MX2012012354A - Compuestos anti-virales. - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos y composiciones relacionadas para el tratamiento de infección viral, incluyendo infección viral ARN, y compuestos que pueden modular la trayectoria de RIG-l en células de vertebrado, incluyendo compuestos que pueden activar la trayectoria de RIG-l.

Description

COMPUESTOS ANTIVIRALES Campo de la descripción Los compuestos y métodos descritos en la presente son útiles para tratar la infección viral en vertebrados, incluyendo infecciones por virus ARN.

Antecedentes de la descripción En conjunto, los virus ARN representan un enorme problema de salud pública en Estados Unidos y en el resto del mundo. Los virus ARN conocidos incluyen el virus de la influenza (que incluye los aislados aviares y porcinos), el virus de la hepatitis C (HCV), el virus del Nilo Occidental, coronavirus SARS, virus respiratorio sincicial (RSV) y virus de la inmunideficiencia humana (HIV).

Más de 170 millones de personas en todo el mundo están infectadas con HCV y 130 millones de esas personas son portadores crónicos con riesgo de desarrollar enfermedades hepáticas crónicas (cirrosis, carcinoma e insuficiencia hepática). De este modo, el HCV es la causa de dos tercios de todos los transplantes de hígado en el mundo desarrollado. Los estudios recientes demuestran que el índice de mortalidad a causa de la infección por HCV se encuentra en aumento debido al aumento de la edad de los pacientes con infección crónica. Además, la gripe estacional infecta al 5 - 20% de la población, lo que provoca 200,000 hospitalizaciones y 36,000 muertes por año.

En comparación con la influenza y el HCV, el virus del Nilo Occidental provoca la menor cantidad de infecciones, 981 en Estados Unidos en 2010. El veinte porciento de los pacientes infectados desarrollan una forma grave de la enfermedad, lo que provoca un índice de mortalidad del 4.5%. A diferencia de la influenza y del HCV, no existen terapias aprobadas para el tratamiento de la infección del virus del Nilo Occidental, y es un patógeno de alta prioridad para el desarrollo del fármaco debido a su potencial como agente bioterrorista.

Entre los virus ARN enumerados, las vacunas existen solamente para el virus de la influenza. Por consiguiente, la terapia con fármaco es esencial para mitigar la morbilidad y la mortalidad significativas asociadas con estos virus. Desafortunadamente, la cantidad de fármacos antivirales es limitada, muchos de ellos son poco eficaces, y prácticamente todos están plagados por la rápida evolución de la resistencia viral y por un espectro limitado de acción. Además, los tratamientos para la influenza aguda y las infecciones por HCV son únicamente levemente eficaces. El estándar de cuidado para la infección por HCV, interferón PEGilado y ribavirina, es eficaz solamente en el 50% de los pacientes, y existe una cantidad de efectos secundarios que limitan la dosis y están relacionados con la terapia combinada. Ambas clases de antivirales de influenza aguda, inhibidores de adamantanos y neuraminidasa, son eficaces solamente en las primeras 48 horas luego de la infección, limitando por lo tanto la ventana de oportunidad para el tratamiento. La alta resistencia a los adamantanos ya restringe su uso, y el acopio masivo de inhibidores de neuraminidasa finalmente provocará un uso excesivo y la aparición de cepas resistentes de la influenza.

La mayoría de los esfuerzos de desarrollo de fármacos contra estos virus se dirigen a las proteínas virales. Esto es en gran parte la razón por la cual los fármacos actuales tienen un espectro limitado y están sujetos a la aparición de la resistencia viral . La mayoría de los virus ARN presentan genomas pequeños y muchos codifica n menos de una docena de proteínas. Por lo tanto, las dianas virales son l imitadas. En función de lo que antecede, existe una inmensa necesidad insatisfecha de tratamientos eficaces contra infecciones virales.

Breve descripción de la descripción Los compuestos y métodos descritos en la presente cambian el foco de desarrollo del fármaco viral alejándolo del direccionamiento de las prote ínas virales e impu lsándolo hacia el desarrol lo de los fármacos que se dirigen y potencian la respuesta antiviral in nata del huésped. Dichos compuestos y métodos probablemente son más eficaces, menos susceptibles a la aparición de la resistencia viral, provocan menos efectos secundarios y son eficaces contra una variedad de virus distintos( 1 ) .

La vía RIG-I está íntimamente involucrada en la regulación de la respuesta i nmunitaria innata a las infecciones por virus ARN . Se espera que los agonistas de RIG-I sean útiles para el tratam iento de muchos virus, incl uyendo, de modo no taxativo, HCV, influenza y virus del Nilo Occidental. Por consig uiente, la presente divulgación se refiere a compuestos y métodos para el tratamiento de la infección viral, incluyendo la infección por virus ARN , donde los compuestos pueden modular la vía RIG-I .

Uha modalidad incluye una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene una estructura donde cada uno de y R2 se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH , CN , N02, OCF3 l CF3, Br, Cl, F, 1 -amidíno, 2-amídino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR4, SOR4, S02R4, C02R4, COR4, CONR R5, CSN R R5 o SOmNR R5; R3 es H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o alquilalquilheterocíclico; cada uno de Z1 , Z2 y Z3 se selecciona independientemente de C, O, NH S, C=0, S=0 o S02; cada uno de Y1 , Y2 e Y3 se selecciona independientemente de C o N; W es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, arialquilo o heteroarilalquilo; cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente de H , alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilaquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH, CN , N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina o isoquinolina; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; m es 1 o 2; n es 0, 1 , 2 o 3; y o es 0, 1 , 2 o 3.

Otra modalidad incluye una composición farmacéutica con un compuesto descrito anteriormente o una sal, tautómero, isómero y/o profármaco farmacéuticamente aceptable de este.

En otra modalidad, un R1 y un R3 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

En otra modalidad, el compuesto tiene una estructura donde cada uno de R se selecciona independientemente de H , alquilo inferior, arito, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH , CN , N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR4, SOR4, S02R4, C02R4, COR4, CONR4R5, CSN R4R5 o SOmNR4R5; cada uno de X1 , X2, X3, X4 y X5 se selecciona independientemente de C o N; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; p es 0, 1 , 2, 3 o 4; y donde dos grupos R6 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

En otra modalidad, el compuesto tiene una estructura donde cada R1 , R2 y R6 se selecciona independientemente de H , alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, NH2, OH, CN, N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, alquilcarbonilo o alquilsulfonilo; es O, NH , NR o S; Z3 es O, NH , NR, S, C = 0, S=0 o S02; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; y donde un R1 y un R3 o dos grupos R6 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquílo.

En otra modalidad, el compuesto tiene una estructura En otra modalidad, el compuesto tiene una estructura seleccionada del grupo que consisten en En otra modalidad, el compuesto tiene una estructura seleccionada del grupo que consisten en Otra modalidad incluye un método para tratar o prevenir una infección viral en un vertebrado que comprende administrar al vertebrado una composición farmacéutica que comprende un compuesto descrito anteriormente.

En otra modalidad, la infección viral es provocada por un virus de una o más de las siguientes familias: Arenaviridae, Astroviridae, Birnaviridae, Bromoviridae, Bunyaviridae, Caliciviridae, Closteroviridae, Comoviridae, Cystoviridae, Flaviviridae, Flexiviridae, Hepevirus, Leviviridaé, Luteoviridae, Mononegavirales, virus del mosaico, Nidovirales, Nodaviridae, Orthomyxoviridae, Picobirnavirus, Picornaviridae, Potyviridae, Reoviridae, Retroviridae, Sequiviridae, Tenuivirus, Togaviridae, Tombusviridae, Totiviridae, Tymoviridae, Hepadnaviridae, Herpesviridae, Paramyxoviridae o Papillomaviridae.

En otra modalidad, la infección viral es virus de la influenza, virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, coronavirus SARS, poliovirus, virus del sarampión, virus del dengue, virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis de San Luis, virus de Murray Valley, virus Powassan, virus Roció, virus de la encefalomielitis ovina, virus Banzi, virus llheus, virus Kokobera, virus Kunjin, virus Alfuy, virus de la diarrea bovina, virus de la enfermedad de la selva de Kyasanur o virus de la inmunodeficiencia humana (VI H).

En otra modalidad de los métodos, el compuesto tiene una estructura que se selecciona del grupo que consiste en En otra modalidad de los métodos, la composición farmacéutica se administra como un adyuvante para una vacuna profiláctica o terapéutica.

En otra modalidad de los métodos, el compuesto tiene un estructura que se selecciona del grupo que consiste en En otra modalidad de los métodos, el método comprende vacunar a un vertebrado administrándole adicionalmente un vacuna contra el virus de la influenza, virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, coronavirus SARS, poliovirus, virus del sarampión, virus del dengue, virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis de San Luis, virus de urray Valley, virus Powassan, virus Roció, virus de la encefalomielitis ovina, virus Banzi, virus llheus, virus Kokobera, virus Kunjin, virus Alfuy, virus de la diarrea bovina, virus de la enfermedad de la selva de Kyasanur o virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

Otra modalidad incluye un método para modular la respuesta inmunitaria innata en una célula eucariota que comprende administrar a la célula un compuesto descrito anteriormente.

En otra modalidad para modular la respuesta inmunitaria innata en una célula eucariota, el compuesto tiene un estructura que se selecciona del grupo que consiste en En otra modalidad para modular la respuesta inmunitaria innata en una célula egcariota, el compuesto tiene un estructura que se selecciona del grupo que consiste en Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra compuestos similares desde el punto de vista de la estructura y análogos propuestos para KI N100.

La Figura 2 es un gráfico de un ensayo de fromación de focos de HCV. Las células Huh7 se pretrataron con KI N 100 durante 24 horas y se infectaron con HCV2a a una multiplicidad de infección (MOI) de 0.5 durante 48 horas. Se detectaron las proteínas de HCV mediante tinción inmunofluorescente con suero específico del virus y los focos se normalizaron a células de control negativo que no se trataron con el fármaco (igual a 1 ).

Las figuras 3A y 3B demuestran el efecto de KI N 1 01 y el control positivo en la viabilidad celular luego de la infección con virus de encefalomiocarditis murina (EMCV).

Descripción detallada La presente divulgación proporciona compuestos y métodos que cambian el foco de los tratamientos virales alejándolo del direccionamiento de las proteínas virales e impulsándolo hacia el desarrollo de los fármacos que se dirigen y potencian la respuesta antiviral innata del huésped (paciente) . Dichos compuestos y métodos probablemente son más eficaces, menos susceptibles a la aparición de la resistencia viral, provocan menos efectos secundarios y son eficaces contra una variedad de distintos virus (1 ).

La vía RIG-I está íntimamente involucrada en la regulación de la respuesta inmunitaria innata a las infecciones por virus ARN. RIG-I es un receptor de reconocimiento de patógenos citosólico que es esencial para provocar la inmunidad a una gran variedad de virus ARN (5-8). RIG-I es una helicasa de ARN de cadena doble que se une a motivos dentro del genoma del virus ARN y está caracterizada por tramos homopoliméricos de uridina o motivos poliméricos U/A (9). La unión al ARN induce un cambio de conformación que disipa la represión de señalización de RIG-I mediante un dominio represor autólogo, permitiendo así que RIG-I emita señales corriente abajo a través de sus dominios de activación y reclutamiento de caspasa (CARD) en tándem (4). La señalización de RIG-I depende de su actividad NTPasa, pero no requiere el dominio helicasa (10, 1 1 ). La señalización de RIG-I es imperceptible en células en reposo, y el dominio represor sirve como el interruptor de encendido-apagado que rige la señalización en respuesta a la infección del virus (8).

La señalización de RIG-I se transduce a través de IPS- (también conocido como Cardif, MAV y VISA), una proteína adaptadora esencial que reside en la membrana mitocondrial externa (1 2-1 5). IPS-1 recluta un complejo de señalización macromolecular que estimula la activación corriente abajo de I RF-3, un factor de transcripción que induce la expresión de IFN tipo I y los genes que responden al virus que controlan la infección (16). Los compuestos que desencadenan la señalización de RIG-I directamente o mediante la modulación de los componentes de la vía RIG-I , incluyendo IRF-3, presentan aplicaciones terapéuticas atractivas como antivirales o moduladores inmunitarios.

Se utilizó un enfoque de análisis de alto rendimiento para identificar los compuestos que modulan la vía RIG-I , un regulador clave de la respuesta inmunitaria celular innata a la infección del virus ARN. En modalidades particulares, se demostró que los principales compuestos agonistas de RIG-I validados activan específicamente el factor-3 regulador de interferón (I RF-3). En modalidades adicionales, presentan uno o más de los siguientes: inducen la expresión de los genes estimulados por interferón (ISG), presentan baja citotoxicidad en ensayos basados en células, son adecuados para el desarrollo de análogos y para estudios QSAR, presentan propiedades fisicoquímicas similares al fármaco, y presentan actividad antiviral contra el virus de la influenza A y/o el virus de la hepatitis C (HCV). En determinadas modalidades, los compuestos exhiben todas estas características.

Tal como se describe a continuación , estos compuestos representan una nueva clase de agentes terapéuticos antivirales potenciales. Si bien la divulgación no está limitada a un mecanismo específico de acción de los compuestos in vivo, los compuestos se seleccionan para su modulación de la vía RIG-I. En determinadas modalidades, la modulación es la activación de la vía RIG-I . Los compuestos y métodos descritos en la presente funcionan para (uno o más de estos) disminuir la proteína viral, el ARN viral y el virus infeccioso en modelos de cultivo celular de HCV y/o virus de la influenza. En una modalidad, la divulgación de la presente se refiere a una clase de compuestos de la siguiente estructura: donde cada uno de y R2 se selecciona independientemente de H , alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH, CN , N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR4, SOR4, S02R\ C02R4, COR4, CONR4R5, CSNR4R5 o SOmNR4R5; R3 es H , alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquiiariio, arilalquilo, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o alquilalquilheterocíclico; cada uno de Z1 , Z2 y Z3 se selecciona independientemente de C, O, NH S, C=0, S=0 o so2; cada uno de Y1 , Y2 e Y3 se selecciona independientemente de C o N; W es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, arialquilo o heteroarilalquilo; cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquiiariio, arilaquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH, CN , N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina o isoquinolina; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; m es 1 o 2; n es 0, 1 , 2 o 3; y o es 0, 1 , 2 o 3.

Se considera que las sales, tautómeros, isómeros y profármacos farmacéuticamente aceptables de los compuestos que anteceden se encuentran comprendidos por el alcance de la presente descripción.

En una modalidad, un R1 y un R3 se toman juntos para formar un grupo arito, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

En otra modalidad, los compuestos tienen una estructura donde cada R6 se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arito, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH , CN, N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR4, SOR4, S02R4, C02R4 , COR4, CONR4R5, CSNR4R5 o SOmNR4R5; cada uno de X1 , X2, X3, X4 y X5 se selecciona independientemente de C o N; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; p es 0, 1 , 2, 3 o 4; y donde dos grupos R6 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

En aun otra modalidad, los compuestos tienen una estructura donde cada R1, R2 y R6 se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, NH2, OH, CN, N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, alquilcarbonilo o alqui Isulfonilo; ? es O, NH, NR, S; Z3 es O, NH, NR, S, C=0, S=0 o S02; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; y donde un grupo R1 y uno R3 o dos R6 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

En aun otras modalidades, los compuestos tienen una estructura En otros ejemplos de modalidades, los compuestos descritos nte pueden tener las estructuras Los ejemplos de compuestos incluyen 25 ?? ?? Tal como se usan en la presente, ya sea solos o combinados, los términos "alquiloxi" o "alcoxi" se refieren a un grupo funcional que comprende un grupo alquil éter. Los ejemplos de alcoxis incluyen, de modo no taxativo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi y similares.

Los términos "alquilo", "alquenilo" y "alquinilo" se refieren a alquiles, alquenilos y alquinilos sustituidos y no sustituidos. El término "alquilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene 1 a 20 átomos de carbono unidos exclusivamente por enlaces simples y que no tienen ninguna estructura cíclica. Un grupo alquilo puede estar opcionalmente sustituido, tal como se define en la presente. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, de modo no taxativo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, pentilo, iso-amilo, hexilo, heptilo, octilo, noilo, decilo, undecilo, dodecilo tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo, nonadecilo, eicosilo y similares.

Alquilos, alquenilos y alquinilos sustituidos se refieren a alquilos, alquenilos y alquinilos sustituidos con uno a cinco sustituyentes del grupo, que incluyen, H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, NH2, OH , CN, N02, OCF3, CF3, F, 1 -amidina, 2-amidina, alquilcarbonilo, morfolinilo, piperidinilo, dioxajiilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, tiadiazolilo, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazolilo, isoxazolilo, piridinilo, pirimidinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, SR , SOR , S02R, C02R, COR, CONR'R", CSNR'R", SOnNR'R".

Tal como se usa en la presente, solo o combinado, el término "alquinilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene de 2 a 20 átomos de carbono y que tiene uno o más enlaces triples carbono-carbono y que no tiene ninguna estructura cíclica. Un grupo alquinilo puede estar opcionalmente sustituido, tal como se define en la presente. Los ejemplos de grupos alquinilo incluyen, de modo no taxativo, etinilo, propinilo, . hidroxipropinilo, butinilo, butin-1 -ilo, butin-2-ilo, 3-metilbutin-1 -ilo, pentinilo, pentin-1 -ilo, hexinilo, hexin-2-ilo, heptinilo, octinilo, noninilo, decinilo, undecinilo, dodecinilo, tridecinilo, tetradecinilo, pentadecinilo, hexadecinilo, heptadecinilo, octadecinilo, nonadecinilo, eicosinilo y similares.

El término "alquileno" tal como se usa en la presente, solo o combinado, se refiere a un grupo alifático saturado derivado de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada unido en dos o más posiciones, tal como metileno (-C2-). A menos que se especifique de otro modo, el término "alquilo" puede incluir grupos "alquileno".

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "alquilcarbonilo" o "alcanoilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un grupo alquilo unido al resto molecular original a través de un grupo carbonilo. Los ejemplos de grupos alquilcarbonilo incluyen, de modo no taxativo, metilcarbonilo, etilcarbonílo y similares.

El término "alquinileno" se refiere a un enlace triple carbono-carbono unido en dos posiciones, tal como etinileno (-C: : :C-, -C=C-). A menos que se especifique de otro modo, el término "alquinilo" puede incluir grupos "alquinileno".

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "arilo", "hidrocarbilo arilo" o "hidrocarburo de arilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo aromático sustituido o no sustituido con una estructura de anillo molecular cíclico conjugado de 3 a 12 átomos de carbono. Un grupo arilo puede ser monocíclico, bicíclico o policíclico, y puede incluir opcionalmente una a tres estructuras anulares adicionales, tales como, por ej. , un cicloalquilo, un cicloalquenilo, un heterocicloalquilo, un heterocicloalquenilo o un heteroariío. El término "arilo" incluye, de modo no taxativo, fenilo (bencenilo), tiofenilo, indolilo, naftilo, totilo, xililo, antracenilo, fenantrilo, azulenilo, bifenilo, naftalenilo, 1 -metilnaftalenilo, acenaftenilo, acenaftilenilo, antracenilo, fluorenilo, fenalenilo, fenantrenilo, benzo[a]antracenilo, ben2o[c]fenantrenilo, crisenilo, fluorantenilo, pirenilo, tetracenilo (naftacenilo), trifenilenilo, antantrenilo, benzopirenilo, benzo[a]pirenilo, benzo[e]fluorantenilo, benzo[ghi]perilenilo, benzo[j]fluorantenilo, benzo[k]fluorantenilo, corannulenilo, coronenilo, dicoronilenilo, helicenilo, heptacenilo, hexacenilo, ovalenilo, pentacenilo, picenilo, perilenilo y tetrafenilenilo. Arilo sustituido se refiere a arilos sustituidos con uno a cinco sustituyentes del grupo, que incluyen, H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, NH2, OH , CN, N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbon ilo, morfolinilo, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR, SOR, S02R, C02R, COR, CONRR, CSNRR, SOnNRR.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "arilo inferior" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo aromático sustituido o no sustituido con una estructura de anillo molecular cíclico conjugado de 3 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos arilo inferior incluyen, de modo no taxativo, fenilo y naftilo.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "carboxilo" o "carboxi" se refiere a un grupo funcional -C(=0)OH o al anión "carboxilato" correspondiente -C(=0)0-. Los ejemplos incluyen, de modo no taxativo, ácido fórmico, ácido acético, ácido oxálico, ácido benzoico. Un grupo "O-carboxilo" se refiere a un grupo carboxilo . que tiene la fórmula general RCOO, donde R es un resto o grupo orgánico. Un grupo "C-carboxilo" se refiere a un grupo carboxilo que tiene la fórmula general COOR, donde R es un resto o grupo orgánico.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "cicloalquilo", "alquilocarbocíctico" y "carbocicloalquilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido con una estructura de anillo molecular cíclico no conjugado de 3 a 12 átomos de carbono unidos exclusivamente con enlaces simples carbono-carbono en la estructura anular de carbono. Un grupo cicloalquilo puede ser monocíclico, bicíclico o policíclico, y puede incluir opcionalmente una a tres estructuras anulares adicionales, tales como, por ej. , un arilo, un heteroarilo, un cicloalquenilo, un heterocicloalquilo o un heterocicloalquenilo.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "cicloalquilo inferior" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo monocíclico no aromático sustituido o no sustituido con una estructura de anillo molecular cíclico no conjugado de 3 a 6 átomos de carbono unidos exclusivamente con enlaces simples carbono-carbono en la estructura anular de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo inferior incluyen, de modo no taxativo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

Tal como se usa en la presente, el término "grupo funcional" se refiere a un grupo específico de átomos dentro de una molécula que son responsables de las reacciones qu ímicas características de dichas moléculas.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "heteroalquilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene de 1 a 20 átomos unidos exclusivamente mediante enlaces simples, donde al menos un átomo en la cadena es un carbono y al menos un átomo en la cadena es O, S, N o cualquier combinación de estos. El grupo heteroalquilo puede estar completamente saturado o puede contener 1 a 3 grados de insaturación. Los átomos distintos de carbono pueden estar en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo, y hasta dos átomos distintos de carbono pueden ser consecutivos, tales como, por ej. , -CH2-NH-OCH3. Además, los átomos distintos de carbono opcionalmente pueden estar oxidados y el nitrógeno puede estar opcionalmente cuaternizado.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "heteroarilo" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo aromático sustituido o no sustituido con una estructura de anillo molecular cíclico conjugado de 3 a 12 átomos, donde al menos un átomo en la estructura anular es un carbono y al menos un átomo en la estructura anular es O, S, N o cualquier combinación de estos. Un grupo heteroarilo puede ser monocíclico, bicíclico o policíclico, y puede incluir opcionalmente una a tres estructuras anulares adicionales, tales como, por ej . , un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, un heterocicloalquilo o un heterocicloalquenilo. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, de modo no taxativo, acridinilo, bencidolilo, bencimidazolilo, bencisoxazolilo, benzodioxinilo, dihidrobenzodioxinilo, benzodioxolilo, 1 ,3-benzodioxolilo, benzofurilo, benzoisoxazolilo, benzopiranilo, benzotiofenilo, benzo[c]tiofenilo, benzotriazolilo, benzoxadiazolilo, benzoxazolilo, benzotiadiazolilo, benzotiazolilo, benzotienilo, carbazolilo, cromonilo, cinnolinilo, dihidrocinnolinilo, coumarinilo, dibenzofuranilo, furopiridinilo, furilo, indolizinilo, indolilo, dihidroindolilo, imidazolilo, indazolilo, isobenzofurilo, isoindolilo, isoindolinilo, dihidroisoindolilo, isoquinolilo, dihidroisoquinolinilo, isoxazol i lo , isotiazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, fenantrolinilo, fenantridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirrolinilo, pirrolilo, pirrolopiridínilo, quinolilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrazolopiridazinilo, tetrahidroisoquinolinilo, tiofenilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tienopiridinilo, tienilo, tiofenilo, triazolilo, xantenilo y similares.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "heteroarilo inferior" se refiere a un grupo funcional que comprende un hidrocarburo monocíclico o bicíclico aromático sustituido o no sustituido con una estructura de anillo molecular cíclico conjugado de 3 a 6 átomos, donde al menos un átomo en la estructura anular es un carbono y al menos un átomo en la estructura anular es O, S, N o cualquier combinación de estos.

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "hidroxi" se refiere al grupo funcional hidroxilo (-OH).

Tal como se usa en la presente, ya sea solo o combinado, el término "oxo" se refiere al grupo funcional =0.

Tal como se usa en la presente, el término "vertebrado" incluye todos los vertebrados vivos, tales como, de modo no taxativo, mamíferos, humanos, pájaros, perros, gatos, ganado, animales de granja, rebaños de campo, etc.

Tal como se usa en la presente, una "composición farmacéutica" comprende al menos un compuesto descrito en la presente junto con uno o más portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables, según sea apropiado para el modo de administración seleccionado.

Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse, de modo no taxativo, en forma sólida (incluyendo gránulos, polvos o supositorios) o en forma l íquida (por ej. , soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas pueden estar sujetas a operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales, tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsificantes, amortiguadores, etc.

Las formas de dosificación sólidas para la administración oral pueden incluir cápsulas, comprimidos, pildoras, polvos y gránulos. En dichas formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se puede combinar con al menos un diluyente inerte, tal como sacarosa, lactosa o almidón. Dichas formas de dosificación también pueden comprender, como en la práctica normal, sustancias adicionales distintas de diluyentes inertes, por ej. , agentes lubricantes, tal como estearato de magnesio. En el caso de las cápsulas, comprimidos y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes amortiguadores. Los comprimidos y las pildoras se pueden preparar adicionalmente con recubrimientos entéricos.

Las formas de dosificación liquidas para administración oral pueden incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables que contienen diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tal como el agua. Dichas composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, endulzantes, saborizantes y aromatizantes. La composición farmacéutica puede contener más de una modalidad de la presente invención. Las preparaciones para administración oral pueden formularse adecuadamente para proporcionar la liberación controlada del compuesto activo.

Para la administración bucal, las composiciones pueden adoptar la forma de comprimidos o pastillas formuladas de manera convencional.

Los compuestos pueden formularse para administración parenteral por inyección, por ej. , mediante inyección de bolo o infusión. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en forma de dosificación unitaria, por ej. , en ampollas de vidrio o recipientes de múltiples dosis, por ej. , frascos de vidrio. Las composiciones para inyección pueden adoptar formas como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y pueden contener agentes r de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilización, conservación y/o dispersión. De manera alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constituirse con un vehículo adecuado, por ej. , agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso.

Además de las formulaciones descritas anteriormente, los compuestos también se pueden formular como una preparación de depósito. Tales formulaciones de larga actuación se pueden administrar mediante implantación o mediante inyección intramuscular.

Para la administración nasal o pulmonar o cualquier otra administración mediante inhalación, los compuestos para usarse de acuerdo con la presente invención se administran convenientemente en forma de una presentación de aerosol en spray a partir de paquetes presurizados o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ej. , diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas o mezcla de gases adecuados.

Muchos virus ARN comparten vías bioquímicas, de regulación y de señalización . Estos virus incluyen, de modo no taxativo, virus de la influenza (que incluye los aislados aviares y porcinos), virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, coronavirus SARS, poliovirus, virus del sarampión, virus del dengue, virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis de San Luis, virus de Murray Valley, virus Powassan, virus Roció, virus de la encefalomielitis ovina, virus Banzi, virus llheus, virus Kokobera, virus Kunjin, virus Alfuy, virus de la diarrea bovina y virus de la enfermedad de la selva de Kyasanur. Los compuestos y métodos descritos en la presente se pueden usar para tratar estos virus.

Las familias taxonómicas releventes de virus ARN incluyen, de modo no taxativo, Astroviridae, Birnaviridae, Bromoviridae, Caliciviridae, Closteroviridae, Comoviridae, Cystoviridae, Flaviviridae, Flexiviridae, Hepevirus, Leviviridae, Luteoviridae, Mononegavirales, virus del mosaico, Nidovirales, Nodaviridae, Orthomyxoviridae, Picobirnavirus, Picornaviridae, Potyviridae, Reoviridae, Retroviridae, Sequiviridae, Tenuivirus, Togaviridae, Tombusviridae, Totiviridae y Tymoviridae. Los compuestos y métodos descritos en la presente se pueden usar para tratar virus dentro de estas familias de virus como parte de una formulación de fármaco farmacéuticamente aceptable. Otras familias de virus relevantes incluyen, de modo no taxativo, Hepadnaviridae, Herpesviridae, Paramyxoviridae y Papillomaviridae.

La divulgación proporciona una vacuna que comprende los compuestos combinados con un antígeno, a los efectos de prevenir o tratar una enfermedad en un animal, incluyendo un animal vertebrado. Tal como se usan en la presente, las vacunas incluyen La divulgación proporciona el uso de los compuestos como adyuvantes. Tal como se usa en la presente, el adyuvante mejora, potencia y/o acelera los efectos beneficiosos de otro agente terapéutico administrado.

Los compuestos y métodos descritos en la presente pueden ser aditivos o sinergísticos con otras terapias actualmente en desarrollo o uso. Por ejemplo, ribavirina e interferón-a proporcionan un tratamiento eficaz para la infección de HCV cuando se usan combinados. Su eficacia combinada puede superar la eficacia de cualquiera de los fármacos utilizados individualmente. Las composiciones de la divulgación se pueden administrar solas o combinadas o junto con interferón, ribavirina y/o varias moléculas pequeñas que se están desarrollando contra ambas dianas virales (proteasas virales, polimerasa viral, ensamble de complejos de replicación viral) y dianas hospedadoras (proteasas hospedadoras requeridas para el procesamiento viral, cinasas hospedadoras requeridas para la fosforilación de dianas virales, tales como NS5A e inhibidores de factores hospedadores requeridos para utilizar eficazmente el sitio interno de entrada al ribosoma o IRES viral).

Los compuestos y métodos descritos en la presente podrían usarse combinados o junto con, de modo no taxativo, inhibidores de adamantano, inhibidores de neuraminidasa, interferones alfa, inhibidores de polimerasa no nucleósido o nucleósido, inhibidores de NS5A, antihistaminas, inhibidores de proteasa, inhibidores de helicasa, inhibidores de P7, inhibidores de entrada, inhibidores de IRES, estimuladores inmunitarios, inhibidores de la replicación de HCV, inhibidores de ciclofilina A, agonistas de adenosina A3 y supresores de microARN.

Las citocinas que podrían administrarse combinadas o junto con los compuestos y métodos descritos en la presente incluyen, de modo no taxativo, IL-2, IL-12, IL-23, IL-27 o IFN-?. Los nuevos fármacos contra HCV que están o estarán disponibles para la administración potencial combinados o junto con los compuestos y métodos descritos en la presente incluyen, de modo no taxativo, ACH-1625 (Achillion); interferón glicosilado (Alios Biopharma); ANA598, ANA773 (Anadys Pharm); ATI-0810 (Arisyn Therapeutics); AVL-1 81 (Avila Therapeutics); LOCTERON® (Biolex); CTS- 027 (Conatus); SD-101 (Dynavax Technologies); Clemizole (Eiger Biopharmaceuticals); GS-9190 (Gilead Sciences); Gl-5005 (Globallmmune BioPharma); Resiquimod / R-848 (Graceway Pharmaceuticals); Albinterferon alfa-2b (Human Genome Sciences); IDX-184, I DX-320, I DX-375 (Idenix); I MO-2125 (Idera Pharmaceuticals); INX-189 (Inhibitex) ; ITCA-638 (Intarcia Therapeutics) ; ITMN- 1 91 /RG7227 (Intermune); ITX-5061 , ITX-4520 (iTherx Pharmaceuticals); MB1 1362 (Metabasis Therapeutics); Bavituximab (Peregrine Pharmaceuticals); PSI-7977, RG7128, PSI-938 (Pharmasset); PHX1 766 (Phenomix); Nitazoxanide / ALINIA® (Romark Laboratories); SP-30 (Samaritan Pharmaceuticals); SCV-07 (SciClone); SCY-635 (Scynexis); TT-033 (Tacere Therapeutics); Viramidina/taribavirina (Valeant Pharmaceuticals); Telaprevir, VCH-759, VCH-916, VCH-222, VX-500, VX-81 3 (Vértex Pharmaceuticals) y PEG-INF Lambda (Zymogenetics).

Los nuevos fármacos contra el virus de la influenza y del Nilo Occidental que están o estarán disponibles para la administración potencial combinados o junto con los compuestos y métodos descritos en la presente incluyen, de modo no taxativo, inhibidores de neuraminidasa (Peramivir, Laninamivir); terapia triple - inhibidores de neuraminidasa ribavirina, amantadina (ADS-8902); inhibidores de polimerasa (Favipiravir); inhibidor de transcriptasa inversa (ANX-201 ); chitosan inhalado (ANX-2 1 ); inhibidores de entrada /unión (mimético del sitio de unión, Flucide); inhibidor de entrada, (Fludase); inhibidor de fusión, (MGAWN 1 para Nilo Occidental); inhibidores de célula hospedadora (lantibióticos); escisión del genoma de ARN (ARNi, ARNse L); estimuladores inmunes (Interferón, Alferon-LDO; agonista Neuroquinina l , Homspera, Interferón Alferon N para Nilo Occidental) y TG21 .

Otros fármacos para el tratamiento de la influenza y/o hepatitis disponibles para la administración potencial combinada o junto con los compuestos y métodos descritos en la presente incluyen, de modo no taxativo: Tabla 1 . Fármacos contra la hepatitis y la influenza Nombre de Indicaciones Nombre genérico marca aprobadas Dichos agentes e la misma composición f 'r aKfi'sltU Pegasys 2a Hepatitis B PEGinterferón Peg-lntron Hepatitis C 2b Copegus Ribavirina Hepatitis C Rebetol Ribavirina Hepatitis C Ribavirina Hepatitis C Tamiflu Oseltamivir I nfluenza A, B, C Relenza Zanamivir Influenza A, B, C Estos agentes s-e pueden . incorporar domo parte de la mismfo composición f Amantadina I nfluenza A Rimantadina Influenza A compuestos o composiciones de la descripción.

Los compuestos y métodos descritos en la presente pueden ser aditivos o sinergísticos con otros compuestos y métodos para permitir el desarrollo de la vacuna. En virtud de sus propiedades antivirales e inmunitarias mejoradas, los compuestos se pueden usar para afectar una vacunación profiláctica o terapéutica. Los compuestos no necesitan administrarse simultáneamente o junto con otros componentes de vacuna para ser eficaces. Las aplicaciones de vacunas de los compuestos no están limitadas a la prevención o tratamiento de infección de virus pero pueden comprender todas las aplicaciones de vacunas terapéuticas y profilácticas debido a la naturaleza general de la respuesta inmunitaria provocada por los compuestos.

Tal como lo comprende el experto en la técnica, las vacunas pueden ser contra virus, infecciones bacterianas, cánceres, etc. y pueden incluir uno o más de (de modo no taxativo): una vacuna atenuada viva (LAIV), una vacuna inactivada (I IV; vacuna de virus inactivo), una subunidad (vacuna fraccionada); una vacuna subvirión; una vacuna de proteína purificada o una vacuna de ADN. Los adyuvantes apropiados incluyen uno o más de (de modo no taxativo) emulsiones de agua/aceite, adyuvantes de copolímero no iónico, por ej., CRL 1005 (Optivax; Vaxcel Inc., Norcross, Ga.), fosfato de aluminio, hidróxido de aluminio, suspensiones acuosas de hidróxidos de aluminio y magnesio, endotoxinas bacterianas, polinucleótidos, polielectrolitos, adyuvantes lipof ílicos y análogos de dipéptido muramilo sintético (norMDP), tales como, N-acetil-nor-muranil-L-alanil-D-isoglutamina, N-acetil-muranil-(6-0-estearoil)-L-alanil-D-isoglutamina o N-glicol-muranil-LalfaAbu-D-isoglutamina (Ciba-Geigy Ltd.).

La composición farmacéutica que comprende un compuesto de la divulgación se puede formular de varias formas, por ej . , como un líquido, gel, liofilizado o como un sólido comprimido. La forma preferida dependerá de la indicación particular que se esté tratando y será evidente para el experto en la técnica. En una modalidad, los agonistas de RIG-I descritos incluyen formulaciones para la administración oral que pueden ser fármacos de molécula pequeña que emplean procesos de química medicinal directa.

La administración de las formulaciones de la presente divulgación se pueden realizar de varias formas, incluyendo, de modo no taxativo, oral, subcutánea, intravenosa, intracerebral, intranasal, transdérmica, intraperitoneal, intramuscular, intrapulmonar, intratecal, vaginal, rectal, infraocular, o de cualquier otra forma. Las formulaciones se pueden administrar continuamente mediante infusión, si bien se acepta la inyección de bolo, usando procedimientos conocidos en la técnica, tales como bombas (por ej. , bombas osmóticas subcutáneas) o implante. En algunos casos, las formulaciones se pueden aplicar directamente como una solución o aerosol.

Un ejemplo de una composición farmacéutica es una solución diseñada para administración parenteral. Si bien en muchos casos las formulaciones de soluciones farmacéuticas se proporcionan en forma líquida, apropiada para uso inmediato, dichas formulaciones parenterales también se pueden proporcionar en forma congelada o liofilizada. En el caso anterior, la composición se debe descongelar antes de su uso. La última forma a menudo se utiliza para mejorar la estabilidad del compuesto activo contenido en la composición en una amplia variedad de condiciones de almacenamiento; ya que los expertos en la técnica reconocen que generalmente las preparaciones liofilizadas son más estables que sus equivalentes líquidos. Dichas preparaciones liofilizadas se reconstituyen antes de su uso mediante la adición de uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptables adecuados, tales como, de modo no taxativo, agua estéril para inyección o solución salina fisiológica estéril.

Las formulaciones parenterales se pueden preparar para almacenamiento como formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas mezclando, según sea apropiado, el compuesto que tiene el grado deseado de pureza con uno o más portadores, excipientes o estabilizantes farmacéuticamente aceptables, que se emplean generalmente en la técnica (los cuales se denom inan "excipientes"), por ejemplo, agentes amortiguadores, agentes estabilizantes, conservantes, agentes isotónicos, detergentes no iónicos, antioxidantes y/u otros aditivos varios.

Los agentes amortiguadores ayudan a mantener el pH en el intervalo que se aproxima a las condiciones fisiológicas. Generalmente, están presentes a una concentración en el intervalo de alrededor de 2 mM a alrededor de 50 mM. Los agentes amortiguadores adecuados para su uso con la presente divulgación incluyen tanto ácidos orgánicos como inorgánicos y sales de estos, tales como, amortiguadores de citrato (por ej. , mezcla de citrato monosodico y citrato disódico, mezcla de ácido cítrico y citrato trisódico, mezcla de ácido cítrico y citrato monosodico, etc.), amortiguadores de succinato (por ej. , mezcla de ácido succínico y succinato monosodico, mezcla de ácido succínico e hidróxido de sodio, mezcla de ácido succínico y succinato disódico, etc.), amortiguadores de tartrato (por ej. , mezcla de ácido tartárico y tartrato de sodio, mezcla de ácido tartárico y tartrato de potasio, mezcla de ácido tartárico e hidróxido de sodio, etc.), amortiguadores de fumarato, (por ej . , mezcla de ácido fumárico y fumarato monosodico, mezcla de ácido fumárico y fu m arato disódico, mezcla de fumarato m onosod ico y fu m a rato d isód ico, etc.), amortiguadores de gluconato (por ej. , mezcla de ácido glucónico y gluconato de sodio, mezcla de ácido glucónico e hidróxido de sodio, mezcla de ácido glucónico y gluconato de potasio, etc. ), amortiguador de oxalato (por ej. , mezcla de ácido oxálico y oxalato de sodio, mezcla de ácido oxálico e hidróxido de sodio, mezcla de ácido oxálico y oxalato de potasio, etc.) , amortiguadores de lactato (por ej. , mezcla de ácido láctico y lactato de sodio, mezcla de ácido láctico e hidróxido de sodio, mezcla de ácido láctico y lactato de potasio , etc. ) y amortiguadores de acetato (por ej. , mezcla de ácido acético y acetato de sod io, mezcla de ácido acético e hidróxido de sodio, etc. ). Las posibilidades adicionales son amortiguadores de fosfato, amortiguadores de histidina y sales de trimetilamina, tal como Tris.

Los conservantes se pueden agregar para retardar el crecimiento mricobiano, y en general se agregan en cantidades de alrededor de 0.2%-1 % (p/v). Los conservantes adecuados para su uso con la presente divulgación incluyen, de modo no taxativo, fenol, alcohol bencílico, meta-cresol, metilparabeno, propilparabeno, cloruro de octadecildimetilbencilamonio, haluros de benzalconio (por ej. , cloruro, bromuro o yoduro de benzalconio), cloruro de hexametonio, alquil parabenos, tales como, metil o propil parabeno, catecol , resorcinol, ciclohexanol y 3-pentanol.

Se pueden agregar agentes isotónicos para asegurar la isotonicidad de las composiciones líquidas, estos incluyen, de modo no taxativo, alcoholes de azúcar polihídrica, preferentemente alcoholes de azúcar trihídrica o superior, tales como, glicerina, eritritol, arabitol, xilitol, sorbitol y manitol. Los alcoholes polihídricos pueden estar presentes en una cantidad de entre 0.1 % y 25% en peso, en general 1 % y 5%, teniendo en cuenta las cantidades relativas de los otros ingredientes.

Los estabilizadores se refieren a una amplia categoría de excipientes que pueden tener la función de agente aumentador de volumen y de aditivo que solubiliza el agente terapéutico o ayuda a prevenir la desnaturalización o adherencia a la pared del recipiente. Los estabilizadores típicos pueden ser alcoholes de azúcar polihídricos (enumerados anteriormente); aminoácidos, tales como, arginina, lisina, glicina, glutamina, asparagina, histidina, alanina, ornitina, L-leucina, 2-fenilalanina, ácido glutámico, treonina, etc. , azúcares orgánicos o alcoholes de azúcar, tales como, lactosa, trehalosa, estaquiosa, manitol, sorbitol, xilitol, ribitol, mioinisitol, galactitol, glicerol y similares, incluyendo, ciclitoles, tales como, inositol; polietilenglicol; polímeros de aminoácido; agentes reductores que contienen azufre, tales como, urea, glutationa, ácido tióctico, tioglicolato de sodio, tioglicerol, alfa-monotioglicerol y tiosulfato de sodio; polipéptidos de bajo peso molecular (es decir, <10 residuos); proteínas, tales como, albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tales como, polivinilpirrolidona; monosacáridos, tales como, xilosa, mañosa, fructosa y glucosa; disacáridos, tales como, lactosa, maltosa y sucrosa; trisacáridos, tales como, rafinosa y polisacáridos, tales como, dextrano. En general, los estabilizadores están presentes en el intervalo de 0.1 a 10,000 partes en peso, en función del peso del compuesto activo.

Los excipientes adicionales variados incluyen agentes aumentad res de volumen o rellenos (por ej., almidón), agentes quelantes (por ej., EDTA), antioxidantes (por ej., ácido ascórbico, metionina, vitamina E) y cosolventes.

El ingrediente activo también puede estar contenido en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa, gelatina o poli-(metilmetacilato), en sistemas coloidales de liberación de fármaco (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones. Dichas técnicas se describen en Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21a ed., publicado por Lippincott Williams & Wilkins, A Wolters Kluwer Company, 2005.

Eri general, las formulaciones parenterales a ser usadas para la administración in vivo son estériles. Esto se logra fácilmente, por ejemplo, mediante filtración a través de membranas de filtración estériles.

Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el compuesto o la composición, las matrices tienen una forma adecuada, tal como una película o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, pol i(2-hidroxietíl-metacrilato) o polí(vinila lcohol)) , pol il áctidos , copol í me ros de ácido L-glutám ¡co y etil-L-glutamato, acetato de etilen-vinilo no degradable, copolímeros degradables de ácido láctico-ácido glicólico, tales como, tecnología PROLEASE® o LUPRON DEPOT® (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glícólíco y acetato de leuprolida) y ácido poli-D-(-)-3-hídroxibutírico. Si bien los polímeros, tales como acetato de etilen-vinilo y ácido láctico-ácido glicólico permiten la liberación de moléculas durante períodos prolongados, tal como hasta 100 días o más, determinados hidrogeles liberan los compuestos por períodos de tiempo más cortos.

La administración oral de los compuestos y composiciones es una práctica deseada de la divulgación. Para la administración oral, la composición farmacéutica puede estar en forma sólida o líquida, por ej., en forma de una cápsula, comprimido, polvo, gránulo, suspensión, emulsión p solución. La composición farmacéutica preferentemente se produce en forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad determinada del ingrediente activo. Una dosis diaria adecuada para un vertebrado humano u otro vertebrado puede variar ampliamente dependiendo de la afección del paciente y de otros factores, pero puede ser determinada por personas expertas en la técnica usando métodos de rutina.

En formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se puede combinar con al menos un diluyente inerte, tal como sucrosa, lactosa o almidón. Dichas formas de dosificación también pueden comprender, como es la práctica normal, sustancias adicionales, por ej. , agentes lubricantes, tal como estearato de magnesio. En el caso de las cápsulas, comprimidos y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes amortiguadores. Los comprimidos y las pildoras se pueden preparar adicionalmente con recubrimientos entéricos.

Los compuestos o las composiciones se pueden mezclar con adyuvantes, tales como, lactosa, sucrosa, polvo de almidón, ésteres de celulosa de ácidos alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinilpirrolidona y/o alcohol polivin ílico, y luego se colocan en comprimidos o se encapsulan para una administración convencional. De manera alternativa, se pueden disolver en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceites (tal como aceite de maíz, aceite de maní, aceite de algodón o aceite de sésamo), goma tragacanto y/o varios amortiguadores. En la técnica farmacéutica se conocen ampliamente otros adyuvantes y modos de administración. El portador o diluyente puede incluir material de acción retardada, tal como gliceril monoestearato o gliceril diestearato solo o con una cera, u otros materiales conocidos en la técnica.

Los ejemplos que figuran a continuación describen las propiedades de los compuestos descritos. Los ejemplos se incluyen para demostrar las modalidades particulares de la divulgación. Los expertos en la técnica deben reconocer que las técnicas descritas en los Ejemplos representan las técnicas y composiciones que los inventores descubrieron que funcionan correctamente en la práctica de la divulgación y, por lo tanto, puede considerarse como que constituyen modos preferidos para llevarla a la práctica. Sin embargo, los expertos en la técnica, en vista de la presente divulgación, deben reconocer que pueden realizarse muchos cambios en las modalidades específicas descritas y aun así obtener un resultado parecido o similar sin apartarse del espíritu y alcance de la divulgación. Por ejemplo, los Ejemplos que figuran a continuación proporcionan métodos in vitro para analizar los compuestos de la divulgación. Otros modelos de infección de virus in vitro incluyen, de modo no taxativo, flavivirus, tales como, virus de la diarrea bovina, virus del Nilo Occidental y virus GBV-C, otros virus ARN, tales como, virus sincitial respiratorio y los sistemas de replicones del HCV (32), Además, se puede utilizar cualquier cultivo celular apropiado competente para la replicación viral en los ensayos antivirales.

En los siguientes ejemplos, las referencias KI N 100 y KI N101 se refieren a los siguientes compuestos, respectivamente: Ejemplo 1. Síntesis de 7-hidroxi-3-(2-piridil)cromen-4-ona ato Compuesto 1 El resorcinol se hace reaccionar con cloruro de 2-(2-piridil)acetilo, formando el producto 1 -(2,4-dihidroxifenil)-2-(2- piridil)etanona. Dichas reacciones se describen en Chemistry of Heterocyclic Compounds (NY, NY, USA) 1977, tomo 1 3, p. 948-953. El producto se hace reaccionar con trietilortoformiato para formar 7-hidroxi-3-(2-piridil) cromen-4-ona (Compuesto 1 ) que el experto en la técnica puede hacer reaccionar para formar los compuestos de acuerdo con la presente descripción.

Ejemplo 2. Síntesis de [4-oxo-6-propil-3-(2-piridil)cromen-7-il] acetato El 4-propilbenceno-1 ,3-diol se hace reaccionar con cloruro de 2-(2-piridil)acetilo, formando el producto 1 -(2,4-dihidroxi-5-propil-fenil)-2-(2-piridil)etanona. Dichas reacciones se describen en Chemistry of Heterocyclic Compounds (NY, NY, USA) 1977, tomo 13, p. 948-953. El producto se hace reaccionar con trietilortoformiato para formar 7-hidroxi-6-propil-3-(2-piridil)cromen-4-ona que se puede hacer reaccionar con anhídrido acético y una base para formar [4-oxo-6-propil-3-(2- piridil)cromen-7-il] acetato.

Ejemplo 3. Síntesis de [4-oxo-6-propil-3-(2-piridil)cromen-7-il] acetato El resorcinol se hace reaccionar con cloruro de 2-(4- bromofeníl)acetilo, formando el producto 2-(4-bromofenil)-1 -(2,4- dihidroxifenil)etanona. Dichas reacciones se describen en Chemistry of Heterocyclic Compounds (NY, NY, USA) 1977, tomo 1 3, p. 948-953. El producto se hace reaccionar con trietilortoformiato para formar 3-(4- bromofenil)-7-hidroxi-cromen-4-ona que se puede hacer reaccionar con cloruro de metansulfonilo y una base para formar [3-(4-bromofenil)-4- oxo-cromen-7-?] metanosulfonato.

Ejemplo 4. Síntesis de 3-(3,4-dimetoxifenil)-7-hidroxi-cromen-4-ona Compuesto 2 El 3-yodo-7-tetrahidrop¡ran-2-iloxi-cromen-4-ona se hace reaccionar con ácido (3,4-dimetoxifenil)borónico. Luego de una reacción de acoplamiento y de la hidrólisis posterior, se forma 3-(3,4- dimetoxifenil)-7-hidroxi-cromen-4-ona (Compuesto 2). Las reacciones como esta se pueden encontrar, por ejemplo, en Tetrahedron, tomo 63, 2007 pg . 3010-301 6. El experto en la técnica puede hacer reaccionar el Compuesto 2 para formar los compuestos de acuerdo con la presente descripción.

Ejemplo 5. Actividad biológica de KI N 1 00 El KI N 100 se analizó para determinar las actividades biológicas, tal como se muestra en la Tabla 2, y demostró tener las siguientes características: actividad antiviral contra el virus de la influenza, baja citotoxicidad y un índice terapéutico superior a 10. Un resumen de la actividad antiviral de KIN 1 00 es el siguiente: el valor (IC50) de HCV del ensayo de formación de focos (FFA) fue de 1 .2 µ?; el valor (IC50) de ELISA de la nucleoproteína (NP) de la influenza fue de >50 µ?; el valor de citotoxicidad (CC50) fue de >50 µ? ; y el índice terapéutico (TI) (CC50 / IC50) fue de 42, tal como se muestra en la Tabla 2. Estos y otros ensayos para la actividad antiviral se realizan tal como se describe detalladamente a continuación.

Ensayo MTS para determinar la citotoxicidad. Las células Huh7 humanas cultivadas se tratan con cantidades cada vez mayores del compuesto o cantidades equivalentes de DMSO diluido en medio durante 24 horas para ver su efecto en la viabilidad celular. La proporción de las células viables se calcula usando un ensayo de viabilidad celular que mide la conversión de un compuesto de tetrazolio [3-(4,5-dimetil-2-il)-5- (3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna; MTS] en un compuesto formazan coloreado en células vivas. La conversión de MTS en formazan se detecta en un lector de placas de microtitulación de 96 pocilios, y las densidades ópticas resultantes se pueden trazar directamente para calcular la viabilidad celular. Cell Titer One (Promega) es el reactivo de una etapa utilizado tal como lo sugiere el protocolo del fabricante y las células se incuban durante tres horas en presencia de reactivo antes de realizar la lectura de O. D. Los compuestos se diluyeron a concentraciones finales de 0, 5, 1 0, 20 y 50 uM en medio que contiene 0.5% de DMSO. Los pocilios de control negativo no contienen compuesto y se examina el control positivo para determinar la citotoxicidad usando una infección de EMCV que provoca el 100% del efecto citopático. Cada concentración de compuesto y control se realiza en pocilios por triplicado para generar barras de error.

Ensayo de ELISA del virus de la influenza A. Se cultivan células A549 en una placa de 96 pocilios; 1 X104 células/pocilio. Las células se cultivan durante 16 horas y los compuestos diluidos a 5, 10, 20, 50 uM en medio que contiene 0.5% de DMSO se agregan a cada pocilio. Las células se incuban durante 6 horas y luego se infectan con 250 pfu de cepa de WSN de influenza. El virus diluido se agrega directamente al pocilio y el compuesto no se retira. Las células infectadas se cultivan durante un total de 24 horas luego del tratamiento con el compuesto y luego se fijan. El protocolo de ELISA de WSN de influenza se realiza de la siguiente manera: Las células se lavan con PBS, se fijan con metano acetona durante 10 minutos y se lavan nuevamente con PBS. Las células se bloquean con suero de caballo y BSA en presencia de Tritón ?-1?0. El anticuerpo primario utilizado a una dilución de 1 :3000 es anticuerpo monoclonal de nucleoproteína de ratón anti-influenza A (Chemicon). El anticuerpo secundario utilizado es IgG-HRP de cabra anti ratón (Pierce) y esto también se diluye a 1 :3000. La reacción se lleva a cabo usando reactivos TMBK BioFX, tal como fue sugerido. Luego de la adición del reactivo, las células se incuban a temperatura ambiente durante 2-5 minutos y se utiliza HCI 2N para detener la reacción. Las placas se leen a 450 nM.

Ejemplo 6. Ensayo antiviral de EMCV Se cultivaron células Huh7 en condiciones normales de crecimiento y se trataron con la cantidad indicada de fármaco en medio que contiene 0.5% de DMSO. Las células se cultivaron en presencia de un fármaco durante 5 horas y luego se infectaron con 250 pfu de virus de encefalomiocarditis murina (EMCV), por ejemplo, obtenido del ATCC #VR-129B. Las células infectadas se cultivaron durante 1 8 horas adicionales y luego se midió la viabilidad celular usando un ensayo MTS. Las células de control negativo se trataron con amortiguador solo, que contiene 0.5% de DMSO. Se utilizó tratamiento con interferón como control positivo para la inhibición del virus y se agregó de manera similar a los tratamientos con fármaco a una concentración final de 1 0 lU/mL, por ejemplo, interferón-a: Intrón A, de Schering-Plough. La viabilidad celular se midió usando un ensayo MTS, tal como, ensayo de proliferación celular CelITiter 96® AQueous One Solution (MTS), de Promega #G3580.

Los resultados se muestran en las Figuras 3A y 3B. Tal como se puede observar en las Figuras y en la siguiente tabla, KI N 1 01 protegió la viabilidad celular luego de la infección con EMCV.

Ejemplo 7. Actividad antiviral y propiedades farmacológicas usando estud ios cuantitativos de la relación estructura-actividad (QSAR) Este Ejem plo describe la optim ización de compuestos KI N 1 00 para la acción a ntiviral . Para la optim ización , se util iza un enfoque QSAR de dos etapas, comenzando con un peq ueño derivado de análogo establecido para defin ir la clase estructural seguido de la expansión del derivado. Los análogos activos identificados en la primera etapa se utilizarán para definir un subconjunto de las clases estructurales de interés para optimización adicional en la etapa 2.

La etapa 2 se enfocará en la creación de la diversidad estructural y en la eval uación de las variantes centrales. Los derivados estructura les se anal izan para determi nar la actividad antiviral contra HCV y el virus de la influenza , y para determinar la citotoxicidad en una o más líneas celulares o células mononucleares de sangre periférica.

Las moléculas optimizadas que muestran una mejora de la eficacia y baja citotoxicidad están caracterizadas además por mediciones adicionales de la toxicología in vitro, y la absorción, distribución, metabolismo y eliminación (ADME). También se estudia su mecanismo de acción y la amplitud de la actividad antiviral.

Diseño qu ímico en estudios QSAR. Para diseñar las estructuras análogas, analizaremos las propiedades similares a las del fármaco, la inestabilidad metabólica y el potencial tóxico de los compuestos KIN 1 00. Las propiedades similares a las del fármaco, según fueron medidas mediante las Reglas de Lipinski (18), y las propiedades fisicoquímicas relacionadas son los principales indicadores de la biodisponibilidad. Las características estructurales que sugieren inestabilidad metabólica y toxicológica pueden indicar una estabilidad limitada, una reducción de la semivida, intermedios reactivos o toxicidad idiosincrática y, por lo tanto, se retirarán. Se construye un conjunto de análogos de 5 a 10 compuestos para retirar o alterar las características estructurales químicamente reactivas o metabólicamente susceptibles, desarrollando así una QSAR preliminar.

En la Fig. 1 se muestra un ejemplo de un diseño de análogo para la molécula de isoflavona KI N 100. Las isoflavonas son conocidas como productos naturales aislados de la familia de las leguminosas (legumbre) y, en general, son polihidroxiladas y farmacológicamente activas como fitoestrógenos y antioxidantes. El miembro más reconocido de esta clase es genisteína, que se ha informado que presenta actividades anticancerígenas e induce los cambios tímicos e inmunitarios en mamíferos (1 9). Es importante que un análisis preliminar de una biblioteca de productos naturales de NCI reveló que la genisteína tiene validez para la inducción de ISG. Esta correlación demuestra el potencial de amplia flexibilidad de las modificaciones del grupo funcional y de diseño de análogos, sin perder la actividad biológica.

Los elementos estructurales pertinentes para el programa de QSAR incluyen el grupo acetoxi en la posición 7 de KI N 1 00. El grupo bromofenilo altamente lipofílico en la posición 3 se puede reemplazar eficazmente con la piridina básica en KI N 100, lo que demuestra un alto grado de tolerancia a los cambios del sustituyente.

De manera similar, el resto propilo en la posición 6 de KI N 1 00 se puede retirar sin una gran desventaja de la actividad, sin embargo, su presencia permite la introducción de otros sustituyentes con demandas estéricas similares. El grupo acetoxi lábil en la posición 7 de KIN 100, que es vulnerable a la hidrólisis enzimática, sugiere que la especie activa real es un derivado de 6-hidrox¡. Los análogos en la posición 7 con estabilidad absoluta son adecuados para el desarrollo de análogos.

El núcleo de cetona insaturado común (un aceptor de Michael) es un sitio de alquilacion potencial y estará sujeto a la modificación y el análisis. Los ejemplos de reemplazos para el análisis incluyen los núcleos de piridona, pirimidona, piridina, pirimidina y naftileno (Fig. 1 ). En general, las moléculas de isoflavona emparejadas son adecuadas para diseñar análogos con perfiles biológicos, toxicológicos y farmacocinéticos optimizados.

Modelos in vitro para sustentar QSAR. Los análogos químicos de se analizan para determinar la actividad antiviral in vitro contra el HCV 2A y el virus de la influenza A (A/WSN/33). Los niveles de proteína viral y ARN se evalúan luego del tratamiento con fármaco utilizando los ensayos descritos anteriormente.

Luego de varias rondas iterativas de QSAR, los análogos más atractivos de una diversidad de clases estructurales se seleccionan para la caracterización de sus propiedades toxicológicas y ADMA in vitro y para el estudio mecanístico adicional. Los estudios QSAR están diseñados para proporcionar compuestos principales con potencia picomolar a nanomolar, que es adecuada para sustentar el desarrollo preclínico.

Farmacolog ía in vitro. Se realizan estudios de farmacolog ía in vitro para medir el rendimiento de los análogos más prometedores en uno o más ensayos de permeabilidad intestinal, estabilidad metabólica y toxicidad. Los principales estudios de caracterización in vitro pueden incluir unión de la proteína plasmática, estabilidad del suero, plasma y sangre total en organismos humanos y modelo, permeabilidad intestinal, depuración intrínseca, inhibición del canal del gen relacionado con ether-a-go-go humano y la genotoxicidad.

Para cada análogo, se utilizará un método analítico basado en HPLC y/o en espectrometría de masas por HPLC para evaluar las concentraciones de fármaco y metabolito en varios sistemas de prueba. Si bien el método analítico específico es optimizado para cada molécula, la cromatografía de fase inversa se puede usar sola o combinada con espectrometría de masas cuadrupolo para caracterizar la identidad y pureza de varias de las moléculas principales. Inicialmente, se evaluarán la estabilidad del fármaco en el tiempo en concentraciones cada vez mayores de suero, plasma y sangre total de especies de mamíferos (tales como, ratón, macaco cinomolgo y humanos) mediante HPLC, y se determinará una semivida.

En algunos casos, los metabolitos prominentes están caracterizados por espectrometría de masas. La unión de la proteína plasmática humana se evaluará mediante análisis de división usando diálisis por equilibrio. Para el modelado de la permeabilidad intestinal, se evalúa el flujo apical a basolateral en la línea celular epitelial humana TC7. Se calcula la depuración hepática para un subconjunto de los análogos más prometedores midiendo el índice de desaparición del compuesto original durante la incubación en microsomas de hígado humano. Tal como se indica anteriormente, los metabolitos específicos se pueden aislar y caracterizar.

Toxicolog ía in vitro. Esta descripción de ensayos toxicológicos tiene fines ilustrativos y no restrictivos. Los estudios de toxicolog ía in vitro se llevan a cabo para evaluar la toxicidad cardíaca y genética potencial de los análogos principales. Se puede utilizar el pinzamiento zonal automático para evaluar el impacto de cada compuesto sobre las corrientes del canal hERG en una línea celular de ovario de hámster chino (CHO) recombinante que expresa transgénicamente el gen Kv1 1 .1 humano. Las concentraciones hasta el mínimo de 30 veces la máxima concentración en suero o el límite de solubilidad de cada compuesto se evalúan para determinar una IC50 para la molécula en el canal hERG.

Se evalúa un subconjunto de compuestos en un intervalo de concentraciones para determinar su capacidad de inducir la reversión de la mutación en cepas de Salmonella typhimurium TA98 y TA100 o para fomentar la formación de micronúcleos en células CHO en cultivo.

Ejemplo 8. Actividad antiviral de compuestos KI N 100 Acción antiviral en modelos de infección en cultivo celular. Los compuestos KI N 1 00 descritos en la presente presentan actividad eficaz contra el genotipo HCV 2a y contra la cepa del virus de la influenza WSN . Para caracterizar adicionalmente la amplitud de la actividad antivi ral de m o lécu las opti m izadas, los modelos de i nfección de cu ltivo celular se utilizan para analizar distintos genotipos de HCV y cepas del virus de la influenza . Además, los compuestos optimizados se analizan para determinar la actividad contra el virus del Nilo Occidental (WNV), una preocupación emergente de salud pública. Los estudios incluyen tratar las células con el compuesto 2-1 2 h antes de la infección o tratar las células 8 h luego de la infección (Tabla 3). Se evalúan la producción de virus y la expresión de ISG celular en un período de tiempo para analizar los efectos antivirales de los compuestos representativos de las principales clases estructurales. Se utiliza el tratamiento con IFNp como control positivo.

La producción de virus se mide mediante ensayo de formación de focos o placas. Un ejemplo del ensayo de formación de focos se muestra en la Figura 2, que es un gráfico del ensayo de formación de focos de HCV. Se pretrataron cél ulas Huh7 con KI N 1 00 durante 24 horas y se infectaron con HCV2a a una MOI de 0.5 durante 48 horas. Se detectaron las proteínas de HCV mediante tinción inm unofluorescente con suero específico del virus y los focos se normalizaron a cél u las de control negativo que no se trataron con el fármaco (igual a 1 ) .

En experimentos paralelos, la expresión de ARN viral y de ISG cel ular se midieron mediante qPCR y ensayos de inmunotransferencia. Estos experimentos están diseñados para val idar las acciones de señal ización de com puestos durante la infección del virus, y para eevaluar las acciones del compuesto para d irigir los prog ramas antivirales inm unitarios innatos contra varias cepas de virus y para establecer las contramedidas del virus. Se llevan a cabo análisis de respuesta a la dosis detallados de cada compuesto en cada sistema de infección de virus para determinar la dosis eficaz que suprime la producción del virus en un 50% (IC50) y 90% ( I C90) , en comparación con las células de control para los modelos de infección antes y después del tratamiento.

Tabla 3. Sistemas virales y diseño de estudio para el análisis antiviral de los com puestos principales Ejem plo 9. Farmacocinética in vivo, propiedades toxicológicas y antivirales de compuestos KI N 1 00 optimizados en modelos animales precl ínicos Perfiles farmacocinético y de tolerabilidad precl ín icos. El perfil farmacocinético in vivo (PK) y la tolerabilidad/toxicidad de compuestos KI N 100 se evalúan para llevar a cabo la caracterización adicional de su actividad antiviral en modelos animales del virus de la influenza y de la infección WNV. El ratón es la especie de prueba eleg ida para estos estudios dado que es el modelo de roedor más comúnmente utilizado de WNV e influenza .

Una fase inversa, el método de detección de H PLC-MS/MS se utiliza para medir la concentración de cada compuesto en el plasma de ratón . Antes del perfil de PK, se desarrol la una form ulación oral e intravenosa inicial para cada compuesto usando un análisis de componente de formulación limitada enfocado mayormente en maximizar la solubilidad y estabilidad acuosa en una cantidad pequeña de condiciones de almacenamiento. Los métodos analíticos existentes conocidos en la técnica se utilizan para medir el rendimiento de la formulación. Se desarrolla una formulación para cada compuesto luego de una estrategia de tres niveles: ¦ Nivel 1 : ajuste de pH (pH 3 a 9), amortiguador y osmolalidad ¦ Nivel 2: adición de cosolventes de etanol (< 10%), propilenglicol (<40%) o polietilenglicol (PEG) 300 o 400 (<60%) para mejorar la solubilidad ¦ Nivel 3: adición de cosolventes de A -A/-dimetilacetamida (DMA, <30%), W-metil-2-pirrolidona (NMP, <20%) y/o dimetilsulfóxido (DMSO, <20%) o las ciclodextrinas (<40%), según sea necesario para mejorar adicionalmente la solubilidad.

Para los compuestos KIN 100 seleccionados que demuestran un rendimiento adecuado en estudios antivirales, mecanísticos, ADME y de toxicolog ía in vitro, se realiza un estudio preliminar de PK en ratones (Tabla 4). Cada compuesto se administra a los animales como una dosis individual mediante sonda oral (<10 ml/kg) o mediante inyección i.v. en bolo (<5 ml/kg) luego del ayuno durante la noche. Varios animales reciben la dosis para cada grupo de dosificación de modo que se puedan realizar muestras de 3 animales en cada momento específico. Las muestras de sangre se recogen del seno retro-orbital antes de la dosificación y a los 5, 1 5 y 30 min, y 1 , 2, 4, 8 y 24 h luego de la dosificación. Las concentraciones de fármaco se miden de acuerdo con el método bioanal ítico desarrollado anteriormente. Los parámetros farmacocinéticos se evalúan usando el software WinNonlin.

En función del rendi miento en estudios de PK exploratorios, los compuestos se evalúan ad icionalmente para determinar la tolerabilidad y toxicidad preliminar en ratones antes de su caracterización en modelos antivirales. Los estudios de tolerabilidad se llevan a cabo en dos etapas: una etapa de aumento de la dosis i n icial (hasta 5 dosis , cada una separada por un período de reposo farmacológ ico de 5 d ías) para determ inar la máxima dosis tolerable (MTD, Fase 1 ) , seg uida de siete administraciones diarias de MTD para evaluar la toxicidad aguda (Etapa 2) (Tabla 5) . Todas las dosis se administran por sonda oral. En un ejemplo de experimento, cinco animales de cada sexo se colocan en el estudio en la etapa 1 y 1 5 animales por sexo por g rupo de dosificación en la Etapa 2. Los momentos específicos del estudio incl uyen una determinación de MTD, examen . físico, observaciones cl ínicas, hematolog ía , q uím ica del suero y pesos corporales de an imales. La patología macroscópica se lleva a cabo en todos los animales ya sea que se encuentren muertos, someter a eutanasia en los ú ltimos momentos de vida , o en la finalización deseada del experimento. Los estudios de toxicolog ía son principalmente de naturaleza exploratoria y tienen la finalidad de identificar los criterios de valoración toxicologicos prematuros y provocar la selección de los candidatos principales para modelos animales antivirales.

Tabla 5. Estudios in vivo de las acciones del compuesto contra WNV y el virus de la influenza iteraciones de cada experimento Evaluación de las propiedades antivirales y protección inmunitaria usando modelos de infección de ratón. Los compuestos optimizados se seleccionan en función de las acciones de farmacocinética, antivirales e inmunitarias innatas del compuesto para la evaluación adicional en modelos de ratón preclínicos de la infección (Tabla 5). Se miden las acciones inmunitarias innatas de los compuestos y se evalúa su capacidad de proteger a los ratones de la exposición al WNV y al virus de la influenza. Para el modelo de infección de WNV, se lleva a cabo la infección subcutánea de la almohadilla plantar de ratones C57BI/6 de tipo salvaje con la cepa de WNV virulento de linaje 1 (WNV- TX) (29). Se lleva a cabo la instilación traqueal no quirúrgica para las cepas A/PR/8/34, A/WSN/33 y A/Udorn/72 del virus de la influenza.

Las cepas del virus de la influenza utilizadas para determinados experimentos son de dos subtipos distintos (H 1 N 1 y H3N2) y presentan diversas propiedades patogénicas y presentaciones clínicas en ratones C57BI/6 (30). Los ratones son controlados para determinar la morbilidad y la mortalidad en un intervalo de dosis de exposiciones (tal como, 10 a 1 ,000 pfu de virus) ya sea de manera individual o combinada con el tratamiento con el compuesto que comienza 1 2 h antes o 24 h después de la infección y que continúa diariamente dependiendo de la semivida determinada del fármaco en plasma. El análisis en respuesta a la dosis del compuesto y los estudios de la infección en el transcurso del tiempo se llevan a cabo para evaluar la eficacia del compuesto para: 1 ) limitar la carga viral del suero, 2) limitar la replicación y propagación del virus en órganos diana y 3) proteger contra la patogénesis viral.

Para WNV, además del suero, la carga viral se evalúa en los nodulos linfáticos, el bazo y el cerebro; para el virus de la influenza, la carga viral se evalúa en el corazón, el pulmón, el riñon , el hígado y el cerebro. La determinación de una dosis eficaz para la supresión al 50% y 90% de la carga viral en suero (ED50 y ED90) de cada compuesto después de una exposición estándar de 1 00 pfu de WNV-TX o 1 ,000 pfu de virus de la influenza está incorporada en el diseño de estos experimentos. Las cargas virales en suero se determinan mediante qPCR de ARN viral en intervalos de 24 h luego del tratamiento con el compuesto. Las acciones del compuesto se analizan en ED50 y ED90 para limitar la patogénesis de WNV en el sistema nervioso cerebral usando un modelo de neuroinvasión de WNV de la infección (31 ).

Los ratones se controlan para determinar la morbilidad y mortalidad luego de la exposición intracranial estándar de 1 pfu de WNV-MAD, ya sea solo o combinado con el tratamiento con compuesto comenzando 24 h luego de la infección.

Salvo que se indique lo contrario, se debe comprender que todas las cifras que expresan cantidades de ingredientes, propiedades como peso molecular, condiciones de reacción y otras utilizadas en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones se encuentran modificadas en todos los casos por el término "alrededor de". Por lo tanto, salvo que se indique lo contrario, los parámetros numéricos que se indican en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se busque obtener con la presente divulgación . En última instancia y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico se debería interpretar al menos en vista de la cantidad de dígitos significativos indicados y aplicando técnicas de redondeo normales.

Sin perjuicio de que los intervalos y los parámetros numéricos que indican el amplio alcance de la divulgación sean aproximaciones, los valores numéricos que se indican en los ejemplos específicos se indican de la forma más precisa posible. No obstante, todo valor numérico contiene inherentemente algunos errores que resultan necesariamente de la desviación estándar que se encuentra en sus mediciones de análisis respectivas.

Los términos "un", "una", "el" y referentes similares utilizados en el contexto de la descripción de la divulgación (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) se deben interpretar como abarcativos del singular y el plural, salvo que se indique lo contrario en la presente o que el contexto lo contradiga claramente. La mención de intervalos de valores en la presente pretende meramente servir como un método taquigráfico para referirse de forma individual a cada valor separado que se encuentra en el intervalo. Salvo que se indique lo contrario en la presente, cada valor individual se incorpora en la memoria descriptiva como si se mencionara de forma individual en la presente. Todos los métodos descritos en la presente se pueden realizar en cualquier orden adecuado, salvo que se indique lo contrario en la presente o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cualquiera de los ejemplos o las expresiones de ejemplo (por ej., "tal como") en la presente pretende meramente iluminar mejor la divulgación y no presenta una limitación al alcance de la divulgación reivindicada. No se debe interpretar ninguna expresión en la memoria descriptiva como una indicación de algún elemento no reivindicado esencial para la práctica de la divulgación.

Las agrupaciones de elementos o modalidades alternativos de la divulgación descritos en la presente no se deben interpretar como limitaciones. Cada miembro del grupo se puede referir y reivindicar de forma individual o en cualquier combinación con otros miembros del grupo u otros elementos que se encuentran en la presente. Se anticipa que uno o más miembros de un grupo se pueden incluir o eliminar de un grupo por razones de conveniencia y/o patentabilidad. Cuando ocurra una de tales inclusiones o eliminaciones, se considera que la memoria descriptiva contiene el grupo según se modificó y, por consiguiente, cumple con la descripción escrita de todos los grupos Markush utilizados en las reivindicaciones adjuntas.

Algunas modalidades de la presente divulgación se describen en la presente, incluyendo la mejor forma conocida por los inventores para realizar la divulgación. Por supuesto, variaciones de estas modalidades descritas serán evidentes para los expertos en la técnica tras la lectura de la descripción que antecede. El inventor espera que los expertos utilicen dichas variaciones según sea apropiado y pretende que la divulgación se practique de una forma diferente a la que se describe específicamente en la presente. Por consiguiente, la presente divulgación incluye todas las modificaciones y equivalentes de la materia mencionada en las reivindicaciones adjuntas a la presente según permita la ley correspondiente. Adicionalmente, toda combinación de los elementos descritos anteriormente en todas las variaciones posibles de los mismos se encuentra incluida en la divulgación, salvo que se indique lo contrario en la presente o que lo contradiga claramente el contexto.

Las modalidades específicas descritas en la presente se pueden limitar adicionalmente en las reivindicaciones usando los términos "que consiste en" o "que consiste esencialmente en". Cuando se utiliza en las reivindicaciones, ya sea como se presentan o en adiciones a modo de corrección, el término de transición "que consiste en" excluye todo elemento, etapa o ingrediente que no se especifique en las reivindicaciones. El término de transición "que consiste esencialmente en" limita el alcance de una reivindicación a los materiales o las etapas especificados y a aquellos que no afectan de forma material la o las características básicas y novedosas. Las modalidades de la divulgación que se reivindican de tal forma se describen y permiten inherente o expresamente en la presente.

Por último, se debe comprender que las modalidades de la divulgación descritas en la presente ilustran los principios de la presente divulgación. Otras modificaciones que se pueden utilizar se encuentran dentro del alance de la divulgación. Por consiguiente, a modo de ejemplo, pero de forma no taxativa, se pueden utilizar configuraciones alternativas de la presente divulgación de acuerdo con las enseñanzas que obran en la presente. Por consiguiente, la presente divulgación no se limita a las mismas precisamente como se muestra y describe.

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Claims (16)

REIVINDICACIONES

1 . Una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene una estructura donde cada uno de Ri y R2 se selecciona independientemente de H , alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH , CN , N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F,, 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR4, SOR4, S02R4, C02R4, COR4, CONR R5, CSNR4R5 o SOmNR4R5; R3 es H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo o alquilalquilo alquilalquilheterocíclico; cada uno de Z1 , Z2 y Z3 se selecciona independientemente de C, O, NH S, C=0, S=0 o S02; cada uno de Y1 , Y2 e Y3 se selecciona independientemente de C o N; W es alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, heteroalquilo, heteroalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, arialquilo o heteroarilalquilo; cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilaquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH, CN , N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F„: 1 -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol, isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina o isoquinolina; las l íneas pu nteada s representa n la presen cia o a u se ncia de u n enlace doble; m es 1 o 2; n es 0, 1 , 2 o 3; y o es 0, 1 , 2 o 3.

2. Una composición farmacéutica de la reivindicación 1 que comprende un compuesto de la reivindicación 1 o una sal, tautómero, isómero y/o profármaco farmacéuticamente aceptables de este.

3. Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde un R1 y un R3 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

4. Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde el compuesto tiene una estructura donde cada uno de R se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, acilo, NH2, OH , CN, N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, -amidino, 2-amidino, alquilcarbonilo, morfolino, piperidinilo, dioxanilo, piranilo, heteroarilo, furanilo, tiofenilo, tetrazol, tiazol, isotiazol, imidazol, tiadiazol, tiadiazol S-óxido, tiadiazol S,S-dióxido, pirazol, oxazol , isoxazol, piridinilo, pirimidinilo, quinolina, isoquinolina, SR4, SOR4, S02R4, C02R4, COR4, CONR R5, CSNR R5 o SOmNR R5; cada uno de X1 , X2, X3, X4 y X5 se selecciona independientemente de C o N; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; p es 0, 1 , 2, 3 o 4; y donde dos grupos R6 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

5. Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde el compuesto tiene una estructura donde cada R1, R2 y R6 se selecciona independientemente de H, alquilo inferior, arilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo, alcoxi, ariloxi, arilalcoxi, alcoxialquilarilo, alquilamino, arilamino, heteroalquilo, heteroarilo, heteroalquilo cíclico, NH2, OH, CN, N02, OCF3, CF3, Br, Cl, F, alquilcarbonilo o alquilsulfonilo; Z, es O, NH, NR o S; Z3 es O, NH, NR, S, C=0, S=0 o SOz; las líneas punteadas representan la presencia o ausencia de un enlace doble; y donde un grupo R1 y uno R3 o dos R6 se toman juntos para formar un grupo arilo, cicloalquilo, metilenodioxo, etilenodioxo, heteroarilo o heterocicloalquilo.

6. Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde el compuesto tiene una estructura

Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde el compuesto tiene una estructura que se selecciona del grupo q ue consiste en

8. Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde el compuesto tiene u na estructura que se selecciona del grupo q ue consiste en

9. Una composición farmacéutica de la reivindicación 2, donde el compuesto tiene una estructura que se selecciona del grupo que consiste en

1 0. Un método para tratar o prevenir una infección viral en un vertebrado que comprende administrar un compuesto de la reivindicación 2.

1 1 . Un método de la reivindicación 10 donde la infección viral es provocada por un virus de una o más de las siguientes familias: Arenaviridae, Astroviridae, Birnaviridae, Bromoviridae, Bunyaviridae, Caliciviridae, Closteroviridae, Comoviridae, Cystoviridae, Flaviviridae, Flexiviridae, Hepevirus, Leviviridae, Luteoviridae, Mononegavirales, virus del mosaico, Nidovirales, Nodaviridae, Orthomyxoviridae, Picobirnavirus, Picornaviridae, Potyviridae, Reoviridae, Retroviridae, Sequiviridae, Tenuivirus, Togaviridae, Tombusviridae, Totiviridae o Tymoviridáe.

1 2. Un método de la reivindicación 1 0 donde la infección viral es virus de la influenza, virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, coronavirus SARS, poliovirus, virus del sarampión, virus del dengue, virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis de San Luis, virus de Murray Valley, virus Powassan, virus Roció, virus de la encefalomielitis ovina, virus Banzi, virus llheus, virus Kokobera, virus Kunjin, virus Alfuy, virus de la diarrea bovina, virus de la enfermedad de la selva de Kyasanur o virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

1 3. Un método de la reivindicación 1 0, donde el compuesto tiene una estructura que se selecciona del grupo que consiste en

14. Un método de la reivindicación 10, donde dicha composición farmacéutica se administra como un adyuvante para una vacuna profiláctica o terapéutica.

15. Un método de la reivindicación 1 0, donde el compuesto tiene una estructura que se selecciona del grupo que consiste en ??

16. Un método de la reivindicación 14, donde dicho método comprende vacunar a un vertebrado administrándole adicionalmente un vacuna contra el virus de la influenza, virus de la hepatitis C, virus del Nilo Occidental, coronavirus SARS, poliovirus, virus del sarampión, virus del dengue, virus de la fiebre amarilla, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas, virus de la encefalitis japonesa, virus de la encefalitis de San Luis, virus de Murray Valley, virus Powassan, virus Roció, virus de la encefalomielitis ovina, virus Banzi, virus llheus, virus Kokobera, virus Kunjin, virus Alfuy, virus de la diarrea bovina, virus de la enfermedad de la selva de Kyasanur o virus de la inmunodeficiencia humana (VI H). 1 7. Un método para modular la respuesta inmunitaria innata en una célula eucariota que comprende administrar a la célula un compuesto de la reivindicación 2. 1 8. Un método de la reivindicación 1 7, donde el compuesto tiene una estructura que se selecciona del grupo que consiste en ??