MXPA94006048A - L-VALILAMIDAS DE 7-o-AMINO-1,1-DIOXO-CEFEM. - Google Patents

Abstract

Se describen L-valilamidas y L-homovalilamidas de 7alfa-amino-1,1-dioxo-3-cefem de formula (I), el proceso para obtenerlas y las composiciones farmaceuticas las cuales las contienen. Los compuestos mencionados anteriormente son activos en la bronquitis cronica, en enfisema, en ARDS, en fibrosis cistica y en artritis reumatoide.

Description

L-VALILAMIDAS DE 7- ?C-AMINO-lr 1-DIOXO-CEFEM PROPIETARIA: DOMPE" S.p.A., sociedad de nacionalidad Italia na, con domicilio en: Via Campo Di Pile 67100 L'Aquila, ITALIA.

INVENTORES: BRUNO MACCHIA, con domicilio en: Via Lavagna - 15, 56126 PISA, ITALIA; CLAUDIO OMINI, con domicilio en: Piazza Cavour 5, 20060 Bussero Milano, ITALIA; CARMELO GANDOLPI, con domicilio en: Via M.A. - Colonna 9, 20149 Milano, ITALIA y MARCO MANTOVANINI, con domicilio en: Via Gran San Bernardo 6, 20154 Milano, ITALIA.

Todos de nacionalidad Italiana.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN # Se describen L-valilamidas y L-homovalilamidas d 7alfa-amino-1, l-dioxo-3-cefem de fórmula (I), el proceso par obtenerlas y las composiciones farmacéuticas las cuales la contienen. Los compuestos mencionados anteriormente so activos en la bronquitis crónica, en enfisema, en ARDS, e fibrosis cística y en artritis reumatoide.

? DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con la 7alfa-amino-1, 1-dioxocefem L-valilamidas, el método para s preparación y las composiciones farmacéuticas que la contienen. Más particularmente, la presente invención s refiere a los compuestos L-valil y L-homovalilamida de l fórmula ( I ) en donde R es hidrógeno, un grupo protector convencional de grupo amino de aminoácidos y un radical arilcarbonilo; R, es un radical alcoxi recto o ramificado, qu contiene 1-4 átomos de carbono, radical benzhidriloxi ; piper zin-l-il 4- sustituido o el grupo en donde R. e hidrógeno y R- representa el resto de un L-alfa-aminoácido R. y Rj- conjuntamente con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de 5 o 6 átomos, que se selecciona d 2-carboxipirrolidil y 4-carboxipiperidil, los grupos carbox opcionalmente son todos al mismo tiempo esterificados, preferiblemente como esteres de ter-butilo y/o benzhidrilo o en forma de sales aceptables farmacéuticamente de un catió inorgánico y/o amonio; R2 es un radical alquilo de cadena recta ramificada, que contiene 1-4 átomos de carbono; R., es un radical alquilo de cadena recta qu contiene 1-2 átomos de carbono; y con las sales con ácidos aceptables farmacéutica mente de los compuestos (I) en los cuales R es hidrógeno. Ejemplos de grupos protectores convencionales d los grupos amino alfa-aminoácido son benziloxicarbonilo en e cual el anillo de benceno no está sustituido o 4-metoxi 2, 6-dimetil sustituido; metoxi-, etoxi-, aliloxi-, carbonilo 2,2, 2-tricloroetoxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo Entre ellos el benciloxicarbonilo es preferido. Ejemplos de radicales arilcarbonilo son lo radicales de fórmula: en donde X se selecciona del grupo que consiste de -NH-CO--NH- y P se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno cloro y metilo, preferiblemente es cloro. Ejemplos del piperazin-1-ilo 4- sustituido so 4-metil-piperazin-l-ilo, 4-etilpiperazin-l-ilo, 4- ( 2-dimetil amino) etilpiperazin-1-ilo, 4- ( 2-dietilamino)etilpiperazin-l ilo. Ejemplos de residuos de L-alfa-aminoácidos son aquello que se derivan de los aminoácidos mono- y di-carboxílieos opcionalmente sustituidos con un átomo de S o con un grup S0„, entre los cuales son preferidos aquellos residuos d L-alfa-aminoácidos dicarboxílicos de 3 a 6 átomos de carbono es decir tales como ácido aspártico, glutámico, adípico 4-tiadípico, 4 , 4-dioxo-4-tiadípico, de entre los cuales e ácido 4-tiadípico es preferido. R„ es preferiblemente metilo. R-. es preferiblemente metilo. Ejemplos del radical alcoxi, de cadena recta ramificados que contienen de 1-4 átomos de carbono, so metoxi, etoxi, isopropiloxi , butoxi y ter-butoxi ; de entr ellos el ter-butoxi es preferido. Ejemplos del radical alquilo de cadena recta ramificada, que contiene 1-4 átomos de carbono, son metilo isopropilo, y ter-butilo; de entre ellos el metilo e preferido. El compuesto preferido de la invención es 7alfa( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido) -1, l-dioxo-3-ace o-xi-metil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem. Otros compuestos preferidos de la invención son: 7alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-isoleucilamido) -1,1, -dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem; 7 alfa-( (N-fluorenilmétoxi)carbonil)-L-valil- amido) -1,1, -dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-ce- fem; 7alfa- ( (N- ( 9-fluorenilmetoxicarbonil ) -L-isoleucil- amido ) -1 , 1 , -dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-ce- fem; 7alfa-( (N-benciloxicarboni1) -L-valilamido) -1,1- dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem; 7alfa- ( (N-benciloxicarbonil)-L-isoleucilamido) - 1, l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem; 7alfa-( (N-( 9-fluorenilmetoxi) carbonil ) -L-valil¬ • amido) -1,1, -dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-c fem; 7alfa- ( (N- ( 9-fluorenilmetoxi ) carbonil ) -L-isoleucil amido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-ce fem; 7alfa-( (N-4- ( 4-clorofenilsulfonilamino) fenil ) carbo nil ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicar- ? bonil-3-cefem; 7alfa-( (N-4-( 4-clorofenilsulfonilaminocarboni1 ) - fenil ) carbonil-L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter- butoxicarbonil-3-cefem; 7alfa- ( (N-4-(4-clorofenilsulfonilamino) fenil ) - carbonil ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidri loxicarbonil-3-cefem; 7alfa- ( (N-4- ( 4-clorofenilsulfonilaminocarbonil ) - fenil ) carbonil-L-valilamido ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ben hidriloxicarbonil-3-cefem; 7alfa- ( ( -benci loxicarboni 1 ) -L-valilamido ) -1 , 1- dioxo-3-acetoximetil-3-cef em-4-carboxi-amida N- ( 2S ) -4-ti hexano-1 , 6-didica ; 1-metil 4- ( ( 7 alfa- ( ( -benciloxicarbonil ) -L-valilamido ) -1 , 1- dioxo-3-acetoximetil-3-cef em-4-carbonil ) ) -piperazina ; Los compuestos ( I ) de la invención , se pued preparar mediante oxidación de cefem derivados de fórmula : en donde R' representa un grupo protector convencional grupos amino alfa-aminoácido y un radical arilsarbonilo y R R„ y R_ tienen el significado anterior, a condición de qu cuando R, es un radical alcoxi de cadena recta o ramifica de 1 a 4 átomos de carbono, los compuestos (III) tienen pre riblemente, la estructura cef-3-em, y cuando R, es el radic benzhidriloxi, los compuestos (III) tienen, preferiblement la estructura cef-2-em, para dar un compuesto cef-3-em fórmula: en donde RA R-, » R2 y R tienen el significado mencio nado anteriormente, el cual se puede someter opcionalmente una remoción selectiva del grupo protector amino R' conven cional, para dar los compuestos correspondientes, en donde es hidrógeno, los cuales compuestos, si se desea, s salifican con un ácido aceptable farmacéuticamente o trans formarse opcionalmente a otros compuestos (la) al restaura el sustituyente R' . En compuestos alternativos (la), en donde R, es u radical alcoxi de cadena recta o ramificada de 1-4 átomos d carbono, se puede preparar un radical piperazin-1-il 4-sus tituido o el grupo NR4R5 definido anteriormente, a partir d compuestos (la) en donde R, representa un radical benzhidri loxi o ter-butoxi, mediante métodos conocidos en la técnica los cuales incluyen la separación selectiva del radica benzhidriloxi o ter-butoxi, para dar el ácido 4-carboxílic correspondiente el cual se proüesa luego como se describe enseguida. La oxidación de los compuestos (III) para obten compuestos (la) se lleva a cabo utilizando métodos conven cionales, co o por ejemplo, hacer reaccionar (III), e presencia de un bicarbonato alcalino, con por lo menos do moles equivalentes, preferiblemente de 2.2 a 2.5, de un perácido orgánico, tal como ácido peracético, perbenzdico, m-cloro perbenzóico, monoperftálico, en un disolvente como dicloro metano, acetato de etilo y/o sus mezclas, a una temperatur entre -20 y +20 C, pero preferiblemente a 0 C, por un tiemp que varía de diez minutos o hasta unas pocas horas. Como e bicarbonato, el bicarbonato de sodio es preferido. La reacción se consuma usualmente después de 3 ho ras. La eliminación de los grupos protectores R' conven cionales se lleva a cabo utilizando métodos convencionales bien conocidos en la técnica. En el caso de un protección llevada a cabo co 2 , 2 , 2-tricloroetoxicarbonilo, tal eliminación se lleva a cab con Zn y ácido acético acuoso, de acuerdo a T.A. Montzka e al., Tetrahedr. Lett., 1325, 1974. Cuando el grupo protector se representa mediante e radical 9-fluorenilmetixocarbonilo, la eliminación selectiv se lleva a cabo mediante tratamiento con por lo menos l cantidad equimolar, pero preferiblemente una cantidad e exceso de piperidina en un disolvente aprótico adecuado. La restauración de los grupos protectores conven cionales también como grupos arilcarbonilo R' en los compuestos de fórmula (I), en la cual R es hidrógeno, para obtener otros compuestos (la) se lleva a cabo utilizando métodos convencionales bien conocidos en la técnica, tales como la reacción del grupo amino con el cloruro de un monoéster de ácido carbónico adecuado o con el cloruro del ácido arilcarboxílico seleccionado o a partir del ácido arilcarbo- xxlico mediante reacción con una carbodiimida opcionalmente en presencia de N-hidroxisuccinimida y/o hidroxibenzotria- zol. Los compuestos (III) se obtienen mediante una reacción de etapas múltiples, la cual comprende: hacer reaccionar un 7 alfa-aminocefem de fórmula: en donde R„ tiene el significado descrito anteriormente y * se selecciona de entre radicales benzhidriloxi y ter-butoxi con un derivado L-valil u homovalil de fórmula: (V) en la cual R' y R., tienen el significado descrito anterior mente y X representa un grupo hidroxi o un grupo activant carbonilo, para dar un derivado cefem de fórmula (Illa') íTTTh') resDectiv.amen.tex en donde R ' , R„ , R-. y R' tienen los significados defini dos anteriormente y R" ' es un radical benzhidriloxi ; opcionalmente, eliminar el benzhidrilox protector o ter-butoxi y enseguida acilación del grup carboxílico así formado, para proveer los compuestos (III). Los grupos activantes adecuados del compuesto (V) son aquellos normalmente utilizados para la formación de enlace peptídico; entre estos, en particular, azida, imida zolida y N-hidroxisuccinimida. La reacción de condensació entre el derivado de fórmula (V) y derivado 7 alfa-amino cefem de fórmula (IVa, b) se lleva a cabo utilizando lo métodos convencionales, bien conocidos, de la síntesis d péptidos, la cual también visualiza una condensación entre e grupo carboxílico de compuestos de fórmula (V) en donde X e OH y el aminocefem en presencia de agentes de condensació como carbodiimidas. La eliminación del benzhidril protector de carbox y los grupos ter-butoxi en los compuestos (Illa') y (Illb* se lleva a cabo preferiblemente mediante la reacción con u exceso molar de ácido trifluoroacético, y los ácidos libre así obtenidos se acilan utilizando los métodos bie conocidos, tales como la esterificación por medio de u diazoalcano o formación de un enlace amxdico, tales com mediante activación del grupo carboxi por medio de N-hidro xisuccinimida, N-hidroxibenzotriazol opcionalmente e presencia de una carbodiimida, seguida por reacción con l amina primaria o secundaria seleccionada. La activación de grupo carboxi también se puede llevar a cabo por medio de l obtención de intermediarios tales como imidazolidas anhídridos mezclados, siguiendo el proceso descrito para lo análogos del 7 alfa-metoxicefem por P.E. Finks en J. Med Chem. en donde R„ tiene el significado descrito anteriormente, s obtienen mediante epimerización del carbono en 7 del 7-beta aminocefem de fórmula: (V en donde R„ tiene el significado definido anteriormente R, ' ' ' representa el radical benzhidriloxi o ter-butoxi siguiendo el método de J.B. Doherty et al., J. Med. Chem. 33, 2513, 1990, de acuerdo con C.V. Kim et al., J. o Antibiotics, 27, 881, (1974). En una modalidad alternativa la epimerizacidn de un 7beta-aminocefem de fórmula (VI) par dar un compuesto de fórmula: en donde R„ y R-j."' son como se definen anteriormente, se pued llevar a cabo por medio de diazotación del compuesto (VI) co un exceso de nitrito de sodio para dar el diazoderivad correspondiente, el cual se hace reaccionar con un exceso d iones azido ( ) y dá el derivado 7alfa-azidocefe correspondiente, el cual se reduce moderadamente con trifeni fosfina al compuesto (IVa) de acuerdo al siguiente esquema d reacción: Los compuestos de fórmula (VI) son derivados de ácido 7beta-aminocefalosporánico y se pueden preparar partir del ácido de acuerdo a métodos bien conocidos en l técnica, por ejemplo, a partir de ácido 7beta-aminocefalos foránico e isobuteno (véase el artículo de J.B. Dohert mencionado anteriormente) o mediante reacción de u 7beta-amonio o mentansulfonato o sal de p-toluensulfonato de ácido en un disolvente tal como acetonitrilo en presencia d un exceso de un diazoderivado. Como parte de un estudio de inhibidores de l elastasa humana de leucocitos (HLE), en el artícul mencionado anteriormente, la síntesis de tienil-, formil-, metoxi-carbonilamidas o 7beta-amino-l,l-dioxo-3-acetoximetil 4-ter-butiloxicarbonil-3-cefem también se describe cerca uno de los correspondientes 7alfa-amino epímero y finalmente, la preparación de 7alfa-(N-trifluoroacetamino) 1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem.

Las 7beta-amidas resultan ser compuestos sustan cialmente carentes de actividad antielastasa, mientras que l 7alfa-amidas se definen como constituyentes de una nuev clase de inhibidores de la elastasa, aún si son meno potentes, debido a la rigidez y polaridad del enlace amida e cual mediaría contra el óptimo de interacción de esta moléculas con el sitio Sl de la enzima. Para apoyar esta hipótesis, se toma atención po los autores a solo pequeñas amidas alfa-orientadas que tiene una cierta actividad: en compuestos activos la ICrn varia d 2 micromolar ( trifluacetamino) a 4 micromolar (formamida metoxicarbonilamida) en tanto que las amidas más voluminosa (tales como tienilamida) resultan prácticamente inactivas co IC?-n alrededor de 40 micromolar, de tal manera que se decide por un interés muy pobre por tal clase de compuestos. Las 7alfa-L-valilamidas (I) objeto de la present invención han probado inesperadamente ser inhibidore efectivos de la elastasa humana con valores de IC inferiores 1 micromolar. Además, las mismas L-valilamidas (I muestran una mayor afinidad y, por consiguiente, mejo selectividad, hacia la elastasa neutrófila humana (HLE) má bien que hacia la elastasa pancreática porcina tipo III (PPE y catepsina G de los neutrófilos humanos (HCG). En efecto el 7alfa- (N-benciloxicarbonil ) -L-valil) 1, l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, en un relación de concentración a la enzima de 25:1, inhibe la HL en una proporción de 90% en tanto que solo inhibe en un proporción de 30% y 15-20% el PPE y el HCG, respectivamente. La incubación con suero no altera sustancialmente l actividad inhibitoria de los compuestos (I), objeto de l invención. Se debe observar además que el epímero 7beta- (N-be ciloxicarbonil ) -L-valilamida muestra actividades contrastan tes, puesto que a concentraciones las cuales inhiben el PP en una proporción del 30% parecen ser completamente inactiva contra el HLE. Esta afinidad y selectividad peculiar de lo compuestos de la invención sobre el HLE los hace particular mente útiles en el tratamiento de enfermedades patológica tales como bronquitis crónica, enfisema, ARDS (síndrome d malestar respiratoria aguda) , fibrosis cística y artriti reumatoide, en las cuales se supone que un inhibidor d enzima eficiente contribuye al retención y prevención d estas enfermedades patológicas que se vuelven agudas una ve más.

Ejemplo 1 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil)-L-valilamido)-l,l-dioxo-3-ace-toximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem.

A una solución de 1. 53 g ( 6. 08 mmoles ) de N-benci loxicarbonil-L-valina en 10 ml de tetrahidrofurano anhidro mantenida bajo atmósfera de nitrógeno , agitada magnética mente y enfriada a -100 C , se agrega gota a gota en el curs de 5 minutos, una solución de 0. 84 ml ( 6 . 0 mmoles ) d trietilamina en 1 ml de tetrahidrofurano anhidro , y luego , s agrega gota a gota , en el curso de 5 minutos , una solución d 0.58 ml( 6 . 08 mmoles ) de cloroformiato de etilo en 1 ml d tetrahidrofurano anhidro . Después de 30 minutos bajo agita ción a la misma temperatura , el sólido formado se retir mediante filtración bajo vacío y la solución orgánica s evapora bajo vacío a sequedad. El residuo aceitoso se disuelve en 20 m de cloruro de metileno anhidro y la solución resultante se agrega, got a gota, en el curso de 15 minutos a una solución de lg (3.04 mmoles) d 7 alfa-amino-3-acetoximetil-4-ter-butiloxicarbonil-3-cefem en 20 ml d cloruro de metileno anhidro, enfriada a -10 C, bajo atmósfera d nitrógeno. Al terminarse la adición, la mezcla se trae a 0 C se agita bajo nitrógeno durante 2 horas, luego se lava sobr un embudo de separación en la secuencia: dos veces con ácid acético al 10% y hielo molido, dos veces con una solució acuosa saturada de bicarbonato de sodio y con una solució saturada de cloruro de sodio hasta neutralidad, luego s filtra y evapora a presión reducida. Se obtienen 2.42 gramo de un residuo aceitoso, el cual se somete a cromatografí sobre columna de gel de sílice a presión media, se eluye c una mezcla 2:1 de hexano :metiletilcetona, y recolección fracciones de 15 ml . A partir de las fracciones centrale recolectadas conjuntamente y evaporadas, se obtienen 0.450 de 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil) -L-valilamido) -3-acetoximet 4-ter-butoxicarbonil-3-cefem como un aceite.

RMN H (CDCL3) delta 0.87-1.01 (m, 6H CH(CH3)2), 1.55 (s, 9 C(CH 3_)' 3A, 2.06 (s, 3H, CH-CO) , 2.14 (m, ÍH, CH(CH 3_)'2_), 3.24 3.60 (2d, 2H, J = 18.3 Hz , SCH2), 4.06 (dd, ÍH, J = 5.9 y 8 Hz, NHCHCONH), 4.64-5.05 (m, 6H) , 5.31 (d, ÍH, J = 8.5 H OCONH), 7.06 (d, ÍH, J = 7.0 Hz, NHCHCHS ) , 7.34 (s ampli 5H, C¿-H_ ) . IR (CC14) ^ 1789 cm -1 (C = O beta-lactama) .

Análisis elemental para C„7H--N-Oí,S H N % Calculado 57.74 6.28 7.48 % Encontrado 57.82 6.31 7.40 A una solución de 0.39 g (0.69 moles) de 7 alfa-( benciloxicarbonil ) -L-valilamido ) -3-acetoximetil-4-ter-butox carbonil-3-cefem en 14 ml de cloruro de metileno enfriada 0°C y agitada magnéticamente, se agregan 0.143 g (1.7 mmole de bicarbonato de sodio sólido y luego, en una porción 0.42 (1.70 mmoles) de ácido m-cloroperoxibenzóico al 70%. mezcla resultante se agita, a 0 C durante tres horas, se la sobre un embudo de separación, en la secuencia: tres vec con una solución acuosa al 10% de tiosulfato, dos veces c una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y tr veces con agua, se filtra y evapora bajo presión reducida. obtienen 0.33 gramos de un residuo vitreo que consiste 7alfa- ( (N-benciloxicarboni1 ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-ace-toximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem (CCF) prácticamen puro. RMN H (CDC13) delta 0.85-0.91 (m, 6H, CH(CH3)2), 1.48 (s, 9H, C(CH3)3) 2.02 (s, 3H, CH3CO) 3.60 y 3.96 (2d, 2H, J 18 Hz, SCH2), 4.01 (dd, ÍH, J = 6.0 y 7.6 Hz , NHCHCONH 4.60-5.12 (m, 6H) , 5.86 (d, ÍH, J = 7.6 Hz , OCONH), 7.28 amplio, 5H, CgH5), 7.75 (d, ÍH, J = 6.6 Hz, NHCHCHS). IR (CC14) ~v 1881 cm-1 (C = O beta-lactama) .

Análisis elemental para el C„7 H^- ^O, «S H N % Calculado 54.63 5.94 7.08 % Encontrado 53.89 6.07 6.62 Ejemplo 2 ? Se opera de una manera similar como se describ anteriormente y se utilizan los grupos protectores correspon dientes, se obtienen, en primer lugar: 7 alfa- ( (N-4-metoxibenciloxicarbonil ) -L-valil amido ) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem; - 7 alfa- ( (N-2, 6-dimetilbenciloxicarbonil ) -L-va lilamido) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem; - 7 alfa-( (N-4-ter-butoxicarbonil ) -L-valilamido) -3 acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem; - 7 alfa- ( (N-2 , 2 , 2-tricloroetoxicarbonil ) -L-valil amido) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem y luego después de la oxidación de acuerdo al ejemplo citad anteriormente, respectivamente: - 7 alfa- ( (N-4-metoxibenciloxicarbonil ) -L-valil # amido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem 7 alfa- ( (N-2 , 6-dimetilbencijc?xicarbonil ) -L-va lilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-ce fem. - 7 alfa-( (N-4-ter-butoxicarbonil ) -L-valilamido) 1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-ceferr - 7 alfa-( (N-2,2,2-tricloroetoxicarbonil) -L-valil amido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem Ejemplo 6 7 beta- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-ace toximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem.

Da acuerdo al procedimiento del ejemplo 1, al hace reaccionar 3.07 g (12.22 mmoles) de N-benciloxicarbonil-L valina con 2.0 g (6.1 mmoles) de 7beta-amino-3-acetoxime til-4-terbutoxicarbonil-3-cefem, se obtienen 2.0 g de 7 beta ( ( N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido ) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, que funde a 92-94 C.

RMN H (CDC13) delta 0.90-1.02 (m, 6H, CH(CH )2 ), 1.53 (s 9H, C(CH3)3), 2.07 (s, 3H, CH3C0), 2.10 (m, ÍH, CH(CH ) ) 3.23 y 3.58 (2d, 2H, J = 18.8 Hz, SCH2), 4.07 (dd, ÍH, J 6.1 y 8.8 Hz, NHCHCONH) , 4.69-5.11 (m, 6H) , 5.16 (d, ÍH, J 8.8 Hz, OCONH), 5.78 (dd, ÍH, J = 4.8 y 8.8 Hz, CHCHS ) , 6.7 (d, ÍH, J = 8.8 Hz, NHCHCHS), 7.34 (s amplio, 5H, C H5 ) . IR (CC14) 1803 cm-1 (C = O beta-lactama) .

Análisis elemental para C„-,H-. cN 0oS H N % Calculado 57.74 6.28 7.48 % Encontrado 57.47 6.22 7.50 La oxidación de 0.90 g (1.6 mmoles) de 7 beta-((N- benciloxicarbonil ) -L-valilamido ) -3-acetoximetil-4-ter- butoxicarbonil-3-cefem, como se describe previamente, provee 0.72 g de un residuo aceitoso que consiste de 7beta- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoxi-metil- 4-ter-butoxicarbonil-3-cefem prácticamente puro. Rendimiento 76%. RMN 1H (CDC1A delta 0.88-1.02 (m, 6H, CH(CHA ), 1.53 (s, 9H, C(CH3)3), 2.08 (s, 3H, CH3CO) , 2.15 (m, ÍH, CH(CH_)2), 3.62 y 3.97 (2d, 2H, J = 18.6 Hz, SCH2 ) , 4.09 (dd, ÍH, 5.6 y 8.88 Hz, NHCHCONH). 4.68 (d, ÍH, J = 8.8 Hz, OCONH), 4.83-5.31 (m, 5H) , 6.06 (dd, ÍH, J = 5.0 y 10.3 Hz, CHCHS ) , 7.17 (d, ÍH, J = 10.3 Hz, NHCHCS), 7.33 (s amplio, 5H, CCHC ) , 7.33 (s amplio, 5H, CfiH,-). * IR (CC14) 1881 cm X (C = O beta-lactama) Análisis elemental para C„_H3[-N n, s H N % Calculado 54.63 5.94 7.08 % Encontrado 54.29 6.03 6.67 Ejemplo 7 A una solución enfriada en baño de hielo y agitad de 28.5 g de ácido p-toluensulfónico monohidrato en 0.5 li tros de dioxano, se agrega a 41 g de 7-ACA y lueg manteniendo la temperatura interna a aproximadamente 12-14 C se agrega una solución enfriada 0.8 m de difenildiazometan en 0.6 1 de dioxano. La reacción se agita durante 4 horas temperatura ambiente y se evapora en vacío a una temperatur inferior a 50 C. El residuo se titula con n-hexano para da un material sólido que se recolecta mediante filtración luego se disuelve con 0.4 1 de diclorometano. La cap orgánica se lava dos veces con 2 x 50 ml de solución acuos saturada de bicarbonato de sodio y con agua, se seca sobr sulfato de sodio, y evapora a un volumen pequeño. El materia sólido que precipita mediante dilución con éter de petróleo a 60-80 C,se filtra y seca en vacío para dar 16.6 g de 7 bet amino-3-ace oximeti1-4-benzhidriloxicarboni1-3-cefem, punt de fusión 119-121 C. (alfa), 2.9 (CH2C12) Ds acuerdo a este procedimiento, se preparan ben zhidriléster de ácido isonipecótico y di-benzhidril éster d L-carboximetilcistexna a partir de sus ácidos libres.

Ejemplo 8 A una solución de 8 g de 7 beta amino-3-acetoxim til-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem en diclorometano, s agregan 0.7 g de p-nitrobenzaldehído y 3 g de Na„SO. anhidro. Después de 4 horas, la mezcla se filtra y evapora a sequeda al vacío, para proveer 2.2 g de 7 beta-(p-nitro-benzilide amino) -3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem. U solución verde del último compuesto en 70 ml de DMF se enfrí a 15 C y se trata con una solución enfriada al 30% (v/v) trietilamina en 10 ml de DMF para dar una solución azul q • se agita adicionalmente durante 30 minutos, y luego se dilu con solución acuosa fría de HCl 0.015 N. La fase acuosa se extra con 2 x 250 ml de metil éter, los extractos orgánicos comb nados se lavan con fosfato dihidrógeno de sodio acuoso al 5 salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, y se evapora sequedad. La mezcla cruda se somete a cromatografía de HP preparativa (sílice porasil 15-20 mieras, n-hexano/AcO 75:25) para obtener respectivamente: (a) 7beta-(p-nitro-benziliden-amino) -3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-2-cefem T_, = 12.77; (b) 7alfa-(p-nitro-benziliden-amino) -3-acetoximetil-4 benzhidriloxicarbonil-3-cefem K. = 17.89; (c) 7beta-(p-nitro-benziliden-amino) -3-acetoximetil-4 benzhidril-oxicarbonil-3-cefem T K = 23.9; (d) 7alfa- (p-nitro-benziliden-amino) -3-acetoximetil-4 benzhidriloxicarbonil-2-cefem T R 29.2; como sustancia puras .

Ejemplo 9 Procedimiento A: Bajo agitación vigorosa, 0.51 ml de H„SO. 2 acuoso se agregan gota a gota a una mezcla de doble fase d NaN0„ acuosa, 0.047 g en H„0, 5 ml y 0.3 g de 7 beta-amino 3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem (5 ml) d solución de diclorometano. Después de 1 hora, la fase acuos se separa, se extrae con 2 x 2 ml de diclorometano; lo extractos orgánicos combinados se lavan con salmuera y s secan con sulfato de sodio anhidro. La solución cruda y sec de 7-diazo-3-acetoximetil-4-benzhidrioxicarbonil-3-cefem (CC sobre Si02, eluyente CHCl3-EtO Rf = 0.62) se enfría a 0°C se trata con solución de HN03 al 5% en 12 ml de cloroformo. Después de 2 horas a 0 C, la solución se mantiene durante un noche a temperatura ambiente, se lava con bicarbonato d sodio acuoso saturado, salmuera y se seca sobre sulfato d sodio. Después de la eliminación de los disolventes baj vacío, el residuo se somete a cromatografía para proveer alfa-azido-3-acetoximeti1-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem (TLC sobre Si02, eluyente CHC13-Et02 Rf = 0.72), (HPL Spherisorb S 5, eluyente CHCl„/i-PrOH, tiempo de retenció 5'66) . I.R. 2115.6 cm_1 (azida), RMN (CDCl.,, TMS ppm) H-7 4.65 (J 1.9 Hz), H-6 4.52 (J = 1.9 Hz ) . Mediante tratamiento de l azida con cantidades equimolares de trifenilfosfina en TH húmedo a temperatura ambiente, se prepara el 7 alfa-amino-3 acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem (HPLC Spherisor S 5 , eluyente CH„Cl„/iPrOH tiempo de retención 7'.83).

Procedimiento B: 1 g de 7 alfa-(p-nitro-benciliden-amino) 3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem y 0.9 g d reactivo de Girard T, se disuelven a temperatura ambiente e 25 ml de MeOH. La solución se agita durante 2 horas, luego s vierte en 600 ml de AcOEt-agua, se agita y se separa. La fas orgánica se lava con agua, se seca sobre sulfato de sodio se evapora a sequedad para proveer 0.69 g de 7 alfa-amino-3 acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem. El isómero geo métrico 2-cefem-7alfa-(p-nitro-benciliden-amino) (1.35 g) cuando se utiliza en este procedimiento, produce 0.82 g d 7alfa-amino-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarboni1-2-cefem T = 7.9 (Spherisorb S 5 mm 4.6 x 250 CH2Cl2-iPrOH, 95.5 flujo 0.5 ml/min) que se hace reaccionar con 0.52 g de Z-Val-OH en diclorometano anhidro, a 0 C, en presencia de WSCDI, 0.5 g de clorhidrato de N-( 3-dimetilaminopropil )-N' -etilcarbodiimida y algunas gotas de trietilamina. La mezcla de reacción se agita durante 3 horas a temperatura ambiente, se diluye con agua para dar, después del procedimiento usual y cromatografía instantánea (hexano/AcOEt 3:1), 0.92 g 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida) -3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbo- nil-2-cefem, Rf = 0.16 (hexano/AcOEt 2:1). # Cuando de acuerdo al procedimiento anterior, uno de los siguientes: Z-Ile-OH, Fmoc-Val, Fmoc-Ile-OH, p-Cl-Fen-S02NH-Fen-CO-Val-OH, p-Cl-Fen-S02NH-CO- Fen-Val-OH, p-Cl-Fen-SO NH-Fen-CO-Ile-OH, p-Cl-Fen-SO NH-CO-Fen-CO-Ile-OH se usa para acilar un 7-amino-cefem-benzhidril éster, se preparan los siguientes 3 -cefem y 2-cefem-3-acetoximetil-4-benzhidri- loxicarbonil; • - 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leuxilamida, - 7 alfa- ( (N-Fmoc) -L-iso-leucilamida) , - 7 alfa-( (N-Fmoc) -L-valilamida) , 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-Fen)carbonil-L-iso- leucilamida) , - 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-CO-Fen)carbonil-L-iso- leucilamida) , - - - 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-Fen)carbonil-L-carb nil-L-valilamida) , 7 alfa- ( ( -p-Cl-Fen-S02NH-CO-Fen ) carbonil-valilamida) Ejemplo 10 Una solución de 30 ml de diclorometano de 1.04 g 7 alfa-(( N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida) -3-acetox metil-4-benzhidriloxicarbonil-2-cef em se oxida en presenc de 0.6 g de NaHC03 con m-CPBA al 55%, 1.36 g de ácido cloroperbenzóico, mediante agitación a temperatura ambien durante 16 horas. Después del procedimiento usual (trat miento con solución acuosa de NaHCO-. que contiene sulfito sodio para destruir cualquier exceso de m-CPBA) , piridi (pocas gotas) se agrega a la capa orgánica final, cuando seca sobre sulfato de sodio. La solución se agita has obtener completa isomerización de cualquier compuesto 2-cef residual (aproximadamente 1 hora) , luego se filtra y evapora sequedad. El residuo se purifica sobre CL en SiO (elnye? hexaao/AcOEt 2:1) para dar 0.72 g de 7 alf a- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida) -1, l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidrilo xicarbonil-3-cef em, Rf = 0.44 (hexano/AcOEt 1:1). Utilizan en el misma procedimiento una cef em-4-benzhidriloxicarbonil-7-alf a -amida del ejemplo 9, se preparan los siguientes l,l-dioxo-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem: - 7 alfa-( (N-Fmoc-L-iso-leucilamida) , - 7 alfa- ( (N-Fmoc) -L-valilamida) , 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-Fen)carbonil-L-is leucilamida) , - 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-CO-Fen)carbonil-L-is leucilamida) , - 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leucilamida) - 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-Fen)carbonil-L-vali amida) , 7 alfa-( (N-p-Cl-Fen-S02NH-CO-Fen)carboni L-valilamida) .

Ejemplo 11 A 0.25 g de 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-vali amida) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem (alfaA 27.8 (c=l% MeOH) se agrega una mezcla enfriada de 0.04 ml anisol y 0.65 ml de TFA. Después de horas, se retira el ba de agua helada; la mezcla de reacción se mantiene durante horas a temperatura ambiente, luego se diluye con 40 ml agua: hielo: diclorometano 1:1:2, y se agita. La capa orgánic después del procedimiento usual, se extrae con 3x8 ml solución acuosa saturada de NaHCO^. Los extractos alcalin combinados se acidifican con HCl 2N y se extraen con AcOE Los extractos de AcOEt combinados se secan sobre sulfato de - - sodo y se evaporan a sequedad y dan 0.12 g de ácido alf a-( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida) -3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxílico (TLC Si02AcOH 99:1 Rf = 0.27). A una solución enfriada en baño de hielo de 0.1 del ácido anterior en 2 ml de dioxano se agregan secuenci mente 0.03 g de N-OH-succinimida y 0.06 g de DDC. La reacci se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos, y lu se vuelve a enfriar en un baño de hielo. Se agregan 0.6 ml trietilamina; después de agitación durante 30 minutos a 0 se agrega sal de di-ter-butil éster de dibencensulf imida ácido L-glutámico se agrega todo de una vez. La mezcla mantiene durante 3 horas a temperatura ambiente, lue después de dilución con 20 ml de dietiléter, se filtra. filtrado se vierte en agua helada que contiene HCl 2 N; fase acuosa se separa, se lava con dietiléter. Los extrac orgánicos combinados se lavan con agua y carbonato hidróg de sodio. Después del procedimiento usual, el residuo cr se purifica mediante CL preparativa (SiO-, n-hexano/Ac 1:1 para dar 0.1 g de N-L-glutamil-di -ter-butil éster de 7 alfa- ( (N-be ciloxicarbonil ) -L-valilamida ) -3-acetoximetil-4-carboxamida-3-cef em. La siguiente oxidación con m-CPBA provee: 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamid ) -1 , l-dioxo-3-acetox met L-4-carboxamida-3-cef em .

Cuando, de acuerdo al procedimiento anterior, ter-butil éster como: 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida) -3-ace ^J"? toximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leucilamida) 3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, 7 alfa- ( ( N-4- ( 4-Cl-fenilsulfonilamino ) fenil ) ca bonil ) -L-valilamida) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil- 3-cefem, 7 alfa-( (N-(4-( 4-Cl-fenila?lfonilaminocarbonil)fenil)- carbonil ) -L-valilamida ) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil 3-cefem, se escinde, se obtiene uno de los siguientes ácido ácido 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leuci amida) -3-acetoximeti1-3-cefem-4-carboxílico. ácido 7 alfa-( (N-4- ( 4-Cl-fenilsulfonilamino) fenil) carbonil ) -L-valilamida ) -3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxílic ácido 7 alfa-( (N-(4-( 4-Cl-fenilsulfonilaminoca bonil ) fenil ) carbonil ) -L-valilamida) -3-acetoximetil-3-cefem- 4-carboxílico, que, luego, probablemente como: ácido 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida) 3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxílico, mediante reacción c una amina (o sal de amonio) , que se selecciona del grupo q consiste de: benzhidriléster de ácido isonipecótico y eti éster, sal de di-ter-butil éster de dibenzosulfimida de áci L-2-aminoadípico , sal de di-ter-butil éster de dibencensulf imida ácido L-aspártico, sal de di-ter-butil éster de dibencensulf imida de ácido L-glutámico, dá surgimiento a los correspondiente: ißonipecotil benzhidrilésteres : L-2-aminoadipoil di-ter-butil éster, L-aspartil di-ter-butil éster, L-glutamil di-ter-butil éster 4-carboxiamidas , q se convierten a sus compuestos 1,1-dioxo relacionados mediant oxidación con m-CBPA: benzhidril éster de ácido 7 alfa- ( (N-benciloxica bonil ) -L-valilamida) -3-acetoximetil-4-carboxiamido-3-cefem N-isonipético (alfa) = -18.9 (c = 9; MeOH) Rf = 0. ( exano-AcOEt 1:1) Etil éster de ácido 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil) valilamida) -3-acetoximetil-4-carboxiamida-3-cefem N-isonipe- cótico Rf = 0.1 (hexano-AcOEt 1:1) (alfa) = -28 (c = 1 MeOH) . Mediante oxidación de m-CPBA, también se prepar los siguientes ter-butil esteres: 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida )-l, dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil) -L-iso-leucilamida l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, 7 alf - ( (N- ( 4- ( 4-Ci-fenilsulfonilamino) fenil )ca bonil ) -L-valilamida ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxi-carbonil-3-cef em, 7 alfa- ( ( N- ( 4- ( 4-Cl-f enilsulf onilaminocarbonil ) fenil ) -carbonil ) -L-valilamida) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-buto xicarboni 1-3 -cefem.

Ejemplo 12 A una solución agitada (y enfriada a 0 C) de 13.4 de 7 alfa-amino-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem 14.8 g de Fmoc-L-valina en 35 ml de diclorometano se agreg todo de una vez, 7.9 g de SCDI. Se permite que la mezc repose durante 8 horas a temperatura ambiente. Después d procedimiento usual (lavados con agua, NaHCO-. acuoso al 5 HCl 2 N, salmuera, secado sobre sulfato de sodio, elimin ción de disolventes en vacío) 25 g del residuo crudo purifican mediante cromatografía sobre SiO„ para dar 7 alf ( (N-Fmoc) -L-valilamido) -3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil 3-cefem (22 g; CCF si02 hexano-MEC 2/1 Rf = 0.21). A una solución agitada de 3.8 g de este compues en 120 ml de dLclorometano anhidro, enfriada a 0 C, agregan 1.5 g de NaHCO-. y todo de una vez 4.5 g de m-CPBA 70%. La agitación se mantiene durante 2 horas a 0 C, luego temperatura ambiente durante 4.5 horas antes de dilución c AcOEt-agua. Después del procedimiento usual, el residuo cru se purifica mediante elución sobre columna de florisi (hexano, metiletilcetona (MEC) 2:1) para obtener 2.19 g de alfa- ( (N-Fmoc) -L-valilamida) -1, l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem (CCF Si02, hexano:MEC 2:1 Rf = 0.23) De una manera similar, también se preparan: 7 alfa- ( (N-Fmoc) -L-iso-leucilamida ) -1 , 1-dioxo 3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, y - 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leucilamida ) l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem (alfa) = + 8.8 (c = 1% MeOH) , - 7 alfa- ( (N-Fmoc) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-ac toximetil-4-benzhidriloxicarboni1-3-cefem. Ejemplo 13 A una solución de 1.5 g de 7 alfa- (N-Fmoc) -L-valil amida) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-ce-fem en 10 ml de diclorometano, se agregan 0.8 ml de pip ridina. Después de 30 minutos a 20-23 C, la mezcla reacción se diluye con 25 ml de solución acuosa al 10% ácido cítrico y se agita durante una noche a 5-10 C. La fas acuosa se separa, se basifica cuidadosamente hasta pH mediante adición de NaOH 4 N (mediante enfriamiento externo 5-10 C) y luego se extrae con 3x10 ml de AcOEt. Los extract orgánicos combinados se secan sobre Na„SO., se evaporan ~ sequedad para dar 0.8 g de 7 alfa- (L-valilamida ) -1 , 1-diox 3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem. A una solución agitada y enfriada (aproximadamen 0 C) de 0.5 g de ácido 4-( 4-clorofenilsulfonilaminocarb nil)benzoico en (3 ml) de DMF, se agregan 0.4 g de hidrato 1-QH-benzotriazol. Después de 5 minutos, se agrega a la misma una solución enfriada de 0.5 g de 7- (L-valilamido)-l,l-diox acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem en 2 ml de DMF q contiene 0.22 ml de trietilamina. Al final, a la mezc agitada, se agregan 0.35 g de DCC, y la agitación se contin durante 3 horas a 0 C y 3 horas a temperatura ambiente.. mezcla se diluye con dietiléter y se filtra, se reparte ent agua helada. La fase acuosa se lava con AcOEt; los extract orgánicos combinados después del trabajo usual (lavados c ácido cítrico acuoso al 10%, NaHCO-. saturado y salmuera) secado sobre sulfato de sodio, se evaporan a sequedad, pa dar después de purificación mediante CL 0.62 g de 7 alf ( (N- ( 4- ( 4-clorofenilsulfonilaminocarbonil ) fenil ) carbonil ) -L-valilamida ) -1 , 1-dioxo-3-acetoximeti1- -ter-butoxi-3-cefem Da acuerdo al procedimiento anterior, el 1,1-diox 3-acetoximetil-3-cefem-4-benzhidriloxicarbonil y 4-ter-but xicarbonil-7alfa- ( (N-Fmoc) -L-valilamidas) y 7 alfa- ( (N-Fmoc L-iso-leucilamidas ) producen, mediante reacción con piper dina, las correspondientes 7alfa- (L-valilamidas ) y 7alf (L-iso-leucilamidas ) , que si se desea, se acilan median reacción con un ácido arilcarboxílico conveniente de mvencion.

Ejemplo 14 A 1 g de 7alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-vali amida) -1 ,l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefe se agrega una mezcla enfriada de 2.4 ml de ácido trifluor acétco (TFA) y 0.2 ml de anisol. La mezcla se mantiene a 0 durante 2 horas, a temperatura ambiente durante 3 horas, luego se reparte entre 100 ml de diclorometano y agua hela 1:1. La capa acuosa se extrae con 2x10 ml de diclorometan las capas orgánicas combinadas se lavan con agua y luego extraen repetidamente con solución acuosa saturada carbonato hidrógeno de sodio. Los extractos básicos combinan, se acidifican a pH 2 y se extraen con 3x6 ml AcOEt. Los extractos de AcO?t combinados se secan sob sulfato de sodio y se evaporan a sequedad, para dar 0.73 g ácido 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida )-l,l-diox 3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxi (alfa) + 16.7 (MeOH) Rf 0.06 (AcOEt-AcOH 98:2). Una solución del compuesto y 0.24 g de 1-hidrox benzotriazol hidratado en 3 ml de DMF se enfría en un baño hielo, y 0.6 g de DDC se agregan de porción en porción duran 5 minutos. La reacción se agita a temperatura ambien durante 2 horas y luego se vuelve a enfriar a -5-0°C. 0.42 de ter-butil éster de L-prolina se agregan todo de una vez la reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se diluye con dietil éter y se filtra el filtrado se vierte en agua helada que contiene HCl 2 N„ fase acuosa se separa, se lava con éter; los extract orgánicos combinados se lavan con agua, solución de carbona hidrógeno de sodio y salmuera, se secan sobre sulfato sodio y se evaporan. El producto se purifica mediante preparativa (SiO?, n-hexano/AcOEt 55:45) para dar 0.8 g N-L-prolil-ter-butil éster da 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil) valilamida ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-carboxamida-3-cefem. A una muestra enfriada en baño de hielo de est 0.8 g del compuesto, se agregan 7.5 ml de TFA y 0.5 ml anisol. La reacción se agita durante 1 hora y luego evapora en vacío a 30 C; el residuo se toma dos veces diclorometano y se evaporan para eliminar el exceso de TFA. Mediante cr tografía instantánea (eluyente hexano-AcOEt 30:70, lue AcOH-AcOEt al 0.5%), se obtienen 0.52 g de 7 alfa- ( (N-be ciloxicarbonil) -L-valilamida) -1, l-dioxo-3-acetoximetil-4-( (2 (S) -carboxipirrolidono) carbonil ) -3-cefam Rf = 0. (AcOEt-AcOH al 1%) . Utilizando el procedimiento anterior, di-ter-but éster de L-carboximetilcisteína y di-benzhidriléster carboximetilcisteína, los siguientes: - N-L-carboximetilcisteinil di-ter-butil éster de alfa- ( (N-benciloxicarbonil) -L-valilamida )-l, l-dioxo-3-aceto-ximetil-4-carboxamida-3-cefem, - N-L-carboximetilcisteinil di-benzhidril éster d 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil) -L-valilamida) -1, l-dioxo-3-acet ximetil-4-carboxamida-3-cefem, que, después de la escición del grupo éste protector, cada uno de ellos produce: - N-L-carboximetilcisteinil 7 alfa-( (N-benciloxi carbonil ) -L-valilamida) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-carboxa-mida-3-cefem.

Ejemplo 15 Los N--isonipecotinoil di-ter-butil esteres d 1 , l-dioxo-3-acetoximetil-3-cef em-4-carboxiamidas , N-L-asparti di-ter-butil esteres, y N-L-glutamil di-ter-butil esteres del ejemplo 1 se convierten en los ácidos libres relacionados, que incluyen: ácido 7 alf a- ( ( N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida ) l , l-dioxo-3-acetoximetil-4-carboxamida-3-cefem N-isonipecótico Rf = 0 . 7 (AcOEt-AcOH 98 : 2 ) , ácido 7 alf a- ( ( N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida ) 1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-carboxamida-3-cef am N-aspártico , ácido 7 alf a- ( ( N-benciloxicarbonil ) -L-valilamida ) 1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-carboxamida-3-cef em N-glutámico mediante escición de los grupos protectores ter-butilo benzhidrilo, cuando se tratan de acuerdo al procedimiento d ejemplo 14. Ejemplo 16 De acuerdo al procedimiento del ejemplo 14, l grupos protectores ter-butil éster y benzhidriléster de l siguientes esteres: - 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil) -L-valilamida )-l, dioxo-3-acetoximeti1-4-ter-butoxicarboni1-3-cefem, - 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leucilamida l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, - 7 alfa-( (N-( 4-(4-fenilsulfenilamino)fenil)carb nil) -L-valilamida) -1, l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicar bonil-3-cefem, - 7 alfa- ( (N-( 4- ( 4-fenilsulfenilaminocarbonil ) f nil ) carbonil ) -L-valilamida ) -1 , l-dioxo-3Aacetoximetil- 4-ter-butoxicarbonil-3-cefem, -7 alfa-( (N-benciloxicarbonil)-L-iso-leucilamida l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem, - 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil) -L-iso-leucilamida l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-benz hidriloxicarbonil-3-cefem, 7 alfa-( (N-(p-Cl-Fen-S02NH-Fan)-carbonil-L-is leucilamida) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbo-nil-3-cefem, 7 alfa-( (N-(p-Cl-Fen-S02NH-CO-Fen)carboni L-iso-leucilamida) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxi carbonil-3-cefem, - 7 alfa- ( (N- (benciloxicarbonil ) -L-valilamida) -1, dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem, 7 alfa-( (N-(p-Cl-Fen-S02NH-Fen)carbonil-L-v lilamida) -l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil- 3-cefem, 7 alfa-( (N-(p-Cl-Fen-SO NH-CO-Fen) carboni L-valilamida-l,l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbon 3-cefem) se eliminan, para producir los 4-carboxi ácidos: - ácido 7 alfa- ( (N- (benciloxicarbonil ) -L-vali amida ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxi , - ácido 7 alfa- ( (N- ( 4- ( 4-Cl-fenilsulfonilamino fenil) carbonil ) -L-valilamida )-l, l-dioxo-3-acetoximetil-3-ce fein-4-carboxi , - ácido 7 alfa- ( (N- ( 4- ( 4-CI-fenilsulfonilamin carbonil ) fenil ) carbonil ) -L-valilamida ) -1 , l-dioxo-3-acetoxi- metil-3-cefem-4-carboxi , - ácido 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-iso-leuci <& amida) -1 ,l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxi (alfa) = 13.07 (c = 13; MeOH) Rf = 0.12 (AcOEt-AcOH 98:2), ácido 7 alfa-( (N-(p-Cl-Fen-SO„H-Fen)carboni L-iso-leucilamida) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carbo xi, - ácido 7 alfa-( (N-(?-Cl-Fen-S02NH-CO-Fen)carb nil-L-iso-leucilamida) -1,1-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-c boxi, Ejemplo 17 Ds acuerdo al procedimiento del ejemplo 11, a una solución enfriada en baño de hielo de 0.74 g de ácido 7 alfa-( (N- ( 4- ( 4-Cl-fenilsulfonilaminocarbonil ) -fenil )carbonil ) -L-valilamida) -l,l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxi en 4 ml de dioxano, se agregan secuencialmente 0.12 g de N-OH-succinimida y 0.38 g de DCC. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se reenfría en un baño de hielo. Se agregan 0.2 ml de trietilamina y después de agitación adicional durante 30 minutos, se agregan 0.37 g de 4- ( 2-dietilaminoetil )piperazina, todo de una vez. Después de 3.5 horas, la mezcla de reacción se diluye con dietiléter, se filtra y se evapora a sequedad. El residuo se disuelve en ácido sulfúrico frío 0.5 N, la fase acuosa se extrae repetidamente con AcOEt y el extracto orgánico combinado se descarta. Luego, la fase acuosa se basifica a pH 9 y se extrae con 3x9 ml de AcOEt; el procedimiento usual sobre la fase orgánica, y purificación mediante CL ( AcOEt-MeOH-NH-, ) produce 9.82 g de N- ( 2-dietilaminoetil ) , W* -( 7 alfa-( (N-( 4- ( 4-Cl-fenilsulfonilaminocarbonil ) -fenil ) carbonil ) -L-valilamida) -1, 1-dioxo-3-acetoxime il-3-cefem-4-carbonil ) -piperazina.

Ejemplo 18 Mediante reacción, en el procedimiento del ejemp 17, de un ácido l,l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carbox preparado de acuerdo al procedimiento del ejemplo 16, con u piperazina seleccionada del grupo que consiste de 4-meti piperazina, 4 -etil-piperazina, 4- ( 2-dimetilamino) -piper zina y 4- ( 2-dietilamino) -piperazina, se preparan las piper zin-l,l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxi-amidas , en l que se incluyen: N--metil-N ' - ( 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-is leucilamida ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carbonil ) -piperazina Rf = 0.52 (CHCl3-MeOH-ciclohexano-NH4 68:15:15:2).

Ejemplo 19 2.3 equivalentes de t-BuOLi (mediante tratamien de cantidad equimolar de ter-BuOH an THF anhidro con n-BuL se hacen reaccionar con 1 equivalente d cloruro teraftoilo; el di-ter-butiléster de teraftoilo se convier en el monoéster mediante tratamiento con 1.05 equivalentes KOH en t-BuOH. La sal se neutraliza; una solución de diclor metano del mono ter-butiléster resultante se hace reaccion con p-Cl-fenilsulfonamida en presencia de DMAP y cantidad equimolares de SDCI para obtener 4-(p-Cl-fenil-sulfoni amino-carbonil ) enzoato de ter-butilo. La siguiente escici del grupo ter-butil éster (TFA 0°C) dá el ácido 4- (p-Cl-f nilsulfonil-amino-carbonil) benzoico que se acopla con met L-valina y L-isoleucina y/o ter-butil éster para obtener: - 4- (p-Cl-fenil-sulfonil-amino-carbonil )benzoi L-valina (alfa) = + 10 (c = 10; MeOH) Rf = 0.28 (CHCl3~Me 6:4) punto de fusión mayor de 300°C y - 4- (p-Cl-fenil-sulfonil-amino-carbonil ) benzoi L-isoleucina como metil éster y/o ter-butil éster, l funciones éster del cual se escinden con NaOH N en MeOH TFA, respectivamente, para producir los ácidos libres. El acoplamiento del cloruro de p-Cl-fenilsulfoni con metil y/o ter-butil éster de ácido p-amino benzoic provee los 4-(p-Cl-fenilsulfonilamino) benzoatos de metilo ter-butilo. La escición de las funciones esteres y ensegui acoplamiento con L-valina y L-isoleucina y/o ter-butil ést permite obtener: 4- (p-Cl-fenil-sulfonil-amino) benzoil-L-vali (alfa)D = + 7.5 (c = 10; MeOH) Rf = 0.24 (CHCl-MeOH-A.c 94:5:1) y 4-(p-Cl-fenil-sulfonil-air no)benzoil ) -L-iso-le cina como metil éster y/o ter-butiléster , las funciones ést de los cuales se escinden con NaOH N en MeOH y TFA respecti mente para producir el ácido libre. Los compuestos de la presente invención se pued formular apropiadamente en composiciones farmacéutic obtenidas de acuerdo a las técnicas conocidas, por ejemplo, aquellas descritas en "Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook", Hack Publishing Co, U.S.A. En particular, las composiciones adecuadas para administración oral y mediante aerosol son preferidas, tales como composiciones sólidas y líquidas, como cápsulas, pildoras, tabletas, suspensiones, emulsiones, jarabes, gotas o frascos. Una dosis adecuada de los compuestos de fórmula (I) varía de acuerdo a la naturaleza e intensidad de la afección, de la vía de administración, la edad, peso y estado de gravidez del paciente. En particular, la cantidad del principio activo oralmente administrado, como dosis total, varía de 5 a 1500 mg al día, subdividida en administraciones repetidas. La dosis del principio activo administrado mediante aerosol, como dosis total, varía de 0.05 a 50 mg por día.

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad, lo contenido en las siguientes

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. L-valil- y homovalil-amidas de 7 alfa-amino-l,l-dioxo-3-cefem de fórmula caracterizadas porque: R es hidrógeno, un grupo protector convencional de grupos amino aminoácidos y un radical arilo; R, es un radical alcoxi de cadena recta o ramificada, que contiene 1-4 átomos de carbono, radical benzhidriloxi; piperazin-1-il 4-sustituido o el grupo NR.R,. en donde R. es hidrógeno y R,- representa el resto de un L-alfa-aminoácido o R. y R? junto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de 5 o 6 átomos, que se selecciona t de 2-carboxipirrolidilo y 4-carboxipiperidilo, los grupos carboxi opcionalmente se esterifican contemporáneamente de manera preferible como ter-butil y/o benzhidril esteres o en forma de sales aceptables farmacéuticamente de un catión inorgánico y/o amonio; R~ es un radical alquilo de cadena recta o ramificada, que contiene 1-4 átomos de carbono; R. es un radical alquilo de cadena recta que contiene 1-2 átomos de carbono; y las sales con ácidos aceptables farmacéuticamente de los compuestos (I) en los cuales R es hidrógeno.

2. Las L-valilamidas de 7 alfa-amino-l,l-dioxo-3-cefem de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas por el hecho de que el grupo protector amino alfa-aminoácido convencional se selecciona del grupo que consiste de benziloxi-carbonilo, opcionalmente sustituido en el anillo de benceno con radical 4-metoxi o 2 ,6-dimetilo; metoxi-; etoxi- y aliloxi-carbonilo; 2 , 2, 2-tricloroetoxicarbonilo y 9-fluore-nilmetoxicarbonilo.

3. Las L-homovalilamidas de 7 alfa-amino-1, l-dioxo-3-cefem de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas por el hecho de que el grupo protector amino alfa-aminoácido conven-cional se selecciona del grupo que consiste de benziloxicar-bonilo, opcionalmente sustituido en el anillo de benceno con radical 4-metoxi o 2 , 6-dimetilo; metoxi-, etoxi- y aliloxicarbonilo; 2, 2 , 2-tricloroetoxicarbonilo y 9-fluorofenilmetoxi-carbonilo.

4. Las L-valil y homovalil-amidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas por el hecho de que el radical arilcarbonilo se selecciona del grupo que consiste de radicales de p-clorofenilsulfonilaminocarbonilfenilcarbonilo y p-clorofenilsulfonilaminofenilcarbonilo.

5. Las valil y homovalil-amidas de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas por el hecho de que el grupo 4-carbonilo del núcleo de cefem porta un residuo amina que se selecciona del grupo que consiste del residuo de L-alfa-aminoácido, piperazina 4-sustituida y el radical 2-carboxi-pirrolidil y 2-carboxipiperidil .

6. El 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido) -1 , 1-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem.

7. El 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-isoleucilamido) -1 , 1-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem.

8. El 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido) -1, 1-dioxo-3-acetoximeti1-4-benzhidriloxi-3-cefem.

9. El 7 alfa-( (N-benciloxicarbonil ) -L-isoleucilamido) -1 , 1-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxicarbonil-3-cefem.

10. El 7 alfa-( (N-4-(4-clorofenilsulfonilamino)fenil)carbonil)-L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3 cefem.

11. El 7 alfa- ( (N-4- (4-clorofenilsulfonilaminocarbonil) fenil ) carbonil ) -L-valilamido ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ter-butoxicarbonil-3-cefem.

12. El 7 alfa-( (N-4-( 4-clorofenilsulfonilamino) fenil)carbo-nil ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-benzhidriloxi-carbonil-3-cefem.

13. El 7 alfa- ( (N-4- ( 4-clorofenilsulfonilaminocarbonil )-fenil ) carbonil ) -L-valilamido) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-4-ben-zhidriloxicarbonil-3-cefem.

14. La 7 alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido) -1 ,1-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carboxamida N- ( 2S ) -4-tiaxen-1, 6-dióica.

15. La 1-metil, 4- ( 7alfa- ( (N-benciloxicarbonil ) -L-valilamido ) -1 , l-dioxo-3-acetoximetil-3-cefem-4-carbonil ) ) piperazina.

16. Una composición farmacéutica activa en la cura de bronquitis crónica, enfisema, ARDS, fibrosis cística y artritis reumatoide, caracterizada porque contiene una cantidad terapéuticamente activa de un compuesto de conformidad con las reivindicaciones 1-15, en mezcla con diluyentes adecuados, aceptables farmacéuticamente. Bajo protesta de decir verdad manifiesto que -el mejor método conocido para llevar a la práctica la presente invención, es el que se señala en la descrip- -ción de ésta solicitud. En testimonio de lo cual firmamos la presente en: México, D.F., a 6 de Agosto de 1994. DOMPE' S.p.A. P.P. DR. FÉLIX B. DUMONT. O. JACQUELINE KOURILSKY. Y/O. LIC. JOSÉ B. DUMONT.