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MX2013009357A - Composiciones y metodos para la terapia y diagnostico de la influenza. - Google Patents

Composiciones y metodos para la terapia y diagnostico de la influenza.

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MX2013009357A
MX2013009357A MX2013009357A MX2013009357A MX2013009357A MX 2013009357 A MX2013009357 A MX 2013009357A MX 2013009357 A MX2013009357 A MX 2013009357A MX 2013009357 A MX2013009357 A MX 2013009357A MX 2013009357 A MX2013009357 A MX 2013009357A
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MX
Mexico
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seq
tcn
antibody
amino acid
acid sequence
Prior art date
Application number
MX2013009357A
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Inventor
Matthew Moyle
Andres G Grandea
Gordon King
Jennifer Mitcham
Thomas C Cox
Ole Olsen
Phil Hammond
Original Assignee
Theraclone Sciences Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Abstract

La presente invención proporciona composiciones, vacunas, y métodos para el diagnóstico, tratamiento, y prevención de la infección de la influenza usando una combinación de anticuerpos dirigidos contra los polipéptidos de hemaglutinina de influenza y ectodominio de matriz 2.

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA LA TERAPIA Y DIAGNÓSTICO DE LA INFLUENZA SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional USSN 61/442,733, presentada el 14 de febrero de 2011, el contenido de la cual se incorporan en el presente por referencia en su totalidad.
INCORPORACIÓN DE LISTADO DE SECUENCIAS El contenido del archivo de texto llamado "37418-51800lWO_ST25.txt", que fue creado el 6 de enero de 2012 y es de 910 KB de tamaño, se incorporan por referencia en su totalidad.
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere en general a la prevención, el diagnóstico, la terapia y el seguimiento de la infección por influenza. La invención está relacionada más específicamente a composiciones que contienen una combinación de anticuerpos humanos levantado contra cualquiera de la hemaglutinina de la influenza o proteína de la matriz 2. Tales composiciones son útiles en composiciones farmacéuticas para la prevención y tratamiento de la influenza, y para el diagnóstico y seguimiento de la infección por influenza.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la influenza infecta a un 5-20% de la población y los resultados de 30,000-50,000 muertes cada año en los E.U. la enfermedad causada por infecciones de influenza A virales se caracteriza por su carácter cíclico.
La deriva antigenica y cambio permiten diferentes cepas que surjan cada año. Sumado a ello, la amenaza de cepas altamente patógenas que entran en la población general ha insistido en la necesidad de nuevas terapias para las infecciones de gripe.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona composiciones de diagnóstico, profilácticos y terapéuticos, incluyendo un anticuerpo humano dirigido contra la proteína hemaglutinina de la influenza y un anticuerpo monoclonal humano dirigido contra la proteína M2 de la influenza. Por otra parte, la invención proporciona composiciones de diagnóstico, profilácticos y terapéuticos, incluyendo un anticuerpo humano aislado generado contra un epítopo de la proteína hemaglutinina de la influenza y un anticuerpo monoclonal humano aislado generado contra un epítopo de la proteína M2 de la influenza. Además, estas composiciones son composiciones farmacéuticas que incluyen un portador farmacéutico. Estas composiciones responden a una necesidad largamente sentida en la técnica de composiciones farmacéuticas que tanto neutraliza fuertemente infección por el virus influenza y reconoce las regiones constantes dentro de las proteínas comunes a todas las cepas de la influenza .
En concreto, la invención proporciona una composición que incluye: (a) un anticuerpo humano aislado que se une específicamente a un epítopo de la (HA) glicoproteína de un virus de influenza hemaglutinina, y (b) un anticuerpo monoclonal humano aislado que se une específicamente a un epítopo en el dominio extracelular de la matriz 2 ectodominio (M2e) polipéptido de un virus de la influenza. En ciertas modalidades de esta composición, el anticuerpo monoclonal humano aislado que se une específicamente a un epítopo del polipéptido M2e es TCN-032 (8110), 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23( 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11, o 3242_P05. Por otra parte, el anticuerpo humano aislado que se une específicamente a un epítopo de la glicoproteína HA es opcionalmente TCN-522 (3212_I12), TCN- 521 (3280_D18), TCN-523 (5248_A17), TCN-563 (5237. _B21) , TCN- 526 (5084. _C17) , TCN- 527 (5086. _C06) , TCN -528 (5087. _P17) , TCN-529 (5297. _H01) , TCN- 530 (5248. _H10) , TCN -531 (5091. _H13) , TCN-532 (5262. _H18) , TCN- 533 (5256. _A17) , TCN -534 (5249. _B02) , TCN-535 (5246. _P19) , TCN- 536 (5095. _N01) , TCN -537 (3194. _D21) , TCN-538 (3206. _017) , TCN-539 (5056. _A08) , TCN -540 (5060. _F05) , TCN-541 (5062. _M11) , TCN- 542 (5079. _A16) TCN -543 (5081 _G23) , TCN-544 (5082_ _A19) , TCN- 545 (5082. _I15) TCN -546 (5089. _L08) , TCN-547 (5092. _F11) , TCN- 548 (5092. _P01) TCN -549 (5092. _P04) , TCN-550 (5096. _F06) , TCN- 551 (5243. _D01) TCN -552 (5249. _I23) , TCN-553 (5261. _C18) , TCN- 554 (5277. _M05) TCN -555 (5246. _L16) , TCN-556 (5089_ 12) , TCN -557 (5081_A04) , NTP 558 (5248_Hl0b), TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10), TCN-504 (3251_K17), SC06-141, SC06-255, SC06-257, SC06-260, SC06-261, SC06-262, SC06-268, SC06-272, SC06-296, SC06-301, SC06-307, SC06-310, SC06-314, SC06-323, SC06-325, SC06-327, SC06-328, SC06-329, SC06-331, SC06-332, SC06-334, SC06-336, SC06-339, SC06-342, SC06-343, SC06-344, CR6141, CR6255, CR6257, CR6260, CR6261, CR6262, CR6268, CR6272, CR6296, CR6301, CR6307, CR6310, CR6314, CR6323, CR6325, CR6327, CR6328, CR6329, CR6331, CR6332, CR6334, CR6336, CR6339, CR6342, CR5343, CR6344, 2A, D7 , D8 , FIO, G17, ?40, ?ßß, D80, ?88, ?90, o ?98.
El epítopo de la glicoproteína HA es opcionalmente GVTNKVNSIIDK (SEQ ID NO: 198) , GVTNKVNSIINK (SEQ ID NO: 283), GVTNKENSIIDK (SEQ ID NO: 202), GVTNKVNRIIDK (SEQ ID NO: 201), GITNKVNSVIEK (SEQ ID NO: 281), GITNKENSVIEK ( SEQ ID NO: 257), GITNKVNSIIDK (SEQ ID NO: 225), y KITSKVNNIVDK (SEQ ID NO: 216). La hemaglutinina (HA) de la influenza glicoproteína incluye una subunidad HAl y HA2. Ejemplos de epítopos de la glicoproteína HA incluyen la subunidad HAl, HA2 subunidad, o ambas las subunidades HAl y HA2. Alternativamente, o además, el epítopo del polipéptido M2e es un epítopo discontinuo. Por ejemplo; el epítopo del polipéptido M2e incluye el aminoácido en las posiciones 2, 5, y 6 de MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD ( SEQ ID NO: .1) O el aminoácido en las posiciones 2, 5, y 6 de SLLTEV (SEQ ID NO: 42).
La invención proporciona además una composición que incluye: (a) un anticuerpo anti-HA humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que incluye una región variable de cadena pesada (VH) y un dominio variable de cadena ligera (VL). de dominio, caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL contienen cada uno tres regiones determinantes de complementariedad 1 a 3 (CDRl-3), y en el que cada CDR incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRl de VH: SEQ ID NOS: 247, 571, 586, 597, 603, 609, 615, 627, 633, 637, 643, 649, 658, 664, 670, 303, 251, 242, o 222; CDR2 de VH : SEQ ID NO: 248, 572, 587, 592, 598, 604, 610, 616, 628, 634, 638, 644, 650, 655, 659, 665, 671, 306, 249, 307, o 221; CDR3 de VH: SEQ ID NO: 568, 573, 588, 593, 599, 605, 611, 617, 629, 635, 639, 645, 651, 656, 660, 666, 672, 725, 246, 290, o 220; VL CDRl: SEQ ID NO: 569, 574, 577, 580, 583, 589, 594, 612, 618, 621, 624, 640, 646, 652, 661, 667, 285, 289, 245, 224, o 219; CDR2 de VL: SEQ ID NO: 570, 575, 578, 581, 584, 590, 595, 601, 607, 613, 619, 622, 625, 631, 653, 662, 668, 305, 223, o 231; CDR3 de VL: SEQ ID NO: 289, 576, 579, 582, 585, 591, 596, 602, 608, 614, 620, 623, 626, 632, 636, 642, 648, 654, 657, 663, 669, 308, 250, 227, o 280, y (b) un aislado de lucha contra la matriz 2 ectodominio (M2e) fragmento de anticuerpo, o de unión a antígeno de los mismos, incluyendo una variable de cadena pesada (VH) de dominio y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL cada uno contiene tres regiones determinantes de complementariedad 1 a 3 (CDRl-3), y en el que cada CDR incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRl de VH: SEQ ID NOS: 72, 103, 179, 187, 203, 211, 228, 252, 260, 268, 284, 293, o 301; VH CDR2 : SEQ ID NOS: 74, 105, 180, 188, 204, 212, 229, 237, 253, 261, 269, 285, o 294; VH CDR3 de SEQ ID NO: 76, 107, 181, 189, 197, 205, 213, 230,' 238, 254, 262, 270, 286, o 295; VL CDR1: SEQ ID NOs : 59, 92, 184, 192, 208, 192, 233, 241, 265, o 273; VL CDR2 : SEQ ID NOS: 61, 94, 185, 193, 209, 217, 226, 234, 258, 274, o 282, y CDR3 de VL : SEQ ID NO: 63, 96, 186, 194, 210, 218, 243, 259, 267, 275, 291, o 300.
Como alternativa, o además, la invención proporciona una composición que incluye: (a) un anticuerpo anti-HA humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que incluye una región variable de cadena pesada (VH) y un dominio variable de cadena ligera (VL) de dominio, caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL cada uno contiene tres regiones determinantes de complementariedad 1 a 3 (CDRl-3), y en el que cada CDR incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRl de VH: SEQ ID NOS: 247, 571, 586, 597, 603, 609, 615, 627, 633, 637, 643, 649, 658, 664, 670, 303, 251, 242, o 222; CDR2 de VH: SEQ ID NO: 248, 572, 587, 592, 598, 604, 610, 616, 628, 634, 638, 644, 650, 655, 659, 665, 671, 306, 249, 307, o 221; CDR3 de VH : SEQ ID NO: 568, 573, 588, 593, 599, 605, 611, 617, 629, 635, 639, 645, 651, 656, 660, 666, 672, 725, 246, 290, o 220; VL CDRl: SEQ ID NO: 569, 574, 577, 580, 583, 589, 594, 612, 618, 621, 624, 640, 646, 652, 661, 667, 285, 289, 245, 224, O 219; CDR2 de VL : SEQ ID NO: 570, 575, 578, 581, 584, 590, 595, 601, 607, 613, 619, 622, 625, 631, 653, 662, 668, 305, 223, o 231; CDR3 de VL: SEQ ID NO: 289, 576, 579, 582, 585, 591, 596, 602, 608, 614, 620, 623, 626, 632, 636, 642, 648, 654, 657, 663, 669, 308, 250, 227, o 2£ 50, y (b) un anti-matriz aislado 2 ectodominio (M2e) anticuerpo, o fragmento de unión al antígeno de los mismos, incluyendo una variable de cadena pesada (VH) de dominio y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL cada uno contiene tres regiones determinantes de complementariedad del 1 al 3 (CDRl-3), y en el que cada CDR incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: CDRl de VH: SEQ ID NOS: 109, 112, 182, 190, 206, 214, 239, 255, 263, 271, 287, 296, o 304; CDR2 de VH: SEQ ID NO: 110, 113, 183, 191, 207, 215, 232, 240, 256, 264, 272, 288, o 297; VH CDR3 de SEQ ID NO: 76, 107, 181, 189, 197, 205, 213, 230, 238, 254, 262, 270, 286, o 295; VL CDRl: SEQ ID NOs : 59, 92, 184, 192, 208, 192, 233, 241, 265, o 273; VL CDR2 : SEQ ID NOs : 61, 94, 185, 193, 209, 217, 226, 234, 258, 274, o 282, y CDR3 de VL: SEQ ID NOS: 63, 96, 186, 194, 210, 218, 243, 259, 267, 275, 291, o 300.
La invención proporciona una composición que incluye: (a) un anticuerpo anti-HA humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que incluye una región variable de cadena pesada (VH) de dominio, caracterizado porque el dominio VH incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO 309, 313, 317, 321, 325, 329, 333, 337, 341, 345, 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 397, 401, 405, 409, 199, 417, 423, 429, 435, 441, 447, 453, 459, 465, 471, 477, 483, 489, 495, 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 550, 556, o 562, y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VL incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO 310, 314, 318, 322, 326, 330, 334, 338, 342, 346, 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 398, 402, 406, 410, 414, 420, 426, 432, 438, 444, 450, 456, 462, 468, 474, 480, 486, 492, 498, 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 547, 553, 559, o 565, y (b) un aislado de lucha contra la matriz 2 ectodominio (M2e) anticuerpo, o fragmento de unión al antígeno de los mismos, incluyendo una variable de cadena pesada (VH) de dominio, caracterizado porque el dominio VH incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO 44, 277, 276, 50, 236, 235, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, o 176, y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VL incluye las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO 46, 292, 52, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, o 178.
Además, la invención proporciona una composición de vacuna multivalente que incluye cualquiera de la compositionsdescribed en el presente que contiene un anticuerpo anti-HA humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo y un aislado de lucha contra la matriz 2 " ectodominio (M2e) de anticuerpos, o antígeno-fragmento de unión del mismo. Alternativamente, la vacuna multivalente incluye anticuerpos que se unen a los epítopos a los que los anticuerpos de la invención se unen. Ejemplos de anticuerpos de la invención incluyen, pero no se limitan a, TCN-032 (8110), 21B15 , TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_ D19, 3362_ BU , 3242_ _P05, TCN-522 (3212_ .112) , TCN-521 (3280 _D18) , TCN -523 (5248. _A1 ) TCN -563 (5237. _B21) , TCN-526 (5084. _C17) , TCN -527 (5086. _C06) TCN -528 (5087. _P17) , TCN-529 (5297_ _H01) , TCN -530 (5248. _H10) TCN -531 (5091_ _H13) , TCN-532 (5262. _H18) , TCN -533 (5256. _A17) TCN -534 (5249. _B02) , TCN-535 (5246. _P19) , TCN -536 (5095. _N01 ) TCN -537 (3194. _D21) , TCN-538 (3206. _017) , TCN -539 (5056. _A08) TCN -540 (5060. _F05) , TCN- 541 (5062. _ 11) , TCN -542 (5079. _A16) TCN -543 (5081. _G23) , TCN- 544 (5082. _A19) , TCN -545 (5082. _I15) TCN -546 (5089. _L08) , TCN- 547 (5092. _F11) , TCN -548 (5092. _P01) TCN -549 (5092. _P04) , TCN-550 (5096. _F06) , TCN -551 (5243. _D01) TCN -552 (5249. _I23) , TCN- 553 (5261 _C18 ) , TCN--554 (5277. _M05) TCN -555 (5246. _L16) , TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_?04), ??? 558 (5248_H10b), TCN- 559 (5097 _G08) , TCN-560 (5084_P10), TCN-504 (3251_K17), SC06 -141, SC06-255, SC06-257, SC06-260, SC06-261, SC06-262, SC06 -268, SC06-272, SC06-296, SC06-301, SC06-307, SC06-310, SC06 -314, SC06- 323, SC05-325, SC06-327, SC06-328, SC06-329, SC06 -331, SC06- 332, SC06-334, SC06-336, SC06-339, SC06-342, SC06 -343, SC06- 344, CR6141, CR6255, CR6257, CR6260, CR6261, CR6262, CR6268, CR6272, CR6296, CR6301, CR6307, CR6310, CR6314, CR6323, CR6325, CR6327, CR6328, CR6329, CR6331, CR6332, CR6334, CR6336, CR6339, CR6342, CR6343, CR6344, D7, D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90 y H98. Por ejemplo, la vacuna multivalente puede incluir uno o más de los siguientes epitopos: GVTNKV SIIDK (SEQ ID NO: 198), GVTNKVNSIINK (SEQ ID NO: 283), GVTNKENSIIDK (SEQ ID NO: 202), GVTNKVNRIIDK ( SEQ ID NO: 201), GITNKVNSVIEK (SEQ ID NO: 281), GITNKENSVIEK (SEQ ID NO: 257), GITNKVNSIIDK (SEQ ID NO: 225), KITSKVNNIVDK (SEQ ID NO: 216), MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD (SEQ ID NO: 1), y MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD (SEQ ID NO: 1) proporcionada en su conformación nativa.
La vacuna multivalente incluye también una composición que incluye: (a) un anticuerpo humano que se une específicamente a un epítopo de la (HA) glicoproteína de un virus de influenza hemaglutinina, y (b) un anticuerpo monoclonal humano que se une específicamente a un epítopo en el dominio extracelular de la matriz 2 ectodominio (M2e) polipeptido de un virus de la influenza.
La invención proporciona una composición farmacéutica que incluye cualquiera de las composiciones descritas en el presente. Por otra parte, la composición farmacéutica incluye un portador farmacéutico.
La invención proporciona un método para estimular una respuesta inmune en un sujeto, incluyendo la administración al sujeto la composición farmacéutica descrita en el presente. La composición farmacéutica puede administrarse antes de o después de la exposición del sujeto a un virus de la influenza.
La invención también proporciona un método para el tratamiento de una infección por el virus de la influenza en un sujeto en necesidad del mismo, incluyendo la administración al sujeto la composición farmacéutica descrita en el presente. La sujeción puede haber estado expuesto al virus de la influenza. Alternativamente, o además, el sujeto no ha sido diagnosticado con una infección de la influenza. La composición farmacéutica puede administrarse antes de o después de la exposición del sujeto a un virus de la influenza. Preferiblemente, la composición farmacéutica se administra a una dosis suficiente para promover el aclaramiento viral o eliminar las células infectadas de influenza.
La invención proporciona además un método para la prevención de una infección por el virus de la influenza en un sujeto en necesidad del mismo, incluyendo la administración al sujeto de una composición de vacuna descrita en el presente, antes de la exposición del sujeto a un virus de la influenza. En ciertas modalidades de este método, el sujeto está en riesgo de contraer una infección de la influenza. La composición farmacéutica puede administrarse antes de o después de la exposición del sujeto a un virus de la influenza. Preferiblemente, la composición farmacéutica se administra a una dosis suficiente para promover el aclaramiento viral o eliminar las células infectadas de influenza.
Los métodos de tratamiento y prevención proporcionadas por la invención incluyen además la administración de un fármaco antiviral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión del virus. Fármacos anti-virales ejemplares incluyen, pero no se limitan a, un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico, o un inhibidor de los canales de iones M2. En ciertos aspectos de estos métodos, el inhibidor de los canales de iones M2 es amantadina o rimantadina. En otros aspectos de estos métodos, el inhibidor de la neuraminidasa es zanamivir o oseltamivir fosfato. El medicamento antiviral puede administrarse antes de o después de la exposición del sujeto a un virus de la influenza .
Los métodos de tratamiento y prevención proporcionadas por la invención incluyen además la administración de un segundo anticuerpo anti-influenza Un anticuerpo. El segundo anticuerpo es opcionalmente un anticuerpo descrito en el presente. El segundo anticuerpo puede administrarse antes de o después de la exposición del sujeto a un virus de la influenza.
La invención proporciona un método para determinar la presencia de una infección por virus de la influenza en un sujeto, que incluye las etapas de: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida del sujeto con uno cualquiera de los anticuerpos o composiciones farmacéuticas descritas en el presente; (b) detectar una cantidad del anticuerpo que se une a la muestra biológica, y (c) comparar la cantidad de anticuerpo que se une a la muestra biológica a un valor de control, y partir de ello determinar la presencia del virus de la influenza en el tema. Opcionalmente, el valor de control se determina poniendo en contacto una muestra de control obtenida del sujeto con uno cualquiera de los anticuerpos o composiciones farmacéuticas descritas en el presente y la detección de una cantidad del anticuerpo que se une a la muestra de control.
La invención también proporciona un equipo de diagnóstico incluyendo uno cualquiera de los anticuerpos, composiciones, o composiciones farmacéuticas descritas en el presente.
La invención proporciona además un equipo profiláctico incluyendo una composición de vacuna se describe en el presente. Preferiblemente, la vacuna es una vacuna multivalente . El término " vacuna multivalente " describe una sola vacuna que provoca una respuesta inmune ya sea a más de un agente infeccioso, por ejemplo, la glicoproteína HA de la influenza y la influenza M2e polipéptido, o para varios epítopos diferentes de una molécula, por ejemplo, HA epítopos se muestra en la SEQ ID NO 198, 283, 202, 201, 281, 257, 225, y 216. Alternativamente, o además, la vacuna multivalente término está destinado a describir la administración de una combinación de anticuerpos humanos levantado contra más de un agente infeccioso, por ejemplo, la glicoproteína HA de influenza y la influenza M2e polipéptido.
Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de y son abarcadas por la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la unión de tres anticuerpos de la presente invención y el control hul4C2 anticuerpo a las células HEK-293 transfectadas con un constructo de expresión de M2 o vector de control, en presencia o ausencia de péptido M2 libre.
Las figuras 2A y B son gráficos que muestran el anticuerpo monoclonal humano de unión a la influenza A/Puerto Rico/8/32.
La figura 3A es un gráfico que muestra secuencias de aminoácidos de los dominios extracelulares de variantes M2 (SEQ ID NOS 1-3, 679 y 5-40, respectivamente, en orden de aparición) .
Las figuras 3B y C son gráficos de barras que muestran la unión del anticuerpo anti-influenza monoclonal humano de unión a las variantes 2 mostrados en la Figura 3A.
Las figuras 4A y B son gráficos de barras que muestran la unión del anticuerpo anti-influenza monoclonal humano de unión a péptidos M2 sometidas a mutagénesis de barrido de alanina.
La figura 5 es una serie de gráficos de barras que muestran la unión de los MAb 8il0 y 23K12 a la representación de secuencia de la proteína M2 A/HK/483/1997 cepa de influenza que se expresa de forma estable en la línea celular CHO DG44.
La figura 6A es un diagrama que muestra la unión reactividad cruzada de los anticuerpos anti-M2 a los péptidos M2 variantes (SEQ ID NO 680 a 704, respectivamente, en orden de aparición) .
La figura 6B es un gráfico que muestra actividad de unión de los anticuerpos a los péptidos M2 truncadas (SEQ ID NOS 680, 705 a 724 y 19, respectivamente, en orden de aparición) .
La figura 7 es un gráfico que muestra la supervivencia de los ratones infectados de influenza tratados con anticuerpos monoclonales anti-influenza humana .
La figura 8 es una ilustración que muestra los anticuerpos anti-M2 se unen a una región altamente conservada en el extremo N-terminal de M2e (SEQ ID NO: 19) .
La figura 9 es un gráfico que muestra los clones rHMAb anti-M2 a partir del sobrenadante crudo unido a la influenza en ELISA, mientras que el control anti-M2e mAb 14C2 no se unen fácilmente del virus.
La figura 10 es una serie de fotografías que muestran rHMAbs anti-M2 unidos a las células infectadas con la influenza. Células MDCK fueron o no fueron infectadas con influenza A/PR/8/32 y Ab unión de sobrenadante crudo se ensayó 24 horas más tarde. Los datos fueron recogidos desde el escáner de placa FMAT.
La figura 11 es un gráfico que muestra los clones rHMAb anti-M2 a partir del sobrenadante crudo unido a las células transfectadas con la influenza subtipos H3N2 , HK483, y VN1203 proteínas M2. Los plásmidos que codifican los ADNc de longitud completa M2 correspondientes a las cepas de la influenza H3N2 , HK483, y V 1203, así como un plásmido de control de maqueta, se transfectaron transitoriamente en células 293. El 14C2, 8il0, 23K12, y 21B15 mAbs se ensayaron para la unión a los transfectantes , y se detectaron con un anticuerpo secundario anti-IgG humana conjugado con AF647. Se muestran la intensidad de fluorescencia media del mAb específico consolidado tras el análisis FACS.
Las figuras 12A-B son secuencias de aminoácidos de las regiones variables de mAb anti-M2e. Regiones Framework 4.1 (FR 4.1) y la complementariedad -> regiones determinantes 1-3 (1-3 CDR) de VH y Vk se muestran. FR, CDR, y los nombres de genes se definen mediante la nomenclatura en la base de datos IMGT (IMGT®, el Sistema Internacional de Información ImMunoGeneTics® http://www.imgt.org). Los recuadros grises indican identidad con la secuencia de línea germinal que se muestra en las cajas de color azul claro, guiones denotan huecos, y cajas blancas son mutaciones de reemplazo de aminoácidos de la línea germinal.
La figura 13 es un gráfico que representa los resultados de un análisis de competición de unión de un panel de mAb anti-M2e con TCN-032 Fab. Los mAb anti-M2e indicados se utilizaron para enlazar con el transíectante estable de CHO que expresa M2 de A/Hong Kong/483/97 que habían sido tratados previamente con o sin 10 mg/ml TCN-032 fragmento Fab. El mAb anti-M2e unido a la superficie celular se detectó con IgG de cabra anti-Fc HuIgG -> AlexaFluor488 FACS y se analizaron por citometría de flujo. Los resultados se derivan de un experimento.
La figura 14A es un gráfico que representa la capacidad de los mAb anti-M2e TCN-032 y TCN-031 para unir las partículas de virus y células infectadas por virus pero no péptido sintético derivado de M2e. El virus de la influenza purificada (A/Puerto Rico/8/34) se aplicó a 10 mg/ml en pozos de ELISA y la unión de anticuerpos monoclonales anti-M2e TCN-031, TCN-032, chl4C2 y el HCMV mAbs 2N9 se evaluó utilizando HRP-de cabra marcado con Fe anti-humano. Los resultados mostrados son representativos de 3 experimentos.
La figura 14B es un gráfico que representa la capacidad de los mAb anti-M2e TCN-032 y TCN-031 para unir las partículas de virus y células infectadas por virus pero no péptido sintético derivado de M2e. Péptido sintético 23mer de M2 derivado de A/Fort Worth/1/50 se aplicó a 1 mg/ml en pozos de ELISA y la unión de mAb TCN-031, TCN-032, chl4C2 y 2N9 se evaluaron como en el panel a. Los resultados mostrados son representativos de 3 experimentos .
La figura 14C es un gráfico que representa la capacidad de los mAb anti-M2e TCN-032 y TCN-031 para unir las partículas de virus y células infectadas por virus pero no péptido sintético derivado de M2e. MDCK células fueron infectadas con A/Puerto Rico/8/34 (PR8) y posteriormente se tiñeron con anticuerpos monoclonales TCN-031, TCN-032, chl4C2 y el HCMV mAb 5J12. La unión de anticuerpos se detectó utilizando Alexafluor-647 conjugado de cabra anti-IgG humana H y L del anticuerpo y se cuantificó por citometría de flujo. Los resultados mostrados son representativos de 3 experimentos.
La figura 14D es una serie de fotografías que muestra células HEK 293 transíectadas de forma estable con el ectodominio de M2 de A/Fort Worth/1/50 (D20) fueron teñidas con transfección transitoria sobrenadante que contenía mAb TCN-031, TCN-032, o la chl4C2 de control y se analizaron por FMAT para la unión a M2 en la presencia o ausencia de 5 ug/ml de péptido M2e. Células transfectadas de manera simulada son células 293 transfectadas de forma estable con el vector solo. Los resultados mostrados son representativos de un experimento.
Las figuras 15A-D son gráficos que representan la eficacia terapéutica de mAb anti-M2 TCN-031 y TCN-032 en ratones. Los ratones (n = 10) fueron infectados por inoculación intranasal con 5 x DL50 A/Vietnam/1203 /04 (H5N1) (paneles AB) o (n = 5) con 5 x DL50 A/Puerto Rico 8/34 (HlNl) (paneles de CD) , seguido por 3 intraperitoneal (ip) con inyecciones de mAb a las 24, 72, y 120 horas después de la infección (un total de 3 inyecciones de mAb por ratón) y se pesaron diariamente durante 14 días. Porcentaje de supervivencia se muestra en A y C, mientras que el porcentaje de cambio de peso de los ratones se muestra en B y D. Los resultados que se muestran para el estudio de tratamiento de los ratones infectados con A/Vietnam/1203/04 (H5N1) son representativos de 2 experimentos .
La figura 16 es una serie de gráficos que representan los títulos virales en el pulmón, el hígado y el cerebro de los ratones tratados con anti-M2e mAb TCN-031 y TCN-032 después del desafío con el virus H5N1 A/Vietnam/1203/04. Balb/c ratones (n = 19) fueron tratados por vía intraperitoneal inyección de una dosis yg/200 1 400 de TCN-031, TCN-032, el control humano mAb 2N9 , control mAb quimérico chl4C2, PBS, o se deja sin tratar. Los títulos virales de tejido se determinaron a partir de 3 ratones por grupo a las 3 y 6 días después de la infección en los pulmones (como un indicador de la replicación local) y en el hígado y el cerebro (como un indicador de la propagación sistémica que es característico de la infección por virus H5N1) .
La figura 17 es un gráfico que representa la capacidad de TCN-031 y TCN-032 puede potenciar la citolisis de las células NK. Células MDC se infectaron con A/Islas Salomón /3/2006 (H1N1) del virus, y se trataron con mAb TCN-031, TCN-032, o la subclase-emparejado control negativo mAb 2N9. Las células fueron retados con células NK humanas purificadas, y la lactato deshidrogenasa liberada como resultado de la lisis celular se midió a través de absorbancia de la luz. Los resultados son representativos de dos experimentos independientes con dos donantes humanos normales diferentes.
La figura 18 es un gráfico que representa la citolisis dependiente del complemento (CDC) de células M2-que expresan unidos con mAb anti-M2. El transíectante estable que expresa M2 de A/Hong Kong/483/97 y un control simulacro fueron tratados con los mAb indicados y, posteriormente, desafió con complemento humano. Las células lisadas se visualizaron por tinción con yoduro de propidio seguido por análisis FACS . Los datos son representativos de dos experimentos .
Las figuras 19A-C son gráficos que representan la unión de mAb anti-M2e TCN-031 y TCN-032 a mutantes M2 indica el epítopo se encuentra en el N-terminal altamente conservado de M2e. Los mutantes con alanina sustituida en cada posición del ectodominio M2 de A/Fort Worth/1 /50 (D20) (A) o cuarenta mutantes M2 de tipo salvaje como A/Vietnam/1203/04 (VN) y A/Hong Kong/483/97 (HK) (B) fueron transfectadas transitoriamente en células 293. La identidad de cada mutante M2 de tipo salvaje se muestra en la Tabla 6. Las células transfectadas se tiñeron con mAbs TCN-031, TCN-032, o el control chl4C2 y se analizaron por FACS para la unión a M2 a las 24 horas después de la transfección. mAb TCN-031 y TCN-032 no se unen las variantes con sustituciones de aminoácidos en las posiciones 1, 4, o 5 de M2e. (C) El epítopo deducida para TCN-031 y TCN-032 se produce en una región altamente conservada de M2e y es distinta de la encontrada para chl4C2. Los resultados muestran para (A) y (B) son representativos de 3 experimentos .
La figura 20 es un gráfico que representa los mAb TCN-031 y TCN-032 reconocen la misma región en M2e. El transfectante CHO que expresan establemente M2 A/Hong Kong/483/97 como manchado con 10 mg/ml TCN-031, TCN-032, o 2N9, seguida de la detección con Alexafluor647 marcado TCN-031 (TCN-031AF647) o TCN-032 (TCN-032AF647 ) y análisis por citometría de flujo. Los resultados son representativos de tres experimentos .
La figura 21 es un gráfico que representa TCN-032 células de vinculación que han sido infectadas con el virus HlNl A/California/4/09 contra M2e mAbs TCN-031 y. MDCK células fueron infectadas con Influenza A HlNl A/Memphis/14/96 cepa HlNl A/California/4/09 o simulacros de infectados. Veinte cuatro células después de la infección horas se tiñeron con mAbs TCN-031, TCN-032, o el control chl4C2 y se analizaron por FACS para la unión a M2. Los resultados mostrados son de un experimento.
DESCRIPCIÓN DETALLADA Los virus de influenza se componen de tres tipos, A, B y C. La influenza A virus infectar una gran variedad de aves y mamíferos, incluidos los seres humanos, caballos, mamíferos marinos, cerdos, hurones y aves de corral. En la mayoría de los animales de la influenza A virus causan infecciones localizadas leves de las vías respiratorias e intestinales. Sin embargo, la altamente patógena influenza cepas A H5N1, tales como las que existen que causan infecciones sistémicas en las aves de corral en el que la mortalidad puede alcanzar el 100%. Los animales infectados con la influenza A menudo actúan como un depósito para los virus de la influenza y ciertos subtipos se han mostrado para cruzar la barrera de especies a los humanos.
Los virus de influenza A se clasifican en subtipos en función de las variaciones alélicas en regiones antigénicas de dos genes que codifican las glicoproteínas de superficie, es decir, la hemaglutinina (HA) y la neuraminidasa (NA) , que son necesarios para la unión del virus y la liberación celular. Otras proteínas virales principales incluyen la nucleoproteína, la proteína estructural de la nucleocápsida, proteínas de la membrana (MI y M2), polimerasas (PA, PB y PB2 ) y proteínas no estructurales (NS1 y NS2). Actualmente, dieciséis subtipos de HA (H1-H16) y nueve de NA (N1-N9) variantes antigénicas son conocidos en la influenza A virus. Anteriormente, sólo tres subtipos han sido conocidos a circular en los seres humanos (HlNl, H1N2 , y H3N2 ) .
Sin embargo, en los últimos años, la altamente patógena de subtipo H5N1 de la influenza aviar se ha informado de cruzar la barrera de las especies e infectar a los seres humanos como se documenta en Hong Kong en 1997 y 2003, llevando a la muerte de varios pacientes. En los seres humanos, el virus de la influenza aviar infecta las células de las vías respiratorias, así como el tracto intestinal, el hígado, el bazo, los ríñones y otros órganos. Los síntomas de la infección de la influenza aviar incluyen fiebre, dificultades respiratorias, incluida la falta de aire y tos, linfopenia, diarrea y dificultades que regulan los niveles de azúcar en la sangre. A diferencia de la influenza estacional, el grupo con mayor riesgo son los adultos sanos, que constituyen el grueso de la población. Debido a la alta patogenicidad de ciertos subtipos de la influenza aviar, en particular H5N1, y su capacidad demostrada para cruzar a infectar a los seres humanos, hay un riesgo para la salud pública y económica significativa asociada con estas cepas virales, incluyendo una epidemia real y amenaza de pandemia. La magnitud de la amenaza que se ilustra por la pandemia de influenza de 1918 que mató a más de 50 millones de personas.
En la actualidad,- no hay vacunas eficaces contra la infección por virus H5N1 están disponibles, por lo inmunoterapia pasiva con inmunoglobulinas puede ser una estrategia alternativa. El uso de la inmunización pasiva durante la pandemia de 1918, al parecer reduce a la mitad la tasa de mortalidad. En vista de su beneficio terapéutico en los seres humanos, no es por lo tanto una necesidad de anticuerpos, preferiblemente humana anticuerpos, capaces de neutralizar la infección por influenza, incluyendo H5N1.
La invención proporciona composiciones que incluyen anticuerpos humanos producidos contra dos proteínas de la influenza, la hemaglutinina (HA) y la matriz 2 ectodominio (M2e) , y muestra que estas composiciones pueden ser utilizadas en medicina, en particular para el diagnóstico, prevención y tratamiento de infecciones de influenza, incluyendo Anticuerpos HuM2e La presente invención proporciona anticuerpos monoclonales completamente humanos dirigidos espec ficamente contra M2e. Opcionalmente, el anticuerpo se aisla formar una célula B de un donante humano. Anticuerpos monoclonales ejemplares incluyen TCN-032 (8110) , 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11, y 3242_P05. Descrito en el presente documento. Alternativamente, el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo que se une al mismo epítopo que TCN-032 (8110), 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248„P18, 3253„P10, 3260_D19, 3362_B11, y 3242_P05. Los anticuerpos que se refiere, respectivamente, a la presente invención son anticuerpos huM2e. El anticuerpo huM2e tiene una o más de las siguientes características: a) se une a un epítopo en el dominio extracelular de la matriz 2 ectodominio (M2e) polipéptido de un virus de la influenza; b) se une a la influenza A las células infectadas, o c) se une al virus de la influenza A.
El epítopo que el anticuerpo se une a huM2e es un epítopo no lineal de un polipéptido M2. Preferiblemente, el ep topo incluye la región amino terminal del polipéptido M2e. Más preferiblemente, el epítopo incluye total o parcialmente la secuencia SLLTEV de aminoácidos (SEQ ID NO: 42). Lo más preferiblemente, el epítopo incluye el aminoácido en la posición 2, 5 y 6 del polipéptido M2e cuando se numeran de acuerdo con la SEQ ID NO: 1. El aminoácido en la posición 2 es una serina; en la posición 5 es una treonina, y en la posición 6 es un ácido glutámico.
Un anticuerpo huM2e contiene una variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 44, 277, 276, 50, 236, 235, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, o 176 y una variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 46, 52, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, 174, o 178. Preferiblemente, las tres CDR de cadena pesada incluyen una secuencia de aminoácidos al menos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% o más idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 72, 74, 76, 103, 105, 107, 179, 180, 181, 187, 188, 189, 197, 203, 204, 205, 21, 212, 213, 228, 229, 230, 237, 238, 252, 253, 254, 260, 261, 262, 268, 269, 270, 284, 285, 286, 293, 294, 295, y 301 (como se determina por el método de Kabat) o la SEQ ID NO: 109, 110, 76, 112, 113, 107, 182, 183, 181, 190, 191, 189,, 197, 206, 207, 205, 214, 215, 213, 232, 230, 239, 240, 238, 255, 256, 254, 263, 264, 262, 271, 272, 270, 287, 288, 286, 296, 297, 295, y 304 (como se determina por el método de Chothia) y una cadena ligera con tres CDR que incluyen una secuencia de aminoácidos al menos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% o más idéntica a la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 59, 60, 61, 92, 94, 96, 184, 185, 186, 192, 193, 194, 208, 209, 210,, 217, 218, 226, 223, 234, 241, 243, 258, 259, 265, 267, 273, 274, 275, 282, 291, y 300 (como se determina por el método de abat) o la SEQ ID NO: 59, 60, 61, 92, 94, 96, 184, 185, 186, 192, 193, 194, 208, 209, 210,, 217, 218, 226, 223, 234, 241, 243, 258, 259, 265, 267, 273, 274, de 275, 282, 291, y 300 (como se determina por el método de Chothia) . El anticuerpo se une M2e.
La cadena pesada de un anticuerpo M2e se deriva de una linea germinal V gen (variable) tales como, por ejemplo, la IgHV4 o el gen de la línea germinal IGHV3.
Los anticuerpos M2e de la invención incluyen una cadena pesada variable (VH) región codificada por un lgHV4 humana o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3. Una secuencia génica germinal IgHV4 se muestran, por ejemplo, en números de acceso L10088, M29812, 95114, X56360 y M95117. IGHV3 secuencia genética de la línea germinal se muestran, por ejemplo, en los números de acceso X92218, X70208, Z27504, 99679 y AB019437. Los anticuerpos M2e de la invención incluyen una región VH que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 80% homologa a la IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la IgHV4 o la línea germinal IGHV3 secuencia de gen. La región VH del anticuerpo M2e es al menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VH codificada por el IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal de VH IGHV3. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VH del anticuerpo 2e es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por el IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por el IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3.
Los anticuerpos M2e de la invención también incluyen una región (VL) de cadena ligera variable codificada por una secuencia de genes de la línea germinal humana igKVl . Se muestra una secuencia génica germinal IgKVl LV humana, por ejemplo, números de acceso X59315, X59312, X59318, J00248, y Y14865. Alternativamente, los anticuerpos 2e incluyen una región L que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 80% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl. La región VL del anticuerpo M2e es al menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VL codificada la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VL del anticuerpo M2e es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por la secuencia del gen de correo de la línea germinal IgKVl .
En otro aspecto, la invención proporciona una composición que incluye un anticuerpo huM2e de acuerdo con la invención. En varios aspectos, la composición incluye además un fármaco anti-viral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral . El fármaco antiviral es por ejemplo un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico o un inhibidor de canal iónico M2. El inhibidor del canal iónico M2 es, por ejemplo amantadina o rimantadina. El inhibidor de la neuraminidasa por ejemplo zanamivir o oseltamivir fosfato. En un aspecto adicional, la composición incluye además un segundo anticuerpo anti-influenza A anticuerpo.
En un aspecto adicional, los anticuerpos hu 2e de acuerdo con la invención se ligado operativamente a un agente terapéutico o un marcador detectable.
Además, la invención proporciona métodos para estimular una respuesta inmune, tratar, prevenir o aliviar un síntoma de una infección viral de la influenza mediante la administración de un anticuerpo a un sujeto huM2e.
Opcionalmente, el sujeto se administra adicionalmente con un segundo agente, tal como, pero no limitado a, un anticuerpo virus de la influenza, un fármaco anti-viral tal como un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico o un ion M2 inhibidor de canal, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral. El inhibidor de canal iónico M2 es, por ejemplo, la amantadina o rimantadina. El inhibidor de la neuraminidasa es, por ejemplo, el zanamivir o oseltamivir fosfato. El sujeto padece o está predispuesto a desarrollar una infección por virus de la influenza, tales como, por ejemplo, una enfermedad autoinmune o un trastorno inflamatorio.
En otro aspecto, la invención proporciona métodos para administrar el anticuerpo huM2e de la invención a un sujeto antes de, y/o después de la exposición a un virus de la influenza. Por ejemplo, el anticuerpo huM2e de la invención se utiliza para tratar o prevenir la infección por influenza rechazo. El anticuerpo huM2e se administra a una dosis suficiente para promover la eliminación del virus de la influenza A o eliminar las células infectadas.
También se incluyen en la invención es un método para determinar la presencia de una infección por el virus de la influenza en un paciente, poniendo en contacto una muestra biológica obtenida del paciente con un anticuerpo humM2e; detectar una cantidad del anticuerpo que se une a la muestra biológica, y comparando la cantidad de anticuerpo que se une a la muestra biológica a un valor de control .
La invención proporciona además un equipo de diagnóstico que comprende un anticuerpo huM2e.
Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de y son abarcadas por la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones.
La presente invención proporciona anticuerpos monoclonales totalmente humanos específicos contra el dominio extracelular de la matriz 2 (M2) polipéptido. Los anticuerpos se denominan, respectivamente, en la presente descripción como anticuerpos huM2e.
M2 es una proteína transmembrana de 96 aminoácidos presente como un homotetrámero en la superficie del virus de la influenza y células infectadas por virus. M2 contiene un ectodominio 23 aminoácidos (M2e) que está altamente conservada entre las cepas de la influenza A. Pocos cambios de aminoácidos se han producido desde la cepa pandémica 1918 así M2e es un objetivo atractivo para las terapias de la influenza. En estudios anteriores, los anticuerpos monoclonales específicos para el ectodominio de M2 (M2e) se obtuvieron sobre inmunizaciones con un péptido correspondiente a la secuencia lineal de M2e. En contraste, la presente invención proporciona un nuevo procedimiento mediante el cual de longitud completa M2 se expresa en líneas celulares, lo que permite la identificación de anticuerpos humanos que unía a esta M2e célula-expresado. Los anticuerpos huM2e han demostrado que se unen los determinantes conformacionales en las células transíectadas-M2 , así como M2 nativa, ya sea en las células infectadas de la influenza, o en el propio virus. Los anticuerpos huM2e no se unían al péptido M2e lineal, pero sí se unen varias variantes naturales M2 , también expresadas tras la transfección de cDNA en líneas celulares. Por lo tanto, esta invención ha permitido la identificación y producción de anticuerpos monoclonales humanos que exhiben especificidad novedoso para una muy amplia gama de cepas del virus gripal. Estos anticuerpos pueden usarse diagnósticamente para identificar la infección de la influenza A y terapéuticamente para tratar la infección por influenza A.
Los anticuerpos huM2e de la invención tienen una o más de las siguientes características: el anticuerpo se une a un huM2e) a un epítopo en el dominio extracelular de la matriz 2 (M2) polipéptido de un virus de la influenza; b) se une a la influenza A las células infectadas, y/o c) se une al virus influenza A (es decir, los viriones) . Los anticuerpos huM2e de la invención eliminan las células infectadas de la influenza a través de mecanismos efectores inmunes, tales como la ADCC, y promover el aclaramiento viral directa mediante la unión a los viriones de la influenza. Los anticuerpos huM2e de la invención se unen a la región amino-terminal del polipéptido M2e. Preferiblemente, los anticuerpos huM2e de la invención se unen a la región amino-terminal del polipéptido M2e en el que el residuo de metionina N-terminal está ausente. Secuencias M2e ejemplares incluyen aquellas secuencias que aparecen en la tabla 1 siguiente.
Tabla 1.
En una modalidad, los anticuerpos huM2e de la invención se unen a un M2e que incluye total o parcialmente los residuos de aminoácidos desde la posición 2 a la posición 7 de M2e cuando se numeran de acuerdo con la SEQ ID NO: 1. Por ejemplo, los anticuerpos huM2e de la invención se unen total o parcialmente a la secuencia de aminoácidos SLLTEVET (SEQ ID NO: 41) Lo más preferiblemente, los anticuerpos huM2e de la invención se unen total o parcialmente a la secuencia de aminoácidos SLLTEV (SEQ ID NO : 42) . Preferiblemente, los anticuerpos huM2e de la invención se unen al epítopo no lineal de la proteína M2e. Por ejemplo, los anticuerpos huM2e se unen a un epítopo que comprende la posición 2, 5, y 6 del polipéptido M2e cuando se numeran de acuerdo a SEQ ID NO: 1 en donde el aminoácido en a) la posición 2 es una serina,-b) la posición 5 es una treonina, y e) la posición 6 es un ácido glutámico. Anticuerpos monoclonales Ejemplar huM2e que se unen a este epítopo son el TCN-032 (8110), 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_Bll y 3242_P05 anticuerpos descritos en el presente documento.
La (8110) anticuerpo TCN-032 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 44) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 43, un corto de la región variable de cadena pesada ( SEQ ID NO: 277) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 278, una región variable de la cadena pesada de largo (SEQ ID NO: 276) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 196, y una variable de cadena ligera región (SEQ ID NO: 46) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 45.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia, C. et al. (1989, Nature, 342: 877-883) están subrayados y las definidas por Kabat EA et al. (1991, Secuencias de Proteínas de Interés Inmunológíco, quinta edición, NIH Publicación no. 91-3242 del Departamento de Salud y Servicios Humanos de los E.U.) se destacan en negrita en las secuencias siguientes.
Los CDR de cadena pesada de la TCN-032 (8110) anticuerpo tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: NYYWS (SEQ ID NO : 72), FIYYGGNTKYNPSLKS (SEQ ID NO: 74) y ASCSGGYCILD ( SEQ ID NO: 76) . Las CDR de cadena ligera de la TCN-032 (8110) anticuerpo tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQNIYKYLN (SEQ ID NO: 59), AASGLQS (SEQ ID NO: 61) y QQSYSPPLT (SEQ ID NO: 63) .
Los CDR de cadena pesada de la TCN-032 (8110) anticuerpo tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GSSISN (SEQ ID NO: 109), FIYYGGNTK (SEQ ID NO: 110) ? ASCSGGYCILD (SEQ ID NO: 76). Las CDR de cadena ligera de la TCN-032 (8110) anticuerpo tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQNIYKYLN (SEQ ID NO: 59), AASGLQS (SEQ ID NO: 61) y QQSYSPPLT (SEQ ID NO: 63) .
TCN-032 (8110) Secuencia de nucleótido VH: (SEQ ID NO: 43) CAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTT ATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAG AGTCAGGTCTCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGT AGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG TCN-032 (8110) Secuencia de aminoácido VH: (SEQ ID NO: 44) Kabat Bold, Chothia subrayado Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S S I S N Y Y W S W I R Q S P G K G L E W I G F I Y Y G G N T K Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R A S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T V S TCN-032 (8110) Secuencia de nucleótido corto VH: (SEQ ID NO: 278) CAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTT ATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAG AGTCAGGTCTCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGT AGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT TCN-032 (8110) Secuencia de aminoácido corto VH: (SEQ ID NO: 277) Kabat Bold, Chothia subrayado Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S E I S N Y Y W S W I R Q S P G K G L E W I G F I Y Y G G N T K Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R A S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T TCN-032 (8110) Secuencia de nucleótido largo VH: (SEQ ID NO: 196) CAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTT ATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAG AGTCAGGTCTCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGT AGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC TCN-032 (8110) Secuencia de aminoácido largo VH: (SEQ ID NO: 276) Kabat Bold, Chothia subrayado Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S S I S N Y Y W S W I R Q S P G K G L E W I G F I Y Y G G N T K Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R A S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T V S S TCN-032 (8110) Secuencia de nucleótido VL: (SEQ ID NO: 45) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCG AGTCAGAACATTTACAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAGGGCCTGATCTCTGCT GCATCCGGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC ACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTCCCCCTCTCACTTTCGGCGGA GGGACCAGGGTGGAGATCAAAC TCN-032 (8110) VL secuencia de aminoácido: (SEQ ID NO: 46) Kabat Bold, Chothia subrayado D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C R A S Q N I Y K Y L N W Y Q Q R P G K A P K G L I S A A S G L Q S G V P S R F S G S G S G T D F T L T I T S L Q P E D F A T Y Y C Q Q S Y S P P L T F G G G T R V E I K El anticuerpo 21B15 incluye una región de cadena pesada variable (SEQ ID NO: 44) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 47, una corta región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 277) codificada por el secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 278, una región variable de la cadena pesada de largo (SEQ ID NO: 276) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 196, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 46) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 48.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al. 1989, están subrayadas y las definidas por Kabat et al., 1991 se destacan en negrita en las secuencias siguientes.
Los CDR de la cadena pesada del anticuerpo 21B15 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: NYYWS (SEQ ID NO: 72), FIYYGGNTKYNPSLKS (SEQ ID NO : 74) y ASCSGGYCILD (SEQ ID NO: 76) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 21B15 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQNIYKYLN (SEQ ID NO: 59), AASGLQS (SEQ ID NO: 61) y QQSYSPPLT (SEQ ID NO: 63).
Los CDR de la cadena pesada del anticuerpo 21B15 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GSSISN (SEQ ID NO: 109), FIYYGGNTK (SEQ ID NO: 110) y ASCSGGYCILD (SEQ ID NO : 76) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 21B15 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQNIYKYLN (SEQ ID NO: 59), AASGLQS (SEQ ID NO: 61) y QQSYSPPLT (SEQ ID NO : 63 ) . 21B15 Secuencia de nucleótido VH: (SEQ ID NO: 47) CAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTT ATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAG AGTCAGGTCTCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGT AGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG 21B15 Secuencia de aminoácido VH: (SEQ ID NO: 44) Kabat Bold, Chothia subrayado Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S S I S N Y Y W S W I R Q S P G K G L E W I G F I Y Y O G N T K Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R A S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T V S 21B15 Secuencia de nucleótido corto VH: (SEQ ID NO: 278) CAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTT ATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAG AGTCAGGTCTCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGT AGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGT 21B15 Secuencia de aminoácido corto VH Kabat Bold, Chothia subrayado Q V Q L Q E S G P G L V K P S E G S S I S N Y Y W S W I R Q S P G K G L E W I G F I Y Y G G N T K Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R A S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T 21B15 Secuencia de nucleótido largo VH: (SEQ ID NO: 196) CAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTT ATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAG AGTCAGGTCTCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGT AGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC 21B15 Secuencia de aminoácido largo VH: (SEQ ID NO: 276) Kabat Bold, Chothia subrayado Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S S I S N Y Y W S W I R Q S P G K G L E W I G F I Y Y G G N T K Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R A S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T V S S 21B15 Secuencia de nucleótido VL: (SEQ ID NO: 48) GACATCCAGGTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGCGCG AGTCAGAACATTTACAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAGGGCCTGATCTCTGCT GCATCCGGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC ACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTCCCCCTCTCACTTTCGGCGGA GGGACCAGGGTGGATATCAAAC 21B15 VL secuencia de aminoácido: (SEQ ID NO: 292) Kabat Bold, Chothia subrayado D I Q V T Q S P S s L s A s V G D R V T I T C R A s Q N I Y K y L N w Y Q Q R P G K A P K G L I s A A s 6 L Q s G V P s R F S G s G S G T D F T L T I T S L Q P E D F A T Y Y C Q Q S Y S P P L T F G G G T R V D I K El (23K12) anticuerpo TCN-031 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 50) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 49, un corto de la región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 236) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 244, una región variable de la cadena pesada de largo (SEQ ID NO: 195) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 235, y una variable de cadena ligera región (SEQ ID NO: 52) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 51.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Los CDR de la cadena pesada del anticuerpo TCN-031 (23K12) tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SNYMS (SEQ ID NO: 103), VIYSGGSTYYADSVK (SEQ ID NO: 105) y CLSRMRGYGLDV (SEQ ID NO: 107) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo TCN-031 (23K12) tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RTSQSISSYLN (SEQ ID NO: 92), AASSLQSGVPSRF (SEQ ID NO: 94) y QQSYSMPA (SEQ ID NO: 96) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo TCN-031 (23K12) tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GFTVSSN (SEQ ID NO: 112), VIYSGGSTY (SEQ ID NO: 113) y CLSRMRGYGLDV (SEQ ID NO: 107). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo TCN-031 (23K12) tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RTSQSISSYLN (SEQ ID NO: 92), AASSLQSGVPSRF (SEQ ID NO: 94) y QQSYSMPA (SEQ ID NO 96).
TCN-031 (23K12) Secuencia de nucleótido VH: (SEQ ID NO: 49) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAATCTCCTGTGCAGCCTCT GGATTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTT ATTTATAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCAGATTCTCCTTCTCCAGAGACAACTCCAAG AACACAGTGTTTCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGATGTCTGAGC AGGATGCGGGGTTACGGTTTAGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCG TCN-031 (23K12) Secuencia de aminoácido VH: Kabat Bold, Chothia subrayado E V Q L V E S G G G . L V Q P G G S L G F T V S S N Y M S W V R Q A P G K I Y S G G S T Y Y A D S V K G R F S N T V F L Q M N S L R A E D T A V Y R M R G Y G L D V W G Q G T T V T V TCN-031 (23K12) Secuencia de nucleótido corto VH: (SEQ ID NO: 244) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAATCTCCTGTGCAGCCTCT GGATTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTT ATTTATAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCAGATTCTCCTTCTCCAGAGACAACTCCAAG AACACAG GTTTCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGATGTCTGAGC AGGATGCGGGGTTACGGTTTAGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGT TCN-031 (23K12) Secuencia de aminoácido corto VH: (SEQ ID NO: 236) Kabat Bold, Chothia subrayado E V Q L V E S G G G L V Q P G G S L R I S C A A S G F T V ? S N Y M S W V R Q A P G K G L E W V S V I Y S G G S T Y Y A D S V K G R F S F S R D N S K N T V F L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R C L S R M R G Y G L D V W G Q G T T V T V S TCN-031 (23K12) Secuencia de nucleótido largo VH: (SEQ ID * NO: 195) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAATCTCCTGTGCAGCCTCT GGATTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTT ATTTATAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCAGATTCTCCTTCTCCAGAGACAACTCCAAG AACACAGTGTTTCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGATGTCTGAGC AGGATGCGGGGTTACGGTTTAGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC TCN-031 (23K12) Secuencia de aminoácido largo VH: (SEQ ID NO: 235) Kabat Bold, Chothia subrayado E V Q L V E S G G G L V Q P G G S L R I S C A A S G F T V S S N Y M S W V R Q A P G K G L E W V S V I Y S G G S T Y Y A D S V K G R F S F S R D N S K N T V F L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R C L S R M R G Y G L D V W G Q G T T V T V S S TCN-031 (23K12) Secuencia de nucleótido VL: (SEQ ID NO: 51) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACA AGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCT GCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCGGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACCTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTATGCCTGCCTTTGGCCAGGGG ACCAAGCTGGAGATCAAA TCN-031 (23K12) VL secuencia de aminoácido: (SEQ ID NO: 52) Kabat Bold, Chothia subrayado D I C M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C R T S Q S I S S Y L N W Y Q Q K P G K A P K L L I Y A A S S L Q S G V P S R F S G S G S G T D F T L T I S G L Q P E D F A T Y Y C Q Q S Y S M P A F G Q G T K L E I K El anticuerpo 3241_G23 (también denominado en el presente como G23) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 116) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 115, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 118) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 117.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo G23 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: GGGYSWN (SEQ ID NO: 179), FMFHSGSPRYNPTLKS (SEQ ID NO: 180) y VGQ DKYYAMDV (SEQ ID NO : 181) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo G23 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSIGAYV (SEQ ID NO: 184), GASNLQS (SEQ ID NO: 185) y QQTYSTPIT (SEQ ID NO: 186) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo G23 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGPVSGGG (SEQ ID NO: 182), FMFHSGSPR (SEQ ID NO: 183) y VGQMDKYYAMDV (SEQ ID NO: 181) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo G23 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSIGAYVN (SEQ ID NO: 184), GASNLQS (SEQ ID NO: 185) y QQTYSTPIT (SEQ ID NO:186). 3241_G23 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 115) CAGGTGCAGCTGCAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACTTGCACTGTCTCT GGTGGCCCCGTCAGCGGTGGTGGTTACTCCTGGAACTGGATCCGCCAACGCCCAGGACAGGGCCTGGAGTGGGTT GGGTTCATGTTTCACAGTGGGAGTCCCCGCTACAATCCGACCCTCAAGAGTCGAATTACCATCTCAGTCGACACG TCTAAGAACCTGGTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACGGCCGCGGACACGGCCGTGTATTTTTGTGCGCGAGTG GGGCAGATGGACAAGTACTATGCCATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3241_G23 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 116) Kabat Bold, Chothia subrayado QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGPVSQQGY-WNWIRQRPGQGLEWVGFMFHSGSPRY PTLKSRITISVDT SKNLVSLKLSSVTAADTAVYFCARVGQMDKYYAMDVWGQGTTV VSS 3241_G23 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 117) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTTCCTCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTGGCGCCTATGTAAATTGGTATCAACAGAAAGCAGGGAAAGCCCCCCAGGTCCTGATCTTTGGT GCTTCCAATTTACAAAGCGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTGCAACCTGAAGACTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGACTTACAGTACCCCGATCACCTTCGGCCAA GGGACACGACTGGAGATTAAACG 3241_G23 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 118) Kabat en negritas, Chothia subrayado DIQMTQSPSSLSSSVGDRWITCRASQSIGAYVNWYQQKAGKAPQVLIFGAS LQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFA YFCQQTYSTPITFGQGTRLEIK El 3244_I10 anticuerpo (también denominado en el presente 110) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 120) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 119, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 122) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 121.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 110 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SDYWS (SEQ ID NO: 187), FFYNGGSTKYNPSLKS (SEQ ID NO: 188) y HDAKFSGSYYVAS (SEQ ID NO: 189). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 110 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GATNLQS (SEQ ID NO: 193) y QQSYNTPLI (SEQ ID NO: 194) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 110 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSITS (SEQ ID NO: 190), FFYNGGSTK (SEQ ID NO: 191) y HDAKFSGSYYVAS (SEQ ID NO: 189). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 110 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GATNLQS ( SEQ ID NO: 193) y QQSYNTPLI (SEQ ID NO: 194) . 3244_I10 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 119) CAGGTCCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGCTGAAGCCTTCGGACACCCTGGCCCTCACTTGCACTGTCTCT GGTGGCTCCATCACCAGTGACTACTGGAGCTGGATCCGGCAACCCCCAGGGAGGGGACTGGACTGGATCGGATTC TTCTATAACGGCGGAAGCACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCAGCGGACACGTCCAAG AACCAGTTGTCCCTGAAATTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGGCGTGTATTATTGTGCGAGACATGATGCC AAATTTAGTGGGAGCTACTACGTTGCCTCCTGGGGCCAGGGAACCCGAGTCACCGTCTCGAGC 3244_H0 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 120) QVQLQESGPGLLKPSDTLALTCTVSGGSITSDYWSWIRQPPGRGLDWIGFFY GGSTKYNPSLKSRV ISADTSK NQLSLKLTSVTAADTGVYYCARHDAKFSGSYWASWGQGTRVTVSS 3244_I10 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 121) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCTCTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGCAACCTGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTCATTTTTGGT GCAACCAACTTGCAAAGTGGGGTCCCATCTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAATACCCCCCTCATTTTTGGCCAG GGGACCAAGCTGGAGATCAAACG 3244_I10 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 122) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQSISTYLN YQQQPGKAPKVLIFGATNLQSGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYNTPLIFGQGTKLEIK El anticuerpo 3243_J07 (también denominado en el presente como J07) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 124) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 123, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 126) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO : 125.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo J07 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SDY S (SEQ ID NO: 187), FFYNGGSTKYNPSLKS (SEQ ID NO : 188) y HDVKFSGSYYVAS (SEQ ID NO: 197) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo J07 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GATNLQS (SEQ ID NO: 193) y QQSYNTPLI (SEQ ID NO: 194).
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo J07 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSITS (SEQ ID NO: 190), FFYNGGSTK (SEQ ID NO: 191) y HDVKFSGSYYVAS (SEQ ID NO : 197) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo J07 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GATNLQS (SEQ ID NO: 193) y QQSYNTPLI (SEQ ID NO : 194). 3243_J07 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 123) CAGGTCCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGCTGAAGCCTTCGGACACCCTGGCCCTCACTTGCACTGTCTCT GGTGGCTCCATCACCAGTGACTACTGGAGCTGGATCCGGCAACCCCCAGGGAGGGGACTGGACTGGATCGGATTC TTCTATAACGGCGGGAGCACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGCGGACACGTCCAAG AACCAGT GTCCCTGAAATTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGGCGTGTATTATTGTGCGAGACATGATGTC AAATTTAGTGGGAGCTACTACGTTGCCTCCTGGGGCCAGGGAACCCGAGTCACCGTCTCGAGC 3243_J07 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 124) QVQLQESGPGLLKPSDTLALTCTVSGGSITSDYWSWIRQPPGRGLDWIGFFYWGGSTKY PSLKSRVTISADTSK NQLSLKLTSVTAADTGVYYCARHDVKFSGSYYVASWGQGTRVTVSS 3243_J07 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 125) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCTCTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGCAACCTGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTCTGGT GCAACCAACTTGCAAAGTGGGGTCCCATCTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAATACCCCCCTCATTTTTGGCCAG GGGACCAAGCTGGAGATCAAACG 3243_J07 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 126) DIQMTQSPSSLSASVGDRWISCR¾SQSISTYLNWYQQQPGKAPKVLISGATNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYYCQQSYNTPLIFGQGTKLEIK El anticuerpo 3259_J21 (también denominado, en el presente como J21) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 128) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 127, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 130) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 129.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo J21 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SYNWI (SEQ ID NO: 203), HIYDYGRTFYNSSLQS (SEQ ID NO: 204) y PLGILHYYAMDL (SEQ ID NO: 205) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo J21 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSIDKFLN (SEQ ID NO: 208), GASNLHS (SEQ ID NO: 209) y QQSFSVPA (SEQ ID NO: 210) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo J21 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSISS (SEQ ID NO: 206), HIYDYGRTF (SEQ ID NO: 207) y PLGILHYYAMDL (SEQ ID NO: 205) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo J21 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSIDKFLN (SEQ ID NO: 208), GASNLHS (SEQ ID NO: 209) y QQSFSVPA (SEQ ID NO : 210) . 3259_J21 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 127) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCACGAGTGGTGAGGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCG GGGGGCTCCATCAGTTCTTACAACTGGATTTGGATCCGGCAGCCCCCTGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCAC ATATATGACTATGGGAGGACCTTCTACAACTCCTCCCTCCAGAGTCGACCTACCATATCTGTAGACGCGTCCAAG AATCAGCTCTCCCTGCGATTGACCTCTGTGACCGCCTCAGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGAGACCTCTCGGT ATACTCCACTACTACGCGATGGACCTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3259_J21 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 128) QVQLQESGPRWRPSETLSLTCTVSGGSISSYMWIWIRQPPGKGLE IGHIYDYGRTFYNSSLQSRPTISVDASK NQLSLRLTSVTASDTAVYYCARPLGILHYYAMDLWGQGTTVTVSS 3259_J21 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 129) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATTATCCGTGTCTGTATCTGTCGGGGACAGGGTCACCATCGCTTGCCGGGCA AGTCAGAGTATTGACAAGTTTTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGGT GCCTCCAATTTGCACAGTGGGGCCCCATCAAGGTTCAGTGCCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTAACAATC ACCAATATACAGACTGAAGATTTCGCAACTTACCTCTGTCAACAGAGTTTCAGTGTCCCCGCTTTCGGCGGAGGG ACCAAGGTTGAGATCAAACG 3259_J21 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 130) DIQMTQSPLSVSVSVGDRVTIACRASQSIDKFLNWYQQKPGKAPKLLIYGASIJLHSGAPSRFSASGSGTDFTLTI TNIQTEDFATYLCQQSFSVPAFGGGTKVEIK El 3245_019 anticuerpo (también denominado en el presente 019) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 132) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 131, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 134) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 133.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 019 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: STYMN (SEQ ID NO: 211), VFYSETRTYYADSVKG (SEQ ID NO: 212) y VQRLSYGMDV (SEQ ID NO : 213). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 019 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GASTLQS (SEQ ID NO: 217) y QQTYSIPL (SEQ ID NO : 218) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 019 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GLSVSS (SEQ ID NO: 214), VFYSETRTY (SEQ ID NO: 215) y VQRLSYGMDV (SEQ ID NO: 213). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 019 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GASTLQS (SEQ ID NO: 217) y QQTYSIPL (SEQ ID NO: 218) . 3245_019 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 131) GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGAGGGGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACGGCCTCT GGGTTAAGTGTCAGTTCCACCTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGTT TTTTATAGTGAGACCAGGACGTACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGACACAATTCCAAC AACACGCTCTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGTTGAAGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAGTCCAGAGA TTGTCGTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3245_019 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 132) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGLSVSSTY-N QAPGKGLEWSVFYSETRTYYADSVKGRFTVSRH SN NTLYLQMNSLRVEDTAVYYCARVQRLSYGMDVWGQGTTVTVSS 3245_019 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 133) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTAAATTGGTATCAGAAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGGTCTATGGT GCATCCACTTTGCAGAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC GCCAGTCTGCAACCTGAAGATTCTGCAACTTACTACTGTCAACAGACTTACAGTATCCCCCTCTTCGGCCAGGGG ACACGGCTGGAGATTAAACG 3245_019 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 134) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYIiMWYQKRPGKAPKLLVYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI ASLQPEDSATYYCQQTYSIPLFGQGTRLEIK El 3244_H04 anticuerpo (también denominado en el presente H04) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 136) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 135, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 138) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 137.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo H04 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: STYMN (SEQ ID NO: 211), VFYSETRTYYADSVKG (SEQ ID NO: 212) y VQRLSYGMDV (SEQ ID NO: 213). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo H04 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GASSLQS (SEQ ID NO: 226) y QQTYSIPL (SEQ ID NO: 218) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo H04 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GLSVSS (SEQ ID NO: 214), VFYSETRTY (SEQ ID NO: 215) y VQRLSYGMDV (SEQ ID NO: 213). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo H04 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLN ( SEQ ID NO: 192), GASSLQS (SEQ ID NO: 226) y QQTYSIPL (SEQ ID NO:218). 3244_H04 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 135) GAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGAGGGGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAGCCTCT GGGTTAAGCGTCAGTTCCACCTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCAGTT TTTTATAGTGAAACCAGGACGTATTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGACACAATTCCAAC AACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAAGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAGTCCAGAGA CTGTCATACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3244_H04 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 136) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGLSVSSTYMNWVRQAPGKGLE SVFYSETRTYYADSVKGRFTVSRHNSN NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVQRLSYGMDVWGQGTTVTVSS 3244_H04 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 137) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCGTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTAAATTGGTATCAGAAGAGACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGGTCTATGGT GCATCCAGTTTGCAGAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC GCCAGTCTGCAACCTGAAGATTCTGCAGTTTATTACTGTCAACAGACTTACAGTATCCCCCTCTTCGGCCAGGGG ACACGACTGGAGAT AAACG 3244_H04 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 138) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYLNWYQKRPGKAPKLLVYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI ASLQPEDSAVYYCQQTYSIPLFGQGTRLEIK El anticuerpo 3136_G05 (también denominado en el presente como G05) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 140) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 139, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 142) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 141.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo G05 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SDFWS (SEQ ID NO: 228), YVYNRGSTKYSPSLKS (SEQ ID NO: 229) y NGRSSTSWGIDV (SEQ ID NO : 230) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3136_G05 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLH (SEQ ID NO: 233), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYSPPLT (SEQ ID NO : 63) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3136_G05 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSISS (SEQ ID NO: 206), YVYNRGSTK (SEQ ID NO: 232) y NGRSSTSWGIDV (SEQ ID NO: 230). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3136_G05 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLH (SEQ ID NO: 233), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYSPPLT (SEQ ID NO: 3136_G05 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 139) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCAGTGTCTCT GGTGGCTCCATTAGTAGTGATTTCTGGAGTTGGATCCGACAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTAT GTCTATAACAGAGGGAGCACTAAGTACAGTCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGCAGACATGTCCAAG AACCAGTTTTCCCTGAATATGAGTTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAAAAATGGTCGA AGTAGCACCAGTTGGGGCATCGACGTCTGGGGCAAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC [01]3136_G05 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 140) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCSVSGGSISSDFWS IRQPPGKGLEWIGYVYNRGSTKYSPSLKSRVTISADMSK NQFSL MSSVTAADTAVYYCAKNGRS3TSWGIDVWGKGTTVTVSS 3136_G05 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 141) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGACTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTACATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCT GCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGT CAGTGGCAGTAGATCAGGAACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTGCAACCTGATGACTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTCCCCCCCTCACTTTCGGCCCT GGGACCAAAGTGGATATGAAACG 3136_G05 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 142) DIQMTQSPSSLSASVGDRLTITCRASQSISTYLH YQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSRSGTDFTLTI SSLQPDDFATYYCQQSYSPPLTFGPGTKVD K El anticuerpo 3252_C13 (también denominado en el presente como C13) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 144) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 143, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 146) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 145.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo C13 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SDYWS (SEQ ID NO: 187), YIYNRGSTKYTPSLKS (SEQ ID NO: 237) y HVGGHTYGIDY (SEQ ID NO: 238). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo C13 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISNYLN (SEQ ID NO: 241), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYNTPIT (SEQ ID NO: 243).
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo C13 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GASISS (SEQ ID NO: 239), YIYNRGSTK (SEQ ID NO: 240) y HVGGHTYGIDY (SEQ ID NO: 238). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo C13 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISNYLN (SEQ ID NO: 241), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYNTPIT (SEQ ID NO: 243) . 3252_C13 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 143) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTGCCTCCATCAGTAGTGACTACTGGAGCTGGATCCGGCTGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTAT ATCTATAATAGAGGGAGTACCAAGTACACCCCCTCCCTGAAGAGTCGAGTCACCATATCACTAGACACGGCCGAG AACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGGTCGGTGACCGCCGCAGACACGGCCATCTATTACTGTGCGAGACATGTAGGT GGCCACACCTATGGAATTGATTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC 3252_C13 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 144) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGA5ISSDYWS IRLPPGKGLEWIGYIYNRGSTKY PSLK5RVTISLDTAE NQFSLRLRSVTAADTAIYYCARHVGGHTYGIDYWGQGTLVTVSS 3252_C13 Secuencia de nucleótido VIi (SEQ ID NO: 145) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCGTCCCTGTCTGCCTCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAACACAAACCTGGGGAAGCCCCCAAGCTCCTGAACTATGCT GCGTCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGCCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTTCAACCTGAAGATTTTGCCACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAATACTCCGATCACCTTCGGCCAA GGGACACGACTGGAAATTAAACG 3252_C13 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 146) DIQMTQSPSSLSASVGDRV ITCRASQSISNYLNWYQHKPGEAPKLLNYAASSLQSGVPSRFSASGSGTDFTLTI SSLQPEDFA YYCQQS N PITFGQGTRLEIK El anticuerpo 3259_J06 (también denominado en el presente como J06) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 148) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 147, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 150) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 149.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo J06 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SDYWS (SEQ ID NO: 187), YIYNRGSTKYTPSLKS (SEQ ID NO: 237) y HVGGHTYGIDY (SEQ ID NO: 238) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo J06 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISNYLN (SEQ ID NO: 241), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYNTPIT (SEQ ID NO: 243).
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo J06 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GASISS (SEQ ID NO: 239), YIYNRGSTK (SEQ ID NO: 240) y HVGGHTYGIDY (SEQ ID NO: 238). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo J06 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISNYLN (SEQ ID NO: 241), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYNTPIT (SEQ ID NO: 243). 3255_J06 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 147) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTGCCTCCATCAGTAGTGACTACTGGAGCTGGATCCGGCTGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTAT ATCTATAATAGAGGGAGTACCAAGTACACCCCCTCCCTGAAGAGTCGAGTCACCATATCACTAGACACGGCCGAG AACCAGTTCTCCCTGAGGCTGAGGTCGGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGAGACATGTGGGT GGCCACACCTATGGAATTGATTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC 3255_J06 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 148) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGASISSDYWSWIRLPPGKGLEWIGYIYNRGSTKYTPSLKSRVTISLDTAE NQFSLRLRSVTAADTAVYYCARHVGGHTYGIDYWGQGTLVTVSS 3255_J06 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 149 ) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCGTCCCTGTCTGCCTCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCAACTATTTAAATTGGTATCAACACAAACCTGGGGAAGCCCCCAAGCTCCTGAACTATGCT GCGTCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGCCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAGCATC AGCGGTCTTCAACCTGAAGATTTTGCCACTTACTACTGTCAACAGAGCTACAATACTCCGATCACCTTCGGCCCA GGGACACGACTGGAAATTAAACG 3255_J06 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 150 ) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNYLNWYQHKPGEAPKLLNYAASSIiQSGVPSRFSASGSGTDFTLSI SGLQPEDFATYYCQQSYNTPITFGPGTRLEIK El anticuerpo 3410_I23 (también denominado en el presente 123) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 152) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 151, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 154) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 153.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3410_I23 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SYSWS ( SEQ ID NO: 252), YLYYSGSTKYNPSLKS (SEQ ID NO: 253) y TGSESTTGYGMDV (SEQ ID NO: 254). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3410_I23 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), AASSLHS (SEQ ID NO: 258) y QQSYSPPIT (SEQ ID NO: 259) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3410_I23 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GDSISS (SEQ ID NO: 255), YLYYSGSTK (SEQ ID NO: 256) y TGSESTTGYGMDV (SEQ ID NO : 254). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3410_i23 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), AASSLHS (SEQ ID NO: 258) y QQSYSPPIT (SEQ ID NO: 259) . 3420_I23 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 151) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCGTCACCTGCAAAGTCTCT GGTGACTCCATCAGTAGTTATTCCTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGGTTGGCTAT TTGTATTATAGTGGGAGCACCAAGTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAACCACCATATCAGTAGACACGTCCACG AACCAGTTGTCCCTGAAGTTGAGTTTTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAACCGGCTCG GAATCTACTACCGGCTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3420_I23 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 152) QVQLQESGPGLVKPSETLSVTCKVSGDSISSYSWSWIRQPPGKGLEWVGYLYYSGSTKYNPSLKSRTTISVDTST NQLSLKLSFVTAADTAVYFCARTGSESTTGYGMDVWGQGTTVTVSS 3420_I23 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 153) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCT GCATCCAGTTTGCACAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCGCTCTCACCATC AGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTCCCCCGATCACCTTCGGCCAA GGGACACGACTGGAGATTAAACG 3420_I23 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 154) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISTYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLHSGVPSRFSGSGSGTDFALTI SSLQPEDFATYYCQQSYSPPITFGQGTRLEIK El 3139_P23 anticuerpo (también denominado en el presente como P23) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 156) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 155, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 158) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 157.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y las definidas por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo P23 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: NSFWG (SEQ ID NO: 260), YVYNSGNTKYNPSLKS (SEQ ID NO : 261) y HDDASHGYSIS (SEQ ID NO: 262). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3139_P23 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQTISTYLN (SEQ ID NO: 265), AASGLQS (SEQ ID NO: 61) y QQSYNTPLT (SEQ ID NO: 267) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3139_P23 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSISN (SEQ ID NO: 263), YVYNSGNTK (SEQ ID NO: 264) y HDDASHGYSIS (SEQ ID NO: 262). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3139_P23 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQTISTYLN (SEQ ID NO: 265), AASGLQS (SEQ ID NO: 61) y QQSYNTPLT (SEQ ID NO: 267) . 3139_P23 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 155) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAAGACTGGTGAAGCCTTCGGAGAGCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTGGCTCCATTAGTAATTCCTTCTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGGAGGGACTGGAGTGGATTGGTTAT GTCTATAACAGTGGCAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCGCGCGACACGTCCAAG AGTCAACTCTACATGAAGCTGAGGTCTGTGACCGCCGCTGACACGGCCGTGTACTACTGTGCGAGGCATGACGAC GCAAGTCATGGCTACAGCATCTCCTGGGGCCACGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC 3139_P23 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 156) QVQLQESGPRLVKPSESLSLTCTVSGGSISNSFWGWIRQPPGEGLEWIGYVYNSG TKY PSLKSRVTISRDTSK SQLYMKLRSVTAADTAVYYCARHDDASHGYSIS GHGTLVTVSS 3139_P23 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 157) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGGGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGACCATTAGTACTTATTTAAATTGGTATCAACAGAAATCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCT GCATCCGGTTTGCAAAGTGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTTCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTTCTGTCAACAGAGTTACAATACTCCCCTGACGTTCGGCCAA GGGACCAAGGTGGAAATCAAA [02]3139_P23 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 158) DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQTISTYLNWYQQKSGKAPKLLIYAASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYFCQQSYN PLTFGQGTKVEIK El 3248_P18 anticuerpo (también denominado en el presente como P18) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 160) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 159, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 162) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 161.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se 'definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3248_P18 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: AYHWS (SEQ ID NO: 268), HIFDSGSTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 269) y PLGSRYYYGMDV ( SEQ ID NO: 270). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3248_P18 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), GASTLQN (SEQ 'ID NO: 274) y QQSYSVPA (SEQ ID NO: 275).
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3248_P18 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSISA (SEQ ID NO: 271), HIFDSGSTY (SEQ ID NO: 272) y PLGSRYYYGMDV (SEQ ID NO: 270). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3248_P18 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), GASTLQN (SEQ ID NO: 274) y QQSYSVPA (SEQ ID NO: 275) . 3248_P18 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 159) CAGGTGCAACTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCG GGTGGCTCCATCAGTGCTTACCACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCAC ATCTTTGACAGTGGGAGCACTTACTACAACCCCTCCCTTAAGAGTCGAGTCACCATATCACTAGACGCGTCCAAG AACCAGCTCTCCCTGAGATTGACCTCTGTGACCGCCTCAGACACGGCCATATATTACTGTGCGAGACCTCTCGGG AGTCGGTACTATTACGGAATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3248_P18 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 160) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISAYHWSWIRQPPGKGLEWIGHIFDSGSTYYNPSLKSRVTISLDASK NQLSLRLTSV ASDTAIYYCARPLGSRYYYG DVWGQGTTV VSS 3248_P18 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 161) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCGTCCTCCCTGTCTGCATCTGTCGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGTATTAGCAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGT GCCTCCACTTTGCAAAATGGGGCCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTACAACCTGAAGATTCCGCAACTTACCTCTGTCAACAGAGTTACAGTGTCCCTGCTTTCGGCGGAGGA ACCAAGGTGGAGGTCAAA 3248_P18 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 162) DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYL WYQQ PGKAPKLLIYGASTLQNGAPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDSATYLCQQSYSVPAFGGGTKVEVK El 3253_P10 anticuerpo (también denominado en el presente como PIO) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 164) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 163, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 166) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 165.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por abat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3253_P10 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SDYWS (SEQ ID NO: 187), FFYNGGSTKYNPSLKS (SEQ ID NO: 188) y HDAKFSGSYYVAS (SEQ ID NO : 189) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3253_P10 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GATDLQS (SEQ ID NO: 282) y QQSYNTPLI (SEQ ID NO: 194) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3253_P10 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GGSITS ( SEQ ID NO: 190), FFYNGGSTK (SEQ ID NO: 191) y HDAKFSGSYYVAS (SEQ ID NO: 189) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3253_P10 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISTYLN (SEQ ID NO: 192), GATDLQS (SEQ ID NO: 282) y QQSYNTPLI (SEQ ID NO:194). 3253_P10 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 163) CAGGTCCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGCTGAAGCCTTCGGACACCCTGGCCCTCACTTGCACTGTCTCT GGTGGCTCCATCACCAGTGACTACTGGAGCTGGATCCGGCAACCCCCAGGGAGGGGACTGGACTGGATCGGATTC TTCTATAACGGCGGGAGCACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGCGGACACGTCCAAG AACCAGTTGTCCCTGAAATTGACCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGGCGTGTATTATTGTGCGAGACATGATGCC AAATTTAGTGGGAGCTACTACGTTGCCTCCTGGGGCCAGGGAACCCGAGTCACCGTCTCGAGC 3253_P10 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 164) QVQLQESGPGLLKPSDTLALTCTVSGGSITSDYWSWIRQPPGRGLDWIGFFY GGSTKY PSLKSRVTISADTSK NQLSLKLTSVTAADTGWYCARHDAKFSGSYYVASWGQGTRVTVSS 3253_P10 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 165) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCCTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCTCTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCACCTATTTAAATTGGTATCAGCAGCAACCTGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATCTCTGGT GCAACCGACTTGCAAAGTGGGGTCCCATCTCGCTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATC AGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAATACCCCCCTCATTTTTGGCCAG GGGACCAAGCTGGAGATCAAA 3253_P10 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 166) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTISCRASQSISTYL WYQQQPG AP VLISGATDLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYYCQQSYNTPLIFGQGTKLEIK El 3260_D19 anticuerpo (también denominado en el presente D19) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 168) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 167, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 170) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 169.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3260_D19 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: DNYL (SEQ ID NO: 284), VFYSADRTSYADSVKG (SEQ ID NO: 285) y VQKSYYGMDV (SEQ ID NO: 285). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3260_D19 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), GASSLQS (SEQ ID NO: 226) y QQTFSIPL (SEQ ID NO: 291).
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3260_D19 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GFSVSD (SEQ ID NO: 287), VFYSADRTS (SEQ ID NO: 288) y VQKSYYGMDV (SEQ ID NO: 286). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3260_D19 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), GASSLQS (SEQ ID NO: 226) y QQTFSIPL (SEQ ID NO:291) . 3260_D19 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 167) GACATGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGTCCCGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGCGCAGCCTCT GGGTTTTCCGTCAGTGACAACTACATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGACTGGGTCTCAGTC TTTTATAGTGCTGATAGAACATCCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGCCACGATTCCAAG AACACAGTGTACCTTCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGTTCAGAAG TCCTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3260_D19 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 168) DMQLVESGGGLVPPGGSLRLSCAASGFSVSDNYI WVRQAPGKGLDWVSVFYSADRTSYADSVKGRFTVSSHDSK NTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVQKSYYGMDVWGQGTTVTVSS [03]3260_D19 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 169) GGCATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCAGATATTTAAATTGGTATCTGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTCTGGT GCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCACTGGGTCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATC AGCAGTTTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGACTTTCAGTATCCCTCTTTTTGGCCAGGGG ACCAAGGTGGAGATCAAA [04]3260_D19 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 170) GIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIS YL WYLQKPGKAPKLLISGASSLQSGVPSRFSGTGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCQQTFSIPLFGQGTKVEIK El anticuerpo 3362_B11 (también denominado en el presente como Bll) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 172) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 171, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 174) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 173.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo Bll tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: SGAYYWT (SEQ ID NO : 293), YIYYSGNTYYNPSLKS (SEQ ID NO: 294) y AASTSVLGYGMDV (SEQ ID NO : 295) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo Bll tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYSTPLT (SEQ ID NO: 300) .
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo Bll tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: GDSITSGA (SEQ ID NO: 296), YIYYSGNTY (SEQ ID NO: 297) y AASTSVLGYGMDV (SEQ ID NO: 295) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo Bll tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), AASSLQS (SEQ ID NO: 234) y QQSYSTPLT (SEQ ID NO 300) . 3362_B11 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 171) CAGGTGCAGCTGCAGGCGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCAGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCT GGTGACTCCATCACCAGTGGTGCTTACTACTGGACCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATT GGGTACATCTATTACAGTGGGAACACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCACTAGACACG TCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGGTGAACTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGAGCT GCTTCGACTTCAGTGCTAGGATACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3362_B11 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 172) QVQLQASGPGLVKPSETLSLTCTVSGDSITSGAYYWTWIRQHPGKGLEWIGYirySGNTYY PSLKSRVTISLDT SKNQFSLKVNSVTAADTAVYYCARAASTSVLGYGMDV GQGTTVTVSS 3362_B11 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 173) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCAGATATTTAAATTGGTATCAGCAGGAACCAGGGAAGGCCCCTAAGCTCCTGGTCTATGCT GCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGT CAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATA AGCAGTCTTCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTATAGTACCCCCCTCACCTTCGGCCAA GGGACACGACTGGAGATTAAA 3362_B11 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 174) DIQMTQSPSSLSASVGDRV ITCRASQSIS YLNWYQQEPG APKLLVYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGQGTRLEIK El 3242_P05 anticuerpo (también denominado en el presente como P05) incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 176) codificada por la secuencia de ácido nucleico que se muestra a continuación en la SEQ ID NO: 175, y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 178) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 177.
Los aminoácidos que abarcan las CDR según se define por Chothia et al., Están subrayados 1989 y los que se definen por Kabat et al., 1991 se resaltan en negrita en las secuencias siguientes.
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3242_P05 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: VSDNYIN (SEQ ID NO : 301), VFYSADRTSYADSVKG ( SEQ ID NO: 285) y VQKSYYGMDV (SEQ ID NO: 286). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3242_P05 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISRYLN ( SEQ ID NO: 273), GASSLQS (SEQ ID NO: 226) y QQTFSIPL (SEQ ID NO: 291).
Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo 3242_P05 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: SGFSV (SEQ ID NO: 304), VFYSADRTS (SEQ ID NO: 288) y VQKSYYGMDV (SEQ ID NO: 286) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3242_P05 tienen las siguientes secuencias por definición de Chothia: Las CDR de cadena ligera del anticuerpo 3242_P05 tienen las siguientes secuencias por definición de Kabat: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 273), GASSLQS (SEQ ID NO: 226) y QQTFSIPL (SEQ ID NO: 291) . 3242_P05 Secuencia de nucleótido VH (SEQ ID NO: 175) GACATGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGTCCCGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGCGCAGCCTCT GGGTTTTCCGTCAGTGACAACTACATAAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGACTGGGTCTCAGTC TTTTATAGTGCTGATAGAACATCCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGCCACGATTCCAAG AACACAGTGTACCTTCAAATGAACAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAGTTCAGAAG TCCTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC 3242_P05 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 176) DMQLVESGGGLVPPGGSLRLSCAASGFSVSDNYI WVRQAPGKGLDWVSVFYSADRTSYADSVKGRFTVSSHDSK TWLQMNSLRAEDTAWYCARVQKSYYGMDV GQGTTVTVSS 3242_P05 Secuencia de nucleótido VL (SEQ ID NO: 177) GGCATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCA AGTCAGAGCATTAGCAGATATTTAAATTGGTATCTGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTCTGGT GCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCACTGGGTCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATC AGCAGTTTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGACTTTCAGTATCCCTCTTTTTGGCCAGGGG ACCAAGGTGGAGATCAAA 3242_P05 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 178) GIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYIi WYLQKPGKAPKLLISGASSLQSGVPSRFSGTGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCQQTFSIPLFGQGTKVEIK Los anticuerpos HuM2e de la invención también incluyen anticuerpos que incluyen una secuencia de cadena pesada variable de aminoácidos que es al menos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% o más idéntica la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 44, 277, 276, 50, 236, 235, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, o 176. y/o un aminoácido variable de cadena ligera que es al menos 90%, 92%, 95%, 97% 98%, 99% o más idéntica la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 46, 52, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, 174, 178.
Como alternativa, el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo que se une al mismo epítopo que TCN-032 (8110) , 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11, o 3242_P05.
La cadena pesada de un anticuerpo M2e se deriva de una línea germinal V gen (variable) tales como, por ejemplo, la IgHV4 o el gen de la línea germinal IGHV3.
Los anticuerpos M2e de la invención incluyen una región de cadena pesada variable (VH) codificada por un IgHV4 humana o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3. Se muestra una secuencia génica germinal IgHV4, por ejemplo, en los números de acceso L10088, M29812, M95114, X56360 y M95117. Se muestra una secuencia génica germinal IGHV3 , por ejemplo, en los números de acceso X92218, X70208, Z27504, M99679 y AB019437. Los anticuerpos M2e de la invención incluyen una región VH que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 80% homologa a la IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la IgHV4 o la línea germinal IGHV3 secuencia de gen. La región VH del anticuerpo M2e es al menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VH codificada por el IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal de VH IGHV3. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VH del anticuerpo M2e es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por el IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por el IgHV4 o la secuencia del gen de la línea germinal IGHV3.
Los anticuerpos M2e de la invención también incluyen un (VL) región codificada por una secuencia de genes de la línea germinal humana IgKVl cadena ligera variable. Se muestra una secuencia génica germinal IgKVl LV humana, por ejemplo, números de acceso X59315, X59312, X59318, J00248, y Y14865. Alternativamente, los anticuerpos M2e incluyen una región VL que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 80% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl. La región VL del anticuerpo M2e es al menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VL codificada la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl. Preferiblemente, la secuencia, de aminoácidos de la región VL del anticuerpo M2e es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia del gen de la línea germinal IgKVl, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por la secuencia del gen de correo de la línea germinal IgKVl .
Anticuerpos HA I Los anticuerpos de HA de la invención pueden también ser capaces de unirse específicamente a uno o más fragmentos de H5N1 virus de la influenza, tales como las glicoproteínas de superficie, hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) , que se requieren para la unión viral y celular liberar, o proteínas de membrana (Mi y M2 ) . En una modalidad específica, los anticuerpos de HA de la invención son capaces de unirse específicamente a la molécula de HA de las cepas H5N1. Ellos pueden ser capaces de unirse específicamente a la HAL y/o HA2 subunidad de la molécula de HA. Ellos pueden ser capaces de unirse específicamente a epítopos lineales o estructurales y/o conformacionales sobre la HAL y/o HA2 subunidad de la molécula de HA. La molécula de HA puede ser purificado a partir de virus o producido recombinantemente y, opcionalmente, aislado antes de su uso. Alternativamente, el HA puede ser expresada en la superficie de las células.
Para el diagnóstico, los anticuerpos de HA también puede ser capaz, de específicamente la unión a proteínas no presentes en la superficie del virus H5N1 incluyendo la nucleoproteína, la proteína estructural de la nucleocápside, polimerasas (PA, PB y PB2) , y las proteínas no estructurales (NS1 y NS2) . El nucleótido y/o secuencia de aminoácidos de las proteínas de diversas cepas H5N1 se pueden encontrar en la base de datos GenBank, NCBI Virus de la influenza de secuencia de base de datos, la base de datos de secuencias de la influenza (ISD) , EMBL-base de datos y/o otras bases de datos. Es bien dentro del alcance de la persona experta encontrar tales secuencias en las bases de datos respectivas. En otra modalidad, los anticuerpos de HA de la invención son capaces de unirse específicamente a un fragmento de las proteínas y/o polipéptidos mencionados anteriormente-en el que el fragmento incluye al menos un determinante antigénico reconocido por los anticuerpos de HA de la invención. Un "determinante antigénico", como se usa en el presente documento es un resto que es capaz de unirse a un anticuerpo de HA de la invención con afinidad suficientemente alta para formar un complejo antígeno-anticuerpo detectable. Como se usa en el presente documento, los términos "determinante antigénico" y "epítopo" son equivalentes. Los anticuerpos de HA de la invención pueden o no pueden ser capaces de unirse específicamente a la parte extracelular de HA (también llamado de HA soluble en el presente documento (HA) ) .
Los anticuerpos de HA de la invención pueden ser moléculas de inmunoglobulina intactas como anticuerpos policlonales o monoclonales o los anticuerpos de HA pueden ser fragmentos de unión a antígeno, incluyendo, pero no limitados a, Fab, F (ab'), F (ab') 2, Fv, dAb, Fd, región determinante de la complementariedad (CDR) , fragmentos de anticuerpos de cadena sencilla (scFv) , anticuerpos de cadena sencilla bivalentes, anticuerpos de fagos de cadena única, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos , y (poli) péptidos que contienen al menos un fragmento de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir unión a antígeno específico de las cepas H5N1 del virus de la influenza o un fragmento del mismo. En una forma de modalidad preferida, los anticuerpos de HA son anticuerpos monoclonales humanos.
Los anticuerpos de HA se pueden utilizar en forma no aislada o aislado. Además, los anticuerpos de HA se pueden utilizar solos o en una mezcla que incluye al menos un anticuerpo de HA (o un variante o fragmento de la misma) . Por lo tanto, los anticuerpos de HA se pueden utilizar en combinación, por ejemplo, como una composición farmacéutica que comprende dos o más anticuerpos de la invención, las variantes o fragmentos de los mismos. Por ejemplo, anticuerpos que tienen diferente, pero las actividades complementarias se pueden combinar en una única terapia para lograr un profiláctico deseado, efecto terapéutico o de diagnóstico, pero, alternativamente, anticuerpos que tienen actividades idénticas pueden ser también combinado en una sola terapia para lograr un profiláctico deseado, efecto terapéutico o de diagnóstico. Opcionalmente, la mezcla incluye además al menos otro agente terapéutico. Preferiblemente, el agente terapéutico tal como, por ejemplo, inhibidores de M2 (por ejemplo, amantadina, rimantadina) y/o inhibidores de la neuraminidasa (por ejemplo, zanamivir, oseltamivir) es útil en la profilaxis y/o tratamiento de una infección por virus de la influenza H5N1.
Por lo general, los anticuerpos de HA pueden unirse a sus parejas de unión, es decir, la influenza H5N1 virus o fragmentos de los mismos, con una constante de afinidad (Kd-valor) que es inferior a 0.2x10-4 M, 1.0x10-5 M, 1.0x10-6 M, 1.0x10-7 M, preferiblemente inferior a 1.0x10-8 M, más preferiblemente inferior a 1.0x10-9 M, más preferiblemente inferior a l.OxlO-LO M, incluso más preferiblemente inferior a 1.0x10-11 M, y en particular, inferior a 1.0x10-12 M. Las constantes de afinidad pueden variar para los isotipos de anticuerpos. Por ejemplo, la unión de un isotipo de IgM afinidad se refiere a una afinidad de unión de al menos aproximadamente 1.0x10-7 M. constantes de afinidad puede por ejemplo ser medido usando resonancia de plasmón superficial, por ejemplo, usando el sistema BIACORE (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suecia) .
Los anticuerpos HA pueden unirse a virus H5N1 de la influenza o un fragmento del mismo en forma soluble, tal como, por ejemplo, en una muestra o en suspensión o se pueden unir a H5N1 virus de la influenza o un fragmento del mismo unido o unido a un portador o sustrato, por ejemplo, placas de microtitulación, membranas y perlas, etc. Portadores o sustratos pueden estar hechos de vidrio, plástico (por ejemplo, poliestireno) , polisacáridos , nylon, nitrocelulosa, o teflón, etc. La superficie de tales soportes puede ser sólida o porosa y de cualquier conveniente dar forma. Además, los anticuerpos de HA pueden unirse a virus H5N1 de la influenza en la no-forma purificada aislada/aislado o no purificada.
Los anticuerpos HA presentan actividad neutralizante. La actividad neutralizante puede por ejemplo medirse como se describe en la Solicitud de Patente Internacional PCT/EP2007/059356 (Publicación No. WO 2008/028946, cuyo contenido se incorporan en el presente en su totalidad) . Ensayos alternativos que miden la actividad neutralizante se describen en, por ejemplo, la OMS Manual sobre Influenza Animal Diagnóstico y Vigilancia, Ginebra: Organización Mundial de la Salud, 2005, versión 2002.5.
La invención se refiere a un anticuerpo HA humano aislado que reconoce y se une a un epítopo en la subunidad HA2 de la proteína emaglutinina de influenza (HA) , caracterizado porque dicho anticuerpo HA tiene actividad neutralizante contra un virus de la influenza, por ejemplo, incluyendo HA del subtipo H5. Los ejemplos de cepas de la influenza que contienen HA de subtipo H5 tales y que son cepas importantes en vista de las amenazas pandémicas son H5N1, H5N2, H5N8 , H5N9 y. Particularmente preferidos son los anticuerpos de HA que por lo menos neutralizar la cepa de influenza H5N1. Preferiblemente, los anticuerpos de HA no dependen de un epítopo en la subunidad Hal la proteína HA para la unión a dicha proteína HA.
Definiciones El término "anticuerpo humano HA" describe una inmunoglobulina intacta incluyendo anticuerpos monoclonales , tales como anticuerpos quiméricos, humanizados o anticuerpos monoclonales humanos, o a una y/o un dominio variable que comprende un fragmento de una inmunoglobulina que compite con la inmunoglobulina intacta de unión al antígeno para la unión especifica a la pareja de unión de la inmunoglobulina, por ejemplo, H5N1. Independientemente de la estructura, el fragmento de unión al antígeno se une con el mismo antígeno que es reconocido por la inmunoglobulina intacta. Un fragmento de unión al antígeno puede comprender un péptido o polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de al menos 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 125, 150, 175, 200, o 250 residuos de aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo de HA.
El término " anticuerpo de HA " , incluye todas las clases y subclases de inmunoglobulinas conocidas en la técnica. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos de HA se pueden dividir en las cinco clases principales de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y varias de estas pueden dividirse además en subclases (isotipos) , por ejemplo, IGAL, IgA2 , IgGl, IgG2 , IgG3 e IgG4.
Los fragmentos de unión a antígeno incluyen, entre otras cosas, Fab, F (ab'), F (ab') 2, Fv, dAb, Fd, región determinante de la complementa iedad (CDR) fragmentos, anticuerpos de cadena sencilla (scFv) , anticuerpos bivalentes de cadena sencilla, anticuerpos de fagos de cadena única, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos , (poli) péptidos que contienen al menos un fragmento de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir unión a antígeno específico de la (poli) péptido, etc. Lo anterior fragmentos pueden ser producidos sintéticamente o mediante escisión enzimática o química de in unoglobulinas intactas o pueden ser diseñados genéticamente por técnicas de ADN recombinante. Los métodos de producción son bien conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en Anticuerpos: Manual de Laboratorio, Editado por: E. Harlow y D, Lañe (1988), Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Nueva York, que se incorpora en el presente por referencia. Un anticuerpo HA o fragmento de unión al antígeno del mismo pueden tener uno o más sitios de unión. Si hay más de un sitio de unión, los sitios de unión pueden ser idénticos entre sí o pueden ser diferentes.
Con respecto a los anticuerpos de HA, el término "regiones determinantes de complementariedad" (CDR) como se utiliza en el presente significa secuencias dentro de las regiones variables de los anticuerpos de HA, tales como inmunoglobulinas, que normalmente contribuyen en gran medida al sitio de unión de antígeno que es complementaria en forma y distribución de carga al epítopo reconocido en el antígeno. Las regiones CDR de anticuerpos de HA pueden ser específicas para epítopos lineales, epítopos discontinuos o epítopos conformacionales de proteínas o fragmentos de proteínas, ya sea como presentes en la proteína en su conformación nativa o, en algunos casos, como presente en las proteínas como desnaturalizado, por ejemplo,, mediante solubilización en SDS . Los epítopos de anticuerpos de HA también pueden consistir en modificaciones postraduccionales de proteínas.
El término "variante funcional", como se usa en el presente, se refiere a un anticuerpo de HA que incluye un nucleótido y/o secuencia de aminoácidos que está alterada por uno o más nucleótidos y/o aminoácidos en comparación con la de nucleótidos y/o aminoácidos secuencias de ácido del anticuerpo HA parental y que es todavía capaz de competir por la unión a la pareja de unión, por ejemplo, H5N1, con el anticuerpo de HA de los padres. En otras palabras, las modificaciones en el aminoácido y/o secuencia de nucleótidos del anticuerpo HA parental no afectan ni alteran significativamente las características de unión del anticuerpo de HA codificada por la secuencia de nucleótidos o que contiene la secuencia de aminoácidos, es decir, el anticuerpo es todavía capaz de reconocer y unirse a su objetivo. La variante funcional puede tener modificaciones de secuencia conservativas incluyendo nucleótidos y de aminoácidos sustituciones, adiciones y deleciones. Estas modificaciones pueden introducirse mediante técnicas estándar conocidas en la técnica, tales como mutagénesis dirigida al sitio y mutagénesis mediada por PCR aleatoria, y pueden incluir natural, así como los nucleótidos no naturales y aminoácidos .
Las sustituciones de aminoácidos conservativas incluyen aquellas en las que el aminoácido residuo se sustituye con un residuo de aminoácido que tiene química similar o propiedades estructurales. Las familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares han sido definidas en la técnica. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico) , cadenas laterales polares sin carga (por ejemplo, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptófano) , cadenas laterales no polares (por ejemplo, glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina , metionina) , cadenas laterales ramificadas en beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina , triptófano) . Será claro para el técnico en la materia que otras clasificaciones de familias de residuos de aminoácidos que el utilizado anteriormente también se pueden emplear. Además, una variante funcional de anticuerpo HA puede tener sustituciones de aminoácidos no conservadores, por ejemplo, sustitución de un aminoácido con un residuo de aminoácido que tiene diferentes propiedades estructurales o químicas. Variaciones menores similares también pueden incluir deleciones o inserciones de aminoácidos, o ambos. La guía para determinar que residuos de aminoácidos pueden ser sustituidos, insertados, o suprimidos sin abolir la actividad inmunologica se puede encontrar usando programas de computadora bien conocidos en la técnica.
Una mutación en una secuencia de nucleótidos puede ser una sola alteración realizada en un locus (una mutación puntual), tal como mutaciones de transición o transversión, o alternativamente, múltiples nucleótidos pueden insertarse, eliminarse o cambiarse en un único locus. Además, una o más alteraciones se pueden hacer en cualquier número de loci dentro de una secuencia de nucleótidos. Las mutaciones se pueden realizar por cualquier método adecuado conocido en la técnica.
El término "humano", cuando se aplica a los anticuerpos de HA, se refiere a moléculas que estén directamente derivadas de un ser humano o .en base a una secuencia humana. Cuando un anticuerpo HA se efectúe o esté basada en una secuencia humana y modificada posteriormente, todavía es para ser considerado humano tal como se utiliza en toda la descripción. En otras palabras, el término humano, cuando se aplica a los anticuerpos de HA se pretende incluir anticuerpos que tienen regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana o sobre la base de regiones variables o constantes que se producen en un linfocito humano o humano y modificado de alguna forma. Por lo tanto, los anticuerpos de HA humanos pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana, contener sustituciones y/o deleciones (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis al azar, por ejemplo, o específica del sitio in vitro o por mutación somática in vivo) . "En base a" como se usa en el presente, se refiere a la situación de que una secuencia de ácido nucleico puede ser copiado exactamente de una plantilla, o con mutaciones menores , como por métodos de PCR propenso a errores , o sintéticamente hecho coincidir la plantilla exactamente o con ligeras modificaciones. Moléculas semi-sintéticos basados en secuencias humanas también se consideran ser humano tal como se utiliza en el presente documento.
Anticuerpos HA cadena única La cadena pesada de un anticuerpo de HA se deriva de una línea germinal V (variable) de genes tales como, por ejemplo, el gen de línea germinal VHl o VH3 (ver, Tomlinson IM, Williams SC, Ignatovitch 0, Corbett SJ, Winter T. Secuencia V-BASE Directorio de Cambridge, Reino Unido: Centro RC de Ingeniería de Proteínas (1997)). Los anticuerpos de HA de la invención incluyen una región VH que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 80% homologa a la secuencia del gen de línea germinal VHl o VH3. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia del gen de línea germinal VHl o VH3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia del gen de línea germinal VHl o VH3. La región VH del anticuerpo HA es al menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VH codificada por el VHl o VH3 VH secuencia del gen de la línea germinal. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VH del anticuerpo HA es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por el VHl o VH3 secuencia del gen de la línea germinal, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por la secuencia del gen de línea germinal VHl o VH3.
En ciertos aspectos de la invención, el gen de línea germinal VHl es VHl (1-2), VHl (1-18), VHl (3-23), o VHl (1-69) . En otros aspectos de la invención, el gen de línea germinal VH3 es VH3 (3-21) Los anticuerpos de HA de la invención también incluyen una región (VL) de cadena ligera variable codificada por una secuencia de genes de la línea germinal humana seleccionado del grupo que consiste de VKI , VKII, VKIII, VKIV, VLl, VL2 y VL3 (ver, Tomlinson I , SC Williams, Ignatovitch 0, Corbett SJ, Winter G. V-BASE Secuencia Directorio de Cambridge, Reino Unido: . Centro MRC de Ingeniería de Proteínas (1997)). Alternativamente, los anticuerpos de HA incluyen una región VL que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 80% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal de VKI, VKII, VKIII, VKIV, VLl, VL2, o VL3. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal de VKI, VKII, VKIII, VKIV, VLl, VL2 , O VL3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia del gen de la línea germinal de VKI, VKII, VKIII, VKIV, VLl, VL2 , o VL3. La región VL del anticuerpo HA es al menos 80% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VL codificada la secuencia del gen de la línea germinal de VKI, VKII, VKIII, VKIV, VLl, VL2, o VL3. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VL del anticuerpo HA es al menos 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia del gen de la línea germinal de VKI, VKII, VKIII, V IV, VLl, VL2 , o VL3 , y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por la secuencia del gen de la línea germinal de VKI, VKII, VKIII, VKIV, VLl, VL2 , o VL3.
En ciertos aspectos de la invención, el gen de la línea germinal VKI es VKI (A20) , el gen de la línea germinal VKII es VKII (A3), el gen de la línea germinal VKIII es VKIII (A27), y el gen de la línea germinal VKIV es VKIV (B3) . En otros aspectos de la invención, el gen de la línea germinal VLl es VLl (Vl-13), VLl (Vl-16), VLl (Vl-17), o. VLl (Vl-19) . Alternativamente, el gen de la línea germinal VL2 es VL2 (VI-3) o VL2 (Vl-4). Además, el gen de la línea germinal VL3 es VL3 (V2-14) .
Las combinaciones específicas de un VH-y HL-locus se proporcionan para cada anticuerpo de HA se describe a continuación .
Las regiones CDR de los anticuerpos de HA de la invención se determinaron de acuerdo Kabat et al. (1991) como se describe en Secuencias de Proteínas de Interés Inmunológico . En ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos de HA contienen dos, tres, cuatro, cinco o todas las seis regiones CDR como se describe en el presente documento. Preferiblemente, los anticuerpos de HA contienen al menos dos de las CDR descritas en el presente.
El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-141 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 309) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 310) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 311 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 312. El VH-locus es VHl (1-18) y el locus de VL es HKIV (B3) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-141 tienen las siguientes secuencias de CDR: GYYVY (HCDRl , SEQ ID NO: 247), WISAYNGNTNYAQKFQG (HCDR2 , SEQ ID NO: 248) y SRSLDV (HCDR3, SEQ ID NO: 568). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-141 tienen las siguientes secuencias de CDR: KSSQSVLYSSNNKNYLA (LCDRl , SEQ ID NO: 569), WASTRES (LCDR2, la SEQ ID NO: 570) y QQYYSTPLT (LCDR3, SEQ ID NO: 289) .
SC06-141 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 311) gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctgggta caccttcacc ggctactatg tgtactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagaagtaga 300 tccctggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cgagcggtac gggcggttca 360 ggcggaaccg gcagcggcac tggcgggtcg acggatgttg tgatgactca gtctccagac 420 tccctggctg tgtctctggg cgagagggcc accatcaact gcaagtccag ccagagtgtt 480 ttatacagct ccaacaataa gaactactta gcttggtacc agcagaaacc aggacagcct 540 cctaagctgc tcatttactg ggcatctacc cgggaatccg gggtccctga ccgattcagt 600 ggcagcgggt ctgggacaga tttcactctc accatcagca gcctgcaggc tgaagatgtg 660 gcagtttatt actgtcagca atattatagt actcctctca ctttcggcgg agggaccaaa 720 gtggatatca aacgt 735 SC06-141 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 312) EVQLVQSGAEVKKPGASWVSCKASGYTFTGYYWWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNT YAQKFQGRVTITADKS TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRSLDVWGQGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTDWMTQSPDSLAVSLGERA TINCKSS2SVLYSS NKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQYYSTPLTFGGGTKVDIKR SC06-141 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 309) EVQLVQSGAEWKPGASV VSCKASGYTFTGYYVYWVRQAPGQGLE MGWISAY GNTNYAQKFQGRVTITADKS TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRSLDV GQGTTVTVSS SC06-141 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 310) DVV TQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWAST RESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVDIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-255 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 313) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 314) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 315 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 316. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VL1 (Vl-16) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-255 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl, SEQ ID NO: 571), GIIPIFGTTKYAPKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 572) y HMGYQVRETMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 573). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-255 tienen las siguientes secuencias de CDR: SGSTFNIGSNAVD (LCDRl , SEQ ID NO: 574), SNNQRPS (LCDR2, SEQ ID NO : 575) y AAWDDILNVPV (LCDR3, SEQ ID NO: 576) .
SC06-255 secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO: 315). gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420 ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480 ggaagcacgt tcaacatcgg aagtaatgct gtagactggt accggcagct cccaggaacg 540 gcccccaaac tcctcatcta tagtaataat cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600 tctggctcca ggtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtgggctcca gtctgaggat 660 gaggctgatt attactgtgc agcatgggat gacatcctga atgttccggt attcggcgga 720 gggaccaagc tgaccgtcct aggt 744 SC06-255 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 316) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEOTAMYYCAKHMGYQVRE MD GKGTTV VSSGTGGSGGTGSGTGGSTSYVLTQPPSASGT PGQRV ISCSGSTFNIGSNAVDWYRQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSRSGTSASLAISGLQSEDEADYY CAAWDDILNVPVFGGGTKLTVLG SC06-255 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO EVQLVESGAEWKPGSSWVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMG6IIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVKETMDVWGKG TTVTVSS SC06-255 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 314) SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSTFNIGS AVDWYRQLPGTAPKLLIYSN QRPSGVPDRFSGSRSGTSASLA ISGLQSEDEADYYCAAWDDIL VPVFGGGTKLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-257 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 317) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 318) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 319 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 320. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VL2 (Vl-4) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SCO6-257 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl , SEQ ID NO: 571), GIIPIFGTTKYAP FQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 572) y HMGYQVRETMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 573). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-257 tienen las siguientes secuencias de CDR: TGTSSDVGGYNYVS (LCDRl , SEQ ID NO: 577), EVSNRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 578) y SSYTSSSTY (LCDR3, SEQ ID NO: 579) .
SC06-257 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 319) caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcagtctgcc 420 ctgactcagc ctgccgccgt gtctgggtct cctggacagt cgatcaccat ctcctgcact 480 ggaaccagca gtgacgttgg tggttataac tatgtctcct ggtaccaaca gcacccaggc 540 aaagccccca aactcatgat ttatgaggtc agtaatcggc cctcaggggt ttctaatcgc 600 ttctctggct ccaagtctgg caacacggcc tccctgacca tctctgggct ccaggctgag 660 gacgaggctg attattactg cagctcatat acaagcagca gcacttatgt cttcggaact 720 gggaccaagg tcaccgtcct aggt 744 SC06-257 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 320) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTQSALTQPAAVSGS PGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVS RFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADY YCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVLG SC06-257 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 317) QVQLVQSGAEWKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAiyTYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSS SC06-257 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 318) QSALTQPAAVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSY SSSTYVFGTGTKVTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-260 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 321) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 322) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 323 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 324. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VLl (Vl-17) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-260 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl , SEQ ID NO: 571) , GIIPIFGTTKYAPKFQG (HCDR2, la SEQ ID NO: 572) y HMGYQVRETMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 573) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-260 tienen las siguientes secuencias de CDR: SGSRSNVGDNSVY (LCDRl , la SEQ ID NO: 580) , KNTQRPS ( LCDR2 , la SEQ ID NO: 581) y VAWDDSVDGYV (LCDR3, la SEQ ID NO: 582) .
SC06-260 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 323) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420 ctgactcagc caccctcagt ctctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgctct 480 ggaagccgct ccaacgtcgg agataattct gtatattggt atcaacacgt cccagaaatg 540 gcccccaaac tcctcgtcta taagaatact caacggccct caggagtccc tgcccggttt 600 tccggctcca agtctggcac ttcagcctcc ctggccatca ttggcctcca gtccggcgat 660 gaggctgatt attattgtgt ggcatgggat gacagcgtag atggctatgt cttcggatct 720 gggaccaagg tcaccgtcct aggt 744 SC06-260 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 324) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKH GYQVRETMDVWGKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTSYVLTQPPSVSGT PGQRVTISCSGSRSNVGDNSVYWYQHVPEMAPKLLVYKNTQRPSGVPARFSGSKSGTSASLAIIGLQSGDEADYY CVAWDDSVDGYVFGSGTKVTVLG SC06-260 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 321) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAIS VRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSS SC06-260 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 322) SYA/LTQPPSVSGTPGQRV ISCSGSRS VGDNSVYWYQHVPEMAPKLLWKNTQRPSGVPARFSGSKSGTSASLA IIGLQSGDEADYYCVAWDDS3VDGYVFGSGTKVTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple especifico de HA SC06-261 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 325) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 326) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 327 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 328. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VLl (Vl-19) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-261 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl , SEQ ID NO: 571), GIIPIFGTTKYAPKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 572) y HMGYQVRETMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 573). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-261 tienen las siguientes secuencias de CDR: SGSSSNIGNDYVS (LCDRl , SEQ ID NO: 583), DNNKRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 584) y ATWDRRPTAYW (LCDR3, SEQ ID NO: 585) .
SC06-261 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 327) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcagtctgtg 420 ttgacgcagc cgccctcagt gtctgcggcc ccaggacaga aggtcaccat ctcctgctct 480 ggaagcagct ccaacattgg gaatgattat gtatcctggt accagcagct cccaggaaca 540 gcccccaaac tcctcattta tgacaataat aagcgaccct cagggattcc tgaccgattc 600 tctggctcca agtctggcac gtcagccacc ctgggcatca ccggactcca gactggggac 660 gaggccaact attactgcgc aacatgggat cgccgcccga ctgcttatgt tgtcttcggc 720 ggagggacca agctgaccgt cctaggt 747 SC06-261 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 328) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDV GKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTQSVLTQPPSVS PGQKV ISCSGSSSNIGNDYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEANYY CA WDRRPTAYWFGGGTKLTVLG SC06-261 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 325) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGT KYAPKFQGRVTITADDF AGTVY ELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVKETMDVWGKGTTVTVSS SC06-261 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO SVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNDYVS YQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGI TGLQTGDEANYYCATWD RPTAYWFGGGTKLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-262 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 329) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 330) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 331 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 332. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKI (A20) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-262 tienen las siguientes secuencias de CDR: GSAIS (HCDRl , SEQ ID NO: 586), GISPLFGTTNYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 587) y GPKYYSEYMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 588). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-262 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQGISSYLA (LCDRl , SEQ ID NO: 589), DASTLRS (LCDR2, la SEQ ID NO : 590) y QRYNSAPPI (LCDR3, SEQ ID NO: 591) .
SC06-262 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 331) caggtacagc tgcagcagtc aggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttccggagt cattttcagc ggcagtgcga tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gccttgagtg gatgggaggg atcagccctc tctttggcac aacaaattac 180 gcacaaaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgaa cacaacctac 240 atggaggtga acagcctgag atatgaggac acggccgtgt atttctgtgc gcgaggtcca 300 aaatattaca gtgagtacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga catccagatg 420 acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480 gcgagtcagg gcattagcag ttatttagcc tggtatcagc agaagccagg gaaagttcct 540 acactcctga tctatgatgc atccactttg cgatcagggg tcccatctcg cttcagtggc 600 agtggatctg cgacagattt cactctcacc atcagcagcc tgcagcctga agatgttgca 660 acttattact gtcaaaggta taacagtgcc cccccgatca ccttcggcca agggacacga 720 ctggagatta aacgt 735 SC06-262 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 332) QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKVSGVIFSGSAISWVRQAPGQGLE MGGISPLFGTTNYAQKFQGRVTITADQS TNTTYMEVNSLRYEDTAVYFCARGPKYYSEYMDVWGKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTDIQMTQSPSSLSAS VGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKVPTLLIYDASTLRSGVPSRFSGSGSATDFTLTISSLQPEDVATYYCQ RYNSAPPITFGQGTRLEIKR SC06-262 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 329) QVQLQQSGAE KPGSSVKVSCKVSGVIFSGSAISWWQAPGQGLE MGGISPLFGTTNYAQKFQGRVTITADQS TNTTYMEVNSLRYEDTAVYFCARGPKYYSEYMDVWG GTTVTVSS SC06-262 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 330) DIQMTQSPSSLSAS.VGDRV ITCRASQGISSYLAWYQQKPGKVPTLLIYDASTLRSGVPSRFSGSGSATDFTLTI SSLQPEDVATYYCQRYNSAPPITFGQGTRLEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-268 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 333) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 334) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 335 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 336. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-268 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl, SEQ ID NO: 571), GIMGMFGTTNYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 592) y SSGYYPEYFQD (HCDR3 , SEQ ID NO: 593). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-268 tienen las siguientes secuencias de CDR: SGHKLGDKYVS (LCDRl , SEQ ID NO: 594), QDNRRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 595) y QA DSSTA (LCDR3, SEQ ID NO: 596) .
SC06-268 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 335) caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagt agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcatgggta tgtttggcac aactaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgaggac acggccgtct actactgtgc gaggtctagt 300 ggttattacc ccgaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgtgctg 420 actcagccac cctcagagtc cgtgtcccca ggacagacag ccagcgtcac ctgctctgga 480 cataaattgg gggataaata tgtttcgtgg tatcagcaga agccaggcca gtcccctgta 540 ttactcatct atcaagataa caggcggccc tcagggatcc ctgagcgatt cataggctcc 600 aactctggga acacagccac tctgaccatc agcgggaccc aggctctgga tgaggctgac 660 tattactgtc aggcgtggga cagcagcact gcggttttcg gcggagggac caagctgacc 720 gtcctaggt 729 SC06-268 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 336) QVQLVQSGAEWKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIMGMFGTTNYAQKFQGRVTITADEF TSAAYMELRSLRSEDTAVYYCARSSGYYPEYFQDWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTQSVLTQPPSESVSP GQTASVTCSGHKLGDKYVSWYQQKPGQSPVLLIYQDNRRPSGIPERFIGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQA WDSSTAVFGGGTKLTVLG SC06-268 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 333) QVQLVQSGAEV KPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIMGMFGTT YAQKFQGRVTITADEF TSAAYMELRSLRSEDTAVYYCARSSGYYPEYFQDWGQGTLVTVSS SC06-268 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 334) QSVLTQPPSESVSPGQTASVTCSGffiLGDKYVSWYQQKPGQSPVLLIYQDNRRPSGIPERFIGSNSGNTATLTIS GTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-272 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 337) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 338) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 339 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 340. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VL2 (Vl-3).
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-272 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIT (HCDRl, SEQ ID NO: 597), GIIGMFGSTNYAQNFQG (HCDR2 , SEQ ID NO: 598) y STGYYPAYLHH (HCDR3 , SEQ ID NO: 599). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-272 tienen las siguientes secuencias de CDR: TGTSSDVGGYNYVS (LCDR1 , SEQ ID NO: 577), DVSKRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 601) y SSYTSSSTHV (LCDR3, SEQ ID NO: 602) .
SC06-272 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 339) cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttctcc agttatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180 gcacagaact tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctcag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtact 300 ggttattacc ctgcatacct ccaccactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgccctg 420 actcagcctc gctcagtgtc cgggtctcct ggacagtcag tcaccatctc ctgcactgga 480 accagcagtg atgttggtgg ttataactat gtctcctggt accaacagca cccaggcaaa 540 gcccccaaac tcatgattta tgatgtcagt aagcggccct caggggtccc tgatcgcttc 600 tctggctcca agtctggcaa cacggcctcc ctgaccatct ctgggctcca ggctgaggat 660 gaggctgatt attactgcag ctcatataca agcagcagca ctcatgtctt cggaactggg 720 accaaggtca ccgtcctagg t 741 SCO6-272 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 340) QMQLVQSGAEV KPGSSVKVSCKASGGTFSSYAIT VRQAPGQGLEWMGGIIGMFGSTYAQNFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTGYYPAYLHHWGQGTLV VS SGTGGSGGTGSGTGGSTQSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPG KAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTHVFGTG TKVTVLG SC06-272 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 337) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAITWVRQAPGQGLE MGGIIGMFGSTNYAQNFQGRVTI ADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTGYYPAYLHHWGQGTLVTVSS SC06-272 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 338) QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSY SSSTHVFGTGTKV VLG El anticuerpo Fv de cadena simple especifico de HA SC06-296 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 341) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 342) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO : 343 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 344. El VH-locus es VHl (1-2) y el locus de VL es VKIII (A27).
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-296 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYYMH (HCDR1 , SEQ ID NO: 603), WINPNSGGTNYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 604) y EGKWGPQAAFDI (HCDR3 , SEQ ID NO: 605). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-296 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQSVSSSYLA (LCDRl , SEQ ID NO: 646), DASSRAT (LCDR2, la SEQ ID NO : 607) y QQYGSSLW (LCDR3, SEQ ID NO: 608) .
SC06-296 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 343) gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagggg 300 aaatggggac ctcaagcggc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac ggaaattgtg 420 atgacgcagt ctccaggcac cctgtctttg tctccagggg aaagagccac cctctcctgc 480 agggccagtc agagtgttag cagcagctac ttagcctggt accagcagaa acctggccag 540 gctcccaggc tcctcatcta tgatgcatcc agcagggcca ctgacatccc agacaggttc 600 agtggcagtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagactgga gcctgaagat 660 tttgcagtgt attactgtca gcagtatggt agctcacttt ggacgttcgg ccaagggacc 720 aaggtggaga tcaaacgt 738 SC06-296 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 344) EVQLVETGAEV KPGAS VSCKASGYTFTSYYIffiWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTS ISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGKWGPQAAFDIWGQGTMVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVMTQSPGTLSL SPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATDIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYY CQQYGSSLWTFGQGTKVEIKR SC06-296 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 341) EVQLVETGAEWKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLE MG IOTNSGGTOTAQKFQGRV M RDTS ISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGK GPQAAFDIWGQGTMVTVSS SC06-296 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 342) EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYIiAWYQQKPGQAPRLLIYDASS ATDIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSL TFGQGTKVEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SCD6-301 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 345) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 346) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 347 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 348. El VH-locus es VH1 (3-23) y el locus de VL es VKII (A3).
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-301 tienen las siguientes secuencias de CDR: IYAMS (HCDRl, SEQ ID NO: 609), AISSSGDSTYYADSVKG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 610) y AYGYTFDP (HCDR3, SEQ ID NO: 611). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-301 tienen las siguientes secuencias de CDR: RSSQSLLHSNGYNYLD (LCDRl, SEQ ID NO: 612), LGSNRAS (LCDR2, SEQ ID NO: 613) y MQALQTPL (LCDR3, SEQ ID NO: 614).
SC06-301 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 347) gaggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc atctatgcca tgagctgggt ccgccaggca 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtagta gtggtgatag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca acgccaggaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcgtat 300 ggctacacgt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag cggtacgggc 360 ggttcaggcg gaaccggcag cggcactggc gggtcgacgg aaattgtgct gactcagtct 420 ccactctccc tgcccgtcac ccctggagag ccggcctcca tctcctgcag gtctagtcag 480 agcctcctgc atagtaatgg atacaactat ttggattggt acctgcagaa gccagggcag 540 tctccacagc tcctgatcta tttgggttct aatcgggcct ccggggtccc tgacaggttc 600 agtggcagtg gatcaggcac agattttaca ctgaaaatca gcagagtgga ggctgaggat 660 gttggggttt attactgcat gcaagctcta caaactcccc tcactttcgg cggagggacc 720 aaggtggaga tcaaacgt 738 SC06-301 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 348) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYA SWVRQAPGKGLEWVSAISSSGDSTYYADSVKGRFTISRDNA RNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGYTFDPWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVLTQSPLSLPVTPGE PASISCRSSQSLLHSNGY YLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYY C QALQTPLTFGGGTKVEIKR SC06-301 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 345) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSSGDSTYYADSVKGRFTISRDNA RNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGYTFDPWGQGTL TVSS SC06-301 VT, secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 346) EIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGY YLD YLQKPGQSPQLLIYLGS HASGVPDRFSGSGSGTD FTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SCO6-307 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 349) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 350) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 351 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 352. El VH-locus es VH3 (3-21) y el locus de VL es VKIII (A27) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-307 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYSMN (HCDRl , SEQ ID NO: 615), SISSSSSYIYYVDSVKG (HCDR2 , SEQ ID NO: 616) y GGGSYGAYEGFDY (HCDR3 , SEQ ID NO: 617). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-307 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQRVSSYLA (LCDRl, SEQ ID NO: 618), GASTRAA (LCDR2, la SEQ ID NO : 619) y QQYGRTPLT ( LCDR3 , SEQ ID NO: 620) .
SC06-307 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 351) caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180 gtagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggtggt 300 gggagctacg gggcctacga aggctttgac tactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360 tcgagcggta cgggcggttc aggcggaacc ggcagcggca ctggcgggtc gacggaaatt 420 gtgctgactc agtctccagg caccctgtct ttgtctccag gggaaagagc caccctctcc 480 tgcagggcca gtcagcgtgt tagcagctac ttagcctggt accaacagaa acctggccag 540 gctcccaggc tcctcatcta tggtgcatcc accagggccg ctggcatccc agacaggttc 600 agtggcagtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagactgga gcctgaagat 660 tctgcagtgt attactgtca gcagtatggt aggacaccgc tcactttcgg cggagggacc 720 aaggtggaga tcaaacgt 738 SC06-307 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 352) QVQLVQSGGGLWPGGSLRLSCAASGFTFSSYS WVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYVDSV GRFTISRDNA KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGSYGAYEGFDYWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVLTQSPGTLS LSPGERATLSCRASQRVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRAAGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYY CQQYGRTPLTFGGGTKVEIKR SC06-307 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 349) QVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYVDSVKGRFTISRDNA K SLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGSYGAYEGFDYWGQGTLVTVSS SC06-307 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 350) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRAAGIPDRFSGSGSGTDFTLTI SRLEPEDSAVYYCQQYGRTPLTFGGGTKVEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-310 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 353) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 354) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 355 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 356. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-310 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl , SEQ ID NO: 571), GIIPIFGTTKYAPKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 572) y HMGYQVRETMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 573). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-310 tienen las siguientes secuencias de CDR: GGNNIGSKSVH ( LCDRl , SEQ ID NO: 621), DDSDRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 622) y QVWDSSSDHAV (LCDR3, SEQ ID NO: 623) .
SC06-310 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 355) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420 ctgactcagc caccctcggt gtcagtggcc ccaggacaga cggccaggat tacctgtggg 480 ggaaacaaca ttggaagtaa aagtgtgcac tggtaccagc agaagccagg ccaggcccct 540 gtgctggtcg tctatgatga tagcgaccgg ccctcaggga tccctgagcg attctctggc 600 tccaactctg ggaacacggc caccctgacc atcagcaggg tcgaagccgg ggatgaggcc ¦ 660 gactattact gtcaggtgtg ggatagtagt agtgatcatg ctgtgttcgg aggaggcacc 720 cagctgaccg tcctcggt 738 SC06-310 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 356) EVQLVESGAEV KPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEW GGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTSYVLTQPPSVSVA PGQTARITCGG NIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQ VWDSSSDHAVFGGGTQLTVLG SC06-310 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 353) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDV GKGTTVTVSS SC06-310 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 354) SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHAVFGGGTQLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-314 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 357) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 358) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 359 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 360. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VLl (vi-17) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-314 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl, SEQ ID NO: 571), GIIPIFGTTKYAPKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 572) y HMGYQVRETMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 573). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-314 tienen las siguientes secuencias de CDR: SGSSSNIGSNYVY (LCDRl , SEQ ID NO: 624), RDGQRPS (LCDR2 , SEQ ID NO : 625) y ATWDDNLSGPV (LCDR3 , SEQ ID NO: 626) .
SC06-314 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 359) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420 ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480 ggaagcagct ccaacatcgg aagtaattat gtatactggt accagcagct cccaggcacg 540 gcccccaaac tcctcatcta tagggatggt cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600 tctggctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtggactccg gtccgatgat 660 gaggctgatt attactgtgc aacatgggat gacaacctga gtggtccagt attcggcgga 720 gggaccaagc tgaccgtcct aggt 744 SC06-314 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 360) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE GGIIPIFGTTKYAPKFQGRV ITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTSYVLTQPPSASGT PGQRV ISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRDGQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSDDEADYY CATWDDNLSGPVFGGGTKLTVLG SC06-314 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 357) EVQLVESGAEVKKPGSSV VSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGT KYAPKFQGRVTITADDF AGTVY ELSSLRSEDTA YYCAKHMGYQVRE MDV GKGTTVTVSS SC06-314 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 358) SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGS YVYWYQQLPGTAPKLLIYRDGQRPSGVPDRFSGS SGTSASLA ISGLRSDDEADYYCATWDDNLSGPVFGGGTKLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-323 incluye una región variable de cadena pesada ( SEQ ID NO: 361) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 362) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 363 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 364. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKIII (A27).
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-323 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYGIS (HCDRl , SEQ ID NO: 627), DIIGMFGSTNYAQNFQG (HCDR2 , SEQ ID NO: 628) y SSGYYPAYLPH (HCDR3 , SEQ ID NO: 629). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-323 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQSVSSSYLA (LCDRl , SEQ ID NO: 646), GASSRAT (LCDR2, la SEQ ID NO: 631) y QQYGSSPRT (LCDR3, SEQ ID NO: 632) .
SC06-323 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 363) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cagggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgtaagg cctctggagg caccttctcc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagac atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180 gcacagaact tccagggcag actcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtagt 300 ggttattacc ctgcatacct cccccactgg ggccagggca ccttggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga aattgtgttg 420 acccagtctc caggcaccct gtctttgtct ccaggggaaa gagccaccct ctcctgcagg 480 gccagtcaga gtgttagcag cagctactta gcctggtacc agcagaaacc tggccaggct 540 cccaggctcc tcatctatgg tgcatccagc agggccactg gcatcccaga caggttcagt 600 ggcagtgggt ctgggacaga cttcactctc accatcagca gactggagcc tgaagatttt 660 gcagtgtatt actgtcagca gtatggtagc tcacccagaa ctttcggcgg agggaccaag 720 gtggagatca aacgt 735 SC06-323 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 364) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGISWVRQAPGQGLEWMGDIIGMFGST YAQNFQGRLTITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSGYYPAYLPH GQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVLTQSPGTLSLS PGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSPRTFGGGTKVEIKR SC06-323 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 361) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGISWVRQAPGQGLEWMGDIIGMFGST YAQNFQGRLTITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSGYYPAYLPHWGQGTLVTVSS SCO6-323 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 362) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPRTFGGGTKVEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple especifico de HA SC06-325 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 365) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 366) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 367 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 368. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VL2 (Vl-4).
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-325 tienen las siguientes secuencias de CDR: FYSMS (HCDRl , la SEQ ID NO: 633), GIIPMFGTTNYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 634) y GDKGIYYYYMDV (HCDR3 , la SEQ ID NO: 635). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-325 tienen las siguientes secuencias de CDR: TGTSSDVGGYNYVS (LCDRl , SEQ ID NO: 577), EVSNRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 578) y SSYTSSSTLV ( LCDR3 , SEQ ID NO: 636) .
SC06-325 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 367) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cggggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ttctattcta tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcatcccta tgtttggtac aacaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggtcg aatccacgag cacagcctac 240 atggaggtga gcagcctgag atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggtgat 300 aagggtatct actactacta catggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcagtctgcc 420 ctgactcagc ctgcctccgt gtctgggtct cctggacagt cgatcaccat ctcctgcact 480 ggaaccagca gtgacgttgg tggttataac tatgtctcct ggtaccaaca gcacccaggc 540 aaagccccca aactcatgat ttatgaggtc agtaatcggc cctcaggggt ttctaatcgc 600 ttctctggct ccaagtctgg caacacggcc tccctgacca tctctgggct ccaggctgag 660 gacgaggctg attattactg cagctcatat acaagcagca gcactcttgt cttcggaact 720 gggaccaagg tcaccgtcct aggt 744 SC06-325 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 368) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSFYSMS VRQAPGQGLE MGGIIPMFGTTNYAQKFQGRVTITAVES TSTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGDKGIYYYYMDV GKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTQSALTQPASVSGS PGQSITISCTGTSSDVGGYNYVS YQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADY YCSSYTSSSTLVFGTGTKVTVLG SC06-325 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 365) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSFYSMS VRQAPGQGLE MGGIIPMFGTTNYAQKFQGRVTITAVES TSTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGDKGIYYYYMDV GKGTTVTVSS SC06-325 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 366) QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGTGTKVTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-327 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 369) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 370) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 371 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 372. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-327 tienen las siguientes secuencias de CDR: THAIS (SEQ ID NO: 637), GIIAIFGTANYAQKFQG ( SEQ ID NO: 638) y GSGYHISTPFDN (SEQ ID NO: 639) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-327 tienen las siguientes secuencias de CDR: GGNNIGSKGVH (SEQ ID NO: 640) , DDSDRPS (SEQ ID NO: 622) y QVWDSSSDHW (SEQ ID NO: 642) .
SC06-327 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 371) gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cctctggagg caccttcagg acccatgcta tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tcttcggaac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag aatcacgatt accgcggacg aatccacgag tacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgtgc gagaggcagt 300 ggttatcata tatcgacacc ctttgacaac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gtcctatgtg 420 ctgactcagc caccctcggt gtcagtggcc ccaggacaga cggccaggat tacctgtggg 480 ggaaacaaca ttggaagtaa aggtgtgcac tggtaccagc agaagcctgg ccaggcccct 540 gtgctggtcg tctatgatga tagcgaccgg ccctcaggga tccctgagcg attctctggc 600 tccaactctg ggaacacggc caccctgacc atcagcaggg tcgaagccgg ggatgaggcc 660 gactattact gtcaggtgtg ggatagtagt agtgatcatg tggtattcgg cggagggacc 720 aagctgaccg tcctaggt 738 SC06-327 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 372) EVQLVETGAE KPGSSVKVSCKASGGTFRTHAISWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTA YAQKFQGRITITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGSGYHISTPFD WGQGTLVTVSSG TGGSGGTGSGTGGSTSYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKGVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWFGGGTKLTVLG SC06-327 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 369) EVQLVETGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFRTIiAISWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTANYAQKFQGRITITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGSGYHISTPFDNWGQGTLVTVSS SC06-327 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 370) SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGN IGSKGVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQWÍDSSSDHWFGGGTKLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-328 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 373) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 374) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 375 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 376. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKIII (A27) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-328 tienen las siguientes secuencias de CDR: GYAIS (HCDRl, SEQ ID NO: 643), GIIPIFGTTNYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 644) y VKDGYCTLTSCPVGWYFDL (HCDR3 , SEQ ID NO: 645). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-328 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQSVSSSYLA (LCDRl , SEQ ID NO: 646), GASSRAT (LCDR2, la SEQ ID NO : 631) y QQYGSSLT (LCDR3, SEQ ID NO: 648) .
SC06-328 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 375) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggaca catcttcagc ggctatgcaa tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgag cacagcctac 240 atggacctga gcaacttgag atctgaggac acggccgtct attactgtgc gagagtgaaa 300 gatggatatt gtactcttac cagctgccct gtcggctggt acttcgatct ctggggccgt 360 ggcaccctgg tcactgtctc gagcggtacg ggcggttcag gcggaaccgg cagcggcact 420 ggcgggtcga cggaaattgt gatgacgcag tctccaggca ccctgtcttt gtctccaggg 480 gaaagagcca ccctctcgtg cagggccagt cagagtgtta gcagcagcta cttagcctgg 540 taccagcaga aacctggcca ggctcccagg ctcctcatct ttggtgcctc cagcagggcc 600 actggcatcc cagacaggtt cagtggcagt gggtctggga cagacttcac tctcaccatc 660 agcagactgg agcctgaaga ttttgcagtg tattactgtc agcagtatgg agctcactc 720 actttcggcg gagggaccaa gctggagatc aaacgt 756 SC06-328 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 376) EVALVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGHIFSGYAISWVRQAPGQGLE MGGIIPIFGTTNYAQKFQGRVTITADQS TSTAYMDLSNLRSEDTAVYYCARVKDGYCTLTSCPVGWYFDLWGRGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVMTQ SPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEP EDFAVYYCQQYGSSLTFGGGTKLEIKR SC06-328 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 373) EVALVESGAEA/K PGSSWVSCKASGHIFSGYAISWWQAPGQGLEWMGGIIPIFGTTNyAQKFQGRVTITADQS TSTAYMDLSNLRSEDTAVYYCARVKDGYCTLTSCPVG YFDL GRGTLVTVSS SC06-328 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 374) EIVMTQSPGTLSLSPGEP^TLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLTFGGGTKLEIKR El SC06-329-hemaglutinina específica de anticuerpos Fv de una sola cadena incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 377) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 378) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 379 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 380. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKIII (A27) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-329 tienen las siguientes secuencias de CDR: SNSIS (HCDRl, SEQ ID NO: 649), GIFALFGTTDYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 650) y GSGYTTRNYFDY (HCDR3 , la SEQ ID NO: 651). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-329 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQSVSSNYLG (LCDRl , SEQ ID NO: 652), GASSRAS (LCDR2, la SEQ ID NO: 653) y QQYGSSPLT (LCDR3, SEQ ID NO: 654) .
SC06-329 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 379) gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gttaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg catcttcaga agcaattcta tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctgggcaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcgctc ttttcggaac aacagactac 180 gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcttcgac cacagtctac 240 ctggagctga gtagcctgac atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggcagt 300 ggctacacca cacgcaacta ctttgactac tggggccagg gcaccctggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac ggaaattgtg 420 ctgactcagt ctccaggcac cctgtctttg tctccagggg aaagagccac actctcctgc 480 agggccagtc agagtgttag cagcaactac ttaggctggt accagcagaa acctggccag 540 gctcccaggc tcctgatcta tggtgcatcc agcagggcca gtggcatccc agacaggttc 600 agtggcggtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca gcagactgga gcctgaagat 660 tttgcagtgt attactgtca gcagtatggt agctcacccc tcactttcgg cggagggacc 720 aaggtggaga tcaaacgt 738 SC06-329 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 380) EVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGGIFRSNSISWVRQAPGQGLEWMGGIFALFGTTDYAQKFQGRV ITADES STTVYLELSSLTSEDTAVYYCARGSGYTTRNYFDYWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVLTQSPGTLSL SPGERATLSCRASQSVSSNYLGWTQQKPGQAPRLLIYGASSRASGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYY CQQYGSSPLTFGGGTKVEIKR SC06-329 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 377) EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGIFRSNSISWWQAPGQGLE MGGIFALFGT DYAQKFQGRVTITADES STTVYLELSSLTSEDTAVYYCARGSGY RNYFDYWGQGTLVTVSS SC06-329 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 378) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC ASQSVSSNYliG TQQKPGQAPRLLIYGASS ASGIPDRFSGGGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-331 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 381) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 382) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 383 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 384. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de cadena pesada de la SC06-331anticuerpo tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl , SEQ ID NO: 571), GIIGMFGTA YAQKFQG (HCDR2, SEQ ID NO: 655) y GNYYYESSLDY (HCDR3, SEQ ID NO: 656). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-331 tienen las siguientes secuencias de CDR: GGNNIGSKSVH ( LCDRl , SEQ ID NO: 621), DDSDRPS (LCDR2, la SEQ ID NO : 622) y QVWDSSSDH (LCDR3, SEQ ID NO: 657. ) SC06-331 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 383) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgttcggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatttacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaat 300 tattactatg agagtagtct cgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgtcgtg 420 acgcagccgc cctcggtgtc agtggcccca ggacagacgg ccaggattac ctgtggggga 480 aacaacattg gaagtaaaag tgtgcactgg taccagcaga agccaggcca ggcccctgtg 540 ctggtcgtct atgatgatag cgaccggccc tcagggatcc ctgagcgatt ctctggctcc 600 aactctggga acacggccac cctgaccatc agcagggtcg aagccgggga tgaggccgac 660 tattactgtc aggtgtggga tagtagtagt gatcattatg tcttcggaac tgggaccaag 720 gtcaccgtcc taggt 735 SC06-331 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 384) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIGMFGTANYAQKFQGRVTITADEF TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYYYESSLDY GQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTQSWTQPPSVSVAP GQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQV DSSSDHYVFGTGTKVTVLG SC06-331 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 381) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIGMFGTANYAQKFQGRV ITADEF TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYYYESSLDYWGQGTLVTVSS SC06-331 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 382) QSWTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHYVFGTGTKV VLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-332 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 385) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 386) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO; 387 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 388. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKI (A20) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-332 tienen las siguientes secuencias de CDR: NFAIN (HCDRl, SEQ ID NO: 658), GIIAVFGTTKYAHKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 659) y GPHYYSSYMDV (HCDR3 , SEQ ID NO: 660). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-332 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQGISTYLA (LCDR1, SEQ ID NO: 661), AASTLQS (LCDR2, la SEQ ID NO : 662) y QKYNSAPS (LCDR3, SEQ ID NO: 663) .
SC06-332 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 387) caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtaaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg ccccttccgc aattttgcta tcaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgctg tctttgggac gacaaagtac 180 gcacataagt tccagggcag agtcaccatc accgcggacg actccacaaa tacagcttac 240 atggagctgg gcagcctgaa atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggtccc 300 cactactact cctcctacat ggacgtctgg ggcgaaggga ccacggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga catccagttg 420 acccagtctc catcctccct gtctgcatct gtaggagaca gagtcaccat cacttgccgg 480 gcgagtcagg gcattagcac ttatttagcc tggtatcagc agaaacccgg gaaagttcct 540 aaactcctga tctatgctgc atccactttg caatcagggg tcccatctcg gttcagtggc 600 agtggatctg ggacagattt cactctcacc atcagcagcc tgcagcctga agatgttgca 660 acttattact gtcaaaagta taacagtgcc ccttctttcg gccctgggac caaagtggat 720 atcaaacgt 729 SC06-332 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 388) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRNFAI WVRQAPGQGLEWMGGIIAVFGTTKYAHKFQGRV ITADDS TNTAYMELGSLKSEDTAVYYCARGPHYYSSYMDVWGEGTTVTVSSGTGGDGGTGSGTGGSTDIQLTQSPSSLSAS VGDRV ITCRASQGISTYLA YQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQ KYNSAPSFGPGTKVDIKR SC06-332 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 385) QVQLVQSGAEWKPGSSVKVSCKASGGPFP.FAINWVRQAPGQGLEWMGGIIAVFG TKYAHKFQGRV ITADDS TAYMELGSLKSEDTAVYYCARGPUYYSSYMDVWGEGTTVTVSS SC06-332 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 386) DlQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISTYLAWYQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSLQPEDVATYYCQKYNSAPSFGPGTKVDIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-33 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 389) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 390) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 391 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 392. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-334 tienen las siguientes secuencias de CDR: SNAVS (HCDR1, SEQ ID NO: 664), GILGVFGSPSYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 665) y GPTYYYSYMDV (HCDR3 , SEQ ID NO : 666). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-334 tienen las siguientes secuencias de CDR: GGNNIGRNSVH ( LCDRl , SEQ ID NO: 667), DDSDRPS (LCDR2, la SEQ ID NO : 622) y QVWHSSSDHYV (LCDR3, SEQ ID NO: 669) .
SC06-334 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 391) gaggtgcagc tggtggagac tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 ccctgcaaat cttctggaag ccccttcagg agtaatgctg tcagctgggt gcgacaggcc 120 cccggacaag ggcttgagtg ggtgggagga atcctcggtg tctttggttc accaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccaccaa cacagtccac 240 atggagctga gaggtttgag atctgaggac acggccgtgt attattgtgc gagaggtcct 300 acctactact actcctacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgtc ctatgtgctg 420 actcagccac cctcggagtc agtggcccca ggacagacgg ccaggattac ctgtggggga 480 aataacattg gaagaaatag tgtgcactgg tatcagcaga agccaggcca ggcccctgtg 540 ctggtcgtgt atgatgatag cgaccggccc tcagggatcc ctgagcgatt ttctggctcc 600 aagtctggga acacggccac cctgattatc agcagggtcg aagtcgggga tgaggccgac 660 tactactgtc aggtgtggca tagtagtagt gatcattatg tcttcggaac tgggaccaag ? 20 gtcaccgtcc taggt 735 SC06-334 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 392) EVALVETGAEVKKPGSSVKVPCKSSGSPFRSNAVSWVRQAPGQGLEWVGGILGVFGSPSYAQKFQGRVTITADES TNTVHMELRGLRSEDTAVYYCARGPTYYYSYMDVWGKGTTVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTSYVLTQPPSESVAP GQTARI CGGN IGRNSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSKSGNTATLIISRVEVGDEADYYCQV HSSSDHYVFGTGTKVTVLG SC06-334 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 389) EVALVETGAEVKKPGSSVKVPCKSSGSPFRSNAVSWVRQAPGQGLEWVGGILGVFGSPSYAQKFQGRVTITADES TNTVHMELRGLRSEDTAVYYCARGPTYYYSYMDVWGKGTTVTVSS SC06-334 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 390) SYVLTQPPSESVAPGQTARITCGG NIGRNSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGS SGNTATLIIS RVEVGDEADYYCQVWHSSSDHYVFGTGTKVTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-336 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 393) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 394) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 395 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 396. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKIII (A27) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-336 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDR1, SEQ ID NO: 670), GIFGMFGTANYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 671) y SSGYYPQYFQD (HCDR3 , SEQ ID NO: 672). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-336 tienen las siguientes secuencias de CDR: RASQSVSSSYLA (LCDRl, SEQ ID NO: 646), GASSRAT (LCDR2 , la SEQ ID NO: 631) y QQYGSSSLT ( LCDR3 , SEQ ID NO: 308) .
SC06-336 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 395) cagatgcagc tggtacaatc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcggta tgtttgggac agcaaactac 180 gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcggcctac 240 atggagctga gcagcctggg atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggtctagt 300 ggttattacc cccaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgga aattgtgatg 420 acacagtctc caggcaccct gtctttgtct ccagggcaaa gagccaccct ctcctgcagg 480 gccagtcaga gtgttagcag cagctactta gcctggtacc agcagaaacc tggccaggct 540 cccagactcc tcatgtatgg tgcatccagc agggccactg gcatcccaga caggttcagt 600 ggcagtgggt ctgggacaga cttcactctc accatcagca gactggagcc tgaagatttt 660 gcagtgtatt actgtcagca gtatggtagc tcatcgctca ctttcggcgg agggaccaag 720 ctggagatca aacgt 735 SC06-336 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 396) QMQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIFGMFGTANyAQKFQGRVTITADEF TSAAYMELSSLGSEDTAMYYCARSSGYYPQYFQDWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTEIVMTQSPGTLSLS PGQRATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL YGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC QQYGSSSLTFGGGTKLEIKR SC06-336 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 393) QMQLVQSGAE KPGSSVKVSCKASGGTFSSYAIS VRQAPGQGLEWMGGIFGMFGTA YAQKFQGRVTITADEF TSAAYMELSSLGSEDTAMYYCARSSGYYPQYFQDWGQGTLVTVSS SC06-336 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 394) EIVMTQSPGTLSLSPGQRATLSC ASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSSLTFGGGTKLEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-339 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 397) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 398) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 399 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 400. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-339 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDRl, SEQ ID NO: 303), GIIAIFHTPKYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 306) y GSTYDFSSGLDY (HCDR3 , SEQ ID NO: 725). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-339 tienen las siguientes secuencias de CDR: GGN IGSKSVH (LCDRl, SEQ ID NO: 621), DDSDRPS (LCDR2, la SEQ ID NO: 622) y QVWDSSSDHW ( LCDR3 , SEQ ID NO: 642) .
SC06-339 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 399) gaggtgcagc tggtggagtc cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg catcttcaac agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggc atcatcgcta tctttcatac accaaagtac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgaa cacagcctac 240 atggaactga gaagcctgaa atctgaggac acggccctgt attactgtgc gagagggtcc 300 acttacgatt tttcgagtgg ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360 agcggtacgg gcggttcagg cggaaccggc agcggcactg gcgggtcgac gcaggcaggg 420 ctgactcagc caccctcggt gtcagtggcc ccaggacaga cggccaggat tacctgtggg 480 ggaaacaaca ttggaagtaa aagtgtgcac tggtaccagc agaagccagg ccaggcccct 540 gtcctagtcg tctatgatga tagcgaccgg ccctcaggga tccctgagcg attctctggc 600 tccaactctg ggaacacggc caccctgacc atcagcaggg tcgaagccgg ggatgaggcc 660 gactattact gtcaggtgtg ggatagtagt agtgatcatg tggtattcgg cggagggacc 720 aagctgaccg tcctaggt 738 SC06-339 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 400) EVQLVESGAEV KPGSSVKVSCKASGGIFNSYAISWVRQAPGQGLEW GGIIAIFHTPKYAQKFQGRVTITADES TAYMELRSLKSEDTALYYCARGSTYDFSSGLDY GQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTQAGLTQPPSVSVA PGQTARITCGG NIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQ VWDSSSDHWFGGGTKLTVLG SC06-339 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 397) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGIFNSYAISWVRQAPGQGLE MGGIIAIFHTPKYAQKFQGRV ITADES TNTAYMELRSLKSEDTALYYCARGSTYDFSSGLDYWGQGTLVTVSS SC06-339 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 398) QAGLTQPPSVSVAPGQTARITCGGMNIGSK£UHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWFGGGTKLTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-342 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 401) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 402) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 403 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 404. El VH-locus es VH1 (1-69) y el locus de VL es VKIV (B3) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-342 tienen las siguientes secuencias de CDR: SYAIS (HCDR1 , SEQ ID NO: 251) , GVIPIFRTANYAQNFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 249) y LNYHDSGTYYNAPRGWFDP (HCDR3 , SEQ ID NO: 246) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-342 tienen las siguientes secuencias de CDR: KSSQSILNSSNNKNYLA ( LCDRl , SEQ ID NO: 5 245), WASTRES (LCDR2, la SEQ ID NO: 570) y QQYYSSPPT (LCDR3, SEQ ID NO: 250) .
SC06-342 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 403) caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg cttcttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgccaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatggggggg gtcatcccta tctttcgtac agcaaactac 180 ]_Q gcacagaact tccagggcag agtcaccatt accgcggacg aattcacatc gtatatggag 240 ctgagcagcc tgagatctga cgacacggcc gtgtattact gtgcgaggtt gaattaccat 300 gattcgggga cttattataa cgccccccgg ggctggttcg acccctgggg ccagggaacc 360 ctggtcaccg tctcgagcgg tacgggcggt tcaggcggaa ccggcagcgg cactggcggg 420 tcgacggaca tccagatgac ccagtctcca gactccctgg ctgtgtctct gggcgagaag 480 gccaccatca actgcaagtc cagccagagt attttaaaca gctccaacaa taagaactac 540 ttagcttggt accagcagaa accaggacag cctcctaagc tgctcattta ctgggcatct 600 acccgggaat ccggggtccc tgaccgattc agtggcagcg ggtctgggac agatttcact 660 ctcaccatca gcagcctgca ggctgaagat gtggcagttt attactgtca gcaatattat 720 agtagtccgc cgacgttcgg ccaagggacc aaggtggaaa tcaaacgt 768 SC06-342 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 404) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGFFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGVIPIFRTA YAQNFQGRVTITADEF TSYMELSSLRSDDTAVYYCARLNYHDSGTYYNAPRGWFDPWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTDIQMTQSP DSLAVSLGEKATINCKSSQSILNSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLXYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT1SS LQAEDVAVYYCQQYYSSPPTFGQGTKVEIKR SC06-342 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 401) QVQLVQSGAEWKPGSSVKVSC ASGGFFSSYAIS QAPGQGLEWMGGVIPIFRTANYAQNFQGRVTITADEF TSYMELSSLRSDDTAVYYCARL YHDSGTYY APRGWFDPWGQGTLVTVSS 25 SC06-342 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 402) DIQMTQSPDSLAVSLGEKATINCKSSQSILNSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSSPPTFGQGTKVEIKR El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-343 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 405) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 406) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 407 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 408. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VL3 (V2-14) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-343 tienen las siguientes secuencias de CDR: YYAMS (HCDRl, SEQ ID NO: 242), GISPMFGTTTYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID · NO: 307) y SSNYYDSVYDY (HCDR3 , SEQ ID NO: 290). Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-343 tienen las siguientes secuencias de CDR: GGHNIGSNSVH ( LCDRl , SEQ ID NO: 224), DNSDRPS (LCDR2 , la SEQ ID NO : 223) y QVWGSSSDH (LCDR3 , SEQ ID NO: 227) .
SC06-343 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 407) caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagt caccttcagt tactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcagcccta tgtttgggac aacaacctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt actgcggacg actccacgag tacagcctac 240 atggaggtga ggagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagatcttcg 300 aattactatg atagtgtata tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagc 360 ggtacgggcg gttcaggcgg aaccggcagc ggcactggcg ggtcgacgca gtctgtcgtg 420 acgcagccgc cctcggagtc agtggcccca ggacagacgg ccaggattac ctgtggggga 480 cataacattg gaagtaatag tgtgcactgg taccagcaga agccaggcca ggcccctgtg 540 ctggtcgtgt atgataatag cgaccggccc tcagggatcc ctgagcgatt ctctggctcc 600 aactctggga acacggccac cctgaccatc agcagggtcg aagccgggga tgaggccgac 660 tattactgtc aggtgtgggg tagtagtagt gaccattatg tcttcggaac tgggaccaag 720 gtcaccgtcc taggt 735 SC06-343 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 408) QVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGVTFSYYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISPMFGTTTYAQKFQGRVTITADDS TSTAYMEVRSLRSEDTAVYYCARSSNYYDSVYDYWGQGTLV VSSGTGGSGGTGSGTGGSTQSWTQPPSESVAP GQTARITCGGHNIGSNSVH YQQKPGQAPVLWYDNSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQV WGSSSDHYVFGTGTKVTVLG SC06-343 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 405) QVQLVQSGAEWKPGSSVKVSCKASGV FSYYi^V^QAPGQGLEWMGGISPMFGT TYAQKFQGRVTITADDS TSTAYME/RSLRSEDTAVYYCARSS YYDSVYDYWGQGTLVTVSS SC06-343 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 406) QSWTQPPSESVAPGQTARITCGGH IGSNSVHWYQQKPGQAPVLWYDNSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWGSSSDHYVFGTGTKVTVLG El anticuerpo Fv de cadena simple específico de HA SC06-344 incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 409) y una cadena ligera de la región variable (SEQ ID NO: 410) codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEQ ID NO: 411 y la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 412. El VH-locus es VHl (1-69) y el locus de VL es VLl (Vl-13) .
Los aminoácidos que comprenden las CDR se resaltan en negrita en las secuencias siguientes. Las CDR de la cadena pesada del anticuerpo SC06-344 tienen las siguientes secuencias de CDR: nyams (HCDRl , SEQ ID NO: 222) , GIIAIFGTPKYAQKFQG (HCDR2 , la SEQ ID NO: 221) y IPHYNFGSGSYFDY (HCDR3 , SEQ ID NO : 220) . Las CDR de cadena ligera del anticuerpo SC06-344 tienen las siguientes secuencias de CDR: TGSSSNIGAGYDVH (LCDRl , SEQ ID NO: 219), GNSNRPS (LCDR2, la SEQ ID NO : 231) y GTWDSSLSAYV ( LCDR3 , SEQ ID NO: 280) .
SC06-344 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 411) caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagagtc 60 tcctgcaagg cttctggaag catcttcaga aactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tttttgggac accaaagtac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcgacgag cactgtctac 240 atggaactga gcggactgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggattccc 300 cactataatt ttggttcggg gagttatttc gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360 gtctcgagcg gtacgggcgg ttcaggcgga accggcagcg gcactggcgg gtcgacgact 420 gtgttgacac agccgccctc agtgtctggg gccccagggc agagggtcac catctcctgc 480 actgggagca gctccaacat cggggcaggt tatgatgtac actggtacca gcagcttcca 540 ggaacagccc ccaaactcct catctatggt aacagcaatc ggccctcagg ggtccctgac 600 cgattctctg gctccaagtc tggcacgtca gccaccctgg gcatcaccgg actccagact 660 ggggacgagg ccgattatta ctgcggaaca tgggatagca gcctgagtgc ttatgtcttc 720 ggaactggga ccaaggtcac cgtcctaggt 750 SC06-344 secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 412) QVQLVQSSAEWKPGSSWVSCKASGSIFR YAMSWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTPKYAQKFQGRVTITADES TS VYMELSGLRSEDTAMYYCARIPHYNFGSGSYFDYWGQGTLVTVSSGTGGSGGTGSGTGGSTTVLTQPPSVSG APGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEAD YYCGTWDSSLSAYVFGTGTKVTVLG SC06-344 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 409) QVQLVQSGAEWKPGSSWVSCKASGSIFRI^AMSWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTPKYAQKFQGRV ITADES TSTVYMELSGLRSEDTA YYCARIPHYNFGSGSYFDYWGQGTLVTVSS SC06-344 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 410) TVLTQPPSVSGAPGQRV ISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNS RPSGVPDRFSGSKSGTSATLG ITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAYVFGTGTKVTVLG Anticuerpos HA IgG El anticuerpo CR6141 HA-lgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 199) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 279 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 413. El anticuerpo CR6141 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 414) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 415 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO:416.
CR6141 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 279) gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctgggta caccttcacc ggctactatg tgtactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180 . gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggctgtgt attactgtgc gagaagtaga 300 tccctggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cgagtgctag caccaagggc 360 cccagcgtgt tccccctggc ccccagcagc aagagcacca gcggcggcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggcgcc 480 ttgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc ctgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600 aaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aaacgcgtgg agcccaagag ctgcgacaag 660 acccacacct gccccccctg ccctgccccc gagctgctgg gcggaccctc cgtgttcctg "720 ttccccccca agcccaagga caccctcatg atcagccgga cccccgaggt gacctgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 900 gtgagcgtgc tcaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtgagcaaca aggccctgcc tgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 1020 ccccgggagc cccaggtgta caccctgccc cccagccggg aggagatgac caagaaccag 1080 gtgtccctca cctgtctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200 agcttcttcc tgtacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 1260 ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 1320 ctgagccccg gcaag 1335 CR6141 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 413) EVQLVQSGAEVKKPGASWVSCKASGYTFTGYYWWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKFQGRVTITADKS TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRSLDVWGQGTTV VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPE PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRV VSVLTVLHQDWLNG EYKCKVSNKALPAPIEKTISIÍAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD SRWQQG V FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6141 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 199) EVQLVQSGAEWKPGASWVSCKASGYTFTGYYVY VRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKFQGRV ITADKS TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRSLDVWGQGTTVTVSS CR6141 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 415) gatgttgtga tgactcagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300 cctctcactt tcggcggagg gaccaaagtg gatatcaaac gtgcggccgc acccagcgtg 360 ttcatcttcc ccccctccga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540 agcagcaccc tcaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600 gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaaccgggg cgagtgt 657 CR6141 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 416) DWMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVÜIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAK VQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6141 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 414) DWMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSS KNYLA YQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGGGTKVDIKR El anticuerpo CR6255 HA-lgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 417) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 418 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 419. El anticuerpo CR6255 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 420) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 421 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 422.
CR6255 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 418) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct. 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6255 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 419) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRV ITADDF AGTVYMELSSLRSEDTA YYCA HMGYQVRETMDV GKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV HKPSNT VDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6255 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 417) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKY APKFQGRVTITADDFAGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSS CR6255 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 421) tcctatgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgttctg gaagcacgtt caacatcgga agtaatgctg tagactggta ccggcagctc 120 ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccag gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240 tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acatcctgaa tgttccggta 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6255 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 422) SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSTFNIGSNAVDWYRQLPGTAPKLLIYS NQRPSGVPDRFSGSRSGTSASLA ISGLQSEDEADYYCAAWDDILNVPVFGGGTKLTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQA KATLVCLISDFYPG AVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSmKYAASSYLSLTPEQ KSHRSYSCQV HEGSTVEKTVAPTECS CR6255 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 420) SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSTFNIGSNAVD YRQLPGTAPKLLIYS NQRPSGVPDRFSGSRSGTSASLA ISGLQSEDEADYYCAA DDIL VPVFGGGTKLTVLG El anticuerpo CR6257 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 423) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en' la SEQ ID NO: 424 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 425. El anticuerpo CR6257 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 426) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 427 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 428.
CR6257 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 424) caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6257 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEO. ID NO: 425) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEW GGIIPIFGTTKY APKFQGRVTITADDFAGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTV VSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPV VS SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV HKP SNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF YVDG VEVHNA TKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA GQPREPQVYTLPPSRE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQG VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6257 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 423) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEW GGIIPIFGTTKY APKFQGRVTITADDFAGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQWETMDVWGKGTTV VSS CR6257 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 427) cagtctgccc tgactcagcc tgccgccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120 cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cacttatgtc 300 ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6257 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 428) QSALTQPAAVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGY YVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTYVFGTGTKV VLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQAN ATLVCLISDFYPG AVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQ KSHRSYS CQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR6257 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 426) QSALTQPAAVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGY YVSWYQQHPGKAPKL IYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTYVFGTGTKVTVLG El anticuerpo CR6260 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 429) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 430 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 431. El anticuerpo CR6260 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 432) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 433 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO:434.
CR6260 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 430) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6260 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 431) EVQLVESGAEVKKPGSSV VSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AG VYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPV VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEWCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH AKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE TK QVSLTCLVKG FYPSDIAVE ESNGQPE NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ SLSLSPG K CR6260 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 429) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AG VYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETTOVWGKGTTVTVSS CR6260 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 433) tcctatgtgc tgactcagcc accctcagtc tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgctctg gaagccgctc caacgtcgga gataattctg tatattggta tcaacacgtc 120 ccagaaatgg cccccaaact cctcgtctat aagaatactc aacggccctc aggagtccct 180 gcccggtttt ccggctccaa gtctggcact tcagcctccc tggccatcat tggcctccag 240 tccggcgatg aggctgatta ttattgtgtg gcatgggatg acagcgtaga tggctatgtc 300 ttcggatctg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6260 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 434) SYVLTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSRSNVGDNSVYWYQHVPE APKLLVYK TQRPSGVP ARFSGSKSGTSASLAIIGLQSGDEADYYCVAWDDSVDGYVFGSGTKVTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQA NKATLVCLISDFYPGAVTVA KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKY AASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV HEGSTVEKTVAPTECS CR6260 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 432) SYVLTQPPSVSGTPGQRVTISCSGSRSNVGDNSVYWYQHVPE APKLLVYKNTQRPSGVP ARFSGSKSGTSASLAIIGLQSGDEADYYCVAWDDSVDGYVFGSGTKV VLG El anticuerpo CR6261 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 435) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 436 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 437. El anticuerpo CR6261 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 438) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 439 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 440.
CR6261 Secuencia de nucleotido de cadena pesada (SEQ ID NO 436) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6261 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 437) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVY ELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRE MDWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNH PSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF WYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNG EYKCKVSNKALPAPIEKTISKA GQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPE YKTTPPVLDSDGSFFLYSKL VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG K CR6261 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 435) EVQLVESGAEVKKPGSSV VSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDV GKGTTVTVSS CR6261 Secuencia de nucleotido de cadena ligera (SEQ 439) cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aatgattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240 actggggacg aggccaacta ttactgcgca acatgggatc gccgcccgac tgcttatgtt 300 gtcttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctaggtgcgg ccgcaggcca gcccaaggcc 360 gctcccagcg tgaccctgtt ccccccctcc tccgaggagc tgcaggccaa caaggccacc 420 ctggtgtgcc tcatcagcga cttctaccct ggcgccgtga ccgtggcctg gaaggccgac 480 agcagccccg tgaaggccgg cgtggagacc accaccccca gcaagcagag caacaacaag 540 tacgccgcca gcagctacct gagcctcacc cccgagcagt ggaagagcca ccggagctac 600 agctgccagg tgacccacga gggcagcacc gtggagaaga ccgtggcccc caccgagtgc 660 CR6261 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 440) QSVLTQPPSVSAAPGQKV ISCSGSSSNIGNDWSWYgQLPGTAPKLLIYDN KRPSGIPDRFSGSKSGTSATLG ITGLQTGDEANYYCATWDRRPTAYWFGGGTKLTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYP GAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQS NKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR626lVIi secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 438) QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNDYVSWYQQLPGTAPKLLIYDN KRPSGIPDRFSGSKSGTSATLG ITGLQTGDEANYYCAT DRRPTAYWFGGGTKLTVLG El anticuerpo CR6262 HA-IgG específica incluye una región- variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 441) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 442 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 443. El anticuerpo CR6262 específico de HA de igG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 444) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 445 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 446.
CR6262 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 442) caggtacagc tgcagcagtc aggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttccggagt cattttcagc ggcagtgcga tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gccttgagtg gatgggaggg atcagccctc tctttggcac aacaaattac 180 gcacaaaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgaa cacaacctac 240 atggaggtga acagcctgag atatgaggac acggccgtgt atttctgtgc gcgaggtcca 300 aaatattaca gtgagtacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6262 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 443) QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKVSGVIFSGSAISWVRQAPGQGLE MGGISPLFGTTNYAQKFQGRVTITADQS T TTYMEV SLRYEDTAVYFCARGPKYYSEYI^VWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSW SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEWCVWDVSHEDPEWFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPEN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG CR6262 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 441) QVQLQQSGAEWKPGSSWVSCKVSGVIFSGSAISWVRQAPGQGLEWMGGISPLFGTTNYAQKFQGRVTITADQS TNTTYMEVNSLRYEDTAVYFCARGPKYYSEYMDVWGKGTTVTVSS CR6262 Secuencia de nucleotido de cadena ligera (SEQ ID NO: 445) gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcagaagcca 120 gggaaagttc ctacactcct gatctatgat gcatccactt tgcgatcagg ggtcccatct 180 cgcttcagtg gcagtggatc tgcgacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaagg tataacagtg cccccccgat caccttcggc 300 caagggacac gactggagat taaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360 tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642 CR6262 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 446) DIQMTQSPSSLSASVGDRV ITCRASQGISSYLAWYQQKPGKVPTLLIYDASTLRSGVPSRFSGSGSATDFTLTI SSLQPEDVATYYCQRYNSAPPITFGQGTRLEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLN FYPREAKVQ KV DNALQSGNSQESV EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6262 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 444) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSYLA YQQKPGKVPTLLIYDASTLRSGVPSRFSGSGSATDFTLTI SSLQPEDVATYYCQRYNSAPPITFGQGTRLEIKR El anticuerpo CR6268 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 447) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 448 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 449. El anticuerpo CR6268 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 450) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 451 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO -.452.
CR6268 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 448) caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagt agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcatgggta tgtttggcac aactaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgaggac acggccgtct actactgtgc gaggtctagt 300 ggttattacc ccgaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cg'tgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6268 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 449) QVQLVQSGAEVKKPGSSWVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEW GGIMGMFGTTNYAQKFQGRVTITADEF TSAAY ELRSLRSEDTAVYYCARSSGYYPEYFQDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPV VS SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKF WYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKGF YPSDIAVEV^SNGQPEMSÍY TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGIWFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6268 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 447) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIMG FGTTNYAQKFQGRVTITADEF TSAAYMELRSLRSEDTAVYYCARSSGYYPEYFQDWGQGTLVTVSS CR6268 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 451) cagtctgtgc tgactcagcc accctcagag tccgtgtccc caggacagac agccagcgtc 60 acctgctctg gacataaatt gggggataaa tatgtttcgt ggtatcagca gaagccaggc 120 cagtcccctg tattactcat ctatcaagat aacaggcggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttcataggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctctg 240 gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacagcagca ctgcggtttt cggcggaggg 300 accaagctga ccgtcctagg tgcggccgca ggccagccca aggccgctcc cagcgtgacc 360 ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctcatc 420 agcgacttct accctggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgacagcag ccccgtgaag 480 gccggcgtgg agaccaccac ccccagcaag cagagcaaca acaagtacgc' cgccagcagc 540 tacctgagcc tcacccccga gcagtggaag agccaccgga gctacagctg ccaggtgacc 600 cacgagggca gcaccgtgga gaagaccgtg gcccccaccg agtgcagc 648 CR6268 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 452) QSVLTQPPSESVSPGQTASVTCSGHKLGDKYVSWYQQKPGQSPVLLIYQDNRRPSGIPERFIGSNSGNTATLTIS GTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQA KATLVCLISDFYPGAVTV AWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK VAPTECS CR6268 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 450) QSVLTQPPSESVSPGQTASVTCSGHKLGDKYVSWYQQKPGQSPVLLIYQDNRRPSGIPERFIGSNSGNTATLTIS GTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVLG El anticuerpo CR6272 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 453) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 454 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 455. El anticuerpo CR6272 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 456) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 457 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 458.
CR6272 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 454) cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttctcc agttatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180 gcacagaact tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctcag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtact 300 ggttattacc ctgcatacct ccaccactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6272 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 455) Q QLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAITWVRQAPGQGLEWMGGIIGMFGSTNYAQNFQGRVTITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTGYYPAYLHHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSW SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV F WYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQG VFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG CR6272 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 453) QMQLVQSGAEVKKPGSS VSCKASGGTFSSYAIT VRQAPGQGLEWMGGIIGMFGST YAQNFQGRV ITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSTGYYPAYLHHWGQGTLVTVSS CR6272 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 457) cagtctgccc tgactcagcc tcgctcagtg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgatgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120 cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180 cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 caggctgagg atgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactcatgtc 300 ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6272 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 458) QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTHVFGTGTKVTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPG AVWA KADSSPVKAGVETTTPSKQS NKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR6272 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 456) GSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTHVFGTGTKVTVLG El anticuerpo CR696 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 459) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 460 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 461. El anticuerpo CR6296 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 462) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 463 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 464.
CR6296 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO 460) gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagggg 300 aaatggggac ctcaagcggc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accg'ggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6296 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 461) EVQLVETGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMG INPNSGGTNYAQKFQGRV TRDTS ISTAY ELSRLRSDDTAVYYCAREGKWGPQAAFDI GQGTMVTVSSAST GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSW SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVL VLHQDWLNGKEYKCKVSN ALPAPIE TISKA GQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K CR62 6 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 459) EVQLVETGAEV KPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLE MGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTS ISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGKWGPQAAFDI GQGTMVTVSS CR6296 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 463) gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat gatgcatcca gcagggccac tgacatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcactttg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggagat caaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360 tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642 CR6296 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 464) EIV TQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATDIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSL TFGQGTKVEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6296 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 462) EIV TQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATDIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPFJDFAVYYCQQYGSSLWTFGQGTKVEIKR El anticuerpo CR6301 HA-IgG especifica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 465) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 466 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 467. El anticuerpo CR6301 especifico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 468) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 469 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 470.
CR6301 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 466) gaggtgcagc tggtagagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc atctatgcca tgagctgggt ccgccaggca 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtagta gtggtgatag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca acgccaggaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagcgtat 300 ggctacacgt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcgag tgctagcacc 360 aagggcccca gcgtgttccc cctggccccc agcagcaaga gcaccagcgg cggcacagcc 420 gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgag ctggaacagc 4B0 ggcgccttga ccagcggcgt gcacaccttc cccgccgtgc tgcagagcag cggcctgtac 540 agcctgagca gcgtggtgac cgtgcccagc agcagcctgg gcacccagac ctacatctgc 600 aacgtgaacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaac gcgtggagcc caagagctgc 660 gacaagaccc acacctgccc cccctgccct gcccccgagc tgctgggcgg accctccgtg 720 ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc ctcatgatca gccggacccc cgaggtgacc 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag ccccgggagg agcagtacaa cagcacctac 900 cgggtggtga gcgtgctcac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcctgcc cccatcgaga agaccatcag caaggccaag 1020 ggccagcccc gggagcccca ggtgtacacc ctgcccccca gccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctcacctg tctggtgaag ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 1200 gacggcagct tcttcctgta cagcaagctc accgtggaca agagccggtg gcagcagggc 1260 aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagagc 1320 ctgagcctga gccccggcaa g 1341 CR6301 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 467) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISSSGDSTYYADSVKGRFTISRDNA RNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGYTFDPWGQGTLV VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV DYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV HKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVCGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPGK CR6301 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 465) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSIYAMS VRQAPGKGLEWVSAISSSGDSTYYADSVKGRFTISRDNA RNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGYTFDPWGQGTLVTVSS CR6301 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 469) gaaattgtgc tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccc 300 ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaacgtg cggccgcacc cagcgtgttc 360 atcttccccc cctccgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg 420 aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480 ggcaacagcc aggagagcgt gaccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540 agcaccctca ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgc ctgcgaggtg 600 acccaccagg gcctgagcag ccccgtgacc aagagcttca accggggcga gtgt 654 CR6301 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 470) EIVLTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTD FTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKV QWKVDNALQSGNSQESV EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6301 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID N0:468) EIVLTQSPLSLPV PGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLD YLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTD FTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKR El anticuerpo CR6307 HA-lgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 471) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 472 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 473. El anticuerpo CR6307 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 474) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 475 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 476.
CR6307 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 472) caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180 gtagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaggtggt 300 gggagctacg gggcctacga aggctttgac tactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360 tcgagtgcta gcaccaaggg ccccagcgtg ttccccctgg cccccagcag caagagcacc 420 agcggcggca cagccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 480 gtgagctgga acagcggcgc cttgaccagc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 540 agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc 600 cagacctaca tctgcaacgt gaaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caaacgcgtg 660 gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccccccct gccctgcccc cgagctgctg 720 ggcggaccct ccgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctcat gatcagccgg 780 acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg aggaccccga ggtgaagttc 840 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagccccg ggaggagcag 900 tacaacagca cctaccgggt ggtgagcgtg ctcaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ctgcccccat cgagaagacc 1020 atcagcaagg ccaagggcca gccccgggag ccccaggtgt acaccctgcc ccccagccgg 1080 gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctc acctgtctgg tgaagggctt ctaccccagc 1140 gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1200 cctgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260 cggtggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320 tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggcaag 1356 CR6307 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 473) QVQLVQSGGGLV PGGSLRLSCAASGFTFSSYSMN VRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYVDSVKGRFTISRDNA KWSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGSYGAYEGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCL VKDYFPEPV VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC DKTHTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEWCVWDVSHEDPEWF WYVDGVEVHNAKTKPREEQ Y STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSP GK CR6307 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 471) QVQLVQSGGGLWPGGSLRLSCAASGFTFSSYSM WVRQAPG GLEWVSSISSSSSYIYYVDSVKGRFTISRDNA KNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGGSYGAYEGFDYWGQGTLV VSS CR6307 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 475) gaaattgtgc tgactcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gcgtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccgctgg catcccagac 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag actggagcct 240 gaagattctg cagtgtatta ctgtcagcag tatggtagga caccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgtgcggcc gcacccagcg tgttcatctt ccccccctcc 360 gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420 cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480 agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctcaccctg 540 agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600 agcagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639 CR6307 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 476) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRAAGIPDRFSGSGSGTDFTLTI SRLEPEDSAVYYCQQYGRTPLTFGGGTKVEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6307 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 474) EIVLYQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRAAGIPDRFSGSGSGTDFTLTI SRLEPEDSAVYYCQQYGRTPLTFGGGT VEIKR El anticuerpo CR6310 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 477) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 478 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 479. El anticuerpo CR6310 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 480) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 481 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO:482.
CR6310 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 478) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt. gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6310 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 479) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTT YAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDV GKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV HKPSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP DTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH AKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQD LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG K CR6310 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 477) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPEWMGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDV GKGTTVTVSS CR6310 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 481) tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgc tgtgttcgga 300 ggaggcaccc agctgaccgt cctcggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6310 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 482) SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGG NIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHAVFGGGTQLTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPV AGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR6310 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 480) SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHAVFGGGTQLTVLG El anticuerpo CR6314 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 483) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 484 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 485. El anticuerpo CR6314 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 486) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 487 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 488.
CR6314 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 484) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60 tcttgcaagg cttctggagg ccccttccgc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcctgagtg gatgggaggg atcatcccta tttttggtac aacaaaatac 180 gcaccgaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg atttcgcggg cacagtttac 240 atggagctga gcagcctgcg atctgaggac acggccatgt actactgtgc gaaacatatg 300 gggtaccagg tgcgcgaaac tatggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6314 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 485) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTAMYYCAKHMGYQVRETMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVS SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKP DTL ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF WYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPE WYKTTPPVbDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K CR6314 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 483) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFRSYAISWVRQAPGQGPE MGGIIPIFGTTKYAPKFQGRVTITADDF AGTVYMELSSLRSEDTA YYCAKHMGYQVRETMEVWGKGTTVTVSS CR6314 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 487) tcctatgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60 tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120 ccaggcacgg cccccaaact cctcatctat agggatggtc agcggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggactccgg 240 tccgatgatg aggctgatta ttactgtgca acatgggatg acaacctgag tggtccagta 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6314 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 488) SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRDGQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLA ISGLRSDDEADYYCATWDDNLSGPVFGGGTKLTVLGAAAQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGA VTVA KADSSPVKAGVETTTPSKQSN KYAASSYLSLTPGQ KSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSG CR6314 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 486) SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRDGQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLA ISGLRSDDEADYYCAT DDNLSGPVFGGGTKLTVLG El anticuerpo CR6323 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 489) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 490 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 491. El anticuerpo CR6323 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 492) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 493 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 494.
CR6323 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 490) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cagggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgtaagg cctctggagg caccttctcc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagac atcatcggta tgtttggttc aacaaactac 180 gcacagaact tccagggcag actcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagtagt 300 ggttattacc ctgcatacct cccccactgg ggccagggca ccttggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6323 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 491) EVQLVESGAEVKKPGSSV VSCKASGGTFSSYGISWVRQAPGQGLE MGDIIGMFGSTNYAQNFQGRLTITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSGYYPAYLPH GQGTLV VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSWLFPP PKDTLMISRTPEV CVVVDVSHEDPEWFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQWTLPPSREE TK QVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPE NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG CR6323 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 489) EVQLVESGAEV KPGSSV VSCKASGGTFSSYGISWVRQAPGQGLEWMGDIIGMFGSTNYAQNFQGRLTITADES TSTAY ELSSLRSEDTAVYYCARSSGYYPAYLPHWGQGTLVTVSS CR6323 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 493) gaaattgtgt tgacccagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacccag aactttcggc 300 ggagggacca aggtggagat caaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360 tccgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642 CR6323 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 494) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAWYCQQYGSSPRTFGGGTKVEIKRAAAPSWIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6323 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 492) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPRTFGGGTKVEIKR El anticuerpo CR6325 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 495) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 496 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 497. El anticuerpo CR6325 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 498) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 499 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 500.
CR6325 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 496) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc cggggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ttctattcta tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcatcccta tgtttggtac aacaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggtcg aatccacgag cacagcctac 240 atggaggtga gcagcctgag atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggtgat 300 aagggtatct actactacta catggacgtc tggggcaaag ggaccacggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag CR6325 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 497) EVQLVESGAEWKPGSSWVSCKASGGTFSFYSMSWVRQAPGQGLE MGGIIPMFGTTNYAQKFQGRVTITAVES TSTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGDKGIYYYYMDVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPTTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV VPSSSLGTQTYIC VNHKPSNT VDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFiSIWYVDGVEVHNAKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPFJSnSTY TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNWSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG K CR6325 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 495) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSFYS SWVRQAPGQGLE GGIIPMFGTTNYAQKFQGRVTITAVES TSTAYMEVSSLRSEDTAVYYCARGDKGIYYYYMDVWGKGTTVTVSS CR6325 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 499) cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60 tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120 cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaatcggcc ctcaggggtt 180 tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240 caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactcttgtc 300 ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6325 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 500) QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGY YVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGTGTKVTVLGAAAGQPKAAPSV LFPPSSEELQA KATLVCLISDFYPG AVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSN KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV HEGSTVEKTVAPTECS CR6325 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 498) QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVS RPSGVSNRFSGSKSGNTASL TISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGTGTKV VLG El anticuerpo CR6327 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 501) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 502 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 503. El anticuerpo CR6327 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 504) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 505 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 506.
CR6327 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 502) gaggtgcagc tggtggagac cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cctctggagg caccttcagg acccatgcta tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tcttcggaac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag aatcacgatt accgcggacg aatccacgag tacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt atttctgtgc gagaggcagt 300 ggttatcata tatcgacacc ctttgacaac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6327 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 503) EVQLVETGAEVKKPGSSV VSCKASGGTFRTHAISWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTA YAQKFQGRITITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGSGYHISTPFDNWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEP\M/SV™SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVWVPSSSLGTQTYICWVIWKPSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKP DTLMISRTPEV CVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVH AKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQD LNGKEYKCKVSN ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPFJSINYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSV HEALHNHYTQKSLSLSPG K CR6327 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 501) EVQLVETGAEVKKPGSSV VSCKASGGTFRTHAISWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTANYAQKFQGRITITADES TSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGSGYHISTPFDN GQGTLVTVSS CR6327 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 505) tcctatgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa ggtgtgcact ggtaccagca gaagcctggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gt.gaa.ggccg gcgtggagac caccaccc.cc a.gcaagca.ga gca.a.caacaa. gt.acgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6327 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 506) SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKGVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWFGGGTKLTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQA KATLVCLISDFYPGAV TVA KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQ KSHRSYSCQV HEGSTVEKTVAPTECS CR6327 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 504) SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKGVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWFGGGTKLTVLG El anticuerpo CR6328 HA-lgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 507) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 508 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 509. El anticuerpo CR6328 especifico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 510) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 511 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 512.
CR6328 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 508) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggaca catcttcagc ggctatgcaa tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacc aatccacgag cacagcctac 240 atggacctga gcaacttgag atctgaggac acggccgtct attactgtgc gagagtgaaa 300 gatggatatt gtactcttac cagctgccct gtcggctggt acttcgatct ctggggccgt 360 ggcaccctgg tcactgtctc gagtgctagc accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcc 420 cccagcagca agagcaccag cggcggcaca gccgccctgg gctgcctggt gaaggactac 480 ttccccgagc ccgtgaccgt gagctggaac agcggcgcct tgaccagcgg cgtgcacacc 540 ttccccgccg tgctgcagag cagcggcctg tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgccc 600 agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc 660 aaggtggaca aacgcgtgga gcccaagagc tgcgacaaga cccacacctg ccccccctgc 720 cctgcccccg agctgctggg cggaccctcc gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac 780 accctcatga tcagccggac ccccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 840 gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 900 aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct caccgtgctg 960 caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcct 1020 gcccccatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc cccgggagcc ccaggtgtac 1080 accctgcccc ccagccggga ggagatgacc aagaaccagg tgtccctcac ctgtctggtg 1140 aagggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 1200 aactacaaga ccaccccccc tgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 1260 ctcaccgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 1320 gaggccctgc acaaccacta cacccagaag agcctgagcc tgagccccgg caag 1374 CR6328 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 509) EVQLVESGAEWKPGSSVKVSCKASGHIFSGYAISWVRQAPGQGLEW GGIIPIFGTTNYAQKFQGRV ITADQS TSTAYMDLSNLRSEDTAVYYCARVKDGYCTLTSCPVGWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKDYFPEPVTVSW SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV VPSSSLGTQTYIC V HKPSNTKVDKR VEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEWF WYVDGVEVHNAKT PREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ SLSLSPGK CR6328 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 507) EVQLVESGAEWKPGSSVKVSCKASGHIFSGYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTTNYAQKFQGRVTITADQS TSTAYMDLSNLRSEDTAVYYCARVKDGYCTLTSCPVGWYFDL GRGTLVTVSS CR6328 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 511) gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcgtgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatcttt ggtgcctcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcactcac tttcggcgga 300 gggaccaagc tggagatcaa acgtgcggcc gcacccagcg tgttcatctt ccccccctcc 360 gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420 cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag 480 agcgtgaccg agcaggacag caaggactcc acctacagcc tgagcagcac cctcaccctg 540 agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600 agcagccccg tgaccaagag cttcaaccgg ggcgagtgt 639 [05]CR6328 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 512) EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLTFGGGTKLEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVD NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEV HQGLSSPVTKSF RGEC CR6328 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 510) EIV TQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSLTFGGGTKLEIKR El anticuerpo CR6329 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 513) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 514 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 515. El anticuerpo CR6329 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 516) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 517 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 518.
CR6329 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO 514) gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gttaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg catcttcaga agcaattcta tcagttgggt gcgacaggcc 120 cctgggcaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcgctc ttttcggaac aacagactac 180 gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcttcgac cacagtctac 240 ctggagctga gtagcctgac atctgaggac acggccgttt attactgtgc gagaggcagt 300 ggctacacca cacgcaacta ctttgactac tggggccagg gcaccctggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcg.gcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 rrrnannfns r-. f nr.ataat aat nna mf rt artrrsrmnn arrrras t man lraa R4D tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6329 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 515) EVQLVQSGAEVKKPGSSWVSCKASGGIFRSNSISWVRQAPGQGLE GGIFALFGTTDYAQKFQGRV ITADES STTVYLELSSLTSEDTAVYYCARGSGYTTRNYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCD THTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF WYVDGVEVH AKTKPREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNG EY CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPFJSTNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPG K CR6329 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 513) EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGIFRSNSISWVRQAPGQGLEWMGGIFALFGTTDYAQKFQGRV ITADES STTVYLELSSLTSEDTAVYYCARGSGYTTR YFDYWGQGTLVTVSS Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: gaaattgtgc tgactcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccaca 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaactact taggctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctgatctat ggtgcatcca gcagggccag tggcatccca 180 gacaggttca gtggcggtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacccct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggagat caaacgtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6329 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 518) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLG YQQKPGQAPRLLIYGASSRASGIPDRFSGGGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKRAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAV WA KADSSP AGVETTTPSKQSNN YAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR6329 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 516) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLGWYQQKPGQAPRLLIYGASSRASGIPDRFSGGGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGGGTKVEIKR El anticuerpo CR6331 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada ( SEQ ID NO: 519) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 520 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 521. El anticuerpo CR6331 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 522) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 523 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 524.
CR6331 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO 520) gaggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcggta tgttcggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatttacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaat 300 tattactatg agagtagtct cgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6331 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 521) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLE MGGIIGMFGTANYAQKFQGRV ITADEF TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYYYESSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQY STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPE NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH HYTQKSLSLSPGK CR6331 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 519) EVQLVESGAEWKPGSSWVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEW GGIIGMFGTA YAQKFQGRVTITADEF TSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNYYYESSLDYWGQGTLVTVSS CR6331 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 523) cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatta tgtcttcgga 300 actgggacca aggtcaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6331 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 524) QSWTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQ PGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQV DSSSDHWFGTGTKV VLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQS WKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQWHEGSTVEKTVAPTECS CR6331 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 522) QSWTQPPSVSVAPGQTARITCGG NIGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHYVFGTGTKV VLG El anticuerpo CR6332 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 525) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 526 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 527. El anticuerpo CR6332 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 528) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 529 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 530.
CR6332 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO 526) caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtaaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg ccccttccgc aattttgcta tcaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgctg tctttgggac gacaaagtac 180 gcacataagt tccagggcag agtcaccatc accgcggacg actccacaaa tacagcttac 240 atggagctgg gcagcctgaa atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggtccc 300 cactactact cctcctacat ggacgtctgg ggcgaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6332 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 527) QVQLVQSGAEVKKPGSSVWSCKASGGPFRNFAINWVRQAPGQGLEWMGGIIAVFGTTKYAHKFQGRVTITADDS NTAYMELGSLKSEDTAVYYCARGPHYYSSYMD GEGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPV VSWNSGALTSGYHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV CVWDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPE NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD SRWQQG VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6332 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 525) QVQLVQSGAEV KPGSSWVSCKASGGPFRNFAINWVRQAPGQGLEWMGGIIAVFGTTKYAHKFQGRV ITADDS TNTAYMELGSLKSEDTAVYYCARGPHYYSSYMDVWGEGTTVTVSS CR6332 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 529) gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc acttatttag cctggtatca gcagaaaccc 120 gggaaagttc ctaaactcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180 cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccttcttt cggccctggg 300 accaaagtgg atatcaaacg tgcggccgca cccagcgtgt tcatcttccc cccctccgac 360 gagcagctga agagcggcac cgccagcgtg gtgtgcctgc tgaacaactt ctacccccgg 420 gaggccaagg tgcagtggaa ggtggacaac gccctgcaga gcggcaacag ccaggagagc 480 gtgaccgagc aggacagcaa ggactccacc tacagcctga gcagcaccct caccctgagc 540 aaggccgact acgagaagca caaggtgtac gcctgcgagg tgacccacca gggcctgagc 600 agccccgtga ccaagagctt caaccggggc gagtgt 636 CR6332 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 530) DIQLTQSPSSLSASVGDRV ITCRASQGISTYLAWYQQKPGKVPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDVATYYCQKYNSAPSFGPGT VDIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDN ALQSGNSQESV EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6332 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 528) DIQLTQSPSSLSASVGDRV ITCRASQGISTYLAWYQQKPGKVP LLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDVATYYCQKYNSAPSFGPGTKVDIKR El anticuerpo CR6334 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 531) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 532 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 533. El anticuerpo CR6334 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 534) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 535 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 536.
CR6334 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO 532) gaggtgcagc tggtggagac tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 ccctgcaaat cttctggaag ccccttcagg agtaatgctg tcagctgggt gcgacaggcc 120 cccggacaag ggcttgagtg ggtgggagga atcctcggtg tctttggttc accaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccaccaa cacagtccac 240 atggagctga gaggtttgag atctgaggac acggccgtgt attattgtgc gagaggtcct 300 acctactact actcctacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtgcacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtgcagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6334 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 533) EVQLVETGAEVKKPGSSVKVPCKSSGSPFRSNAVSWVRQAPGQGLEWVGGILGVFGSPSYAQKFQGRVTITADES TNTVHMELRGLRSEDTAVYYCARGPTYYYSY DVWGKGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC V HKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLY GF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6334 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 531) EVQLVETGAEVKKPGSSVKVPCKSSGSPFRSNAVSWVRQAPGQGLEWVGGILGVFGSPSYAQKFQGRV ITADES TNTVHMELRGLRSEDTAVYYCARGPTYYYSYMDVWGKGTTVTVSS CR6334 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 535) tcctatgtgc tgactcagcc accctcggag tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaataacat tggaagaaat agtgtgcact ggtatcagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt gtatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttttctggct ccaagtctgg gaacacggcc accctgatta tcagcagggt cgaagtcggg 240 gatgaggccg actactactg tcaggtgtgg catagtagta gtgatcatta tgtcttcgga 300 ac gggacca aggtcaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6334 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 536) SYVLTQPPSESVAPGQTARITCGGN IGRNSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSKSGNTATLIIS RVEVGDEADYYCQVWHSSSDHYVFGTGTKVTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQA KATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPV AGVETTTPSKQS KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV HEGSTVEKTVAPTECS CR6334 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 534) SYVLTQPPSESVAPGQTARITCGGNNIGR SVH YQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSKSGNTATLIIS RVEVGDEADYYCQVWHSSSDHYVFGTGTKVTVLG El anticuerpo CR6336 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 537) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 538 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 539. El anticuerpo CR6336 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 540) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 541 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 542.
CR6336 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 538) cagatgcagc tggtacaatc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcttcggta tgtttgggac agcaaactac 180 gcgcagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cgcggcctac 240 atggagctga gcagcctggg atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggtctagt 300 ggttattacc cccaatactt ccaggactgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6336 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 539) QMQLVQSGAEV KPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIFGMFGTANYAQKFQGRVTITADEF TSAAYMELSSLGSEDTAMYYCARSSGYYPQYFQDWGQGTLVTVSSAST GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC V HKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPEN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK CR6336 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 537) QMQLVQSGAEWKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEW GGIFGMFGTANYAQKFQGRVTITADEF TSAAY ELSSLGSEDTAMYYCARSSGYYPQYFQDWGQGTLVTVSS CR6336 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 541) gaaattgtga tgacacagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggca aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120 cctggccagg ctcccagact cctcatgtat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcatcgct cactttcggc 300 ggagggacca agctggagat caaacgtgcg gccgcaccca gcgtgttcat cttccccccc 360 tccgacgagc agctgaagag cggcac.cgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420 ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480 gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctcacc 540 ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600 ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cggggcgagt gt 642 CR6336 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 542) EIVMTQSPGTLSLSPGQRATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSSLTFGGGTKLEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLL NFYPREAKVQ KV DNALQSGNSQESV EQDSKDSTYSLSSTLTLS ADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6336 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 540) EIVMTQSPGTLSLSPGQRATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLT ISRLEPEDFAVYYCQQYGSSSLTFGGGTKLEIKR El anticuerpo CR6339 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 543) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 545 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 546. El anticuerpo CR6339 especifico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 547) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 548 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 549.
CR6339 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO 545) gaggtgcagc tggtggagtc cggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg catcttcaac agttatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggc atcatcgcta tctttcatac accaaagtac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgaa cacagcctac 240 atggaactga gaagcctgaa atctgaggac acggccctgt attactgtgc gagagggtcc 300 acttacgatt tttcgagtgg ccttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcg 360 agtgctagca ccaagggccc cagcgtgttc cccctggccc ccagcagcaa gagcaccagc 420 ggcggcacag ccgccctggg ctgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgaccgtg 480 agctggaaca gcggcgcctt gaccagcggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540 agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg accgtgccca gcagcagcct gggcacccag 600 acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa acgcgtggag 660 cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc ctgcccccga gctgctgggc 720 ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctcatgat cagccggacc 780 cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840 tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccggga ggagcagtac 900 aacagcacct accgggtggt gagcgtgctc accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960 aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgcctg cccccatcga gaagaccatc 1020 agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080 gagatgacca agaaccaggt gtccctcacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140 atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccct 1200 gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg 1260 tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320 acccagaaga gcctgagcct gagccccggc aag 1353 CR6339 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 546) EVQLVESGAE KPGSSVKVSCKASGGIFNSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFHTPKYAQKFQGRVTITADES TNTAY ELRSLKSEDTALYYCARGSTYDFSSGLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLV KDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEWFNWYVDGVEVHNAKT PREEQY NSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPFJSINYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG K CR6339 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 543) EVQLVESGAEVKKPGSSVKVSCKASGGIFNSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFHTPKYAQKFQGRVTITADES TNTAYMELRSLKSEDTALYYCARGSTYDFSSGLDYWGQGTLVTVSS CR6339 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO 548) caggcagggc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tcctagtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300 ggagggacca agctgaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6339 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 549) QAGLTQPPSVSVAPGQTARITCGG IGSKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWFGGGTKLTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQA KATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQS KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV HEGSTVEKTVAPTECS CR6339 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 547) QAGLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGS SVHWYQQKPGQAPVLWYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWDSSSDHWFGGGTKLTVLG El anticuerpo CR6342 HA-lgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 550) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 551 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 552. El anticuerpo CR6342 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 553) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 554 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 555.
CR6342 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 551) caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg cttcttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgccaggcc 120 cctggacaag gacttgagtg gatggggggg gtcatcccta tctttcgtac agcaaactac 180 gcacagaact tccagggcag agtcaccatt accgcggacg aattcacatc gtatatggag 240 ctgagcagcc tgagatctga cgacacggcc gtgtattact gtgcgaggtt gaattaccat 300 gattcgggga cttattataa cgccccccgg ggctggttcg acccctgggg ccagggaacc 360 ctggtcaccg tctcgagtgc tagcaccaag ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc 420 agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc 480 gagcccgtga ccgtgagctg gaacagcggc gccttgacca gcggcgtgca caccttcccc 540 gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc 600 agcctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg 660 gacaaacgcg tggagcccaa gagctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc 720 cccgagctgc tgggcggacc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctc 780 atgatcagcc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaggacccc 840 gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc 900 cgggaggagc agtacaacag cacctaccgg gtggtgagcg tgctcaccgt gctgcaccag 960 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgagca acaaggccct gcctgccccc 1020 atcgagaaga ccatcagcaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg 1080 CR6342 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 552) QVQLVQSGAEV KPGSSV VSCKASGGFFSSYAIS VRQAPGQGLEW GGVIPIFRTANYAQNFQGRVTITADEF TSYMELSSLRSDDTAVYYCARLNYHDSGTYYNAPRGWFDPWGQGTLV VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAA LGCLWDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVE P SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEV CWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLT CLWGFYPSDIAVEWESNGQPEl^ TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG VFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK CR6342 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 550) QVQLVQSGAEWKPGSSV VSCKASGGFFSSYAISWVRQAPGQGLEW GGVIPIFRTANYAQNFQGRV ITADEF TSYMELSSLRSDDTAVYYCARLNYHDSGTYYNAPRGWFDPWGQGTLVTVSS CR6342 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 554) gacatccaga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gaaggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtatttta aacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtagt 300 ccgccgacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtgcggccgc acccagcgtg 360 ttcatcttcc ccccctccga cgagcagctg aagagcggca ccgccagcgt ggtgtgcctg 420 ctgaacaact tctacccccg ggaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 480 agcggcaaca gccaggagag cgtgaccgag caggacagca aggactccac ctacagcctg 540 agcagcaccc tcaccctgag caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgag 600 gtgacccacc agggcctgag cagccccgtg accaagagct tcaaccgggg cgagtgt 657 CR6342 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 555) DIQ TQSPDSLAVSLGEKATINCKSSQSILNSSNNK YLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSSPPTFGQGTKVEIKRAAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAK VQWKVÜNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC CR6342 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 553) DIQMTQSPDSLAVSLGEKATINCKSSQSILNSSN KNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGT DFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSSPPTFGQGTKVEIKR El anticuerpo CR6343 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 556) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 557 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 558. El anticuerpo CR6343 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 559) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 560 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 561.
CR6343 Secuencia de nucléotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 557) 5 caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagt caccttcagt tactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcagcccta tgtttgggac aacaacctac 180 ]_ Q gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt actgcggacg actccacgag tacagcctac 240 atggaggtga ggagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagatcttcg 300 aattactatg atagtgtata tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360 gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480 tggaacagcg gcgccttgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaaacg cgtggagccc 660 aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggcgga 720 ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tcatgatcag ccggaccccc 780 gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840 15 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900 agcacctacc gggtggtgag cgtgctcacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcctgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020 aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtgtc cctcacctgt ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 1200 ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctca ccgtggacaa gagccggtgg 1260 cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320 cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag 1350 CR6343 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 558) QVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGVTFSYYAMSWVRQAPGQGLEWMGGISP FGTTTYAQKFQGRVTITADDS TSTAYMEVRSLRSEDTAVYYCARSSNYYDSVYDYWGQGTLV VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVSW SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV HKPSNTKVDKRVEPKSCDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKF WYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRWSVLTVLHQD LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPEN YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG CR6343 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 556) QVQLVQSGAEWKPGSSVKVSCKASGVTFSYYAMSWVRQAPGQGLE MGGISPMFGTTTYAQKFQGRV ITADDS TSTAYMEVRSLRSEDTAVYYCARSSNYYDSVYDYWGQGTLVTVSS CR6343 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ 560) cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcggag tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60 acctgtgggg gacataacat tggaagtaat agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120 caggcccctg tgctggtcgt gtatgataat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180 ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240 gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg ggtagtagta gtgaccatta tgtcttcgga 300 actgggacca aggtcaccgt cctaggtgcg gccgcaggcc agcccaaggc cgctcccagc 360 gtgaccctgt tccccccctc ctccgaggag ctgcaggcca acaaggccac cctggtgtgc 420 ctcatcagcg acttctaccc tggcgccgtg accgtggcct ggaaggccga cagcagcccc 480 gtgaaggccg gcgtggagac caccaccccc agcaagcaga gcaacaacaa gtacgccgcc 540 agcagctacc tgagcctcac ccccgagcag tggaagagcc accggagcta cagctgccag 600 gtgacccacg agggcagcac cgtggagaag accgtggccc ccaccgagtg cagc 654 CR6343 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 561) QSWTQPPSESVAPGQTARITCGGH IGSNSVHWYQQ PGQAPVLWYDNSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWGSSSDHYVFGTGTKVTVLGAAAGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAV TVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR6343 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 559) QSW QPPSESVAPGQTARITCGGHNIGSNSVHWYQQKPGQAPVLWYDNSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTIS RVEAGDEADYYCQVWGSSSDHYVFGTGT VTVLG El anticuerpo CR6344 HA-IgG específica incluye una región variable de cadena pesada (SEQ ID NO: 562) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 563 y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada mostrada en la SEQ ID NO: 564. El anticuerpo CR6344 específico de HA de IgG también incluye una región de cadena ligera variable (SEQ ID NO: 565) codificada por la secuencia de nucleótidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 566 y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera mostrada en la SEQ ID NO: 567.
CR6344 Secuencia de nucleotido de cadena pesada (SEQ ID NO: 563) caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagagtc 60 tcctgcaagg cttctggaag catcttcaga aactatgcta tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcgcta tttttgggac accaaagtac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatcgacgag cactgtctac 240 atggaactga gcggactgag atctgaggac acggccatgt attactgtgc gaggattccc 300 cactataatt ttggttcggg gagttatttc gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360 gtctcgagtg ctagcaccaa gggccccagc gtgttccccc tggcccccag cagcaagagc 420 accagcggcg gcacagccgc cctgggctgc ctggtgaagg actacttccc cgagcccgtg 480 accgtgagct ggaacagcgg cgccttgacc agcggcgtgc acaccttccc cgccgtgctg 540 cagagcagcg gcctgtacag cctgagcagc gtggtgaccg tgcccagcag cagcctgggc 600 acccagacct acatctgcaa cgtgaaccac aagcccagca acaccaaggt ggacaaacgc 660 gtggagccca agagctgcga caagacccac acctgccccc cctgccctgc ccccgagctg 720 ctgggcggac cctccgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct catgatcagc 780 cggacccccg aggtgacctg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaggaccc cgaggtgaag 840 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc ccgggaggag 900 cagtacaaca gcacctaccg ggtggtgagc gtgctcaccg tgctgcacca ggactggctg 960 aacggcaagg agtacaagtg caaggtgagc aacaaggccc tgcctgcccc catcgagaag 1020 accatcagca aggccaaggg ccagccccgg gagccccagg tgtacaccct gccccccagc 1080 cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtgtcc ctcacctgtc tggtgaaggg cttctacccc 1140 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200 ccccctgtgc tggacagcga cggcagcttc ttcctgtaca gcaagctcac cgtggacaag 1260 agccggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320 cactacaccc agaagagcct gagcctgagc cccggcaag 1359 CR6344 Secuencia de aminoácido de cadena pesada (SEQ ID NO: 564) QVQLVQSGAEWKPGSSWVSCKASGSIFR YAMS VRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTPKYAQKFQGRVTITADES TSTVYMELSGLRSEDTAMYYCARIPHYNFGSGSYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGC LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS CDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF WYVDGVEVH AKTKPREE QYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK QVSLTCLV KGFYPSDIAVE ESNGQPEmYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGIWFSCS\^EALHNHYTQKSLSLS PGK CR6344 Secuencia de aminoácido VH (SEQ ID NO: 562) QVQLVQSGAEVKKPGSSVRVSCKASGSIFRNYAMSWVRQAPGQGLEWMGGIIAIFGTPKYAQKFQGRVTITADES TSTVYMELSGLRSEDTAMYYCARIPHYNFGSGSYFDYWGQGTLVTVSS CR6344 Secuencia de nucleótido de cadena ligera (SEQ ID NO: 566) actgtgttga cacagccgcc ctcagtgtct ggggccccag ggcagagggt caccatctcc 60 tgcactggga gcagctccaa catcggggca ggttatgatg tacactggta ccagcagctt 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatctat ggtaacagca atcggccctc aggggtccct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcagcctgag tgcttatgtc 300 ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggtgcggccg caggccagcc caaggccgct 360 cccagcgtga ccctgttccc cccctcctcc gaggagctgc aggccaacaa ggccaccctg 420 gtgtgcctca tcagcgactt ctaccctggc gccgtgaccg tggcctggaa ggccgacagc 480 agccccgtga aggccggcgt ggagaccacc acccccagca agcagagcaa caacaagtac 540 gccgccagca gctacctgag cctcaccccc gagcagtgga agagccaccg gagctacagc 600 tgccaggtga cccacgaggg cagcaccgtg gagaagaccg tggcccccac cgagtgcagc 660 CR6344 Secuencia de aminoácido de cadena ligera (SEQ ID NO: 567) TVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSATLG ITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAYVFGTGTKVTVLGAAAGQPIAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPG AVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQS NKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS CR6344 VL secuencia de aminoácido (SEQ ID NO: 565) TVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVH YQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSATLG ITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSAYVFGTGTKV VLG Epítopos de anticuerpos de HA La invención se refiere a un anticuerpo HA humano aislado que es capaz de reconocer y se unen a un epitopo en la subunidad HA2 de la proteína hemaglutinina de influenza (HA) (también conocida como hemaglutinina (HA)), caracterizado porque el anticuerpo HA tiene actividad neutralizante contra un virus de la influenza 5 incluyendo HA del subtipo H5. Los ejemplos de cepas de la influenza que contienen HA de subtipo H5 tales y que son cepas importantes en vista de las amenazas pandémicas son H5N1, H5N2 , H5N8, H5N9 y. Particularmente preferidos son los anticuerpos de HA que por lo menos neutralizar la cepa de influenza H5N1. Preferiblemente, un anticuerpo de HA de la invención no depende de un epítopo en la subunidad HAl de la proteína HA para la unión a dicha proteína HA.
Un número de los anticuerpos de la invención (por ejemplo, CR6307 y CR6323) no depende de los epítopos conformacionales y reconocer el epítopo HA2 incluso en una forma reducida (cuando se usa en transferencia de Western) . Esto es una ventaja sobre los anticuerpos de la técnica, porque cuando un cambio conformacional se induce en la proteína HA debido a lo mutación en otra parte de la proteína, tal cambio conformacional muy probablemente no obstaculizar la unión de los anticuerpos de la presente invención el epítopo HA2, mientras que los anticuerpos que hacen depender la conformación muy bien podría ser incapaz de unirse cuando se producen tales mutaciones .
En otra modalidad preferida, un anticuerpo de HA de la invención también ha actividad neutralizante contra un virus de la influenza que comprende- HA del subtipo Hl , y preferiblemente en el que el anticuerpo HA también ha actividad neutralizante contra la influenza virus que comprende HA de la H2 , ?ß y/o subtipo H9. Los anticuerpos de HA de la invención interactúan con un epítopo presente en los epítopos HA2 presente en el H5, Hl, subtipos H2 , H6 y H9 (ver, solicitud de patente internacional PCT/EP2007/059356, publicada como WO 2008/028946, los contenidos de los cuales se incorporan por referencia en su totalidad) , y se ha demostrado que los anticuerpos de HA de la invención cruzada neutralizan entre los subtipos de influenza debido a este reparto de epítopo.
En otro aspecto preferido de la invención un anticuerpo de HA de la invención se une a un epítopo que se selecciona del grupo que consiste de la secuencia de aminoácidos: GVTNKV SIIDK (SEQ ID NO: 198), GVTNKVNSIINK (SEQ ID NO: 283), GVTNKENS11DK (SEQ ID NO: 202), GVTNKVNRIIDK (SEQ ID NO: 201), GITNKVNSVIEK (SEQ ID NO: 281), GITNKENSVIE (SEQ ID NO: 257), GITNKVNSIIDK (SEQ ID NO: 225), y KITSKVNNIVDK (SEQ ID NO: 216). Ciertos anticuerpos de HA de la invención, CR6261, CR6325, CR6329 y interactúan con el GVTNKVNSIIDK (SEQ ID NO: 198) epítopo presente en el virus H5N1 , y no se ven obstaculizados por una mutación en el TGLRN (SEQ ID NO: 200) epítopo en HAl que no influir en la unión de C179. Por otra parte, algunos anticuerpos de HA, tales como CR6307 y CR6323 no están incluso obstaculizados por un mutante de escape, como se describe en Okuno et al. (1993) con una valina-> mutación de ácido glutámico en la posición 6 (ejemplificado por GVTNKENSIIDK (SEQ ID NO: 202)). Este epítopo es parte de una hélice alfa extendida en la región HA2. Los residuos en este supuesto epítopo que se prevé que sea más solvente expuestos están subrayados en negrita: GV-TNKENSIIDK (SEQ ID NO: 202) . Estos aminoácidos podrían ser más accesible a un anticuerpo de HA y por lo tanto pueden formar la región más importante del epítopo. En consonancia con esta idea de los (en negrita) aminoácidos resaltados están absolutamente conservadas en la identidad y posición en todas las secuencias presentadas. Este conocimiento puede ser usado para predecir epítopos de unión en subtipos de la influenza que no llevan la misma secuencia como antes (es decir, H3, H7 y cepas B) .
Anticuerpos HA jj La invención proporciona anticuerpos neutralizantes monoclonales humanos que se unen virus de influenza A e inhiben la influenza A virus infecte una célula. Aunque la neutralización de anticuerpos monoclonales humanos de la invención se unen a los epítopos dentro de las proteínas que están expuestos en la superficie de un virus de la influenza, la invención se centra en la hemaglutinina de la influenza relativamente invariante proteína (HA) . Un MAb neutralizante levantó contra una proteína HA de la influenza, que se mantiene en su conformación nativa, proporciona una terapia superior para todos los cepas de la influenza A, ya que no depende de pequeños cambios en la secuencia de aminoácidos .
La proteína influenza hemaglutinina (HA) es responsable de permitir que el virus reconoce a las células objeto a través de unión a los receptores que contienen ácido siálico de monosacáridos en la superficie de la célula objeto antes de la infección. Por otra parte, la proteina HA de la influenza es responsable de permitir la entrada del genoma viral en la célula objeto mediante la fusión de la membrana de huésped endosomal con la membrana viral .
La proteína influenza hemaglutinina (HA) es una glicoproteína de membrana integral homotrimérica encuentra en la superficie del virus de la influenza. El uso de maquinaria de síntesis de proteínas de la célula huésped, la proteína HA de la influenza se sintetiza primero como un polipéptido precursor de cadena sencilla (HAO) en el retículo endoplásmico , donde también se monta como un homotrímero. El homotrímero HA resultante es posteriormente exportada a la superficie celular a través de la red de Golgi . Homotrímeros HA situados en una superficie celular se escinden por una proteasa de acogida-producido en dos subunidades de péptidos más pequeños: HAl y HA2. La subunidad HA2 forma una cadena helicoidal largo anclado a la membrana viral, mientras que la subunidad HAl encabeza la subunidad HA2 para formar un gran glóbulo. La etapa de escisión, que convierte el precursor de HAO en la proteína HA madura que contiene subunidades HAl y HA2 , es esencial para la patogenicidad viral de la influenza. Estructuralmente, la proteína HA madura contiene una bobina central de a-hélice que resulta en una forma general cilindrica con tres cabezas esféricas. La proteína HA, y, específicamente, la subunidad HAl de la proteína HA madura, se une a receptores que contienen glicanos con ácidos siálicos terminales en células huésped. La manera en la que el ácido siálico está conectado a la galactosa, por ejemplo, ce 2-3 vínculos como en serotipos aviares frente a a 2-6 vínculos como en serotipos humanos, no sólo determinan la especificidad de especie de un virus de influenza, sino que también impide especies cruzadas la infección. Sin embargo, dentro de ciertos serotipos de HA, tales como Hl y H3 , sólo se requieren dos mutaciones de aminoácidos en la secuencia de marco para convertir especificidad de la especie aviar a partir de humano.
Para mediar la infección, la proteína HA de la influenza se une primero los receptores que contienen ácido siálico presentes en la superficie de la célula objeto. En consecuencia, la membrana de endocitosos de la célula objeto o engulle el virus de la influenza. Una vez dentro del endosoma, y tras la acidificación de la célula huésped de ese compartimiento, la proteína HA de la influenza se desarrolla parcialmente revelando un péptido de fusión muy hidrófoba que se inserta en la membrana endosomal . Como el resto de los repliega la proteína HA de la influenza, la prote na de fusión se retrae y se fusiona con la membrana endosomal la membrana viral. Tras la fusión de las membranas celulares y virales, el- contenido del virus, incluyendo el genoma viral, se liberan en el citoplasma de la célula objeto.
Por lo menos 16 serotipos de hemaglutinina o antígenos diferentes de la influenza A se han identificado: H1-H16. Sólo HA serotipos H1-H3 normalmente median la infección de la influenza humana. Sin embargo, las cepas de la influenza que se cree para infectar sólo a algunas especies de aves o mamíferos pueden mutar para infectar a los humanos. Como se describió anteriormente, sólo unos pocos aminoácidos necesitan cambiar a lo largo de la longitud de toda la proteína para permitir la influenza para cruzar una barrera de las especies. Por ejemplo, un cambio de aminoácidos en la secuencia del subtipo H5 permitió una cepa de la influenza aviar específica para convertirse en infecciosa en humanos (H5N1) . Una pandemia surgió cuando una cepa de la influenza común de la especie porcina, se convirtió en letal para los humanos (HlNl). A diferencia de la influenza A, influenza B y C los virus contienen cada uno sólo una forma de la proteína HA.
En concreto, la invención proporciona un anticuerpo aislado monoclonal totalmente humano, caracterizado porque dicho anticuerpo raonoclonal tiene las siguientes características: a) se une a un virus de influenza A, b) se une a una célula puesta en contacto con la influenza A, c) se une a un epítopo de una proteína viral de la influenza A, y, opcionalmente, d) neutraliza la influenza A infección por el virus. Un anticuerpo que no neutraliza la influenza A infección por el virus se puede utilizar, por ejemplo, para una terapia conjugado. En ciertos aspectos, este anticuerpo se une a una célula eucariota. Por otra parte, la célula es opcionalmente una célula humana.
En otro aspecto, este anticuerpo se aisla a partir de una célula B de un donante humano. El aislamiento de un anticuerpo monoclonal totalmente humano de la invención a partir de una célula B se realiza usando métodos recombinantes . Alternativamente, o además, el anticuerpo aislado monoclonal totalmente humano de la invención se aisla a partir del sobrenadante de una célula de plasma cultivadas ya sea in vitro o ex vivo. Las células plasmáticas también conocido como diferenciadas las células B, las células B plasmáticas, plasmocitos, o B-células efectoras . El anticuerpo monoclonal totalmente humano aislado a partir de ya sea una célula B o una célula de plasma demuestra actividad neutralizante.
Los anticuerpos de la invención se unen a un epítopo de hemaglutinina del virus de la influenza A (HA) de la proteína. Los ejemplos de epítopos de HA a la que los anticuerpos de la invención se unen incluyen un péptido precursor de hemaglutinina (HAO), una subunidad HAl, una subunidad HA2 , una proteína madura que contiene HAl y HA2 , y un polipéptido HA recombinante . Alternativamente, los anticuerpos de la invención se unen a un epítopo dentro de un péptido precursor de hemaglutinina (HAO) , una subunidad HAl, una subunidad HA2 , una proteína madura que contiene HAl y HA2 , o un polipéptido HA recombinante. Polipéptidos HA recombinante se codifican, por ejemplo, por la secuencia de SEQ ID NO: 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, o 744.
Los anticuerpos de la invención se unen a un epítopo que es no lineal o lineal. En ciertos aspectos de la invención, un epítopo no lineal es un epítopo discontinuo .
Un anticuerpo de la invención es TCN-522 (3212_I12), TCN-521 (3280_D18), TCN-523 (5248_A17), TCN-563 (5237_B21), TCN-526 (5084_C17), TCN-527 (5086_C06), TCN-528 (5087_P17), TCN-529 (5297_H01), TCN-530 (5248_Hl0a), TCN-531 (5091_H13), TCN-532 (5262_H18), TCN-533 (5256_A17), TCN-534 (5249_B02), TCN-535 (5246_P19), TCN-536 (5095_N01), TCN-537 (3194_D21), TCN-538 (3206_O17), TCN-539 (5056_A08), TCN-540 (5060_F05), TCN-541 (5062_M11), TCN-542 (5079_A16), TCN-543 (5081_G23), TCN-544 (5082_A19), TCN-545 (5082_I15), TCN-546 (5089_L08), TCN-547 (5092_F11), TCN-548 (5092_P01), TCN-549 (5092_P04), TCN-550 (5096_F06), TCN-551 (5243_D01), TCN-552 (5249_I23), TCN-553 (5261_C18) , TCN-554 (5277_M05), TCN-555 (5246_L16), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04), TCN-558 (5248_Hl0b), TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10) o TCN-504 (3251_K17) .
La invención abarca además un anticuerpo que se une al mismo epítopo que TCN-522 (3212_I12), TCN-521 (3280_D18), TCN-523 (5248_A17), TCN-563 (5237_B21), TCN-526 (5084_C17), TCN-527 (5086_C06), TCN-528 (5087_P17), TCN-529 (5297_H01), TCN-530 (5248_Hl0a), TCN-531 (5091_H13), TCN-532 (5262_H18), TCN-533 (5256_A17), TCN-534 (5249_B02), TCN-535 (5246_P19), TCN-536 (5095_N01), TCN-537 (3194_D21), TCN-538 (3206_O17), TCN-539 (5056_A08), TCN-540 (5060_F05), TCN-541 (5062_M11), TCN-542 (5079_A16), TCN-543 (5081_G23), TCN-544 (5082_A19), TCN-545 (5082_I15), TCN-546 (5089_L08), TCN-547 (5092_F11), TCN-548 (5092_P01), TCN-549 (5092_P04), TCN-550 (5096_F06), TCN-551 (5243_D01), TCN-552 (5249_I23), TCN-553 (5261_C18), TCN-554 (5277_M05), TCN-555 (5246_L16), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04), TCN-558 (5248_Hl0b), TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10) o TCN-504 (3251_K17) .
La invención proporciona un anticuerpo monoclonal totalmente humano aislado anti-HA o fragmento de la misma, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena pesada variable (VH) región que comprende la CDRl y CDR2, caracterizado porque la región VH está codificado por un IGHVl humana (o específicamente, IGHV1-18, IGHVl-2, IGHVl-69, IGHV1-8), IGHV2 (o específicamente, IGHV2-5) , IGHV3 (o específicamente, IGHV3-30, IGHV3-33, IGHV3-49, IGHV3-53, 66, IGHV3-7), IGHV4 (o específicamente, IGHV4-31, IGHV4-34, IGHV4-39, IGHV4-59, IGHV4-61) , o IGHV5 (o específicamente, IGHV5-51) VH secuencia de línea germinal o un alelo de la misma, o una secuencia de ácido nucleico que es homologa a la IGHVl, IGHV2, IGHV3 , IGHV4 , o IGHV5 VH secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. En un aspecto, la secuencia de ácido nucleico que es homologa a la IGHVl, IGHV2, IGHV3 , IGHV4 , o IGHV5 secuencia de línea germinal de VH es al menos 75% homologa a la IGHVl, IGHV2 , IGHV3 , IGHV4, o IGHV5 VH secuencia de línea germinal o un alelo de los mismos. Alelos de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, IGHVl-18 * 01, IGHVl-2 * 02, IGHVl-2 * 04, IGHV1-69 * 01, IGHV1-69 * 05, IGHV1-69 * 06, IGHV1-69 * 12, IGHVl-8 * 01, IGHV2-5 * 10, IGHV3-30-3 * 01, IGHV3-30 * 03, IGHV3-30 * 18, IGHV3-33 * 05, IGHV3-49 * 04, IGHV3-53 * 01, IGHV3-66 * 03, IGHV3-7 * 01, IGHV4-31 * 03, IGHV4-31 * 06, IGHV4-34 * 01, IGHV4-34 * 02, IGHV4-34 * 03, IGHV4-34 * 12, IGHV4-39 * 01, IGHV4-59 * 01, IGHV4-59 * 03, IGHV4-61 * 01, IGHV4-61 * 08, y IGHV5-51 * 01.
Un anticuerpo de la invención, o específicamente, cualquier anticuerpo descrito en el presente documento, puede ser operativamente ligado a un agente terapéutico o un marcador detectable.
La invención proporciona además una composición farmacéutica que incluye un anticuerpo descrito en el presente y un portador farmacéutico. Esta composición incluye opcionalmente un fármaco anti-viral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral. Fármacos anti-virales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico y un inhibidor de canal iónico M2. En una forma de modalidad de la composición, el inhibidor de canal iónico M2 es la amantadina o rimantadina. Alternativamente, o además, el inhibidor de la neuraminidasa zanamivir o fosfato de oseltamivir. La composición también puede incluir un segundo anticuerpo anti-influenza A. El segundo anticuerpo anti-influenza A es opcionalmente un anticuerpo descrito en el presente documento.
La invención proporciona un método para estimular una respuesta inmune en un sujeto, incluyendo la administración al sujeto la composición farmacéutica descrita en el presente documento.
Por otra parte, la invención proporciona un método para el tratamiento de una infección por virus de la influenza en un sujeto, incluyendo la administración al sujeto la composición farmacéutica descrita en el presente documento. Este método incluye además la administración de un fármaco anti-viral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral .
La invención también proporciona un método para la prevención de una infección por virus de la influenza en un sujeto, incluyendo la administración al sujeto la composición farmacéutica descrita en el presente documento antes de la exposición del sujeto a virus de la influenza o infección. , Este método incluye además la administración de un fármaco anti-viral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral. Este método puede ser un método de vacunación.
El tema de estos métodos puede tener una infección de la influenza o está predispuesto a desarrollar una infección por virus de la influenza. Los sujetos predispuestos a desarrollar una infección de la influenza, o que pueden estar en riesgo elevado de contraer una infección, son aquellos sujetos con un sistema inmunológico debilitado a causa de la enfermedad autoinmune, las personas que reciben tratamiento inmunosupresor (por ejemplo, después de un trasplante de órgano) , esas personas padecen síndrome de la inmunodeficiencia humana (VIH) o síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , ciertas formas de anemia que agotan o destruyen las células blancas de la sangre, las personas que reciben radiación o quimioterapia, o aquellas personas que sufren de un trastorno inflamatorio. Además, los sujetos de edad joven o viejo extremo están en mayor riesgo. Cualquier persona que entra en contacto físico o proximidad física con una persona infectada tiene un mayor riesgo de desarrollar una infección por virus de la influenza. Por otra parte, un sujeto está en riesgo de contraer una infección de la influenza debido a la proximidad a un brote de la enfermedad, por ejemplo, sujeto reside en una ciudad densamente poblada o en las proximidades de los sujetos que tienen infecciones confirmadas o sospechosos de virus de la influenza, o elección de su trabajo, por ejemplo, trabajador del hospital, investigadora farmacéutica, que viaja a la zona infectada, o de viajero frecuente.
De acuerdo con los métodos descritos en el presente documento, los fármacos anti-virales de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico y un canal iónico M2. En un aspecto de estos métodos, el inhibidor de canal iónico M2 es la amantadina o rimantadina. Alternativamente, o además, el inhibidor de la neuraminidasa es zanamivir o fosfato de oseltamivir.
Estos métodos incluyen opcionalmente la administración de un segundo anticuerpo anti-influenza A. Por ejemplo, el anticuerpo se administra antes o después de la exposición al virus de la influenza. En ciertos aspectos de estos métodos, el anticuerpo se administra a una dosis suficiente para promover la eliminación del virus o para eliminar las células infectadas de la influenza A. El segundo anticuerpo es opcionalmente un anticuerpo descrito en el presente documento.
La invención proporciona además un método para determinar la presencia de una infección de virus de la influenza en un sujeto, incluyendo los pasos de: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida del sujeto con un anticuerpo descrito en el presente documento o la composición farmacéutica descrita en el presente documento; (b) detectar una cantidad del anticuerpo que se une a la muestra biológica, y (c) comparar la cantidad de anticuerpo que se une a la muestra biológica a un valor de control, y de ello, determinar la presencia del virus de la influenza en el sujeto.
La invención proporciona una composición de vacuna que incluye un anticuerpo descrito en el presente documento. Esta composición contiene, opcionalmente, un portador farmacéutico.
Como alternativa, la invención proporciona una composición de vacuna que incluye un epitopo de un anticuerpo descrito en el presente documento. Esta composición contiene, opcionalmente, un portador farmacéutico .
Las vacunas de la invención son vacunas multivalentes . El término " vacuna multivalente " está destinado a describir una sola vacuna que provoca una respuesta inmune ya sea a más de un agente infeccioso, por ejemplo, proteínas recombinantes homotrimérica HAO o fragmentos de los mismos derivados de múltiples cepas de Influenza A (véase la Tabla 9), o para varios epítopos diferentes de una molécula, por ejemplo, una un epitopo discontinuo de la misma proteína HAO homotrimérica recombinante o fragmento de la misma derivada de una sola cepa de la influenza A. Alternativamente, o además, el término vacuna multivalente tiene la intención de describir la administración de una combinación de anticuerpos humanos producidos contra más lineal y de un agente infeccioso, por ejemplo, una combinación de anticuerpos generados contra proteínas HuMHA HAO homotrimérica recombinantes o fragmentos de los mismos derivados de múltiples cepas de Influenza A (véase la Tabla 9) .
La invención proporciona un equipo de diagnóstico incluyendo un anticuerpo descrito en el presente documento.
La invención proporciona un equipo profiláctico incluyendo un anticuerpo descrito en el presente documento o un epítopo de un anticuerpo descrito en el presente documento. Alternativamente, o además, la invención proporciona un equipo profiláctico incluyendo una composición de vacuna se describe en el presente documento.
En una forma de modalidad preferida, la presente invención proporciona anticuerpos monoclonales completamente humanos dirigidos específicamente contra la influenza hemaglutinina glicoproteína , que neutralizan la infección por influenza. Opcionalmente, el anticuerpo se aisla de una célula B de un donante de mamífero, y preferiblemente, un donante humano. En ciertas modalidades de la invención, el anticuerpo se identifica por su capacidad para unirse a un virus de la influenza intacto o conjunto. Alternativamente, o además, el anticuerpo aislado se identifica por su capacidad para unirse a un epítopo de una proteína de la influenza homotrimérica HAO recombinante o proteína HA (s) aislado a partir de múltiples cepas de la influenza, o se hace como proteínas recombinantes tales como las cepas del virus gripal proporcionada en la Tabla 9. Alternativamente, o además, el anticuerpo se identifica por su capacidad para inhibir o neutralizar la infección por el virus de células eucariotas susceptibles. Anticuerpos neutralizantes ejemplares de este perfil incluyen, pero no se limitan a, aquellos anticuerpos enumeran en la Tabla 10. Alternativamente, el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo que se une al mismo epítopo que los anticuerpos proporcionados en la Tabla 10. En ciertas modalidades, los anticuerpos neutralizantes monoclonales humanos de la invención son anticuerpos anti-HA. Un anticuerpo anti-HA monoclonal de la invención tiene una o más de las siguientes características: a) se une a un epítopo en una subunidad HAl de una proteína influenza hemaglutinina (HA) , b) se une a un epítopo en la subunidad HA2 de hemaglutinina de la influenza proteína (HA) , c) se une a un epítopo en el dominio extracelular de una hemaglutinina de la influenza ( ) proteína HA, que consiste en una subunidad HAl y una subunidad HA2 d) se une a un epítopo de una proteína de la influenza homotrimérica HAO recombinante ; e) se une a un epítopo de una proteína HA de la influenza expresada en una célula infectada; f) se une a un epítopo de una proteína HA de la influenza expresada en una célula modificada; g) se une a un virus de la influenza, o h) inhibe la infección por el virus de células eucariotas susceptibles.
Las células modificadas de la invención se transfectan o transforman con un polinucleótido que codifica una proteína HA de la influenza, o cualquier fragmento de la misma. El término " fragmento de la proteína HA de la influenza " está destinado a describir cualquier porción de la proteína que es más pequeña o menos de la proteína completa. Los polinucleótidos y polipéptidos de la invención no siempre codifican una proteína HA de la influenza funcional .
Las células infectadas de la invención son de mamífero, y preferiblemente de origen humano. Específicamente, las células de mamíferos están infectadas con el virus de la influenza A in vivo, in vitro, in situ, ex vivo, en la cultura, y cualquier combinación de los mismos. Las células se infectan con viriones activas o inactivas. Viriones inactivos a modo de ejemplo muestran la proteína HA en sus superficies, sin embargo, que son de replicación defectuosa, y por lo tanto, incapaz de propagarse dentro de la célula o sujeto.
Los epítopos de los anticuerpos monoclonales humanos de la invención incluyen una o transmembrana integral de la membrana de la Influenza A proteína. Específicamente, los epítopos de los anticuerpos monoclonales humanos de la invención comprenden la influenza hemaglutinina (HA) de proteínas.
Los epítopos de los anticuerpos monoclonales humanos de la invención incluyen una o más subunidades de una proteína hemaglutinina de la influenza (HA) . Proteínas HA de la invención incluyen proteínas precursoras hemaglutinina (HAO) , la subunidad HAl , HA2 la subunidad, la proteína madura que contiene las subunidades HAl y HA2 , y una proteína HA recombinante . Proteínas HA recombinantes contienen la SEQ ID NO: 726. Proteínas recombinantes de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, aquellas proteínas descritos por la SEQ ID No.: 727-744.
Los epítopos de los anticuerpos monoclonales humanos de la invención son no lineal o lineal. Por ejemplo, un epítopo no lineal es discontinua. Epítopos discontinuos están disponibles para la unión de anticuerpos sólo cuando la proteína HA de la influenza se mantiene en su conformación nativa homotrimérica . Cuando un anticuerpo se une a un epítopo discontinuo, el anticuerpo se une a una superficie tridimensional de la proteína objeto, es decir, la proteína HA de la influenza, en la que yuxtaponen aminoácidos están expuestos o enmascarados alternativamente .
Los recombinantes proteínas HAO homotrimérica de la invención están codificadas por, por ejemplo, las secuencias descritas por una cualquiera de SEQ ID NO: 727-744. En ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos monoclonales humanos, o anticuerpos anti-HA monoclonales, proteínas HA de la influenza descrito en el presente documento se unen-unida a la membrana o solubles recombinantes homotrimérica. Alternativamente, los anticuerpos anti-HA monoclonal descrito proteínas HA de la influenza en el presente documento se unen a la membrana unida y soluble recombinante homotrimérica. En ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos anti-HA monoclonales descritos en el presente documento se unen y neutralizan subtipos de virus de la influenza Hl, H2 , y H3. En otras modalidades de la invención, los anticuerpos anti-HA monoclonales se unen subtipos de virus de la influenza Hl, H2, y H3, y neutralizan uno de estos subtipos, tales como Hl, H2 , o H3. En una modalidad específica, los anticuerpos anti-HA monoclonales se unen influenza subtipos HlNl, H2N2, y H3N2, HlNl y neutralizan.
En un aspecto, el polipéptido precursor de HA (HAO) de la homotrimérica proteína HA de la influenza soluble y recombinante contiene un dominio de trimerización (foldon) codificado en el fibritin fago T . Un dominio de trimerización ejemplar aislado del fibritin fago T4 tiene la siguiente secuencia en la que un sitio de escisión de trombina está en cursiva y en negrita, se subraya un dominio de trimerización T4 o secuencia, una etiqueta V5 se encajona y un hexa-histidina (His) tag está en negrita: SGRIiVP-RGgPGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGKPIPNPLLGLDSTGHHHHH H (SEQ ID NO: 726) .
Como se usa en el presente, el término "anticuerpo neutralizante" está destinado a describir un anticuerpo que inhibe o previene la infección por influenza A, inhibe o previene la influenza A la entrada del virus en una célula, inhibe o evita la replicación de la influenza, inhibe o previene la salida de la influenza a partir una célula huésped, o reduce el título de la influenza A en una célula, muestra biológica, o sujeto. En una modalidad preferida, los anticuerpos neutralizantes de la invención impiden la entrada viral en el compartimiento citoplásmico de las células huésped.
La presente invención proporciona anticuerpos monoclonales completamente humanos que se unen y neutralizan los virus de la influenza infección. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona anticuerpos monoclonales totalmente humanos neutralizantes específicos contra la proteína hemaglutinina de la influenza. Los anticuerpos se denominan, respectivamente, en el presente documento es anti-HA (huMHA) anticuerpos monoclonales humanos .
La proteína influenza hemaglutinina (HA) es una glicoproteína de membrana integral homotrimérica encuentra en la superficie del virus de la influenza. Para imitar la conformación nativa de esta proteína homotrimérica, los métodos de la invención proporcionan un aislado de HA precursor de la proteína que está operativamente ligado a un dominio de trimerización o foldon de la prote na del fago T4 fibritina.
( SGRLVPRGSPGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGKPIPNPLLGLDSTGHHHH HH (SEQ ID NO: 726) ) .
La proteína recombinante resultante homotrimérica foldon HA no sólo conserva la hemaglutinina de la influenza conformación homotrimérica nativa, pero también se vuelve soluble, es decir, la proteína ya no está unido a una membrana viral o celular. Específicamente, estas proteínas homotrimérica HA" recombinantes carecen de una membrana integral o dominio transmembrana. En ciertas modalidades, estas proteínas recombinantes HA homotrimérica incluyen HAl y HA2 subunidades, así como un dominio de trimerización, la proteína HA recombinante resultante homotrimérica que contiene entre 1-50, 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-350, 350-400, 400-450, 450-500,500-550, 550-600 aminoácidos (aa) o cualquier longitud de los aminoácidos en el medio. Preferiblemente, estas proteínas homotrimérica HA recombinantes contienen entre 565 a 575 aminoácidos (aa) . Proteínas homotrimérica HA recombinante incluyen además un sitio de escisión de la señal en el extremo N-terminal que contiene entre 15-25 aa. Alternativamente, o además, las proteínas homotrimérica HA recombinante incluyen además un dominio transmembrana posicionado entre los aminoácidos 525-535 de HA en función de la influenza A subtipo de virus. En una modalidad preferida, la proteína HA se deriva de una o más cepas de un virus de la influenza A. Proteínas homotrimérica HA recombinante de la invención retienen la secuencia señal nativa para permitir la secreción. Por otra parte, las proteínas homotrimérica HA recombinantes de la invención contienen una misma secuencia de señal, que no se deriva de HA. Masoveros, secuencias de señal utilizadas con proteínas homotrimérica HA recombinante de la invención incluyen aquellas secuencias de señal conocidos en la técnica que permiten la secreción eficiente de las proteínas, tales como la secuencia señal de la cadena ligera de la inmunoglobulina kappa. Alternativamente, las proteínas homotrimérica HA recombinante, o los precursores de HAO de los mismos, pueden tener las secuencias señal nativas en las construcciones de expresión utilizados por Inmune Technology Corp. (http://www.immune-tech.com/). Las secuencias señal se conservan o manipultated para permitir la secreción eficiente de, por ejemplo, líneas celulares reconocidos en la técnica mantienen in vitro, por ejemplo, 293 células HEK .
Las proteínas recombinantes homotriméricas HA pueden retener un sitio de escisión de la proteasa HA1/HA2 nativa, que es fundamental para la patogenicidad viral. En un aspecto de la invención, las proteínas homotrimérica HA recombinantes contienen un sitio de escisión de la proteasa HA1/HA2 sustituido. Por ejemplo, la proteína HA recombinante codificada por la SEQ ID NO: 737 no tiene un sitio de escisión nativa, sino más bien un sitio de escisión sustituido de otra proteína HA. Además, estas proteínas opcionalmente conservan los receptores de sitios de unión que contienen ácido siálico dentro de la subunidad HA1.
De acuerdo con los métodos de la invención, los anticuerpos humanos obtenidos a partir de sangre, suero, plasma, o fluido espinal cerebral, se ponen en contacto a homotrímeros HA recombinante y solubles de la invención in vitro, caracterizado porque el recombinante y homotrímeros de HA solubles actúan como objetivos para anticuerpo humano de unión para confirmar la especificidad del anticuerpo humano aislado para un homotrímero HA de la influenza en su conformación nativa. En general, los métodos incluyen la obtención de muestras de suero o plasma de sujetos o pacientes que han sido infectados con o vacunados contra un agente infeccioso. Estas muestras de suero o plasma se criban para identificar aquellos que contienen anticuerpos específicos para un polipéptido particular asociado con el agente infeccioso, tal como, por ejemplo, un polipéptido expresado específicamente en la superficie de células infectadas con el agente infeccioso, pero no sin infectar células. En modalidades particulares, las muestras de suero o plasma se criban por contacto de las muestras con una célula que ha sido transfectada con un vector de expresión que expresa el polipéptido expresado en la superficie de las células infectadas. En modalidades particulares las muestras de suero o plasma son examinados por contacto de las muestras con una proteína recombinante que representa una proteína particular del agente infeccioso tal como, por ejemplo, hemaglutinina del virus de la influenza A. En modalidades particulares las muestras de suero o plasma son examinados por contacto de las muestras con una forma purificada del agente infeccioso tal como, por ejemplo, viriones enteros intactos del virus de la influenza A. En modalidades particulares, las muestras de suero o plasma se criban por contacto de las muestras con una forma viva del agente infeccioso tal como, por ejemplo, viriones completos intactos del virus de la influenza A para determinar la presencia de anticuerpos de suero que inhiben o neutralizan la infección de células susceptibles. Células susceptibles de ejemplo son células eucarióticas o de mamíferos, tales como células MDCK.
Una vez que un sujeto o paciente se identifica como tener el suero o plasma que contiene un anticuerpo específico para el polipeptido agente infeccioso o virus de interés, mononucleares y/o células B obtenidas a partir de la misma sujeto o paciente se utilizan para, identificar una célula o clon de la misma que produce el anticuerpo, usando cualquiera de los métodos descritos en el presente o disponibles en la técnica. Una vez que una célula B que produce el anticuerpo se identifica, los ADNc que codifican las regiones variables o fragmentos de la misma del anticuerpo pueden clonarse usando vectores y cebadores específicos para secuencias de anticuerpos conservadas estándar de RT-PCR, y se subclonaron en vectores de expresión usados para la producción recombinante de anticuerpos monoclonales específicos para el polipéptido agente infeccioso de interés.
Más específicamente, las células B se recogen de un donante en particular, es decir, un sujeto o paciente se identifica como teniendo suero o plasma que contiene un anticuerpo específico para HA, cultivadas, y el anticuerpo se secreta a partir de estas células B en el medio de cultivo. El medio de cultivo se separa de estas células B, las células B se someten a lisis, y después se congelan para el almacenamiento. Se tamiza a continuación, el medio de cultivo para la unión de anticuerpos a diferentes objetivos de HA y/o la inhibición/neutralización de la infección in vitro. Cuando un bien cultural es identificado con un anticuerpo de la especificidad deseada, se aplica la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) para el lisado de células B para amplificar las regiones variables de anticuerpos y, posteriormente, clonar, expresar y ensayo por la unión y la función del anticuerpo recombinante.
Los anticuerpos humanos, tales como los anticuerpos monoclonales enumerados en la Tabla 10, que se unen el homotrímero HA recombinante y soluble y/o se unen viriones completos, y opcionalmente inhibir o neutralizar la infección de virus vivo se reproducen de forma recombinante y formular en una composición farmacéutica para la administración a un sujeto en riesgo de poner en contacto un virus de la influenza. Además, homotrímeros HA recombinante y solubles se derivan de múltiples cepas de virus de la influenza, incluyendo múltiples cepas de influenza A virus. Anticuerpos humanos ejemplares se unen específicamente Influenza A, y pueden ser seleccionados por una incapacidad para enlazar la influenza B y C las cepas del virus.
La invención proporciona además un nuevo procedimiento mediante el cual de longitud completa de HA se expresa en líneas celulares de mamíferos, lo que permite la identificación de anticuerpos humanos que se unen esta celular HA-expresado . Los anticuerpos huMHA han demostrado que se unen los determinantes conformacionales en las células transfectadas con HA, así como de HA nativa, que puede ser aislado, o en contacto a los anticuerpos huMHA cuando se presenta ya sea en las células infectadas de la influenza o el virus de la influenza A. Alternativamente, o además, los anticuerpos se unen huMHA HA nativa, homotrimérica HA recombinante, virus purificado, las células infectadas, péptido lineal, péptido sintético ha, ha transfectaron células de mamíferos, y HA expresado en la superficie del virus bacteriófago modificado genéticamente, que se utilizan para ensayos de visualización de fragmentos de gen. Por lo tanto, esta invención ha permitido la identificación y producción de anticuerpos monoclonales humanos que exhiben especificidad novedoso para una muy amplia gama de cepas de virus de la influenza A. Estos anticuerpos se pueden usar profilácticamente para prevenir la infección de la influenza A, el diagnóstico para identificar la infección de la influenza A y terapéuticamente para tratar la infección de la influenza A. Por otra parte, los epítopos a los que anticuerpos huMHA de la invención se unen se utilizan como vacunas para prevenir la infección por influenza A.
Los anticuerpos huMHA de la invención tiene una o más de las siguientes características: a) se une a un epítopo en una subunidad HAl de una proteína influenza hemaglutinina (HA) , b) se une a un epítopo en la subunidad HA2 de hemaglutinina de la influenza proteína (HA) , c) se une a un epítopo en el dominio extracelular de una hemaglutinina de la influenza () proteína HA, que consiste en una subunidad HAl y una subunidad HA2; d) se une a un epítopo de una proteína de la influenza homotrimérica HAO recombinante; e) se une a un epítopo de una proteína HA de la influenza expresada en una célula infectada; f) se une a un epítopo de una proteína HA de la influenza expresada en una célula modificada; g) se une a un virus de la influenza, o h) inhibe la infección por el virus de células eucariotas susceptibles . Los anticuerpos huMHA de la invención eliminan las células infectadas de influenza a través de los mecanismos efectores inmunes como ADCC y/o CDC y promueven la eliminación del virus directa mediante la unión a los viriones de la influenza.
Las cepas de la influenza A modo de ejemplo utilizados para el cribado de muestras de plasma humanos, B sobrenadantes de cultivo celular (BCC SN) , y los sobrenadantes de transfección monoclonales (MN se muestran en la Tabla 8 a continuación) . Cepas vivas se utilizaron para los ensayos de neutralización descritos en el presente documento. Cepas inactivadas se utilizaron para los ensayos de unión de virus descritos en el presente. Recombinante proteína HA homotrimérica se utilizó en el ensayo de unión de HA trimérica.
Tabla 8.
Las secuencias HA ejemplares incluyen las secuencias mencionadas en la Tabla 9 que viene a continuación.
Tabla 9 En una modalidad, los anticuerpos huMHA de la invención se unen a un HA que incluye total o parcialmente los residuos de aminoácidos desde la posición 1 hasta la posición 525 de la hemaglutinina de la influenza cuando se numeran de acuerdo con la SEQ ID No.: 727-744. Alternativamente, el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo que se une al mismo epítopo que los mAbs enumerados en la Tabla 10.
Tabla 10 Los anticuerpos de la invención son capaces de neutralizar los anticuerpos de la influenza A. monoclonales pueden producirse por procedimientos conocidos, por ejemplo, como se describe por R. Kennet et al. en "Anticuerpos monoclonales y líneas celulares funcionales; Avances y Aplicaciones". Plenum Press (Nueva York), 1984. Otros materiales y métodos aplicados se basan en los procedimientos conocidos, por ejemplo, tal como se describe en J. Virol . 67:6642-6647, 1993.
Estos anticuerpos se pueden utilizar como agentes profilácticos o terapéuticos de la formulación apropiada, o como una herramienta de diagnóstico.
Un "anticuerpo neutralizante" es uno que puede neutralizar la capacidad de ese patógeno para iniciar y/o perpetuar una infección en un huésped y/o en las células objeto in vitro. La invención proporciona un anticuerpo humano monoclonal neutralizante, caracterizado porque el anticuerpo reconoce un antígeno de un virus de influenza, que se deriva preferiblemente de la proteína HA. Preferiblemente un anticuerpo de acuerdo con la invención es un anticuerpo monoclonal novedoso denominado en el presente como TCN-522 (correspondiente a la ubicación de la placa y pozo BCC 3212_I12), TCN-521 (3280_D18) , TCN-523 (5248_A17), TCN-563 (5237_B21), TCN-526 (5084_C17), TCN-527 (5086_C06), TCN-528 (5087_P17), TCN-529 (5297_H01), TCN-530 (5248_Hl0a), TCN-531 (5091_H13), TCN-532 (5262_H18), TCN-533 (5256_A17), TCN-534 (5249_B02), TCN-535 (5246_P19), TCN-536 (5095_N01), TCN-537 (3194_D21), TCN-538 (3206_O17), TCN-539 (5056_A08), TCN-540 (5060_F05), TCN-541 (5062_Mll), TCN-542 (5079_A16), TCN-543 (5081_G23), TCN-544 (5082_A19), TCN-545 (5082_I15), TCN-546 (5089_L08), TCN-547 (5092_Fll), TCN-548 (5092_P01), TCN-549 (5092_P04), TCN-550 (5096_F06), TCN-551 (5243_D01), TCN-552 (5249_I23), TCN-553 (5261_C18), TCN-554 (5277_M05), TCN-555 (5246_L16), TCN-556- (5089_K12), TCN-557 (5081_?04), TCN-558 (5248_Hl0b) , TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10), y TCN-504 (3251_K17). Estos anticuerpos se aislaron inicialmente de las muestras humanas y se produjeron por los cultivos de células B con referencia a 3212_I12, 3280_D18, 5248_A17, 5237_B21, 5084_C17, 5086_C06, 5087_P17, 5297_H01, 5248_Hl0a, 5091_H13, 5262_H18, 5256_A17, 5249_B02, 5246_P19, 5095_N01, 3194_D21, 3206_O17, 5056_A08, 5060_F05, 5062_M11, 5079_A16, 5081_G23, 5082_A19, 5082_I15, 5089_L08, 5092_F11, 5092_P01, 5092_P04, 5096_F06, 5243_D01, 5249_I23, 5261_C18, 5277_M05, 5246_L16, 5089_K12, 5081_A04, 5248_Hl0b, 5097_G08, 5084_P10, y 3251_K17. Estos anticuerpos tienen una amplia actividad neutralizante o amplia actividad de unión para la Influenza A in vitro.
Las CDR de las cadenas pesadas del anticuerpo se conocen como CDRHl , CDRH2 y CDRH3 , respectivamente. Del mismo modo, las CDR de las cadenas ligeras de anticuerpos se conocen como CDRLl , CDRL2 y CDRL3 , respectivamente. La posición de los aminoácidos de CDR se define de acuerdo con el sistema de numeración IMGT como: CDRl-IMGT las posiciones 27 a 38, la CDR2-IMGT posiciones 56 a 65 y la CDR3-IMGT posiciones 105-117. (Lefranc, M P. et al 2003 IMGT numeración único para la inmunoglobulina y regiones variables de receptores de células T y la superfamilia de dominios Ig-V como Dev. Comp Immunol 27 (l):55-77; Lefranc, M P. 1997 El sistema único de numeración de base de datos para el análisis inmunogenética Immunology Today, 18:509;.. Lefranc, M P. 1999 La numeración única IMGT para las in unoglobulinas , receptores de células T y los dominios similares a Ig inmunologo, 7:132-136).
Las secuencias de los anticuerpos se determinaron, incluyendo las secuencias de las regiones variables de las Gamma pesada y kappa o lambda cadenas ligeras de los anticuerpos designados. Además, la secuencia de cada uno de los polinucleótidos y polipéptidos que codifican las secuencias de anticuerpo se determinó para TCN-522 (3212_I12) , TCN-521 (3280. _D18) , TCN-523 (5248_A17) , TCN-563 (5237_B21) , TCN-526 (5084. _C17) , TCN-527 (5086_C06) , TCN-528 (5087_P17 ) , TCN-529 (5297_H01) , TCN-530 (5248_H10a), TCN-531 (5091_H13), TCN-532 (5262 _H18) , TCN- 533 (5256_A17), TCN-534 (5249_B02), TCN-535 (5246_P19) , TCN-536 (5095_N01) , TCN-537 (3194 _D21) , TCN-538 (3206_O17) , TCN-539 (5056_A08) , TCN-540 (5060 _F05) , TCN-541 (5062_M11) , TCN-542 (5079_A16) , TCN-543 (5081 _G23) , TCN-544 (5082_A19) , TCN-545 (5082_I15) , TCN-546 (5089 _L08) , TCN-547 (5092_F11) , TCN-5 8 (5092_P01) , TCN-549 (5092 _P04) , TCN-550 (5096_F06) , TCN-551 (5243_D01) TCN-552 (5249 _I23) , TCN-553 (5261_C1 8), TCN-554 (5277_M05), TCN-555 (5246_L16), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04) , TCN-55Í 3 (5248_ HlOb) , TCN- 559 (5097_G08) , TCN-560 (5084_P10), y CN-504 (3251_K17) A continuación se muestran las secuencias de polipéptidos y polinucleótidos de las cadenas pesadas y ligeras, con los péptidos de señal en el extremo N-terminal (o 5) y las regiones constantes en el extremo C-terminal (o 3 ' ) de la regi'ones variables, que se muestran en texto en TCN-504 (3251_K17) secuencia de nucleótidos de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAACTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGGAGACCCTGTCCCTCACTTGCGCTGTCTCT GGTGTCTCCATCAGCAATATTGATTTCTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTAGAATGGATT GGCAATATCTATTATACGGGGATCACCTTCTACAACCCGTCCCTCAGCAGTCGAGTCGCCATATCCATTGACACC TCCAAGAACCAGTTCTCCCTGACTCTGACTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTATGTATTACTGTGCGAGACAT TACGGTGACTCCGAGGCAATAAACGATGCCTTTGACATCTGGGGCCAAGGGACAATGCTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 745) TCN-504 (3251_K17) secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada gama: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGVSISNIDFY GWIRQPPGKGLEWIGNIYYTQITFYNPSLSSRVAISIDT SK QFSLTLTSVTAADTAMYYCARHYGDSEAI DAFDIWGQGTMLTVSS (SEQ ID NO : 746) TCN-504 (3251_K17) Kabat CDR de cadena pesada gama: CDR 1: NIDFYWG (SEQ ID NO : 747) CDR 2: NIYYTGITFYNPSLSS (SEQ ID NO: 748) CDR 3: HYGDSEAINDAFDI (SEQ ID NO: 749) TCN-504 (3251_K17) de cadena pesada gama Chothia CDR CDR 1: GVSISN (SEQ ID NO: 750) CDR 2: NIYYTGITF (SEQ ID NO : 751) CDR 3: HYGDSEAINDAFDI (SEQ ID NO : 749) TCN-504 (3251_K17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAGATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCC AGTCAGAGTGTTGGCAATAGTTTAGCCTGGTACCAGCAGAGACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTACGGT GCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCACCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATC AGCAGCCTGCAGACTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAACAATATATTAACTGGCGTCCGCTCAGTTTTGGC GGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 752) TCN-504 (3251_K17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (KabatCDRs en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGNSLAWYQQRPGQAPRLLIYGASTRATGIPPRFSGSGSGTEFTLTI SSLQTEDFAVYYCQQYINWRPIiSFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 753) TCN-504 (3251_K17) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVGNSLA (SEQ ID NO: 754) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO : 755) CDR 3: QQYINWRPLS (SEQ ID NO: 756) TCN-504 (3251_K17) CDR Chot ia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVGNSLA (SEQ ID NO : 754) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO: 755) CDR 3: QQYINWRPLS (SEQ ID NO : 756) TCN-521 (3280_D18) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: GAAGTGCAGTTGGTGCAGTCTGGAGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCGCCTGTGTAGTCTCT GGGTTCACCGTCACCAGCAATTATATAACTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTT ATTTATAGTCATGGTCGCGCATATTATTCAGCCTCCGTGAATGGCCGATTCACCATCTCCAGACACACTTCCAAG AACACAGTTTATCTTGAAATGAACAGCCTGAGACCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGGGCGGGGGCCTA GTCGGTGGCTACGACGAATATTTCTTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGCCACCGTCTCCTCA ( SEQ ID NO: 758) TCN-521 (3280_D18) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLACWSGFTV S YIT VRQAPGKGLEWVSVIYSHGRAYYSASVNGRFTISRHTS NTVYLEMNSLRPEDTAVYYCAGGGLVGGYDEYFFDYWGQGTLATVSS (SEQ ID NO: 759) TCN-521 (3280_D18) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SNYIT (SEQ ID NO : 760) CDR 2: VIYSHGRAYYSASVNG (SEQ ID NO: 761) CDR 3: GGLVGGYDEYFFDY (SEQ ID NO : 762) TCN-521 (3280_D18) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFTVTS (SEQ ID NO : 763) CDR 2: VIYSHGRAY (SEQ ID NO: 764) CDR 3: GGLVGGYDEYFFDY (SEQ ID NO : 762) TCN-521 (3280_D18) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAACTGTCTTGACGCAATCTCCAGGCACCTTGTCTTTGACTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGAGTCGGTCAGAGTGTTAGCGGCAGCCACTTAGCCTGGTACCAACAGA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCGGTGGCAGTGTGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACT GGAGCCTGAAGATTCTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATGGTGACTCACGATACACTT TTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO : 765) TCN-521 (3280_D18) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) ETVLTQSPGTLSLTPGERATLSCRVGQSVSGSHLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFGGSVSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYGDSRYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 766) TCN-521 (3280_D18) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RVGQSVSGSHLA (SEQ ID NO : 767) CDR 2: GASSRAT (SEQ ID NO : 768) CDR 3: QQYGDSRYT (SEQ ID NO: 769) TCN-521 (3280_D18) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RVGQSVSGSHLA (SEQ ID NO: 767) CDR 2: GASSRAT (SEQ ID NO: 768) CDR 3: QQYGDSRYT (SEQ ID NO: 769) TCN-522 (3212_I12) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTTTTGAAACCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTGTCTGGGGGGTCCCTCACTGATTACTCTTGGAACTGGATCCGCCAGC CCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGTGACACCCTTCATAATGGCTACACCAACTAC AACCCGTCCCTCAGGGGTCGAGTTTCCATCTCAATAGACACGTCCAAGAACCAGGTCTC ACTCAGGCTGACCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTCTTTATTACTGTGCGAGAGGCT CAGGTGGATATGGTGGCTTCGATTATTTTGGCAAGCTCCGGACATGGGACTTCTGGGGC CAGGGAACGCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO : 770) TCN-522 (3212_I12) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCTVSGGSLTDYSWNWIRQPPGKGLEWIGDTLHNGYT Y PSLRGRVSISIDTSKNQVSLRLTSV AADTALYYCARGSGGYGGFDYFGKLRTWDFWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 771) TCN-522 (3212_I12) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DYS (SEQ ID NO: 772) CDR 2: DTLHNGYT YNPSLRG (SEQ ID NO : 773) CDR 3: GSGGYGGFDYFGKLRTWDF (SEQ ID NO: 774) TCN-522 (3212_I12) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSLTD (SEQ ID NO: 775) CDR 2: DTLHNGYTN (SEQ ID NO : 776) CDR 3: GSGGYGGFDYFGKLRTWDF (SEQ ID NO: 774) TCN-522 (3212_I12) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATTCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAAAAAC CAGGGAACGCCCCTAAGCGCCTGATCTTTGGTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAGTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCA GCCTGAGGACTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCGTACACTTTTG GCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 777) TCN-522 (3212_I12) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGNAPKRLIFGASSLQSGVP SRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 778) TCN-522 (3212_I12) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQGI NDLG (SEQ ID NO : 779) CDR 2: GASSLQS (SEQ ID NO: 780) CDR 3: LQHNSYPYT (SEQ ID NO: 781) TCN-522 (3212_I12)CDR Chothia de cadena ligera CDR 1: RASQGIRNDLG (SEQ ID NO: 779) CDR 2: GASSLQS (SEQ ID NO: 780) CDR 3: LQHNSYPYT (SEQ ID NO: 781) TCN-523 (5248_A17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAACTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCAGCTTCAGCAACTATGCCTTCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGACCATCCCTCTACTTGGTACAACAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTTCCGCGGACCAATTCACGAGCACAGC CTACATGGAGCTGGGCAGCCTGAGATCTGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTACGAGAC GGAAAATGACTACGGCTTTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 782) TCN-523 (5248_A17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGSFSNYAFSWVRQAPGQGLEWMGGTIPLLGTTN YAQKFQGRVTISADQFTSTAYMELGSLRSEDTAVYYCTRKKMTTAFDSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 783) TCN-523 (5248_A17) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYAFS (SEQ ID NO: 784) CDR 2: GTIPLLGTTNYAQKFQG (SEQ ID NO : 785) CDR 3: RKMTTAFDS (SEQ ID NO: 786) TCN-523 (5248_A17) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSFSN (SEQ ID NO: 787) CDR 2: GTIPLLGTTN (SEQ ID NO: 788) CDR 3: RKMTTAFDS (SEQ ID NO: 786) TCN-523 (5248_A17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGCCTGTTCTGACTCAGCCACCTTCTGCATCAGCCTCCCTGGGAGCCTCGGTCACACT CACCTGCACCCTGAGCAGCGCCTACAGTAATTATAAAGTGGACTGGTACCAGCAGAGAC CAGGGAAGGGCCCCCGCTTTGTGATGCGAGTGGGCACTGGTGGGATTGTGGGATCCAAG GGGGATGGCATCCCTGATCGCTTCTCAGTCTTGGGCTCAGGCCTGAATCGGTACCTGAC CATCAAGAACATCCAGGAAGAGGATGAGAGTGACTACCACTGTGGGGCAGACCATGGCA GTGGGAGCAACTTCGTGTCCCCTTACGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTTCTA (SEQ ID NO: 789) TCN-523 (5248_A17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QPVLTQPPSASASLGASVTLTCTLSSAYSNYKVDWYQQRPGKGPRFVMRVGTGGIVGSK GDGIPDRFSVLGSGLNRYLTIK IQEEDESDYHCGADHGSGSNFVSPYVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 790) TCN-523 (5248_A17) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TLSSAYSNYKVD (SEQ ID NO : 791) CDR 2: VGTGGIVGSKGD (SEQ ID NO : 792) CDR 3: GADHGSGSNFVSPYV (SEQ ID NO: 793) TCN-523 (5248_A17) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TLSSAYSNYKVD (SEQ ID NO : 791) CDR 2: VGTGGIVGSKGD (SEQ ID NO : 792) CDR 3: GADHGSGSNFVSPYV (SEQ ID NO: 793) TCN-563 (5237_B21) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGCGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAGGCCTGGGTCCTCGGTGAAAGT CTCATGCACGGCTTCTGGAGGCATCTTCAGGAAGAATGCAATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCGCAGTCTTTAACACAGCAAAT TACGCGCAGAAGTTTCAGGGCAGAGTCAAAATTACCGCAGACGAATCCGGGAATACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGTC ACCCAAAATATTTCTATGGTTCGGGGAGTTATCCGGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTG GTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 794) TCN-563 (5237_B21) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) Q QLAQSGAEVKRPGSSVKVSCTASGGIFRKNAISWRQAPGQGLEWMGGIIAVFNTA YAQKFQGRVKITADESGNTAYMELSSLRSDDTAVYYCASHPKYFYGSGSYPDFWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 795) TCN-563 (5237_B21) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: KNAIS (SEQ ID NO: 796) CDR 2: GIIAVFNTANYAQKFQG (SEQ ID NO : 797) CDR 3: HPKYFYGSGSYPDF (SEQ ID NO : 798) TCN-563 (5237_B21) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGIFRK (SEQ ID NO: 799) CDR 2: GIIAVFNTA (SEQ ID NO : 800) CDR 3: HPKYFYGSGSYPDF (SEQ ID NO: 798) TCN-563 (5237_B21) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAATCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCAT CTCCTGCACTGGAAGCAGCAGTGATGTTGGTGCTTCTAACTCTGTCTCCTGGTACCAAC AACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCGTTATTTATGATGTCACTGAGCGACCCTCAGGG GTCCCTCATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGG GCTCCAGCCTGAGGACGAGGCTGATTATTTCTGCTGCGCATATGGAGGCAAATATCTTG TGGTCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGACCGTCCTC (SEQ ID NO: 801) TCN-563 (5237_B21) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGSSSDVGASNSVSWYQQHPGKAPKLVIYDVTERPSG VPHRFSGSKSGNTASLTVSGLQPEDEADYFCCAYGGKYLWFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 802) TCN-563 (5237_B21) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TGSSSDVGASNSVS (SEQ ID NO: 803) CDR 2: DVTERPS (SEQ ID NO : 804) CDR 3: CAYGGKYLW (SEQ ID NO: 805) - TCN-563 (5237_B21 ) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TGSSSDVGASNSVS (SEQ ID NO: 803) CDR 2: DVTERPS (SEQ ID NO : 804) CDR 3: CAYGGKYLW (SEQ ID NO : 805) TCN-526 (5084_C17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: GAGGTGCTGATGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCGTGAGACT CTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCAGTTTCAGTAGTCATTGGATGACCTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAGAGGACGATGGAGGTGACAAGTAC TATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCATTATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATTCAGT GTATCTGCAAATGAACAGCCTAAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTTCTGTGCGAGAG GTTCGGGGAGCTCTGATAGAAGTGATTATGACCCCCACTACTACTACTACTTGGACGTC TGGGGCAAAGGGGCCACGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 806) TCN-526 (5084_C17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EVLMVESGGGL QPGGS RLSCVASGFSFSSHWM WVRQAPGKGLEWVANIEDDGGDKY YVDSVKGRFIISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTA FCARGSGSSDRSDYDPHYYYYLDV WGKGATVTVSS (SEQ ID NO: 807) TCN-526 (5084_C17) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SHWMT (SEQ ID NO: 808) CDR 2: NIEDDGGDKYYVDSVKG (SEQ ID NO : 809) CDR 3: GSGSSDRSDYDPHYYYYLDV (SEQ ID NO: 810) TCN-526 (5084_C17) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFSFSS (SEQ ID NO: 811) CDR 2: NIEDDGGDKY (SEQ ID NO: 812) CDR 3: GSGSSDRSDYDPHYYYYLDV (SEQ ID NO: 810) TCN-526 (5084_C17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCCAGCTGACCCAGTCTCCATCTTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAAAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGCTGTTTGCTGCTTCTACTTTGCTAGATGGGGTCCCA TCAAGATTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCA ACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACGGAATCACAGTCCCTCGTGGACGTTCG GCCAAGGGACCAGGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 813) TCN-526 (5084_C17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYL WYQQKPGKAPKLLLFAASTLLDGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQR HSPSWTFGQGTRVEIK (SEQ ID NO: 814) TCN-526 (5084_C17) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSISRYLN (SEQ ID NO : 815) CDR 2: AASTLLD (SEQ ID NO : 816) CDR 3: QRNHSPSWT (SEQ ID NO : 817) TCN-526 (5084_C17) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSISRYLN (SEQ ID NO: 815) CDR 2: AASTLLD (SEQ ID NO: 816) CDR 3: QRNHSPSWT (SEQ ID NO: 817) TCN-527 (5086_C06) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAAGAGTCGGGCCCGGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CAACTGCGCTGTCTCTGGAGGCTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGC CCCCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGCTATATCTCTTACAATGGGAGGCCCAAGTAC AACCCCTCCCTCACGAGTCGAGTCACCATATCCGTCGACACGTCCAAGGACCAGTTCTC CCTGGAGCTGCGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCCTTTATTACTGTGCGAGAGAAA CGCGGTTCGGGGAGTTATTATCTCCCTATGATGCTTTTGAAATCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO : 818) TCN-527 (5086_C06) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLNCAVSGGSISNYYWSWIRQPPGKGLEWIGYISY GRPKY PSLTSRVTISVDTSKDQFSLELRSVTAADTALYYCARETRFGELLSPYDAFEIWGQGT MVTVSS (SEQ ID NO : 819) TCN-527 (5086_C06) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYY S (SEQ ID NO: 820) CDR 2: YISYNGRPKYNPSLTS (SEQ ID NO: 821) CDR 3: ETRFGELLSPYDAFEI (SEQ ID NO: 822) TCN-527 (5086_C06) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSISN (SEQ ID NO : 824) CDR 2: YISYNGRPK ( SEQ ID NO: 823) CDR 3: ETRFGELLSPYDAFEI (SEQ ID NO: 822) TCN-527 (5086_C06) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATGACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTAGAAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGAC CAGGGACAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTACACAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAATAATCTGCA ACCTGAAGATTTTGCATCTTACTACTGTCAACAGAGTTACGATAACCCTCAGACGTTCG GCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO : 825) TCN-527 (5086_C06) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASQNIRSYL WYQQRPGTAPKLLIYAASTLHSGVP SRFSGGGSGTDFTLTIN LQPEDFASYYCQQSYDNPQTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 826) TCN-527 (5086_C06) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQNIRSYLN (SEQ ID NO : 827) CDR 2: AASTLHS (SEQ ID NO: 828) CDR 3: QQSYDNPQT (SEQ ID NO : 829) TCN-527 (5086_C06) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQNIRSYLN (SEQ ID NO: 827) CDR 2: AASTLHS (SEQ ID NO: 828) CDR 3: QQSYDNPQT (SEQ ID NO : 829) TCN-528 (5087_P17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGTCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCAATTATGACATCAACTGGATTCGACAGG CCCCTGGTCAAGGACTTGAGTGGATGGGCTGGATAAATCCCAACAGTGGAACCACGGGC TCTGCACAGAGGTTCCAGGGCAGAGTCACCATAACCGTGGACACCTCCATAACCACAGT CTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCATTTACTACTGCGCGAGAG GCCGTGAGCTCCTCCGGCTTCAACATTTTTTGACTGACTCCCAGTCCGAGAGGAGGGAC TGCTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 830) TCN-528 (5087_P17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGSEVKKPGASVKVSCKASGYTFT YDINWIRQAPGQGLEWMGWINPNSGTTG SAQRFQGRVTITVDTSITTVYMELSSLRSDDTAIYYCARGRELLRLQHFLTDSQSE RD CFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 831) TCN-528 (5087_P17) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYDIN (SEQ ID NO: 832) CDR 2: WINPNSGTTGSAQRFQG (SEQ ID NO : 833) CDR 3: GRELLRLQHFLTDSQSERRDCFDP (SEQ ID NO: 834) TCN-528 (5087_P17) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GYTFTN (SEQ ID NO : 835) CDR 2: WINPNSGTTG (SEQ ID NO : 836) CDR 3: GRELLRLQHFLTDSQSERRDCFDP (SEQ ID NO: 834) TCN-528 (5087_P17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GATATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAATCAAGACATTGGCATTTATTTAAATTGGTATCAACAGAATC CAGGGAAAGTCCCTAAACTCCTGCTCCATGGTGCGTCCAGTTTGCAGGGCGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGCCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATTCACAGTCTACA ACCTGAAGATTTAGCAACCTACTACTGTCAACAGAGTCGCCGTCTACCGTACACTTTTG GCCAGGGGACCAGGGTGGAACTCAAA (SEQ ID NO : 837) TCN-528 (5087_P17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRANQDIGIYLNWYQQNPGKVPKLLLHGASSLQGGVP SRFSASGSGTDFTLTIHSLQPEDLATYYCQQSRRLPYTFGQGTRVELK (SEQ ID NO: 838) TCN-528 (5087_P17) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RANQDIGIYLN (SEQ ID NO : 839) CDR 2: GASSLQG (SEQ ID NO : 840) CDR 3: QQSRRLPYT (SEQ ID NO: 841) TCN-528 (5087_P17) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RANQDIGIYLN (SEQ ID NO : 839) CDR 2: GASSLQG (SEQ ID NO : 840) CDR 3: QQSRRLPYT (SEQ ID NO : 841) TCN-529 (5297_H01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGATCACCTTGAGGGAGTCTGGTCCTACGCTGGTGAAACCCACACAGACCCTCACGCT GACCTGCACCTTCTCTGGGTTTTCACTCAGCACTAATGGAGTGAATGTGGGCTGGATCC GTCAGCCCCCAGGAAAGGCCCTGGAGTGGCTTGCACTCATTTACTGGGATGATGATAAG CGCTACAGTCCGTCTCTGAAGAGAAGGCTCACCATCACCAAGGACACCTCCAAAAACCA AGTGGTCCTTACACTGACCAACATGGACCCTGTAGATACAGCCACATATTACTGTGCAC ACAGACCCGACTTCTATGGTGACTTCGAGTACTGGGGCCCGGGAACCCTGGTCACCGTC TCCTCA (SEQ ID NO : 842) TCN-529 (5297_H01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QITLRESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLST GVNVGWIRQPPGKALEWLALIYWDDDK RYSPSLKRRLTITKDTSKNQWLTLTNMDPVDTATYYCAHRPDFYGDFEYWGPGTLVTV SS (SEQ ID NO: 843) TCN-529 (5297_H01) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: TNGVNVG (SEQ ID NO: 844) CDR 2: LIYWDDDKRYSPSLKR (SEQ ID NO: 845) CDR 3: RPDFYGDFEY (SEQ ID NO : 846) TCN-529 (5297_H01) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFSLSTNG (SEQ ID NO : 847) CDR 2: LIY DDDKR (SEQ ID NO : 848) CDR 3: RPDFYGDFEY (SEQ ID NO: 846) TCN-529 (5297_H01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGTCTGCACTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCCGGACAGTCGATCACCAT CTCCTGCACTGGAAGCAGCAGTGACATTGGTGGTTÁTAACTATGTCTCCTGGTACCAAC AACACCCAGGCAAGGCCCCCAAACTCATGATTTACGATGTCAATAATCGGCCCTCAGGG GTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACTATCTCTGG GCTCCAGACTGACGACGAGGCTGATTATTACTGCGGCTCATATACAGGCAGTCCTCATT ATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID NO : 849) TCN-529 (5297_H01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDIGGY YVSWYQQHPGKAPKLMIYDVM RPSG VSNRFSGSKSGNTASLTISGLQTDDEADYYCGSYTGSPHYVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 850) TCN-529 (5297_H01) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TGSSSDIGGYNYVS (SEQ ID NO: 851) CDR 2: DVNNRPS (SEQ ID NO: 852) CDR 3: GSYTGSPHYV (SEQ ID NO: 853) TCN-529 (5297_H01) CDR•Chothia de cadena ligera: CDR 1: TGSSSDIGGYNYVS (SEQ ID NO : 851) CDR 2: DVNNRPS (SEQ ID NO : 852) CDR 3: GSYTGSPHYV (SEQ ID NO: 853) TCN-530 (5248_Hl0a) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTCCAACTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAGGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCCCCTTCATGAGTTATGCTATCGGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCAACCCTGTGTTTGGTAGACCGCAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATCGCCACGGACGACTCCACGAAGACATC GTACATGGAACTGAGTAGCCTGACGTCTGAGGACACGGGCATGTATTACTGTGCGAGTA GGTATAGTAGGTCGTCCCCAGGGACCTTTGAGTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACC GTCTCGAGC (SEQ ID NO : 854) TCN-530 (5248_Hl0a) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVRKPGSSVKVSCKASGGPFMSYAIGWVRQAPGQGLEWMGGINPVFGRPH YAQKFQGRVTIATDDSTKTSYMELSSLTSEDTGMYYCASRYSRSSPGTFESWGQGTLVT VSS (SEQ ID NO: 855) TCN-530 (5248_Hl0a) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SYAIG (SEQ ID NO: 856) CDR 2: GINPVFGRPHYAQKFQG (SEQ ID NO: 857) CDR 3: RYSRSSPGTFES (SEQ ID NO: 858) TCN-530 (5248_Hl0a) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGPFMS (SEQ ID NO: 859) CDR 2: GINPVFGRPH (SEQ ID NO: 860) CDR 3: RYSRSSPGTFES (SEQ ID NO : 858) TCN-530 (5248_Hl0a) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATAGTGATGACGCAGTTTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCCGGGGAACGAGTCAC CCTCTCCTGTAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAACAATTTAGCCTGGTACCAGCAAAAAC CTGGCCAGCCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCTACCAGGGCCACGGGTGTCCCA GCCAAGTTCAGTGGCACTGGGTCTGGCACAGAGTTCACTCTCAGCATCAGCAGCCTGCA GTCCGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATCACAACTGGCCTCCCTCG ACA GTTTTGGCCTGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 861) TCN-530 (5248_Hl0a) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVMTQFPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSN LAWYQQKPGQPPRLLIYDASTRATGVP AKFSGTGSGTEFTLSISSLQSEDFAYYCQQYHNWPPSYSFGLGTKLEIK (SEQ ID NO: 862) TCN-530 (5248_Hl0a) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSNNLA (SEQ ID NO : 863) CDR 2: DASTRAT (SEQ ID NO: 864) CDR 3: QQYHNWPPSYS (SEQ ID NO: 865) TCN-530 (5248_Hl0a) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSNNLA (SEQ ID NO : 863) CDR 2: DASTRAT (SEQ ID NO : 864) CDR 3: QQYH WPPSYS (SEQ ID NO : 865) TCN-531 (5091_H13) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTGGTACAGCCAGGGCGGTCCCTGAAACT CTCCTGCACAGGTTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGGTGTGACCTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTAGGTTTCATTAGAACCAGACCTTGGGGTGGGACA GCAGATACCGCCGCGTCTGTGAAAGGCAGATTCACTATTTCAAGAGATGATTCCAAAAG TCTCGCCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTT GTAGAGATGCCCCTCCAAATGTGGAAGTGGCTTCTATGACCAACTGGTACTTCGATCTC TGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO : 866) TCN-531 (5091_H13) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EVQLVESGGDLVQPGRSLKLSCTGSGFTFGDYGVTWVRQAPGKGLEWVGFIRTRP GGT ADTAASVKGRFTISRDDSKSLAYLQinSISLKTEDTAvYYCCRDAPPNVEVASMTMWYFDL WGRGTLVTVSS (SEQ ID NO : 867) TCN-531 (5091_H13) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DYGVT (SEQ ID NO: 868) CDR 2: FIRTRPWGGTADTAASVKG (SEQ ID NO: 869) CDR 3: DAPPNVEVASMTNWYFDL (SEQ ID NO : 870) TCN-531 (5091_H13) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFTFGD (SEQ ID NO: 871) CDR 2: FIRTRPWGGTAD (SEQ ID NO : 872) CDR 3: DAPPNVEVASMT WYFDL (SEQ ID NO: 870) TCN-531 (5091_H13) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCCAGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTCTCAATTGTTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CGGGGAAAGTTCCTAACCTCCTGATGTATGCTGCATCCACATTGCAGTCAGGGGTCCCA TCTCGGTTCAGCGGCAGTGGATTTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA GCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAACGTATGGCGGTGTCTCTACTTTCGGCG GAGGGACCAAGGTGGAGATCAGA (SEQ ID NO: 873) TCN-531 (5091_H13) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGILNCLAWYQQKPGKVPNLLMYAASTLQSGVP SRF5GSGFGTDFTLTISSLQPEDVA YYCQTYGGVSTFGGGTKVEIR (SEQ ID NO: 874) TCN-531 (50 1_H13) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQGILNCLA (SEQ ID NO: 875) CDR 2: AASTLQS (SEQ ID NO : 876) CDR 3: QTYGGVST (SEQ ID NO: 877) TCN-531 (5091_H13) CDR Chot ia de cadena ligera: CDR 1: RASQGILNCLA (SEQ ID NO: 875) CDR 2: AASTLQS (SEQ ID NO : 876) CDR 3: QTYGGVST (SEQ ID NO : 877) TCN-532 (5262_H18) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCTTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCGTCAGCAGTGAGACTTACTACTGGAGCTGGATCC GGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTAGAGTGGATTGGATATATCTATTACATTGGGAACACC GACTACAGGCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCACTGGACACGTCCAAGAACCA GTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGA GAGGCGCTTATTATGATAGTAGTGGTTACCCGGCTTTTTATATCTGGGGCCAAGGGACA ATGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 878) TCN-532 (5262_H18) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSETYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGNT DYRPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGAYYDSSGYPAFYI GQGT MVTVSS (SEQ ID NO: 879) TCN-532 (5262_H18) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SETYYWS (SEQ ID NO : 880) CDR 2: YIYYIGNTDYRPSLKS (SEQ ID NO : 881) CDR 3: GAYYDSSGYPAFYI (SEQ ID NO : 882) TCN-532 (5262_H18) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSVSSET (SEQ ID NO: 883) CDR 2: YIYYIGNTD (SEQ ID NO: 884) CDR 3: GAYYDSSGYPAFYI (SEQ ID NO: 882) TCN-532 (5262_H18) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCAT CTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGTCAGATTATGATGTGCACTGGTACAAGC AACTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTTTGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGG GTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGG GCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAATCCTATGACAGCAGCCTGAGTG GTTTTCATGTCTTCGGAAGTGGGACCAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID NO: 885) TCN-532 (5262_H18) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSDYDVHWYKQLPGTAPKLLIFGNSNRPSG VPDRFSGSK5GTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGFHVFGSGTKVTVL ( SEQ ID NO: 886) TCN-532 (5262_H18) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TGSSSNIGSDYDVH (SEQ ID NO : 887) CDR 2: GNSNRPS (SEQ ID NO: 888) CDR 3: QSYDSSLSGFHV (SEQ ID NO : 889) TCN-532 (5262_H18) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TGSSSNIGSDYDVH (SEQ ID NO: 887) CDR 2: GNSNRPS (SEQ ID NO : 888) CDR 3: QSYDSSLSGFHV (SEQ ID NO: 889) TCN-533 (5256_A17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGACGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGACGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCAGCTTCAGCAACTATGGAATCAACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGGGGAATCATCCCTCTCATTAATGCACCGAAC TACGCACCGAAGTTCCAGGGCAGAGTGACGATTACCGCGGACATGTTCTCGAATATAGT CTCCTTGCAGTTGACCAGCCTGAGAACTGACGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAC GAAAAATGACTACGGCTATTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 890) TCN-533 (5256_A17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGADVKKPGSSVTVSCKASGGSFSNYGI VRQAPGQGLEWMGGIIPLINAPN YAPKFQGRV I ADMFSNIVSLQLTSLRTDDTAVYYCARRK TTAIDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 891) TCN-533 (5256_A17) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYGIN (SEQ ID NO: 892) CDR 2: GIIPLINAPNYAPKFQG (SEQ ID NO : 893) CDR 3: RKMTTAIDY (SEQ ID NO: 894) TCN-533 (5256_A17) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSFSN (SEQ ID NO: 787) CDR 2: GIIPLINAPN (SEQ ID NO: 895) CDR 3: RKMTTAIDY (SEQ ID NO: 894) TCN-533 (5256_A17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGCCTGTGTTGAGTCAGCCACCTTCTGCATCGGCCTCCCTGGGAGCCTCCGTCACACT CACCTGCACCCTGAGTAGCGGCTTCGATAATTATCAAGTGGCCTGGTACCAGCAGAGAC CAGGGAAGGGCCCCCGCTTTGTGATGCGGGTGGGCAATGGTGGGAATGTGGCTTCCAAG GGGGATGGCATTCCTGATCGTTTCTCAGTCTCGGGCTCAGGCCTGAATCGGTACCTGAC CATCAAGAACATCCAGGAAGACGATGAGAGTGACTATTATTGTGGGGCAGACCATGGCA GTGGGAACAACTTCGTGTCCCCTTATGTGTTTGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTTCTA (SEQ ID NO: 896) TCN-533 (5256_A17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QPVLSQPPSASASLGASVTLTCTLSSGFD YQVAWYQQRPGKGPRFVMRVGNGGNVASK GDGIPDRFSVSGSGLNRYLTIK IQEDDESDYYCGADHGSGNNFVSPYVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 897) TCN-533 (5256_A17) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TLSSGFDNYQVA (SEQ ID NO: 898) CDR 2: VGNGGNVASKGD (SEQ ID NO: 899) CDR 3: GADHGSGNNFVSPYV (SEQ ID NO : 900) TCN-533 (5256_A17) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TLSSGFDNYQVA (SEQ ID NO : 898) CDR 2: VGNGGNVASKGD (SEQ ID NO : 899) CDR 3: GADHGSGNNFVSPYV (SEQ ID NO: 900) TCN-534 (5249_B02) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCAGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAGGGAATCTGGAGGCACCTTCAACGGCTACACTATCACCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGGCAAGGCCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATGATGGGGACAGTCAAC TACGCACAGAAGTTGCAGGGCAGAGTCACCATTACCACGGACTATTTCACGAAAACAGC CTACATGGATCTGAACAATTTAAGATCTGAAGACACGGCCATGTATTATTGTGTGAAAA TCAGATATACTGGGCAGCAGCTGCTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO: 901) TCN-534 (5249_B02) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVKKPGS5VKVSCRESGGTFNGYTITWVRQAPGQGLE MGGIIPMMGTVM YAQKLQGRVTITTDYFTKTAYMDLN LRSEDTAMYYCVKIRYTGQQLLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 902) TCN-534 (5249_B02) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: GYTIT (SEQ ID NO: 903) CDR 2: GIIPMMGTVNYAQKLQG (SEQ ID NO : 904) CDR 3: IRYTGQQLL (SEQ ID NO : 905) TCN-534 (5249_B02) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGTFNG (SEQ ID NO : 906) CDR 2: GIIPMMGTVN (SEQ ID NO: 907) CDR 3 : IRYTGQQLL (SEQ ID NO: 905) TCN-534 (5249_B02) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCGGCATCTATAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTGCAAGTTGGTTGGCCTGGTATCAGCAAAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGAGGCAGTTAATTTAGAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA GCCCGATGATTTTGCAACTTATTTCTGCCAACATTATGGTACTATTTCTCAGACCTTCG GCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 908) TCN-534 (5249_B02) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQMTQSPSTLSASIGDRVTITCRASQSIASWLAWYQQKPGKAPKLLIYEAVNLESGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYFCQHYGTISQTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 909) TCN-534 (5249_B02) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSIASWLA (SEQ ID NO : 910) CDR 2: EAVNLES (SEQ ID NO: 911) CDR 3: QHYGTISQT (SEQ ID NO : 912) TCN-534 (5249_B02) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSIASWLA (SEQ ID NO: 910) CDR 2: EAVNLES (SEQ ID NO: 911) CDR 3: QHYGTISQT (SEQ ID NO : 912) TCN-535 (5246_P19) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTCCAGCTGGTGCAATCTGGGAGTGAGGTGAAGAAGCCTGGGACCTCGGTGAAGGT CTCCTGCACGGCCTCTGGAAGTGTCTTCACCAATTATGGAATTAGTTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTCTCTTTGGCGCAGCCAAG TACGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACCATCACAGCGGACGAATCCACGAAGACAGT CTACATGGAGCTGAGCAGGCTGACATCTAAAGACACGGCCATATATTTCTGTGCGAAGG CCCCCCGTGTCTACGAGTACTACTTTGATCAGTGGGGCCAGGGAACCCCAGTCACCGTC TCCTCA (SEQ ID NO: 913) TCN-535 (5246_P19) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGSEVKKPGTSVKVSC ASGSVFTNYGISWVRQAPGQGLEWMGGIIPLFGAAK YAQKFQGRV I ADESTKTVYMELSRLTSKDTAIYFCAKAPRVYEYYFDQWGQG PVTV SS (SEQ ID NO: 914) TCN-535 (5246_P19) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYGIS (SEQ ID NO: 915) CDR 2: GilPLFGAAKYAQKFQG (SEQ ID NO: 916) CDR 3: APRVYEYYFDQ (SEQ ID NO : 917) TCN-535 (5246_P19) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GSVFTN (SEQ ID NO: 918) CDR 2: GilPLFGAAK (SEQ ID NO: 919) CDR 3: APRVYEYYFDQ (SEQ ID NO : 917) TCN-535 (5246_P19) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGTCAATTAGCCTGGTACCAGCAAA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCATCATCTATGGTGCGTCCACCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGAAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCGGCAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTTTTTCTGTCAGCAGTATAGTACCTCACCTCCGACGT TCGGCCAAGGGACCAAGGTGGATTTCAAA (SEQ ID NO : 920) TCN-535 (5246_P19) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSQLA YQQKPGQAPRLIIYGASTRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTIGRLEPEDFAVFFCQQYSTSPPTFGQGTKVDFK (SEQ ID NO: 921) TCN-535 (5246_P19) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSSQLA (SEQ ID NO : 922) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO: 755) CDR 3: QQYSTSPPT ( SEQ ID NO: 923) TCN-535 (5246_P19) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSSQLA (SEQ ID NO : 922) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO : 755) CDR 3: QQYSTSPPT (SEQ ID NO : 923) TCN-536 (5095_N01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCC GCCAGCCCCCAGGGAGGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAGTCATGGTGGAAGCACC AACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTGGACACGACCAAGAACCA GTTCTCCCTGAGACTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGA GAGGGACAGACCCTGACACGGAAGTATATTGTCGTGTTGGTAACTGCGCGGCCTTTGAC TACTGGGGCCAGGGAAGCCTGGTCACCGTCTCCTCA (SEQ ID NO : 924) TCN-536 (5095_N01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSVSGYYWSWIRQPPGRGLEWIGEISHGGST YNPSLKSRV IS DTTKNQFSLRLSS TAADTAVYYCARGTDPDTEVYCRVGNCAAFD YWGQGSLVTVSS (SEQ ID NO: 925) TCN-536 (5095_N01) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: VSGYYWS (SEQ ID NO : 926) CDR 2: ElSHGGSTNYNPSLKS (SEQ ID NO : 927) CDR 3: GTDPDTEVYCRVGNCAAFDY (SEQ ID NO : 928) TCN-536 (5095_N01) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSFSVSG (SEQ ID NO : 929) CDR 2: EISHGGSTN (SEQ ID NO: 930) CDR 3: GTDPDTEVYCRVGNCAAFDY (SEQ ID NO : 928) TCN-536 (5095_N01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTATATTGGCGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAGAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGCCAGTTTGTTAGCACCAGATCCCTGGCCTGGTACCAGCAGA GACCTGGCCAGGCTCCCAGACTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACGCTCACCATCAGCAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCACTATGGTTACTCACCTAGGTACG CTTTTGGCCAGGGGTCCAAGGTTGAGATCAAA (SEQ ID NO : 931) TCN-536 (5095_N01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIILAQSPGTLSLSPGERATLSCRASQFVSTRSLA YQQRPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGYSPRYAFGQGSKVEIK (SEQ ID NO: 932) TCN-536 (5095_N01) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQFVSTRSLA (SEQ ID NO : 933) CDR 2: GASSRAT (SEQ ID NO: 768) CDR 3: QHYGYSPRYA (SEQ ID NO: 934) TCN-536 (5095_N01) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQFVSTRSLA (SEQ ID NO : 933) CDR 2: GASSRAT (SEQ ID NO: .768) CDR 3: QHYGYSPRYA (SEQ ID NO: 934) TCN-537 (3194_D21) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTCCAACAGTGGGGCTCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGAGATGACTACTGGACCTGGATTCGCCAGC CCCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGAACCAACTAC AACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCCTGAAACAGTTCTC CTTGAAGGTGATTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTTTATTACTGTGCGAGAGGGA CGAGCCATGTTTCCCGGTATTTTGATTGGTTACCACCCACCAACTGGTTCGACCCCTGG GGCCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 935) TCN-537 (3194_D21) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQQWGSGLLKPSETLSLTCAVYGGSFRDDYWTWIRQPPGKGLEWIGEINHSGRTNY NPSLKSRVTISVDTSLKQFSLKVISVTAADTAVYYCARGTSHVSRYFDWLPPT WFDPW GQGTQVTVSS (SEQ ID NO: 936) TCN-537 (319 _D21) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DDYWT ( SEQ ID NO: 937) CDR 2: EINHSGRTNY PSLKS (SEQ ID NO: 938) CDR 3: GTSHVSRYFDWLPPTNWFDP (SEQ ID NO: 939) TCN-537 (3194_D21) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSFRD (SEQ ID NO: 940) CDR 2: EINHSGRTN (SEQ ID NO: 941) CDR 3: GTSHVSRYFDWLPPTNWFDP (SEQ ID NO: 939) TCN-537 (3194_D21) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCGTCATGTATGGTGCAGCCACCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGCCAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAATGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAACTCACCGATCACCT TCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATCAAA (SEQ ID NO : 942) TCN-537 (3194_D21) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLVMYGAATRATGI PDRFSGSGSGPDFTLTISRLEPEDFAMYYCQQYGNSPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 943) TCN-537 (3194_D21) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO : 944) CDR 2: GAATRAT (SEQ ID NO : 945) CDR 3: QQYGNSPIT (SEQ ID NO: 946) TCN-537 (3194_D21) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO : 944) CDR 2: GAATRAT (SEQ ID NO: 945) CDR 3: QQYGNSPIT (SEQ ID NO: 946) TCN-538 (3206_O17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTACACTGGTGAAACCCACACAGACCCTCACACT GACCTGCGTCTTCTCTGGGTTCTCACTCAGCATTACTGGAGTGCGTGTGGGCTGGATCC GTCAGCCCCCAGGAAAGGCCCTGGAGTGGCTTGCACTCATTTCTTGGGATGATGAAAAG CACTACAGCCCATCTCTGCAGAGTAGGCTCACCATCACCAAGGACACCTCCAAAAACCA GGTGGTCCTTACAATGACCAACCTGGACCCTGTCGACACAGCCACATATTACTGTGCAC GGTCAACCGACAGGGGCCACGTCTTACGATATTTTGGCTGGATGTTACCGGGTGATGCA TTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 947) TCN-538 (3206_Ol7) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCVFSGFSLSITGVRVGWIRQPPGKALEWLALISWDDEK HYSPSLQSRLTITKDTSKNQWLTMTNLDPVDTATYYCARSTDRGHVLRYFGWMLPGDA FDVWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO : 948) TCN-538 (3206_?17) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: ITGVRVG (SEQ ID NO : 949) CDR 2: LISWDDEKHYSPSLQS (SEQ ID NO : 950) CDR 3: STDRGHVLRYFGWMLPGDAFDV (SEQ ID NO : 951) TCN-538 (3206_O17) CDR C othia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFSLSITG (SEQ ID NO: 952) CDR 2: LISWDDEKH (SEQ ID NO: 953) CDR 3: STDRGHVLRYFGWMLPGDAFDV (SEQ ID NO : 951) TCN-538 ¦ (3206_O17) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTTCCTGCCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCAC CATCAACTGCAAGTCC GCCAGAGAGTTTTATACAGCTCCAACAATAAAAACTACTTAG CTTGGTACCAGCTGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAGTTGATCATTTATTGGGCATCTACC CGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGAATTCACTCT CACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAACAATATTATA GTCGTCCGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTCGAGATCAAA (SEQ ID NO: 954) TCN-538 (3206_O17) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIVMTQSPDFLPVSLGERATINCKSSQRVLYSSN KNYLAWYQLKPGQPPKLIIYWAST RESGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSRPYTFGQGTKLEIK ( SEQ ID NO: 955) TCN-538 (3206_Ol7) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: KSSQRVLYSS K YLA (SEQ ID NO : 956) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO : 957) CDR 3: QQYYSRPYT (SEQ ID NO : 958) TCN-538 (3206_O17) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: KSSQRVLYSSNNKNYLA (SEQ ID NO : 956) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO: 957) CDR 3: QQYYSRPYT (SEQ ID NO: 958) TCN-539 (5056_A08) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGAAATCACCTTCATTACCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGG CCCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTTATATCAGATGATGGAAGCAATAAATTC TACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCT GTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGCTTATTACTGTGCGAGAG AAGGGGTTTACTTTGATTCGGGGACTTATAGGGGCTACTTTGACTACTGGGGCCAGGAA ACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 959) TCN-539 (5056_A08) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASEITFITYjümWVRQAPGKGLEWVALISDDGS KF YADSVKGRFTISRDNSK TLYLQMNSLRAEDTAAYYCAREGVYFDSGTYRGYFDYWGQE TLVTVSS (SEQ ID NO: 960) TCN-539 (5056_A08) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: TYAMH ( SEQ ID NO: 961) CDR 2: LISDDGSNKFYADSVKG (SEQ ID NO: 962) CDR 3: EGVYFDSGTYRGYFDY (SEQ ID NO : 963) TCN-539 (5056_A08) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: EITFIT (SEQ ID NO: 964) CDR 2: LISDDGSNKF (SEQ ID NO: 965) CDR 3: EGVYFDSGTYRGYFDY (SEQ ID NO: 963) TCN-539 (5056_A08) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAAC CTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCA GCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGA GCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCCACTGGCCTCCGATCACCT TCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATCAAA (SEQ ID NO : 966) TCN-539 (5056_A08) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFA YCQQRSHWPPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 967) TCN-539 (5056_A08) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSYLA (SEQ ID NO : 968) CDR 2: DASNRAT (SEQ ID NO: 969) CDR 3: QQRSHWPPIT (SEQ ID NO : 970) TCN-539 (5056_Á08) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSYLA (SEQ ID NO : 968) CDR 2: DASNRAT (SEQ ID NO: 969) CDR 3: QQRSHWPPIT (SEQ ID NO: 970) TCN-540 (5060_F05) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTACAATCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTACGCCATGCACTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCTATTATATCATACGACGGAAATGATCAATAC TATACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAGCTCCAAAGTGTATCT CCAAATGCACAGGCTGAGACCTGAGGACACGGCTGTTTATTACTGTGCGAAAGAATTTG AAACTAGTGGTTATTTTCATGGGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAATCCTGGTCACC GTCTCGAGC (SEQ ID NO : 971) TCN-540 (5060_F05) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGNDQY YTDSVKGRFTISRDSSKVYLQMHRLRPEDTAVYYCAKEFETSGYFHGSFDYWGQGILVT VSS ( SEQ ID NO: 972) TCN-540 (5060_F05) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SYAMH (SEQ ID NO: 973) CDR 2: IISYDGNDQYYTDSVKG (SEQ ID NO : 974) CDR 3: EFETSGYFHGSFDY (SEQ ID NO: 975) TCN-540 (5060_F05) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFTFSS (SEQ ID NO : 976) CDR 2: IISYDGNDQY (SEQ ID NO: 977) CDR 3 : EFETSGYFHGSFDY (SEQ ID NO: 975) TCN-540 (5060_F05) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCAT CTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAAC AACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCTTGATTTATGAGGTCACTAATTGGCCCTCAGGG GTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACAATCTCTGG GCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCAGCTCATATGCGGGCAGCAGCACTT GGGTGTTCGGCGGAGGGACCAGGGTGACCGTTCTA (SEQ ID NO: 978) TCN-540 (5060_F05) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGY YVSWYQQHPGKAPKLLIYEVT WPSG VSNRFSGSKSGNTASL ISGLQAEDEADYYCSSYAGSS WVFGGGTRVTVL ( SEQ ID NO: 979) TCN-540 (5060_F05) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TG SSDVGGYNYVS (SEQ ID NO : 980) CDR 2: EVTNWPS (SEQ ID NO: 981) CDR 3: SSYAGSST V ( SEQ ID NO: 982) TCN-540 (5060_F05) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO : 980) CDR 2: EVTNWPS (SEQ ID NO: 981) CDR 3: SSYAGSSTWV (SEQ ID NO: 982) TCN-541 (5062_M11) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAATAGTTACTACTGGAACTGGATCCGGCAGC CCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGCTATATCTATCACAGTGGGAGCACCAACTAC AACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATTTCGGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTC CCTGCAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGACTCC GGACGGACTACGGTGACCCCGACTCGGTATACTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAA GGGACCACGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 983) TCN-541 (5062_Mll) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWN IRQPPGKGLE IGYIYHSGSTNY PSLKSRVTISVPTSK QFSLQLSSVTAADTAVYYCARLRTDYGDPDSVYYYGMDVWGQ GTTVTVSS (SEQ ID NO : 984) TCN-541 (5062_M11) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SYY N (SEQ ID NO: 985) CDR 2: YIYHSGSTNYNPSLKS (SEQ ID NO : 986) CDR 3: LRTDYGDPDSVYYYGMDV (SEQ ID NO: 987) TCN-541 (5062_M11) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSINS (SEQ ID NO: 988) CDR 2: YIYHSGSTN (SEQ ID NO: 989) CDR 3: LRTDYGDPDSVYYYGMDV (SEQ ID NO: 987) TCN-541 (5062_M11) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCAGTGTCCCCAGGACAGACGGCCAGGAT CACCTGCTCTGGAGATGCATTGCCAAAGCAAAATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAG GCCAGGCCCCTGTGCTGCTGATATATAAAGACAGTGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAG CGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGGACAACAGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGC AGAGGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAGCAGTGGTACTTCTTGGGTGT TCGGCGGAGGGACCAAACTGACCGTTCTA (SEQ ID NO : 990) TCN-541 (5062_M11) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera ( abat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQNAYWYQQKPGQAPVLLIYKDSERPSGIPE RFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSSGTSWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 991) TCN-541 (5062_M11) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: SGDALPKQNAY (SEQ ID NO : 994) CDR 2: KDSERPS (SEQ ID NO : 995) CDR 3: QSADSSGTSWV (SEQ ID NO: 996) TCN-541 (5062_M11) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: SGDALPKQNAY (SEQ ID NO : 994) CDR 2: KDSERPS (SEQ ID NO : 995) CDR 3: QSADSSGTSWV (SEQ ID NO : 996) TCN-542 (5079_A16) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTAATTACTACTGGAACTGGGTCC GCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGAGGGAGCACC TTCTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTGACCATATCAATAGACACGTCTAAGAACCA GTTCTCCCTGAGGCTGAGCTCTGTGACGGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGA AGGATACAAGGTCGAGCCTAGACAATTACCAGTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGG ACCACGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 992) TCN-542 (5079_A16) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: ( abat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGNYYWN VRQHPGKGLEWIGYIYYRGST FY PSLKSRVTISID SKNQFSLRL5SV AADTAVYYCAKDTRSSLDNYQYG DVWGQG TTVTVSS (SEQ ID NO: 993) TCN-5. 2 (5079_A16) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SGNYYWN (SEQ ID NO: 997) CDR 2: YIYYRGSTFYNPSLKS (SEQ ID NO : 998) CDR 3: DTRSSLDNYQYGMDV (SEQ ID NO: 999) TCN-542 (5079_A16) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSISSGN (SEQ ID NO: 1000) CDR 2: YIYYRGSTF (SEQ ID NO: 1001) CDR 3: DTRSSLDNYQYGMDV (SEQ ID NO : 999) TCN-542 (5079_A16) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGACTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCT CACCTGTGCTTCCAGCACTGGAGCAGTCACCAGTAGTTACTTTCCAAACTGGTTCCAGC AGAAACCTGGACAAGCGCCCAGGCCACTGATTTATAGTACAACTATCAGACACTCCTGG ACCCCGGCCCGATTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACACTGTCAGG TGTGCAGCCTGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCTGCTCTACTCTGGTGGTGATCCAG TGGC TTCGGCGGAGGGACCAAAC GACCGTTC A (SEQ ID NO: 1002) TCN-542 (5079_A16) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QTWTQEPSLTVgPGGTVTLTCASSTGAV SSYFPNWFQQKPGQAPRPLIYSTTIRHSW TPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEADYYCLLYSGGDPVAFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 1003) TCN-542 (5079_A16) CDR Kabat dé cadena ligera: CDR 1: ASSTGAVTSSYFPN (SEQ ID NO: 1004) CDR 2: STTIRHS (SEQ ID NO: 1005) CDR 3: LLYSGGDPVA (SEQ ID NO : 1006) TCN-542 (5079_A16) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: ASSTGAVTSSYFPN (SEQ ID NO: 1004) CDR 2: STTIRHS (SEQ ID NO : 1005) CDR 3: LLYSGGDPVA (SEQ ID NO: 1006) TCN-543 (5081_G23) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTTCATCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAGGAAGCCTGGGGACTCAGTGAAGGT CTCCTGTAAGACTTCTGGTTACACCTTTTCCACCTATCCTGTCGCCTGGGTGCGACAGG TCCCCGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCACTTACAATGGAAACACAAAC TTTGCACAGAACTTCCAGGGCAGAGTCACCCTGACCACAGACACAACCACGAACACAGC CTACATGGAAGTGAGGAGCCTGAAATTTGACGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGAGAG TGGAAGGCTCGTACAGGGATTTTTGGAATAATCAAAACAGATTCGACCCCTGGGGCCAG GGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1007) TCN-543 (5081_G23) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVHLVQSGAEVRKPGDSVKVSCKTSGYTFSTYPVAWVRQVPGQGLEWMGWISTYNG TN FAQNFQGRVTLTTDTTTNTAYMEVRSLKFDDTAVYYCARVEGSYRDFW QNRFDPWGQ GTLVTVSS (SEQ ID NO : 1008) TCN-543 (5081_G23) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: TYPVA (SEQ ID NO: 1009) CDR 2: WISTYNGNTNFAQNFQG (SEQ ID NO : 1010) CDR 3: VEGSYRDFWNNQNRFDP (SEQ ID NO : 1011) TCN-543 (5081_G23) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GYTFST (SEQ ID NO : 1012) CDR 2: WISTYNGNTN (SEQ ID NO : 1013) CDR 3: VEGSYRDFWN QNRFDP (SEQ ID NO: 1011) TCN-543 (5081_G23) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: TCCTATGTACTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGAT TTCCTGTGGGGGAAGCAACATTGGAGGGAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAG GCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGGCCGGCCCTCAGGGATCCCTGAG CGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGGACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGC CGGGGATGAGGCCGACTATTTCTGTCAGGTGTGGGATAATTTCGGGGGAGTCTTCGGAA CTGGGACCAAGGTCACCGTTCTA (SEQ ID NO : 1014) TCN-543 (5081_G23) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) SYVLTQPPSVSVAPGQTARISCGGSNIGGKSVHWYQQKPGQAPVLWYDDSGRPSGIPE RFSGSNSGDTATLTISRVEAGDEADYFCQVWDNFGGVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 1015) TCN-543 (5081_G23) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: GGSNIGGKSVH (SEQ ID NO : 1016) CDR 2: DDSGRPS (SEQ ID NO: 1017) CDR 3: QVWDNFGGV (SEQ ID NO: 1018) TCN-543 (5081_G23) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: GGSNIGGKSVH (SEQ ID NO : 1016) CDR 2: DDSGRPS (SEQ ID NO : 1017) CDR 3: QVWDNFGGV (SEQ ID NO : 1018) TCN-544 (5082_A19) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGGCTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTCGTGGCTCCATCGGTCATTACTTCTGGAGCTGGATCCGGCAGC CCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGTTATATCTCTTACAGTGGGAGCACCAAGTAC AACCCCTCCCTCAGGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTC CCTGAATCTGAACTCTGTCACCGCTACGGACACGGCCCTATATTACTGTGCGAGAGAGG ATTACGATATTTTGACTGGGGCGGGACCCGGTATGGAGGTCTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1019) TCN-544 (5082_A19) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSRGSIGHYF SWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTKY NPSLRSRVTISVDTSKNQFSLNLNSVTATD ALYYCAREDYDILTGAGPGMEVWGQGTT VTVSS ( SEQ ID NO: 1020) TCN-544 (5082_A19) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: HYFWS (SEQ ID NO: 1021) CDR 2: YISYSGSTKYNPSLRS (SEQ ID NO : 1022) CDR 3: EDYDILTGAGPGMEV (SEQ ID NO : 1023) TCN-544 (5082_A19) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: RGSIGH (SEQ ID NO: 1024) CDR 2: YISYSGSTK (SEQ ID NO: 1025) CDR 3: EDYDILTGAGPGMEV (SEQ ID NO: 1023) TCN-544 (5082_A19) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGTCTATGTTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCAT CTCTTGTTCTGGGAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTCAACTGGTTCAAACATC TCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTACAGAAATGATCTGCGGCCCTCAGGGGTC CCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCT CCAGTCTGAGGATGAGGCTGAT AT ACTGTGCAACATGGGATGACAGCCTGAATGGTT TTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAAGTCACCGTTCTA (SEQ ID NO : 1026) TCN-544 (5082_A19) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSMLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVN FKHLPGTAPKLLIYR DLRPSGV PDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGFYVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 1027) TCN-544 (5082_A19) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: SGSSSNIGSNTV (SEQ ID NO : 1028) CDR 2: R DLRPS (SEQ ID NO : 1029) CDR 3: ATWDDSLNGFYV (SEQ ID NO : 1030) TCN-544 (5082_A19) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: SGSSSNIGSNTVN (SEQ ID NO : 1028) CDR 2: RNDLRPS (SEQ ID NO : 1029) CDR 3: ATWDDSLNGFYV (SEQ ID NO: 1030) TCN-545 (5082_I15) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CTCCTGCGCTGTCTTTGGTGGGTCCTTCAGTGATTACTACTGGACCTGGATACGCCAGC CCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGCGAAATCAAACATAGTGGAAGAACCAACTAC AACCCGTCCCTTGAGAGTCGAGTCACCATATCAGTGGACACGTCCAAGAACCAGTTTTC CCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTATATATTATTGTGCGAGAGGGA CAGACCCTGACACGGAGGGATATTGTCGTAGTGGTAGCTGCTCGGCCTTTGACTTCTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1031) TCN-545 (5082_I15) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLSCAVFGGSFSDYYWTWIRQPPGKGLEWIGEIKHSGRTMY NPSLESRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAIYYCARGTDPDTEGYCRSGSCSAFDFW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1032) TCN-545 (5082_I15) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DYY T (SEQ ID NO : 1033) CDR 2: EIKHSGRTNYNPSLES (SEQ ID NO : 1034) CDR 3: GTDPDTEGYCRSGSCSAFDF (SEQ ID NO : 1035) TCN-545 (5082_I15) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSFSD (SEQ ID NO: 1036) CDR 2: EIKHSGRTN ( SEQ ID NO: 1037) CDR 3: GTDPDTEGYCRSGSCSAFDF (SEQ ID NO: 1035) TCN-545 (5082_I15) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCACTTTGTGAACTACAGGTCCTTAGCCTGGTACCAGCAGA CACCTGGCCAGGTTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCGTCCACCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTTCTGTCAGCAGTATGGTGGCTCACCTAGGTACA CTTTTGGCCAGGGGACCAGGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 1038) TCN-545 (5082_I15) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASHFV YRSLA YQQTPGQVPRLLIYGASTRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYFCQQYGGSPRYTFGQGTRLEIK (SEQ ID NO: 1039) TCN-545 (5082_I15) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASHFVNYRSLA (SEQ ID NO : 1040) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO : 755) CDR 3: QQYGGSPRYT (SEQ ID NO : 1041) TCN-545 (5082_I15) CDR C ot ia de cadena ligera: CDR 1: RASHFVNYRSLA (SEQ ID NO : 1040) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO : 755) CDR 3: QQYGGSPRYT (SEQ ID NO: 1041) TCN-546 (5089_L08) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCGGTGTCTATGGTGGGTCCCTCAGTGATTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGC CCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGAGAAATCAATCATAGTGGAGGCACCAACTAC AATCCGTCCCTCAAGAGACGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCAAAGAAGCAATTCTC CCTGAAGATGAACTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGGGA CAGACCCTGACACGGAAGTATATTGTCGTGCTGGTAACTGCGCGGCCTTTGACTTCTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1042) TCN-546 (5089_L08) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCGVYGGSLSDYYWSWIRQPPGKGLEWIGEI HSGGT Y NPSLKRRVTISVDTSKKQFSLKM SVTAADTAVYYCARGTDPDTEVYCRAGNCAAFDFW GQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 1043) TCN-546 (5089_L08) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DYYWS (SEQ ID NO: 1044) CDR 2: EINHSGGTNYNPSLKR (SEQ ID NO: 1045) CDR 3: GTDPDTEVYCRAGNCAAFDF (SEQ ID NO: 1046) TCN-546 (5089_L08) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGSLSD (SEQ ID NO: 1047) CDR 2: EINHSGGTN (SEQ ID NO : 1048) CDR 3: GTDPDTEVYCRAGNCAAFDF (SEQ ID NO: 1046) TCN-546 (5089_L08) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAGAGAGCCAC CCTCTCCTGCCGGGCCAGTCACTTTGTTATAGGCAGGGCTGTAGCCTGGTACCAGCAGA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTACGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATC CCGGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACT GGAGACTGAAGATTTTGCTGTGTTTTACTGTCAGCACTATGGTAGCTCACCTAGGTACG CTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 1049) TCN-546 (5089_L08) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC ASHFVIGRAVAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGI PDRFSGSGSGTDFTLTISRLETEDFAVFYCQHYGSSPRYAFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 1050) TCN-546 (5089_L08) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASHFVIGRAVA (SEQ ID NO : 1051) CDR 2: GASSRAT (SEQ ID NO: 768) CDR 3: QHYGSSPRYAF (SEQ ID NO: 1052) TCN-546 (5089_L08) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASHFVIGRAVA (SEQ ID NO: 1051) CDR 2: GASSRAT ( SEQ ID NO : 768) CDR 3: QHYGSSPRYAE (SEQ ID NO: 1052) TCN-547 (5092_F11) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGACTCCATTAGTAGTGTTGATCACTACTGGAGCTGGATCC GCCAACACCCAGTGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTTCATGTATTACAGTGCGAGCACC TATTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAACGGACACGTCTAAGAACCA GTTCTCCCTGAGGCTGAGTTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGA GAGGCACTTGTGCTGGTGACTGCTCCCTTCACTACTACTACTACGGTTTGGACGTCTGG GGCCAAGGGAGGACGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1053) TCN-547 (5092_Fll) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: ( abat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGDSISSVDHYWSWIRQHPVKGLEWIGFMYYSAST YY PSLKSRVTISTDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCARGTCAGDCSLHYYYYGLDVW GQGRTVTVSS (SEQ ID NO: 1054) TCN-547 (5092_F11) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SVDHYWS (SEQ ID NO: 1055) CDR 2: FMYYSASTYY PSLKS (SEQ ID NO: 1056) CDR 3: GTCAGDCSLHYYYYGLDV (SEQ ID NO: 1057) TCN-547 (5092_F11) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR l: GDSISSVD (SEQ ID NO: 1058) CDR 2: FMYYSASTY (SEQ ID NO : 1059) CDR 3: GTCAGDCSLHYYYYGLDV (SEQ ID NO: 1057) TCN-547 (5092_F11) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCACAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATGTATGCTGTATCCATTTTGCAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGGCAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCA ACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTTCCCCGCTCACTTTCG GCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 1060) TCN-547 (5092_F11) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYL WYQHKPGKAPKVLMYAVSILQSGVP SRFSGSGSGADFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSSPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1061) TCN-547 (5092_F11) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSISSYLN (SEQ ID NO: 1062) CDR 2: AVSILQS (SEQ ID NO: 1063) CDR 3: QQSYSSPLT (SEQ ID NO: 1064) TCN-547 (5092_F11) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSISSYLN (SEQ ID NO: 1062) CDR 2: AVSILQS (SEQ ID NO: 1063) CDR 3: QQSYSSPLT (SEQ ID NO: 1064) TCN-548 (5092_P01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTAGTGGCCCCATGAGTGATTATTACTGGAGCTGGATCCGGCAGC CCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCATGTCTCTGTCTCTCACGGAGGGAGGACC AAATCCAATCCCTCCGTCATGAGTCGAGTCACCATTTCAGTAGAAACGTCCAAGAACCA ATTCTCCCTGAAACTGACCTCCGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGA GATTAAATTACTATGATAGAAGTGGTTATCATTCGCCTGACGGCCCCTCGAACAACTGG TTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1065) TCN-548 (5092_P01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSSGPMSDYYWSWIRQPPGKGLEWIGHVSVSHGGRT KSNPSV SRVTISVETSK QFSLKLTSVTAADTAVYYCARLNYYDRSGYHSPDGPS NW FDPWGQGTLVTVS5 (SEQ ID NO: 1066) TCN-548 (5092_P01) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DYY S (SEQ ID NO: 1044) CDR 2: HVSVSHGGRTKSNPSVMS (SEQ ID NO: 1067) CDR 3: LNYYDRSGYHSPDGPSNNWFDP (SEQ ID NO : 1068) TCN-548 (5092_P01) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: SGPMSD (SEQ ID NO: 1069) CDR 2: HVSVSHGGRTK (SEQ ID NO : 1070) CDR 3: LNYYDRSGYHSPDGPSNNWFDP (SEQ ID NO : 1068) TCN-548 (5092_P01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCAC CATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAG GTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACC CGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGAATCAGCGGCAGCGGGTCTGGGGCAGATTTCACTCT CACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATTTTG CTACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 1071) TCN-548 (5092_P01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNK YLAWYQQKPGQPPKLLIY AST RESGVPDRISGSGSGADFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFATPRTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 1072) TCN-548 (5092_P01) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: KSSQSVLYSSNNKNYLA (SEQ ID NO : 1073) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO: 957) CDR 3: QQYFATPRT (SEQ ID NO: 1074) TCN-548 (5092_P01) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: KSSQSVLYSSNNKNYLA (SEQ ID NO: 1073) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO : 957) CDR 3: QQYFATPRT (SEQ ID NO : 1074) TCN-549 (5092_P04) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTACAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGACACAAAC TATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCACCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG ATTCCCCCTATAGCAGCAGCTGGTCCTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGACCCCTGGTC ACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1075) TCN-549 (5092_P04) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLE MGWINPNSGDTN YAQKFQGRVTMTRDTSITTAYMELSSLRSDDTAVYYCARDSPYSSSWSFFDYWGQGPLV TVSS (SEQ ID NO: 1076) TCN-549 (5092_P04) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: GYYMH (SEQ ID NO: 1077) CDR 2: WINPNSGDTNYAQKFQG (SEQ ID NO : 1078) CDR 3: DSPYSSSWSFFDY (SEQ ID NO: 1079) TCN-549 (5092_P04) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GYTFTG (SEQ ID NO : 1080) CDR 2: WINPNSGDTN (SEQ ID NO : 1081) CDR 3: DSPYSSSWSFFDY (SEQ ID NO : 1079) TCN-549 (5092_P04) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGAGTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCAC CATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAGCCACTTAG CTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGTTGCTCATTTACTGGGCATCTACC CGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACCCT CATCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAGGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATT TTTCTCCCCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 1082) TCN-549 (5092_P04) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera ( abat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIVMTQSPDSLAVgLGEPATINCKSSQSVLYSSNKKSHLAWYQQKPGQPPKLLIYWAST RESGVPDRFSGSGSGTDFTLIISSLQAEDVAVYYCQQYYFSPLTFGGGTKVEIK ( SEQ ID NO: 1083) TCN-549 (5092_P04) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: KSSQSVLYSSNNKSHLA (SEQ ID NO : 1084) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO : 957) CDR 3: QQYYFSPLT (SEQ ID NO: 1085) TCN-549 (5092_P04) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: KSSQSVLYSSNNKSHLA (SEQ ID NO : 1084) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO : 957) CDR 3: QQYYFSPLT (SEQ ID NO: 1085) TCN-550 (5096_F06) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGCCTCCATCAATAGTCACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGC CCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATGTCTATTACAGTGGGAGCACCACCTAC AACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTATCAGTAGATACGTCCAAGAACCAGTTCTC CCTGAACCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCCTTCTATTACTGTGCGAGACATC CCTACGATGTTTTGACTGGTTCCGGGGACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTG GTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1086) TCN-550 (5096_F06) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGASINSHYWSWIRQPPGKGLEWIGYVYYSGSTTY NPSLKSRVTLSVDTSKNQFSLNLSSVTAADTAFYYCARHPYDVLTGSGD FDPWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 1087) TCN-550 (5096_F06) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SHYWS (SEQ ID NO: 1088) CDR 2: YVYYSGSTTYNPSLKS (SEQ ID NO : 1089) CDR 3: HPYDVLTGSGDWFDP (SEQ ID NO : 1090) TCN-550 (5096_F06) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GASINSH (SEQ ID'NO: 1091) CDR 2: YVYYSGSTT (SEQ ID NO: 1092) CDR 3: HPYDVLTGSGDWFDP (SEQ ID NO: 1090) TCN-550 (5096_F06) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: TCCTATGTTCTGACTCAGGCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGAT TACCTGTGGGGGAAATGCCATTGGAAGTAAAAAAGTTCACTGGTACCAGCACAAGGCAG GCCAGGCCCCTGTACTCGTCGTCTATGATGATACAGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAG CGATTCTCTGGCTCCAACTCTTGGAGCACGGCCACCCTGACCATCAACAGGGTCGAAGC CGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATTTTACCATTGATCATGTGGTCT TCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTTCTA (SEQ ID NO : 1093) TCN-550 (5096_F06) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) S LTQAPSVSVAPGQTARITCGGNAIGSKKVHWYQHKAGQAPVLVVYDDTDRPSGIPE RFSGSNSWSTATLTINRVEAGDEADYYCQWÍDFTIDHWFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 1094) TCN-550 (5096_F06) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: GGNAIGSK VH (SEQ ID NO : 1095) CDR 2: DDTDRPS (SEQ ID NO : 1096) CDR 3: QVWDFTIDHW (SEQ ID NO : 1097) TCN-550 (5096_F06) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: GGNAIGSKKVH (SEQ ID NO : 1095) CDR 2: DDTDRPS (SEQ ID NO: 1096) CDR 3: QVWDFTIDHW (SEQ ID NO: 1097) TCN-551 (5243_D01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: GAGGTGCAACTGGTTCAGTCTGGATCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGAT CTCCTGTAAGGGTTCTGGCTACAGCTTTAGCAACTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCACA TGCCCGGGAAAGGCCTGGAATGGATGGGGATCATTTATCCTGGTGACTCTGATACCAGA TACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATGTCAGCCGACAAGTCCAGCAGCACCGT CTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATTTATTATTGTGCGAGAC GGGGCGGACATAGTTTTGGATATGGGTCGGGGGGGGACACGCACAGTGAATTCGACTCC TGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO : 1098) TCN-551 (5243_D01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EVQLVQSGSEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNY IGWVRHMPGKGLEWMGIIYPGDSDTR YSPSFQGQVTMSADKSSSTVYLQWSSLKASDTAIYYCARRGGHSFGYGSGGDTHSEFDS WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO : 1099) TCN-551 (5243_D01) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYWIG (SEQ ID NO : 1100) CDR 2: IIYPGDSDTRYSPSFQG (SEQ ID NO : 1101) CDR 3: RGGHSFGYGSGGDTHSEFDS (SEQ ID NO : 1102) TCN-551 (5243_D01) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GYSFSN (SEQ ID NO: 1103) CDR 2: IIYPGDSDTR (SEQ ID NO: 1104) CDR 3: RGGHSFGYGSGGDTHSEFDS (SEQ ID NO: 1102) TCN-551 (5243_D01) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGTCTGTATTGACGCAGTCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCAT CTCCTGCTCTGGAAGCGACTCCAACATTGGTGATTATTTTGTATGTTGGTACCAGCACC TCCCAGGAAAACCCCCCCAACTCCTCATCTATGAAAATAATAAGCGACCCTCAGGGATT CCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGAAT CCAGACCGGGGACGAGGCCGATTACTACTGCGCAACTTGGGATGGCAGCCTGAGTGCTT GGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTTCTA (SEQ ID NO: 1105) TCN-551 (5243_D01) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSVLTQSPSVSAAPGQKVTISCSGSDSNIGDYFVCWYQHLPGKPPQLLIYEN KRPSGI PDRFSGSKSGTSATLGITGIQTGDEADYYCATWDGSLSAWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 1106) TCN-551 (5243_D01) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: SGSDSNIGDYFVC (SEQ ID NO : 1107) CDR 2: ENNKRPS (SEQ ID NO : 1108) CDR 3: ATWDGSLSAWV (SEQ ID NO : 1109) TCN-551 (5243_D01) CDR Chot ia de cadena ligera: CDR 1: SGSDSNIGDYFVC (SEQ ID NO: 1107) CDR 2: ENNKRPS (SEQ ID NO: 1108) CDR 3: ATWDGSLSAWV (SEQ ID NO: 1109) TCN-552 (5249_I23) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada : CAGGTCCAAGTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAGGGT CTCCTGCCAGGCTTCTGGAGGCACCTTCATGAATTATGCTATCATTTGGGTGCGACGGG CCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTGTCTTTCCTACACCAAAC TACGCACAGATGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTTCCACGGACGAATCCAGGAGCACATC CTTCTTGGAACTGACCAACCTGAGATATGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGGC GAATTTATCACGGTGGTAACTCCGGCTTTGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACC GTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1110) TCN-552 (5249_I23) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQWQSGAEVKKPGSSVRVSCQASGGTFM YAIIWVRRAPGQGLEWMGGIIPVFPTPN YAQMFQGRVTISTDESRSTSFLELTNLRYEDTAVYYCARRIYHGGNSGFDFWGQGTLVT VSS (SEQ ID NO: 1111) TCN-552 (5249_I23) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYAII (SEQ ID NO: 1112) CDR 2: GIIPVFPTPNYAQMFQG (SEQ ID NO: 1113) CDR 3: RIYHGGNSGFDF (SEQ ID NO: 1114) TCN-552 (5249_I23) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGTFMN (SEQ ID NO: 1115) CDR 2: GIIPVFPTPN (SEQ ID NO: 1116) CDR 3: RIYHGGNSGFDF (SEQ ID NO : 1114) TCN-552 (5249_I23) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTGGCAACTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAAC CTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATTCATCCAACAGGGCCCCTGGCATCCCA GCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTCGC GCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAAGTGGCCTCCCATGTACA GTTTTGGCCATGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO : 1117) TCN-552 (5249_I23) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVG YLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRAPGIP ARFSGSGSGTDFTLTISSLAPEDFAVYYCQQRSKWPPMYSFGHGTKLEIK (SEQ ID NO: 1118) TCN-552 (5249_I23) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVGNYLA (SEQ ID NO : 1119) CDR 2: DSSNRAP (SEQ ID NO: 1120) CDR 3: QQRSKWPPMYS (SEQ ID NO : 1121) TCN-552 (5249_I23) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVGNYLA (SEQ ID NO : 1119) CDR 2: DSSNRAP (SEQ ID NO: 1120) CDR 3: QQRSKWPPMYS (SEQ ID NO: 1121) TCN-553 (5261_C18) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTCCAGGTGGTGCAGTCTGGGACTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCCAGACTTCTGGAGGCAGGTTCATGAGTTATGCTATCACCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGCATCGTCCCTGTCTTCGGAACAGCAAAC TACGCTCAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATCACCACGGACGATTCCACGCGCACAGC CTATATGGAGTTGAGCAGCCTGAGAAGTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGGGTTCC GATACGGCTCTGGTTACGGGTTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCG AGC (SEQ ID NO: 1122) TCN-553 (5261_C18) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQWQSG EVKKPGSS K SCQTSGGRFMSYAI WVRQAPGQGLEWMGGIVPVFGTAN YAQKFQGRV I TDDS R AYMELSSLRSEDTAVYYCGFRYGSGYGFDSWGQGTLVTVS S (SEQ ID NO: 1123) TCN-553 (5261_C18) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: SYAIT (SEQ ID NO: 1124) CDR 2: GIVPVFGTANYAQKFQG (SEQ ID NO: 1125) CDR 3: RYGSGYGFDS (SEQ ID NO: 1126) TCN-553 (5261_C18) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGRFMS (SEQ ID NO: 1127) CDR 2: GIVPVFGTAN (SEQ ID NO: 1128) CDR 3: RYGSGYGFDS (SEQ ID NO: 1126) TCN-553 (5261_C18) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATTGTATTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGTAGCAGCTACTTAGCCTGGTATCAGAAGA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCTTCCACTAGGGCCACTGGCATC CCGGACCGGTTCACTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCAGCATCAGTAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCACTTTGGTACCTCAGTCTTCACTT TCGGCGGAGGGACCAAGGTTGAGATCAAA (SEQ ID NO : 1129) TCN-553 (5261_C18) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQKKPGQAPRLLIYGASTRATGI PDRFTGSGSGTDFTLSISRLEPEDFAVYYCQHFGTSVFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 1130) TCN-553 (5261_C18) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO : 944) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO: 755) CDR 3: QHFGTSVFT (SEQ ID NO: 1131) TCN-553 (5261_C18) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO : 944) CDR 2: GASTRAT (SEQ ID NO: 755) CDR 3: QHFGTSVFT (SEQ ID NO: 1131) TCN-554 (5277_M05) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGATCTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGACTACTATATTCACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGAAAGTGGTGACACAAAG TATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCACCACAGC CTACATGGAGCTGGGTAGGCTGAGATCCGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG ATGTAAGTACGACCTGGAGCTGGTTCGCCCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTC TCGAGC (SEQ ID NO: 1132) TCN-554 (5277_ 05) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQ5GADLKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPESGDTK YAQKFQGRVT TRDTSITTAYMELGRLRSDDTAVYYCARDVSTTWSWFAPWGQGTLVTV SS (SEQ ID NO: 1133) TCN-554 (5277_ 05) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: DYYIH (SEQ ID NO: 1134) CDR 2: WINPESGDTKYAQKFQG (SEQ ID NO: 1135) CDR 3: DVSTTWSWFAP (SEQ ID NO: 1136) TCN-554 (5277_M05) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GYTFTD (SEQ ID NO: 1137) CDR 2: WINPESGDTK (SEQ ID NO: 1138) CDR 3: DVSTTWSWFAP (SEQ ID NO : 1136) TCN-554 (5277_M05) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCAGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCAC CATCAACTGCAGGTCCAGCCAGAGTATTTTCCACAACTCCAACAATGAGAACTACTTAG CTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACC CGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCT CACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCGGTTTATTTCTGTCAGCAATATTATA ATGCTCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID NO: 1139) TCN-554 (5277_M05) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSIFH SNNENYLAWYQQKPGQPPKLLIYWAST RESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQYY APLTFGGGTKVEIK ( SEQ ID NO: 1140) TCN-554 (5277_M05) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RSSQSIFHNSNNENYLA (SEQ ID NO: 1141) CDR 2: WASTRES (SEQ ID NO : 957) CDR 3: QQYYNAPLT (SEQ ID NO: 1142) TCN-554 (5277_M05) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RSSQSIFHNSN ENYLA (SEQ ID NO : 1141) CDR 2 : WASTRES (SEQ ID NO: 957) CDR 3: QQYY APLT (SEQ ID NO : 1142) TCN-555 (5246_L16) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAGGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCATGCACGGCTTCTGGAGGCATCTTCAGGAAGAATGCAATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCGCAGTCTTTAACACAGCAAAT TACGCGCAGAAGTTCCAGAACAGAGTCAAAATTACCGCAGACGAGTCAGGCAATACGGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGACATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGTC ACCCAAAATATTTCTATGGTTCGGGGAGTTATCCGGACTTCTGGGGCCAGGGAACCCTG GTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1143) TCN-555 (5246_L16) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVKRPGSSVKVSCTASGGIFRKNAISWVRQAPGQGLE MGGIIAVFNTAN YAQKFQ RVKITADESGNTAYMEL5SLTSDDTAVYYCASHPKYFYGSGSYPDFWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 1144) TCN-555 (5246_L16) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: KNAIS (SEQ ID NO: 796) CDR 2: GIIAVFNTANYAQKFQN (SEQ ID NO : 797) CDR 3: HPKYFYGSGSYPDF (SEQ ID NO: 798) TCN-555 (5246_L16) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GGIFRK (SEQ ID NO : 799) CDR 2: GIIAVFNTAN (SEQ ID NO: 800) CDR 3: HP YFYGSGSYPDF (SEQ ID NO : 798) TCN-555 (5246_L16) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAATCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAATCACCAT CTCCTGTACTGGTGGCAGCAGTGATATTGGTGCTTCTAACTCTGTCTCCTGGTACCAAC AACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCGTTATTTTTGATGTCACTGAGCGACCCTCAGGG GTCCCGCATCGGTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGG GCTCCAGCCTGACGACGAGGCTGATTATTTCTGCTGCGCATATGGAGGCAAATATCTTG TGGTCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGACCGTTCTA (SEQ ID NO: 1145) TCN-555 (5246_L16) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSALTQPR5VSGSPGQSITISCTGGSSDIGASNSVS YQQHPGKAPKLVIFDVTERPSG VPHRFSGSKSGNTASL VSGLQPDDEADYFCCAYGGKYLWFGGGTKVTVL (SEQ ID NO: 1146) TCN-555 (5246_L16) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TGGSSDIGASNSVS (SEQ ID NO: 1147) CDR 2: DVTERPS (SEQ ID NO: 804) CDR 3: CAYGGKYLW (SEQ ID NO: 805) TCN-555 (5246_L16) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TGGSSDIGASNSVS (SEQ ID NO: 1147) CDR 2: DVTERPS (SEQ ID NO : 804) CDR 3: CAYGGKYLW ( SEQ ID NO: 805) TCN-556 (5089_K12) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAACCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCATCGGCTATGATATGCACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACGCTAAAAGAGGTGGCACAAAC TATGCACAAAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCTATCAGCACAGC CTACATGGAGCTGAACAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG GGGTGGGGTCACGAACTACGATTTTTGGAGTTCTCAACCCGGAATTTGACTACTGGGGC CAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1148) TCN-556 (5089_K12) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFIGYDMHWVRQAPGQGLE MGWINÁKRQGTN YAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNSLRSDDTAVYYCARGVGSRTTIFGVLNPEFDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1149) TCN-556 (5089_K12) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: GYDMH (SEQ ID NO : 1150) CDR 2: WINAKRGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO : 1151) CDR 3: GVGSRTTIFGVLNPEFDY (SEQ ID NO : 1152) TCN-556 (5089_K12) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GYTFIG (SEQ ID NO: 1153) CDR 2: WINAKRGGTN (SEQ ID NO: 1154) CDR 3: GVGSRTTIFGVLNPEFDY (SEQ ID NO: 1152) TCN-556 (5089_K12) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCAT CTCCTGCACTGGATCCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATGACTATGTCTCCTGGTACCAAC AACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGG GTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGG GCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCGGGCAACTACAATC ATGTCTTCGGACCTGGGACCAAGGTCACCGTTCTA (SEQ ID NO: 1155) TCN-556 (5089_K12) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGSSSDVGGYDYVS YQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSG VPDRFSGSKSGN SLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGNYNHVFGPGTKVTVL (SEQ ID NO: 1156) TCN-556 (5089_K12) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: TGSSSDVGGYDYVS (SEQ ID NO: 1157) CDR 2: EVTKRPS (SEQ ID NO: 1158) CDR 3: SSYAGNYNHV (SEQ ID NO: 1159) TCN-556 (5089_K12) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: TGSSSDVGGYDYVS (SEQ ID NO: 1157) CDR 2: EVTKRPS (SEQ ID NO: 1158) CDR 3: SSYAGNYNHV (SEQ ID NO: 1159) TCN-557 (5081_A04) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGACACACCTTCACCGGCTACTACATACACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTGACAGTGGTGCCACCAGT TCTGCACAGAACTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCGGGGACACGTCCTCTAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGTAGGCTGAGTTTTGACGACACGGCCGTCTATTACTGTGCGAGAG TACTGTTTACCAGTCCTTTTGACTTCTGGGGTGAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1160) TCN-557 (5081_A04) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGHTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGATS SAQNFQGRVTMTGDTSSS AYMELSRLSFDDTAVYYCARVLFTSPFDFWGEGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1161) TCN-557 (5081_A04) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: GYYIH (SEQ ID NO: 1162) CDR 2: WINPDSGATSSAQNFQG (SEQ ID NO: 1163) CDR 3: VLFTSPFDF (SEQ ID NO: 1164) TCN-557 (5081_A04) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GHTFTG (SEQ ID NO: 1165) CDR 2: WINPDSGATS (SEQ ID NO : 1166) CDR 3: VLFTSPFDF (SEQ ID NO: 1164) TCN-557 (5081_A04) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGGCTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGGCTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCT CACCTGTGGCTCCAGCACTGGAGCTGTCACCAGGGGTCATTATCCCTATTGGTTCCAGC AGAAGCCTGGCCAAGCCCCCAGGGCACTCATTTATGATAGTGCAGGCAACAGACACTCC TGGACTCCCGCCCGATTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACCCTTTC GGGTGCGCAGCCTGAGGATGAGGCTGAGTATTACTGCTTGCTCTCCTATAGTGGTGTCT GGGTGTTCGGCGGAGGGACGAAGCTGACCGTTCTA (SEQ ID NO: 1167) TCN-557 (5081_A04) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QAWTQEPSLAVSPGGTVTLTCGSSTGAV RGHYPYWFQQKPGQAPRALIYDSAGNRHS WTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCLLSYSGVWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 1168) TCN-557 (5081_A04) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: GSSTGAVTRGHYPY (SEQ ID NO : 1169) CDR 2: DSAGNRHS (SEQ ID NO : 1170) CDR 3: LLSYSGVWV (SEQ ID NO: 1171) TCN-557 (5081_A04) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: GSSTGAVTRGHYPY (SEQ ID NO: 1169) CDR 2: DSAGNRHS (SEQ ID NO: 1170) CDR 3: LLSYSGVWV (SEQ ID NO: 1171) TCN-558 (5248_Hl0b) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAGGTCCAGCTGGTGCAATCTGGGAGTGAGGTGAAGAAGCCTGGGACCTCGGTGAAGGT CTCCTGCACGGCCTCTGGAAGTGTCTTCACCAATTATGGAATTAGTTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTCTCTTTGGCGCAGCCAAG TACGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACCATCACAGCGGACGAATCCACGAAGACAGT CTACATGGAGCTGAGCAGGCTGACATCTAAAGACACGGCCATATATTTCTGTGCGAAGG CCCCCCGTGTCTACGAGTACTACTTTGATCAGTGGGGCCAGGGAACCCCAGTCACCGTC TCCTCA (SEQ ID NO : 1172) TCN-558 (5248_Hl0b) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QVQLVQSGSEVKKPGTSVKVSCTASGSVFTNYGISWVRQAPGQGLE MGGIIPLFGAAK YAQKFQGRVTITADESTKTVYMELSRLTSKDTAIYFCAKAPRVYEYYFDQWGQGTPVTV SS (SEQ ID NO: 914) TCN-558 (5248_Hl0b) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYGIS (SEQ ID NO: 915) CDR 2: GIIPLFGAAKYAQKFQG (SEQ ID NO: 916) CDR 3: APRVYEYYFDQ (SEQ ID NO: 917) TCN-558 (5248_Hl0b) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GSVFTN (SEQ ID NO: 918) CDR 2: GIIPLFGAAK (SEQ ID NO: 919) CDR 3: APRVYEYYFDQ (SEQ ID NO: 917) TCN-558 (5248_Hl0b) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GAAATAGTGATGACGCAGTTTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCCGGGGAACGAGTCAC CCTCTCCTGTAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAACAATTTAGCCTGGTACCAGCAAAAAC CTGGCCAGCCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCTACCAGGGCCACGGGTGTCCCA GCCAAGTTCAGTGGCACTGGGTCTGGCACAGAGTTCACTCTCAGCATCAGCAGCCTGCA GTCCGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATCACAACTGGCCTCCCTCGTACA GTTTTGGCCTGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA (SEQ ID NO : 1173) TCN-558 (5248_Hl0b) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EIVMTQFPATLSVSPGERVTLSCRASQSVSN LAWYQQKPGQPPRLLIYDASTRATGVP AKFSGTGSGTEFTLSISSLQSEDFA YCQQYHMWPPSYSFGLGTKLEIK (SEQ ID NO: 862) TCN-558 (5248_Hl0b) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQSVSNNLA (SEQ ID NO : 863) CDR 2: DASTRAT (SEQ ID NO: 864) CDR 3: QQYHN PPSYS (SEQ ID NO: 865) TCN-558 (5248_Hl0b) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1:. RASQSVSNNLA (SEQ ID NO : 863) CDR 2: DASTRAT (SEQ ID NO: 864) CDR 3: QQYHNWPPSYS (SEQ ID NO : 865) TCN-559 (5097_G08) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: CAAGAGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTAGAAAGTCCTTCATTGGCTACTATGTACACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCCCTGACAGTGATGCCACAAAG TACGCACAGAAGTTTCAGGGCTCCGTCATCATGACCAGGGACACGTCCGTCAGCACAGT GTACATGGAGCTGAGTAGGCTGACATCTGACGACACGGCCCTTTATTACTGTCTCCTTT TTCGAGGTGGAAACTCCCTCTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1174) TCN-559 (5097_G08) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QEQLVQSGAEVKKPGA5VKVSCKASRKSFIGYYVH VRQAPGQGLEWMGWISPDSDATK YAQKFQGSVIMTRDTSVSTVYMELSRLTSDDTALYYCLLFRGGNSLSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 1175) TCN-559 (5097_G08) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: GYYVH (SEQ ID NO: 1176) CDR 2: WISPDSDATKYAQKFQG (SEQ ID NO: 1177) CDR 3: FRGGNSLS (SEQ ID NO: 1178) TCN-559 (5097_G08) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: RKSFIG (SEQ ID NO: 1179) CDR 2: ISPDSDATK (SEQ ID NO: 1180) CDR 3: FRGGNSLS (SEQ ID NO: 1178) TCN-559 (5097_G08) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: CAGGCTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACCCT CACCTGTGGCTCCAGCACTGGACCTGTCACCAGTGGTCATTATCCCTACTGGTTCCAGC AGAAGCCTGGCCAAGCCCCCAGGACATTGATTTCTGCTACATCCAACACACACTCCTGG ACACCTGCCCGCTTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAGAGCTGCCCTGACCCTTTCGGG TGCGCAGCCTGAGGATGAGGCTGACTATTATTGCTTTCTCTCCTACAGTGGTGCTTGGG TGTTCGGCGGAGGGACCACGCTGACCGTTCTA (SEQ ID NO : 1181) TCN-559 (5097_G08) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) QAWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGPVTSGHYPYWFQQKPGQAPRTLISATSN HSW TPARFSGSLLGGRAALTLSGAQPEDEADYYCFLSYSGAWVFGGGTTLTVL (SEQ ID NO: 1182) TCN-559 (5097_G08) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1 GSSTGPVTSGHYPY (SEQ ID NO: CDR 2 ATSNTHS (SEQ ID NO: 1184) CDR 3 FLSYSGAWV ( SEQ ID NO : 1185) TCN-559 (5097_G08) CDR Chothia de cadena ligera; CDR 1 GSSTGPVTSGHYPY (SEQ ID NO : 1183 CDR 2 ATSNTHS (SEQ ID NO : 1184) CDR 3 FLSYSGAWV (SEQ ID NO : 1185) TCN-560 (5084_P10) secuencia de nucleótido de región variable de cadena pesada: GAGGTGCAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTTATCTTTAGAAATTACTGGATGAGCTGGGTCCGGCAGG CTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAACAAGATGGAAGAGAGAAGTAC TATGTGGACTCTCTGAGGGGCCGAGTCAACATCTCCAGAGACAACGCCGAGAACTCATT GTATCTGCACATGAACAGCCTGAGAGTCGAGGACACGGCTGTTTATTTCTGTGCGAGAG CTCGGATGGTGGTGGTTACTGGCGATGGTTTTGATGTCTGGGGCCATGGGACAATGGTC ACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 1186) TCN-560 (5084_P10) secuencia de aminoácido de región variable de cadena pesada gamma: (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFIFR YWMSWRQAPGKGLEWVA IKQDGREKY YVDSLRGRVl^ISRDNAENSLYLHMNSLRVEDTAVYFCARARI VVTGTOFDVWGHGTIW TVSS (SEQ ID NO: 1187) TCN-560 (5084_P10) Kabat CDR de cadena pesada gamma: CDR 1: NYWMS (SEQ ID NO: 1188) CDR 2: NIKQDGREKYYVDSLRG (SEQ ID NO : 1189) CDR 3: ARMVWTGDGFDV (SEQ ID NO : 1190) TCN-560' (508 _P10) CDR Chothia de cadena pesada gamma: CDR 1: GFIFRN (SEQ ID NO: 1191) CDR 2: NIKQDGREKY (SEQ ID NO : 1192) CDR 3: ARMVWTGDGFDV (SEQ ID NO : 1190) TCN-560 (5084_P10) secuencia de nucleótido de región variable de cadena ligera: GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAATATTAAGAGGTATTTCAATTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATTTAGAAAATGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCA ACCTGAGGATTTTGCGACTTATTACTGTCAGCAGAGTTTCAGTAAATCGTGGACATTCG GCCAAGGGACCAACGTGGACATCAAA (SEQ ID NO : 1193) TCN-560 (5084_P10) secuencia de aminoácido de región variable de cadena ligera (Kabat CDR en negritas, Chothia CDR subrayado) DIQ TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIKRYF WYQQKPGKAPKLLIYAAS LENGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSFSKS TFGQGTNVDIK (SEQ ID NO: 1194) TCN-560 (5084_P10) CDR Kabat de cadena ligera: CDR 1: RASQNIKRYFN (SEQ ID NO: 1195) CDR 2: AASNLEN (SEQ ID NO: 1196) CDR 3: QQSFSKSWT (SEQ ID NO: 1197) TCN-560 (5084_P10) CDR Chothia de cadena ligera: CDR 1: RASQNIKRYFN (SEQ ID NO: 1195) CDR 2: AASNLEN (SEQ ID NO : 1196) CDR 3: QQSFSKSWT (SEQ ID NO : 1197) La invención proporciona un anticuerpo monoclonal totalmente humano aislado anti-HA o fragmento de la misma, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena pesada variable (VH) región que comprende la CDRl y CDR2 , caracterizado porque la región VH está codificado por un IGHVI humana (o específicamente, IGHVI-18, IGHVl-2, IGHVl-69, IGHVl-8), IGHV2 (o específicamente, IGHV2-5), IGHV3 (o específicamente, IGHV3-30, IGHV3-33, IGHV3-49, IGHV3-53, 66, IGHV3-7), IGHV4 (o específicamente, IGHV4-31, IGHV4-34, IGHV4-39, IGHV4-59, IGHV4-61), o IGHV5 (o específicamente, IGHV5-51) secuencia de línea germinal VH O un alelo de la misma, o una secuencia de ácido nucleico que es homologa a la IGHVI, IGHV2 , IGHV3 , IGHV4, o IGHV5 VH secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. En un aspecto, la secuencia de ácido nucleico que es homologa a la IGHVI , IGHV2 , IGHV3 , IGHV4, o IGHV5 secuencia de línea germinal de VH es al menos 75% homologa a la IGHVI, IGHV2, IGHV3, IGHV4 , o IGHV5 VH secuencia de línea germinal o un alelo de los mismos. Alelos de ejemplo incluyen, pero no se limitan, IGHVl-18*01, IGHVl-2*02, IGHVl-2*04, IGHVl-69*01, IGHVl-69*05, IGHVl-69*06, IGHVI- 69*12, IGHV1-8*01, IGHV2-5*10, IGHV3-30-3 *01 , IGHV3-30*03, IGHV3-30*18, IGHV3-33*05, IGHV3-49*04, IGHV3-53*01, IGHV3-66*03, IGHV3-7*01, IGHV4-31*03, IGHV4-31*06, IGHV4-34*01, IGHV4-34*02, IGHV4-34*03, IGHV4-34*12, IGHV4-39*01, IGHV4-59*01, IGHV4-59*03, IGHV4-61*01, IGHV4-61*08, y IGHV5-51*01. Secuencias ejemplares para cada alelo se proporcionan a continuación.
IGHV1-18 * 01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1198) CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAAC TATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG A lGHVl-2*02 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1199) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAAC TATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG A IGHVl-2*04 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1200) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCACAAAC TATGCACAGAAGTTTCAGGGCTGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGA IGHV1-69*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1201) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG A IGHVl-69*05 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1202) CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCACGGACGAATCCACGAGCACAGC C ACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTG AT ACTGTGCGAGA IGHVl-69*06 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1203) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG A IGHV1-69*12 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1204) CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CGCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTTTGGTACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTAT ACTGTGCGAGAG A IGHV1-8*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1205) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCAGTTATGATATCAACTGGGTGCGAC GG CCACTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTAACACAGGC TATGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATAAGCACAGC CTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG G IGHV2-5*10 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1206) CAGATCACCTTGAAGGAGTCTGGTCCTACGCTGGTGAAACCCACACAGACCCTCACGCT GACCTGCACCTTCTCTGGGTTCTCACTCAGCACTAGTGGAGTGGGTGTGGGCTGGATCC GTCAGCCCCCAGGAAAGGCCCTGGAGTGGCTTGCACTCATTTATTGGGATGATGATAAG CGCTACAGCCCATCTCTGAAGAGCAGGCTCACCATCAGCAAGGACACCTCCAAAAACCA GGTGGTCCTTACAATGACCAACATGGACCCTGTGGACACAGCCACATATTACTGTGCAC GG IGHV3-30-3*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1207) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGCAATAAATAC TACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCT GTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGA IGHV3-30*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1208) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATAC TATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCT GTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAG A IGHV3-30*18 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1209) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATAC TATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCT GTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAG A IGHV3-33*05 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1210) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATAC TATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCT GTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAG A IGHV3-49*04 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1211) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCAGGGCGGTCCCTGAGACT CTCCTGTACAGCTTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGCTATGAGCTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTAGGTTTCATTAGAAGCAAAGCTTATGGTGGGACA ACAGAATACGCCGCGTCTGTGAAAGGCAGATTCACCATCTCAAGAGATGATTCCAAAAG CATCGCCTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACAGCCGTGTATTACTGTA CTAGAGA IGHV3-53*01 secuencia de nucleótido ( SEQ ID NO: 1212) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGAGGAGGCTTGATCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGGTTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGCTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTTATAGCGGTGGTAGCACATACTAC GCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTA TCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGA IGHV3-66*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1213) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCATGAGGTGAAGCAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACAGTTTCACCACCTATGGTATGAATTGGGTGCCACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGTTCAACACCTACACTGGGAACCCAACA TATGCCCAGGGCTTCACAGGACGGTTTGTCTTCTCCATGGACACCTCTGCCAGCACAGC ATACCTGCAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAGGACATGGCCATGTATTACTGTGCGAGAT A IGHV3-7*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1214) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACT CTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGG CTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCAAGATGGAAGTGAGAAATAC TATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACT GTATC GCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAG A IGHV4-31*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1215) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCC GCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACC TACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCA GTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGA GAGA IGHV4-31*06 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1216) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCC GCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCACC TACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCA GTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTG IGHV4-34*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1217) CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCC GCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAGCACC TACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCA GTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGA GACA IGHV4-34*02 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1218) CAGGTGCAGCTACAACAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGC CCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTAC AACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTC CCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGG IGHV4-34*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1219) CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGC CCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTAC AACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTC CCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTG IGHV4-34*12 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1220) CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGC CCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCATTCATAGTGGAAGCACCAACTAC AACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTC CCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGA IGHV4-39*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1221) CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCC GCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAGCACC TACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCCGTAGACACGTCCAAGAACCA GTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTG AT ACTGTGCGA GACA IGHV4-59*01 secuencia de nucleótido ( SEQ ID NO: 1222) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTAAAGACTGGAGGGGTCTCTGAGAC TCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTCTGCTATGCACTGGGTCCACCAG GCTCCAGGAAAGGGTTTGGAGTGGGTCTCAGTTATTAGTACAAGTGGTGATACCGTACT CTACACAGACTCTGTGAAGGGCTGATTCACCATCTCTAGAGACAATGCCCAGAATTCAC TGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGACGACATGGCTGTGTATTACTGTGTGAAA GA [06] lGHV4-59*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1223) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGC CCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTAC AACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAATTCTC CCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCG IGHV4-61*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1224) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCT CACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCGTCAGCAGTGGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCC GGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACAGTGGGAGCACC AACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCA GTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGA GAGA IGHV4-61*08 secuencia de nucleótido ( SEQ ID NO: 1225) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCCATGAGGTGAAGCAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACAGTTTCACCACCTATGGTATGAATTGGGTGCCACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGTTCAACACCTACACTGGGAACCCAACA TATGCCCAGGGCTTCACAGGACGGTTTGTCTTCTCCATGGACACCTCTGCCAGCACAGC ATACCTGCAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAGGACATGGCCATGTATTACTGTGCGAGAT A IGHV5-51*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1226) GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGAT CTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCAGCTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGA TGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGA TACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGC CTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGAC A En ciertas modalidades de la invención, el anticuerpo incluye, además, una región (VL) de cadena ligera variable por IGKVl humana (o específicamente, IGKVl-17, IGKVl-27, IGKV1-39, IGKVlD-39, IG Vl-5), IGKV2 (o específicamente, IGKV2-30) , IGKV3 (o específicamente, IGKV3-11, IGKV3-15, IGKV3-20) , IGKV4 (o específicamente, IGKV4-1, IGKV4-1), IGLVl (o específicamente, IGLVl-40, IGLVl-44, IGLVl-55), IGLV2 (o específicamente, IGLV2-11, IGLV2-14, IGLV2-8), IGLV3 (o específicamente, IGLV3-21 o IGLV3-25), IGLV7 (o específicamente, IGLV7-43 o IGLV7-46), o IGLV9 (o específicamente, IGLV9-49) o un alelo de la misma. La secuencia de gen de línea germinal VL IGKVl, IGKV2, IGKV3, IGKV4 , IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 O un alelo de la misma, o una secuencia de nucleótidos que es homologa a la IGKVl, IGKV2, IGKV3, IGKV4, IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o secuencia del gen de la línea germinal IGLV9 VL o un alelo de la misma. Además, la secuencia de ácido nucleico que es homologa a la, IGKV2 , IGKV3 , IGKV4, IGLVl, IGLV2, IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 VL secuencia de línea germinal IGKVl o un alelo de la misma es al menos 65% homologa a la IGKV1, IGKV2 , IGKV3 , IG V4 , IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7, o IGLV9 VL secuencia de línea germinal o un alelo de la misma.
IGKV1-17 * 01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1227) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCA GCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCTCC IGKV1-27*01 secuencia de nucleótido ( SEQ ID NO: 1228) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGTTCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCA TCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA GCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCTCC IGKV1-39*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1229) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCA ACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCC IGKV1D-39*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1230) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCA ACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTACCCCTCC IGKVl-5*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1231) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC CATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAG AT AGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA GCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCTCC lGKV2-30*02 secuencia de nucleótido ( SEQ ID NO: 1232) GATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTC CATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGTGATGGAAACACCTACTTGAATT GGTTTCAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCAAGGCGCCTAATTTATAAGGTTTCTAACCGG GACTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCAGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAA AATCAGCAGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCATGCAAGGTACACACT GGCCTCC IGKV3-11*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1233) GAAATTGTGTTGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAAC CTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCA GCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTAGA GCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCC IGKV3-15*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1234) GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAAC CTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCA GCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCA GTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATAATAACTGGCCTCC IGKV3-20*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1235) GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCC IGKV4-1*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1236) GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCAC CATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAG CTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACC CGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCT CACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATA GTACTCCTCC IGLV1-40*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1237) CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCAT CTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGC AGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGG GTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGG GCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTG GTTC IGLV1-44*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1238) CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCAT CTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGC TCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTC CCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCT CCAGTCTGAGGATGAGGCTGAT AT ACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTC C IGLV1-51*02 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1239) CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCAT CTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAACATTGGGAATAATTATGTATCCTGGTACCAGCAGC TCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGAAAATAATAAGCGACCCTCAGGGATT CCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACT CCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGTGCTG G IGLV2-11*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1240) CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCGCTCAGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCAT CTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGATGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAAC AGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGG GTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGG GCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCTGCTCATATGCAGGCAGCTACACTT C IGLV2-14*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1241) CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCAT CTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAAC AGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAATCGGCCCTCAGGG GTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGG GCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTC TC IGLV2-8*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1242) CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCAT CTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAAC AGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAAGCGGCCCTCAGGG GTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGG GCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCAACAATT C IGLV3-21*02 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1243) TCCTATGAGCTGACACAGCTACCCTCGGTGTCAGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGGAT CACCTGCTCTGGAGATGTACTGGGGGAAAATTATGCTGACTGGTACCAGCAGAAGCCAG GCCAGGCCCCTGAGTTGGTGATATACGAAGATAGTGAGCGGTACCCTGGAATCCCTGAA CGATTCTCTGGGTCCACCTCAGGGAACACGACCACCCTGACCATCAGCAGGGTCCTGAC CGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTTTGTCTGGGGATGAGGACAATCC IGLV3-25*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1244) TCCTATGAGCTGACACAGCCACCCTCGGTGTCAGTGTCCCCAGGACAGACGGCCAGGAT CACCTGCTCTGGAGATGCATTGCCAAAGCAATATGCTTATTGGTACCAGCAGAAGCCAG GCCAGGCCCCTGTGCTGGTGATATATAAAGACAGTGAGAGGCCCTCAGGGATCCCTGAG CGATTCTCTGGCTCCAGCTCAGGGACAACAGTCACGTTGACCATCAGTGGAGTCCAGGC AGAAGACGAGGCTGACTATTACTGTCAATCAGCAGACAGCAGTGGT IGLV7-43*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1245) CAGACTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCT CACCTGTGCTTCCAGCACTGGAGCAGTCACCAGTGGTTACTATCCAAACTGGTTCCAGC AGAAACCTGGACAAGCACCCAGGGCACTGATTTATAGTACAAGCAACAAACACTCCTGG ACCCCTGCCCGGTTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACACTGTCAGG TGTGCAGCCTGAGGACGAGGCTGAGTATTACTGCCTGCTCTACTATGGTGGTGCTCAG IGLV7-46*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1246) CAGGCTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCT CACCTGTGGCTCCAGCACTGGAGCTGTCACCAGTGGTCATTATCCCTACTGGTTCCAGC AGAAGCCTGGCCAAGCCCCCAGGACACTGATTTATGATACAAGCAACAAACACTCCTGG ACACCTGCCCGGTTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACCCTTTCGGG TGCGCAGCCTGAGGATGAGGCTGAGTATTACTGCTTGCTCTCCTATAGTGGTGCTCGG IGLV7-46*02 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1247) CAGGCTGTGGTGACTCAGGAGCCCTCACTGACTGTGTCCCCAGGAGGGACAGTCACTCT CACCTGTGGCTCCAGCACTGGAGCTGTCACCAGTGGTCATTATCCCTACTGGTTCCAGC AGAAGCCTGGCCAAGCCCCCAGGACACTGATTTATGA ACAAGCAACAAACACTCCTGG ACACCTGCCCGGTTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAAGCTGCCCTGACCCTTTTGGG TGCGCAGCCTGAGGATGAGGCTGAGTATTACTGCTTGCTCTCCTATAGTGGTGCTCGG IGLV9-49*01 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1248) CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCTTCTGCATCAGCCTCCCTGGGAGCCTCGGTCACACT CACCTGCACCCTGAGCAGCGGCTACAGTAATTATAAAGTGGACTGGTACCAGCAGAGAC CAGGGAAGGGCCCCCGGTTTGTGATGCGAGTGGGCACTGGTGGGATTGTGGGATCCAAG GGGGATGGCATCCCTGATCGCTTCTCAGTCTTGGGCTCAGGCCTGAATCGGTACCTGAC CATCAAGAACATCCAGGAAGAGGATGAGAGTGACTACCACTGTGGGGCAGACCATGGCA GTGGGAGCAACTTCGTGTAACC IGLV9-49*03 secuencia de nucleótido (SEQ ID NO: 1249) CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCTTCTGCATCAGCCTCCCTGGGAGCCTCGGTCACACT CACCTGCACCCTGAGCAGCGGCTACAGTAATTATAAAGTGGACTGGTACCAGCAGAGAC CAGGGAAGGGCCCCCGATTTGTGATGCGAGTGGGCACTGGTGGGATTGTGGGATCCAAG GGGGATGGCATCCCTGATCGCTTCTCAGTCTTGGGCTCAGGCCTGAATCGGTACCTGAC CATCAAGAACATCCAGGAAGAGGATGAGAGTGACTACCACTGTGGGGCAGACCATGGCA GTGGGAGCAACTTCGTGTAACC La cadena pesada de un aislado monoclonal anti-hemaglutinina (HA) de anticuerpos (es decir, anticuerpo anti-hemaglutinina de la invención) se deriva de una línea germinal V gen (variable) tales como, por ejemplo, la IGHV1, IGHV2, gen de la línea germinal IGHV3 , IGHV4, o IGHV5 o un alelo de la misma.
Los anticuerpos de HA de la invención incluyen una cadena pesada variable (VH) región codificada por un IGHVl humana, IGHV2 , IGHV3 , IGHV4 , o IGHV5 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. Se muestra una secuencia de gen de la línea germinal IGHVl, IGHV2, IGHV3, IGHV4, o IGHV5 , por ejemplo, en la SEQ ID NO: 457-485. Los anticuerpos de HA de la invención incluyen una región VH que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 75% homologa a la IGHVl, IGHV2 , IGHV3, IGHV4, o IGHV5 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la IGHVl, IGHV2 , IGHV3 , IGHV4, o IGHV5 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la IGHVl, IGHV2 , IGHV3 , IGHV4 , o IGHV5 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. La región VH del anticuerpo HA es al menos 75% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VH codificada por el IGHVl, IGHV2, IGHV3, IGHV4 , o IGHV5 VH secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VH del anticuerpo HA es al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por el 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97% de secuencias de genes de la línea germinal o un alelo de la misma, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por el 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97% de secuencias de genes de la línea germinal o un alelo de la misma.
Los anticuerpos de HA de la invención también incluyen una cadena ligera variable (VL) región codificada por un IGKV1 humana, IGKV2 , IGKV3, IGKV4, IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 o IGLV9 secuencia genética de la línea germinal o un alelo de la misma. Un IG Vl humana, IGKV2 , IGKV3, IGKV4, IGLVl , IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 VL secuencia del gen de la línea germinal, o un alelo de la misma se muestra, por ejemplo, en la SEQ ID NO: 486-508. Alternativamente, los anticuerpos de HA incluyen un IGKVl, IGKV2, IGKV3, IGKV4 , IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o región IGLV9 VL que es codificada por una secuencia de ácido nucleico que es al menos 65% homologa a la IGKVl, IGKV2, IGKV3, IGKV4, IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. Preferiblemente, la secuencia de ácido nucleico es al menos 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la IGKVl, IGKV2, IGKV3, IGKV4 , IGLVl , IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la, IGKV2, IGKV3 , IGKV4 , IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o secuencia o gen de la línea germinal IGLV9 IGKVl un alelo de la misma. La región VL del anticuerpo HA es al menos 65% homologa a la secuencia de aminoácidos de la región VL codifican la IGKVl, IGKV2 , IGKV3 , IGKV4 , IGLVl, IGLV2 , IGLV3, IGLV7, o IGLV9 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma. Preferiblemente, la secuencia de aminoácidos de la región VL del anticuerpo HA es al menos 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97% homologa a la secuencia de aminoácidos codificada por la IGKVl, IGKV2, IGKV3 , IGKV4 , IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma, y más preferiblemente, al menos 98%, 99% homologa a la secuencia codificada por el IGKVl, IGKV2 , IGKV3 , IGKV4, IGLVl, IGLV2 , IGLV3 , IGLV7 , o IGLV9 secuencia del gen de la línea germinal o un alelo de la misma.
Anticuerpos HA III La presente invención se refiere a un inmunógeno capaz de inducir anticuerpos contra un péptido objeto de la región del tallo de la proteína hemagglutinn de un virus de la influenza. El inmunógeno es un péptido o un péptido sintético. En particular, el inmunógeno de esta invención comprende uno o más ep topos o unidades de epítopo. Opcionalmente, el inmunógeno comprende además un estimulador inmunológico general. Estos inmunógenos de la presente invención son capaces de inducir anticuerpos contra el virus de la influenza A para prevenir la infección por el virus.
En un aspecto, la invención proporciona un inmunógeno que tiene un epi opo o unidad de epitopo reconocido por un anticuerpo monoclonal de protección que tiene la especificidad para la región del tallo de la proteina hemagglutinn de un virus de la influenza.
El anticuerpo se une tanto a la HAL y péptido HA2. En algunas modalidades, el epítopo se reconoce por el anticuerpo monoclonal D7 , D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90, o H98 o un anticuerpo monoclonal que compite con la unión del anticuerpo monoclonal D7, D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90, H98 o a la proteína HA. Preferiblemente, el epítopo es el epítopo FIO.
En algunas modalidades, la proteína hemaglutinina es en la conformación de pH neutro.
El inmunógeno es un péptido o un péptido sintético .
En algunos aspectos el inmunógeno es un conjugado que tiene uno o más péptidos o fragmentos- de péptidos que están colocadas espacialmente respecto a la otra de modo que juntos forman una secuencia no lineal que imita la estructura terciaria de un epítopo FIO. Opcionalmente, el uno o más péptidos o fragmentos de péptidos están unidos a una cadena principal. El conjugado compite con la unión del anticuerpo monoclonal FIO a la proteína HA.
La conformación del epítopo se define por los residuos de aminoácidos 18, 38, 39, 40 y 291 de Hal y 18, 19, 20, 21, 38, 41, 42, 45, 49, 52, 53, y 56 de HA2 cuando la hemaglutinina en la conformación de pH neutro.
En algunas modalidades, el inmunógeno es un péptido que tiene una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos .
[Xaao]m-Xaai-Xaa2- [Xaaolp, en donde, preferentemente, Xaai es S, T, F H o Y y Xaa 2 es H, Y, M, L o Q. De manera más preferente, Xaai es Y. De manera más preferente, Xaa2 es H. [Xaao]m-Xaai-Xaa2- [Xaaolp, en donde, preferentemente, Xaai es H, Q, Y, S, D, N o T y Xaa2 of es Q, E, K, I, V, M, E, R o T. De manera más preferente, Xaai es H. De manera más preferente, Xaa2 es Q.
[Xaa0] m-Xaai-Xaa2-Xaa3-Xaa4- [Xaa0] p, en donde, preferentemente, Xaai es I, V, M, o L; Xaa2 es D, N, H, Y, D, A,S o E, Xaa3 es G o A, y Xaa4 es W, R, o G. De manera más preferente, Xaai es V; Xaa2 es D, Xaa3 es G, y Xaa4 es W.
[Xaao]m-Xaai- [Xaa0] q Xaa2-Xaa3- [Xaa0] q Xaa4-[Xaa0]r Xaa5-[Xaa0]q-Xaa6 xaa7- [Xaa0] q-Xaa8- [Xaa0]p, y [Xaa0]m-Xaai- [Xaa0]q Xaa2-Xaa3- [Xaa0]q Xaa4-[Xaa0]r Xaa5- [Xaa0] q- aa6 Xaa7-[Xaa0]s -[Xaas] t- [Xaa0]p, en donde, preferentemente Xaai es , Q, R, N, L, G, F, H o Y; Xaa2 es S o T, xaa3 es Q o P; Xaa4 es F, V, I, M, L, o T; Xaa5 es I, T, S, N, Q, D, o A; Xaa6 es I, V, M, o L; Xaa7 es N, S, T, o D y Xaa8 es I, F,V, A, o . De manera más preferente, Xaai es K; Xaa2 es T, Xaa3 es Q; Xaa4 es I; Xaa5 es T; Xaa6 es V; Xaa7 es N, y Xaag es I.
Para todas las secuencias precedentes, m, y p son independientemente 0 ó 1-100, preferiblemente de aproximadamente 1-90, · 1-80, 1-70, 1-60, 1-50, 1-40, 1-30, 1-20 o 1-10; q es 2 , r es 3 , s es 0 o 2 , y t es 0 o 1 , y XaaO, es independientemente cualquier aminoácido. Preferiblemente s es 2 y t es 1.
En algunos aspectos de las invenciones, uno o más aminoácidos son D-aminoácidos .
Opcionalmente, el inmunógeno comprende además un adyuvante o está conjugado a un portador.
En varios aspectos, la invención incluye una composición que contiene el inmunógeno junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, diluyentes, y/o adyuvantes. En algunas modalidades, la composición comprende además un anticuerpo anti-antígeno de la influenza de fragmento de unión del mismo. Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal D7, D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90, o H98 o un anticuerpo monoclonal que compite con la unión del anticuerpo monoclonal D7, D8, FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90, H98 o a la proteína HA. También se proporcionan por la invención son ácidos nucleicos que codifican los inmunógenos de la invención y la composición que comprende los ácidos nucleicos.
La invención comprende además un método para prevenir una enfermedad o trastorno provocado por un virus de la influenza mediante la administración a la persona en riesgo de padecer dicha enfermedad o trastorno de una composición de inmunógeno descrito en el presente documento. Opcionalmente, el método incluye administrar, además, un fármaco antiviral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral . El fármaco antiviral es un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico o un canal iónico M2. El inhibidor de canal iónico M2 es la amantadina o, rimantadina. El inhibidor de la neuraminidasa zanamivir o oseltamivir fosfato.
En otro aspecto, el método incluye administrar además uno o más anticuerpos específicos para un virus de la influenza Grupo I y un virus de la influenza o del Grupo II. El anticuerpo se administra en una dosis suficiente para neutralizar el virus de la influenza.
La administración es antes o después de la exposición al virus de la influenza.
También se describen métodos de tratamiento de sujetos y métodos de cribado y la producción de anticuerpos. Por ejemplo, se describe un método de tratamiento de un sujeto que sufre o por el riesgo de infección de la influenza, comprendiendo el método administrar al sujeto una o más de los anticuerpos descritos, tales como los anticuerpos madre HA descritos. Por ejemplo, se da a conocer un método de tratamiento de un sujeto, comprendiendo el método administrar al sujeto el vástago región de hemaglutinina de la influenza en la conformación de pH neutro en forma aislada de otros componentes de virus de la influenza, caracterizado porque el sujeto produce una respuesta inmune a la región vástago. Por ejemplo, se describe un método de tratamiento de un sujeto, comprendiendo el método administración al sujeto de la región tallo de hemaglutinina de la influenza en el pH neutro conformación en el aislamiento de la región de la cabeza de la hemaglutinina, caracterizado porque el sujeto produce una respuesta inmune a la región del tallo. Por ejemplo, se describe un método de tratamiento de un sujeto, comprendiendo el método administrar al sujeto la influenza hemaglutinina en la conformación de pH neutro aislado de otros componentes de virus de la influenza, caracterizado porque la región de la cabeza de la hemaglutinina se modifica para reducir la antigenicidad de la región de la cabeza, caracterizado porque el sujeto produce una respuesta inmune a la región vástago. Por ejemplo, se describe un método, el método que comprende anticuerpos de detección reactiva para hemaglutinina por la unión a la hemaglutinina inmovilizada sobre una superficie, por lo tanto identificación de anticuerpos de interés. Por ejemplo, se describe un método de cribado que comprende los anticuerpos reactivos a la hemaglutinina por la unión a la región del tallo de la influenza de hemaglutinina en la conformación de pH neutro en el aislamiento de la región de la cabeza de hemaglutinina, identificando de este modo los anticuerpos de interés. Por ejemplo, se describe un método que comprende cribado de anticuerpos reactivos a la hemaglutinina de unión a la influenza de hemaglutinina en la conformación de pH neutro aislado de otros componentes del virus de la influenza, caracterizado porque la región de la cabeza de la hemaglutinina se modifica para reducir la antigenicidad de la región de la cabeza, identificando de este modo los anticuerpos de interés.
En algunas formas, la región de la cabeza de la hemaglutinina puede ser modificado mediante la eliminación o la sustitución de sitios de glicosilación . En algunas formas , la región de la cabeza de la hemaglutinina puede ser modificado mediante la adición de sitios de glicosilación. En algunas formas, la región de la cabeza de la hemaglutinina puede ser modificado mediante la eliminación de la totalidad o una porción de la región de la cabeza.
En algunas formas, los anticuerpos dados a conocer, da a conocer hemaglutininas , y da a conocer métodos pueden producir una reacción inmune en un sujeto. Por ejemplo, en algunas formas, el sujeto puede producir una respuesta inmune que previene o reduce la gravedad de una infección por influenza. En algunas formas, la respuesta inmune puede ser reactiva a virus de la influenza dentro de un subtipo. En algunas formas, la respuesta inmune puede ser reactiva a virus de la influenza en cada subtipo dentro de un clúster. En algunas formas, la respuesta inmune puede ser reactiva a virus de la influenza en cada grupo dentro de un grupo . En algunas formas , la respuesta inmune puede ser reactiva a todos los virus de la influenza en cada subtipo dentro de un grupo. En algunas formas, la respuesta inmune puede ser reactiva a virus de la influenza dentro de grupo 1.
En algunas formas, los métodos descritos pueden comprender además la detección de los anticuerpos de interés para competir con FIO anticuerpo para unirse a la hemaglutinina, identificando de este modo anticuerpos F10-competencia. En algunas formas, la hemaglutinina se puede hemaglutinina de un virus de la influenza grupo 2. En algunas formas, la hemaglutinina se puede hemaglutinina de un virus de la influenza grupo 1. En algunas formas, los métodos descritos pueden comprende, además, la producción de los anticuerpos identificados. También se describen anticuerpos producidos por los métodos descritos. También se describen anticuerpos identificados por los métodos descritos .
Las composiciones y métodos descritos se basan en el descubrimiento de anticuerpos monoclonales que neutralizan el virus de la influenza, por ejemplo, influenza A virus. El virus de influenza A es un Grupo I de la influenza A virus tales como el virus de la influenza Hl clúster. El virus de la influenza Hl clúster es un clúster Hla o un grupo H libras. El anticuerpo monoclonal es totalmente humano. En algunas formas, el anticuerpo monoclonal puede ser un anticuerpo bivalente, un anticuerpo monovalente, un anticuerpo de cadena sencilla o fragmento de la misma. Específicamente, tales monoclonal puede unirse a un epítopo en la región del tallo de la proteína hemaglutinina (HA), tales como Hal o polipéptido HA2. El epítopo puede ser no lineal.
El epítopo puede comprender tanto el HAL y HA2. El epítopo puede ser no lineal. En algunas formas el epítopo pueden comprender la posición de aminoácidos 18, 38, 40, 291 del polipéptido Hal y el aminoácido en la posición 18, 19, 20, 21, 38, 41, 42, 45, 49, 52, 53 y 56 del polipéptido HA2.
Las composiciones y métodos descritos se basan además en el descubrimiento de un protocolo para la generación de anticuerpos ampliamente neutralizantes humanos que se dirigen a un muy conservadas epítopo en la región del tallo de HA. usando el ectodominio H5 trimérico expresada en baculovirus que produce más cortos N-glicanos y mañosas sin carga absorbidos sobre una superficie de plástico, se admiten para la presentación del epítopo dominante madre, mientras que enmascara la cabeza globular normalmente immunodominate . En consecuencia, también se describe un método de producción de un anticuerpo aislado que se une específicamente a un patógeno virus con envuelta mediante la exposición de una sola cadena o una biblioteca de expresión de Fab a una proteína de fusión de la membrana del virus, la identificación de un anticuerpo en la biblioteca que se une específicamente a dicha proteína; y aislar el anticuerpo de la biblioteca. La proteína de fusión puede ser inmovilizado sobre una superficie sólida, por ejemplo, de plástico. En algunas formas de la proteína de fusión puede haber modificado glicosilaciones comparación con una proteína de fusión de tipo salvaje. Por ejemplo, la fusión puede ser producido en una célula no de mamífero, tal como una célula de insecto. La proteína de fusión puede ser, por ejemplo, una hemaglutinina trimérica (HA) de la proteína.
También se describe un procedimiento de vacunación de un sujeto contra patógenos envuelto de virus tales como virus de la influenza por la administración al sujeto, por ejemplo, una membrana proteína de fusión (proteína por ejemplo, una hemaglutinina trimérica (HA) recubierto) o incrustado en una matriz biológicamente compatible. En algunas formas de la proteína de fusión puede haber modificado glicosilaciones comparación con una proteína de fusión de tipo salvaje.
También se describe una composición que comprende un anticuerpo monoclonal como se describe en el presente documento y kits que contienen la composición en uno o más contenedores y las instrucciones de uso. La invención proporciona además un método de selección de un compuesto para la unión a un anticuerpo FIO poniendo en contacto dicho anticuerpo FIO con un compuesto de interés y la detección de un compuesto complejo-anticuerpo. También se incluye en la invención son el compuesto identificado por el método y su uso como inmunógenos .
De alta afinidad, cruzado-subtipo, ampliamente neutralizantes mAb anti-HA humanos han sido identificados. Específicamente, una biblioteca humana fago Ab pantalla y H5 de hemaglutinina (HA) ectodominio se utilizó para seleccionar diez mAbs neutralizantes (NABS) , con un muy amplio rango de entre los grupos 1 virus de la influenza, incluyendo el virus H5N1 "gripe aviar " y el HlNl "gripe española" y las tensiones "gripe porcina" . Estos Nabs inhiben el proceso de fusión posterior a la unión por el reconocimiento de una novela y epítopo neutralizante altamente conservada dentro de la región del tallo en un punto en el que los elementos clave del cambio conformacional-el péptido de fusión y la superficie expuesta de la hélice aA-se ponen en estrecha aposición. La estructura cristalina de mAb (mAbFlO) unido a H5N1 HA revela que sólo los insertos de cadena pesada en una altamente conservada bolsillo en la región del tallo de HA, la inhibición de los cambios conformacionales requeridos para la fusión de membranas. Se ha descubierto que la orientación de esta NABS bolsillo puede proporcionar una amplia protección contra las infecciones de influenza estacional y pandémica. La estructura cristalina más reveló que el epítopo al que el mAb FIO está definida por los residuos de aminoácidos 18, 38, 39, 40 y 291 de HAL y 18, 19, 20, 21, 38, 41, 42, 45, 49, 52, 53 y 56 de HA2. Este epítopo se denomina en el presente como el ep topo FIO. El análisis estructural y la secuencia de todos los subtipos 16 HA apunta a la existencia de sólo dos variantes de este epitopo, correspondiente a las dos agrupaciones filogenéticas de HA (Grupos 1 y 2). Este descubrimiento indica que una pequeña mezcla de NABS derivado de un subconjunto de cada grupo puede proporcionar una amplia protección contra estacional y la influenza pandémica.
Cabe destacar que Nabs fueron aislados que utilizar el mismo gen de la línea germinal VH, IGHVl-69 * 01, y el codificar un bucle CDR3 que contiene una tirosina en una posición equivalente a Y102, de una biblioteca no inmune. Esto indica que la amplia anti-HA inmunidad cruzada pre- existe en la población-H5 ingenua, posiblemente debido a la exposición anterior a Hl, y, para la biblioteca donantes nacidos antes de 1968, los subtipos H2. El uso recurrente de este segmento VH de la línea germinal, la comunalidad de la tirosina CDR3 introducido a través de la inserción N y/o el gen de la línea germinal D el montaje y el uso promiscuo de genes VL por los Nabs descubiertos indican que la frecuencia de precursores de segmentos reordenados VH que podrían reconocer este epítopo es significativo. Esto indica que con la exposición adecuada al epítopo FIO identificado en el presente, este Nabs de amplio espectro pueden ser inducidos fácilmente in vivo. Estos descubrimientos condujeron a lasolución simple revelada para proporcionar una protección universal contra los subtipos del virus, tanto en grupos.
Tres anti-HA-1 scFv únicos fueron identificados por análisis de secuenciacion del 58 HA-1 clones positivos. Estos scFv fueron designados como 38B y 1C. El aminoácido de VH y VL secuencia de 2A se muestra en el presente documento. Diez únicas scFv anti-HAO fueron identificados por análisis de secuenciacion de los 97 HAO clones positivos. Estos scFv fueron designados como 7, 8, 10, 17, 40, 66, 80, 88, 90, y 98. Seis diferentes VH y VL 10 genes diferentes se dieron a conocer. Algunos scFv compartieron el mismo gen VH. Cinco de los seis genes VH diferentes pertenecían a la familia de genes IGHV1-69. Tres de cada diez genes VL eran cadena kappa. 2A scFv es un anticuerpo neutralizante moderado, 38B y 1C son anticuerpos no neutralizantes. Diez scFv, 7, 8, 10, 17, 40, 66, 80, 88, 90, y 98 son anticuerpos neutralizantes potentes. La secuencia de ácido nucleico y aminoácidos de los anticuerpos neutralizantes de la influenza se proporcionan a continuación. Métodos de fabricación de estos anticuerpos se describen en la PCT/US2009/054950 (Publicación No. O 2010/027818) , todo el contenido de la cual se incorpora en el presente por referencia.
Anticuerpo 2A: región variable de secuencias de ácidos nucleicos de la cadena VH de (SEQ ID NO: 1305) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGTGACAATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCAGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGGGGCATCATTCCTATCTTTGGAAAACCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACTGCGGACGAATCCACGAGCACAGC CTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCGAGAG ATTCAGACGCGTATTACTATGGTTCGGGGGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGCACCCTG GTCACCGTCTCCTCA VL cadena de 2A (SEQ ID NO: 1306) CTGCCTGTGCTGACTCAATCATCCTCTGCCTCTGCTTCCCTGGGATCCTCGGTCAAGCT CACCTGCACTCTGAGCAGTGGGCATAGTAACTACATCATCGCATGGCATCAACAGCAGC CAGGGAAGGCCCCTCGGTACTTGATGAAGGTTAATAGTGATGGCAGCCACACCAAGGGG GACGGGATCCCTGATCGCTTCTCAGGCTCCAGCTCTGGGGCTGACCGCTACCTCACCAT CTCCAACCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTAGTTATTTCTGTGAGACCTGGGACACTAAGA TTCATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCTCCGTCCTCAG Anticuerpo 2A: Secuencia de aminoácidos de región variable VH cadena de 2A (SEQ ID NO: 1307) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDNAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKPN YAQKFQGRVTITADESTSTAYMDLRSLRSEDTAVYYCARDSDAYYYGSGGMDVWGQGTL VTVSS VL cadena de 2A (SEQ ID NO: 1308) LPVLTQSSSASASLGSSVKLTCTLSSGHSNYIIAWHQQQPGKAPRYLMKVNSDGSHTKG DGI PDRFSGSSSGADRYLT ISNLQSEDEASYFCETWDTK I HVFGTGTKVSVL Anticuerpo D7: Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de D7 (SEQ ID NO: 1309) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTCCTGGAGGTATCTTCAACACCAATGCTTTCAGCTGGGTCCGACAGG CCCCTGGACAAGGTCTTGAGTGGGTGGGAGGGGTCATCCCTTTGTTTCGAACAGCAAGC TACGCACAGAACGTCCAGGGCAGAGTCACCATTACCGCGGACGAATCCACGAACACAGC CTACATGGAGCTTACCAGCCTGAGATCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAA GTAGTGGTTACCATTTTAGGAGTCACTTTGACTCCTGGGGCCTGGGAACCCTGGTCACC GTCTCCTCA VL cadena de D7 (SEQ ID NO: 1310) AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGCGTCTCCGGGGAAGACGGTGACCAT CTCCTGCACCGGCAGCAGTGGCAACATTGCCGCCAACTATGTGCAGTGGTACCAACAAC GTCCGGGCAGTGCCCCCACTACTGTGATCTATGAGGATGACCGAAGACCCTCTGGGGTC CCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGGTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTC AGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACTTATGATACCAACAATC ATGCTGTGTTCGGAGGAGGCACCCACCTGACCGTCCTC Anticuerpo H98: Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena.de H98 (SEQ ID NO: 1311) CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTCCTGGAGGTATCTTCAACACCAATGCTTTCAGCTGGGTCCGACAGG CCCCTGGACAAGGTCTTGAGTGGGTGGGAGGGGTCATCCCTTTGTTTCGAACAGCAAGC TACGCACAGAACGTCCAGGGCAGAGTCACCATTACCGCGGACGAATCCACGAACACAGC CTACATGGAGCTTACCAGCCTGAGATCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAA GTAGTGGTTACCATTTTAGGAGTCACTTTGACTCCTGGGGCCTGGGAACCCTGGTCACC GTCTCCTCA VL cadena de H98 (SEQ ID NO: 1312) TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGAAACACGGGCAGAGGGTCACCAT CTCTTGTTCTGGAGGCACCTCCAACATCGGACGTAATCATGTTAACTGGTACCAGCAAC TCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATGAACAGCGGCCCTCAGGGGTC CCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAATCTGGCACCTCCGCCTCCCTGGCCGTGAGTGGGCT CCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCATCATGGGATGACAACTTGAGTGGTT GGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA Anticuerpo D7 y H98: Secuencia de aminoácidos de cadena de región variable VH cadena de D7 y H98 (SEQ ID NO: 1313) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAPGGIFNTNAFSWVRQAPGQGLEWVGGVIPLFRTAS YAQNVQGRVT I TADESTNTAYMELTSLRSADTAVYYCARSSGYH FRSHFDSWGLGTLVTVSS VL cadena de D7 (SEQ ID NO: 1314) NFMLTQPHSVSASPGKTVTISCTGSSGNIAANYVQWYQQRPGSAPTTVIYEDDRRPSGV PDRFSGSIDRSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDT NHAVFGGGTHLTVL VL cadena de H98 (SEQ ID NO: 1315) SYELTQPPSASGKHGQRVTISCSGGTSNIGRNHVNWYQQLPGTAPKLLIYSNEQRPSGV PDRFSGSKSGTSASLAVSGLQSEDEADYYCASWDDNLSGWVFGGGTKLTVL Anticuerpo D8: Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de D8 (SEQ ID NO: 1316) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCGCTTATGCTTTCACCTGGGTGCGGCAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGCATCACCGGAATGTTTGGCACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAACTCACGAGCACAGC CTACATGGAGTTGAGCTCCCTGACATCTGAAGACACGGCCCTTTATTATTGTGCGAGAG GATTGTATTACTATGAGAGTAGTCTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTC TCCTCAG VL cadena de D8 (SEQ ID NO: 1317) CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCAT CTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTCTGTCTCCTGGTACCAAC AGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGG GTCCCTGATCGCTTCTCTGCCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGG GCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTTCTGCTGCTCATATGCAGGCCACAGTGCTT ATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTG Anticuerpo D80: Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de D80 (SEQ ID NO: 1318) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCAGGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCGCTTATGCTTTCACCTGGGTGCGGCAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGCATCACCGGAATGTTTGGCACAGCAAAC TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAACTCACGAGCACAGC CTACATGGAGTTGAGCTCCCTGACATCTGAAGACACGGCCCTTTATTATTGTGCGAGAG GATTGTATTACTATGAGAGTAGTCTTGACTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTC TCCTCAG VK cadena de D80 (SEQ ID NO: 1319) GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTCTTAGCAGCAAGTACTTAGCCTGGTATCAGCAGA AACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATC CCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCACCATCAGTAGACT GGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTCCTGTCAGCAGTATGATGGCGTACCTCGGACGT TCGGCCAAGGGACCACGGTGGAAATCAAA Anticuerpo D8 y D80: Secuencia de aminoácidos de cadena de región variable VH cadena de D8 y D80 (SEQ ID NO: 1320) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSAYAFTWVRQAPGQGLE MGGITGMFGTAN YAQKFQGRVTITADELTSTAY ELSSLTSEDTALYYCARGLYYYESSLDYWGQGTLVTV SS 5 VL cadena de D8 (SEQ ID NO: 1321) QSVLTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYEVTKRPSG VPDRFSASKSGNTASLTVSGLQAEDEADYFCCSYAGHSAYVFGTGTKVTVL VK cadena de D80 (SEQ ID NO: 1322) 10 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLSSKYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATG IPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYSCQQYDGVPRTFGQGTTVEIK Anticuerpo FIO: Secuencia de ácido nucleico de región variable !5 VH cadena de FIO (SEQ ID NO: 1323) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCACGTCCTCTGAAGTCACCTTCAGTAGTTTTGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGCTGGGAGGGATCAGCCCTATGTTTGGAACACCTAAT 20 TACGCGCAGAAGTTCCAAGGCAGAGTCACCATTACCGCGGACCAGTCCACGAGGACAGC CTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAT CTCCTTCTTACATTTGTTCTGGTGGAACCTGCGTCTTTGACCATTGGGGCCAGGGAACC CTGGTCACCGTCTCCTCA 25 VL cadena de FIO (SEQ ID NO: 1324) CAGCCTGGGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCCAAGGGCTTGAGACAGACCGCCACACT CACCTGCACTGGGAACAGCAACAATGTTGGCAACCAAGGAGCAGCTTGGCTGCAGCAGC ACCAGGGCCACCCTCCCAAACTCCTATCCTACAGGAATAATGACCGGCCCTCAGGGATC TCAGAGAGATTCTCTGCATCCAGGTCAGGAAACACAGCCTCCCTGACCATTACTGGACT CCAGCCTGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCTCAACATGGGACAGCAGCCTCAGTGCTG TGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA Anticuerpo E90: Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de E90 (SEQ ID NO: 1325) CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGT CTCCTGCACGTCCTCTGAAGTCACCTTCAGTAGTTTTGCTATCAGCTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGCTGGGAGGGATCAGCCCTATGTTTGGAACACCTAAT TACGCGCAGAAGTTCCAAGGCAGAGTCACCATTACCGCGGACCAGTCCACGAGGACAGC CTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTATTGTGCGAGAT CTCCTTCTTACATTTGTTCTGGTGGAACCTGCGTCTTTGACCATTGGGGCCAGGGAACC CTGGTCACCGTCTCCTCA VL cadena de E90 (SEQ ID NO: 1326) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCAC ' CATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAAC CAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGAGGGGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATTAGCAGCCTGCA GCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAGCAGTATGATAGTTCACCGTACACTTTTG GCCAGGGGACCAAGGTAGAGATCAAA Anticuerpo FIO y E90 Secuencia de aminoácidos de región variable VH cadena de FIO y E90 (SEQ ID NO: 1327) QVQLVQSGAEVKKPGS SVKVSCTSSEVTFSSFAISWVRQAPGQGLEWLGGISPMFGT PNYAQKFQGRVTITADQSTRTAYMDLRSLRSEDTAVYYCARSPSYICSGGTCVFDHWGQ GTLVTVSS VL cadena de FIO (SEQ ID NO: 1328) QPGLTQPPSVSKGLRQTATLTCTGNSNNVGNQGAAWLQQHQGHPPKLLSYRNNDRPSGI SERFSASRSGNTASLTITGLQPEDEADYYCSTWDSSLSAWFGGGTKLTVL VL cadena de E90 (SEQ ID NO: 1329) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAP LLIYAASSLQRGVP SRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYDSSPYTFGQGTKVEIK Anticuerpo 617 : Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de G17 (SEQ ID NO: 1330) CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCCTGCAAGACTTCTGGAGTCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGTTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCGGTGTCTTTGGTGTACCAAAG TACGCGCAGAACTTCCAGGGCAGAGTCACAATTACCGCGGACAAACCGACGAGTACAGT CTACATGGAGCTGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAG AGCCCGGGTACTACGTAGGAAAGAATGGTTTTGATGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTC ACCGTCTCTTCA VL cadena de G17 (SEQ ID NO: 1331) TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCCAAGGGCTTGAGACAGACCGCCATACT CACCTGCACTGGAGACAGCAACAATGTTGGCCACCAAGGTACAGCTTGGCTGCAACAAC ACCAGGGCCACCCTCCCAAACTCCTATCCTACAGGAATGGCAACCGGCCCTCAGGGATC TCAGAGAGATTCTCTGCATCCAGGTCAGGAAATACAGCCTCCCTGACCATTATTGGACT CCAGCCTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGCTCAGTATGGGACAGCAGCCTCAGTGCCT GGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA Anticuerpo G17 Secuencia de aminoácidos de región variable VH cadena de G17 (SEQ ID NO: 1332) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGVTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIGVFGVPK YAQNFQGRVTITADKPTSTVYMELNSLRAEDTAVYYCAREPGYYVGK GFDVWGQGTMV TVSS VL cadena de G17 (SEQ ID NO: 1333) SYELTQPPSVSKGLRQTAILTCTGDSNNVGHQGTAWLQQHQGHPPKLLSYRNGNRPSGI SERFSASRSGNTASL IIGLQPEDEADYYCSVWDSSLSAWVFGGGTKLTVL Anticuerpo H40 : Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de H40 (SEQ ID NO: 1334) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAGGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGT CTCATGTAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCGGTTATTATATTCACTGGGTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGTTGGATCAACCCTATGACTGGTGGCACAAAC TATGCACAGAAGTTTCAGGTCTGGGTCACCATGACCCGGGACACGTCCATCAACACAGC CTACATGGAGGTGAGCAGGCTGACATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGG GGGCTTCCGTATTACGATATTTTGACTGGCAGCCCGAGGCTCTTGATATCTGGGGCCTC GGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA VL cadena de H40 (SEQ ID NO: 1335) CAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGCAT TCCCTGTGGGGGGAACAACATTGGAGGCTACAGTGTACACTGGTACCAACAAAAGCCGG GCCAGGCCCCCCTCTTGGTCATTTATGACGATAAAGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAG CGATTCTCTGGCGCCAACTCTGGGAGCACGGCCACCCTGACAATCAGCAGGGTCGAAGC CGGGGATGAGGGCGACTACTACTGTCAGGTGTGGGATAGTGGTAATGATCGTCCGCTGT TCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA Anticuerpo H40: Secuencia de aminoácidos de región variable VH cadena de H40 (SEQ ID NO: 1336) QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYTFTGYYIHWVRQAPGQGLEWMG INPMTGGTN YAQKFQVWVTMTRDTSI TAY EVSRL SDDTAVYYCARGASVLRYFDWQPEALDI GL GTTVTVSS VL cadena de H40 (SEQ ID NO: 1337) QPVLTQPPSVSVAPGQTASIPCGGNNIGGYSVHWYQQKPGQAPLLVIYDDKDRPSGIPE RFSGANSGSTATLTISRVEAGDEGDYYCQV DSGNDRPLFGGGTKLTVL Anticuerpo A66 Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de A66 (SEQ ID NO: 1338) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGCTCCTCGGTGAAGGT TTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCCCCTTCAGCATGACTGCTTTCACCTGGCTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGGGATCAGCCCTATCTTTCGTACACCGAAG TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAACACAGC CAACATGGAGCTGACCAGCCTGAAATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAA CCCTTTCCTCCTACCAACCGAATAATGATGCTTTTGCTATCTGGGGCCAAGGGACAATG GTCACCGTCTCTTCA VK cadena de A66 (SEQ ID NO: 1339) GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCAC CCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAAC CTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCA GCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGA GCCTGAAGATTTTGCAGTCTATTTCTGTCAGCAGTATGGTAGCTCACCTCAATTCGGCC AAGGGACACGACTGGAGATTAAA Anticuerpo de A66 secuencia de aminoácidos de región variable VH cadena de A66 (SEQ ID NO: 1340) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGPFSMTAFT LRQAPGQGLE MGGISPIFRTPK YAQ FQGRVTITAIDESTNTANMELTSLKSEDTAVYYCARTLSSYQPNNDAFAIWGQGTM VTVSS VK cadena de A66 (SEQ ID NO: 1341) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIP ARFSGSGSGTDFTLT I SRLEPEDFAVYFCQQYGSSPQFGQGTRLEIK Anticuerpo E88 de Secuencia de ácido nucleico de región variable VH cadena de E88 (SEQ ID NO: 1342) CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAAGTGAAGAAGCCTGGCTCCTCGGTGAAGGT TTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCCCCTTCAGCATGACTGCTTTCACCTGGCTGCGACAGG CCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGTGGGATCAGCCCTATCTTTCGTACACCGAAG TACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAACACAGC CAACATGGAGCTGACCAGCCTGAAATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAA CCCTTTCCTCCTACCAACCGAATAATGATGCTTTTGCTATCTGGGGCCAAGGGACAATG GTCACCGTCTCTTCA VL cadena de E88 (SEQ ID NO: 1343) CTGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCAT CTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGC TCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTC CCTGACCGATTCTCTGGCTCCAGGTCAGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCATTGGACT CCGGCCTGAGGATGAAGCTGATTATTACTGTCAGTCGTATGACAGCAGGCTCAGTGCTT CTCTCTTCGGAACTGGGACCACGGTCACCGTCCTC Anticuerpo de E88 secuencia de aminoácidos de región variable VH cadena de E88 (SEQ ID NO: 1344) QVQLVQSGAEVK PGSSVKVSCKASGGPFSMTAFTWLRQAPGQGLE MGGISPIFRTPK YAQKFQGRVTITADESTNTANMELTSLKSEDTAVYYCARTLSSYQPMNDAFAIWGQGTM VTVSS VL cadena de E88 (SEQ ID NO: 1345) LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTV WYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGV PDRFSGSRSGTSASLAIIGLRPEDEADYYCQSYDSRLSASLFGTGTTVTVL Las secuencias de aminoácidos de la cadena pesada y ligera regiones determinantes de la complementariedad de los anticuerpos de la influenza de neutralización se muestran a continuación en la Tabla 18.
Tabla 18.
Anticuerpos A menos que se defina lo contrario, los términos científicos y técnicos utilizados en relación con la presente invención tendrán los significados que son comúnmente · entendidos por los técnicos normales en la técnica. Además, a menos que sea requerido por el contexto, los términos singulares incluirán pluralidades y los términos en plural incluyen el singular. Generalmente, las nomenclaturas utilizadas en relación con, y técnicas de, cultivo celular y tisular, biología molecular, y proteínas y oligo-o polinucleotido química y de hibridación descritas en el presente documento son los bien conocidos y comúnmente utilizados en la técnica. Se utilizan técnicas estándar para ADN recombinante, síntesis de oligonucleótidos , y cultivo y transformación de tejidos (por ejemplo, electroporación, lipofección) . Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación se realizan según las especificaciones del fabricante o como se consigue comúnmente en la técnica o como se describe en el presente documento. La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique específicamente a los métodos contrarios, convencionales de virología, inmunología, microbiología, biología molecular y técnicas de ADN recombinante dentro de la experiencia de la técnica, muchos de los cuales se describen a continuación con el propósito de ilustración. Tales técnicas se explican completamente en la literatura. Ver, por ejemplo, Sambrook, et al. Clonación Molecular: Manual de Laboratory (segunda edición, 1989); Maniatis y col. Clonación molecular: A Laboratory Manual (1982); DNA Cloning: A Practical Approach, vol . I & II (D. Glover, ed. ) ; Síntesis de Oligonucleótido (N. Gait, ed, 1984); La hibridación de ácidos nucleicos (B. Hames y S.
Higgins, eds , 1985.); Transcripción y Traslado (B. Hames . y S. Higgins, eds, 1984); Animal Cultivos Celulares (R. Freshney, ed, 1986);. Perbal, Guía práctica para la Clonación Molecular (1984) .
Las nomenclaturas utilizadas en relación con, y los procedimientos y técnicas de, química analítica, química orgánica sintética, y química médica y farmacéutica descritas en él presente documento de laboratorio son aquellos bien conocidos y comúnmente utilizados en la técnica. Se utilizan técnicas estándar de síntesis químicas, análisis químicos, preparación farmacéutica, formulación, y la entrega, y el tratamiento de los pacientes .
Las siguientes definiciones son útiles en la comprensión de la presente invención: El término " anticuerpo " (Ab) como se usa en el presente documento incluye anticuerpos monoclonales , anticuerpos policlonales , anticuerpos multiespecífieos (por ejemplo, anticuerpos biespecífieos ) , y fragmentos de anticuerpos, siempre que muestren la actividad biológica deseada. El término " inmunoglobulina " (Ig) se utiliza indistintamente con " anticuerpo " en el presente documento .
Un " anticuerpo aislado " es uno que se ha separado y/o recuperado de un componente de su entorno natural . Los componentes contaminantes de su entorno natural son materiales que interferirían con los usos diagnósticos o terapéuticos para el anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas, y otros solutos proteicos o no proteicos. En modalidades preferidas, el anticuerpo se purifica: (1) hasta más del 95% en peso de anticuerpo según se determina por el método de Lowry, y lo más preferiblemente más de 99% en peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia N-terminal o interna de aminoácidos mediante el uso de un secuenciador de taza giratoria, o (3) hasta la homogeneidad mediante SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o, preferiblemente, tinción de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células recombinantes ya que al menos un componente del entorno natural del anticuerpo no estará presente. Normalmente, sin embargo, el anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.
La unidad básica de anticuerpos de cuatro cadenas es una glicoproteína heterotetramérica compuesta por dos cadenas ligeras (L) idénticas y dos cadenas pesadas (H) idénticas cadenas. Un anticuerpo IgM consiste en 5 de la unidad de heterotetrámero básica junto con un polipéptido adicional denominado cadena J, y por lo tanto, contiene 10 sitios de unión a antígeno, mientras que los anticuerpos igA secretados pueden polimerizar para formar ensambla es polivalentes que comprenden 2-5 de las unidades básicas de 4 cadenas junto con la cadena J. En el caso de las IgGs, la unidad de 4 cadenas es generalmente de aproximadamente 150,000 daltons. Cada cadena L está unida a una cadena H mediante un enlace disulfuro covalente, mientras que las dos cadenas H están unidas entre sí por uno o más enlaces disulfuro dependiendo del isotipo de la cadena H. Cada cadena H y L también ha intracadena regularmente espaciados puentes disulfuro. Cada cadena H tiene en el extremo N-terminal, un dominio variable (VH) seguido de tres dominios constantes (CH) para cada una de la a y ? cadenas y cuatro dominios CH para µ e y isotipos. Cada cadena L tiene en el extremo N-terminal, un dominio variable (VL) seguido de un dominio constante (CL) en su otro extremo. El VL está alineado con el VH y el CL está alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada (CHl) . Residuos de aminoácidos particulares se cree que forman una interfaz entre la cadena ligera y los dominios variables de cadena pesada. El emparejamiento de un VH y VL juntos forma un único sitio de unión al antígeno. Para la estructura y las propiedades de las diferentes clases de anticuerpos, véase, por ejemplo, Basic y Inmunología Clínica, 8 8 edición, Daniel P. Stites, Abba I. Terr y Tristram G. Parslo (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, Conn. , 1994, página 71, y en el capítulo 6.
La cadena L de cualquier especie de vertebrados se puede asignar a uno de dos tipos claramente distintos, denominados kappa (?) y lambda (?) , basado en las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes (CL) . Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas (CH) , las irimunoglobulinas se pueden asignar a diferentes clases o isotipos. Hay cinco clases de i munoglobulinas : igA, igD, igE, IgG e igM, que tienen cadenas pesadas designadas alfa (a )) , delta (d ) ), épsilon (e )) , gamma (? ) ) y mu (µ)), respectivamente las clases ? y a se dividen además en subclases en base a diferencias relativamente menores en la secuencia y función de CH, por ejemplo, los seres humanos expresan las siguientes subclases: IgGl, IgG2 , IgG3 , IgG4, IgAl , e IgA2.
El término "variable" se refiere al hecho de que ciertos segmentos de los dominios V difieren ampliamente en secuencia entre los anticuerpos . El dominio V media en la unión a antígeno y define la especificidad de un anticuerpo particular para su antígeno particular. Sin embargo, la variabilidad no se distribuye uniformemente a través de la duración de ácido 110-amino de los dominios variables. En cambio, las regiones V consisten en tramos relativamente invariantes denominados regiones marco (FR) de 15-30 aminoácidos separados por regiones más cortas de variabilidad extrema denominadas " regiones hipervariables " que son cada uno de 9-12 aminoácidos de longitud. Los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras nativas comprenden cada uno cuatro FR, adoptando en gran medida una configuración ß-hoja, conectados por tres regiones hipervariables, que forman bucles que conectan, y en algunos casos forman parte de, la estructura ß-ho a . Las regiones hipervariables en cada cadena se mantienen juntas en estrecha proximidad por las FR y, con las regiones hipervariables de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión a antígeno de los anticuerpos (véase Kabat et al., Secuencias de Proteínas de inmunológica interés, quinto Ed. Servicio Público de Salud, Institutos nacionales de Salud, Bethesda, Maryland (1991)). Los dominios constantes no están implicados directamente en la unión de un anticuerpo a un antígeno, pero presentan diversas funciones efectoras, como la participación del anticuerpo en la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) .
El término " región hipervariable " cuando se usa en el presente se refiere a los residuos de aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión a antígeno. La región hipervariable comprende generalmente residuos de aminoácidos de una " región determinante de la complementariedad " o " CDR " (por ejemplo, alrededor de aproximadamente los residuos 24-34 (Ll) , 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el VL, y alrededor de aproximadamente 31-35 (Hl), 50-65 (H2) y 95-102 (H3) en el VH cuando se numeran de acuerdo con el sistema de numeración de Kabat; . Kabat et al, secuencias de Proteínas de interés Inmunológico, 5 a edición. Servicio Público de Salud, Institutos nacionales de Salud, Bethesda, Maryland (1991)), y/o aquellos residuos de un "bucle hipervariable " (por ejemplo, los residuos 24-34 (Ll), 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el VL, y 26-32 (Hl), 52-56 (H2) y 95-101 (H3) en el VH cuando se numeran de acuerdo con el sistema de numeración de Chothia; Chothia y Lesk, J. Mol Biol. 196:901-917 (1987)), y/o aquellos residuos de un "bucle hipervariable "/CDR (por ejemplo, los residuos 27-38 (Ll) , 56-65 (L2) y 105-120 (L3) en el VL, y 27-38 (Hl), 56-65 (H2) y 105-120 (H3) en el VH cuando se numeran de acuerdo con el sistema de numeración IMGT; Lefranc, MP et al, Res. de Ácidos Nucí 27:209-212 (1999), Ruiz, M. et al. Res. de Ácidos Nucí.: 219-221 (2000)). Opcionalmente, el anticuerpo tiene inserciones simétricas en uno o más de los siguientes puntos 28, 36 (Ll), 63, 74-75 (L2) y 123 (L3) en el VL, y 28, 36 (Hl) , 63, 74-75 (H2) y 123 (H3) en el VH cuando se numeran de acuerdo con ano; Honegger, A. y Plunkthun, AJ Mol. Biol. 309:657-670 (2001) ) .
Por "residuo de ácido nucleico de la línea germinal" se entiende el residuo de ácido nucleico que se produce naturalmente en un gen de línea germinal que codifica una región constante o variable. "Gen de la línea germinal" es el ADN encontrado en una célula germinal (es decir, una célula destinada a convertirse en un óvulo o en el esperma) . Una "mutación de línea germinal " se refiere a un cambio heredable en un ADN particular que se ha producido en una célula germinal o el cigoto en la etapa de célula única, y cuando se transmite a la descendencia, tal mutación se incorpora en cada célula del cuerpo. Una mutación de la línea germinal es en contraste a una mutación somática que se adquiere en una sola célula del organismo. En algunos casos, los nucleótidos en una secuencia que codifica ADN de la línea germinal para una región variable están imitados (es decir, una mutación somática) y se reemplazaron con un nucleótido diferente.
El término " anticuerpo monoclonal " tal como se utiliza en el presente se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos considerablemente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores . Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, estando dirigidos contra un único sitio antigénico. Además, en contraste con las preparaciones de anticuerpos policlonales que incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos) , cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante en el antigeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son favorables ya que pueden ser sintetizados sin contaminación por otros anticuerpos. El modificador "monoclonal" no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo mediante cualquier procedimiento particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales útiles en la presente invención se pueden preparar mediante la metodología del hibridoma descrito primero por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), o se pueden fabricar utilizando métodos de ADN recombinante en bacterias, eucariota animal o vegetal las células (ver, por ejemplo, la Patente de E.U. No. 4,816,567). Los "anticuerpos monoclonales" también pueden aislarse a partir de bibliotecas de anticuerpos de fagos usando las técnicas descritas en Clackson et al., Naturaleza, 352:624-628 (1991) y Marks et al., J. Mol. Biol, 222:581-597 (1991), por ejemplo.
Los anticuerpos monoclonales del presente documento incluyen anticuerpos "quiméricos" en los que una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica u homologa a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular correspondiente o perteneciente a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras el resto de la cadena (s) es idéntica u homologa a las secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otras especies correspondientes o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de dichos anticuerpos, siempre que muestren la actividad biológica deseada (véase, la patente de E.U. No. 4.816.567, y Morrison et al, Proc Nati Acad Sci E.U., 81:6851-6855 (1984)). La presente invención proporciona secuencias de unión a antígeno de dominio variable derivadas de anticuerpos humanos. En consecuencia, los anticuerpos quiméricos de interés principal en el presente documento incluyen anticuerpos que tienen una o más secuencias de unión a antígeno humano (por ejemplo, CDR) y que contiene una o más secuencias derivadas de un anticuerpo no humano, por ejemplo, un FR o secuencia de la región C. Además, los anticuerpos quiméricos de interés principal en el presente documento incluyen los que comprenden una secuencia de unión a antígeno de dominio variable humano de clase uno o subclase de anticuerpo y otra secuencia, por ejemplo, FR o secuencia de la región C, derivada de otra clase o subclase de anticuerpos . Los anticuerpos quiméricos de interés en el presente también incluyen aquellos que contienen secuencias de unión a antígeno de dominio variable relacionado con los descritos en el presente documento o que se derivan de una especie diferente, tal como un primate no humano (por ejemplo, mono del Viejo Mundo, Simio, etc.). Los anticuerpos quiméricos también incluyen anticuerpos primatizados y humanizados.
Además, los anticuerpos quiméricos pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante. Estas modificaciones se realizan para refinar aún más el rendimiento del anticuerpo. Para más detalles, véase Jones et al, Nature 321:522-525 (1986), Riechmann et al, Nature 332:323-329 (1988), y Presta, Curr. Op. Struct. Biol . 2:593-596 (1992).
Un "anticuerpo humanizado" se considera generalmente que es un anticuerpo humano que tiene uno o más residuos de aminoácidos introducidos en él de una fuente que no es humana. Estos residuos de aminoácidos no humanos se denominan frecuentemente como residuos" importados", que normalmente se toman de un "importación" dominio variable. La humanización se lleva a cabo tradicionalmente siguiendo el método de Winter y colaboradores (Jones et al, Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann y otros, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)), mediante la sustitución de importación secuencias de la región hipervariable por las secuencias correspondientes de un anticuerpo humano. Por consiguiente, tales anticuerpos "humanizados" son anticuerpos quiméricos (Patente de E.U.. No. 4.816.567) en los que considerablemente menos de un dominio variable humano intacto ha sido sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana.
Un "anticuerpo humano" es un anticuerpo que contiene sólo las secuencias presentes en un anticuerpo producido de forma natural por un ser humano. Sin embargo, tal como se usa en el presente documento, los anticuerpos humanos pueden comprender residuos o modificaciones que no se encuentran en un anticuerpo humano de origen natural, incluyendo aquellas modificaciones y variantes de las secuencias descritas en el presente documento. Estos se hacen típicamente para perfeccionar o mejorar el rendimiento del anticuerpo.
Un anticuerpo " intacto " es aquel que comprende un sitio de unión a antígeno así como un CL y al menos los dominios constantes de la cadena pesada, CH 1, CH 2 y CH 3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo, dominios constantes de secuencia nativa humana) o de aminoácidos variante de la secuencia de los mismos. Preferiblemente, el anticuerpo intacto tiene una o más funciones efectoras .
Un " fragmento de anticuerpo " comprende una porción de un anticuerpo intacto, preferiblemente la unión al antígeno o región variable del anticuerpo intacto. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen Fab, Fab, F (ab' ) 2, y fragmentos Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales (véase la Patente de E.U. No. 5.641.870; Zapata et al, Ing. de Proteína 8 (10): 057-62
[1995]); moléculas de anticuerpos de cadena única, y anticuerpos multiespecífieos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.
La frase " fragmento o análogo funcional " de un anticuerpo es un compuesto que tiene actividad biológica cualitativa en común con un anticuerpo de longitud completa. Por ejemplo, un fragmento funcional o análogo de un anticuerpo anti-IgE es uno que puede unirse a una inmunoglobulina igE de tal manera con el fin de prevenir o reducir la capacidad de tal molécula de tener la capacidad de unirse al receptor de alta afinidad considerablemente, Fe e RI .
La digestión con papaína de los anticuerpos produce dos fragmentos idénticos de unión al antígeno, llamados fragmentos "Fab", y un fragmento "Fe" residual, una designación que refleja la capacidad de cristalizar fácilmente. El fragmento Fab se compone de toda una cadena L junto con el dominio de la región variable de la cadena H (VH) , y el primer dominio constante de una cadena pesada (CH 1) . Cada fragmento Fab es monovalente con respecto a la unión al antígeno, es decir, que tiene un único sitio de unión a antígeno . El tratamiento con pepsina de un anticuerpo produce un único gran F (ab ' ) 2 fragmento que corresponde aproximadamente a dos fragmentos Fab unido por disulfuro que tienen actividad de unión a antígeno divalente y aún es capaz de entrecruzar el antígeno. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos Fab por tener unos pocos restos adicionales en el extremo carboxi del dominio CHl incluyendo una o más cisteínas de la región bisagra del anticuerpo. Fab'-SH es la designación en el presente documento para Fab ' en la que el residuo de cisteína (s) de los dominios constantes portan un grupo tiol libre. F (ab ') 2 de anticuerpos se produjeron originalmente como pares de fragmentos Fab' que han de bisagra cisteínas entre ellos. También se conocen otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpos.
El fragmento " Fe " comprende las porciones carboxi-terminal de ambas cadenas H se mantienen unidos por disulfuros. Las funciones efectoras de los anticuerpos se determinan mediante las secuencias en la región Fe, cuya región es también la parte reconocida por receptores Fe (FcR) que se encuentran en determinados tipos de células.
"Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un antígeno completo de reconocimiento y sitio de unión. Este fragmento consiste en un dímero de un dominio pesada y una región variable de cadena ligera en estrecha asociación, no covalente. Desde el plegamiento de estos dos dominios emanan seis bucles hipervariables (tres bucles de cada uno de la cadena H y L) que contribuyen a los residuos de aminoácidos para la unión al antígeno y confieren especificidad de unión a antígeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un solo dominio variable (o la mitad de un Fv que comprende sólo tres CDR específicas para un antígeno) tiene la capacidad de reconocer y unirse al antígeno, aunque a una afinidad menor que el sitio de unión.
"Fv de cadena única, también abreviado como " sFv" o "scFv" son fragmentos de anticuerpo que comprenden los dominios de anticuerpo VH y VL conectados a una única cadena de polipéptido. Preferiblemente, el polipéptido sFv comprende además un polipéptido enlazador entre los dominios VH y VL que permite que el sFv forme la estructura deseada para la unión a antígeno. Para una revisión de sFv, ver Pluckthun en La Farmacología de Anticuerpos Monoclonales , vol . 113, Rosenburg y Moore, Springer-Verlag, Nueva York, pp 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, infra.
El término " diacuerpos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpos preparados mediante la construcción de fragmentos sFv (véase el párrafo anterior) con enlazadores cortos (aproximadamente 5-10 residuos) entre los dominios VH y VL de tal manera que entre cadenas pero no dentro de la cadena de emparejamiento de los dominios V se consigue, lo que resulta en un fragmento bivalente, es decir, dos sitios de unión a antígeno-fragmento que tiene. Los diacuerpos biespecífieos son heterodímeros de dos "crossover " fragmentos sFv en el que los dominios VH y VL de los dos anticuerpos están presentes en diferentes cadenas polipeptidicas . Los diacuerpos se describen más completamente en, por ejemplo, EP 404097, WO 93/11161;. Y Hollinger y otros, Proc . Nati. Acad. Ciencia. E.U., 90:6444-6448 (1993).
Como se usa en el presente, un anticuerpo que " internaliza " es uno que ha sido tomado por (es decir, entra en) la célula tras la unión a un antígeno en una célula de mamífero (por ejemplo, un polipéptido de superficie celular o receptor de) . El anticuerpo de internalización, por supuesto, incluir fragmentos de anticuerpo, anticuerpo humano o quimérico, y conjugados de anticuerpos. Para ciertas aplicaciones terapéuticas, la internalización in vivo se contempla. El número de moléculas de anticuerpo internalizadas será suficiente o adecuado para matar una célula o inhibir su crecimiento, especialmente una célula infectada. Dependiendo de la potencia del anticuerpo o anticuerpo conjugado, en algunos casos, la captación de una sola molécula de anticuerpo en la célula es suficiente para destruir la célula objeto a la que se une el anticuerpo. Por ejemplo, ciertas toxinas son altamente potentes en la destrucción de modo que la internalización de una molécula de la toxina conjugada con el anticuerpo es suficiente para matar a la célula infectada.
Como se usa en el presente, un anticuerpo se dice que es " inmunoespecífico, " especifico para " o " se une específicamente " a un antígeno si reacciona a un nivel detectable con el antígeno, preferiblemente con una constante de afinidad, Ka, de mayor que o igual a aproximadamente 104 M-l, o mayor que o igual a aproximadamente 105 M-l, mayor que o igual a aproximadamente 106 M-l, mayor que o igual a aproximadamente 107 M 1, o mayor que o igual a 108 M-l. La afinidad de un anticuerpo por su antígeno cognado también se expresa comúnmente como una constante de disociación KD, y en ciertas modalidades, el anticuerpo se une específicamente a HuM2e M2e si se une con una KD de menos de o igual a 10-4 M, de menos de o igual a aproximadamente 10-5 , de menos de o igual a aproximadamente 10-6 M, de menos de o igual a 10-7 M, o menos de o igual a 10-8 M. Las afinidades de los anticuerpos se puede determinar fácilmente utilizando técnicas convencionales, por ejemplo, las descritas por Scatchard et al. (Ann. N.Y. Acad. Sci.. E.U. 51 : 660 (1949) ) .
La propiedades de encapsulación de un anticuerpo a los antígenos, células o tejidos de la misma se podrá hacer determinado y evaluado utilizando métodos de inmunodetección, incluyendo, por ejemplo, los ensayos basados en inmunofluorescencia, como la inmunohistoquímica (IHC) y/o fluorescencia de células activadas por la clasificación (FACS) .
Un anticuerpo que tiene una " característica biológica " de un anticuerpo designado es el que posee una o más de las características biológicas de ese anticuerpo que lo distinguen de otros anticuerpos. Por ejemplo, en ciertas modalidades, un anticuerpo con una característica biológica de un anticuerpo designado se unirá al mismo epítopo que el unido por el anticuerpo designado y/o tener una función efectora común como el anticuerpo designado.
El término anticuerpo " antagonista " se utiliza en el sentido más amplio, e incluye un anticuerpo que bloquea parcial o totalmente, inhibe o neutraliza una actividad biológica de un epítopo, polipéptido, o una célula que se une específicamente. Los métodos para la identificación de anticuerpos antagonistas pueden comprender poner en contacto un polipéptido o una célula unido específicamente por un anticuerpo antagonista candidato con el anticuerpo antagonista candidato y medir un cambio detectable en una o más actividades biológicas normalmente asociadas con el polipéptido o la célula.
Un "anticuerpo que inhibe el crecimiento de las células infectadas " o un " inhibidor del crecimiento " anticuerpo es uno que se une a y da como resultado la inhibición del crecimiento medible de las células infectadas que expresan o capaces de expresar un epítopo M2e unido por un anticuerpo. Anticuerpos inhibidores del crecimiento preferidos inhiben el crecimiento de las células infectadas en más de un 20%, preferiblemente de aproximadamente 20% a aproximadamente 50%, e incluso más preferiblemente, en más de un 50% (por ejemplo, desde aproximadamente 50% a aproximadamente 100%) en comparación con los el control correspondiente, el control suele ser infectado células no tratadas con el anticuerpo se está probando. La inhibición del crecimiento se puede medir a una concentración de anticuerpo de aproximadamente 0,1 a 30 µ g/ml o aproximadamente 0,5 nM a 200 nM en cultivo celular, donde la inhibición del crecimiento se determina 1-10 días después de la exposición de las células infectadas con el anticuerpo. La inhibición del crecimiento de las células infectadas in vivo se puede determinar de varias maneras conocidas en la técnica. El anticuerpo es inhibidor del crecimiento in vivo si la administración del anticuerpo a aproximadamente 1 µ g/kg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal resultados en la reducción, el porcentaje de células infectadas o el número total de células infectadas dentro de aproximadamente 5 días a 3 meses a partir de la primera administración del anticuerpo, preferiblemente dentro de aproximadamente 5 a 30 días.
Un anticuerpo que " induce apoptosis " es aquel que induce la muerte celular programada determinada mediante la unión de anexina V, la fragmentación de ADN, encogimiento celular, dilatación del retículo endoplasmático, fragmentación celular y/o formación de vesículas de membrana (llamado apoptosis cuerpos) . Preferiblemente, la célula, es una célula infectada. Varios métodos están disponibles para evaluar los eventos celulares asociados con la apoptosis. Por ejemplo, fosfatidil serina (PS) translocación se puede medir por unión de anexina; fragmentación de ADN se puede evaluar a través de escalera de ADN; y nuclear/condensación de la cromatina junto con la fragmentación del ADN puede evaluarse mediante cualquier incremento en células hipodiploides . Preferiblemente, el anticuerpo que induce la apoptosis es uno que resulta en aproximadamente 2 a 50 veces, preferiblemente de aproximadamente 5 a 50 veces, y más preferiblemente de aproximadamente 10 a 50 veces, la inducción de unión a annexina en relación a célula no tratada en un ensayo de unión de anexina.
El anticuerpo " funciones efectoras " se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fe (una región Fe de secuencia nativa o la secuencia de aminoácidos de la región Fe variante) de un anticuerpo, y varían con el isotipo de anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras del anticuerpo incluyen: unión a Clq y citotoxicidad dependiente de complemento; unión al receptor Fe; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) ; fagocitosis; regulación negativa de receptores de superficie celular (por ejemplo, receptor de células B) , y la activación de células B.
La "citotoxicidad dependiente de anticuerpo mediada por células" o "ADCC" se refiere a una forma de citotoxicidad en la que segrega ig unido a los receptores Fe (FcR) presentes en ciertas células citotoxicas (por ejemplo, células asesinas naturales (NK) , neutrófilos, y macrófagos) permiten que estas células efectoras citotoxicas se unan específicamente a una célula objeto que lleva un antígeno y posteriormente maten la célula objeto con citotoxinas. Los anticuerpos " arman " las células citotoxicas y son necesarios para tal matanza. Las células primarias para mediar la ADCC, las células NK, expresan Fe ? RUI solamente, mientras que los monocitos expresan Fe ? RI, Fe ? RII y Fe y RUI. La expresión de FcR en las células hematopoyéticas se resume en la Tabla 3 en la página 464 de Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) . Para evaluar la actividad ADCC de una molécula de interés, un ensayo de ADCC in vitro, tal como el descrito en la Patente de E.U.. No. 5.500.362 o la patente de E.U.. No. 5.821.337. Células efectoras útiles para tales ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células asesinas naturales (NK) . Alternativamente, o adicionalmente, la actividad ADCC de la molécula de interés puede evaluarse in vivo, por ejemplo, en un modelo animal tal como el descrito en Clynes et al., PNAS (E.U.) 95:652-656 (1998) .
El "receptor de Fe" o " FcR" describen un receptor que se une a la región Fe de un anticuerpo. En ciertas modalidades, el FcR es un FcR humano de secuencia nativa. Además, un FcR preferido es uno que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de Fe ? RI, Fe ? RII, y subclases Fe ? RUI, incluyendo variantes alélicas y formas alternativamente empalmadas de estos receptores. Receptores Fe ? RII incluyen Fe ? RIIA (un " receptor activador) y Fe ? gamma RIIB (un " receptor inhibidor) , que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en sus dominios citoplásmicos . Receptor activador Fe ? RIIA contiene un motivo de activación basado en tirosina inmunoreceptor (ITAM) en su dominio citoplásmico . La inhibición de los receptores Fe ? RIIB contiene una tirosina basado motivo inhibición immunoreceptor (ITI ) en su dominio citoplásmico . (ver crítica M. en Daeron, Annu. Rev.. Immunol 15:203-234 (1997)) . FcRs se revisan en Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) ; . Capel et al, Immunomethods 4:25-34 (1994) ; . Y de Haas et al, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995) . Otros FcRs , incluyendo aquellos gue se identificaron en el futuro, están comprendidos en el término " FcR " en el presente. El término también incluye el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de IgG maternas al feto (Guyer et al, J. Immunol 117:587 (1976) y Kim et al, J. Immunol 24: 249 (1994) ) .
Las "Células efectoras humanas" son leucocitos que expresan uno o más FcR y realizan funciones efectoras. Preferiblemente, las células expresan al menos Fe ? RUI y realizan la función efectora de ADCC . Ejemplos de leucocitos humanos que median la ADCC incluyen PBMC, células NK, monocitos, células T citotoxicas y neutrofilos; con PBMC y las células NK se preferidas. Las células efectoras se pueden aislar de una fuente nativa, por ejemplo, a partir de sangre.
La "Ci otoxicidad dependiente del complemento" o "CDC" se refiere a la lisis de una célula objeto en presencia del complemento. La activación de la vía clásica del complemento ' se inicia por la unión del primer componente del sistema del complemento (Clq) a anticuerpos (de la subclase apropiada) que están unidos a su antígeno afín. Para evaluar la activación del complemento, un ensayo CDC, por ejemplo, como se describe en Gazzano-Santoro et al., J. Immunol . Métodos 202:163 (1996), se puede realizar.
El término " influenza A " y " Influenzavirus A " se refiere a un género de la familia Orthomyxoviridae de virus. Influenzavirus A incluye una sola especie: virus de influenza A que causan la influenza en aves, humanos, cerdos y caballos. Las cepas de todos los subtipos de virus de la influenza A se han aislado a partir de las aves silvestres, aunque la enfermedad es poco común. Algunas cepas de influenza A causa enfermedad severa del virus, tanto en aves de corral y, en raras ocasiones, en los seres humanos .
Un " mamífero " a los efectos de tratar la infección por n, se refiere a cualquier mamífero, incluyendo humanos, animales domésticos y de granja, zoológico, deportivos o de los animales de compañía, como perros, gatos, vacas, caballos, ovejas, cerdos, cabras, conejos, etc. Preferiblemente, el mamífero es humano.
" Tratar" o " tratamiento" o "alivio " se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a medidas profilácticas o preventivas, caracterizado porque el objeto es prevenir o ralentizar (reducir) la condición patológica específica o desorden. Los que están en necesidad de tratamiento incluyen los que ya padecen el trastorno así como los propensos a tener el trastorno o aquellos en los que el trastorno debe prevenirse. Un sujeto mamífero o se éxito " tratado " para una infección si, después de recibir una cantidad terapéutica de un anticuerpo de acuerdo con los métodos de la presente invención, el paciente muestra una reducción observable y/o medible o ausencia de uno o más de los siguientes: reducción en el número de células o ausencia de las células infectadas infectados; reducción en el porcentaje del total de células que están infectadas, y/o alivio hasta cierto punto, uno o más de los síntomas asociados con la infección específica; reducción de la morbilidad y la mortalidad, y la mejora en la calidad de vida. Los parámetros anteriores para evaluar el éxito del tratamiento y la mejora en la enfermedad son fácilmente medible por procedimientos de rutina familiares para un médico .
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad de un anticuerpo o un fármaco efectivo para "tratar" una enfermedad o trastorno en un sujeto o mamífero. Ver anterior definición de "tratar.
"Crónica " se refiere a la administración de la administración del agente (s) en un modo continuo en oposición a un modo agudo, para mantener el efecto terapéutico inicial (actividad.) durante un período prolongado de tiempo. Administración "intermitente " es el tratamiento que no se realiza consecutivamente sin interrupción, sino que más bien es de naturaleza cíclica.
La administración "en combinación con " uno o más agentes terapéuticos adicionales incluye la administración simultánea (concurrente) y consecutiva en cualquier orden.
" Portadores", tal como se usa en el presente documento incluyen portadores farmacéuticamente aceptables, excipientes, o estabilizantes que no son tóxicos para la célula o el mamífero expuesto a los mismos a las dosis y concentraciones empleadas. A menudo, el portador fisiológicamente aceptable es una solución acuosa tamponada de pH. Los ejemplos de portadores fisiológicamente aceptables incluyen tampones tales como fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes incluyendo el ácido ascórbico; de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos) ; polipéptido proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina, o inmunoglobulinas ; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina; monosacáridos , disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo la glucosa, mañosa, o dextrinas, agentes quelantes tales como EDTA, alcoholes de azúcar, tales como manitol o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como sodio, y/o no iónicos tales como TWEEN™ polietilenglicol (PEG) , y PLURONICS™.
El término " agente citotóxico " tal como se utiliza en el presente, se refiere a una sustancia que inhibe o previene la función de las células y/o causa la destrucción de las células . El término pretende incluir isótopos radiactivos (por ejemplo, AT211, 1131, 1125, Y90, Rel86, RE188, Sml53, BÍ212, P32 e isótopos radiactivos de Lu) , agentes quimioterapéuticos , por ejemplo, metotrexato, adriamicina, alcaloides de la vinca (vincristina, vinblastina, etopósido) , doxorrubicina, melfalán, mitomicina C, clorambucilo, daunorubicina u otros agentes intercalantes, enzimas y fragmentos de las mismas tales como enzimas nucleolíticas , antibióticos, y toxinas tales como toxinas de molécula pequeña o toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fúngico, vegetal o animal, incluyendo fragmentos y/o variantes de los mismos, y los diversos agentes antitumorales o anticancer genos se describe a continuación. Otros agentes citotóxicos se describen a continuación.
Un " agente inhibidor del crecimiento " cuando se usa en el presente se refiere a un compuesto o composición que inhibe el crecimiento de una célula, ya sea in vitro o in vivo. Los ejemplos de agentes inhibidores del crecimiento incluyen agentes que la progresión del ciclo celular bloque, tales como agentes que inducen la detención de Gl y la detención de M-fase. Bloqueadores clásicos de fase M incluyen los alcaloides de la vinca (vincristina, vinorelbina y vinblastina) , taxanos, e inhibidores de la topoisomerasa II tales como la doxorubicina, epirubicina, daunorubiciña, etopósido, y bleomicina. Aquellos agentes que interrumpen Gl también afectan a la detención de la fase S, por ejemplo, agentes alquilantes de ADN, tales como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatino, metotrexato, 5-fluorouracilo, y ara-C. Más información se puede encontrar en la base molecular del cáncer, Mendelsohn y de Israel, eds . , Capítulo 1, titulado "La regulación del ciclo celular, los oncogenes y los fármacos antineoplásicos " de Murakami et al. (W B Saunders : Filadelfia, 1995), especialmente p. 13. Los taxanos (paclitaxel y docetaxel) son fármacos anticancerígenos derivados ambos del tejo. El docetaxel (Taxotere™, Rhóne-Poulenc Rorer) , derivado del tejo europeo, es un análogo semisintético de paclitaxel (Taxol®, Bristol-Myers Squibb) . El paclitaxel y el docetaxel promueven el ensamblaje de microtúbulos a partir de dímeros de tubulina y estabilizan los microtúbulos mediante la prevención de la despolimerización, lo que resulta en la inhibición de la mitosis en las células .
"Etiqueta" tal como se utiliza en el presente se refiere a un compuesto o composición detectable que se conjuga directa o indirectamente con el anticuerpo para generar un anticuerpo "marcado " . El marcador puede ser detectable por sí mismo (por ejemplo, marcadores radioisótopos o marcadores fluorescentes) o, en el caso de un marcador enzimático, puede catalizar la alteración química de un compuesto o composición sustrato que es detectable .
El término " epítopo etiquetado " como se usa en el presente, se refiere a un polipéptido quimérico que comprende un polipéptido fusionado a un " polipéptido etiqueta. " El polipéptido etiqueta tiene suficientes residuos para proporcionar un epítopo contra el que un anticuerpo se puede hacer, aunque es suficientemente corto de tal manera que no interfiera con la actividad del polipéptido al que se fusiona. El polipéptido etiqueta es también preferiblemente bastante único, de manera que el anticuerpo no reaccione de forma cruzada con otros epítopos. Los polipéptidos etiqueta adecuados tienen generalmente al menos seis residuos de aminoácidos y habitualmente entre aproximadamente 8 y 50 residuos de aminoácidos (preferiblemente, entre aproximadamente 10 y 20 residuos de aminoácidos) .
Una " molécula pequeña " se define en el presente para tener un peso molecular por debajo de aproximadamente 500 Daltons.
Los términos " ácido nucleico " y " polinucleótido " se usan indistintamente en el presente documento para referirse a ARN de una o de doble cadena, ADN, o polímeros mixtos. Los polinucleotidos pueden incluir secuencias genómicas, secuencias extra-genómico y de plásmidos y segmentos de genes de ingeniería más pequeñas que expresan, o pueden ser adaptados para expresar polipéptidos .
Un " ácido nucleico aislado " es un ácido nucleico que se separa considerablemente de otras secuencias de ADN del genoma así como proteínas o complejos tales como ribosomas y polimerasas, que acompañan de forma natural una secuencia nativa. El término abarca una secuencia de ácido nucleico que se ha retirado de su entorno de origen natural, e incluye ADN recombinante o clonado aisla y sintetizar químicamente análogos o análogos sintetizados biológicamente por sistemas heterólogos . Un ácido nucleico considerablemente pura incluye formas aisladas de ácido nucleico. Por supuesto, esto se refiere al ácido nucleico aislado como originalmente y no excluye genes o secuencias más tarde añadido al ácido nucleico aislado por la mano del hombre.
El término " polipéptido " se usa en su significado convencional, es decir, como una secuencia de aminoácidos. Los polipéptidos no se limitan a una longitud específica del producto. Los péptidos, oligopéptidos , y proteínas se incluyen dentro de la definición de polipéptido, y dichos términos se pueden usar indistintamente en el presente documento a menos que se indique específicamente lo contrario. Este término tampoco se refiere o excluye modificaciones post-expresión del polipéptido, por ejemplo, glicosilaciones , acetilaciones , fosforilaciones y similares, así como otras modificaciones conocidas en la técnica, tanto de origen natural y de origen no natural. Un polipéptido puede ser una proteína completa, o una subsecuencia de la misma. Polipéptidos particulares de interés en el contexto de esta invención son amino subsecuencias de ácido que comprende las CDR y que es capaz de unirse a un antígeno o célula infectada-A de la influenza.
Un " polipéptido aislado " es uno que se ha identificado y separado y/ o recuperado de un componente de su entorno natural. En modalidades preferidas, el polipéptido aislado se purificará (1) hasta más del 95% en peso de polipéptido según lo determinado por el método de Lowry, y lo más preferiblemente más de 99% en peso, (2) hasta un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos N-terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de taza giratoria, o (3) hasta la homogeneidad mediante SDS-PAGE en condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o, preferiblemente, tinción de plata. El polipéptido aislado incluye el polipéptido in situ dentro de células recombinantes ya que al menos un componente del entorno natural del polipéptido no estará presente. Normalmente, sin embargo, el polipéptido aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.
Un polinucleotido " secuencia nativa " es uno que tiene la misma secuencia de nucleótidos como un polinucleotido derivado de la naturaleza. Un polipéptido de " secuencia nativa " es uno que tiene la misma secuencia de aminoácidos que un polipéptido (por ejemplo, anticuerpo) derivado de la naturaleza (por ejemplo, de cualquier especie) . Tales polinucleotidos y polipeptidos de secuencia nativa pueden aislarse de la naturaleza o pueden producirse por medios recombinantes o sintéticos.
Una "variante, " polinucleotido como el término se usa en el presente, es un polinucleotido que típicamente difiere de un polinucleotido específicamente descrita en el presente en una o más sustituciones, deleciones, adiciones y/o inserciones. Tales variantes pueden ser de origen natural o pueden ser generadas sintéticamente, por ejemplo, mediante la modificación de una o más de las secuencias de polinucleotidos de la invención y la evaluación de una o más actividades biológicas del polipéptido codificado, como se describe en el presente documento y/o el uso de cualquiera de un número de técnicas bien conocidas en la técnica .
Una "variante, polipéptido como el término se usa en el presente documento, es un polipéptido que típicamente difiere de un polipéptido específicamente descrita en el presente en una o más sustituciones, deleciones, adiciones y/o inserciones. Tales variantes pueden ser de origen natural o pueden ser generadas sintéticamente, por ejemplo, mediante la modificación de una o más de las secuencias de polipéptidos anteriores de la invención y la evaluación de una o más actividades biológicas del polipéptido como se describe en el presente documento y/o el uso de cualquiera de un número de técnicas bien conocidas en la técnica.
Se pueden hacer modificaciones en la estructura de los polinucleótidos y polipéptidos de la presente invención y aún obtener una molécula funcional que codifica una variante o polipéptido derivado con características deseables. Cuando se desea alterar la secuencia de aminoácidos de un polipéptido para crear un equivalente, o incluso una mejora, variante o porción de un polipéptido de la invención, un técnico en la técnica típicamente va a cambiar uno o más de los codones de la codificación secuencia de ADN.
Por ejemplo, ciertos aminoácidos pueden ser sustituidos por otros aminoácidos en una estructura proteica sin pérdida apreciable de su capacidad para unirse a otros polipéptidos (por ejemplo, antigenos) o células. Puesto que es la capacidad de unión y la naturaleza de una proteína que define esa actividad funcional biológica de la proteína, ciertas sustituciones en la secuencia de aminoácidos puede hacerse en una secuencia de proteína, y, por supuesto, su ADN subyacente secuencia de codificación, y sin embargo obtener una proteína con como propiedades. Por tanto, se contempla que diversos cambios se pueden hacer en las secuencias peptídicas de las composiciones descritas, o secuencias de ADN correspondientes que codifican dichos péptidos sin pérdida apreciable de su utilidad o actividad biológica.
En muchos casos, una variante de polipéptido contendrá una o más sustituciones conservadoras. Una "sustitución conservativa" es una en la que se sustituye un aminoácido por otro aminoácido que tiene propiedades similares, de tal manera que un técnico en la técnica de la química de péptidos esperaría que la estructura secundaria y la naturaleza hidropática del polipéptido a ser considerablemente sin cambios.
Al hacer tales cambios, el índice hidropático de los aminoácidos puede ser considerado. La importancia del índice hidropático de los aminoácidos para conferir función biológica interactiva en una proteina se entiende generalmente en la técnica (Kyte y Doolittle, 1982) . Se acepta que el carácter hidropático relativo del aminoácido contribuye a la estructura secundaria de la proteína resultante, que a su vez define la interacción de la proteína con otras moléculas, por ejemplo, enzimas, sustratos, receptores, ADN, anticuerpos, antígenos, y similares. A cada aminoácido se le ha asignado un índice hidropático sobre la base de sus características de hidrofobicidad y carga (Kyte y Doolittle, 1982) . Estos valores son: isoleucina (+4,5); valina (4.2); leucina (3,8); fenilalanina (2,8); cisteína/cistina (+2,5); metionina (1,9); alanina (1,8); glicina (-0,4); treonina (-0,7); serina (-0,8); triptófano (-0,9); tirosina (-1,3); prolina (-1,6); histidina (-3,2); glutamato (-3,5); glutamina (-3.5); aspartato (-3,5); asparagina (-3,5); lisina (-3,9) y arginina (-4,5).
Es conocido en la técnica que ciertos aminoácidos pueden ser sustituidos por otros aminoácidos que tienen un índice o valor hidropático similar y todavía dan como resultado una proteína con actividad biológica similar, es decir aún obtener una proteína funcionalmente equivalente biológica. Al hacer tales cambios, se prefiere la sustitución de aminoácidos cuyos índices hidropáticos están dentro de ± 2, aquellos dentro de ± 1 se prefieren particularmente, y aquellos dentro de ± 0,5 son incluso más particularmente preferido. También se entiende en la técnica que la sustitución de aminoácidos similares puede realizarse eficazmente sobre la base de la hidrofilicidad. Patente E.U. 4.554.101 establece que la mayor hidrofilicidad promedio local de una proteína, que se rige por la hidrofilicidad de sus aminoácidos adyacentes, se correlaciona con una propiedad biológica de la proteína.
Como se detalla en la patente de E.U. 4.554.101, los siguientes valores de hidrofilicidad se han asignado a los residuos de aminoácidos: arginina (+3,0); lisina (3,0); aspartato (3,0 ± 1); glutamato (3,0 ± 1); serina (0,3); asparagina (+0,2); glutamina (0,2); glicina (0); treonina (-0,4); prolina (-0.5 ± 1); alanina (-0,5); histidina (-0,5); cisteína (-1,0); metionina (-1,3); valina (-1,5); leucina (-1,8); isoleucina (-1,8); tirosina (-2,3); fenilalanina (-2,5); triptófano (-3,4). Se entiende que un aminoácido puede ser sustituido por otro que tiene un valor de hidrofilicidad similar y todavía obtener un equivalente biológicamente, y, en particular, una proteína inmunológicamente equivalente. En tales cambios, se prefiere la sustitución de aminoácidos cuyos valores de hidrofilicidad están dentro de + 2, aquellos dentro de ± 1 se prefieren particularmente, y aquellos dentro de ± 0,5 son incluso más particularmente preferido.
Como se indica anteriormente, las sustituciones de aminoácidos generalmente se basan por lo tanto en la similitud relativa de los sustituyentes de la cadena lateral de aminoácidos, por ejemplo, su hidrofobicidad, hidrofilicidad, carga, tamaño, y similares. Sustituciones ejemplares que toman diversas de las características anteriores en consideración son bien conocidos por los técnicos en la materia e incluyen: arginina y lisina; glutamato y aspartato; serina y treonina; glutamina y asparagina, y valina, leucina e isoleucina.
Las sustituciones de aminoácidos pueden además hacerse sobre la base de similitud de polaridad, carga, solubilidad, hidrofobicidad, hidrofilicidad y/o la naturaleza antipática de los residuos. Por ejemplo, los aminoácidos cargados negativamente incluyen ácido aspártico y ácido glutámico; aminoácidos cargados positivamente incluyen lisina y arginina, y los aminoácidos con grupos de cabeza polares no cargados que tienen valores de hidrofilicidad similares incluyen leucina, isoleucina y valina; glicina y alanina; asparagina y glutamina; y serina, treonina, fenilalanina y tirosina. Otros grupos de aminoácidos que pueden representar cambios conservadores incluyen: (1) Ala, Pro, Gly, Glu, Asp, Gln, Asn, Ser, Thr; (2) Cys, Ser, Tyr, Thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, la, y (5) Phe, Tyr, Trp, la suya. Una variante puede, o alternativamente, contener también cambios no conservativos. En una modalidad preferida, variantes de polipéptidos difieren de una secuencia nativa por sustitución, deleción o adición de cinco aminoácidos o menos. Las variantes pueden también (o alternativamente) ser modificadas mediante, por ejemplo, la deleción o adición de aminoácidos que tienen influencia mínima en la inmunogenicidad, estructura secundaria y la naturaleza hidropática del polipéptido.
Los polipéptidos pueden comprender una señal (o guía) secuencia en el extremo N-terminal de la proteína, que dirige co-traduccionalmente o post-traduccionalmente la transferencia de la proteína. El polipéptido también puede estar conjugado a un enlazador u otra secuencia para facilidad de síntesis, purificación o identificación del polipéptido (por ejemplo, poli-His) , o para potenciar la unión del polipéptido a un soporte sólido. Por ejemplo, un polipéptido puede conjugarse con una región Fe de inmunoglobulina .
Al comparar secuencias de polinucleótidos y de polipéptidos, dos secuencias se dice que son " idénticas " si la secuencia de nucleótidos o aminoácidos en las dos secuencias es la misma cuando se alinean para la máxima correspondencia, como se describe a continuación. Las comparaciones entre dos secuencias se realizan típicamente mediante la comparación de las secuencias de más de una ventana de comparación para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencia. Una " ventana de comparación ", como se usa en el presente documento, se refiere a un segmento de al menos aproximadamente 20 posiciones contiguas, normalmente de 30 a aproximadamente 75, 40 a aproximadamente 50, en la que una secuencia puede compararse con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de que las dos secuencias se alinean de manera óptima.
El alineamiento óptimo de secuencias para comparación puede realizarse utilizando el programa Megalign en la suite Lasergene de software de bioinformática (DNASTAR, Inc., Madison, WI) , utilizando parámetros por defecto. Este programa incorpora varios esquemas de alineación descritos en las siguientes referencias: Dayhoff, MO (1978) Un modelo de cambio evolutivo en proteínas-Matrices para la detección de relaciones distantes. En Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas de la secuencia de la proteína y la estructura, La Fundación de Investigación Biomédica Nacional, Washington DC vol . 5, Supl . 3, pp 345-358; Hein J. (1990) enfoque unificado de Alineación y Filogenes pp . 626-645 Métodos en Enzimología vol . 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, DG y Sharp, p.M. (1989) CABIOS 5:151-153; Myers , EW y Muller . (1988) CABIOS 4:11-17; Robinson, ED (1971) Comb. Teor. 11:105; Santou, N. Nes , M. (1987) Mol. Biol . Evol . 4:406-425; Sneath, P.H.A. y Sokal , RR (1973) Taxonomía numérica-los Principios y Práctica de Taxonomía Numérica, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, WJ y Lipman, DJ (1983) Proc. Nati. Acad., Ciencia. E.U. 80:726-730.
Alternativamente, la alineación óptima de secuencias para comparación puede realizarse por el algoritmo de identidad local de Smith y Waterman (1981) Add. APL. Matemáticas 2:482, por el algoritmo de alineamiento de identidad de Needleman y Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443, por la búsqueda de métodos de similitud de Pearson y Lipman (1988) Proc. Nati. Acad. Ciencia. E.U. 85: 2444, mediante implementaciones computarizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA y TFASTA en Paquete de Software de Genética de Wisconsin, Grupo de Computadora de Genética (GCG) , 575 Science Dr., Madison, WI ) , o mediante inspección.
Un ejemplo preferido de algoritmos que son adecuados para determinar el porcentaje de identidad de secuencia y similitud de secuencia son los algoritmos BLAST y BLAST 2.0, que se describen en Altschul et al. (1977) Nucí. Acids Res.. 25:3389-3402 y Altschul et al. (1990) J.
Mol. Biol. 215:403-410, respectivamente. BLAST y BLAST 2.0 pueden utilizarse, por ejemplo, con los parámetros descritos en el presente documento, para determinar el porcentaje de identidad de secuencia para los polinucleótidos y polipéptidos de la invención. El software para realizar análisis BLAST está públicamente disponible a través del Centro Nacional de Información Biotecnológica.
En un ejemplo ilustrativo, las puntuaciones acumulativas se pueden calcular usando, para secuencias de nucleótidos, los parámetros M (puntuación de recompensa para un par de restos coincidentes; siempre > 0) y N (puntuación de penalización para residuos no coincidentes, siempre < 0) . Extensión de la palabra en cada dirección se detiene cuando: la puntuación de alineación acumulativa disminuye en la cantidad X de su valor máximo alcanzado; la puntuación acumulativa llega a cero o menos, debido a la acumulación de una o más alineaciones negativos anotando residuos; o se alcanza el final de cualquier secuencia. Los parámetros del algoritmo BLAST W, T y X determinan la sensibilidad y velocidad del alineamiento. El programa BLASTN (para secuencias de nucleótidos) usa por defecto una longitud de palabra (W) de 11, y expectativa (E) de 10, y la matriz de puntuación BLOSUM62 (véase Henikoff y Henikoff (1989) Proc. Nati. Acad. Sci .. E.U. 89: 10915) alineaciones, (B) de 50, expectativa (e) de 10, M = 5, N =- 4 y una comparación de ambas cadenas .
Para secuencias de aminoácidos, una matriz de puntuación se puede utilizar para calcular la puntuación acumulativa. Extensión de la palabra en cada dirección se detiene cuando: la puntuación de alineación acumulativa disminuye en la cantidad X de su valor máximo alcanzado; la puntuación acumulativa llega a cero o menos, debido a la acumulación de una o más alineaciones negativos anotando residuos; o se alcanza el final de cualquier secuencia. Los parámetros del algoritmo BLAST W, T y X determinan la sensibilidad y velocidad del alineamiento.
En un enfoque, el " porcentaje de identidad de secuencia " se determina comparando dos secuencias óptimamente alineadas sobre una ventana de comparación de al menos 20 posiciones, caracterizado porque la porción de la secuencia polinucleotídica o polipeptídica en la ventana de comparación puede comprender adiciones o deleciones (es decir, huecos) de 20 por ciento o menos, habitualmente de 5 a 15 por ciento, o 10 a 12 por ciento, en comparación con las secuencias de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para un alineamiento óptimo de las dos secuencias. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que se producen las bases de ácidos nucleicos idénticas o residuos de aminoácidos en ambas secuencias para producir el número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones en la secuencia de referencia (es decir, el tamaño de la ventana) y multiplicando los resultados por 100 para producir el porcentaje de identidad de secuencia.
" Homología " se refiere al porcentaje de residuos en el polinucleótido o polipéptido variante de secuencia que son idénticos a la secuencia no variante después de alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para conseguir el máximo porcentaje de homología. En modalidades particulares, las variantes de polinucleótidos y de polipéptidos tienen al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 98%, o ál menos 99% de homología de polinucleótido o polipéptido con un polinucleótido o polipéptido descrito en el presente.
El " vector " incluye vectores lanzadera y¦ de expresión. Típicamente, la construcción de plásmido también incluirá un origen de replicación (por ejemplo, el origen de replicación ColEl) y un marcador seleccionable (por ejemplo, resistencia a ampicilina o tetraciclina) , para la replicación y selección, respectivamente, de los plásmidos en bacterias. Un " vector de expresión " se refiere a un vector que contiene las secuencias de control necesarias o elementos reguladores para la expresión de los anticuerpos incluyendo fragmento de anticuerpo de la invención, en células bacterianas o eucariotas. Los vectores adecuados se dan a conocer a continuación.
Tal como se utiliza en esta descripción y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares " un, "una " y " el " incluyen referencias plurales a menos que el contenido indique claramente lo contrario.
La presente invención incluye anticuerpos humanos monoclonales anti-influenza que comprenden un polipéptido de la presente invención, así como fragmentos y variantes de la misma. En una forma de modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo designado en el presente como: TCN- 032 (8110), 21B15, TCN-031 (23K12), 3241 _G23, 3244_I10 3243 _J07, 3259_J21, 3245 _019, 3244_H04, 3136 _G05, 3252_C13 3255 _J06, 3420_I23, 3139 _P23 , 3248_P18, 3253 _P10, 3260_D19 3362 _B11 , 3242_P05, TCN-522 (3212_I12) , TCN-521 (3280_D18) TCN-523 (5248_A17) , TCN-563 (5237_B21) , TCN-526 (5084_C17) TCN-527 (5086_C06) , TCN-528 (5087_P17) , TCN-529 (5297_H01) TCN-530 (5248_H10) , TCN-531 (5091_H13) , TCN-532 (5262_H18) TCN-533 (5256_A17) , TCN-534 (5249_B02) , TCN-535 (5246_P19) TCN-536 (5095_N01) , TCN-537 (3194_D21) , TCN-538 (3206_O17) TCN-539 (5056_A08) , TCN-540 (5060_F05) , TCN-541 (5062_M11) TCN-542 (5079_A16) , TCN-543 (5081_G23) , TCN-544 (5082_A19) TCN-545 (5082_I15) , TCN-546 (5089_L08) , TCN-547 (5092_F11) TCN-548 (5092_P01) , TCN-549 (5092_P04) , TCN-550 (5096_F06) TCN-551 (5243_D01), TCN-552 (5249_I23), TCN-553 (5261_C18), TCN-554 (5277_M05), TCN-555 (5246_L16), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04), TCN 558 (5248_Hl0b), TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10), TCN-504 (3251_K17), SC06 -141 , SC06-255, SC06- 257, SC06 -260, SC06-261, SC06-262, SC06 -268 , SC06-272, SC06-¦296, SC06 -301, SC06-307, SC06-310, SC06 -314 , SC06-323, SC06-•325, SC06 -327, SC06-328, SC06-329, SC06 -331 , SC06-332, SC06-¦334, SC06 -336, SC06-339, SC06-342, SC06 -343 , SC06-344, CR6141, CR6255 , CR6257, CR6260, CR6261, CR62 62, CR6268, CR6272, CR6296, CR6301, CR6307, CR6310, CR63 14, CR6323, CR6325, CR6327, CR6328, CR6329, CR6331, CR63 32, CR6334, CR6336, CR6339, CR6342, CR6343, o CR6344.
Estos anticuerpos se unen preferentemente a o específicamente se unen a la influenza A las células infectadas en comparación con células de control no infectadas del mismo tipo celular.
En modalidades particulares, los anticuerpos de la presente invención se unen a la proteína 2 o HA. En ciertas modalidades, la presente invención proporciona anticuerpos anti-influenza humana que se unen a epítopos dentro de M2e o HA que sólo están presentes en la conformación nativa, es decir, tal como se expresa en las células. En modalidades particulares, estos anticuerpos no pueden unirse específicamente a un polipéptido aislado que M2e, por ejemplo, el fragmento de M2e residuo 23 de aminoácido o un polipeptido aislado de HA. Se entiende que estos anticuerpos reconocen no lineal (es decir, conformacionales) epítopo (s) del péptido o proteína M2 o HA.
Estos epítopos conformacionales específicos dentro de la proteína M2 o HA, y particularmente dentro de M2e, se pueden utilizar como vacunas para prevenir el desarrollo de la infección de la influenza dentro de un su eto .
Como se entenderá por el técnico en la materia, descripción general de anticuerpos en el presente documento y los métodos de preparación y uso de la misma también se aplican a los componentes polipeptídicos individuales de anticuerpos y fragmentos de anticuerpos.
Los anticuerpos de la presente invención pueden ser anticuerpos policlonales o monoclonales . Sin embargo, en modalidades preferidas, que son monoclonales. En modalidades particulares, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos completamente humanos. Los métodos para producir anticuerpos policlonales y monoclonales son conocidos en · la técnica y se describen generalmente, por ejemplo, en la Patente de E.U. No. 6.824.780. Típicamente, los anticuerpos de la presente invención se producen de manera recombinante , utilizando vectores y métodos disponibles en la técnica, como se describe más adelante. Los anticuerpos humanos también pueden ser generados in vitro por células B activadas (ver patente de E.U. n. Nos. 5.567.610 y 5.229.275).
Los anticuerpos humanos también pueden producirse en animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que son capaces de producir un repertorio completo de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena. Por ejemplo, se ha descrito que la deleción homocigótica del gen de la cadena pesada del anticuerpo región de unión (JH) en los resultados de ratones mutantes quiméricos y de línea germinal en la inhibición completa de la producción endógena de anticuerpos. Transferencia de la línea germinal de genes de inmunoglobulina humana en tal matriz de línea germinal resulta ratones mutantes en la producción de anticuerpos humanos tras la exposición al antígeno. Ver, por ejemplo, Jakobovits et al., Proc. Nati. Acad. Ciencia. E.U., 90:2551 (1993);. Jakobovits y otros, Nature, 362:255-258 (1993);. Bruggemann et al, Año en Immuno, 7:33 (1993);. Patente de E.U.. Nos. 5.545.806, 5.569.825, 5.591.669 (todas de GenPharm) ; Patente de E.U.. No. 5.545.807 y WO 97/17852. Tales animales pueden ser diseñados genéticamente para producir anticuerpos humanos que comprenden un polipéptido de la presente invención.
En ciertas modalidades, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos quiméricos que comprenden secuencias derivadas tanto de fuentes humanas y no humanas. En modalidades particulares, estos anticuerpos quiméricos se humanizados o primatizados™. En la práctica, los anticuerpos humanizados son típicamente anticuerpos humanos en los que algunos residuos de la región hipervariable y posiblemente algunos residuos de FR se sustituyen por residuos de sitios análogos en anticuerpos de roedores .
En el contexto de la presente invención, los anticuerpos quiméricos también incluyen anticuerpos completamente humanos en el que la región hipervariable humano o una o más CDR se conservan, pero uno o más de otras regiones de la secuencia han sido sustituidos por las secuencias correspondientes de un no-humana animales .
La elección de secuencias no-humanos, tanto ligeros como pesados , para ser utilizado en la fabricación de los anticuerpos quiméricos es importante para reducir la antigenicidad y las respuestas de anticuerpos anti-no-humanos humanos cuando el anticuerpo es para uso terapéutico humano. Es importante que los anticuerpos quiméricos retienen alta afinidad de unión por el antígeno y otras propiedades biológicas favorables. Para lograr este objetivo, de acuerdo con un método preferido, los anticuerpos quiméricos se preparan mediante un proceso de análisis de las secuencias parentales y diversos productos quiméricos conceptuales utilizando modelos tridimensionales de las secuencias de humanos y no humanos parentales . Los modelos de inmunoglobulina tridimensionales están comúnmente disponibles y son familiares para los técnicos en la materia. Programas informáticos disponibles que ilustran y muestran probables estructuras conformacionales tridimensionales de secuencias de inmunoglobulinas candidatas seleccionadas. La inspección de estas presentaciones permite el análisis del papel probable de los residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, es decir, el análisis de residuos que influyen en la capacidad de la inmunoglobulina candidata para unirse a su antígeno. De esta manera, los residuos de FR se pueden seleccionar y combinar a partir de las secuencias receptoras y de importación para conseguir la característica deseada del anticuerpo, tal como una mayor afinidad para el antígeno (s) objetivo, se consigue. En general, los residuos de la región hipervariable están directamente y más considerablemente implicados en influenciar la unión al antígeno.
Como se ha señalado anteriormente, los anticuerpos (o inmunoglobulinas) se pueden dividir en cinco clases diferentes, basados en diferencias en las secuencias de aminoácidos de la región constante de las cadenas pesadas. Todas las inmurioglobulinas dentro de una clase determinada tienen regiones constantes de la cadena pesada muy similares. Estas diferencias pueden ser detectadas por los estudios de secuencia o más comúnmente por medios serológicos (es decir, mediante el uso de anticuerpos dirigidos a estas diferencias). Los anticuerpos, o fragmentos de los mismos, de la presente invención pueden ser de cualquier clase, y pueden, por lo tanto, tener un gamma, mu, alfa, delta, o épsilon de la cadena pesada. Una cadena gamma puede ser gamma 1, gamma 2, gamma 3, o gamma 4, y una cadena alfa puede ser alfa 1 o alfa 2.
En una modalidad preferida, un anticuerpo de la presente invención, o fragmento de la misma, es una IgG. IgG se considera la inmunoglobulina más versátil, ya que es capaz de llevar a cabo todas las funciones de moléculas de inmunoglobulina . La IgG es la principal de Ig en suero, y la única clase de Ig que atraviesa la placenta. IgG también fija el complemento, aunque la subclase IgG4 no lo hace. Los macrófagos, monocitos, PM y algunos linfocitos tienen receptores Fe para la región Fe de la IgG. No todas las subclases se unen igualmente bien,- IgG2 e IgG4 no se unen a los receptores Fe. Una consecuencia de la unión a los receptores Fe sobre el PMN, monocitos y macrófagos es que la celda ahora puede internalizar el antígeno mejor. IgG es una opsonina que mejora la fagocitosis. La unión de IgG a los receptores Fe sobre otros tipos de células da como resultado la activación de otras funciones. Los anticuerpos de la presente invención pueden ser de cualquier subclase de IgG.
En otra forma de modalidad preferida, un anticuerpo, o fragmento de la misma, de la presente invención es una igE. La IgE es el suero de Ig menos común ya que se une muy fuertemente a los receptores Fe sobre los basófilos y mastocitos incluso antes de interactuar con el antígeno. Como consecuencia de su unión a los basófilos un mastocitos, la IgE está implicada en las reacciones alérgicas. La unión del alérgeno a la IgE en las células da como resultado la liberación de diversos mediadores farmacológicos que resultan en síntomas alérgicos. IgE también juega un papel en las enfermedades parasitarias por helmintos . Los eosinófilos tienen receptores Fe para IgE y la unión de los eosinófilos a recubiertos de IgE helmintos resulta en muerte del parásito. IgE no se soluciona el complemento .
En diversas modalidades, los anticuerpos de la presente invención, y fragmentos de los mismos, comprenden una cadena ligera variable que es o bien kappa o l mbda. La cadena Lamba puede ser cualquiera de subtipo, incluyendo, por ejemplo, lambda 1, lambda 2, lambda 3, 4 y lambda.
Como se ha indicado anteriormente, la presente invención proporciona además fragmentos de anticuerpos que comprenden un polipéptido de la presente invención. En ciertas circunstancias, hay ventajas de usar fragmentos de anticuerpos, en lugar de anticuerpos completos. Por ejemplo, el tamaño más pequeño de los fragmentos permite un aclaramiento rápido, y puede conducir a un mejor acceso a ciertos tejidos, tales como tumores sólidos. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen: fragmentos Fab, Fab ' , F (ab ') 2 y fragmentos Fv; diacuerpos ; anticuerpos lineales; anticuerpos de cadena única, y anticuerpos multiespecificos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.
Varias técnicas han sido desarrolladas para la producción de fragmentos de anticuerpos. Tradicionalmente, estos fragmentos se derivaban mediante la digestión proteolítica de anticuerpos intactos (ver, por ejemplo, Morimoto et al, Manual de Métodos Bioquímicos y Biofísicos 24:107-117 (1992); Y Brennan y otros, Science, 229:81 (1985)). Sin embargo, estos fragmentos ahora pueden producirse directamente mediante células huésped recombinantes . Fragmentos de anticuerpos Fab, Fv y ScFv se pueden todos ser expresados en y secretados a partir de E. coli, permitiendo así la producción fácil de grandes cantidades de estos fragmentos. Fragmentos Fab'-SH se pueden recuperar directamente de E. coli y acoplarse químicamente para formar fragmentos F (ab ' ) 2 fragmentos (Cárter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). De acuerdo con otro enfoque, F (ab ' ) 2 fragmentos se pueden aislar directamente del cultivo de célula huésped recombinante . Fab y F (ab ') 2 fragmento con un aumento en la vida media in vivo que comprende un receptor de rescate vinculante ep topo residuos se describen en la Patente de E.U. No. 5.869.046. Otras técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos serán evidentes para el técnico en la materia.
En otras modalidades, el anticuerpo de elección es un fragmento Fv de cadena (scFv) . Véase el documento WO 93/16185; Patente de E.U. Nos. 5,571,894, y 5,587,458. Fv y sFv son las únicas especies con sitios de combinación intactos que están desprovistos de regiones constantes. Por lo tanto, son adecuados para la unión no específica reducida durante el uso in vivo, proteínas de fusión sFv pueden construirse para producir la fusión de una proteína efectora en el extremo amino o el extremo carboxi de un sFv. Ver Ingeniería del Anticuerpo, ed. Borrebaeck, supra. El fragmento de anticuerpo también puede ser un " anticuerpo lineal ", por ejemplo, como se describe en la Patente de E.U. No. 5,641,870, por ejemplo. Dichos fragmentos de anticuerpos lineales pueden ser monoespecífieos o biespecífieos .
En ciertas modalidades, los anticuerpos de la presente invención son biespec fica o multiespecifica . Los anticuerpos biespecificos . son anticuerpos que tienen especificidades de unión para al menos dos epítopos diferentes. Anticuerpos biespecificos ejemplares pueden unirse a dos epítopos diferentes de un solo antígeno. Otros de tales anticuerpos pueden combinar un primer sitio de unión del antígeno con un sitio de unión para un segundo antígeno. Alternativamente, un brazo anti-M2e puede combinarse con un brazo que se une a una molécula desencadenante en un leucocito, tal como una molécula receptor de células T (por ejemplo, CD3 ) , o receptores Fe para IgG (Fe ? R) , tales como Fe ? RI (CD64), Fe ? RII (CD32) y Fe ? RUI (CD16), con el fin de enfocar y localizar los mecanismos de defensa celular en la célula infectada. Los anticuerpos biespecificos también se pueden utilizar para localizar agentes citotóxicos para las células infectadas. Estos anticuerpos poseen un brazo M2e vinculante y un brazo que se une al agente citotóxico (por ejemplo, saporina, anti-interferón-a, alcaloides de la vinca, la cadena de ricina, metotrexato o hapteno de isótopo radiactivo) . Los anticuerpos biespecificos pueden prepararse como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, F (ab ' ) 2 de anticuerpos biespecificos) . El documento WO 96/16673 describe un anticuerpo biespecifico anti-ErbB2 /anti-Fc ? RUI y la Patente de E.U. No. 5,837,234 describe un anticuerpo biespecífico anti-ErbB2/anti-Fc ? RI . Un anticuerpo biespecífico anti-ErbB2/Fc a se muestra en WO98/02463. La Patente de E.U.. No. 5.821.337 enseña un anticuerpo biespecífico anti-ErbB2 /anti-CD3.
Los métodos para hacer anticuerpos biespecí fieos son conocidos en la técnica. La producción tradicional de anticuerpos biespecí fieos de longitud completa se basa en la co-expresión de dos pares de cadena pesada de la luz cadena de inmunoglobulina, donde las dos cadenas tienen especificidades diferentes (Millstein et al., Nature, 305:537-539 (1983)) . Debido a la variedad aleatoria de inmunoglobulina cadenas pesadas y ligeras, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de diez moléculas de anticuerpo diferentes, de las cuales sólo una tiene la estructura biespecí fica correcta. La purificación de la molécula correcta, que se realiza habitualmente mediante etapas de cromatografía de afinidad, es bastante engorrosa, y los rendimientos de producto son bajos. Procedimientos similares se describen en el documento WO 93/08829, y en Traunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991) .
De acuerdo con un enfoque diferente, los dominios variables de anticuerpos con las especificidades de unión deseadas (combinación anticuerpo-antígeno sitios) se fusionan a secuencias de dominio constante de inmunoglobulina. Preferiblemente, la fusión es con un dominio constante de cadena pesada de Ig, que comprende al menos parte de las regiones bisagra, CH2 , y CH3. Se prefiere tener la primera región constante de cadena pesada (CH1) que contiene el sitio necesario para la unión de la cadena ligera, presente en al menos una de las fusiones. Los ADN que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y, si se desea, la cadena ligera de inmunoglobulina, se insertan en vectores de expresión separados, y son co-transfectados en una célula huésped adecuada. Esto proporciona una mayor flexibilidad en el ajuste de las proporciones mutuas de los tres fragmentos de polipéptido en modalidades cuando las proporciones desiguales de las tres cadenas de polipéptido utilizadas en la construcción proporcionan el rendimiento óptimo del anticuerpo biespecífico deseado. Es, sin embargo, posible insertar las secuencias codificantes para dos o las tres cadenas polipeptídicas en un solo vector de expresión cuando la expresión de al menos dos cadenas polipeptídicas en proporciones iguales da lugar a rendimientos elevados o cuando las proporciones no tienen ningún efecto significativo en el rendimiento de la combinación de cadena deseada .
En una forma de modalidad preferida de esta aproximación, los anticuerpos biespecífieos están compuestos de una cadena pesada de inmunoglobulina híbrida con una primera especificidad de unión en un brazo, y un par pesada de inmunoglobulina híbrida de la cadena ligera de la cadena (que proporciona una segunda especificidad de unión) en el otro brazo. Se encontró que esta estructura asimétrica facilita la separación del compuesto biespecífico deseado de combinaciones de cadenas de inmunoglobulina no deseadas, como la presencia de una cadena ligera de inmunoglobulina en sólo una mitad de la molécula biespecífica proporciona una manera fácil de separación. Esta aproximación se describe en el documento WO 94/04690. Para más detalles sobre la generación de anticuerpos biespecífieos ver, por ejemplo, Suresh et al., Métodos en Enzimología, 121:210 (1986).
Según otro enfoque descrito en la Patente de E.U.
No. 5.731.168, la interfaz entre un par de moléculas de anticuerpo puede diseñarse para maximizar el porcentaje de heterodímeros que se recuperan del cultivo de células recombinantes . La interfaz preferida comprende al menos una parte del dominio CH3. En este método, una o más cadenas laterales pequeñas de aminoácidos de la interfase de la primera molécula de anticuerpo se sustituyen por cadenas laterales más grandes (por ejemplo, tirosina o triptófano) . "Cavidades " compensatorias de tamaño idéntico o similar a la cadena lateral grande (s) se crean en la interfaz de la segunda molécula de anticuerpo mediante la sustitución de cadenas laterales grandes de aminoácidos con otras más pequeñas (por ejemplo, alanina o treonina) . Esto proporciona un mecanismo para aumentar el rendimiento del heterod mero sobre otros productos finales no deseados, tales como homod meros .
Los anticuerpos biespecífieos incluyen anticuerpos "heteroconjugados " reticulados o. Por ejemplo, uno de los anticuerpos en el heteroconjugado puede acoplarse a avidina, el otro a biotina. Han, por ejemplo, han propuesto Tales anticuerpos para dirigir células del sistema inmune a células no deseadas (patente de E.U. n. No. 4.676.980), y para el tratamiento de la infección por VIH (WO 91/00360, WO 92/200373, y EP 03089). Los anticuerpos heteroconjugados se pueden fabricar utilizando cualquier método de reticulación conveniente. Agentes de reticulación adecuados son bien conocidos en la técnica, y se describen en la Patente de E.U. No. 4.676.980, junto con un número de técnicas de reticulación.
Las técnicas para generar anticuerpos biespecífieos a partir de fragmentos de anticuerpos también se han descrito en la literatura. Por ejemplo, los anticuerpos biespecífieos se pueden preparar utilizando uniones químicas.. Brennan y otros, Science, 229: 81 (1985) describen un procedimiento en el que anticuerpos intactos se cortan proteolíticamente para generar fragmentos F (ab ') 2 fragmentos. Estos fragmentos se reducen en presencia del agente complejante de ditiol, arsenito sódico, para estabilizar los ditioles vecinales y evitar la formación de disulfuro intermolecular. Los fragmentos Fab ' generados se convierten en derivados de tionitrobenzoato (TNB) . Uno de los derivados Fa ' -TNB se reconvierte a continuación en Fab'-tiol mediante reducción con mercaptoetilamina y se mezcla con una cantidad equimolar del otro derivado Fab ' -TNB para formar el anticuerpo biespecífico . Los anticuerpos biespecíficos producidos pueden utilizarse como agentes para la inmovilización selectiva de enzimas.
El progreso reciente ha facilitado la recuperación directa de fragmentos Fab'-SH a partir de E. coli, que pueden acoplarse químicamente para formar anticuerpos biespecíficos . Shalaby et al., J. Exp.. Med., 175:. 217-225 (1992) describen la producción de un anticuerpo biespecífico completamente humanizado F (ab ' ) 2 molécula. Cada fragmento Fab 'se secretó por separado de E. coli y se sometió a un acoplamiento químico dirigido in vitro para formar el anticuerpo biespecífico . El anticuerpo biespecífico así formado fue capaz de unirse a células que sobreexpresaban el receptor ErbB2 y células T humanas normales, así como desencadenar la actividad lítica de los linfocitos citotóxicos humanos contra dianas de tumores de mama humanos .
También se han descrito diversas técnicas para preparar y aislar fragmentos de anticuerpos biespecífieos directamente de cultivos de células recombinantes . Por ejemplo, los anticuerpos biespecífieos se han producido utilizando cremalleras de leucina. Kostelny et al., J. Immunol., 148 (5): 1547-1553 (19'92). Los péptidos cremallera de leucina de las proteínas Fos y Jun se unieron a las porciones Fab 'de dos anticuerpos diferentes mediante fusión génica. Los homodímeros de anticuerpo se redujeron en la región bisagra para formar monómeros y después re-oxidaron para formar los heterodímeros de anticuerpo. Este método también puede ser utilizado para la producción de homodímeros de anticuerpo. La tecnología del "diacuerpo " descrita por Hollinger et al., Proc . Nati. Acad. Ciencia. E.U., 90:6444-6448 (1993) ha proporcionado un mecanismo alternativo para fabricar fragmentos de anticuerpos biespecíficos . Los fragmentos comprenden un VH conectado a un VL mediante un enlazador que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena. Por consiguiente, los dominios VH y VL de un fragmento se fuerzan a emparejarse con los dominios complementarios VL y VH de otro fragmento, formando de ese modo dos sitios de unión a antígeno. También se ha descrito otra estrategia para fabricar fragmentos de anticuerpos biespecífieos mediante el uso de una sola cadena Fv (sFv) dímeros. Ver Gruber et al., J. Immunol . , 152:5368 (1994).
Los anticuerpos con más de dos valencias se contemplan. Por ejemplo, anticuerpos triespec ficos se pueden preparar. Tutt et al., J. Immunol.. 147: 60 (1991). Un anticuerpo multivalente puede ser internalizado (y/o catabolizado) más rápido que un anticuerpo bivalente por una célula que expresa un antígeno al que los anticuerpos se unen. Los anticuerpos de la presente invención pueden ser anticuerpos multivalentes con tres o más sitios de antígeno (por ejemplo, anticuerpos tetravalentes) , que se pueden producir fácilmente mediante expresión recombinante de ácido nucleico que codifica las cadenas polipeptídicas de la unión del anticuerpo. El anticuerpo multivalente puede comprender un dominio de dimerización y tres o más sitios de unión a antígeno. El dominio de dimerización preferido comprende (o consiste en) una región Fe o una región bisagra. En este escenario, el anticuerpo comprenderá una región Fe y tres o más sitios de unión a antígeno amino-terminal a la región Fe. El establecimiento cuenta preferidos multivalentes de anticuerpos de este documento (o consiste en) tres .a eso de las ocho, pero preferiblemente cuatro, sitios de unión al antígeno. El anticuerpo multivalente comprende al menos una cadena polipeptídica (y preferiblemente dos cadenas polipeptídicas ) , donde la cadena (s) de polipéptido comprenden dos o más dominios variables. Por ejemplo, la cadena (s) de polipéptido puede comprender VDl-(Xl) n-VD2-(X2) n-Fc, donde VDl es un primer dominio variable, VD2 es un segundo dominio variable, Fe es una cadena polipeptídica de un Fe región, XI y X2 representan un aminoácido o polipéptido, y n es 0 o 1. Por ejemplo, la cadena (s) de polipéptido puede comprender: VH-CHl-cadena de región enlazadora flexible de-VH-CHl-Fc , o VH-CHl-VH-CHl-cadena de región Fe. El anticuerpo multivalente la presente invención comprende preferiblemente además al menos dos (y preferiblemente cuatro) polipéptidos del dominio variable de cadena ligera. El anticuerpo multivalente en el presente documento puede, por ejemplo, comprender de aproximadamente dos a aproximadamente ocho polipéptidos del dominio variable de cadena ligera. Los polipéptidos del dominio variable de cadena ligera contemplados en el presente comprenden un dominio variable de cadena ligera y, opcionalmente, comprenden además un dominio CL.
Los anticuerpos de la presente invención incluyen además anticuerpos de cadena sencilla.
En modalidades particulares, los anticuerpos de la presente invención son anticuerpos de internalización.
La modificación de la secuencia de aminoácidos (s) de los anticuerpos descritos en el presente documento se contemplan. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/o otras propiedades biológicas del anticuerpo. Variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo se pueden preparar mediante la introducción de cambios de nucleotidos apropiados en un polinucleotido que codifica el anticuerpo, o una cadena del mismo, o mediante síntesis de péptidos . Tales modificaciones incluyen, por ejemplo, deleciones de, y/o inserciones en y/o sustituciones de, residuos dentro de las secuencias de aminoácidos del anticuerpo. Cualquier combinación de deleción, inserción y sustitución puede hacerse para llegar a la final de anticuerpo, siempre que la construcción final posea las características deseadas. Los cambios de aminoácidos también pueden alterar los procesos post-traduccionales del anticuerpo, tales como cambiar el número o posición de los sitios de glicosilación. Cualquiera de las variaciones y modificaciones descritas anteriormente para los polipéptidos de la presente invención pueden ser incluidos en los anticuerpos de la presente invención.
Un método útil para la identificación de ciertos residuos o regiones de un anticuerpo que son ubicaciones preferidas para la mutagénesis se denomina " mutagénesis de barrido de alanina " , como se describe por Cunningham y Wells en Science, 244:1081-1085 (1989). En el presente, un residuo o grupo de residuos objeto se identifican (por ejemplo, residuos tales como Arg, Asp, His, Lys, y Glu cargado) y se sustituye por un aminoácido neutro o cargado negativamente (más preferiblemente alanina o polialanina) para afectar la interacción de los aminoácidos con el antígeno de PSCA. Esas ubicaciones de aminoácidos que demuestran sensibilidad funcional a las sustituciones entonces se refinan introduciendo más u otras variantes en, o para, los sitios de sustitución. Por lo tanto, mientras que el sitio para introducir una variación de la secuencia de aminoácidos está predeterminado, la naturaleza de la mutación per se no necesita estar predeterminada. Por ejemplo, para analizar el rendimiento de una mutación en un sitio dado, el escaneo de ala o mutagénesis aleatoria se realiza en el codón o región objeto y las variantes anti-anticuerpos expresadas se criban para la actividad deseada.
La Secuencia de aminoácidos inserciones incluyen amino-y/o fusiones carboxilo terminal que varían en longitud desde un residuo hasta polipéptidos que contienen un centenar o más residuos, así como inserciones intrasecuencia de residuos de aminoácidos individuales o múltiples. Ejemplos de inserciones terminales incluyen un anticuerpo con un residuo metionilo N-terminal o el anticuerpo fusionado a un polipéptido citotóxico. Otras variantes de inserción de un anticuerpo incluyen la fusión al extremo N-o C- erminal del anticuerpo a una enzima (por ejemplo, para ADEPT) o un polipeptido que aumenta la vida media en suero del anticuerpo.
Otro tipo de variante es una variante de sustitución de aminoácidos. Estas variantes tienen al menos un residuo de aminoácido en la molécula de anticuerpo reemplazado por un residuo diferente. Los sitios de mayor interés para la mutagéñesis de sustitución incluyen las regiones hipervariables , pero las alteraciones FR también se contemplan. Las sustituciones conservativas y no conservativas se contemplan.
Las modificaciones considerablees en las propiedades biológicas del anticuerpo se realizan seleccionando sustituciones que difieran significativamente en su efecto sobre el mantenimiento (a) la estructura del esqueleto del polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo, como una conformación en lámina o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objeto, o (c) el- grueso de la cadena lateral.
Cualquier residuo de cisteína no implicado en el mantenimiento de la conformación adecuada del anticuerpo también puede sustituirse, generalmente con serina, para mejorar la estabilidad oxidativa de la molécula y evitar la reticulación aberrante. Por el contrario, enlace (s) de cisteina puede añadirse al anticuerpo para mejorar su estabilidad (particularmente cuando el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fv) .
Un tipo de variante por sustitución implica la sustitución de uno o más residuos de la región hipervariable de un anticuerpo parental . Generalmente, la variante (s) resultantes seleccionadas para un mayor desarrollo se han mejorado las propiedades biológicas relativas al anticuerpo parental del cual se generan. Una manera conveniente para generar tales variantes por sustitución implica la maduración por afinidad utilizando la presentación en fagos. Brevemente, varios sitios de la región hipervariable (por ejemplo, 6-7 sitios) se mutan para generar todas las posibles sustituciones amino en cada sitio. Las variantes de anticuerpos así generadas se muestran de una manera monovalente a partir de partículas de fagos filamentosos como fusiones con el producto del gen III de M13 empaquetado dentro de cada partícula. Las variantes de fagos se criban por su actividad biológica (por ejemplo, afinidad de unión) como se describe en el presente. Con el fin de identificar los sitios candidatos de la región hipervariable para la modificación, la mutagénesis de barrido de alanina se puede realizar para identificar residuos de la región hipervariable que contribuyen significativamente a la unión al antígeno. Alternativamente, o adicionalmente , puede ser beneficioso analizar una estructura cristalina del complejo antígeno- anticuerpo para identificar puntos de contacto entre el anticuerpo y un antígeno o célula infectada. Tales residuos de contacto y residuos vecinos son candidatos para la sustitución según las técnicas elaboradas en el presente documento. Una vez se generan dichas variantes, el panel de variantes se somete a cribado tal como se describe en el presente documento y los anticuerpos con propiedades superiores en uno o más ensayos relevantes se puede seleccionar para un mayor desarrollo.
Otro tipo de variante de aminoácido del anticuerpo altera el patrón de glicosilación original del anticuerpo. Por alteración se entiende la deleción de uno o más restos de carbohidratos que se encuentran en el anticuerpo, y/o añadir uno o más sitios de glicosilación que no están presentes en el anticuerpo.
La glicosilación de anticuerpos es típicamente N-o ligada-O. Ligada a N se refiere a la unión del resto carbohidrato a la cadena lateral de un residuo asparagina . La secuencias de tripéptido asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde x es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática del grupo carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Por lo tanto, la presencia de cualquiera de estas secuencias de tripéptidos en un polipéptido crea un sitio de glicosilación potencial.
Glicosilación unida a O se refiere a la unión de uno de los azúcares N-acetilgalactosamina, galactosa, o xilosa a un ácido hidroxiamino, más comúnmente serina o treonina, aunque 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina también pueden ser utilizados.
La adición de sitios de glicosilación al anticuerpo se consigue convenientemente alterando la secuencia de aminoácidos de forma que contenga una o más de las secuencias de tripéptidos descritas anteriormente (para sitios de glicosilación unidos a N) . La alteración también puede hacerse mediante la adición de, o sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia del anticuerpo original (para sitios de glicosilación unidos a 0) .
El anticuerpo de la invención se modifica con respecto a la función efectora, por ejemplo, a fin de aumentar la citotoxicidad mediada por células dependiente de antígeno (ADCC) y/o citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) del anticuerpo. Esto se puede lograr mediante la introducción de una o más sustituciones de aminoácidos en una región Fe del anticuerpo. Alternativamente o adicionalmente, residuo (s) cisteina se puede introducir en la región Fe, permitiendo de ese modo la formación de enlaces disulfuro entre cadenas en esta región. El anticuerpo homodimérico así generado puede tener una capacidad de internalizacion mejorada y/o aumento de la mediada por el complemento de matar células y la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) . Ver Carón et al., J. Exp. Med. 176:1191-1195 (1992) y Shopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992). Los anticuerpos homodiméricos con actividad anti-infección también se pueden preparar utilizando reticuladores heterobifuncionales tal como se describe en Wolff et al., El Cáncer Research 53:2560-2565 (1993). Alternativamente, un anticuerpo se puede diseñar que tenga regiones Fe duales y de ese modo puede haber mejorado la lisis de complemento y las capacidades de ADCC. Ver Stevenson et al., Diseño del Fármaco de Anti-Cáncer 3:219-230 (1989).
Para aumentar la vida media en suero del anticuerpo, uno puede incorporar un epítopo de unión al receptor salvaje en el anticuerpo (especialmente un fragmento de anticuerpo) como se describe en la Patente de E.U. No. 5.739.277, por ejemplo. Como se usa en el presente, el término " epítopo de unión al receptor salvaje " se refiere a un epítopo de la región Fe de una molécula de IgG (por ejemplo, IgGl, IgG2 , IgG3 , o IgG4) que es responsable de aumentar el suero in vivo de la vida media de la molécula de IgG.
Los anticuerpos de la presente invención también se pueden modificar para incluir una etiqueta de epítopo o la etiqueta, por ejemplo, para su uso en la purificación o aplicaciones de diagnóstico. La invención también se refiere a la terapia con inmunoconjugados que comprenden un anticuerpo conjugado a un agente anti-cáncer, tal como un agente citotóxico o un agente inhibidor del crecimiento. Los agentes quimioterapéuticos útiles en la generación de dichos inmunoconjugados se han descrito anteriormente.
Los conjugados de un anticuerpo y una o más toxinas de molécula pequeña, tales como una caliqueamicina, maitansinoides , un tricoteno, y CC1065, y los derivados de estas toxinas que tienen actividad de la toxina, también se contemplan en el presente documento.
En una forma de modalidad preferida, un anticuerpo (longitud completa o fragmentos) de la invención se conjuga con una o más moléculas de maitansinoide . Los maitansinoides son inhibidores mitotóticos que actúan inhibiendo la polimerización de tubulina. Maitansina se aisló por primera desde el este de África Maytenus serrata arbusto (Patente E.U. No. 3.896.111). Posteriormente, se descubrió que ciertos microbios también producen maitansinoides, tales como maitansinol y ésteres C-3 de maitansinol (. Patente de E.U. No. 4.151.042). Maitansinol y derivados y análogos sintéticos de los mismos se describen, por ejemplo, en la Patente de E.U. Nos. 4.137.230; 4.248.870; 4.256.746; 4.260.608; 4.265.814; 4.294.757; 4.307.016; 4.308.268; 4.308.269; 4.309.428; 4.313.946; 4.315.929; 4.317.821; 4.322.348; 4.331.598; 4.361.650; 4.364.866; 4.424.219; 4.450.254; 4.362.663; y 4.371.533.
En un intento por mejorar su índice terapéutico, la maitansina y los maitansinoides se han conjugado a anticuerpos que se unen específicamente a antígenos de células tumorales. Los inmunoconjugados que contienen maitansinoides y su uso terapéutico se describen, por ejemplo, en la Patente de E.U. Nos. 5,208,020, 5,416,064 y la Patente Europea EP 0 425 235 Bl . Liu et al., Proc. Nati. Acad. Ciencia. E.U. 93:8618-8623 (1996) describe inmunocon ugados que comprenden un maitansinoide DM1 designado ligado al anticuerpo monoclonal C242 dirigido contra el cáncer colorrectal humano. El conjugado se encontró que era altamente citotoxico hacia las células del cáncer de colon cultivadas, y mostró actividad antitumoral en un ensayo in vivo en el crecimiento tumoral .
Los conjugados anticuerpo-maitansinoide se preparan mediante la unión química de un anticuerpo a una molécula maitansinoide sin disminuir significativamente la actividad biológica de ya sea el anticuerpo o la molécula maitansinoide. Un promedio de 3-4 moléculas de maitansinoide conjugadas por molécula de anticuerpo ha demostrado eficacia en mejorar la citotoxicidad de las células objeto sin afectar negativamente a la función o solubilidad del anticuerpo, aunque se esperaría que incluso una molécula de toxina/anticuerpo para mejorar la citotoxicidad sobre el uso de anticuerpo desnudo. Los maitansinoides son bien conocidos en la técnica y pueden ser sintetizados mediante técnicas conocidas o aislarse de fuentes naturales. Maitansinoides adecuados se describen, por ejemplo, en la Patente de E.U.. No. 5.208.020 y en las otras patentes y publicaciones que no son patentes mencionadas anteriormente. Maitansinoides preferidos son maitansinol y análogos de maitansinol modificados en el anillo aromático o en otras posiciones de la molécula de maitansinol, tales como diversos ésteres de maitansinol.
Hay muchos grupos de unión conocidos en la técnica para fabricar conjugados de anticuerpos, incluyendo, por ejemplo, los descritos en la Patente de E.U. No. 5.208.020 o la patente EP 0 425 235 Bl, y Chari et al, C ncer Research 52: 127-131 (1992) . Los grupos de enlace incluyen grupos disufide, grupos tioéter, grupos lábiles ácidos, grupos fotolábiles, grupos lábiles de peptidasa o grupos lábiles de esterasa, tal como se describen en las patentes anteriormente identificadas, grupos disulfuro y tioéter siendo preferidos.
Los inmunocon ugados se puede hacer usando una variedad de agentes de acoplamiento de proteínas bifuncionales tales como N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP) , succinimidil-4- (N-maleimidometil ) ciclohexano-l-carboxilato , iminotiolano (IT) , derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como dimetil adipimidato HCl), esteres activos (tales como suberato de disuccinimidilo) , aldehidos (tales como glutaraldehído) , compuestos bis-azido (tales como bis (p-azidobenzoil ) hexanodiamina) , bis-diazonio derivados (tales como bis- (p-diazoniobenzoil ) -etilendiamina) , diisocianatos (tales como tolueno 2 , 6-diisocianato) , y compuestos de flúor bis-activos (tales como 1 , 5-difluoro-2 , 4-dinitrobenceno) . Agentes de acoplamiento particularmente preferidos incluyen N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP) (Carlsson et al., Biochem. J. 173:723-737 [ 1978 ] ) y N-succinimidil-4- (2-piridiltio) pentanoato (SPP) para establecer un enlace disulfuro. Por ejemplo, una inmunotoxina de ricina se puede preparar como se describe en Vitetta y otros, Science 238:. 1098 (1987). Marcado con carbono-14 de ácido triaminopentaacético 1-isotiocianatobencil-3-metildietilen (MX-DTPA) es un ejemplo de agente quelante para la conjugación de radionucleótidos al anticuerpo. Ver el documento WO94/11026. El enlazador puede ser un " enlazador escindible " que facilita la liberación del fármaco citotóxico en la célula. Por ejemplo, un enlazador lábil en medio ácido, Cáncer Research 52: 127-131 (1992); Patente de E.U. No. 5.208.020) se puede utilizar .
Otro inmunoconjugado de interés comprende un anticuerpo conjugado a una o más moléculas de caliqueamicina . La familia de antibióticos de caliqueamicina es capaz de producir roturas de doble cadena de ADN a concentraciones sub-picomolares . Para la preparación de conjugados de la familia caliqueamicina, véase la patente de E.U.. Nos. 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001, 5877296 (todos a American Cyanamid Company) . Otro fármaco que el anticuerpo se puede conjugar es QFA que es un antifolato. Tanto calicheamicin y QFA tienen sitios intracelulares de acción y no cruzan fácilmente la membrana plasmática. Por lo tanto, la captación celular de estos agentes a través de internalización mediada por anticuerpos mejora enormemente sus efectos citotóxicos.
Los ejemplos de otros agentes que se pueden conjugar a los anticuerpos de la invención incluyen BCNU, streptozoicin, vincristina y 5-fluorouracilo , la familia de agentes conocidos colectivamente complejo LL-E33288 descrita en la Patente de E.U. Nos. 5,053,394, 5,770,710, así como esperamicinas (patente de E.U. n. No. 5.877.296).
Las toxinas enzimáticamente activas y fragmentos de las mismas que pueden usarse incluyen, por ejemplo, cadena A de difteria, fragmentos activos no enlazantes de la toxina de la difteria, cadena A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosas) , cadena A de ricina, abrina, cadena A de modeccina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas diantina, proteínas de fitolaca americana (PAPI, PAPII, y PAP-S) , inhibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inhibidor de Saponaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina y los tricotecenos . Véase, por ejemplo, el documento WO 93/21232.
La presente invención incluye además un inmunoconjugado formado entre un anticuerpo y un compuesto con actividad nucleolí ica (por ejemplo, una ribonucleasa o una endonucleasa de ADN tal como una desoxirribonucleasa; DNasa) .
Para la destrucción selectiva de las células infectadas, el anticuerpo incluye un átomo altamente radioactivo. Una variedad de isótopos radioactivos disponibles para la producción de anticuerpos anti-PSCA radiocon ugados . Los ejemplos incluyen At211, 1131, 1125, Y90, Rel86, Rcl88, Sml53, BÍ212, P32, Pb212 y los isótopos radiactivos de Lu. Cuando se utiliza el conjugado para el diagnóstico, puede comprender un átomo radioactivo para estudios gammagráficos , por ejemplo Tc99m o 1123, o un marcador de espín para la resonancia magnética nuclear (RMN) (también conocida como imágenes de resonancia magnética, mri), tal como yodo-123, yodo-131, indio-111, flúor-19, carbono-13, nitrógeno-15 , oxígeno-17, gadolinio, manganeso o hierro.
Se incorpora la radio . u otra etiqueta en el conjugado de formas conocidas. Por ejemplo, el péptido puede ser biosintetizado o puede sintetizarse mediante síntesis química de aminoácidos utilizando precursores de aminoácidos adecuados que implican, por ejemplo, flúor-19 en lugar de hidrógeno. Las etiquetas como Tc99m o 1123, Rel86, RE188 y Inlll se pueden unir mediante un residuo de cisteína en el péptido. El itrio-90 se puede unir mediante un residuo de lisina. El método IODOGEN (Fraker et al (1978) Biochem Biophys Res Commun 80:. 49-57 se puede utilizar para incorporar yodo-123 " Anticuerpos monoclonales en inmunogammagrafía " (Chatal, CRC Press 1989) describe otros métodos en detalle.
Alternativamente, se hizo una proteína de fusión que comprende el anticuerpo y el agente citotóxico, por ejemplo, mediante técnicas recombinantes o síntesis de péptidos. La longitud del ADN puede comprender regiones respectivas que codifican las dos porciones del conjugado ya sea adyacentes entre sí o separadas por una región que codifica un péptido enlazador que no destruye las propiedades deseadas del conjugado.
Los anticuerpos de la presente invención también se utilizan en enzima dependiente de anticuerpo mediada por la terapia de profármaco (ADET) mediante la conjugación del anticuerpo a una enzima activadora del profármaco que convierte un profármaco (por ejemplo, un agente quimioterapéutico peptidilo, ver WO81/01145) a un fármaco activo contra el cáncer (véase, por ejemplo, el documento WO 88/07378 y Pat . de E.U. No. 4.975.278).
El componente enzimático del inmunoconjugado útil para ADEPT incluye cualquier enzima capaz de actuar sobre un profármaco de tal forma que lo convierta en su forma citotóxica más activa. Las enzimas que son útiles en el método de esta invención incluyen, pero no se limitan a, fosfatasa alcalina útil para convertir profármacos que contienen fosfato en fármacos libres; arilsulfatasa útil para convertir profármacos que contienen sulfato en fármacos libres; citosina desaminasa útil para convertir no-tóxico 5-fluorocitosina en el fármaco contra el cáncer, 5-fluorouracilo; proteasas, tales como la proteasa de Serratia, termolisina, subtilisina, carboxipeptidasas y catepsinas (tales como catepsinas B y L) , que son útiles para convertir profármacos que contienen péptidos en fármacos libres; D-alanilcarboxipeptidasas , útiles para convertir profármacos que contienen sustituyentes de D-aminoácidos; enzimas que cortan carbohidratos, tales como ß-galactosidasa y neuraminidasa útiles para convertir profármacos glicosilados en fármacos libres; ß-lactamasa útil para convertir fármacos derivatizados con ß-lactámicos en fármacos libres; y penicilina amidasas, tales como penicilina V amidasa o penicilina G amidasa, útiles para convertir fármacos derivatizados en sus nitrógenos de amina con grupos fenoxiacetilo o fenilacetilo , respectivamente, en fármacos libres. Alternativamente, los anticuerpos con actividad enzimática, también conocidos en la técnica como " abzimas " , pueden utilizarse para convertir los profármacos de la invención en fármacos activos libres (véase, por ejemplo, Massey, Nature 328: 457-458 (1987)'). Los conjugados anticuerpo-abzima se pueden preparar tal como se describe en el presente para la liberación de la abzima a una población de células infectadas .
Las enzimas de esta invención pueden unirse covalentemente a los anticuerpos mediante técnicas bien conocidas en la técnica tales como el uso de los reactivos de reticulación heterobifuncionales discutidos anteriormente. Alternativamente, las proteínas de fusión que comprenden al menos la región de unión a antígeno de un anticuerpo de la invención unida a al menos una porción funcionalmente activa de una enzima de la invención puede construirse utilizando técnicas de ADN recombinante bien conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Neuberger et. al, Nature, 312: 604-608 (1984).
Otras modificaciones del anticuerpo se contemplan en el presente. Por ejemplo, el anticuerpo puede estar vinculada a uno de una variedad de polímeros no proteicos, por ejemplo, polietilenglicol , polipropilenglicol , polioxialquilenos , o copolímeros de polietilenglicol y polipropilenglicol. El anticuerpo se puede inmovilizar también en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial (por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y poli- (metacrilato de metilo) microcápsulas, respectivamente), en sistemas de liberación de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nano-partículas y nanocápsulas ) , o en macroemulsiones . Tales técnicas se describen en Pharmaceutical Sciences de Remington, 16 2 edición, Oslo, A., ed. , (1980).
Los anticuerpos descritos en el presente también se formulan como inmunoliposomas . Un " liposoma " es una vesícula pequeña compuesta de diversos tipos de lípidos, fosfolípidos y/o tensoactivo que es útil para la administración de un fármaco a un mamífero. Los componentes del liposoma se disponen comúnmente en una formación de bicapa, similar a la disposición de los lípidos de las membranas biológicas. Los liposomas que contienen el anticuerpo se preparan mediante métodos conocidos en la técnica, tales como los descritos en Epstein et al., Proc. Nati. Acad. Ciencia. E.U., 82:3688 (1985);. Hwang y otros, Proc. Nati Acad. Ciencia. E.U., 77:4030 (1980); Patente de E.U.. Nos. 4.485.045 y 4.544.545, y W097/38731 publicado 23 de octubre 1997. Los liposomas con tiempo de circulación mejorado se describen en la Patente de E.U.. No. 5.013.556.
Las liposomas particularmente útiles pueden ser generados por el método de evaporación de fase inversa con una composición lipídica que comprende fosfatidilcolina, colesterol y fosfatidiletanolamina derivada de PEG (PEG-PE) . Los liposomas se extruyen a través de filtros de tamaño de poro definido para producir liposomas con el deseado diámetro. Los fragmentos Fab 'del anticuerpo de la presente invención pueden conjugarse con los liposomas tal como se describe en Martin et al . , J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982) a través de una reacción de intercambio de disulfuro. Un agente quimioterapéutico está opcionalmente contenido dentro del liposoma. Ver Gabizon et al., J. Inst. Nacional del Cáncer. 81 (19) 1484 (1989).
Los anticuerpos de la presente invención, o fragmentos de los mismos, pueden poseer cualquiera de una variedad de características biológicas o funcionales. En ciertas modalidades, estos anticuerpos son anticuerpos específicos de la influenza A o proteína M2 , lo que indica que se unen específicamente a o se unen preferentemente a la influenza A o la proteína M2 del mismo, respectivamente, en comparación con una célula de control normal . En modalidades particulares, los anticuerpos son anticuerpos HuM2e, lo que indica que se unen específicamente a una proteína M2e, preferiblemente a un epítopo del dominio M2e que sólo está presente cuando la proteína M2 se expresa en las células o presentes en un virus, en comparación con una de células de control normal .
En modalidades particulares, un anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo antagonista, que bloquea parcial o totalmente o inhibe una actividad biológica de un polipéptido o una célula a la que se une específicamente o preferencialmente . En otras modalidades, un anticuerpo de la presente invención es un anticuerpo inhibidor del crecimiento, que bloquea parcial o totalmente o inhibe el crecimiento de una célula infectada a la que se une. En otra forma de modalidad, un anticuerpo de la presente invención induce la apoptosis. En aún otra modalidad, un anticuerpo de la presente invención induce o promueve la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos o citotoxicidad dependiente de complemento. Los métodos para identificar y producir anticuerpos específicos para el virus de la influenza.
La presente invención proporciona nuevos métodos para la identificación de anticuerpos anti-influenza humanos producidos contra la proteína M2e, como se ejemplifica en · el Ejemplo 4, y para la identificación de anticuerpos anti-influenza humanos producidos contra la proteína HA, como se ejemplifica en el Ejemplo 13. Estos métodos se pueden adaptar fácilmente para identificar anticuerpos específicos para otros polipéptidos expresados en la superficie celular por agentes infecciosos, o incluso polipéptidos expresados en la superficie de un mismo agente infeccioso.
En general, los métodos incluyen la obtención de muestras de suero de pacientes que han sido infectados con o vacunados contra un agente infeccioso. Estas muestras de suero se criban para identificar aquellos que contienen anticuerpos específicos para un polipéptido particular asociado con el agente infeccioso, tal como, por ejemplo, un polipéptido o proteína expresado específicamente en la superficie de células infectadas con el agente infeccioso, pero no las células no infectadas. En modalidades particulares, las muestras de suero se criban por contacto de las muestras con una célula que ha sido transfectada con un vector de expresión que expresa el polipéptido expresado en la superficie de las células infectadas.
Una vez que un paciente se identifica como tener el suero que contiene un anticuerpo específico para el polipéptido agente infeccioso de interés se identifica, las células mononucleares y/o B obtenidas del mismo paciente se utilizan para identificar una célula o clon de la misma que produce el anticuerpo, utilizando cualquiera de los métodos descritos en el presente o disponibles en la técnica. Una vez que una célula B que produce el anticuerpo se identifica, los ADNc que codifican las regiones variables o fragmentos de la misma del anticuerpo pueden clonarse usando vectores y cebadores específicos para secuencias de anticuerpos conservadas estándar de RT-PCR, y se subclonaron en los vectores de expresión usados para la producción recombinante de anticuerpos monoclonales específicos para el polipéptido agente infeccioso de interés .
En una modalidad, la presente invención proporciona un método de identificación de un anticuerpo que se une específicamente a las células de la influenza A-infectado, que comprende: poner en contacto un virus de la influenza A o una célula que expresa la proteína M2 con una muestra biológica obtenida de un paciente que tiene sido infectados por la influenza A; determinar una cantidad de anticuerpo en la muestra biológica que se une a la célula, y la comparación de la cantidad determinada con un valor de control, caracterizado porque si el valor determinado es al menos dos veces mayor que el valor de control, un anticuerpo que se une específicamente a las células de la influenza A-infectados se indica.
En diversas modalidades, las células que expresan una proteína M2 o HA son células infectadas con un virus de la influenza A o células que han sido transfectadas con un polinucleótido que expresa la proteína M2 o HA. Alternativamente, las células pueden expresar una porción de la proteína M2, que incluye el dominio M2e y lo suficientemente secuencia M2 adicional de que la proteína permanece asociado con la célula y el dominio M2e se presenta en la superficie celular de la misma manera como cuando está presente dentro de la longitud completa proteína M2. Métodos de preparación de un vector de expresión M2 o HA y la transfección de una célula apropiada, incluyendo los descritos en el presente documento, pueden llevarse a cabo fácilmente, en vista de estar a disposición del público las secuencias de M2 y de HA. Véase, por ejemplo, la base de datos de Influenza secuencia (DSI) (flu.lanl.gov en la World Wide Web, que se describe en Macken et al., 2001, "El valor de una base de datos en la vigilancia y la selección de la vacuna, en Opciones para el Control de de Influenza IV. ADME, Osterhaus y Hampson (Eds.), Elsevier Science, Amsterdam, pp 103-106) y el Centro de Secuenciación microbiana (MSC) en el Instituto de Investigación Genómica (TIGR) (tigr.org/msc/infl_a_virus. shtml en la World Wide WeB) .
Las células M2e o HA-que expresan o virus descritos anteriormente se utilizan para detectar la muestra biológica obtenida de un paciente infectado con la influenza A para la presencia de anticuerpos que se unen preferentemente a la célula que expresa el polipéptido M2 o HA mediante biológica estándar técnicas. Por ejemplo, en ciertas modalidades, los anticuerpos pueden estar marcados, y la presencia de etiqueta asociada con la célula detectado, por ejemplo, usando FMAT o análisis FACS . En modalidades particulares, la muestra biológica es sangre, suero, plasma, lavado bronquial, o la saliva. Los métodos de la presente invención pueden ponerse en práctica utilizando técnicas de alto rendimiento.
Los anticuerpos humanos identificados a continuación pueden caracterizarse adicionalmente . Por ejemplo los epítopos conformacionales particulares con en la proteína M2e o HA que son necesarias o suficientes para la unión del anticuerpo se pueden determinar, por ejemplo, usando mutagénesis dirigida al sitio de polipéptidos expresados M2e o HA. Estos métodos se pueden adaptar fácilmente para identificar anticuerpos humanos que se unen a cualquier proteína expresada en una superficie celular. Además, estos métodos pueden ser adaptados para determinar la unión del anticuerpo a el virus en sí, en oposición a una célula que expresa M2e o HA recombinante, o infectados con el virus.
Las secuencias de polinucleotidos que codifican los anticuerpos, las regiones variables de los mismos, o fragmentos de unión a antígeno del mismo se pueden subclonar en vectores de expresión para la producción recombinante de anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anti-HA. En una forma de modalidad, esto se consigue mediante la obtención de células mononucleares del paciente a partir del suero que contiene el anticuerpo monoclonal humano identificado anti-M2e o anti-HA se obtuvo anticuerpo; la producción de clones de células B de las células mononucleares; inducir las células B para convertirse anticuerpo-la producción de células plasmáticas, y el cribado de los sobrenadantes producidos por las células de plasma para determinar si contiene la monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA. Una vez que un clon de células B que produce un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA se identifica, se lleva a cabo transcripción inversa-reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) para clonar los ADNs que codifican las regiones variables o porciones de los mismos de la monoclonal anti humana-M2e o anticuerpo anti-HA. Estas secuencias se subclonaron entonces en vectores de expresión adecuados para la producción recombinante de anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anti-HA. La especificidad de unión puede ser confirmado mediante la determinación de la capacidad del anticuerpo recombinante para unirse a células que expresan M2e o polipéptido HA o proteína.
En modalidades particulares de los métodos descritos en el presente documento, las células B aisladas de sangre periférica o ganglios linfáticos son ordenados, por ejemplo, sobre la base de su ser CD19 positivo, y chapada, por ejemplo, tan bajo como una sola especificidad de la célula por pozo, por ejemplo, en 96, 384, o 1536 configuraciones bien. Las células son inducidas a diferenciarse en células productoras de anticuerpos, por ejemplo, células plasmáticas, y los sobrenadantes de cultivo se recogieron y se ensayaron para la unión a células que expresan el polipéptido agente infeccioso en su superficie usando, por ejemplo, FMAT o análisis FACS. Los pozos positivos se sometieron a continuación a toda así RT-PCR para amplificar regiones variables de cadena pesada y ligera de la molécula de IgG expresada por las células plasmáticas hija clónales. Los productos resultantes de la PCR que codifican las regiones variables de cadena pesada y ligera, o porciones de los mismos, se subclonaron en vectores de expresión de anticuerpos humanos para la expresión recombinante. Los anticuerpos recombinantes resultantes se ponen a prueba para confirmar su especificidad de unión original y se pueden probar más de pan-especificidad a través de varias cepas de cepas del agente infeccioso.
Por lo tanto, en una modalidad, un método de identificación monoclonal humano anti-M2e o anticuerpos anti-HA se practica de la siguiente manera. En primer lugar, de longitud completa o de longitud completa de aproximadamente M2 o HA ADNc se transfectan en una línea celular para la expresión de M2 o proteína HA. En segundo lugar, las muestras de plasma o suero humanos individuales son la prueba de anticuerpos que se unen el M2 celular expresa o HA. Y, por último, los anticuerpos monoclonales derivados de individuos de plasma o suero-positivo se caracterizan por la unión a la misma célula M2-expresado o HA. Además definición de las especificidades finas de los MAb se puede realizar en este punto.
Estos métodos pueden ponerse en práctica para identificar una variedad de diferentes anticuerpos HuM2e, incluyendo anticuerpos específicos para (a) los epítopos en un péptido M2e lineal, (b) los epítopos comunes en múltiples variantes de M2e, (c) los determinantes conformacionales de un M2 homotetrámero , y (d) los determinantes conformacionales comunes de múltiples variantes de la homotetrámero M2. La última categoría es particularmente deseable, ya que esta especificidad es tal vez específica para todas las cepas de la influenza.
Estos métodos pueden ponerse en práctica para identificar una variedad de diferentes anticuerpos anti-HA monoclonales humanos, incluyendo anticuerpos específicos para (a) los epítopos en un péptido HA lineal, (b) los epítopos comunes en múltiples variantes de HA, (c) conformacional determinantes de una proteína HA o homotrímero, y (d) los determinantes conformacionales comunes de múltiples variantes de la proteína HA o homotrímero. La última categoría es particularmente deseable, ya que esta especificidad es tal vez específica para todas las cepas de la influenza.
Los polinucleotidos que codifican el anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpos anti-HA o porciones de los mismos de la presente invención se pueden aislar a partir de células que expresan monoclonal humano anti-M2e o anticuerpos anti-HA, de acuerdo con métodos disponibles en la técnica y se describen en el presente documento, incluyendo la amplificación por reacción en cadena de la polimerasa usando cebadores específicos para regiones conservadas de los polipéptidos de anticuerpos humanos. Por ejemplo, la cadena ligera y la cadena pesada de las regiones variables pueden ser clonados a partir de la célula B de acuerdo con técnicas de biología molecular descritas en el documento WO 92/02551, patente de E.U. No. 5.627.052; o Babcook et al, Proc. Nati. Acad. Ciencia. E.U. 93:7843-48 (1996). En ciertas modalidades, los polinucleótidos que codifican la totalidad o una región de ambas las regiones variables de cadena pesada y ligera de la molécula de IgG expresada por las células plasmáticas hija clónales que expresan el anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA se subclonaron y se secuenciaron . La secuencia del polipéptido codificado puede determinarse fácilmente a partir de la secuencia de polinucleótido .
Los polinucleótidos aislados que codifican un polipéptido de la presente invención pueden succionarse en un vector de expresión para producir de forma recombinante anticuerpos y polipéptidos de la presente invención, usando procedimientos conocidos en la técnica y descritos en el presente documento.
Las propiedades de unión de un anticuerpo (o fragmento del mismo) a M2e o células o tejidos infectados pueden generalmente ser determinadas y evaluadas utilizando métodos de inmunodetección, incluyendo, por ejemplo, ensayos basados en inmunofluorescencia , tales como inmuno-histoquímica - (IHC) y/o clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) . Métodos de inmunoensayo pueden incluir controles y procedimientos para determinar si los anticuerpos se unen específicamente a M2e de una o varias cepas de la influenza A, y no reconocen o una reacción cruzada con las células normales de control .
Después de la preseleccion de suero a identificar a los pacientes que producen anticuerpos a un agente infeccioso o polipéptido de la misma, por ejemplo, M2 o de HA, los métodos de la presente invención incluyen típicamente el aislamiento o purificación de las células B a partir de una muestra biológica obtenida previamente a partir de un paciente o sujeto. El paciente o sujeto se pueden diagnosticar actualmente o previamente con o sospechan o tener una determinada enfermedad o infección, o el paciente o sujeto puede ser considerado una enfermedad o infección en particular libre o. Típicamente, el paciente o sujeto es un mamífero y, en modalidades particulares, un ser humano. La muestra biológica puede ser cualquier muestra que contiene células B, incluyendo pero no limitado a, los ganglios linfáticos o el tejido de ganglio linfático, derrames pleurales, sangre periférica, ascitis, tejido tumoral, o líquido cefalorren el presentedeo (LCR) . En diversas modalidades, las células B se aislan de diferentes tipos de muestras biológicas, tales como una muestra biológica afectado por una enfermedad o infección en particular. Sin embargo, se entiende que cualquier muestra biológica que comprende células B puede ser utilizado para cualquiera de las modalidades de la presente invención.
Una vez aislados, las células B son inducidas para producir anticuerpos, por ejemplo, mediante el cultivo de las células B en condiciones que apoyan la proliferación de células B o de desarrollo en un plasmacito, plasmablasto , o de células plasmáticas. Los anticuerpos se investigan luego, típicamente usando técnicas de alto rendimiento, para identificar un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno objeto, por ejemplo, un particular, tejido, célula, agente infeccioso, o polipéptido. En ciertas modalidades, el antígeno específico, por ejemplo, un polipéptido de la superficie celular unido por el anticuerpo no se conoce, mientras que en otras modalidades, el antígeno unido específicamente por el anticuerpo se conoce.
De acuerdo con la presente invención, las células B se pueden aislar de una muestra biológica, por ejemplo, un tumor, tejido, sangre periférica o de la muestra de ganglio linfático, por cualquier medio conocido y disponibles en la técnica. Las células B son típicamente ordenados por FACS en base a la presencia en su superficie de un marcador de células B específicas, por ejemplo, CD19, CD138, y/o la superficie de IgG. Sin embargo, otros métodos conocidos en la técnica se pueden emplear, tales como, por ejemplo, purificación en columna usando perlas magnéticas CD19 o perlas magnéticas de IgG específicos, seguido de la elución de la columna. Sin embargo, el aislamiento magnético de células B utilizando cualquier marcador puede resultar en la pérdida de ciertas células B. Por lo tanto, en ciertas modalidades, las células aisladas no están ordenados, pero, en cambio, las células mononucleares de Ficol-purificado aislados de tumor se sembraron directamente al número apropiado o deseado de especificidades por pozo.
Con el fin de identificar las células B que producen un anticuerpo-agente infeccioso específico, las células B están típicamente en placas a baja densidad (por ejemplo, una sola especificidad de la célula por pozo, 1-10 células por pozo, 10-100 células por pozo, 1-100 células por pozo, a menos de 10 células por pozo, o menos de 100 células por pozo) en múltiples pozos o placas de microtitulación, por ejemplo, en el 96, 384, 1536 o configuraciones así. Cuando las células B se siembran inicialmente a una densidad mayor que una célula por pozo, a continuación, los métodos de la presente invención pueden incluir la etapa de, posteriormente, diluyendo las células en un pozo identificado como producir un anticuerpo específico de antígeno, hasta que una sola especificidad de la célula por así se consigue, facilitando de este modo la identificación de la célula B que produce el anticuerpo específico de antígeno. Los sobrenadantes celulares o una parte del mismo y/o las células pueden ser congelados y almacenados para pruebas futuras y la recuperación posterior de polinucleotidos de anticuerpos.
En ciertas modalidades, las células B son cultivadas bajo condiciones que favorecen la producción de anticuerpos por las células B. Por ejemplo, las células B pueden ser cultivadas en condiciones favorables para la proliferación de células B y diferenciación para producir plasmablasto productora de anticuerpos, plasmacitos, o células plasmáticas. En modalidades particulares, las ^células B son cultivadas en presencia de un mitógeno de células B, tales como lipopolisacárido (LPS) o ligando de CD40. En una forma de modalidad específica, las células B se diferencian a células productoras de anticuerpos mediante el cultivo con células de alimentación y/o otros activadores de células B, tales como el ligando de CD40.
Los sobrenadantes de cultivo celular o anticuerpos obtenidos de los mismos pueden ser probados por su capacidad de unirse a un antígeno objeto, utilizando métodos de rutina disponibles en la técnica, incluyendo los descritos en el presente documento. En modalidades particulares, los sobrenadantes de cultivo se ensayan para la presencia de anticuerpos que se unen a un antígeno objeto utilizando métodos de alto rendimiento. Por ejemplo, las células B pueden ser cultivadas en platos de múltiples pozos de microtitulación, de tal manera que los manipuladores robóticos de placa se pueden usar para muestrear simultáneamente múltiples sobrenadantes de células y ensayo para, la presencia de anticuerpos que se unen a un antígeno objeto. En modalidades particulares, los antígenos están unidos a perlas paramagnéticas , por ejemplo, de látex o perlas) para facilitar la captura de los complejos de anticuerpo/antígeno . En otras modalidades, los antígenos y los anticuerpos están marcados con fluorescencia (con diferentes etiquetas) y el análisis FACS se realiza para identificar la presencia de anticuerpos que se unen al antígeno objeto. En una forma de modalidad, la unión del anticuerpo se determina usando análisis de™ FMAT y la instrumentación (Applied Biosystems, Foster City, CA) . FMAT™ es una plataforma-macro confocal de fluorescencia para detección de alto rendimiento, que mezcla y de lectura, los ensayos no radiactivos utilizando células vivas o perlas.
En el contexto de la comparación de la unión de un anticuerpo a un antígeno objeto particular (por ejemplo, una muestra biológica tal como un tejido infectado o células, o agentes infecciosos) en comparación con una muestra de control (por ejemplo, una muestra biológica tal como no infectada células, o un agente infeccioso diferente) , en diversas modalidades, el anticuerpo se considera que se unen preferentemente un antígeno objeto particular, si al menos de dos veces, al menos tres veces, al menos cinco veces, o al menos diez veces más anticuerpo se une al antígeno objeto particular, en comparación con la cantidad que se une una muestra de control.
Los polinucleótidos que codifican cadenas de anticuerpo, las regiones variables de los mismos, o fragmentos de los mismos, pueden aislarse a partir de células que utilizan cualquier medio disponible en la técnica. En una forma de modalidad, los polinucleótidos son aislados usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) , por ejemplo, transcripción inversa-PCR (RT-PCR) utilizando cebadores de oligonucleótidos que se unen específicamente a secuencias pesadas o ligeras de polinucleótido que codifica la cadena o complementos de los mismos usando procedimientos de rutina disponibles en el arte. En una forma de modalidad, los pozos positivos se someten a todo bien de RT-PCR para amplificar las regiones variables de cadena pesada y ligera de la molécula de IgG expresada por las células plasmáticas hija clónales. Estos productos de PCR se pueden secuenciar.
Los productos de PCR resultantes codifican las regiones o porciones variables de cadena pesada y ligera del mismo se subclonaron entonces en vectores de expresión de anticuerpos humanos y se expresan de forma recombinante de acuerdo con los procedimientos de rutina en la técnica (véase, por ejemplo, la patente de E.U. No. 7.112.439). Las moléculas de ácido nucleico que codifican un anticuerpo específico de tumor o fragmento de la misma, como se describe en el presente documento, pueden propagarse y expresarse de acuerdo a cualquiera de una variedad de procedimientos bien conocidos para la escisión de ácido nucleico, ligación, transformación, y transfección. Por lo tanto, en ciertas modalidades puede preferirse la expresión de un fragmento de anticuerpo en una célula huésped procariota, tal como Escherichia coli (véase, por ejemplo, Pluckthun et al., Métodos Enzimol. 178:497-515 (1989)). En ciertas otras modalidades, la expresión del anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo puede ser preferible en una célula huésped eucariota, incluyendo levaduras (por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, y Pichia pastoris) , células animales (incluyendo células de mamífero) , o células vegetales. Los ejemplos de células animales adecuadas incluyen, pero no se limitan a, mieloma, COS, CHO, o células de hibridoma. Los ejemplos de células vegetales incluyen el tabaco, maíz, soja, y las células de arroz. Por métodos conocidos por los técnicos en la materia y en base a la presente descripción, un vector de ácido nucleico puede ser diseñado para expresar secuencias extrañas en un sistema de huésped particular, y, a continuación secuencias de polinucleotidos que codifica el anticuerpo específico de tumor (o fragmento de la misma) puede ser insertado. Los elementos reguladores variarán de acuerdo con el huésped particular .
Uno o más vectores de expresión replicables que contienen un polinucleótido que codifica una región variable y/o constante pueden ser preparados y utilizados para transformar una línea celular apropiada, por ejemplo, una línea celular de mieloma no productora, tal como una línea NSO de ratón o una bacteria, tal como E. coli, en la que la producción del anticuerpo se producirá. Con el fin de obtener la transcripción y la traslado eficiente, la secuencia de polinucleótido en cada vector debe incluir secuencias reguladoras apropiadas, particularmente un promotor y la secuencia guía operativamente unida a la secuencia del dominio variable. Los métodos particulares para producir anticuerpos de esta manera son generalmente bien conocidos y utilizados rutinariamente. Por ejemplo, los procedimientos de biología molecular se describen por Sambrook et al. (Clonación Molecular, Manual de Laboratorio, 2 4 ed, Laboratorio Cold Spring Harbor, Nueva York, 1989; Véase también Sambrook et al, 3 8 ed, Laboratorio Cold Spring Harbor, Nueva York, (2001).). Aunque no es necesario, en ciertas modalidades, las regiones de polinucleótidos que codifican los anticuerpos recombinantes pueden ser secuenciados . La secuenciación del ADN se puede realizar como se describe en Sanger et al. (Proc. Nati. Acad. Sci.. E.U. 74:5463 (1977)) y el manual de secuenciación de Amersham International pie y que incluyen mejoras de la misma.
En modalidades particulares, los anticuerpos o fragmentos recombinantes resultantes de los mismos se prueban para confirmar su especificidad original y se pueden probar más de pan-especificidad, por ejemplo, con agentes infecciosos relacionados. En modalidades particulares, un anticuerpo identificado o producido de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento se prueba para la muerte celular a través de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) o la apoptosis, y/o así como su capacidad de internalizar.
Polinucleótidos La presente invención, en otros aspectos, proporciona composiciones de polinucleótidos. En modalidades preferidas, estos polinucleótidos codifican un polipéptido de la invención, por ejemplo, una región de una cadena variable de un anticuerpo que se une a la influenza A, M2 , M2e, o HA (soluble o recombinante) . Los polinucleótidos de la invención son de una sola cadena (de codificación o antisentido) o de doble cadena de ADN (genómico, ADNc o sintético) o moléculas de ARN. Moléculas de ARN incluyen, pero no se limitan a, moléculas de hnRNA, que contienen intrones y corresponden a una molécula de ADN de una manera uno-a-uno, y moléculas de AR m, que no contienen intrones. Alternativamente, o además, secuencias codificantes o no codificantes están presentes dentro de un polinucleótido de la presente invención. También alternativamente, o además, un polinucleótido que está vinculada a otras moléculas y/o materiales de soporte de la invención. Se utilizan polinucleótidos de la invención, por ejemplo, en ensayos de hibridación para detectar la presencia de un anticuerpo de la influenza A en una muestra biológica, y en la producción recombinante de polipéptidos de la invención.
Por lo tanto, de acuerdo con otro aspecto de la presente invención, las composiciones de polinucleótidos se proporcionan que incluir algunos o todos de una secuencias de polinucleótidos establecidas en el presente, complementos de estas secuencias de polinucleótidos, y variantes degeneradas de estas secuencias de polinucleótidos. En ciertas modalidades preferidas, las secuencias de polinucleótidos establecidas en el presente codifican polipéptidos capaces de unión preferentemente una célula infectada-A de la influenza, en comparación con una célula no infectada control normal, incluyendo un polipéptido que tiene una secuencia expuesta en el presente. Además, la invención incluye todos los polinucleótidos que codifican cualquier polipéptido de la presente invención.
En otras modalidades relacionadas, la invención proporciona polinucleótidos variantes que tienen una identidad considerable con las secuencias expuestas en el presente documento, por ejemplo los que comprenden al menos 70% de identidad de secuencia, preferiblemente al menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% o superior, de identidad de secuencia comparado con una secuencia de polinucleótidos de esta invención, como se determina usando los métodos descritos en el presente, (por ejemplo, análisis BLAST utilizando parámetros estándar) . Un técnico en esta técnica reconocerá que estos valores se pueden a ustar apropiadamente para determinar la identidad correspondiente de proteínas codificadas por dos secuencias de nucleótidos teniendo en cuenta la degeneración del codón, amino similitud ácido, posicionamiento del marco de lectura, y similares.
Típicamente, las variantes de polinucleótidos contienen una o más sustituciones, adiciones, deleciones y/o inserciones, preferiblemente de tal manera que las propiedades de unión inmunogénicas del polipéptido codificado por la variante de polinucleótido no está considerablemente disminuida con respecto a un polipéptido codificado por una secuencia de polinucleótido específicamente establecidos en el presente. En modalidades adicionales, la presente invención proporciona fragmentos de polinucleotidos que comprenden diversas longitudes de tramos contiguos de secuencia idéntica o complementaria a una o más de las secuencias descritas en el presente documento. Por ejemplo, los polinucleotidos se proporcionan por la presente invención que comprenden al menos aproximadamente 10, 15, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200, 300, 400, 500 o 1000 o más nucleótidos contiguos de una o más de las secuencias descritas en el presente, así como todas las longitudes intermedias entre ellas. Tal como se usa en el presente, el término "longitudes intermedias" se utiliza para describir cualquier longitud entre los valores citados, tales como 16, 17, 18, 19, etc.; 21, 22, 23, etc.; 30, 31, 32, etc.; 50, 51, 52, 53, etc.; 100, 101, 102, 103, etc.; 150, 151, 152, 153, etc.; incluyendo todos los números enteros a través 200-500; 500-1.000, y similares.
En otra forma de modalidad de la invención, las composiciones de polinucleotidos se proporcionan que son capaces de hibridar en condiciones de moderada a alta rigurosidad a una secuencia de polinucleotidos proporcionadas en el presente documento, o un fragmento del mismo, o una secuencia complementaria de la misma. Las técnicas de hibridación son bien conocidos en la técnica de la biología molecular. Para fines de ilustración, adecuadas condiciones moderadamente rigurosas para ensayos de hibridación de un polinucleótido de esta invención con otros polinucleotidos incluyen prelavado en una solución de 5 x SSC, 0,5% de SDS, EDTA 1,0 mM (pH 8,0); hibridar a 50 2 C-60 a C, 5 X SSC, durante la noche; seguido de lavado dos veces a 65 2 C durante 20 minutos con cada uno de 2X, 0,5 X y 0,2 X SSC que contiene 0,1% de SDS. Un técnico en la técnica entenderán que la rigurosidad de la hibridación puede ser manipulada fácilmente, tal como mediante la alteración del contenido de sal de la solución de hibridación y/o la temperatura a la que se lleva a cabo la hibridación. Por ejemplo, en otra forma de modalidad, las condiciones de hibridación altamente rigurosas adecuadas incluyen las descritas anteriormente, con la excepción de que la temperatura de hibridación se incrementa, por ejemplo, a 60-65oC o 65-70oC.
En modalidades preferidas, el polipéptido codificado por la variante de polinucleótido o fragmento tiene la misma especificidad de unión (es decir, específicamente o preferentemente se une al mismo epítopo o influenza A cepa) que el polipéptido codificado por el polinucleótido nativo. En ciertas modalidades preferidas, los polinucleotidos descritos anteriormente, por ejemplo, variantes de polinucleotidos, fragmentos y secuencias que se hibridan, codifican polipéptidos que tienen un nivel de actividad de unión de al menos aproximadamente 50%, preferiblemente al menos aproximadamente 70%, y más preferiblemente al menos aproximadamente 90% de la de una secuencia de polipéptido configurado específicamente en el presente documento.
Los polinucleotidos de la presente invención, o fragmentos de los mismos, independientemente de la longitud de la secuencia de codificación en sí, pueden combinarse con otras secuencias de ADN, tales como promotores, señales de poliadenilación, sitios adicionales de enzimas de restricción, múltiples sitios de clonación, otra codificación segmentos, y similares, tal que su longitud total puede variar considerablemente. Se emplea un fragmento de ácido nucleico de casi cualquier longitud, con la longitud total preferiblemente está limitada por la facilidad de preparación y uso en el protocolo de ADN recombinante previsto. Por ejemplo, los segmentos de polinucleotidos ilustrativos con longitudes totales de aproximadamente 10.000, aproximadamente 5.000, aproximadamente 3,000, aproximadamente 2,000, aproximadamente 1,000, aproximadamente 500, aproximadamen e 200, aproximadamente 100, aproximadamente 50 pares de bases de longitud, y similares, (incluyendo todas las longitudes intermedias) se incluyen en muchas implementaciones de esta invención.
Se apreciará por los técnicos en la materia que, como resultado de la degeneración del código genético, existen múltiples secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido como se describe en el presente documento. Algunos de estos polinucleótidos llevan una homología mínima con la secuencia de nucleótidos de cualquier gen nativo. No obstante, los polinucleótidos que codifican un polipéptido de la presente invención pero que varían debido a diferencias en el uso de codones se contemplan específicamente por la invención. Además, los alelos de los genes, incluyendo las secuencias de polinucleótidos proporcionadas en el presente documento están dentro del alcance de la invención. Los alelos son genes endógenos que están alterados como resultado de una o más mutaciones, tales como deleciones, adiciones y/o sustituciones de nucleótidos. El ARNm y la proteína resultante puede, pero no necesita, tener una estructura o función alterada. Los alelos se pueden identificar usando técnicas estándar (tales como la hibridación, amplificación y/o base de datos de comparación de secuencias) .
En ciertas modalidades de la presente invención, la mutagénesis . de las secuencias de polinucleótidos descritas se lleva a cabo con el fin de alterar una o más propiedades del polipéptido codificado, como su fuerza de unión o especificidad de unión. Las técnicas para la mutagénesis son bien conocidos en la técnica, y se utilizan ampliamente para crear variantes tanto de polipéptidos y polinucleótidos. Un enfoque de mutagénesis, tales como mutagénesis específica de sitio, se emplea para la preparación de variantes y/o derivados de los polipéptidos descritos en el presente documento. Por este enfoque, modificaciones específicas en una secuencia de polipéptido se realizan a través de la mutagénesis de los polinucleótidos subyacentes que los codifican. Estas técnicas proporciona un enfoque sencillo para preparar y variantes de secuencia de prueba, por ejemplo, la incorporación de una o más de las consideraciones anteriores, introduciendo uno o más cambios de secuencia de nucleotidos en el polinucleótido .
La mutagénesis específica del sitio permite la producción de imitantes a través del uso de secuencias de oligonucleótidos específicos incluyen la secuencia de nucleotidos de la mutación deseada, así como un número suficiente de nucleotidos adyacentes, para proporcionar una secuencia de cebador de tamaño suficiente y complejidad de secuencia para formar un dúplex estable a ambos lados de la unión de deleción que se atraviesa. Las mutaciones se emplean en una secuencia de polinucleótido seleccionada para mejorar, alterar, disminuir, modificar, o cambiar de otro modo las propiedades del propio polinucleótido, y/o alterar las propiedades, actividad, composición, estabilidad, o secuencia primaria del polipéptido codificado .
En otras modalidades de la presente invención, las secuencias de polinucleótidos proporcionadas en el presente documento se utilizan como sondas o cebadores para la hibridación de ácidos nucleicos, por ejemplo, como cebadores de PCR. La capacidad de tales sondas de ácido nucleico para hibridarse específicamente a una secuencia de interés que puedan detectar la presencia de secuencias complementarias en una muestra dada. Sin embargo, otros usos también son abarcados por la invención, tales como el uso de la información de la secuencia para la preparación de cebadores de especies mutantes, o cebadores para uso en la preparación de otras construcciones genéticas. Como tales, los segmentos de ácido nucleico de la invención que incluyen una región de secuencia de al menos aproximadamente 15 nucleótidos de longitud de secuencia contigua que tiene la misma secuencia que, o es complementaria a, una secuencia contigua larga de 15 nucleótidos descrita en el presente documento es particularmente útil. Secuencias idénticas o complementarias contiguas más largo, por ejemplo, aquellos de aproximadamente 20, 30, 40, 50, 100, 200, 500, 1000 (incluyendo todas las longitudes intermedias) , incluyendo secuencias de longitud completa, y todas las longitudes en el medio, también se utilizan en ciertas modalidades.
Las moléculas de polinucleótidos que tienen regiones de secuencia que consisten en tramos contiguos de nucleótidos de 10-14, 15-20, 30, 50, o incluso de 100-200 nucleótidos o así (incluyendo longitudes intermedios, así), idéntica o complementaria a una secuencia de polinucleótido descrita en el presente, se contempla particularmente como sondas de hibridación para el uso en, por ejemplo, el sur y el norte de secante, y/o cebadores para su uso en, por ejemplo, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) . El tamaño total del fragmento, así como el tamaño del tramo complementario (s), depende en última instancia del uso previsto o de la aplicación del segmento de ácido nucleico particular. Los fragmentos más pequeños se utilizan generalmente en modalidades de hibridación, caracterizado porgue la longitud de la región complementaria contigua puede ser variada, tal como entre aproximadamente 15 y aproximadamente 100 nucleótidos, pero más grandes tramos contiguos de complementariedad puede ser utilizado, de acuerdo con las secuencias complementarias de longitud que se desea detectar.
El uso de una sonda de hibridación de aproximadamente 15-25 nucleótidos de longitud permite la formación de una molécula dúplex que es tanto estable como selectiva. Las moléculas que tienen secuencias complementarias contiguas en tramos superiores a 12 bases de longitud se prefieren en general, sin embargo, con el fin de aumentar la estabilidad y selectividad del híbrido, y de ese modo mejorar la calidad y grado de moléculas híbridas específicas obtenidas. Moléculas de ácido nucleico que tiene tramos de genes complementarios de 15 a 25 nucleótidos contiguos, o incluso más, cuando se desee, se prefieren generalmente.
Las sondas de hibridación se seleccionan a partir de cualquier parte de cualquiera de las secuencias descritas en el presente documento. Todo lo que se requiere es revisar las secuencias expuestas en el presente documento, oa cualquier porción continua de las secuencias, de cerca de 15-25 nucleótidos de longitud hasta e incluyendo la secuencia de longitud completa, que se desea utilizar como sonda o cebador. La elección de la sonda y el cebador secuencias se rige por varios factores. Por ejemplo, se puede desear emplear cebadores de hacia los extremos de la secuencia total.
El polinucleótido de la presente invención, o fragmentos o variantes de los mismos, sé preparan fácilmente mediante, por ejemplo, sintetizando directamente el fragmento por medios químicos, como se practica comúnmente utilizando un sintetizador automático de oligonucleótidos . También, los fragmentos se obtienen mediante la aplicación de tecnología de reproducción de ácidos nucleicos, tales como la tecnología PCR™ de la patente de E.U. 4.683.202, mediante la introducción de secuencias seleccionadas en vectores recombinantes para la producción recombinante, y mediante otras técnicas de ADN recombinante generalmente conocidas por los técnicos en la materia la biología molecular de vectores, células huésped y procedimientos recombinantes.
La invención proporciona vectores y células huésped que comprenden un ácido nucleico de la presente invención, así como las técnicas recombinantes para la producción de un polipéptido de la presente invención. Los vectores de la invención incluyen aquellos capaces de replicacion en cualquier tipo de célula u organismo, incluyendo, por ejemplo, plásmidos, fagos, cósmidos, y mini cromosomas. En diversas modalidades, los vectores que comprenden un polinucleótido de la presente invención son vectores adecuados para la propagación o la replicacion del polinucleótido, o vectores adecuados para la expresión de un polipéptido de la presente invención. Tales vectores son conocidos en la técnica y están disponibles comercialmente.
Los polinucleótidos de la presente invención se sintetizan, todo o en partes que luego se combinan, y se inserta en un vector usando técnicas rutinarias de biología molecular y celular, incluyendo, por ejemplo, subclonando el polinucleótido en un vector linealizado usando sitios de restricción apropiados y restricción enzimas. Los polinucleótidos de la presente invención se amplifican por la reacción en cadena de la polimerasa utilizando cebadores de oligonucleótidos complementarios a cada hebra del polinucleótido. Estos cebadores también incluyen sitios de escisión de enzimas de restricción para facilitar la subclonación en un vector. Los componentes del vector replicables generalmente incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: una secuencia señal, un origen de replicación, y uno o más marcador o genes seleccionables .
Con el fin de expresar un polipéptido de la presente invención, las secuencias de nucleótidos que codifican el polipéptido, o equivalentes funcionales, se insertan en un vector de expresión apropiado, es decir, un vector que contiene los elementos necesarios para la transcripción y traslado de la insertado secuencia de codificación. Métodos bien conocidos por los técnicos en la materia se utilizan para construir vectores de expresión que contienen secuencias que codifican un polipéptido de interés y elementos de control transcripcional y traduccxonal apropiadas. Estos métodos incluyen técnicas de ADN recom inante in vitro, técnicas sintéticas, y recombinación genética in vivo. Tales técnicas se describen, por ejemplo, en Sambrook, j., et al. (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview, Nueva York, y Ausubel, FM et al. (1989) Protocolos Actuales en Biología Molecular, John Wiley & Sons, Nueva York. N.Y.
Una variedad de sistemas de vector de expresión/huésped se utilizan para contener y expresar secuencias de polinucleótidos . Estos incluyen, pero no se limitan a, microorganismos tales como bacterias transformadas con bacteriófago recombinante, plásmido, o vectores de expresión de ADN de cósmidos; levadura transformada con vectores de expresión de levadura, sistemas de células de insectos infectadas con vectores de expresión de virus (por ejemplo, baculovirus) , sistemas de células de plantas transformadas con vectores de expresión de virus (por ejemplo, virus de mosaico de la coliflor, CaMV, el virus del mosaico del tabaco, TMV) o con vectores de expresión bacterianos (por ejemplo, Ti o pBR322 plásmidos), o sistemas de células animales. En una modalidad, las regiones variables de un gen que expresa un anticuerpo monoclonal de interés se amplificaron a partir de una célula de hibridoma usando cebadores de nucleótidos. Estos cebadores son sintetizados por un técnico normal en la técnica, o se pueden comprar de fuentes disponibles comercialmente (véase, por ejemplo, Stratagene (La Jolla, California) , que vende cebadores para la amplificación de ratón y las regiones variables humanas. Los cebadores se utilizan para amplificar regiones variables de cadena pesada o ligera, que luego se insertan en vectores tales como immunoZAP™ H o ImmunoZAP™ L (Stratagene), respectivamente. Estos vectores se introducen entonces en E. coli, levaduras, o sistemas basados en mamíferos para la expresión, grande cantidades de una proteína de una sola cadena que contiene una fusión de los dominios VH y VL se producen utilizando estos métodos (ver Bird y col., Ciencia 242:423-426 (1988) ) .
Los "elementos de control" o "secuencias reguladoras " presentes en un vector de expresión son aquellas regiones no traducidas del vector, por ejemplo, potenciadores , promotores, 5 'y 3' regiones no traducidas, que interactúan con las proteínas celulares huésped para llevar la transcripción y la traslado a cabo. Tales elementos pueden variar en su fuerza y especificidad. Dependiendo del sistema de vector y huésped utilizado, cualquier número de elementos de transcripción y traslado adecuados, incluyendo promotores constitutivos e inducibles, se utiliza.
Los Ejemplos de promotores adecuados para su uso con huéspedes procariotas incluyen el promotor phoA, sistemas de ß-lactamasa y de la lactosa, promotor de la fosfatasa alcalina, un triptófano (trp) sistema promotor, y promotores híbridos tales como el promotor tac. Sin embargo, otros promotores bacterianos conocidos son adecuados. Los promotores para uso en sistemas bacterianos también contienen generalmente una secuencia de Shine-Dalgarno unida operativamente al ADN que codifica el polipéptido. Se utilizan promotores inducibles tales como el promotor híbrido lacz del fagémido pBluescript (Stratagene, La Jolla, CA) o plásmido pSPORTl (Gibco BRL, Gaithersburg, MD) y similares.
Una variedad de secuencias promotoras son conocidos para eucariotas y cualquier se utilizan de acuerdo con la presente invención. Virtualmente todos los genes eucariotas tienen una región rica en AT ubicada aproximadamente 25 a 30 bases cadena arriba del sitio donde se inicia la transcripción. Otra secuencia hallada 70 a 80 bases cadena arriba del inicio de la transcripción de muchos genes es una región CNCAAT, donde N puede ser cualquier nucleótido. En el extremo 3 ' de la mayoría de genes eucariotas es una secuencia AATAAA que puede ser la señal para la adición de la cola poli A al extremo 3 ' de la secuencia codificante. Todas estas secuencias se insertan de forma adecuada en vectores de expresión eucariotas .
En los sistemas de células de mamíferos, promotores de genes de mamíferos o de virus de mamíferos se prefieren generalmente. La expresión del polipéptido a partir de vectores en células huésped de mamífero Aer controlada, por ejemplo, mediante promotores obtenidos de los genomas de virus tales como el virus del polioma, el virus de la viruela aviar, adenovirus (por ejemplo, adenovirus 2), virus del papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus (CMV) , un retrovirus, virus de la hepatitis B y más preferiblemente virus de simio 40 (SV40) , de promotores heterólogos de mamíferos, por ejemplo, el promotor de la actina o un promotor de inmunoglobulina, y de promotores de choque térmico, siempre que dichos promotores sean compatibles con los sistemas de células huésped. Si es necesario generar una línea celular que contenga múltiples copias de la secuencia que codifica un polipéptido, vectores basados en SV40 o EBV se pueden usar ventajosamente con un marcador seleccionable apropiado. Un ejemplo de un vector de expresión adecuado es pcDNA-3.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) , que incluye un promotor de CMV.
Un número de sistemas de expresión basados en virus están disponibles para la expresión de polipéptidos de mamíferos. Por ejemplo, en los casos en los que se utiliza un adenovirus como vector de expresión, las secuencias que codifican un polipéptido de interés pueden ligarse en un complejo de transcripción/traslado de adenovirus que consiste en el promotor tardío y la secuencia guía tripartita. La inserción en una región no esencial El o E3 del genoma viral se puede usar para obtener un virus viable que es capaz de expresar el polipéptido en células huésped infectadas (Logan, J. y Shenk, T. (1984) Proc . Nati. Acad. Sci .. 81:3655-3659). Además, potenciadores de la transcripción, tales como el virus del sarcoma de Rous (RSV) potenciador, se pueden usar para aumentar la expresión en células huésped de mamífero.
En sistemas bacterianos, cualquiera de un número de vectores de expresión se selecciona dependiendo del uso pretendido para el polipéptido expresado. Por ejemplo, cuando se desean grandes cantidades, vectores que dirigen la expresión de alto nivel de proteínas de fusión que se purifican fácilmente se utilizan. Tales vectores incluyen, pero no se limitan a, la clonación y expresión de E. coli vectores multifuncionales tales como BLUESCRIPT (Stratagene) , caracterizado porque la secuencia que codifica el polipéptido de interés se puede ligar en el vector en marco con secuencias para el amino terminal Met y los 7 restos posteriores de ß-galactosidasa, de manera que se produce una proteína híbrida; vectores pIN (.. Van Heeke, G. y SM Sc uster (1989) J. Biol. Chem. 264:5503-5509), y similares. Vectores pGEX (Promega, Madison, WI) también se utilizan para expresar polipéptidos extraños como proteínas de fusión con glutatión S-transíerasa (GST) . En general, tales proteínas de fusión son solubles y se pueden purificar fácilmente a partir de células lisadas por adsorción a perlas de glutatión-agarosa seguido de elución en presencia de glutatión libre. Las proteínas hechas en tales sistemas se diseñan para incluir heparina, trombina, o XA sitios de escisión de la proteasa del factor de modo que el polipéptido clonado de interés puede liberarse del resto de GST a voluntad.
En la levadura, Saccharomyces cerevisiae, se utiliza un número de vectores que contienen promotores constitutivos o inducibles tales como el factor alfa, la alcohol oxidasa, y PGH. Ejemplos de otras secuencias promotoras adecuadas para su uso con huéspedes de levadura incluyen los promotores para la 3-fosfoglicerato quinasa u otras enzimas glicolíticas , tales como enolasa, dehydrogcnase gliceraldehído-3-fosfato, la hexoquinasa, la piruvato descarboxilasa, la fosfofructoquinasa, la isomerasa de . glucosa-6-fosfato , 3-fosfoglicerato mutasa, piruvato quinasa, isomerasa triosafosfato , fosfoglucosa isomerasa y glucoquinasa . Para revisiones, véase Ausubel et al. (supra) y Grant et al. (1987) Methods Enzymol . 153:516-544. Otros promotores de levadura que son promotores inducibles que tienen la ventaja adicional de una transcripción controlada por las condiciones de crecimiento incluyen las regiones promotoras de la alcohol deshidrogenasa 2, isocitocromo C, fosfatasa ácida, enzimas degradativas asociadas con el metabolismo del nitrógeno, la metalotioneína, gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, y enzimas responsable de la utilización de maltosa y galactosa. Vectores y promotores adecuados para uso en la expresión en levaduras se describen adicionalmente en EP 73.657. Los potenciadores de levadura también se utilizan ventajosamente con promotores de levadura.
En los casos en que se utilizan vectores de expresión vegetales, la expresión de secuencias que codifican polipéptidos son accionados por cualquiera de un número de promotores. Por ejemplo, promotores virales tales como los promotores 35S y 19S de CaMV se utilizan solos o en combinación con la secuencia guía omega de TMV (Takamatsu, N. (1987) EMBO J. 6:307-311. Alternativamente, promotores de plantas tales como la subunidad pequeña de RUBISCO o promotores de choque térmico se utilizan (Coruzzi, G. et al (1984) EMBO J. 3:1671-1680;. Broglie, R. et al (1984), Science 224:838-843;. y Winter, J., et al. (1991) Resultados Probl . Cell Differ. 17:85-105). Estas construcciones pueden introducirse en células vegetales mediante transformación de ADN directa o transfección mediada por patógeno. Tales técnicas se describen en un número de generalmente opiniones disponibles (véase, por ejemplo, Hobbs, S. o Murry, LE en McGraw Hill Anuario de Ciencia y Tecnología (1992) McGraw Hill, Nueva York, NY; pp 191-196) .
Un sistema de insecto también se utiliza para expresar un polipéptido de interés. Por ejemplo, en uno de tales sistemas, de Autographa californica virus de la poliedrosis nuclear (AcNPV) se utiliza como un vector para expresar genes extraños en células de Spodoptera frugiperda o en larvas de Trichoplusia. Las secuencias que codifican el polipéptido se clonan en una región no esencial del virus, tal como el gen de polihedrina, y colocadas bajo el control del promotor de la polihedrina. La inserción exitosa de la secuencia que codifica el polipéptido hace que el gen de la polihedrina inactivo y producir virus recombinante que carece de proteína de la cubierta. Los virus recombinantes se utilizan luego para infectar, por ejemplo, células de S. frugiperda o larvas de Trichoplusia, caracterizado porque el polipéptido de interés se expresa (Engelhard, EK et al (1994) Proc Nati Acad Sci 91: 3224-3227) .
Las señales de iniciación específicas también se utilizan para lograr una traslado más eficaz de secuencias que codifican un polipéptido de interés. Tales señales incluyen el codón de iniciación ATG y secuencias adyacentes. En casos donde las secuencias que codifican el polipéptido, su codón de iniciación, y secuencias cadena arriba se insertan en el vector de expresión apropiado, pueden no necesitarse señales de transcripción o control de la traslado adicionales. Sin embargo, en casos en los que sólo la secuencia, o una porción de codificación de la misma, se inserta, señales de control de la traslado exógenas, incluyendo el codón de iniciación ATG se proporcionan. Además, el codón de iniciación está en el marco de lectura correcto para asegurar la correcta traslado del polinucleótido insertado. Los elementos de traslado exógenos y los codones de iniciación son de diversos orígenes, tanto naturales como sintéticos.
La transcripción de un ADN que codifica un polipéptido de la invención se incrementa a menudo insertando una secuencia potenciadora en el vector. Muchas secuencias potenciadoras se conocen, incluyendo, por ejemplo, las identificadas en los genes que codifican la globina, elastasa, albúmina, oc-fetoproteína, e insulina. Típicamente, sin embargo, se utiliza un potenciador de un virus de célula eucariota. Los ejemplos incluyen el potenciador de SV40 en el lado tardío del origen de replicación (pb 100-270), el potenciador de promotor temprano de citomegalovirus , el potenciador de polioma en el lado tardío del origen de replicación, y potenciadores de adenovirus. Ver también Yaniv, Nature 297:17-18 (1982) sobre elementos potenciadores para la activación de promotores eucariotas . El potenciador se empalmarse en el vector en una posición 5 ' o 3 ' de la secuencia que codifica el polipéptido, pero se encuentra preferiblemente en un sitio 5 'del promotor.
Los vectores de expresión utilizados en células huésped eucariotas (levaduras, hongos, insectos, plantas, animales, humanos, o células nucleadas de otros organismos multicelulares) típicamente también contienen secuencias necesarias para la terminación de la transcripción y para estabilizar el ARNm. Tales secuencias están comúnmente disponibles a partir de la 5, y ocasionalmente 3 ', regiones no traducidas de ADNs o ADNcs eucariotas o virales. Estas regiones contienen segmentos de nucleótidos transcritos como fragmentos poliadenilados en la porción no traducida del ARNm que codifica el anticuerpo anti-PSCA. Un componente de terminación de transcripción útil es la región de poliadenilación de la hormona de crecimiento bovina. Ver la patente internacional O94/11026 y el vector de expresión descrito en la misma.
Las células huésped adecuadas para la clonación o expresión del ADN en los vectores en el presente documento son las células procariotas, de levadura, de plantas o eucariotas superiores descritas anteriormente. Ejemplos de procariotas adecuados para este propósito incluyen las eubacterias, tales como organismos Gram-negativos o Gram-positivos , por ejemplo, Enterobacteriaceae tales como Escherichia, por ejemplo, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, por ejemplo, Salmonella typhimurium, Serratia, por ejemplo, Serratia marcescens, y Shigella, así como Bacilli tales como B. subtilis y B. licheniformis (por ejemplo, B. licheniformis 41P descrito en DD 266.710, publicada el 12 de abril 1989), Pseudomonas tales como P. aeruginosa, y Streptomyces . Uno de E. coli huésped de clonación preferido es E. coli 294 (ATCC 31.446), aunque otras cepas tales como E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31.537), y E. coli W3110 (ATCC 27.325) son adecuados. Estos ejemplos son ilustrativos en lugar de limitantes .
Saccharomyces cerevisiae, o la levadura del pan, es el más utilizado entre los microorganismos huéspedes eucariotas inferiores. Sin embargo, un número de otros géneros, especies, y cepas están comúnmente disponibles y usa en el presente, tales como Schizosaccharomyces pombe; Kluyveromyces tales como, por ejemplo, K lactis, K. fragilis (ATCC 12.424), . bulgaricus (ATCC 16.045), K wickeramii (ATCC 24.178), K . waltii (ATCC 56.500), K. drosophilarum (ATCC 36.906), K. thermotolerans , y K. marxianus; Yarrowia (documento EP 402.226); Pic ia pastoris. (EP 183.070); Candida; Tric oderma reesia (EP 244.234); Neurospora crassa; Schwanniomyces tales como Schwanniomyces occidentalis , y hongos filamentosos tales como, por ejemplo, Neurospora, Penicillium, Tolypocladium, y Aspergillus huéspedes tales como A. nidulans y A. niger.
En ciertas modalidades, se elige una cepa de células huésped por su capacidad para modular la expresión de las secuencias insertadas o para procesar la proteína expresada de la manera deseada. Tales modificaciones del polipéptido incluyen, pero no se limitan a, acetilación, carboxilación. glicosilación, fosforilación, lipidación, y acilación. Procesamiento post-traduccional que escinde una forma " prepro " de la proteína también se utiliza para facilitar la inserción, plegamiento y/o función. Diferentes células huésped tales como CHO, COS, HeLa, MDCK, HEK293, y WI38, que tienen maquinaria celular específica y mecanismos característicos para tales actividades posteriores a la traslado, se eligen para asegurar la modificación y procesamiento correctos de la proteína extraña.
Los métodos y reactivos adaptados específicamente para la expresión de anticuerpos o fragmentos de los mismos también son conocidos y disponibles en la técnica, incluyendo los descritos, por ejemplo, en la patente de E.U. No. 4.816.567 y 6.331.415. En diversas modalidades, el anticuerpo cadenas pesada y ligera, o fragmentos de los mismos, se expresan a partir de las mismas o vectores de expresión separados. En una forma de modalidad, las dos cadenas se expresan en la misma célula, facilitando de este modo la formación de un anticuerpo funcional o fragmento de la misma.
Los anticuerpos de longitud completa, fragmentos de anticuerpos, y proteínas de fusión de anticuerpos se producen en bacterias, en particular cuando no son necesarias la glicosilación y la función efectora de Fe, tal como cuando el anticuerpo terapéutico se conjuga a un agente citotóxico (por ejemplo, una toxina) y el inmunoconjugado por sí mismo muestra eficacia en la destrucción de la célula infectada. Para la expresión de fragmentos de anticuerpo y polipéptidos en bacterias, véase, por ejemplo, la Patente de E.U.. Nos. 5,648,237, 5,789,199, y 5,840,523, que describe región de iniciación de traslado (TIR) y las secuencias señal para optimizar la expresión y secreción. Después de la expresión, el anticuerpo se aisla de la pasta de células de E. coli en una fracción soluble y se puede purificar a través de, por ejemplo, una proteína A o columna G dependiendo del isotipo. La purificación final se puede llevar a cabo utilizando un proceso similar al utilizado para la purificación de anticuerpo expresado por ejemplo, en células CHO.
Las células huésped adecuadas para la expresión de polipéptidos glicosilados y anticuerpos se derivan de organismos multicelulares. Ejemplos de células de invertebrados incluyen células de plantas e insectos. Numerosas cepas y variantes de baculovirus y las correspondientes células huésped de insectos permisivas de huéspedes tales como Spodoptera frugiperda (oruga) , Aedes aegypti (mosquito) , Aedes albopicius (mosquito) , Drosophila melanogaster (mosca de la fruta) , y Bombyx mori se han identificado. Una variedad de cepas virales para la transfección están disponibles públicamente, por ejemplo, la variante L-1 de Autographa californica NPV y la cepa Bm-5 de Bombyx mori NPV, y tales virus se utilizan en el presente como el virus según la presente invención, en particular para los la transfección de células de Spodoptera frugiperda. Cultivos de células vegetales de algodón, maíz, patata, soja, petunia, tomate y tabaco también se utilizan como huéspedes.
Los Métodos de propagación de polipéptidos de anticuerpos y fragmentos de los mismos en las células de vertebrados en cultivo (cultivo de tejidos) se abarcan por la invención. Ejemplos de líneas celulares huésped de mamífero usadas en los métodos de la invención son línea CVl de riñon de mono transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651) ; línea de riñon embrionario humano (293 o 293 células subclonadas para el crecimiento en cultivo en suspensión, Grahana y col., J. Gen Virol 36:59 (1977)); células de riñon de cría de hámster (BHK, ATCC CCL 10) ; células de ovario de hámster chino-DHFR (CHO, Urlaub et al, Proc Nati Acad Sci. E.U. 77:4216 (1980)); células de Sertoli de ratón (TM4, Mather, Biol . Reprod 23:243-251 (1980)); células de riñon de mono (CVl ATCC CCL 70); células de riñon de mono verde africano (VERO-76, ATCC CRL-1587); células humanas de carcinoma cervical (HELA, ATCC CCL 2); células de riñon canino (MDCK, ATCC CCL 34); células de hígado de rata búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442) , células de pulmón humano (W138, ATCC CCL 75); células de hígado humano (Hep G2 , HB 8065); tumor mamario de ratón (MMT 060562, ATCC CCL51); células TR1 (Mather et al, Annals NY Acad Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 células, células FS4 y una línea de hepatoma humano (Hep G2) .
Las células huésped se transforman con la expresión antes descrita o vectores de clonación para la producción de polipéptido y se cultivan en medios nutrientes convencionales modificados según sea apropiado para inducir promotores, seleccionar transformantes, o amplificar los genes que codifican las secuencias deseadas.
Para a largo plazo, la producción de alto rendimiento de proteínas recombinantes , la expresión estable se prefiere generalmente. Por ejemplo, las líneas celulares que expresan de forma estable un polinucleótido de interés se transforman usando vectores de expresión que contienen orígenes virales de replicacion y/o elementos de expresión endógenos y un gen marcador seleccionable en el mismo o en un vector separado. Tras la introducción del vector, las células se dejaron crecer durante 1-2 días en un medio enriquecido antes de que se cambien a un medio selectivo. El propósito del marcador seleccionable es conferir resistencia a la selección, y su presencia permite el crecimiento y recuperación de células que expresan con éxito las secuencias introducidas. Los clones resistentes de células transformadas de forma estable se proliferar usando técnicas de cultivo de tejidos apropiadas para el tipo de célula.
Una pluralidad de sistemas de selección se utilizan para recuperar líneas celulares transformadas. Estos incluyen, pero no se limitan a, el virus herpes simple timidina quinasa (Wigler, M. et al (1977) Cell 11:223-32.) Y adenina fosforribosiltransferasa (Lowy, I. (1990) Cell 22 et al.: 817-23) los genes que se emplean en aprt-tk-o, respectivamente. También, resistencia a antimetabolitos , antibióticos o herbicidas se utiliza como la base para la selección, por ejemplo, dhfr, que confiere resistencia al metotrexato (Wigler, M. et al (1980) Proc Nati Acad Sci 77:3567-70), npt, que confiere resistencia a la aminoglucósidos , neomicina y G-418 (Colbere-Garapin, F. et al (1981). J. Mol Biol . 150:1-14);.. y ais o pat, que confieren resistencia a clorsulfurón y fosfinotricina acetiltransferasa, respectivamente (Murry, supra) . Genes seleccionables adicionales se han descrito. Por ejemplo, trpB permite a las células utilizar indol en lugar de triptófano, hisD y permite a las células utilizar histinol en lugar de histidina (Hartman, SC y RC Mulligan (1988) Proc. Nati. Acad. Sci.. 85:8047-51). El uso de marcadores visibles ha ganado popularidad con marcadores tales como antocianinas , beta-glucuronidasa y su sustrato GUS, y luciferasa y su sustrato luciferina, siendo ampliamente utilizado no sólo para identificar transformantes, sino también para ' cuantificar la cantidad de expresión transitoria o estable de proteínas atribuible a un sistema específico de vector (Rhodes, CA et al. (1995) Métodos Mol. Biol. 55:121-131) .
A pesar de la presencia/ausencia de expresión del gen marcador sugiere que el gen de interés también está presente, se confirma su presencia y expresión. Por ejemplo, si la secuencia que codifica un polipéptido se inserta dentro de una secuencia de gen marcador, las células recom inantes que contienen secuencias se identifican por la ausencia de función del gen marcador. Alternativamente, un gen marcador se coloca en tándem con una secuencia que codifica el polipéptido bajo el control de un único promotor. La expresión del gen marcador en respuesta a la inducción o selección usualmente indica la expresión del gen en tándem también.
Alternativamente, las células huésped que contienen y expresan una secuencia polinucleotídica deseada son identificados por una variedad de procedimientos conocidos por los técnicos en la materia. Estos procedimientos incluyen, pero no se limitan a, ADN-ADN o ADN-ARN hibridaciones y técnicas de bioensayo o inmunoensayo de proteínas que incluyen, por ejemplo, tecnologías basadas en membrana, solución o chip para la detección y/o cuantificación de ácido nucleico o proteína.
Una variedad de protocolos para detectar y medir la expresión de productos de polinucleótidos codificados, utilizando ya sea anticuerpos policlonales o monoclonales específicos para el producto son conocidos en la técnica. Ejemplos no limitantes incluyen ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) , radioinmunoensayo (RIA) , y la fluorescencia de células activadas (FACS) . Se prefiere un-inmunoensayo de dos sitios basado en monoclonales que utiliza anticuerpos monoclonales reactivos a dos epítopos no . interferentes en un polipéptido dado para algunas aplicaciones, pero un ensayo de unión competitiva también se puede emplear. Estos y otros ensayos se describen, entre otros lugares, en Hampton, R. et al. (1990, Métodos serológicos, a Laboratory Manual, APS Press, St Paul Minn.) Y Maddox, DE et al. (1983; J. Exp. Med. 158:1211-1216).
Diversas etiquetas y técnicas de conjugación son conocidos por los técnicos en la materia y se utilizan en diversos ensayos de ácidos nucleicos y aminoácidos. Los medios para producir hibridación o de PCR sondas marcadas para detectar secuencias relacionadas con polinucleótidos incluyen oligomarcaje, desplazamiento de mella, mareaje terminal o amplificación por PCR usando un nucleótido marcado. Alternativamente, las secuencias, o cualquier porción de los mismos se clonan en un vector para la producción de una sonda de ARNm. Tales vectores son conocidos en la técnica, están disponibles comercialmente, y se utilizan para sintetizar sondas de ARN in vitro mediante la adición de una ARN polimerasa apropiada tal como T7 , T3 , o SP6 y nucleótidos marcados. Estos procedimientos se llevan a cabo usando una variedad de kits disponibles comercialmente. Las moléculas indicadoras adecuadas o etiquetas, que se utilizan incluyen, pero no se limitan a, radionucleidos , enzimas, fluorescentes, quimioluminiscentes , o agentes cromogénicos , así como sustratos, cofactores, inhibidores, partículas magnéticas, y similares.
El polipéptido producido por una célula recombinante se secreta o contenido intracelularmente dependiendo de la secuencia y/o el vector usado. Los vectores de expresión que contienen polinucleótidos de la invención están diseñados para contener secuencias señal que dirigen la secreción del polipéptido codificado a través de una membrana celular procariota o eucariota.
En ciertas modalidades, un polipéptido de la invención se produce como un polipéptido de fusión que incluye además un dominio de polipéptido que facilita la purificación de proteínas solubles. Tales dominios de purificación-facilitar incluyen, pero no se limitan a, péptidos quelantes de metales tales como módulos de histidina-triptófano que permiten la purificación sobre metales inmovilizados, dominios de proteína A que permiten la purificación sobre inmunoglobulina inmovilizada, y el dominio utilizado en la purificación de extensión/afinidad FLAGS sistema (Amgen, Seattle, WA) . La inclusión de secuencias de engarce escindibles tales como las específicas para el Factor XA o enteroquinasa (Invitrogen. San Diego, CA) entre el dominio de purificación y el polipéptido codificado se utilizan para facilitar la I 504 purificación. Un vector de expresión a modo de ejemplo proporciona la expresión de una proteína de fusión que contiene un polipeptido de interés y un ácido nucleico que codifica 6 residuos de histidina que preceden una tioredoxina o un sitio de escisión de enteroquinasa . Los residuos de histidina facilitan la purificación en IMIAC (cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados) como se describe en Porath, J. et al. Mientras que el sitio de escisión de enteroquinasa proporciona un medio para purificar el polipeptido deseado a partir de la proteína de fusión (1992, Prot. Exp. Purif. 3:263-281). Una discusión de los vectores utilizados para la producción de proteínas de fusión se proporciona en Kroll, DJ et al. (1993; DNA Cell Biol . 12:441-453.). · En ciertas modalidades, un polipéptido de la presente invención se fusiona con un polipéptido heterólogo, que puede ser una secuencia señal u otro polipéptido que tiene un sitio de escisión específico en el extremo N-terminal de la proteína madura o polipéptido. La secuencia señal heteróloga seleccionada preferiblemente es una que es reconocida y procesada (es decir, cortada por una peptidasa señal) por la célula huésped. Para las células huésped procariotas, se selecciona la secuencia señal, por ejemplo, del grupo de la fosfatasa alcalina, la penicilinasa, 1 pp, o la enterotoxina II estable al calor líderes. Para la secreción en levaduras, la secuencia señal se selecciona de entre, por ejemplo, el guía de la invertasa de levadura, guía del factor a (incluyendo líderes del factor de Saccharomyces y Kluyveromyces a) , o el guía de la fosfatasa ácida, las C. albicans glucoamilasa guía, o la señal descrita en el documento O 90/13646. En la expresión de células de mamíferos, las secuencias señal de mamífero así como los líderes secretores virales, por ejemplo, simple señal de herpes gD, están disponibles.
Cuando se utilizan técnicas recombinantes , el polipéptido o el anticuerpo se produce intracelularmente, en el espacio periplásmico, o secretarse directamente en el medio. Si el polipéptido o anticuerpo se produce intracelularmente, como un primer paso, los restos de partículas, bien células huésped o fragmentos lisados , se eliminan, por ejemplo, mediante centrifugación o ultrafiltración . Cárter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992) describen un procedimiento para aislar anticuerpos que se secretan al espacio periplásmico de E. coli. Brevemente, la pasta celular se descongela en presencia de acetato de sodio (pH 3,5), EDTA, y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) durante aproximadamente 30 min. Los restos celulares se eliminaron por centrifugación. • Cuando el polipéptido o el anticuerpo se secreta en el medio, los sobrenadantes de dichos sistemas de expresión generalmente se concentran en primer lugar utilizando un filtro de concentración de proteínas disponible comercialmente, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Millipore Pellicon. Opcionalmente, un inhibidor de la proteasa como el PMSF está incluido en cualquiera de los pasos anteriores para inhibir la proteólisis y los antibióticos se incluyen para prevenir el crecimiento de contaminantes adventicios .
La composición de polipéptido o anticuerpo preparado a partir de las células se purificó usando, por ejemplo, cromatografía de hidroxilapatita, electroforesis en gel, diálisis, y cromatografía de afinidad, cromatografía de afinidad con siendo la técnica de purificación preferida. La idoneidad de la proteína A como ligando de afinidad depende de la especie y el isotipo de cualquier dominio Fe de inmunoglobulina que está presente en el polipéptido o anticuerpo. La proteína A se utiliza para purificar anticuerpos o fragmentos de los mismos que se basan en humano y y 1 , 2 , o y 4 cadenas pesadas (Lindmark et al., J. Immunol. Meth 62:1-13 (1983)). La proteína G se recomienda para todos los isotipos de ratón y para ? humana 3 (Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)). La matriz a la que se une el ligando de afinidad es frecuentemente agarosa, pero hay otras matrices disponibles. Las matrices mecánicamente estables, tales como vidrio de poro controlado o poli (estirenodivinil) benceno permiten velocidades de flujo más rápidas y tiempos de procesamiento más cortos que se pueden conseguir con agarosa. Cuando el polipéptido o el anticuerpo comprende un dominio CH 3 , la resina Bakerbond ABX™ (JT Baker, Phillipsburg, NJ) es útil para la purificación. Otras técnicas para la purificación de proteínas tales como el fraccionamiento en una columna de intercambio iónico, precipitación con etanol, HPLC de Fase Inversa, cromatografía en sílice, cromatografía en cromatografía™ de heparina sefarosa en un anión o resina de intercambio catiónico (tal como una columna de ácido poliaspártico) , cromatoenfoque, SDS-PAGE, y precipitación con sulfato amónico también están disponibles dependiendo del polipéptido o anticuerpo que debe recuperarse.
Después de cualquier etapa de purificación preliminar (s) , la mezcla que comprende el polipéptido o anticuerpo de interés y los contaminantes se sometió a cromatografía de interacción hidrofóbica de pH bajo utilizando un tampón de elución a un pH entre aproximadamente 2.5 a 4.5, preferiblemente realizado a bajas concentraciones de sal (por ejemplo, desde aproximadamente sal 0,25 M-0) .
Composiciones farmacéuticas La invención incluye además formulaciones farmacéuticas que incluyen un polipéptido, anticuerpo, o modulador de la presente invención, en un grado de pureza deseado, y un portador farmacéuticamente aceptable, excipiente, o estabilizador (Ciencias Farmacéuticas 16 a edición de Remingion, Osol, A. ed (1980) ) . En ciertas modalidades, las formulaciones farmacéuticas se preparan para mejorar la estabilidad del polipéptido o anticuerpo durante el almacenamiento, por ejemplo, en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas.
Los portadores aceptables, excipientes, o estabilizadores aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen, por ejemplo, tampones tales como acetato, Tris, fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencil amonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, butilo o alcohol bencílico; alquil parabenos tales como metil o propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol ; 3-pentanol, y m-cresol); bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos) polipéptidos de peso; proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina, o inmunoglobulinas ; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona ; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos , disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo la glucosa, mañosa, o dextrinas, agentes quelantes tales como EDTA; tonificantes tales como trealosa y cloruro de sodio; azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; tensioactivo tal como polisorbato; contra-iones formadores de sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo complejos de Zn-proteina) , y/o tensioactivos no iónicos tales como TWEEN™, PLURONICS™ o polietilenglicol (PEG) . En ciertas modalidades, la formulación terapéutica comprende preferiblemente el polipéptido o anticuerpo a una concentración de entre 5-200 mg/ml, preferiblemente entre 10-100 mg/ml .
Las formulaciones de la presente invención también contienen uno o más agentes terapéuticos adicionales adecuados para el tratamiento de la indicación particular, por ejemplo, la infección que se está tratando, o para evitar efectos secundarios no deseados. Preferiblemente, el agente terapéutico adicional tiene una actividad complementaria al polipéptido o anticuerpo de la invención vuelto a enviar, y los dos no afectan adversamente entre sí. Por ejemplo, además del polipéptido o anticuerpo de la invención, un anticuerpo adicional o segundo, agente anti-viral, agente anti-infeccioso y/o cardioprotector se añade a la formulación. Dichas moléculas están presentes adecuadamente en la formulación farmacéutica en cantidades que son eficaces para el propósito pretendido.
Los ingredientes activos, por ejemplo, polipéptidos y anticuerpos de la invención y otros agentes terapéuticos, también están atrapados en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas polymethylmethacylate) , respectivamente, en sistemas de liberación de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nanopartículas y nanocápsulas ) o en macroemulsiones . Tales técnicas se describen en Pharmaceutical Sciences 16a edición de Remingion, Osol, A. Ed. (1980).
Se preparan preparaciones de liberación sostenida. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen, pero no se limitan a, matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el anticuerpo, matrices que están en forma de artículos conformados, por ejemplo, películas, o microcápsulas. Ejemplos no limitativos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2-hidroxietil-metacrilato) , o poli (alcohol vinílico) ) , polilactidas (. Patente de E.U. No. 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y etil ?-L-glutamato, acetato no degradable de etileno-vinilo, copolímeros degradables de ácido láctico-ácido glicólico tales como el LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida) , y poli-D- (-) -3-hydroxyburyric ácido.
Las formulaciones que se utilizarán para la administración in vivo son preferiblemente estériles. Esto se consigue fácilmente mediante filtración a través de membranas de filtración estériles.
Usos de diagnóstico Los anticuerpos y fragmentos de los mismos, y composiciones terapéuticos, de la invención se unen específicamente o se unen preferentemente a las células o tejidos infectados, en comparación con las células control normales y el tejido. Por lo tanto, estos anticuerpos de la influenza A se utilizan para detectar las células o tejidos infectados en un paciente, muestra biológica, o población de células, usando cualquiera de una variedad de métodos de diagnóstico y pronóstico, incluyendo los descritos en el presente documento. La capacidad de un anticuerpo específico anti-M2e o anti-HA para detectar células infectadas depende de su especificidad de unión, que se determina fácilmente por la comprobación de su capacidad para unirse a las células infectadas o tejidos obtenidos de diferentes pacientes, y/o de pacientes infectados con diferentes cepas de la influenza A.
Los métodos de diagnóstico generalmente implican poner en contacto una muestra biológica obtenida de un paciente, tales como, por ejemplo, sangre, suero, saliva, orina, esputo, una muestra de hisopo celular, o una biopsia de tejido, con una influenza A, por ejemplo, monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA, y determinar si el anticuerpo se une preferentemente a la muestra en comparación con una muestra de control o valor de corte predeterminado, indicando de este modo la presencia de las células infectadas. En modalidades particulares, al menos de dos veces, tres veces, o cinco veces más humano monoclonal anti-M2e o anti-HA anticuerpo se une a una célula infectada en comparación con una célula normal de control apropiado o muestra de tejido. Un valor de corte predeterminado se determina, por ejemplo, haciendo un promedio de la cantidad de anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anticuerpo anti-HA que se une a varios diferentes muestras de control apropiado en las mismas condiciones utilizadas para llevar a cabo el ensayo de diagnóstico de la muestra biológica se está probando. Alternativamente, o además, una proteína hemaglutinina (HA) es sustituido por un virus de la influenza en el método anterior. La proteína HA se presenta en la superficie de un virus, célula huésped (por ejemplo, cualquier célula de mamífero), o en una forma recombinante y soluble. En la versión de HA de este método de diagnóstico, la proteína de control es una proteína desnaturalizada de HA, un péptido HA lineal, una proteína no relacionada de tamaño y forma similar, pero diferente secuencia, o un valor de corte predeterminado .
El anticuerpo unido se detecta usando procedimientos descritos en el presente documento y conocidos en la técnica. En ciertas modalidades, los métodos de diagnóstico de la invención se practican usando monoclonal humano anticuerpos anti-M2e o anti-HA que se conjuga a un marcador detectable, por ejemplo, un fluoróforo, para facilitar la detección del anticuerpo unido. Sin embargo, también se practican usando métodos de detección secundaria de la monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA. Estos incluyen, por ejemplo, RIA, ELISA, precipitación, aglutinación, fijación del complemento y de inmuno- fluorescencia .
En ciertos procedimientos, los anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anti-HA se etiquetan. El marcador se detecta directamente. Ejemplos de etiquetas que se detectan directamente incluyen, pero no se limitan a, marcadores radiactivos y fluorocromos . Alternativamente, o además, las etiquetas son restos, tales como enzimas, que deben reaccionar o derivatizarse para ser detectados. Ejemplos no limitantes de las etiquetas de isótopos son 99Tc, 14C, 1311, 1251, 3H, 32P y 35S. Los materiales fluorescentes que se utilizan incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, fluoresceína y sus derivados, rodamina y sus derivados, auramina, dansilo, umbeliferona, Luciferia, 2 , 3-dihidroftalazinadionas , peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, lisozima, y la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa .
Una etiqueta de enzima se detecta por cualquiera de las técnicas colorimétricas actualmente utilizado, espectrofotométrico , fluorospectro-fotometricas o gasométricas . Muchas enzimas que se utilizan en estos procedimientos son conocidos y utilizados por los métodos de la invención. Los Ejemplos no limitantes son la peroxidasa, fosfatasa alcalina, ß-glucuronidasa, ß-D-glucosidasa, ß-D-galactosidasa, ureasa, glucosa oxidasa más peroxidasa, galactosa oxidasa más peroxidasa y fosfatasa ácida .
Los anticuerpos etiquetados con tales etiquetas por métodos conocidos. Por ejemplo, los agentes de acoplamiento tales como aldehidos, carbodiimidas , dimaleimida, imidatos, succinimidas , benzadine oferta-diazotizada y similares se utilizan para etiquetar los anticuerpos con el anteriormente descrito fluorescentes, quimioluminiscentes , enzimas y etiquetas. Una enzima se combina típicamente con un anticuerpo utilizando moléculas puente tales como carbodiimidas , peryodato, diisocianatos , glutaraldehído y similares. Diversas técnicas de etiquetado se describen en Morrison, Métodos en Enzimología 32b, 103 (1974), Syvanen et al., J. Biol. Chem. 284, 3762 1973) y Bolton y Hunter, Biochem J. 133, 529 (1973).
El monoclonal humano anti-M2e o anti-HA anticuerpos de la presente invención son capaces de diferenciar entre pacientes con y pacientes sin una infección de influenza A, y la determinación de si o no un paciente tiene una infección, usando los ensayos representativos proporcionados en el presente. Según un método, una muestra biológica se obtiene de un paciente sospechoso de tener o sabe que tienen una infección por influenza A. En modalidades preferidas, la muestra biológica incluye células del paciente. La muestra se pone en contacto con un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA, por ejemplo, durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para permitir que el monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA de unirse a células infectadas presentes en la muestra. Por ejemplo, la muestra se pone en contacto con un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA ' para 10 segundos, 30 segundos, 1 minuto, 5 minutos, 10 minutos, 30 minutos, 1 hora, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 3 días o cualquier punto en el medio. La cantidad de anticuerpo monoclonal humano anti-unido M2e o anticuerpo anti-HA se determina y compara con un valor de control, que puede ser, por ejemplo, un valor predeterminado o un valor determinado a partir de muestra de tejido normal. Un aumento de la cantidad de anticuerpo unido a la muestra del paciente en comparación con la muestra de control es indicativo de la presencia de células infectadas en la muestra del paciente.
En un método relacionado, una muestra biológica obtenida de un paciente se pone en contacto con un anticuerpo monoclonal humano anti- 2e o anticuerpo anti-HA para un tiempo y bajo condiciones suficientes para permitir que el anticuerpo se una a las células infectadas. A continuación, se detecta el anticuerpo unido, y la presencia de anticuerpo unido indica que la muestra contiene células infectadas. Esta modalidad es particularmente útil cuando el monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA no se une a las células normales a un nivel detectable.
Los diferentes anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anti-HA poseen diferentes características de unión y especificidad. Dependiendo de estas características, en particular anticuerpos monoclonales anti-M2e o anti-HA humanos se utilizan para detectar la presencia de una o más cepas de la influenza A. Por ejemplo, ciertos anticuerpos se unen específicamente a sólo una o varias cepas de virus de la influenza, mientras que otras unirse a la totalidad o una mayoría de diferentes cepas de virus de la influenza. Los anticuerpos específicos para sólo una cepa de la influenza A se utilizan para identificar la cepa de una infección.
En ciertas modalidades, los anticuerpos que se unen a una célula infectada generan preferentemente una señal que indica la presencia de una infección en al menos aproximadamente el 20% de los pacientes con la infección que se detecta, más preferiblemente al menos aproximadamente 30% de los pacientes. Alternativamente, o además, el anticuerpo genera una señal negativa que indica la ausencia de la infección en al menos aproximadamente el 90% de los individuos sin la infección que se está detectado. Cada anticuerpo satisface los criterios anteriores, sin embargo, los anticuerpos de la presente invención se utilizan en combinación para mejorar la sensibilidad.
La presente invención también incluye kits útiles en la modalidad de ensayos de diagnóstico y pronóstico usando los anticuerpos de la presente invención. Los kits de la invención incluyen un recipiente adecuado que comprende un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA de la invención en forma ya sea marcado o no marcado. Además, cuando el anticuerpo se suministra en una forma marcada adecuado para un ensayo de unión indirecta, el equipo incluye además reactivos para realizar el ensayo indirecto apropiado. Por ejemplo, el equipo incluye uno o más recipientes adecuados que incluyen sustratos de enzimas o agentes de derivación, dependiendo de la naturaleza de la etiqueta. También se incluyen muestras de control y/o instrucciones.
Usos terapéuticos/profilácticos La inmunización pasiva ha demostrado ser una estrategia efectiva y seguro para la prevención y el tratamiento de enfermedades virales. (Ver Keller et al, Clin Microbiol Rev. 13:602-14 (2000); Casadevall, Nat Biotechnol 20:114 (2002); Shibata et al, Nat. Med. 5:204-10 (1999); y Igarashi et al, Nat. Med. 5:211-16 (1999), cada uno de los cuales se incorporan en el presente por referencia) ) . La inmunización pasiva con anticuerpos monoclonales humanos proporciona una estrategia de tratamiento inmediato para la profilaxis de emergencia y tratamiento de la influenza.
El monoclonal humano anti-M2e o anti-HA anticuerpos y fragmentos de los mismos, y composiciones terapéuticos, de la invención se unen específicamente o preferentemente se unen a las células infectadas, en comparación con las células no infectadas de control normales y el tejido. Por lo tanto, estos anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anti-HA se utilizan para atacar selectivamente las células infectadas o tejidos en un paciente, muestra biológica, o población de células. A la luz de las propiedades de unión de la infección específica de estos anticuerpos, la presente invención proporciona métodos para regular (por ejemplo, inhibir) el crecimiento de las células infectadas, los métodos de matar las células infectadas, y métodos de inducción de la apoptosis de las células infectadas. Estos métodos incluyen poner en contacto una célula infectada con un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA de la invención. Estos métodos se practican in vitro, ex vivo, e in vivo .
En diversas modalidades, los anticuerpos de la invención son intrínsecamente terapéuticamente activo. Alternativamente, o además, los anticuerpos de la invención se conjugan a un agente citotóxico o agente inhibidor del crecimiento, por ejemplo, un radioisótopo o una toxina, que se utiliza en el tratamiento de las células infectadas con destino o contactadas por el anticuerpo.
En una modalidad, la invención proporciona métodos para tratar o prevenir la infección en un paciente, incluyendo los pasos de proporcionar un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA de la invención a un paciente diagnosticado con, en riesgo de desarrollar, o se sospecha que tiene una infección de influenza A. Los métodos de la invención se utilizan en el tratamiento de primera línea de la infección, el seguimiento en el tratamiento, o en el tratamiento de una infección en recaída o refractario. El tratamiento con un anticuerpo de la invención es un tratamiento independiente. Alternativamente, el tratamiento con un anticuerpo de la invención es un componente o fase de un régimen de terapia de combinación, caracterizado porque uno o más agentes terapéuticos adicionales también se utilizan para tratar al paciente .
Los sujetos con riesgo para una enfermedad o trastornos relacionados con los virus de la influenza incluyen a pacientes que hayan estado en contacto con una persona infectada o que han estado expuestos al virus de la influenza en alguna otra forma. La administración de un agente profiláctico puede ocurrir antes de la manifestación de los síntomas característicos de la enfermedad relacionada con el virus de la influenza o trastorno, tal que una enfermedad o trastorno se evita o, alternativamente, retraso en su progresión.
En varios aspectos, la monoclonal humano anti-M2e o anti-HA se administran considerablemente simultáneamente con o después de la infección del sujeto, es decir, tratamiento terapéutico. En otro aspecto, el anticuerpo proporciona un beneficio terapéutico. En varios aspectos, un beneficio terapéutico incluye la reducción o disminución de la progresión, gravedad, frecuencia, duración o probabilidad de uno o más síntomas o complicaciones de la infección de la influenza, el título de virus, la replicación del virus o una cantidad de una proteína viral de una o más cepas de la influenza. Todavía en otro aspecto, un beneficio terapéutico incluye acelerar o acelerar la recuperación de un sujeto a partir de la infección por influenza.
Los métodos para la prevención de un aumento en el título de virus de la influenza, la replicación del virus, la proliferación de virus o una cantidad de una proteína viral de la influenza en un sujeto se proporcionan más. En una modalidad, un método incluye administrar al sujeto una cantidad de un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA efectivo para prevenir un aumento en el título de virus de la influenza, la replicación del virus o una cantidad de una proteína viral de la influenza de uno o más de influenza cepas y aislados en el tema .
Los métodos para la protección de un sujeto contra la infección o la disminución de la susceptibilidad de un sujeto a la infección por una o más cepas de la influenza/aisla o subtipos, es decir, métodos profilácticos, se proporcionan adicionalmente . En una modalidad, un método incluye administrar al sujeto una cantidad de anticuerpos monoclonales humanos anti-M2e o anticuerpo anti-HA de la influenza que se une específicamente M2 o HA, respectivamente, eficaz para proteger al sujeto de la infección, o eficaz para disminuir la susceptibilidad del sujeto a la infección, por una o más cepas de la influenza/o aislados de subtipos.
Opcionalmente, el sujeto se administra adicionalmente con un segundo agente, tal como, pero no limitado a, un anticuerpo virus de la influenza, un fármaco anti-viral tal como un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico o un ion M2 inhibidor de canal, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral . El inhibidor del canal iónico M2 es, por ejemplo amantadina o rimantadina. El inhibidor de la neuraminidasa por ejemplo zanamivir u oseltamivir fosfato .
Los síntomas o las complicaciones de · la infección de la influenza que puede ser reducido o disminuido incluir, por ejemplo, escalofríos, fiebre, tos, dolor de garganta, congestión nasal, congestión nasal, infección nasal, sinusitis, dolor de cuerpo, dolor de cabeza, la fatiga, la neumonía, bronquitis, infecciones del oído, dolor de oído o la muerte.
Para el tratamiento in vivo de pacientes humanos y no humanos, el paciente se administra generalmente o se proporciona una formulación farmacéutica que incluye un anticuerpo monoclonal humano anti-M2e o anticuerpo anti-HA de la invención. Cuando se usa para terapia in vivo, los anticuerpos de la invención se administran al paciente en cantidades terapéuticamente eficaces (es decir, cantidades que eliminan o reducen la carga viral del paciente) . Los anticuerpos se administran a un paciente humano, de acuerdo con métodos conocidos, tales como administración intravenosa, por ejemplo, como un bolo o mediante infusión continua durante un período de tiempo, por vía intramuscular, intraperitoneal , intracerebroespinal , subcutánea, intra-articular, intrasinovial , , las vías oral, tópica o por inhalación intratecal . Los anticuerpos se pueden administrar por vía parenteral, cuando sea posible, en el lugar de la célula objeto, o intravenosa. Se prefiere la administración intravenosa o subcutánea del anticuerpo en ciertas modalidades. Las composiciones terapéuticas de la invención se administran a un paciente o sujeto sistémicamente , parenteral, o localmente.
Para la administración parenteral, los anticuerpos se formulan en una dosis unidad de forma inyectable (solución, suspensión, emulsión) en asociación con un portador farmacéuticamente, portador parenteral aceptable. Ejemplos de tales portadores son agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y 5% de albúmina de suero humano. También se utilizan portadores no acuosos tales como aceites fijos y oleato de etilo. Los liposomas se utilizan como portadores. El portador contiene cantidades menores de aditivos tales como sustancias que potencian la isotonicidad y la estabilidad química, por ejemplo, tampones y conservantes. Los anticuerpos se formulan típicamente en tales portadores a concentraciones de aproximadamente 1 mg/ml a 10 mg/ml.
El régimen de dosis y la dosis depende de una variedad de factores determinados fácilmente por un médico, tales como la naturaleza de la infección y las características del agente citotóxico en particular o agente inhibidor del crecimiento conjugado con el anticuerpo (cuando se usa) , por ejemplo, su índice terapéutico, el paciente, y la historia del paciente. Generalmente, una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo se administra a un paciente. En modalidades particulares, la cantidad de anticuerpo administrado está en el intervalo de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal del paciente.
Dependiendo del tipo y gravedad de la infección, aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal (por ejemplo, aproximadamente 0,1-15 mg/kg/dosis) de anticuerpo es una dosis candidata inicial para la administración al paciente, ya sea, por ejemplo, mediante una o más administraciones separadas, o mediante infusión continua. El progreso de esta terapia se monitoriza fácilmente mediante métodos y ensayos convencionales y basados en criterios conocidos por el médico u otras personas expertas en la técnica.
En una modalidad particular, un inmunoconjugado incluyendo el anticuerpo conjugado con un agente citotoxico se administra al paciente. Preferiblemente, el inmunoconjugado es internalizado por la célula, resultando en una mayor eficacia terapéutica del inmunoconjugado en matar a la célula a la que se une. En una forma de modalidad, los objetivos de agente citotoxico o interfiere con el ácido nucleico en la célula infectada. Ejemplos de dichos agentes citotóxicos se han descrito anteriormente e incluyen, pero no se limitan a, maitansinoides , calicheamicinas , ribonucleasas y endonucleasas de ADN.
Otros regímenes terapéuticos se combinan con la administración del anticuerpo HuM2e de la presente invención. La administración combinada incluye la coadministración, utilizando formulaciones separadas o una única formulación farmacéutica, y la administración consecutiva en cualquier orden, donde preferiblemente hay un periodo de tiempo, mientras que ambos (o todos) los agentes activos ejercen simultáneamente sus actividades biológicas. Resultados de la terapia Preferiblemente tales combinadas en un efecto terapéutico sinérgico.
En ciertas modalidades, es deseable combinar la administración de un anticuerpo de la invención con otro anticuerpo dirigido contra otro antígeno asociado con el agente infeccioso.
Aparte de la administración de la proteína anticuerpo al paciente, la invención proporciona métodos para la administración del anticuerpo mediante terapia génica. Tal administración de ácido nucleico que codifica el anticuerpo es abarcada por la expresión " administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo". Véase, por ejemplo, la Solicitud de Patente PCT WO96/07321 de publicación sobre el uso de la terapia génica para generar anticuerpos intracelulares .
En otra forma de modalidad, los anticuerpos humanos monoclonales anti-M2e o anti-HA de la invención se utilizan para determinar la estructura de antígeno unido, por ejemplo, los epítopos conformacionales , la estructura de los cuales se utiliza entonces para desarrollar una vacuna que tiene o imitando esta estructura, por ejemplo, a través del modelado químico y métodos de SAR. Dicha vacuna podría entonces ser utilizada para prevenir la infección de la influenza A.
Todas las patentes anteriores de los Estados Unidos, las publicaciones de solicitudes de patentes de los Estados Unidos, las solicitudes de patentes de los Estados Unidos, las patentes extranjeras, solicitudes de patentes extranjeras y publicaciones no patentes mencionadas en esta descripción y/o las recogidas en los Datos Sheetare Aplicación incorporada en el presente como referencia, en su totalidad.
EJEMPLOS Ejemplo 1: Selección y caracterización de anticuerpos 2e específicos presentes en el plasma humano utilizando células que expresan Proteína M2e recombinante Se identificaron anticuerpos monoclonales totalmente humanos específicos para M2 y capaces de unirse a la influenza A las células infectadas y el propio virus de la influenza en el suero del paciente, como se describe a continuación.
Expresión de M2 en líneas celulares Una construcción de expresión que contiene el ADNc de longitud completa M2 , que corresponde a la secuencia de M2 derivada encontrado en la influenza subtipo H3N2, se transfectó en células 293.
El ADNc de M2 está codificado por la siguiente secuencia de polinucleótidos y la SEQ ID NO: 53.
ATGAGTCTTCTAACCGAGGTCGAAACGCCTATCAGAAACGAATGGGGGTGCAGATGCAA CGATTCAAGTGATCCTCTTGTTGTTGCCGCAAGTATCATTGGGATCCTGCACTTGATAT TGTGGATTCTTGATCGTCTTTTTTTCAAATGCATTTATCGTCTCTTTAAACACGGTCTG AAAAGAGGGCCTTCTACGGAAGGAGTACCAGAGTCTATGAGGGAAGAATATCGAAAGGA ACAGCAGAGTGCTGTGGATGCTGACGATAGTCATTTTGTCAACATAGAGCTGGAG La expresión en la superficie celular de M2 fue confirmado utilizando el anti-péptido M2e MAb específico 14C2. Otras dos variantes de M2 , de la A/Hong Kong/483 /1997 (HK483) y A/Vietnam/1203/2004 (VN1203), se utilizaron para los análisis posteriores, y su expresión se determinó usando anticuerpos monoclonales M2e específicos de la presente invención, ya 14C2 unión puede ser derogada por las diversas sustituciones de aminoácidos en M2e.
Detección de anticuerpos en la sangre periférica Más de 120 muestras de plasma individuales se realizarán las pruebas de anticuerpos que se unen M2. Ninguno de ellos mostró la unión al péptido M2e específica. Sin embargo, 10% de las muestras de plasma contenía anticuerpos que se unen específicamente a la línea celular H3N2 293-M2. Esto indica que los anticuerpos podrían ser categorizados como la unión a determinantes conformacionales de un homotetrámero M2 , y la unión a factores determinantes conformacionales de múltiples variantes de la homotetrámero M2; no podían ser específicos para el péptido M2e lineal.
Caracterización de mAbs anti-M2 Los MAbs humanos identificados a través de este proceso demostraron que se unen a epítopos conformacionales en la homotetrámero M2. Ellos unidos a la original transfectante 293-M2, así como para las otras dos variantes de células M2-expresado . El MAb 14C2, además de unirse el péptido M2e, demostró ser más sensibles a las secuencias variantes M2. Por otra parte, 14C2 no se une fácilmente viriones de la influenza, mientras que la conformación específica anti-M2 AcMs hizo.
Estos resultados demuestran que los métodos de la invención proporcionan la identificación de los MAb M2 de respuestas inmunes humanos normales a la influenza sin la necesidad de la inmunización específica de M2. Si se utiliza para la inmunoterapia, estos anticuerpos monoclonales completamente humanos tienen el potencial de ser mejor tolerado por los pacientes que la humanización de anticuerpos de ratón. Además, y en contraste con 14C2 y los Gemini Biosciences MAb, que se unen a lineal péptido M2e, los anticuerpos monoclonales de la invención se unen a epítopos conformacionales de M2, y son específicos, no sólo para las células infectadas con una cepa de influenza, sino también para el virus en sí. Otra ventaja de los anticuerpos monoclonales de la invención es que cada uno de ellos se unen todas las variantes de la M2 probado todavía, lo que indica que no se limitan a una secuencia lineal de aminoácidos específica.
Ejemplo 2: Identificación de anticuerpos M2-específicas Las células mononucleares o B que expresan tres de los anticuerpos monoclonales identificados en el suero humano como se describe en el Ejemplo 1 se diluyeron en poblaciones clónales y se indujeron para producir anticuerpos. El anticuerpo que contiene sobrenadantes fueron seleccionados para la unión a las células 293 FT transfectadas establemente con la proteína M2E larga duración de la cepa de la influenza de subtipo H3N2. Los sobrenadantes que mostraron tinción positiva/de unión fueron re-examinados de nuevo en 293 células FT establemente transfectadas con la proteína M2E longitud completa a partir de la influenza de cepa subtipo H3N2 y el vector de las células transfectadas solo como un control.
Las regiones variables de los anticuerpos a continuación, se clonaron a partir de rescatar a los pozos de células B cuyos sobrenadantes mostraron unión positiva. Las transfecciones transitorias se realizaron en 293 células M para reconstituir y producir estos anticuerpos. Sobrenadantes de anticuerpos reconstituidas fueron seleccionados para la unión a las células 293 transfectadas de forma estable con FT la proteína M2E de longitud completa como se detalla anteriormente para identificar los anticuerpos anti-M2E rescatados. Se identificaron tres anticuerpos diferentes: 8il0, 21B15 y 23K12. Un cuarto clon anticuerpo adicional se aisló por las pantallas de rescate, 4C2. Sin embargo, no era único y tenía la misma secuencia exacta como clon 8il0 a pesar de que se trataba de un donante diferente que 8il0 clon.
Las secuencias de la kappa y gamma regiones variables de estos anticuerpos se proporcionan a continuación.
Clon 8il0 (corresponde a TCN-032): La región variable de Kappa LC del clon 8il0 contra M2 se clonó como fragmento Hind III para BsiWl (ver más abajo) , y se codifica por las siguientes secuencias de polinucleótidos , y SEQ ID NO: 54 (parte superior) y SEQ ID NO: 55 (en la parte inferior) : AAGCTTCCACCATGGACATGAGGGTCCTCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGGTG TTCGAAGGTGGTACCTGTACTCCCAGGAGCGAGTCGAGGACCCCGAGGACGATGAGACCGAGGCTCCAC CCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCA GGTCTACACTGTAGGTCTACTGGGTCAGAGGTAGGAGGGACAGACGTAGACATCCTCTGTCTCAGTGGT TCACTTGCCGGGCGAGTCAGAACATTTACAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCC AGTGAACGGCCCGCTCAGTCTTGTAAATGTTCATAAATTTAACCATAGTCGTCTCTGGTCCCTTTCGGG CTAAGGGCCTGATCTCTGCTGCATCCGGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGAT GATTCCCGGACTAGAGACGACGTAGGCCCAACGTTTCACCCCAGGGTAGTTCCAAGTCACCGTCACCTA CTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAAC GACCCTGTCTAAAGTGAGAGTGGTAGTGGTCAGACGTTGGACTTCTAAAACGTTGAATGATGACAGTTG AGAGTTACAGTCCCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAGGGTGGAGATCAAACGTACG TCTCAATGTCAGGGGGAGAGTGAAAGCCGCCTCCCTGGTCCCACCTCTAGTTTGCATGC La traslado de la 8il0 Kappa LC región variable es la siguiente, secuencia de polinucleótido (por encima de, la SEQ ID NO: 54, la parte superior) y la secuencia de aminoácidos (a continuación, correspondiente a los residuos 1-131 de SEQ ID NO: 56) .
AAGCTTCCACCATGGACATGAGGGTCCTCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGGTG CCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCA TCACTTGCCGGGCGAGTCAGAACATTTACAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCC CTAAGGGCCTGATCTCTGCTGCATCCGGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGAT CTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAAC AGAGTTACAGTCCCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAGGGTGGAGATCAAACGTACG La secuencia de aminoácidos de la 8il0 Kappa LC región variable es la siguiente, con dominios específicos identificados por debajo (secuencias de CDR definen de acuerdo con los métodos de Kabat) : M D M R V L A Q L L G L L L L W L R G A R C VK guía (SEQ ID NO: 57) D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C FR1 (SEQ ID NO: 58) R A S Q N I Y K Y L N CDRKSEQ ID NO: 59) W Y Q Q R P G K A P K G L I S FR2 (SEQ ID NO: 60) A A S G L Q ? CDR2 (SEQ ID NO: 61) G V P S R F S G S G S G T D F T L T I T S L Q P E D F A T Y Y C FR3 (SEQ ID NO: 62) Q Q S Y S P P L T CDR3 (SEQ ID NO: 63) F G G G T R V E I K FR4 (SEQ ID NO: 64) R T Inicio de la región constante Kappa El siguiente es un ejemplo de la región variable de Kappa LC de 8il0 clonado en el vector pcDNA3.1 de expresión que ya contenía la región constante kappa LC (secuencia de polinucleotido superior corresponde a la SEQ ID NO: 65, secuencia de polinucleotido inferior corresponde a la SEQ ID No. : 66, secuencia de aminoácidos corresponde a SEQ ID NO: 56) . Las Bases en negro representan las secuencias del vector pcDNA3.1, subrayados representan las secuencias de anticuerpos clonados . Los anticuerpos descritos en el presente también se han clonado en el vector de expresión pCEP4.
La región variable 8il0 Gamma HC se clonó como un Hind III para Xho 1 fragmento, y se codifica las siguientes secuencias de polinucleótidos , y SEQ ID NO: 67 (parte superior) y SEQ ID NO: 68 (parte inferior) .
AAGCTTCCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTCCTTCTCCTGGTGGCAGCTCCCAGCTGGGT TTCGAAGGTGGTACTTTGTGGACACCAAGAAGGAAGAGGACCACCGTCGAGGGTCGACCCA CCTGTCCCAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTG GGACAGGGTCCACGTTAACGTCCTCAGCCCGGGTCCTGACCACTTCGGAAGCCTCTGGGAC TCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGC AGGGAGTGGACGTGACAGAGACCAAGCAGGTAGTCATTAATGATGACCTCGACCTAGGCCG AGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTTATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTA TCAGGGGTCCCTTCCCTGACCTCACCTAACCCAAATAGATAATGCCACCTTTGTGGTTCAT CAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAGAGTCAGGTCTCC GTTAGGGAGGGAGTTCTCGGCGCAGTGGTATAGTGTTCTGTGAAGGTTCTCAGTCCAGAGG CTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTT GACTGCTACTCGAGACACTGGCGACGCCTTAGCCGGCAGATAAAGACACGCTCTCGCAGAA GTAGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAG CATCACCACCAATGACATAGGAACTGATGACCCCGGTCCCTTGGGACCAGTGGCAGAGCTC La traslado de la 8il0 Gamma HC es el siguiente, secuencia de polinucleótido (por encima de, la SEQ ID NO: 67, la parte superior) y la secuencia de aminoácidos (a continuación, correspondiente a los residuos 1-138 de SEQ ID NO: 69) : Hindlll AAGCTTCCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTCCTTCTCCTGGTGGCAGCTCCCAGCTGGGTC K H L W F F L L L V A A P S W V CTGTCCCAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTG L S Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L TCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGG S L T C T V S G S S I S N Y Y W S W I R CAGTCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTTATCTATTACGGTGGAAACACCAAG Q S P G K G L E W I G F I Y Y G G N T TACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAGAGTCAGGTC Y N P S L K S R V T I S Q D T S K S Q V TCCCTGACGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCG S L T S S V T A A E S A V Y F C A A Xhol TCTTGTAGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTC S C S G G Y C I L D Y W G Q G T L V T V TCGAG s La secuencia de aminoácidos de la 8il0 Gamma HC es el siguiente con dominios específicos identificados por debajo (secuencias de CDR definen de acuerdo con los métodos de Kabat) : M K H L W F P L L L V A A P S W V L S guia VH (SEQ ID NO: 70) Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S S I S FRl (SEQ ID NO: 71) N Y Y W S CDR1 ( SEQ ID NO: 72) W I R Q S P G K G L E W I G FR2 (SEQ ID NO: 73) F I Y Y G G N T K Y N P S L S CDR2 (SEQ ID NO: 74) R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R FR3 (SEQ ID NO: 75) A S C S G G Y C I L D CDR3 (SEQ ID NO: 76) Y W G Q G T L V T V S FR4 (SEQ ID NO: 77) YWGQGTLVTVSS Largo FR4 (SEQ ID NO: 266) El siguiente es un ejemplo de la región variable Gamma HC de 8il0 clonado en el vector pcDNA3.1 de expresión que ya contenía la región constante gamma HC (secuencia de polinucleótido superior corresponde a la SEQ ID NO: 78, secuencia de polinucleótido inferior corresponde a la SEQ ID No.: 79, secuencia de aminoácidos corresponde a SEQ ID NO: 69). Bases Bases en negro representan secuencias pcDNA3.1 vectoriales, subrayados representan las secuencias de anticuerpos clonados .
CSÍOi w.<a(»«i «nam cíioi TGGAAACACCAAGTACAATCCCTCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAGAGT CAGG CTCCCTGAGGATGAGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCT TTTCTGTGCGAGAGCGT I— c v-, — _. ___ -T r- *— -* v s v í c —— « n- CTTGTAGTGGTGGTTACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTClJffl.tó -TJS Hf-s— s— t— s— i— s— i— »— i— c— »— j——— p— s— n— i——— o—— s— o——p—r—s— e¦¦ ¾ -* t ?t ß— ?— »— c— ?— ?— r—e— c— t— e— a—y— s— s— t—t—*— p-~v-^e~^^^-^ -~r~x w ¡ a t y a1 u ?— c — ,— ,— ¾r— g— <,— s— n—— o—— s— »— ?—— ww 11— a— o— c— ß— e— ?>—— a— ?— x— ?— ?— p 1 n f ro"'r ,G,,.,¾,¾,., .¾!,!8,¾;¾;.¾^^ -jj— s , -,— p g— j— y — ?— t— jp-,»— B" '.V"t »'("""¾— ~e— ? K C X1 V""S — w r— p— «— p— — r~T— s— — ¾— s~~¾n— R—e—— e— —— i— t— p— p— s—s— a — x— 1 o "v 1 a—— i— e K g— ; , ,5 — g g — ?G? e— Y ' T ' P V 'C "g""G"' "? r v s. x i i— ß— a— ?— s—5r-w—o— o— s— a— o— r— s— c— s— o— si— — p— t— a— n 111 r " CS5S OmoHüuSí a" ? El marco 4 (FR4) de la región gamma HC normalmente termina con dos serinas (SS) , de modo que la región llena marco 4 debe ser WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 80). La aceptación de Xho 1 sitio y una base adicional aguas abajo del sitio Xhol en el vector, caracterizado porque la región constante gamma HC que las regiones variables Gamma HC se clonan, suministra las últimas bases, que codifican este aminoácido final del marco 4. Sin embargo, el vector original no ajustar para la mutación silenciosa hecho cuando el sitio Xhol (CTCGAG , la SEQ ID NO: 81) fue creado y contenía un nucleótido " A" aguas abajo del sitio Xhol, lo que provocó un cambio de aminoácido en el extremo de marco 4: una serina a arginina (S R) Sustitución presente en todos los que trabajan clones Gamma HC. Por lo tanto, la región completa marco 4 lee WGQGTLVTVSR (SEQ ID NO: 82). Construcciones futuros se están creando el que la base aguas abajo del sitio Xho 1 es un nucleótido " C ". Por lo tanto, la creación del sitio Xho 1 utilizado para la clonación de las secuencias de la región variable de Gamma HC en modalidades alternativas es una mutación silenciosa y restaura la secuencia de marco 4 de aminoácidos para su buen WGQGTLV TVSS (SEQ ID NO: 80) . Esto es cierto para todos los clones M2 Gamma HC descritos en el presente documento .
Clon 21B15: La región variable de Kappa LC de la lucha contra M2 clon 21B15 se clonó como fragmento Hind III para BsiWl, y está codificado por las siguientes secuencias de polinucleótidos y la SEQ ID NO: 83 y SEQ ID NO: 84: AAGCTTCCACCATGGACATGAGGGTCCTCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGGTGC TTCGAAGGTGGTACCTGTACTCCCAGGAGCGAGTCGAGGACCCCGAGGACGATGAGACCGAGGCTCCACG CAGATGTGACATCCAGGTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATC GTCTACACTGTAGGTCCACTGGGTCAGAGGTAGGAGGGACAGACGTAGACATCCTCTGTCTCAGTGGTAG ACTTGCCGCGCGAGTCAGAACATTTACAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCCCCTA TGAACGGCGCGCTCAGTCTTGTAAATGTTCATAAATTTAACCATAGTCGTCTCTGGTCCCTTTCGGGGAT AGGGCCTGATCTCTGCTGCATCCGGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGG TCCCGGACTAGAGACGACGTAGGCCCAACGTTTCACCCCAGGGTAGTTCCAAGTCACCGTCACCTAGACC GACAGATTTCACTCTCACCATCACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGT CTGTCTAAAGTGAGAGTGGTAGTGGTCAGACGTTGGACTTCTAAAACGTTGAATGATGACAGTTGTCTCA TACAGTCCCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAGGGTGGATATCAAACGTACG ATGTCAGGGGGAGAGTGAAAGCCGCCTCCCTGGTCCCACCTATAGTTTGCATGC La traslado de la región variable de Kappa 21B15 LC es la siguiente, secuencia de polinucleótido (por encima de, la SEQ ID NO: 83, la parte superior) y la secuencia de aminoácidos (a continuación, correspondiente a la SEQ ID NO: 298) : AAGCTTCCACCATGGACATGAGGGTCCTCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGGT GCCAGATGTGACATCCAGGTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACC ATCACTTGCCGCGCGAGTCAGAACATTTACAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAGACCAGGGAAAGCC CCTAAGGGCCTGATCTCTGCTGCATCCGGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGA TCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCACCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAA CAGAGTTACAGTCCCCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAGGGTGGATATCAAACGTACG La secuencia de aminoácidos de la región variable de Kappa 21B15 LC es la siguiente, con dominios específicos identificados por debajo (secuencias de CDR definen de acuerdo con los métodos de Kabat) : M D R V L A Q L L G L L L L W L R G A R C guia VK (SEQ ID NO: 57) D I Q V T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C FR1 (SEQ ID NO: 58) ^ A S Q N I Y K Y L N CDRl (SEQ ID NO: 59) W Y Q Q R P G K P K G L FR2 (SEQ ID NO: 60) A A S G L Q S CDR2 (SEQ NO: 61) G V P S R F S G S G S G T D F T L T I T S L Q P E D F A T Y Y C FR3 (SEQ ID NO: 62) Q Q S Y S P P L T CDR3 (SEQ ID NO: 63) F G G G T R V D FR4 (SEQ ID NO: 64) R T Inicio de la región constante de Kappa El cebador usado para clonar la región variable de Kappa LC extendido a través de una región de la diversidad y tenía posición de la base de oscilación en su diseño. Por lo tanto, en la región marco 4 podría producirse un aminoácido D o E. En algunos casos, el aminoácido en esta posición en el anticuerpo rescatado no puede ser el aminoácido parental original que se produce en la célula B. En la mayoría de las CL kappa la posición es una E. Mirando el clon de más arriba (21B15) D en un marco 4 (DIKRT) (SEQ ID NO: 544) se observó. Sin embargo, mirando a los aminoácidos circundantes, esto puede haber ocurrido como resultado de la imprimación y puede ser un artefacto. El anticuerpo nativo de la célula B puede haber tenido una E en esta posición.
La región variable 21B15 Gamma HC se clonó como un Hind III para Xho 1 fragmento, y se codifica por las siguientes secuencias de polinucleótidos y la SEQ ID NO: 85 (superior) , y SEQ ID NO: 86 (parte inferior) : Hindlll AAGCTTCCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTCCTTCTCCTGGTGGCAGCTCCCAGCTGGGTCC TTCGAAGGTGGTACTTTGTGGACACCAAGAAGGAAGAGGACCACCGTCGAGGGTCGACCCAGG TGTCCCAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCC ACAGGGTCCACGTTAACGTCCTCAGCCCGGGTCCTGACCACTTCGGAAGCCTCTGGGACAGGG TCACCTGCACTGTCTCTGGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCCC AGTGGACGTGACAGAGACCAAGCAGGTAGTCATTAATGATGACCTCGACCTAGGCCGTCAGGG CAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTTATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCCT GTCCCTTCCCTGACCTCACCTAACCCAAATAGATAATGCCACCTTTGTGGTTCATGTTAGGGA CCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAGAGTCAGGTCTCCCTGACGATGA GGGAGTTCTCGGCGCAGTGGTATAGTGTTCTGTGAAGGTTCTCAGTCCAGAGGGACTGCTACT GCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGTAGTGGTGGTT CGAGACACTGGCGACGCCTTAGCCGGCAGATAAAGACACGCTCTCGCAGAACATCACCACCAA Xhol ACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAG TGACATAGGAACTGATGACCCCGGTCCCTTGGGACCAGTGGCAGAGCTC La traslado de la 21B15 Gamma HC es el siguiente, secuencia de polinucleótido (por encima de, la SEQ ID NO: 87, la parte superior) y la secuencia de aminoácidos (a continuación, correspondiente a los residuos 1-138 de SEQ ID NO: 69): AAGCTTCCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTCCTTCTCCTGGTGGCAGCTCCCAGCTGGGTC K H L W F F L L L V A A P S W V CTGTCCCAGGTGCAATTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCC L S Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S CTCACCTGCACTGTCTCTGGTTCGTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGTCC L T C T V S G S S I S N Y Y W S W I R Q S CCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGTTTATCTATTACGGTGGAAACACCAAGTACAATCCC P G K G L E W I G F I Y Y G G N T K Y N P TCCCTCAAGAGCCGCGTCACCATATCACAAGACACTTCCAAGAGTCAGGTCTCCCTGACGATG S L K S R V T I S Q D T S K S Q V S L T M AGCTCTGTGACCGCTGCGGAATCGGCCGTCTATTTCTGTGCGAGAGCGTCTTGTAGTGGTGGT TACTGTATCCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAG La secuencia de aminoácidos de la 21B15 Gamma HC es el siguiente, con dominios específicos identificados por debajo (secuencias de CDR definen de acuerdo con los métodos de Kabat) : M K H L W F F L L L V A A P S W V L S guía VH (SEQ ID NO: 70) Q V Q L Q E S G P G L V K P S E T L S L T C T V S G S S I S FR1 (SEQ ID NO: 71) N Y Y W S CDR1 (SEQ ID NO: 72) W I R Q S P G K G L E W I G FR2 (SEQ ID NO: 73) F I Y Y G G N T K Y N P S L K S CDR2 (SEQ ID NO: 74) R V T I S Q D T S K S Q V S L T M S S V T A A E S A V Y F C A R FR3 (SEQ ID NO: 75) A S G S G G Y C I L D CDR3 (SEQ ID NO: 76) Y W G Q G T L V T V FR4 (SEQ ID NO: 77) YWGQGTLVTVSS FR4 Largo (SEQ ID NO : 266) Clon 23K12 (corresponde a TCN-031) : La región variable de Kappa LC de la lucha contra M2 clon 23K12 se clonó como fragmento Hind III para Bsi l (ver más abajo) , y se codifica por las siguientes secuencias de polinucleótidos SEQ ID NO: 88 (parte superior) y SEQ ID NO: 89 (a continuación) .
AAGCTTCCACCATGGACATGAGGGTCCTCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGG TTCGAAGGTGGTACCTGTACTCCCAGGAGCGAGTCGAGGACCCCGAGGACGATGAGACCGAGGCTCC TGCCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC ACGGTCTACACTGTAGGTCTACTGGGTCAGAGGTAGGAGGGACAGACGTAGACATCCTCTGTCTCAG ACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGA TGGTAGTGAACGGCCTGTTCAGTCTCGTAATCGTCGATAAATTTAACCATAGTCGTCTTTGGTCCCT AAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGG TTCGGGGATTTGAGGACTAGATACGACGTAGGTCAAACGTTTCACCCCAGGGTAGTTCCAAGTCACC CAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACCTAC GTCACCTAGACCCTGTCTAAAGTGAGAGTGGTAGTCGCCAGACGTTGGACTTCTAAAACGTTGGATG TACTGTCAACAGAGTTACAGTATGCCTGCCTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACG ATGACAGTTGTCTCAATGTCATACGGACGGAAACCGGTCCCCTGGTTCGACCTCTAGTTTGCATGC La traslado de la región variable de Kappa 23K12 LC es la siguiente, secuencia de polinucleótido (por encima de, la SEQ ID NO: 90, la parte superior) y la secuencia de aminoácidos (a continuación, correspondiente a la SEQ ID NO: 91) .
Hindll AAGCTTCCACCATGGACATGAGGGTCCTCGCTCAGCTCCTGGGGCTCCTGCTACTCTGGCTCCGAGG TGCCAGATGTGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTC A R C O I Q T Q S P S S L S A S V G D R V ACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGA T I T C R T S O S I S S Y L N W Y Q Q K P G AAGCCCCTAAACTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGG CAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCGGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACCTAC S G S G T D F T L T I S G L Q P E D F A T Y TACTGTCAACAGAGTTACAGTATGCCTGCCTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACG La secuencia de aminoácidos de la región variable de Kappa 23K12 LC es la siguiente, con dominios específicos identificados por debajo (secuencias de CDR definen de acuerdo con los métodos de Kabat) : M D M R V L A Q L L G L L L L W L R G A R C guía VK (SEQ ID NO: 57) D I Q M T Q S P S S L S A S V G D R V T I T C FR1 (SEQ ID NO: 58) R T S Q S I S S Y L N CDR1 (SEQ ID NO: 92) W Y Q Q K P G K K L L FR2 (SEQ ID NO: 93) A A S S L Q S G V P S R F CDR2 (SEQ ID NO: 94) S G S G S G T D F T L T I S G L Q P E D F A T Y Y C FR3 (SEQ ID NO: 95) Q Q S Y S M P A CDR3 (SEQ NO: 96) F G Q G T K I K FR4 (SEQ ID NO: 114) Inicio de la región constante LC Kappa La región variable 23K12 Gamma HC se clonó como un Hind III para Xho 1 fragmento, y se codifica por las siguientes secuencias de polinucleótidos y la SEQ ID NO: 97 (parte superior) y SEQ ID NO: 98 (parte inferior) .
AAGCTTCCACCATGGAGTTGGGGCTGTGCTGGGTTTTCCTTGTTGCTATTTTAAAAGGTGTCCAGT TTCGAAGGTGGTACCTCAACCCCGACACGACCCAAAAGGAACAACGATAAAATTTTCCACAGGTCA GTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAATCTCCT CACTCCACGTCGACCACCTCAGACCCCCTCCGAACCAGGTCGGACCCCCCAGGGACTCTTAGAGGA GTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGG CACGTCGGAGACCTAAGTGGCAGTCATCGTTGATGTACTCAACCCAGGCGGTCCGAGGTCCCTTCC GGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTTATAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCA CCGACCTCACCCAGAGTCAATAAATATCACCACCATCGTGTATGATGCGTCTGAGGCACTTCCCGT GATTCTCCTTCTCCAGAGACAACTCCAAGAACACAGTGTTTCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCG CTAAGAGGAAGAGGTCTCTGTTGAGGTTCTTGTGTCACAAAGAAGTTTACTTGTCGGACTCTCGGC AGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGATGTCTGAGCAGGATGCGGGGTTACGGTTTAGACGTCT TCCTGTGCCGACACATAATGACACGCTCTACAGACTCGTCCTACGCCCCAATGCCAAATCTGCAGA Xh l GGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAG CCCCGGTTCCCTGGTGCCAGTGGCAGAGCTC La traslado de la región variable 23K12 Gamma HC es el siguiente, secuencia de polinucleótido (por encima de, la SEQ ID NO: 99, la parte superior), y la secuencia de aminoácidos (a continuación, correspondiente a la SEQ ID NO: 100) : AAGCTTCCACCATGGAGTTGGGGCTGTGCTGGGTTTTCCTTGTTGCTATTTTAAAAGGTGTCCAG M E L G I C W V F L V A L G V Q TGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAATCTCC TGTGCAGCCTCTGGATTCACCGTCAGTAGCAACTACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAG C A A S G F T V S S N Y M S W V R Q A P G K GGGCTGGAGTGGGTCTCAGTTATTTATAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGC G L E W V S V I Y S G G S T Y Y A D S V K G AGATTCTCCTTCTCCAGAGACAACTCCAAGAACACAGTGTTTCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCC R F S F S R D N S N T V F L Q N S L R A GAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGATGTCTGAGCAGGATGCGGGGTTACGGTTTAGACGTC E D T A V Y Y C A R C L S R R G Y G L D V TGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCGAG La secuencia de aminoácidos de la región variable 23K12 Gamma HC es el siguiente, con dominios específicos identificados por debajo (secuencias de CDR definen de acuerdo con los métodos de Kabat) : M E L G L C W V F L V A I L K G V Q C VH guía (SEQ ID NO: 101) E V Q L V E S G G G L V Q P G G S L R I S C A A S G F T V S FR1 (SEQ ID NO: 102) S N Y M S CDRl (SEQ ID NO: 103) W V R Q A P G K G L E W V S FR2 (SEQ ID NO: 104) V I Y S G G S T Y Y A D S V K CDR2 (SEQ ID NO: 105) G R F S F S R D N S K N T V F L Q M N S L R A E D T A V Y Y C A R FR3 (SEQ ID NO: 106) C L S R M R G Y G L D V CDR3 (SEQ ID NO: 107) W G Q G ? ? V T V FR4 (SEQ ID NO: 108) WGQGTTVTVSS Largo FR4 (SEQ ID NO: 111) Ejemplo 3: Identificación de regiones variables de anticuerpo conservado Las secuencias de aminoácidos de las tres regiones variables de anticuerpo kappa LC y HC gamma fueron alineadas para identificar regiones conservadas y residuos, como se muestra a continuación.
La secuencia de aminoácidos de alineación de las regiones variables kappa LC de los tres clones (SEQ ID NO 673-675, respectivamente, en orden de aparición): La secuencia de aminoácidos de alineación de las regiones variables Gamma HC de los tres clones (SEQ ID NOS 676-678, respectivamente, en orden de aparición: Los clones 8110 y 21B15 procedían de dos donantes diferentes, sin embargo, tienen exactamente el mismo Gamma HC y difieren en la Kappa LC por un solo aminoácido en la posición 4 en la región del marco 1 (aminoácidos M frente a V, véase más arriba) , (excluyendo la posición wobble D frente a E en el marco 4 de la Kappa LC) .
La comparación de secuencias de las regiones variables de los anticuerpos revelaron que la cadena pesada de 8il0 clon se deriva de la secuencia de la línea germinal IgHV4 y que la cadena ligera se deriva de la secuencia de la línea germinal IgKVl .
La comparación de secuencias de las regiones variables de los anticuerpos revelaron que la cadena pesada del clon 21B15 se deriva de la secuencia de la línea germinal IgHV4 y que la cadena ligera se deriva de la secuencia de la línea germinal IgKVl .
La comparación de secuencias de las regiones variables de los anticuerpos reveló que la cadena pesada del clon 23K12 se deriva de la secuencia de la línea germinal IGHV3 y que la cadena ligera se deriva de la secuencia de la línea germinal IgKVl.
Ejemplo 4: Producción y caracterización de anticuerpos M2 Los anticuerpos descritos anteriormente se producían en cantidades de miligramos por grandes transfixiones transitorias escala en 293 células PEAK. Crudo sobrenadantes de anticuerpos de la O U-purificadas se utilizaron para examinar la unión del anticuerpo a la influenza A/Puerto Rico/8/1932 (PR8) de virus en placas de ELISA, y se compararon con la unión del anticuerpo de control 14C2, que también fue producido por más grande transitoria escala transíección. Los anticuerpos raonoclonales humanos recombinantes anti- 2 unidos a la influenza, mientras que el anticuerpo de control no lo hizo (Figura 9) .
La unión también fue probada en células MDCK infectadas con el virus PR8 (Figura 10) . El anticuerpo de control 14C2 y los tres clones anti-M2E: 8110, 21B15 y 23K12, todos mostraron unión específica a la proteína M2 expresada en la superficie de las células infectadas con PR8. No se observó unión en las células no infectadas .
Los anticuerpos se purificaron sobre columnas de proteína A de los sobrenadantes. Se realizó el análisis FACS utilizando anticuerpos purificados a una concentración de 1 ug por mi para examinar la unión de los anticuerpos a transíectaron transitoriamente 293 células PEAK expresar las proteínas M2 en la superficie celular. Enlace se midió prueba vinculante para burlarse de las células y las células transíectadas transi oriamente transíectadas con el subtipo de influenza H3N2 , A/Vietnam/1203 /2004 (V 1203), o proteínas A/Hong ong/483/1997 HK483 M2. Como control positivo se utilizó el anticuerpo 14C2. Los controles solos de anticuerpos sin teñir y secundarios ayudaron con los antecedentes determinados. Se observó tinción específica para las células transfectadas con la proteína M2 para los tres clones. Además, los tres clones unidos a la alta trayectoria de cepas A/Vietnam/1203 /2004 y las proteínas A/Hong Kong/483/1997 M2 muy bien, mientras que el control positivo 14C2 que obliga'do así a la proteína M2 H3N2 , unido mucho más débil a la proteína A/Vietnam/1203/2004 M2 y no obligar a la proteína A/Hong Kong/483/1997 M2. Vea la Figura 11.
Los anticuerpos 21B15, 23K12, y 8110 unido a la superficie de las células HEK-293 que expresan establemente la proteína M2, pero no al vector las células transfectadas (ver Figura 1). Además, la unión de estos anticuerpos no fue compitieron por la presencia de 5 mg/ml de péptido 24-mer M2 , mientras que la unión del control del ratón quimérico de IgGl kappa V-región/humana 14C2 anticuerpo (hul4C2) generado contra el péptido M2 lineal fue completamente inhibida por el péptido M2 (véase la Figura 1) . Estos datos confirman que estos anticuerpos se unen a epítopos conformacionales presentes en M2e expresado en la superficie de la célula o virus, en comparación con el péptido M2e lineal.
Ejemplo 5: Viral unión de los anticuerpos monoclonales anti-influenza humana De la influenza inactivado por UV virus A (A/PR/8/34) (Biotecnologías Aplicadas) se sembró en placas de 384 pozos MaxiSorp (Nunc) a 1,2 mg/ml en PBS, con 25 1/pozo, y se incubó a 4°C durante la noche. Las placas se lavaron entonces tres veces con PBS, y se bloquearon con 1% de leche en polvo sin grasa en PBS, 50 1/pozo, y después se incubaron a temperatura ambiente durante 1 h. Después de un segundo lavado con PBS, se añadieron anticuerpos monoclonales a las concentraciones indicadas en triplicado, y las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de otro lavado con PBS, a cada pozo se añadieron 25 1 de una dilución 1/5000 de la peroxidasa de rábano picante (HRP) conjugado de cabra anti-Fc de IgG humana (Pierce) en PBS/1% de leche, y las placas se dejaron a temperatura ambiente durante 1 hora. Después del lavado final de PBS, se añadió el sustrato de HRP l-step™ Ultra-TMB-ELISA (Pierce) a 25 1/pozo, y la reacción procedió en la oscuridad a temperatura ambiente. El ensayo se detuvo con 25 1/pozo de H2S04 1N, y la luz de la absorbancia a 450 nm (A450) se leyó en un lector de placas Spectromax Plus. Se normalizaron los datos a la absorbancia del MAb 8110 unión AT10 g/ml . Los resultados se muestran en las Figuras 2A y 2B.
Ejemplo 6: Unión del anticuerpo humano de anti-influenza Anticuerpos Monoclonales de longitud total de Variantes 2 Se seleccionaron variantes M2 (incluyendo aquellos con un fenotipo de alta patología in vivo) para el análisis. Ver la Figura 3A para las secuencias.
Las construcciones de ADNc M2 se transfectaron transitoriamente en células HEK293 y se analizaron de la siguiente manera: Para analizar los transfectantes transitorios por FACS, las células en placas de 10 cm de cultivo de tejidos fueron tratados con 0,5 mi de tampón de disociación celular (Invitrogen) , y se recogieron. Las células se lavaron en PBS que contenía 1% de FBS, 0,2% de NaN3 (tampón FACS), y se resuspendieron en 0,6 mi de tampón FACS suplementado con igG de 100 g/ml de conejo. Cada transfectante se mezcló con los anticuerpos monoclonales indicados a 1 g/ml en 0,2 mi de tampón FACS, con 5 x 105 a 106 células por muestra. Las células se lavaron tres veces con tampón FACS, y cada muestra se resuspendió en 0.1 mi que contiene 1 mg/ml AlexaFluor (AF) 647 anti-IgG humana de H & L (Invitrogen) . Las células se lavaron de nuevo y citometría de flujo se realizó en un dispositivo FACSCanto (Becton-Dickenson) . Los datos se expresan como un porcentaje de la fluorescencia media de la M2-D20 transitoria transfectante . Los datos de unión variante son representativos de 2 experimentos . Los datos correspondientes a los mutantes de alanina son lecturas promedio de 3 experimentos independientes con error estándar. Los resultados se muestran en la Figura 3B y 3C.
Ejemplo 7: mutagénesis de barrido de alanina para evaluar el enlace 2 Enlace Para evaluar el anticuerpo sitios de unión, alanina fue sustituido en las posiciones de aminoácidos individuales, como se indica por mutagénesis dirigida al sitio.
Las construcciones de ADNc M2 se transfectaron transitoriamente en células HEK293 y se analizaron como se describe anteriormente en el Ejemplo 6. Los resultados se muestran en la Figura 4A y 4B. La Figura 8 muestra que el epítopo está en una región altamente conservada del extremo amino del polipéptido M2. Como se muestra en las Figuras 4A, 4B y la figura 8, el epítopo incluye la serina en la posición 2, la treonina en la posición 5 y el ácido glutámico en la posición 6 del polipéptido M2.
Ejemplo 8: Bloqueo de Epítopo Para determinar si el MAbs 8110 y 23K12 se unen al mismo sitio, la proteína M2 que representa cepa de influenza A/HK/483/1997 secuencia se expresó de manera estable en el CHO (ovario de hámster chino) línea celular DG44. Las células se trataron con tampón de disociación celular ( Invitrogen) , y se recogieron. Las células se lavaron en PBS que contenía 1% de FBS , 0,2% de NaN3 (tampón FACS) , y se resuspendieron a 107 células/ml en tampón FACS suplementado con IgG de 100 g/ml de conejo. Las células se pre-obligados por mAb (o el control 2N9 ) en 10 g/ml durante 1 hora a 4°C, y luego se lavaron con tampón FACS. Conjugado directamente AF647-8I10 0-23K12 (marcado con el equipo de AlexaFluor® 647 Proteína de etiquetado (Invitrogen) y luego se utiliza para teñir las tres muestras de células pre-bloqueados en 1 mg/ml para 106 células por muestra. El flujo de análisis de citometría de procedió como antes con la FACSCanto. Los datos son lecturas medias de 3 experimentos separados con error estándar, los resultados se muestran en la Figura 5.
Ejemplo 9: Unión de los anticuerpos monoclonales de anti-influenza humana a M2 variantes y Péptidos truncados M2 La reactividad cruzada de mAb 8il0 y 23K12 a otras variantes de péptidos M2 se evaluó por ELISA. Las secuencias peptidicas se muestran en las Figuras 6A y 6B. Además, se utilizó un ensayo ELISA similar para determinar la actividad de unión a M2 péptidos truncados.
En resumen, cada péptido se revistió a 2 mg/ml a una placa de fondo plano de 384 pozos (Nunc) en 25 1/pozo de tampón de PBS durante la noche a 4 0 C. Las placas se lavaron tres veces y se bloquearon con 1% de leche/PBS durante una hora a temperatura ambiente. Después de lavar tres veces, se añadieron y se incubaron durante una hora títulos de MAb a temperatura ambiente. Diluido HRP de cabra conjugado específico de Fe anti-inmunoglobulina humana (Pierce) se añadió a cada pozo después de lavar tres veces. Las placas se incubaron durante una hora a temperatura ambiente y se lavaron tres veces. 1-Step™ Ultra-TMB-ELISA (Pierce) se añadió a 25 1/pozo, y la reacción procedió en la oscuridad a temperatura ambiente. El ensayo se detuvo con 25 1/pozo de H2S04 1N, y la luz de la absorbancia a 450 nm (A450) se leyó en un lector de placas Spectromax Plus.
Los resultados se muestran en las Figuras 6A y 6B.
Ejemplo 10: Evaluación in vivo de la Facultad de Anticuerpos monoclonales Anti-influenza Humano para la Protección del reto viral letal La capacidad de los anticuerpos, 23K12 y 8110, para proteger a los ratones de la exposición viral letal con una alta trayectoria de cepa de la influenza aviar fue probado .
Los ratones hembra BALB/c se asignaron al azar en 5 grupos de 10. Un día antes (Día-1 (menos uno)) y dos días después de la infección (Día 2 (más dos) , 200 ug de anticuerpo se administra a través de 200 de inyección intra-peritoneal ul . En el Día 0 (cero), una LD90 aproximada (dosis letal 90) del virus de la influenza A/Vietnam/1203/04, en un volumen de 30 1 se le dio por vía intranasal . La tasa de supervivencia se observó desde el Día 1 hasta el Día 28 después de la infección. Los resultados se muestran en la Figura 7.
Ejemplo 11: Caracterización de anticuerpos M2 TCN-032 (8110), 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11, y 3242_P05.
La longitud completa cDNA M2 (A/Hong ong/483/97) fueron sintetizados (Blue Heron Tecnología) y clonado en el vector pcDNA3.1 plásmido que después se transfectaron en células CHO con Lipofectamine (Invitrogen) para crear un grupo estable de las células que expresan M2-CHO-HK. Para el panel de anti-M2 Mab, se utilizaron muestras de 20 1 de sobrenadante de transfecciones transitorias de cada una de las combinaciones de cadena ligera y pesada de IgG para teñir la línea celular estable CHO-HK M2. Bound mAbs anti-M2 se visualizaron en células viables con Alexafluor de cabra 647-conjugado anti-IgG humana de H & L de anticuerpo (Invitrogen) . La citometría de flujo se realizó con un FACSCanto, y el análisis en el software FACSDiva adjunto (Becton Dickenson) .
ELISA Influenza A purificada (A/Puerto Rico/8/34) inactivada por ß-propiolactona (Advanced Biotechnologies , Inc.) se biotiniló (EZ-Link sulfo-NHS-LC-biotina, Pierce) y se adsorbió durante 16 horas a 4 0 C para placas de 384 pozos en 25 1 de PBS que se pre-recubiertas con neutravidina (Pierce) . Las placas se bloquearon con BSA en PBS, se añadieron muestras de sobrenadante de las transfecciones transitorias de cada una de las combinaciones de cadena ligera y pesada de IgG a una dilución final de 1:05, seguido de cabra conjugado con HRP de anticuerpos anti-Fc humana (Pierce) , y desarrollado con sustrato TMB (ThermoFisher) .
Los resultados de este análisis se muestran a continuación en la Tabla 2.
Tabla 2 Control positivo: sobrenadante de transfección con la combinación de cadena pesada y ligera del anticuerpo monoclonal IgG 8110 Control negativo: sobrenadante de transfección tranisent con la combinación de cadena pesada y ligera del anticuerpo monoclonal IgG 2N9 MFI - intensidad media de fluorescencia Ejemplo 12 Anticuerpos Humanos revelan un epítopo protector que está altamente conservado entre los virus de la influenza A humana y no humana La influenza sigue siendo una grave amenaza para la salud pública en todo el mundo. Las vacunas y los antivirales disponibles que pueden proporcionar protección contra la infección. Sin embargo, nuevas cepas virales surgen continuamente debido a la plasticidad del genoma de la influenza que requiere reformulación anual de antígenos de la vacuna, y la resistencia a los antivirales pueden aparecer rápidamente y afianzado en la circulación de las poblaciones de virus. Además, la propagación de nuevas cepas pandémicas es difícil de contener debido al tiempo necesario para diseñar y fabricar vacunas eficaces. Los anticuerpos monoclonales que se dirigen a epítopos virales altamente conservadas podrían ofrecer un paradigma de protección alternativa. En el presente se describe el aislamiento de un panel de anticuerpos monoclonales derivados de las células de IgG + B de memoria de los sujetos sanos, humanos que reconocen un epítopo conformacional previamente desconocido en el ectodominio de la proteína de la influenza matriz 2, M2e. Esta región de unión del anticuerpo es altamente conservadas en los virus de la influenza A, que está presente en casi todas las cepas detectadas hasta la fecha, incluyendo los virus altamente patógenos que infectan a las aves y los cerdos, y el actual 2009 de origen porcino cepa pandémica HlNl (S-OIV) . Además, estos anticuerpos monoclonales anti-M2e humanos protegen a los ratones de desafíos letales, ya sea con el virus H5N1 o virus de la influenza HlNl. Estos resultados sugieren que M2e viral puede provocar anticuerpos amplia reactividad cruzada y de protección en los seres humanos. De acuerdo con ello, formas recombinantes de estos anticuerpos humanos pueden proporcionar agentes terapéuticos útiles para proteger contra la infección de un amplio espectro de cepas de la influenza A.
Introducción Las epidemias estacionales de influenza hospitalizar a más de 200.000 personas cada año en los E.U. y matan a un estimado de 500.000 en todo el mundo (Thompson, WW et al. (2004) JAMA 292:1333-1340). El sistema inmune proporciona sólo una protección parcial a partir de cepas estacionales en la mayoría de los individuos debido a que surge constantemente mutaciones puntuales en el genoma viral que conducen a la variabilidad estructural conocida como la deriva antigénica. Cepas pandémicas encuentran aún menos inmune resistencia debido a los acontecimientos redistribución genómica entre los distintos virus que dan lugar a más cambios radicales en los determinantes antigénicos virales. En consecuencia, la pandemia de influenza tiene el potencial para causar la enfermedad generalizada, la muerte, y los trastornos económicos. Las vacunas y agentes antivirales están disponibles para hacer frente a la amenaza de epidemias y pandemias de influenza. Sin embargo, la composición de la cepa de vacunas contra la influenza debe determinarse antes de la temporada de la influenza una vez al año, y predecir de antemano qué cepas se convertirá en dominante es un reto. Por otra parte, la aparición de cepas que evaden, la respuesta inmunitaria protectora inducida por la vacuna es relativamente rápida, que a menudo se traduce en una protección inadecuada (Carrat F, Flahault A. (2007) Vacuna contra la influenza: . El reto de la deriva antigénica Vacuna 25:6852-6862). Los medicamentos antivirales incluyen oseltamivir y zanamivir que inhiben la función de la proteína viral de la neuraminidasa (NA) , y adamantanos que inhiben la función del canal iónico de la proteína M2 del virus (Gubareva LV, et al (2000) Lancet 355:827-835;. Wang C, et al . (1993) J Virol 67:5585-5594). Los agentes antivirales son eficaces para cepas de virus sensibles pero la resistencia viral pueden desarrollar rápidamente y tiene el potencial de hacer que estos medicamentos ineficaces. En la temporada de influenza 2008-2009 E.U. casi el 100% de los virus HlNl de la influenza estacional o H3N2 cepas aisladas fueron resistentes a oseltamivir o antivirales adamantano, respectivamente (Encuesta de Influenza de los CDC: www. cdc . gov/flu/weekly/weeklyarchives2008-2009/weekly23.htm) .
La inmunoterapia pasiva con anticuerpos antiinfluenza representa un paradigma alternativo para prevenir o tratar la infección viral. La evidencia de la utilidad de este enfoque se remonta casi 100 años, cuando se utiliza la transferencia pasiva de suero durante la pandemia de influenza de 1918 con cierto éxito (Lucas TC, et al (2006) Ann Intern Med 145:599-609). Mientras que la protección proporcionada por los anticuerpos monoclonales anti-influenza (mAbs) es típicamente estrecha en anchura debido a la heterogeneidad antigénica de los virus de la influenza, varios grupos han informado recientemente de mAbs de protección que se unen a epítopos conservados dentro de la región del tallo de la hemaglutinina viral (HA) (Okuno. Y, et al (1993) J Virol 67:2552-2558; Throsby M, et al (2008) PLoS One 3: e3942; Sui J, et al (2009) Nat. Struct Mol Biol. 16:265-273; Corti D, et al (2010) J Clin Invest doi : 10.1172 /JCI41902 ) .. Estos epitopos parecen estar restringidos a un subconjunto de los virus de influenza, estos mAb anti-HA no se esperaría para proporcionar protección contra los virus de los subtipos H3 y H7. De éstos, el primero comprende un componente importante de las cepas circulantes humanos (Russell CA, et al. (2008) Ciencia 320:340-346) mientras que el segundo incluye las cepas altamente patógenas aviares que han causado mortalidad en los seres humanos (Fouchier RA, et al. (2004) Proc Nati Acad Sci E.U. 101:1356-1361; Belser JA, et al (2009) Emerg Infect Dis 15:859-865)..
De los tres objetivos de anticuerpos presentes en la superficie del virus de la influenza, el ectodominio de la proteína M2 del virus (M2e) se conserva mucho más altamente que cualquiera de HA o NA, que hace que sea un objetivo atractivo para los mAbs ampliamente de protección. Los anticuerpos monoclonales para M2e han demostrado ser protectora in vivo (Wang R, et al (2008) Antiviral Res. 80:168-177;. Liu W, et al (2004) Immunol Lett 93:131-6;. Fu TM, . et al (2008) Virology 385:218-226; Treanor JJ, et al (1990) J Virol 64:1375-1357;. Beerli R, et al (2009) Virology J 6:224-234), y varios, grupos han demostrado protección contra la infección con estrategias de vacunas basadas en M2e (Fu TM, et al (2009) vacuna 27:1440-1447; Fan J, et al (2004) vacuna 22:2993-3003; Slepushkin VA, y col. (1995) 13:1399-1402 Vacuna;. Neirynck S, et al (1999) Nat. Med. 5:1157-1163; Tompkins SM, et al (2007) Emerg Infect Dis 13:426-435;. Mozdzanowska K, et al. (2003) Vacuna 21:2616-2626). En estos casos, la proteína 2 purificada o los péptidos derivados de la secuencia de M2e han sido utilizados como inmunógenos para generar anticuerpos anti-M2e en animales o como candidatos de vacunas. En el presente estudio, los mAbs fueron aisladas directamente a partir de células B humanas que se unen a la proteína M2 se muestra en las partículas del virus y en las células infectadas por virus. Además, hemos demostrado que estos anticuerpos protegen a los ratones de una influenza letal Un desafío del virus y que puedan reconocer M2 variantes derivadas de una amplia gama de la influenza humana y animal A aislados de virus. Esta combinación de propiedades podría aumentar la utilidad de estos anticuerpos para prevenir y tratar infecciones por el virus de la influenza.
Resultados y Discusión El aislamiento de una familia ' de anti- 2e mAbs de células B humanas. Para explorar la respuesta inmune humoral a la infección de la influenza natural en los seres humanos, se ha aislado a partir de células anticuerpos IgG + B de memoria de los sujetos M2e-seropositivos . Las muestras de suero de 140 adultos sanos, donantes de origen en los Estados Unidos se ensayaron para determinar la reactividad con M2e expresado en la superficie de las células HEK293 que fueron transíectadas con un gen M2 viral (derivada de A/Fort Worth/50 HlNl) . Células IgG + B de memoria de 5 de los 23 sujetos M2e-seropositivos se cultivaron en condiciones en que proliferaron y diferenciarse en células plasmáticas secretoras de IgG. Pozos de cultivo de células B fueron seleccionados para la reactividad de IgG a la superficie celular M2e y pesada de la inmunoglobulina y la cadena ligera de la región variable de los genes (VH y VL) fueron rescatados por RT-PCR a partir de 17 pozos positivos y se incorporan en una IgGl humana región constante de fondo para la expresión recombinante y la purificación. Secuencias de VH y VL de 15 del grupo 17 contra M2e mAbs en dos grupos relacionados (Tabla 3) (IMGT®, el sistema de Información Internacional inmunogenética®, disponibles en www.imgt.org). En el grupo A, la asignación de la línea germinal de VH segmento de gen es IGHV4-59 * 01 mientras que en el grupo B, el segmento de gen de la línea germinal es IGHV3-66 * 01. Los dos más alejadas mAb 62B11 y 41G23 (grupo C) utilizan el segmento del gen de línea germinal V IGHV4-31 * 03 que tiene sólo 5 amino ácidos diferencias de residuos de la línea germinal V segmento de gen IGHV4-59 * 01 del grupo A. Todos estos mAbs utilizan el mismo gen de la cadena ligera V, IGKVl-39 * 01 o su alelo IGKV1D-39 * 01 y muestran evidencia de hipermutación somática a partir de la secuencia de la cadena pesada o kappa línea germinal (Fig. 12). Experimentos de unión competitiva mostraron que todos estos mAbs humanos parecen unirse sitios similares en M2e nativo expresado en la superficie de las células (CHO) (Fig. 13) de ovario de hámster chino. Se seleccionaron para una caracterización adicional de un mAb de cada uno de los grupos A y B, designado TCN-031 y TCN-032, respectivamente.
Tabla 3. Uso del segmento del gen de inmunoglobulina de los anticuerpos humanos anti-M2e garande mAb Variable Variable TCN-032 IGHV4-59*01 IGHOMS'OI IGH14O2 tGKVl-39*01t or (GKVlD-39'01 IGHWOl |43J? iGHV4í$9*07 IGH01-26'01 IGH14*02 IGI V1.Í9*01, or IGKV1D 39O1 IGKJÍ'OI 53PI K5HV4-59O7 IGHDJ-26'Ol ieHM'02 tG Vl -J9*01, Of lGKV10-39'01 IGKJ2O1 44110 K5HV4.59O7 IGMD 1-26*01 IGHJ4O2 tGKVl-39*01, ortGKV10-39*01 IGKJ2O1 55J6 «3W4-S9'01 IGHDS-18*01 IGHJ4O2 tGKVl-39'01. orlGIWlD-39*01 IGKJS'Ol 52C 13 K.HV4-59OI IGItDS-18'01 IGRI4O?, IG Vl-39'01, ot lG V10-39*01 IGKJS'Ol 39P23 IGHV4-59O1 IGH04- 23*01 IGHJ4O1 IGKV1-39O1.0MGW1D-39O1 tGKJl'01 36G5 GMV4-59*01 iGimz-s'Oi IGW6'04 (GICV1-39*01, or (GKVID S'OI lGKJJ'01 48P18 K5HV4-59O1 IGH02-i$*01 IGH)6'Ü2 ?a???-39*??, ???? ???-39·?? IW01 59)31 CW4.59O1 IGM02- 15*01 IGHJS'02 IGKVl-39*01, or tG VlO-39'Ol IGIÜ4O1 20(23 IGHV4.59"01 IGMD6-6O1 IGHÍ6O2 lGKVI-39'01, o lGKV10-39Ol IGKJS'Ol 628 U 3HV4-31O3 IGHD4-23O1 IGHI6*02 (») ?3???-39·??, ???????-39*01 IGKJS'Ol 41G23 IGMV4-31O3 IGHD3-16OI IGHJS'02 >GICVl-í9*01, or «GKVlD-39Ol IGKJS'Ol TCN-031 K5HV3-66O1 IGHD3-10O1 IGK/3'01 IGKVl-39*01, o lGKVlO-39"01 tGKJ2"0t 44H4 GHV3-66O1 a pvs s íGH/6'02 IGKV1 -Í9*01, or IGKVID-39'?! IGKIS'Ol 45019 IGMV3-66'0i (GRIS* 02 tG Vl-39*01, or IGKVlD-39'01 (GKJS'Ol 60019 GMV3-Í6*01 ÍGKI6O2 tGKVl-39*Ql. or lGIIVlD-39Ol IGKJ2O1 Secuencias de referencia para cada cadena pesada y ligera mAb se anafearon lüzando IMGT/-QUEST para desramar ei uso del gen La unión de alta afinidad a la superficie del virus de la influenza. Tanto TCN-031 y TCN-032 unidos directamente a un virus de la influenza HlNl (A/Puerto Rico/8/34) con alta avidez, con la unión media-máxima a aproximadamente 100 ng/ml (Fig. 14a) . Fragmentos Fab preparados a partir de TCN-031 y TCN-032 virus unido con afinidades (Kd) de 14 y 3 nM, respectivamente, como se determina por resonancia de plasmón de superficie (Tabla 4) . Los mAb humanos no se unen apreciablemente a un péptido sintético de 23 aminoácidos correspondiente al dominio M2e de un virus de la influenza HlNl (A/Fort Worth/1/50) (Fig. 14b) . Un derivado quimérico de la murino anti-M2e mAb 14C2 (chl4C2), que fue generado originalmente por la inmunización con M2 purificada (Zebedee y Lamb SL RA. (1988) J Virol 62:2762-2772), exhibió el comportamiento opuesto a la observada con los mAbs humanos, con poca unión a virus, pero robusta unión a la 23mer aislado péptido M2e con mitad de la máxima unión de péptido a 10 ng/ml (Figs. 14a y 14b) . Curiosamente, tanto los mAbs humanos y chl4C2 unidos a la superficie de las células Madin-Darby de riñon canino (MDCK) infectados con el virus de la influenza HlNl (A/Puerto Rico/8/34) con avideces similares (Fig. 14C) . Por tanto, parece que los epítopos virales reconocidos por el anti-M2e humano mAbs están presentes y accesible en la superficie de ambos virus y células infectadas,, mientras que el epítopo unido por chl4C2 es accesible sólo en la superficie de las células infectadas. Nuestra observación de que el anti-M2e humana mAb no se unen apreciablemente a péptidos sintéticos inmovilizados derivados de M2e, y, además, que tales péptidos no compiten por la unión de estos anticuerpos a M2e expresado en la superficie de células de mamíferos (Fig. 14d) , soportes la idea de que la estructura secundaria dentro de la epítopo 2e es importante para la unión por los anticuerpos humanos. Eso chl4C2 se une péptido inmovilizado en plástico sugiere una menor importancia de la estructura de orden superior para la unión de este mAb.
Tabla 4. Afinidad de anti-M2e fragmentos Fab para el virus de la influenza.
La Protección contra Letal desafíos con los virus H5N1 y HlNl . Seguidamente, examinó la eficacia protectora de la anti-M2e mAbs TCN-031 humana y TCN-032 en un modelo de desafío letal de la infección de la influenza en ratones. Los animales fueron desafiados por vía intranasal con 5 x unidades DL50 de un virus H5N1 de alta patogenicidad (A/Vietnam/1203 /04 ) y ambos mAbs humanos eran de protección cuando el tratamiento se inició un día después de la exposición viral. En contraste, los ratones que fueron sometidos a regímenes de tratamiento similares con un AcMo irrelevante de control de subclase emparejados 2N9, que se enfoca en el epítopo AD2 de la porción de gpll6 de la gB de citomegalovirus humano, o con un control de portador fueron protegidos en menor medida, o no en absoluto, lo que resulta en la supervivencia del 70-80% de los ratones tratados con mAbs humanos contra la supervivencia del 20% para mAb de control y la supervivencia 0% para el portador (fig. 15a) . El mAb anti-M2e chl4C2 no confirió una protección considerable en este modelo (supervivencia 20%; Figura 15a), aunque este mAb se ha demostrado para reducir el título de virus en los pulmones de ratones infectados con otras cepas de virus de la influenza (Treanor JJ, et al. (1990) J Virol 64:1375-1357). Todos los animales, incluidos los de los grupos de tratamiento TCN-031 y TCN-032, mostraron la pérdida de peso desde 4 a 8 días después de la infección, seguido de un aumento gradual de peso en los animales que sobrevivieron hasta el final del estudio en el día 14 (. Fig. 15b), lo que indica que la anti-M2e humana mAb proporcionó protección mediante la reducción de la gravedad o extensión de la infección en lugar de mediante la prevención de la infección por completo. De hecho, los resultados de la carga viral análisis inmunohistoquímico y de pulmón, cerebro y tejido hepático de animales adicionales en cada cohorte de tratamiento son consistentes con una reducción en la propagación del virus más allá del pulmón hacia el cerebro y también posiblemente de hígado en animales que fueron tratados con la humano anti-M2e mAb, pero no con chl4C2 o el mAb de control subclase emparejados 2N9. El efecto de los anti-M2e mAbs humanos sobre la carga viral en el pulmón en comparación con los mAb de control era, sin embargo, más moderado (Tabla 5 y Figura 16, respectivamente) .
Para probar si la protección conferida por la humana anti-M2e mAbs refleja su conducta vinculante amplio, se realizó un estudio in vivo semejante desafío con un aislado de ratón adaptado a la relativamente divergentes virus H1N1 A/Puerto Rico/8/34. El cien por ciento de, los ratones tratados con anticuerpos de control tratados con PBS-o emparejados-subclase murieron por este virus, mientras que una mayoría de los animales tratados con el mAb anti-M2e TCN-031 humana y TCN-032 sobrevivió (60%; Fig.. 15c) . Con estos ratones tratados con virus chl4C2 proporcionaron un beneficio de supervivencia similar a la de los anti-M2e mAbs humanos (Fig. 15c) . Los cambios de peso en cada grupo de tratamiento en todo el curso de la infección y su posterior resolución siguieron un patrón que era similar a la de los ratones infectados con el virus H5N1 (fig. 15d) .
Los anti-M2e mAbs humanos y chl4C2 unidos a la superficie celular expresado M2e de A/Vietnam/1203/04 y A/Puerto Rico/8/34 virus (Fig. 19b, Tabla 6) y células infectadas con A/Puerto Rico/8/34 (Fig. 14C) . Mecanismos para la protección mediada por anticuerpos podrían incluir muerte de las células huésped infectadas por citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos o citotoxicidad dependiente del complemento (Wang R, et al (2008) Antiviral Res. 80:168-177;. Jegerlehner A, et al. (2004) J Immunol 172:5598-5605). Hemos encontrado pruebas in vitro para estos dos mecanismos con los anti-M2e mAbs humanos y chl4C2 (Fig. 17 y el Cuadro 6) . Una explicación para la mayor protección in vivo observada con los mAb anti-M2e humanos en comparación con chl4C2 siguiente reto por la alta patogenicidad del virus aviar A/Vietnam/1203 /04 en comparación con A/Puerto Rico/8/34 podría deberse a la capacidad única de los mAbs humanos a unirse virus directamente mientras que chl4C2 no parece unirse viriones de la influenza (Fig. 14a) . Podría esperarse que las propiedades protectoras de anticuerpos que se unen al virus para incluir mecanismos tales como virolisis dependiente de anticuerpos (Nakamura M, et al. (2000) de hibridoma 19:427-434) y aclaramiento a través de opsonofagocitosis por células huésped (Huber VC, et al. (2001) J. Immunol 166:7381-7388). Algunos de estos mecanismos requieren la interacción eficiente entre los anticuerpos y los receptores Fe de acogida. En nuestros experimentos de desafío de ratón todos los mAbs ensayados tenían regiones constantes humanas, sin embargo otros estudios han demostrado que los anticuerpos humanos pueden interactuar de manera productiva con los receptores de Fe murinos (Clynes RA, y col (2000) Nat . Med. 6:443-446.) .
La Tabla 5. Evaluación patológica de los pulmones, el hígado y el cerebro de los ratones tratados con anti- 2e mAbs TCN-031 y TCN-032 después del desafío con el virus H5N1 A/Vietnam/1203/04. Órganos Rsán · Tcn-oji TCN-032 2M9 CHI4C2 PBS UT/C 1 2 ?./«? 3 »»/¦· )¦ ·>!<> Ce/ebo 1 -/- ¦? 2 ¦i- ¦I- -r */- «1- t ¦1- */? Se detectaron cambios patológicos y antígenos virales en los pulmones de todos los ratones de virus-desafiado. Los ratones tenían lesiones pulmonares similares en todos los grupos, aunque los ratones en el TCN-031 y TCN-032 grupos tenían una tendencia hacia una menor expresión del antígeno viral en el pulmón. En el cerebro y el hígado, no se detectaron lesiones en los ratones en el grupo de TCN-31 y sólo uno de tres ratones en el grupo de TCN-032 mostraron cierta evidencia de antígenos virales en el cerebro. Los cambios patológicos/antígenos virales: + + + grave/muchos, + + moderada/moderado, leve +/pocos, ± escasa/raro, -no se ha observado/negativo.
Tabla 6 Ai ioacátoe t-23 deidomaró extrace!ular 2 La secuencia de M2e en la parte superior es de A/Brevig Mission/1/18 (HlNl) y se utiliza como la secuencia de referencia para la alineación de los aminoácidos del ectodominio de M2 1-23 de 43 variantes de tipo salvaje. Los recuadros grises indican identidad de aminoácidos con la secuencia de referencia y las mutaciones de sustitución de aminoácidos boxesare blanco. Esta lista de secuencias no idénticas, a excepción de HK, V , y D20, se derivó a partir de secuencias M2 utilizadas en las referencias 11 y 27. Secuencia de los datos son de El Recurso Virus de la Influenza en el Centro Nacional de Información sobre Biotecnología (http : / /www. cbi . nlm.nih . gov/genomes/FLU/FLU . html ) .
La unión al segmento N-terminal altamente conservada de M2e. Para comprender mejor la propiedad de unión viral única de los anti-M2e mAbs humanos hemos mapeado los sitios de unión dentro del dominio M2e. La falta de unión apreciable de los mAbs humanos a péptidos lineales derivados de M2e impide un enfoque péptido sintético a la cartografía de estructura fina de sus epítopos. En lugar de ello, la unión del mAb a M2e mutantes por sustitución de alanina y variantes naturales M2 que se expresan en la superficie de células de mamífero transíectadas con ADNc se cuantificó por citometría de flujo. Los experimentos de unión con un grupo de proteínas mutantes M2 , donde fue sustituido cada posición en el aminoácido 23 M2 ectodominio con alanina revelaron que el quinto (E) posiciones de la madurez (metionina recortado) primera (S) , cuarto (T) , y polipéptido M2 eran críticos para la unión de ambos TCN-031 y TCN-032 (Fig. 19a) . En contraste, la unión de chl4C2 disminuyó selectivamente cuando se sustituyó la alanina en la posición 14 de la M2 madura (Fig. 19a) . Estas observaciones se confirmaron en estudios con un panel de . origen natural, variantes divergentes M2; sustitución con prolina en la posición 4 (Tabla 6: A/Panamá/1/1966 H2N2 , A/Hong Kong/1144/1999 H3N2 , A/Hong Kong/1180/1999 H3N2 y a/pollo/Hong Kong/YU427/2003 H9N2) y la glicina en la posición 5 (Tabla 6: A/pollo/Hong Kong/SFl/2003 H9N2) correlacionados con la disminución de la unión de los anticuerpos anti-M2e humana mAbs pero no chl4C2 (Fig. 19b, Tabla 6). Estos resultados sugieren que tanto TCN-031 y TCN-032 reconocen una secuencia central de SLLTE en las posiciones 1-5 del extremo N-terminal de M2e madura. Esto es apoyado por los datos que muestran que estos mAbs compiten efectivamente entre sí por la unión a M2e expresado en la superficie de las células CHO (Figura 20) . En contraste, nuestros resultados indican que chl4C2 se une a un sitio que es espacialmente distinta y aguas abajo del núcleo SLLTE que es reconocido por los anti-M2e mAbs humanos. De hecho, estudios previos han demostrado que 14C2 se une a un relativamente amplio, epítopo lineal con la EVERTPIR EW secuencia en las posiciones 5-14 de M2e procesado (Wang R, et al. (2008) Antiviral Res. 80:168-177) .
Mientras que los epítopos reconocidos por TCN-031 y TCN-032 probablemente muy similares, existen algunas diferencias entre estos mAb humanos en su unión a varios de los mutantes M2e. Por ejemplo, TCN-031 parece tener una dependencia mayor que TCN-032 en los residuos de 2 (L) y 3 (L) de la secuencia de M2e madura (Fig. 19a) . Las regiones VH de estos dos mAbs humanos utilizan diferentes variables, la diversidad, y uniendo segmentos de genes que pueden explicar las diferencias de menor importancia en la unión observada entre estos mAb. Curiosamente, a pesar de las diferencias en su VH para el maquillaje de estos mAbs humanos utilizan los mismos segmentos kappa de genes V de la cadena de la línea germinal, aunque con cadena kappa distinta uniendo segmentos.
La localización de la región de unión de los anti-M2e mAbs humanos en la región N-terminal de M2e es especialmente importante a la luz de la muy alta conservación de secuencia en esta parte del polipéptido entre los virus de la influenza A. El segmento viral gen M que codifica M2 también codifica la proteína viral interna Mi a través de empalme diferencial. Sin embargo, el sitio de empalme está situado aguas abajo del extremo N-terminal compartida de M2 y Mi resultante en dos polipéptidos maduros distintos con una secuencia N-terminal de 8 aminoácidos idéntica (Cordero AR y Choppin PW (1981) Virology 112:729-737). Opciones para el escape viral de acogida anticuerpos anti-M2e que unen a esta región pueden ser limitados como mutaciones de escape en la región N-terminal darían lugar a cambios en M2 no sólo, sino también a la proteína MI. De hecho, este segmento de ácido 8-amino N-terminal de M2e muestra identidad casi completa en el 1364 única de longitud completa M2 variantes catalogado en la base de datos NCBI influenza (www.ncbi.nlm.nih.gov/genomas/flu/Base de datos/múltiple. CGI) mientras que los niveles mucho más bajos de conservación se ven en las secuencias de M2e aguas abajo de esta región (Fig. 19c) . De hecho, el núcleo anti-M2e epítopo anticuerpo SLLTE humana está presente en aproximadamente el 98% de las 1.364 secuencias M2e integrales singulares catalogados en la base de datos NCBI influenza, incluyendo el 97%, 98% y 98% de lo humano, porcino y aviar virus, respectivamente. Esto contrasta con la conservación mucho más baja dentro de los sitios de mAb anti-M2e provocados por la inmunización con péptidos M2e o proteínas de unión lineal. Por ejemplo, 14C2 y Z3G1 (Wang R, et al. (2008) Antiviral Res. 80:168-177) secuencias de vinculación que se conservan en menos de 40% de virus de la influenza A, y la conservación dentro de esta región es aún menor en aviar y virus porcinos (Tabla 7) .
Los epítopos lineales M2e reconocidos por anticuerpos contra el péptido-suscitó pueden ser más sensibles a escapar de mutaciones y sustituciones naturales que están presentes en algunos aislamientos virales. Por ejemplo, P10L y evacuación PlOH mutaciones a Mab 14C2 se han asignado a la porción central de M2e (Zharikova D, et al. (2005). J Virol 79:6644-6654) y esas mismas sustituciones también ocurrir en M2e variantes de algunos cepas H5N1 de alta patogenicidad. Hemos encontrado que el ser humano mAbs TCN-031 y TCN-032, pero no se unen chl4C2 a la variante 2 del virus H5N1 A/Hong Kong/483/97 (HK) , que contiene la sustitución P10L (Fig. 19b, Tabla 6) . Por lo tanto, los anticuerpos monoclonales con especificidades similares a la de 14C2 es probable que tengan una utilidad limitada como agentes terapéuticos de amplio espectro.
En el examen de los 5 sujetos humanos que encontramos 17 anticuerpos únicos anti-M2e que unen a la región N- terminal conservado de M2e, pero no observó IgG reactividad con péptidos derivados de M2e que contienen los epítopos lineales reconocidos por 14C2 y otros anticuerpos péptido-suscitó. En contraste con la respuesta de anticuerpos aparentemente uniforme a M2e en los seres humanos infectados naturalmente o vacunados, los ratones inmunizados con péptidos derivados de 2e producidos anticuerpos con un rango de especificidades dentro de M2e, con inclusión del N-terminal conservado y también regiones aguas abajo (Fu TM, et al. (2008) Virology 385:218-226). Es tentador especular que el sistema inmunológico humano ha evolucionado una respuesta humoral que se dirige exclusivamente el segmento N-terminal altamente conservada de M2e en lugar de la más divergente, y, por tanto, menos los sitios aguas -abajo sostenible de protección. A pesar de la falta de pruebas para . los anticuerpos humanos que reconocen esta región interna de M2e, el análisis de la evolución del gen M sugiere que esta región de M2e está sometido a una fuerte selección positiva en los virus de la influenza humana (Furuse Y, et al. (2009) J Virol 29:67). Una explicación para este hallazgo es que la presión selectiva se está dirigido a esta región interna por mecanismos inmunes distintos de anticuerpos. Por ejemplo, los epítopos de células T humanas han sido mapeados a estos sitios internos M2e (Jameson J, et al. (1998) J Virol 72:8682-8689) .
Tabla 7. Conservación del sitio de unión viral para los anti-M2e mAbs humanos en comparación con los de mAbs derivados de ratones inmunizados, en la influenza A.
El reconocimiento de la influenza H1N1 2009 S- OIV. MAb anti-influenza A grandes protectoras podrían ser utilizados en la inmunoterapia pasiva para proteger o tratar a los humanos en el caso de brotes de cepas virales altamente patógenas, pandémicas. Una prueba crítica del potencial de mAbs tales como agentes de inmunoterapia es si son capaces de reconocer las cepas de virus que pueden evolucionar de futuros eventos redistribución viral . Como ejemplo de ello, el anti-M2e mAbs TCN-031 humana y TCN-032 fueron probados por su capacidad de reconocer la cepa actual HlNl de origen porcino pandemia (S-OIV) . Estos mAb se obtuvieron a partir de muestras de sangre humana tomadas en 2007 o antes, antes del momento en que esta cepa se cree que han surgido en los seres humanos (Neumann G, et al. (2009) Naturaleza 459:931-939). Ambos mAb humanos unidos a células MDCK infectadas con A/California/4 /2009 (S-OIV HlNl, pandemia) y A/Memphis/14/1996 (HlNl, estacional), mientras que chl4C2 obligado sólo a las células infectadas con el virus estacional (Fig.. 21) . Si esta amplia comportamiento de enlace demuestra que se correlaciona con la protección, como fue el caso con A/Vietnam/1203 /2004 y A/Puerto Rico/8/34, a continuación, estos mAbs humanos pueden ser útiles para prevenir o tratar la cepa pandémica de S-OIV o, posiblemente, otras cepas pandémicas que podrían surgir en el futuro.
Si bien hay que destacar que los seres humanos tienen la capacidad de producir anticuerpos que pueden conferir una protección casi universal contra la infección de la influenza, el descubrimiento de esta clase hasta ahora un-descrito de anticuerpos plantea la pregunta de por qué este virus es capaz de montar una infección productiva en individuos inmunocompetentes en absoluto. Esta aparente paradoja se puede explicar por la naturaleza del epítopo de protección M2e y su inmunogenicidad relativa. Se ha señalado por otros que M2e parece exhibir una baja inmunogenicidad en humanos (Feng J, et al (2006) J Virol 3:102;. Liu W, et al (2003) FEMS Immunol Med Microbio 35:141-146.), especialmente en comparación con las glicoproteínas del virus de inmunodominantes HA y NA. Por lo tanto, pueden existir anticuerpos protectores anti-M2e en muchos individuos, sino a títulos subóptimos . En apoyo de esta noción es nuestra observación de que la mayoría de los individuos no mostraron una respuesta humoral detectable a M2e. Hemos observado que menos del 20% (23 /140) de los individuos que probamos en nuestra cohorte de sujetos sanos tenían niveles séricos detectables de anticuerpos anti-M2e. Las razones de este fenómeno no están claras, pero una situación similar existe en HCMV donde sólo una minoría de los sujetos seropositivos HCMV tiene anticuerpos medibles a la ampliamente conservada, neutralizando AD2 epítopo dentro del complejo gB de HCMV (Meyer H, et al. (1992) J Gen Virol 73:2375-2383;. Ayata M, et al (1994) J Med Virol 43:386-392; Navarro D, et al (1997) J Med Virol 52:451-459).
Un requisito importante para una solución de inmunoterapia a la amenaza de la influenza será la identificación de los epítopos de protección que se conservan en los virus ya existentes y emergentes. Uso de toma de muestras a gran escala de la respuesta inmune humana a la influenza M2 nativa hemos identificado un epítopo natural inmunogénica y protectora dentro de la región N-terminal altamente conservada de M2e. Los anticuerpos humanos dirigidos a este epítopo, incluyendo los descritos en el presente estudio, pueden ser útiles para la prevención y el tratamiento de la influenza pandémica y estacional.
Métodos El cultivo de células de memoria B. Muestras de sangre entera se recogieron de donantes normales bajo IRB aprobó consentimiento informado y células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se purificaron mediante técnicas estándar. Cultivos de células B se prepararon usando las PBMC, las células B enriquecidas por la selección con células M2-que expresan, o células de IgG + B de memoria enriquecidos a partir de PBMC mediante agotamiento negativo de células no -> IgG + con anticuerpos frente a CD3 , CD14, CD16, IgM, igA, y igD en perlas magnéticas (Miltenyi, Auburn, CA) como se describió previamente (Walker L, et al. (2009), Science 326:289-293). Brevemente, para promover la activación de células B, la proliferación, la diferenciación terminal y la secreción de anticuerpos, las células se sembraron en placas de microtitulación de 384 pozos en presencia de células alimentadoras y medios condicionados generados a partir de células T humanas estimuladas por mitógenos de donantes sanos. Los sobrenadantes de cultivo se recogieron 8 días después y se seleccionaron en un formato de alto rendimiento para la unión de la reactividad a la proteína M2 expresado en células HE 293 transfectadas de forma estable con el virus de la influenza M2 (A/Fort Worth/50 HlNl) utilizando imágenes fluorescentes (sistema FMAT, Applied Biosystems) .
La reconstitución de los mA recombinantes a partir de cultivos de células B. ARNm se aisló a partir de cultivos de células B lisadas utilizando perlas magnéticas (Ambion) . Después de la transcripción inversa (RT) con primers específicos de genes, los genes de dominio variable fueron amplificados mediante PCR VH, V, y los cebadores específicos de la familia VA con flanquean los sitios de restricción (Walker L, et al. (2009), Science 326:289-293). Las reacciones de PCR que producen un amplicón del tamaño esperado se identificaron utilizando 96 pozos E-geles (Invitrogen) y los amplicones de dominio variable se clonaron en el vector de expresión pTT5 (Investigación Nacional de Canadá, Ottawa, Canadá) , que contiene IgGl humana, IgK, o IgA regiones constantes. Cada grupo de VH se combinó con la correspondiente Vk, o piscinas VA de los pozos individuales de BCC y se transfectó transitoriamente en células 293 -6E para generar anticuerpo recombinante . El medio acondicionado se cosechó 3-5 días después de la transfección y se ensayó para la unión de anticuerpos a la proteína M2 expresada en células HEK 293. Los clones individuales se aislaron de piscinas positivos y únicos genes VH y VL se identificaron por secuenciacion. De estos, los anticuerpos monoclonales se expresaron posteriormente y volver a ensayaron para determinar la actividad de unión.
ELISA. Para detectar antígeno viral, o bien 10,2 mg/ml inactivado por UV HlNl A/Puerto Rico/8/34 (PR8) de virus (Advanced Biotechnologies , Inc.) fue adsorbido de forma pasiva a placas de 384 pozos en 25 1 de PBS/pozo durante 16 horas a 4 ° C, o PR8 inactivado por ß-propiolactona (Advanced Biotechnologies, Inc.) se biotiniló (EZ-Link sulfo-NHS-LC-biotina, Pierce) y del mismo modo adsorbieron en placas revestidas con neutravidina (Pierce) . Virus recubiertos y placas de virus recubiertos con biotina se bloquearon con PBS que contenía 1% de leche o BSA, respectivamente. La unión de mAb a las concentraciones indicadas se detectó con anticuerpo de cabra conjugado con HRP anticuerpo anti-Fc humano (Pierce) y se visualizó con sustrato TMB (ThermoFisher) . El péptido M2e, SLLTEVETPIRNEWGCRCNDSSD ( SEQ ID NO: 680) (Genscript) se adsorbió pasivamente a 1 mg/ml y la unión del anticuerpo al péptido se detectó por el mismo método.
El análisis FACS de las células infectadas por virus. Para detectar M2e siguiente en la infección in vitro, las células MDCK se trataron con PR8 en multiplicidad de infección (MOI) de 60:1 durante 1 hora a 37 0 C después de lo cual se reemplazó el medio de cultivo. Las células MDCK infectadas fueron cultivadas durante 16 horas antes de la cosecha para la tinción de las células con los mAb indicados. Bound mAb anti-M2 se visualizaron en células viables con Alexafluor de cabra 647-conjugado anti- IgG humana de H & L de anticuerpo (Invitrogen) . Citometría de flujo se realizó en FACSCanto equipado con el software FACSDiva (Becton Dickenson) . Para el panel de anti-M2 mAb, se utilizaron 20 muestras 1 de sobrenadante de transíecciones transitorias de cada una de las combinaciones de cadenas pesadas y ligeras de IgG para teñir la línea celular 293 estable que expresa M2 de análisis de A/Hong Kong/483/97 FACS se realizado como anteriormente .
Análisis de la Variante M2. Larga duración en Individual mutantes M2 cDNA fueron sintetizados con mutaciones ala individuales en cada posición del ectodominio representando A/Fort Worth/1/1950 (D20), así como lo fueron los cuarenta y tres variantes naturales de M2 (Blue Heron Tecnología) . Ellos fueron clonados en el vector plasmídico pcDNA3.1. Después de la transfección transitoria con Lipofectamina (Invitrogen) , las células HEK293 fueron tratadas con 1 mg/ml de los mAb indicados en PBS suplementado con suero bovino fetal al 1% y 0,2% de NaN3 (tampón FACS) . Bound mAb anti-M2 se visualizaron en células viables con Alexafluor de cabra 647-conjugado anti-igG humana de H & L de anticuerpo (Invitrogen) . Citometría de flujo se realizó con FACSCanto equipado con el software FACSDiva (Becton Dickenson) . La unión relativa a las variantes de origen natural se expresó como el porcentaje de la respectiva tinción de mAb de la D20 células transfectadas de forma transitoria, utilizando la fórmula de Normalizada IMF (%) 100 x (MFIexperimental-MFImock transfectadas) / (MFlD20-MFlmock transfectadas ) .
Los estudios de eficacia terapéutica en ratones.
Se llevaron a cabo estudios en animales bajo protocolos del Comité de Cuidado de Animales y Uso Institucional. Inoculamos 6 grupos de 10 ratones hembra (6-8 semanas de edad BALB/C) por vía intranasal con 5 x DL50 de A/Vietnam/1203/04 (Fig. 15a y b) o 6 grupos de 5 ratones por vía intranasal con 5 x DL50 A/Puerto Rico/8/34 (Fig. 15c y d) . A los 24, 72, y 120 horas después de la infección los ratones recibieron inyecciones intraperitoneales de 400 dosis µ?/200 1 de la anti-M2e mAbs TCN TCN-031-032, Control del AM humana 2N9 , controlar mAb quimérico chl4C2, PBS, o estaban no se trata. Los ratones se pesaron diariamente durante 2 semanas y fueron sacrificados cuando la pérdida de peso supera 20% (H5N1 estudio se muestra en la figura 15a y 15b y el estudio HlNl se muestra en la Fig. 15c y 15d) del peso corporal antes de la infección.
El Anticuerpo reactividad a células infectadas A/California/4/2009. MDCK células fueron infectadas con el medio solo o medio que contiene A/California/4/2009 (HlNl) o A/Memphis/14/1996 (HlNl) en una MOI de aproximadamente 1 y se cultivaron durante 24 horas a 37 ° C. Las células se separaron de las placas de cultivo de tejido con tripsina, se lavaron extensivamente, y luego se fija en 2% de paraformaldehído durante 15 minutos. Las células se incubaron con 1 mg/ml de los anticuerpos indicados y el anticuerpo primario de unión se detectó con Alexafluor de cabra 647-conjugado anti-IgG humana de H & L de anticuerpo (Invitrogen) . Las células se analizaron con un FACSCalibur de Becton Dickinson y los datos se procesaron utilizando el software FlowJo.
Análisis de la competencia de la unión del anticuerpo. Sobrenadante de la transfección transitoria que contiene anticuerpo se proyectó para la unión a las células 293 transfectadas de forma estable con M2 de la influenza H1N1 (A/Fort Worth/50 HlNl), o células falsamente transfectadas , en presencia o ausencia de la M2e péptido SLLTEVETPIR EWGCRCNDSSD (Genscript) a 5 mg/ml. Bound mAb anti- 2 se detectaron con anti-Fc hulgG FMAT azul a 700 ng/ml en DMEM con FCS al 10% y se visualizaron mediante imágenes fluorescentes (sistema de FMAT, Applied Biosystems) .
Ejemplo 13: Detección y caracterización de anticuerpos específicos HA presentes en el plasma humano que unen la Influenza A Viriones inactivados purificados en su totalidad, unen proteínas HA homotriméricas recombinantes y neuralizan la influenza A Los anticuerpos monoclonales totalmente humanos específicos para HA y capaces de unirse purificados enteras inactivadas de la influenza A viriones, de unión a proteínas HA recombinantes homotrimérica, y la neutralización de la influenza vivo Un fueron identificados en el plasma del paciente, como se describe a continuación.
Expresión de HA soluble recombinante Una construcción de expresión fue generado contiene un ADNc que codifica un precursor de HA (HAO) polipéptido que corresponde a la secuencia de HA derivada encontrado en los subtipos de la influenza, por ejemplo, como se indica en la Tabla 9. Recombinantes polipéptidos precursores HAO de la invención carecen de una integral de membrana o el dominio transmembrana, y contienen aminoácidos adicionales en el extremo C-terminal del ectodominio HAO, por ejemplo, correspondientes a la secuencia : SGRLVPRGSPGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLL STFLGKPIPNPLLGLDSTGHHHHHH (SEQ ID NO: 726), caracterizado porque el sitio de escisión de trombina está en negrita y está subrayado en cursiva, la fibritin bacteriófago T4 " foldon " o el dominio de trimerización, el último aminoácido del dominio de trimerización, "G ", es el comienzo de la caja " V5 " etiqueta de epítopo, que es seguido por la histidina hexa (HIS) epítopo etiqueta en negrita. Los hexa-SU etiqueta dentro de la región C-terminal anterior se utiliza para la purificación de proteínas HA recombinantes de la invención. Por lo tanto, las proteínas precursoras HAO recombinante que contienen un dominio de trimerización se consideran proteínas homotrimérica HA recombinante de la invención.
Las proteínas homotriméricas recombinantes HA de la invención retienen la secuencia señal nativa para permitir la secreción eficiente de líneas celulares reconocidos en la técnica mantenidas in vitro, por ejemplo, 293 células HEK como realizados por Inmune Technology Corp. (http://www.immune-tech.com/). Además, dentro de estas proteínas homotrimérica HA recombinante, o los precursores de los mismos HAO, se mantuvo el sitio de escisión de la proteasa viral HA1/HA2 nativa, por ejemplo, en todas las secuencias proporcionadas en la Tabla 9, excepto la SEQ ID NO: 737, en la que el sitio de escisión nativa posicionado en los aminoácidos 337 a 347 y que consiste en la secuencia " PQREGGRRRKR " (SEQ ID NO: 1250) se sustituyó por la secuencia " PQTETR " (SEQ ID NO: 1251) .
Por otra parte, los dominios de las proteínas HA recombinantes homotrimérica, o los precursores de los mismos, HAO incluir los siguientes elementos estructurales de unión al receptor ejemplar: a a-hélice 190, un bucle de 130, y un bucle de 220 (véase, secuencia de la influenza A A/Vietnam/1203/2004 cepa) (o estructuras de HA equivalente en otras cepas de la influenza A que el técnico en la técnica podría obtener fácilmente mediante el acceso a bases de datos públicas, incluyendo GenBank, http://www.ncbi.nlm.nih.gov, y La base de datos de secuencias de la influenza, www.flu.lanl.gov, y la descarga de secuencias) (Stevens et al 2006 Ciencia 312:.. 404-410). En otras modalidades de la invención, en la que la proteína recombinante de HA homotrimérica, o precursor de HA0 de la misma, codificada por este constructo de expresión es parcial o totalmente expresaron y administrarse a un sujeto, estos dominios de unión al receptor pueden ser modificados. El término " modificado " está destinado a describir la eliminación de uno o más elementos estructurales. Alternativamente, o además de, " modificado " se entiende para describir la adición, deleción, sustitución, inversión, o translocación de uno o más aminoácidos dentro de un elemento estructural de un dominio de unión al receptor de HA. Por ejemplo, un epítopo lineal o discontinua a la que un anticuerpo HuMHA de la invención se une se administra a un sujeto en riesgo de contraer una infección de la influenza para prevenir la infección. Alternativamente o además, un epítopo lineal o discontinua a la que un anticuerpo HuMHA de la invención se une se administra a un sujeto antes de la exposición a un virus de la influenza para prevenir la infección de la influenza. En otras modalidades un miroético estructural del epítopo conformacional o discontinua se administra a un sujeto. Cuando se utilizan las proteínas anteriores para fines profilácticos, por ejemplo, como una vacuna, puede ser favorable para modificar uno o más dominios de unión al receptor para controlar la respuesta inmune resultante en el sujeto. Los ejemplos de elementos estructurales de HA que eventualmente modificados incluyen, pero no se limitan a, el 190 a-hélice, thel30-bucle, y el bucle 220 -de HA.
Las proteínas recombinantes HA homotriméricas de la invención son codificados por las siguientes secuencias de aminoácidos, en la que la secuencia nativa está en negrita y la secuencia de SEQ ID NO: 726 es normal (véase también, Tabla 9) .
A/California/4/09 (SEQ ID NO: 727) OTLCIGYHA^STDTVDTVLEKIWT WILG PECESLSTASSWSYIVETPSSDNGTCYPGDFIDYEELREQLSSVSSFERFEIFP KTSSWPNHDSNKGVTAACPHAGAKSFY NLIWLV KGNSYPKLSKSYI DKGKEVLVLW GIHHPSTSADQQSLYQNADTYVFVGSSRYSKKFKPEIAIRPK^ GDKITFEATGNLWPRYAFAMER AGSGIIISDTPVHDC CQTPKGAINTSLPFQNI HPITIGKCPKYVKSTKLRLATGLR IPSIQSRGLFGAIAGFIEGGWTOGiiVDGWYGYHHQ EQGSGYAADLKSTQNAIDEITNKV SVIEKMN QFTAVGKEFNHLEKRIE LNKKVDD GFLDIVTTY AELLVLLEI^RTLDYHDSNVKI^YEKVRSQLKNNAKEIGNGCFEFYH CD NTCMESVK GTYDYPKYSEEAKLNREEIDGVKLESTRIYQSGRLVPRGSPGSGYIPEAP RDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGKPIPNPLLGLDSTGHHHHHH A/Islas Salomón/3 /06-HlNl (SEQ ID NO '·. 728) OTICIGYHAN STOTVDTVLEKNV VTHSV LLEDSHNGKLCLLKGIAPLQLGN^ WILG PECELLISRESWSYIVEKPNPENGTCYPGHFADYEELREQLSSVSSFERFEIFP KESS PNHTTTGVSASCSH GESSFYK LL LTGKNGLYPI^SKSYANNKEKEVLVLWG VHHPPNIGDQRALYHKENAYVSWSSHYSRKFTPEIAKRPKVRDQEGRI YYWTLLEPG DTIIFEANGNLIAPRYAFALSRGFGSGIINSNAPMDECDAKCQTPQGAINSSLPFQNVH PV IGECPKYVRSAKLRMVTGLR IPSIQSRGLFGAIAGFIEGGWTGMVDGWYGYHHQN 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A/cerdo/Ontario/01911-2/99-H4N6 (SEQ ID NO: 732) QNYTGNPVICLGHHAVSNGTMVKTLTDDQIEVVTAQELVESQHLPELCPSPLRLVDGQT CDIVNGALGSPGCDHLNGAEWDVFIERPTAVDTCYPFDVPDYQSLRSILANNGKFEFIA EEFQWim QNGKSGACKRA VNDFFimiNWLTKSDGNAYPLQ LTK^^ GVHHPSTDTEQTI^YKI^PGRV VSTQTSQTS PNIGSRPWVRGLSSRISFYWTIVEP GDLIVFN IGNLIAPRGHYKLNSQKKSTILN AVPIGSCVSKCHTDKGSISTTKPFQNI SRISIGIX!PKYVKQGSLKLATGMRSILEKATRGLFGAIAGFIENG QGLIDGWYGFRHQ NAEGTGTAADLKSTQAAIDQINGKLNRLIGKPNEKYHQIEKEFEQVEGRIQDLEKYVED TKIDLWSY AELLVALENQHTIDVTDSEMNKLFERVRHQLRENAEDKGNGCFEIFHQCD NSCIESIR GTYDHDIYRDEAIN RFQIQGVKLIQGYKDSGRLyPi¾GSPGSGYIPEAPR DGQAYVRKDGEWVLLSTFLGKPIP PLLGLDS GHHHHHH A/Hong Kong/156/97 - H5N1 (SEQ ID NO: 733) MER VLLLATVSLVKSDQICIGYHAl^STEQVOT LNGVKPLILRIX!SVAGWLLGNPMCDEFI VPEWSYIVEKASPA DLCYPGNFNDYEELK HLLSRI HFEKIQIIPKSSWSNHDASSGVSSACPYLGRSSFFRNWWLIKKNSAYPTIK RSYNNTNQEDLLVLWGVHHPMDAAEQTKLYQNP TYISVGTSTLNQRLVPEIATRPKV GQSGRMEFFW ILKPITOAIl^ESNGOTIAPEYAYKIVKKGDSTI KSELEYGNCNTKCQ TP GAINSS PFHNIHPLTIGECPKYVKSNRLVLATGLRNTPQRERRRKKRGLFGAIAG 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SPGSGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGKPIPNPLLGLDSTGHHHHHH Las construcciones de expresión de HA recombinantes y solubles de la SEQ ID NO: 727 a 744 se transfectaron en células HEK 293. Proteína HAO recombinante o HA escinde en sus respectivas subunidades HAl y HA2 y disulfuro de ligado se purificó a partir del sobrenadante del cultivo mediante procedimientos estándar usando el hexa-HlS en el extremo C-terminal. La proteína purificada se analizó por cromatografía de exclusión por tamaño y/o desnaturalización en gel de Coomasie para confirmar una proteína recombinante del tamaño esperado estaba presente.
Ejemplo 14: Proyección de anticuerpos en la sangre periférica Ciento veintiséis muestras de suero o plasma individuales fueron examinados para detectar la presencia de anticuerpos IgG que une a las proteínas recombinantes solubles homotrimérica HA (Tabla 9) utilizando un sistema de exploración de micromatrices , se unen a los viriones enteros inactivados de influenza A (Tabla 10) , utilizando técnicas de ELISA estándar y inhibe o neutraliza la infección por virus de las células MDCK con influenza A HlNl A/lslas Salomón/3/06 o H3N2 A/Wisconsin/67/05. Una parte de las muestras de plasma contenía anticuerpos IgG que se unían específicamente a la proteína recombinante soluble de HA homotrimérica, unido a viriones inactivados, y la infectividad del virus neutralizado. Esto indica que los anticuerpos podrían ser vinculantes epítopos lineales o discontinuos en el homotrímero de HA, así como la unión a determinantes conformacionales de múltiples variantes de la homotrímero de HA. Objetivos solubles incluyen, pero no se limitan a, proteínas HA recombinantes ejemplares derivados de las cepas de virus de la influenza que figuran en la Tabla 2 y las cepas de virus inactivados enumerados en la Tabla 11.
Tabla 11. Viriones completos inactivadas utilizados en ensayos de unión Ejemplo 15: Identificación y rescate de anticuerpos HA-específieos Las células de memoria de IgG + B purificadas a partir de una muestra de sangre humana se cultivaron durante 9 días con el fin de activar, proliferar, y diferenciar estas células B de memoria en células plasmáticas secretoras de IgG. Los medios de cultivo de células B que contiene la IgG se exploró para determinar la presencia de anticuerpos IgG que une a las proteínas HA homotrimérica solubles recombinantes (Tabla 9) usando un sistema de barrido de micromatrices , se unen a toda la Influenza A virus (Tabla 10) utilizando técnicas estándar de ELISA y inhibe o neutraliza la infección por virus de las células MDCK con Influenza A HlNl A/Islas Salomón/3 /06 o H3N2 A/Wisconsin/67/05. Como se muestra en las Tablas 12, 13, y 14, se identificaron treinta y nueve pozos BCC que contenía un anticuerpo IgG con varios virus, HA, o perfiles neutralizantes y las regiones variables del anticuerpo se clonaron a continuación, a partir de los cultivos de células B correspondientes .
Las transíecciones transitorias con monoclonales pares cadena pesada y ligera de cada BCC también se realizaron en 293 6E células para reconstituir y producir el anticuerpo. Sobrenadantes de anticuerpos reconstituidas fueron entonces examinados para la igG que se une a las proteínas recombinantes solubles homotrimérica de HA (Tabla 9), utilizando un sistema de micro-matriz de exploración, se unen a virus entero de influenza A (Tabla 11) utilizando técnicas estándar de ELISA, y inhibe o neutraliza la infección por virus de células MDCK con Influenza A HlNl a/Islas Salomón/3/06, y/o HlNl A/California/04/09 , y/o H3N2 A/Wisconsin/67/05 para identificar el anticuerpo anti-HA rescatado. Enlace y neutralización de los anticuerpos IgG humanos a los objetivos anteriores se compara con la unión de la propiedad de anticuerpo de control positivo TCN-032 (específico para el extremo N-terminal de la proteína de la matriz 2 de la influenza A, E.U. Solicitud de Patente No. 12/ 795, 618) o a la unión de la ampliamente hemaglutinina específica, mAb sin neutralización TCN-504 (también conocido como 3251K17, y descrito en el presente documento) , y la propiedad de anticuerpo de control negativo TCN-202 (específico para el sitio AD2 me epítopo en gB de citomegalovirus humano) a estos mismos objetivos.
Las secuencias de los anticuerpos rescatados se determinan. Además, la secuencia de cada uno de los polinucleótidos que codifican las secuencias de anticuerpo se determina.
Ejemplo 16: perfiles de Enlace de IgG en sobrenadante de cultivo de células B o sobrenadante de transfeccion monoclonales utilizando viriones de influenza A inactivadas en su totalidad Para determinar si los mAbs humanos en BCC SN o monoclonales sobrenadante transfeccion de virus purificado, ligado a enzimas de inmunoabsorción (ELISAs) fueron realizados según los métodos siguientes. En pocas palabras, las distintas cepas del subtipo de virus de la influenza A purificadas se recubrieron directamente sobre una placa de ELISA. Una sola dilución de BCC sobrenadante de los mAb indicados en la Tabla 12 o del sobrenadante de la transfeccion monoclonal se muestra en la Tabla 15 y diversas diluciones de un anticuerpo de control positivo (TCN-032) a continuación, se añadieron a los pozos recubiertos de virus. El anticuerpo no unido se elimina mediante lavado y el anticuerpo unido se detectó con un anticuerpo anti-humano conjugado con HRP. Se detectó la presencia de anticuerpos anti-influenza cuando el cromógeno (TMB) se oxida por el conjugado de HRP, que resulta en un bluecolor. La reacción se detuvo mediante la adición de HCl, girando los pozos positivos de anticuerpos amarillo. El color amarillo tiene una absorbancia máxima a 450 nm.
Métodos : Placas™ Microlon Escudo con 25 ul/pozo de 3 ug/ml viriones inactivados de influenza A Incubar las placas durante la noche a 4 ° C.
Retire las placas de 4 ° C y lavar cuatro veces con PBS con calicum y magnesio (PBS w/Ca2 +, Mg2 +) , utilizando EL405x (programa de lavado: ELISA_4x_wash) .
Añadir 20 ul/pozo de leche al 1%/PBS a las placas.
Preparar curvas mAb de control por diluciones 1:3 de 6 ug/ml 5 ul de cada BCC SN o sobrenadante de la transfeccion y de control de las curvas de mAb transitorios monoclonales se estampan sobre la placa de acuerdo con el mapa de placa. Incubar 2 horas (h) a temperatura ambiente (RT) .
Lavar las placas cuatro veces con PBS w/Ca2 +, Mg2 +, utilizando EL405x (Programa de lavado: ELISA_4x_wash) Añadir 25 ul/pozo de anticuerpo policlonal (PAB) de cabra anti-humano ( Human) Fe de IgG peroxidasa de rábano picante (HRP) a una dilución de 1:5000. incubar 1 hora a temperatura ambiente.
Lavar las placas cuatro veces con PBS w/Ca2 +, Mg2 +, utilizando EL405x (Programa de lavado: ELISA_4x_wash) Añadir 25 ul/pozo de Ultra-TMB (3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidina) a Neat .
Desarrollar 30 minutos (min) a TA.
Detener mediante la adición de 25 ul/pozo de ácido clorhídrico (HC1) a una concentración de 0,3 M.
Leer la placa a 450 nm con el Spectromax.
Uno o más de los siguientes anticuerpos de control se utilizaron 'en estos experimentos: TCN-504 (también conocido como 3251_K17, y se describen en el presente documento) TCN-032 (también conocido como 8110, específico para la proteína A de la influenza M2 ) , y TCN-202 (también conocido como 2N9 , específica para el sitio AD2 me epítopo en gB de citomegalovirus humano) de proteínas .
Los siguientes virus purificados se utilizaron en estos experimentos: A/Islas Salomón/3/2006 (HlNl) (SEQ ID NO: 728), A/Japón/305/1957 (H2N2) (SEQ ID NO: 729), A/Wisconsin/67/2005 (H3N2) (SEQ ID NO: 730). Como se muestra en la Tabla 15 los anticuerpos monoclonales humanos en el sobrenadante de la transfección transitoria se unen fuertemente a uno o más de la influenza HlNl, H2N2 , y/o los virus H3N2 que reproducen el perfil de unión del virus del anticuerpo de IgG en el BCC SN original de (Tabla 12) .
Ejemplo 17: perfiles de Enlace IgG en sobrenadante de cultivo de células B o sobrenadante de transfección monoclonal utilizando trimeric HA Para determinar si los mAbs humanos en BCC SN o monoclonales se unen sobrenadante de la transfección a una o más de las proteínas HA recombinantes homotrimérica, se utilizó un sistema de escaneo de micro-matriz de acuerdo con los métodos siguientes. Veinte Nexterion P (Schott) portaobjetos de vidrio se incubaron durante la noche en una cámara húmeda con 3 mg/ml de cabra anti-humano, el anticuerpo especifico de Fe. Diapositivas P Nexterion contienen un hidrogel que termina en un grupo reactivo éster de NHS que se une el anticuerpo de captura. La reacción se inactivo a continuación, usando etanolamina 50 mM en mM NaBorate 50 (pH 8,0) tampón durante 1 hora con agitación, seguido de 3 lavados con agua ultrapura. Sobrenadantes de transfección se transfirieron a placas de matriz de origen 384 pozos. Placas de origen de la matriz de control se hacen en 8 puntos, 3 veces diluciones seriadas de anticuerpos a partir de 3ug/ml y final 0 ug/ml en BCC o medio de transfección simulada. Tanto BCC o sobrenadante placas de origen de la matriz de transfección y placas de control se cargan en una impresora Aushon 2470 microensayo junto con las 20 muestras preparadas.
Los microensayos se imprimen en 48 bloques de los subconjuntos con un número variable de características y repeticiones dependiendo del número de sobrenadantes de transfección se está imprimiendo. Microensayos impresos se dejaron reposar durante al menos 1 hora después de la impresión (de la noche) en la cámara de humedad controlada de la impresora (80%) . A continuación, se eliminan rápidamente de la impresora, se lavan, y se centrifugan seco para preparar las diapositivas para incubaciones de muestra. Un LifterSlip se coloca en cada diapositiva y 90 ULS de muestra se añade a cada uno. Cada diapositiva recibe ya sea uno de 18 V5 etiquetados-triméricos de HA en concentraciones predeterminadas, una peroxidasa de rábano picante de cabra anti-humana H + L de anticuerpo especifico en una lug/ml, o un espacio en blanco para un total de 20 diapositivas. Los portaobjetos se incubaron durante la noche en una cámara húmeda a temperatura ambiente. Después del lavado, secado por centrifugación, y nueva aplicación LifterSlip, 19 diapositivas, con exclusión de diapositivas se incubaron con anti-IgG humana, se incuban con anti-V5 conjugado con biotina en una dilución 1:1000 durante 1 hora. Posteriormente los portaobjetos se lavaron de nuevo, se secaron y se prepararon para una incubación de 1 hora con una dilución 1:300 de NeutrAvidin-HRP . Después de un nuevo lavado, secado y preparación de todos los 20 portaobjetos se incubaron durante 1 hora con un reactivo de tiramida-AlexaFluor acuerdo con las instrucciones del equipo. Después del lavado final y secado de las diapositivas se escanean en un AXON GenePix 4300A a una longitud de onda de excitación de 594 nm y con una banda de emisión que van desde 619nm a 641nm. Los datos son recuperados utilizando el software AXON GenePix y se analiza a continuación, para los perfiles de unión.
Métodos : 1. Diluir cabra, anticuerpo-FC específica antihumano (Jacksonlmmuno, 10mg/ml) para 3mg/ml en PBS 0.05 y Tween y se aplican a 20 Nexterion P Slides (Schott) , utilizando 90 ULS bajo LifterSlips (Thermo) . 2. Incubar en una cámara húmeda durante la noche a temperatura ambiente. 3. Extracción de la LifterSlip apagar todas las diapositivas de etanolamina 50 mM (Fisher) en 50 mM de tetraborato de sodio decahidratado (Fisher, S248-500) a un pH de 8.0.
. Se inactiva durante 1 hora con la incubación a temperatura ambiente. 5. Lave todas las diapositivas (3x 2 min MilliQ lavados de agua con agitación) . 6. Cargue todas las diapositivas en Aushon 2470 impresora de microensayos . 7. Preparar placas de control utilizando por spiking anticuerpos de control en el medio de transfección para formar un punto de 8 dilución en serie 3 veces a partir de 3 ug/ml y que termina en 0 ug/ml . Traslado diluciones de control para 4 platos de origen de la matriz (Thermo) . 8. Cargue todas las placas de matriz de origen, el control y la muestra, en Aushon 2470 impresora de microensayos y comenzar deposición después de comprobar todos los niveles de los líquidos necesarios. Número de duplicados se basa en el número de sobrenadantes de transfección se está imprimiendo. Por lo general de 1 a 10 repeticiones . 9. Permitir diapositivas para sentarse durante al menos una hora, a la noche, después de la deposición. 10. Lavar inmediatamente (PBS con 2% de Tween 20, 5 min; agua MilliQ, 2 min, 3 x) y centrifugar (2000 rpm durante 1 minuto) 11. Usando LifterSlips y aplicar 90 ULS de HA en la siguiente concentración: Utilice lx PBS, 0,05% de Tween 20, 10% Bloqueador de Caseína (Thermo, # 37528) para llevar el homotrimerica HA a la concentración deseada. 12. Incubar toda la noche en una cámara húmeda a temperatura ambiente. 13. Lavar inmediatamente (PBS con 2% de Tween 20, 5 min; agua MilliQ, 2 min, 3 x) y centrifugar (2000 rpm durante 1 minuto) . 14. Uso de LifterSlips incuban todo pero se deslizan previamente incubadas con anticuerpos anti-IgG humana (H & L) -HRP con 90uls de anti-V5-biotina (ABD Serotec, MCA1360B) a 1 ug/ml en lx PBS 0,05% de Tween 20 durante 1 hora a temperatura ambiente en una cámara húmeda. 15. Lavar inmediatamente (PBS con 2% de Tween 20, 5 min; agua MilliQ, 2 min, 3 x) y centrifugar (2000 rpm durante 1 minuto) . 16. Uso de LifterSlips incuban con 90 ULS de peroxidasa de rábano picante conjugado NeutrAvidin (Pierce # 31030) durante 1 hora a temperatura ambiente en una cámara húmeda . 17. Lavar inmediatamente (PBS con 2% de Tween 20, 5 min; agua MilliQ, 2 min, 3 x) y centrifugar (2000 rpm durante 1 minuto) . 18. Preparar el reactivo tiramida amplificación de señal de acuerdo con las instrucciones del equipo (Kit TSA # 25, Invitrogen, T20935) . Brevemente diluir 1 ul de solución de peróxido de hidrógeno en 200 ULS de tampón de amplificación. Tome 20 ULS de solución tampón de peróxido de hidrógeno/amplificación y añadir a 1.940 ULS de tampón de amplificación fresco. A continuación, añadir 40 ULS de tiramida-Alexa Fluor que resulta en un total de 2 mi de reactivo de amplificación. 19. incubar todas las diapositivas 20 con reactivo de amplificación durante 1 hora a temperatura ambiente en una cámara húmeda. 20. Lavar inmediatamente (PBS con 2% de Tween 20, 5 min; agua MilliQ, 2 min, 3 x) y centrifugar (2000 rpm durante 1 minuto) 21. Analizar todos los portaobjetos en un AXON GenePix 4300A a una longitud de onda de excitación de 594 nm y con una banda de emisión que van desde 619nm a 641nm o un escáner óptico con capacidades similares. 22. Colocar las plantillas en cada diapositiva utilizando GenePix Pro 7 o software similar para recuperar datos de entidad. 23. Analizar datos de entidad para los perfiles de unión a cada trimeric HA.
Como se muestra en la Tabla 16, los anticuerpos monoclonales humanos en el sobrenadante de la transfección transitoria se unen fuertemente a una o más de las proteínas HA recombinantes homotrimérica que reproducen el perfil de unión del virus del anticuerpo de IgG en el BCC SN original de (Tabla 12).
Ejemplo 18: perfiles de neutralización de IgG en sobrenadante de cultivo B celular o sobrenadante de transfección monoclonal Las células MDCK se sembraron a 3 x 103 células/pozo en una placa de 384 pozos en medio D EM completo (suplementado con 10% de FBS, IX penicilina/estreptomicina, lx Glutamax™, y IX de piruvato sódico) y se incubaron a 37 ° C durante la noche.
El virus de la influenza A se preincubó con cualquiera de BCC sobrenadante o sobrenadante de la transfeccion monoclonal o un control positivo anticuerpo monoclonal neutralizante (MAb) , que se diluyó en agrupado sobrenadante BCC o en el sobrenadante de la transfeccion simulada a las concentraciones deseadas y se incubó durante la noche (~ 16 horas) a 37 ° C. Volúmenes y diluciones Void se hicieron en PBS con Mg2 +, Ca2 +, 200 mM de mañosa, y 1% de BSA a 37 ° C con un volumen total de 30 1/pozo.
Cada muestra también contenía: (a) 20 1/pozo de sobrenadante BCC; o (b) 20 ul/pozo de transfeccion monoclonal (c) 3000 Ul/pozo A/Islas Salomón/ 0312006 (HlNl) en 10 1/pozo; o (e) 3,000 Ul/pozo A/California/04/2009 (HlNl) en 10 ul/pozo; o (f) 3000 Ul/pozo A/Wisconsin/67/05 (H3N2) en 10 ul/pozo Antes de la infección, las células MDCK se lavaron una vez con una solución que contiene PBS, Mg2 +, Ca2 + y a 60 1/pozo. Después del lavado, 25 ul de la mezcla de virus/mAb se transfiere y la infección procedió durante 4 horas a 37 0 C.
Después de 4 horas de la infección, las células MDCK se lavan dos veces con DMEM completo. Después del último lavado, 25 1/pozo de DMEM completo se mantuvo, y las placas se incubaron durante la noche a 37 0 C.
Después de la incubación durante la noche se retiró el medio de cultivo y 20 1 de BD Cytofix/Cytoperm™ (Cat # 51-2090KZ) se añadió a cada pozo y se incubó a temperatura ambiente (TA) durante 30 minutos. A continuación, los pozos se lavaron tres veces usando el lavador de placas M384 Atlas.
Después del último lavado, se añadieron 15 1/pozo de 100 mg/ml igG de conejo (Sigma) en PBS con Mg2 +, Ca2 +, y el 1% de BSA y se incubaron durante al menos 5 minutos a temperatura ambiente. Veinte 1/pozo de mAb anti-M2e TCN-032 a 2 g/ml en PBS con Mg2 +, Ca2 +, y 1% de BSA, se añadieron a cada pozo y se incubó durante al menos 30 minutos a temperatura ambiente. Los pozos se lavan una vez usando el lavador de placas Atlas con PBS con Mg2 +, Ca2 + Veinte 1/pozo de 2 mg/ml de Alexa Fluor® 647 anti-humano IgG H + L (Invitrogen™) y 20 g/ml de Hoechst 33342 (Invitrogen™) y se incubó en la oscuridad durante 45 minutos a temperatura ambiente. Los pozos se lavaron tres timesusing el lavador de placas Atlas con PBS con Mg2 +, Ca2 +. Veinte microlitros de PBS con Mg2 +, Ca2 +, y 1% de BSA se añadió a cada pozo, y las placas se sellaron con cinta de sellado negro. Las placas se analizaron mediante el escaneo utilizando un analizador en celda. En concreto, se realizó el análisis utilizando el Software Developer celular IN, se realizó Protocolo " 384 GG Hoechst AF647 4x. " Análisis de la exploración con el desarrollador de software Caja de herramientas, Protocolo " Celular Enlace Núcleos GG densidad 4. " El ensayo fue capaz de detectar los sobrenadantes así que neutralizaron individualmente la infección de influenza A. Si un punto de corte arbitrario se estableció en < 150 nucleoproteína (NP) + células y los pozos con una monocapa de células rotas se restaron, un total de 122 pozos anotó como positivo.
De la influenza Ejemplar anticuerpos neutralizantes que se identificaron con son: TCN-522 (3212_I12), TCN-521 (3280_D18), TCN-523 (5248_A17), TCN-563 (5237_B21), TCN-526 (5084_C17), TCN-527 (5086_C06), TCN-528 (5087_P17), TCN-529 (5297_H01), TCN-530 (5248_Hl0a), TCN-531 (5091_H13), TCN-532 (5262_H18), TCN-533 (5256_A17), TCN-534 (5249_B02), TCN-535 (5246_P19), TCN-536 (5095_N01), TCN-537 (3194JD21), TCN-538 (3206_O17), TCN-539 (5056_A08), TCN-540 (5060_F05), TCN-541 (5062_M11), TCN-542 (5079_A16), TCN-543 (5081_G23), TCN-544 (5082_A19), TCN-545 (5082_I15), TCN-546 (5089_L08), TCN-547 (5092_F11), TCN-548 (5092_P01), TCN-549 (5092_P04), TCN-550 (5096_F06), TCN-551 (5243_D01), TCN-552 (5249_I23), TCN-553 (5261_C18), TCN-554 (5277_M05), TCN-555 (5246_L16), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_?04), TCN-558 (5248_Hl0b), TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10), y TCN-504 (3251_K17).
Las actividades de neutralización individuales de algunos de estos anticuerpos se proporcionan en la Tabla 17.
Varios anticuerpos fueron identificados que pueden ser no neutralizante, incluyendo, TCN-504 (3251_K17), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04), TCN-559 (5097_G08), y TCN-560 (5084_P10). Estos anticuerpos, similares a los anticuerpos neutralizantes de la invención, se unen a una amplia gama de proteínas HA, incluyendo la secuencia y variantes conformacionales . En ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos, incluyendo TCN-504 (3251_K17), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04), TCN-559 (5097_G08), y TCN-560 (5084_P10) no neutralizante puede ser utilizado como conjugados de anticuerpo- fármaco .
Tabla 12 : Resumen de la detección BCC SN por ELISA para la unión del virus .
Tabla 13 : Resumen de la detección BCC SN por el enlace del virus a HA homotrimérica recombinante.
Enlace HA Trimérico: RLU La Tabla 13 (continuación) : Resumen del cribado BCC SN por el enlace del virus a HA homotrimérica recombinante .
Enlace HA Trimérico: RLU Tabla 14: Resumen de la detección BCC SN para neutralización del virus.
Tabla 15: Resumen de la detección sobrenadante de la transfección de anticuerpo monoclonal por ELISA para la unión de virus .
La Tabla 15 (continuación) : Resumen del cribado del sobrenadante de transfección de anticuerpo monoclonal por ELISA para la unión del virus.
Tabla 16: Resumen de la detección sobrenadante de transfeccion del anticuerpo monoclonal para la unión del virus a HA homotrimérica recombinante.
La Tabla 16 (continuación) : Resumen del cribado sobrenadante de transfeccion anticuerpo monoclonal para la unión del viruas a HA recombinante homotrimérica.
Tabla 17. Resumen de la detección sobrenadante de la transfección de anticuerpo monoclonal para la neutralización del virus.
OTRAS MODALIDADES Aunque las modalidades específicas de la invención se han descrito en el presente documento para fines de ilustración, pueden hacerse diversas modificaciones sin desviarse del espíritu y alcance de la invención. Por consiguiente, la invención no está limitada excepto por las reivindicaciones adjuntas.
Aunque la invención se ha descrito junto con la descripción detallada de la misma, la descripción anterior pretende ilustrar y no limitar el alcance de la invención, que se define por el alcance de las reivindicaciones adjuntas. Otros aspectos, ventajas y modificaciones están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones .
La patente y la literatura científica a que se refiere el presente documento se establece el conocimiento que está disponible para los técnicos en la materia. Todas las patentes de Estados Unidos y solicitudes de patentes de los Estados Unidos publicadas o no publicadas citadas en el presente se incorporan por referencia. Todas las patentes extranjeras publicadas y solicitudes de patente citadas en el presente se incorporan por referencia. GenBank y NCBI presentaciones indicados por el número de acceso citadas en el presente se incorporan por referencia. Todas las demás referencias publicadas, documentos, manuscritos y publicaciones científicas citadas en el presente se incorporan por referencia.
Aunque esta invención se ha mostrado y descrito particularmente con referencias a modalidades preferidas de la misma, se entenderá por los técnicos en la materia que diversos cambios en forma y detalles pueden hacerse en la misma sin apartarse del alcance de la invención abarcado por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (29)

REIVINDICACIONES
1. Una composición que comprende: (a) un anticuerpo humano aislado que se une específicamente a un epítopo de la glicoproteína de hemaglutinina (HA) de un virus de la influenza; y (b) un anticuerpo monoclonal humano aislado que se une específicamente a un epítopo en el dominio extracelular del polipéptido de ectodominio de matriz 2 (M2e) de un virus de la influenza.
2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho anticuerpo monoclonal humano aislado que se une específicamente a un epítopo del polipéptido M2e es TCN-032 (8110), 21B15, TCN-031 (23K12), 3241_G23, 3244_I10, 3243_J07, 3259_J21, 3245_019, 3244_H04, 3136_G05, 3252_C13, 3255_J06, 3420_I23, 3139_P23, 3248_P18, 3253_P10, 3260_D19, 3362_B11, o 3242_P05.
3. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho anticuerpo humano aislado que se une específicamente a un epítopo de la glicoproteína HA es TCN-522 (3212_I12), TCN-521 (3280_D18), TCN-523 (5248_A17), TCN-563 (5237_B21), TCN-526 (5084_C17), TCN-527 (5086_C06)( TCN-528 (5087_P17), TCN-529 (5297._H01) , TCN- 530 (5248_ H10) , TCN-531 (5091._H13) , TCN- 532 (5262. _H18) , TCN- 533 (5256_ A17) , TCN-534 (5249. _B02) , TCN- 535 (5246. _P19) , TCN- 536 (5095_ 01) , TCN-537 (3194. _D21) , TCN- 538 (3206. _017) , TCN- 539 (5056_ A08) , TCN-540 (5060. _F05) , TCN- 541 (5062. _M11) , TCN- 542 (5079_ A16) , TCN-543 (5081. _G23) , TCN- 544 (5082. _A19) , TCN- 545 (5082_ .115) , TCN-546 (5089. _L08) , TCN- 547 (5092. _F11) , TCN- 548 (5092_ .P01) , TCN-549 (5092. _P04) , TCN- 550 (5096. _F06) , TCN--551 (5243 _D01) , TCN -552 (5249_I23) TCN- 553 (5261_C18), TCN-554 ( 5277_M05 ) , TCN-555 (5246_L16), TCN-556 (5089_K12), TCN-557 (5081_A04), TCN 558 (5248_Hl0b), TCN-559 (5097_G08), TCN-560 (5084_P10), TCN-504 (3251_K17), SC06-141, SC06-255, SC06-257, SC06-260, SC06-261, SC06-262, SC06-268, SC06-272, SC06-296, SC06-301, SC06-307, SC06-310, SC06-314, SC06-323, SC06-325, SC06-327, SC06-328, SC06-329, SC06-331, SC06-332, SC06-334, SC06-336, SC06-339, SC06-342, SC06-343, SC06-344, CR6141, CR6255, CR6257, CR6260, CR6261, CR6262, CR6268, CR6272, CR6296, CR6301, CR6307, CR6310, CR6314, CR6323, CR6325, CR6327, CR6328, CR6329, CR6331, CR6332, CR6334, CR6336, CR6339, CR6342, CR6343, CR6344, 2A, D7 , D8 , FIO, G17, H40, A66, D80, E88, E90 o H98.
4. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dicho epítope de glicoproteína HA es GVTNKV S11DK (SEQ ID NO: 198), GVTNKVNSIINK (SEQ ID NO: 283), GVTNKENSIIDK (SEQ ID NO: 202), GVTNKVNRIIDK (SEQ ID NO: 201), GITNKVNSVIEK (SEQ ID NO: 281), GITNKENSVIEK (SEQ ID NO: 257), GITNKVNSIIDK (SEQ ID NO: 225), y KITSKVNNIVDK (SEQ ID NO: 216).
5. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque dicho epítope polipéptido de M2e es un epítope descontinuo.
6. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho epí opo del polipéptido M2e comprende, a) el aminoácido en las posiciones 2, 5, y 6 de MSLLTEVETPTRNEWGCRCNDSSD (SEQ ID NO : 1), O b) el aminoácido en las posiciones 2, 5, y 6 de SLLTEV (SEQ ID NO : 42) .
7. Una composición que comprende: (a) un anticuerpo humano anti-HA aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende un dominio de región variable de cadena pesada (VH) y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL comprenden cada uno tres regiones determinantes de complementariedad 1 a 3 (CDRl-3), y en donde cada CDR comprende las siguientes secuencias de aminoácidos: VH CDRl : SEQ ID NOs : 247, 571, 586, 597, 603, 609, 615, 627, 633, 637, 643, 649, 658, 664, 670, 303, 251, 242, o 222; VH CDR2: SEQ ID NOs : 248, 572, 587, 592, 598, 604, 610, 616, 628, 634, 638, 644, 650, 655, 659, 665, 671, 306, 249, 307, o 221; VH CDR3: SEQ ID NOs : 568, 573, 588, 593, 599, 605, 611, 617, 629, 635, 639, 645, 651, 656, 660, 666, 672, 725, 246, 290, o 220; VL CDRl: SEQ ID NOs : 569, 574, 577, 580, 583, 589, 594, 612, 618, 621, 624, 640, 646, 652, 661, 667, 285, 289, 245, 224, o 219; VL CDR2 : SEQ ID NOS: 570, 575, 578, 581, 584, 590, 595, 601, 607, 613, 619, 622, 625, 631, 653, 662, 668, 305, 223, o 231; VL CDR3: SEQ ID NOs : 289, 576, 579, 582, 585, 591, 596, 602, 608, 614, 620, 623, 626, 632, 636, 642, 648, 654, 657, 663, 669, 308, 250, 227, o 280; y (b) un anticuerpo aislado de ectodominio antimatriz 2 (M2e) , o fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende un dominio variable de cadena pesada (VH) y un dominio variable de cadena ligera (VL) , en donde el dominio VH y el dominio VL comprenden cada uno tres regiones determinantes de complementariedad 1 a la 3 (CDRl-3), y en donde cada CDR comprende las siguientes secuencias de aminoácidos : VH CDRl: SEQ ID NOs : 72, 103, 179, 187, 203, 211, 228, 252, 260, 268, 284, 293, o 301; VH CDR2: SEQ ID NOs : 74, 105, 180, 188, 204, 212, 229, 237, 253, 261, 269, 285, o 294; VH CDR3 SEQ ID NOs : 76, 107, 181, 189, 197, 205, 213, 230, 238, 254, 262, 270, 286, o 295; VL CDR1: SEQ ID NOS: 59, 92, 184, 192, 208, 192, 233, 241, 265, o 273; VL CDR2: SEQ ID NOs : 61, 94, 185, 193, 209, 217, 226, 234, 258, 274, o 282; y VL CDR3 : SEQ ID NOs : 63, 96, 186, 194, 210, 218, 243, 259, 267, 275, 291, o 300.
8. Una composición que comprende: (a) un anticuerpo aislado humano anti-HA, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende un dominio de región variable de cadena pesada (VH) y un dominio de variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL comprenden cada uno tres regiones determinantes de complementariedad 1 a 3 (CDRl-3), y en donde cada CDR comprende las siguientes secuencias de aminoácidos : VH CDR1: SEQ ID NOS : 247, 571, 586, 597, 603, 609, 615, 627, 633, 637, 643, 649, 658, 664, 670, 303, 251, 242, o 222; VH CDR2: SEQ ID NOs : 248, 572, 587, 592, 598, 604, 610, 616, 628, 634, 638, 644, 650, 655, 659, 665, 671, 306, 249, 307, o 221; VH CDR3: SEQ ID NOs : 568, 573, 588, 593, 599, 605, 611, 617, 629, 635, 639, 645, 651, 656, 660, 666, 672, 725, 246, 290, o 220; VL CDRl: SEQ ID NOs : 569, 574, 577, 580, 583, 589, 594, 612, 618, 621, 624, 640, 646, 652, 661, 667, 285, 289, 245, 224, o 219; VL CDR2: SEQ ID NOs : 570, 575, 578, 581, 584, 590, 595, 601, 607, 613, 619, 622, 625, 631, 653, 662, 668, 305, 223, o 231; VL CDR3: SEQ ID NOs : 289, 576, 579, 582, 585, 591, 596, 602, 608, 614, 620, 623, 626, 632, 636, 642, 648, 654, 657, 663, 669, 308, 250, 227, o 280; y (b) un anticuerpo de ectodominio de anti-matriz 2 aislado, o fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende un dominio variable de cadena pesada (VH) y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VH y el dominio VL comprenden cada uno tres regiones determinantes de complementar!edad de 1 a 3 (CDR1-3), y en donde cada CDR comprende las siguientes secuencias de aminoácidos : VH CDRl: SEQ ID NOS : 109, 112, 182, 190, 206, 214, 239, 255, 263, 271, 287, 296, o 304; VH CDR2: SEQ ID NOs : 110, 113, 183, 191, 207, 215, 232, 240, 256, 264, 272, 288, o 297; VH CDR3 SEQ ID NOs : 76, 107, 181, 189, 197, 205, 213, 230, 238, 254, 262, 270, 286, o 295; VL CDR1: SEQ ID NOs : 59, 92, 184, 192, 208, 192, 223, 241, 265, o 273 ; VL CDR2: SEQ ID NOs : 61, 94, 185, 193, 209, 217, 226, 234, 258, 274, o 282; y VL CDR3: SEQ ID NOs : 63, 96, 186, 194, 210, 218, 243, 259, 267, 275, 291, o 300.
9. Una composición que comprende: (a) un anticuerpo aislado humano anti-HA, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende un dominio región variable de cadena pesada (VH) , en donde el dominio VH comprende las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NOs 309, 313, 317, 321, 325, 329, 333, 337, 341, 345, 349, 353, 357, 361, 365, 369, 373, 377, 381, 385, 389, 393, 397, 401, 405, 409, 199, 417, 423, 429, 435, 441, 447, 453, 459, 465, 471, 477, 483, 489, 495, 501, 507, 513, 519, 525, 531, 537, 543, 550, 556, o 562, y un dominio variable de cadena ligera (VL) , caracterizado porque el dominio VL comprende las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NOs 310, 314, 318, 322, 326, 330, 334, 338, 342, 346, 350, 354, 358, 362, 366, 370, 374, 378, 382, 386, 390, 394, 398, 402, 406, 410, 414, 420, 426, 432, 438, 444, 450, 456, 462, 468, 474, 480, 486, 492, 498, 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 547, 553, 559, o 565; y (b) un anticuerpo de ectodominio de anti-matriz 2 aislado (M2e) , o fragmento de unión al antigeno del mismo, que comprende un dominio variable de cadena pesada (VH) , en donde el dominio VH comprende las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NO 44, 277, 276, 50, 236, 235, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, o 176, y una variable de cadena ligera (VL) de dominio, caracterizado porque el dominio VL comprende las siguientes secuencias de aminoácidos: SEQ ID NOs 46, 292, 52, 118, 122, 126, 130, 134, 138, 142, 146, 150, 154, 158, 162, 166, 170, o 178.
10. Una composición de vacuna multivalente que comprende la composición de conformidad con la reivindicación 7, 8, o 9.
11. Una composición de vacuna multivalente que comprende la composición de conformidad con la reivindicación 1.
12. Una composición farmacéutica que comprende la composición de conformidad con la reivindicación 1, 7, 8, o 9 y un portador farmacéutico.
13. Un método para estimular una respuesta inmune en un sujeto, que comprende administrar al sujeto la composición de conformidad con la reivindicación 12.
14. Un método para el tratamiento de una infección por el virus de la influenza en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto la composición de conformidad con la reivindicación 12.
15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el sujeto ha sido expuesto a un virus de la influenza.
16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el sujeto no ha sido diagnosticado con una infección de la influenza.
17. Un método para la prevención de una infección por el virus de la influenza en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar a dicho sujeto la vacuna de conformidad con la reivindicación 10 o 11, antes de la exposición de dicho sujeto a un virus de la influenza .
18. El método de conformidad con la reivindicación 14 o 17, en donde el método comprende además administrar un fármaco anti-viral, un inhibidor de la entrada viral o un inhibidor de la unión viral.
1 . El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque dicho fármaco anti-viral es un inhibidor de neuraminidasa, un inhibidor de HA, un inhibidor de ácido siálico o un canal iónico M2.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque dicho inhibidor de canal iónico M2 es la amantadina o rimantadina.
21. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque dicho inhibidor de la neuraminidasa es zanamivir o fosfato de oseltamivir .
22. El método de conformidad con la reivindicación 14 o 17, que comprende además la administración de un segundo anticuerpo de anti-influenza A.
23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque dicho anticuerpo se administra antes o después de la exposición al virus de la influenza.
24. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el sujeto está en riesgo de contraer una infección por influenza.
25. El método de conformidad con la reivindicación 14 o 17, caracterizado porque dicha composición se administra a una dosis suficiente para promover el aclaramiento viral o eliminar las células infectadas de la influenza.
26. Un método para determinar la presencia de una infección por virus de la influenza en un sujeto, que comprende las etapas de: (a) poner en contacto una muestra biológica obtenida del sujeto con el anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 7-9; (b) detectar una cantidad del anticuerpo que se une a la muestra biológica; y (c) comparar la cantidad de anticuerpo que se une a la muestra biológica a un valor de control, y de ello, determinar la presencia del virus de la influenza en el sujeto .
27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el valor de control se determina poniendo en contacto una muestra de control obtenida del sujeto con el anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 7-9 y detectar una cantidad del anticuerpo que se une a la muestra de control.
28. Un equipo de diagnóstico que comprende la composición de conformidad con las reivindicaciones 1, 7, 8, o 9.
29. Un equipo profiláctico que comprende la vacuna de conformidad con la reivindicación 10 o 11.
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4932940B2 (ja) * 2007-11-12 2012-05-16 セラクローン サイエンシーズ， インコーポレイテッド インフルエンザの治療および診断のための組成物および方法
US20110033476A1 (en) * 2007-11-12 2011-02-10 Theraclone Sciences Inc. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of influenza
CN103533929A (zh) * 2011-03-15 2014-01-22 特罗科隆科学有限公司 用于流行性感冒的治疗和诊断的组合物和方法
EP3489261B1 (en) 2012-08-24 2020-10-21 The Regents of The University of California Antibodies and vaccines for use in treating ror1 cancers and inhibiting metastasis
JP2016519688A (ja) * 2013-04-22 2016-07-07 セラクローン サイエンシーズ， インコーポレイテッド インフルエンザの治療および診断のための組成物および方法
WO2015068781A1 (ja) * 2013-11-06 2015-05-14 国立大学法人大阪大学 インフルエンザウイルスａ型のグループ１に対して広域な中和活性を有する抗体
TWI702229B (zh) 2014-12-19 2020-08-21 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
US9890206B2 (en) * 2015-08-20 2018-02-13 Medigen Biotechnology Corporation H1N1 flu virus neutralizing antibodies
SG11201811559WA (en) 2016-06-27 2019-01-30 Univ California Cancer treatment combinations
US10766929B2 (en) 2017-03-15 2020-09-08 University Of Washington De novo designed hemagglutinin binding proteins
WO2019076218A1 (zh) 2017-10-18 2019-04-25 厦门大学 H3n2亚型流感病毒血凝素蛋白的突变体及其应用
CA3105000A1 (en) * 2018-06-26 2020-01-02 Kyowa Kirin Co., Ltd. Antibody binding to cell adhesion molecule 3
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
WO2021201677A1 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Kiadis Pharma Intellectual Property B.V. Compositions and methods targeting influenza
JP2023540373A (ja) * 2020-09-08 2023-09-22 ノヴェルジェン カンパニー リミテッド インフルエンザａウイルスに対する抗ウイルス用組成物
TWI767434B (zh) * 2020-12-01 2022-06-11 國立成功大學 蛋白質微陣列、其檢測方法、其用途及含有該蛋白質微陣列之試劑盒

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164686A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
US4371553A (en) 1980-08-01 1983-02-01 James River-Dixie/Northern, Inc. Package including product support insert
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
GB8705477D0 (en) 1987-03-09 1987-04-15 Carlton Med Prod Drug delivery systems
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
EP0739904A1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
DE69133476T2 (de) 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
CA2102511A1 (en) 1991-05-14 1992-11-15 Paul J. Higgins Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
FI941572L (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenetelmä
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
ATE297465T1 (de) 1991-11-25 2005-06-15 Enzon Inc Verfahren zur herstellung von multivalenten antigenbindenden proteinen
ATE295420T1 (de) 1992-02-06 2005-05-15 Chiron Corp Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
ATE149570T1 (de) 1992-08-17 1997-03-15 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
PL174721B1 (pl) 1992-11-13 1998-09-30 Idec Pharma Corp Przeciwciało monoklonalne anty-CD20
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US6214388B1 (en) 1994-11-09 2001-04-10 The Regents Of The University Of California Immunoliposomes that optimize internalization into target cells
WO1996016673A1 (en) 1994-12-02 1996-06-06 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5837234A (en) 1995-06-07 1998-11-17 Cytotherapeutics, Inc. Bioartificial organ containing cells encapsulated in a permselective polyether suflfone membrane
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
DE19544393A1 (de) 1995-11-15 1997-05-22 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Synergistische herbizide Mischungen
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
US6824780B1 (en) 1999-10-29 2004-11-30 Genentech, Inc. Anti-tumor antibody compositions and methods of use
JP4773947B2 (ja) 2003-01-09 2011-09-14 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 細菌細胞及び哺乳動物細胞における抗体発現のための二重発現ベクター系
HRP20130163T1 (hr) * 2006-09-07 2013-03-31 Crucell Holland B.V. Ljudske molekule za vezanje koje mogu neutralizirati virus influence h5n1 i njihova uporaba
US20110033476A1 (en) 2007-11-12 2011-02-10 Theraclone Sciences Inc. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of influenza
JP4932940B2 (ja) * 2007-11-12 2012-05-16 セラクローン サイエンシーズ， インコーポレイテッド インフルエンザの治療および診断のための組成物および方法
JP6149213B2 (ja) * 2007-12-06 2017-06-21 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド インフルエンザウイルスに対する抗体およびその使用方法
EP2328928A2 (en) 2008-08-25 2011-06-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Conserved influenza hemagglutinin epitope and antibodies thereto
WO2010063675A1 (en) * 2008-12-04 2010-06-10 Cytos Biotechnology Ag Fully human influenza m2 specific antibodies
US8858948B2 (en) * 2009-05-20 2014-10-14 Theraclone Sciences, Inc. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of influenza
EP2464383A4 (en) * 2009-08-14 2013-02-13 Theraclone Sciences Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF GRIP
AU2011289275A1 (en) * 2010-08-12 2013-02-21 Theraclone Sciences, Inc. Anti-hemagglutinin antibody compositions and methods of use thereof

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