MX2012004721A

MX2012004721A - Inmunoterapia de cancer y metodo de tratamiento.

Info

Publication number: MX2012004721A
Application number: MX2012004721A
Authority: MX
Inventors: David C Diamond; Zhiyong Qiu; Adrian Ion Bot; Mihail Obrocea
Original assignee: Mannkind Corp
Priority date: 2009-10-23
Filing date: 2010-10-22
Publication date: 2012-06-25
Also published as: EP2490713A2; AU2016201722A1; US20110274723A1; CA2778707A1; WO2011050344A3; WO2011050344A2; AU2010310468A1; JP2013508415A

Abstract

La presente descripción se refiere a métodos para el tratamiento de un paciente con cáncer, con un agente inmunoterapéutico activo, en donde los métodos incluyen estimar la inmunoreactividad preexistente del paciente a cuando menos un antígeno diana, seleccionar un régimen inmunoterapéutico con base en el nivel de inmunoreactividad preexistente y administrar un agente inmunoterapéutico activo de acuerdo con el régimen.

Description

INMUNOTERAPIA DE CÁNCER Y MÉTODO DE TRATAMIENTO La presente solicitud se presenta junto con un Listado de Secuencias en formato electrónico. El Listado de Secuencias se proporciona como un archivo con titulo SEQLISTING062WO0.txt, creado en octubre 22, 2010, que tiene 22 Kb de tamaño. La información en el formato electrónico del Listado de Secuencia se incorpora aquí por referencia en su totalidad.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente descripción se refiere a estrategias para el diseño y práctica de protocolos de inmunoterapia para generar una respuesta de célula T efectora contra un antigeno diana en un sujeto, y para utilizar más ventajosamente productos inmunogénicos que inducen, promueven el crecimiento de, activan y/o de otra forma estimulan las células T efectoras que hacen blanco o diana en antigenos de tumor en el tratamiento de cáncer. Más particularmente, modalidades se refieren a determinar un curso de tratamiento y métodos para tratar un sujeto, en donde la presencia o ausencia de la inmunoreactividad de linea de referencia cuando menos a un antigeno diana, se estima para seleccionar sujetos para administración de uno o más agentes inmunoterapéuticos activos que hacen diana al antigeno objetivo como mínimo. En algunas modalidades, las estrategias aquí descritas incluyen seleccionar pacientes con enfermedad primordialmente de confinamiento linfático o enfermedad que tiene mayor progresión limitada, o de otra forma se confina a, el sistema linfático para tratamiento con agente inmunoterapéutico activo que se administra intralinfáticamente .

Antecedentes La American Cáncer Society ha estimado que casi 1.5 millones de nuevos casos de cáncer serán diagnosticados este año (excluyendo carcinoma in situ de cualquier sitio excepto vejiga urinaria y excluyendo cánceres de piel de células escamosas y básales) y que aproximadamente uno de cada dos hombres americanos y una de cada tres mujeres americanas tendrán algún tipo de cáncer en algún punto durante su vida.

Las células del cuerpo normales crecen, se dividen y mueren en una forma ordenada. En las enfermedades proliferativas celulares tales como cáncer, las células en lugar de morir, continúan creciendo fuera de control y dividiéndose. Aunque hay muchos tipos de cáncer, la enfermedad usualmente empieza debido a un crecimiento fuera de control de las células anormales.

Opciones de tratamiento usuales para cáncer incluyen cirugía, terapia de radiación y quimioterapia. Una rama adicional de tratamiento, que se refiere como inmunoterapia, se ha establecido más recientemente. Las inmunoterapias se diseñan para ayudar al sistema inmune en reconocer células de cáncer y reforzar una respuesta contra las células de cáncer a fin de destruir al cáncer. Inmunoterapias incluyen inmunoterapias activas y pasivas. Inmunoterapias activas intentan estimular el propio sistema inmune del cuerpo para luchar contra la enfermedad. Inmunoterapias pasivas generalmente no se basan en el sistema inmune del paciente para atacar a la enfermedad; por el contrario, utilizan los componentes del sistema inmune (tales como anticuerpos) generados fuera del cuerpo del paciente.

A pesar de diversos tipos de tratamientos de cáncer, existe una necesidad continua para métodos de tratamiento adicionales y más efectivos. Una alternativa semejante prevé metodologías de tratamiento médico que requieren o se benefician de una capacidad para iniciar, estimular y/o mejorar una respuesta inmune por inmunización. Estas metodologías incluyen aquellas que dependen de la creación o estímulo de una respuesta inmune contra un polipéptido antigénico deseado y aquellos que dependen del inicio o modulación de una respuesta inmune innata. De esta manera un enfoque en el tratamiento de cáncer es la manipulación del sistema inmune por el uso de una vacuna anticáncer terapéutica.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente descripción se refiere a métodos para tratar a un paciente de cáncer. Algunas modalidades de la invención se refieren a métodos para tratar a un paciente de cáncer con el agente inmunoterapéutico activo, en donde los métodos incluyen seleccionar un régimen inmunoterapéutico con base en el nivel de un paciente de inmunoreactividad preexistente a cuando menos un antigeno diana, en donde el régimen incluye la administración de al menos un inmunógeno que hace blanco al antigeno diana objetivo o un epitopo del mismo, y tratar al paciente de acuerdo con el régimen. En algunas modalidades, los métodos aquí descritos incluyen seleccionar un régimen inmunoterapéutico que hace diana a cuando menos un antigeno diana con base en el nivel conocido de un paciente de inmunoreactividad existente previo al antigeno como mínimo.

En algunas modalidades, los métodos incluyen seleccionar un régimen inmunoterapéutico que hace blanco o diana en al menos un antígeno diana con base en la presencia o ausencia de la inmunoreactividad del antígeno diana como mínimo en el paciente. En algunas modalidades, los métodos incluyen seleccionar un régimen inmunoterapéutico que hace diana en al menos un antígeno con base en que el paciente tenga un nivel sustancial o mínimo de inmunoreactividad al antígeno objetivo como mínimo. Algunas modalidades, incluyen un método para tratar un paciente de cáncer con un agente inmunoterapéutico activo que incluye estimar un nivel de inmunoreactividad existente previa del paciente a cuando menos un antígeno diana; seleccionar un régimen inmunoterapéutico con base en el nivel de inmunoreactividad existente previa, en donde el régimen incluye administración de un inmunógeno como mínimo que hace diana en al menos un antígeno, o un epítopo del mismo; y tratar al paciente de acuerdo con el régimen.

En algunas modalidades, el inmunógeno puede promover una respuesta de célula T efectora a un antígeno asociada con el cáncer. El régimen inmunoterapéutico puede lograr un beneficio clínico. El beneficio clínico puede incluir regresión de tumor o estabilización de la enfermedad y semejantes, o una combinación de los mismos. El nivel de inmunoreactividad preexistente puede ser medido por tetrámero o ensayo ELISPOT, y semejantes o una combinación de los mismos .

En algunas modalidades, el paciente puede tener un cáncer que no ha progresado más allá de los órganos linfáticos secundarios. El paciente puede tener un enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) . El cáncer puede ser al menos uno por ejemplo de melanoma, carcinoma de riñon, mama, páncreas, próstata, colorectal, de ovarios, pulmonar de células no pequeñas, glioblastoma, melanoma ocular, carcinoma sensible a hormonas de mama, próstata y ovarios, carcinoma de próstata refractario a hormonas, carcinoma de células renales, esofágico o mesotelioma y semejantes. El paciente puede ser HLA-A2 positivo.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico para tratar a un paciente de cáncer puede incluir un régimen o pauta de sensibilización y refuerzo. En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede incluir más de un ciclo terapéutico. El inmunógeno puede ser administrado en forma directa al sistema linfático del paciente. El suministro directo al sistema linfático puede incluir suministro intranodal.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico de régimen o pauta de sensibilización y refuerzo puede incluir la administración de una cantidad efectiva de un plásmido para inducir una inmunorespuesta seguido por administración de una cantidad efectiva de al menos un péptido que corresponde a un epitopo expresado por el plásmido. El plásmido puede incluir por ejemplo, p EL-TYR o pPRA-PSM, y semejantes. El o los epitopos expresados por el plásmido pueden incluir al menos uno por ejemplo de epitopo PRAME o su análogo, o un epitopo PSM o su análogo, o . un epitopo Melan A o su análogo, o un epitopo de tirosinasa o su análogo y semejantes o una combinación de los mismos. El o los epitopos expresados por el plásmido pueden incluir al menos uno de, por ejemplo, PRAME425-433, o su análogo, o PSMA288-297 , o su análogo, o Melan A26-35, o su análogo, o tirosinasa369-377 , o su análogo y semejantes o una combinación de los mismos. El o los epitopos expresados por el plásmido comprenden al menos uno de Melan A26-35 A27Nva (ENvaAGIGILTV) (SEQ ID NO:2), o Melan A26-35 A27L (ELAGIGILTV) (SEQ ID NO:3), o PRAME425-433 L426Nva, L433Nle (SNvaLQHLIGNle) (SEQ ID N0:7), o PSMA288-297 I297V (GLPSIPVHPV) (SEQ ID NO: 9).

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico además puede incluir administrar un inmunopotenciador . En algunas modalidades, el inmunógeno además puede incluir un inmunopotenciador. El inmunopotenciador puede incluir por ejemplo citoquinas, quimiocinas, moléculas co-estimulantes, factores de transcripción y factores de transducción de señal y semejantes, o una combinación de los mismos. El régimen inmunoterapéutico además puede incluir administrar un agente para reducir la naturaleza inmunosupresora del microambiente del tumor para promover un beneficio clínico.

En algunas modalidades, el antígeno diana incluye Melan A y el paciente tiene una inmunoreactividad existente previa a Melan A. El régimen inmunoterapéutico puede incluir administrar un inmunógeno para promover una respuesta de célula T efectora a Melan A, o uno o más de sus epítopos. El paciente puede tener una enfermedad linfática y/o de la piel. La enfermedad linfática y/o de la piel puede por ejemplo ser una enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mi a) . El régimen inmunoterapéutico puede incluir hacer diana al epitopo Melan A26-35, o un análogo del mismo. El cáncer por ejemplo puede ser melanoma o glioblastoma.

En algunas modalidades, el antigeno diana incluye cuando menos uno de PRA E o PSMA y el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad existente previa a cuando menos uno de PRAME o PSMA, y el régimen inmunoterapéutico puede incluir administrar el inmunógeno para promover una respuesta de célula T efectora a cuando menos uno de PRAME o PSMA. PRAME y PSMA pueden ser co-expresados en el tejido de tumor del paciente. El régimen inmunoterapéutico puede incluir hacer diana en al menos uno de un epítopo PRAME425-433 o un epitopo PSMA288-297. El cáncer puede ser de próstata, cáncer de riñon o melanoma. El cáncer puede ser cáncer de próstata y el beneficio clínico puede incluir por ejemplo niveles de PSA disminuidos, y semejantes. El paciente puede no tener o tener mínima inmunoreactividad existente previa tanto a PRAME como PSMA; y el régimen inmunoterapéutico además puede incluir una terapia subsecuente que comprende: administrar cuando menos un ciclo terapéutico adicional de un agente inmunoterapéutico activo que hace diana al menos uno de PRAME o PSMA de acuerdo con el régimen inmunoterapéutico; ensayar por expansión de células T PRAME y/o PSMA en una muestra de paciente; clasificar al paciente como un respondedor con base en la expansión de células T específicas de antígeno; y administrar al menos un ciclo terapéutico adicional al respondedor. En algunas modalidades, la etapa de ensayo muestra una expansión en células T de PRAME o PSMA y la terapia subsecuente puede incluir repetir los ciclos terapéuticos del régimen inmunoterapéutico . La terapia subsecuente además puede comprender administrar un inmunopotenciador . En algunas modalidades, la etapa de ensayo no indica expansión o una expansión temporal de tanto células T PRAME un y PSMA y la terapia subsecuente puede incluir por ejemplo interrupción del régimen inmunoterapéutico.

Algunas modalidades incluyen un método para tratar un paciente de cáncer que incluye: seleccionar un paciente en una etapa de enfermedad en donde hay diseminación limitada más allá del sistema linfático y cualesquiera metástasis que se han diseminado más allá del sistema linfático número 10 o menor y cualquiera de 1) no están en un órgano vital o 2) tienen menos de un centímetro de diámetro; y aplicar al paciente un régimen inmunoterapéutico que incluye administrar directamente al sistema linfático del paciente un inmunógeno para promover una respuesta de célula T efectora a un antígeno asociado con el cáncer. El régimen inmunoterapéutico puede lograr un beneficio clínico. El beneficio clínico puede incluir regresión del tumor o estabilización de la enfermedad y semejantes o una combinación de los mismos. El paciente puede tener un cáncer que no ha progresado más allá de órganos linfáticos secundarios. En algunas modalidades, el paciente puede tener una enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) . El cáncer puede ser al menos uno de por ejemplo, melanoma, cáncer de riñon, de mama, páncreas, próstata, colorectal, de ovarios, de pulmón de células no pequeñas, glioblastoma, melanoma ocular, carcinoma sensible a hormonas de mama, próstata y ovarios, carcinoma de próstata refractario a hormonas, carcinoma de células renales, esofágico o mesotelioma y semejantes. El paciente puede ser HLA-A2 positivo. El régimen inmunoterapéutico puede incluir un régimen o pauta de sensibilización y refuerzo. El régimen inmunoterapéutico de pauta de sensibilización y refuerzo puede incluir administración de una cantidad efectiva de un plásmido para inducir una respuesta inmune seguido de administración de la cantidad efectiva de al menos un péptido que corresponde a un epitopo expresado por el plásmido. El plásmido puede incluir por ejemplo, pMEL-TYR o pPRA-PSM, y semejantes. El o los epitopos expresados por el plásmido pueden incluir al menos uno de por ejemplo un epitopo PRAME, o su análogo, o un epitopo PSMA, o su análogo, o un epitopo Melan A, o su análogo, o un epitopo de tirosinasa, o su análogo y semejantes o una combinación de los mismos. El o los epitopos expresados por el plásmido pueden incluir al menos uno de por ejemplo, PRAME425- 33, o su análogo, o PSMA288-297, o su análogo, o Melan A26-35, o su análogo, o tirosinasa369-377 , o su análogo y semejantes o una combinación de los mismos. El o los epitopos expresados por el plásmido comprenden al menos uno de Melan A26-35 A27Nva (ENvaAGIGILTV) (SEQ ID NO: 2), o Melan A26-35 A27L (ELAGIGILTV) (SEQ ID NO: 3), o PRAME425-433 L426Nva, L433Nle (SNvaLQHLIGNle) (SEQ ID N0:7), o PSMA288_297 I297V (GLPSIPVHPV) (SEQ ID NO: 9). El régimen inmunoterapéutico además puede incluir administrar un inmunopotenciador . El inmunógeno puede además incluir un inmunopotenciador. El inmunopotenciador puede incluir por ejemplo ligandos de receptor tipo Toll (TLR = Toll Like Receptor) , ligandos de receptor de reconocimiento de patrón endocitico (PRR = Pattern Recognition Receptor), citoquinas, quimiocinas, moléculas co-estimulantes , factor de transcripción y factores de transducción de señal y semejantes o una combinación de los mismos. El régimen inmunoterapéutico puede además incluir administrar un agente para reducir la naturaleza inmunosupresora del microambiente del tumor para promover un beneficio clínico. El régimen inmunoterapéutico puede incluir más de un ciclo terapéutico. El inm'unógeno puede ser administrado en forma directa al sistema linfático del paciente. El suministro directo al sistema linfático puede incluir suministro infranodal. En algunas modalidades, el antígeno asociado con el cáncer incluye Melan A y el paciente tiene inmunoreactividad preexistente a Melan A. El paciente puede tener una enfermedad linfática y/o de la piel. La enfermedad linfática y/o de la piel puede ser por ejemplo enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) . El régimen inmunoterapéutico puede incluir hacer blanco en epitopo Melan A26-35 o su análogo. El cáncer puede ser por ejemplo melanoma o glioblastoma . En algunas modalidades, el antigeno asociado con el cáncer incluye al menos uno de PRAME o PSMA y el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad preexistente a cuando menos uno de PRAME o PSMA. PRAME y PSMA pueden ser co-expresados en el tejido de tumor del paciente. El régimen inmunoterapéutico puede incluir hacer blanco en al menos un epitopo PRAME425_433 o un epitopo PSMA288-297 - El cáncer puede ser por ejemplo de próstata, cáncer de riñon, o melanoma. El cáncer es cáncer de próstata y el beneficio clínico puede incluir por ejemplo niveles disminuidos de PSA y semejantes. El paciente puede no tener o tener mínima inmunoreactividad existente previa tanto a PPvAME como PSMA; y el régimen inmunoterapéutico además puede incluir una terapia subsecuente que comprende: administrar al menos un ciclo terapéutico adicional de un agente inmunoterapéutico activo que hace blanco al menos uno de PRAME o PSMA de acuerdo con el régimen inmunoterapéutico; ensayar por expansión de células PRAME y/o T en una muestra de paciente; clasificar al paciente como un respondedor con base en expansión de células T específicas de antígeno; y administrar al menos un ciclo terapéutico adicional al respondedor. En algunas modalidades, la etapa de ensayo muestra una expansión en células T PRAME o PS A y la terapia subsecuente puede incluir repetir los ciclos terapéuticos del régimen inmunoterapéutico . La terapia subsecuente además puede comprender¦ administrar un inmunopotenciador . En algunas modalidades, la etapa de ensayo no indica expansión o una expansión temporal tanto en células T PRAME como PSMA Y la terapia subsecuente puede incluir por ejemplo interrupción del régimen inmunoterapéutico.

Algunas modalidades incluyen un inmunógeno para utilizar en el tratamiento de un cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene una inmunoreactividad existente previa a Melan A, y en donde el inmunógeno es capaz de promover una respuesta de célula T efectora a Melan-A. El paciente puede ser HLA-A2 positivo. El paciente puede tener una enfermedad linfática y/o de la piel, y en donde el tratamiento además puede incluir determinar la ubicación de la enfermedad a los órganos linfáticos. La enfermedad linfática y/o de la piel puede por ejemplo ser enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) . El cáncer puede ser por ejemplo, melanoma o glioblastoma . El tratamiento puede incluir hacer diana en un epitopo de Melan A26-35.

Algunas modalidades incluyen un inmunógeno para utilizar en el tratamiento de un cáncer en un paciente, en donde el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad persistente a cuando menos un antigeno seleccionado del grupo de PRAME y PSMA, y en donde el inmunógeno es capaz de promover una respuesta efectora de célula T al antigeno para el cuál no hay o hay mínima inmunoreactividad existente previa. El paciente puede ser HLA-A2 positivo. PRAME y PSMA pueden ser co-expresados en el tejido de tumor de paciente. El tratamiento puede incluir hacer diana a un epítopo PRÁME425-433 y/o un epítopo PSMA288-297. El cáncer puede por ejemplo ser cáncer de próstata y el beneficio clínico del tratamiento puede incluir por ejemplo, niveles de PSA disminuidos, y semejantes, o una combinación de los mismos. El antigeno diana como mínimo puede incluir un antígeno PRAME y/o un antígeno PSMA y el cáncer puede ser por ejemplo, de próstata, cáncer de riñon o melanoma. En algunas modalidades, el paciente puede no tener o tener mínima inmunoreactividad existente previa tanto a PPvAME como PSMA; y el tratamiento además puede incluir: administrar al menos un ciclo terapéutico adicional de un agente inmunoterapéutico activo que hace diana en al menos PRAME o PSMA; ensayar por expresión de célula T de PRAME y/o PSMA en una muestra del paciente; clasificar al paciente como un paciente respondedor con base en la expansión de las células T específicas de antígeno; y administrar al menos un ciclo terapéutico adicional al respondedor. En algunas modalidades, la etapa de ensayo muestra una expansión en células T anti-PRAME o anti-PSMA y la terapia subsecuente incluye administrar ciclos terapéuticos subsecuentes del régimen inmunoterapéutico . La terapia subsecuente puede incluir, por ejemplo, administrar un inmunopotenciador . En algunas modalidades, la etapa de ensayo no indica expansión o una expansión temporal tanto de células T PRAME como PSMA, y la terapia subsecuente puede incluir por ejemplo, interrupción del régimen inmunoterapéutico .

Algunas modalidades incluyen un inmunogeno para uso como un medicamento en el tratamiento de un cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene cáncer que no ha progresado, o solo se ha diseminado en forma limitada, más allá de órganos linfáticos secundarios, y en donde el inmunogeno es capaz de promover una respuesta efectora de célula T a un antigeno asociado con el cáncer, en donde el inmunogeno es para administración intralinfática directa del inmunogeno. El paciente puede ser HLA-A2 positivo. El paciente puede estar en una etapa de la enfermedad en donde hay diseminación limitada más allá del sistema linfático y cualquier metástasis que se ha diseminado más allá del sistema linfático número 10 o menor y que ya 1) se trata de un órgano vital o 2) tiene menos de un centímetro de diámetro .

En algunas modalidades, la inmunoreactividad existente previa o nada o mínima inmunoreactividad puede ser medida por ejemplo por ensayo ELISPOT o tetrámero y semejantes, o una combinación de los mismos. El paciente puede tener un cáncer que no ha progresado, o solo tiene diseminación limitada más allá de órganos linfáticos secundarios. El paciente puede tener por ejemplo, enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) . El cáncer puede ser al menos uno de por ejemplo, melanoma, de riñon, mama, páncreas, próstata, colorectal, de ovarios, pulmonar de células no pequeñas, glioblastoma, melanoma ocular, carcinoma de mama sensible a hormona, de próstata y de ovarios, carcinoma de próstata refractario a hormonas, carcinoma de células renales, esofágico, o mesotelioma y semejantes.

En algunas modalidades, el tratamiento puede lograr un beneficio clínico. El beneficio clínico puede incluir por ejemplo, regresión de tumor o estabilización de la enfermedad y semejantes, o una combinación de los mismos.

En algunas modalidades, el tratamiento puede incluir una pauta o régimen de sensibilización y refuerzo. El tratamiento puede incluir más de un ciclo terapéutico. El régimen inmunoterapéutico de otro régimen de sensibilización y refuerzo puede incluir administración de una cantidad efectiva de un plásmido para inducir una inmuno respuesta seguida por administración de una cantidad efectiva de al menos un péptido que corresponde a un epítopo expresado por el plásmido. El o los epítopos expresados por el plásmido pueden ser al menos uno de por ejemplo, un epitopo PRAME o su análogo, un epitopo PSMA o su análogo o un epitopo Melan A o su análogo, o un epitopo tirosinasa o su análogo y semejantes o una combinación de los mismos. El epitopo PRAME puede ser por ejemplo, PRAME425-433 o su análogo. El epitopo PSMA puede ser, por ejemplo, PSMA288-297 o su análogo. El epitopo Melan A puede ser por ejemplo, Melan A26-35, o su análogo. El epitopo tirosinasa puede ser por ejemplo, tirosinasa369-377 o su análogo. El plásmido puede incluir, por ejemplo, pMEL-TYR o pPRA-PSM. El péptido como mínimo puede incluir por ejemplo, Melan A26-35 A27Nva (ENvaAGIGILTV) (SEQ ID NO: 2) o Melan A26-35 A27L (ELAGIGILTV) (SEQ ID NO : 3 ) , PRAME425-433 L426Nva, L433Nle ( SNvaLQHLIGNle ) (SEQ ID NO: 7), o análogo de péptido PSMA288_297 PSMA288_297 I297V (GLPSIPVHPV) (SEQ ID NO: 9), y semejantes o una combinación de los mismos.

En algunas modalidades, el inmunógeno puede ser para suministro directo al sistema linfático del paciente. El suministro directo al sistema linfático puede incluir por ejemplo, suministro intranodal.

En algunas modalidades, el tratamiento además puede incluir administrar un inmunopotenciador . El inmunógeno además puede incluir un inmunopotenciador. El inmunopotenciador puede incluir por ejemplo, citocinas, quimiocinas, moléculas co-estimuladoras , factores de trascripción, elementos de transducción de señal; agentes que están involucrados en procesamiento y presentación de antígeno, proteínas TAP 1 y ??? 2, proteasoma estándar o inmune, beta-2-microglobulina, y moléculas HC clase I o II; agentes que están involucrados en regular la ruta apoptósica, agentes que están involucrados en control o silenciado de genes, tales como enzimas de ADN metilante, moléculas que controlan cromatina, moléculas reguladoras de ARN; receptores tipo Tol (TLRs = Toll-Like Receptors) , péptidoglicanos, LPS o sus análogos, imiquimod, CpG oligodeoxinucleótidos no metilados (CpG ODNs) ; dsRNAs, dsDNA bacterial (que contiene motivos CpG) , y dsRNA sintético (polyLC) en APC y células inmunes innatas que ligan a TLR9 y TLR3, respectivamente; moléculas sintéticas o naturales orgánicas pequeñas que ligan a TLRs, imidas o quinolinas antivirales sintéticas, imiquimod y resiquimod; adyuvantes inmunopotenciadores que activan pAPC o células T, ligandos receptores de reconocimiento de patrón endociticos (PRR = Pattern Recognition Receptor), quillajas saponinas, y tucaresol y semejantes, o las combinaciones de los mismos. El tratamiento además puede incluir administrar un agente para reducir la naturaleza inmunosupresora del micro ambiente de tumor para promover un beneficio clínico.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 ilustra un plan de administración de plásmido y péptido empleado en modalidades ejemplares de la descripción.

La Figura 2 ilustra un diseño de plásmido para el plásmido pMel-pTyr y el Melan A y tirosina péptidos para administración .

La Figura 3 muestra un encogimiento de tumor del 59% que dura 48+ semanas.

La Figura 4 muestra un 60% de encogimiento de tumor que dura 36+ semanas.

La Figura 5 muestra un 30% de encogimiento de tumor que dura 36+ semanas.

Las Figuras 6A-6B muestran células T Melan A MART-1 en linea de referencia con etapa de enfermedad y resultado clínico. La Figura 6A muestra sujetos con respuesta de tumor (enfermedad linfática) o sin repuesta de tumor en la etapa de la enfermedad (etapa IV(Mlb,, c) o etapa IIIC y IV( la)). La Figura 6B muestra el resultado clínico (PD, PR o SD) de sujetos en la Figura 6A. (†SD para 2 ciclos. Sujetos†† con duración de tratamiento de >1 año) . Círculos cerrados representan sujetos sin respuesta del tumor. Círculos abiertos representan sujetos con respuesta del tumor (enfermedad linfática) .

La Figura 7 muestra la expansión de células T específicas de epítopo en sangre periférica como se mide por tinción de multímero MHC (ensayo de tetrámero) .

La Figura 8 ilustra un diseño de plásmido para el plásmido pPRA-PSM y los péptidos PRAME y PSMA para administración .

La Figura 9 muestra un encogimiento de tumor que dura 36 semanas.

La Figura 10 muestra asociación del beneficio clínico con la expansión de células T específicas de epítopo como se mide por tinción de multímero HC.

La Figura 11 muestra asociación de inmuno respuesta con resultado clínico. PC: carcinomas de próstatas, RCC: carcinomas renales, Mel: melanomas, ESO: Esofágicos, * células T específicas de Epítopo en línea de referencia detectadas .

La Figura 12 ilustra · una comparación de las evaluaciones de crecimiento de tumor por los investigadores de la prueba (barras abiertas) y las de un radiólogo independiente (barras negras) que muestran concordancia cualitativa en una tendencia de reducción o estabilización de tumor en pacientes con enfermedad predominantemente localizada en los nodos linfáticos y progresión de tumor en pacientes con enfermedad metastásica visceral.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Definiciones A menos de que de otra forma sea claro desde el contexto del uso de un término aquí, los siguientes términos citados en general deberán tener los significados indicados para los propósitos de esta descripción.

Como se emplea aquí, "tratamiento" o "tratar" se refieren al acto de tratar médicamente a un paciente, tal como por administración o aplicación de remedios a un paciente.

Como se emplea aqui, "régimen inmunoterapéutico , tratamiento o protocolo" se refiere a un plan para tratamiento médico o un curso de tratamiento deseado. Los regímenes, tratamientos o protocolos para utilizar en los métodos aquí descritos son regímenes terapéuticos para utilizar en ambientes clínicos o médicos. El régimen o protocolo puede especificar cualquier parte de o la totalidad del programa de administración, la ruta de administración y los reactivos específicos a administrar.

Como se emplea aquí, "inmunoterapia activa" o "inmunoterapéutico activo" se refieren a procedimientos o reactivos para estimular el propio sistema inmune del cuerpo para luchar contra una enfermedad. Aquí se incluyen agentes, composiciones o productos inmunoterapéuticos activos. El inmunoterapéutico activo se refiere a un inmunógeno o un agente o producto o composición inmunogénica que puede emplearse como un inmunoterapéutico o terapéutico, por ejemplo al proporcionar o ayudar en el tratamiento de la enfermedad. En algunas modalidades, el agente, producto o composición inmunoterapéuticos activos pueden proporcionar o ayudar en curar una enfermedad. En algunas modalidades, el agente, producto o composición inmunoterapéuticos activos proporcionan o ayudan en mejorar una enfermedad.

Como se emplea aquí, "inmunización" se refiere a un proceso para inducir o amplificar una respuesta del sistema inmune a un antigeno. En forma alterna, se refiere a un proceso para reducir/disminuir el progreso de cáncer, o evitar/bloquear metástasis de esta enfermedad por el sistema inmune. En la primera definición, puede conmutar una inmuno respuesta protectora y/o terapéutica, particularmente inmunidad activa o pro-inflamatoria, aunque también puede incluir una respuesta regulatoria.

Como se emplea aquí, "inmunoreactividad" se refiere a una interacción bioquímica entre un receptor inmune y un antígeno, para propósitos de la presente invención particularmente un receptor de célula T (TCR = T cell receptor) y un complejo MHC/antígeno, respectivamente. En algunas modalidades, la inmunoreactividad puede ser parte, o el resultado de una respuesta inmune.

Como se emplea aquí, "hacer diana en un antígeno blanco" se refiere a promover una respuesta inmune que reconoce el antígeno diana o al menos un epítopo particular del mismo. De manera similar, "hacer diana en un tumor o célula" se refiere a promover una inmuno respuesta que reconoce un antígeno o cuando menos un epítopo particular del mismo expresado por el tumor o célula blanco u objetivo. En algunas modalidades, la inmuno respuesta es una respuesta de célula T efectora. En algunas modalidades, la respuesta de célula T efectora incluye una respuesta de célula T citotóxica (CTL = cytotoxic T cell) . En algunas modalidades, el efecto terapéutico del inmunoterapéutico activo aquí descrito está mediado por células T efectoras.

Una "célula diana" como se emplea aquí, se refiere a una célula asociada con una condición cancerosa en la que pueda actuarse por los componentes del sistema inmune, tal como por ejemplo, una célula neoplástica o una célula asociada con una neovasculatura de tumor. En algunas modalidades, una célula diana es una célula para ser diana por las vacunas y métodos aquí descritos. Una célula diana de acuerdo con esta definición incluye, pero no está limitada a una célula neoplástica. En modalidades adicionales, una célula diana o blanco u objetivo es una célula que expresa el antigeno objetivo o presenta el epitopo objetivo.

Como se emplea aquí, un "antigeno asociado a diana (TAA = Target-Associated Antigen) " se refiere a una proteina o polipéptido presente en una célula diana.

Como se emplea aquí, un "antigeno asociado con tumor (TuAA = Tumor-Associated Antigen)" se refiere a un TAA, en donde la célula diana es una célula asociada con tumor. En diversas modalidades, un TuAA es un antigeno asociado con una célula neoplástica, o células no cancerosas del tumor tales como neovasculatura de tumor u otras células estromales dentro del microambiente del tumor.

El término "epitopo" se refiere a un sitio en un antigeno reconocido por un anticuerpo o un receptor de antigeno. Un epitopo de célula T en general es un péptido corto derivado de un antigeno de proteina (aunque los antigenos que no son de proteina también se conocen) . Epitopos de célula T ligan a moléculas MHC y se reconocen por una célula T particular. En algunas modalidades, un epitopo puede incluir, pero no está limitado a péptidos presentados en la superficie de las células, los péptidos se ligan de manera no-covalente con la fisura de enlace de MHC clase I, de manera tal que puedan interactuar con receptores de célula T (TCR) .

Como se emplea aquí, "inmunopotenciadores" o "adyuvante inmunopotenciador" se refieren a cualquier molécula que mejora, aumenta, promueve o modula por incremento la actividad del sistema inmune o sus células, y particularmente sus funciones efectoras, a través de una interacción diferente a un receptor de antigeno. Un "adyuvante inmunopotenciador" se refiere a un adyuvante que activa células que presentan antigeno profesional (pAPCs = professional Antigen Presenting Cells) o células T incluyendo por ejemplo: ligandos TLR, ligandos de Receptor de Reconocimiento de Patrón Endocitico (PRR = Pattern Recognición Receptor) , quillaja saponinas, tucaresol, citocinas, y semejantes. Algunos adyuvantes preferidos se describen en arciani, D., J. Drug Discovery Today 8:934-943, 2003, que se incorpora aquí por referencia en su totalidad.

Como se emplea aquí, "ciclo terapéutico" o "ciclo" se refiere a una o más dosis de cebado/inducción/atrapamiento seguidas por una o más dosis de refuerzo/amplificación. Esta secuencia puede ser repetida tanto como sea necesario para mantener una fuerte inmuno respuesta in vivo. De esta manera, en algunas modalidades, un ciclo terapéutico incluye dos o más dosis de cebado/inducción/atrapamiento seguidas por dos o más dosis de refuerzo/amplificación. En algunas modalidades, un ciclo terapéutico o ciclo incluye una dosis de cebado/inducción/atrapamiento seguida por una o más dosis de refuerzo/amplificación. En otras modalidades, un ciclo terapéutico incluye una o más dosis de cebado/inducción/atrapamiento seguidas por una dosis de refuerzo/amplificación. El régimen protocolo o tratamiento inmunoterapéutico, descrito aquí puede en general involucrar uno o más ciclos múltiples (tales como 2 o más, 4 o más, 6 o más, 8 o más, 10 o más o asi en adelante) .

Como se emplea aquí "lesión diana" se refiere a un tumor en un paciente, con tamaño suficiente que pueda ser evaluado para cambio en tamaño, especialmente encogimiento, en respuesta a una terapia de cáncer. El tamaño de tumor puede ser determinado, por ejemplo por formación de imagen del tumor o medición directa. La formación de imagen del tumor puede lograrse por exploración CT, MRI, y/o exploración PET, y semejantes. Lesiones de la piel pueden ser medidas directamente. En algunas modalidades, las lesiones diana miden más de 1 cm en su dimensión más grande al inicio del tratamiento o evaluación.

Como, se emplea aquí "lesiones no diana", empleadas en contraposición a "lesiones diana" son tumores que miden menos de 1 cm ¦ en su dimensión más grande al inicio de tratamiento o evaluación.

Como se emplea aquí "confinado linfáticamente", "no progresa más allá del sistema linfático" y construcciones similares, se entenderán en el contexto del progreso típico de la enfermedad maligna en donde primero hay una diseminación local próxima al sitio de origen ya sea dentro del mismo tejido u órgano o en tejidos u órganos adyacentes seguido por diseminación a través de los órganos linfáticos secundarios, particularmente a nodos linfáticos en forma local o sistémica y posteriormente a sitios viscerales distantes. En algunos casos, también hay metástasis de la piel o subcutáneas antes de la aparición de metástasis viscerales. Las expresiones "confinado linfáticamente" y/o "no progresa más allá del sistema linfático" como se emplean aquí, pueden emplearse para referirse al límite actual de progreso de la enfermedad en un paciente o el estado de la enfermedad seguido por eliminación quirúrgica y/u otras intervenciones. De esta manera, estos términos pueden referirse a cualquier punto en el progreso de la enfermedad antes de diseminación a las visceras. En algunas modalidades, estos términos pueden emplearse para referirse a pacientes en etapas de la enfermedad más específicamente definidas como se describe aquí. En algunas modalidades, un paciente se caracteriza porque tiene enfermedad confinada linfática debido a la eliminación o ablación de lesiones viscerales después de cirugía u otro tratamiento. En otras modalidades, un paciente se caracteriza porque tiene una enfermedad que está "confinada primordialmente en forma linfática" o que tiene solo "progreso limitado más allá del sistema linfático" (y semejantes) con base en la presencia de metástasis viscerales que se limitan en tamaño y/o número en comparación con un tamaño y/o número predeterminados.

La presente descripción se refiere a una base significante en la utilización de inmunoterapias activas contra carcinomas y el descubrimiento y uso de biomarcadores de compañía de base mecanística, tales como inmunoreactividad existente previa, para utilizar en forma más ventajosa productos inmunogénicos que inducen, promueven el crecimiento de, activan y/o de otra forma estimulan células T efectoras que hacen diana en antígenos de tumor en el tratamiento de cáncer. Avances ejemplares que se proporcionan por los métodos e . inmunógenos aquí descritos incluyen, pero no están limitados a identificación del o de los sub-conj untos de pacientes en donde es pronosticablemente efectiva la inmunoterapia; el logro de respuestas objetivo durables con una vacuna de cáncer a una proporción o velocidad fácilmente observable; primera observación de potencia selectiva de inmunoterapéuticos administrados en forma linfática contra enfermedad metastásica linfática; valor de pronóstico de estado inmune existente previo a él o a los antigenos diana para pronosticar efectividad de inmunoterapia (al menos contra enfermedad metastásica linfática) ; supervivencia libre de progreso prolongado en enfermedad metastásica dentro de sub-conj untos de pacientes.

En algunas modalidades, la descripción se refiere a métodos para identificar o seleccionar pacientes para un régimen inmunoterapéutico, que involucra la administración de un agente que genera una respuesta de célula T efectora contra un antigeno diana. Por ejemplo, la respuesta de célula T efectora puede ser una respuesta CTL. En algunas modalidades, la descripción se refiere a un método para tratar un paciente que tiene un carcinoma en donde inmunoreactividad existente previa a cuando menos uno o más antigenos diana se estima en un paciente antes de selección para un régimen inmunoterapéutico. Por ejemplo, en algunas modalidades, se elige un paciente para tratamiento con un inmunoterapéutico o régimen inmunoterapéutico particular en base a tener o no tener una inmunoreactividad existente previa a un TuAA particular o su epitopo. En los métodos descritos aquí, seleccionar o identificar a un paciente puede involucrar estimar el nivel (por ejemplo, la presencia o ausencia) de una inmunoreactividad existente previa a cuando menos un antigeno diana — es decir la presencia o ausencia de células T que reconocen un antigeno diana, o al menos un epitopo particular de la misma — antes de iniciar el régimen terapéutico. La presencia o ausencia de una inmunoreactividad existente previa contra un antigeno objetivo o diana puede medirse por ejemplo, por tinción de multimero MHC y/o ensayo ELISPOT, y/o semejantes. · En algunas modalidades, seleccionar o identificar incluye seleccionar o identificar un paciente que no tiene o tiene mínima imunoreactividad existente previa al antígeno diana. En algunas modalidades, seleccionar o identificar incluye seleccionar o identificar un paciente que tiene una inmunoreactividad existente previa al antígeno diana. La inmunoreactividad o la inmunidad del paciente contra un antígeno diana se mide y compara con un valor predeterminado. Si la inmunoreactividad está por encima o igual al valor predeterminado, el paciente es categorizado porque tiene una inmunoreactividad existente previa contra el antígeno diana. Si la inmunoreactividad está por debajo del valor predeterminado, el paciente es categorizado porque no tiene o tiene mínima inmunoreactividad existente previa al antígeno diana. El valor predeterminado puede seleccionarse con base en consideraciones incluyendo, por ejemplo la técnica empleada para medir el valor (por ejemplo, tinción de multímero MHC, y/o ensayo ELISPOT, y/o semejantes) , el "valor normal de inmunoreactividad" contra el antígeno diana y semejantes, o una combinación de los mismos. El "valor normal de la inmunoreactividad", puede ser por ejemplo el del mismo paciente antes que el paciente adquiera la enfermedad en cuestión, o el valor promedio de personas sanas (por ejemplo, personas sin la enfermedad en cuestión) de una región específica, grupo de edad, género y/o semejantes. En algunas modalidades, un paciente con inmunoreactividad existente previa contra un antígeno diana tiene una cantidad de células T específicas de antígeno al menos 3 veces mayor que el límite inferior de detección del ensayo. Por el contrario, un paciente que carece inmunoreactividad existente previa contra un antígeno diana tiene una cantidad de células T específicas de antígeno menor que 3 veces el límite inferior de detección del ensayo. En la modalidad ejemplar, el límite inferior de detección de tinción de multímero MHC (ensayo tetrámero) es 0.03 por ciento de células T CD8+ tetrámero positivas por número total de células T CD8+.

Modalidades aquí descritas se refieren a métodos de tratamiento en donde un paciente con el cual la enfermedad no se ha diseminado más allá del sistema linfático; se elige para tratamiento con un régimen que incluye administración intralinfática directa de un reactivo inmunoterapéutico . En una modalidad ejemplar, la administración es a un nodo linfático no enfermo. De esta manera, en algunas modalidades, los métodos aquí descritos incluyen seleccionar o identificar un paciente que tiene una enfermedad metastásica que se confina linfáticamente (ya sea debido a que la enfermedad no ha progresado más allá del sistema linfático o se confina después de cirugía u otro tratamiento) o que está más allá del sistema linfático solo en un grado mínimo (por ejemplo, que tiene lesiones metastásicas más allá del sistema linfático pero no en un órgano vital, por ejemplo pero no limitado a lesiones de tejido suave o blando, en donde estas lesiones son diez o menos en número; o lesiones metastásicas que no excluyen necesariamente aquellas en órganos vitales que tienen menos de 1 cm en diámetro) . En algunas modalidades, los métodos incluyen seleccionar o identificar un paciente que tiene una enfermedad metastásica que no ha progresado a la presencia de metástasis viscerales. En general, un paciente con una enfermedad invasiva en el sitio de origen no se excluye de estos grupos aunque en algunas modalidades sí. En algunas modalidades, seleccionar o identificar de acuerdo con los métodos aquí descritos incluye seleccionar o identificar un paciente de melanoma que solo tiene lesiones en la piel.

De esta manera, en algunas modalidades, los métodos aquí descritos incluyen seleccionar o identificar a un paciente que tiene enfermedades/lesiones metastásicas fuera de o más allá del sistema linfático. En algunas modalidades, estas lesiones metastásicas que se han diseminado más allá del. sistema linfático, se ha diseminado por ejemplo a tejido blando, pero no a un órgano vital, y las lesiones son diez o menos que diez en número. En algunas modalidades, hay 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o 1 lesión. En algunas modalidades, las lesiones metastásicas más allá del sistema linfático son menos que un centímetro de diámetro. En algunas modalidades, las lesiones con menos de un centímetro de diámetro pueden estar en un órgano vital.

En algunas modalidades, los métodos aquí descritos incluyen seleccionar o identificar un paciente que no tiene metástasis más allá del órgano o tejido de origen de la enfermedad, o en donde ha habido diseminación solo a los órganos o tejidos adyacentes. En algunas modalidades, un paciente cuya enfermedad se ha diseminado o propagado más allá del sistema linfático a un órgano no vital y de quien las lesiones metastásicas son diez o menos lesiones, se elige para tratamiento con un inmunoterapéutico de acuerdo con los métodos aquí descritos.

Selección de Pacientes Como se discute aquí, pacientes en general pueden seleccionarse con base en el estado del tipo HLA, el nivel de inmunoreactividad existente previa a un antigeno objetivo o diana, y/o si la enfermedad está confinada linfáticamente o ha progresado más allá del sistema linfático. De esta manera, en algunas modalidades, la selección de paciente puede incluir el ser positivo para un tipo de HLA particular en donde el régimen inmunoterapéutico genera una respuesta restringida por ese tipo HLA, por ejemplo, pero no limitado a HLA-A2 o HLA-A*0201.

En algunas modalidades, los pacientes se eligen de acuerdo con si una inmunoreactividad existente previa a un antigeno objetivo está substancialmente presente, es mínima o ausente en comparación con una línea de referencia o un valor predeterminado como aquí se discute. La presencia o ausencia de una inmunoreactividad existente previa contra un antígeno objetivo, puede medirse por ejemplo por tinción de multímero MHC, y/o ensayo ELISPOT, y/o semejantes. Por ejemplo, en algunas modalidades, los métodos aquí descritos involucran seleccionar un paciente con una inmunoreactividad existente previa a un antígeno diana. De esta manera, pacientes de quienes la inmunoreactividad contra un antígeno diana está en o sobre o substancialmente sobre un valor predeterminado, se eligen para administración de una composición inmunoterapéutica activa que hace blanco en el antigeno diana o uno o más de estos epitopos. Por ejemplo, en algunas modalidades, se eligen pacientes que tienen una inmunoreactividad existente previa de linea de referencia a un antigeno diana que es mayor que o substancialmente sobre un valor predeterminado, por ejemplo, mayor que aproximadamente 0.1% de células T CD8+ como se determina por análisis de tinción de multimero MHC. De ' esta manera, en algunas modalidades, pacientes que tienen una inmunoreactividad de linea de referencia al antigeno diana que es mayor que un valor predeterminado, por ejemplo mayor que aproximadamente 0.10%, aproximadamente 0.11%, aproximadamente 0.12%, aproximadamente 0.13%, aproximadamente 0.14%, aproximadamente 0.15%, aproximadamente 0.16%, aproximadamente 0.17%, aproximadamente 0.18%, aproximadamente 0.19% y aproximadamente 0.20% (% de células T teñidas de todas las células T CD8+ ) como se determina por análisis de multimero MHC, se eligen para administración de una composición inmunoterapéutica activa que hace diana en el antigeno objetivo, o uno o más de sus epitopos.

En algunas modalidades, los métodos involucran seleccionar un paciente sin, o con mínima inmunoreactividad existente previa al antígeno diana. De esta manera, pacientes con inmunoreactividad contra un antígeno diana caen en o por debajo de un valor predeterminado, se eligen para administración de una composición inmunoterapéutica activa que hace blanco en el antigeno diana o uno o más de sus epitopos. Por ejemplo, en algunas modalidades, pacientes que tienen una inmunoreactividad existente previa de linea de referencia a un antigeno diana con menos de un valor predeterminado, por ejemplo menos que aproximadamente 0.1% de células T CD8+ como se determina por análisis de multimero MHC, se caracteriza porque no tienen, o tienen mínima inmunidad existente previa y se eligen para administración de una composición inmunoterapéutica activa que hace blanco en el antígeno diana, o uno o más de sus epitopos. Por ejemplo, pacientes que tienen una inmunoreactividad de linea de referencia al antígeno diana con menos de un valor predeterminado, por ejemplo, menos de aproximadamente 0.10%, aproximadamente 0.09%>, aproximadamente 0.08%>, aproximadamente 0.07%, aproximadamente 0.06%, aproximadamente 0.05%, aproximadamente 0.04%,. aproximadamente 0.03%, aproximadamente 0.02%, o aproximadamente 0.01%, o no distinguibles de los niveles de fondo, como se determina por análisis de multimero MHC, se eligen para tratamiento.

Como será aparente para aquellos con destreza en la técnica, los valores predeterminados dependen de la técnica utilizada para medir inmunoreactividad y la respuesta que se busca. Con base en la presente descripción, estos valores serán aparentes para aquellos con destreza en la técnica para un tipo particular de ensayo o medición, como clasificaciones/estratificaciones adicionales o alternas útiles para los métodos aquí descritos.

En algunas modalidades, la selección o identificación además incluye seleccionar o identificar a un paciente que tiene una enfermedad metastásica que no ha progresado más allá de una etapa predeterminada. La etapa de un cáncer es un descriptor de qué tanto se ha diseminado el cáncer. Como se comprenderá por aquellos con destreza en la técnica, aunque la terminología específica difiere para la clasificación por etapas de diversos cánceres, los principios subyacentes generales son los mismos.

Es significativo el hablar de cánceres que se localizan en el sitio u órgano o tejido de origen, han invadido tejido normal circundante, han invadido el sistema linfático, han invadido las venas y capilares, se han o no sometido a metástasis a órganos distantes/viscerales, para cualesquiera tipos de carcinoma. Para melanoma, por ejemplo, la etapa a menudo toma en cuenta el tamaño y/o espesor de un tumor, que tan profundo ha penetrado las capas dérmicas o tejido subcutáneo, si ha invadido órganos adyacentes, qué tantos nodos linfáticos ha sometido a metástasis (de haber) , y si se ha diseminado a órganos distantes. Las letras TN (Tumor-Nodo-Metástasis) se emplean para definir adicionalmente la etapa del melanoma por ejemplo, en donde la letra T representa el espesor del tumor; la letra N representa el número de nodos linfáticos involucrados; y la letra M representa metástasis en órganos distantes. Cada una de estas letras puede incluir un valor numérico (por ej emplo, 0, 1 etc.) para indicar el espesor, número de nodos linfáticos, o extensión de metástasis respectivamente. Por ejemplo, para evaluar metástasis, el valor numérico empleado es "0", si no ha ocurrido metástasis o T si hay presentes metástasis. (Ver, e.g., Restas, S. and Mastrangelo, MJ, Seminare in Oncology 2007 34 ( 6) : 491-497 , que aquí se incorpora por referencia en su totalidad) .

Las etapas de melanoma, por ejemplo, son etapas 0, I, II, III o IV al menos parcialmente dependen de la localización de tejido enfermo (por ejemplo, el tejido de tumor) y en algunas etapas puede incluir los órganos linfáticos. Como se emplea aquí, los órganos linfáticos incluyen, por ejemplo, el bazo, nodos linfáticos, bazos linfáticos, y semejantes. Los melanomas de etapas 0, IA, IB, toman en cuenta el tamaño de tumor o espesor; no involucra metástasis y son altamente curables. Los melanomas de etapas IIA, IIB y IIC muestran incrementado tamaño o espesor de tumor que el observado en la etapa I, no involucran los nodos linfáticos, y son curables. Los melanomas de etapas IIIA, IIIB y IIIC se refieren a una etapa avanzada que toma en cuenta el tamaño o espesor de tumor, si o no están involucrados nodos linfáticos y que el cáncer ha empezado a someterse a metástasis. Melanoma de etapa IV es otra etapa avanzada que además de las características tomadas en cuenta para melanoma de Etapa III, se asocia con metástasis, representado por "MI" — metástasis distante. Por ejemplo, para melanoma, MI etapa IV indica que el melanoma no ha progresado más allá de los nodos linfáticos, (es decir enfermedad linfática), está limitado a tejidos o nodos linfáticos subcutáneos y de la piel distante, mientras que la enfermedad que ha progresado más allá del nodo linfático a la etapa Mlb o Mlc es representativa de enfermedad visceral, es decir ha ocurrido metástasis al pulmón, o cualquier otros sitios viscerales, o metástasis distante con niveles elevados de deshidrogenasa láctica de suero (LDH = lactic dehydrogenase ) en cualquier sitio.

Las etapas de carcinoma de células renales o cáncer de riñon son etapa I, II, III o IV. Las etapas I y II, toman en cuenta el tamaño o espesor de tumor, y no involucran la metástasis. Carcinoma de células renales de etapa III toma en cuenta el tamaño o espesor de tumor, si o no uno o más nodos linfáticos cercanos están involucrados, y si el cáncer ha invadido los bazos sanguíneos del riñon o el tejido graso circundante. Carcinoma de células renales de etapa IV es una etapa avanzada, que además de las características tomadas en cuenta para Etapa III de la enfermedad, se asocia con metástasis a la glándula adrenal, pulmón, hígado, huesos o cerebro .

Las etapas de cáncer de próstata son etapas I, II, III o IV. Cáncer de próstata etapa I toma en cuenta si el grado de diseminación de tumor es a una mitad, o menos de un lóbulo de la próstata y que el nivel de antígeno específico de próstata (PSA = Prostate Specific Antigen) es menos que 10 nanogramos por mililitro. En cáncer de próstata etapa IIA, el grado de diseminación del tumor es similar al de la Etapa l o a más de la mitad de un lóbulo de la próstata, y el nivel de PSA es al menos 10 nanogramos por mililitro pero menos que 20 nanogramos por mililitro. En cáncer de próstata en la Etapa IIB, el grado de diseminación del tumor es ambos lóbulos de la próstata, y el nivel de PSA es de 20 nanogramos por mililitro o superior. En cáncer de próstata de Etapa III, el tumor se ha diseminado más allá de la próstata a las vesículas seminales y el nivel de PSA varía. En cáncer de próstata en la Etapa IV, enfermedad de etapa avanzada, el tumor se ha diseminado más allá de las vesículas seminales a nodos linfáticos de tejidos u órganos cercanos, tales como la vejiga, pelvis o recto, o metástasis en nodos linfáticos, órganos o tejidos distantes incluyendo huesos; niveles de PSA son variados.

En algunas modalidades, el producto inmunoterapéutico activo aquí descrito puede utilizarse para tratar enfermedad, tal como melanoma o glioblastoma, localizada en los nodos linfáticos. En algunas modalidades, el inmunoterapéutico activo aqui descrito se utiliza para tratar una etapa de enfermedad del cáncer (tal como por ejemplo, glioblastoma, melanoma, próstata, carcinoma de células renales) , en donde hay una diseminación limitada de enfermedad más allá del sistema linfático, o la enfermedad de otra forma está confinada (en forma predominante) al sistema linfático después de cirugía u otro tratamiento, y cualquier metástasis (lesiones) que se han diseminado más allá del sistema linfático son diez o menos en número, y no están en un órgano vital o tienen menos de un centímetro de diámetro si involucra un órgano vital. De esta manera, en algunas modalidades, las metástasis se han diseminado o progresado más allá del sistema linfático pero no en un órgano vital (tales ejemplos de órganos vitales incluyen pulmón, hígado, glándula adrenal) y estas lesiones metastásicas son diez o menos de diez en número. En algunas modalidades, las lesiones metastásicas se han diseminado más allá del sistema linfático, incluyendo en algunas modalidades, diseminación a un órgano vital, y estas lesiones metastásicas tienen menos de un centímetro de diámetro.

En algunas modalidades, el inmunoterapéutico activo aquí descrito puede utilizarse para tratar enfermedad clínicamente manifiesta (macroscópica), (por ejemplo, enfermedad tal como melanoma avanzado) , medido utilizando técnicas de formación de imagen convencionales tales como exploración de tomografia computarizada (CT = Computed Tomography) , formación de imagen por resonancia magnética (MRI = Magnetic Resonance Imaging) , tomografia de emisión de positrones (PET = Positrón Emission Tomography), barrido o exploración óseo o rayos-X. En algunas modalidades, el producto inmunoterapéutico activo puede emplearse para tratar enfermedad microscópica (es decir enfermedad detectable por biopsia pero no por técnicas de formación de imagen) , enfermedad residual mínima y evitar o retardar relapso de la enfermedad. En algunas modalidades, producto inmunoterapéutico aquí descrito se utiliza para evitar desarrollo de lesiones metastásicas clínicamente manifiestas.

Regímenes inmunoterapéuticos ejemplares aquí descritos que incluyen administración directa al sistema linfático secundario se vieron particularmente efectivos contra cánceres que no han progresado aún más allá del sistema linfático, o lo han hecho solo en una proporción limitada. Mientras que inmunización intralinfática se conoce que es ventajosa respecto a la sensibilidad a inmunógeno, por ejemplo^ una ventaja referente a la ubicación anatómica de la enfermedad diana ni fue pronosticable ni esperada. De esta manera, en algunas modalidades, un paciente con enfermedad confinada linfática o enfermedad confinada linfática primordialmente se elige para tratamiento bajo un régimen inmunoterapéutico, incluyendo administración intralinfática de un inmunógeno que hace blanco en un antigeno asociado con tumor. En algunas modalidades, administración directa a un nodo linfático se utiliza. En algunas modalidades, el cáncer no se ha diseminado aún al sistema linfático. En algunas modalidades, el tratamiento inhibe o evita diseminación de la enfermedad, por ejemplo diseminación de la enfermedad más allá del sistema linfático.

Medición de Inmunoreactividad En modalidades de los métodos aquí descritos, se utilizan métodos para evaluar en forma rápida y confiable la respuesta inmune de un paciente a un componente o múltiples componentes de una composición inmunoterapéutica activa. En algunas modalidades, incluyendo definir o clasificar a un paciente como un respondedor inmuno positivo contra un no respondedor. Por ejemplo, la inmuno respuesta del paciente a cuando menos un antigeno inmunizante (o antigeno diana) puede medirse por tinción de multimero MHC y/o ensayo ELISPOT, y/o semejantes, y criterio predeterminado para clasificar al paciente como un respondedor inmuno positivo puede ser dos veces mayor tinción de multimero MHC y/o tres veces mayor que reacción de ELISPOT respecto a una linea de tratamiento previo y significativamente diferente del fondo de ensayo. Inmunoreactividad existente previa puede estimarse contra fondo del ensayo. Estas metodologías son bien conocidas en la técnica. Inmunospot ligado-enzima (ELISPOT) es una técnica sensible para la detección de biomarcadores liberados o desprendidos por células o detección de células individuales que secretan un biomarcador de interés, tal como por ejemplo, células que secretan anticuerpos, citocinas, quimiocinas o granzimas. La técnica está bien establecida y se correlaciona cercanamente con la técnica de ensayo inmunosorbente ligado a enzima (ELISA) (Vaquerano et al, Biotechniques . 1998 Nov; 25(5): 830-4, 836, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad) .

Como se emplea aquí, una tinción de multímero MHC (por ejemplo, ensayo de tetrámero) se refiere al método para detectar la presencia de células T específicas de antígeno en donde complejos péptido-MHC que se han multimerizado y conectado a una molécula reportera, típicamente un colorante fluorescente, se ponen en contacto con células T, ligando a aquellas que expresan un receptor de célula T (TCR) que reconoce el complejo péptido-MHC y permiten su detección a través de la molécula reportera. Solamente a manera de ejemplo, el multímero puede incluir un dímero, un pentámero, un tetrámero o semejantes. Estos reactivos están comercialmente disponibles. Como también se emplea aquí, un ensayo ELISPOT (o un ensayo inmunospot ligado a enzima IFN-gamma) se refiere al método empleado para estimar la respuesta CD8+ CTL al medir la producción IFN-gamma por células efectoras especificas en un ensayo ELISPOT. En este ensayo, las células se inmovilizan en la superficie plástica de un pozo de micro titulación y se agregan células efectoras. El enlace de células por células efectoras específicas de antígeno dispara o activa la producción de citoquinas incluyendo IFN-gamma por las células efectoras. Las células después son teñidas para detectar la presencia de IFN-gamma intracelular y el número de focos de tinción positiva (puntos) se encuentran bajo microscopio.

En algunas modalidades, la respuesta puede estimarse con base en el fenotipo de células T especificas de antígeno utilizando por ejemplo, citometría de flujo para detectar marcadores de superficie asociados con diferentes fenotipos. Por ejemplo, un aumento en la proporción de células T específicas de antígeno que tienen un fenotipo efector o un fenotipo de memoria/efector pueden tomarse como una respuesta positiva incluso en la ausencia de un aumento en el número total de células T específicas de antígeno. Esta práctica es bien conocida en la técnica y reactivos apropiados están comercialmente disponibles.

Otros métodos para determinar o estimar una inmuno respuesta a una composición inmunoterapéutica activa como se describe aquí, 'incluyen por ejemplo pero no están limitados a: tinción de citoquina intracelular (ensayo ICS = Intracellular Cytokine Staining) ; respuesta de DTH de preferencia un DTH especifico de antigeno, ensayos de citoquina, ensayos de proliferación celular, ensayos de liberación de cromo y/o semejantes. Muchas tecnologías para llevar a cabo estos ensayos se conocen en la especialidad. Estos ensayos pueden ser específicos para un epítopo objetivo, no solo el antígeno, y de esta manera pueden ser referidos como determinaciones de epítopo. Reactivos que detectan la presentación de epítopos de célula T particulares de antígenos diana también pueden emplearse. Estos incluyen por ejemplo, líneas de células T e hibridomas, y más preferiblemente, anticuerpos específicos para el complejo péptido-MHC y multímeros TCR (ver, por ejemplo, Li et al., Nature Biotech. 23:349-354, 2005, que se incorpora aquí por referencia en su totalidad) . Reactivos apropiados están comercialmente disponibles.

En algunas modalidades, una muestra de paciente, tal como sangre u otros fluidos o secreciones corporales, tejido de tumor de biopsia o sus porciones, tales como linfocitos o citoquinas, son ensayados para una respuesta inmune. En algunas modalidades, la respuesta inmune se mide utilizando observaciones visuales del cuerpo, tales como una prueba de la piel para DTH.

En algunas modalidades, solo una o varias inmuno respuestas deseadas son ensayadas. En algunas modalidades, solo una o varias inmuno respuestas indeseadas son ensayadas. Todavía en otras modalidades, tanto inmuno respuestas deseadas como no deseadas son ensayadas. En algunas modalidades, la respuesta incluye en una forma no limitante, encogimiento de tumor o reducción o regresión, eliminación de tumor, inhibición de progreso de tumor, mejora del cáncer, enfermedad residual mínima, respuesta clínica (como se mide por los Criterios de Evaluación de Respuesta en Tumor Sólido (RECIST = Response Evaluation Criteria in Solid Tumor) ) , y semejantes. En algunas modalidades, el paciente es clasificado como un respondedor con base en expansión de células T específicas de antígeno después de inmunización, por ejemplo después de al menos dos ciclos de un régimen inmunoterapéutico y/o logro de un beneficio clínico. En modalidades particulares el paciente por ejemplo, un paciente de cáncer de próstata, es clasificado como un respondedor con base en regresión de tumor reflejan espejo por declive de PSA.

Inmunoreactividad Pre-existente a elan A Para evaluar inmunidad y resultados clínicos de inmunoterapia activa en pacientes con melanoma avanzado, se observaron respuestas de tumor (por ejemplo, encogimiento de tumor) en sujetos que tienen una inmunoreactividad existente previa a Melan A como se mide por tinción de multímero MHC para el epítopo Melan A dirigido. Estos es, resultados clínicos y/o respuestas de tumor se pronosticaron por una respuesta de célula T MART-l/Melan A existente previa antes de o al tiempo de inicio del régimen terapéutico. Como puede determinarse por una persona con destreza ordinaria en la técnica, la inmunoreactividad existente previa puede medirse por otros medios aquí descritos y conocidos en la especialidad.

De esta manera, algunas modalidades se refieren a métodos para tratar un paciente que tiene un carcinoma, tal como melanoma, (o un cáncer, tal como glioblastoma) , el método incluye seleccionar un paciente con una inmunoreactividad existente previa a cuando menos un antígeno diana o uno o más de sus epítopos, en donde el antígeno diana es Melan A, y administrar al paciente una composición inmunoterapéutica activa que hace diana en Melan A o uno o más de sus epítopos. En algunas modalidades, la composición inmunoterapéutica también hace diana al menos en un antígeno adicional asociado con el tumor, o uno o más de sus epítopos. En algunas modalidades, el antígeno asociado a tumor adicional es tirosinasa.

En algunas modalidades, pacientes que tienen enfermedad confinada al sistema linfático (por ejemplo, enfermedad metastática etapa de Mía- las etapas de enfermedad se describen aquí en otra parte) muestran beneficio clínico. En algunas modalidades, los métodos aquí descritos incluyen seleccionar a un paciente que tiene un carcinoma que no ha progresado más allá del sistema linfático o los nodos linfáticos. En algunas modalidades, un paciente del cual la enfermedad se ha diseminado más allá del sistema linfático pero no a los órganos vitales y cuyas lesiones son diez o menos en número, muestra beneficio clínico. En algunas modalidades, hay lesiones en órganos vitales pero tienen menos de un centímetro de diámetro.

Como se demuestra aquí, una inmunoreactividad existente previa a Melan A, o a un epítopo particular del mismo, se ha asociado con un resultado clínico positivo ante tratamiento con un inmunoterapéutico que hace diana en Melan A. De esta manera, en algunas modalidades, un paciente se selecciona que recibe una composición inmunoterapéutica activa que hace diana en Melan A con base en un paciente que tiene una inmunoreactividad existente previa a Melan A. De esta manera, en algunas modalidades, un paciente con inmunoreactividad existente previa a un antígeno diana se elige para tratamiento con un régimen inmunoterapéutico para el cual se asocia un resultado clínico positivo con esta inmunoreactividad existente previa. En algunas modalidades, la diana incluye Melan A y el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad existente previa a Melan A y el régimen inmuno reactivo incluye co-administrar un inmunógeno y un inmunopotenciador para promover una inmuno respuesta (por ejemplo, una respuesta de célula T efectora) a elan A.

En algunas modalidades, el carcinoma es un cáncer positivo Melan A, tal como por ejemplo, melanoma o glioblastoma y semejantes, y al menos un antigeno diana es Melan A. En algunas modalidades, el agente o composición inmunoterapéuticos también pueden hacer diana en antigenos adicionales asociados con el tumor, por ejemplo pero no limitados a tirosinasa o uno o más de sus epitopos. El régimen inmunoterapéutico puede involucrar un protocolo de régimen de sensibilización de refuerzo. En algunas modalidades, se hace diana a un epitopo particular. En algunas modalidades, el epitopo dirigido incluye Melan A26-35. En modalidades particulares, los componentes del régimen inmunoterapéutico se suministran por separado y en forma intranodal.

En algunas modalidades, son seleccionados pacientes que tienen una inmunoreactividad existente previa de linea de referencia a antigeno dirigido a Melan-A mayor a un valor predeterminado por ejemplo, aproximadamente 0.1% de células T CD8+ se determinan por análisis de tinción de multimero MHC . En algunas modalidades, y simplemente a manera de ejemplo, pacientes con una inmunoreactividad de linea de referencia a un antigeno diana mayor a un valor predeterminado, por ejemplo mayor a aproximadamente 0.10%, aproximadamente 0.11%, aproximadamente 0.12%, aproximadamente 0.13%, aproximadamente 0.14%, aproximadamente 0.15%, aproximadamente 0.16%, aproximadamente 0.17%, aproximadamente 0.18%, aproximadamente 0.19%, aproximadamente 0.20% (% de células T teñidas de todas las células T CD8+) como se determina por análisis de multimero MHC, se caracterizan porque tienen una inmunoreactividad existente previa a Melan-A. Pacientes con inmunoreactividad existente previa al antigeno diana con menos de un valor predeterminado, por ejemplo menos de aproximadamente 0. 10%, o aproximadamente 0. 09%, aproximadamente .0. 08%, o aproximadamente 0. 07%, aproximadamente 0. 06%, o aproximadamente 0. 05%, aproximadamente 0. 04%, o aproximadamente 0. 03%, aproximadamente 0.02%, o aproximadamente 0.01% de células T CD8+ se caracterizan porque no tienen o tienen mínima inmunoreactividad contra Melan-A. Una persona con destreza ordinaria en la especialidad al leer la presente solicitud, comprenderá que el valor predeterminado contra el cual se compara la inmunoreactividad de línea de referencia, puede seleccionarse con base en el ensayo específico que se utiliza para evaluar la inmunoreactividad.

Inmunoreactividad Existente Previa a PRAME y PSMA Para evaluar inmunidad y resultados clínicos de inmunoterapia activa en pacientes con tumores sólidos positivos PRAME y PSMA, observaciones clínicas positivas (incluyendo pero no limitadas a enfermedad estable, habilitación de cirugía curativa aparente, reducción en títulos o velocidad de PSA) pueden asociarse con la falta de una inmunoreactividad existente previa a los antígenos dirigidos, o sus epítopos, y también con expansión o persistencia de células T en la sangre durante los primeros dos ciclos de tratamiento. Una proporción de pacientes que muestran beneficio clínico mostró expansión ¦ de células T específica de antígeno en la sangre a principio o después de inicio del régimen terapéutico. En algunas modalidades, un resultado clínico positivo puede ser pronosticado por inducción de novo de una respuesta de célula T con células efectoras . De esta manera, algunas modalidades involucran un enfoque teranóstico (ver por ejemplo la Solicitud de Patente de los E.U.A. Número de Serie 11/155,928 (Publicación Número US 2005-0287068 Al) , que aquí se incorpora por referencia en su totalidad) . De esta manera, en algunas modalidades, la falla para expansión o mantenimiento de una respuesta a cualquier antígeno, se utiliza como una base ya sea para interrumpir el tratamiento con el agente/composición inmunoterapéuticos o modificar el tratamiento a un protocolo más fuertemente inmunogénico, por ejemplo para incluir administración de un adyuvante incluyendo un adyuvante inmunopotenciador .

En algunas modalidades, pacientes que tienen enfermedad tales como por ejemplo cáncer de próstata o carcinoma de células renales, confinados al sistema linfático muestran beneficio clínico. En algunas modalidades, los métodos aquí descritos incluyen seleccionar al paciente que tiene un carcinoma que no ha avanzado más allá, o de otra forma está confinado al sistema linfático o nodos linfáticos. En algunas modalidades, un paciente cuya enfermedad se ha diseminado más allá del sistema linfático pero no a órganos vitales y que involucra diez o menos de diez lesiones, muestra beneficio clínico. En algunas modalidades, hay lesiones en órganos vitales pero tienen menos de un centímetro de diámetro.

Algunas modalidades se refieren a métodos para tratar a un paciente que tiene un carcinoma, los métodos incluyen seleccionar a un paciente sin o con mínima inmunoreactividad existente previa a PRAME y/o PS A o un epítopo particular de PRAME y/o PSMA, por ejemplo como se mide por tinción de multímero MHC y/o ensayo ELISPOT y/o semejantes, y administrar al paciente una composición inmunoterapéutica que hace blanco PRAME y/o PSMA o uno o más epítopos de uno o ambos antígenos, en donde una respuesta de célula T efectora se genera contra al menos un antxgeno diana o uno o más epítopos de uno o ambos antígenos. En algunas modalidades, la composición inmunoterapéutica también hace diana en al menos un antígeno adicional asociado con el tumor o uno o más de sus epítopos.

En algunas modalidades, pacientes que tienen una inmunoreactividad existente previa de linea de referencia mínima a PRAME y/o PSMA menor a un valor predeterminado, por ejemplo aproximadamente 0.2% de células T CD8+, como se determina por análisis de tinción de multímero MHC, se eligen. En modalidades particulares, pacientes que tiene una inmunoreactividad de línea de referencia a PRAME y/o PSMA o menor que aproximadamente 0.20%, aproximadamente 0.15%, aproximadamente 0.14%, aproximadamente 0.13%, aproximadamente 0.12%, aproximadamente 0.11%, aproximadamente 0.10%, aproximadamente 0.09%, aproximadamente 0.08%, aproximadamente 0.07%, aproximadamente 0.06%, aproximadamente 0.05%, aproximadamente 0.04%, aproximadamente 0.03%, aproximadamente 0.02% o aproximadamente 0.01% (% de células T teñidas de todas las células T CD8+) como se determina por análisis de multímero MHC, o no distinguir desde el control, se caracteriza porque no tienen o tienen mínima inmunoreactividad existente previa al antígeno diana. Una persona con destreza ordinaria en la técnica, al leer la presente solicitud, comprenderá que el valor predeterminado contra el cual se compara la inmunoreactividad de línea de referencia puede seleccionarse con base en el ensayo específico que se utiliza para evaluar la inmunoreactividad.

En algunas modalidades, un paciente con un carcinoma positivo PRAME y/o PSMA y sin o con mínima inmunoreactividad existente previa a un antigeno o epitopo diana, como se mide por ejemplo por multimero MHC, y/o ensayo ELISPOT y/o semejantes, se elige y se administra un inmunoterapéutico activo que hace blanco en el antigeno PRAME y/o PSMA o uno o más de sus epitopos. En algunas modalidades, el carcinoma se elige de melanoma incluyendo melanoma ocular, cáncer de próstata que incluye cáncer de próstata refractario a hormonas y sensible a hormonas, cáncer renal tal como, por ejemplo, carcinoma de células renales, pancreático, colorectal y semejantes. En algunas modalidades, pacientes con estos cánceres particulares se eligen para tratamiento. En algunas modalidades, el inmunoterapéutico activo también puede hacer blanco en antigenos adicionales asociados con el tumor .

Un beneficio clínico puede incluir por ejemplo, pero no está limitado a regresión de tumor (parcial o completa) , estabilización de enfermedad, supervivencia prolongada, velocidad PSA (tiempo de duplicación) o nivel de expresión y semejantes. Por ejemplo, en algunas modalidades, el antígeno diana incluye PRAME y/o PSMA y el paciente muestra una respuesta inmune a cuando menos uno de los antígenos diana, en donde el método incluye co-administrar un-agente para reducir el micro ambiente de tumor inmunosupresor para promover un beneficio clínico.

Composiciones Inmunoterapéuticas En general, puede emplearse cualquier inmunógeno que induce una respuesta de células T efectoras contra los antigenos dirigidos, en especial composiciones adecuadas para suministro intralinfático . De esta manera, modalidades aquí descritas se refieren a composiciones inmunoterapéuticas activas que hacen diana en antigeno o uno o más de sus epitopos . Un antigeno contemplado en las modalidades aquí descritas, es aquel contra el cual puede montarse una respuesta por el sistema inmune de un sujeto, que tiene un tumor maligno por ejemplo, para atacar un tumor, de esta manera inhibiendo su crecimiento o encogimiento o reducción o su eliminación, y por lo tanto tratar o curar la enfermedad. El antigeno, en algunos casos, puede acoplarse a la enfermedad específica encontrada en el sujeto que se trata, para generar una respuesta de célula T efectora (también referido como una inmuno respuesta mediada por célula) . En algunas modalidades, la inmuno respuesta es una respuesta de linfocito T citotóxico (CTL = cytotoxic T lymphocyte) , es decir una reacción citotóxica por el sistema inmune que resulta en lisis de las células diana (por ejemplo, las células de tumor maligno) .

Antigenos pueden incluir, pero no están limitados a, proteínas, péptidos, polipéptidos y sus derivados, y también pueden ser macromoléculas no péptido. En algunas modalidades, el antígeno es una proteína. En algunas modalidades, el antigeno es un péptido. En algunas modalidades, el antigeno es un polipéptido. En algunas modalidades, el antigeno es un derivado de una proteina, péptido o polipéptido. De esta manera, modalidades de la descripción utilizan antigenos péptido de 8-15 aminoácidos de longitud, tales como antigenos de 8 aminoácidos de longitud, o antigenos de 9 aminoácidos de longitud, o antigenos de 10 aminoácidos de longitud, o antigenos de 11 aminoácidos de longitud, o antigenos de 12 aminoácidos de longitud, o antigenos de 13 aminoácidos de longitud, o antigenos de 14 aminoácidos de longitud, o antigenos de 15 aminoácidos de longitud. Este péptido puede ser un epitopo de un mayor antigeno, es decir es un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos que corresponde al sitio en la más grande molécula que se presenta por moléculas MHC/HLA y puede ser reconocido por ejemplo, por un receptor de antigeno o receptor de célula T. Estos más pequeños péptidos están disponibles a una persona con destreza en la técnica y pueden obtenerse al seguir las enseñazas de las Patentes de los E.U.A. Nos. 5,747,269 y 5,698,396; y las Solicitudes del PCT Nos. PCT/EP95/02593 (No. de Pub. WO/1996/001429) presentada en julio 4, 1995, y PCT/DE96/00351 (No. de Pub. WO/1996/027008) presentada en febrero 26, 1996, cada una de las cuales aquí se incorpora por referencia en su totalidad. Enfoques adicionales a descubrimiento de epitopo se describen en las Patentes de los E.U.A. Nos. 6,037,135 y 6,861,234, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad.

Antigenos ejemplares incluyen, PEIAME, PSMA (antigeno de membrana especifico de próstata) , Melan A, y tirosinasa, SSX-2, NYESO-1, MAGE-1 , MAGE-3, BAGE, GAGE- 1,, GAGE-2, CEA, RAGE, SCP-1, Hom/Mel-40 , p53, H-Ras, HER-2/neu, BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, antigenos de virus Epstein Barr, EBNA, antigenos de papilomavirus humano (HPV) E6 y E7, TSP- 180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, pl 85erbB2, pl 80erbB-3, c-met, nm-23Hl, PSA, TAG-72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, ß-Catenina, CDK , Mum-1, pl6, pl5, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, alfa-fetoproteina, ß-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3XCA 27.29XBCAA, CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733\EpCAM, HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, M0V18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, PLA2, proteina asociada a ciclofilina C/proteina de enlace TA-90\Mac-2, TAAL6, TAG72, TLP, y TPS. Cada uno de los nombres de antigeno aquí descritos se asocia con un sitio genético. Se apreciará por aquellos con destreza ordinaria en la especialidad que hay variación genética en la población humana, de manera tal que cualquier secuencia de referencia particular deberá ser vista como un ejemplo y variantes que ocurren naturalmente que se encuentran en el sitio asociado se comprenderá que están dentro del alcance abarcado por el nombre del antigeno. En algunas modalidades, la variante puede ser reconocida por una respuesta inducida o estimulada por la molécula de referencia. En algunas modalidades, la molécula de referencia puede ser reconocida por una respuesta inducida o estimulada por la variante.

Modalidades de la descripción se refieren a composiciones inmunoterapéuticas activas que hacen blanco en uno o varios antigenos expresados por un tumor, o uno o más de sus epitopos, para el tratamiento de cáncer. Antigenos asociados con tumor (TuAAs = Tumor-Associated Antigens) pueden ser expresados por la propia célula de cáncer o asociados con componentes no-cancerosos del tumor, tales como neovasculatura asociada con tumor u otro estroma. TuAAs pueden incluir antigenos que se expresan en células normales durante desarrollo fetal cuando el sistema inmune es inmaduro e incapaz de responder, o pueden ser antigenos que normalmente están presentes a niveles extremadamente bajos en células normales pero se expresan a niveles muy superiores en células de tumor. En algunas modalidades, un TuAA es un antigeno asociado con una célula no cancerosa del tumor, tal como por ejemplo, neovasculatura de tumor u otras células estromales dentro del microambiente del tumor. La expresión de TuAA puede emplearse para corresponder con la condición o tipo del cáncer de un paciente con un protocolo o régimen inmunoterapéutico apropiado.

En algunas modalidades, se emplean agentes terapéuticos bivalentes o multivalentes . Estos agentes terapéuticos bivalentes o multivalentes pueden hacer diana a más de un antigeno en una célula de tumor. En casos en donde más de un solo antigeno en una célula de tumor es dirigido, la concentración efectiva del terapéutico antitumor se incrementa de conformidad. Atague en estroma asociado con el tumor, tal como vasculatura, puede incrementar la accesibilidad de las células de tumor a el o a los agentes que hacen blanco en ellos. De esta manera, incluso un antigeno que también se expresa en algún tejido normal puede recibir mayor consideración como un antigeno diana si los otros antigenos a dirigir en un ataque bi- o multivalente no se expresan también por ese tejido. Aún más, al dirigir una respuesta inmune contra más de un solo antigeno, si se elige en forma apropiada, el número de células de tumor que puede reconocerse se lleva al máximo. Además, algunos tumores pierden expresión de un TuAA después de inmunización, dando lugar a una población resistente. Si la respuesta inmune se dirige contra más de un TuAA se vuelve mucho más dificil que un tumor resistente surja debido a que debe entonces perder simultáneamente expresión de cada uno de los antigenos a fin de escapar. De esta manera, al tratar cáncer con inmunoteirapia, puede ser ventajoso utilizar una combinación de TuAAs tanto debido a una cobertura más completa de la población de células de tumor, como debido a que hay menos posibilidad de escape de tumor a través de pérdida de expresión de los TuAAs . En modalidades preferidas, esta técnica de ataque multivalente se emplea cuando un tumor es positivo para dos, tres, cuatro o más TuAAs de la combinación empleada .

En algunas modalidades, péptidos inmunogénicos, que corresponden a secuencias de epitopo dirigidas del antigeno se contemplan aquí y pueden incluir secuencias análogas reactivas cruzadas o secuencias nativas. Análogos ejemplares de Melan A, tirosinasa, epitopos de PRAME y PSMA se describen en las Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Nos. de Serie 11/156,253 (Publicación No. 20060063913), No. de Serie 11/155,929, (Publicación No. 20060094661), No. de Serie 11/156,369 (Publicación No. 20060057673), No. de Serie 11/454,300 (Publicación No. US 2007-0060518 Al), No. de. Serie 12/406,022, y las Patentes de los E.U.A. Nos. 7,605,227; 7,511,118; y 7,511,119; cada una de las cuales aquí se incorporará por referencia en su totalidad. "Análogo reactivo cruzado" como se emplea aquí, puede referirse a un péptido incluyendo 1-3 substituciones de aminoácido y/o deleción o adición de aminoácidos en comparación con la secuencia de péptido nativo que induce función efectora (por ejemplo, citólisis o secreción de citoquina) distinguible de fondo, de un CTL reactivo con el péptido nativo. En diversas modalidades, funciones efectoras son de al menos aproximadamente 30%, aproximadamente 50%, aproximadamente 60%, aproximadamente 70%, o aproximadamente 80% de la inducida por el péptido nativo. En forma alterna, la reactividad cruzada puede demostrarse por la capacidad del péptido nativo para inducir función efectora (por ejemplo, citólisis o secreción de citoquina) distinguible de fondo de un CTL generado por inmunización con el análogo. En diversas modalidades, la función efectora es al menos 30%, 50%, .60%), 70%), o 80%) de la inducida por el péptido análogo.

En modalidades particulares, ejemplos de antigenos dirigidos y/o un análogo de los mismos, contemplados para utilizar en los métodos aquí descritos, incluyen PRAME425-433, PSMA288-297, Melan A26-35, y Tirosinasa 369-377 descritos en la Tabla 1 y aquí en otra parte.

Tabla 1. - LISTA PARCIAL DE SEP ID NOs elan A, también conocido como Antigeno de Melanoma Reconocido por Células T (MART-1) , es una proteina biosintética de melanina también expresada a altos niveles en melanomas. Melan A MART- 1 se describe como un TuAA en las patentes de los E.U.A. Nos. 5,994,523; 5,874,560; y 5, 620, 886, cada una de las cuales aquí se incorpora - por referencia en su totalidad. En algunas modalidades aquí descritas, el antigeno dirigido es Melan A26-35 y/o un análogo del mismo descrito en la Tabla 1 y aquí en otra parte. Ejemplos de análogos Melan A se describen en la patente de los E.U.A. No 7,605,227 que aquí se incorpora por referencia en su totalidad. Análogos Melan-A pueden incluir pero no están limitados a análogos de la secuencia: E{A, L, Nva o Nle} AGIGILT {V, Nva, o Nle} (SEQ ID NO: 10); o Y{M, V, Nva, o Nle } DGTMSQ{ V, Nva, o Nle} (SEQ ID NO: 11); y en donde la secuencia no es E { A o L} AGIGILT V (SEQ ID NO: 12) o YMDGTMSQV (SEQ ID NO:4). El análogo de péptido aislado de la invención puede seleccionarse del grupo que consiste de ELAGIGILTNva (SEQ ID NO: 13), ENvaAGIGILTV (SEQ ID NO: 2), YVDGTMSQNva (SEQ ID NO: 14), YVDGT SQV (SEQ ID NO: 15) y YMDGTMSQNva (SEQ ID NO: 5). En algunas modalidades, el análogo es un análogo que consiste esencialmente de la secuencia de aminoácidos ENvaAGIGILTV (SEQ ID NO:2) . Todavía en otras modalidades, el análogo es un análogo que consiste esencialmente de la secuencia de aminoácidos YMDGTMSQNva (SEQ ID NO: 5) .

La tirosínasa, una enzima biosintética de melanina, se expresa en forma predominante en melanocitos con altos niveles que se observan a menudo en melanomas. La tirosinasa se considera uno de los marcadores más específicos de diferenciación melanocítica . También se expresa en células gliales, que al igual que melanocitos, se desarrollan de la neuroectoderma . La tirosinasa de esta manera también es un TuAA útil para glioblastomas , incluyendo un glioblastoma multiforme. Mayores detalles de tirosinasa como un TuAA se describen en la patente de los E.U.A. No. 5,747,271, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad. En algunas modalidades aquí descritas, el antígeno dirigido es tirosinasa369-377, y/o un análogo del mismo descrito en la Tabla 1 y aquí en otra parte.

PRAME, también conocido como MAPE, DAGE y OIP4, se conoce en la técnica como un antígeno de cáncer de testículos (CT = cancer-testis ) . Sin embargo, a diferencia de muchos antigenos CT, tales como: MAGE, GAGE y BAGE, se expresa en leucemias mieloides agudas. PRAME como un TuAA se describe en la patente de los E.U.A. No. 5, 830, 753, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad. En algunas modalidades, el antigeno dirigido es PRAME425-433, y/o su análogo descrito en la Tabla 1 y aquí en otra parte. Ejemplos de análogos PRAME se describen en la Patente de los E.U.A. No. 7,511,119 que aquí se incorpora por referencia en su totalidad. Análogos PRAME pueden incluir pero no están limitados a análogos que incluyen o consisten esencialmente de una secuencia en donde: PO es X, XX, o XXX, en donde X especifica cualquier aminoácido o no-aminoácido; y PI es S, K, F, Y, T, Orn, o Hse; y P2 es L, V, M, I, Nva, Nle, o Abu; y P3 es L, Nva, Nle o Abu; y P4 es Q; y P5 es H; y P6 es L, Nva, Nle, o Abu; y P7 es I; y P8 es G, A, S, o Sar; y ?O es P9 es L, V, I, A, Nle, Nva, Abu, o L-NH2; y ?O+l es X, XX, o XXX, en donde X especifica cualquier aminoácido o no aminoácido; y en donde la secuencia no es SLLQHLIGL (SEQ ID NO: 6). Un análogo PRAME puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: {K, F, Y, T, Orn, o Hse } LLQHLIGL (SEQ ID NO: 16); o S {V, M, I, Nva, Nle, o Abuj LQHLIGL (SEQ ID NO: 17); o SL{Nva, Nle o Abu QHLIGL (SEQ ID NO: 18); o SLLQH{Nva, Nle o AbujlGL (SEQ ID NO: 19); o SLLQHLI {A, S, o Sar}L (SEQ ID NO:20); o SLLQHLIG{ V, I, A, Nle, Nva, Abu, o L-NH2} (SEQ ID NO:21); o { F, Y, T, Orn, o Hse} {Nva, Nle, M, o Ij LQHLIGL (SEQ ID NO:22); o S {Nva, Nle, o M}LQHLIG{Nva, Nle, o V} (SEQ ID NO:23); o {K, F, Y, T, Orn, o HsejLLQHLIGV (SEQ ID NO:24); o {F o T } LLQHLIG {Nle } (SEQ ID NO:25); o { F o T} {Nva o M}LQHLIG{Nle} (SEQ ID NO:26). También, un análogo PRA E puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: { F, Y, T, Orn, o HsejLLQHLIGL (SEQ ID NO:27); o S {Nva, Nle, o MjLQHLIGL (SEQ ID NO:28); o SLLQHLIG{ Nle, Nva, o L-NH2 } (SEQ ID NO:29); o SLLQH{Nva o AbujlGL (SEQ ID NO:30); o S {Nva} LQHLIG {Nle} (SEQ ID NO:31); o {F o T} {L o Nva} LQHLIG {Nle} (SEQ ID NO:32). Además, el análogo puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: S {L o Nva} LQHLIG {Nle} (SEQ ID NO: 33); o T {Nva} LQHLIG {Nle} (SEQ ID NO:34). El análogo puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia S {Nva} LQHLIG {Nle} (SEQ ID NO: 31) .

Antigeno de membrana especifica de próstata (PSMA = Prostate-specific membrane antigen) se encuentra que es altamente expresado en células de cáncer de próstata. Sin embargo, la expresión de PSMA también se nota en el epitelio de próstata normal y en la neovasculatura de tumores no-prostáticos. PSMA como una preparación anti-neovasculatura se describe en la Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. No. 60/274,063, y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/094,699 (Publicación No. 20030046714) y No. de Serie 11/073,347 (Publicación No. 20050260234); cada una de las cuales se incorpora aqui por referencia en su totalidad. PSMA como un TuAA se describe en la Patente de los E.U.A. No. 5,538,866 incorporada aqui por referencia en su totalidad. En algunas modalidades, el antigeno objetivo o diana es PSMA288-297 y/o un análogo del mismo descrito en la Tabla 1 y aqui en otra parte. Ejemplos de análogos PSMA se describen en la Patente de los E.U.A. No 7,511,118 que · aquí se incorpora por referencia en su totalidad. Análogos PSMA pueden incluir pero no se limitan a análogos que incluyen o consisten esencialmente de una secuencia en la que: PO es X, XX, o XXX, en donde X especifica cualquier aminoácido o no aminoácido; y PI es G, A, S, Abu, o Sar; y P2 es L, M, I, Q, V, Nva, Nle, o Abu; y P3 es P o W; y P4 es S; y P5 es I; y P6 es P; y P7 es V; y P8 es H; y P9 es P, A, L, S, o T; y ?O a PIO es I, L, V, Nva, o Nle; y ?O+l es X, XX, o XXX, en donde X especifica cualquier aminoácido o no aminoácido; y en donde la secuencia no es GLPSIPVHPI (SEQ ID N0:8). El análogo puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: {S, Sar, o AbuJLPSIPVHPI (SEQ ID NO: 35); o G{M o Nle}PSIPVHPI (SEQ ID NO:36); o G{ L, I, Nva, o Nle} SIPVHPI (SEQ ID NO:37); o GLWSIPVHP {Nva o V} (SEQ ID NO:38); o GLPSIPVH {A o S}I (SEQ ID NO:39); o GLPSIPVHP {V, L, Nva, o Nle} (SEQ ID NO:40); o G{Nle } PSIPVHP {Nva, o Nle} (SEQ ID N0:41); o G{Nva}PSIPVHP {Nva} (SEQ ID NO: 42); o G{V, Nva, o Nle}PSIPVHPV (SEQ ID NO:43); o {Sar o Abu}LPSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO:44); o A{V, I, Nva, o Nle}WSIPVHPI (SEQ ID NO:45); o AVPSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO:46); o A{ va } PSI VHPV (SEQ ID NO:47); o ALWSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO:48); o GVWSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO:49); o G{Nva }WSIPVHPV (SEQ ID NO:50). También, el análogo puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: {Abu} LPSIPVHPI (SEQ ID N0:51); o G{V, Nva, o AbujPSIPVHPI (SEQ ID NO:52); o GLPSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO: 53); o GLWSIPVHP {I o Nva} (SEQ ID NO: 54); o G{Nle}PSIPVHP{Nva} (SEQ ID NO:55); o G{Nle or NvajPSIPVHPV (SEQ ID NO: 56); o {A o Abu}LPSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO: 57); o G{Nva} PSIPVHP {I o V} (SEQ ID NO:58); o A {Nva o NlejWSIPVHPI (SEQ ID NO:59); o A{V o NvajPSIPVHPV (SEQ ID NO: 60). En particular, el análogo puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: {Abu}LPSIPVHPI (SEQ ID NO: 51); o GLPSIPVHP {V o Nva} (SEQ ID NO:53); o GLWSIPVHPI (SEQ ID NO: 61); o G{ Nle } PSIPVHP {Nva } (SEQ ID NO:55). De preferencia, el análogo puede incluir o consistir esencialmente de la secuencia: GLPSIPVHPV (SEQ ID NO: 9).

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico incluye administración de dos análogos péptido particulares (E-PRA (SEQ ID NO: 7) y E-PSM (SEQ ID NO: 9)). Como se emplea aquí, E-PRA se refiere a un análogo de PRAME425-433, PRAME425-433 L426Nva L433Nle (SEQ ID NO: 7); E-PSM se refiere a un análogo de PSMA288-297, PSMA288-297 I297V (SEQ ID NO: 9). Estos y otros análogos se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/156,369 (No. de Pub. 20060057673) , y la Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. No. de Serie 60/691,889, ambas con titulo "EPITOPE ANALOGS", cada una de las cuales aquí se incorpora por referencia en su totalidad.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico incluye administración de dos análogos péptido particulares (E- EL y E-TYR) . Como se emplea aqui, E-MEL se refiere a un análogo de Melan 26-35, Melan A26-35 A27Nva (SEQ ID NO:2); E-TYR se refiere a un análogo de irOSinaS3369-377, ti OSÍnaS3369-377 V377Nva (SEQ ID NO: 5). Estos y otros análogos (incluyendo Melan A26-35 A27L (SEQ ID NO : 3 ) ) se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/156,369 (Pub. No. 20060057673), y la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. de serie 60/691,889, ambas con titulo "EPITOPE ANALOGS", cada una de las cuales aqui se incorporan por referencia en su totalidad.

Epitopos ejemplares y análogos de epitopos adicionales se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 09/999,186, presentada en noviembre 7, 2001, con titulo "METHODS OF COMMERCIALIZING AN ANTIGEN" ; Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/323,572 (Pub. No. 20060165711); y Solicitud de Patente de los E.U.A. No. 11/323,520 (Pub. No. 20080124352), No. de Serie 10/117, 937, (Pub. No. 20030220239 Al); No. de Serie 11/067,159 (Pub. No. 20050221440) y 11/067,064 (Pub. No. 20050142144), cada una presentada en febrero 25, 2005; No. de Serie 10/657,022 (Pub. No. 20040180354) presentada en septiembre 5, 2003, y las Solicitudes del PCT . Nos. PCT/US2003/027706, presentada en junio 17, 2004 (Pub. No. O 04022709 A2) y PCT/US02/11101, presentada en abril 4, 2002 (Pub. No. WO 02081646), todas con titulo "EPITOPE SEQUENCES" ; y No. de Serie 10/292,413, (Pub. No. 20030228634 Al), 10/837,217 (Pub. No. 20040203051), y Patente de los E.U.A. No. 7,232, 682, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Principios de selección de epitopo benéficos para inraunoterapéuticos se describen en la Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Nos. de Serie 09/560,465 (presentadas en abril 28, 2000), 11/683,397 (Pub No. 20070269464), 10/026,066 (Pub. No. 20030215425 Al), 10/895,523 (Pub No. 2005-0130920), 10/896,325 (Pub No. 20070184062) y 10/005,905 (presentadas en noviembre 7, 2001), todas con titulo "EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS"; 09/561,571 (presentada en abril 28, 2000) con titulo "EPITOPE CLUSTERS"; Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Nos. de Serie 11/073,347 (Pub. No. 20050260234), 11/772,811 (Pub. No. 20090208537), y Patente de los E.U.A. No. 7,252,824, cada una con titulo "ANTI-NEOVASCULATURE PREPARATIONS FOR CANCER"; y Solicitudes de Patente de los E.U.A. Nos. de Serie 10/1 17, 937 (presentadas en abril 4, 2002; Pub. No. 20030220239 Al), y 10/657,022 (Pub. No. 20040180354 Al) y 12/194,478 (Pub. No. 20090285843), todas con título "EPITOPE SEQUENCES"; Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/956,401 (Pub. No. 20050069982), y Patente de los E.U.A. No. 6,861,234, ambas con título "METHOD OF EPITOPE DISCOVERY"; cada una de las cuales aquí se incorpora por referencia en su totalidad. También se contempla que nuevos epítopos identificados por el método descrito en la Patente de los E.U.A. No. 6,861,234 con título "METHOD OF EPITOPE DISCOVERY", y en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/026,066 (Pub. No. 20030215425) presentada en diciembre 7, 2000 y con titulo "EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS", (cada una de las cuales aquí se incorpora por referencia en su totalidad) que actualmente es aparente o puede ser aparente en el futuro para una persona con destreza ordinaria en la técnica, son útiles en las modalidades aquí descritas.

Adicionales modalidades se refieren a composiciones inmunogénicas que incluyen un ácido nucleico que codifica a un antígeno o un fragmento inmunogénico del mismo. Como se discute aquí en otra parte, algunos métodos utilizan composiciones inmunoterapéuticas para el tratamiento de cáncer, que incluyen uno ó varios plásmidos utilizados en combinación con uno o varios péptidos sintéticos. El plásmido puede colocarse bajo el control de una secuencia mej oradora/promotora que permite la trascripción eficiente de ARN mensajero para el polipéptido ante captación por células que presentan antigeno (APCs = Antigen Presenting Cells) . Promotores que pueden emplearse en las modalidades aquí descritas son bien conocidos por una persona con destreza ordinaria en la técnica. Estos promotores incluyen por ejemplo promotores virales y celulares. Promotores virales pueden incluir, por ejemplo, pero no están limitados al promotor citomegalovirus (C V) , el promotor EFl, el promotor tardío mayor de adenovirus 2 y el promotor SV40. Ejemplos de promotores celulares incluyen por ejemplo, pero no están limitados a, el promotor de metalotioneina de ratón 1, factor de elongación 1 alfa (EFl-alfa) , promotor MHC Clase I y II, y promotor CD3 (respecto a expresión específica de célula T, largo plazo) . Otros promotores que pueden ser empleados en el diseño de los vectores aquí descritos pueden determinarse fácilmente por la persona con destreza. Modalidades particulares de la descripción emplean una secuencia de promotor/mej orador del citomegalovirus (CMVp) .

Una señal de poliadenilacion puede proporcionarse en el extremo 3' de la secuencia de codificación, por ejemplo una señal de poliadenilacion de hormona de crecimiento bovino (BGH poliA) , para incrementar la estabilidad de ARN mensajero y su translocación fuera del núcleo y dentro del citoplasma para traducción. Para facilitar transporte de plásmido en el núcleo después de absorción, una secuencia de importación nuclear (NIS = Nuclear Import Sequence) de virus simio 40 (SV40) puede insertarse en la estructura principal del plásmido. El diseño de plásmido también puede incluir motivos inmunoestimuladores , por ejemplo un motivo inmunoestimulador CpG puede colocarse en la secuencia NIS y/o la estructura principal de plásmido. La secuencia inmunoestimuladora (ISS) se refiere a un oligodeoxiribonucleótido que contiene una secuencia CpG no metlilada.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico incluye un plásmido recombinante (pPRA-PSM) . Como se emplea aquí, pPRA-PSM se refiere al plásmido RP12, (descrito en la Solicitud de Patente de los E.U.A. Número de Serie 11/454,616 (Pub. No. 20070004662), con titulo "METHODS AND CO POSITIONS TO ELICIT MULTIVALENT IMMUNE RESPONSES AGAINST DOMINANT, AND SUBDOMINANT EPITOPES, EXPRESSED ON CANCER CELLS AND TUMOR STROMA, " que se incorpora aquí por referencia en su totalidad) que incluye un plásmido de ADN recombinante que expresa epitopos PRAME425-433 y PSMA288-297 y/o sus análogos (Tablas 1 y 2). El plásmido pPRA-PSM codifica los epitopos PRAME y PSMA en una forma para permitir su expresión y presentación por pAPCs .

En algunas modalidades, la composición inmunoterapéutica incluye un plásmido pMEL- TYR. Como se emplea aquí, pMEL-TYR se refiere al plásmido pSEM, (descrito en detalle y referido como pMA2M en la Solicitud de Patente de los E.U.A. Número de Serie 10/292,413 (Publicación No. 20030228634), con titulo "EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET ASSOCIATED ANTIGENS AND ETHODS FOR THEIR DESIGN, " que se incorpora aquí por referencia) que expresa el análogo Melan A26-35 A27L y los epitopos tirosinasa369-377 (Tablas 1 y 2). Se entiende que p EL-TYR, pSEM y pMA2M ¦ se emplean en forma intercambiable aquí. El plásmido pMEL-TYR codifica los epitopos de Melan A y tirosinasa en una forma que permite su expresión y presentación por pAPCs.

Tabla 2. LISTA PARCIAL DE SEP ID NOs SEQ ID IDENTIDAD SECUENCIA NO 62 Secuencia de KRSLLQHLIGLGDAAY liberación de SLLQHLIGLISPEKEEQYIASL plásmido pRP12 LQHLIGKRPSIKR GLPSIPVHPV 63 Polipéptido NLLHETDSAVATARRPRWL inmunogénico CAGALVLAGGFFLLGFLFGWFI codificado por KSAQLAGAKGVILYSDPADYF pRP12 APGVKSYPDGWNLPGGGVQR GNILNLNGAGDPLTPGYPANE YAYRRGIAEAVGLPSIPVHPIA LQSLLQHLIGLSNLTHVLYPVP LESYEDIHGTLHLERLAYLHAR LRELLCELGRPSMVWLSANPC PHCGDRTFYDPEPILCPCFMPN KRSLLQHLIGLGDAAYSLLQH LIGLISPEKEEQYIASLLQHLIGL KRPSIKRGLPSIPVHPV 64 Secuencia de MLLAVLYCLELAGIGILTVY liberación de DGTMSQV plásmido pSE 65 polipéptido MLLAVLYCLELAGIGILTVYM inmunógenico DGTMSQVGILTVILGVLLLGC codificado por pSEM WYCRRRNGYRALMDKSLHVG TQCALTRRCPQEGFDHRDSKV SLQEKNCEPV De esta manera en diversas modalidades, productos inmunoterapéuticos incluyendo estructuras de composiciones inmunogénicas pueden ser empleados. Estas estructuras pueden incluir 1, 2 ó 3 plásmidos como un conjunto de composiciones individuales o una sola composición puede incluir dos o más plásmidos. Estas estructuras también pueden incluir múltiples péptidos que corresponden a los epitopos expresados por los plásmidos. De manera similar, pueden proporcionarse como composiciones incluyendo péptidos individuales o múltiples. En algunas modalidades, uno o varios plásmidos de cebado/inducción/atrapamiento serán vendidos junto con los péptidos de amplificación/refuerzo correspondientes. En algunas modalidades, los múltiples plásmidos se venderán en conjunto, pero sin péptidos correspondientes. Todavía en otras modalidades, conjuntos de péptidos correspondientes serán vendidos en conjunto con el plásmido, por ejemplo para rondas de amplificación subsecuentes de una respuesta atrapada o cebada.

En modalidades adicionales, cada uno de los conjuntos anteriores incluyen los péptidos correspondientes a (que es capaz de reforzar/amplificar la respuesta a) los epítopos expresados por esos plásmidos. Algunas modalidades particulares incluyen un plásmido individual y uno o ambos péptidos correspondientes. (Aunque los plásmidos específicos aquí referidos se describen como bivalentes, también pueden ser amplificados en una forma monovalente) .

En algunas modalidades, el beneficio clínico puede ser mejorado o aumentado. Por ejemplo, en algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico incluye un agente que altera el micro-ambiente de tumor para hacerlo menos inmunosupresor . Como se emplea aquí, el micro-ambiente de tumor se refiere a áreas adyacentes a y entre células cancerosas, abarcando matriz extracelular, células vasculares y otras células no cancerosas. En algunas modalidades, el beneficio clínico puede ser además mejorado— por ejemplo, en pacientes con menos que una respuesta completa, o en pacientes con metástasis visceral, y semejantes— al combinar el agente o composición inmunoterapéuticos con un agente que altera el micro-ambiente de tumor para hacerlo menos inmunosupresor . Estos agentes incluyen por ejemplo, aquellos útiles para agotar células Treg o promover inflamación de tumor y modificadores de respuesta biológica (BROS = Biological Response Modifiers) capaces de modulación a la baja o superar la actividad Treg actividad, incluyendo inmunopotenciadores, como se discute aquí en otra parte, pero no se limitan a éstos. Agentes de agotamiento Treg ejemplares incluyen, por ejemplo, molécula de fusión IL-2 (denileucina diphtitox) , anticuerpos anti-CD25, ciclofosfamida, gemcitabina, fludarabina, doxorrubicina y semejantes. En algunas modalidades, agentes que alteran el micro-ambiente de tumor para hacerlo menos inmunosupresor incluyen moléculas pequeñas, tales como por ejemplo: ciclofosfamida, fludarabina, inhibidores de tirosina quinasa selectos, biomoléculas tales como LIGHT, ligandos TLR, moléculas CpG, anticuerpos contra PD-1, CTLA-4, TGFbeta, IL-10 y semejantes. Un método ejemplar incluyendo la administración de agentes para agotar células Treg o promover inflamación de tumor puede encontrarse en las Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Números de Serie 60/831,256, presentada en julio 14, 2006; 60/863, 332, presentada en octubre 27, 2006; 11/879, -078 (Pub. No. 2008-0014211), presentada en julio 14, 2007; y Publicación de la Solicitud de PCT Número WO/2008/008541, presentada en julio 14, 2007; todas con titulo "METHODS TO ELICIT, ENHANCE AND SUSTAIN I MUNE RESPONSES AGAINST MHC CLASS I-RESTRICTED EPITOPES, FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC PURPOSES", cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad. En algunas modalidades modificadores de . respuesta biológica (BRMs) capaces de modular a la baja o superar la actividad Treg, se administran.

En algunas modalidades, un inmunopotenciador se administra con al menos un componente del régimen inmunoterapéutico . El inmunopotenciador puede ser una molécula inmunomoduladora, tal como, pero no limitada a ligandos TLR, ligandos de receptor de Reconocimiento de Patrón endocitico (PRR = Pattern Recognition Receptor) y semejantes. De esta manera, en algunas modalidades, puede ser mejorado adicionalmente el beneficio clínico- por ejemplo, en pacientes con menos que una respuesta completa, o en pacientes con metástasis visceral y semejante— al combinar al menos un componente del régimen inmunoterapéutico con un inmunopotenciador o un modificador de respuesta biológica. En algunas modalidades, la respuesta se estima siguiendo dos ciclos terapéuticos de tratamiento. Las respuestas pueden ser determinadas, por ejemplo, por: un aumento en células positivas de tetrámero (MHC-multímero) , un aumento en secreción de citosina (por ejemplo, secreción de una granzima o gamma-interferona) , o un aumento en las proporciones de efector o células T de memoria efectora. Evaluación de respuesta puede basarse en ensayo de células T en sangre periférica o recuperada en biopsias de tumor.

Inmunopotenciadores En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico incluye un agente que altera el micro-ambiente de tumor para hacerlo menos inmunosupresor . Por ejemplo, en algunas modalidades, el beneficio clínico puede ser además mejorado— por ejemplo, en pacientes con menos que una respuesta completa, o en pacientes con metástasis visceral, y semejantes— al combinar el agente/producto inmunoterapéutico con un agente que altera el micro-ambiente de tumor para hacerlo menos inmunosupresor. Ejemplo de estos agentes incluyen, pero no están limitados a, moléculas pequeñas, tales como, ciclofosfamida, fludarabina, inhibidores de tirosina quinasa selectos y semejantes; biomoléculas, ligandos de receptor tipo Tol (TLR = Toll- Like Receptor) (por ejemplo, motivos CpG, anticuerpos contra PD-1, CTLA-4, TGFbeta, IL-10, y semejantes; y/o biomoléculas, tales como LIGHT, y semejantes.

Inmunopotenciadores contemplados como útiles en las modalidades' aquí descritas, incluyen por ejemplo y en una forma no limitante: agentes que están involucrados en el control de una inmuno respuesta tales como citosinas, quimiocinas, moléculas co-estimuladoras , factores de trascripción y elementos de transducción de señal; agentes que están involucrados en procesamiento y presentación de antigenos; agentes que están involucrados en regular la ruta apoptósica, o agentes que están involucrados en control o silenciado de genes, tales como enzimas metilantes de ADN, moléculas que controlan cromatina, moléculas reguladoras de ARN o semejantes, se incluyen.

En otros aspectos de la descripción, inmunpotenciadores pueden incluir, por ejemplo y en forma no limitante, moléculas que disparan la producción de citoquina o quimiocina, tales como péptidoglicanos , LPS o sus análogos, oligodeoxinucleótidos no metilados CpG (CpG ODNs) ; dsR tales como dsDNA bacterianos (que contienen motivos CpG) y dsR A sintéticos (poliLC) en APC y células inmune innatas que ligan a TLR9 y TLR3, respectivamente.

Una clase de inmunopotenciadores que se considera útil en modalidades descritas aquí, incluyen moléculas sintéticas o naturales orgánicas pequeñas, que ejercen efectos inmuno moduladores por rutas estimuladoras de inmunidad innata. Se ha mostrado que macrófagos, células dendriticas y otras transportan los asi denominados receptores tipo Tol (TLRs) , que reconocen patrones moleculares asociados con patógeno (PAMPs = Pathogen-associated Molecular Patterns) en micro-organismos (Th'oma-Uszynski, S. et ah, Science 291: 1544-1547, 2001; Akira, S., Curr . Opin. Inmunol. 15: 5-1 1, 2003; cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad) . Además se contemplan moléculas pequeñas que ligan a TLRs, tales como imidazoquinolinas anti-virales puramente sintéticas, por ejemplo, imiquimod y resiquimod, que se han encontrado estimulan la ruta celular de inmunidad al ligar los TLRs 7 y 8 (Hemmi, H. et ah, Nat Inmunol 3: 196-200, 2002; Dummer, R. et ah, Dermatology 207: 1 16-1 18, 2003; cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad) . Inmunopotenciadores además pueden incluir adyuvantes inmunopotenciadores que activan células T o pAPC incluyendo por ejemplo: ligandos receptores de reconocimiento de patrón endocitico (PRR), quillaja saponinas, tucaresol y semejantes.

Los inmunopotenciadores pueden interactuar directamente con receptores que detectan componentes microbianos. En algunas modalidades, moléculas terapéuticas adicionales incluyen, pero no están limitadas a, factores de trascripción tales como T-bet, STAT-1 STAT-4 y STAT-6. Adicionalmente, moléculas que actúan corriente abajo en la ruta de señalización también pueden ser incluidas. En algunas modalidades, las moléculas dirigidas pueden incluir TLR y sus moléculas de señalización corriente abajo tales como, por ejemplo y no limitadas a, MyD88, NFK-B y semejantes. Citoquinas también se contemplan para uso en modalidades aquí descritas, tales como, por ejemplo pero no limitadas a, interferonas (por ejemplo, .IFN-gamma), IL-2, IL-10, IL- 12, IL-18 y TGF-beta GM-CSF, ligando fit3 (fit3L), TNF-alfa y semejantes. Factores co-estimuladores tales como CD40 B7- 1 y B7-2 también se contemplan como útiles aquí. Anticuerpos que ligan a moléculas co-estimulatorias (anti-CD40, CTLA-4, anti-OX40, y semejantes) también se contemplan como útiles en modalidades de la descripción. En algunas modalidades, proteínas reguladoras del ciclo celular tales como, por ejemplo pero no limitadas a, FOXp3, moléculas del tipo B7, ligandos LAG-3 y estas moléculas también se contemplan como útiles en algunas modalidades. En algunas modalidades, moléculas que controlan cromatina y moléculas reguladoras de ARN también se contemplan. Proteínas presentes en la ruta de presentación y procesamiento de antígeno tales como, por ejemplo pero no limitadas a, HLA y TAPs (Transportadores asociados con procesamiento de Antígeno -1 y -2 (TAP1 y TAP2 = Transporters associated with Antigen Processing) ) , proteasoma inmune o estándar, microglobulina-beta-2 y moléculas MHC clase I o II también se · contemplan para utilizar en algunas modalidades. Supresor de activación de célula dendrítica SOCS 1 y proteínas en la ruta de metilación de ADN tales como D NT1 también se contemplan como útiles en las modalidades aquí descritas. Proteínas presente en la ruta apoptótica también se contemplan como útiles en las modalidades aquí descritas. Adicionalmente, quimiosinas, tales como, por ejemplo, pero no limitadas a, IL-8, MIP-3-alfa, MIP- 1 -beta, MCP-1, MCP-3, RANTES, y semejantes también pueden ser empleadas en las modalidades aquí descritas. En algunas modalidades, moléculas terapéuticas adicionales involucradas en promover o mantener células T y/o expresión de antigenos de diferenciación (por ejemplo antigenos de diferenciación de melanoma) aquí se contemplan para uso con el agente inmunoterapéutico activo descrito. Estas moléculas terapéuticas incluyen en algunas modalidades, inhibidores de BRAF ( serina/treonina quinasa B-Raf ) , por ejemplo, PLX4720 (ver también WO2007/002325 aqui descrito para todo su contenido respecto a inhibidores BRAF) que pueden promover expansión o persistencia de células T, incrementar los niveles de expresión de diferenciación de antigeno y promover la actividad de células T contra el cáncer. En algunas modalidades, la inhibición de la ruta MAPK con inhibidores de quinasa regulada por señal extracelular/MAPK (MEK) también se contemplan.

Enfoques de Inmunoterapia Finalmente cualquier régimen inmunoterapéutico que genera una respuesta de célula T efectora contra el o los antigenos dirigidos o epitopos puede utilizarse en los métodos descritos. Aquellos que incluyen una etapa para administración intralinfática de un inmunógeno son particularmente convenientes. Protocolos de tipo de régimen de sensibilización y refuerzo también se consideran ventajosos. Un protocolo de "régimen de sensibilización y refuerzo" se discute en la patente de los E.U.A. No. 6,663,871 con título "Methods and reagents for vaccination which genérate a CD8 T cell immune response", que aquí se incorpora por referencia en su totalidad. Los regímenes inmunoterapéuticos ejemplares aplicados en los métodos aquí descritos se basan en modelos preclínicos que utilizan una composición inicial que establece o incorpora la inmuno respuesta y una segunda composición que intensifica, aumenta o mejora la respuesta a niveles efectivos. En algunas modalidades, la primera y segunda composiciones están en formas que son las mismas, y en algunas modalidades, la primera y segunda composiciones están en formas que son diferentes. Un inmunógeno que "incorpora" como se contempla en las modalidades aquí descritas incluye en muchas modalidades, una inducción que confiere estabilidad particular en el perfil inmune del linaje inducido de células T. Aunque no todas las características del modelo preclínico se han observado en uso clínico en humanos, es de la comprensión de los inventores que las dosis de cebado/inducción/atrapamiento pueden ser importantes para evitar el efecto tolerogénico que de otra forma puede resultar de la administración repetida de péptido como se emplea en las dosis de refuerzo. Mientras que respuestas clínicas que utilizan un régimen de refuerzo de péptido-cebador plásmido se han mostrado superiores a aquellas que se obtienen siguiendo la inmunización con plásmido solo (Tagawa et al., "Phase I Study of Intranodal Delivery of a Plasmid DNA Vaccine for Patients with Stage IV Melanoma" Cáncer, julio 1, 2003, Volumen 98, Número 1, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad) , protocolos de régimen de sensibilización y refuerzo que utilizan una forma simple de inmunógeno - por ejemplo, proteína, polipéptido, péptido, plásmido, ARN, vector viral, y semejantes — también pueden emplearse en los métodos aquí descritos.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede involucrar · un protocolo de régimen de sensibilización de refuerzo o un protocolo de inducción-y-amplificación . En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede involucrar un protocolo de atrapamiento-y-amplificación . De esta manera, en algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico activo incluye un plásmido y uno o más de sus péptidos o análogos, que pueden ser administrados para tratar un cáncer en un sujeto que utiliza cualquiera de estos regímenes/protocolos (como se describe en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/879,078 (Pub. No. 2008-0014211) y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie No. 10/871, 707 (Pub. No. 2005-0079152), y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/323,572 (Pub. No. 2006-0165711) cada una con titulo "METHOD TO ELICIT, ENHANCE AND SUSTAIN IMMUNE RESPONSES AGAINST MHC CLASS-I RESTRICTED EPITOPES, FOR PROPHYLACTIC OR THERAPEUTIC PURPOSES" , cada una de las cualés aqui se incorpora por referencia en su totalidad) . Otros protocolos de inmunización, por ejemplo, utilizando plásmido para otras que la o las dosis de inicio, que se basan en plásmido o péptido solo, o que utilizan otros tipos de reactivos de refuerzo/amplificación, no se excluyen del alcance de la descripción. Algunas modalidades abarcan plásmidos bi- o multivalentes que expresan más de un antigeno diana, o uno o más de sus epitopos.

Algunas modalidades utilizan un régimen terapéutico de atrapamiento-y-amplificación para lograr un ataque multivalente, que ofrece la ventaja de incrementar la sensibilidad del tumor al ataque. Si más de un solo antigeno en una célula de tumor se hace diana o se hace objetivo, la concentración efectiva de agente antitumor se incrementa de conformidad. El ataque en estroma asociado con el tumor, tal como la vasculatura, también puede incrementar la accesibilidad de las células de tumor al mismo o a los agentes que hacen blanco en ellos. De esta manera, incluso un antigeno que también se expresa en algún tejido normal puede recibir mayor consideración como un antigeno diana si los otros antígenos a dirigir en un ataque multivalente no se expresan también por ese tejido.

En algunas modalidades, regímenes inmunoterapéuticos ejemplares aplicados al paciente seleccionados de acuerdo con los métodos aquí descritos involucran cebado con un plásmido tal como, por ejemplo pPRA-PSM o pMEL-TYR, y refuerzo con los análogos péptido respectivos, e.g., E-PRA y E-PSM, o E-MEL y E-TYR, respectivamente.

En algunas modalidades, los métodos pueden incluir, aplicar un régimen que incluye, por ejemplo 1-6 dosis de cebado/inducción/atrapamiento. En algunas modalidades, el método puede incluir administrar una pluralidad de dosis de cebado/inducción/atrapamiento, en donde las dosis se administran sobre el curso de uno a aproximadamente siete días. Las dosis de cebado/inducción/atrapamiento, dosis de refuerzo/amplificación, o dosis de cebado/inducción/atrapamiento y refuerzo/amplificación pueden suministrarse en múltiples pares de inyecciones, en donde un primer miembro de un par puede administrarse dentro de aproximadamente 4 días de un segundo miembro del par, y en donde un intervalo entren los primeros miembros de diferentes pares puede ser de al menos aproximadamente 14 días. Un intervalo entre una última dosis de cebado/inducción/atrapamiento y una primera dosis de refuerzo/amplificación puede estar entre aproximadamente 7 y aproximadamente 100 días, por ejemplo.

Como se contempla en la presente descripción, la expresión "refuerzo/amplificación" o "refuerzo/amplificar", de una respuesta de célula T, incluye en muchas modalidades, un proceso para incrementar el número de células, el número de células activadas, el nivel de actividad, la velocidad de proliferación o parámetros similares de células T involucrado en una respuesta especifica. En algunas modalidades, el protocolo o régimen inmunoterapéutico puede ajustarse con base en la respuesta a las fases de inducción o amplificación y variación en expresión de antigeno. Por ejemplo, repetidas dosis de cebado o inducción o atrapamiento pueden administrarse hasta gue se obtenga una respuesta detectable antes de administrar una o varias dosis de refuerzo o amplificación, en vez de refuerzo o amplificación después de algún número determinado de dosis de cebado/inducción/atrapamiento. De manera similar, dosis de refuerzo/amplificación o mantenimiento programadas de péptido pueden interrumpirse si se debilita o mengua su efectividad, aumenta el número de células T reguladoras especificas de antigeno, o alguna otra evidencia de tolerizacion se observa, y pueden administrarse adicionales dosis de cebado/inducción/atrapamiento antes de reanudar las dosis de refuerzo/amplificación. La integración de técnicas de diagnóstico para estimar y supervisar respuesta inmune con métodos de inmunización se discute más completamente en la Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. No. de Serie 60/580, 964, que se presentó en junio 17, 2004 y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/155,928 (Pub. No. 20050287068), presentada en junio 17, 2005, ambas con titulo "IMPROVED EFFICACY OF ACTIVE IMMUNOTHERAPY BY INTEGRATING DIAGNOSTIC WITH THERAPEUTIC METHODS", cada una de las cuales aqui se incorpora por referencia en su totalidad.

En algunas modalidades, una composición de vector se inyecta en el nodo linfático inguinal seguido por administración subsecuente de un antigeno péptido como un bolo. En algunas modalidades, una o más composiciones de cebado/inducción/atrapamiento y uno o más antigenos de composiciones de refuerzo/amplificación se administran en forma intralinfática . En algunas modalidades, una o más composiciones de cebado/inducción/atrapamiento o uno o más antigenos de composiciones de refuerzo/amplificación se administran en forma intralinfática . Por ejemplo, en algunas modalidades, uno o más antigenos de composiciones para amplificación de refuerzo/amplificación se administran en forma intralinfática . En algunas modalidades, uno o más componentes pueden suministrarse por infusión, en general durante varias horas hasta varios dias. Por ejemplo, en algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico o protocolo requiere inyección o infusión en uno o más nodos linfáticos, empezando con número de administraciones (por ejemplo 1 a 10, o más, 2 a 8, 3 a 6, 4 Ó 5 etc.) de ADN recombinante (intervalo de dosis de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 0.005 a aproximadamente 5 mg/kg, tal como aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1 mg/kg, tal como aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.5 mg/kg) seguido por uno o más, e.g., 2 ó 3 Ó 4 Ó 5 Ó 6 Ó 7 6 8 Ó 9 Ó 10 administraciones de péptido, de preferencia en una formulación o vehículo inmunológico inerte (intervalo de dosis de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, preferido aproximadamente 0.005 a aproximadamente 5 mg/kg, tal como aproximadamente 0.01 a aproximadamente 1 mg/kg, tal como aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.5 mg/kg). Debido a que la dosis no necesariamente se ajustan en escala en forma lineal con el tamaño del sujeto, las dosis para humanos tienden hacia lo menor, y las dosis para ratones tienden hacia las mayores porciones de estos intervalos. En algunas modalidades, la concentración preferida de plásmido (o una cantidad efectiva de un plásmido) y péptido (o una cantidad efectiva de un péptido) ante inyección en general es de aproximadamente 0.1 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, tal como aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5 mg/ml, tal como aproximadamente 1 a aproximadamente 2.5 mg/ml, o aproximadamente 1 mg/ml, en general independientemente del tamaño o especie del sujeto, Sin embargo, péptidos particularmente potentes pueden tener concentraciones óptimas (cantidades efectivas) hacia el extremo bajo de este intervalo, por ej emplo entre aproximadamente i y aproximadamente 100 µg/ml, tal como entre aproximadamente 10 y aproximadamente 50 g/ml, o entre aproximadamente 20 y aproximadamente 60 g/ml, o entre aproximadamente 30 y aproximadamente 70 pg/ml, o entre aproximadamente 40 y aproximadamente 80 ug/ml, o entre aproximadamente 50 y aproximadamente 90 g/ml El tiempo entre la última dosis de ADN de cebado/inducción/atrapamiento y la primera dosis de péptido de refuerzo/amplificación, no es critico. En algunas modalidades, el tiempo entre cebado/inducción/atrapamiento y refuerzo/amplificación es aproximadamente 7 días o más, tal como aproximadamente 2 semanas o aproximadamente 3 semanas o aproximadamente 1 mes, y puede exceder varios meses. La multiplicidad de inyecciones de las dosis de cebado/inducción/atrapamiento y/o las dosis de refuerzo/amplificación puede reducirse al substituir infusiones que duran varios días (se prefieren 2-7 días, tales como 2 días ó 3 días ó 4 dias ó 5 días ó 6 días ó 7 dias) . Puede ser ventajoso iniciar la infusión con un bolo de material similar a lo que puede suministrarse como una inyección, seguido por una lenta infusión (aproximadamente 24 a aproximadamente 12000 microlitros/día para suministrar aproximadamente 25 a aproximadamente 2500 micro gramos/dia para ADN, aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10,000 microgramos/dia para péptido) . Esto puede lograrse en forma manual o a través del uso de una bomba programable, tal como una bomba de insulina. Estas bombas se conocen en la técnica y permiten picos periódicos y otros perfiles de dosis, que pueden ser convenientes en algunas modalidades.

Otras Terapias En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico aquí descrito puede integrarse con otras terapias de cáncer tradicionales incluyendo, pero no limitadas a cirugía, radiación, quimioterapia, terapia hormonal y semejantes. En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico aquí descrito puede utilizarse en un ámbito de adyuvante o neoadyuvante o protocolo de tratamiento para mejorar o aumentar el beneficio clínico. En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede incorporarse en paradigmas de terapia de oncología estándar tales como, terapia auxiliar o de consolidación, que involucran cirugía, radiación, quimioterapia, bioterapia, terapia de genes o terapia hormonal, y semejantes para mejorar o aumentar el beneficio clínico.

Como se emplea aquí, "protocolo de tratamiento de ámbito neoauxiliar" o "terapia neoadyuvante" se refiere a terapia o tratamiento antes de cirugía u otra terapia subsecuente. Esto es, al menos un ciclo terapéutico del régimen inmunoterapéutico aquí descrito se completa antes de un tratamiento de ablación de tumor tal como por ejemplo, pero no limitados a, cirugía, radiación o quimioterapia directa. En diversas modalidades, el tratamiento ablativo de tumor puede ser administrado dentro de días o dos semanas de la terminación del ciclo terapéutico como se determina por la persona con destreza en la técnica. De esta manera, el uso del régimen inmunoterapéutico en un ámbito terapéutico neoadyuvante puede incrementar la velocidad de remisión completa y parcial en pacientes, disminuir la velocidad de relapso y/o incrementar la supervivencia libre de enfermedad media de esta manera mejorando el beneficio clínico.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede emplearse en un ámbito adyuvante para incrementar la probabilidad de una cura. Esto es, el cáncer puede colocarse en completa remisión por un tratamiento ablativo de tumor tal como por ejemplo, pero no limitado a, eliminación quirúrgica, irradiación o quimioterapia con dosis que son directamente citotóxicas a las células de cáncer, y semejantes. El régimen inmunoterapéutico subsecuentemente se administra, resultando en una velocidad disminuida de relapso e incrementado intervalo de supervivencia libre de enfermedad. El régimen inmunoterapéutico puede administrarse dentro de horas, días, o semanas de la terminación del tratamiento inicial.

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede emplearse como terapia de consolidación. Esto semeja el ámbito adyuvante descrito anteriormente excepto porque no se alcanza necesariamente la remisión completa. En este ámbito, el régimen inmunoterapéutico mejora o incrementa el tiempo a supervivencia libre de progreso o progreso (en el caso de remisión parcial) , y disminuye la velocidad o tiempo de relapso (en el caso de remisión completa) .

En algunas modalidades, el régimen inmunoterapéutico puede emplearse como terapia adyuvante, esto es en adicional combinación con un tratamiento ablativo de tumor para incrementar esa eficacia de tratamiento. En contraste con terapia adyuvante, como se describió anteriormente en donde el régimen inmunoterapéutico no se inicia hasta que se completa el tratamiento primario, aquí los dos tratamientos se emplean en conjunto para incrementar la velocidad de respuesta o velocidad de control de la enfermedad (esto es de remisión parcial o completa) . El programa actual de los dos tratamientos puede ser similar a aquellos anteriores, pero ciclos terapéuticos del régimen inmunoterapéutico pueden alternarse con rondas de tratamiento primario tales como quimioterapia o radiación. En algunas modalidades, puede llevarse a cabo cirugía durante el intervalo de tiempo de un ciclo terapéutico del régimen inmunoterapéutico, por ejemplo en el intervalo entre las etapas de cebado (inducción/atrapamiento) y refuerzo (amplificación) o en un intervalo entre cursos de la composición de amplificación.

En una modalidad ejemplar, en un paciente con metástasis en la piel o subcutáneas, pero todavía sin metástasis viscerales, la inmunoterapia se utiliza para estabilizar la enfermedad, o reducir o someter a ablación la carga de tumor en el sitio de origen y/o en el sistema linfático, y tumores de la piel o subcutáneos son resecados quirúrgicamente .

En modalidades ejemplares, en un paciente con metástasis en la piel o subcutáneas, pero todavía sin metástasis viscerales, la inmunoterapia se emplea para estabilizar la enfermedad, o reducir o someter a ablación la carga de tumor en el sistema linfático, antes de resección de los pulmones de la piel o subcutáneos. De esta manera, el régimen inmunoterapéutico puede ser en un ambiente neoadyuvante (primero vacuna, segundo nivel de atención) para estabilizar la enfermedad antes de eliminación del tumor lo que lleva a remisión a largo plazo. Cánceres ejemplares susceptibles a este enfoque incluyen carcinomas y melanomas de riñon.

Para ciertos cánceres, por ejemplo melanoma, el curso típico de tratamiento incluye resección quirúrgica del tumor en el sitio de origen. Este curso de tratamiento también aplica a una variedad de tumores sólidos particularmente en, pero no necesariamente limitados a, las etapas tempranas de la enfermedad. Ejemplos incluyen cáncer de próstata y de riñon. De esta manera, en modalidades particulares, el régimen inmunoterapéutico se aplica en un ámbito adyuvante o como una terapia de consolidación, dependiendo del grado de diseminación de la enfermedad que ya ha ocurrido.

Métodos de Suministro de Composiciones En algunas modalidades, la descripción se refiere a métodos para administrar el uno o más agentes terapéuticos del régimen inmunoterapéutico aquí descritos. Estos métodos pueden incluir, sin limitación: administración intralinfática, intranodal, perinodal, oral, transdérmica, intravenosa, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, mucosal y semejantes. La administración puede ser de cualquier forma compatible con la formulación de dosis y en una cantidad tal como sea terapéuticamente efectiva. Una cantidad o dosis efectiva de una composición inmunogénica de la descripción es aquella cantidad que se encuentra que proporciona una respuesta deseada en el 'sujeto a tratar. Un método particularmente útil de suministro de vacuna para deducir una respuesta CTL se describe en las Patentes de los E.U.A. Números 6,994,851, 6,977,074, 7,364,729, y las Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Números de Serie 11/418,497 (Pub. No. 20090035252) y 11/418,397, cada una con titulo "A METHOD OF INDUCING A CTL RESPONSE", y la Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Números de Se.rie 12/070, 156 (Pub. No. 20080199458), con titulo "A METHOD OF ENHANCING A T-CELL RESPONSE", cada una de las cuales se incorpora por referencia en su totalidad.

En algunas modalidades, las composiciones aqui descritas se administran directamente al sistema linfático u órgano linfático. En modalidades particulares, este será un nodo linfático. Vasos linfáticos aferentes pueden igualmente emplearse. La selección de nodo linfático no es critica. Nodos linfáticos inguinales pueden utilizarse por su tamaño y accesibilidad, pero nodos axilares y cervicales y amígdalas igualmente pueden ser ventajosos. Administración a un solo nodo linfático puede ser suficiente para inducir o amplificar una inmuno respuesta. En algunas modalidades, la administración a múltiples nodos puede aumentar la confiabilidad y magnitud de la respuesta. Para modalidades que promueven una respuesta multivalente y en las que por lo tanto se emplean péptidos de amplificación/refuerzo múltiples, cada péptido puede ser administrado a cualquier nodo linfático en cualquier ocasión. De esta manera, un péptido puede ser administrado al nodo linfático inguinal derecho y un segundo péptido al nodo linfático inguinal izquierdo al mismo tiempo, por ejemplo. Péptidos adicionales pueden ser administrados a otros nodos linfáticos incluso si no son sitios de inducción, ya que no es esencial que las dosis de inicio y refuerzo/amplificación se administren al mismo sitio, debido a migración de linfocitos T. En forma alterna, péptidos adicionales pueden administrarse unos pocos días después, por ejemplo a los mismos nodos linfáticos para los péptidos de refuerzo/amplificación previamente administrados ya que el intervalo de tiempo entre inducción y amplificación generalmente no es un parámetro crucial. De esta manera, en algunas modalidades, el intervalo de tiempo puede ser mayor que aproximadamente una semana. La segregación de administración de péptidos de refuerzo/amplificación generalmente es de menor importancia si sus afinidades de enlace MHC son similares, pero puede crecer en importancia conforme las afinidades se vuelven más distintas. Formulaciones incompatibles de diversos péptidos también pueden hacer útil la administración segregada.

Para introducir los componentes de la composición inmunoterapéutica aquí descrita al sistema linfático u órgano linfático del paciente, cada uno de los componentes se dirige a un vaso linfático, nodo linfático, el bazo u otra porción apropiada del sistema linfático. En algunas modalidades, cada componente se administra como bolo. En algunas modalidades, uno o más componentes se suministran por infusión, generalmente sobre varias horas a varios días. En modalidades particulares, las composiciones inmunoterapéuticas se dirigen a un nodo linfático tal como un nodo inguinal o axilar, al insertar un catéter o aguja al nodo y mantener el catéter o aguja a través del suministro. Adecuadas agujas o catéteres están disponibles son hechas de metal o plástico (por ejemplo, poliuretano, cloruro de polivinilo (PVC), TEFLON, polietileno y semejantes). Al insertar el catéter o aguja en el nodo inguinal por ejemplo, el nodo inguinal se punciona bajo control ultrasonográfico utilizando una cánula VialonMR Insyte W.TM. y catéter de 24G3/4 (Becton Dickinson, USA), que se fija utilizando aposito transparente TegadermMR (Tegaderm™, St . Paul, Minn., USA). Un radiólogo experimentado en general realiza este procedimiento. La ubicación de la punta de catéter dentro del nodo linfático inguinal se confirma por inyección de un volumen mínimo de salino, que en forma inmediata y visible incrementa el tamaño del nodo linfático. Este último procedimiento también permite confirmación que la punta está dentro del nodo. Este procedimiento puede realizarse para asegurar que la punta no se deslice fuera del nodo linfático y puede repetirse en diversos días después de implante del catéter. En el caso de que la punta se deslice fuera de ubicación dentro del nodo linfático, puede implantarse un nuevo catéter.

Diversos parámetros pueden tomarse en cuenta para suministrar o administrar una composición inmunogénica a un sujeto. Además, un régimen de ' dosis y programa de inmunización pueden emplearse. En general, la cantidad de los componentes en la composición inmunoterapéutica variará de paciente a paciente y de antigeno a antigeno, dependiendo de factores tales como: la actividad del antigeno para inducir una respuesta; el gasto de flujo de la linfa a través del sistema del paciente; el peso y edad del sujeto; el tipo de enfermedad y/o condición que se trata; la severidad de la enfermedad o condición; intervenciones terapéuticas previas o concurrentes; la capacidad del sistema inmune del individuo para sintetizar anticuerpos; el grado de protección deseada; la forma de administración y semejantes, todos los cuales pueden determinarse fácilmente por el practicante.

En general, si se suministran por infusión, las composiciones inmunoterapéuticas aquí descritas pueden suministrarse a una velocidad desde aproximadamente 1 a aproximadamente 500 microlitros/hora o aproximadamente 24 a aproximadamente 12,000 microlitros/dia. La concentración de la composición inmunoterapéutica es tal que aproximadamente 0.1 microgramo a aproximadamente 10,000 microgramos de la composición terapéutica se suministrarán durante un periodo de 24 horas. El gasto de flujo se basa en el conocimiento que, en cada minuto, aproximadamente 100 a aproximadamente 1,000 microlitros de fluido linfático fluyen a través de un nodo linfático inguinal de adulto. Un objetivo es llevar al máximo la concentración local de la formulación de vacuna en el sistema linfático. Una cierta cantidad de investigación empírica en pacientes, se realiza para determinar el nivel más eficaz o el nivel de infusión óptimo para un inmunoterapéutico determinado en humanos.

En algunas modalidades, las composiciones inmunogénicas aquí descritas pueden administrarse como un número de dosis secuenciales . Estas dosis pueden ser 2, 3, 4 o más dosis como se requiera para obtener la inmuno respuesta apropiada. En algunas modalidades, se contempla que las dosis de la composición inmunogénica puedan administrarse dentro de aproximadamente segundos o minutos entre sí en' los nodos linfáticos inguinal derecho o izquierdo. Por ejemplo, el plásmido (cebador) primero puede inyectarse en el nodo linfático derecho seguido dentro de segundos o minutos por un segundo plásmido en los nodos linfáticos inguinales derechos o izquierdos. En algunas modalidades, la combinación de uno o más plásmidos que expresan uno o más inmunogénos, puede administrarse. En algunas modalidades, la inyección subsecuente después de la primera inyección en el nodo linfático puede estar dentro de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más minutos pero no mayor que aproximadamente 30, 40, 50 ó 60 minutos después de la primera inyección. Consideraciones similares se aplican a la administración de dos péptidos individualmente a los nodos linfáticos, derecho e izquierdo. Puede ser conveniente administrar las dosis de la composición inmunogénica a un intervalo de días, por ejemplo en donde 1, 2, 3, 4, 5, 6, o 7 o más días transcurren entre administraciones subsecuentes. En algunas modalidades, puede ser conveniente para una o varias administraciones subsecuentes de las composiciones que sean administradas por inyección de nodo linfático inguinal bilateral dentro de aproximadamente 1, 2, 3 o más semanas o dentro aproximadamente 1, 2, 3, o más meses después de la administración de dosis inicial.

Equipos En algunas modalidades, todo o un subconjunto de los componentes de las composiciones inmunoterapéuticas aquí descritas pueden empacarse o ensamblarse en conjunto en un equipo. En algunas modalidades, las proteínas terapéuticas, péptidos, polipéptidos, epítopos o ácido nucleico que los codifican pueden empacarse en conjunto, o como moléculas sencillas o como un conjunto de moléculas. En forma alterna, las composiciones aquí descritas pueden empacarse y ser vendidas individualmente junto con instrucciones, en forma impresa o en medio legible por máquina, describiendo como se utilizaran en conjunto entre sí como se describe aquí, para utilizar como un terapéutico.

En algunas modalidades, el equipo puede contener en un medio de recipiente conveniente, uno o más agentes terapéuticos e instrucciones para emplear los métodos aquí descritos. En algunas modalidades, el equipo puede tener un solo medio de recipiente y/o puede tener un distinto medio de recipiente para compuestos adicionales tales como una formulación inmunológica o terapéutica efectiva de uno o más agentes terapéuticos para tratar una enfermedad o condición debido por ejemplo, a enfermedad proliferativa tal como cáncer .

Cuando los componentes del equipo se proporcionan en una o más soluciones liquidas, la solución liquida es una solución acuosa, con una solución acuosa estéril que se prefiere particularmente. Las composiciones también pueden formularse como una composición de suministro y/o para inyección. En estas modalidades, los medios de recipiente por si mismos pueden ser una jeringa, pipeta y/u otro aparato semejante del cual puede suministrarse o inyectarse la formulación en un sujeto, y/o incluso aplicarse y/o mezclarse con los otros componentes del equipo. En algunas modalidades, los componentes del equipo pueden proporcionarse como uno o varios polvos secos. Cuando los componentes (por ejemplo, reactivos) se proporcionan como un polvo seco, el polvo puede ser reconstituido por la adición de un solvente conveniente.

Se prevé que el solvente también pueda proporcionarse en otros medios de recipiente. En algunas modalidades, uno o más componentes del equipo pueden proporcionarse como la solución liquida o como un polvo seco..

En algunas modalidades, el plásmido puede venderse en conjunto con la proteina terapéutica, péptido, epitopo o ácido nucleico que la codifica. En algunas modalidades, conjuntos de proteínas terapéuticas, péptidos, epitopos o ácido nucleicos que la codifican pueden venderse en conjunto sin el plásmido. En algunas modalidades, cada uno de los componentes incluyendo el régimen inmunoterapéutico aquí descrito puede venderse por separado.

Los medios de recipiente en general incluirán cuando menos una ampolleta, tubo de ensayo, matraz, botella, jeringa y/u otros medios de recipiente, en los cuales el uno o más agentes terapéuticos pueden colocarse. El equipo también puede incluir un segundo medio de recipiente para contener un amortiguador o tampón estéril, farmacéuticamente aceptable y/u otro diluyente. En algunas modalidades, el equipo también puede incluir un medio para contener los materiales para practicar los métodos aquí descritos, y cualesquiera otros recipientes de reactivos en confinamiento cerrado para venta comercial. Estos recipientes pueden incluir por ejemplo recipientes de plástico moldeados por soplado o inyección en los cuales las ampolletas deseadas son retenidas. Independientemente del número o tipo de recipientes, el o los equipos aquí descritos también pueden incluir o empacarse con un instrumento para ayudar con la inyección/administración de uno o más agentes terapéuticos dentro del cuerpo de un sujeto. Este instrumento por ejemplo puede ser pero no está limitado, a una jeringa, bomba y/o cualquier vehículo de suministro médicamente aprobado.

De esta manera, en algunas modalidades, composiciones de cebado/atrapamiento/inducción y refuerzo/amplificación que hacen blanco a un solo epítopo o conjunto de epítopos, pueden empacarse en conjunto. En otros casos, múltiples composiciones de cebado/atrapamiento/inducción pueden ser ensambladas en un equipo y las correspondientes composiciones de refuerzo/amplificación ensambladas en otro equipo. En forma alterna, las composiciones pueden ser empacadas y vendidas individualmente junto con instrucciones, en forma impresa o en medio legible por máquina, describiendo como pueden utilizarse en conjunto entre sí para lograr los resultados benéficos del protocolo de inmunización indicado o régimen inmunoterapéütico . Además variaciones serán aparentes para una persona con destreza en la técnica. El uso de diversos esquemas de empaque incluyendo menos que todas las composiciones que puedan emplearse en un protocolo o régimen particular, facilita la personalización del tratamiento, por ejemplo, con base en expresión de antigeno de tumor, o respuesta observada al inmunoterapéutico o sus diversos componentes, como se describe en las Solicitudes de Patente de los E.U.A. Números de Serie 11/155,288 (Pub. No 20060008468) y 11/323,964 (Pub. No. 2006-159689), cada uno con titulo "COMBINATIONS OF TU OR-ASSOCIATED ANTIGENS IN DIAGNOSTICS FOR VARIOUS TYPES OF CANCERS", y la Solicitud de Patente de los E.U.A. Número de Serie 11/155,928 (Pub. No. 20050287068), con titulo "IMPROVED EFFICACY OF ACTIVE IMMUNOTHERAPY BY INTEGRATING DIAGNOSTIC WITH THERAPEUTIC METHODS", cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad.

Además de aquellas ya descritas en esta solicitud, las siguientes solicitudes aquí se incorporan expresamente por referencia en su totalidad. Las Solicitudes Provisionales de Patentes de los E.U.A. Nos. de Serie 61/279,621 presentada en octubre 23, 2009; 61/254,657 presentada ' en octubre 24, 2009; y 61/255,850 presentada en octubre 28, 2009, cada una con titulo "CANCER IMMUNOTHERAPY AND METHOD OF TREATMENT", cada una se refiere a estrategias mejoradas para el diseño y práctica de generar una respuesta de célula T efectora contra un antigeno diana en un sujeto, y cada una aqui se incorpora expresamente por referencia en su totalidad. Métodos útiles para utilizar los análogos descritos para inducir, atrapar, mantener, modular o amplificar respuestas de células T restringidas MHC clase I, y particularmente respuestas CTL de memoria y efectoras a antigeno, se describen en las Patentes de los E.U.A. Nos. 6,994,851, 6,977,074, y 7,364,729, y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/871,707 (Pub. No. 2005-0079152) y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/323,572 (Pub. No. 2006-0165711), con titulo "METHODS TO ELICIT, ENHANCE AND SUSTAIN IMMUNE RESPONSES AGAINST MHC CLASS I-RESTRICTED EPITOPES, FOR PROPHYLACTIC OR THERAPEUTIC PURPOSE" . Los análogos también pueden emplearse en investigación para obtener adicionales análogos optimizados. Numerosos epitopos de constitutivos se proporcionan en las Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Nos. de Serie 10/117,937 (Pub. No. 2003-0220239 Al), y 10/657,022 (Pub. No. 2004-0180354), y en la Solicitud PCT No. PCT/US2003/027706 (Pub. No. WO 04/022709A2; y las Solicitudes Provisionales de Patentes los E.U.A. Nos. de Serie 60/282,211, presentada en abril 6, 2001; 60/337,017, presentada en noviembre 7, 2001; 60/363,210 presentada en marzo 7, 2002; y 60/409,123, presentada en septiembre 5, 2002; cada una de 'estas solicitudes tiene como titulo "EPITOPE SEQUENCES" . Los análogos además pueden utilizarse en cualguiera de los diversos modos descritos en esas solicitudes. Enjambres de epitopos, que pueden incluir o incluyen los presentes análogos, se describen y definen más completamente en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de serie 09/561,571, presentada en abril 28, 2000, con titulo "EPITOPE CLUSTERS". Metodología para utilizar y suministrar los presentes análogos, se describe en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 09/380,534 y la Patente de los E.U.A. No. 6,977,074 (otorgada en diciembre 20, 2005) y en la Solicitud PCT No. PCT/US98/14289 (Pub. No. WO 99/02183A2), cada una con título "A METHOD OF INDUCING A CTL RESPONSE" . Principios de selección de epítopo benéficos para estos inmunoterapéuticos se describen en las Solicitudes de Patente de los E.U.A. No. de Serie 09/560,465, presentada en abril 28, 2000, No. de Serie 10/026,066 (Pub. No. 2003-0215425 Al), presentada en diciembre 7, 2001, y No. de Serie 10/005,905 presentada en noviembre 7, 2001, todas con título "EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS", la Patente de los E.U.A. No. 6,861,234 (otorgada el 1 de marzo del 2005; la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 09/561,074), con título "METHOD OF EPITOPE DISCOVERY"; la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 09/561,571, presentada en abril 28, 2000, con título "EPITOPE CLUSTERS"; la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/094,699 (Pub. No. 2003-0046714 Al), presentada en marzo 7, 2002, con título "ANTI-NEOVASCULATURE PREPARATIONS FOR CANCER"; la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/117,937 (Pub. No. 2003-0220239 Al) y PCTUS02/11101 (Pub. No. WO 02/081646A2) , ambas presentadas en abril 4, 2002, y ambas con título "EPITOPE SEQUENCES" ; y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/657,022 y la Solicitud de PCT No. PCT/US2003/027706 (Pub. No. WO 04/022709A2) ambas presentadas en septiembre 5, 2003, y ambas con título "EPITOPE SEQUENCES". Aspectos del diseño total de plásmidos de vacunas se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 09/561, 572, presentada en abril 28, 2000, con título "EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS" ; y No. de Serie 10/292,413 (Pub. No. 2003-0228634 Al), presentada en noviembre 7, 2002, con título "EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS AND METHODS FOR THEIR DESIGN" ; la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/225,568 (Pub No. 20030138808), presentada en agosto 20, 2002, Solicitud de PCT No. PCT/US2003/026231 (Pub. No. WO 2004/018666) , presentada en agosto 19, 2003, ambas con título "EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS"; y la Patente de los E.U.A. No. 6, 709, 844 con título "AVOIDANCE OF UNDESIRABLE REPLICATION INTERMEDIATES IN PLAS ID PROPAGATION" . Combinaciones específicas antigénicas de beneficio particular para dirigir una respuesta inmune contra cánceres particulares se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. Provisional No. de Serie 60/479,554, presentada en junio 17, 2003 y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/871,708 (Pub. No. 20050118186), presentada en junio 17, 2004 y la Solicitud de Patente PCT No. PCT/US2004/019571 (Pub. No. O 2004/1 12825), todas con titulo "COMBINATIONS OF TUMOR-ASSOCIATED ANTIGENS IN VACCINES FOR VARIOUS TYPES OF CANCERS" . Antigenos asociados con neovasculatura de tumor (e.g., PSMA, VEGFR2 , Tie-2) son también útiles en conexión con enfermedades cancerosas, como se describe en la Patente de los E.U.A. ¦ No. 7,252, 824 (otorgada en agosto 7, 2007), Solicitudes de Patentes de los E.U.A. Nos. de Serie 11/073,347 (Pub. No. 20050260234) y 11/772,811 (Pub. No. 20090208537), todas con titulo "ANTI-NEOVASCULATURE PREPARATIONS FOR CANCER" , cada una de las cuales aquí se incorporan por referencia en su totalidad respectiva. Métodos para activar, mantener y manipular inmuno respuestas por administración dirigida de modificadores de respuesta biológica, se describen en la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. de Serie 60/640,727, presentada en diciembre 29, 2004. Métodos para derivar células CD4+ en la inducción de una respuesta inmune, se describen en la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. 60/640,821, presentada en diciembre 29, 2004. Enfermedades ejemplares, organismos y antigenos y epitopos asociados con organismos objetivos, células y enfermedades, se describen en la Patente de los E.U.A. No. 6,977,074 (otorgada en diciembre 20, 2005) presentada en febrero 2, 2001 y con titulo "METHOD OF INDUCING A CTL RESPONSE" .

Metodología ejemplar se encuentra en la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. de Serie 60/580,969, presentada en junio 17, 2004, y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. 20060008468-A1, publicada en enero 12, 2006, ambas con título "COMBINATIONS OF TUMOR- ASSOCIATED ANTIGENS IN DIAGNOTISTICS FOR VARIOUS TYPES OF CANCERS" . Metodología y composiciones también se describen en la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. de Serie 60/640,598, presentada en diciembre 29, 2004, con título "COMBINATIONS OF TUMOR-ASSOCAITED ANTIGENS IN COMPOSITIONS FOR VARIOUS TYPES OF CANCER". La integración de técnicas de diagnóstico para estimar y supervisar respuesta inmune con métodos de inmunización incluyendo utilizar los presentes análogos se discuten más completamente en la Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. No. de Serie 60/580,964 presentada en junio 17, 2004 y la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. 2005-0287068-Al, publicada en diciembre 29, 2005) ambas con título "IMPROVED EFFICACY OF ACTIVE IMMUNOTHERAPY BY INTEGRATING DIAGNOSTIC WITH THERAPEUTIC METHODS". Los vectores que codifican polipéptido inmunogénico se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 10/292,413 (Pub. No. 2003-0228634 Al), presentada en noviembre 7, 2002, con título "EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS AND METHODS FOR THEIR DESIGN", y en la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. 60/691,579, presentada en junio 17, 2005, con titulo "METHODS AND CO POSITIONS TO ELICIT ULTIVALENT IMMUNE RESPONSES AGAINST DOMINANT AND SUBDOMINANT EPITOPES, EXPRESSED ON CANCER CELLS AND TUMOR STROMA" . Descripción útil adicional, incluyendo métodos y composiciones de materia, se encuentra en la Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. de Serie 60/691,581, presentada en junio 17, 2005, con titulo "MULTIVALENT ENTRAIN-AND-AMPLIFY IMMUNOTHERAPEUTICS FOR CARCINOMA". Cada una de las solicitudes y patentes mencionadas en los párrafos anteriores aquí se incorporan por referencia en su totalidad para todo lo que ilustran. Adicionales análogos, péptidos y métodos se describen en la Publicación de Patente de los E.U.A. No. 2006-0057673 Al, publicada en marzo 16, 2006, con titulo "EPITOPE ANALOGS" y la Publicación de la Solicitud PCT No. O/2006/009920, con titulo "EPITOPE ANALOGS", todas presentadas en junio 17, 2005. Como un ejemplo, sin estar limitado a lo mismo cada referencia se incorpora por referencia por lo que ilustra respecto a los epitopos restringidos en MHC clase I, análogos, el diseño de análogos, usos de epitopos y análogos, métodos de uso y elaboración de epitopos, y el diseño y uso de vectores de ácido nucleico para su expresión. Otras solicitudes que se incorporan expresamente aquí por referencia son: Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/321,967 (Pub. No. 2006-0153844), presentada en diciembre 29, 2005, con titulo "METHODS TO TRIGGER, MAINTAIN AND MANIPULATE IMMUNE RESPONSES BY TARGETED ADMINISTRATION OF BIOLOGICAL RESPONSE MODIFIERS INTO LYMPHOID ORGANS", Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/323,572 (Pub. No. 2006-0165711), presentada en diciembre 29, 2005, con titulo "METHODS TO ELICIT ENHANCE AND SUSTAIN IMMUNE REPONSES AGAINST MCH CLASS I RESTRICTED EPITOPES, FOR PROPHYLACTIC OR THERAPEUTIC PURPOSES", Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/323,520 (Pub. No. 2008-0124352), presentada en diciembre 29, 2005, con titulo "METHODS TO BYPASS CD4+ CELLS IN THE INDUCTION OF AN IMMUNE RESPONSE", Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11/323,049 (Pub. No. 2006-0159694), presentada en diciembre 29, 2005, con titulo "COMBINATION OF TUMOR-ASSOCIATED ANTIGENS IN COMPOSITIONS FOR VARIOUS TYPES OF CANCERS", Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 11,323,964 (Pub. No. 2006-0159689), presentada en diciembre 29, 2005, con titulo "COMBINATIONS OF TUMOR-ASSOCIATED ANTIGENS IN DIAGNOSTICS FOR VARIOUS TYPES OF CANCERS", Solicitud Provisional de Patente de los E.U.A. No. de Serie 60/691,889, presentada en junio 17, 2005 con titulo "EPITOPE ANALOGS" . Métodos para mejorar una respuesta de célula T se describen en la Solicitud de Patente de los E.U.A. No. de Serie 12/070, 156 (Pub. No. 2008-0199485). Cada una de las anteriores descripciones aquí se incorpora por referencia en su totalidad.

El inmunoterapéutico activo aquí descrito puede emplearse en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de enfermedad, por ejemplo una enfermedad de la piel y/o linfática, un cáncer, en un paciente.

Los siguientes ejemplos son para propósitos ilustrativos solamente y no se pretende que limiten el alcance de la descripción o sus diversas modalidades en forma alguna.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar modalidades descritas aqui . Se aprecia por aquellos con destreza en la técnica que la metodología y composiciones descritos en los ejemplos siguientes, representan metodología descubierta por los inventores que funciona bien en la práctica de la descripción y de esta manera puede considerarse que constituye modos particulares para su práctica. Sin embargo, aquellos con destreza en la técnica pueden, a la luz de la presente descripción, apreciar que muchos cambios pueden realizarse en las modalidades específicas que se describen y todavía obtienen un resultado semejante o similar sin apartarse del espíritu y alcance de la descripción.

Ejemplo 1 Evaluación de inmunidad y resultado clínico de una inmunoterapia activa en pacientes con melanoma avanzado En una prueba de etiqueta abierta, de múltiples centros, un producto inmunoterapéutico activo (referido como MKC1106-MT) que abarca tres componentes: un plásmido recombinante que expresa fragmentos de dos antigenos dirigidos, elan A/MART- 1 y Tirosinasa (pMEL-TYR) ; y dos péptidos, análogos epitopo correspondientes a los epitopos CTL diana respectivos Melan A/MART- 126-35 y Tirosinasa 369-377 (E-MEL y E-TYR, respectivamente) , se probaron en un régimen de inmunización como se ilustra en la Figura 1. El diseño de plásmido y análogos péptido son como se ilustra en la Figura 2. El plásmido se formuló como una solución estéril para administración a una concentración de 4.0 mg/mL. Cada uno de los péptidos, (E-MEL y E-TYR) , se formularon como soluciones estériles de polvos liofilizados a una concentración de 1.0 mg/mL antes de inyección.

Todos los pacientes que participaron en esta prueba fueron HLA-A2 positivos. Estos pacientes también han confirmado melanoma avanzado (etapa Illb, lile o IV) , que progresa a través de terapias previas (por ejemplo, refractario a quimioterapia estándar, radiación y/o cirugía) .

Utilizando un protocolo/programa de tratamiento como se muestra en la Figura 1, el producto inmunoterapéutico activo de múltiples componentes se suministró por inyección de nodo intralinfático utilizando un enfoque de refuerzo de péptido/cebado de plásmido dirigido a producir una inmuno respuesta funcional contra ambos antigenos de Melan A/MART- 1 y tirosinasa. La dosis de plásmido para administración bilateral en nodos linfáticos inguinales se fijó a 1,200 microgramos por inyección. Un total de dieciocho pacientes se dosificaron - siete en la cohorte de péptido de baja dosis y once en la cohorte de alta dosis. La cohorte de péptido de baja dosis recibió una "baja dosis" de 100 microgramos cada uno de los péptidos Melan A/MARTI y tirosinasa por inyección. La cohorte de péptido de alta dosis recibió una "alta dosis" de 300 microgramos cada uno de los péptidos A/MARTI y tirosinasa por inyección.

En el primer ciclo terapéutico, tratamiento de cebado de plásmido se administra en los días 1, 4, 15 y 18 seguido por el tratamiento de refuerzo de péptido los días 29 y 32. Esto fue seguido por un segundo ciclo terapéutico. Evaluación clínica ocurrió después de cada ciclo terapéutico (un ciclo = 6 semanas) . Pacientes que no eran progresores por protocolo continuaron con ciclos de tratamiento adicionales hasta cambio en estado (Progreso de Enfermedad (PD = disease progression) ) y pueden recibir hasta 8 ciclos de tratamiento que se extiende por 48 semanas. La inmuno respuesta se estimó en línea de referencia y a través de la terapia al medir el por ciento de células T CD8+, en sangre periférica, específica para epítopos selectos de los dos antigenos inmunizantes. Respuestas clínicas se categorizaron utilizando criterios de Evaluación de Respuesta en Tumor Sólido (RECIST = Response Evaluation Criteria in Solid Tumor) . Pacientes fueron estimados que tienen enfermedad estable (SD = Stable Disease) si mantiene ese estado por un mínimo de 8 semanas; o como aplique, una respuesta parcial (RP = Partial Response) o respuesta completa (CR = Complete Response) , con base en cambios susceptibles de medición en tamaño del tumor confirmado por evaluación repetida a 4 semanas.

Diez pacientes completaron dos o más ciclos de terapia (dos pacientes en la dosis baja y ocho en la dosis alta) . Todos los pacientes evaluados co-expresaron los antígenos diana en biopsias de tumor. Seis pacientes (un paciente en la cohorte de baja dosis y cinco en la cohorte de alta dosis) exhibieron respuesta de tumor como se define por los criterios RECIST. De estos seis pacientes, tres exhibieron Respuesta Parcial (PR) y tres exhibieron Enfermedad Estable (SD) . Dos de los tres pacientes con PR completaron ocho ciclos de terapia; y el tercer paciente con PR completó un ciclo adicional para un total de nueve ciclos (> 1 año) de terapia. Estos tres pacientes con PR exhibieron 59% (Figura 3), 60% (Figura 4) y 30% (Figura 5) de encogimiento de tumor en lesiones diana combinadas. Uno de los tres pacientes con SD completó 8 ciclos de terapia y los otros dos pacientes progresaron después de dos ciclos de terapia .

Cinco de estos 6 pacientes con una respuesta de tumor fueron de etapa IIIC o IV con metástasis linfática (3 PRs y 2 SDs) (Figura 6A; circuios abiertos; Etapas IIIC y IV: Mía) . Entre estos, cuatro pacientes completaron ocho o nueve ciclos de terapia, todos los cuales tuvieron enfermedad linfática y presencia de células T específicas de Melan A en linea de referencia (Figura 6B círculos abiertos; Etapas IIIC y IV: Mía; PR SD) . Un quinto paciente con enfermedad linfática de etapa IIIC pero sin la presencia de células T especificas de Melan A en linea de referencia, lograron SD a 2 ciclos de terapia y posteriormente progresaron sin continuar en la prueba más allá de 2 ciclos (Figura 6A; círculo abierto; Etapas IIIC y IV: Mía) . El sexto paciente con etapa *IV (Mlb) logró SD en dos ciclos de terapia y posteriormente progresó sin continuar en la prueba más allá de 2 ciclos (Figura 6 A; círculo abierto; Etapa IV: Mlb, MI c) .

Los resultados muestran que la velocidad de respuesta inmune, definida como el porcentaje de pacientes que mostraron números elevados de células T específicas de antígeno en la sangre ante inmunización, como se mide por tinción de multímero MHC, se logró en 50% de todos los pacientes tratados (Figura 7) . Entre dos biopsias de lesiones de regresión una tuvo una infiltración densa de células T CD8+ con aproximadamente TILs al 1% (linfocitos de infiltración de tumor) que son específicos para el epítopo Melan A. Además, las biopsias de tumor mostraron fuerte infiltración tanto con células T CD8+ como CD4+.

Administración repetida del régimen fue segura y bien tolerada con todos los pacientes que completan al menos un ciclo y cuatro pacientes que completan al menos ocho ciclos (un año) de terapia. Se reportaron Efectos Adversos Serios (SAEs = Serious Adverse Effects) que no están relacionados con el fármaco o los fármacos. Los efectos adversos más frecuentemente reportados (AEs) fueron eventos adversos Grado 1 ó 2 que involucran primordialmente dolor en el área de inyección (ingle unilateral y bilateral) y fatiga (intermitente) , fiebre, mareos, sarpullido o erupción cutánea, prurito, rubefacción o enrojecimiento y eritema.

Análisis de sub-conjunto identificó poblaciones de pacientes en la prueba - con base en la etapa de enfermedad y células T específicas de línea de referencia - quienes demostraron las mejores respuestas clínicas totales. Entre 8 pacientes que tenían células T específicas de Melan A MART- 1 en la línea de referencia, cuatro pacientes (todos con enfermedad metastásica linfática) lograron respuestas clínicas durables (>1 año) , (PR o SD como se mide por RECIST, y regresión de tumor) , mientras que los otros 4 pacientes (todos con enfermedad visceral) mostraron rápido avance de la enfermedad y no completaron 2 ciclos, de tratamiento. Entre los 10 pacientes restantes sin células T especificas medibles en la linea de referencia, ninguno logró respuesta durable.

De los 7 pacientes con enfermedad de la piel y/o linfática (etapas IIIC y IV Mía) , 4 mostraron respuesta clínica durable. Además soportar el papel de la etapa de enfermedad en respuesta clínica, ninguno de los 11 pacientes con enfermedad visceral (Mlb, Mlc) tuvo respuestas clínicas durables. En aquellos 4 pacientes con respuestas clínicas durables, ninguno de ellos tuvo respuestas mixtas ya que no se desarrollaron nuevas lesiones en ninguno de estos 4 pacientes, sugiriendo actividad contra focos micrometastásicos, ya que el progreso natural de estos pacientes es enfermedad diseminada, metastásica. Tomados en conjunto, estos resultados no solo soportan aplicabilidad clínica de este agente en un ambiente de enfermedad medible (tal como enfermedad metastásica linfática) , sino que también sugiere su efectividad contra enfermedad micrometastásica aplicable a dos indicaciones: 1) ámbito de adyuvante (por ejemplo después de tratamiento primario en pacientes con enfermedad residual mínima) para prolongar tiempo a relapso; 2) en enfermedad avanzada, terapia auxiliar o adyuvante o monoterapia, para frenar progreso de tumor al evitar desarrollo de nuevas lesiones metastásicas .

Ejemplo 2 Evaluación de inmunidad y resultado clínico de una inmunoterapia activa en pacientes con tumores sólidos PRAME y PSMA positivos Acumular evidencia en expresión de tejido e inmunogenicidad de epitope indica que Antigeno Preferencial de Melanoma (PRAME = Preferential Antigen of Melanoma) y Antigeno de Membrana Especifico de Próstata (PSMA = Prostate Specific Membrane Antigen) son dianas potencialmente aplicables a inmunoterapia activa de diversos tumores sólidos.

Por lo tanto, en un estudio de múltiples centros de etiqueta abierta, de segunda fase 1, pacientes HLA-A2 positivos que co-expresan PRAME y PSMA en tejido de tumor, y con cáncer avanzado de diversos tipos de tumor, enfermedad metastásica y/o enfermedad refractaria progresiva fueron tratados con un producto inmunoterapéutico activo que hace diana en antigenos PRAME y PSMA. El producto inmunoterapéutico activo (referido como MKC1 106-PP) abarca tres componentes: un plásmido recombinante (pPRA-PSM) que expresa fragmentos de los dos antigenos diana; y dos análogos péptido (E-PRA y E-PSM) , que corresponden a los antigenos diana respectivos (Figura 8). El plásmido se formuló como una solución estéril a una concentración de 4.0 mg/mL y cada uno de los péptidos, (E-PRA y E-PSM) , se formularon como soluciones estériles (a una concentración de 0.5 mg/mL y 1.0 mg/mL respectivamente) de polvos liofilizados . Cada uno de los tres componentes del régimen inmuno terapéutico se suministró por inyección de nodos linfáticos intra-inguinales bilateral en un protocolo de régimen de sensibilización y refuerzo, dirigido a producir una inmuno respuesta funcional contra ambos antigenos PRA E y PSMA. El programa de administración de plásmido y péptido se muestran en la Figura 1.

Un total de veintiséis pacientes con diversos tipos de tumor (11 con carcinoma de próstata, 2 con carcinoma de riñon, 11 con melanoma, y 2 con otros cánceres) se dosificaron: trece cada uno en la cohorte de péptido de baja y alta dosis, respectivamente. Veinticuatro pacientes completaron al menos un ciclo del tratamiento y se consideró que eran susceptibles de evaluar por inmuno respuesta. Las dos dosis de péptido empleadas fueron: "dosis baja" de 22.5 y 30 microgramos y "dosis alta" de 150 y 300 microgramos de péptido/inyección, para E-PRA y E-PS , respectivamente. La dosis de plásmido para inyección bilateral se fijó a 1,200 microgramos/inyección.

Se evaluaron sujetos clínicamente después de dos ciclos terapéuticos (12 semanas). Los pacientes que se determinan no progresores (es decir no se observa progreso de la enfermedad; respondedores), continuaron en terapia y pudieron recibir hasta 6 ciclos de tratamiento (que se extienden por 36 semanas) , más allá de dos ciclos terapéuticos. La respuesta inmune se estimó al medir el porcentaje de células T CD8+ especifico para los dos antigenos inmunizantes, PRA E y PSMA, en sangre periférica, en la linea de referencia y a través de terapia utilizando ensayos de tetrámero y ELISPOT.

Siete pacientes mostraron evidencia emergente de respuesta clínica durable, completando cuatro o más ciclos de terapia durante al menos seis meses (3 pacientes en dosis baja y 4 en dosis alta) ; 4 de 10 pacientes de carcinoma de próstata; ambos pacientes de cáncer de riñon, y 1 de 11 pacientes de melanoma. La Figura 9 ilustra encogimiento de tumor en un paciente con cáncer de próstata con enfermedad metastásica linfática a 36 semanas después de inicio del tratamiento. Quince de veinticuatro pacientes susceptibles a evaluar mostraron expansión transitoria o persistente de células T específica a los antígenos inmunizantes, subsecuente a inicio del protocolo de inmunización.

El beneficio clínico se observó asociado con expansión significante de células T específicas de antígeno como se mide por análisis de tetrámero. En particular, pacientes que mostraron evidencia de respuesta clínica durable tendieron a mostrar expansión de células T específicas en la sangre al principio y en una mayor proporción, después de inicio del régimen. Beneficio clínico durable (SD sobre al menos cuatro ciclos de tratamiento) se observó en 7 pacientes susceptibles a evaluación (Figura 10 y Tabla 3) en comparación con 17 pacientes con progreso de la enfermedad (Figura 10 y Tabla 3) al tiempo que tuvieron la primera evaluación después de que se iniciara el tratamiento (12 semanas). De los 17 pacientes con progreso de enfermedad (Tabla 3) , 14 pacientes tuvieron células T susceptibles a medir en la sangre al inicio y durante tratamiento (ver Figure 10; N=14); los otros 3 pacientes progresaron la enfermedad muy rápido para obtener células T medibles en la sangre más allá del inicio del tratamiento. Además, la mitad de los pacientes evaluados quienes mostraron evidencia de respuesta clínica durable, también exhibieron células T persistentes en la sangre por todos y más allá de los primeros 2 ciclos (12 semanas) en comparación con 0% (cero de diecisiete pacientes) quienes progresaron dentro del mismo intervalo, correspondientes a los primeros dos ciclos de terapia (Figura 11; * Células T específicas de epítopo en línea de referencia detectada). Finalmente, pacientes .que mostraron expansión de células T específica y durable tendieron a exhibir un menor porcentaje, o ninguna célula T específicas de antígeno en la línea de referencia, indicando una inducción de novo de una respuesta de célula T con capacidades efectoras en pacientes con inmunidad de células T competentes. Además, los datos sugieren una respuesta de células T pre-existentes deteriorada en pacientes con enfermedad que progresó rápidamente a pesar del tratamiento.

Tabla 3. Asociación entre inmunidad, etapa de la enfermedad y beneficio clínico durable.

Continúa la tabla 3 Análisis de expresión de diana confirmó co-expresión de PRAME y PSMA en casi 100% de las muestras de tumor de cáncer de próstata y una mayoría de tejidos de tumor de pacientes con melanoma y cáncer de riñon. Los mejores resultados clínicos incluyen: un paciente con carcinoma de próstata con regresión de tumor reflejada por declive de PSA (30+ semanas), dos pacientes de carcinoma de próstata con enfermedad estable (36+ semanas) acompañados por cambio de velocidad PSA, un paciente de cáncer de riñon sin evidencia de enfermedad post-resección en un ambiente neoadyuvante (72+ semanas) y un paciente de melanoma metastásico (etapa Mlc) con enfermedad estable a 72+ semanas.

En total, los resultados muestran que la velocidad de respuesta inmune, definida como el porcentaje de pacientes que muestran números elevados de células T especificas de antigeno en la sangre ante inmunización, fue mayor que 60% entre los pacientes susceptibles a evaluar. El régimen de inmunización fue bien tolerado con cinco pacientes que completan seis ciclos (nueve meses) de terapia. Siete pacientes lograron respuesta clínica definida como "Respuesta Parcial" (RECIST) , o cambio en tiempo de duplicación de PSA o "Enfermedad Estable" (por al menos seis meses) : cuatro con próstata, dos con carcinoma renal y uno con melanoma. Pacientes que montaron una respuesta inmune contra ambos antígenos, persistiendo por todos los primeros 2 ciclos de terapia, fue más probable que mostraran beneficio clínico.

No se reportaron efectos adversos serios relacionados a los fármacos (SAEs = Serious Adverse Effects) . Los efectos adversos más frecuentemente reportados (AEs) fueron eventos adversos Grado 1 o 2 primordialmente que involucran dolor en el área de inyección (ingle unilateral y bilateral) y fatiga (intermitente), fiebre, mareos, sarpullido, prurito, enrojecimiento y eritema.

En algunas modalidades, los números expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como peso molecular, condiciones de reacción, y así en adelante empleados para describir y reclamar ciertas modalidades de la descripción, se entenderán como modificados en algunos casos por la expresión "aproximadamente". De acuerdo con esto, en algunas modalidades, los parámetros numéricos establecidos en la descripción escrita y las reivindicaciones anexas, son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se busca obtener por una modalidad particular. En algunas modalidades, los parámetros numéricos deberán considerarse a la luz del número de dígitos significantes reportados y al aplicar técnicas de redondeo ordinarias. No obstante que los intervalos numéricos y parámetros que establecen el amplio alcance de algunas modalidades de la descripción son aproximaciones, los valores numéricos establecidos en los ejemplos específicos se reportan lo más práctico preciso. Los valores numéricos presentados en algunas modalidades de la descripción pueden contener ciertos errores que resultan necesariamente de la desviación estándar que se encuentra en sus mediciones de prueba respectivas.

Ejemplo 3 Revisión independiente de los datos de formación de imagen de la prueba de melanoma Respuestas objetivo, particularmente encogimiento de tumor, no se han observado en general en pruebas de vacunas para cáncer. Por ejemplo, la reciente aprobación de PROVENGE se basó en un modesto incremento de 4.1-mes en duración de supervivencia entre los recipientes de la vacuna; el uso del agente no estuvo asociado con efecto antitumor medióle (D. Longo, N . Engl . J. Med. 363:479-481, 2010; P. W. Kantoff, N. Engl. J. Med. 363:41 1-422, 2010). De esta manera, la generación de respuestas objetivo en las pruebas anteriormente descritas fue sorprendente ya que no pudo haberse esperado una observación dado el número pequeño de pacientes participantes. La naturaleza inesperada de estas observaciones¦ llevó a tener los resultados de la prueba de melanoma que fueron revisados por un laboratorio de patología independiente. La interpretación de barridos CT y otra formación de imagen variará cuantitativamente con base en la metodología, incluyendo selección de lesiones a evaluar — de esta manera el valor de lecturas independientes — sin embargo deberá lograr resultados cualitativos consistentes. Como tal, no se espera que cada lectura independiente concuerde exactamente en todos los detalles, sin embargo, se esperan que las conclusiones totales sean consistentes. Mientras que es necesario tener una lectura independiente' de resultados de formación de imagen en pruebas de eficacia para tratamiento de cáncer, es atípico para una prueba de fase 1.

Para, revisión, el radiólogo independiente está al tanto del tipo de tumor y la secuencia de imágenes en tiempo, pero toda la otra información de pacientes incluyendo el tratamiento, estuvo bloqueada. El radiólogo independiente fue totalmente responsable por la selección de las lesiones diana y no diana, su medición y estimar la mejor respuesta de acuerdo con los criterios RECIST (v. 1.0) con base en barridos CT digitalizados para todos los sujetos de la prueba para la cual estaba disponible la formación de imagen. (Un sujeto respondedor tuvo solo lesiones en la piel (enfermedad de Etapa IIIC; ver Figuras 6A y 6B) y de esta manera no se tomaron barridos CT) . Como se ve en la Figura 12, una comparación sujeto por sujeto de máximo por ciento de cambio^ de tumor muestra que el investigador de la prueba y lecturas independientes producen resultados consistentes. De esta manera, por esta evaluación Ptl-Pt4 y Pt6 (Pt 5 no fue evaluable) mostraron respuesta objetivo por los criterios RECIST (la respuesta para Pt6 fueron de vida relativamente corta) y Pt 7 a Ptl 1 tuvo enfermedad progresiva a pesar de tratamiento. Los pacientes (Pt)l a Pt4 en la Figura 12 fueron aquellos identificados que tenían inmunidad existente previa a Melan A y clasificaron por tener enfermedad linfática Etapa IV: Mi (ver Figuras 6A y 6B) . Estos pacientes se clasificaron porque tiene enfermedad de Etapa IV: Mlb o Mlc en las Figuras 6A y 6B que tienen lesiones diana viscerales incluyendo Pt 5 a Pt 11 en la Figura 12.

La lectura independiente también reportó ciertas lesiones fuera del sistema linfático para Ptl a Pt4, incluyendo lesiones en pulmón, hígado y tejido suave o blando, no reportadas por el- investigador de la prueba. Estas lesiones no cambian en tamaño o número sobre el curso del tratamiento y en general fueron menores a 1 cm en su dimensión más grande (lesiones no diana) . Estas observaciones indicaron que pacientes con enfermedad linfática predominante pero de otra forma baja carga de tumor visceral pueden beneficiarse de esta inmunoterapia . Aún más, fueron consistentes con la idea de que mayor metástasis puede ser inhibida por este tratamiento.

En algunas modalidades, los términos "un", "una" y "el/la" y referencias similares empleadas en el contexto de describir una modalidad particular de la descripción (en especial en el contexto de ciertas de las siguientes reivindicaciones) puede considerarse que cubren tanto en singular como en plural. La descripción de intervalos para valores aquí, simplemente se pretende que sirva un método abreviado para referirse en forma individual a cada valor separado que cae dentro del intervalo. A menos que se indique aquí de otra forma, cada valor individual se incorpora en la especificación como si se describiera individualmente aquí. Todos los métodos aquí descritos pueden realizarse en cualquier orden conveniente a menos que se indique de otra forma o de otra forma sea contraindicado claramente por el contexto. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o descripción ejemplar (por ejemplo, "tal como") que se proporciona con respecto a ciertas modalidades, se pretende solamente para mejor iluminar la descripción y no presenta una limitación en el alcance de la descripción de otra forma reivindicada. No habrá de considerarse lenguaje en la especificación que indique que ningún elemento no reivindicado sea esencial para la práctica de la descripción.

Agrupamientos de elementos o modalidades alternos de la descripción aquí ilustrada, no habrá de considerarse como limitaciones. Cada miembro de grupo puede ser referido como y reivindicado individualmente o en cualquier combinación con otros miembros del grupo u otros elementos que aquí se encuentran. Se anticipa que uno o más miembros de un grupo pueden ser incluidos en o eliminados de un grupo por razones de conveniencia y/o patentabilidad . Cuando cualquiera de dichas inclusiones o deleciones ocurre, la especificación aquí se considera que contiene el grupo como se modificada, de esta manera cumpliendo con la descripción escrita de todos los grupos Markush empleados en las reivindicaciones anexas.

Modalidades particulares de esta descripción se describen aquí, incluyendo el mejor modo conocido para los inventores en la práctica de la descripción. Variaciones a esas modalidades serán aparentes a aquellos con destreza ordinaria en la especialidad ante lectura de la descripción anterior. Se contempla que las personas con destreza en la especialidad pueden emplear estas variaciones como sea apropiado, y la descripción puede practicarse de otra forma como se describe específicamente aquí. De acuerdo con esto, muchas modalidades de esta descripción incluyen todas las modificaciones y equivalentes de la materia descrita en las reivindicaciones agregadas aquí como se permita por la ley aplicable. Aún más, cualquier combinación de los elementos anteriormente descritos en todas sus variaciones posibles se abarca por la descripción a menos que se indique de otra forma o de otra manera sea contraindicado claramente por el contexto .

Además, numerosas referencias se han realizado a patentes y publicaciones impresas a través de esta especificación. Cada una de las referencias anteriormente citadas así como publicaciones impresas, aquí se incorporan individualmente por referencia en su totalidad en la proporción que cualquier contexto no entre en conflicto con la descripción presentada directamente aquí.

Los anteriores párrafos se pretenden que ilustren como los conceptos generales de la descripción pueden ser aplicados en la práctica y no tomados como una descripción exhaustiva o limitante de las variaciones posibles. Sin duda, muchas variaciones o modificaciones adicionales se sugerirán por las propiedades de composiciones inmunoterapéuticas particulares y regímenes/protocolos de inmunización, y serán aparentes para aquellos con destreza en la técnica. De esta manera, a manera de ejemplo, pero no de limitación, configuraciones alternas de la presente descripción pueden utilizarse de acuerdo con las presentes enseñanzas. Modalidades individuales pueden específicamente incluir, excluir cualesquiera de estas alternativas. De acuerdo con esto, la presente descripción no se limita a lo mostrado y descrito precisamente.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un inmunógeno para utilizar en el tratamiento de un cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene una inmunoreactividad existente previa a Melan A, y en donde el inmunógeno es capaz de promover una respuesta de célula T efectora a elan-A.

2. Un inmunógeno para utilizar en el tratamiento de un cáncer en un paciente, en donde el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad existente previa con al menos un antígeno seleccionado del grupo de PRAME y PS A, y en donde el inmunógeno es capaz de promover una respuesta de efector de célula T al antigeno para el cual no hay inmunoreactividad existente previa o mínima.

3. Un inmunógeno para utilizar como un medicamento en el tratamiento de un cáncer en un paciente, en donde el paciente tiene un cáncer que no ha progresado, o solo tiene diseminación limitada más allá de órganos linfáticos secundarios, y en donde el inmunógeno es capaz de promover una respuesta de efector de célula T a un antígeno asociado con el cáncer, en donde el inmunógeno es para administración intralinfática directa del inmunógeno.

4. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el paciente está en una etapa de enfermedad en donde hay diseminación limitada más allá del sistema linfático y cualesquiera metástasis que se han diseminado más allá del sistema linfático 10 o menor y ya sea 1) no está en un órgano vital o 2) tiene menos de un centímetro de diámetro.

5. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el paciente tiene una enfermedad de la piel y/o linfática, y en donde el tratamiento además comprende determinar la ubicación de la enfermedad a los órganos linfáticos.

6. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 1 ó 5, caracterizado porque la enfermedad de la piel y/o linfática es enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) .

7. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 5 ó 6, caracterizado porque el tratamiento comprende hacer blanco o diana en un epítopo de A26-35.

8. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 5-7, caracterizado porque el cáncer es melanoma o glioblastoma .

9. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque PR7AME y PSM/A son co-expresados en el tejido de tumor del paciente.

10. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 2 ó 9, caracterizado porque el tratamiento comprende hacer diana a un epítopo PRAME425-433 y/o un epítopo PSMA288-297.

11. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 9-10, caracterizado porque el cáncer es cáncer de próstata y el beneficio clínico comprende niveles de PSA disminuidos.

12. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 9-11, caracterizado porque al menos un antígeno diana comprende un antígeno PRAME y/o un antígeno PS A y el cáncer es de próstata, cáncer de riñon, o melanoma.

13. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 ó 9-12, caracterizado porque el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad existente previa tanto a PRAME como PSMA; y en donde el tratamiento además comprende: administrar al menos un ciclo terapéutico adicional de un inmunoterapéutico activo que hace diana al menos en PRAME o PSMA; ensayar para expansión de células T de PRAME y/o PSMA en una muestra del paciente; clasificar al paciente como un respondedor, con base en la expansión de células T específicas de antígeno; y administrar al menos un ciclo terapéutico adicional al respondedor.

14. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la etapa de ensayo muestra una expansión en células T anti-PRAME o anti-PSMA y la terapia subsecuente comprende administrar ciclos terapéuticos subsecuentes del régimen inmunoterapéutico.

15. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la terapia subsecuente comprende administrar un inmunopotenciador .

16. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la etapa de ensayo no indica expansión o una expansión temporal tanto de células T PRAME y PSMA y la terapia subsecuente comprende interrumpir el régimen inmunoterapéutico .

17. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el tratamiento logra un beneficio clínico.

18. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el beneficio clínico comprende regresión o estabilización de tumor de la enfermedad.

19. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-18, caracterizado porque la inmunoreactividad existente previa o mínima o ninguna inmunoreactividad se mide por ensayo de tetrámero o ELISPOT.

20. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-19, caracterizado porque el paciente tiene un cáncer que no ha progresado, o solo tiene limitada diseminación, más allá de órganos linfáticos secundarios .

21. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el paciente tiene una enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) .

22. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el cáncer es al menos uno de melanoma, riñon, mama, páncreas, próstata, colorectal, de ovarios, pulmonar-de-células-no pequeñas, glioblastoma, melanoma ocular, carcinoma de mama sensible a hormonas, de próstata y de ovarios, carcinoma de próstata refractario a hormonas, carcinoma de células renales, esofágico o mesotelioma.

23. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el tratamiento comprende un régimen de sensibilización y refuerzo .

2 . Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el tratamiento comprende más de un ciclo terapéutico.

25. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el régimen inmunoterapéutico de sensibilización de refuerzo comprende administración de 'una cantidad efectiva de un plásmido para inducir una inmuno respuesta seguida por administración de una cantidad efectiva de al menos un péptido que corresponde a un epitopo expresado por el plásmido.

26. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el epitopo expresado por el plásmido es al menos uno de un epítopo PRAME o su análogo, o un epitopo PSMA o su análogo o un epítopo de Melan A o su análogo, o un epítopo de tirosinasa o su análogo.

27. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el epítopo PRAME es PRAME425-433 o su análogo, o en donde el epítopo PSMA es PSMA288-297 o su análogo, o en donde el epítopo de Melan A es Melan A26-35, o su análogo, o en donde el epítopo de tirosinasa es tirosinasa369-377 o su análogo.

28. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el plásmido comprende pMEL-TYR o pPRA- PSM.

29. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el péptido como mínimo comprende Melan A26-35 A27Nva (ENvaAGIGILTV) (SEQ ID NO: 2) o Melan A26-35 A27L (ELAGIGILTV) (SEQ ID N0:3).

30. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el péptido como mínimo comprende PRAME425-433 L426Nva, L433Nle (SNvaLQHLIGNle) (SEQ ID NO: 7).

31. Inmunogeno de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el péptido como mínimo comprende análogo péptido PSMA288-297 PSMA288-297 I297V (GLPSIPVHPV) (SEQ ID NO: 9) .

32. Inmunogeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque administrar inmunógeno al paciente comprende suministro directo al sistema linfático.

33. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el suministro directo al sistema linfático comprende suministro intranodal.

34. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el tratamiento además comprende administrar un inmunopotenciador .

35. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque además comprende un inmunopotenciador.

36. Inmunógeno de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el inmunopotenciador se elige del grupo que consiste de citocinas, quimiocinas, moléculas co-estimuladoras , factores de transcripción, elementos de transducción de señal; agentes que están involucrados en procesamiento y presentación de antigeno, proteínas TAP 1 y TAP 2, proteasoma inmune o estándar, beta-2-microglobulina, y moléculas clase I o II MHC; agentes que están involucrados en regular la ruta apoptósica, agentes que están involucrados en control de genes o silenciado tales como enzimas metilantes de ADN, moléculas que controlan cromatina, moléculas reguladoras de ARN; receptores tipo Toll (TLRs) , péptidoglicanos , LPS o sus análogos, imiquimod, oligodeoxinucleótidos CpG no metilados (CpG ODNs); dsRNAs, dsDNA bacterianos (que contienen motivos CpG) , y dsRNA sintético (polyLC) en APC y células inmunes intactas que ligan a TLR9 y TLR3, respectivamente; moléculas naturales o sintéticas orgánicas pequeñas que ligan a TLRs, imidazoquinolinas anti-virales sintéticas, imiquimod y resiquimod; adyuvantes inmunopotenciadores que activan pAPC o células T, ligandos Receptores de Reconocimiento de Patrón Endocitico (PRR), quilla as saponinas y tucaresol.

37. Inmunógeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el tratamiento además comprende administrar un agente para reducir la naturaleza inmunosupresora ,del micro-ambiente de tumor para promover un beneficio clínico.

38. Inmunógeno de conformidad con la cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el paciente es HLA-A2 positivo.

39. Un método para tratar un paciente con cáncer con un inmunoterapéutico activo, que comprende estimar el nivel de un paciente de inmunoreactividad existente previa a cuando menos un antígeno diana; seleccionar un régimen inmunoterapéutico con base en el nivel de inmunoreactividad existente previa, en donde el régimen comprende administración de al menos un inmunógeno que hace diana al antígeno objetivo como mínimo o su epítopo; y tratar al paciente de acuerdo con el régimen.

40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el inmunógeno es capaz de promover una respuesta efectora de célula T a un antigeno asociado con el cáncer.

41. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el régimen inmunoterapéutico logra un beneficio clínico.

42. El método de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el beneficio clínico comprende regresión de tumor o estabilización de la enfermedad.

43. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el nivel de inmunoreactividad existente previa se mide por ensayo de tetrámero o ELISPOT.

44. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el paciente tiene un cáncer que no ha progresado más allá de órganos linfáticos secundarios.

45. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el paciente tiene enfermedad linfática de etapas IIIC o IV (Mía) .

46. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el cáncer es al menos uno de melanoma, riñon, mama, páncreas, próstata, colorectal, de ovarios, pulmonar de células no pequeñas, glioblastoma, melanoma Ocular, carcinoma de mama sensible a hormonas, de próstata y de ovarios, carcinoma de próstata refractario a hormonas, carcinoma de células renales, esofágico o mesotelioma .

47. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el régimen inmunoterapéutico comprende un régimen de sensibilización y refuerzo.

48. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el régimen inmunoterapéutico comprende más de un ciclo terapéutico.

49. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque administrar el inmunógeno comprende suministro directo al sistema linfático del paciente.

50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque el suministro directo al sistema linfático comprende suministro intranodal.

51. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el paciente es HLA-A2 positivo..

52. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el antigeno diana comprende Melan A y el paciente tiene una inmunoreactividad existente previa a Melan A, y en donde el régimen inmunoterapéutico comprende administrar un inmunógeno para promover una respuesta de célula T efectora a Melan A, o su epitopo.

53. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el paciente tiene una enfermedad de la piel y/o linfática.

54. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la enfermedad de la piel y/o linfática es enfermedad linfática de etapa IIIC o IV (Mía) .

55. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque el régimen inmunoterapéutico comprende dirigir epitopo Melan A26-35 o su análogo.

56. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque el cáncer es melanoma o glioblastoma .

57. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el antigeno diana comprende al menos uno de PPvAME o PSMA y el paciente no tiene o tiene mínima inmunoreactividad existente previa a cuando menos uno de PRAME o PSMA, y en donde el régimen inmunoterapéutico comprende administrar el inmunógeno para promover una respuesta de célula T efectora a cuando menos uno de PRAME o PSMA.

58. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque PRAME y PSMA son co-expresados en el tejido de tumor del paciente.

59. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque el régimen inmunoterapéutico comprende hacer diana al menos uno de epitopo PRAME425-433 o un epitopo PSMA288-297.

60. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque el cáncer es de próstata, cáncer de riñon o melanoma.

61. El método de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque el cáncer es cáncer de próstata y el beneficio clínico comprende niveles de PSA disminuidos.

62. Un método para tratar un paciente de cáncer, caracterizado porque comprende: seleccionar a un paciente en una etapa de la enfermedad en donde hay diseminación limitada más allá del sistema linfático y cualesquiera metástasis que se han diseminado más allá del sistema linfático número 10 o menos y cualquiera de 1) no están en un órgano vital o 2) tienen menos de un centímetro de diámetro; y aplicar al paciente un régimen inmunoterapéutico que comprende administrar directamente al sistema linfático del paciente un inmunógeno para promover una respuesta efectora de célula T a un antígeno asociado con el cáncer.