MXPA97010078A - Nuevos anfifilos cationicos y policationicos;reactivos que contienen los mismos y su uso - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a nuevos anfifilos catiónicos o policatiónicos que son capaces de formar agregados con macromoléculas, en particular con ADN o ARN, y se relaciona su distribución en células procarióticas o eucarióticas. Los compuestos con la estructura de espermil-dioleoiloxipropilo han probado ser particularmente preferibles.

Description

NUEVOS ANFIFILOS CATIONICOS Y POLICA IÓNICOS ; REACTIVOS QUE CONTIENEN LOS MISMOS Y SU USO La invención se refiere a nuevos anfífilos catiónicos y policatiónicos que son capaces de formar agregados con macromoléculas, en particular con ADN o ARN, y se refiere a su distribución en células procarióticas o eucariót icas . Los anfífilos (por ejemplo agentes tensioactivos, detergentes) han jugado durante algún tiempo un papel general en la vida diaria. En contraste, solo recientemente se ha puesto mayor atención a los anfífilos catiónicos a través del trabajo pionero de Felgner puesto que se pueden usar para distribuir ADN y ARN en células y transfectarlas de esta manera (P.L. Felgner y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci., USA 84 , 7413-7417 (1987); P. Hawley-Nelson . WO 94/05624 y colaboradores, J.P. Behr, EP 0394111). Los reactivos individuales usados para estos son muy variados, esto es principalmente debido al hecho de que se han encontrado empíricamente. De esta manera, no ha sido posible proporcionar específicamente un compuestos para la aplicación en cuestión. Además, el hecho que REF: 26530 existan compuestos que solo tengan un efecto en una mezcla con otros reactivos revelan la complejidad completa de la transfección. Una revisión de la mayoría de los reactivos que se han encontrado hasta ahora se da por ve (Bioconjugate Chem., 5, 382-389 (1994) y las referencias citadas en el mismo) . Sin embargo, en general, la mayoría de los reactivos puede formar liposomas. El mecanismo de transfección por anfífilos catiónicos es aún poco conocido. Parece creíble que los liposomas por medio de su carga positiva formen un complejo más cargado positivamente con el ADN y esto se une así mismo a la membrana celular polarizada de manera negativa (P.L. Felgner, Nature 337, 387-388 (1989)). Sin embargo, no es cierto como toma lugar la penetración de la membrana celular y el transporte hacia el núcleo de la célula . Sin embargo, a parte de la eficiencia de la transfección, es posible definir un serie de otros requerimientos para los nuevos reactivos: para la eficiencia, debe ser necesario retratar las células tal como al permeabilizar la membrana celular con DMSO, un detergente tal como digitonina o por arrastre. los reactivos no deben ser tóxicos, si es posible especialmente no en la concentración más efectiva, y deben ser preferentemente biológicamente degradables - debe ser posible usarlos igualmente para todas las células que vengan en consideración no deben tener una especificidad para ciertas moléculas de ADN también debe ser posible usarlos in vivo. Esto significa que además de la toxicidad, también la compatibilidad con el suero es de significado principal. Esto frecuentemente ha sido la razón para una disminución drástica en la eficiencia de la transfección.

Por lo tanto, el objeto de la invención fue proporcionar reactivos apropiados que cumplan igualmente estos requerimientos. Este objeto se logra por ciertos anfífilos catiónicos, lipidíeos que se pueden usar para distribuir compuestos aniónicos tal como por ejemplo, ADN en células y en este proceso exhiben sorprendentemente propiedades mejoradas con respecto a los requerimientos mencionados anteriormente.

En particular, los compuestos de la fórmula general I sirven como anfífilos. en la cual Ri representa un grupo de C(0)-C?-23 saturado o insaturado o de C?_2 saturado o insaturado At representa un grupo 0-R2 en el cual R2 tiene significado señalado para Rx y puede ser el mismo como, o diferente de Ri . A2 representa un NR3X o un residuos de N+R3R R5Y~ en el cual R3, R4 que son los mismos entre sí o diferentes, representan hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un grupo (CH2)n-OH o (CH2)n-NH2, donde n = 2-6, R5 que puede ser el mismo como, o diferente de R3 o R4, denota hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un (CH2)n-OH, un (CH2)n- haluro o un grupo ( (CH2 ) mNH) 0- (CH2) n-NH2, en el cual m es un número entero desde 2 a 6 y puede ser igual a, o diferente de, n o en donde n puede ser un número desde 2 a 6, y o un número entero desde 0 a 4, X puede, además del significado para R5, tener el siguiente significado: un aminoácido amídicamente unido, un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (0) -CHR6N (R7) 2, C(0)CHR6N+ (R7)3, C(0) -CHR6N+ (Rt)R8 ó C(0)- R6 puede ser un residuo (CH2) m-NR7R8, (CH2)m- N+(R7)2R6 ó (CH2)m-N+ (R7)3 y m puede ser un número entero desde 1 a 5, R7 representa hidrógeno o un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, R8 representa un grupo (CH2) n-N (R7) 2 ó (CH2)n- N+(R7)3 en el cual n es un número desde 2 a 4 y R7 puede tener el significado planteado anteriormente, y Y es un anión farmacéuticamente aceptable, Bx es un residuo NH [C (0) - (CH2) P-NH] q-Z en el cual p es un número desde 1 a 6 y q es un número desde 0 a 2, Z representa un aminoácido amídicamente unido, o un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C ( 0) -CHR6N (R7 ) 2 , C ( O) -CHR6N+ (R7 ) 3, C(0)- CHR6N+ (R7) 2R8 ó C ( 0) -CHR6NR7R8 , y R6 a R8 y m tienen los significados mencionados anteriormente, y B; puede tener el significado señalado para Ax, y el significado para Ai solo es válido con B y aquel de A2 es solo válido con B2.

Se prefieren los compuestos en los cuales los residuos Ri y Ai tienen residuos de alquilo de 10 a 20 átomos de carbono. Además de estos compuestos en los cuales A2 tiene el significado de NR3X se prefieren y en particular aquellos en los cuales R3 denota hidrógeno y X denota un aminoácido amídicamente unido, un derivado de aminoácido adecuado, un péptido o polipéptido. Los aniones Y farmacéuticamente aceptables, adecuados son en particular, haluros, sulfato de monometilo, acetato, trifluoroacetato y fosfato . Los siguientes compuestos de acuerdo con la invención han probado ser particularmente adecuados : 2- (6-carboxiespermil) -1, 3-dioleoiloxi-propilamida, 2-(N,N,N,N',N',N' -hexametilornitil ) -1 , 3-dioleo i loxi-propi lamida, 1- (6-carboxiespermil) -2 , 3-dioleoiloxi-propilamida y/o 2 , 3-dioleoiloxi-N- (N- (espermil) -glicil) -aminopropano, así como los derivados correspondientes de los mismos. Sin embargo, han probado ser adecuados la 2- (6-carboxiespermil) -1, 3-dimiristoiloxi-propilamida, 2- (1,1,1,5,5,10,10,14,14, 14-decameti 1- 6-carboxiespermil) -1 , 3-dioleoiloxi-pripilamida y/o 2- (N,N,N,N' ,N' ,N'-hexametil-lisil) -1, 3-dioleoi loxi-propilamida . Los compuestos similares tal como por ejemplo los derivados de amina y amidina de glicerol y propanodioles tal como por ejemplo compuestos de 2-aminopropano se han descrito ya para otros usos, una adecuabilidad para aplicaciones biológicas no se ha sugerido sin embargo (DE-A-2835369; Woltrom y colaboradores, Journal of the Am. Soc. (1951) 73(8), p. 3553; Chem. Abs., 59(8), 1963, columna 8586, fig. 6) . Adicionalmente, la presente solicitud también se refiere a la producción de reactivos con una propiedad de transfección. En esta conexión, los nuevos reactivos se pueden usar igualmente como una solución en un solvente miscible en agua o como una formulación de liposomas, acuosa. Cuando se evalúa su eficiencia de transfección, se señala que: en el medio libre de suero usualmente exhiben ya una mejor eficiencia que otros productos comercialmente disponibles, en el medio libre de suero permiten sorprendentemente una parte horizontal más ancha de la reilación ADN/reactivo con una eficiencia de tramsfección similar, tienen sorprendeintérnente la misma o mejor eficiencia en el medio que contiene suero, la eficiencia se puede incrementar adicionalmente por una formulación de liposomas, de manera sorprendente, los compuestos prueban ser mucho menos tóxicos que los compuestos con una eficiencia db transfección similar en un sistema libre de suero Las eficienci as de transfección de algunos compuestos selecciona ios se muestran en las Figuras 1 y 2, en comparación a los reactivos conocidos. Los compuesto s de acuerdo con la invención se sintetizan por méti »dos normales para una persona en la técnica (J March: Advanced Organic Chemistry; John Wiley & Sons, 1985 y M. Bodanszky; Principies of Peptide Synthesis; Springer Verlag, 1984) y los productos terminales se purifican opcionalmente por cromatografía en particular por cromatografía con intercambio iónico. Se muestran los esquemas de reacción apropiados en las Figuras 3 a 7. Un prerrequisito para la producción de nuevos reactivos de transfección fue que los compuestos respectivos sean catiónicos y sean adecuados para la formación de agregados puestos que hasta ahora está por arriba de todos los reactivos cargados que han dado por resultado una transfección hay ejemplos en los cuales el ADN se puede transportar en la célula por medio de reactivos no cargados. Sin embargo, para esto tienen que ser encerrados luego en los liposomas durante la preparación de lo cual la molécula que se va a transportar (por ejemplo, ADN) se puede dañar. En general, la eficiencia lograda por estos complejos no ha sido muy alta (comparar, por ejemplo A. Cudd, C. Nicolau en Liposome Tech nol ogy (Gregoriadis Ed.), (1984) CRC Press Inc. Boca Ratón, Fl . ; S.F. Aliño, M. Bobadilla, M. Garcia-Sanz, M. Lejarreta, F. Unda, E. Hilario in Biochem. Biophys, Res. Commun. 192, 174 (1993)).

Un punto de inicio adicional fue que los compuestos deben ser capaces de formar liposomas. No es claro porque casi exclusivamente los compuestos que forman liposomas son adecuados para la transfección. Los últimos hallazgos (H. Gershon, R. Ghirlando, S.B. Guttman, A. Minsky in Biochemistry 32./ 7143 (1993) y B. Sternberg, F.L. Sorgi, L. Huang en FEBS Letters 356, 361 (1994) mostraron que facilita la formación de las estructuras llamadas fideos de albóndiga que se requieren para la transfección. Aún no se ha clarificado si lo mismo aplica a todos los reactivos y en qué forma esto contribuye al paso a través de la membrana celular. Las siguientes síntesis de novo resultaron de estas consideraciones que se muestran en los diagramas de las Figuras de 3 a 7. En general, están disponibles varios métodos de acuerdo con el estado de la técnica para proporcionar reactivos apropiados tal como por ejemplo formulaciones farmacéuticas. Las formulaciones de liposomas y etanólicas se usan en particular, por lo cual la eficiencia de los varios tipos de liposomas puede diferir ya (para la preparación de liposomas, ver por ejemplo, H.

Schreier en "Pharmazie in unserer Zeit" 1_1, 97 (1982) ) . Sin embargo, los compuestos de acuerdo con la invención no se pueden usar solo para la transfección como liposomas sino también en la forma de otros agregados. En el caso del liposoma así como en el caso de la formación de agregado se pueden estar presentes adicionalmente otros compuestos lipidíeos a parte de los compuestos de acuerdo con la invención. Por ejemplo, los compuestos de la clase de fosfolípido son adecuados para esto; se podrían usar también otros compuestos bien conocidos para personas expertas en la técnica . También se debe considerar como sorprendente que los liposomas se pueden formar a partir de los compuestos de acuerdo con la invención del tipo 3, 6, 12 ó 15 (ver ejemplos 3, 6, 12 y 15) que se describen en la presente por primera vez. La transfección se llevó a cabo en células HeLa con el plásmido pSV2-CAT como un ejemplo (Gorman, C.M. y colaboradores, Mol. Cell. Biol. 2, 1044-1051 (1982)). La eficiencia de transfección se determina por el equipo CAT-ELISA (Boehringer Mannheim GmbH) y se muestra en las Figuras 1 y 2 en comparación a reactivos conocidos. Debido a su baja toxicidad estos compuestos (solo o en combinación con otros compuestos lipidíeos) también se pueden usar in vivo . La invención se pone en claro adicionalmente por los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1 Síntesis de 2- (N-ter . -butiloxicarbonil-L-alanil ) -1 , 3-dihidroxi-propilamida 1 756 mg (4 mmol) de Boc-L-alanina y 600 µl (4.3 mmol) de trietilamina disueltos en 10 mi de THF absoluto se colocaron en un matraz de fondo redondo con un contador de burbuja y se enfriaron a -10°C. Luego, se adicionaron 320 µl (4 mmol) de cloroformato de metilo y se agitó durante 30 minutos a 0°C-. Después de la adición de 456 mg (5 mmol), de 2-amino-l , 3-propanodiol, se adicionó suficiente agua para formar una solución homogénea y se agitó durante una 1 adicional a temperatura ambiente. Después de la remoción del THF, se adicionaron 50 mi de acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con solución de NaHC03 saturada y solución de NaCl saturada y se secó sobre Na2S04. Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 332 mg (32 %) de un aceite incoloro RMN lH (CDC13) : d = 1.32 (d; 3H; J = 7.1 Hz; CH-CH3) ; 1.40 (s; 9H; C(CH3)3); 3.55-3.85 (m; 4H; CH(CH2OH)2); 3.85-4.0 m; 1H; NH-CH); 4.0-4.5 ( ; 3H; NH-CH, 2 x OH); 5.6-5,8 (m; 1H; NH-CH (CH2OH) 2) 7.0-7.35 ( ; 1H; OOC-NH-CH) .

RMN 13C (CDCI3) : d = 18.4 (CH-CH3) ; 28.2 (C(CH3) 3) , 52.2 (NH-CH-CO) ; 52.4 ( CH (CH2OH) 2 ) ; 61.8 (CH (CH2OH) 2) ; 80.2 (C(CH3) ; 155.7 (NH-COO) ; 173.8 (CH-CO-NH) .

Ejemplo 2 Síntesis de 2- (N-ter-butiloxicarbonil-L-alanil) - 1, 3-dioleoiloxi-propilamida 2 Una solución de 598 mg (2.28 mmol) de 1, 1.610 g (5.70 mmol) de ácido oléico, 1.176 g (5.70 mmol) DCC y 28 mg (0.23 mmol) de dimetilaminopiridina en 40 mi de CH2C12 absoluto se agitó durante la noche a temperatura ambiente en un matraz de fondo redondo. Subsecuentemente, se filtró y el filtrado se evaporó por rotación. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, CH2Cl2:MeOH = 30:1). Se obtuvieron 1.450 g (80 %) de un aceite incoloro.

RMN XH (CDC13) : d = 0.87 (t; 6H; J = 6.6 Hz; 2 x CH2-CH3) ; 1.15-1.5 (m; 43H; CH-CH3/ 2 x CO-(CH2)2- (CH2)4, 2 x (CH2)6-CH3); 1.43 (s; 9H; C(CH3)3); 1.5-1.7 (m; 4H; 2 x CO-CH2-CH2); 1.9-2.1 (m; 8H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.30 (t, 4H; J = 7.6 Hz; 2 x CO-CH2); 4.0-4.25 (m; 5H; NH-CH; 2 x CH2OOC); 4.35-4.50 (m; 1H; NH-CH); 9.6-5.0 ( ; 1H; NH-CH-CH2); 5.25-5.45 (m; 4H; 2x CH=CH) ; 6.5-6.65 (m; lh; OOC-NH-CH) .

RMN 13C (CDC13) : d = 14.0 (2 x C(18)H3); 22.5 (2 x C(17)H2); 24.7 (2 x C(3)H2); 27.0, 27.1, 28.98, 29.04, 29.2, 29.4, 29.56, 29.62 {2 x [ C ( 4 ) H2-C ( 7 ) H2, C(12)H2-C(16)H2]}; 28.1 (C(CH3)3); 31.8 (2 x C(2)H2); 33.87, 33.88 {2 x [C(8)H2, C ( 11 ) H2] } ; 47.2 (CH (CH202C-R) 2 ) ; 62.4 ( CH ( CH202C-R) 2 ) ; 129.6, 129.9 (2 x CH=CH) ; 172.4 (CH=CO-NH); 173.4 (CH2-COO).

Ejemplo 3 Síntesis de 2-L-alanil-l , 3-dioleoiloxi-propilamida 3 702 mg (0.89 mmol) de 2 disueltos en 6 mi de CH2C12 absoluto se colocaron en un matraz de fondo redondo con un contador de burbuja y se adicionaron 2 mi (26.12 mmol) de TFA. Después de 30 minutos de agitación a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se transfirió a un embudo de separación y se adicionaron 50 mi de CH2C12 así como 28 mi de NaOH 1 N. La fase orgánica se lavó con 10 mi de solución de NaHC03 saturada y se secó sobre Na2S04. Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 599 mg (97 %) de un aceite casi incoloro.

RMN XH (CDCI3) : d = 0.75-0.9 ( ; 6 H; 2 x CH2-CH3) ; 1.1-1.4 (m; 43H; CH-CH3, 2 x CO- (CH2 ) 2- (CH2 ) 4, 2 x (CH2)6-CH3); 1.4-1.7 (m; 6 H; NH2, 2 x CO-CH2-CH2); 1.85-2.1 ( ; 8 H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.30 (t, 4 H; J = 7.5 Hz; 2 xCO-CH2); 3.35-3.55 (m; 1 H; NH-CH); 4.0- 4.25 (m; 4 H; 2x CH2OOC) ; 4.3-4.5 (m; 1 H; NH-CH); .2-5.4 (m; 4 H; 2 x CH=CH) ; 7.5-7.65 ( ; 1 H; CO- NH-CH) .

RMN 13, (CDCI3) : d = 14.0 (2 x C(18)H3); 22.5 (2 x C(17)H2); 24.7 (2 x C(3)H2); 27.0, 27.1, 28.9, 29.0, 29.2, 29.4, 29.5, 29.6 {2 x [C ( 4 ) H2-C ( 7 ) H2 , C(12)H2-C(16)H2] }; . 31.7 (2 x C(2)H2); 33.9 {2 x [C(8)H2, C(11)H2]}; 46.7 (CH (CH202C-R) 2 ) ; 62.5 (CH (CH202C-R) 2) ; 129.5, 129.8 (2 x CH=CH) ; 173.3 (CH-CO-NH); 173.4 (CH2-COO) .

Ejemplo 4 Síntesis de 2- (N, N' di-ter-butiloxicarbonil-L-ornitil) -1, 3-dihidroxipropilamida 4 2.000 g (6 mmol) de Boc-L-ornitina y 900 µl (6.45 mmol) de trietilamina disueltos en 25 mi de THF absoluto absoluto se colocaron en un matraz de fondo redondo con un contador de burbuja y se enfriaron a -10°C. Luego se adicionaron 480 µl (6 mmol) de cloroformato de metilo y se agitó durante 30 minutos a 0°C. Después de la adición de 684 mg (7.5 mmol) de 2-amino-l , 3-propanodiol se adicionó suficiente agua para formar una solución homogénea y se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. Después de la remoción del solvente, se tomó en acetato de etilo, se lavó con solución NaCH03 saturada y solución de NaCl saturada y se secó sobre NaS04. Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 1.987 g (82 %) de 4, como cristales incoloros.

RMN :H (CDC13) : d = 1.42 (s; 9 H; C(CH3)3); 1.4-1.95 (m; 4 H; CH2-CH2-CH2-NH) ; 3.0-3.2 (m; 2 H; CH2NH) ; 3.6-3.8 (m; 4 H; CH(CH2OH)2); 3.9-4.05 (m; 1 H; NHCH); 4.05-4.6 ( ; 3 H; NH-CH, 2 x OH); 5.2-5.4 (m; 1 H; NH-CH); 5.8-6.0.5 (m; 1 H ; NH-CH); 7.35-7.5 (m; 1 H; NH-CH) .

RMN 13C (CDCI3) : d = 26.1 (CH2-CH2-CH2-NH) ; 28.4 (C(CH3)3, 28.5 (C(CH3)3); 30.1 (CH2-CH2-NH) ; 40.0 (CH2-NH) ; 52.9 (CH (CH2OH) 2 ) ; 54.4 (NH-CH-CO) ; 61.8 (CH(CH2OH) 2 ) ; 79.3 (C(CH3) 3) ; 80.1 (C(CH3)3); 156.1 (NH-COO); 156.5 (NH-COO); 173.3 (CH-CO-NH).

Ejemplo 5 Síntesis de 2- (N, N' -di-ter-butiloxicarbonil-L-ornitil ) -1 , 3-dioleoxi-propilamida 5.

Una solución de 1.898 g (4.68 mmol) de 4, 3.305 g (11.7 mmol) de ácido oleico, 2.414 g (11.7 mmol) de DCC y 57 mg (0.47 mmol) de dimet ilaminopiridina en 50 mi de CH2C12 absoluto se agitó durante la noche a temperatura ambiente en un matraz de fondo. Subsecuentemente, se filtró y el filtrado se evaporó por rotación. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna en gel de sílice (CH2Cl2:MeOH = 30:1). Se obtuvieron 1.678 g (38 %) del producto como un sólido ceroso, incoloro de punto de fusión de 52-54°C.

RMN aH (CDC13) : d = 0.75-0.9 (m; 6 H; 2 x CH2-CH3) ; 1.05-1.5 (m; 40 H; 2 x CO- (CH2) 2. (CH2 ) 4, 2 x (CH2)6- CH3); .1.42 (s; 18 H ; 2 x C (CH3)3; 1.45-1.85 ( ; 8 H; 2 x CH2-CH2-CH2-NH, 2 x CO-CH2-CH2); 1.85-2.1 (m, 8 H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.2-2.35 (m; 4 H; 2 x CO-CH2); 3.0-3.35 (2 m; 2 H; CH2-NH) ; 4.0-4.25 ( ; 5 H; NH-CH; 2 x CH2OOC) ; 4.35-4.5 (m; 1 H; NH-CH); 4.7-4.8 (m; 1 H; NH-CH); 5.1-5.2 (m; 1 H; NH-CH); 5.2-5.4 ( ; 4 H; 2 x - CH=CH) ; 6.65-6.8 (m; 1 H; OOC-NH-CH) .

RMN lE (CDCI3) : d = 14.0 (2 x C(18)H3); 22.5 (2 x C(17)H2); 24.6 (2 x C(3)H2) ; 26.2 (CH2-CH2-CH2-NH) ; 27.0, 27.1, 28.97, 29.04, 29.2, 29.4, 29.56, 29.61 {2 x [C(4)H2-C(7)H2, C(12)H2-C(16)H2] y CH2-CH2-NH}; 28.1, 28.3 (2 x C(CH3)3); 31.7 (2 x C(2)H2); 33.85, 33.86 {2 x [C(8)H2, C(11)H2]}. 47.2 (CH (CH202C-R) 2 ) ; 62.3 (CH(CH202C-R)2) ; 129.6, 129.8 (2 x CH=CH) ; 156.3 (NH-COO); 173.30, 173.33 (CH-CO-NH, 2 x CH2-COO) .

Ejemplo 6 Síntesis de 2-L-ornitil-l , 3-dioleoiloxi-pripilamida 6 421 mg (0.451 mmol) de 5 disueltos en 3 mi de CH2C12 absoluto se colocaron en un matraz de fondo redondo y se adicionó 1 mi (13.06 mmol) de TFA. Después de la agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente, la material de reacción se diluyó con 200 mi de CH2C12, se lavó dos veces con solución de NaHC03 saturada y se secó sobre Na2S04. Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 296 mg (89 %) de un aceite casi incoloro.

RMN lH (CDC13) : d = 0.86 (t; 6 H; J = 6.7 Hz; 2 x CH2-CH3); 1.1-1.45 (m; 40 H; 2 x CO- (CH2) 2- (CH2) 4, 2 x (CH2)6-CH3); 1.45-1.7 (m; 8 H; CH2-CH2-CH2-NH2, 2 x CO- (CH2-CH2) ; 1.9-2.1 (m; 8 H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.30 (t; 4 H; J = 7.5 Hz; 2 x CO-CH2); 2.6-3.1 (m; 4 H; 2 x NH2); 3.15-3.55 (m; 2 H; CH2-NH2); 3.55-3.75 (m; 1 H; NH-CH); 4.0-4.25 (m; 4 H; 2 x CH2-OOC) ; 4.3-4.5 (m; 1 H; NH-CH); 5,2-5.4 (m; 4 H; 2 x CH=CH) ; 7.65-7.75 ( ; 1 H; CO-NH-CH) .

RMN 13C (CDC1 ) : d = 14.0 (2 x C(18)H3); 22.5 (2 x C(17)H2); 24.7 (2 x C(3)H2); 26.99, 27.04, 29.1, 29.3, 29.5, 29.6, {2 x [ C ( 4 ) H2-C ( 7 ) H2 , C(12)H2- C(16)H2], CH2-CH2-CH2NH} ; 31.7, (2 x C(2)H2); 33.9 (2 x [C(8)H2, C(11)H2]); 46.7 (CH (CH202C-R) 2 ) ; 54.6 (NH2-CH-CO) ; 62.5 (CH ( CH202C-R) 2 ) ; 129.5, 129.8 (2 x CH=CH) ; 173.31, 173.6 (CH-CO-NH, 2 x - CH2-COO); 174.7 (CH-CO-NH) .

Ejemplo 7 Síntesis de N-ter-butiloxicarbonil-1 , 3-dihidroxi-propilamina 7 Una solución de 1.07 (5 mmol) de Boc20, de 697 µl (5 mol) de trietilamina y 456 mg (5 mmol) de 2-amino-l, 3-propanodiol en 10 mi de THF/agua (1:1) se agitó durante la noche a temperatura ambiente en un matraz de fondo redondo. Después de la remoción del THF en un evaporador giratorio, se adicionaron 50 mi de acetato de etilo y 10 mi de solución de NaCl saturada. La fase orgánica se lavó con 10 mi de solución de NaCl saturada y se secó sobre Na2So4.

Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 589 mg (62 %) de 7, como cristales incoloros. Punto de fusión 83-85°C.

RMN XH (CDCI3) : d = 1.44 (s; 9H; C(CH3)3); 3.4-3.85 (m; 7H; CH(CH2OH)2); 5.3-5.45 ( ; 1H; NH-CH).

RMN 13C (CDCI3) : d = 28.4 (C(CH3)3); 53.3 (CH (CH2OH) 2) ; 62.6 (CH(CH2OH)2) ; 79.9 (C(CH3)3); 156.5 (NH-COO).

Ejemplo 8 Síntesis de N-ter-butiloxicarbonil-1 , 3-dioleoiloxi-propilamina 8 Una solución de 478 mg (2.5 mmol) de 7, 1.695 g (6 mmol) de ácido oleico, 1.28 g (6 mmol) de DCC y 12 mg (0.1 mmol) de dimetilaminopiridina en 25 mi de CH2C12 absoluto se agitó duante la noche a temperatura ambiente en un matraz de fondo redondo. Subsecuentemente, se filtró y el filtrado se evaporó en evaporador giratorio. El producto crudo se purificó por cromatrografía en columna en gel de sílice (hexano: acetato de etilo = 5:1) . Se obtuvieron 1.482 g (82 %) del producto como un aceite incoloro.

RMN :H (CDC13) d = 0.86 (t; 6H; J = 6 Hz; 2 x CH2-CH3) 1.1-1.5 (m; 40H; 2 x CO- (CH2) 2- (CH2) 4 2 x (CH2)6-CH3) 1.43 (s; 9H; C(CH3); 1.5-1.7 ( ; 4H; 2 x CO-CH2-CH2) 1.9-2.1 (m, 8H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.30 (t; 4H; J = 7.5 Hz; 2 x CO-CH2); 3.95-4.25 (m; 5H; NH-CH; 2 x CH2OOC); 4.7-4.85 (m; 1H; OOC-NH-CH) ; 5.25-5.45 (m; 4H; 2 x CH=CH) .

RMN 13C (CDClj) : d = 14.0 (2 x C(18)H3); 22.5 (2 x C(17)H2); 24.7 (2 x C(3)H2); 27.0, 27.1, 28.96, 29.02, 29.2, 29.4, 29.55, 29.62 { 2x [C ( 4 ) H2-C ( 7 ) H2, C(12)H2-C(16)H2] }; 28.2-(C(CH3)3) ; 31.8 (2 x C(2)H2); 33.9 {2 x [C(8)H2, C(11)H2]}; 48.4 (CH (CH202C-R) 2) ; 62.8 (CH(CH202C-R)2) ; 79.8 (C (CH3 ) 3) ; 129.6 , 129.8(2 x CH=CH) ; 154.9- (NH-COO) ; 173.3 (CH2-COO) .

Ejemplo 9 Síntesis de 1 , 3-dioleoiloxi-propilamina 9 720 mg (1 mmol) de 8, disueltos en 3 mi de CH2C12 absoluto se colocaron en un matraz de fondo redondo y se adicionó 1 mi (13.06 mmol) de TFA.

Después de la agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente, la material de reacción se diluyó con 50 mi de CH2C12, se lavó con solución de NaHC03 saturada y se secó sobre Na2So4. Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 589 mg (95 %) de un aceite incoloro.

RMN lE (CDC13) : d = 0.87 (t; 6H; J = 6.6 HZ; 2 x CH2-CH3); 1.1-1.5 (m; 40H; 2x CO- (CH2) 2- (CH2) 4 , 2 x (CH2) 6-CH3); 1.35-1.5 (m; 2H; CH-NH2) ; 1.5-1.7 (m; 4H; 2 x CO- (CH2-CH2) ; 1.85-2.1 (m; 8H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.32 (t; 4H; J = 7.5 Hz; 2 x CO-CH2); 3.2-3.35 (m; 1H; CH-NH2); 3.95-4.15 (m; 4H; 2 x CH2-OOC) ; 5.25-5.45 (m; 4H; 2 x CH=CH) .

RMN 13C (CDCI3) : d = 14.0 (2 x C (18) H3) ; 22.5 (2 x C(17)H2) ; 24.8 (2 x C(3)H2) ; 27.0, 27.1, 28.96, 28.99, 29.03, 29.2, 29.4, 29.55, 29.63 (2 x [C(4)H2-C(7)H2, C(12)H2-C(16)H2] }, 31.8, (2 x C ( 2 ) H2 ) ; 34.0 (2 x [C(8)H2, C(11)H2] ) ; 49 { CH (CH202C-R) 2 } ; 65.7 {CH(CH202C-R)2}; 129.6, 129.9 (2 x CH=CH) ; 173.4 (CH2-COO) .

Ejemplo 10 Síntesis de 2- (N, N' , N' ' , N' ' ' -tetra-ter-butiloxi-carbonil-6-carboxi-spermil ) -1, 3-dihidroxi-propilamida 10 Se adicionaron 25 µl (312 µmol) de cloroformeato de metilo a -10°C a una solución de 202 mg (312 µmol) de tetra-Boc-sper ina y 47 µl (335 µmol) de rietila ina en 2 mi de THF absoluto y se agitaron durante 30 minutos a 0°C. Después de la adición subsecuente de 36 mg (390 µmol) de 2-amino-l , 3-opropanodiol, se adicionó suficiente agua para formar una emulsión homogénea y después se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. Después de la remoción del solvente en un evaporador giratorio, se adicionaron aproximadamente 30 mi de acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con solución de NaHC03 saturada y solución de NaCl saturada. Y se secó sobre Na2So . Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 208 mg (93 %) de un sólido espumoso, incoloro.

RMN lñ (CDC13) : d = 1.3-1.47 ( ; 36H; 4 x C(CH3)3); 1.5-2.05 (m; 8H; 2 x N-CH2-CH2-CH2-N, N-CH-CH2-CH2-CH2-N) ; 2.85-3.4 ( ; 10H; 5 x N-CH2); 3.65-3.8 (m; 4H; 2 x CH2-OH) ; 3.8-4.5 (m; 4H; 2 x -CH-, 2 x CH2-OH) ; 4.8-5.1 (s (amplio) ; 1H; CH2-NH) ; 5.25-5.4 (s (amplio) ; 1H; CH2-NH) ; 7.05-7.15 ( s ( amplio) ; 1H; -NH-CO) .

RMN ?3 C (CDC13) : d = 25.0, 29.5 (N-CH-CH2-CH2-CH2-N) 28.0, 28.2, 28.3 (4 x C(CH3)3) ; 38.0, 38.1 (2 x N-CH2-CH2-CH2-N) ; 42.9, 45.0, 47.0 (otros espermil-CH2 carbono) ; 52.4 (CH (CH2-OH) 2) ; 59.8 (CH-CO) ; 63.1 (CH(CH2-OH) 2) ; 79.3, 79.5, 81.1 (4 x CO-O-C) CH3 ) 3) ¡ 156.0, 156.1 (4 x CO-O-C) CH3 ) 3) ; 171.1 (CO-NH) .

Ejemplo 11 Síntesis de 2- (N, N' , N' ' , N' ' ' -tetra-ter-butiloxicarbonil-6-carboxi-apermil) -1, 3-dioleoiloxi-propilamida 11 Una solución de 208 mg (72 µmol) 10, 204 mg (289 µmol) de ácido oleico, 149 mg (723 µmol) de DCC y 4 mg (29 µmol) de dimetilaminopiridina en 6 mi de CH2C12 absoluto se agitó durante la noche a temperatura ambiente en un matraz de fondo redondo cerrado . Subsecuentemente se filtró, se volvió a lavar con hexano/éter (3:1) y el filtrado se evaporó en evaporador giratorio. Después de la cromatografía en columna en gel de sílice (CH2Cl2/MeOH = 20:1). Se obtuvieron 160 mg (44 %) de un aceite incoloro.

RMN XH (CDCI3) : d = 0.8-0.95 (m; 6H; 2 x CH2-CH3) ; 1.2- 1.4 (m; 40H; 2 x CO- (CH2) 2- (CH2) 4 , 2 x (CH2)6-CH3) ; 1.4-1.55 (m; 36H; 4 x C(CH3) 3) ; 1.55-1.75 (m; 10H; 3 x (-CH2-CH2-CH2-) spßrm 2 x CO-CH2-CH2-) ; 1.85-2.05 (m, 10H; (-CH-CH2-CH2-) 3pßtm, 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.25-2.35 (m; 4H; 2 x CO-CH2) ; 3.0-3.35 (m, 10H; 5 x N-CH2) ; 4.0- 4.4 (m; 6H; 2 x -CH-N, (CH (CH202C-R) 2) ; 4.5-5.1 (s(very amplio) ; 1H; NH-CH2) ; 5.25-5.35 ( ; 4H; 2 x CH=CH) ; 6.8-7.0 (s (amplio) ; 1H; NH-CO) .

RMN 13C (CDC13) : d = 14.4 (2 x C(18)H3) ; 23.0 (2 x C(17)H2) ;5.2 (2 x C(3)H2) ; 27.6 (C(8)H2 C(11)H2) ; 29.5, 29.6, 29.7, 29.9, 30.1, 32.3 ( (CH-CH2-CH2-CH2. ) sperm, 2 x N- CH2-CH2 -CH2~N, 2 X C ( 4 ) H2~C ( 7 ) H2 , 2 X C(12)H2-C (16) H2; 28.7, 28.8 (4 x C (CH3) 3) ; 34.0 (2 x C(2)H2) ; 38.5, 44.6, 46.8, 47.6 (2 x N-CH2-CH2-CH2-N- (CH-CH2-CH2-CH2-) spe m ( CH ( CH202C-R ) 2 ) ; 59.5 (CO-CH) ; 62.8 (CH(CH202C-R) 2) ; 79.5, 80.1, 81.5 (4 x CO-O-C(CH3)3) ; 130.07, 130.37 (2 x CH=CH) ; 156.3 (4 x CO-O-C (CH3)3) ; 173.7 (CO-NH, 2 x CH2-COO) .

Ejemplo 12 Síntesis de 2- ( 6-caarboxi-spermil ) -1 , 3-dioleoiloxi-propilamida 12 85 mg (68 µmol) de 11 se disolvieron en 1 mi de CH2C12 absoluto en un matraz de fondo redondo con contador de burbuja y se adicionaron 400 µl de TFA. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Subsecuentemente se adicionaron aproximadamente 20 mi de CH2C12, se lavó con solución saturada de NaHC03 y se secó sobre Na2So . Después de la remoción del solvente, se obtuvieron 56 mg (97 %) de un aceite incoloro.

RMN aH (CDCI3) : d = 0.8-0.95 (m; 6H; 2 x CH2-CH3) ; 1.15-1.4 (m; 40H; 2 x CO- (CH2) 2- (CH2) 4, 2 x (CH2) 6-CH3) ; 1.5-1.9 (m; 12H; 3 x (-CH2-CH2-CH2-) 3pßrp?, 2 x CO-CH2-CH2-, (-CH-CH2-CH2-)sp?rm) ; 1.9-2.1 (m, 8H; 2x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.2-2.35 (m; 4H; 2 x CO-CH2) ; 2.45-3.3 ( ; 10H; 5 x N CH2) ; 4.0-4.59 (m; 12H; 2 x CH-N, (CH(CH202C-R) 2, 2 x NH2, 2 x NHspßrm) / 5.25-5.45 (m; 4H; 2 x CH=CH) ; 7.6-7.9 (s (amplio) ; 1H; NH-CO) .

RMN 13C (CDCI3) : d = 14.0 (2 x C(18)H3) ; 22.5 (2 x C(17)H2) ; 24.7 (2 x C(3)H2) ; 27.0, 27.1 (C(8)H2, C(11)H2) ; 29.0, 29.1, 29.2, 29.4, 29.60, 29.61, 31.8 - ( (CH-CH2-CH2-CH2-) Sperm, 2 x N~CH2 -CH2 -CH2~N , 2 x C(4)H2-C(7)H2, 2 x C(12)H2-C(16)H2) ; 33.9(2 x C(2)H2) ; 41.0, 47.3, 48.8 (2 x N-CH2-CH2-CH2-N, (CH-CH2-CH2-CH2- ) sp?rm, (CH(CH202C-R) 2) ; 62.0, 62.9 (CO-CH, CH (CH202C-R) 2) ; 129.5, 129.9 (2 x CH=CH) ; 173.4, 174.2 (CO-NH, 2 x CH2-COO) .

Ejemplo 13 Síntesis de 2-dimetilamino-l , 3-propanodiiol 13 Se colocaron 456 mg (5 mmol) de 2-amino-1 , 3-propanodiol en un matraz de fondo redondo y se mezclaron con 1.13 mi (25 mmol) de ácido fórmico (85 %, d = 1.20) mientras que se enfría en hielo. Subsecuentemente, se adicionaron 895 µl (12 mmol) de formaldehído (37 %) y la mezcla se calentó durante 10 horas a 80°C en un baño de agua. Después del enfriamiento se adicionaron 3 mi de ácido clorhídrico 2 N. El producto se aisló por cromatografía sobre un intercambiador iónico ácido de 25 g (DOWEX) . El producto crudo obtenido de esta manera se purificó por destilación de ruta corta en un vacío de bomba de aceite. Se obtuvieron 253 mg (42 %) de un aceite incoloro.

Punto de ebullición?mbar = 105°C.

RMN ?K (DMSO-dg); o = 2.25 (s; 6H; N(CH3)2); 2.31-2.45 ( , 1H; CH(CH2OH)2); 3.35-3.55 (m, 4H; CH(CH2OH)2); 4.24 (s (amplio); 2H; CH(CH2OH)2) .

RMN 13C (DM80-d6) ; d = 41.8 (N(C_H3)2); 58.7- (CH(CH2OH)2) ; 66.7 (CH (CH2OH) 2) .

Ejemplo 14 Síntesis de 2-dimetilamino- ( 1 , 3-dioleoiloxi ) -propano 14 Una solución de 183 mg (1.54 mmol) de 13, 1.088 g (3.85 mmol) de ácido oleico, 795 mg (3.85 mmol) de DCC y 18 mg (154 µmol) de dimetilaminapiridina en 20 mi de CH2C12 absoluto se agitó durante la noche a temperatura ambiente.

Subsecuentemente, se filtró, se volvió a lavar con hexano/éter (3:1) y el filtrado se evaporó en evaporador giratorio. Después de la cromatografía en columna en gel de sílice, (CH2Cl2/MeOH = 30:1) se obtuvieron 444 mg (45 % ) del producto como un aceite incoloro.

RMN XH (CDCI3) : d = 0.85-0.95 (m; 6H; 2 x CH2-CH3) 1.2-1.4 (m; 40H; 2 x CO- (CH2) 2- (CH2) 4, 2 x (CH2)6-CH3) 1.55-1.7 (m; 4H; 2 x CO-CH2-CH2- ) ; 1.95-2.05 (m; 8H 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.3-2.35 ( , 4H; 2 x CO-CH2-CH2-) 2.39 (s; 6H; N(CH3)2); 2.9-3.0 (m; 1H; CH (CH202C-R) 2) 4.1-4.3 (m; 4H; CH (CH202C-R) 2 ) ; 5.3-5.4 (m; 4H; 2 x CH=CH) .

RMN aH (CDCI3) : d = 14.4 (2 x C(18)H3); 23.0(2 x C(17)H2); 25.3 (2 x C(3)H2); 27.55, 27.6 (C(8)H2; C(11)H2); 29.50, 29.53, 29.67, 29.7, 29.8, 29.9, .06, 30.14, 32.3 (2 x C ( 4 ) H2-C ( 7 ) H2, 2 x C(12)H2- C(16)H2); 34.7 (2 x C(2)H2); 42.4 (N (CH3) 2 ) ; 61.6, 61.9 (CH(CH202C-R) 2 ) ; 130.09, 130.36 (2 x-CH=CH) ; 173.9 (CH2-COO) Ejemplo 15 Síntesis de sulfato de N-[2-(l,3-dioleoiloxi) propil] -N, NN-trimeti lamoniornetilo 15 Se adicionaron 66 µl (696 µmol) de sulfato de dimetilo a 0°C a una solución de 200 mg (309 µmol) de 14 en 1.55 mi de acetato de etilo/hexano (1:1) y la material de reacción se filtró durante 24 horas a 4°C. subsecuentemente, el solvente se removió. Se obtuvieron 213 mg (89 %) de un aceite incoloro .

RMN XH (CDC13) : d = 0.75-0.9 (m; 6H; 2 x CH2-CH3) ; 1.05-1.4 (m; 40H; 2 x CO- (CH2 ) 2- (CH2) , 2 x (CH2)6-CH3); 1.4-1.65 ( ; 4H; 2 x CO-CH2-CH2- ) ; 1.8-2.1 (m; 8H; 2 x CH2-CH=CH-CH2) ; 2.25-2.4 ( , 4H; 2 x CO-CH2- CH2-); 3.3-3.45 (s (amplio); 9H; N(CH3)3); 3.61 (s; 3H; CH3-0-S); 4.1-4.2 (m; 1H; CH (CH202C-R) 2) ; 4.4-4.65 (m; 4H; CH(CH202C-R) 2) ; 5.2-5.4 (m; 4H; 2 x CH=CH) .

RMN 13, (CDCI3) d = 13.8 (2 x C(18)H3); 22.4 (2 C(17)H2); 24.4 (2 x C(3)H2); 26.9, 27.0 (C(8)H2; C(11)H2); 28.8, 28.9, 29.0, 29.05, 29.3, 29.46, 29.5, 31.6 (2xC(4)H2-C(7)H2, 2 x C ( 12 ) H2-C ( 16) H2 ) ; 33.6 (2 x C(2)H2); 53.0, 54.0 (N(CH3)3, CH3-0-S); 58.7- (CH(CH202C-R)2) ; 69.8 (CH (CH202C-R) 2) ; 129.4, 129.8 (2 x CH=CH) ; 172.3 (CH2-C_00) .

Ejemplo 16 Síntesis de N, N' , N' ' , N' ' ' -tetra-ter-buti loxicarboni 1-6-carboxi-spermi 1-2, 3-dihidroxi-l-propilamida 16 Una solución de 300 mg (0.47 mmol) de tetra-Boc-carboxispermina en 4 mi de diclorometano se mezcló sucesivamente con 59 mg (0.51 mmol) de hidroxisuccinimida disueltos en 2 mi de diclorometano/THF (1:1) y 106 mg (0.51 mmol) de diciclohexil-carbodiimida disueltos en 2.2 mi de diclorometano y se agitó durante 4 días a temperatura ambiente. Después de la remoción del solvente, el residuo se tomó en acetato de etilo, se filtró y el solvente se removió a partir del filtrado claro. El residuo (335 mg (0.45 mmol) éster tetra-Boc-carboxispermina-hidroxi-succinimidí lico) se tomó en 2.18 mi de dimetilformamida y se mezcló con 41 mg (0.45 mmol) de (±) -l-amino-2, 3-propanodiol y 61.5 µl (0.45 mmol) de trietilamina. Después de la agitación durante 3 días, el solvente se removió y el residuo se diluyó entre éter y agua. La fase orgánica se secó. Después de la remoción del solvente, se obtuvo un producto aceitoso que se procesó directamente .

Ejemplo 17 Síntesis de N, N' , N' ' , N' ' ' -tetra-ter-butiloxicarbonil-6-carboxi-spermil-2, 3-dioleoiloxi-1-pripilamida 17 218 mg (0.77 mmol) de ácido oleico, 180 mg (0.87 mmol) de diciclohexilcarbodiimida y una cantidad catalítica de dimetilaminopiridina se adicionaron a una solución de 252 mg (0.35 mmol) de 16 en 1.4 mi de tetracloruro de carbono. Se agitó durante la noche. Después de la remoción del solvente, el residuo se cromatografió (gel de sílice, diclorometano con un contenido creciente de metanol hasta 10 %). Se obtuieron 392 mg (92 % de lo teórico) de un aceite.

RMN 1E : d = 173.8, 173.3 (ácido oleico-C=0) , 156 (C(=0)-N, 130.0, 129.7 (ácido oleico C=C) , 80.97, 79.67, 79.84 (quat. -BOC), 70.3 (Glic.sn2), 62.6 (Glic.snl), 59.1 (esperm.-), 46.5, 44.3, 43.7, 43.1 (esperm.N-CH2) , 39.5 (Glic.sn3), 38.2 (esperm. -CH2) , 34.9(ácido oleico-C-2), 31.9 (ácido oleico C-16) , 29.8-29.1 (ácido oleico-CH2) , 28.4 (BOC-CH3) , 27.2 (ácido oleico C-8, 11), 25.0 (ácido oleico C-3), 22.7 (ácido oleico C-17), 14.1 (ácido oleico C-18).

Ejemplo 18 (6-carboxi-espermil) -2, 3-dioleoiloxi-l-propilamina 18 Una solución de 195 mg (0.16 mmol) de 17 en 5 mi de diclorometano se agitó a temperatura ambiente con 5 mi de TFA. Después de la agitación de 20 minutos, se diluyó con 100 mi de diclorometano y se lavó con solución de carbonato ácido de sodio saturada. Las fases orgánicas combinadas se secaron y el solvente se evaporó. se obtuvieron 134 mg (99 %) de un aceite viscoso.

RMN XH (500 MHz, CDCl3/CD3COOD 5:1) d = 5.33 (ácido oleico 9, 10-H), 5.16 (glicerol 2-H) , 4.25 y 4.06 (glicerol 1-H) , 4.15 (esparmina-H) , 3.55 y 3.33 (glicerol 13-H) , 3.18 y 3.05 (espermina N-CH2) , 2.31 (ácido oleico 2-H) , 2.21 (espermina-CH2) , 2.01 (ácido oleico 8, 11-H) , 1.98 (espermina-), 1.83 (espermina CH2) , 1.57 (ácido oleico 3-H) , 1.30 (ácido oleico 4-7, 12-17-H), 0.87 ppm (ácido oleico 18-H) RMN 13C: d = 173.82 y 173.53 (ácido oleico C-l), 154.06 (C(=0)-N), 130.17 y 129.81 (ácido oleico C-9 y C-10), 70 (glicerol C-2), 63.2 (glicerol C-l), 39.8 (glicerol C-3), 34.25, 34.05, 33.97 (ácido oleico C-2), 32.70, 31.93 (ácido oleico C-16), 30.82, 29.79, 29.57 y 29.35 (ácido oleico CH2) , 27.25 (ácido oleico C-8, 11), 25.64, 25.53, 25.32, 24.97 (ácido oleico C-3), 24.71, 22.70 (ácido oleico C-17), 14.13 ppm (ácido oleico C-18). MS(FAB): MH+ 848.6 (cale.848.8) .

Ejemplo 19 Síntesis de N- ( (N-Boc) -glicil ) -aminopropano-2, 3-diol 19 Se disolvieron 10.00 g (36.73 mmol) de Boc-Gli-Osu (Bachem) junto con 3.35 g (36.77 mmol) de l-amino-2, 3-propanodiol en 50 mi de DMF y se agitó durante 18 h. El producto se purificó por cromatografía instantánea (CH2Cl2/MeOH; 95:5 v/v).

Se obtuvieron 8.94 g (98 %) de 19 como un aceite incoloro .

RMN aH (CDC13) : d = 1.45 (s; 9H; CH3); 3.28 (m; 1H; CH2-0H; 3.39 (m; 1H; CH2-OH; ); 3.35 (m; 1H; CH2- NaminoProP/ ) ; 3.38 (m; 1H; CH2-Namin?pr?p. ) ; 3.78 (s; 3H; -CH-OH; CH2-NHgli) ; 4.41 (amplio; 1H; OH) ; 4.67 (amplio; 1H; OH) ; 6.04 (tr; 1H; NH) ; 7.45, (tr.lH; NH) . RMN 13C (CDC13) : ( = 28.4 (CH3) ; 42.2 (CH2-Ngli)'; 44.0 (CH2-Naminoprop/ ) ; 64.0 (CH2-OH) ; 70.8 (CH-OH) ; 80.3 (quat.CBoc) ; 156.6 (NC02) ; 174.5 (NCO) .

Ejemplo 20 Síntesis de 2, 3-dioleoxiloxi-N- ( (N-Boc) -glicil) -aminopropano 20 Se disolvieron 8.90 g (35.85 mol) de 19 junto con 22.70 g (110.02 mmol) de DCC y 26.60 g (94.17 mmol) de ácido oleico en 50 mi de DMF. Se adicionaron 0.42 g (3.44 mmol) de DMAP y se agitó durante 2 d. Después de que se filtró, se evaporó en evaporador giratorio y el producto se purificó por cromatografía (CH2Cl2/MeOH; 99:1 v/v). Rendimiento 19.25 g de 20, como un aceite incoloro (60 %) .

RMN XH (CDCI3) : ( =0.89, (tr.6H; CH3, ácido oleico); 1.30 (amplio; 40H; C-CH2-C) ; 1.45 (amplio; 9H; CH3'BOC) ; 1.62 (m; 4H; CH2-CH2C=0) ; 2.03 (m; 8H; CH2- CH=CH) ; 2.32 (tr; 4H; CH2C=0) ; 3.42-3.57 (m; 2H; CH2-Namlr.0pr0p. ) ; 3.75 (d; 2H; CH2-Ngli) ; 4.12 (dd; 1H; CH2-0aminopl:Op. ) ; 4.27 (dd; 1H; CH2-Oaminoprop. ) ; 5.08 ( ; 1H; CH-O) ; 5.20 (s, 1H; NH) ; 5.34 (m; 4H; CH=CH) ; 6.58, (tr.1H; NH) .

RMN 13C (CDC13) : ( = 14.0 (CH3,ácido oieico) ; 22.7 (CH2, ácido ol?ico) 24.9 (CH2, ácido olßico) / 27.2 (CH2, ácido ol?ico) / 27.2 (CH2, cido oißico) 28.3 (CH2, ácido oißico) / 29.2 (CH2, ácido oißico) / 29.3 (CH3,BOC) ; 29.5 ( CH2, cido oißico ) 29.8 (CH2, ácido ol?ico) / 31.9 ( CH2 , ácido ol?ico) / 34.0 ( CH2, ácido oi?ico) ; 34.2 (CH2, ácido ol?ico) ; 39.7 (CH2-Ngii) ; 44.5 (CH2 — Namin0prop> ) ; 62.7 (CH2_Oaminoprop. ) ; 70.2 ( CH — Oaminoprop. ) ; 80.3 (quat.CBOC); 129.7 (CH=CH) ; 129.7 (CH=CH); 130.0 (CH=CH); 130.0 (CH=CH); 156.1 (NC02); 169.8 (NCO); 173.2 (COácido oleico); 173.4 (COácido oleico) .

Ejemplo 21 Síntesis de 2 , 3-dioleoiloxi-N- (glicil)-aminopropano 21 Se tomaron 15.20 g (19.56 mmol) de 20 en 200 mi de CH2C12/TF (3:1 v/v) se agitaron durante 30 min. Después la solución se diluyó co 200 mi de CH2C12 y se agitó con 200 mi de solución de NaHC03 saturada. La fase orgánica se secó sobre MgS04 y se evaporó en evaporador giratorio. Rendimiento: 11.64 g (88 %) de 21 como un aceite.

RMN L (CDCI3) : ( =0.88 (tr.6H; CH3) ; 1.29 (amplio; 40H; C-CH2-C) ; 1.62 (m; 4H; CH2-CH2C=0) ; 1.82 (s; 2H CH2-Ngly) ; 2.01 (m; 8H; CH2-CH=CH) ; 2.32, (tr.tr 4H; CH2C=0) ; 3.36 (s; 2H; NH2); 3.43-3.62 (m; 2H CH2-Naminoprop . ) ; 4.12 (dd; 1H; CH2-Oaminoprop . ) 4.28 (dd; 1H; CH2-Oaminoprop . ) ; 5.14 (m; 1H; CH-Oaminoprop. ) ; 5.34 (m; 4H; CH=CH) ; 7.60, (tr.lH; NH) . RMN 13C (CDCI3) : (=14.0 (CH3); 22.6 (CH2, ácido oleico); 24.8 (CH2, ácido oleico); 24.8 (CH2, ácido oleico); 27.1 (CH2, ácido oleico); 29.0 (CH2, ácido oleico); 29.1 (CH2, ácido oleico); 29.2 (CH2, ácido oleico); 29.4 (CH2, ácido oleico); 29.6 (CH2, ácido oleico); 31.8 (CH2, ácido oleico); 34.0 (CH2, ácido oleico); 34.2 (CH2, ácido oleico); 39.1 (CH2-Ngly) 44.5 (CH2- Naminoprop . ) ; 62.7 (CH2-Naminoprop . ) 129.6 (CHácido oleico); 129.9 (CHácido oleico) 173.1 (NCO); 173.1 (COácido oleico); 173.3 (COácido oleico) .

Ejemplo 22 Síntesis de 2, 3-dioleoiloxi-N- (N- (N, N' -N' ' -N' ' ' -tetra-ter-butiloxicarbonil-6-carboxi-esparmil) -glicil ) -aminopropano 22 100 mg (0.15 mmol) de 21 se disolvieron junto con 102 mg (0.16 mmol) de (Boc) -espermil-COOH y 39 mg (0.19 mmol) de DCC en 1 mi de CH2C12 y se agitó durante 18 h. Después se removió el DCH precipitado por filtración. La concentración por evaporación y la purificación cromatográfica (CH2Cl2/MeOH, 97:3) producjeron 123.1 mg (65 %) de 22 como un aceite incoloro.

RMN aH (CDC13 + 0.11 mi CD3COOD) : (=0.88 (tr; 6H; CH3, ácido oleico); 1.28 (amplio; 40H; C-CH2-Cácido oleico); 1.46 (amplio; CH3,BOC; CH2, esper il) ; 1.62 (m; 4H; CH2CH2C=0) ; 2.03 (m; 8H; CH2-cH=CH) ; 2.32 (m; 4H; CH2c=0) ; 3.00- ' 3.33 (m; 10H; CH2, espermil ) ; 3.33-3.62 (m; 2H; CH2- Naminoprop . ) ; 3.95 (m; 2H; CH2-Ngly) ; 4.10 (m; 1H; CH2- O); 4.28 (m; 1H; CH2-0) ; 4.30 (amplio; 1H; CHespermil); 5.12 (m; 1H; CHaminoprop. ) ; 5.35 (m; 4H; CH=CH) .

RMN 13C (CDCl3+0.1mlCD3COOD) : ( =14.1 (CH3, ácido oleico); 22.8 (CH2, ácido oleico); 25.0 (CH2, ácido oleico); 27.3 (CH2, ácido oleico); 27.3 (CH2, ácido oleico); 28.4 (CH3,BOC); 28.5 (CH3,BOC); 29.3 (CH2, ácido oleico); 29.3 (CH2, ácido oleico); 29.4 (CH2, ácido oleico); 29.7 (CH2, ácido oleico); 29.9 (CH2, ácido oleico); 32.0 (CH2, ácido oleico); 34.2 (CH2, ácido oleico); 39.7 (CH2-Ngly) ; 43.1 (CH2- Naminoprop. ) ; 63.0 (CH2- O); 70.2 (CH-O) ; 79.6 (quat.CBOC); 80.2 (quat.CBOC); 80.9 (quat.CBOC); 81.5 (quat.CBOC); 129.8 (CH=CH); 130,1 (CH=CH); 155-158 (NC02); 173.6 (COO) '.173.8 (COO).

Ejemplo 23 Síntesis de 2, 3-dioleoiloxi-N- (N- (6-carboxi-espermil) -glicil) -aminopropano 23 Se disolvió 1.00 g (0.77 mmol) de 22 en 100 mi de CH2C12/TFA (3:1) y se agitó durante 30 minutos. Subsecuentemente se removió el solvente se obtuvieron 1.03 g (98.80 %) de 23 como un producto ceroso .

RMN XH (d6-DM80) : (=0.85, (tr.6H; CH3, ácido oleico); 1.23 (amplio; 44H; C-CH2-Cácido oleico/espermil); 1.50 (m; 4H; CH2- CH2C=0) ; 1.67 (m; 2H; C-CH2-Cespermil); 1.83 (m; 2H; C- CH2-Cespermil) ; 1.95 (m; 8H; CH2-CH=CH) ; 2.23 (m; 4H; CH2c=0) ; 2.82-3.30 (m; 10H; CH2, espermil ) ; 3.26 (m; 1H; CH2-Na inoprop. ) ; 3.36 (m; 1H; CH2-Naminoprop . ) ; 3.74-3.88 ( ; 2H; CH2-Ngly) ; 3.93 (amplio; 1H; CHespermil) ; 4.01 (m; 1H; CH2-0) ; 4.24 (m; 1H; CH2-O); 5.02 (m; 1H; CHaminoprop . ) ; 5.31 (m; 4H CH=CH) ; 8.10 (amplio; 6H; NH) ; 8.33, (tr.lH NHC=0) ; 8.98 (amplio; 2H; NH) ; 9.04 , (tr.lH NHC=0) ' .9.15 (amplio; 1H; NH) ; 9.50 (amplio; 1H NH) . RMN 13C (d6-DMSO) : ( =13.8 (CH3, ácido oleico); 20.9 (CH2, esper) ; 22.1 (CH2, ácido oleico); 23.8; 23.9 (CH2,esper); 24.4, 26.6 (CH2, ácido oleico); 26.9 (CH2, esper); 28.5-29.1 (CH2, ácido oleico); 31.3 (CH2, ácido oleico); 33.4,33.6 (CH2, ácido oleico); 36.2 (CH2, esper); 38.7 (CH2, esper); 41.8 (CH2-Ngly) ; 43.0 (CH2-Naminoprop . ) ; 43.9,46.2 (CH2, esper); 58.8 (CHsper); 62.8 (CH2-0) ; 129.5 (CH=CH); 129.6 (CH=CH); 167.4,168.5 (NCOesper/gly); 172.2 (COO); 172.4 (COO) .

Ejemplo 24 Transfección de células HELA adherentes con plásmido CAT 1. Material de Inicio 1. Medio para el cultivo concentrado de HELA (ATCC No. CCL 2): MEM (con sales de EARL) , FCS al 10 %, pivurato 2 mM, glutamina 2 mM, 1 x n.e. aminoácidos . Para la transfección preparar el mismo medio que contiene FCS al 5 % y el mismo medio sin FCS. 2. Plásmido pSV2-CAT en amortiguador TE, concentración: 1 mg/ml, 5 Kb (Gorman C.M. et al., Mol. Cell. Biol. 2, 1044-1051 (1982)). 3. Nuevos reactivos de transfección: en MES (MES 20 mM, NaCl 150 mM, pH 6.2) concentración 1.0 mg/ml, tratado con sonido (sonificador Branson) esterilizado por filtración en EtOH al 99.8 %, concentración 2.5 mg/ml (no tratado con sonido y no esterilizado por filtración) 4. HEPES: Hepes 20 mM, NaCl 150 mM, pH 7.4, estéril, . PBS, BM No. de orden 210 331 (amortiguador 10 mM, sal 150 mM) , estéril y no estéril 6. NaCl 150 mM, 7. Amortiguador: MOPS 10 mM, NaCl 10 -mM, EGTA 1 mM, Tritón X-100 1 % mM, pH 6.5 2. Mezcla de transfección Un día antes de la transfección las células se transfirieron a cajas de petri de 6 cm: para esto las células se trataron con tripsina y se diluyeron a 2 x 105 células/ml (cuenta de células determinada con una cámara de conteo de Neubauer) en el medio que contiene FCS al 5 %. 5 mi por caja. Incubación en un incubador (a 37°C, C02 al 5 %) .

Mezcla por caja para soluciones acuosas del reactivo de transfección (TR) : 1. Adicionar HEPES a 5 µg de plásmido (- 5 µl) a un volumen final de 100 µl y someter a vórtice. 2. Adicionar HEPES a 10 - 40 µg de TR (= 10 - 40 µl) a un volumen final de 100 µl y someter a vórtice . 3. Combinar las soluciones de 1. y 2., agitar cuidadosamente. Dejar reposar durante 10 a 15 min a Temp. Ambiente. 4. Durante el periodo de incubación cambiar el medio en las cajas de prueba: aspirar el medio viejo y reemplazar con 3 mi de medio (que contiene FCS al 5 % o, si es sin FCS al 5 %, lavar las células dos veces con PBS) .

. Adicionar la mezcla de plásmido-TR desde 3 (200 µl) directamente al medio fresco (con o sin FCS) y dispersar uniformemente por revoltura cuidadosa del disco. 6. Incubar durante 6 h en un incubador (a 37°C, C02 al 5 %) . 7. Luego suplementar el medio a una concentración final de FCS de 5 - 10 %. Volumen final del medio de 6 mi . 8. Incubar durante 19 h en un incubador. 9. Luego aspirar completamente la mezcla y reemplazar con 5 mi de medio que contiene 5 - 10 de FCS al 5 - 10 %.

Mezcla por disco para soluciones etanólicas del TR: A. Sin FCS en el medio 1. 5 µg de plásmido (=5 µl) + 500 µl del medio sin FCS, y someter a vórtice. - 40 µg de TR (= 4 - 16 µl) + 500 µl del medio y lavar dos veces con PBS; aspirar.

Lavar las células libres de FCS: aspirar 5 mi del medio y lavar dos veces con PBS; aspirar.

Combinar las soluciones de 1. y 2., agitar cuidadosamente .

Colocar la mezcla de plásmido-TR de 4. (aprox. 1020 µl) en las células lavadas y distribuir igualmente por revoltura cuidadosa de la caja.

Incubar durante 6 h en un incubador (a 37 %, C02 al 5 %) .

Luego suplementar el medio a una concentración final de FCS de 5 - 10 Volumen final del medio de 6 mi .

Incubar durante 18 h en un incubador Luego aspirar completamente la mezcla y reemplazar por 5 mi del medio que contiene FCS al 5 - 10 %.

B. con FCS en el medio 1. 5 µg de plásmido (=5 µl) + 500 µl de NaCl, y someter a vórtice. 2. 10 - 40 µg de TR (= 4 - 16 µl) + 500 µl de NaCl y someter a vórtice. 3. Combinar las soluciones de 1. y 2., agitar cuidadosamente. Dejar reposar durante 15 min a Temp. Ambiente. 4. Durante el periodo de incubación cambiar el medio en las cajas de prueba: aspirar el medio viejo y reemplazar con 1.5 mi de medio (que contiene FCS al 5 %) .

. Colocar la mezcla de plásmido-TR de 3 (aprox. 320 µl) en el medio fresco y distribuir igualmente por revoltura cuidadosa de la caja.

Incubar durante 6 h en un incubador (a 37 %, C02 al 5 %) .

Luego suplementar el medio a una concentración final de FCS de 5 - 10 %. Volumen final del medio de 6 mi .

Incubar durante 18 h en un incubador.

Luego aspirar completamente la mezcla y reemplazar por 5 mi del medio que contiene FCS al 5 - 10 %. sis celular Aspirar el medio y lavar las células tres veces con PBS enfriado con hielo.

Aspirar cuidadosamente el líquido residual y adicionar 1 mi del amortiguador de lisis por caja. Incubar durante 30 min a Temp. Ambiente, dejar que las cajas reposen sin agitación.

Remover el lisado celular por pipeta y transferir a tubos de Eppendorf de 1.5 mi. 4. Centrifugar los lisados en una centrifiga de banco, 3 min.

. Remover el sobrenadante y transferir hasta un recipiente fresco. Descartar el sedimento. 4. Determinación de proteina de los lisados La determinación de proteína se lleva a cabo después de la lisis. La determinación de la proteína se analiza de acuerdo con Bradford (M. Bradford, Anal. Biochem. 72, 248 (1976) ) . Para el examen adicional, los lisados de un experimento se ajustan con amortiguador de la muestra (del equipo CAT-ELISA, Boehringer mannhein, No. de orden 1363727) a la misma concentración de proteína (aprox. 250 µg/ml).

. Determinación de la eficiencia de transfección Los lisados se examinan en un CAT-ELISA (Boehringer Mannheim, No. de orden 1363727). 200 µl de cada uno de los lisados ajustados a la misma concentración de proteína se usan en el ELISA.

La comparación de las absorbancias produce la información acerca de la eficiencias de transfección .

Reconstitución de los componentes del equipo y dilución a la concentración de trabajo: 1. CAT normal, botella 1 Adicionar 0.5 mi de agua redestilada a una botella de liofilisado y disolver por agitación. La concentración (ng/ml) se imprime en una etiqueta.

Dilución de trabajo: Diluir el liofilisado disuelto (0.2 mg/ml) con amortiguador diluyente de la muestra (botella 7) a 2 µg/ml. 3. PAB<Dig>POD, botella 3 Adicionar 0.5 mi de agua redestilada a una botella de liofilisado y disolver por agitación (concentración = 20 U/ml) .

Dilución de trabajo: Diluir el liofilisado disuelto (20 U/ml) con amortiguador diluyente de la muestra (botella 7) a 150 µg/ml . 4. Amortiguador de lavado, botella 6 Se prepara el amortiguador de lavado listo para usarse al mezclar 1 parte 10 x amortiguador de lavado (botella 6) con 9 partes de agu redestilada. 1 x amortiguador de lavado se requiere para todos los pasos de lavado.

. Amortiguador diluyente de la muestra, botella 7 Botella portadora No . 7 a temp. Ambiente en un baño de agua. Lista para usarse. 6. Substrato de POP, botella 4 Substrato de 1 componente de ABTS (botella No. 4), listo para usarse, temperatura Se mantiene constante a temp. Ambiente.

Procedimiento La siguiente tabla se refiere a los amortiguadores y diluciones de trabajo mencionados anteriormente. Los módulos de MTP se tapan en múltiples capas de papel de celulosa después de cada paso de lavado.

Para los pasos de incubación a 37°C se adhiere una hoja de cubierta de MTP sobre la placa.

Los resultados se muestran en las Figuras 1 y 2.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES Compuestos de la fórmula general (I) caracterizados porque Ri representa una cadena de C(0)-C?-23 saturada o insaturada o de C?-24 saturada o insaturada, Ai representa un grupo 0-R2 en el cual R2 tiene el significado señalado para Ri y puede ser el mismo como, o diferente a Ri . A2 representa un NR3X o un residuo de N+R3R4R5Y" en el cual R3, R4 pueden ser los mismos como, o diferentes a, uno al otro, con la condición que R3 y R no puedan ser simultáneamente hidrógeno, representan hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un grupo (CH2)n-0H o (CH2)n-NH2, donde n = 2-6, R5 que puede ser el mismo o diferente como R3 o R4, denota hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un (CH2)n-OH, un (CH2)n- halogenuro, o un grupo ( (CH2) mNH) s- (CH2) n-NH2, en el cual m es un número entero desde 2 a 6 y puede ser igual a, o diferente a n o en donde n puede ser un número desde 2 a 6 y un número entero desde 0 a 4, X puede, además del significado para R5, tener el siguiente significado: un aminoácido amídicamente unido, un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (0) -CHR6N (R ) 2, C(0)CHR6N+ (R7)3, C(0) -CHR6N+ (Rt)2R8 ó C(0)- CHR6NR7R8 con la condición que X denote un aminoácido amídicamente unido, un derivado de aminoácidos adecuado, un pépetido o polipéptido si R3 es hidrógeno, en donde R6 puede ser un residuo (CH2) m-NR7R8/ (CH2)m- N+(R7)2R8 ó (CH2) m-N+ (R7) 3 y m puede ser un número entero desde 1 a 5, R7 representa hidrógeno o un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, R8 representa un grupo (CH2) n-N (R7) 2 ó (CH2)n- N+(R7)3 en el cual n es un número desde 2 a 4 y R7 puede tener el significado señalado anteriormente, y Y es un anión farmacéuticamente aceptable, Bi es un residuo NH [C (0) - (CH2 ) P-NH] q-Z en el cual p es un número desde 1 a 6 y q es un número desde 0 a 2, Z representa un aminoácido amídicamente unido, o un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (0) -CHR6N (R7) 2 C (0) -CHR6N+ (R7) 3, C(0)- CHR6N+ (R7) 2R8 ó C (0) -CHR6NRR8, y R6 a R8 y m tienen los significados mencionados anteriormente, y B2 puede tener el significado señalado para i, y el significado para Ai solo es válido con Bx y aquel de A2 es solo válido con B2.
2. 2. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el reisuo Rx representa un grupo C?0.20 o C(0) 0-2o saturado o insaturado .
3. 3. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque A2 denota NR3X en donde R3 es hidrógeno y X es un aminoácido amídicamente unido, un derivado de aminoácido, un péptido o polipéptido, . Los compuestos de la fórmula general (I) RjO ~ Al,2 (I) Bl,2 - caracterizados porque Ri representa una cadena de C(0)-C?_23 saturada o insaturada o de C?_24 saturada o insaturada, Ai representa un grupo 0-R2 en el cual R2 tiene el significado señalado para Ri y puede ser el mismo como, o diferente a Ri . A2 representa un NR3X o un residuo de N+R3R4R5Y" en el cual R3, R4 pueden ser los mismos como, o diferentes a, uno al otro, representan hidrógeno, representan hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un grupo (CH2)n-OH o (CH2)n-NH2, donde n = 2-6, R5 que puede ser el mismo o diferente como R3 o R4, denota hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un (CH2)n-0H, un (CH2)n- halogenuro, o un grupo ( (CH2) mNH) Q- (CH2) n-NH2, en el cual m es un número entero desde 2 a 6 y puede ser igual a, o diferente a n o en donde n puede ser un número desde 2 a 6 y un número entero desde 0 a 4, X puede, además del significado para R5, tener el siguiente significado: un aminoácido amídicamente unido, un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (0) -CHR6N (R7) 2, C(0)CHR6N+ (R7)3, C(0)-CHR6N+ (R7)2R8 ó C(0)- CHR6NR7R8 en los cuales R6 puede ser un residuo (CH2) ro-NR7R8, (CH2)m- N+(R-7)2R8 ó (CH2) m-N+ (R7) 3 y puede ser un número entero desde 1 a 5, R7 representa hidrógeno o un grupo alquilo con 1 a
4. 4 átomos de carbono, R8 representa un grupo (CH2) n-N (R7) 2 ó (CH2)n- N+(R7)3 en el cual n es un número desde 2 a 4 y R7 puede tener el significado señalado anteriormente, y Y es un anión farmacéuticamente aceptable, Bi es un residuo NH [C (0) - (CH2) P-NH] q-Z en el cual p es un número desde 1 a 6 y q es un número desde 0 a 2, Z representa un aminoácido amídicamente unido, o un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (0) -CHR6N (R7) 2 C (0) -CHR6N+ (R7) 3 , C(0)- CHR6N+ (R7) 2R8 ó C(O) -CHR6NR7R8, y R6 a R8 y m tienen los significados mencionados anteriormente, y B2 puede tener el significado señalado para Ax, y el significado para Ai solo es válido con Bi y aquel de A2 es solo válido con B2.
5. 5. Los compuestos de conformidad con la reivindicación 1, 2, 3 ó 4, caracterizados porque Y denota un halogenuro, sulfato de monometilo, acetato, trifluoroacetao, o fosfato.
6. 6. Los compuestos de conformidad con una de las reivindicaciones de 1 a 5, caracterizados porque es 2- ( 6-carboxispermil) -1 , 3-dioleoiloxi-propi lamida, 1- (6-carboxispermil) -2, 3-dioleoiloxi-propilamida, 2, 3-dileoiloxi-N- (N- (6-carboxispermil) -glicil) -aminopropano, 2- ( 6-carboxispermil ) -1, 3-dmiristoiloxi-propilamida, 2, (1,1,1,5,5,10,10,14,14, 14-deca-metil- 6-carboxiespermil) -1, 3-dioleoxiloxi-propilamida 2- (N,N,N,N' ,N' , N' -hexametilornitil) -1,3-dioleoiloxi-propilamida y/o 2- (, , N, N, N' , N' , N' -hexametillisil) -1 , 3-dioleoiloxi-propilamida .
7. 7. Reactivo compuesto de al menos un compuesto de la fórmula general (I), caracterizado porque la solución contiene un solvente miscible en agua y la fórmula (I) se define como sigue: Bl,2 — en donde: Ri representa una cadena de C(0)-C?-23 saturada o insaturada o de C?-24 saturada o insaturada, Ai representa un grupo 0-R2 en el cual R2 tiene el significado señalado para Ri y puede ser el mismo como, o diferente a Ri . A2 representa un NR3X o un residuo de N+R3RR5Y" en el cual R3, R4 pueden ser los mismos como, o diferentes a, uno al otro, representan hidrógeno, representan hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un grupo (CH2)n-OH o (CH2)n-NH2, donde n = 2-6, R5 que puede ser el mismo o diferente como R3 o R4, denota hidrógeno, un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, un (CH2)n-OH, un (CH2)n- halogenuro, o un grupo ( (CH2) mNH) 0- (CH2) n-NH2, en el cual m es un número entero desde 2 a 6 y puede ser igual a, o diferente a n o en donde n puede ser un número desde 2 a 6 y un número entero desde 0 a 4, X puede, además del significado para R5, tener el siguiente significado: un aminoácido amídicamente unido, un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (O) -CHR6N (R7) 2, C(0)CHR6N+ (R7)3, C(0)-CHR6N+(R7)2R8 ó C(O)- CHR6NR7R9 en los cuales R6 puede ser un residuo (CH2) m-NR7R8, (CH2)m- N+(R7)2R8 ó (CH2) m-N+ (R7) 3 y m puede ser un número entero desde 1 a 5, R representa hidrógeno o un grupo alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, R8 representa un grupo (CH2) n-N (R7) 2 ó (CH2)n- N+(R7)3 en el cual n es un número desde 2 a 4 y R7 puede tener el significado señalado anteriormente, y Y es un anión farmacéuticamente aceptable, Bi es un residuo NH [C (0) - (CH2) P-NH] q-Z en el cual p es un número desde 1 a 6 y q es un número desde 0 a 2, Z representa un aminoácido amídicamente unido, o un péptido o polipéptido amídicamente unido, un grupo C (0) -CHR6N (R7) 2 C (0) -CHR6N+ (R7 ) 3, C (0) - CHR6N+ (R7) 2Ra ó C ( 0) -CHR6NR7R8, y R6 a R8 y m tienen los significados mencionados anteriormente, y B2 puede tener el significado señalado para Ai, y el significado para Ai solo es válido con Bx y aquel de A2 es solo válido con B2.
8. 8. El reactivo de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la solución contiene una mezcla compuesta de al menos un compuesto de la fórmula general (I) y otro compuesto lipídico en solventes miscibles en agua.
9. 9. El reactivo de conformidad con la reivindicación 7 u 8, caracterizado porque el solvente miscible en agua es un alcohol inferior.
10. 10. El reactivo caracterizado porque uno o varios compuestos como se reivindica en la reivindicación 1 a 6 están presentes en la forma de liposomas u otros agregados opcionalmente en la presencia de compuestos lipidíeos.
11. 11. Un método para la distribución de (bio) moléculas en células, caracterizado porque un reactivo de las reivindicaciones 7 a 10 se usa y éste se pone en contacto primero con una biomolécula aniónica y subsecuentemented con células para la transfección.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque las moléculas que se transportan con ADN o ARN.
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la biomolécula aniónica es ADN o un fragmento correspondiente .
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 11 a 13, caracterizado porque es una 2-(6-carboxispermil)-l, 3-dioleoiloxi-propilamida, 1- (6-carboxispermil) -2, 3-dioleoiloxi-propilamida, 2, 3-dileoiloxi-N- (N- ( 6-carboxispermil ) -glicil) -aminopropano, 2-( 6-carboxispermil) -1,3-dmiristoiloxi-propilamida, 2, (1,1,1,5,5,10,10,14,14, 14-deca-metil- 6-carboxiespermil) -1, 3-dioleoxiloxi-propilamida 2-(N,N,N,N' ,N' ,N' -hexametilornitil) -1,3-dioleoiloxi-propilamida y/o 2- (, N, N, , N' , N' , N' -hexametillisil) -1, 3-dioleoiloxi-propilamida.