MX2013008786A - Compuestos de acido [ (5h-pirrolo [2,1-c] [1,4] benzodiazepin-11-il) piperazin-1-il] -2, 2-dimetilpropanoico sustituido como antagonista de 5-ht2a/agonista inversos de h1 de actividad dual. - Google Patents

Abstract

Se describen un antagonista del receptor dual de H1/5-HT2A de la fórmula:, sus usos y métodos para su preparación (Ver Formula).

Description

COMPUESTOS DE ÁCIDO r(5H-PIRROLOr2.1 -cTM .41BENZODIAZEPIN- 11-IL)PIPERAZIN-1-IU-2,2-DIMETILPROPANOICO SUSTITUIDO COMO ANTAGONISTAS DE 5-HT?A/AGQNISTAS INVERSOS DE H1 DE ACTIVIDAD DUAL La histamina juega un papel importante en una variedad de procesos fisiológicos a través de su interacción con al menos cuatro diferentes receptores acoplados a la proteína G, los receptores H1-H4. En el CNS, los receptores H1 juegan un papel clave en el ciclo de regulación del sueño y agonistas inversos/antagonistas de H1 se conocen por inducir somnolencia.

Del mismo modo, la serotonina juega papeles importantes en una variedad de procesos fisiológicos a través de su interacción con al menos catorce diferentes receptores acoplados a la proteína G. La modulación de receptores 5-HT2A en el CNS juega un papel clave en el ciclo de regulación del sueño y antagonistas de 5-HT2A han sido mostrados por mejorar el sueño de onda lenta y mantenimiento del sueño en pacientes con insomnio.

Compuestos que tienen actividad antagonista o agonista inverso de H1 o 5-HT2A han sido usados en el tratamiento de insomnio (por ejemplo, doxepina y trazodona, respectivamente) y tienen efectos farmacológicos significativos exhibidos en estudios del sueño en animales. Sin embargo, no están actualmente comercialmente disponibles antagonistas/agonistas inversos de H1/5-HT2A: de actividad dual selectiva.

El documento US 4, 192,803 describe ciertos compuestos de 4-(5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazinilo sustituido para uso como antipsicóticos y neurolépticos.

La presente invención proporciona una familia de compuestos de ácido (5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin- 1 1 -il)piperazin- 1 -il]-2,2-dimetilpropanoico sustituido con alta potencia agonista inversa para el receptor H 1 y alta potencia antagonista para el receptor 5-HT2A- Ciertos compuestos de la presente invención también son selectivos para los receptores H 1 y 5-HT2A, particularmente como contra otros receptores de histamina, receptores de serotonina y otros receptores fisiológicamente relevantes, particularmente como contra el receptor 5-HT2c, receptor GABAA, receptores muscarínicos, receptores dopaminérgicos, receptores adrenérgicos, y el canal hERG. Ciertos compuestos también han demostrado a través de modelos animales que pueden ser útiles para el tratamiento de trastornos del sueño caracterizados por el mantenimiento de la falta del sueño. Como tal, los compuestos de la invención se cree son útiles para el tratamiento de trastornos del sueño caracterizados por latencia de la faltad del sueño o mantenimiento de la falta del sueño o ambos, tales como el tratamiento de insomnio, como por ejemplo insomnio primario temporal o crónico, o insomnio secundario temporal o crónico, o ambos. Ejemplos de insomnio secundario incluyen , pero no se limitan a insomnio asociado con trastornos depresivos (por ejemplo, trastorno depresivo principal, distimia, y/o ciclotimia), insomnio asociado con trastornos de ansiedad (por ejemplo, trastorno de ansiedad generalizado y/o fobia social), insomnio asociado con dolor (por ejemplo, fibromialgia, dolor crónico de hueso o articulación, tales como asociados con artritis inflamatoria u osteoartritis, o dolor neuropático diabético), insomnio asociado con reacciones alérgicas (por ejemplo, asma alérgica, pruritos, rinitis, congestión, etc. ), insomnio asociado con trastornos de las vías respiratorias o pulmón (por ejemplo, con apnea del sueño obstructiva, enfermedad reactiva de las vías respiratorias, etc. ), insomnio asociado con trastornos psiquiátricos, demencia, y/o enfermedades neurodegenerativas, y/o insomnio asociado con trastornos del sueño de ritmo circardiano (por ejemplo, trastorno de sueño del trabajo por turnos, trastorno por cambio de horario o jet lag , trastorno de fase del sueño retardada, trastorno del sueño de fase avanzada, y síndrome del sueño-vigilia no de 24 horas, etc.).

Además, ciertos de los compuestos de la presente invención demuestran potenciación de sus efectos en el sueño sin rápido movimiento del ojo (sueño NREM) y mantenimiento del sueño cuando se coadministran con inhibidores selectivos de reabsorción de serotonina.

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula i donde R es cloro o metilo; R2 es metilo, etilo, isopropilo, cloro, bromo, trífluorometilo, o metiltio; y R3 es hidrógeno o metoxi; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto de la invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. Además, este aspecto de la invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para el tratamiento de insomnio, como por ejemplo insomnio caracterizado por latencia del sueño prolongada o mantenimiento de la falta de sueño o ambos, como por ejemplo insomnio primario, por cambio de horario o jet lag, trastorno del sueño por trabajo por turnos, trastorno de fase del sueño retardado, trastorno del sueño de fase avanzada, y/o trastornos del sueño-vigilia no de 24 horas, que comprende un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con uno o más excipientes, portadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Una modalidad adicional de este aspecto de la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con la Fórmula I , o sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con al menos un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. En una modalidad aún adicional de este aspecto de la invención, la composición farmacéutica además comprende un segundo agente terapéutico el cual es un inhibidor de reabsorción de serotonina, como por ejemplo citalopram, paroxetina, fluoxetina y/o fluvoxetina.

La presente invención también proporciona un método para tratar insomnio, como por ejemplo insomnio caracterizado por latencia del sueño prolongada o mantenimiento de la falta de sueño o ambos, como por ejemplo insomnio primario, por cambio de horario o jet lag , trastorno del sueño por trabajo por turnos, trastorno de fase del sueño retardado, trastorno del sueño de fase avanzada, y/o trastornos del sueño-vigilia no de 24 horas, en un mamífero que comprende administrar a un mam ífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad de este aspecto de la invención, el método además comprende administrar en combinación simultánea, separada o secuencial, un segundo agente terapéutico el cual es un inhibidor de reabsorción de serotonina, como por ejemplo citalopram, paroxetina, fluoxetina y/o fluvoxetina. En una modalidad particular de estos métodos de tratamiento, el mam ífero es un humano.

Esta invención también proporciona un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable para uso en terapia. Dentro de este aspecto, la invención proporciona un compuesto de Fórmula I , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de insomnio. En modalidades adicionales, el insomnio es caracterizado por latencia del sueño prolong ada o mantenimiento de la falta del sueño o ambos, como por ejemplo insomnio primario, por cambio de horario o jet lag, trastorno del sueño por trabajo por turnos, trastorno de fase del sueño retardado, trastorno del sueño de fase avanzada, y/o trastornos del sueño-vigilia no de 24 horas. En otra modalidad de este aspecto, la invención proporciona un compuesto de conformidad con la Fórmula I , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en. combinación simultánea, separada o secuencial con un inhibidor de reabsorción de serotonina , como por ejemplo citalopram , paroxetina, fluoxetina y/o fluvoxetina, en el tratamiento de insomnio. Una modalidad particular de estos aspectos de. la invención, los usos son en mam íferos, particularmente humanos.

Otro aspecto de esta invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de insomnio, como por ejemplo insomnio primario caracterizado por latencia del sueño prolongada o mantenimiento de la falta del sueño o ambos, como por ejemplo insomnio primario, por cambio de horario o jet lag , trastorno del sueño por trabajo por turnos, trastorno de fase del sueño retardado, trastorno del sueño de fase avanzada, y/o trastornos del sueño-vigilia no de 24 horas. Otra modalidad de este aspecto de la invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un segundo agente terapéutico el cual es un inhibidor de reabsorción de serotonina, como por ejemplo citalopram, paroxetina, fluoxetina y/o fluvoxetina, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de insomnio, como por ejemplo, insomnio caracterizado por latencia del sueño prolongada y/o mantenimiento de la falta del sueño, como por ejemplo insomnio primario, por cambio de horario o jet lag, trastorno del sueño por trabajo por turnos, trastorno de fase del sueño retardado, trastorno del sueño de fase avanzada, y/o trastornos del sueño-vigilia no de 24 horas.

Por claridad, la siguiente numeración de la estructura del anillo tricíclico será usada a través de la solicitud: Compuestos de esta invención tienen porciones básicas y ácidas, y por consiguiente reaccionan con un número de ácidos y bases orgánicas e inorgánicas para formar sales farmacéuticamente aceptables. Sales farmacéuticamente aceptables de cada uno de los compuestos de la presente invención están contemplados dentro del alcance de la presente solicitud. El término "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente, se refiere a cualquier sal de un compuesto de la invención que es sustancialmente no tóxico a organismos vivos. Tales sales incluyen aquellas listadas en Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977) , las cuales se conocen por los expertos en la técnica.

Clases preferidas de compuestos de la presente invención son compuestos en donde: 1 ) R3 es hidrógeno; 2) R3 es metoxi; 3) R1 es cloro; 4) R1 es metilo; 5) R1 es cloro y R3 es hidrógeno; 6) R1 es metilo y R3 es hidrógeno; 7) R2 es metilo, etilo, o isopropilo; 8) R2 es metilo; 9) R2 es cloro o bromo; 1 0) R2 es cloro; 1 1 ) R2 es trifluorometilo; y 12) R2 es metiltio.

Se entenderá que compuestos preferidos adicionales son aquellos que combinan las selecciones preferidas anteriores para un sustituyente o sustituyentes dados con selecciones preferidas de otros sustituyentes. Ejemplos de tales combinaciones incluyen,: pero no se limitan a las siguientes clases preferidas de compuestos: 1 3) compuestos preferidos de cualquiera de las clases preferidas 7-1 2 (las cuales son selecciones preferidas para R2) en donde R3 es hidrógeno (clase preferida 1 ); 14) compuestos preferidos de cualquiera de las clases preferidas 7-1 2 (las cuales son selecciones preferidas para R2) en donde R1 es cloro y R3 es hidrógeno (clase preferida 5); y 1 5) compuestos preferidos de clase preferida 8 en donde R3 es metoxi (clase preferida 2).

Compuestos preferidos específicos son aquellos descritos en los Ejemplos que incluyen sus bases libres y sales de los mismos farmacéuticamente aceptables.

Cierto compuesto preferido es ácido 3-[4-(7-Cloro-2-metil-5W-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable (es decir, el compuesto del Ejemplo 1 y sales de los mismos farmacéuticamente aceptables).

Las abreviaturas usadas en la presente son definidas como sigue: "BSA" significa albúmina de suero bovino.

"DCG IV" significa (2S,2'R,3'R)-2-(2',3'-dicarboxiciclopropil)glicina.

"DCM" significa diclorometano.

"DME significa Medio Eagle M ínimo de Dulbecco. :„ "DIVISO" significa dimetilsulfóxido.

"DPBS" significa Salina Amortiguada de Fosfato de Dulbecco.

"DSC" significa calorimetría de exploración diferencial.

"EtOAc" significa acetato de etilo.

"GC" significa cromatografía de gas.

" HBSS" significa Solución de Sal Amortiguada de Hank.

"HEPES" significa ácido 4-(2-hidroxietil)-1 -piperazin etansulfónico.

"HPLC" significa cromatografía líquida de alta presión. "hr." o "h" significa hora u horas.

"IBMX" significa 3-isobutil-1-metilxantina.

"IC50" significa la concentración en la cual se logra 50% de la inhibición máxima. "i.v." significa intravenoso o intravenosamente. "i.p." significa ¡ntraperitoneal.

"LC-MS" significa espectrografía de masas-HPLC.

"MeOH" significa metanol. "mFST" significa prueba de nado forzado en ratón; u modelo animal para actividad antídepresiva. "min." o "m" significa minutos. "mp" significa punto de fusión.

"MS" significa espectroscopia de masas.

"MS (ES+)" significa espectroscopia de masas usando ionización por electrorrocío.

"MTBE" significa metil t-butil éter.

"NM " significa resonancia magnética nuclear. "p.o." significa peros, por la boca.

"SCX-2" significa columnas de intercambio catiónico fuerte Biotage Isolute Flash SCX-2®.

"THF" significa tetrahidrofurano.

Química General Los compuestos de la presente invención pueden ser preparados de conformidad con los siguientes esquemas de reacción sintéticos por métodos generales bien conocidos y apreciados en la técnica. Las condiciones de reacción adecuadas para las etapas de estos esquemas de reacción son bien conocidas en la técnica y sustituciones apropiadas de solventes y co-reactivos están dentro de la habilidad de la técnica. Del mismo modo, se apreciará por aquellos expertos en la técnica que intermediarios sintéticos pueden ser aislados y/o purificados por varias técnicas bien conocidas como sean necesarias o deseadas , y que frecuentemente, será posible usar varios intermediarios directamente en etapas sintéticas subsecuentes con poca o ninguna purificación. Además, el experto en la técnica apreciará que en algunas circunstancias, el orden en el cual las porciones son introducidas no es crítico. El orden particular de etapas requeridas para producir los compuestos de la presente invención es dependiente del compuesto particular a ser sintetizado, el compuesto de partida, y la responsabilidad relativa de las porciones sustituidas, como es bien apreciado por el qu ímico experto. Todos los sustituyentes, a menos que se indique de otro modo, son como se define previamente, y todos los reactivos son bien conocidos y apreciados en la técnica.

En general, un compuesto de Fórmula I puede ser preparado de un compuesto de Fórmula II donde Pg es un grupo protector carboxilo adecuado (Esquema de reacción 1 ). Más específicamente, un compuesto de Fórmula I I donde Pg es un grupo alquilo C C3 se hace reaccionar con un agente de desprotección adecuado tal como hidróxido de sodio acuoso en un co-solvente orgánico tal como alcohol isopropílico para proporcionar, después de la neutralización con un ácido, un compuesto de Fórmula I.

Esquema de reacción 1 ? I En general, un compuesto de Fórmula II puede ser preparado de un compuesto de Fórmula III o un compuesto de Fórmula IV (Esquema de reacción 2). Más específicamente, un compuesto de Fórmula III se hace reaccionar con cloruro de fosforilo en un solvente adecuado tal como metoxibenceno o diclorometano para proporcionar el intermediario cloruro de imino. El cloruro de imino puede ser aislado o se hace reaccionar directamente con Pg-2,2-dimetil-3-piperazin-1 -il propanoato en la presencia de una base adecuada tal como carbonato de potasio para proporcionar un compuesto de Fórmula II. La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado tal como acetonitrilo. Alternativamente, el cloruro de imino se puede hacer reaccionar con piperazina en la presencia de una base adecuada tal como carbonato de cesio para proporcionar un compuesto de Fórmula IV. La reacción se lleva a cabo en un solvente adecuado tal como acetonitrilo. Un compuesto de Fórmula IV es alquilado con Pg-2,2-dimetil-3-oxopropanoato en la presencia de un agente reductor adecuado tal como triacetoxiborohidruro de sodio para proporcionar un compuesto de Fórmula I I . La reacción se lleva a cabo típicamente en un solvente tal como diclorometano.

Esquema de reacción 2 IV Un compuesto de Fórmula I II puede ser preparado de un compuesto de Fórmula V donde R4 es metilo o etilo (Esquema de reacción 3). Más específicamente, un compuesto de Fórmula V se hace reaccionar con un agente adecuado para reducir el grupo arilnitrilo a la anilina correspondiente. Agentes reductores adecuados incluyen hidrógeno en la presencia de un catalizador de metal de transición tal como platino; hierro en ácido acético; y dicloruro de estaño en ácido clorh ídrico. La anilina correspondiente puede ser primero aislada o se hace reaccionar directamente bajo condiciones de ciclización para proporcionar un com puesto de Fórmula I I I . La ciclización se lleva a cabo en la presencia de un ácido tal como ácido clorhídrico o una base tal como r-butóxido de potasio. Un compuesto de Fórmula V donde R4 es metilo o etilo puede ser preparado como se describe en las preparaciones o por procedimientos conocidos en las artes químicas para la producción de compuestos estructuralmente análogos.

Esquema de reacción 3 V III En las siguientes preparaciones ilustrativas y ejemplos, los reactivos se obtuvieron de una variedad de fuentes comerciales. Los solventes son en general removidos bajo presión reducida (evaporado). En algunos procedimientos los rendimientos indicados son rendimientos crudos representativos para productos los cuales son aislados por evaporación o filtración y usados directamente sin purificación adicional .

Preparación 1 Síntesis de 2,2-dimetil-3-oxb^propánoato de metilo.

Se agregó 3-hidroxi-2,2-dimetilpropanoato de metilo (33 g, 250 mmol) a peryodinano de Dess-Martin (106 g, 250 mmol) suspendido en DCM (1000 mL) a 0°C y agitó a temperatura ambiente por 18 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de un lecho de celite y concentró lo filtrado. Se lavó lo filtrado concentrado con pentano (2 x 200 mL). Se separó la capa de pentano y concentró in vacuo para dar 2,2-dimetil-3-oxo-propanoato de metilo (31.93 g, cuantitativo). H NMR (d6-DMSO) d 9.59 (s, 1H), 3.67 (s, 3H), 1.26 (s, 6H).

Preparación 2 Síntesis de 4-(3-metoxi-2,2-dimetil-3-oxopropil)piperazin-1-carboxilato de rer-butilo.

Se agitó una solución de 2,2-dimetil-3-oxo-propanoato de metilo (30.88 g, 237.31 mmoles) y piperazin-1 -carboxilato de rer-butilo (34.00 g, 182.55 mmoles) en DCM (500 mL) a temperatura ambiente por 20 minutos. Se agregó ácido acético (2 equiv); 20.92 mL, 365.09 mmoles) seguido por triacetoxiborohidruro de sodio (1.4 equiv; 54.17 g, 255.56 mmoles) durante 0.5 h y agitó la mezcla resultante agitada a temperatura ambiente durante la noche. Se apagó cuidadosamente con agua (250 mL) y transfirió la mezcla a un embudo separador con DCM (300 mL). Se lavó la capa orgánica resultante con salmuera. Se secó sobre MgS04, se filtró y evaporó para dar 4-(3-metoxi-2,2-dimetil-3-oxopropil)piperazin-1 -carboxilato de fer-butilo. (58 g , 100%). MS (m/z): 301 .2 (M+ 1 ).

Preparación 3 Síntesis de diclorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)propanoato de metilo.

A una solución de 4-(3-metoxi-2,2-dimetil-3-oxopropil)piperazin- 1 -carboxilato de íer-butilo (58.0 g , 193.08 mmoles) en alcohol isopropílico (150 mL) se agregó una solución de dioxano 4M de cloruro de hidrógeno ((4 equiv); 1 93.08 mL, 772.31 mmoles) durante 15 minutos, observando desprendimiento de gas y un precipitado fino. Se calentó a 55°C por 3h para dar un precipitado blanco. Se enfrió a 10°C y recolectó el sólido blanco por filtración, se lavó con alcohol isopropílico adicional (30 mL), después EtOAc. Se secó en un horno a vacío a 45°C por 1 h para dar 2,2-dimetil-3-(piperaz¡n-1 -M)propanoato de diclorhidrato de metilo (31 g, 59% de rendimiento). MS (m/z): = 201 .1 (M+ 1 ).

Preparación 4 Síntesis de clorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)propanoato de metilo. disolvió diclorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 il)propanoato de metilo (1 12.0 g , 409.95 mmoles) en agua (250 mL). Se agregó bicarbonato de sodio sólido para dar una capa acuosa de pH 4 y se extrajo la mezcla en una solución de 10% de DCM en éter dietílico (300 m L) para remover algo de materia sólida oscura y algo de color. Se desechó la capa orgánica. Se basificó la fase acuosa a pH 8 con solución acuosa de hidróxido de sodio 2M, después se saturó con cl o ru ro de sodio sólido. Se extrajo en una solución al 1 0% de isopropanol en cloroformo. Se agregó además hidróxido de sodio acuoso 2M para mantener el pH 8. Se repitió la extracción en una solución al 10% de isopropanol en cloroformo. Se continuó el proceso de extracción hasta que 85% del material esperado se ha recuperado. Se lavó el isopropanol en solución de cloroformo con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y evaporó para dar clorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)propanoato de metilo (82.1 g % de rendimiento). MS (m/z): 201 .1 (M + 1 ).

Preparación 5 Síntesis de 4-etenil- 1 H-pirrol-2-carboxilato de metilo.

Se desgasificó, purgando con nitrógeno por 10 minutos, una solución de 4-bromo-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de metilo (2.0 g, 9.8 mmoles), trietenilboroxin piridina (1.3 equiv; 3.1 g, 12.7 mmoles), y carbonato de potasio (3 equiv; 4.1 g, 29.4 mmoles) en una mezcla de 1,4-dioxano (20 mL) y agua (10 mL). Se agregó tr¡s(dibencilideneaceton¡l)bis-paladio (Pd2(dba)3) (0.01 equiv; 0.0925 g, 98.0 pinoles) y 1 , 1 '-bis(di-ter-butilfosfino)ferroceno (dtbpf) (0.03 equiv; 0.0853 g, 294.1 pmoles) y se calentó a 95°C por 3 h. Se enfrió a temperatura ambiente después dividió entre agua (50 mL) y una mezcla 1:1 de hexanos/éter dietílico (100 mL). La capa orgánica se lavó con agua (2 x 50 mL) después salmuera. Se secó sobre Na2S04, se filtró y evaporó para dar 4-etenil-1H-pirrol-2-carboxilato de metilo como un aceite de color paja (1.5 g). Se usó sin purificación adicional. 1H-NMR (CDCI3), d: 8.90 (1H, br. s), 7.02 (1H, m), 6.95 (1H, m), 6.56 (1H, q) 5.48 (1H, dd), 5.05 (1H, dd), 3.86 (3H, s).

Preparación 6 Síntesis de 4-etil-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de metilo.

Se cargó a una botella Parr de 500 mL, una mezcla de 5% de paladio en carbono (0.2 g) en etanol (25 mL) y se agregó 4-etenil- 1 H-pirrol-2-carboxilato de metilo (1.4 g, 9.3 mmoles).- Se hidrogenó a 206.8 kPa por 3 h para dar conversión completa por LC-MS. Se filtró a través de celite y evaporó para dar un aceite. Se pasó a través de una almohadilla de gel de sílice con iso-hexano/acetato de etilo (100:0 a 75:25) para dar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido (1.12g). 1 H-NMR (CDCI3), ?: 8.87 (1H, br. s), 6.73-6.78 (2H, m), 3.83 (3H, s), 2.50 (2H, q, J =7.8Hz) y 1.19 (3H, t, J =7.3Hz).

Preparación 7 Síntesis de 4-(prop-1-en-2-il)-1 H-pirrol-2-carboxilato de m etilo.

Se mezcló 4-yodo-1 H-pirrol-2-carboxilato de metilo (1.5 g, 5.98 m moles), 4,4,5,5-tetramet¡l-2-(prop-1-en-2-il)-1 ,3,2-dioxaborolano (3.01 g, 17.98 mmoles), 1 ,1 '-bis(di-ter-butilfosfino)ferroceno (dtbpf) (0.3 g, 0.06 mmoles), tris(dibencilideneacetonil)bis-paladio (Pd2(dba)3) (0.3 g, 0.06 mmoles), fosfato tripotásico (2.54 g, 11.95 mmoles) y metanol (12 mL). Se calentó la mezcla en un tubo sellado en un microondas a 140°C por 30 minutos. Se enfrió, se filtró la mezcla de reacción y se lavó sinterizada con metanol, se evaporó lo filtrado bajo presión reducida y sometió a cromatografía sobre sílice eluyendo con isohexano/diclorometano (gradiente de elución, 100:0 a 0:100). Se evaporaron las fracciones que contienen producto para dar 4-(prop-1 -en-2-íl)-1 -/-pirrol-2-carboxilato de metilo. (0.679 g, 68.79% de rendimiento). MS (miz): 166.1 (M+1).

Preparación 8 Síntesis de 3-metoxi-4-metil-1 W-pirrol^-carboxilato de etilo.

Se agregó sulfato de dimetilo (3 mL, 3.99 g, 31.63 mmoles) a una mezcla de éster etílico del ácido 3-hidroxi-4-metil-1 H-pirrol-2-carboxílico (3.5 g, 20.69 mmoles) e hidróxido de sodio 2M (75 mL, 1500 mmoles) y agitó la mezcla de reacción vigorosamente por 30 mins a temperatura ambiente (baño de enfriamiento de agua aplicado). Se recolectó lo precipitado resultante y se lavó con agua. Se agregó más sulfato de dimetilo (3 mL, 399 g, 31.63 mmoles) a lo filtrado y agitó por 30 minutos. Se recolectó lo precipitado resultante y se lavó con agua. Se agregó más sulfato de dimetilo (3 mL, 3.99 g, 31.63 mmoles) a lo filtrado y agitó por 1h. Se combinaron los precipitados aislados y se secaron en un horno a vacío a 50°C por 30 minutos para dar 3-metoxi-4-metil-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo (3.221 g, 84.98% de rendimiento). MS (m/z): 184.09 (M + 1).

Preparación 9 Síntesis de 1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-4-metil-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo.

Se agitó vigorosamente una solución de 2-(bromometil)-4-cloro-1-nitro-benceno (25.02 g, 99.88 mmoles) en DCM (200 mL), y a esto se agregó una solución de 4-metil-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo (15 g, 97.92 mmoles) en DCM (200 mL). Después se agregó hidróxido de tetra-n-butilamonio 30-hidratado (0.508 g) y se enfrió la mezcla agitada bajo nitrógeno a 5°C usando un baño de hielo externo. Se agregó 25% de hidróxido de sodio acuoso (200 mL) por goteo durante 15 minutos observando la temperatura interna elevarse a 10°C. Se agitó y dejó calentar a temperatura ambiente. Se agitó a temperatura ambiente por 3.5 h. Se agregó además 50% de hidróxido de sodio acuoso (20 mL) y agitó a temperatura ambiente por 1h adicional. Se detuvo la agitación y dejaron separar las capas. Se transfirió a un embudo separador y se lavó la capa orgánica con ácido clorhídrico 1N (200mL), observando el pH de esta capa por ser ácido usando papel indicador. Después se lavó la capa orgánica con agua (600 mL) y después salmuera (600 mL) y finalmente se secó sobre Na2S04. Se filtró la mezcla y se removió el solvente ¡n vacuo a 40°C para dar un aceite anaranjado. Se purificó pasando a través de una almohadilla de gel de sílice con iso-hexano/acetato de etilo (gradiente de elución de 10 a 20%) para dar 1-(5-cloro-2-nitrobencil)-4-metil-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo como un aceite amarillo (33 g, cuantitativo). MS (m/z): 322.98 (M + 1). , Preparación 9 alternativa Síntesis de 1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-4-metil-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo.

Bajo una atmósfera de nitrógeno con agitación se agregó carbonato de cesio (96 g, 295 mmoles) a una solución de 4-met¡l-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo (30 g , 196 mmoles) en DMF (240 ml_) y se calentó la mezcla de reacción a 40 °C a 45 °C por 1 hora. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agregó una solución de 2-(bromometil)-4-cloro-1 -nitro-benceno (54 g, 216 mmoles) en DM F (120 mL) goteo. Se agitó la suspensión resultante por 1 .5 h a 2.0 h, se filtraron los sólidos y se enjuagó la torta de filtración con DMF (45 mL). Se transfirieron los sólidos a un recipiente de reacción limpio, se agregó agua (200 mL) y se enfrió la suspensión a 1 0 °C a 1 5 °C con agitación por 1 h a 2 h. Se filtró la suspensión, se enjuagó con agua (75 mL) y se transfirieron los sólidos a otro recipiente de reacción. Se agregó etanol ( 1 25 mL) y ag itó la suspensión a 5 °C a 10 °C por 1 h a 2 h. Se filtraron los sólidos, se enjuagó la torta de filtración con etanol (20 mL), y se secaron los sólidos en un horno a menos de 50 °C bajo presión reducida para dar 1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-4-metil-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo como un sólido amarillo (54 g , 94.1 % de pureza, 73.3% de rendimiento).

Preparación 1 0 Síntesis de 4-bromo-1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo Se lavó hidruro de sodio suspendido en aceite mineral al 60% (1.2 equiv; 1.1 g, 27.52 mmoles) con una cantidad pequeña de íso-hexano (x 2). Se suspendió en N,N-dimetilacetamida (15 ml_) y enfrió en un baño de hielo. Se agregó 4-bromo-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo (5.0 g, 22.93 mmoles) en forma de porciones durante 15 minutos permitiendo el desprendimiento de gas subsidiar entre adiciones. Se agitó a temperatura ambiente por 15 minutos para dar una solución marrón. Se agregó 2-(bromometil)-4-cloro-1 -nitro-benceno (1.15 equiv; 6.61 g, 26.37 mmoles) en porciones durante 15 minutos y agitó la solución púrpura resultante a temperatura ambiente por 2.5 h. Se enfrió en un baño de hielo y se apagó con agua (10 ml_). Se dividió entre ácido clorhídrico 1M (100 ml_) y EtOAc (300 mL). Se lavó la capa orgánica con agua (2 x 100 mL) después salmuera. Se secó sobre Na2S04 y decoloró con carbón activado. Se filtró a través de celite y evaporó para dar 4-bromo-1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-1 W-pirrol-2-carboxilato de etilo como un aceite anaranjado (9.1g, cuantitativo). 1H-NMR (CDCI3) d: 8.12 (1H, d), 7.40 (1H, dd), 7.07 (1H, d), 6.92 (1H, d), 6.53 (1H, d), 5.87 (2H, s), 4.17 (2H, q), 1.25 (3H, t).

Los siguientes compuestos se prepararon esencialmente por el método de Preparación 10.

Preparación 22 Síntesis de 1 -(2-amino-5-clorobencil)-4-metil-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo.

Se cargó 5% de platino(S)/carbón (2.5 g), y 1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-4-metil-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo ( 16.0 g , 49.57 m m oles) a una botella Parr de 500 m l_. Se agregó etanol (200 ml_) después dibromuro de zinc (0.22 equiv; 2.46 g , 10.91 mmoles) y se colocó la mezcla bajo hidrógeno a 275.8 kPa y se hidrogenó a temperatura ambiente durante la noche, monitoreando la formación de un intermediario parcialmente hidrogenado. Se removió la botella Parr, se calentó suavemente en un baño de agua para disolver el material cristalizado, y se filtró a través de celite. Se combinó con lo filtrado de una corrida idéntica y evaporó para dar 1 -(2-amino-5-clorobe cil)-4-metil- -/-pirrol-2-carboxilato de etilo un sólido blancuzco. Se colocó bajo alto vacío para remover etanol residual para dar el material (35 g , cuantitativo). MS (m/z): 293.1 (M + 1 ).

Preparación 22 alternativa Síntesis de 1 -(2-am¡no-5-clorobencM)-4-metil-1 H-pirrol-2-carboxílato de etilo.

En un recipiente de reacción bajo nitrógeno se cargó una solución de 1-(5-cloro-2-nitrobencil)-4-metil-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo (100.0 g, 310 mmoles) en THF (800 mL) y se agregó dibromuro de zinc (0.22 equiv; 15.4 g, 68.4 mmoles) con agitación a temperatura ambiente. Se cargó una suspensión de 5% de platino(S)/carbón (13.3 g) en THF (25 mL), y se colocó el recipiente bajo hidrógeno a 380 kPa. Se hidrogenó a temperatura ambiente por 30 hr. a 40 hr., monitoreando la formación de un intermediario parcialmente hidrogenado y se filtró sobre diatomita. Se enjuagó el filtro auxiliar con THF (300 mL) y concentró lo filtrado, por debajo de 40 °C, para llegar a un volumen de aproximadamente 200 mL. Se agregó DCM (250 mL), se concentró la solución, por debajo de 40 °C, para llegar a un volumen de aproximadamente 200 mL, y se agregó DCM adicional (600 mL). Este proceso puede ser repetido como sea necesario para remover niveles ¡ndeseados de THF de la mezcla de reacción. Se cargó agua (500 mL), se separaron las capas, y se lavó la capa orgánica con agua; (300 mL), seguido por 25% de solución acuosa de cloruro de sodio (250 mL). Se concentró la solución, 40 °C, para llegar a un volumen de aproximadamente 200 mL, se agregó heptano (400 mL), y concentró la solución, por debajo de 40 eC, para llegar a un volumen de aproximadamente 200 mL. Se agregó heptano (400 mL) y se calentó la mezcla de reacción a 40 - 45 °C con agitación por 2 - 3 hr. Se enfrió la mezcla de reacción a 5 - 10 °C y se continuó la agitación a esta temperatura por 1 - 2 hr. Se filtraron los sólidos resultantes y;s secó en un horno a menos de 50 °C bajo presión reducida para dar 1 -(2-amino-5- clorobencil)-4-metil- 1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo (81.4 g, 95.8% pureza, 85.9% de rendimiento) como un sólido amarillo.

Los siguientes compuestos se prepararon esencialmente el método de Preparación 22.

Preparación 26 Síntesis de 1 -(2-amino-5-clorobencil)-4-bromo-1 H-pirrol-2-carboxilato de etilo.

A una solución bien agitada de 4-bromo-1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-1 /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo (9.1 g, 23.48 mmoles) en ácido acético (60.00 ml_) a 70"C, se agregó hierro (5 equiv; 6.56 g, 1 17.38 mmoles) en porciones durante 0.5 h. A la mitad a través de la adición, se observa un exoterma para mantener una temperatura de 85°C con el baño de aceite removido. La mezcla de reacción se espesará conforme el exoterma se disipa y el resto del hierro puede ser agregado. Se agitó a 85°C por 0.5 h. Se enfrió a temperatura ambiente y vertió sobre agua (200 ml_). Se extrajo en cloroformo (2 x 200 mL). Se combinaron las capas orgánicas y se lavó con agua (2 x 100 mL) después solución acuosa saturada de NaHC03. Se secó sobre Na2S04, se filtró y evaporó al compuesto del título como un aceite anaranjado (7.7 g , 92% de rendimiento) . MS (m/z): 358.98 (M + 1 ).

Los siguientes compuestos se prepararon esencialmente por el método de Preparación 26.

Preparación 32 Síntesis de 7-cloro-2-metil-5,10-dihidro-11/-/-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona.

A una solución de 1-[(2-amino-5-cloro-phenil)metil]-4-metil-pirrol-2-carboxilato de etilo (35 g, 119.55 mmoles) en dimetil sulfóxido (120 mL) se agregó t-butóxido de potasio (14.76 g, 131.5 mmoles) durante 10 minutos. Se calentó a 80°C (temperatura del baño de aceite) por 1 h. Se dejó enfriar después se vertió en agua (400 mL). Se recolectó el sólido en polvo marrón resultante por filtración, se lavó bien con agua. Se sorbió tan secó como sea posible en el sinterizador después se transfirió a un disco y se secó en un horno a vacío a 55°C sobre pentóxido de fósforo durante la noche, para dar 7-cloro-2-metil-5, 10-dihidro-1 1 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -ona . (22 g, 91 %). MS (m/z): 247.1 (M + 1 ).

Preparación 32 alternativa Síntesis de 7-cloro-2-metil-5, 10-dihidro-1 1 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -ona.

A una solución de 1 -[(2-amino-5-cloro-phenil)metil]-4-metil-plrrol-2-carboxilato de etilo (20 g, 68.3 mmoles) en dimetil sulfóxido (60 mL) se agregó t-butóxido de potasio (8.4 g , 74.9 mmoles) en DMSO (40 mL) y se calentó la mezcla de reacción a 75 - 80 °C por 1 - 2 hr. Se agregó agua (200 mL) lentamente, se enfrió a temperatura ambiente, y agitó por 1 - 2 hr. Se filtraron los sólidos, se lavó la torta de filtración con agua (75 mL) , y se transfirieron los sólidos a un recipiente de reacción limpio. Se agregó THF (100 mL) y se calentó la mezcla de reacción a 30 - 35 °C hasta que los sólidos se disolvieron. Se agregó DCM (350 mL) y se continuó agitando a 30 - 35 °C por 1 '- 2 hr. Se agregó ácido clorh ídrico 1 N (250 mL) y se continuó agitando a 30 - 35 °C por 1 - 2 hr. Se separaron las capas, se lavó la capa orgánica con ácido clorhídrico 1 N (250 mL) seguido por una solución acuosa de cloruro de sodio al 25% (50 mL), y concentró la solución, por debajo de 50 °C, para llegar a un volumen de aproximadamente 25 mL. Se agregó etanol (50 mL), se concentró la solución, por debajo de 50 °C, para llegar a un volumen de aproximadamente 25 mL, y se agregó etanol adicional (50 mL). Se concentró la solución, por debajo de 50 °C, para llegar a un volumen de aproximadamente 25 mL, se calentó la mezcla de reacción a 45 " - 50 °C, y agitó por 1 - 2 hr. Se enfrió la mezcla de reacción a 5 - 1 0 °C con agitación por 2 - 3 hr. , y se filtraron los sólidos resultantes. Se enjuagó la torta de filtración con etanol (25 mL) y se secó en un horno a menos de 50 °C bajo presión reducida para dar 7-cloro-2-met ¡1-5, 1 0-dihidro-1 1 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -ona como un sólido blancuzco ( 14.9 g, 99.9% de pureza, 88.5% de rendimiento).

Los siguientes compuestos se prepararon esencialmente por el método de Preparación 32.

Preparación 43 Síntesis alternativa de 7-cloro-2-(trifluorometil)-5, 10-dihidro-11 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona.

Se agregó cloruro de estaño (3 equiv; 3.02 g, 15.77 mmol) en ácido clorhídrico 5M (20 ml_, 100 mmol) a 1 -(5-cloro-2-nitrobencil)-4-(trifluorometil)-l /-/-pirrol-2-carboxilato de etilo (1 equiv; 1.98 g, 5.26 mmoles) y etanol (100 mL) a 50°C. Se calentó durante la noche y después por unas 26 h adicionales, se removió la mayoría del etanol in vacuo y se diluyó la solución resultante con agua y recolectó lo precipitado resultante por filtración, se lavó bien con agua y se secó in vacuo a 40°C. Se absorbió el sólido sobre sílice, se sometió a cromatografía eluyendo con DCM/metanol (5:95) para dar amino éster no ciclizado (0.260 g) y 7-cloro-2-(trifluorometil)-5, 10-dihidro-11 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11 -ona (0.613 g). Se calentó él éster no ciclizado en una mezcla de ácido clorhídrico 5M (10 mL, 50 ¡mm'ól) por 80 h. Se removió el etanol in vacuo y recolectó el sólido resultante precipitado por filtración y se lavó con agua para dar 7-cloro-2-(trifluorometil)-5, 10-dihidro-11 W-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona (0.17 g). Se combinó con 7-cloro-2-(trifluorometil)-5, 10-dih¡dro-11 H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona anterior para dar (0.794 g, 50% de rendimiento). MS (m/z): 300.99 (M + 1).

El siguiente compuesto se preparó esencialmente por el método de Preparación 43.

Preparación 45 Síntesis de 7,11 -dicloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepina A una suspensión de 7-cloro-2-metil-5, 10-dihidro-11 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11 -ona (40.6 g, 164.58 mmoles) en metoxibenceno (250 mL) a 70°C se agregó ?,?-dimetilanilina {2.8 equiv; 58.59 mL, 460.8 mmoles) en una porción seguido por cloruro de fósforilo (2.3 equiv (molar); 35.18 mL, 378.52 mmoles) durante 20 minutos, controlando el exoterma por adición. Se calentó la solución oscura resultante a 90°C por 1.5 h. Se agregó cloruro de fósforilo adicional (0.33 equiv; 5.05 mL, 54.31 mmoles) y se calentó la mezcla a 90°C por 1h adicional para dar conversión completa. Se evaporó a casi sequedad y se dividió el residuo entre agua (500 mL) y acetato de etilo (2 x 500 mL). Se combinaron las capas orgánicas y se lavó con agua (500 mL) después salmuera. Se secó sobre Na2S04l se filtró y evaporó sobre sílice. Se pasó a través de una almohadilla de gel de sílice con iso-hexano/acetato de etilo (gradiente de elución 5 a 25%). Se combinaron las fracciones de producto y evaporó a una cantidad pequeña de solvente. Se agregó iso-hexano (150 mL) y recolectó el polvo amarillo resultante por filtración, para dar 7,11-dicloro-2-metil-5/--pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina (34.0 g, 78% de rendimiento). MS (m/z): 265.1 (M+1).

Síntesis alternativa: Bajo una atmósfera de N2 se agregó cloruro de fosforilo (124 g, 819 mmol) a una mezcla de 7-cloro-2-metil-5, 10-dihidro~11 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11 -ona (100 g, 405 mmol), N,N-dimetilanilina (138 g, 1.14 mol) y anisol (550 mL). Se calentó a 80 - 85 °C y agitó por 4 hr. a 6 hr. Se concentró a un total de 1.5 volúmenes a 2.5 volúmenes mientras se mantiene la temperatura por debajo de 75 °C. Se enfrió a 15 - 25 °C. Se agregó diclorometano (600 mL) por goteo y agitó por 1 hr. Se agregó la mezcla resultante a agua (600 mL) mientras se mantiene la temperatura entre 10 °C y 35 °C. Se agitó por 1 hr. y después se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con diclorometano (600 mL). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con 1.0 N HCI (600 g) seguido por 7% de NaHC03 (600 g). Se filtró la capa orgánica a través de diatomita (20 g a 30 g) y gel de sílice (60 g a 100 g). Se concentró lo filtrado resultante a un total de 1.5 volúmenes a 2.5 volúmenes mientras se mantiene la temperatura por debajo de 45 °C. Se agregó heptano (270 g a 410 g) y concentró lo filtrado resultante a un total de 1.5 volúmenes a 2.5 volúmenes mientras se mantiene la temperatura por debajo de 45 °C. Se agregó heptano (150 g a 210 g), se enfrió a 5 °C a 10 °C, y agitó por 2 hr. a 3 hr. Se filtró, se enjuagó la torta de filtración con heptano, y se secó bajo vacío, por debajo de 45 °C, para obtener el compuesto del título como un sólido amarillo pálido (90% a 95% de rendimiento) Los siguientes compuestos se prepararon esencialmente por el método de Preparación 45.

Preparación 50 Síntesis de 3-[4-(7-cloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo.

Se agregó cloruro de fosforilo (1.47 mL, 243 g, 15.85 mmoles) a 7-cloro-2-metil-5, 10-d¡hidro-11 H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona (1.117 g, 4.53 mmoles) en DCM (50 mL) y agitó a temperatura ambiente durante una semana. Se agregó agua helada a la mezcla de reacción después se agregó DCM, se separó la capa acuosa y se lavó la capa de DCM con agua y solución de carbonato hidrógeno de sodio. Se secó la solución de DCM con MgSCv se filtró y evaporó el solvente in vacuo para dar 7, 11 -dicloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina (1.167 g).

Se disolvió 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)propanoato de diclorhidrato de metilo (1.61 g, 5.89 mmoles) en agua y cargó en dos cartuchos SCX-2 (10 g). Se lavaron los cartuchos con metanol y eluyeron con amoníaco 2M en metanol. Se concentró in vacuo, después se disolvió el aceite resultante en acetonitrilo (40 mL). Se agregó 7,11-dicloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina (1.167 g, 4.4 mmoles) a la solución de acetonitrilo. Se dividió la solución de acetonitrilo y se colocó en 2 tubos de microondas, se agregó carbonato de potasio (0.89 g, 6.79 mmoles) a cada tubo de microondas y se calentó y agitó a 140°C en el microondas por 3.5 hr. Se dejó enfriar la mezcla de reacción, se filtró, se lavó el sólido recolectado en la sinterización con acetonitrilo después se concentró lo filtrado in vacuo, se agregó metanol y después se evaporó a sequedad. Se trató con más metanol y recolectó lo precipitado resultante, se lavó lo precipitado con metanol para dar 3-[4-(7-cloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo como un sólido cristalino (1.1 g). MS (m/z): 429.18 (M + 1).

Síntesis alternativa de 3-[4-(7-cloro-2-metil-5--pirrolo[2,1- c][1 ,4]benzodiazep¡n- 1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo.

A una suspensión de 7, 1 1 -dicloro-2-metil-5 -/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepina (34.0 g, 128.23 mmoles) en acetonitrilo (300 mL) se agregó clorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)-propionato de metilo (2.1 equiv; 63.75 g , 269.29 mmoles) y carbonato de potasio (4 equiv; 70.89 g, 512.93 mmoles). Se calentó la mezcla a reflujo durante la noche. Se evaporó a sequedad. Se dividió el residuo entre agua (500 mL) y EtOAc (2 x 500 mL). Se combinaron las capas orgánicas y se lavó con agua (500 mL) después salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y evaporó a un aceite marrón. Se agregó iso-hexano (~150mL) y un cristal de siembra de la Preparación 50. Se dejó cristalizar durante 2 h, después se transfirió el matraz a un frigorífico y se dejó reposar. Se recolectó el sólido cristalino pesado resultante por filtración, lavando con iso-hexano frío. Se secó en un horno a vacío a 40°C por 1 h, para dar 3-[4-(7-cloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin- 1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo (53.6 g, 97% de rendimiento). MS (m/z): 429.18 (M + 1 ) .

Segunda síntesis alternativa de 3-[4-(7-cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)pi erazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo.

Se calentó una mezcla de 7, 1 1 -dicloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepina ( 10.0 g, 37.7 mmol) , diclorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)-propionato de metilo (1 9.4 g , 71 :0 · mmol), diisopropilamina (22.9 g, 226 mmol), y acetonitrilo (80 g) a 80 °C a 85 °C por 22 hr. a 26 hr. Se enfrió a 30 °C a 40 °C y se agregó acetato de etilo (80 g). Se agregó agua (80 g) por goteo. Se agitó 40 min. a 60 min. y se separaron las capas. Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (60 g a 80 g). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con 25% de cloruro de sodio acuoso (2 X 40 g). Se concentró la capa orgánica a un total de 1.5 volúmenes y 3.5 volúmenes mientras se mantiene la temperatura por debajo de 50 °C. Se agregó heptano (41 g a 55 g) a 40 °C a 50 °C)\ y agitó por 2 hr. a 3 hr. Se concentró a un total de 1.5 volúmenes a 3.0 volúmenes mientras se mantiene la temperatura por debajo de 50 °C. Se enfrió a 0 °C a 10 °C y agitó por 2 hr. a 3 hr. Se filtró, se lavó la torta de filtración con heptano (3.0 g a 10.0 g), y se secó bajo vacío, por debajo de 60 °C, para proporcionar el compuesto del título (16.0 g, 94.7% en p/% en peso del ensayo, 94% de rendimiento) como un sólido amarillo, ligero.

Preparación 51 Síntesis de 3-[4-(2,7-dicloro-5--pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il)piperazin-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo.

Se agregó cloruro de fosforílo (5 equiv; 4.36 ml_, 7.19 g, 46.89 mmoles) a 2,7-dicloro-5, 10-dihidro-11 H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona (1 equiv; 2.505 g, 9.38 mmoles) en cloroformo (80 ml_) y se calentó y agitó a 50°C durante la noche. Se decantó la solución de reacción y evaporó in vacuo a un aceite. Se disolvió el aceite en DCM, se lavó con solución acuosa saturada de carbonato hidrógeno de sodio. Se secó la solución de DCM sobre Na2S0 , se filtró y concentró a sequedad para dar 2,7,11 -tricloro-5/-/-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina como un sólido de color crema. En paralelo se desaló clorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)propanoato de metilo (0.837 g, 3.54 mmoles) disolviendo en metanol, se agregó la solución metanólica a una columna SCX-2 (10 g) se lavó con metanol y después se eluyó con amoníaco 2.5M en solución metanólica, se evaporó la fracción de amoníaco de metanol para dar 2,2-dimetil-3-(piperazin-1 -il)propanoato de metilo (0.665 g) como un aceite. Se mezcló este aceite con 2,7,11-tricloro-5H-pirrolo[2, 1-c][1 ,4]benzodiazepina (0.505 g 1.77 mmoles), carbonato de potasio (0.733 g, 5.31 mmoles) y acetonitrilo (20 mL) y se calentó a reflujo durante la noche. Se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se filtró, lavando lo sinterizado con EtOAc, después se evaporó lo filtrado in vacuo a un sólido. Se sometió a cromatografía sobre sílice eluyendo con metanol/DCM (gradiente de elución 2:98 a 8:92). Se evaporaron las fracciones que contienen producto para dar 3-[4-(2,7-dicloro-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo (0.69 g). MS (m/z): 449.13/451.07 (M+1).

Los siguientes compuestos se prepararon esencialmente por étodo de Preparación 51 .

Preparación 60 Síntesis de 2,2-dimet¡l-3-[4-(7-metil-2-(metilsulfanil)-5/-/-pirrolo[2,1 c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1 -il]-propanoato de metilo.

Se trató 1 -(5-metil-2-nitrobencil)-4-(metilsulfanil)-1 H-pirrol-2-carboxilato de metilo (3.49 mmoles; 1.12 g) con ácido acético (15 mL) después se trató con hierro, en polvo (10.5 mmoles; 585 mg) después lentamente se calentó en un baño de aceite a 80°C. Después de algunas horas se incrementó la temperatura del baño de aceite a 90°C. Después se dejó la reacción a 60°C por 2 días. Después se concentró a sequedad para remover el ácido acético después se trató con EtOAc y se lavó a través de una almohadilla de sílice con más EtOAc hasta que el color anaranjado dejó de salir. Se concentró el eluyente rojo a sequedad después se trató con metanol después se re-concentró y se disolvió en DCM (20 mL) y se trató con cloruro de fosforilo ( 1 .0 ml_). Se calentó la reacción en un baño de aceite a 50°C durante la noche. Después se enfrió la reacción a RT y se trató con hielo después se lavó con agua dos veces y después NaHC03 (ac). Se secó la capa orgánica sobre MgS0 , se filtró y concentró a un alquitrán. Mientras tanto, se disolvió diclorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin- 1 -il)-propanoato de metilo (1 .60 g, 5.86 mmoles) en agua después se cargó en un cartucho SCX-2 (2 x 10 g) y se lavó con metanol y después se eluyó con amoníaco en metanol. Se concentró la solución básica a sequedad a un aceite. Después se disolvió este aceite en acetonitrilo (50 mL) y se agregó a una mezcla del alquitrán y carbonato de potasio ( 1 .0 g) después se calentó a reflujo. Después de 2 horas, se sometió a microondas la reacción a 140°C por 2 horas. Después se filtró la reacción y se extrajo con acetonitrilo y acetona. Se combinaron y concentraron los licores madre a sequedad sobre sílice después se purificó por cromatografía instantánea en sílice (40 g) (10-50% EtOAc en hexano). Se tomaron las fracciones las cuales contienen el producto limpio, se combinó y concentró para proporcionar 2,2-dimetil-3-[4-(7-metil-2-(metilsulfanil)-5/-/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-propanoato de metilo (41 8 mg; 27% de rendimiento). MS (m/z): 441 .18 (M + 1 ).

Preparación 61 Síntesis de 7-cloro-2-(metilsulfanil)-1 1 -(piperazin-1 -il)-5/-/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepina.

Se agregó cloruro de fosforilo (5 equiv; 2.21 mL, 3.64 g, 23.76 mmoles) a 7-cloro-2-(metilsulfanil)-5, 10-dihidro-11 -/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11-ona (1.38 g, 4.75 mmoles) en cloroformo (20 mL) y se calentó y agitó a 45°C por 2 h. Se elevó la temperatura de la reacción a 60°C y agitó por unas 2 h adicionales. Se removió el cloroformo in vacuo y se disolvió el residuo en DCM (100 mL) y se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio (100 mL). Se filtró la capa de DCM a través de una frita de separación de fase y evaporó el solvente in vacuo para dar un aceite viscoso. Se disolvió el aceite en acetonitrilo (10 mL) y se agregó carbonato de cesio (3 equiv; 4.65 g, 14.26 mmoles). Se agregó a esta mezcla piperazina (10 equiv; 4.09 g, 47.52 mmoles) en acetonitrilo seco (10 mL) y se calentó y agitó la mezcla bajo reflujo durante la noche. Se enfrió la mezcla de 'reacción y se agregó solución saturada de cloruro de amonio (100 mL) y se extrajo en EtOAc (2 x 50 mL). Se combinaron las capas orgánicas y se lavó con agua (3 x 100 mL), se secó sobre MgS0 , se filtró y evaporó el solvente in vacuo para dar 7-cloro-2-(metilsulfanil)-11 -(piperazin-1 -il)-5/7-pirrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepina (1.0 g, 60%). MS (m/z): 347.13 (M + 1).

Preparación 62 Síntesis de 3-[4-(7-cloro-2-(metilsulfanil)-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo.

Se agregó 2,2-dimetil-3-oxo-propanoato de metilo (0.928 g, 7.13 mmoies) en DCM (5 mL) a 7-cloro-2-(metilsulfanil)-11 -(piperazin-1 -il)-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepina (1.0 g, 2.85 mmoies) en DCM (10 mL) y agitó bajo nitrógeno por 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregó triacetoxiborohidruro de sodio (3 equiv; 1.89 g, 8.56 mmoies) a la mezcla de reacción y agitó bajo nitrógeno durante la noche a temperatura ambiente. Se agregó metanol y aplicó a una columna SCX-2, se lavó con metanol y se eluyó con 2M amoníaco en metanol. Se evaporó la solución metanolica para dar 3-[4-(7-cloro-2-(met¡lsulfanil)-5H-pirrolo[2,1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11-il) piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo (1.23 g, 84%). MS (miz): 461.12 (M+1).

Preparación 63 Síntesis de 2,2-d¡metil-3-{4-[7-metil-2-(propan-2-il)-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-il]piperazin-1-il}propanoato de metilo.

Se mezcló 3-[4-(2-bromo-7-metil-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il)piperaz¡n-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo (1.00 equiv; 600.00 mg, 1.27 mmoles), 4,4,5,5-tetramet¡l-2-(prop-1-en-2-¡l)-1 ,3,2-dioxaborolano (3.00 equiv; 638.93 mg, 3.80 mmoles) en metanol (15 ml_). Se agregó una mezcla pre-combinada de 1.09% en peso de tris(dibencilideneaceton¡l)bis-paladio (Pd2(dba)3), 1.16% en peso de 1 ,1'-bis(di-ter-butilfosfino)ferroceno (dtbpf) y 97.75% en peso de fosfato tripotásico (1.06 g) y se calentó a 140°C por 25 mins en un microondas. Se filtró la mezcla de reacción a través de celite y se diluyó a 25 mL de volumen con metanol. Se hidrogenó la solución metanólica pasando a 1mL/min. a través de un hidrogenador de flujo H-Cube® un cartucho catalítico de 10%Pd/C a 50°C. Se evaporó el solvente in vacuo para dar 2,2-d¡metil-3-{4-[7-metil-2-(propan-2-il)-5/-/-p¡rrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il]piperazin-1 -il}propanoato de metilo. MS (m/z): 437.28 (M + 1).

Preparación 64 Síntesis de 3-[4-(2-etil-7-metil-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo.

Se mezcló 3-[4-(2-bromo-7-metil-5/-/-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazep¡n-11-il)piperaz¡n-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo (1.00 equiv; ; 620.00 mg, 1.31 mmoles), trietenilboroxin piridina (1.5 equiv; 472.79 mg, 1.96 mmoles;) en metanol (15 ml_). Se agregó una mezcla pre-combinada de 1.09% en peso de tris(dibencilideneacetonil)bis-paladio (Pd2(dba)3), 1.16% en peso de 1,1"-bis(di-ter-butilfosfino)ferroceno (dtbpf) y 97.75% en peso de fosfato tripotásico (1.10 g) y se calentó a 140°C por 25 mins en un microondas. Se filtró la mezcla de reacción a través de celite y se diluyó a 25 mL de volumen con metanol. Se hidrogenó la solución metanólica pasando a 1ml_/min. a través de un hidrogenador de flujo H-Cube® usando un cartucho catalítico de 10%Pd/C a 50°C. Se evaporó el solvente in vacuo para dar 3-[4-(2-etil-7-metil-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin- 1-il)piperazin-1-il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo. MS (m/z): 423.18 (M+1).

Ejemplo 1 Síntesis de ácido 3-[4-(7-cloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2,1 c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico.

A una suspensión de 3-[4-(7-cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de metilo (28.0 g , 65.27 mmoles) en una mezcla de alcohol isopropilico ( 150 mL) y agua (150 mL) se agregó hidróxido de sodio (3 equiv; 7.83 g , 1 95.82 mmoles) y se calentó a 70°C por 4 h para dar una solución transparente. Se calentó a 70°C por 1 h adicional después se enfrió ligeramente. Se agregó ácido clorhídrico 5M para dar pH 8 y precipitó un sólido blanco. Se agregó además ácido clorhídrico 5M para dar un pH entre 6.5 y 7. Se redujo el volumen del solvente por la mitad y después se enfrió el matraz en un frigorífico por 0.5 h. Se recolectó el sólido blanco resultante por filtración y se secó durante la noche en un horno a vacío a 40°C sobre pentóxido de fósforo para dar ácido 3-[4 (7-cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2, 2-dimetilpropanoico (26.5 g, 98% de rendimiento). MS (m/z): 41 5.3 (M + 1 ). Punto de fusión de DSC = 246.5°C (comienzo).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente por el método de Ejemplo 1 .

Ejemplo 13 Síntesis de diclorhidrato de ácido 3-[4-(7-Cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico.

A una suspensión de ácido 3-[4-(7-cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -¡l]-2,2-dimetilpropanoico (24.25 g, 58.44 mmoles) en alcohol isopropilico (250 mL) a 60°C, se agregó una solución de dioxano 4M de cloruro de hidrógeno (2.4 equiv; 35.07 mL, 140.26 mmoles) durante 10 minutos para dar una solución transparente. Se dejó enfriar ligeramente después se evaporó a un sólido blancuzco. Se trituró con una cantidad pequeña de éter dietílico y recolectó el sólido crema en polvo por filtración. Se secó en un horno a vacío a 40°C durante la noche. Se trituró a un polvo fino y se secó en un horno a vacío a 60°C por 6 h. Se monitorearon los niveles de alcohol isopropilico residual por 1 H NMR. Se disolvió en etanol caliente (350 mL) y evaporó a sequedad. Se trituró con etanol (50 mL) y evaporó a sequedad nuevamente Se trituró con éter dietílico seco (200 mL) y recolectó el sólido resultante por filtración. Se secó por 6 h en un horno a vacío a 50°C para dar diclorhídrato de ácido 3-[4-(7-cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico (26.9 g , 94% de rendimiento) MS (m/z): 41 5.2 (M+ 1 ).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente por el método de Ejemplo 1 3. tjempio ¿ t> Síntesis de diclorhidrato de ácido 3-[4-(2-cloro-7-metil-5H-pirrolo[2, 1 c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico.

Se disolvió diclorhidrato de 2,2-dimetil-3-(piperazin-1-il)-propanoato de metilo (1.49 g, 5.47 mmoles) en agua y se absorbió sobre una columna SCX2. Se lavó la columna con metanol y se eluyó 2,2-dimetil-3-piperazin-1-il-propanoato de metilo con 2 amoníaco en metanol. Se removió el metanol in vacuo y se agregó el 2,2-dimetil-3-(piperazin-l-il)propanoato de metilo a acetonitrilo (12 mL). Se agregó 2,11-dicloro-7-metil-5H-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepina (0.85 g, 3.22 mmoles) y bicarbonato de sodio (0.405 g, 4.83 mmoles) a la solución de acetonitrilo. Se calentó y agitó en el microondas por 30 minutos a 140°C. Se enfrió a temperatura ambiente, se absorbió la mezcla de reacción sobre sílice y se purificó por cromatografía (gradiente de elución con EtOAc/isohexano 0:100% a 100:0%). Se recolectaron las fracciones que contienen producto y evaporó el solvente in vacuo y se disolvió el residuo en metanol (10 mL) y se agregó hidróxido de litio (0.235 g, 9.65 mmoles). Se calentó y agitó la solución metanólica en el microondas por 12.5 minutos a 140°C. Se enfrió a temperatura ambiente y acidificó con ácido acético y después se evaporó el solvente bajo presión reducida. Se disolvió el residuo en exceso de HCI 2M (ac) y después se evaporó a sequedad. Se disolvió el residuo en agua e inmovilizó sobre una resina de carbonato hidrógeno de poliestireno macroporosa (PL-HC03). Se lavó la resina con agua y se eluyó de la resina con HCI 2M (ac). Se evaporó la solución a sequedad para dar diclorhidrato de ácido 3-[4-(2-cloro-7-metil-5/--pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1-il]-2,2-dimetilpropanoico (0.177 g; 11.28% de rendimiento). MS (m/z): 415.18 (M + 1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente por el método de Ejemplo 25.

Ejemplo 29 Síntesis de 3-[4-(7-cloro-2-etil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazep il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de sodio Se disolvió diclorhidrato de ácido 3-[4-(7-cloro-2-etil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzod¡azepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico (201 mg , 400 pinoles en agua y metanol (5 ml_) después se cargó en un cartucho SCX-2 (2 g). Se lavó con metanol y después se eluyó con amon íaco en metanol. Se concentró la solución básica a sequedad para dar ácido 3-[4-(7-cloro-2-etil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -¡l]-2,2-dimetilpropanoico (160 mg , 373 pmoles). Después se trató con 2N hidróxido de sodio (187 pL, (373 pinoles) y agua (3 mL) para causar la solución. Después se secó por congelamiento para proporcionar 3-[4-(7-cloro-2-etil-5/- -pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoato de sodio (164 mg, 98% de rendimiento). MS (m/z): 429. 18 (M+ 1 ).

Ejemplo 30 Síntesis de dimetansulfonato de ácido 3-[4-(7-Cloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico Se agregó acetonitrilo (5 ml_) a ácido 3-[4-(7-cloro-2-metil-5r7-pirrolo[2,1-c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1-il]-2,2-dimetilpropanoico (0.106 g, 0.255 mmol) para crear una suspensión. Se agregó ácido metansulfónico (0.050 mi, 0.075 g, 0.76 mmol) a la suspensión agitada (1000 rpm) y se agitó la solución resultante a 60°C hasta que un sólido blanco precipita. Se enfrió esta suspensión, y aisló el sólido por filtración para obtener dimetansulfonato de ácido 3-[4-(7-cloro-2-metil-5/-/-pirrolo[2, 1-c][1 ,4]benzodiazepin-11 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetilpropanoico (0.15 g).

Datos de literatura (Morairty SR, Hedley L, Flores J, Martin R, Kilduff TS. (2008) Selective 5-HT2A and 5-HT6 receptor antagonists promote sleep in rats. Sleep 31, 34-44.; y Barbier, A.J., y Bradbury, M.J., Histaminergic Control of Sleep-Wake Cycles: Recent Therapeutic Advances for Sleep and Wake Disorders, CNS & Neurological Disorders - Drug Targets, vol 6, pg. 31-43 (2007)) y datos generados en estudios animales no clínicos que soportan un papel para actividad dual de agonistas inversos H1/antagonistas 5-HT2A en el tratamiento de insomnio y en el tratamiento sintomático de insomnio asociado con otros trastornos ta l como trastornos depresivos , trastornos de ansiedad, dolor, alergias, trastornos de pulmón o vías respiratorias, trastornos psiquiátricos, demencia y/o enfermedades neurodegenerativas y/o trastornos del sueño de ritmo circadiano. Específicamente se encontró que cierta actividad dua l agonistas inversos H 1 /antagonistas 5-HT2A son efectivos en el tiempo de sueño total incrementado usa ndo roedores monitoreados EEG sin hiperactividad desproporcionada o cl ínicamente relevante, dismi nución en sueño REM o hipersom nolencia .

Para demostrar además las características de los presentes compuestos, los compuestos se pueden correr en los sig uientes ensayos in vitro e in vivo: Ensayos de enlace y actividad in vitro Ensayo de enlace de com petencia H 1 Se llevaron a cabo experimentos de en lace [3H]-Pirilamína en formato de 96 cavidades SPA (ensayo de proximidad de escintilación). Se prepararon membranas usadas en este ensayo del receptor H 1 recombinante (h umano) que expresa establemente células HEK-293. La incubación se inicia por la adición de una mezcla de perlillas SPA PVT WGA ( 1 mg/cavidad, Perkin Elmer (MA, U SA) RPNQ0001 ) y mem branas de 3 pg para amortiguador de ensayo (Tris 67 mM; pH 7.6) que contiene [3H]-Pirilamina 3.5 m M y concentraciones variadas del com puesto de prueba (curvas de respuesta de concentración de 1 0 puntos) . Se determinó el enlace no específico en la presencia de Triprolidina 10 µ?. Las muestras se incubaron por cuatro horas a temperatura ambiente (22°C) y después se leyeron en un Trilux Microbeta.

Ensayo de enlace de competencia 5-HT2A Se llevaron a cabo experimentos de enlace [3H]-Cetanserina en formato de 96 cavidades SPA. Se prepararon membranas usadas en este ensayo del receptor 5-HT2A recombinante (humano) que expresa establemente células AV-12. La incubación se inicia por la adición de una mezcla de perlillas SPA YSi WGA (1 mg/cavidad, Perkin Elmer (MA, USA) RPNQ001 1 ) y membranas de 2 pg para amortiguador de ensayo (Tris 67 mM; EDTA 0.5 mM; pH 7.6) que contiene [3H]-Cetanserina 3.1 mM y concentraciones variadas del compuesto de prueba (curvas de respuesta de concentración de 10 puntos). Se determinó el enlace no específico en la presencia de -Naftil) piperazina 20 µ?. Las muestras se incubaron por cuatro horas a temperatura ambiente (22°C) y después se leyeron en un Trilux Microbeta.

Ensayo de enlace de competencia 5-HT2c Se llevaron a cabo experimentos de enlace [ 25l]-(+)DOI en formato de 96 cavidades SPA. Se prepararon membranas usadas en este ensayo del receptor 5-HT2c recombinante (humano) que expresa establemente células AV-12. La incubación se inicia por la adición de una mezcla de perlillas SPA PVT WGA (0.5 mg/cavidad, Perkin Elmer (MA, USA) RPNQ001 1 ) y membranas de 2.5 pg para amortiguador de ensayo (Tris-HCI 50 mM; MgCI2 10 mM, EDTA 0.5 mM ; pargiíina 1 0 µ?, ácido ascórbico al 0.1 %, pH 7.4) que contiene [ l]-(+)DOI 0.2 mM y concentraciones variadas del compuesto de prueba (curvas de respuesta de concentración de 10 puntos). Se determinó el enlace no específico en la presencia de 1 -( 1 -Naftil) piperazina 20 µ?. Las muestras se incubaron por cuatro horas a temperatura ambiente (22°C) y después se leyeron en un Trilux Microbeta.

Análisis de datos de enlace Se evaluaron curvas usando una ecuación no lineal logística de 4 parámetros para obtener la concentración del competidor que causa 50% de inhibición de enlace de radioligando (IC50). Se calcularon las constantes de disociación de equilibrio (K¡) de conformidad con la ecuación K¡ = IC50/( 1 +L/Kd), en donde L iguala la concentración del radioligando usado en el experimento y K¡ iguala la constante de disociación de equilibrio del radioligando para el receptor, determinado de análisis de saturación estándar o experimentos de competencia homólogos. Los valores reportados para K¡, en donde los valores n son indicados, se muestran como media geométrica + el error estándar de la media (SEM), con el número de determinaciones replicadas indicadas por n. Se calcularon las medias geométricas por la ecuación GeoMean = 10? (Promedio (log K¡ 1 + log ¡ 2 +... log K¡ n) n2).

Antagonismo GABAA usando receptores nativos en cultivos heuronales primarios Se evaluó la actividad de compuestos en receptores GABAA nativos monitoreando flujos de calcio usando un sistema FLIPR® en formato de 96 cavidades (Fluorometric I maging Píate Reader (FLIPR®, Molecular Devices). Brevemente, se disasociaron neuronas embriónicas corticales de embriones de rata E1 8 y se colocaron a una densidad óptima en placas FLI PR® de 96 cavidades recubiertas de poli-D-lisina de fondo transparente, de pared negra. Después de cargar las células con un tinte sensible a calcio (Fluo4-AM, Molecular Devices), las células se bañan en una solución que contiene cloruro bajo (cloruro reemplazado por gluconato). Bajo estas condiciones de activación de receptores GABAA causa un eflujo de iones de cloruro (en la dirección del gradiente químico), lo cual resulta en despolarización de membrana y consecuentemente activación de canales de calcio puenteado por voltaje (VGCCs). Se registra el influjo de calcio a través de VGCCs y se analiza fuera de línea usando el sistema FLIPR®. Para una validación farmacológica del ensayo, las curvas de respuesta de concentración (CRC) se registran para el agonista estándar (GABA) y antagonista estándar (Gabacina). Se determina cualquiera de los efectos en agonista forma CRC una concentración fija del GABA agonista a 10 µ? (equivalente a una respuesta GBA EC90).

Métodos: Los efectos agonistas de compuestos se cuantifican usando curvas de respuestas de 10 puntos comparando las respuestas fluorescentes máximas al GABA agonista en la presencia y ausencia de compuesto. La ventana de ensayo se define como la respuesta máxima obtenida por GABA y su concentración EC90 predeterminada menos la respuesta obtenida por una concentración completamente inhibidora de gabacina (50 µ?). Se calculan los efectos antagonistas como un porcentaje de la ventana de ensayo. Todos los datos se calculan como valores IC50 relativos usando un programa de fijación de curva logística de cuatro parámetros (Prism Graphpad® 3.01). Se comparan potencias antagonistas para todos los componentes a gabacina con tres replicas en cada corrida de ensayo.

Se prueban compuestos ejemplificados o sales de los mismos ejemplificadas esencialmente como se describe anteriormente y se encuentran por tener ata afinidad para los receptores H1 y 5-HT2A y selectivamente sobre el receptor 5-HT2C. Los K¡ para los receptores H1-5-HT2A para los compuestos ejemplificados se encontraron ser menores de 100 nM y 200 nM, respectivamente, mientras las K¡ para el receptor 5-HT2c se encontraron ser mayores de 1000 nM.

Además, los compuestos de la invención pueden ser probados en ensayos de enlace y ensayos de actividad funcional por métodos bien conocidos para otros receptores fisiológicamente importantes tales como, pero no se limitan a, el canal hERG, otros receptores de serotonina (específicamente receptores 5-HT1A, 5-HT1B, 5-HT1D, 5-HT1E, 5-HT1F, carecen de actividad agonista a receptores 5-HT2B, receptores 5-HT2C- 5-HT4, 5-HT5, 5-HT6 y 5-HT7), receptores muscarínicos, receptores dopaminérgicos (específicamente D1, D2 y D3), receptores GABA, receptores adrenérgicos y transportadores de monoamina. Ciertos compuestos ejemplificados se prueban en estos receptores y se m uestran por carecer de actividad significativa .

Los compuestos de los ejemplos 1 y 1 3 se prueban esencialmente como se describe anteriormente y se encontraron tener perfiles de actividad como se muestra en la Tabla 1 .

Tabla 1 . Datos de selectividad Por lo tanto, las dosis fisiológicamente relevantes de los compuestos de la invención se espera que proporcionen inhibición sustancial de receptores H 1 y 5-HT2A ¡n vivo, mientras no interactúa sustancialmente con otros receptores fisiológicamente relevantes, y así se espera proporcionen la farmacología deseada mientras se evitan efectos indeseados asociados con actividad objetivo. Estos efectos indeseables incluyen, pero no se limitan a los siguientes: actividad antagonista de 5-HT2c asociada con el tratamiento emergente de ganancia de peso, actividad agonista de 5-HT2 B asociada con valvulopatía, modulación del canal hERG asociada con prolongación QT y actividad GABAA asociada con actividad de espasmo. Además, la interferencia con psicolog ía sueño/despertar es evitada por la selectividad sobre receptores de dopamina, otros receptores de serotonina, receptores adrenérgicos y transportadores de monoamina.

Ocupación del Receptor 5-HT7A: Se somete a ensayo la ocupación del receptor para demostrar el alcance de interacción con el Receptor 5-HT2A in vivo. Brevemente, las ratas Sprague-Dawley machos (Harían Sprague-Dawley, Indianápolis, IN) que pesan aproximadamente 230-280 gramos se les da acceso ad libitum a alimento y agua hasta el comienzo del protocolo experimental de 3 horas. Se usa 1 mg/kg de cetanserina (antagonista 5-HT2A no selectivo) usa como un control positivo para establecer validez de ensayo. Los compuestos de prueba o control se administran por alimentación por sonda oral en un vehículo que comprende de hidroxipropil beta-ciclodextrina al 20%. Se usa como un trazador MDL 100907 ((R)-(+)-a-(2,3-Dimetoxifenil)-1 -[2-(4-fluorofenil)etil]-4-piperidinmetanol), un antagonista 5-HT2A selectivo. El MDL 100907 se suspende en agua con 5 µ? de ácido láctico diluido (1 mg/ml), diluido a 6 pg/ml con salina, y se administra en un volumen de 1 ml/kg intravenosamente vía la vena de cola lateral para proporcionar una dosis de trazador de 3 pg/ml. Se administra a las ratas el compuesto de prueba, cetanserina, o vehículo (N = 4), después de una hora más tarde con una dosis del trazador de 3 pg/kg intravenosa del MDL 100907. En este tiempo de administración del trazador la ocupación del receptor (RO) se considera medida. Quince minutos después de la administración del trazador, las ratas son sacrificadas por dislocación cervical. Se recolectan muestras de plasma y se, remueven muestras de la corteza frontal y cerebelo. Se mide el nivel de MDL 100907 en cada muestra cortical y cerebelar. Se calcula RO usando el método de proporción bien establecido el cual emplea una región de alta densidad del receptor representativa de enlace total (corteza frontal) normalizado por un área sin o con muy bajos niveles del receptor (cerebelo). Esta región, referida como la región nula, representa enlace no específico de la sonda de ligando. La proporción de vehículo de los niveles de trazador en la corteza en relación al cerebelo representa 0% de ocupación. Una proporción de 1 representa 100% de ocupación y se logra cuando todos los enlaces específicos al receptor 5-HT2A del trazador MDL 100907 se bloquean. Las proporciones intermedias del trazador cortical al cerebelar del grupo pretratado con el compuesto de prueba se interpolan linealmente entre la proporción de niveles del trazador en animales tratados con el veh ículo (0% de ocupación) y una proporción de 1 (1 00% de ocupación) para determinar el porcentaje de RO 5-HT2A.

Análisis MDL 1 00907: Las muestras de la corteza y cerebelar se pesan y colocan en tubos para centrifugación cónicos en hielo. Se agregan cuatro volúmenes (p/v) de acetonitrilo que contiene ácido fórmico al 0.1 % a cada tubo. Las muestras después se homogenizan y se centrifugan a 14,000 RPM (21 , 920 x g) por 16 minutos. El sobrenadante se diluye agregando 100 - 900 µ? de agua estéril en viales de inyección HPLC para análisis LC/MS/MS. El análisis de MDL 100907 se lleva a cabo usando un HPLC Agilent modelo 1200 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) y un espectrómetro de masa API 4000. La separación cromatográfica es en una columna C 18 2.1 X 50 mm (Agilent, número de parte 971700-907) con una fase móvil que consiste de acetonitrilo al 60% en agua con un contenido de ácido fórmico al 0.1 % total. La detección de MDL 100907 se logra monitoreando el precursor para transición a producto iónico con una masa a proporción de carga (m/z) de 374.2 a 123.0. Se preparan los estándares agregando cantidades conocidas del analito a muestras del tejido del cerebro de ratas no tratadas y procesamiento como se describe anteriormente.

Métodos Estadísticos: Se fijan curvas de cada estudio a una función logística de 4 parámetros con el fondo fijado a 0% usando JMP® versión 8.0 (SAS Institute Inc, Cary NC) y se calcula el ED50 absoluto por el software. Los valores se proporcionan como medias, errores estándares e intervalos de confidencia del 95%. Los compuestos del Ejemplo 13 se prueban esencialmente como se describe y se encuentra que logra alta ocupación del receptor 5-HT2A con un EC50 de 0.27 mg/kg (SE = 0.069, Cl 95% = 0.16-0.48 mg/kg).

Ocupación del Receptor H1 Histamina: Se somete a ensayo RO H1 para demostrar el alcance de la interacción con el receptor H1 ¡n vivo. Brevemente, ratas Sprague-Dawley machos (Harían Sprague-Dawley, Indianápolis, IN) que pesan aproximadamente 230-280 gramos se les da acceso ad libitum a alimento y agua hasta el comienzo del protocolo experimental de 3 horas. Se usa diclorhidrato del ácido 3-[4-(8-fluorodibenzo[b,f][1 ,4]oxazepin-11-il)piperazin-1-il]-2,2-dimetilpropanoico como un control positivo y se usa doxepina como un rastreador. Los compuestos de prueba y control se administran por alimentación por sonda oral en un vehículo que comprende hidroxipropil beta-ciclodextrina al 20% Se disuelve doxepina en agua estéril (100 pg/ml), se diluye a 2 pg/ml con salina, y se administra en un volumen de 0.5 ml/kg intravenosamente vía la vena de cola lateral para proporcionar una dosis de rastreador de 1 pg/ml. Se administra a las ratas el compuesto de prueba, 15 mg/kg de control positivo o vehículo, o después de 1 hora más tarde por una dosis de "rastreador" intravenoso de doxepina (N = 4). En este tiempo la administración del rastreador de RO se considera medida. 40 minutos después de la administración de rastreador, las ratas se sacrifican por dislocación cervical. Las muestras de plasma se recolectan y se remueve la corteza frontal. El nivel del rastreador doxepina se mide en cada muestra cortical. Se calcula RO usando una comparación dentro del tejido de niveles del rastreador bajo condiciones del vehículo (0% de ocupación) y condiciones de control positivo (1 00% de ocupación). 1 5 mg/kg del control positivo administrado intravenosamente con un pretratamiento de 30 minutos es predeterminado para representar bloqueo completo del enlace específico del rastreador a receptores H 1 . Grupos de tratamiento adicional con dosis del compuesto de prueba son linealmente interpolados entre el vehículo y grupos de control positivo para calcular el porcentaje de RO H 1 .

Análisis de Doxepina: Las muestras corticales se pesaron y colocaron en tubos para centrifugación cónicos en hielo. Se agregan cuatro volúmenes (p/v) de acetonitrilo que contiene ácido fórmico al 0.1 % a cada tubo. Las muestras se homogenizan y centrifugan usando un RMP a 14,000 RPM (21 ,920 x g) por 16 minutos. El sobrenadante se diluye con 1 00 - 900 µ? de agua estéril en viales de inyección HPLC para análisis LC/MS/MS. El análisis LC/MS/MS de doxepina se lleva a cabo usando un HPLC Agilent modelo 1200 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA) y un espectrómetro de masa API 4000. La separación cromatográfica emplea una columna C18 2.1 X 50 mm (Agilent, número de parte 971 700-907) y una fase móvil usando un método de gradiente que consiste de condiciones iniciales de acetonitrilo al 1 0% (ACN) en agua con un contenido de ácido fórmico al 0.1 % total, después de 1 min ACN 10%, 2 min. - ACN 90% , 2.9 min. - ACN 90%, 3.1 min . - ACN 10%, 5.5 min. - Detención. La detección de doxepina se logra monitoreando el precursor para transición a producto iónico con una masa a proporción de carga (m/z) de 280 a 107.1 . Se preparan los estándares agregando cantidades conocidas del analito a muestras del tejido del cerebro de ratas no tratadas y procesamiento como se describe anteriormente.

Métodos Estadísticos: Se fijan curvas de cada estudio a una función logística de 4 parámetros (no se mantiene constante) usando Prism® versión 3.02 (GraphPad Software, San Diego, CA) y se calcula el EDso relativo por el software. Los valores se proporcionan como medias + error estándar de la media. Los compuestos del Ejemplo 13 se prueban esencialmente como se describe y se encuentra que logra alta RO H1 con un EC50 de 0.3 mg/kg.

Agonismo Inverso H1 : Para determinar la naturaleza del agonismo inverso de compuestos de la presente invención, se miden sus efectos en los niveles de fosfato Myo-lnositol 1 (I P1 ) en células HEK293 transfectadas con el receptor H 1 recombinante humano (HEK293/hm H 1 clon R-40). Brevemente, las células HK293/hm H 1 (clon R-40) se hacen crecer a -90% de confluencia (3: 1 DMEM/F12, FBS 5%, H EPES 20 mM, G418 500 pg/ml, Pen/Estrep/Glutamina 1 %) y recolectados en el día del ensayo usando 1 x Tripsina/EDTA (PAA Pasching, Austria L1 1 -003). Se siembran 35 µ? de células (300K) en placas de fondo sólido con la mitad de área blanca de 96 cavidades (Corning, UK 3688) en amortiguador de estimación (NaCI 146 mM, CaCI2 1 mM, KCI 4.2 mM, MgCI2 0.5 mM, Glucosa 5.5 mM , HEPES 1 0 mM y LiCI 50 mM). Los compuestos de prueba inicialmente se disuelven en DMSO 100% a 1 mM, y serialmente diluidas (medio log) en DMSO 100% para dar curvas de respuesta de dosis de 10 puntos (Biomek 2000, Beckman Coulter UK). Estos son diluidos adicionalmente a una concentración de ensayo final x2 en amortiguador de estimación usando CybiweII (CiBio Jena, Alemania) y se agrega 35 µ? a las células en la placa de ensayo (10 µ? concentración final máxima). Se incuban las células más el compuesto por 1 hora 30 minutos a 37°C/C02 al 5% antes de la adición de 15 µ? de cada uno de los reactivos del kit de detección I P1 HTRF (CisBio 62P1 APEC). La placa celular se incuba por una hora adicional a temperatura ambiente antes de la medición de acumulación IP1 (lector de placa Envision, Perkin Elmer). Se calcula la acumulación IP1 (nM) por extrapolación de la curva I P1 estándar corrida el día del ensayo. Se calculan los valores EC50 usando un ajuste de curva de 4 parámetros (Graph Pad Prism v3.02). Los valores de eficacia negativa se expresan en relación al control positivo de Tripelennamina (10 µ?, Sigma, UK P5514). Los compuestos representativos de la presente invención se someten a ensayo esencialmente como se describe y se encontraron ser agonistas inversos en el receptor H1. El compuesto 13 es probado esencialmente como se describe y se encuentra que suprime completamente la actividad constitutiva (126 + 6%) con un IC50 de 53.9 + 37 nM.

Inhibición de Actividad de Movimiento de Cabeza inducido por DOl: La actividad antagonista del receptor 5-HT2A ¡n vivo de los compuestos de la presente invención se demuestra por su capacidad para bloquear actividad de movimiento de cabeza inducido por el agonista del receptor 5-HT2A 2,5-dimetoxi-4-yodoamfetamina (DOl). (véase por ejemplo. Bartoszyk GD, van Amsterdam C, Bóttcher H, Seyfried CA. EMD 281014, a new selective serotonin 5-HT2A receptor antagonist. Eur J Pharmacol. 2003473: 229-230). Brevemente, ratones C57BL/6J macho (20-25 g, Charles River) se alojaron en condiciones de alojamiento estándar (32 ratones en una jaula IVC grande, con fase de luz de 07.00 a 19.00, temperatura constante (19-23°C) y humedad (50% +/-10), ad libitum a alimento y agua). Los ratones reciben ya sea vehículo (Metil celulosa al 0.25%), DOl (3 mg/kg en salina) o compuesto de prueba a 10 mg/kg de PO más DOl (3 mg/kg en salina). Los compuestos de prueba se evalúan individualmente en grupos de cuatro por experimento con n = 4 para cada compuesto, junto con el vehículo y DOl+vehículo (n = 8). Después de un tiempo de pre-tratamiento del compuesto de prueba de 60 minutos, los ratones reciben ya sea el vehículo (salina) o 3 mg/kg de DOI dosificada subcutáneamente, y después se colocan en cámaras de observación perspex transparentes. Cinco minutos después de la administración de DOI o vehículo, el número de movimientos de cabeza visualmente registrados exhibidos por cada ratón individual se cuantifica por 1 5 minutos. Los datos se analizan usando una ANOVA y Prueba de Dunnet post-hoc. Los compuestos ejemplificados se prueban esencialmente como se describe y se encuentran que inhiben la respuesta de movimiento de cabeza inducido por DOI a más del 90% a 10 mg/kg. El compuesto del ejemplo 13 es probado esencialmente como se describe y se encuentra que inhibe la respuesta de movimiento de cabeza inducido por DOI al 100% a 10 mg/kg.

Monitoreo de Sueño y Comportamiento en ratas: Se prueban compuestos representativos de la presente invención en ratas para su capacidad para incrementar la cantidad de sueño o interrupción de sueño disminuida o ambos sin efectos indeseables tales como inhibición de sueño REM , inicio de discapacidad motriz y/o insomnio de rebote. Los animales de prueba son continuamente monitoreados por electroencefalogramas (EEG) , electromiogramas (EMG) y movimiento para medir sueño no REM acumulativo, sueño total acumulativo, duración de ataque de sueño promedio, duración de ataque de sueño más largo, insomnio de rebote, inhibición de sueño REM y intensidad de actividad locomotora durante el desvelo. Se conocen en la técnica métodos para estos estudios (véase por ejemplo, métodos descritos en Edgar DM, Seidel WE. Modafinil induce desvelo sin actividad motora intensificada o subsecuente hipersomnolencia de rebote en la rata. J Pharmacology & Experimental Therapeutics 1997; 283: 757-769; van Gelder RN, Edgar DM, Dement WC. Registro de sueño automatizado en tiempo real: Validación de un sistema a base de microcomputadora para ratones. Sleep 1991, 14: 48-55; and Gross BA, Walsh CM, Turakhia AA, Booth V, Mashour GA, Poe GR. Software de registro de sueño automatizado a base de fuente abierta lógica usando registros electrofisiológicos en ratas. J Neurosci Methods. 2009; 184(1 ): 10-8). Los estudios se conducen como sigue: Preparación animal. Ratas Wistar machos, adultos (aproximadamente 270-300 g al tiempo de la cirugía) son quirúrgicamente equipadas para registros crónicos de EEG, EMG y movimiento como sigue: Las ratas son preparadas quirúrgicamente con un implante craneal que consiste de cuatro tornillos de acero inoxidable para registro EEG (dos frontales [3.9 mm anterior del sincipucio, y +2.0 mm lateral medio] y dos occipital [6.4 mm posterior al sincipucio, +5.5 mm lateral medio]), y con dos alambres de acero inoxidable revestidos de Teflón para registros EMG (colocados bajo los músculos trapezoides de la nuca). Todos los cables son soldados a un conector miniatura (Microtech, Boothwyn, PA) antes de la cirugía. El montaje de implante se fija al cráneo por la combinación de los tornillos que registran EEG de acero inoxidable, cianoacrilato aplicado entre el conector de implante y el cráneo, y acrílico dental. Se monitorea la actividad locomotora por medio de un transmisor miniatura (Minimitter PDT4000G, Philips Respironics, Bend, OR) quirúrgicamente colocado en el abdomen. Se dejan para recuperación al menos 3 semanas.

Ambiente de Registro: Cada rata se aloja individualmente dentro de una jaula microaisladora modificada con un filtro superior de policarbonato insertado ascendente para permitir más espacio superior vertical. Se conecta un cable flexible que restringe mínimamente el movimiento a un extremo a un conmutador fijado a la parte superior de la jaula y en el otro extremo al implante craneal del animal. Cada jaula se localiza dentro de compartimentos ventilados, separados de una cámara que registra el sueño-despertar de acero inoxidable. Están disponibles alimento y agua ad libitum y la temperatura ambiental se mantiene a aproximadamente 23+1°C. Un ciclo de luz-oscuridad de 24 horas (LD 12:12) usando luz fluorescente se mantiene a través del estudio. La humedad relativa promedia aproximadamente 50%. Los animales no son perturbados por al menos 30 horas antes y después de cada tratamiento.

Estudio de diseño y dosificación. El vehículo ' (placebo, metilcelulosa 15 centipoise 0.25% en agua) o uno de los niveles de dosis del compuesto de prueba se administra oralmente a 1 ml/kg pseudo-aleatoriamente de forma que la rata no recibe ;el mismo tratamiento dos veces, y la rata no recibe más de dos de los 8 tratamientos en cualquiera de los estudios. Cada rata se remueve de su jaula por aproximadamente un minuto para ser pesada y tratada. Al menos un periodo de 6 días "grabado" precede y sigue cada tratamiento.

Recolección de Datos. La discriminación de sueño y desvelo puede ser automatizada (por ejemplo, Van Gelder et al. 1991 (above); Edgar et al. 1997 (anterior); Winrow CJ, et al., Neuropharmacology 2010; 58(1):185-94.; y Gross et al., 2009 (anterior). Se amplifica el EEG y se fija (X10.000, paso de banda 1-30 Hz), EMG se amplifica e integra (paso de banda 10-100 Hz, integración RMS) y se monitorea simultáneamente la actividad locomotora no específica (LMA) simultáneamente. Se clasifican los estados de excitación en épocas de 10 segundos como sueño no REM, sueño REM, desvelo, o desvelo dominado teta. Se registra la actividad locomotora (LMA) como conteos por minuto y se detecta por receptores de telemetría comercialmente disponibles (ER4000, Minimitter, Bend, OR).

Análisis Estadístico: Todos los animales que tienen al menos un resultado se incluyen en los resultados resumidos (por ejemplo, se incluyen datos apropiados de un tratamiento animal para el cual los datos de telemetría son usados pero los datos EEG no). El periodo de observación post-tratamiento es dividido en intervalos postdosificación apropiado a cada resultado, en donde el tiempo de dosificación se define como el inicio de Hora = 0, y los resultados se resumen en el periodo de observación computarizando ya sea la- media cada hora o el valor acumulativo a través de cada periodo (véase las leyendas de la Tabla 1 para definición precisa de cada Resultado). Se analizan ataques de sueño en la escala log para estabilizar la variación, todas las otras variantes se analizan en la escala lineal. Cada resultado en cada periodo se analiza por análisis de covarianza usando grupos de tratamiento y datos de tratamiento como factores y el intervalo de pre-tratamiento correspondiente, 24 horas antes, como el covariado. Las medias ajustadas y el cambio de medias de vehículo y sus correspondientes errores estándar se resumen para cada grupo de tratamiento. Los resultados analizados en la escala log son transformados nuevamente para medias geométricas reportadas y resultados proporción a vehículos medios.

Los compuestos de los Ejemplos 1 3-28 son probados esencialmente como se describe. Los compuestos de los Ejemplos 1 3, 1 5, 16, 1 8 y 1 9 se encontraron por tiempo de sueño NREM acumulativo significativamente incrementado y tiempo de sueño total acumulativo sin insomnio de rebote significativo, inhibición de sueño REM o inhibición de intensidad locomotora (LMI) a 3 mg/kg. El compuesto del Ejemplo 1 3 se prueba esencialmente como se describe y se encuentra que tiene el perfil de sueño e intensidad de actividad locomotora como se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2. Compuesto del Eje Variables de efectos Eficacia de variables indeseables Sueño NREM acumulativo Insomnio de Rebote Media Dosis (mg/kg PO) N SE ajustada Sueño Total acumulativo Media Dosis (mg/kg PO) N ajustada Ataque de Sueño Intensidad de Actividad Locomotora Promedio Media Dosis (mg/kg PO) N SE N Media ajustada LCL ajustada Ataque de Sueño más Largo Media Dosis (mg/kg PO) N SE ajustada Tabla 2. Resumen estadístico: Abreviaturas: N = tamaño de muestra; Media ajustada = valor medio del grupo ajustado en relación a controles de vehículo; SE = error estándar de la media; LCL = límite de confidencia menor al 95%, NREM = no REM , es decir, todos los otros sueños que el sueño REM. ;¦¦ ¡¡¡i Definiciones y unidades - las medias son difeféncias ajustadas de controles de vehículo: Sueño acumulativo: a través de las primeras 6 horas después del tratamiento, en minutos ("Sueño total" denota sueño NREM + sueño REM).

Ataque de sueño promedio: promedio de ataques de sueño promediados cada hora, a través de las primeras 6 horas después del tratamiento, expresado como n-veces incrementado sobre los controles de vehículo.

Ataque de sueño más largo: el ataque de sueño más largo en las primeras 6 horas después del tratamiento, expresado como n-veces incrementado sobre los controles de vehículo.

Insomnio de rebote: minutos acumulativos de sueño NREM+REM durante las primeras 3 horas de luz en el periodo, es decir, 7a, 8a y 9a hora después del tratamiento.

Inhibición REM: minutos acumulativos de sueño REM durante las primeras 12 horas después del tratamiento.

Intensidad de Actividad Locomotora (LMA): expresada como conteos LMA por minuto de desvelo definido por EEG , promediado a través de las primeras 6 horas después del tratamiento.

Determinación de Eficacia: El umbral de eficacia para cada una de las cuatro variables de eficacia se calcula trazando el incremento en cada variable en relación a controles de vehículo durante el periodo de 6 horas después del tratamiento contra log (dosis). El umbral de eficacia para cada variable es que la dosis la cual proporciona el valor de umbral de eficacia definida; +30 minutos de sueño no REM acumulado adicional , +25 minutos de sueño total acumulado adicional, 1 .75x de incremento en duración de ataque de sueño promedio y 1 .5x de incremento en duración del ataque de sueño más largo. El compuesto del ejemplo 1 3 se encuentra por tener umbrales eficaces de dosis como se muestra en la Tabla 3.

Determinación de efectos indeseados: Cada variable de resultado de "efecto indeseado" (véase Tabla 4, leyenda de definiciones), se traza contra log(dosis).

El umbral del valor para inhibición REM se define como una reducción acumulativa de sueño REM de -1 0 minutos. El umbral del valor para insomnio de rebote se define como -20 minutos. El umbral del valor para LMI reducido se define como -5 conteos de actividad locomotora por minuto de desvelo definido por EEG. Un efecto indeseado significativo se define por ocurrir cuando el límite de confidencia inferior desciende por debajo del umbral del valor, para todas las dosis en o antes de la dosis eficaz promedio. Para compuestos ejemplificados, no se observan ocurrencias indeseadas de inhibición REM, insomnio de rebote o reducción en LMI se observan a dosis hasta de al menos 10 mg/Kg. (Valor negativo indica inhibición de REM, insomnio de rebote y LMI reducido, respectivamente).

Mientras es posible administrar compuestos empleados en los métodos de esta invención directamente sin cualquier formulación, los compuestos son usualmente administrados en la forma de composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de Fórmula I, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, como un ingrediente activo y al menos un portador, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable. Estas composiciones pueden ser administradas por una variedad de rutas que incluyen oral, sublingual, nasal, subcutánea, intravenosa, e intramuscular. Tales composiciones farmacéuticas y procesos para prepararlas son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (University of the Sciences in Philadelphia, ed., 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005).

Las composiciones son preferiblemente formuladas en una forma de dosificación unitaria, cada dosificación contiene desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 60 mg, más usualmente aproximadamente 1 hasta aproximadamente 30 mg, como por ejemplo entre aproximadamente 2 y aproximadamente 10 mg del ingrediente activo. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a. unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mam íferos, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con al menos un portador, diluyente y/o excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado.

Los compuestos de Fórmula I son en general efectivos sobre un amplio intervalo de dosis. Por ejemplo, dosificaciones por día normalmente caen dentro del intervalo de aproximadamente 0.002 hasta aproximadamente 1 .0 mg/kg, más usualmente desde aproximadamente 0.015 hasta 0.5 mg/kg, y como por ejemplo, entre 0.03 y 0.1 5 mg/kg de peso corporal. En algunos casos los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado anteriormente pueden ser más que adecuados, mientras en otros casos todavía dosis más grandes pueden ser empleadas sin causar algún efecto secundario peligroso, y por lo tanto los intervalos de dosificación anteriores no están propuestos para limitar el alcance de la invención en cualquier forma. Se entenderá que la cantidad del compuesto actualmente administrado será determinada por un especialista, en vista de las circunstancias relevantes, que incluyen la condición a ser tratada, la " ruta de administración elegida, el compuesto actual o compuestos administrados, la edad, peso y respuesta del paciente individual, y la severidad de los síntomas del paciente.

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula caracterizado porque R1 es cloro o metilo; R2 es metilo, etilo, isopropilo, cloro, bromo, trifluorometilo, o metiltio; y R3 es hidrógeno o metoxi; o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R3 es hidrógeno, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

3. Un compuesto de conformidad con ya sea la Reivindicación 1 o Reivindicación 2, caracterizado porque R1 es cloro, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

4. Un compuesto de conformidad con la Reivindicación 1, caracterizado porque es ácido 3-[4-(7-Cloro-2-metil-5H-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-11-il)piperazin-1 -il]-2,2-d¡metilpropanoico, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

5. Un compuesto de conformidad con la Reivindicación 1 , caracterizado porque es diclorhidrato de ácido 3-[4-(7-Cloro-2-metil-5 -/-pirrolo[2, 1 -c][1 ,4]benzodiazepin-1 1 -il)piperazin-1 -il]-2,2-dimetil-propanoico.

6. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. Un método para tratar insomnio en un mam ífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero en necesidad de tal tratamiento una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la Reivindicación 1 , o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

8. El método de conformidad con la Reivindicación 7, caracterizado porque el mam ífero es un humano.

9. El método de conformidad con la Reivindicación 7, caracterizado porque el insomnio es caracterizado por dificultades en el comienzo del sueño o mantenimiento del sueño o ambos.

10. El método de conformidad con la Reivindicación 9, caracterizado porque el mamífero es un humano.

1 1 . Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en terapia.

12. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de insomnio.

13. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de insomnio donde el insomnio es distinguido por dificultades en el comienzo del sueño o mantenimiento del sueño o ambos.

14. Un compuesto para el uso de conformidad con ya sea la Reivindicación 12 o 1 3 en un humano.

15. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de insomnio.

16. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de insomnio donde el insomnio es distinguido por dificultades en el comienzo del sueño o mantenimiento del sueño o ambos en un mam ífero.

17. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en combinación con al menos un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos.

18. La composición farmacéutica de conformidad con la Reivindicación 17, caracterizada porque el otro ingrediente terapéutico comprende un inhibidor selectivo de reabsorción de serotonina.