MXPA97009290A - Tratamiento bacteriano para conservar el ensilaje - Google Patents

Abstract

Se conserva ensilaje por medio del tratamiento con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje de un inoculante seleccionado de:una combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, con el microorganismo Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético:una combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, con el microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalentes genético;y una combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, con el microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético. Los presentes inoculantes son particularmente efectivos para mejorar la velocidad y grado de digestibilidad del ensilaje de asfalfa.

Description

TRATAMIENTO BA-CTERIANO PARA CONSERVAR EL ENSILAJE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Así la invención se refiere a un método para conservar los productos agrícolas que se usan como alimento para animales después de su almacenamiento bajo condiciones anaerobicas. Específicamente, esta invención se refiere a un método para conservar el ensilaje después del almacenamiento bajo condiciones anaerobicas de tal forma que se mejoren el grado y velocidad de digestibilidad del ensilaje. El uso de aditivos de ensilaje se ha vuelto una practica ampliamente aceptada en la mayor parte del mundo agrícola. Durante el proceso de ensilaje, la respiración aerobica empieza inmediatamente después de desmenuzar el ensilaje. Durante esta temprana fase, los carbohidratos solubles en los tejidos vegetales se oxidan y convierten a dioxido de carbono y agua. Este proceso continua hasta que se agote el nivel de oxígeno o bien se agoten los carbohidratos solubles en agua. Bajo las condiciones ideales, con empaque y sellado adecuado del material de ensilaje la respiración dura solo algunas horas. El crecimiento de microorganismos durante este período se limita a aquellos tolerantes al oxígeno. Típicamente esto incluye bacterias aerobicas, levaduras y mohos. Esos organismos se reconocen generalmente como negativos al sistema porque metabolizan el azúcar a dioxido de carbono, calor y agua. Otro importante cambio químico que ocurre durante esta fase temprana es el rompimiento de la proteína vegetal por parte de las proteasas vegetales. Las proteínas se degradan a aminoácidos y se metabolizan a amoniaco y aminas. Se ha reportado que hasta el 50% de la s proteínas totales pueden han desintegrado durante este proceso dependiendo de la velocidad de reducción del pH en el ensilaje. Una vez que se han establecido las condiciones anaerobicas, las bacterias anaerobicas proliferan. Las enterobacterias y las bacterias heterofermentativas de ácido láctico son generalmente las primeras poblaciones que se establecen. Esos organismos producen principalmente ácido acético, etanol, ácido láctico y dioxido de carbono de la fermentación de glucosa y fructuosa. Una vez que el ph empieza a declinar, hay un marcado aumento en la población homofermentativa de ácido láctico que produce principalmente ácido láctico. El aumento rápido en el nivel de ácido láctico da como resultado en la reducción del ph a aproximadamente 4. En este momento, la masa de ensilaje permanecerá estable durante el almacenamiento si no es se le perturba. En resumen cuando el material se empaca inicialmente en la estructura limitante de oxígeno tal como un silo cubierto, el ph se reduce, el oxígeno residual se utiliza y el material sufre una fermentación de ácido láctico. El material permanecerá estable y puede almacenarse durante muchos meses en esta condición.

Cuando el ensilaje esta listo a ser alimentado, la parte superior se retira y el silo se abre para la alimentación. el material entonces se expone al aire y el proceso ya no es anaerobico. La icroflora en el propio ensilaje o los contaminantes volátiles pueden empezar a oxidar los ácidos presentes. Esta oxidación provoca una perdida de masa o materia seca del forraje y provoca perdidas. En adición el pH resultante y los aumentos de temperatura son objetables para los animales y el forraje será rechazado por los animales después de que se ha empezado a calentar, la incidencia de inestabilidad aerobica observada en la practica depende de la velocidad a la cual el material de ensilaje se retira del silo y el tiempo que el material ha estado en el silo antes de abrirlo. Si el ensilaje se descarga lentamente entonces se deja mas tiempo para que se presente el deterioro en la superficie del ensilaje abierto. A tiempos de ensilado mayores producen ensilajes generalmente mas estables ya que las concentraciones de ácidos son mayores y toda la población de microflora tiende a disminuir. En general el ensilaje debe ser estable durante cuando menos cinco días después de abrir. Esto permitirá que transcurra un tiempo adecuado para que el ensilaje sea retirado. Recientemente se ha sabido que los inoculantes bacterianos ayudan a conservar el ensilaje, incluyendo ensilaje de hierba, ensilaje de alfalfa y ensilaje de maíz. Por ejemplo, la inoculación con bacterias de ácido láctico durante la fase de fermentación puede ser benéfico para el proceso de fermentación, ver por ejemplo la patente de EE.UU. 4,842,871 de Hill así como las referencias citadas en ella. Para la estabilidad de alfalfa con alto contenido de humedad, este aumento ee debe probablemente a los inoculantes que mejoran la tasa de fermentación anaerobica y la disminución del pH. Esto es benéfico debido a se evitan las perdidas oxidativas producidas por la microflora sensible al pH en las etapas iniciales. En ensilajes tales como los de planta completa de maíz, alfalfa, etc. el inoculante puede tener efecto benéficos sobre la digestibilidad de los ensilajes provocando un aumento en la disponibilidad de la fibra y/o proporcionando mas nutrientes por cantidad de ensilaje a una mayor velocidad. De acuerdo con esto, es un objetivo de la presente invención el desarrollar un inoculante de ensilaje bacteriano que es efectivo tanto durante las etapas anaerobicas iniciales y durante las etapas aerobicas iniciales cuando un silo se abre al aire. Es otro objetivo de la presente invención el desarrollar un inoculante de ensilaje que aumente la tasa de digestibilidad del ensilaje, poniendo los nutrientes a disposición del animal mas pronto. Otro objetivo de la presente invención es el de desarrollar un inoculante de ensilaje que aumente el grado de digestibilidad del ensilaje, poniendo a disposición mas nutrientes para el animal que se alimente.

El método y la manera de lograr cada uno de los objetivos de la presente invención así como otros será evidente a partir de la descripción detallada que sigue. En la presente invención el ensilaje, incluyendo ensilaje de hierba, alfalfa y/o maíz, se conserva durante la fase inicial anaerobica del proceso de ensilaje y durante las fases iniciales de condiciones aerobicas después de que el silo se abre. La conservación se realiza al mezclar ciertos inoculantes bacterianos facultativos. Los presentes inoculantes mejoran la extensión y velocidad de digestibilidad del ensilaje, especialmente del ensilaje de alfalfa. Los inoculantes son combinaciones de cepas seleccionadas de Lactobacillus plantarum y Enterococcus faecium. Los presentes inoculante son compatibles con otras bacterias y no retardan el proceso de ensilaje de manera alguna. Específicamente los inoculantes incluyen TJ1: una combinación de Lactobacillus plantarum 347 y Enterococcus faecium 302, con el numero ATCC ; ST: una combinación de Lactobacillus plantarum 346 y Lactobacillus plantarum 347, con el numero ATCC y FS una combinación de Lactobacillus plantarum 286 y Lactobacillus plantarum 346, que tiene un numero ATCC . La presente invención también provee métodos para tratar el ensilaje que consiste en administrar al ensilaje una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje, de los presentes prototipos de inoculantes. Los inoculantes de la presente invención ;on particularmente efectivos para mejorar la digestibilidad de ensilaje de alfalfa. El termino "ensilaje" usado aquí se pretende que incluya todos los tipos de productos agrícolas fermentados tales como ensilaje de hierba, ensilaje de alfalfa, ensilaje de planta entera de maíz, ensilaje de sorgo, ensilaje de mezclas fermentadas de granos y hierba, etc. Todo puede tratarse exitosamente con los inoculantes de la presente invención. La presente invención es particularmente efectiva para tratar el ensilaje de alfalfa. Un aspecto sorprendente de esta invenciones que solo ciertas combinaciones de ciertas especies de Lactobacillus plantarum y Enterococcus faecium funcionara efectivamente en la presente invención. La adición de Lactobaci1lus al ensilaje como tema general es conocida, ver por ejemplo la patente de EE.UU. no. 4,981,705. Sin embargo, la presente invención es necesariamente especifica a las especies con relación a la combinación de Lactobacillus plantarum y Enterococcus faecium. En particular los inoculantes que se encontró que funcionan en la presente invención son: Lactobacillus plantarum 347 en combinación con Enteroccoccus faecium 301 ["TJ1" ], Lactobacillus plantarium 346 en combinación con Lactobacillus plantarum 347 ["ST"] y Lactobacillus plantarum 286 en combinación con Lactobacillus plantarum 346 ["FS"]. Ha de entenderse sin embargo que la invención del solicitante, aunque es especifico para las especies pretende cubrir esas especies y sus equivalentes genéticos o sus mutantes efectivas, que demuestran las propiedades deseadas de las especies y cepas mencionadas. Esos equivalentes genéticos o mutantes se consideran funcionalmente equivalentes a las especies madre. Es muy conocido a los expertos en la técnica que la mutación espontanea es una ocurrencia común en microorganismos y las mutaciones pueden producirse intencionalmente por medio de una variedad de técnicas conocidas. Por ejemplo, los mutantes pueden producirse usando técnicas químicas, radioactivas y recombinantes. Sin importar la manera en la cual se inducen las mutaciones o equivalentes genéticos, el caso critico es que funcionan para preservar el ensilaje como se describe para las especies o cepa madre. En otras palabras, la presente invención incluye las mutaciones resultantes en esas pequeños cambios como por ejemplo alteraciones taxonómicas menores. Las composiciones típicas útiles para el tratamiento de esta invención pueden incluir los presentes inoculantes dentro de los rangos útiles para tratar los productos de ensilaje, por ejemplo típicamente 10ß-10" organismos viables/tonelada, preferentemente 10'-10" organismos viables/tonelada, mas preferentemente ÍO10 organismos por tonelada. Se prefiere una mezcla de dos cepas en el rango de aproximadamente 75% a aproximadamente 25% de cada cepa. Una mezcla de aproximadamente 50% de cada una de la dos cepa por inoculante se prefiere particularmente.

La composición de la presente invención también puede incluir otros organismos comunes de conservaciones de ensilaje, por ejemplo Propionibacteria , Streptococcus f Lactococcus y Peiococcus f y ciertas enzimas de hongos y bacterias, considerando que de ninguna manera son antagónicos para los organismos activos. Aquellos con experiencia normal en la técnica conocerán otros portadores y formas de dosificación adecuados, o podrán llegar a ellos usando experimentación rutinaria. Además, la administración de las diferentes composiciones puede realizarse usando técnicas estándar comunes a aquellos con experiencia normal en la técnica, esto es rocío, espolvoreado,. La explicación anterior describe generalmente la presente invención. Un entendimiento mas detallado puede obtenerse haciendo referencia a los siguientes ejemplos específicos que se proveen con propósitos de ilustración y no se pretende que sean limitantes a menos que se especifique otra cosa.

En los ejemplos mostrados en las siguientes tablas, el tratamiento, preparación y almacenamiento se realizaron usando procedimientos estándar. Los inoculantes usados en las pruebas de ensilaje, que se realizaron en los años 1992, 1993 y 1994 se compararon con una mezcla de control que no contiene ningún inoculante. El nivel de inoculante fue de lxlO5 organismos viables por gramo de forraje en una mezcla 50:50. Esto corresponde a 9xl010 organismos por tonelada. Se aplicaron tratamientos en forma liquida. Los inoculantes prototipos desarrollados consistieron de cepas seleccionadas de Lactobacillus plantarum y Enterococcus faecium en las siguientes combinaciones: Lactobacillus plantarum cepa 347 en combinación con Enteroccoccus faecium cepa 301 ["TJ1"], Lactobacillus plantarum cepa 286 en combinación con Lactobacillus plantarum 346 ["FS"] y Lactobacillus plantarium cepa 346 en combinación con Lactobacillus plantarum cepa 347 ["ST"]. Las combinaciones prototipo se mezclaron en una proporción 50:50 y se aplicaron sobre alfalfa picada y marchitada, en forma liquida en una proporción de lxl05cfu/g de forraje. El forraje tratado se dividió en porciones iguales y se empaco con una densidad estándar usando una prensa en silos experimentales de PVC de 10x35 cm. Los silos se sellaron en cada extremo con tapas de caucho retenidos fuertemente con anillos metálicos. Un extremo se equipo con una válvula de liberación de presión de tal forma que los gases puedan escapar y mantener la anaerobiosis. Los silos experimentales se almacenaron a 20-25ßC durante 80-120 días antes de abrir para simular las condiciones de un silo en una granja. Los silos experimentales se abrieron, el ensilaje se traslado a un recipiente limpio, se mezclo y se tomaron muestras para los análisis microbianos, químicos y de digestibilidad. El ensilaje remanente se coloco en un enfriador de poliestireno forrado con plástico, se coloco una sonda en el centro de la masa de ensilaje, y la temperatura se midió cada 3 horas durante una semana para determinar la estabilidad aerobica. Esto es importante porque cuando el ensilaje se expone al aire, pueden presentarse grandes perdidas de nutrientes como resultado de los productos de fermentación y de consumo de azucares de los microorganismos aerobicos en el silo. Los azucares se convierten en dioxido de carbono y agua, produciendo calor. Además la perdida de porciones altamente digeribles del ensilaje, algunos microorganismos aerobicos producen toxinas que afectan la salud del animal. Dos mediciones se usaron para determinar la estabilidad de el ensilaje después de la exposición con el aire. La hora a la cual la temperatura del ensilaje aumento 1.7°C por encima de la temperatura ambiente se llamo "putrefacción" den ensilaje. es una medida del tiempo después de que el ensilaje se expone al aire antes de que los microorganismos aerobicos empiezan a crecer provocando que en ensilaje se caliente. El grado acumulativo de días, o "cumm dd" es la integración del área entre la curva de temperatura actual y la línea de la temperatura ambiente. Es una medida de la cantidad total de calentamiento. Las temperaturas elevadas aumentan la velocidad y cantidad de desintegración de la proteína y reducen la digestibilidad del nitrógeno, fibras y otras fracciones.

La determinación del nitrógeno de amoníaco se realizo usando procedimientos estándar que incluyen la disociación de los iones de amoníaco al elevar el pH, seguido por la destilación del vapor del amoníaco fuera del ensilaje. La cantidad de nitrógeno de amoníaco se mide cuantitativamente por medio de titulación. El nivel de nitrógeno de amoníaco es el indicador de la velocidad de fermentación. Entre mayor sea la velocidad de fermentación, menor será la actividad de las enzimas proteolitica, poniendo mas proteínas a la disposición de un animal. La medición final de la fermentación es el pH. Un pH satisfactorio para el ensilaje de alfalfa es menor a 4.5. A medida que disminuye el pH, disminuye la actividad proteolitica. Las mediciones del pH se realizaron con un medidor de pH Orien" modelo 701A calibrado con amortiguadores de pH 4.01 y 7.00. Para determinar la extensión y velocidad de la digestibilidad, se secaron y molieron muestras a través de una pantalla de molino Wiley de 0.5 mm para el análisis de digestibilidad. Todas las muestras se sometieron a espectroscopia de reflectancia infrarroja cercana [NIRS]. Los extremos en los espectros se seleccionaron para realizar las velocidades de materia seca in vitro [IVDM] y la extensión de la digestibilidad. La velocidad IVDM de digestibilidad se determino usando un sistema designado para simular lo que pasa en el rumen. Muestras secas de ensilaje se combinaron con un amortiguador y fluido de rumen que contenga microorganismo celulares vivos. A medida que los microorganismos celulares digieren la fibra en la muestra de ensilaje, se produce gas. la velocidad de digestibilidad se definió como la pendiente de la porción lineal de la curva producida al graficar la producción de gas vs tiempo. Se expreso como un porcentaje de un estándar para registrar la variación en poblaciones microbianas entre los lotes de fluido de rumen. Una velocidad mayor de digestibilidad significa que los nutrientes están disponibles para el animal más rápido permitiendo que los utilicen para producir mas leche o carne. Una posibilidad de como los inoculantes provocan esta aumento es que cambian la estructura del forraje, haciéndolo mas disponible a los microorganismos del rumen, que a su vez convierten el forraje a energía usada por el animal. EL volumen total de gas producido en un período fijo de tiempo es llamado el grado de digestibilidad y también se expresa como porcentaje de un estándar. El grado de digestibilidad es un indicador de la cantidad total de nutrientes puestos a disposición por la digestión de las fibras. La tasa IVDM y el grado de la digestibilidad para los extremos se agregan a la ecuación de calibración NIRS y los valores para las otras muestras se predijeron en base a sus espectros. Las tablas 1, 2 y 3 a continuación resumen las pruebas realizadas. "Control" indica ensilaje no inoculado. La tabla 1 resume los datos de una prueba de 1992. La tabla 1 indica que TJl, FS y ST tienen todos niveles mayores de digestibilidad que el ensilaje de control. Asi los nutrientes de los ensilajes inoculados estarían disponibles a un animal mas rápido que los nutrientes de ensilaje no inoculado. Los ensilajes inoculados TJl y FS también muestran menores niveles de nitrógeno de amoníaco que el ensilaje de control, indicando una tasa de fermentación mas rápida que conduce a menores perdidas de proteínas. Los valores de pH fueron todos aceptables [<4.5] teniendo los ensilajes inoculados pH numéricamente mejores que los del ensilaje de control. La tabla 2 resume los datos de 1993 cubriendo siete pruebas para pH, putrefacción, cumm-dd, grado de digestión, y velocidad de digestión. Se realizaron cinco pruebas sobre el nitrógeno de amoníaco. TJl, FS y ST muestran todas velocidades significativamente mayores [p<.l][los nutrientes están disponibles mas rápido] y mayor grado de digestibilidad [mas nutrientes disponibles] y menores niveles de nitrógeno de amoníaco [P<.1] [menos perdida de proteína] que el ensilaje no inoculado. Los inoculantes también proporcionan mejores valores de putrefacción y cumm_dd que el ensilaje de control indicando menor estabilidad aerobica. Los valores de putrefacción mejores menor perdida de nutrientes debido al calentamiento aerobico. Los valores Cumm_dd fueron todos muy bajos indicando un calentamiento total mínimo. Los valores de putrefacción fueron todos satisfactorios ya que pasaron mas de 6 días después de que los microorganismos aerobicos empezaran a crecer y provocaran el calentamiento. Los valores Cumm_dd fueron muy bajos mostrando que el calentamiento total fue mínimo. La tabla 3 resume los datos de cinco pruebas realizadas para TJl y cuatro muestras conducidas para ST en 1994. Los datos indican que TJl y ST presentan velocidades y grados mayores de digestibilidad que el ensilaje de control. Los ensilajes inoculados también tenían valores de pH significantemente mejores (P<.20) que el ensilaje de control (que tenía un pH por encima de 4.5).

Tabla 1: Resumen de la prueba con alfalfa en 1992 Tratamiento pH Vel. de disest. NH,-N f% N total 1 Control 4.35 107.9 10.58 TJl 4.30 123.0 8.88 FS 4.21 126.3 7.82 ST 4.17 124.6 Tabla 2: Resumen de la prueba con alfalfa en 1993 Tratamiento pü Putref . Cumm dd Grado Vel. NH,-N r%N de diaestib. total 1 Control 4.44 134.8 22.2 80.7 87.3 7.71 TJl 4.46 146.5 27.5 89.3 95.3 6.66 FS 4.43 157.1 1.6 89.2 92.0 5.36 ST 4.45 160.0 0 88.5 94.8 5.20 Tabla 3; Resumen de la prueba con alfalfa en 1994 Tratamiento Putref . Cumm dd Grado Vel . de digestibilidad Control 152.9 11.4 88.81 87.23 ST 149.4 23.1 94.75 93.39 TJl 151.8 11.4 92.61 94.21

Claims (20)

REIVINDICACIONES

1.- Un método para conservar el ensilaje, el método consiste en tratar el ensilaje con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje de un inoculante seleccionado del grupo consistente de: Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, en combinación con Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético; Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, en combinación con Enterococcus faccium 347, o su equivalente genético; Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, en combinación con Enterococcus faccium 346, o su equivalente genético.

2.- El método de acuerdo con la reivindicación 1 en el cual el ensilaje conservado es ensilaje de alfalfa.

3.- El método de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual el inoculante es una combinación de Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, y Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético.

4.- El método de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual el inoculante es una combinación de Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, y Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético.

5.- El método de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual el inoculante es una combinación de Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, y Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético.

6.- El método de acuerdo con la reivindicación 2 en el cual el inoculante se aplica a una tasa de aproximadamente 10* a aproximadamente 1014 organismos viables por tonelada.

7. - El método de acuerdo con la reivindicación 6 en el cual el inoculante se aplica a una tasa de aproximadamente 10* a aproximadamente 10" organismos viables por tonelada.

8.- El método de acuerdo con la reivindicación 7 en el cual el inoculante se aplica a una tasa de aproximadamente 1010 organismos por tonelada.

9.- Un conservador para ensilaje seleccionado del grupo consistente de una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje del microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, en combinación con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje del microorganismo Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético; una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje del microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, en combinación con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje del microorganismo Enterococcus faccium 347, o su equivalente genético; y una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje del microorganismo Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, en combinación con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje del microorganismo Enterococcus faccium 346.

10.- El conservador de acuerdo con la reivindicación 9 en el cual el conservador además contiene un portador de cultivo adecuado.

11.- El conservador de acuerdo con la reivindicación 10 en el cual el conservador consiste de la combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, y del microorganismo Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético.

12.- El conservador de acuerdo con la reivindicación 10 en el cual el conservador consiste de la combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, y del microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético.

13.- El conservador de acuerdo con la reivindicación 10 en el cual el conservador consiste de la combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, y del microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético.

14.- Un método para mejorar la velocidad y grado de digestibilidad de ensilaje, el método consiste en tratar ensilaje con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje de un inoculante seleccionado del grupo consistente de: Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, en combinación con Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético; Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, en combinación con Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético; y Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, en combinación con Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético.

15.- El método de acuerdo con la reivindicación 14 en el cual el ensilaje conservado es ensilaje de alfalfa.

16.- El método de acuerdo con la reivindicación 15 en el cual el inoculante consiste de la combinación de Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, y de Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético.

17.- El método de acuerdo con la reivindicación 15 en el cual el inoculante consiste de la combinación de Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, y de Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético.

18.- El método de acuerdo con la reivindicación 15 en el cual el inoculante consiste de la combinación de Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, y de Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético.

19.- El método de acuerdo con la reivindicación 15 en el cual el inoculante se aplica en una tasa de aproximadamente 10ß a aproximadamente 1014 organismos viables por tonelada.

20.- El método de acuerdo con la reivindicación 19 en el cual el inoculante se aplica en una tasa de aproximadamente 10* a aproximadamente 10" organismos viables por tonelada. RESUHEfl Se conserva ensilaje por medio del tratamiento con una cantidad pequeña pero efectiva para conservar el ensilaje de un inoculante seleccionado de: una combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético, con el microorganismo Enterococcus faccium 301, o su equivalente genético: una combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético, con el microorganismo Lactobacillus plantarum 347, o su equivalente genético; y una combinación del microorganismo Lactobacillus plantarum 286, o su equivalente genético, con el microorganismo Lactobacillus plantarum 346, o su equivalente genético. Los presentes inoculantes son particularmente efectivos para mejorar la velocidad y grado de digestibilidad del ensilaje de alfalfa.