MX2015004386A - Derivados de acido hialuronico modificados y uso de los mismos. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a derivados de ácido hialurónico de la Fórmula I, su síntesis y uso de los mismos como cosméticos o como medicamentos en un sujeto en necesidad. (ver Fórmula).

Description

DERIVADOS DE ÁCIDO HIALURÓNICO MODIFICADOS Y USO DE LOS MISMOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a derivados de ácido hialurónico y a su uso en los campos médicos y cosméticos, o como suplementos dietéticos. La invención además se refiere a la composición farmacéutica que contiene tales derivados asi como también el proceso para obtenerlos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Por largo tiempo los investigadores han dedicado muchos esfuerzos para identificar nuevos dispositivos médicos para reparar tejido, ya sea para proporcionar nuevas herramientas que superen algunas desventajas de los anteriores o mejor dicho más adaptados a los tejidos específicos. En la última década, los esfuerzos se han multiplicado también a causa de un incremento en la demanda de personas que desean simplemente modificar su imagen estética principalmente modificando el curso normal de envejecimiento.

Es bien reconocido que la pies es un tejido sensible que se puede alterar por una amplia variedad de factores naturales y no naturales tales como exposición a UV, envejecimiento, humo, quemaduras, aené, enfermedades, etc...

En sujetos sanos, la reparación de tejido o regeneración de tejido ocurre por el proceso de curación después de que una lesión daña el tejido. En el proceso de envejecimiento, la producción de ácido hialurónico y/o colágeno disminuye en tejidos blandos concomitantemente a una velocidad acelerada de degradación. Tal mecanismo conduce al desarrollo de área hundida tal como lineas, arrugas, surcos y pliegues.

Los métodos actualmente disponibles para superar defectos de tejidos blandos incluyen cirugía (por ejemplo, injerto autólogo o heterólogo) o el uso de una técnica menos invasiva que involucra el uso de rellenadores dérmicos.

La piel es una estructura altamente organizada que consiste de tres capas principales, cada una de las cuales tienen su propia función. La capa externa llamada epidermis está compuesta principalmente de queratinocitos, y asume una función protectora de factores externos tales como patógenos, tensión oxidativa debido a UV, agresión de productos químicos mientras que regula la cantidad de agua liberada del cuerpo por pérdida transepidérmica.

El estrato medio es la dermis y es un tejido conectivo fibroelástico denso que sustancialmente consiste de tres proteínas de fibrina, principalmente colágeno, elastina y reticulina conjuntamente con una matriz de soporte. La última está compuesta de glicosaminoglicanos (es decir, GAG), cadenas largas de polisacáridos, los cuales son capaces de enlazar una gran cantidad de agua. Conjuntamente las mismas forman un gel el cual no se fuga de la dermis.

Finalmente, la capa interna llamada hipodermis es una capa fibroadiposa la cual está conectada libremente a la dermis que actúa como una capa de aislamiento y un colchón protector.

La unión dermo-epidérmica determina la superficie de la piel. Por consiguiente, una unión dermo-epidérmica con integridad de estructuras de anclaje mantenida plegada, asi incrementa el área de la superficie de contacto entre la dermis y epidermis, y promueve intercambios de factores difusibles entre estos dos tejidos que fortalecen su cohesión y mejoran la apariencia de la piel. En casos donde las estructuras de anclaje son alteradas, particularmente debido a una deficiencia en la síntesis de colágeno IV, colágeno VII, laminina V y/o debido al envejecimiento o enfermedades, esto causa un aplastamiento de la unión dermo-epidérmica. En efecto, se ha demostrado que el colágeno IV y colágeno VII son muy importantes en el proceso de curación de heridas (Betz P, et al . , Int . J. Legal . Med. , 1992, 105, 93) .

La reparación de tejido también contempla heridas crónicas y/o que no cicatrizan. La prevalencia de tales heridas se incrementa en enfermedades relacionadas con la edad, en personas afectadas por el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), o en pacientes que han sido sometidos a radiación después de la intervención de cáncer. Las heridas crónicas tales como úlceras venosas en piernas requieren cuidado a largo plazo y es muy costoso. Además, tales heridas usualmente reaparecen dentro de dieciocho meses de curación. En las últimas cuatro décadas el concepto de curación de heridas húmedas generalmente se ha aceptado dando lugar a cientos de téenicas de colocación de vendajes diferentes dirigidas a mejorar el tiempo y calidad del proceso de cicatrización. La mayoría de los vendajes actualmente disponibles, aparte de la gasa tradicional, pertenece a una de las siguientes clases: espumas, hidrocoloides, hidrogeles, alginatos, y películas; las primeras dos representan la mayor parte del mercado global de los vendajes para heridas húmedas. Comúnmente los hidrocoloides están hechos de carboximetilcelulosa, gelatina o pectina y se pueden combinar con alginatos, hialuronatos, o colágenos o mezclas de los mismos. Los vendajes que involucran biomateriales tales como colágeno, ácido hialurónico, quitosán, alginatos o elastina son llamados vendajes biológicos.

Desde que el colágeno es la proteína más abundante de vendajes biológicos a base de colágeno de matriz extracelular (ECM) se ha desarrollado ampliamente pero ha sido remplazado progresivamente por vendajes de nueva generación.

Se ha mostrado que los vendajes a base de alginato fueron capaces de promover la actividad celular tal como adhesión y proliferación (Thomas S., J. Wound Care, 2000, 9, 2^ 56; Thomas S., J. Wound Care, 2000, 9, 3, 115; Thomas S., J. Wound Care, 2000, 9, _4, 163).

El polisacárido de quitosán se ha usado en el tratamiento de quemaduras y heridas debido a una estimulación hipotética de formación de fibroblastos y reacción de fase temprana incrementada relacionada con la cicatrización (Paul W., et al., Trends Biomater. Artif. Organs, 2004, 18, 18).

Finalmente, existe una amplia variedad de vendajes que contienen hialuronato, en donde el ácido hialurónico se ha modificado químicamente mientras que mantiene su biocompatibilidad natural, biodegradabilidad, y falta de inmunogenicidad. El ácido hialurónico es un polisacárido endógeno presente en concentraciones elevadas en la piel y tejido conectivo. En la piel, el ácido hialurónico polimérico puede enlazar agua, formando una sustancia viscosa que ayuda en la hidratación y turgencia. Por consiguiente, la pérdida de ácido hialurónico con el envejecimiento está asociada con la deshidratación incrementada y formación de arrugas de la piel. Además de la piel, el ácido hialurónico (es decir, HA) como un componente de núcleo de la matriz intracelular, también se encuentra naturalmente en varios otros tejidos del cuerpo tal como tendones, músculos, cartílago, y el humor vitreo, volviéndolo muy adecuado para aplicaciones biomédicas dirigidas a estos tejidos.

Los ejemplos de vendajes de biomaterial a base de HA son algunos en donde HA es ya sea: S no modificado como su sal de sodio (por ejemplo, ialugen, Ibsa) en la forma de una crema o en almohadillas de gasa que contiene 4g de ialugen para aplicación tópica. esterificado vía las porciones carboxílicas total o parcialmente como se describen en la patente EP0216453 (por ejemplo, Hyaff®) para uso en el campo farmacéutico (por ejemplo, surgical dermatology, ophthalmology, dentistry: Ballini A., et al., Int. J. Med. Sci., 2009, 6, 2, 65) o cosmético. Estos ésteres de HA pueden ser extruidas para producir membranas y fibras, liofilizadas para obtener esponjas, o procesadas por aspersión, extracción, y evaporación para producir microesferas. 'ó esterificado vía las porciones hidroxilo (W02004013182). enlazado con un ingrediente biológicamente activo adicional : o paclitaxel para prevenir la formación de adhesión poscirugia (Jackson J.K., et al., Pharm. Res., 2002, 19 4_, 411; W002090390); o Ampicilina (GB2207142); reticulado para formar una red molecular con o un polímero de un ácido alfa hidroxi tal como ácido poliláctico (W02006069578); 1,4-butandiol diglicidil éter; 1,3-diaminapropano; derivados de epoxi polifuncional (EP0161887); o puede ser o autoreticulado entre la porción amino desacetilada del residuo glucosamina y el grupo carboxílico o la porción de ácido glucurónico o entre el grupo carboxílico o la porción de ácido glucurónico y un grupo hidroxilo de cualquier unidad (por ejemplo, US5676964B1, Hyalobarrier® que actúa como una barrera protectora y de separación de tejidos después de la cirugía abdominopélvica por lo tanto se evitan complicaciones de adhesión). depositado en una película/gasa.

Algunos vendajes pueden contener además ingredientes biológicamente activos complementarios tales como antibióticos, antiinflamatorios, analgésico, o factores de crecimiento o mezcla de los mismos. Una lista no exhaustiva de tales productos se puede representar por Solaraze® que es un gel tópico que contiene 3% de diclofenaco en 2.5% de ácido hialurónico recientemente aprobado para el tratamiento de queratosas actínicas; o por Regranex, un gel que contiene un factor-BB de crecimiento derivado de plaqueta humana recombinante está actualmente en ensayo clínico de fase III para úlcera diabética neuropática.

W02007048522 describe una composición en crema que consiste de ácido hialuronato de sodio, glicina y prolina y posiblemente U sina y leucina que es efectiva para promover la reintegración celular en el proceso de rápida cicatrización de heridas.

WO2010003797 describe composiciones a base de HA de diferentes pesos moleculares para el tratamiento de heridas corneales. Se reivindicó que las fracciones de HA de bajo peso molecular (es decir, 51 kDa y 320 kDa) mejoran el proceso de cicatrización mientras que las fracciones de HA de alto peso molecular (es decir, 1500 kDa) probablemente debido a que son demasiado viscosas no promueven la cicatrización de la herida.

WO2C08015249 describe una composición, preferiblemente coloidal, hecha de partículas de HA de alto peso molecular y poliaminas (por ejemplo, putrecina) para uso como rellenador (es decir, rellenador antiarrugas o rellenador de labios), para el tratamiento de cicatrización de heridas y para la protección de la piel humana contra radiaciones ultravioleta (UVA), pero también para proteger la piel humana contra efectos perjudiciales de los radicales libres. Los únicos datos experimentales publicados consideran los resultados de absorbancia de varias composiciones, por lo tanto se dirigen para ser usados como composiciones protectoras de la piel.

El hidrogel hecho particularmente de HA reticulado también se ha reportado como una matriz polimérica útil para el crecimiento e implante de células (por ejemplo, células que forman cartílago, células que forman hueso, células del músculo, fibroblastos, y células de órganos) para los órganos específicos (US6129761).

Los rellenadores dérmicos son bien conocidos en la téenica y generalmente están hechos de colágeno y/o derivados a base de ácido hialurónico. En el pasado, los rellenadores usado más ampliamente se basaron en el colágeno de bovino o humano y se mantuvo para durar 3 a 6 meses. Una clase más reciente de rellenadores se basa en ácido hialurónico (HA) el cual difiere entre ellos en términos de la configuración de reticulación de HA (es decir, tipo y grado), tamaño de partículas y formulación. Cada uno de estos parámetros se han estudiado ampliamente y ajustado perfectamente para dar lugar a rellenadores intencionalmente adecuados para diferentes áreas del cuerpo.

Para superar la inestabilidad de HA y/o fácil degradación por hialuronidasa, aparece en la década pasada el rellenador de HA reticulado con vida útil mejorada. Generalmente es aceptado que los rellenadores dérmicos a base de HA que tienen una baja viscosidad tal como aquellos que son altamente reticulados y/o están hechos de bajo peso molecular tienen una duración más corta en el cuerpo que otros que son altamente reticulados y/o están hechos de HA de alto peso molecular. El segundo tipo de rellenadores derivado de HA altamente modificado generalmente es preferido puesto que los rellenadores no necesitan ser inyectados en el paciente tan frecuentemente como con algunos de baja viscosidad.

El primer rellenador dérmico reticulado a base de HA que se aprobó por la FDA en Diciembre de 2003 es RestylaneTM, siete años después se aprobó en Europa. RestylaneTM, también conocido como ácido hialurónico estabilizado no animal (NASHA) es un rellenador inyectable compuesto de ácido hialurónico que tiene un peso molecular de aproximadamente 1 millón el cual ha sido reticulado con un reticulador de dos brazos (es decir, 1,4-butanodiol diglicidil éter (BDDE)) para formar ya sea reticulaciones entre los dos grupos hidroxilo de moléculas de HA. RestylaneTM es especialmente adecuado para corregir lineas en la cara inferior y bajo los ojos, asi como también para incrementar el tamaño de los labios. La investigación histopatológica reciente conducida en Restylane® ha demostrado que estimula la síntesis de colágeno I y III (Wang F., et al., Arch. Dermatol., 2007, 143, 155).

Una clase adicional de rellenadores está representada por la familia Hylaform hecha de gel Hylan B. Esta familia está compuesta por Hylaform FineLine, Hylaform Plus e Hylaform (Inamed Corporation, California, USA) y se deriva de un proceso de reticulación usando divinil sulfona (DVS) en la cual también ocurre la reticulación a través de los grupos hidroxilo de HA formando así reticulaciones sulfonil-bis-etilo entre moléculas de HA.

Otra familia de rellenador dérmico reticulado a base de HA es Juvederm compuesto de varios miembros (es decir, Juvederm 18, Juvederm 24, Juvederm 24HV y Juvederm 30) y son productos HA reticulados por medio de BDDE como Restylane.

Sin embargo, Juvederm se pretende que esté en una forma de gel homogéneo en lugar de formas de partículas. Su uso es apropiado tomando en cuenta la profundidad de la dermis para la corrección de pliegues o arrugas faciales moderadas a severas, tales como pliegues nasolabiales.

Perlane® el cual está hecho de partículas de gel más grandes de ácido hialurónico que Restylane® o JuvedermTM es recomendado para inyecciones más profundas. Un ensayo clínico demuestra que una sola inyección con Perlane® podría mantener los efectos hasta por seis meses.

En pacientes que presentan lineas y pliegues faciales más profundamente definidos, el uso de formulaciones con ingredientes de tamaño de partícula pequeña tiende a ser más suave y más tersa, y por lo tanto se adaptan bien en regiones tales como labios. Las partículas más grandes tienen más estructura, y están mejor adecuadas para pliegues profundos tales como las arrugas nasolabiales.

En piel envejecida se ha demostrado que ocurre una disminución en la expresión de colágeno VII, la cual es responsable para asegurar la membrana de basamento a las fibras de colágeno dérmicas ocurridas (Chen Y.Q., et al., J. Invest. Dermatol., 1994, 102, 205). Recientemente se ha encontrado que un nuevo derivado de C-xilopiranosida induce la expresión en la piel de glicosaminoglicanos y de proteoglicanos de sulfato de heparan (Pineau N., et al., Eur. J. Dermatol., 2008, 18, 1, 36).

Sin embargo, además de todas las potenciales ventajas de un rellenador dérmico sobre otro reclamadas por varias compañías, persisten algunas dudas todavía con respecto a la comprobación de las ventajas. Un análisis que compara los beneficios/desventajas de varios rellenadores dérmicos a base de HA de acuerdo con su composición destaca los hechos que no todas las presuntas ventajas reclamadas de los diversos rellenadores han sido evaluadas científica y exhaustivamente (Alemman'I.B., et al., Clin. Interv. Aging, 2008, 3, 4_, 629).

Las partículas de ácido hialurónico revestidas se han dado a conocer recientemente (WO2008147817).

La inyección con aguja es el método preferido para suministrar rellenadores con efecto lateral mínimo en la locación objetivo.

Una lista no exhaustiva de aplicaciones en las cuales un derivado a base de HA puede ser empleado en el campo farmacéutico es reportada a continuación.

Laserskin®, un compuesto de autoinjerto epidérmico hecho de queratinocitos autógenos cultivado en una matriz biodegradable hecha de 100% HA esterificado (es decir, éster bencílico), ha mostrado resultados prometedores para favorecer la cicatrización completa de la úlcera en pacientes con pie diabético crónico (Lobmann R., et al., J. Diabetes Complications, 2003, 17, 199).

Un compuesto de autoinjerto similar ha mostrado efectos benéficos en la cicatrización de heridas crónicas de úlceras de la piel en pacientes de epidermólisis hulosa distrófica recesiva (Wullina U., et al., J. Dermatol., 2001, 28, 4_, 217) .

Una fracción de alto peso molecular de gel que contiene HA (es decir, Gengivel®) ha demostrado ser útil en el tratamiento de la enfermedad periodontal tal como gingivitis (Jentsch H., et al., J. Clin. Periodontol., 2003, 30, 2, 159).

Merogel®, un vendaje nasal tejido hecho de Hyaff®, ha demostrado mejorar el proceso de cicatrización en dacriocistorhinostomia endoscópica endonasal para dacriocistitis crónica primaria (Wu W., et al., Eye, 2011, 25, b, 746) como también Un éster etílico liofilizado de HA ha demostrado ser útil en varias patologías de oído y en la práctica de microcirugía otológica, otoneuroquirúrgica y odontostomatológica, tal como la reparación de perforaciones timpánicas (US5503848).

Una lista no exhaustiva de aplicaciones en las cuales un derivado a base de HA se puede emplear en el campo cosmético es reportada a continuación.

El aumento de labios, celulitis, arrugas y círculos oscuros alrededor de los ojos, arrugas entre las cejas surcos horizontales de la frente, arrugas en la comisura de la boca, irregularidades de las marcas de aené, nariz y barbilla, áreas deprimidas en las mejillas, sienes, aumento del busto.

Ya se conoce el uso de L-carnitina sola o junto con el ácido hialurónico, en el campo cosmético y médico.

US4839159 describe el uso de L-carnitina para mejorar o curar enfermedades de la piel incluyendo las arrugas, la piel seca o descamación, y quemaduras (particularmente quemaduras de sol), y en la curación y la prevención de la formación de la cicatriz, en particular aquella causada por la infección por un patógeno.

US7854939 describe el uso en cosmética de un gel hecho de un complejo que consiste de un polímero tal como polímero de carboxi vinilo (por ejemplo, carbopol), un agente tensioactivo, y clorhidrato de glicinato de propionil L-carnitina, para el tratamiento de trastornos de la piel tales como arrugas y celulitis.

US7763655 describe el uso de una composición tópica que tiene creatinato de carnitina para la inhibición de la formación de la celulitis en la piel.

W02000029030 describe el uso de complejos de ácido hialurónico y carnitina o un derivado de acilo del mismo que tiene 2-20 átomos de carbono, para uso cosmético (por ejemplo, lociones o cremas de belleza) y uso médico (por ejemplo, úlcera de la pierna, síndrome del ojo seco). Esta solicitud de patente reivindica un complejo preferido que contiene los dos componentes (es decir, HA y carnitina o un derivado de acilo de los mismos) en relaciones en peso que varían desde 1:3 a 3:1, preferiblemente en relaciones equiponderales.

A pesar del gran número de productos útiles para el tratamiento de trastornos de la piel en el campo médico y cosmético, todavía es una necesidad percibida tener nuevos ingredientes activos útiles para la prevención o el tratamiento de trastornos de la piel ya sea desde un punto de vista farmacéutico o desde un punto de vista cosmético.

Se ha encontrado ahora sorprendentemente que los derivados de ácido hialurónico funcionalizadas covalentemente con carnitina o alcanoil carnitina están dotados de propiedades biológicas útiles en los campos médicos y cosméticos, y como suplementos dietéticos. Dichos derivados han demostrado permitir la regeneración del propio colágeno del cuerpo.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a derivados de ácido hialurónico y su uso en los campos médicos y cosméticos, y como suplementos dietéticos.

La invención proporciona compuestos de la fórmula I Fórmula I que comprende (m + n) unidades de repetición; en donde m y n son números enteros > 0, con 70 < (m + n)< 5000 y con m > n el símbolo // significa que dos unidades consecutivas pueden ser ya sea insustituidas, o sustituidas o solamente una de las dos es sustituida; R es H o una porción alcanoilo que contiene de 2 a 20 átomos de carbono en donde la porción alcanoilo puede ser lineal o ramificada; X es Cl, Br, Ac, MeS03 o H2P04; A es H, Na, K, o TBA; o cuando X está ausente A está ausente.

Los derivados de ácido hialurónico de la fórmula I se caracterizan por dos parámetros los cuales son el número total de unidades de repetición (es decir, m + n), y el grado de sustitución (es decir, SD). Este último incluso si se calcula mediante HPLC, puede ser representado por la fórmula posterior.

El derivado de ácido hialurónico preferido de la fórmula I comprende entre 70 a 5000 unidades de repetición.

Los derivados de ácido hialurónico más preferidos de la fórmula I se caracterizan por 200 < m + n < 2000.

Los derivados de ácido hialurónico aún más preferidos de la fórmula I se caracterizan por 400 < m + n < 1800.

Adicionalmente los derivados de ácido hialurónico aún más preferidos de la fórmula I se caracterizan por 500 < m + n < 1700.

Además, cada uno de los derivados de ácido hialurónico preferidos, mencionados anteriormente, de la fórmula I tienen un SD de grado de sustitución comprendido entre 0.01 y 0.6.

Los derivados de ácido hialurónico aún más preferidos de la fórmula I tienen un SD de grado de sustitución comprendido entre 0.10 y 0.6.

El término "unidad" o "unidad de repetición" se refiere al dimero sustituido o insustituido constituido por la porción de ácido D-glucurónico y porción de ?-N-acetilglucosamina, este último siendo sustituido o insustitutido .

La expresión "cantidad molar" y el término "equivalente" deben interpretarse con respecto a la unidad de dimero de ácido hialurónico según lo representado en la figura 1.

Figura 1 La expresión "cantidad molar de carnitina unida" está correlacionada con el parámetro n.

La expresión "cantidad molar de dímeros de polidisacárido" está correlacionada con el parámetro m.

El expresión "grado de sustitución" y sus siglas "SD" se refieren al resultado de la ecuación 1 posterior cantidad molar de carnitina unida cantidad SD cantidad molar de dimeros de poMisacándos La expresión "ácido hialurónico" en la presente es sinónimo de hialuronan o de su abreviatura HA. Todas las fuentes de HA son útiles, incluyendo fuentes bacterianas y aviares.

La expresión "derivados basados en HA" se refiere a compuestos hechos de HA químicamente modificado de acuerdo con la presente invención.

Una modalidad de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula I para su uso como agentes rellenadores en el campo cosmético.

En particular, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula I y a su uso como: rellenador para inyecciones útiles para reparar, aumentar fortalecer el tejido en necesidad de ser reconstruido. prevenir y/o tratar la celulitis, cicatrices o arrugas; aumentar senos hipoplásicos, rellenar los huecos de las mejillas, restaurando por lo tanto una apariencia natural.

S para prevenir el envejecimiento.

En una modalidad preferida de la invención al menos un componente de la matriz extracelular es regulado por la administración de compuestos de la fórmula I para el sujeto con necesidad.

En una modalidad más preferida de la invención al menos una matriz extracelular está regulada por 5 a 90%.

En una modalidad todavía más preferida de la invención al menos una matriz extracelular está regulada por 10 a 70%.

En una modalidad todavía más preferida de la invención al menos una matriz extracelular es regulada por 10 a 70% de 6 horas después de la administración y al menos hasta el día 5 después de la administración de compuestos de la fórmula I.

, En una modalidad todavía más preferida adicional de la invención al menos una matriz extracelular es regulada, es elegida a partir del grupo que consiste de colágeno tipo IV, VII, hialuronan sintasa 1 y hialuronan sintasa 2.

En una modalidad todavía más preferida adicional de la invención al menos una matriz extracelular es regulada, es elegida de colágeno tipo IV o VII.

Un objeto adicional de la invención es un compuesto de la fórmula I para uso en restaurar o mantener las actividades de elasticidad de la piel.

Una modalidad adicional de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula I para uso en el campo de la medicina.

En particular, la presente invención se refiere a compuestos de la fórmula I y a su uso como: S suplemento dietético y medicamento, para la prevención y/o el tratamiento de alteraciones de la piel, articulaciones, artrosis, enfermedad de Crohn, rectocolitis ulcerosa y enfermedades de los ojos; ·/ vendaje biológico útil para el tratamiento de heridas crónicas y/o agudas y/o curación no natural de heridas. Una lista no exhaustiva de factores que pueden conducir a ese tipo de heridas son quemaduras; irradiación (ya sea durante un tratamiento de radioterapia o exposición a la luz del sol); abrasiones; cortes; laceraciones; disparos; enfermedades tales como úlceras (por ejemplo, úlceras de pierna y venosas), en particular las derivadas de la diabetes; síndrome del ojo seco; cirugía como cesárea; dispositivo médico para corregir trastornos urológicos tales como incontinencia urinaria, reflujo gástrico liquido; o para reparar lesiones de huesos, cartílago o del músculo.

Un objeto adicional de la presente invención es un compuesto de la fórmula I para uso en apoyo de la capa de la matriz fibrosa del tejido debajo de la piel.

Un objeto adicional de la presente invención, son compuestos de la fórmula I para su uso como suplemento dietético o como medicamento, para la prevención y/o el * tratamiento de alteraciones de las articulaciones, incomodidad musculoesquelético debido a la osteoartritis o fibromialgia, sinovitis, gonartrosis, enfermedad de Crohn, rectocolitis ulcerosa y enfermedades oculares tales como el síndrome del ojo seco.

Para el uso cosmético o farmacéutico, los compuestos de la fórmula I de acuerdo con la presente invención pueden ser administrados convenientemente por vía oral o parenteral, en la forma de líquido, semilíquido, crema, sólido, en liposomas o loción. Una forma no limitativa de administración parenteral es: tópica, intradérmica, intra-articularmente o en cualquier otra forma parenteral adecuada bien conocida en el arte.

Como un suplemento dietético, los compuestos de la fórmula I de acuerdo con la presente invención pueden ser administrados convenientemente por vía oral.

Para uso oftálmico, los compuestos de la fórmula i de acuerdo con la presente invención pueden ser administrados convenientemente por vía oral; o en la forma de gotas para ojos, gel o pomada para ser aplicada tópicamente a los ojos.

De acuerdo con la presente invención la forma parenteral de administración de los compuestos de la fórmula I incluye, y no se limita a, la forma de administración tópica y parenteral en cualquier parte del cuerpo con necesidad de ser tratada.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos de la fórmula I en la forma de la composición farmacéutica o cosmética, pueden ser administrados por vía parenteral, en una dosis de 0.1 a 30% en peso o volumen, preferiblemente de 1 a 20% por peso o volumen, de manera más preferible de 2 a 10% en peso o volumen del ingrediente activo, opcionalmente en mezcla con uno o más agentes auxiliares habituales adecuados o ingredientes activos adicionales.

De acuerdo con la presente invención, los compuestos de invención de la fórmula I en la forma de suplemento dietético o composición farmacéutica cosméticos pueden administrarse por vía oral en una dosis de 0.2 a 200 mg/dia, la dosis preferida es 2-100 mg/dia, la dosis más preferida es de aproximadamente 25-50 mg/dia.

Los compuestos de la fórmula I para ingestión oral pueden estar revestidos en forma entérica para sobrevivir al ácido del estómago y pasar al intestino delgado donde será absorbido.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender adicionalmente uno o más de los siguientes ingredientes: a) un tensioactivo farmacéuticamente aceptable tal como un agente estabilizador, un agente de volumen, un crio-protector, un lio-protector, un aditivo, un vehículo, un portador, un diluyente o un auxiliar. Los tensioactivos son bien conocido por la persona experta y se reportan en cualquiera de los siguientes manuales: Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (Ansel H.C., et al., eds., Lippincott Williams & Wilkins Publishers, 7th ed. 1999); Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro A.R., ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 20th ed.2000); Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman J.G., et al., ed., McGraw-Hill Professional, 10th ed. 2001); y Handbook of Pharmaceutical Excipients (Rowe R.C., et al., APhA Publications, 4th edition 2003), y b) al menos un ingrediente activo para la prevención o el tratamiento de alteraciones de la piel seleccionadas de: - agentes que soportan la microcirculación que incluyen, pero no se limitan a, los extractos de Ginkgo biloba, rusco, meliloto, vid roja, viburnum; agentes para la activación de la lipolisis que incluyen, pero no se limitan a, extractos de hiedra terrestre (Glechoma), raíz de Angélica, extracto de Paulinia, suave o de las bases xánticas tales como cafeína, teobromina y teofilina; - compuestos antiinflamatorios que incluyen, pero no se limitan a, derivados de glicirricinato, ácido rosmarínico, alfa bisabolol, azuleno y derivados de los mismos, asiaticoside, sericoside, ruscogenina, escina, escolín, quercetina, rutina, ácido betulinico y derivados de los mismos, catequina y derivados de la misma; compuesto blanqueadores de la piel que incluyen, pero no se limitan a, ácido ferúlico, hidroquinona, arbutina y ácido kójico; - compuestos antioxidantes y antiarrugas que incluyen, pero no se limitan a, retinol y derivados, tocoferol y derivados, salicilatos y sus derivados; - agentes que mejoran la penetración en la piel y la eficacia de los agentes anticeluliticos comunes que incluyen, pero no se limitan a ácidos monocarboxilicos que comprenden ácido láctico, ácido glicólico, ácido mandélico y mezclas de los mismos; los ácidos grasos esenciales (EFA) que ejercen una función importante en la defensa de la piel contra el estrés oxidativo, introduciendo en la biosintesis de lipidos de la epidermis y proporcionando los lipidos para la formación de la barrera de la epidermis; los ácidos grasos esenciales preferidos se seleccionan del grupo que consiste de ácido linoleico, ácido gamma-linolénico, ácido homo-gamma-linolénico, ácido columbinico, ácido eicosa- (n-6,9,13)-trienoico, ácido araquidónico, ácido gamma-linolénico, ácido timnodónico, ácido hexaenoico y mezclas de los mismos; o - un protector solar adecuado seleccionado del grupo que comprende: derivados de ácido para aminobenzoico (PABA); derivados de cinamato y benzofenona tal como octil metoxi-cinamato, 2-hidroxi-4-metoxi-benzofenona; 3-Hidroxiquinurenina O-b-DL-glucósido o un derivado de los mismos seleccionados del grupo que comprende: 3-hidroxiquinurenina O-b-D-glucósido; 3-Hidroxiquinurenina O-b-L-glucósido; 3-hidroxiquinurenina; ácido 4- (2-amino-3-hidroxifenil)-4-oxobutanoico O-b-D-glucósido; ácido 4- (2-amino-3-hidroxifenil)-4-oxobutanoico O-b-DL-glucósido; ácido 4- (2-amino-3-hidroxifenil)-4-oxobutanoico O-b-L-glucósido; el aducto de glutationa de 3-HKG; o un derivado enantiomérico de los mismos; o mezcla de los mismos; o sus sales. c) opcionalmente al menos un excipiente o diluyente seleccionado de: - agentes espesantes en cualquier proporción conveniente bien conocidos por los expertos en el arte; agente espesante ejemplar son gomas tales como xantano, carragenina, gelatina, karaya, pectina y goma de algarrobilla; dicha composición cosmética basada en agua puede ser protegida; preservativos contra el crecimiento de microorganismos; conservadores adecuados incluyen ésteres alquilicos del ácido p-hidroxibenzoico, derivados de hidantoina, sales de propionato, metilparabeno, propilparabeno, imidazolidinil urea, alcohol bencílico de deshidroxiacetato de sodio, y una variedad de compuestos de amonio cuaternario. Los conservadores, si los hubiera, se agregan en cualquier proporción adecuada bien conocida por la persona experta en el arte; - polímeros de silicona en cualquier proporción adecuada bien conocidos por los expertos en el arte; emolientes actúa como portador, para facilitar la dispersión del ingrediente activo y suavizantes de la piel; los emolientes pueden ser incorporados en la composición cosmética de la invención en cualquier proporción adecuada bien conocida por los expertos en el arte; los emolientes adecuados pueden ser clasificados bajo tales categorías químicas generales como ésteres, ácidos grasos y alcoholes, polioles e hidrocarburos; un ejemplo de di-ésteres grasos incluyen: adipato de dibutilo, dietil Sebacato, diisopropil dimerato, acetato de propilenglicol miristil éter, diisopropil adipato; y dioctil succinato; un ejemplo de ésteres grasos de cadena ramificada incluyen 2-etil-hexil miristato, isopropil estearato e isostearil palmitato; un ejemplo de ésteres de ácido tribásicos incluyen triisopropil trilinoleato, trilauril citrato, tributirina, y aceites vegetales saturados o insaturados; un ejemplo de ésteres grasos de cadena recta incluyen lauril palmitato, miristil lactato, oleil eurcato, estearil oleato coco-caprilato/caprato, y cetil octanoato; un ejemplo de alcoholes grasos y ácidos son compuestos de C10-C20 tales como ácidos y alcoholes cetilico, miristilico, palmitico y estearilico; un ejemplo de polioles son compuestos alquil polihidroxilo de cadena lineal y ramificada, tales como propilen y butilenglicol, sorbitol glicerina, asi como también los polioles poliméricos tales como polipropilenglicol y polietilenglicol; un ejemplo de hidrocarburos son cadenas de hidrocarburos de C12-C30 lineales tales como aceite mineral, vaselina, escualeno e isoparafinas; - agua; - agentes colorantes, - opacificantes; - perfumes.

La composición para tratamiento tópico de la piel de la invención, puede ser formulada en todas las formas tópicas utilizadas en el cuidado de la belleza: loción, crema liquida, gel o crema. La composición puede ser envasada en un contenedor adecuado de acuerdo con su viscosidad y para el uso prevista por el usuario. Por ejemplo, una crema liquida o loción puede ser envasada en una botella, en un aplicador de bola, en una cápsula, parche, en un dispositivo para aerosol impulsado por propulsor o un recipiente ajustado con una bomba adecuada para la operación de dedo.

Cuando la composición es una crema, simplemente puede ser almacenada en una botella no deformable o en un contenedor comprimible, tal como un tubo o un frasco con tapa.

Para cada forma particular, se ha recurrido a excipientes adecuados.

Estos excipientes deben tener todas las cualidades comúnmente requeridas. Como ejemplos, se pueden citar: propilenglicol, glicerina, alcohol cetilico, polioles, fosfolipidos en liposomas o no, aceites vegetal, animal, mineral, conservadores, amortiguadores, espesantes, estabilizantes y emulsionantes generalmente usados.

Los expresión "ingredientes cosméticamente aceptables" según la presente invención son productos que son adecuados para su uso en tratamientos cosméticos, por ejemplo aquellos incluidos en la lista INCI elaborada por la Asociación Europea de Perfumería y Aseo Cosmético (COLIPA) y publicada en 96/335/EC "Annex to Commission Decisión of 8 May 1996".

La dosis terapéuticamente efectiva de los compuestos de la fórmula I a ser administrada puede ser estimada inicialmente ya sea en ensayos de cultivo celular o en modelos de animal, generalmente ratones o ratas.

El modelo animal también puede ser utilizado para determinar el intervalo de concentración apropiada y vía de administración. Tal información se puede utilizar para determinar las dosis útiles y vías de administración en los seres humanos.

La dosis efectiva precisa para un sujeto humano dependerá de la severidad de la enfermedad o el estado de la condición, estado general de salud del sujeto, edad, peso y sexo del sujeto, dieta, tiempo y frecuencia de administración, combinación(es) de fármacos, sensibilidades de reacción, y tolerancia/respuesta a la terapia.

Esto implica que las dosis del componente se pueden determinar por el experto en el sector con ensayos pre clínicos y clínicos normales, o con las consideraciones comunes relativas a la formulación de un producto dietético cosmético .

Los siguientes ejemplos ilustrados no son una lista exhaustiva de lo que pretende proteger la presente invención.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1: muestra la cantidad de LDH liberado por el tratamiento del tejido con la composición de la invención con respecto al control.

Figura 2: muestra la expresión génica de HAS-1 en diferentes puntos de tiempo medidos por qRT-PCR.

Figura 3: muestra la expresión génica de HAS-2 en diferentes puntos de tiempo medidos por qRT-PCR.

Figura 4: muestra la expresión génica de COL7A1 en diferentes puntos de tiempo medidos por qRT-PCR.

Figura 5: muestra la expresión génica de COL4A1 en diferentes puntos de tiempo medidos por qRT-PCR.

Figura 6: muestra la expresión génica de SPAMl en diferentes puntos de tiempo medidos por qRT-PCR.

Figura 7: muestra la liberación de HA-carnitina en PBS a pH 7.4.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Conversión de hialuronato de sodio a hialuronato de tetrabutilamonio (TBA-HA/CA) Etapa A: ácido hialurónico 300 mg de hialuronato de sodio (0.75 mmol con referencia a la unidad de disacárido) se disolvieron en 300 mi de agua desionizada y se eluyó a una velocidad de flujo de 1 ml/min a través de una columna de 4 X 40 cm empacada con resina Amberlite IR 120 (Forma H).

Etapa B: hialuronato de tetrabutilamonio 357 ml de hidróxido de tetrabutilamonio (55% solución en H20) luego se agregaron al percolato colectado gue contiene HA de la etapa A para producir una mezcla estequiométrica de HA y TBA que tiene un pH 7. La solución luego se sometió a diálisis a través de un corte de membrana de 3 kDa con 51 de H20 desionizada por 7 horas. Tal proceso se repitió dos veces. Posteriormente, las soluciones se tomaron conjuntamente y se purificaron adicionalmente por medio de ultrafiltración usando un sistema Amicon con un corte de membrana de celulosa de 10 kDa aplicando una presión de nitrógeno de 2.5 bar. La TBA-HA asi obtenida se secó por congelación para obtener el aducto deseado como un sólido blanco tipo tejido.

Fig 1: Espectros de NMR de TBA-HA.

Fig 2: Espectros IR de TBA-HA EJEMPLO 2/1 Etapa_ A: (2-hidroxi-4-imidazol-1-il-4-oxo-butil·)-trimeti1-amonio 273 mg de carbonil diimidazol (1.69 inmoles) se agregaron a una solución de 500 mg de clorhidrato de L-carnitina (2.53 inmoles, 1.5 eq.) en 5 mi de DMSO anhidro. La mezcla de reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante 3 horas a RT, hasta lá terminación de la reacción. Una muestra de la solución se concentró bajo vacio, y se analizó por NMR. 1H NMR (400 MHz, DMSO) d: 8.48 (m, 1H); 7.75 (m, 1H); 7.11 (, 1H); 4.441 (m, 1H); 3.55 (m, 2H); 3.13 (m, 9H); 2.41 (m, 2H).

ETAPA B: La solución de la Etapa A, que contiene 1.69 mmol de carnitina activada, se agregó a una solución agitada de 1.05 g de TBA-HA (1.69 mmol) en 60 mi de DMSO anhidro. La mezcla de reacción se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante cinco dias. La solución luego se vertió en etanol/éter dietilico (600 mi, 50/50). El precipitado resultante se filtró, y se enjuagó con una solución de etanol/éter dietilico 1/1.

ETAPA C: La sal de TBA-HA-CA obtenida de la Etapa B se disolvió en una solución acuosa de 5% NaCl y se sometió a diálisis de filtración de fluido tangencial (TFF) con un corte de 5 a 10 KDa usando inicialmente 5% solución de cloruro de sodio y luego agua pura. La TBA-HA-CA asi obtenida se secó por congelación para obtener el aducto deseado como un sólido blanco tipo tejido.

EJEMPLO 2/2 La solución de la Etapa A del ejemplo 2/1, que contiene 1.69 mmol de carnitina activada, se agregó a una solución agitada de 640 mg de HA (1.69 mmol) en 60 mi de formamida anhidra. La mezcla de reacción se agitó bajo UNA atmósfera de nitrógeno durante cinco dias. La solución luego se vertió en etanol/éter dietilico (11, 50:50). El precipitado resultante se filtró, y se enjuagó con una solución de 1/1 etanol/éter dietilico, y finalmente se desecó bajo vacio previo a ser purificado de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 2/1 Etapa C.

EJEMPLO 2/3 La HA/CA sustituida del ejemplo 2/3 se sintetizó siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 2/2 modificando la relación entre HA y carnitina activada desde 1/1 a 1:10.

EJEMPLO 2/4 La HA/CA sustituida del ejemplo 2/4 se sintetizó siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 2/3 modificando la relación entre HA y carnitina activada desde 1/1 a 1:5.

EJEMPLO 2/5 La HA/CA sustituida del ejemplo 2/5 se sintetizó siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 2/3 modificando la relación entre HA y carnitina activada desde 1/1 a 2/1.

EJEMPLO 2/6 La HA/CA sustituida del ejemplo 2/6 se sintetizó siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo 2/3 modificando en la etapa B la relación entre HA carnitina activada de la etapa A, desde 1/1 a 5/1.

EJEMPLO 3 ETAPA A: (3-clorocarbonil-2-hidroxi- il)-trimetil-amonio Una solución de clorhidrato de L-carnitina (10.5 inmoles) en 800 ml de cloruro de tionilo (11 mmol) se agitó bajo atmósfera de nitrógeno durante 1.5 horas. Luego el cloruro de tionilo se removió bajo presión reducida para conducir a un aceite transparente. El análisis MS de una muestra de este producto crudo disuelto en MeOH demostró la formación de (2-hidroxi-3-metoxicarbonil-propil)-trimetil-amonio resultante de la reacción del cloruro de ácido esperado con MeOH.

ETAPA B: Una solución de 1.08 g de cloruro de (3-clorocarbonil-2-hidroxi-propil)-trimetil-amonio (5 mmol) en DMSO (5 mi) se agregó a una solución de HA (379 mg, 1 mmol con referencia a la unidad de disacárido) en 40 mi de formamida. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora y luego se vertió en EtOH. El precipitado resultante se filtró y se enjuagó con EtOH y Et20 y posteriormente se desecó bajo presión reducida previo a ser purificado de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 2/1 Etapa C.

EJEMPLO 4 Determinación del grado de sustitución de carnitina La determinación del grado de sustitución de carnitina se hizo por medio del análisis de HPLC cuantitativa.

Solventes y reactivos H20: destilada y filtrada a través de filtros Millipore Milli-Q; AcCN: Grado HPLC; KH2P04: grado reactivo; Equipo Matraces volumétricos de vidrio de 1 i y 100 mi; Balanza de precisión de 0.1 mg Baño ultrasónico Sistema HPLC eguipado con: ' Cromatógrafo: Waters Alliance mod. 2690 o eguivalente Sistema inyector capaz de inyectar 10 ml S Detector UV (Waters mod.2487 o equivalente); S Sistema de Datos (Waters "Empower 2" o equivalente); S Columna: Spherisorb SCX 5 mm (250*4.6 mm de 0 interno) .

Condiciones cromatográficas Velocidad de flujo: 0.7 ml/min; Volumen de inyección: 10 ml; Modo de elución: isocrática; Tiempo de elución total: 25 min; Temperatura de la columna:30°C; Longitud de onda de detector: 205 nm.

Fase móvil 50 mM KH2P04/CH3CN 40/60 (v/v). Unos 400 mi de solución de 50 mM KH2P04 se agregaron en 600 mi de AcCN. El pH de la mezcla resultante se ajustó a pH 4.2 por la adición de H3P04 concentrado. Luego, la solución se desgasificó por medio de baño ultrasónico o por helio puro burbujeante.

Preparación de la solución de muestra Una muestra de 10 mg de la HA-CA substituida se disolvió en 1 mi de NaOH 0.1 N. Después de 30 minutos la solución se neutralizó por la adición de 1 mi de HCl 0.1 N.

Preparación de la solución de referencia Una muestra de 10 mg de L-carnitina se disolvió en 100 mi de fase móvil (es decir, 50 mM KH2P04/CH3CN 40/60 (v/v)). Una muestra de 1 mi de esta solución se diluyó adicionalmente a cientos de volúmenes usando la misma fase móvil para alcanzar una concentración de 0.001 mg/ml de L-carnitina.

Procedimiento La columna cromatográfica se acondicionó con la fase móvil durante 60 min.

Se inyectaron 10 ml de la solución testigo. La inyección se repitió dos veces.

S Se inyectaron 10 ml de la solución de referencia. La inyección se repitió dos veces.

Se inyectaron 10 m? de la solución de muestra. La inyección se repitió dos veces.

Método de cálculo Se cuantificó la cantidad de carnitina liberada del polímero en la hidrólisis de NaOH usando la ecuación 1 debajo: MW[HA~CA] Ecuación 1 MW[CA] 100 en donde: SD: grado de la substitución As: área pico de la carnitina en la solución de muestra (media de dos inyecciones) Ar: área pico de la carnitina en la solución de referencia (media de dos inyecciones) Wr: peso de la muestra de referencia (mg) Ws: peso de la muestra (mg) S: % de concentración de la muestra de referencia Tabla 2 EJEMPLO 5 La HA-CA secada por congelación de los ejemplos mencionados anteriormente se suspendió en 1 1 de solución acuosa estéril de amortiguador de fosfato de sodio (0.1 a 30%) y se agitó hasta obtener un gel.

EJEMPLO 5/1 10 g de HA-CA del ejemplo 2/2 (SD = 0.11, PM = 900 KDa) y 0.5% solución acuosa de amortiguador de fosfato de sodio se utilizaron para obtener un gel que contiene 1% de HA-CA.

EJEMPLO 5/2 20 g de HA-CA del ejemplo 2/4 (SD = 0.48, PM = 900 KDa) y 1% solución acuosa estéril de amortiguador de fosfato de sodio se utilizaron para obtener un gel que contiene 2% de HA-CA.

EJEMPLO 6 Liberación de HA-carnitina en PBS a pH 7.4 16.8 mg de polímero del ejemplo 2/2 se disolvieron en 3.4 mi de PBS para obtener una solución con una concentración final de 5 mg/ml. La solución así obtenida se colocó en un baño de agua a 37°C. La liberación se monitoreó por HPLC utilizando el mismo protocolo experimental como el descrito en el ejemplo 4.

Los resultados como se reportan en la Figura 7 indican una extremadamente buena estabilidad a pH fisiológico.

EJEMPLO 7 Con el fin de evaluar los efectos de la composición farmacéutica de la invención, se han realizado pruebas biológicas in vitro sobre el modelo de piel de espesor completo Phenion®. El último es reconocido como un equivalente de piel de espesor total humano. La composición de la invención (150 ml) se inyectó por medio de una jeringa en tres puntos diferentes del tejido (es decir, 50 ml para cada inyección) entre la epidermis y la dermis. El mismo protocolo experimental se replicó con HA no modificado, y son solución salina solamente, mientras tanto en un cuarto experimento realizado en paralelo el tejido se trató tópicamente con la solución salina solamente.

Determinación de la integridad de la membrana La determinación de la integridad de la membrana se determinó midiendo el nivel de lactato deshidrogenasa (LDH) en el medio extracelular. De hecho, la LDH es una enzima citoplasmática estable presente en todas las células. La evidencia de su presencia extracelularmente seria inevitablemente el resultado de daño celular, determinando su rápida liberación (Korzeniewski, C., et ai., J. Immunol . Methods, 1983, 64, 313). La determinación se hizo por medio de un kit colorimétrico comercialmente disponible (es decir, KIT de Detección de Citotoxicidad-LDH, Roche, lote 1253300) que se basa en la detección de la sal de formazan (l 492 nm con referencia a 690 nm). El sobrenadante de cultivo se colectó y se incubó durante 20 minutos con la mezcla de reacción incluida en el kit a temperatura ambiente, en la oscuridad. Un aumento en la cantidad de células dañadas de membrana de plasma o muertas resulta en un aumento de la actividad enzimática de LDH en los medios de cultivo, el aumento está directamente correlacionado con la cantidad de formazan formado. Previamente se ha determinado una curva estándar utilizando 8 concentraciones de LDH: 500 mU/ml, 250, 125, 75, 62, 5, 31, 25, 15, 62, 7 y 8 mU/ml.

Como se muestra en la figura 1, los valores LDH con respecto a cualquier grupo no son estadísticamente diferentes, lo que significa una buena integridad celular en el tratamiento con la composición de la invención, demostrando una buena biocompatibilidad de la composición.

Cambios en el nivel de expresión genica Para evaluar los efectos farmacológicos de la inyección de tejido con la composición de la invención, se realizaron experimentos de PCR en tiempo real considerando 5 diferentes objetivos (es decir, codificación de HAS1, HAS/2, COL4A1, COL7A1, SPAM1 para hialuronato sintasa-1, hialuronato sintasa-2, colágeno tipo IV alfa 1, colágeno tipo VII alfa 1, hialuronidasa respectivamente).

Gen HAS1 La expresión del gen HAS1 no se afectó sustancíalmente después de la inyección de HA-CA hasta el dia 5, mientras tanto la inyección de HA no modificado provocó una fuerte sobreexpresión en 36 horas seguido por una rápida bajo-regulación en el dia 5 (es decir, figura 2). Tal comportamiento demostró que el HA no modificado perdió eficacia en el medio a largo plazo mientras tanto la HA-CA probó promover la síntesis de nuevo HA permitiendo, por lo tanto, un proceso de curación más rápido.

Gen HAS2 La expresión del gen HAS2 se sobre-reguló en 6 h para regresar a un nivel normal después. Se observó una tendencia similar cuando se utilizó el ácido hialurónico no modificado en lugar de HA-CA (es decir, figura 3).

Gen COL7A1 La expresión del gen COL7A1 probó ser altamente mejorada desde el día 5 del experimento que involucra la inyección de HA-CA mientras tanto su nivel permaneció sensiblemente estable con HA no modificado (es decir, figura 4).

Gen COL 4 Al La expresión del gen COL4A1 se sobre-reguló en el punto de tiempo de 6 h para regresar al nivel normal más adelante (es decir, 36 h y 5 días). Fue interesante señalar (es decir, figura 5) que la inyección de ácido hialurónico no modificado provocó una bajo-regulación de C0L4A1 en 5 días en comparación con el grupo de control, mientras tanto una sobre-regulación similar a la que provocó por HA-CA se observó en un punto de tiempo temprano (es decir, 6 h).

SPAM1 La inyección de ácido hialurónico no modificado condujo a una fuerte sobre-regulación del gen SPAM1 en 5 días mientras tanto el efecto de HA-CA fue mucho menos intenso en el mismo punto del tiempo y aún menor que cuando se utilizó la solución salina (es decir, figura 6).

Claims (13)

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes. REIVINDICACIONES

1. Un derivado de ácido hialurónico de la Fórmula Fórmula I caracterizado porque comprende (m + n) unidades de repetición; en donde m y n son números enteros > 0, con 70 < (m + n)< 5000 con m > n; el símbolo // significa que dos unidades consecutivas pueden ser ya sea ambas insustituidas, o ambas sustituidas o solamente una de las dos es sustituida; R es H o una porción alcanoilo que contiene de 2 a 20 átomos de carbono en donde la porción alcanoilo puede ser lineal o ramificada si contiene de 3 a 20 átomos de carbono; X es Cl, Br, Ac, MeS03 o H2P04; A es H, Na, K, o TBA; o cuando X está ausente A está ausente.

2. El derivado de ácido hialurónico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque 200 < (m + n) < 2000

3. El derivado de ácido hialurónico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque presenta un grado de sustitución SD comprendido entre 0.01 y 0.60.

4. Composición, caracterizada porque comprende como un ingrediente activo un compuesto de fórmula I de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, y opcionalmente uno o más diluyentes o excipientes.

5. Composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque es enteralmente o parenteralmente administrable.

6. Composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada para uso oral, tópico, intradérmico, intra-articular, inyección u oftálmico.

7. Composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque está en forma liquida, semiliquida, crema, sólida, en liposomas, o loción.

8. Composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada para ingesta oral, la cual es entéricamente revestida.

9. El derivado de ácido hialurónico de la fórmula I de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado para el uso como un rellenador para inyecciones.

10. El derivado de ácido hialurónico de la fórmula I de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado para el uso como cosmético.

11. El derivado de ácido hialurónico de la fórmula I de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado para el uso como un suplemento alimenticio.

12. El derivado de ácido hialurónico de la fórmula I de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado para el uso como un medicamento.

13. El derivado de ácido hialurónico de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado para el uso en a) reparación de defectos o lesión del tejido en necesidad de ser reconstruido; o b) aumento y fortalecimiento de tejido blando; o c) aumento de una mama hipoplásica; o d) corrección de afonía o disfonía causada por la parálisis de las cuerdas vocales; o e) el tratamiento de reflujo de fluido gástrico; o f) el tratamiento de los esfínteres anales defectuosos; o g) el tratamiento de los trastornos urológicos tal como reflujo vesico-ureteral o incontinencia urinaria; o h) reparación de los defectos de los labios o de los huecos de las mejillas; o i) prevención o tratamiento de la celulitis o arrugas; j) prevención o tratamiento de trastornos de las articulaciones, osteoartritis, fibromialgia, sinovitis, gonartrosis, enfermedad de Crohn, rectocolitis ulcerosa y enfermedades de los ojos.