MX2012011574A - Metodos y composiciones para inhibir la transmision del vih. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona métodos y composiciones útiles en el campo de la medicina, y particularmente en el tratamiento de infecciones virales. Más particularmente, la invención se refiere al uso de métodos y composiciones para la inhibición de la transmisión del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

Description

Métodos y composiciones para inhibir la transmisión del VIH Campo La presente invención proporciona métodos y composiciones útiles en el campo de la medicina, y particularmente en el tratamiento de infecciones virales. Más particularmente, la invención se refiere al uso de métodos y composiciones para la inhibición de la transmisión del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

Antecedentes El retrovirus denominado virus de inmunodeficiencia humana (VIH) es el agente etiológico de la enfermedad compleja que incluye la destrucción progresiva del sistema inmune (síndrome de inmunodeficiencia adquirida; SIDA) y la degeneración del sistema nervioso central y periférico. Desde su surgimiento como una amenaza para la salud pública a principios de la década de 1980, los esfuerzos por controlar o erradicar la enfermedad se centraron principalmente en las opciones para el tratamiento de la enfermedad después de que un individuo se infectó.

El uso de condones proporciona un grado sustancial de protección contra la transmisión de infecciones del VIH durante el acto sexual. Sin embargo, el uso del condón no es 100% eficaz contra la transmisión del VIH. Además, las parejas a menudo no usan condones. Una composición tópica que pudiera insertarse en la vagina o en el recto por una espuma, gel, esponja u otra forma, o que pudiera aplicarse tópicamente en los genitales masculinos, en muchos casos pudiera preferirse a los condones. Además, la eficacia profiláctica de los condones se puede mejorar mediante la inclusión de un microbicida adecuado en el lubricante recubierto en el exterior del condón. Sin embargo, hasta la fecha se ha hecho poco progreso para desarrollar una composición tópica eficaz contra la transmisión del VIH.

La mayor parte del trabajo para desarrollar composiciones tópicas profilácticas para el VIH se ha centrado en el uso de tensoactivos y amortiguadores, tales l como el producto sin receta nonoxinol-9. Los tensoactivos y detergentes rompen las membranas microbianas y del esperma por lisis y emulsificación. Las cremas y geles que contienen tensoactivos tienen la ventaja de ser muy amplios en su capacidad de matar, y por lo tanto pueden matar el virus del VIH y a los virus asociados con otras enfermedades de transmisión sexual. El uso de tensoactivos y amortiguadores, sin embargo, se limita sustancialmente por el daño que pueden causar a las membranas celulares. En la vagina, el nonoxinol-9 demostró adelgazar las paredes vaginales. En el recto, el nonoxinol-9 puede causar que se desprendan las paredes del recto.

Otras composiciones virucidas que se investigan para su uso como virucidas para el VIH incluyen carragenano y otros polisacáridos sulfatados grandes que se adhieren a las envolturas virales y posiblemente recubren las membranas celulares. Los inhibidores no-nucleósidos de la transcriptasa inversa del virus de la ¡nmunodeficiencia humana mostraron además tener algún efecto contra el VIH.

Los científicos informaron recientemente varios descubrimientos biológicos que mejoran nuestra comprensión de cómo el VIH entra en un organismo después del contacto sexual, lo cual puede conducir a sustancias profilácticas que interfieran con la interacción del VIH con las células objetivo. Estos descubrimientos giran generalmente alrededor de los linfocitos T, monocitos/macrófagos y células dendríticas, lo que sugiere que los receptores de las células CD4 están involucrados en el proceso de transmisión del virus. Por ejemplo, se piensa que el VIH se une estrechamente a la superficie de las células dendríticas, y cuando las células dendríticas presentan antígenos microbianos a las células T CD4+ auxiliadoras para estimular una respuesta inmune, las células dendríticas inadvertidamente transfieren el VIH a las células T CD4+, y así avanza la progresión de la infección.

En base a estos descubrimientos, algunos postularon que se pueden diseñar profilácticos que bloqueen la interacción entre el virus y el hospedero humano.

Sin embargo, los métodos que dependen de la interacción específica del VIH y las células humanas son limitados, porque la vía de infección no está enteramente definida y puede ser diversa. (Miller, C. J. y otros, "Genital Mucosal Transmission of Simian Immunodeficiency Virus: Animal Model for Heterosexual Transmission of Human Immunodeficiency Virus", J. Virol., 63, 4277-4284 (1989); Phillips, D. M. y Bourinbaiar, A. S., "Mechanism of VIH Spread from Lymphocytes to Epithelia", Virology, 186, 261 -273 (1992); Phillips, D. M., Tan, X., Pearce-Pratt, R. y Zacharopoulos, V. R., "An Assay for VIH Infection of Cultured Human Cervix-derived Cells", J. Virol. Methods, 52, 1 -13 (1995); Ho, J. L. y otros, "Neutrophils from Human Immunodeficiency Virus (HlV)-Seronegative Donors Induce VIH Replication from HlV-infected Patients Mononuclear Cells and Cell lines": An In Vitro Model of VIH Transmission Facilitated by Chlamydia Trachomatis., "J. Exp. Med., 181 , 1493-1505 (1995); y Braathen, L. R. & Mork, C. en "HIV infection of Skin Langerhans Cells", En: Skin Langerhans (dendritic) cells in virus ¡nfections and AIDS (ed. Becker, Y.) 131 -139 (Kluwer Academic Publishers, Boston, (1991 )).

Los esfuerzos de los investigadores para desarrollar una vacuna contra el VIH tampoco han sido todavía exitosos. Por ejemplo, la vacunación con VIS inactivado no protege a los monos verdes africanos contra la infección con el virus homólogo a pesar de una fuerte respuesta inmune a VIS.

Como resultará evidente a partir de la revisión anterior de la materia previa, existen aún problemas significativos a superar en la prevención y el tratamiento del VIH y de la transmisión del VIH. Es un aspecto de la presente invención superar o mejorar un problema de la materia anterior proporcionando composiciones y métodos para la inhibición de la transmisión del VIH.

La discusión de documentos, actas, materiales, dispositivos, artículos y similares se incluye en esta descripción únicamente con el propósito de proporcionar un contexto para la presente invención. No se sugiere o representa que cualquiera o todos estos materias formen parte de la base de la materia anterior o eran de conocimiento general común en el campo relevante a la presente invención como existieran antes de la fecha de prioridad de cada reivindicación de esta solicitud.

Compendio de la invención En un primer aspecto, la presente invención proporciona una composición para inhibir la transmisión del VIH que comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una proteína de la envoltura viral (Env) de un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o un fragmento de la misma. La proteína Env o fragmento de la misma puede ser cualquier proteína Env del VIH, sin embargo, preferentemente la proteína Env es gp140. Sin desear limitarse por la teoría, se propone que los anticuerpos policlonales actúan para unirse a los viriones de VIH, y de esta forma inhiben el movimiento del VIH a través de las células que forman la capa de barrera en las superficies de la mucosa. En una modalidad, la composición es capaz de prevenir la infección por VIH de una célula.

En una modalidad, la proteína Env o el fragmento de la misma es un oligómero de gp140. El oligómero puede comprender trímeros, dímeros y monómeros de gp140. Los oligomeros pueden purificarse a partir del sobrenadante de células HeLa y 293 transducidas, por ejemplo, por cromatografía de afinidad a lectina de lenteja y filtración en gel. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser una proteína de la envoltura viral (Env) o fragmento de la misma de la cepa de VIH de subtipo A, subtipo B o subtipo C.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína Env de un subtipo heterólogo de VIH o una cepa heteróloga de VIH.

En una modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos que se producen contra la gp140 de Subtipo B que son capaces de unirse a Iagp140 heteróloga de un Subtipo A, Subtipo B o Subtipo C.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son anticuerpos neutralizantes.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalente funcional del mismo puede producirse por inmunización de un animal con una proteína de la envoltura viral del VIH (Env) o un fragmento de la misma. El animal puede inmunizarse con gp140, gp140 recombinante o gp140 oligomérica. La gp140 recombinante puede no derivarse del cultivo del virión. El animal puede inmunizarse con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma y un adyuvante. En una modalidad, el adyuvante es una emulsión de agua en aceite.

El animal se puede inmunizar con la gp140 de Subtipo B y se producen anticuerpos que son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de un Subtipo A, Subtipo B o Subtipo C.

El animal se puede inmunizar con la gp140 de Subtipo B y los anticuerpos producidos competir con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

El animal se puede inmunizar con la gp 40 de Subtipo B y los anticuerpos producidos son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de Subtipo A, Subtipo B o Subtipo C, donde los anticuerpos producidos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalente funcional del mismo puede estar presente en, u obtenerse de un huevo aviar o estar presente en, u obtenerse de calostro hiperinmune o leche hiperinmune de un animal. El animal puede ser una vaca.

La composición puede formularse para la administración tópica, y en ciertas modalidades, la composición se formula para la administración vaginal o rectal.

La composición puede formularse como un gel, o formularse como una formulación tópica en crema, pomada, loción o espuma.

En ciertas modalidades, la composición puede comprender además un excipiente farmacéuticamente aceptable, un lubricante, o un agente antiviral.

La presente invención proporciona además el uso de una composición de la presente invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de la transmisión del VIH.

La presente invención proporciona además un método para preparar una composición para inhibir la transmisión del VIH que comprende inmunizar un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma, y obtener calostro hiperinmune del animal inmunizado.

La presente invención proporciona además una composición para inhibir la transmisión de VIH preparada por el método que comprende inmunizar un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma, y obtener leche hiperinmune del animal inmunizado.

La presente invención proporciona además un método para inhibir la transmisión del VIH, que comprende: formar calostro hiperinmune o leche hiperinmune por inmunización de vacas; y administrar el calostro hiperinmune o la leche hiperinmune a un sujeto, en donde la etapa de inmunizar a las vacas para producir calostro hiperinmune o leche hiperinmune comprende la vacunación con una proteína de la envoltura viral (Env) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), o un fragmento de la misma. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser cualquier proteína Env del VIH, sin embargo preferentemente la proteína Env es gp140.

Además se proporciona un método para inhibir la transmisión de VIH que comprende administrar anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una proteína de la envoltura viral (Env) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o un fragmento de la misma a un sujeto. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser cualquier proteína Env del VIH, sin embargo, preferentemente la proteína Env es gp140.

En una modalidad, la proteína Env o el fragmento de la misma es un oligómero de gp140. El oligómero puede comprender trímeros, dímeros y monómeros de gp140. Los oligómeros pueden purificarse a partir de sobrenadante de células HeLa y 293 transducidas, por ejemplo, por cromatografía de afinidad a lectina de lenteja y filtración en gel. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser una proteína de envoltura viral (Env) de una cepa de VIH de Subtipo A, subtipo B o subtipo C o un fragmento de la misma.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína Env de un subtipo heterólogo de VIH o una cepa heteróloga de VIH.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalentes funcionales de los mismos se pueden producir pór inmunización de un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma. El animal se puede inmunizar con gp140, gp140 recombinante o gp140 oligomérica. La gp140 recombinante puede no derivarse del cultivo del virión. El animal se puede inmunizar con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma y un adyuvante. En una modalidad, el adyuvante es una emulsión de agua en aceite.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalentes funcionales de los mismos pueden estar presente en, u obtenerse de un huevo aviar, o estar presente en, u obtenerse de calostro hiperinmune o leche hiperinmune de un animal. El animal puede ser una vaca.

La composición puede formularse para la administración tópica, y en ciertas modalidades, la composición se formula para la administración vaginal o rectal.

La composición puede formularse como un gel, o formulase como una formulación tópica en crema, pomada, loción o espuma.

Breve descripción de las figuras La Figura 1 ilustra un esquema de vacunación de gp140.

La Figura 2 ilustra un esquema de vacunación degp140.

La Figura 3 muestra la IgG de suero y calostro que se une a la gp140 Env de subtipo A, B y C.

La Figura 4 muestra que la IgG de calostro purificada a partir de vacas no-embarazadas conserva la unión a gp140 Env y muestra actividad de unión heteróioga.

La Figura 5 muestra que la IgG bovina bloquea la unión del Ac monoclonal b12 al sitio de unión a CD4 de gp140.

La Figura 6 muestra que el calostro de vacas embarazadas vacunadas con gp140 de subtipo A/B/C y vacas no-embarazadas vacunadas con gp140 de subtipo B tiene una amplia actividad neutralizante heteróioga.

La figura 7 muestra que la IgG purificada de calostro tiene actividad neutralizante.

Descripción detallada de la invención La presente invención se basa en parte en el descubrimiento de que se pueden generar anticuerpos del calostro altamente específicos que se unen a la proteína Env del VIH mediante la vacunación de animales embarazados. En consecuencia, en un primer aspecto la presente invención proporciona una composición para inhibir la transmisión de VIH que comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una proteína de la envoltura viral (Env) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o un fragmento de la misma. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser cualquier proteína Env del VIH, sin embargo, preferentemente la proteína Env es gp140. Sin desear estar limitados por la teoría, se propone que los anticuerpos policlonales actúan al unirse a los viriones del VIH, lo cual inhibe el movimiento del VIH a través de células que forman la capa de barrera en las superficies mucosas. En una modalidad, la composición es capaz de inhibir o prevenir la infección del VIH de una célula. En otra modalidad, la composición es capaz de inhibir o prevenir el movimiento del VIH a través de las células epiteliales, tales como las que forman la capa de barrera en las superficies de la mucosa. Este enfoque para la formulación de composiciones y métodos para inhibir la transmisión del VIH se distingue de los enfoques de la materia anterior, y es en efecto contrario a la enseñanza general de la materia anterior previa de la presente invención.

El término "inhibición de la transmisión", como se usa en la presente, se refiere generalmente a la inhibición completa y además a la inhibición parcial de la transmisión del VIH. La inhibición completa indica que el virus del VIH es completamente incapaz de infectar y/o replicarse y/o infectar adicionalmente a otras células con éxito. Esto se puede determinar en un número de formas, a nivel celular y/o de todo el organismo, por el médico experto. Tal determinación es por la incapacidad para obtener VIH infecciosos de una célula hospedera. Otra determinación de este tipo es por la incapacidad para determinar que el VIH ha entrado en la célula hospedera. A nivel de todo el organismo, se pueden usar métodos estándar para ensayar la infección por el VIH (por ejemplo, el ensayo de anticuerpos contra el VIH en el individuo). La inhibición parcial se refiere a una reducción medióle, estadísticamente significativa en la capacidad del VIH para infectar y/o replicarse y/o infectar más otras células, en comparación con un control adecuado, que no se sometió a los terapéuticos descritos en la presente. Un ejemplo sería un requerimiento de mayores niveles de exposición o un periodo más largo de exposición al VIH para una infección exitosa.

El término "capaz de unirse" como se usa en la presente, generalmente se refiere a un anticuerpo que se une a una gp140 de un subtipo de VIH, tal como un anticuerpo descrito en la presente. La unión a una gp140 de un subtipo de VIH se puede demostrar como se describe en los Ejemplos más abajo. En modalidades útiles, los anticuerpos o fragmentos de los mismos se unen a una gp140 de una cepa o subtipo de VIH, contra la cual se levantaron los anticuerpos, y además se unen a una gp140 de una cepa o subtipo de VIH, contra la cual no se levantaron los anticuerpos. En otras modalidades útiles, los anticuerpos o fragmentos de los mismos se unen a una gp140 del subtipo de VIH, contra la cual se produjeron los anticuerpos, y además se unen a una gp140 de un subtipo de VIH heterólogo.

El término "subtipo(s)", como se usa en la presente, abarca generalmente los subtipos o formas recombinantes del VIH.

El trabajo previo indicó que hay una necesidad de proporcionar composiciones mejoradas que proporcionen protección contra el VIH y/o inhiban la transmisión del VIH. En particular, hay una necesidad de proporcionar composiciones que protejan contra el VIH, sin comprometer la integridad de la capa superficial de protección innata de la vagina o el recto. El trabajo hacia este fin se ha centrado en la inmunidad activa (por ejemplo, vacunas), sin embargo cuando se usan anticuerpos contra el VIH en composiciones contra el VIH, estos anticuerpos se hacen usando el antígeno del VIH lo que dificultaría conseguir la aprobación regulatoria para su uso debido al riesgo de infección y la dificultad de fabricación en volumen. En contraste con las enseñanzas de la materia anterior, la presente invención se basa, en parte, en proporcionar una hetero-inmunidad pasiva, donde los anticuerpos preparados en un organismo particular se usan para proteger a otro organismo, generalmente de una especie diferente.

El ectodominio Env se conoce como gp140, el cual contiene gp120 y gp41 truncado (que carece de los dominios de transmembrana y la cola citoplásmica). En una modalidad, la proteína Env o el fragmento de la misma es un oligómero de gp140. El oligómero puede comprender trímeros, dímeros y monómeros de gp140. Los oligómeros pueden purificarse a partir del sobrenadante de células transducidas (por ejemplo, HeLa y 293), por ejemplo por cromatografía de afinidad a lectina de lenteja y filtración en gel. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser una proteína de la envoltura viral (Env) de una cepa del VIH de subtipo A, subtipo B o subtipo C o un fragmento de la misma.

En una solicitud relacionada (PCT/AU2009/001218, incorporada en la presente como referencia), los solicitantes demostraron que las cepas de VIH-1 tienen diferencias en sus Env.

En una modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a la gp140 de un subtipo A, subtipo B, o Subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a la gp140 de un subtipo A y un subtipo B.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a la gp140 de un subtipo B y un subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a la gp140 de un subtipo A y un subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a la gp140 de un subtipo A, un subtipo B y un Subtipo C.

En una modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos producidos contra la gp140 de Subtipo B que son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de un subtipo A, subtipo B o subtipo C.

En una modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos que compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos producidos contra la gp140 de Subtipo B que son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de subtipo A, subtipo B o subtipo C, en donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

Sorprendentemente, los solicitantes demostraron que el calostro, y la IgG purificada a partir de calostro de vacas vacunadas con oligómeros de gp140 Env del VIH de un subtipo pueden unirse a la gp140 Env de VIH de otro subtipo, a pesar de la diversidad en la secuencia y la glicosilación de Env entre cepas de VIH. Además, los solicitantes demostraron que el calostro, y la IgG purificada a partir de calostro de vacas vacunadas con oligómeros de la gp140 Env del VIH de un subtipo pueden unirse a gp140 y neutralizar el VIH de otro subtipo, a pesar de la diversidad en la secuencia y glicosilación de Env entre las cepas de VIH.

Las vacas lecheras se vacunaron en el segundo trimestre de embarazo con Env (gp140) del VIH-1 oligomérica soluble de alta calidad para producir calostro que contiene altos niveles de anticuerpos policlonales neutralizantes específicos por Env de VIH-1 para usar como una composición inhibitoria de la transmisión del VIH. Los presentes inventores mostraron que la IgG anti- Env de VIH sinergiza con los componentes antivirales intrínsecos en el calostro bovino para neutralizar agresivamente el VIH-1.

En consecuencia, la presente invención proporciona una ventaja para la producción de cantidades en kilogramo de IgG bovina. Sin desear estar limitados por la teoría, se propone que las composiciones de la presente invención tienen una potente capacidad de neutralizar el VIH y por lo tanto lo hace no infeccioso para células susceptibles in vitro.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son anticuerpos neutralizantes.

El término "neutralización" como se usa en la presente, se refiere generalmente a anticuerpos o fragmentos de los mismos que son capaces de unirse a la molécula de la invención e impedir su actividad biológica. El término abarca los anticuerpos o fragmentos de los mismos que impiden que un virus, por ejemplo, el VIH, infecte una célula, por ejemplo, mediante el bloqueo de la unión de gp140 al CD4 en una célula.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalente funcional del mismo se puede producir por inmunización de un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma.

El animal se puede inmunizar con gp140, gp140 recombinante o gp140 oligomérica.

El animal se puede inmunizar con una gp140 de subtipo B y los anticuerpos producidos son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de subtipo A, subtipo B o subtipo C.

El animal se puede inmunizar con la gp140 de subtipo B y los anticuerpos producidos son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de subtipo A, subtipo B o subtipo C.

El animal se puede inmunizar con la gp140de Subtipo B y los anticuerpos producidos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

El animal se puede inmunizar con la gp140 de Subtipo B y los anticuerpos producidos son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de subtipo A, subtipo B o subtipo C, donde los anticuerpos producidos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos producidos son anticuerpos neutralizantes.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los producidos bloquean la unión de gp140 a CD4 en una célula.

En una modalidad, la gp140 recombinante puede no derivarse del cultivo del virión.

Un polipéptido de Env que es adecuado para generar una respuesta inmune es una polipéptido de Env que tiene al menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% de identidad de aminoácidos con gp140. gp140 contiene un fragmento de una gp120 de una cepa dada de VIH y un fragmento de gp41 de la misma cepa de VIH, donde el fragmento soluble de gp41 carece del dominio transmembrana. Los polipéptidos de gp140 capaces de formar estructuras oligoméricas pueden expresarse a partir de una construcción. En consecuencia, se proporciona una secuencia de nucleotidos que codifica para un polipéptido de gp140, y una construcción de expresión que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica para un polipéptido de gp140. La construcción de expresión puede ser una para uso transitorio o ser más adecuada para la transfección estable y el mantenimiento dentro de una célula objetivo, ya sea como una construcción replicante episomal o una forma integrada.

En una modalidad, se proporciona un polipéptido de gp140, y una construcción de expresión que expresa un polipéptido de gp140. En otra modalidad, se proporciona un polipéptido glicosilado de gp140, que se fabrica o se expresa en un sistema de expresión que añade la glicosilación celular nativa.

La gp140 recombinante se puede producir usando pseudovirus que portan Env de diferentes subtipos/cepas usando los vectores de expresión que se incluyen en la Tabla 1.

La gp140 se puede purificar por un número de medios diferentes. Por ejemplo, los sobrenadantes del cultivo de tejido que contiene la gp140 se pueden pasar por columnas de afinidad de lectina de lenteja, las cuales median la captura de las glicoproteínas, incluyendo la gp140, por medio de la afinidad de la lectina de lenteja por los carbohidratos. Después del lavado, la gp140 se eluye competitivamente de la columna mediante la adición de 0.5 M de metil-D-manopiranósido (Sigma). Los rendimientos obtenidos con este sistema para otras cepas de gp140 varían entre 0.4 y 1.0 miligramos por 100 mililitros de sobrenadante de cultivo de tejido. Después, el eluato puede concentrarse y purificar se adicionalmente por filtración en gel en Superdex 200. La gp140 se purifica a partir de los sobrenadantes del cultivo en una forma oligomérica.

Los oligómeros de gp140 Env solubles se prepararon de cepas de VIH-1 de subtipo A, B, y C de células HeLa y/o 293T y se purifican por afinidad a la lectlna de lenteja y cromatografía de filtración en gel.

Cuatro vacas (dos embarazadas en el segundo semestre y dos inicialmente no embarazadas) se vacunaron con 100 pg del oligómero de gp140 Envdel VIH-1 formulado con adyuvante Montanide. Dos grupos de dos vacas (una embarazada y una no embarazada) se vacunaron con gp140 Env de subtipo B (AD8) solamente o con cantidades iguales (33,33pg) de subtipo A, B y C (UG8, AD8 y MW) (denominado "trimix"). Las cuatro vacas recibieron al menos tres vacunaciones, mientras que la última vacuna se administró cuatro semanas antes de dar a luz. Las cuatro vacas fueron seroconvertidas en nueve semanas. Los títulos finales recíprocos de IgG en suero fueron de hasta 1 x102,5 para vacas embarazadas y hasta 1 x105 para las vacas no embarazadas determinados por un nuevo ELISA específico establecido para anti-lgG bovina gp140 Env de VIH-1. El bajo título de IgG sérica esperado en vacas embarazadas se explicó por el bombeo de los anticuerpos IgG del suero en el calostro aproximadamente cuatro semanas antes de dar a luz.

El calostro bovino inmune al VIH se recogió y pasteurizó post-parto a partir de todas las vacas con vacunación en el embarazo lo que resultó en respuestas relativamente bajas con títulos recíprocos de lgG<102 (vacunados con subtipo B) y 1 x 103 5 (vacunados con trimix). Los títulos recíprocos de IgG del calostro de las vacas vacunadas antes del embarazo fueronlO5 (vacunadas con subtipo B) y 104 5 (vacunados con trimix). El análisis de transferencia de tipo Western confirmó que la IgG del calostro de las cuatro vacas fue específica contra la gp140 Env VIH-1. El calostro no fraccionado se probó para la actividad neutralizante en un ensayo de virus pseudotipado reportero - Env VIH-1.

En resumen, el ensayo de virus pseudotipado reportero - Env VIH-1detecta la presencia de anticuerpos neutralizantes del virus contra la proteína de la envoltura del VIH-1. Las partículas de pseudovirus reportero EGFP que expresan la Env de VIH-1 derivada de cepas/subtipos de elección se usan para infectar células objetivo de una manera dependiente de Env. En un ensayo, las partículas de pseudovirus reportero se incuban durante 1 hora antes de la adición de las células objetivo (Cf2th-CD4/CCR5/CXCR4; células CF2) a 2x10 /pocillo en una placa de 96 pocilios. Después de una inoculación por centrifugación de 2 horas a 1200 x g a temperatura ambiente, los pseudovirus y el anticuerpo residuales se eliminaron y se añadió medio fresco a las células. Dos días más tarde las células objetivo se analizaron por la expresión de EGFP por FACS. En presencia de calostro o IgG de calostro producido contra los oligómeros solubles de gp140 Env de VIH-1 , el grado de reducción en el nivel de infección se determinó midiendo la reducción del porcentaje de células EGFP positivas. El porcentaje de neutralización representa una relación entre los niveles de infección observados en sueros de ratones antes de la vacunación (pre-sangrado) y el suero de los ratones dos semanas después de la vacunación 3 de re-estimulación con proteína.

Se probaron los virus pseudotipos de Subtipo A/E, subtipo B y subtipo C que incluye el panel de referencia de NIH para los virus de subtipo B y C (total n = 27) y se compararon con el calostro bovino no-inmune que ya tiene actividad intrínseca de bloqueo de la infección debido a la lactoferrina y otros péptidos bioactivos. El calostro no fraccionado de la vaca trimix vacunada durante el embarazo mostró una neutralización alta de hasta 50% para todos los pseudovirus de subtipo B (n = 15), así como para la mayoría de los pseudovirus de subtipo C (n = 11) y subtipo A / E (n=1) a una dilución de 1 :16. La primera vaca vacunada con subtipo B fue una respondedora baja pero ambas vacas vacunadas antes del embarazo y que tuvieron sus terneros recientemente respondieron bien. Hasta este momento, se observó una amplia neutralización para la vaca vacunada con el subtipo B que mostró 50 a 80% de neutralización para pseudovirus de subtipo B (n=12) y subtipo C (n=9) (dilución 1 :16) (Tabla I). Los Ac IgG del primer par de vacas se purificaron a partir del calostro y las IgG purificadas retuvieron la actividad neutralizante con hasta 50% de neutralización para las IgG de trimix en comparación con las IgG no inmunes a 500 pg/ml. Los resultados del perfil de neutralización de dos muestras de calostro bovino hiperinmune a gp140 Env de VIH contra pseudovirus de diferentes subtipos se muestra en la Tabla 1 (ver, Ejemplo 2). Este resultado es sorprendente ya que no se esperaba que los anticuerpos producidos contra la gp140 se unan y neutralicen fuertemente virus de diferentes subtipos, ya que hay diferencias significativas en los epitopos entre las gp140 de los diferentes subtipos.

Estos resultados apoyan fuertemente este método de producir altos niveles de anticuerpos neutralizantes y anticuerpos neutralizantes que pueden unirse a las cepas de VIH heterólogas. Por consiguiente, en una modalidad, los anticuerpos policlonalés o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína Env de un subtipo de VIH heterólogo o una cepa de VIH heteróloga.

En una modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonalés o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una gp140 de subtipo A, subtipo B o subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonalés o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una gp140 de subtipo A y subtipo B.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonalés o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una gp140 de subtipo B y subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una gp140 de subtipo A y subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una gp140 de subtipo A, subtipo B y Subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos producidos contra la gp140 de Subtipo B que son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de subtipo A, subtipo B o subtipo C.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos que compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

En otra modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son anticuerpos neutralizantes.

En otra modalidad, la composición comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos producidos contra la gp140 de Subtipo B que son capaces de unirse a una gp140 heteróloga de subtipo A, subtipo B o subtipo C, donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140 .

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalentes funcionales de los mismos pueden estar presentes en u obtenerse de un huevo aviar, o estar presentes en u obtenerse de calostro hiperinmune o leche hiperinmune de un animal. El animal puede ser una vaca.

Los métodos para generar suero, leche, calostro y similares hiperinmunes se conocen en la materia.

El método para generar el material hiperimmune puede comprender la etapa de purificar la proteína Env de otras moléculas potencialmente inmunogénicas. Por ejemplo, las proteínas Env pueden aislarse por métodos tales como la centrifugación a alta y baja velocidad, opcionalmente con el uso de gradientes formados usando sacarosa, percol, cesio y similares. Los métodos tales como la cromatografía de exclusión por tamaño, cromatografía de afinidad, cromatografía líquida de alto rendimiento, la cromatografía de fase inversa, y similares, son además útiles. Los procedimientos electroforéticos (tal como la electroforesis capilar), los métodos de filtración (tal como la ultrafiltración de flujo tangencial), los métodos de partición (tal como la precipitación de proteínas) son otros ejemplos de métodos útiles. Se pueden desarrollar líneas celulares crónicamente infectadas por la infección de las células, por ejemplo células 6D5 (un subclón de la línea celular Hut78) con el VIH. El análisis de radioinmunoprecipitación se usa para examinar que la línea celular secreta Env al medio. La proteína Env puede purificarse entonces a partir del medio condicionado libre de suero por cromatografía de afinidad usando los anticuerpos monoclonales de ratón para la proteína Env.

Para la producción de material hiperinmune, la proteína Env (purificada o no) se administra a un animal, típicamente por medio de inyección (por ejemplo, a través de las vía IM, subcutánea, intraperitoneal, o intravenosa). La proteína Env se puede combinar con un adyuvante para aumentar la respuesta inmune generada por el animal.

En consecuencia, el animal se puede inmunizar con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma y un adyuvante. En una modalidad, el adyuvante es una emulsión de agua en aceite.

El experto está familiarizado con muchos adyuvantes potencialmente útiles, tales como el adyuvante completo de Freund, alúmina, y escualeno. Los adyuvantes que se pueden usar en las composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a las composiciones de emulsiones de aceite adecuadas para usar como adyuvantes en la invención incluyen emulsiones de aceite-en-agua y emulsiones de agua-en-aceite, además se puede usar el adyuvante completo de Freund (CFA) y el adyuvante incompleto de Freund (IFA). Preferentemente, se pueden usar los adyuvantes de la marca Montanide (por ejemplo, MONTANIDE ISA 50V, MONTANIDE ISA 206, y MONTANIDE IMS 1312). Estos adyuvantes son composiciones de adyuvantes oleosos de oleato de manida y aceite mineral, o nanopartículas a base de agua en combinación con un inmunoestimulante soluble.

Los adyuvantes adecuados para su uso en la invención incluyen derivados bacterianos o microbianos tales como los derivados de lipopolisacárido enterobacteriano (LPS), derivados de lípidos A, oligonucleótidos inmunoestimulantes y toxinas de ribosilación de ADP y derivados detoxificados de los mismos.

El animal se puede dosificar con Env a intervalos durante un período de días, semanas o meses. A la conclusión del régimen de inmunización, el material hiperinmune (tal como la sangre, la leche o el calostro) se cosecha. Los anticuerpos en el material hiperinmune pueden cosecharse por cualquier método adecuado, lo que incluye cualquier método descrito anteriormente.

En una modalidad, la composición comprende anticuerpos del calostro o de un extracto de calostro, que se caracteriza además porque el calostro está enriquecido en anticuerpos anti-Env cuando se compara con el calostro obtenido sin vacunación.

En una modalidad del método, los anticuerpos policlonales se obtienen a partir de un material hiperinmune. El material hiperinmune está enriquecido cuando se compara con el material correspondiente en el cual el animal no se retó con el antígeno en cuestión.

El animal que se usó para producir el material hiperinmune puede ser cualquier animal adecuado, incluyendo un ser humano. Sin embargo, ya que la leche humana puede contener patógenos humanos potencialmente transmisibles, una forma del método proporciona que el anticuerpo no se derive de humano. En cualquier caso, se prefieren los animales que produzcan grandes cantidades de leche. En este sentido, los ungulados (y vacas en particular), son animales útiles para la generación de material hiperinmune.

En una modalidad del método, el "material hiperinmune" es un material derivado de lácteos hiperinmunes tales como la leche, en particular la leche con calostro (calostro) y similares, los cuales se enriquecen con anticuerpos o fragmentos de los mismos y los cuales se derivan de una fuente animal. El material lácteo hiperinmune es preferentemente el calostro hiperinmune.

En otra modalidad, el material hiperinmune se deriva de huevos de aves. Un subtipo de inmunoglobulina conocida como IgY puede extraerse fácilmente de la yema. Típicamente, la yema se desgrasa primero y se aisla la IgY por métodos idénticos o similares a aquellos que se usan para la leche desnatada.

El término "calostro", como se usa en la presente incluye leche con calostro, leche con calostro procesada tal como la leche con calostro procesada para eliminar parcial o completamente uno o más de los residuos de grasa, desechos celulares, lactosa y caseína; y leche con calostro o leche con calostro procesada que se secó, por ejemplo, mediante liofilización, secado por pulverización u otros métodos de secado conocidos en la materia. La leche con calostro se toma generalmente de un mamífero tal como una vaca en los cinco días después del parto. Preferentemente, el calostro de mamífero es calostro bovino que se conserva de los primeros 4 días post-parto, con mayor preferencia calostro bovino que se conserva de los primeros 2 días post-parto, aún con mayor preferencia calostro bovino que se conserva del primer día post-parto, y con la máxima preferencia calostro bovino que se conserva del primer ordeño post-parto.

Preferentemente, el calostro que se recoge de la vaca comprende al menos 4% de proteína total (% en peso), con mayor preferencia 5%, con mayor preferencia al menos 8%, con mayor preferencia al menos 10%.

Preferentemente, la relación de IgG a proteína total del calostro recogido de la vaca es de al menos 10%, con mayor preferencia 20%.

El material lácteo hiperinmune contiene preferentemente al menos 3 g por kilogramo de producto que es IgG dirigida contra Env, o una concentración molar equivalente del anticuerpo anti-Env. Por ejemplo, el material hiperinmune puede contener al menos 5g, al menos 10g, o al menos 15g de anticuerpo anti-Env por kg de material hiperinmune en base al peso seco de los componentes. El extremo superior del intervalo de concentración de anticuerpo dependerá de factores tales como la dosis, el estado de la enfermedad y la salud del paciente. El material hiperinmune puede contener, por ejemplo, no más de 80 g tal como no más de 60 g, no más de 50 gramos o no más de 40 g de anticuerpo anti-Env por kg de material hiperinmune en base al peso seco de los componentes.

En una modalidad del método, los anticuerpos policlonales se administran al sujeto como una composición. En una modalidad, la composición puede comprender un portador que se mezcla con el ligando antes de la administración, por ejemplo, mezclando una composición de calostro hiperinmune de vacas inmunizadas o uno o más componentes procesados del mismo con los alimentos convencionales y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. La relación de producto enriquecido con relación al material lácteo convencional de animales no vacunados puede ser, por ejemplo, de al menos 4, tal como al menos 10 en un ensayo de ELISA comparativo.

En otra modalidad una parte o la totalidad de los anticuerpos específicos para Env se extraen del calostro y se usan para preparar una composición para la administración.

En una modalidad, el material hiperinmune se une a Env derivada de una cepa de VIH-1 de subtipo A, subtipo B, o subtipo C. Preferentemente, el material hiperinmune se une al menos a dos de los anteriores, con mayor preferencia al menos a 3 de los subtipos. El grado de enriquecimiento en material seleccionado de los anticuerpos capaces de unirse a Env puede ser al menos 4 veces, por ejemplo, al menos 10 veces el nivel que se encuentra en los animales no vacunados correspondientes con respecto a cada una de las moléculas de Env según se determina por un ELISA estándar.

En una modalidad, los restos de bajo de peso molecular se eliminan sustancialmente del calostro o el extracto de calostro. Por sustancialmente eliminados se entiende que al menos el 75% y preferentemente el 90% de los restos de bajo peso molecular se eliminan.

En un ejemplo preferido de esta modalidad, al menos el 75% (tal como al menos el 90% o eliminación sustancialmente completa) de, restos de peso molecular inferior a 30 kDa se eliminan del calostro o del extracto de calostro. Preferentemente los restos de peso molecular inferior a 60 kDa se eliminan sustancialmente del calostro o extracto de calostro.

En una modalidad, el material hiperinmune comprende al material inmunogénico seleccionado a partir del anticuerpo y fragmentos de anticuerpo que se unen a Env. Preferentemente, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo policlonal o un fragmento de anticuerpo policlonal de origen bovino.

La composición puede contener además moléculas del factor de crecimiento que se encuentran normalmente en la leche o el calostro. Estos factores pueden producir un sinergismo con los anticuerpos anti-Env contenidos en la composición. Los factores de crecimiento ilustrativos incluyen TGF-beta-1 , TGF-beta-2, IGF-1 , IGF-2, EGF, FGF y PDGF.

La composición se puede formular para la administración tópica, y en ciertas modalidades, la composición se formula para la administración vaginal o rectal. La composición puede formularse como un gel, o se formula como una formulación tópica en crema, pomada, loción o espuma.

Las formulaciones tópicas de la presente invención se pueden usar para prevenir la infección por VIH en un ser humano, o para inhibir la transmisión del virus del VIH de un humano infectado a otro humano. Las formulaciones tópicas de la presente invención pueden inhibir el crecimiento o la replicación de un virus, tal como un retrovirus, en particular un virus de la inmunodeficiencia humana, específicamente el VIH-1 y VIH-2. Las formulaciones tópicas son útiles en el tratamiento profiláctico de humanos que están en riesgo de infección viral. Las formulaciones tópicas además se pueden usar para tratar objetos o materiales, tales como dispositivos anticonceptivos (por ejemplo condones o dispositivos intrauterinos), equipos médicos, materiales, o fluidos, incluyendo los fluidos biológicos, tales como sangre, productos sanguíneos y tejidos, para prevenir o inhibir la infección viral de un humano. Tales formulaciones tópicas son útiles además para prevenir la transmisión, tal como la transmisión sexual de infecciones virales, por ejemplo, VIH, la cual es la forma principal en la que se transmite el VIH a nivel mundial. Los métodos de prevención o inhibición o retardo de la transmisión de la infección viral, por ejemplo, la infección por VIH, de acuerdo con la presente invención, comprenden el tratamiento tópico vaginal, rectal, del pene u otro con una cantidad antiviral eficaz de una preparación tópica de la presente invención, sola o en combinación con otro compuesto antiviral, como se describe en la presente.

Las composiciones preferidas pueden adoptar diversas formas. Así, en una modalidad, la composición está en forma de una crema, loción, gel o espuma que se aplica a la piel o cavidad epitelial afectada, y preferentemente se extiende en toda la piel o superficie epitelial que se encuentra en riesgo de contacto con fluidos corporales. Tales formulaciones, que son adecuadas para la administración vaginal o rectal, pueden estar presentes en forma de suspensiones, soluciones o emulsiones acuosas u oleosas (formulaciones líquidas) que contienen, además del ingrediente activo, portadores tales como los que se conocen como apropiados en la materia. Por lubricantes "independientes" (es decir, lubricantes que no se pre-envasan con los condones), se prefieren generalmente geles y formulaciones acuosas similares, por diversas razones (tanto científicas como económicas) conocidas por los expertos en la materia. Estas formulaciones son útiles para proteger no sólo contra la transmisión sexual del VIH, sino también para prevenir la infección de un bebé durante el paso por el canal de nacimiento. Así, la administración vaginal puede tener lugar antes de la relación sexual, durante el acto sexual, e inmediatamente antes del nacimiento.

Un método de aplicación de un lubricante anti-viral a los genitales, para los fines descritos en la presente, consiste en extraer una pequeña cantidad (por ejemplo, una cucharadita, o varios mililitros) de un gel, crema, pomada, emulsión, o formulación similar de un tubo plástico o metálico, frasco o recipiente similar, o de un paquete plástico, metálico u otro sellado, que contiene una dosis única de dicha composición, y extender la composición sobre la superficie del pene inmediatamente antes del coito. Los métodos alternativos de colocación incluyen: (1 ) extender la composición sobre las superficies accesibles dentro de la vagina o el recto poco antes del coito, y (2) emplazar un condón, diafragma, o dispositivo similar, que ya se recubrió o se puso en contacto de otra manera con un lubricante anti-viral, sobre el pene o dentro de la vagina. En una modalidad preferida, cualquiera de estos métodos de propagación de un lubricante anti-viral sobre las superficies de los genitales hace que el lubricante cubra y permanezca en contacto con las superficies genitales y epiteliales durante todo el coito.

En otra modalidad, la presente invención implica la administración tópica de la formulación tópica al ano. La composición que se administra al ano es una espuma o gel, etc., adecuado, tales como los descritos anteriormente con respecto a la aplicación vaginal. En el caso de aplicación anal, puede preferirse usar un aplicador que distribuya la composición de manera sustancialmente uniforme en todo el ano. Por ejemplo, un aplicador apropiado es un tubo de 2.5 a 25 cm, preferentemente de 5 a 10 cm, de longitud que tiene agujeros distribuidos regularmente a lo largo de su longitud.

Cuando la composición es una crema vaginal o gel soluble en agua, se aplican adecuadamente 0.1 a 4 gramos, preferentemente aproximadamente 0.5 a 2 gramos. Cuando la composición es una espuma atomizada vaginal, se aplican adecuadamente desde 0.1 hasta 2 gramos, preferentemente de aproximadamente 0.5 a 1 g, de la espuma atomizada. Cuando la composición es una crema o gel anal, se aplican adecuadamente 0.1 a 4 gramos, preferentemente de aproximadamente 0.5 a 2 gramos de la crema o el gel. Cuando la composición es una espuma atomizada anal, se aplican adecuadamente desde 0.1 hasta 2 gramos, preferentemente de aproximadamente 0.5 a 1 gramos de la espuma atomizada.

Como una formulación vaginal, el ingrediente activo se puede usar en conjunto con un espermicida y se puede emplear con un condón, diafragma, esponja u otro dispositivo anticonceptivo. Los ejemplos de espermicidas adecuados incluyen nonilfenoxipolioxietilen glicol (nonoxinol 9), cloruro de bencetonio, y clorindanol. Adecuadamente, el pH de la composición es de 4.5 a 8.5. Las composiciones vaginales tienen preferentemente un pH de 4.5 a 6, con la máxima preferencia de aproximadamente 5.

Las formulaciones vaginales incluyen además supositorios (por ejemplo, cremas cubiertas de gel), comprimidos y películas. Los supositorios se pueden administrar por inserción con un aplicador usando los métodos bien conocidos en la materia.

Las formulaciones bucales típicas son cremas, pomadas, geles, comprimidos o películas que comprenden ingredientes que son seguros cuando se administran a través de la cavidad de la boca. Las formulaciones bucales además pueden comprender un enmascarador del sabor o agente saborizante.

Las presentes composiciones pueden estar además en forma de una composición de liberación en el tiempo. En esta modalidad, la composición se incorpora en una composición que liberará el compuesto activo a una velocidad que resultará en la concentración vaginal o anal que se describió anteriormente. Las composiciones de liberación en el tiempo se describen en Controlled Reléase of Pesticides and Pharmaceuticals, D. H. Lew, Ed., Plenum Press, Nueva York, 1981 ; y las patentes de Estados Unidos núms. 5,185,155; 5,248,700; 4,011 ,312; 3,887,699; 5,143,731 ; 3,640,741 ; 4,895,724; 4,795,642; Bodmeier y otros, Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 78 (1989); Amies, Journal of Pathology and Bacteriology, vol. 77 (1959); y Pfister y otros, Journal of Controlled Reléase, vol. 3, pp. 229-233 (1986), los que se incorporan en la presente como referencia.

Las presentes composiciones pueden estar además en la forma en que libera la composición en respuesta a algún evento, tal como coito vaginal o anal. Por ejemplo, la composición puede contener los anticuerpos anti_ent en vesículas o liposomas, que se rompen por la acción mecánica del coito. Las composiciones que comprenden liposomas se describen en la patente de Estados Unidos núm. 5,231 ,112 y Deamer y Uster, "Liposome Preparation: Methods and Mechanisms", en Liposomes, pp. 27-51 (1983); Sessa y otros, J. Biol. Chem., vol. 245, pp. 3295-3300 (1970); Journal of Pharmaceutics and Pharmacology, vol. 34, pp. 473-474 (1982); y Topics in Pharmaceutical Sciences, D. D. Breimer y P. Speiser, Eds., Elsevier, Nueva York, pp. 345-358 (1985), que se incorporan en la presente como referencia.

Además debe tenerse en cuenta que las presentes composiciones pueden estar asociadas con un dispositivo o artículo anticonceptivo, tal como un dispositivo de anillo vaginal, un dispositivo intrauterino (DIU), diafragma vaginal, esponja vaginal, pesario, condón, etc. En el caso de un DIU o diafragma, se pueden preferir las composiciones de liberación en el tiempo y/o de liberación mecánica, mientras que en el caso de los condones, se prefieren las composiciones de liberación mecánica.

Un sistema de entrega de fármaco al anillo vaginal adecuado para la liberación lenta de los anticuerpos anti-Env se describe en la patente de Estados Unidos núm. 5,989,581 , que se incorpora en la presente como referencia. Como se describe en la patente de Estados Unidos núm 5,989,581 , el anillo vaginal entrega dos activos para la anticoncepción. El sistema de liberación de fármaco descrito comprende al menos un compartimento que comprende un fármaco disuelto en un núcleo de polímero termoplástico y un revestimiento termoplástico que recubre el núcleo. Los polímeros termoplásticos preferidos para el núcleo y el revestimiento son copolímeros de etileno-acetato de vinilo. Como se entenderá por un experto en la materia, de acuerdo con la presente invención, el sistema de entrega descrito contiene anticuerpos anti-Env útiles para prevenir, inhibir o enlentecer la infección o la transmisión del VIH. En ciertas modalidades, dicho dispositivo de anillo vaginal puede contener además uno o más fármacos adicionales, por ejemplo, un agente anticonceptivo tal como un compuesto progestogénico esteroide y/o un compuesto estrogénico esferoide. En otras modalidades, el sistema de anillo vaginal que contiene anticuerpos anti-Env puede contener además o usarse en combinación con un estriol tópico, tal como Ovestin™, para mejorar la prevención de la infección o la transmisión del VIH a través del epitelio vaginal.

En otra modalidad, la presente invención proporciona artículos novedosos que son útiles para la prevención o retraso de la infección por VIH. En particular, los presentes artículos son aquellos que liberan anticuerpos anti-Env cuando se colocan sobre una parte apropiada del cuerpo o en una cavidad corporal apropiada. Así, el presente artículo puede ser un dispositivo de anillo vaginal tal como se describió anteriormente o un ILID. Los ILID adecuados se describen en las patentes de Estados Unidos núms. 3,888,975 y 4,283,325 que se incorporan en la presente como referencia.

El presente artículo puede ser una esponja intravaginal, que comprende y libera, de una manera controlada en el tiempo, los anticuerpos anti-Env. Las esponjas intravaginales se describen en las patentes de Estados Unidos núms. 3,916,898 y 4,360,013, las cuales se incorporan en la presente como referencia. El presente artículo puede ser además un dispensador vaginal, el cual libera los anticuerpos anti-Env. Los dispensadores vaginales se describen en la patente de Estados Unidos núm. 4,961,931 , que se incorpora en la presente como referencia.

En una modalidad, las composiciones se usan en conjunto con condones, para mejorar la eficacia en la reducción del riesgo de los condones y proporcionar la máxima protección para los usuarios. La composición se puede aplicar sobre los condones durante la fabricación, y adjuntarla dentro de paquetes convencionales de plástico o de papel de aluminio impermeables que contienen un condón por paquete, o se puede aplicar manualmente por un usuario al interior o el exterior de un condón, inmediatamente antes de su uso.

Como se usa en la presente, "condón" se refiere a un dispositivo de barrera el cual se usa para proporcionar una barrera física impermeable entre los genitales masculinos y femeninos durante el coito, y que se retira después del coito. Este término incluye los condones convencionales que cubren el pene; además incluye los llamados "condones femeninos", que se insertan en la cavidad vaginal antes del coito. El término "condón" no incluye los diafragmas, capuchas cervicales u otros dispositivos de barrera que cubren solamente una porción de las membranas epiteliales dentro de la cavidad vaginal. Preferentemente, los condones deben hacerse de látex o un material plástico sintético tal como el poliuretano, ya que éstos proporcionan un alto grado de protección contra los virus.

En otra modalidad, las composiciones se usan en conjunto con otras superficies posibles para la transmisión, tales como guantes, para proporcionar la máxima protección para los usuarios. La composición se puede aplicar sobre los guantes durante la fabricación, y adjuntarse dentro de paquetes convencionales de plástico o de papel de aluminio impermeables que contienen un par de guantes por paquete, o puede aplicarse manualmente por un usuario ya sea al interior o el exterior de un guante, inmediatamente antes de su uso.

En otra modalidad, la composición está en forma de una pildora intra-vaginal, una pildora intra-rectal, o un supositorio. El supositorio o pildora debe insertarse en la cavidad vaginal o rectal de una manera que permita que el supositorio o la pildora, a medida que se disuelve o erosiona, recubra las paredes vaginales o rectales con una capa profiláctica del agente anti-VIH.

Todavía en otra modalidad, la composición se aplica tópicamente por la liberación a partir de un dispositivo intravaginal. Los dispositivos tales como los anillos vaginales, esponjas vaginales, diafragmas, capuchas cervicales, condones femeninos, y similares, se pueden adaptar fácilmente para liberar la composición en la cavidad vaginal después de la inserción.

En ciertas modalidades, la composición puede comprender además un excipiente farmacéuticamente aceptable, un lubricante, o un agente antiviral.

Las composiciones que se usan en los métodos de esta invención pueden comprender además otros agentes activos, tal como otro agente para prevenir la infección del VIH, y agentes que protegen a los individuos de la concepción y de otras enfermedades de transmisión sexual. Asi, en otra modalidad, las composiciones que se usan en esta invención comprenden además un segundo agente anti-VIH, un virucida eficaz contra otras infecciones virales de VIH, y/o un espermicida.

En una modalidad particular, la composición contiene nonoxinol, un espermicida tensoactivo que se usa ampliamente. La composición resultante puede considerarse como una composición "bi-funcional", ya que tendría dos agentes activos que proporcionan dos funciones deseadas diferentes en un portador líquido relativamente inerte; el nonoxinol proporcionaría un agente espermicida anticonceptivo, y los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos proporcionarían propiedades anti-virales. Es probable que el nonoxinol cause algún nivel de irritación, al menos en algunos usuarios; esto es lamentable, pero es un efecto secundario bien conocido de los espermicidas surfactantes tales como el nonoxinol y el octoxinol, que atacan y destruyen las membranas de bicapa de lípidos que rodean las células de esperma y otras células de mamíferos.

Las composiciones que se usan en esta invención pueden contener además un lubricante que facilita la aplicación de la composición a las áreas deseadas de la piel y el tejido epitelial, y reduce la fricción durante la relación sexual. En el caso de una pastilla o supositorio, el lubricante se puede aplicar en el exterior de la forma de dosificación para facilitar la inserción.

Todavía en otra modalidad, la invención proporciona un dispositivo para inhibir la transmisión sexual del VIH, que comprende (a) una estructura de barrera para la inserción en la cavidad vaginal, y (b) una composición que comprende un anticuerpo policlonal de acuerdo con la presente invención. Como se mencionó anteriormente, los dispositivos preferidos que actúan como estructuras de barrera, y los cuales se pueden adaptar para aplicar el agente anti-VIH, incluyen la esponja vaginal, diafragma, tapón cervical o condón (masculino o femenino).

En las modalidades de crema o pomada de la presente invención, la formulación tópica comprende uno o más lubricantes. Los geles y espumas de la presente invención pueden incluir opcionalmente uno o más lubricantes.

Los ejemplos no limitantes de lubricantes útiles incluyen la cera de ésteres de cetilo, aceite vegetal hidrogenado, estearato de magnesio, estearato de metilo, aceite mineral, copolímero de polioxietileno-polioxipropileno, polietilenglicol, alcohol polivinílico, lauril sulfato de sodio, cera blanca, o mezclas de dos o más de los anteriores.

La cantidad de lubricante en la formulación tópica puede estar en el intervalo de aproximadamente 0 a aproximadamente 95 por ciento en peso. Las formulaciones típicas de crema y de pomada comprenden de 0.1 a 95 por ciento en peso de lubricante.

Las formulaciones tópicas pueden comprender uno o más adyuvantes, en donde el adyuvante es un agente antimicrobiano, antioxidante, humectante o emulsionante, o una mezcla de dos o más de los mismos. Los geles y espumas de la presente invención pueden incluir uno o más agentes antimicrobianos y opcionalmente pueden incluir uno o más de los antioxidantes, los humectantes y emulsionantes.

Los ejemplos no limitantes de agentes antimicrobianos útiles son alcohol bencílico, propilenglicol, propilparabeno, metilparabeno, o mezclas de dos o más de los mismos.

La cantidad de agentes antimicrobianos en la formulación tópica puede estar en el intervalo de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 10 por ciento en peso, y en algunas modalidades de aproximadamente 0.2 a aproximadamente 10 por ciento en peso, en base al peso total de la formulación tópica.

Los ejemplos no limitantes de antioxidantes útiles incluyen hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, edetato disódico o mezclas de dos o más de los mismos.

La cantidad de antioxidante en la formulación tópica puede estar en el intervalo de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1 por ciento en peso, y en algunas modalidades de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 0.1 por ciento en peso, en base al peso total de la formulación tópica.

Los ejemplos no limitantes de humectantes útiles incluyen etilenglicol, glicerina, sorbitol o mezclas de dos o más de los mismos.

La cantidad de humectante en la formulación tópica puede variar de aproximadamente 1 a aproximadamente 30 por ciento en peso, y en algunas modalidades de aproximadamente 2 a aproximadamente 20 por ciento en peso, en base al peso total de la formulación tópica.

Los ejemplos no limitantes de emulsionantes útiles incluyen polímeros de ácido acrílico (tales como espesantes de la clase carbómero, por ejemplo, Carbomer 934P, fabricado por Voveon, inc), éter de polioxietileno-10-estearilo, éter de polioxietileno-20-estearílo, alcohol cetoestearílico, alcohol cetílico, colesterol, estearato de diglicol, monoestearato de glicerilo, estearato de glicerilo, poligliceril-3 oleato, hidroxipropil celulosa, hidroxipropilmetil celulosa, lanolina, lauril éter de polioxietileno, metilcelulosa, estearato de polioxietileno, polisorbato, monoestearato de propilenglicol, ésteres de sorbitán, ácido esteárico o mezclas de dos o más de los mismos.

La cantidad de emulsionante en la formulación tópica puede estar en el intervalo de aproximadamente 1 a aproximadamente 40 por ciento en peso, y en algunas modalidades de aproximadamente 5 a aproximadamente 30 por ciento en peso, en base al peso total de la formulación tópica.

Las formulaciones en gel de la presente invención comprenden uno o más agentes gelificantes. Los ejemplos no limitantes de agentes gelificantes útiles incluyen los polímeros de ácido carboxílico que incluyen los polímeros de ácido acrílico reticulados con enlaces cruzados tales como alil éteres de sacarosa (por ejemplo, espesantes de clase carbómero), alcohol cetoestearílico, hidroximetilcelulosa, copolímero de polioxietileno-polioxipropileno, carboximetilcelulosa sódica, polivinilpirrolidona, o mezclas de dos o más de los mismos.

La cantidad de agente gelificante en la formulación del gel tópico puede estar en el intervalo de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 por ciento en peso, y en algunas modalidades de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 por ciento en peso, en base al peso total de la formulación tópica.

Las formulaciones de gel de la presente invención pueden comprender además uno o más alcalinizantes, por ejemplo, hidróxido de sodio, en una cantidad de menos de aproximadamente 2 por ciento en peso como activadores de la gelificación.

Las formulaciones pueden contener uno o más excipientes adicionales bien conocidos en la materia, por ejemplo, agua y un agente espesante tal como dióxido de silicio coloidal.

Las formulaciones de la presente invención se pueden administrar en combinación con uno o más de otros agentes antivirales u otros agentes útiles para tratar o prevenir la infección con el VIH o para inhibir la transmisión del VIH, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. En una forma del método, el sujeto está bajo tratamiento con un agente antirretroviral.

En algunas modalidades, el método comprende la co-administración de un agente antirretroviral, y particularmente un agente usado para el tratamiento de la infección por VIH tal como Zidovudina (AZT), Abacavir, Emtricitabina (FTC), Lamivudina (3TC), Didanosina (ddl), Estavudina (d4T), Zalcitabina (ddC), Nevirapina, Efavirenz, Delavirdina, Tenofovir, Enfuvirtida (T20), Maraviroc (CCR5), Lopinavir, Atazanavir, Fosamprenvir, Amprenavir, Saquinavir, Indinavir, Nelfinavir, Raltegravir y Elvitegravir.

Uno o más, preferentemente uno a cuatro, agentes antivirales útiles en la terapia ant¡-VIH-1 se pueden usar en combinación con al menos un (es decir, 1-4, preferentemente 1 ) anticuerpo anti-Env en una formulación de la presente invención. El agente o agentes antivirales pueden combinarse con el anticuerpo anti-Env en una forma de dosificación única, o el anticuerpo anti-Env y el agente o agentes antivirales se pueden administrar simultáneamente o secuencialmente como formas de dosificación separadas. Por ejemplo, la formulación del anticuerpo anti-Env se puede usar en un dispositivo de anillo vaginal o para recubrir el exterior de un condón para prevenir la transmisión de VIH en una pareja sexual no infectada mientras que la pareja sexual infectada por el VIH se somete a tratamiento sistémico con terapia antiviral. Los agentes antivirales contemplados para su uso en combinación con las formulaciones del anticuerpo anti-Env de la presente invención comprenden inhibidores nucleósidos y nucleótidos de la transcriptasa inversa, inhibidores no-nucleósidos de la transcriptasa inversa, inhibidores de proteasa y otros fármacos antivirales que se muestran más abajo no incluidos en estas clasificaciones. En particular, las combinaciones conocidas como HAART se contemplan para su uso en combinación con las formulaciones de anticuerpo anti-Env de la presente invención. [00169] El término "inhibidores nucleósido y nucleótido de la transcriptasa inversa" ("NRTI") como se usa en la presente significa nucleósidos y nucleótidos y análogos de los mismos que inhiben la actividad de la transcriptasa inversa del VIH-1 , la enzima que cataliza la conversión del ARN genómico viral del VIH -1 en ADN proviral del VIH-1.

Los NRTI típicos apropiados incluyen zidovudina (AZT) disponible bajo el nombre comercial RETROVIR de Glaxo-Wellcome Inc., Research Triangle, NC 27709; didanosina (ddl) disponible bajo la marca VIDEX de Bristol-Myers Squibb Co., Princeton, NJ 08543; zalcitabina (ddC) disponible bajo el nombre comercial HMD de Roche Pharmaceuticals, Nutley, NJ 071 10; estavudina (d4T) disponible bajo la marca ZERIT de Bristol-Myers Squibb Co., Princeton, NJ 08543; lamivudina (3TC) disponible bajo el nombre comercial EPIVIR de Glaxo-Smith Kline Triangle, NC 27709; abacavir (1592U89) descrito en WO96/30025 y disponible bajo la marca comercial de ZIAGEN de Glaxo-Wellcome Research Triangle, NC 27709; adefovir dipivoxil [bis (POM)-PMEA] disponible bajo el nombre comercial PREVON de Gilead Sciences, Foster City, CA 94404; lobucavir (BMS-180194), un inhibidor nucleósido de la transcriptasa inversa descrito en EP-0358154 y EP 0736533 y en desarrollo por Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543; BCH-10652, un inhibidor de la transcriptasa inversa (en forma de una mezcla racémica de BCH-10618 y BCH-10619) en desarrollo por Biochem Pharma, Laval, Quebec H7V, 4A7, Canadá; emitricitabina [(-)-FTC] con licencia de la Universidad de Emory bajo la patente de Estados Unidos núm. 5,814,639 de Emory Univ. y disponible de Gilead bajo el nombre comercial Emtrivia™; beta-L-FD4 (llamado además beta-L-D4C y denominado beta-L-2', 3'-dicleoxi-5-fluoro-citidina) autorizado por la Universidad de Yale a Vion Pharmaceuticals, New Haven CT 0651 1 ; DAPD, el nucleósido de purina, (-)-beta-D-2, 6,-diamino-purina dioxolano descrito en EP 0656778 y autorizado por la Universidad de Emory y la Universidad de Georgia a Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707; y lodenosina (FddA), 9 - (2,3-didesoxi-2-fluoro-b-D-treo-pentofuranosil) adenina, un inhibidor de la transcriptasa inversa basado en purina estable en ácido descubierto por el NIH y en desarrollo por U.S. Bioscience Inc., West Conshohoken, PA 19428. [00171] El término "inhibidores no-nucleósidos de la transcriptasa inversa" ("NNRTI11S) como se usa en la presente significa no-nucleósidos que inhiben la actividad de la transcriptasa inversa del VIH-1.

Los NNRTI típicos adecuados incluyen nevirapina (BI-RG-587) disponible bajo el nombre comercial VIRAMUNE de Boehringer Ingelheim, el fabricante para Roxane Laboratories, Columbus, OH 43216; delaviradina (BHAP, U-90152) disponible bajo el nombre comercial RESCRIPTOR de Pharmacia & Upjohn Co., Bridgewater NJ 08807; efavirenz (DMP-266) un benzoxazin-2-ona descrito en WO94/03440 y disponible bajo el nombre comercial SUSTIVA de Bristol Myers Squibb en los Estados Unidos y Merck en Europa; PNU-142721 , una furopiridina-tio-pirimida en desarrollo por Pharmacia and Upjohn, Bridgewater NJ 08807; AG-1549 (antes Shionogi # S-1 153); 5-(3,5-diclorofenil)-tio-4-¡sopropil-1-(4-piridil)metil-IH-imidazol-2-ilmetil carbonato descrito en WO 96/10019 y en desarrollo clínico por Agouron Pharmaceuticals, Inc., La Jolla CA 92037-1020; MKC-442 (1-(etoxi-metil)-5-(1-metiletil) -6-(fen¡lmetil)-(2,4 (1 H, 3H) -pirimidinadiona) descubierta por Mitsubishi Chemical Co. y en desarrollo por Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707; (+) - calanolida A (NSC-675451 ) y B, derivados de cumarina descritos en la patente de Estados Unidos núm. 5,489,697, con licencia a Med Chem Research, que co-desarrolla (+) calanolida A con Vita-lnvest como un producto administrare por vía oral; y etravirina (TMC-125, Intelence) comercializado por Tibotec. [00173] El término "inhibidor de proteasa" ("Pl") como se usa en la presente significa inhibidores de la proteasa de VIH-1 , una enzima necesaria para la escisión proteolítica de precursores de poliproteínas virales (por ejemplo, poliproteínas virales GAG y GAG Pol), en las proteínas funcionales individuales que se encuentran el VIH-1 infeccioso. Los inhibidores de la proteasa del VIH incluyen compuestos que tienen una estructura peptidomimética, alto peso molecular (7600 daltons) y carácter de péptido sustancial, por ejemplo CRIXIVAN (disponible de Merck), así como inhibidores de proteasa no peptídicos, por ejemplo, VIRACEPT (disponible de Agouron).

Los Pl típicos adecuados incluyen saquinavir (Ro 31-8959) disponible en cápsulas de gel duras bajo el nombre comercial INVIRASE y como cápsulas de gel suave con el nombre comercial FORTOVASE de Roche Pharmaceuticals, Nutley, NJ 071 10.1 199; ritonavir (ABT-538) disponible bajo el nombre comercial NORVIR de Abbott Laboratories, Abbott Park, IL 60064; indinavir (MK-639) disponible bajo el nombre comercial CRIXIVAN de Merck & Co., Inc., West Point, PA 19486-0004; nelfnavir (AG-1343) disponible bajo el nombre comercial VIRACEPT de Agouron Pharmaceuticals, Inc., La Jolla CA 92037-1020; amprenavir (141 W94), nombre comercial AGENERASE, un inhibidor de proteasa no peptídico en desarrollo por Vértex Pharmaceuticals, Inc., Cambridge, MA 02139-4211 y disponible de Glaxo -Wellcome, Research Triangle, NC en virtud de un programa de acceso expandido; lasinavir (BMS-234475) disponible de Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543 (originalmente descubierto por Novartis, Basilea, Suiza (CGP-6 755) DMP-450, una urea cíclica descubierta por Dupont y en desarrollo por Triangle Pharmaceuticals, BMS-2322623, un azapéptido en desarrollo por Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543, como Pl de segunda generación del VIH-1 ; ABT-378 en desarrollo por Abbott, Abbott Park, IL 60064, AG-1549 un carbamato de imidazol oralmente activo descubierto por Shionogi (Shionogi # S-1153) y en desarrollo por Agouron Pharmaceuticals, Inc., La Jolla CA 92037-1020; atazanavir; tipranavir y darunavir.

Otros agentes antivirales incluyen antagonistas de CXCR4, enfuvirtida, hidroxiurea, ribavirina, IL-2, IL-12, pentafusida y Proyecto Yissum núm. 11607. La hidroxiurea (Droxia), un inhibidor de reductasa de trifosfato de ribonucleósido, la enzima implicada en la activación de las células T, se descubrió en el NCI y está en desarrollo por Bristol-Myers Squibb; en estudios preclínicos, demostró tener un efecto sinérgico sobre la actividad de la didanosina y se estudió con estavudina. La IL-2 se describe en Ajinomoto EP-0142268, Takeda EP-0176299, y las patentes de Estados Unidos de Chiron núms. RE 33653, 4530787, 4569790, 4604377, 4748234, 4752585, y 4949314, y está disponible bajo el nombre comercial PROLEUKIN (aldesleucina) de Chiron Corp., Emeryville, CA 94608-2997 como un polvo liofilizado para infusión IV o administración SC tras la reconstitución y dilución con agua; una dosis de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 millones Ul/día, se prefiere se; con mayor preferencia una dosis de aproximadamente 15 millones Ul/día, se. La IL-12 se describe en W096/25171 y está disponible de Roche Pharmaceuticals, Nutley, NJ 07110-1199 y American Home Products, Madison, NJ 07940; se prefiere una dosis de aproximadamente 0.5 microgramos/kg/día a aproximadamente 10 microgramos/kg/día, se. La enfuvirtida (DP-178, T-20) un péptido sintético de 36 amino ácidos, se describió en la patente de Estados Unidos núm. 5,464,933 con licencia de la Universidad de Duke a Trimeris los cuales desarrollaron enfuvirtida en colaboración con la Universidad de Duke y Roche; la enfuvirtida actúa por inhibición de la fusión de VIH-1 con las membranas objetivos. La enfuvirtida (3-100 mg/día) se administra como una infusión se continua o inyección junto con efavirenz y 2 Pl a pacientes positivos para el VIH-1 refractarios a una terapia de combinación triple; se prefiere el uso de 100 mg/día. Yissum Project núm. 11607, una proteína sintética basada en la proteína Vif del VIH -1 , está en desarrollo preclínico por Yissum Research Development Co., Jerusalén 91042, Israel. La ribavirina, ?-ß-D-ribofuranosil-l H-1 ,2,4-triazol-3-carboxamida, está disponible de ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA; su fabricación y formulación se describen en la patente de Estados Unidos núm. 4,211,771 ; el inhibidor de la integrasa raltegravir disponible de Merck bajo el nombre comercial Isentress™; elvitegravir un inhibidor de integrasa en desarrollo por Gilead Sciences; el inhibidor de la maduración de Gag de VIH-1 berivimat en fase de desarrollo (Fase llb) por Panacos Pharmaceutical. [00176] El término "terapia anti-VIH-1" como se usa en la presente significa cualquier fármaco anti-VIH-1 que se encuentra de utilidad para tratar infecciones por VIH-1 en el hombre solo, o como parte de terapias de combinación multifármacos, especialmente las terapias de combinación triples y cuádruples HAART. Las terapias típicas adecuadas conocidas anti-VIH-1 incluyen, pero no se limitan a, terapias de combinación multifármacos tales como (i) al menos tres fármacos anti-VIH-1 seleccionados de dos NRTI, un Pl, un segundo Pl, y un NNRTI; y (ii) al menos dos fármacos anti- VIH-1 seleccionados de NNRTI y Pl. Las terapias de combinación de múltiples fármacos- HAART típicas adecuadas incluyen: [00177] (a) terapias de combinación triple tales como dos NRTI y un Pl, o (b) dos NRTI y un NNRTI, y (c) terapias de combinación cuádruples tales como dos NRTI, un Pl y un segundo Pl o un NNRTI. En el tratamiento de pacientes vírgenes, se prefiere empezar el tratamiento contra el VIH-1 con la terapia de combinación triple; se prefiere el uso de dos NRTI y un NNRTI o dos NRTI y un Pl si hay intolerancia a NNRTI. El cumplimiento del fármaco es esencial. Los niveles plasmáticos de las células CD4+ y de ARN de VIH-1 se deben monitorear cada 3-6 meses. En caso de meseta de la carga viral, se podría añadir un cuarto fármaco, por ejemplo, un Pl, un NNRTI o un inhibidor de la integrasa.

La presente invención proporciona además el uso de una composición de la presente invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de la transmisión del VIH.

La presente invención proporciona además un método para preparar una composición para inhibir la transmisión del VIH que comprende inmunizar un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma, y obtener calostro hiperinmune del animal inmunizado.

La presente invención proporciona además una composición para inhibir la transmisión de VIH que se prepara por el método que comprende inmunizar un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma, y obtener leche hiperinmune del animal inmunizado.

La presente invención proporciona además un método para inhibir la transmisión del VIH, que comprende: formar calostro hiperinmune o leche hiperinmune por la inmunización de vacas; y administrar el calostro hiperinmune o leche hiperinmune a un sujeto, en donde la etapa de inmunizar las vacas para producir calostro hiperinmune o leche hiperinmune comprende la vacunación con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser cualquier proteína Env del VIH, sin embargo, preferentemente la proteína de Env es gp140.

Además se proporciona un método para inhibir la transmisión de VIH que comprende la administración de anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH un fragmento de la misma a un sujeto. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser cualquier proteína Env del VIH, sin embargo, preferentemente la proteína Env es gp140.

En una modalidad, la proteína Env o el fragmento de la misma es un oligómero de gp140. El oligómero puede comprender trímeros, dímeros y monómeros de gp140. Los oligomeros pueden purificarse a partir de sobrenadante de células HeLa y 293 transducidas, por ejemplo, por cromatografía de afinidad a lectina de lenteja y filtración en gel. La proteína Env o el fragmento de la misma puede ser una proteína de la envoltura viral (Env) de la cepa de VIH de subtipo A, subtipo B o subtipo C o fragmento de la misma.

En una modalidad, los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína Env de un subtipo de VIH heterólogo o una cepa de VIH heteróloga.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalente funcional del mismo se puede producir por inmunización de un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma. El animal se puede inmunizar con gp140, gp140 recombinante o gp140 oligomérica. La gp140 recombinante puede no derivarse del cultivo del virión. El animal se puede inmunizar con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIHo un fragmento de la misma y un adyuvante. En una modalidad, el adyuvante es una emulsión de agua en aceite.

El anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalente funcional del mismo puede estar presente en, u obtenerse de un huevo aviar, o presente en, u obtenerse de calostro hiperinmune o leche hiperinmune de un animal. El animal puede ser una vaca.

La composición se puede formular para la administración tópica, y en ciertas modalidades, la composición se formula para la administración vaginal o rectal. La composición puede formularse como un gel, o se formula como una formulación tópica en crema, pomada, loción o espuma.

En una modalidad del método, el ligando es un anticuerpo, o fragmento o derivado del mismo. Los anticuerpos o fragmentos o derivados de los mismos pueden ser inmunoglobulinas policlonales o anticuerpos quiméricos o fragmentos inmunoactivos presentados en dendrímeros o fragmentos inmunoactivos tales como fragmentos F(ab) y F(ab)2 o fragmentos recombinantes inmunoactivos, o inmunoglobulinas purificadas por afinidad o fragmentos inmunoactivos de las mismas.

En una forma de la composición el anticuerpo o fragmento del mismo o derivado del mismo se producen por la inmunización de un animal con un microbio o un producto microbiano. Los anticuerpos policlonales capaces de unirse a un microbio o producto microbiano se pueden obtener por la inmunización de un animal, y la obtención de los anticuerpos a través de un fluido corporal, tal como la sangre, una secreción de una glándula o célula, el huevo, la leche o el calostro.

Los métodos, composiciones y dispositivos de la presente invención se pueden adaptar generalmente para liberar el agente activo de una manera sensible al tiempo que mejor se corresponda con el tiempo de la actividad sexual. Cuando se aplica tópicamente como una loción o gel, las composiciones se aplican preferentemente inmediatamente antes de la actividad sexual. Otros modos de aplicación, tales como dispositivos y supositorios, se pueden diseñar para liberar el agente activo durante un periodo prolongado de tiempo, a una velocidad predeterminada, en dependencia de las necesidades del consumidor.

En ciertas modalidades de la presente invención, el objetivo de las formulaciones de la presente invención es reducir la carga viral de ARN de VIH-1 por debajo del límite detectable de modo que la infección o transmisión de la infección se retarda, previene o inhibe. El "límite detectable de ARN de VIH-1" en el contexto de la presente invención significa que hay menos de aproximadamente 200 a menos de aproximadamente 50 copias de ARN de VIH-1 por mi de plasma del paciente medido por la metodología de PCR cuantitativa, de multi-ciclos de transcriptasa inversa. El ARN de VIH-1 se mide preferentemente en la presente invención por la metodología de Amplicor -1 Monitor 1.5 (disponible de Roche Diagnostics) o de Nuclisens HIV-1 QT-1.

En ciertas modalidades, las formulaciones de la invención son útiles no solamente para proteger contra la transmisión sexual del VIH, sino además para prevenir la infección de un bebé durante el paso por el canal de nacimiento. Así, la administración vaginal puede tener lugar antes de la relación sexual, durante el acto sexual, inmediatamente antes del parto o durante el parto. Tales formas de dosificación tópicas pueden ser particularmente útiles cuando se aplica a un bebé recién nacido de una madre infectada por VIH.

La presente invención se describirá ahora más completamente con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 : Producción de calostro hiperinmune que contiene anticuerpos policlonales anti-Env Etapa 1 - Producción de vacuna para ganado lechero Se usaron los procedimientos para la preparación de antígeno reportados en la publicación núm. WO/2004/078209 solicitud internacional núm. PCT/AU2004/000277 (cuyo contenido se incorpora la presente como referencia).

Etapa 2 -Se usaron los procedimientos para preparar los anticuerpos de ganado vacunados reportados en la publicación núm. WO/2004/078209 solicitud internacional núm. PCT/AU2004/000277 (cuyo contenido se incorpora en la presente como referencia).

EJEMPLO 2: Producción de anticuerpos policlonales que se unen a Env del VIH, y demostración de la neutralización Se prepararon oligómeros solubles de gp140 Env a partir cepas de VIH-1 de subtipo A, B, y C a partir de células HeLa y/o 293T y se purificaron por afinidad a lectina de lenteja y cromatografía de filtración en gel.

Cuatro vacas (dos embarazada en el segundo semestre y dos inicialmente no embarazadas) se vacunaron con 100 pg de oligómero de gp140 Env del VI H-formulados con adyuvante Montanide. Dos grupos de dos vacas (una embarazada y una no embarazada) se vacunaron con gp140 Env de subtipo B (AD8) sólo o con cantidades ¡guales (33.33pg) de subtipos A, B y C (UG8, AD8 y MW) (denominado "trimix"). Las cuatro vacas recibieron al menos tres vacunaciones, mientras que la última vacunación se administró cuatro semanas antes del parto. Los cuatro vacas fueron seroconvertidas en nueve semanas. Los recíprocos del punto final de los títulos de IgG fueron de hasta 1 x102 5 para las vacas embarazadas y hasta 1 x105 para las vacas no embarazadas determinados por un ELISA específico nuevo establecido anti-lgG bovina gp140 Env de VIH-1. El esperado bajo título de IgG sérica en las vacas embarazadas se explicó por el bombeo de anticuerpos IgG del suero al calostro aproximadamente cuatro semanas antes del parto.

El calostro bovino inmune al VIH se recogió y pasteurizó post-parto de todas las vacas con vacunación en el embarazo lo que resultó en respuestas relativamente bajas con títulos de IgG recíprocos<102 (vacunadas con subtipo B) y 1 x 103 5 (vacunadas con trimix). El título de IgG del calostro recíproco de las vacas vacunadas antes del embarazo fue 105 (vacunadas con subtipo B) y 104,5 (vacunadas con trimix). El análisis por transferencia de tipo Western confirmó que la IgG del calostro de las cuatro vacas fue específica contra la gp140 Env de VIH-1. El calostro no fraccionado se probó para la actividad neutralizante en un ensayo de virus pseudotipado reportero - Env VIH-1. Se probaron los virus de pseudotipos de subtipo A/E, subtipo B y subtipo C que incluyen el panel de referencia de NIH para virus de subtipo B y subtipo C (total n = 27) y se compararon con calostro bovino no-inmune que ya tiene actividad intrínseca de bloqueo de la infección debido a la lactoferrina y otros péptidos bioactivos. El calostro no fraccionado de la vaca vacunada con trimix durante el embarazo mostró una neutralización alta de hasta 50% para todos los pseudovirus de subtipo B (n = 15), así como para la mayoría de los pseudovirus de subtipo C (n = 11 ) y subtipo A/E (n = 1) a una dilución de 1 :16. La primera vaca inmunizada con subtipo B fue una baja respondedora pero ambas vacas vacunadas antes del embarazo y que tuvieron recientemente sus terneros respondieron bien. Hasta este momento, se observó neutralización amplia para la vaca vacunada con el subtipo B que mostró 50 -80% de neutralización de pseudovirus del subtipo B (n = 12) y del subtipo C (n = 9) (dilución 1 : 16) (Tabla I). Los Ac IgG del primer par de vacas se purificaron a partir del calostro y la actividad neutralizante se retuvo para la IgG purificada con hasta 50% de neutralización para el trimix-lgG en comparación con la IgGa 500 pg/ml.

Los resultados del perfil de neutralización de dos muestras de calostro hiperinmunes a la gp140 Env de VIH contra pseudovirus de diferentes subtipos se demuestra en la Tabla 1.

Estos resultados apoyan firmemente este método de producir altos niveles de anticuerpos neutralizantes.

Tabla 1 Perfil de neutralización: verde 0% -25%, amarillo 25% -50%, naranja 50% - 75%, rojo 75% -100%; * pendiente EJEMPLO 3: Anticuerpos policlonales neutralizantes a Env de VIH-1 a partir de calostro bovino.

Doce vacas embarazada libres de BSE alojadas en una granja aprobada de cuarentena en Victoria se vacunan con 100 g de una mezcla equimolar de cuatro oligómeros de gp140 Env de VIH-1 : 1 ) gp140 Env de cepa pre-seroconversión subtipo B SC35, estos adoptan una configuración abierta y muestran prominentemente epítopos importantes de neutralización; 2) gp140 Env de subtipo B R5-trópico primario ADA; 3) gp140 Env de subtipo A/E 966, y 4) gp140 Env de subtipo C MW.

Estas Env se formulan con adyuvante (Montanide) y se administran dos veces antes del embarazo y al menos dos veces a intervalos de 3 semanas durante el segundo trimestre del embarazo por un veterinario registrado.

Un ensayo de ELISA y transferencia de tipo Western para Env se usan para controlar los niveles de IgG específica de Env en muestras de sangre regulares tomadas durante la vacunación y el embarazo y la vacunación continúa hasta que se detectan títulos elevados de IgG. Inmediatamente después del parto, el primer calostro se recoge por un veterinario registrado y a los terneros se les da su calostro esencial, lo que deja alrededor de un litro de calostro por vaca.

Después del almacenamiento de 200 mi de calostro entero, el resto se fracciona y se purifica usando métodos para producir 1 kg de anticuerpo congelado seco puro. Todo el calostro y los anticuerpos purificados se evaluaron para la amplitud y el título de la actividad de anticuerpos neutralizantes usando un ensayo de virus pseudotipado reportero - Env. Las células objetivo típicas se prueban en estos ensayos, así como las células primarias. La neutralización del VIH además se confirma en el sistema de propagación de la infección en PBMC.

Además se examinan los ensayos de neutralización para SIV para evaluar si este modelo de reto robusto se puede usar para los estudios en primates. Y lo más importante, los anticuerpos se titulan dentro de un plasma seminal agrupado que es un subproducto de los procedimientos clínicos IVF, y en los lavados vaginales que se recogen en diversas fases del ciclo menstrual y se prueban para la actividad neutralizante. Usualmente el pH de la vagina es ácido (entre pH 4 y 5), pero en presencia de semen el pH aumenta a un nivel neutro (pH 7). La actividad de los anticuerpos de calostro bovino se prueba a través de este intervalo de pH.

EJEMPLO 4: Mecanismos de inhibición del VIH por IgG de calostro bovino en transcitosis viral y ensayos de neutralización in vitro y en un modelo de explante de infección cervical.

Una vía principal por la cual el VIH elude los mecanismos de defensa del hospedero es el transporte del virus dentro de una vesícula protectora a través del interior de las células epiteliales que dan al interior de la vagina (conocido como transcitosis) sin infectar estas células. La actividad anti-transcitosis de los anticuerpos policlonales bovinos se ensaya en células B Hec-1 usando un voltímetro-ohmímetro EVOM2 para tejido epitelial en un ensayo de transcitosis. El calostro entero, adicionalmente a las IgA e IgG purificadas se examina para la actividad anti-transcitosis. Se obtiene el tejido cervical, y se examina la penetración de la IgG bovina marcadas fluorescentemente en las capas epiteliales de la ectocérvix, endocérvix y epitelio columnar de la vagina .Se añade el virión de VIH marcado con Vpr fluorescente para seguir el movimiento del VIH en y a través de estos tejidos en el modelo de cultivo de explantes para observar virolisis o atrapamiento.

EJEMPLO 5: Formulación de anticuerpos neutralizantes de calostro en un gel microbicida y pruebas de seguridad del gel y eficacia en conejos.

Los anticuerpos policlonales más potentes anti- Env VIH-1 se prueban y se agrupan y formular en diversos geles amortiguadores a base de agua. Varias formulaciones de Acanti-Env se preparan, lo que incluye formulaciones que añaden de nuevo lactoferrina como excipiente de proteína, porque además tiene una actividad neutralizante potente, y una formulación de caseína y carbonato de calcio para probar la posibilidad de retener la actividad de unión de la IgG tras el paso por el estómago y el sistema alimentario para un microbicida rectal que se entrega por vía oral.

La actividad de los anticuerpos cuando se co-formulan en diferentes geles existentes, como el gel lubricante K-Y basado en glicol, o el gel microbicida dendrímero, VivaGel, desarrollado por Starpharma. Se prueba la actividad de las formulaciones que conservan o mejoran la amplitud y la potencia de neutralización del VIH bajo condiciones de pH neutro así como ácido in vitro y su estabilidad. La estabilidad, la biodistribución y la reactogenicidad/inflamación inducida por los anticuerpos bovinos se prueban en estudios toxicológicos en conejo. La biodistribución de la IgG bovina se examina por histopatología, inmunohistoquímica, observación dérmica de respuestas inflamatorias locales, inmunogenicidad por respuestas de anticuerpos y celulares a la IgG bovina, y por arreglos de perlas Bioplex o ELISA de citoquinas y ensayo ELISPOT. El peso corporal, oftalmología, ECG, química clínica, hematología, análisis de orina, peso de órganos y frotis de médula ósea y sangre se prueban por cualquier anormalidad. A los animales de control se les da un gel de placebo. A continuación de los estudios de toxicidad de células, el calostro y los Acs purificados se co-cultivan con bacterias comunes en la vagina, por ejemplo, Lactobacillus acidophilus para evaluar el efecto del Ac de calostro en la flora normal beneficiosa. Antes de estudios de reto en primates, se prueba la estabilidad y la actividad de la formulación en el ambiente vaginal a diferentes puntos de tiempo después de la aplicación a conejos por la recuperación de anticuerpos por lavado con salina.

EJEMPLO 6: Formulaciones Los siguientes se formulan de acuerdo con métodos estándar que se basan en las listas siguientes de ingredientes. "Calostro hiperinmune" es el calostro hiperinmune que contiene anticuerpos para Env.

Formulación 1 Se prepara una formulación de crema vaginal por la mezcla de los componentes que se enumeran en la Tabla 2 más abajo. Para cada aplicación, 1-4 gramos de la crema se administran vaginalmente con un aplicador adecuado, como una jeringa.

Tabla 2 Formulación 2 Se prepara una formulación de crema vaginal por la mezcla de los componentes enumerados en la Tabla 3 más abajo. Para cada aplicación, 1-4 gramos de la crema se administran vaginalmente con un aplicador adecuado, como una jeringa.

Tabla 3 Formulación 3 Se prepara una formulación de gel vaginal por la mezcla de los componentes enumerados en la Tabla 4 más abajo. Para cada aplicación, 4 gramos del gel se administran vaginalmente con un aplicador adecuado, como una jeringa.

Tabla 4 Formulación 4 Se prepara una formulación de espuma rectal por la mezcla de los componentes enumerados en la Tabla 5 más abajo y los propelentes inertes isobuteno y propano. La espuma se suministra en un recipiente de aerosol con un aplicador rectal. Para cada aplicación, 900 miligramos de la espuma se administran por vía rectal usando el aplicador.

Tabla 5 EJEMPLO 7: Producción de antígeno, purificación y vacunación de las vacas La gp140 Env deVIH-1 trimérica soluble subtipo A (92UG8037.8; UG8), subtipo B (AD8) y subtipo C (93MW965.26; MW) se purificó por cromatografía de afinidad a lectina de lenteja y de filtración en gel y 100ug de gp140 en un adyuvante patentado se usaron para tres vacunaciones intramusculares de 4 vacas; 2 vacas después de la concepción (p) y dos vacas antes de la concepción (NP) de acuerdo con el calendario de vacunación que se muestra en las Figuras 1 y 2.

EJEMPLO 8: La IgG de suero y calostro se une a la gp140 Env de subtipo A, B y C La Figura 3 muestra los títulos de IgG específica agp-140Env en los sueros 9 semanas después de la vacunación primaria y en calostro determinados por ELISA directo contra gp140 Env de subtipo A (UG8), subtipo B (AD8) y subtipo C (MW). Los títulos recíprocos de punto final se determinaron por medio del uso del corte de 2 veces la DO basado en las muestras pre-sangrado o en el calostro no inmune, respectivamente. Estos resultados demuestran que la IgG del suero y calostro se une a la gp140 Env de los subtipos A, B y C. Estos resultados además demuestran que la IgG de vacas no embarazadas tiene amplia actividad de unión a la gp140 de los subtipos A, B y C.

EJEMPLO 9: La IgG purificada del calostro de vacas no embarazadas conserva la unión a la gp140 Env La Figura 4 muestra la actividad de unión específica de la IgG de calostro purificada que se determinó por un ELISA directo contra el subtipo A (UG8), el subtipo B (AD8) y el subtipo C (MW) y la absorbancia (abs) medida a 450 nm. Estos resultados demuestran que la IgG purificada a partir de vacas no embarazadas conserva la unión a gp140. Los resultados además demuestran que la IgG purificada de vacas no embarazadas conserva la actividad de unión amplia a gp140 de subtipos A, B y C. Los resultados además demuestran la unión cruzada entre subtipos (heteróloga), con el calostro de vacas no embarazadas vacunadas con oligómeros solubles de gp140 Env de subtipo B que se unen a gp140 de subtipos A By C.

EJEMPLO 10: La IgG bovina bloquea la unión del Ac monoclonal b12 al sitio de unión de CD4 de la gp140.

Varios anticuerpos monoclonales (AcM) humanos ampliamente neutralizantes se derivan de individuos infectados, incluyendo la inmunoglobulina G1 (lgG1 ) b12 y 2G12. Entre los más potentes, el anticuerpo monoclonal b12 (Ac b12) bien conocido ocluye el sitio de unión de CD4 en gp120 (que forma parte de gp140) e impide la unión del virus a CD4 en las células objetivo y es capaz de neutralizar aislados de HIV-1 primarios. 2G12 reconoce un clúster de glicanos de mañosa alta en la glicoproteína gp120de la envoltura viral. Una comprensión de la especificidad de unión, neutralización y protección de b12 debería ayudar en el desarrollo de inmunógenos que inducen anticuerpos neutralizantes de una especificidad similar.

La Figura 5 muestra que la IgG de calostro bovino compite con el AcMb12neutralizante humano por la unión al sitio de unión de gp140 en CD4. Se realizaron ELISA de competencia por la titulación de b12 y 2G12 en un fondo constante de 100 ug de IgG o una dilución 1 :100 del calostro entero. La capacidad de b12 y 2G12 para unirse a AD8 (gp140 de subtipo B) en presencia o ausencia de la IgG de calostro se detectó mediante un anticuerpo anti-lgG humana conjugado a HRP. Los resultados demuestran que la IgG bovina bloquea la unión del potente anticuerpo b12 al sitio de unión a CD4 de la gp140 Env. Los resultados además demuestran que la IgG bovina de vacas no embarazadas bloquea la unión del potente anticuerpo b12 al sitio de unión a CD4 de la gp140 Env.

EJEMPLO 11 : El calostro de vacas embarazadas vacunadas con gp140 de subtipo A B/C y vacas no embarazadas vacunadas con gp140 de subtipo B tienen amplia actividad neutralizante.

La Tabla 6 muestra el perfil de neutralización del calostro entero. Los números representan el porcentaje de neutralización de una dilución 1:16 contra las EGFP Env -virus pseudotipados indicados, lo que incluye cepas comunes de laboratorio y el panel de referencia del subtipo B y C del NIH (ARRP #1 1227, #11326) en las células CF2. Los datos que se muestran son un experimento representativo de dos experimentos independientes. Los resultados demuestran que el calostro de vacas embarazadas vacunadas con gp140 de subtipos A/B/C y de vacas no embarazadas vacunadas con gp140 de subtipo B tiene amplia actividad neutralizante. En particular, esta neutralización es una neutralización cruzada entre subtipos (heteróloga), con el calostro de vacas no embarazadas vacunadas con oligomerossolubles degp140 Env de subtipo B que neutraliza VIH de subtipos A By C. Además, el calostro de vacas embarazadas vacunadas con oligómeros solubles de gp140 Env trimix neutraliza VIH de subtipos A B y C. Los resultados además muestran que el calostro no inmune tiene actividad neutralizante.

Tabla 6 Perfil de neutralización: verde 0% -25%, amarillo 25% -50%, naranja 50% -75%, rojo 75% -100%.

EJEMPLO 12: La IgG purificada de calostro tiene actividad neutralizante.

La Figura 7 muestra la actividad neutralizante de la IgG purificada de calostro de las 4 vacas vacunadas para virus pseudotipados reporteros- 2 EGFP Env (subtipo B) La neutralización característica de En- virus pseudotipados; AD*; resistente, MN, sensible.

Finalmente, se entiende que otras diversas modificaciones y/o alteraciones se pueden hacer sin apartarse del espíritu de la presente invención como se indica en la presente.

Se pueden presentar futuras solicitudes de patente en base a, o reivindicar la prioridad de la presente solicitud. Se debe entender que las reivindicaciones provisionales siguientes se proporcionan a modo de ejemplo solamente, y no están destinadas a limitar el alcance de lo que se puede reclamar en cualquier solicitud futura. Las características se pueden añadir a u omitir de las reivindicaciones provisionales en una fecha posterior para definir o redefinir aún más la invención o invenciones.

Claims (56)

REIVINDICACIONES

1. Una composición para inhibir la transmisión del VIH comprende anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una proteína de la envoltura viral (Env) del virus de la ¡nmunodeficiencia humana (VIH) o un fragmento de la misma.

2. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 en donde la proteína de Env o el fragmento de la misma es gp140.

3. Una composición de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en donde la proteína de Env o el fragmento de la misma es un oligómero de gp140

4. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la proteína de Env o el fragmento de la misma es una proteína de la envoltura viral (Env) de la cepa de subtipo A, subtipo B, o subtipo C del VIH o un fragmento de la misma.

5. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína de Env de un subtipo heterólogo de VIH.

6. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína de Env de una cepa heteróloga de VIH.

7. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

8. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el anticuerpo policlonal o fragmento del mismo es capaz de prevenir la infección por VIH de una célula.

9. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el anticuerpo, o fragmento del mismo, o equivalente funcional del mismo se produce por inmunización de un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma.

10. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9 en donde el animal se inmuniza con gp140.

11. Una composición de acuerdo con la reivindicación 10 en donde el animal se inmuniza con gp140 recombinante.

12. Una composición según la reivindicación 11 en donde el animal se inmuniza con gp140 oligomérica.

13. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en donde el animal se inmuniza con una gp140 de subtipo B.

14. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en donde el animal se inmuniza con una gp140 de subtipo B y los anticuerpos producidos son capaces de unirse a una gp140heteróloga de un subtipo A, subtipo B, o subtipo C.

15. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, donde los anticuerpos o fragmentos de los mismos compiten con el anticuerpo monoclonal Ac b12 por la unión a gp140.

16. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9 en la que el animal se inmuniza con una molécula recombinante que no se deriva del cultivo del virión.

17. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9 en la que el animal se inmuniza con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma y un adyuvante.

18. Una composición de acuerdo con la reivindicación 9 en donde el adyuvante es una emulsión de agua en aceite.

19. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18 en donde el anticuerpo, o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo está presente en o se obtiene de un huevo aviar.

20. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18 en donde el anticuerpo, o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo está presente en o se obtiene de calostro hiperinmune del animal.

21. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 18 en donde el anticuerpo o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo está presente en, o se obtiene de la leche hiperinmune del animal.

22. Una composición de acuerdo con la reivindicación 20 o la reivindicación 21 en donde el animal es una vaca.

23. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22. en donde la composición se formula para la administración tópica.

24. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en donde la composición se formula para la administración vaginal o rectal.

25. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23 o la reivindicación 24 en la que la composición se formula como un gel.

26. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23 o la reivindicación 24 en donde la composición se formula como una formulación tópica de crema, pomada, loción o espuma.

27. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26, que comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.

28. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, que comprende además un lubricante.

29. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, que comprende además un agente antiviral.

30. Un uso de una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de la transmisión del VIH.

31. Un método para preparar una composición para inhibir la transmisión de VIH que comprende inmunizar un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma, y obtener calostro hiperinmune del animal inmunizado.

32. Una composición para inhibir la transmisión del VIH preparada por el método que comprende inmunizar un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma, y obtener calostro hiperinmune del animal inmunizado.

33. Un método para inhibir la transmisión del VIH, que comprende: formar calostro hiperinmune o leche hiperinmune por la inmunización de vacas, y administrar el calostro hiperinmune o leche hiperinmune a un sujeto, donde la etapa de inmunización de las vacas para producir el calostro hiperinmune o la leche hiperinmune comprende la vacunación con una proteína de la envoltura viral (Env) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), o un fragmento de la misma.

34. Un método de acuerdo con la reivindicación 33 en donde la proteína de Env o el fragmento de la misma es gp140.

35. Un método para inhibir la transmisión de VIH que comprende la administración de anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos capaces de unirse a una proteína de la envoltura viral (Env) del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), o un fragmento de la misma a un sujeto.

36. Un método de acuerdo con la reivindicación 35 en donde la proteína de Env o el fragmento de la misma es gp140.

37. Un método de acuerdo con la reivindicación 35 o la reivindicación 36 en donde la proteína de Env o el fragmento de la misma es un oligómero de gp140.

38. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 a 37 en donde la proteína Env o el fragmento de la misma es una proteína de la envoltura viral (Env) de la cepa de subtipo A, subtipo B o subtipo C de VIH o un fragmento de la misma.

39. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 a 38 en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína Env de un subtipo de VIH heterólogo

40. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 a 39 en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos son capaces de unirse a una proteína de Env de una cepa heteróloga de VIH.

41. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 a 40 en donde el anticuerpo policlonal o fragmento del mismo es capaz de prevenir la infección por VIH de una célula.

42. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 a 41 en donde el anticuerpo, o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo se produce por inmunización de un animal con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma.

43. Un método de acuerdo con la reivindicación 42 en donde el animal se inmuniza con gp140.

44. Un método de acuerdo con la reivindicación 43 en donde el animal se inmuniza con gp140 recombinante.

45. Un método de acuerdo con la reivindicación 44 en donde el animal se inmuniza con gp140 oligomérica.

46. Un método de acuerdo con la reivindicación 42 en el que el animal se inmuniza con una molécula recombinante que no se deriva del cultivo del virión.

47. Un método de acuerdo con la reivindicación 42 en el que el animal se inmuniza con una proteína de la envoltura viral (Env) del VIH o un fragmento de la misma y un adyuvante.

48. Un método de acuerdo con la reivindicación 42 en el que el adyuvante es una emulsión de agua en aceite

49. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 42 a 48 en donde el anticuerpo, o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo está presente en, o se obtiene de un huevo aviar.

50. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 42 a 48 en donde el anticuerpo, o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo está presente en, o se obtiene de calostro hiperinmune del animal.

51. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 42 a 48 en donde el anticuerpo o fragmento del mismo, o el equivalente funcional del mismo está presente en o se deriva de la leche hiperinmune del animal.

52. Un método de acuerdo con la reivindicación 50 o la reivindicación 51 en donde el animal es una vaca

53. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 52 en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos se administran por vía tópica

54. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 35 a 47 en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos se administran por vía vaginal o rectal.

55. Un método de acuerdo con la reivindicación 53 o la reivindicación 54 en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos se administran como un gel

56. Un método de acuerdo con la reivindicación 53 o la reivindicación 54 en donde los anticuerpos policlonales o fragmentos de los mismos se administran como una formulación tópica en crema, pomada, loción o espuma.