAC AAATGGATCC CTTGCANTAA TCCAAGGATA 60 ACNCCTATTG TGANCCATGA ACATCATCAN NATATCCTCT TTANATAGCA TCNANNNNTC 120 AANNGGAATT AACAGTTACT ANNTAGTTAA TGTCATAGTA ATTGTCNATA ATATATGTAA 180 TCTTAACTAA CTAAGCTNNT TAATAATAAA ATTNACTACT TATCAANAAT AGGTGATATN 240 GGGTTACATC TTGAAAATAC TTNCCATAAT TANGAGGGCT AATATAATNG AANTAAAAAG 300 ACCANATATA AAAGGACCAG GCCAACCAAA AAATGACCAT CCAATACCNA AAACAATTGG 360 CGAAAATACT CTGACTTAAC CTCANAAATG TACTGTTTAT AGCCATATCA ATAGCTCTGT 420 TGGATGTNGG NGCAATTGAT GTAATGTGGC TGTNTACTAN ANGAAATGAT NTACCTCGTG 480 CTATNCCTAN NACAANAATA NGTAATGTAA GTANCCNAAT ATCTTGGCTT TGTAATGGGA 540 GAATAATNNC AAGTCCTTGG GAAATNAANT TACNNCCAGC CAGCTATNNT AAGCAGTTCT 600 NTGGTGACTA TACGTCCTAC TNAANTCGTG CCAAAGATTA AATANNCGAT AATCGCNCTN 660 CCTAAANCAN GCAATACTAA AATGGTTTCT NCCTANCTTG GNATANGGTG GAAGCNCGGA 720 CAGAATTNAN TTCGCNANTT TANANNGGAA NATNCGTNAA NTTANTCGGG GCCCANNCCN 780 AAATTCCTNA NTCNATANAN NAACTNNCTN CTNTAAAANG GCCNACTGGA NTNGTTAAAT 840 GAAATA 846 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 855 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO: 18 GATTNTTTAT CGATCACTNT AGACGCGATT TGGGNAACAC TTACCTGGTA NCCACCCGGG 60 TGGAAAAATC GATGGGCCCG CGGCCGCTCT AGAAGTACTC TCGAGAAGCT TTTTGAATTC 120 TTTGGATCCT CAACACAGGG TATGGATTAA AACAACTTTA GCTCTAACAG GAGCATTTTA 180 TAATATATTC CCTGGTAGAA CAATATCTAC TCAAGAAAAT CTGTCTATTG GTTTTCAACT 240 AAAAAAAACT TTTAAACCTT TTCATTGGAC CATCTTACTC TTAGATGAAC ATTATATGTC 300 TTCGCCAAGA ATTGCAGCAG CAATTATGCC TGCACAGCTT GCTGGAGTTA AAAACATTAT 360 AGCTGTTTGG ACCAGTAAAA ATAACCGACT GACCGCTGAA AAAATCTCAC CTGCTTTACT 420 AACAACATTA GAACTTTCAG GAGTTAACAT AGCCCTAACA CTTACCCACA CTGAAACTGA 480 ACTTCTTATT CATCAATTAA TGAAAATAGG TATTGGAAAC CTGTTATATT TTTTAAAAGA 540 AGAAGACATA CTACATATAT CTACTATACC TGTACTACCT TTCTGGAAAG AATATACTTC 600 TCATCGACTT GTTATAGAAA AAGATGCTGG CNTTAATACA GAAATCCTCC AATGGGCNCA 660 TCCTCATTCA ATTATTGAAC AAATAGCAAC AGAACCATAC TCTGAAANAT ATCCCAGATG 720 CACTTTACTG TGCTAGCTCA TCCANTAAAA ACTATNCTCA TANAGNATCC CCAGAATTTT 780 TCATNATGGA CTTGAACCTA TTTGGATTCA NCCCAACNCT TCCTCCAANC CTCCTTTCTC 840 CATACACCAT GGGGA 855 (2) IN FORMACIÓN PARA SEQ ID NO: 19: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1082 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:19 TATCTNGTTG ANTCAATAAA ACTTTTGGGG CCCNTNAAAN TTTCATNANN AAAAAAACAA 60 NATTNCTGGG GGNCCCNTCC CAAAAAANNC AATCANTNNG AANCTTGNCT TCTTATTNNG 120 NTTTTNANAC TATAATATNT NTTATCNATA ATNN?TCNNT ATACTNATTT CTNATTCANT 180 NACANNGGNN AGNAANNTTA ATCTNAAANA CTNCNAAGGG GGNNNTNATA NTNTTTNTTT 240 NTTTNTCCCN TNNAATNNAT AACCNNNCAC CCNNATTANT TNNAATNNAT ACCATANCNN 300 CCTTTCAAAC TGTACACATA NTANNNAANN ACACTCNANC NTTTTNCATC CTCTCTANTN 360 CCNACTCCNA TNNANCTNTT CCCCCATNCC TATNTNTCNC TGCTTCCCAG NTTNNACNTN 420 NCTTNNTTTC ACANTATTCC TATCCAANCT AACATNTNTN NTNTCNTNCT CCTTNTNTNT 480 TATNTNTTTC TNNTACCTNN CACTGACANT CTATNANTNA NNTCNNATAC TNNTATANCT 540 NTANGCNANT NTATCTANAA NTNTANCNNN NNATCNTNAC NGCCGTNNAT NTNNNNNCAN 600 TTANNTANNN CTANCNTNNC CAANNNCNTA TNTATNAATA ACNACTATCC NATATTNNAT 660 TNNNTNNTNT CNTANNCAAA TNATTTANGC NCACNNCACT ANGTNATATN ANNATTNTAT 720 ATTNTGAANC TTCTNGGCTT CNCNAATANT ACCANTNNNC ANCNTCNNNT NCATCTNNNT 780 NTACTTCNTA CCATANCGCT CTCNAGNNTC ACTACTTCTA NTAGTNATCN TCTACTGCCN 840 ATGGCNNNNN GCNNNNCGAN AGNTATNCAC NTACANTNNC NTCTACTATN TANATCTANN 900 NCNTCCGNNG CCTNCNGTAC GNNTNGGCNA ANTCGNNTAC TTTNCNTNTA TCTAGTCNCA 960 TCAGNNNTNG ANTCCTCAAN CNNGCTCTAN TTACATGTNN NNTNATGCNC TANANCGNNA 1020 CNTCTATCCT TCNANTCTGC NCTNANTNTA TANACTCTNN NNNATCNNCN AANCTATNTC 1080 CC 1082 (2) IN FORMACIÓN PARA SEQ ID NO:20: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 354 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:20 CTCCCNTNNC NCTAAGTGGA TCGCGCGCT GCAGGTCGAC ACTAGTGGAT CTTGATATAC 60 TTTTAAAAGA TGTGATGTTA ACATCAAAAA AGCATGAATC ACGTTAGACT TGCAGAGTCT 120 GTACATCAAA ATATTCTTTA CCCACCTTAA TACGAAAANA AATNNTTATN CNCCNCNATG 180 GGTGGGGNTN AAATCCTNGC CCCNTTNCCC TGTTCNTTTA GGGAACCCCC NAATTCCCCN 240 NGTTATTCCT CTGTTTGAAA NTTCTGGTTN CCCGGCCCTN TNACCAANAG CTTGANNNCC 300 NCCCCGTCCT GGGGCATCCT CNTGTTTATT TTCCCTCNAN CNCCCCCTTN ACTN 354 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:21 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 477 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:21 GGATCTTTTT GTGTTTTACA TGGTTTTATA GGAAATACTT CAAGTTTACC TGGTCGGGGT 60 TCACTATGGT ATTGAAGTAC TTCTTCTTTT GTNACTAAAG CCATAACCGC TCCTTTAAGT 120 TGTTCTCAAA AAGAATATAG TCTTATATGT ATTAATCTAT TTACTATTGT ATAGATACAA 180 TAGGTCATAA AAAATATTCT ATTATTATTC TACTGTTATT ATATAGAATA TAAATGTGTT 240 ATGGCTATTG TAACTCACAA TATGTTGTAT AAAGCATGTA TGGTTAAATA CCTAAATTAT 300 TGTNCCAGCA TCAACAAAAA NAATTCACCG GTTACTCCTG ATGANAGGTC TGAAGCTAAA 360 AAAACAGCAG ATTTACCTAC ATCTTCCATA NTTACATTAC GTTTTAATGG TGAATGTTCT 4 0 CCTATATAAT TAAAAATTTT TTTGAAGTCC Z-AATACNAAA GNCGCTAATG TTTTATA 477 (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:22: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 568 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (¡i) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:22 GATCATTTAA AAAACCATCT TGAGTAAAAC GAAAATTCCC TGCTCGTGTA TAGTGTACTT 60 TATCCTCTAA TGTAACCTGA AAAAAACCTT TTCCACCAAT AGCAAGATCT GTTACACTAT 120 TGCCAGGTTC AAAAGCACCC TGTGTAAAAA TTGTGCGAAC ACTTCCAACC TGTGCTCCCA 180 TACCAGCCTG GTTTGGCCCC TGACTTCCAG TAAAACCTAT TGCTAAATCT TGACTAAACA 240 GGTCTTGAAA CACTACCTGT TGCTGCTTAT ACCCAATGGT ATTTGCGTTA GCAATATTAT 300 TGGAGACAGT ACCANCCCTG TNCTATGGGT TTTCATACCT GTTGGCANCA ATAAACAAAC 360 TCCCCATCAT GATAACATCT CCTAAAAAAT AATTTCATGG NGGNAAAAAT GTTACCTACA 420 CATCTCTATT TTNAAAGCAA AAAACCCATG CCCAANAAAA TTTTTGGGCC NAATTAATAT 480 ACTTAATCTA ATAAACTTTT TTGGGTAATN AAAAAAAATT AATTTTTTAA ACTTGGTTTN 540 ACCAACCTTT TCTCCTTACT TTTTAACC (2) INFORMACIÓN PARA SEQ ID NO:23: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 477 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) FILAMENTO:simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: DNA (xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: SEQ ID NO:23 GGTACCCCAC CCGC 7T-.C--AA AATCGATGGG CCCGCGGCCG CTCTAAAANT 50 ACTCTCGAGA AGCTTTTTGA ATTCTTTGGA TCCCCAGGAA TAACTTGTTG 100 ACGGAATTTT ACATTTTCTA TCCCTGCAAA TANAAAAACT TTACCTTGTA 150 GTTCATTAAT AGGAAAAGAT TGGAGTACTG TGATTCCACC TGATTGCGCC 200 ATAGCTTCTA AAATTAGAAC TCCAGGCATG ACAGGAAATC CAGGGGAAAT 250 GACCCNGAAA AAATGGTTCA TTAATACTAA CATTTTTATA AGCTTTAATA 300 TATTTGCCAG CATTAAATTC AATAACTCTA TCTACAATTA AAAAGGGATA 350 ACGGTGGGGA ATTTACTGTA AAATTTCTTG GATATTTTGG AGGTATGGAT 400 GGGGACATTA ATTTTCCTAT ATATATGCTC TTTTTCTTTT CNAAAATTTT 450 TCAGCTTTTT TATCCCNTAA AAACCTC 467

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición de vacuna para la profilaxis o tratamiento de infección en un animal o ave por Lawsonia intracellularis o microorganismo relacionado, comprendiendo dicha composición de vacuna una forma inmunogénica, no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado o un componente inmunogénico del mismo y uno o más portadores, diluyentes y/o auxiliares adecuados para uso veterinario o farmacéutico.

2. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 1 , en donde la composición es para la profilaxis o tratamiento de infección en cerdos por L. intracellularis o microorganismo relacionado.

3. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 2, en donde la forma no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado es una especie atenuada del microorganismo.

4. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 2, en donde la forma no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado es una preparación muerta del microorganismo.

5. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 2, en donde la forma no patogénica de L. intracellularís o microorganismo relacionado es una preparación muerta en formalina del microorganismo.

6. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 1 o 2, en donde dicha composición comprende una molécula de péptido, polipéptido, proteína, carbohidrato, lípido o ácido nucleico o una combinación de las mismas de L. intracellularis o microorganismo relacionado en una cantidad efectiva para inducir un agente de respuesta inmune protectora de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

7. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 6, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido, proteína o un derivado de los mismos de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

8. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 7, en donde el péptido, polipéptido o proteína está en forma recombinante.

9. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 7 u 8, en donde la composición comprende una proteína redoblada/choque de calor, una proteína de bastoncito de cuerpo basal flagelar, S-adenosilmetionina: tRNA ribosiltransferasa-isomerasa, autolisina, enoil-(acil-portador-proteína) reductasa o un transportador de glucarato o derivado de los mismos.

10. Una vacuna de acuerdo a la reivindicación 9, en donde la proteína es GroEL que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:2 o es una proteína que tiene por lo menos aproximadamente de similitud con la misma.

1 1 . Una vacuna de acuerdo a la reivindicación 9, en donde la proteína es GroES que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:4 o es una proteína que tiene por lo menos aproximadamente de similitud con la misma.

12. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 1 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

13. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:3 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

14. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:5 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

15. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:6 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

16. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:8 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

17. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde ia composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 1 1 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

18. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 13 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

19. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:15 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

20. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 17 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

21. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 18 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

22. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ I D NO: 19 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

23. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:20 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

24. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8. en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:21 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

25. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada mediante una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:22 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con la misma.

26. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:7 o una secuencia que tiene por lo menos 40% de similitud.

27. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:9 o una secuencia que tiene por lo menos 40% de similitud.

28. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10 o una secuencia que tiene por lo menos 40% de similitud.

29. Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12 o una secuencia que tiene por lo menos 40% de similitud.

30. Una composición de vacuna de acuerdo a ia reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14 o una secuencia que tiene por lo menos 40% de similitud.

31 . Una composición de vacuna de acuerdo a la reivindicación 8, en donde la composición comprende un péptido, polipéptido o proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16 o una secuencia que tiene por lo menos 40% de similitud.

32. Un método para vacunar un animal o ave contra infección por L. intracellularis o microorganismo relacionado o tratar un animal o ave infectado por L. intracellularis, comprendiendo dicho método administra a dicho animal o ave una cantidad efectiva de una forma no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado o un componente inmunogénico del mismo durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

33. Un método de acuerdo a la reivindicación 32, en donde el animal es un cerdo.

34. Un método de acuerdo a la reivindicación 33, en donde la forma no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado es una especie atenuada del microorganismo.

35. Un método de acuerdo a la reivindicación 33, en donde la forma no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado es una preparación muerta del microorganismo.

36. Un método de acuerdo a la reivindicación 33, en donde la forma no patogénica de L. intracellularis o microorganismo relacionado es una preparación muerta en formalina del microorganismo.

37. Un método de acuerdo a la reivindicación 32 y 33, en donde dicho componente inmunogénico comprende una molécula de péptido, polipéptido, proteína, carbohidrato, lípido o ácido nucleico o una combinanción de las mismas de L. intracellularis o microorganismo relacionado en una cantidad efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

38. Un método de acuerdo a la reivindicación 37, en donde dicho componente comprende un péptido, polipéptido, proteína o un derivado de los mismos de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

39. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el péptido, polipéptido o proteína está en forma recombinante.

40. Un método de acuerdo a la reivindicación 29 o 30, en donde el componente inmunogénico es una proteína redoblada/choque de calor, una proteína de bastoncito de cuerpo basal flagelar, S-adenosilmetionina: tRNA ribosiltransferasa-isomerasa, autolisina, enoil-(acil-portador-proteína) reductasa o un transportador de glucarato o derivado de los mismos.

41. Un método de acuerdo a la reivindicación 40, en donde la proteína es GroEL que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en SE ID NO:2 o es una proteína que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

42. Un método de acuerdo a la reivindicación 40, en donde la proteína es GroES que tiene una secuencia de aminoácidos expuesta en SE ID NO:4 o es una proteína que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

43. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 1 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

44. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:3 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

45. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:5 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

46. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:6 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

47. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendc 3EQ ID NO:8 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

48. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 1 1 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

49. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótídos comprendiendo SEQ ID NO: 13 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

50. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 15 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

51. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:17 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

52. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptído o proteína codificada por una secuencia de nucíeótidos comprendiendo SEQ ID NO: 18 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

53. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO: 19 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

54. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:20 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

55. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:21 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

56. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína codificada por una secuencia de nucleótidos comprendiendo SEQ ID NO:22 o una secuencia que tiene por lo menos aproximadamente 40% de similitud con ella.

57. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:7 o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella.

58. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:9 o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella.

59. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 10 o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella.

60. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 12 o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella.

61. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ I D NO: 14 o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella.

62. Un método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el componente inmunogénico comprende un péptido, polipéptido o proteína comprendiendo una secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:16 o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella.

63. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1 , y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

64. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:3 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:3, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

65. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:5 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:5, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

66. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:6 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con ia secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:6, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

67. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:8 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:8, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

68. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 1 1 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1 1 , y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

69. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 13 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 13, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

70. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 15 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:15, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína ¡nmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

71 . Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 17 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 17, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

72. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 18 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:18, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

73. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO: 19 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:19, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

74. Una molécula de áci-ío nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:20 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:20, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptído o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

75. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:21 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:21 , y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

76. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia como se expone en SEQ ID NO:22 o una secuencia de nucleótidos que tiene por lo menos 40% de similitud con la secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:22, y la cual es capaz de hibridar a la misma bajo condiciones de severidad baja y la cual codifica un péptido, polipéptido o proteína inmunogénico de L. intracellularis o microorganismo relacionado.

77. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1 , o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 1 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

78. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:3, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:3 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

79. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:5, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:5 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

80. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:6, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:6 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

81. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:8, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:8 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

82. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 1 1 , o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 1 1 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

83. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 13, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 13 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

84. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 15, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 15 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

85. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 17, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 17 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

86. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 18, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 18 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

87. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO: 19, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO: 19 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

88. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tie/ie una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:20, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:20 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

89. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:21 , o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:21 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.

90. Una vacuna genética comprendiendo una secuencia de DNA que tiene una secuencia de nucleótidos expuesta en SEQ ID NO:22, o que tiene por lo menos 40% de similitud con ella o es capaz de hibridar a SEQ ID NO:22 bajo condiciones de severidad baja, siendo capaz dicha secuencia de DNA de expresión en un cerdo para producir una cantidad de un péptido, polipéptido o proteína efectiva para inducir una respuesta inmune protectora contra L. intracellularis o microorganismo relacionado.