MXPA97008226A - Vacunas que contienen una saponina y un esterol - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a una composición de vacuna que comprende un antígeno, una fracción de saponina inmunológicamente activa y un esterol.

Description

VACUNAS QUE CONTIENEN UNA SAPONINA Y UN ESTEROL La presente invención a formulaciones de vacunas novedosas, a métodos de su producción y a su uso en medicina. En particular, la presente invención se refiere a vacunas que contienen un antígeno, una fracción inmunológicamente activa derivada de corteza de Quillaja Saponaria Molina tal como QS21 y un esterol. Las fracciones inmunológicamente activas que tienen actividad auxiliar derivadas de corteza del árbol de Sudamérica Quillaja Saponaria Molina se conocen en la materia. Por ejemplo QS21 también conocida como QA21, una fracción purificada de CLAR del árbol de Quillaja Saponaria Molina y su método de su producción se describe (como QA21) en la patente de E.U.A. No. 5,057,540. La Saponina de Quillaja también se describe como un auxiliar por Scott y otros, Int. Archs. Allergy Appl. Immun., 1985, 77, 409. Sin embargo, el uso de QS21 como un auxiliar está asociado con ciertas desventajas. Por ejemplo, cuando QS21 se inyecta en un mamífero dado que una molécula libre se ha observado que la necrosis, que por decirlo, es la muerte de tejido localizada, ocurre en el sitio de inyección. Ahora se ha encontrado sorprendentemente que la necrosis en el sitio de inyección se puede evitar mediante el uso de formulaciones que contienen una combinación de QS21 un esterol. Los esteróles preferidos incluyen ß-sitoesterol, estigmasterol, ergosterol, ergocalciferol y colesterol. Estos esteróles son bien conocidos en la materia, por ejemplo, se describe colesterol en el Merck I ndex, 1 1 a Ed . Página 341 , como un esterol presente en la naturaleza en grasa animal. En un primer aspecto, la presente invención provee por lo tanto una composición de vacuna que comprende un antígeno, una fracción de saponina inmunológicamente activa y un esterol . Preferiblemente las composiciones de la invención contienen la fracción de saponina inmunológicamente activa en forma substancialmente pura. Preferiblemente las composiciones de la invención contienen QS21 en forma substancialmente pura, es decir, la QS21 por lo menos es 90% pura, preferiblemente por lo menos 95% pura y más preferiblemente por lo menos 98% pura. Otras fracciones de saponina inmunológicamente activas útiles en composiciones de la invención incluyen QA 17/QS 17. Las composiciones de la invención que comprenden QS21 y colesterol mostró disminuir la reactogenicidad cuando se comparan con composiciones en las cuales está ausente el colesterol, mientras que se ambiente el efecto auxiliar. Además, se sabe que QS21 se degrada bajo condiciones básicas en donde el pH es de aproximadamente 7 o mayor. Una ventaja adicional de las composiciones presentes es que la estabilidad de QS21 a la hidrólisis mediada por base se aumenta en formulaciones que contienen colesterol. Las composiciones preferidas de la invención son aquellas que forman una estructura de liposoma. Las composiciones en donde la fracción de saponina de esterol/inmunológicamente activa forma una estructura de ISCOM también forman un aspecto de la invención .

La relación de QS21 :esterol normalmente estará en el orden de 1 : 100 a 1 : 1 de peso a peso. Preferiblemente está presente esterol en exceso, la relación de QS21 :esterol siendo de por lo menos 1 :2 p/p. Normalmente para la administración a humanos estará presente QS21 y esterol en una vacuna en la escala de aproximadamente 1 µg a aproximadamente 100 µg, preferiblemente aproximadamente 10 µg a aproximadamente 50 µg por dosis. Preferiblemente los liposomas contienen un l ípido neutro, por ejemplo fosfatidilcolina, que preferiblemente es no cristalino a temperatura ambiente, por ejemplo, fosfatidilcolína de clara de huevo , fosfatidilcolina de dioleoilo o fosfatidilcolina de dilaurilo. Los liposomas también contienen un líquido cargado que incrementa la estabilidad de la estructura de liposoma QS21 para liposomas compuestos de líquido saturados. En estos casos, la cantidad de líquido cargado preferiblemente es de 1 -20% p/p, más preferiblemente 5- 10% . La relación de esterol a fosfolípido es de 1 -50% (ml/mol), más preferiblemente 20-25% . Preferiblemente las composiciones de la invención contienen MPL (lípido monofosforilo 3-desacilado A también conocido como 3S-MPL) . Se conoce el 3D-MPL de GB2 220 21 1 (Ribi) como una mezcla de 3 tipos de lípido A monofosforílico De-O-acilado con 4, 5 ó 6 cadenas aciladas y se manufactura por Ribi I mmunochem , Montana. Se describe una forma preferida en la Solicitud de Patente Internacional 92/1 16556.

Las composiciones adecuadas de la invención son aquellas en donde los liposomas son preparados inicialmente sin MPL y MPL se adiciona entonces, preferiblemente como partículas de 100 nm. Por lo tanto MPL no está contenido dentro de membrana de vesículas (conocidas como MPL afuera). Las composiciones en donde MPL esta contenido adentro de la membrana de vesículas (conocido como MPL adentro) también forma un aspecto de la invención. El antígeno puede estar contenido dentro de la membrana de vesícula o contenido afuera d ella membrana de vesícula. Preferiblemente los antígenos solubles están afuera y los antígenos hidrofóbicos o lipidados están contenidos tanto adentro como afuera de la membrana. Con frecuencia las vacunas de la invención no requieren ningún vehículo específico y se formulan en una solución reguladora de pH farmacéuticamente aceptable acuosa y otra. En algunos casos puede ser ventajoso que las vacunas de la presente invención además contienen alúmina o pueden estar presentes en una emulsión de aceite en agua, u otro vehículo adecuado, tal como por ejemplo, liposomas, microesferas o partículas de antígeno encapsuladas. Preferiblemente las formulaciones de vacunas contendrán un antígeno o composición antigénica capaz de producir una respuesta inmune contra un patógeno humano o animal. El antígeno o composiciones antigénicas conocidas en la materia se pueden usar en las composiciones de la invención, incluyendo antígenos de polisacárido, antígenos o composiciones antigénicas derivadas de HIV-1, (tales como gp 120 o gp 160), cualquiera de virus de Inmunodeficiencia de felinos, virus de herpes humano o animales, tales como gD o derivados de los mismos o proteína inmediata Temprana tales como ICP27 de HSV1 ó HSV2, citomegalovirus (especialmente humanos) (tales como gB o derivados de los mismos), Virus Varicella Zoster (tal como gpl, II o III) o de un virus de hepatits tal como virus de hepatitis por ejemplo antígeno de Superficie de Hepatitis B o un derivado del mismo, virus de hepatitis A, virus de hepatitis C y virus de hepatitis B, o de otros patógenos virales, tales como virus Sincicíales Respiratorios (por ejemplo proteínas F y Ge de HSRV o fragmentos inmunogénicos de las mismas descritas en la Patente de E.U.A. 5,149,650 o polipeptidos quiméricos que contienen fragmentos inmunogénicos de proteínas F y G de HSRV, v.gr., glicoproteína FG descrita en la Patente de E.U.A. 5,194,595), antígenos derivados de cepas de meningitis tales como meningitis A, B y C, Sterptoccoccus Pneumonía, virus de papiloma humano, virus de Influenza, Hemophilus Influenza B (Hib), Virus Epstein Barr (EBV), o derivados de patógenos bacterianos como Salmonella, Neisseria, Borrrelia (por ejemplo OspA o OspB o derivados de los mismos), o Chlamydia, o Bordetella por ejemplo P.69, Pt y FHA, o derivados de parásitos tales como plasmodio o toxoplasma. Glicoproteína D de HSV (gD) o derivados de los mismos es un antígeno de vacunas preferido. Está localizado en la membrana viral y también se encuentra en el citoplasma de células infectadas (Eisenberg R. J. y otros; J. of Virol 1980 35 428-438). Comprende 393 aminoácidos incluyendo un péptido señalador y tiene un peso molecular de aproximadamente 60 kD. De todas las glicoproteínas de cubierta de HSV, probablemente este es el mejor caracterizado (Cohén y otros J . Virology 60 157- 166). I n vivo se conoce que juega un papel central en la unión viral a las membranas celulares. Además, la glicoproteína D ha mostrado que es capaz de producir anticuerpos neutralizantes in vivo y protege animales del reto letal . Una forma truncada de la molécula de gD libera la región de anclaje de terminal C y puede producirse en células de mam íferos como proteína soluble que se exporta en el sobrenadante de cultivo celular. Se prefieren dichas formas solubles de g D . La producción de formas truncadas de gD se describe en EP 0 139 417. Preferiblemente g D se deriva de H SV-2. Una modalidad de la invención es una glicoproteína D de HSV-2 truncada de 308 aminoácidos que comprende aminoácidos 1 a 306 de la glicoproteína presente en la naturaleza con la adición de Asparagina y Glutamina en el extremo terminal C de la proteína truncada se libera de su región de ancla de membrana. Esta forma de la proteína incluye el péptido de señal que se separa para permitir que la proteína de 283 aminoácidos soluble madura se secrete de una célula huésped . En otro aspecto de la invención, el antígeno de superficie de Hepatitis B es un antígeno de vacuna preferido. Como se usa en la presente, la expresión "antígeno de superficie de Hepatitis B" o 'H BsAg' incluye cualquier antígeno de H BsAg o fragmento del m ismo exhibiendo la antigenicidad del antígeno de superficie de HBV. Se entenderá que además de la secuencia de 226 aminoácidos del antígeno HBsAg (ver Tiollais y otros, Nature, 317, 489 (1985) referencias en la misma) HBsAg como se describió en la presente, si se desea, puede contener todo o parte d ella secuencia pre-S como se describió en las referencias anteriores en la EP-A-0 278 904. En particular el HBsAg puede comprender un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácido que comprende residuos de 12-52 seguido por residuos de 133-145 seguido por los residuos 175-400 de la proteína L de HBsAg relativo al marco de lectura abierto en un virus de Hepatitis B de serotipo de adición (este polipéptido se denomina como L*; véase EP 0414 374). HBsAg dentro del alcance de la invención también se puede incluir el polipéptido pre-S1-preS2-S descrito en la EP 0198 474 (Endotronics) o análogos cercanos de los mismos tales como aquellos descritos en la EP 0 304 578 (Me Cormick y Jones), HBsAg como se describió en la presente puede denominarse como mutantes, por ejemplo, la 'muíante de escape' descrita en la EP 0 304 578 (Me Cormíck y Jones). HBsAg como se describió en la presente también puede referirse a mutantes, por ejemplo, la 'mutante d escape' descrita en la WO 91/14703 o la Solicitud de Patente Europea Número 0 511 855a1, especialmente HBsAg en donde la substitución de aminoácido en la posición 145 es de glicina a arginina. Normalmente el HBsAg estará en forma de partículas. Las partículas pueden comprender, por ejemplo la proteína S sola o pueden ser partículas mixtas, por ejemplo (L*, S) en donde L* es como se definió antes y S denota la proteína S de H BsAg. Dicha partícula ventajosamente tiene la forma en la cual se expresa en levaduras. La preparación de proteína S de antígeno de superficie de hepatitis B está bien documentada. Véase por ejemplo, Harford y otros (1983) en Develop. Biol. Standard 54, pág . 125, Gregg y otros (1987) en Biotechnology. 5, página 479, EP 0 226 846, EP 0 299 108 y referencias en la presente. Las formulaciones dentro del alcance de la invención también pueden contener un antígeno antitumoral y ser útiles para cánceres de tratamiento de inmunoterapia. La preparación de vacunas generalmente se describió en New Trends and Developments in Vaccines, editado por Voller y otros, University Park Press , Baltimore, Maryland , E . U .A. 1978. La encapsulación dentro de liposomas se describió, por ejemplo, por Fullerton , Patente de E. U .A . 4,235,877. La conjugación de proteínas a macromoléculas se describió, por ejemplo, por Likhite, Patente de E . U .A. 4,372,945 y por Armor y otros, Patente de E. U .A. 4, 474,757.

La cantidad de proteína en cada dosis de vacuna se selecciona como una cantidad que induce una respuesta inmunoprotectora sin efectos laterales significativos, adversos en vacunas normales. Dicha cantidad variará dependiendo de cual inmunógeno específico se emplea y cómo se presenta . Generalmente, se espera que cada dosis comprenderá de 1 a 1000 mcg de proteína, preferiblemente de 2 a 100 mcg , más preferiblemente de 4 a 40 mcg. Una cantidad óptima para una vacuna particular puede evaluarse mediante estudios normales implicando la observación de respuestas inmunes apropiadas en los sujetos. Después de una vacuna inicial, los sujetos pueden recibir una o varias inmunizaciones de refuerzo separadas adecuadamente. Las formulaciones de la presente invención se pueden usar tanto para fines profilácticos como terapéuticos. Consecuentemente, en un aspecto adicional, la invención provee así el uso de una vacuna de la invención para el tratamiento de pacientes humanos. La invención provee un método de tratamiento que comprende administrar una cantidad efectiva de una vacuna de la presente invención a un paciente. En particular, la invención provee un método para tratar infecciones virales, bacterianas, parásitas o cáncer el cual comprende administrar una cantidad efectiva de una vacuna de la presente invención a un paciente. Los siguientes ejemplos y datos ilustran la invención. Ejemplos 1.1 Método de preparación de liposomas: Una mezcla de lípidos (tal como fosfatidilcolina ya sea de yema de huevo o sintético) y colesterol en solvente orgánico, se seca bajo vacío (o alternativamente bajo una corriente de gas inerte). Una solución acuosa (tal como solución salina con solución de pH regulado de fosfato) después se adiciona y el recipiente se agita hasta que todo el lípido está en suspensión. Este suspención entonces de microfluidiza hasta que se reduce el tamaño de liposoma a 1 nm y después se filtra con esterilización a través de un filtro de 0.2 µm. La extrusión o tratamiento con sonido podría reemplazar este paso. Normalmente la relación de colesterol:fosfatidilcolina s de 1:4 (p/p) y la solución acuosa se adiciona para dar una concentración final de colesterol de 5 a 50 mg/ml. Si MPL en solución orgánica se adiciona al líquido en solución orgánica, los liposomas finales contienen MPL en la membrana (denominado como MPL adentro). Los liposomas tienen un tamaño definido de 100 nm y se denominan como SUV (para vesículas unilamelares pequeñas). Si esta solución se congela y descongela repetidamente las vesículas se funden para formar grandes estructuras multilamelares (MLV) de tamaño que varía de 500 nm a 15 µm. Los liposomas por sí mismos son estables con el tiempo y no tiene capacidad fusogénica. 1.2 Procedimiento de formulación: QS21 en solución acuosa se adiciona a los liposomas. Esta mezcla se adiciona entonces a la solución antigénica que si se desea, puede contener MPL en la forma de partículas de 100 nm. 1.3 La actividad lítica de QS21 se inhibe por los liposomas que contienen colesterol Cuando QS21 se adiciona a eritrocitos, los lisan liberando hemoglobina. Esta actividad lítica también se puede medir usando liposomas que contienen colesterol en su membrana y un colorante fluorescente atrapado, carboxifluoresceína, a medida que los liposomas se lisan el colorante se libera, lo cual se puede monitorea por espectroscopia de fluorescencia. Si los liposmas fluorescente no contienen colesterol en su membrana no se observa lisis de los liposomas. Si el QS21 se incuba con liposomas que contienen colesterol antes de adicionarlo a eritrocitos, la lisis de eritrocitos se disminuye dependiendo de la relación de colesterol a QS21 . Si se usa una relación de 1 : 1 no se detecta actividad lítica. Si los liposomas no contienen colesterol, la inhibición de lisis requiere un exceso de cien veces de fosfolípido sobre QS21 . Lo mismo es cierto usando liposomas fluorescentes para medir la actividad l ítica. En la siguiente gráfica, la actividad lítica de 4 µg de QS21 tratado con liposomas que carecen de colesterol (1 mg de lecitina de yema de huevo por mi) o conteniendo colesterol (1 mg lecitina , 500 µg de colesterol por mi) se midió por fluorescencia .

Los datos muestran que QS21 se asocia en una manera específica con colesterol en una membrana, ocasionando así la lisis (de células o liposomas fluorescentes). Si el QS21 primero se socia con colesterol en liposomas, no es lítico hacia las células u otros liposomas. Esto requiere una relación mínima de 0.5: col. :QS21 (P/P). El colesterol es insoluble en soluciones acuosas y no forma una suspensión estable. En presencia de fosfolípidos el colesterol reside dentro de la bicapa de fosfolípidos que puede formar una suspensión estable de vesículas llamadas liposomas. Para evitar el requerimiento de adicionar fosfolípidos, se analizó un derivado soluble. El sebacato de polioxietanil-colesterol es soluble en agua a 60 mg/ml sin embargo aún a un exceso de 2000 veces (p/p) sobre QS21 no se detectó reducción en la actividad lítica de QS21 . 1 .4 Estabilidad incrementada de QS21 por liposomas que contienen colesterol. QS21 es muy susceptible a la hidrólisis en un pH por arriba de 7. La hidrólisis se puede monitorear midiendo la disminución en el pico correspondiente a QS21 en CLAR de fase inversa. Por ejemplo, la siguiente gráfica muestra que un pH 9 y a una temperatura de 37°C, 90% de QS21 se hidroliza dentro de 16 horas. Si los liposomas que contienen colesterol se adicionan al QS21 a una proporción de 2: 1 (col: QS21 p/p) no se detectó hidrólisis bajo las mismas condiciones. Si la relación des de 1 : 1 se degrada 10% del QS21 .

Incubación de 20 µg QS21 en presencia de SUV que contiene colesterol de pH 9 durante 16 hrs a 37°C µg colesterol presente Se' concluye que cuando QS21 se asocia con liposomas que contienen colesterol, se vuelve mucho menos susceptible a la hidrólisis mediada por base. El producto de la hidrólisis se describe porque no tiene actividad auxiliar cuando se da parenteralmente, por lo tanto las vacunas que contienen QS21 tienen que ser formuladas a pH ácido y se mantienen a 4°C para mantener composición auxiliar. El uso de liposomas puede superar este requisito. 1.5 Estudios de reactogeneicidad Los ratones fueron inyectados en músculo de la tibia con 5 µg QS21 (o digitonina) adicionado para incrementar cantidades de liposomas (expresado en términos de µg colesterol). La actividad lítica se expresa como µg QS21 equivalente, lo cual significa la cantidad de QS21 requerida para lograr la misma hemolisis como la muestra.

La coloración rojiza , necrosis y toxicidad en el músculo en el sitio de inyección se clasificaron visualmente después de sacrificar los ratones.

Los datos muestran que cuando la actividad lítica es abolida por la adición de liposomas que contienen colesterol , también es abolida la toxicidad después de sacrificar a los ratones. 1 .6 Reactogeneicidad intramuscular en conejos Valores en U . l ./L Los datos muestran que la adición de liposomas que contienen colesterol a la formulación reduce significativamente la elevación en CPQ (creatinina fosfoquinasa) ocasionada por el QS21. Dado que el incremento en CPQ es una medida de daño muscular, indica daño disminuido del músculo y se confirma por la histopatología. 1.7 Unión del complejo de liposoma-QS21 a alúmina QS21 se incubó con liposomas neutros que contienen exceso de colesterol así como colesterol radioactivo y después se incubó con alúmina (AI(OH)3) en PBS. Solos, ni los liposomas neutros ni QS21 se unen a alúmina en PBS, ni lo hacen los liposomas cargados negativamente. Sin embargo, cuando están juntos, QS21 y los liposomas neutros se unen a alúmina. El sobrenadante no contuvo ni QS21 (analizado por prueba de orcinol) ni colesterol radioactivo.

Esto indica que QS21 se ha unido a los liposomas y permite la combinación de liposoma-QS21 para unirse a la alúmina. Esto puede surgir de una carga negativa que se impone en los liposomas por QS21 , o a una exposición de regiones hidrofóbicas en los líposomas. Estos resultados también implican que QS21 no extraiga colesterol de la membrana. Esto indica que las composiciones de la invención se pueden usar en vacunas basadas en alúmina. 1 .8 Comparación de QS21/MPL liposomal y QS21 +MPL para anticuerpo e inducción de CMI SUV se preparó por extrusión (EYPC: col : MPL, 20:5: 1 ). Para M PL afuera, los liposomas se prepararon sin MPL y MPL adicionado como partículas de 100 nM . QS21 se adicionó antes al antígeno Col:QS21 =5: 1 (p/p) MLV se formaron por congelación-descongelación de SUV 3 veces antes de la adición de antígeno. Para tener atrapado el antígeno, se adicionó antígeno a SUV antes del congelamiento-descongelamiento y QS21 se adicionaron antes del congelamiento-descongelamiento. La encapsulación del antígeno=5% adentro, 95% afuera . Se inyectaron ratones (balb/c para gD, B 10BR para RTSs) dos veces en la almohadilla de la pata. G D es la glicoproteína D del virus de Herpes Simplex. RTS es el antígeno superficial de Hepatitis B (HbsAg) modificado genéticamente para contener un epítope del esporozoito de Plasmodiium falciparu m . titulaciones de anticuerpos por lo menos tan buenas como QS21+MPL, así como inducen IL2 un marcador de inmunidad mediada por células, mientras que enfría la reactogenicidad 21.

Los resultados adicionales de un segundo experimento comparando QS21 y QS21 en presencia de colesterol (SUV) en ratones balb/c con HSV gD como antígeno se muestran enseguida: 1 .9 Comparación de gp120 más MPL/QS21 liposomal con MPL/QS21 libre Liposomas=SUV que contiene MPL en la membrana Col:QS21 = 6: 1 Se probó la respuesta dos semanas después de la inmunización Después de una segunda inmunización : Los datos muestran que QS21 asociado con liposomas que contienen colesterol y MPL induce una respuesta de Th 1 /Th0 igual a MPL*QS21 . A esta relación de colesterol a QS21 , QS21 no es tóxico en conejos (por CPK) . En un segundo experimento los ratones balb/c se inmu nizaron entre las almohadi llas con gp120 en presencia de QS21 o QS21 +SUV que contienen colesterol. Se midió la actividad de linfocitos T citotóxicos en células del bazo. Esto demuestra que QS21 solo induce la actividad CTL, y que QS21 en presencia de liposomas que contienen colesterol induce la actividad de CTL por lo menos tan bien como, o mejor que, QS21 solo . 2. Vacunas 2.1 Formulación de partículas HbsAg L*, S Reí. Efector blanco Reí. Efector: blanco Esto demuestra que QS21 solo induce la actividad de CTL y que QS21 en presencia de liposomas que contienen colesterol induce la actividad de CTL por lo menos tan buena como , o mejor que, QS21 solo. 2. Vacunas 2.1 Formulación de partículas HbsAg L*,S Las partículas HbsAgL* ,S se pueden formular de la siguiente ma nera: 10µg de partículas HbsAgL*,S/dosis se incuban 1 h a temperatura ambiente bajo agitación. El volumen se ajusta usando agua para inyección y una solución de PBS y se completa a un volumen final de 70µl/dosis con una solución acuosa de QS21 (10µ g/dosis). El pH se mantiene a 7±0.5. Las formulaciones similares se pueden preparar usando 1 y 50 µg de HbsAgL*,S y también usando el antígeno HbsAg S. Estas formulaciones se pueden probar en el modelo terapéutico subrogado Woodchuck usando antígenos de HBV Woodchuck como un modelo. Modelo Woodchuck DQ QS21 (es decir QS21/colesterol o QS21 extinguido) puede probarse en el modelo terapéutico Woodchuck en donde los animales son infectados crónicamente con el virus. La vacuna de virus de hepatitis de Woodchuck puede adicionarse mezclado con QS21 como tal o DQ y con o sin MPL y se puede administrar a los animales cada mes durante 6 meses. La efectividad de la vacuna se puede evaluar mediante la supresión de ADN viral. 2.2 Modelo de Conejillos de la India (HSV) 2.2.1 Modelo Profiláctico Los grupos de 12 conejillos de la india Harley hembras se inyectaron intramuscularmente en el día 0 y el día 28 con las siguientes formulaciones: 1° experimento: gD 5 µg + QS21 50 µg + SUV que contiene 50 µg de colesterol gD 5 µg + QS21 100 µg + SUV que contiene 100 µg de colesterol gD 5 µg * QS21 50 µg + SUV que contiene 250 µg de colesterol gD 5 µg * QS21 50 µg 2° experimento: gD 5 µg + MPL 12.5 µg + QS21 12.5 µg + SUV conteniendo 62.5 µg de colesterol, o se dejó sin tratar. Los animales se mezclaron a los 14 y 28 días después de la segunda inmunización y los sueros se probaron para sus titulaciones de anticuerpos de ELISA específicos para gD. Los animales después se confrontaron intravaginalmente con 10s pfu de la cepa HSV-2 MS. Se clasificaron diariamente desde el día 4 al 12 para evaluación de lesiones herpéticas primarias. La clasificación fue la siguiente: Lesione vaginales: - sangrado = 0.5 - coloración rojiza durante 1 o 2 días sin sangrado = 0.5 - coloración rojiza y sangrado durante un día=1 - coloración rojiza sin sangrado que dura por lo menos 3 días=1 Vesículas herpéticas externas: - < 4 vesículas pequeñas = 2 - > = 4 vesículas pequeñas o una vesícula grande 4> = 4 lesiones grandes, 8 que fusionan lesiones grandes = 16 Fusión de lesiones grandes en toda el área genital externa= 32. Esto da como resultado la siguiente tabla: NJ CO Suma de las lesiones se clasifica para los días 4 a 12 después de la infección (No se consideran los animales sin lesión) Clasificación de lesiones: sin lesión (0), lesiones vaginales (0.5 ó 1), vesículas externas de piel (2, 4, 8 ó 16) ** índice de infección primaria = SUM (Max. Cías. I) x (incidencia %); con i= 0, 0.5, 1, 2, 4, 8 ó 16.

La tabla y gráfica muestran que en el modelo profiláctico, se indujo un nivel muy alto de protección contra enfermedad primaria se indujo al inmunizar con gD / MPL / QS21/ SUV. Tanto la incidencia de lesiones externas como la severidad de lesiones pareció altamente reducida en el grupo de animales inmunizados con gD/MPL/QS21 /SUV. 2.2.2 Modelo Terapéutico En el modelo terapéutico, los conejillos de la india Hartley hembras primero se confrontaron con 10s pfu de la cepa HSV-2 MS. Los animales con lesiones herpéticas se distribuyan aleatoriamente a los grupo de 16. En el día 21 y día 43, se inmunizaron con una de las siguientes formulaciones: - gD + MPL 50 µg + SUV conteniendo 250 µg de colesterol. - GD + AI(OH)3 + MPL 50 µg, + S UV que contiene 250 µg de colesterol o se dejó sin tratar. Se monitorearon diariamente desde el d ía 22 a 75 para evaluar la enfermedad actual . La clasificación fue como se describió para el modelo profiláctico. Los resultados se muestran en la tabla y gráfica siguiente.

Suma de las clasificaciones de lesiones para los días 25 a 75 después de la infección. ** Días totales en que los animales experimentaron lesiones recurrentes para los días 22 a 75 después de la infección *** N úmero de episodios de frecuencia para los días 22 a 75 después de la i nfección . U n episodio es precedido y seguido por un día sin lesión y caracterizado por lo menos por dos días con eritema c (clasificación = 0.5) o un día con vesícula externa (clasificación > = 2) El tratamiento inmunoterapéutico se realizó en los días 21 y 42. Los resultados m uestran que los buenos niveles de protección también fueron inducidos en el modelo terapéutico de infección con HSV-2. La inmunización con gD/M PL/QS21 /SUV con o sin Alúmina tuvo un efecto notorio en la severidad media de enfermedad recurrente. También se redujo ligeramente el n úmero y duración de episodio (ver Tabla) .

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición de vacuna comprendiendo un antígeno, una fracción de saponina inmunológicamente activa y un esterol.
2. 2. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la fracción de saponina inmunológicamente activa es QS21.
3. 3. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el esterol es colesterol.
4. 4. Una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 2 ó 3, en donde la relación de QS21:esterol es de 1:100 a 1:1.
5. 5. Una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que además contiene MPL.
6. 6. Una composición de vacuna como se reclama en la presente comprendiendo un antígeno o composición antigénica derivada de cualquiera de Virus de Inmunodeficiencia Humano, Virus de inmunodeficiencia Felino, Virus de Varicella Zoster, Virus de Herpes Simplex tipo 1, Virus de Herpes Simplex tipo 2, citomegalovirus humano, hepatitis A, B, C, o E, virus Respiratorio Sincicial, virus de papiloma humano, virus de la Influenza, Hib, virus de meningitis, Salmonella, Neisseria, Borrelia, Chlamydia, Bordetella, Plasmodium o Toxoplasma.
7. 7. Una vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el antígeno es un antígeno tumoral.
8. 8. El uso de la composición como se definió en cualquiera con las reivindicaciones 1 a 5, para la manufactura de una vacuna para el tratamiento profiláctico de infecciones virales, bacterianas o parásitas.
9. 9. El uso de la composición como se definió en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la manufactura de una vacuna para el tratamiento inmunoterapéutico de infecciones virales , bacteriana, parásita o cáncer.
10. 10. Un método para tratar un mam ífero que sufre de o es susceptible a una infección patogénica comprendiendo la administración de una cantidad segura y efectiva de una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5. 1 1 . Un método para tratar un mam ífero que sufre de cáncer que comprende la administración de una cantidad segura y efectiva de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 5. 12. Un proceso para formular una composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 , comprendiendo mezclar una fracción de saponina inmunológicamente activa y colesterol con un antígeno o composición antigénica.