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MX2012001945A - Oligosacaridos n-sulfatados activadores de los receptores de fgf, su preparacion y su uso en terapeutica. - Google Patents

Oligosacaridos n-sulfatados activadores de los receptores de fgf, su preparacion y su uso en terapeutica.

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Publication number
MX2012001945A
MX2012001945A MX2012001945A MX2012001945A MX2012001945A MX 2012001945 A MX2012001945 A MX 2012001945A MX 2012001945 A MX2012001945 A MX 2012001945A MX 2012001945 A MX2012001945 A MX 2012001945A MX 2012001945 A MX2012001945 A MX 2012001945A
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MX
Mexico
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sodium
deoxy
benzyl
idopyranosyluronate
sulfonate
Prior art date
Application number
MX2012001945A
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English (en)
Inventor
Philippe Duchaussoy
Pierre Fons
Alexandre Froidbise
Original Assignee
Sanofi Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Sa filed Critical Sanofi Sa
Publication of MX2012001945A publication Critical patent/MX2012001945A/es

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Abstract

Oligosacáridos N-sulfatados activadores de los receptores de FGF, que responden a la fórmula (I); en donde R1, R4, R6 y R8 representan grupos -OSO3 o hidroxilo, R2 representa un grupo -O-alquilo o un monosacárido de fórmula de fórmula (II), R3 representa un disacárido de fórmula (III), R5 representa un disacárido de fórmula (IV), R7 representa un grupo hidroxilo o un disacárido de fórmula (VI); R9 representa un grupo hidroxilo u -O-alquilo o un disacárido de fórmula (VII), R10 representa un grupo - O-alquilo; Su preparación y su uso en terapéutica.

Description

OLIGOSACARIDOS N-SULFATADOS ACTIVADORES DE LOS RECEPTORES DE FGF. SU PREPARACION Y SU USO EN TERAPEUTICA Campo de la Invención La presente invención se refiere a oligosacáridos N-sulfatados agonistas del sistema FGF/FGFR, su preparación y su uso en terapéutica.
Antecedentes de la Invención La angiogénesis es un proceso de generación de nuevos vasos capilares. Durante la obstrucción de un vaso sanguíneo, la angiogénesis, asociada a la arteriogénesis (dilatación de los capilares) mejora la revascularización de la zona obstruida. Se ha mostrado in vitro e in vivo que varios factores de crecimiento, tales como los Factores de Crecimiento de los Fibroblastos (los FGF) estimulan el proceso de neovascularización.
Los FGF son una familia de 23 miembros. El FGF2 (o FGF básico) es una proteína de 18 kDa. El FGF2 induce al nivel de las células endoteliales en cultivo su proliferación, su migración y la producción de proteasas. In vivo, el FGF2 favorece los fenómenos de neovascularización. El FGF2 interactúa con células endoteliales a través de dos clases de receptores, los receptores de alta afinidad por la actividad tirosina cinasa (FGFR) y los receptores de baja afinidad de proteoglicano de tipo heparán sulfato (HSPG).
Se conoce que los receptores de la superficie celular con actividad tirosina cinasa se asocian en forman de dímero a un complejo formado por dos moléculas de ligando y una molécula de heparán sulfato. La formación de este complejo permite desencadenar una cascada de señales intracelulares que conducen la activación de la proliferación y la migración celular, dos procesos clave implicados en la angiogénesis.
Así, el FGF2 y sus receptores representan objetivos muy pertinentes para las terapias que pretenden activar o inhibir los procesos de angiogénesis.
Los oligosacáridos de síntesis han sido objeto igualmente de estudios de interacciones con los receptores de FGF y han demostrado sus efectos inhibidores del enlace del FGF-2 con sus receptores en las células musculares lisas, con un IC50 de 16 g/ml, así como una inhibición de la proliferación de estas células inducida por FGF-2, con IC50 de aproximadamente 23 pg/ml (C. Tabeur y colaboradores, Bioorg. & Med. Chem., 1999, 7, 2003-2012; C. Noti y colaboradores, Chem. Eur. J., 2006, 12, 8664-8686).
Ahora hemos encontrado nuevos compuestos oligosacarídicos de síntesis capaces de facilitar la formación del complejo FGF/FGFR y favorecer así la supervivencia de las células endoteliales in vitro y aumentar la formación de neovasos in vitro e in vivo.
La presente invención tiene por objeto nuevos compuestos oligosacarídicos que responden a la fórmula (I): en donde: -R, representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R2 representa o un grupo -O-alquilo o un monosacárido de fórmula (II), donde R representa un grupo alquilo: -R3 representa un disacárido de fórmula (III): en donde: -R4 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R5 representa un disacárido de fórmula (IV): en donde: -R6 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R7 representa o un grupo hidroxilo o un disacárido fórmula (VI): en donde: -R8 representa un grupo -OSO3" ó un grupo hidroxilo, -R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo o un disacárido de fórmula (VII): en donde R10 representa un grupo -O-alquilo, con la condición que: R9 representa un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo cuando R2 representa un monosacárido de fórmula (II) tal como se definió anteriormente; R7 representa un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente cuando R2 representa un grupo -O-alquilo y R1f R4, R6 y R8 no representan simultáneamente grupos hidroxilo.
En el ámbito de la presente invención y a menos que se indique lo contrario, se entiende por «grupo alquilo» un grupo alifático saturado lineal o ramificado, que comprende de 1 a 4 átomos de carbono. Como ejemplos, se pueden citar los grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y ferc-butilo. En los compuestos de acuerdo a la invención, incluido en cada subgrupo de compuestos que se definirán más adelante, los grupos alquilo representan ventajosamente grupos metilo, excepto los sustituyentes R9 y Ri0, en donde los radicales alquilo de los grupos -O-alquilo representan ventajosamente grupos propilo.
Los compuestos de acuerdo a la invención son oligosacáridos de síntesis, es decir se trata de compuestos obtenidos por síntesis total a partir de sintones intermedios, como se describirá con detalle más adelante. Por ello, difieren en los oligosacáridos obtenidos por despolimerización o aislamiento de mezclas complejas de polisacáridos, de tipo heparinas o heparinas de bajo peso molecular. Especialmente, los compuestos de acuerdo a la invención presentan una estructura bien determinada que resulta de su síntesis química y se presentan en forma de oligosacáridos puros, es decir exentos de otras especies oligosacarídicas.
La invención engloba los compuestos de fórmula (I) en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente. En forma ácida, las funciones -COO" y -S03" están respectivamente en forma -COOH y -S03H.
Se entiende por sal aceptable farmacéuticamente de los compuestos de la invención, un compuesto en donde una o varias de las funciones -COO" o/y -S03" están unidas de manera iónica a un catión aceptable farmacéuticamente. Las sales preferidas de acuerdo a la invención son aquéllas en que el catión se selecciona entre los cationes de metales alcalinos, especialmente el catión Na*.
Los compuestos de fórmula (I) de acuerdo a la invención comprenden igualmente aquéllos en donde uno o varios átomos de hidrógeno o de carbono han sido reemplazados por su isótopo radioactivo, por ejemplo tritio o carbono 1 C. Tales compuestos marcados son útiles en trabajos de investigación, metabolismo o farmacocinética así como ligandos en ensayos bioquímicos.
En la fórmula (I) de los compuestos de acuerdo a la presente invención, se entiende que: el monosacárido de fórmula (II) está unido a la unidad disacarídica representada en la fórmula (I) por el átomo de oxígeno situado en posición 4 de su unidad ácido urónico, el disacárido de fórmula (III) está unido a la unidad disacarídica representada en la fórmula (I) por el átomo de oxígeno situado en posición 1 de su unidad glucosamina, igualmente, el disacárido de fórmula (IV) está unido al disacárido de fórmula (III) por el átomo de oxígeno situado en posición 1 de su unidad glucosamina, igualmente, el disacárido de fórmula (VI) está unido al disacárido de fórmula (IV) por el átomo de oxígeno situado en posición 1 de su unidad glucosamina, - igualmente, el disacárido de fórmula (VII) está unido al disacárido de fórmula (VI) por el átomo de oxígeno situado en posición 1 de su unidad glucosamina.
Se entiende por «unidad glucosamina» la unidad monosacarídica de la siguiente fórmula: El otro tipo de unidad sacarídica presente en los compuestos de acuerdo a la invención es un ácido urónico, más precisamente un ácido idurónico, que responde a la siguiente fórmula: Así, los compuestos de fórmula (I) de acuerdo a la invención pueden estar representados igualmente de acuerdo a la fórmula ( ) como sigue, en donde se suceden las unidades idurónicas y las unidades glucosamina y en donde R,, R2, , Re y 7 son tal como se definió anteriormente: En función de los significados de R2 y R7, los oligosacáridos de acuerdo a la invención pueden comprender de 7 a 10 unidades sacarídicas.
Entre los compuestos de fórmula (?)/(G) objeto de la invención, se pueden citar aquéllos en donde: Ri, R3, R , R5 y e son tal como se definió anteriormente, R2 representa un monosacárido de fórmula (II) tal como se definió anteriormente, y R7 representa un grupo hidroxilo.
Tales compuestos son heptasacáridos. Responden a la fórmula (1-1) más adelante, en donde R7 representa un grupo hidroxilo y R, R,, R4 y R6 son tal como se definió anteriormente, y se presentan en forma ácida o bajo la forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
Entre los compuestos de fórmula (?)/( ) objeto de la invención, se puede citar un subgrupo de compuestos en donde R2 representa un grupo -O-alquilo.
Tales compuestos son octasacáridos o decasacáridos. Responden a la fórmula (I-2) más adelante, en donde R,, R4, R6) R8 y R9 son tal como se definió anteriormente y R2 representa un grupo -O-alquilo, y se presentan en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
Entre los compuestos de fórmula (?)/(G) objetos de la invención, se puede citar un sub-grupo de compuestos en donde: R2 representa un grupo -O-alquilo, y R7 representa un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente, en donde R9 representa un disacárido de fórmula (VII) tal como se definió anteriormente.
Tales compuestos son decasacáridos. Responden a la fórmula (1-3) más adelante, en donde Ri, R4, R6, Re y Río son tal como se definió anteriormente, y se presentan en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
Entre los compuestos de fórmula (I) objeto de la invención, se puede citar un sub-grupo de compuestos en donde: -R2 representa un grupo -O-alquilo, y -R7 representa un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente, en donde R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo.
Tales compuestos son octasacáridos y responden a la fórmula (1-2) anterior, en donde Ri, R4, R6 y Re son tal como se definió anteriormente, R2 representa un grupo -O-alquilo y R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo.
De manera ventajosa, los octasacáridos de acuerdo a la invención son tal que R9 representa un grupo -O-alquilo.
Otros sub-grupos de compuestos de acuerdo a la invención pueden presentar diversas características enunciadas anteriormente para cada uno de los subgrupos definidos anteriormente.
La invención se refiere especialmente a los oligosacáridos siguientes: -Metil(4-0-propil-2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-[(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil-(1?4)]2-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D- glucopiranósido (No. 1); -Metil(4-0-propil-2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sod¡o)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sod¡o(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-[(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desox¡-6-0-sod¡osulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil-(1?4)]3-(2-0-sodiosulfonato-a-L-¡dopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 2); -[Metil(2-0-sod¡osulfonato-a-L-idop¡ranosiluronato de sodio)- (1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-g luco p¡ ra n os il )-( 1?4)-[(2-0-sod ios ulfon ato-a- L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranos¡l)-(1?4)]2-2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranósido]-uronato de sodio (No. 3); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfo nato amino)-a-D-g luco pira nosil)- (1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosil uro nato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio (sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No.4); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sod ios ulfonato-2-sodio(sulfon atoa mino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— 4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 5); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No.6); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0- sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desox¡-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucop¡ranósido (No. 7); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-¡dopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sod¡osulfonato-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-glucopiranosil)-[(1-?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sod¡osulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)]2-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-(sulfonato)amino-a-D-glucopiranósido (No.8); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranos¡luronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonato)am¡no-a-D-glucopiranosil)-[(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L- ¡dopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-glucop¡ranosil)]2- (1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)- (1?4)-2-desoxi-2-sod¡o(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 9).
En principio, el procedimiento de preparación de los compuestos de acuerdo a la invención utiliza sintones de base di-u oligosacarídicos preparados como se indicó anteriormente en la bibliografía. Se hará referencia especialmente a las Patentes o Solicitudes de Patente Europeas EP 0 300099, EP 0 529 715, EP 0 621 282 y EP 0 649 854, así como a la publicación de C. Van Boeckel y . Petitou aparecida en Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690. Estos sintones se acoplan a continuación los unos a los otros de manera que se produzca un equivalente completamente protegido de un compuesto de acuerdo a la invención. Este equivalente protegido se transforma a continuación en un compuesto de acuerdo a la invención. En las reacciones de acoplamiento evocadas anteriormente, un di- u oligosacárido "donador", activado en su carbono anomérico, se hace reaccionar con un di- u oligosacárido "aceptor", que posea un hidroxilo libre.
La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de los compuestos de fórmula (?)/( ) caracterizados por que: en una primera fase, se sintetiza un equivalente completamente protegido del compuesto (I) deseado, en una segunda fase, se introducen y/o desenmascaran los grupos -COO" y -OS03", en una tercera fase, se desprotege el conjunto del compuesto y en una cuarta fase, se introducen grupos N-sulfatos. La síntesis del equivalente completamente protegido del compuesto (I) deseado se realiza de acuerdo a reacciones bien conocidas por el experto en la técnica, utilizando los métodos de la síntesis de oligosacáridos (por ejemplo, G. J. Boons, Tetrahedron, (1996), 52, 1095-1121 y las Solicitudes de Patente Internacional WO 98/03554 y WO 99/36443) en donde un oligosacárido donante de enlace glicosídico se acopla con un oligosacárido aceptor de enlace glicosídico para conducir a otro oligosacárido cuyo tamaño es igual a la suma de los tamaños de dos especies reactivas. Esta secuencia se repite hasta la obtención del compuesto de fórmula (?)/(G), eventualmente en forma protegida. La naturaleza y el perfil de la carga del compuesto final deseado determinan la naturaleza de las entidades químicas utilizadas en las diferentes etapas de la síntesis, de acuerdo a las reglas conocidas por el experto en la técnica. Se podrá referir por ejemplo a C. Van Boeckel y M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1993), 32, 1671-1690 ó incluso a H. Paulsen, «Advances in selective chemical syntheses of complex oligosaccharides» , Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1982), 21, 155-173.
Los compuestos de la invención se pueden preparar naturalmente utilizando diferentes estrategias conocidas por el experto en la síntesis de los oligosacáridos. El procedimiento descrito anteriormente es el procedimiento preferido de la invención. Sin embargo, los compuestos de fórmula (?)/( ) se pueden preparar por otros métodos bien conocidos de la química de los azúcares descritos por ejemplo en « Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products», P. M. Collins y R. J. Ferrier, J. Wiley & Sons, (1995) y en G. J. Boons, Tetrahedron, (1996), 52, 1095-1121.
Los grupos protectores utilizados en el procedimiento de preparación de los compuestos de fórmula (?)/(G) son los que permiten por una parte proteger una función reactiva tal como un hidroxi o una amina durante una síntesis y por otra parte, regenerar la función reactiva intacta al final de la síntesis. Se utilizan, para poner en práctica el procedimiento de acuerdo a la invención, los grupos protectores comúnmente utilizados en la química de los azúcares, tal como se describe por ejemplo en «Protective Groups in Organic Synthesis», Green y colaboradores, 3a Edición (John Wiley & Sons, Inc., Nueva York). Los grupos protectores son seleccionados por ejemplo entre los grupos acetilo, halogenometilo, benzoílo, levulinilo, bencilo, alilo, rerc-butildifenilsililo (tBDPS).
Los grupos activadores pueden utilizarse igualmente; se trata de los clásicamente utilizados en la química de los azúcares, por ejemplo de acuerdo a G. J. Boons, Tetrahedron (1996), 52, 1095-1121. Estos grupos activadores se seleccionan por ejemplo entre imidatos y tioglicósidos.
El procedimiento descrito anteriormente permite obtener los compuestos de la invención en forma de sales, ventajosamente en forma de sal de sodio. Para obtener los correspondientes ácidos, los compuestos de la invención en forma de sales se pueden poner en contacto con una resina de intercambio de cationes en forma ácida. Los compuestos de la invención en forma de ácidos se pueden neutralizar a continuación por una base para obtener la sal deseada. Para la preparación de sales de los compuestos de fórmula (?)/( ), se puede utilizar cualquier base mineral u orgánica donadora, con los compuestos de fórmula (?)/( ), de sales aceptables farmacéuticamente.
La invención tiene igualmente por objeto los compuestos de fórmula 20A más adelante, en donde Pg, Pg' y Pg", idénticos o diferentes entre sí, representan grupos protectores: Estos compuestos son útiles como intermedios de síntesis de los compuestos de fórmula (?)/(G).
En particular, la invención tiene por objeto el compuesto 20A en donde Pg, Pg' y Pg" representan respectivamente los grupos bencilo, alilo y acetilo. Tal compuesto corresponde al disacárido 20 ilustrado en el Esquema de Reacción 2 más adelante, útil para la síntesis de los compuestos No. 1 y 2 de acuerdo a la invención, como se detallará a continuación: Los siguientes ejemplos describen la preparación de ciertos compuestos e intermedios de síntesis conforme a la invención.
Estos ejemplos no son limitantes y sólo son para ilustrar la presente invención. Los compuestos iniciales y los reactivos, cuando no se describe expresamente su modo de preparación, están disponibles comercialmente o se describen en la bibliografía, o bien pueden prepararse de acuerdo a los métodos descritos en ésta o que son conocidos por el experto en la técnica.
Se utilizan las abreviaturas siguientes: [a]D: poder rotatorio: Ac: acetilo 11 : alilo Bn: bencilo Bz: benzoílo CCF: Cromatografía en Capa Fina Cr03: trióxido de cromo DDQ: 2,3-dicloro-5,6-diciano-1 ,4-benzoquinona ESI: Ionización por Electrospray h: hora H2S04: ácido sulfúrico Lev: levulinilo Me: metilo min: minuto Rf: Factor de retardo (tiempo de retención medido sobre la CCF con relación al frente del solvente de migración). tBDPS: rerc-butildifenilsililo Z: benciloxi-carbonilo Preparación de los compuestos intermedios de síntesis: Esquema de Reacción 1: Preparación del disacárido donador 15; 14 15 (Bencil 2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-i_- ¡dopiranosiluronato)-(1?4)-1,6-anhidro-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosa (12); A una solución del compuesto 11 (11.6 g, 16.2 moles) (descrita en la preparación del compuesto No. 8 de la Solicitud de Patente Internacional WO 2006/021653) en dioxano anhidro (340 mi), se añade sucesivamente 4-dimetilaminopiridina (2.12 g, 17.3 moles), clorhidrato de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (6.5 g, 34.3 moles) y ácido levulínico (3.6 mi; 34.3 moles). Después de 4 horas 30 minutos de agitación, se diluye con diclorometano (1800 mi). Se lava la fase orgánica sucesivamente con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio al 10%, con una solución saturada de cloruro de sodio, con una solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio después con agua, se seca sobre sulfato de sodio, filtra, después se evapora a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 5/1 v/v) para dar 12.7 g del compuesto 12.
CCF: Rf = 0.42, gel de sílice, tolueno/acetona 3/1 v/v.
(Bencil 2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1 ,6-di-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a,3-D-glucopiranosa (13); A una solución del compuesto 12 (12.76 g, 16.2 moles) en anhídrido acético (160 mi) se añade, a 0°C, ácido trifluoroacético (14.1 mi, 183 moles). Se agita el medio de reacción durante 16 horas a temperatura ambiente. Después de concentración se coevapora la mezcla con tolueno. La purificación del residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 4/1 v/v) da 10.5 g del compuesto 13.
CCF: Rf = 0.49, gel de sílice, (tolueno/acetona 4/1 v/v).
(Bencil 2-0-acet¡l-3-0-bencil-4-Q-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g.B-D-glucopiranosa (14); Se agita una solución del compuesto 13 (10.5 g, 12.0 moles) y bencilamina (50 mi, 457 moles) en éter dietílico (360 mi) a temperatura ambiente durante 2 horas. Se diluye la mezcla de reacción con éter dietílico (2000 mi). Se lava la fase orgánica con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1 M frío después con agua, se seca sobre sulfato de sodio, filtra, después se concentra a sequedad. Se cromatografía el residuo sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 3/1 v/v) y da 7.14 g del compuesto 14.
CCF: Rf = 0.40, gel de sílice, tolueno/acetona 3/1 v/v.
(Bencil 2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-le ulinoil-a-L-idop¡ranosiluronato)-(1-4)-6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g.B-D-qlucopiranosa tricloroacetimidato (15): Se añaden tricloroacetonitrilo (4.3 mi, 42.8 moles) y carbonato de cesio (1.89 g, 13.7 moles) a una solución del compuesto 14 (7.14 g, 8.56 moles) en diclorometano (160 mi). Después de agitación durante 30 minutos, se filtra el medio de reacción después se concentra. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 2/1 v/v + 0.1% de trietilamina) para dar 7.0 g del compuesto 15.
CCF: Rf = 0.37 y 0.28, gel de sílice, tolueno/acetona 2/1 v/v. Esquema de Reacción 2: Preparación del donador de glicosilo 20; (Bencil 2-0-acetil-4-0-(aliloxi)carbonil-3-0-bencil-q-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1.6-anhidro-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-B-D-qlucopiranosa (16); A una solución del compuesto 11 (11.7 g, 17.3 moles) (descrita en la preparación del compuesto No. 8 de la Solicitud de Patente Internacional WO 2006/021653) en tetrahidrofurano anhidro, se añade, a 0°C, sucesivamente piridina (14 mi; 173 moles), 4-dimetilaminopiridina (2.12 g, 17.3 moles) y cloroformiato de alilo (18.3 mi, 173 moles). Después de 16 horas de agitación a temperatura ambiente, se añade a 0°C agua (47 mi). Después de 30 min de agitación, se diluye con acetato de etilo (800 mi). Se lava la fase orgánica sucesivamente con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio al 10% y agua después con una solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio saturado y agua, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra, después se evapora a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v) para dar 11.4 g del compuesto 16.
CCF: Rf = 0.37, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v.
(Bencil 2-0-acetil-4-0-alil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1 ,6-anhidro-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-B-D-glucopiranosa (17); Se disuelve el compuesto 16 (11.44 g, 15.1 moles) en tetrahidrofurano (100 mi). Se añade de acetato de paladio (67.6 mg, 0.30 moles) y trifenilfosfina (395 mg, 1.5 moles). Después de 2 horas de agitación a reflujo, se concentra el medio de reacción a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 3/1 v/v) para dar 8.0 g del compuesto 17.
CCF: Rf = 0.33, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v.
(Bencil 2-0-acet¡l-4-0-al¡l-3-0-benc¡l-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1.6-di-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a,P-D-glucopiranosa (18); A una solución del compuesto 16 (7.96 g, 11.1 moles) en anhídrido acético (105 mi) enfriada a 0°C se añade ácido trifluoroacético (9.4 mi). Se agita el medio de reacción durante 16 horas a temperatura ambiente. Después de concentración, se coevaporó la mezcla con tolueno (5 x 200 mi). La purificación del residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v) da 7.72 g del compuesto 18.
CCF: Rf = 0.40, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v.
(Bencil 2-0-acet¡l-4-0-alil-3-0-bencil-a-L-idopiranos¡luronato)-(1?4)-6-Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-q,B-D-glucopiranosa (19): Se agita una solución del compuesto 18 (7.72 g, 9.44 moles) y bencilamina (3.9 mi, 35.2 moles) en éter dietílico (280 mi) a temperatura ambiente, durante 6 horas. Se diluye la mezcla de reacción con éter dietílico (800 mi). Se lava la fase orgánica con una solución acuosa de ácido clorhídrico 1M después con agua, se seca sobre sulfato de sodio, filtra, después se concentra a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 5/2 v/v) para dar 6.14 g del compuesto 19.
CCF: Rf = 0.45, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 5/3 v/v.
(Bencil 2-0-acetil-4-0-alil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a.B-D-glucopiranosa tricloroacetimidato (20); Se añade tricloroacetonitrilo (4 mi, 39.6 moles) y carbonato de cesio (4.13 g, 12.7 moles) a una solución del compuesto 19 (6.14 g, 7.9 moles) en diclorometano (150 mi). Después de agitación durante 30 minutos, se filtra el medio de reacción después se concentra. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 4/1 v/v) para dar 6.5 g del compuesto 20.
CCF: Rf = 0.50, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 3/1 v/v.
Desplazamientos químicos de protones anoméricos (500 MHz, CDCI3) d 5.27 IdollA", 5.57 Glc'p y 5.28 IdollA", 6.36 Glc'a LC-EM m/z 798.2 [(M + Na)+]. TR1 = 13.59 min y TR2 = ' min.
Esquema de Reacción 3: Preparación del octasacárido 26; Metil(bencil2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-3-0-bencil-2-(r(benciloxi)carbon¡namino>-2-desoxi-a-D-glucopiranósido Í22Ü Se agita una mezcla de imidato 15 (541 mg, 0.553 moles), del aceptor de glicosilo 21 (650 mg, 0.83 moles) (preparado de acuerdo al método descrito en Carbohydrate Research (1987), 167 67-75) y tamiz molecular de 4Á en polvo (412 mg) en una mezcla de tolueno/diclorometano (23 mi, 20/3 v/v) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -25°C y se añade una solución 1 M de triflato de terc-butildimetilsililo en diclorometano (82.5 µ?) al medio de reacción. Después de 15 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se purifica el residuo obtenido por cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) para dar 746 mg del compuesto 22.
CCF: Rf = 0.37, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 5/6 v/v.
Metil(bencil2-0-acetil-3-0-bencil-a-l_-idopiranos¡luronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-q-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil- -L- idopiranosiluronato -(1?4)-6-Q-acetil-3-0-bencil-2-(r(benciloxi)carbonil1amino>-2-d es oxi-a-D-glucopi ranos ido Í231i A una solución del compuesto 22 (2.3 g, 1.44 moles) en una mezcla de tolueno/etanol 1/2 v/v (290 mi) se añade acetato de hidrazina (662.3 mg, 7.2 moles). Se agita el medio de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de concentración, se purifica el residuo por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 5/6 v/v) para dar 1.84 g del compuesto 23.
CCF: Rf = 0.48, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 5/6 v/v.
Metil(benc¡l2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-g-L-¡dopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranos¡l)-(1?4)-(bencil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1-?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil-H?4)-(metil-2-Q-acet¡l-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-M?4)-6-0-acetil-3-0-bencil-2-fr(benciloxi)carboninamino -2-desoxi-a-D-glucopi ranos ido (24): Se agita una mezcla del aceptor de glicosilo 23 (1.97 g, 1.12 moles), imidato 15 (1.63 g, 1.66 moles) y tamiz molecular de 4Á en polvo (2.6 g) en una mezcla de diclorometano/tolueno 1/1 v/v (75 mi) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1 M de triflato de ferc-butildimetilsililo en diclorometano (250 µ?) al medio de reacción. Después de 10 minutos, Se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se purifica el residuo obtenido por cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) para dar 1.63 g del compuesto 24.
CCF: Rf = 0.33, gel de sílice, tolueno/acetona 3/1 v/v.
Met¡l(benc¡l2-Q-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1 -?4)-(bencil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desox¡-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-Q-acetil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-Q-acetil-3-Q-bencil-2-fr(benc¡loxi)carbon¡namino)-2-desoxi-a-D-glucopi ranos ido (25): A una solución del compuesto 24 (1.7 g, 0.73 moles) en una mezcla de tolueno/etanol 1/2 v/v (145 mi) se añade acetato de hidrazina (338 mg, 3.67 moles). Se agita el medio de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de concentración, se purifica el residuo por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (ciciohexano/acetato de etilo 1/1 v/v) para conducir al compuesto 25 (1.41 g).
CCF: Rf = 0.47, gel de sílice, ciciohexano/acetato de etilo 1/1 v/v.
Metil(bencil2-0-acetil-4-0-alil-3-0-bencil- -L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(bencil-2-0-acetil-3-0-bencil- -L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil-(1?4)1?-imetil-2-Q-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-3-0-bencil-2-(r(bencilox¡)carbon¡Hamino)-2-desoxi-g-D-qlucopiranósido 26): Se agitó una mezcla del imidato 20 (0.681 mg, 0.74 moles), aceptor de glicosilo 25 (1.10 g, 0.5 moles) y tamiz molecular de 4Á en polvo (0.555 g) en una mezcla de diclorometano/tolueno 1/1 v/v (26 mi) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfrió la mezcla de reacción a -20°C y se añadió una solución 1 M de triflato de rerc-butildimetilsililo en diclorometano (111 µ?). Después de 20 minutos, se neutralizó el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración sobre Celite® y concentración, se cromatografió el residuo obtenido sobre columna de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) para dar sucesivamente 468 mg de octasacárido 26 y 842 mg de una mezcla que contenía hexasacárido 25 y octasacárido 26.
Se trató esta mezcla (842 mg) de acuerdo a las condiciones anteriores para conducir al compuesto 26 (513.6 mg) después de tratamiento y cromatografía sobre columna (Sephadex® LH20, 190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
Se reunieron las dos fracciones (468 mg y 513.6 mg) y se purificaron por cromatografía HPLC preparativa sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 2/1 v/v) para dar el compuesto 26 (1.03 g).
CCF: Rf = 0.44, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 2/1 v/v.
Esquema de Reacción 4: Preparación del octasacárido 30; Metil(metil-4-0-alil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1 - 4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-( 1?4)-r(metil-3-O-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil-(1?4)1?-(metil-3-0-bencil-g-L- idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2-fr(benciloxi)carbon¡namino)-2-desoxi-a-D-glucopiranósido 27): A una solución del compuesto 26 (819 mg, 0.27 moles) en una mezcla de diclorometano/metanol 2/3 v/v (83 mi) que contiene tamiz de 3Á (10.3 g) se añade, a 0°C, en atmósfera de argón una solución 1 M de metilato de sodio en metanol (1.65 mi). Después de 16 horas a -18°C, se neutraliza el medio de reacción con resina Dowex® 50WX4 H + . Después de filtración y concentración, se purifica el residuo por cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) seguido por una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 4/3 v/v) para dar 605 mg del compuesto 27.
CCF: Rf = 0.41, gel de sílice, tolueno/acetona 4/3 v/v.
Metil(metil-4-0-alil-3-Q-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-Q-trietilamoniosulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(metil-3-0-bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-Q-triet¡l amonios ulf onato-g-D-glucopiranosil-(1?4)12-(metil-3-0-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencM-2-(r(benc¡loxi)carbon¡namino)-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranósido (28); Se seca el compuesto 27 (300 mg, 0.12 moles) por co-destilación de N, A/-dimet¡lformanida (3 x 10 mi) después se pone en solución en N, /V-dimetilformanida (11 mi). A esta solución se añade complejo trióxido de azufre-trietilamina (902 mg; 4.98 moles). Se agita la mezcla durante 16 horas a 55°C protegido de la luz después se neutraliza con metanol (202 µ?, 4.98 moles). Se deposita el medio de reacción sobre una columna de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm) eluye por mezcla diclorometano/etanol 1/1 v/v para conducir al compuesto 28 (426 mg).
CCF: Rf = 0.32, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 11/7/1.6/4 v/v/v/v.
Metil(4-0-alil-3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-O-litiosulfo nato-a -D-glucop¡ ra nosil)-(1?4)-r(3-Q-bencil-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-Q-litiosulfonato-a-D-glucopiranosil-(1?4)T2-(3-Q-bencil-2-0-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio) -M?4)-3- O-bencil-2-fr(benciloxi)carbon¡namino}-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-g-D-glucopi ranósido (29); A una solución del compuesto 28 (459 mg, 0.12 moles) en una mezcla de tetrahidrofurano/metanol 1/1 v/v (19 mi) se añade, a 0°C, una solución 0.7 M de hidróxido de litio en agua (7.6 mi; c.s.p concentración final de 0.2 M). Después de 1 hora a 0°C después 16 horas a temperatura ambiente, se enfría el medio de reacción a 0°C, se neutraliza con ácido acético (305 µ?) después se deposita sobre una columna Sephadex LH20 (95 x 2 cm) eluye con mezcla metanol/agua 4/1 v/v para conducir al compuesto 29 (368 mg).
CCF: Rf = 0.25, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 27/19/4.2/11 v/v/v/v.
Metil(4-0-npropil-2-O-sodiosulfonato-a-L-idop¡ranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4) -f2-Q-s odios ulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-a-D-glucopiranos¡l-(1?4)17-(2-0-sulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-a-D-glucopiranósido (30); Se trata una solución del compuesto 29 (170 mg) en una mezcla de ferc-butanol/agua 2/3 v/v (27 mi) bajo presión de hidrógeno (100 kPa (1 bar)) en presencia de paladio sobre carbono al 10% (340 mg) a 30°C durante 24 horas. Después de filtración (filtro Millipore® LSWP 5 pm), se deposita la mezcla de reacción sobre una columna Sephadex® G-25 fino (90 x 3 cm) eluye con una solución acuosa de cloruro de sodio 0.2M. Se concentran las fracciones que contienen el producto y se desalan utilizando la misma columna eluida con agua. Después de concentración a sequedad, se obtiene el compuesto 30 (205 mg).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2327.55; masa experimental: 2239 u.m.a. (ácidos idurónicos observados en forma COOH).
Esquema de Reacción 5: Preparación del decasacárido 33; etil(bencil-2-0-acetil-3-Q-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(bencil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil-(1?4)T2-(metil-2-Q-acetil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-Q-acetil-3-Q-bencil-2-(r(benciloxi)carboninamino>-2-desoxi-g-D-glucopiranósido Se agita una mezcla de imidato 15 (250 mg, 0.255 moles), aceptor de glicosilo 25 (376 mg, 0.169 moles) y tamiz molecular de 4A en polvo (396 mg) en una mezcla de diclorometano/tolueno 1/1 v/v (11.4 mi) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 0.1M de triflato de ferc-butildimetilsililo en diclorometano (381 µ?). Después de 12 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se cromatografía el residuo obtenido sobre columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) para dar sucesivamente 150 mg del compuesto bruto 31 y 318 mg de una mezcla que contiene el hexasacárido 25 y el octasacárido 31.
Se trata la mezcla que contiene el hexasacárido 25 y el octasacárido 33 de acuerdo a las condiciones anteriores para dar después de cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20) 151 mg del compuesto bruto 31 y 191 mg de una mezcla que contiene el hexasacárido 25 y el octasacárido 31. Esta operación se repite dos veces hasta agotamiento del hexasacárido 25.
Se reúnen las fracciones que contienen el octasacárido bruto 31 y se purifican por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 7/3 v/v) para dar el compuesto 31 (351 mg).
CCF: Rf = 0.37, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 7/5 v/v.
Metil(bencil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-q-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(bencil-2-0-acetil-3-0-bencM-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil-d— 4)1g-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-q-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-Q-acetil-3-0-bencil-2-(r(benciloxi)carbonil1amino)-2-desoxi-a-D-glucop¡ ranos ido Í321i A una solución del compuesto 31 (335 mg, 0.11 moles) en una mezcla de tolueno/etanol 1/2 v/v (22 mi) se añade acetato de hidrazina (51 mg, 0.55 moles). Se agita el medio de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente. Se diluye la mezcla de reacción con diclorometano (50 mi). Se lava la fase orgánica con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio al 2%, después agua, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra después se concentra a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 7/3 v/v) para dar el compuesto 32 (238 mg).
CCF: Rf = 0.50, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 5/6 v/v.
Metil(bencil-2-0-acetil-4-Q-alil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-az¡do-3-0-benc¡l-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(bencil-2-Q-acetil-3-Q-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1 -?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D-gluco iranos¡l-(1?4)1 -(metil-2-Q-acetil-3- 0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-3-0-bencil- 2-fr(bencMox¡)carbon¡Hamino)-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (33): Se agita una mezcla de imidato 20 (64 mg, 0.066 moles), aceptor de glicosilo 32 (130 mg, 0.044 moles) y tamiz molecular de 4Á en polvo (49 mg) en una mezcla de diclorometano/tolueno 1/1 v/v (2.2 mi) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 0.1M de triflato de ferc-butildimetilsililo en diclorometano (100 µ?). Después de 10 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se cromatografía el residuo obtenido sobre columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) para dar sucesivamente 61 mg del compuesto bruto 33 y 87.7 mg de una mezcla que contiene el octasacárido 32 y el decasacárido 33.
La mezcla anterior (87.7 mg) se trata de acuerdo a las condiciones anteriores para dar el compuesto bruto 33 (120 mg) después de cromatografía sobre columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
Se reúnen las dos fracciones que contienen el compuesto bruto y se purifican por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 7/2 v/v) para dar el compuesto 33 (120 mg).
CCF: Rf = 0.52, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo Esquema de Reacción 6: Preparación del decasacárido 37; 33 Metil(metil-4-0-alil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)- (2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1-?4)-rfmetil- 3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1 -?4)-(2-azido-3-0-bencil- 2-desoxi-a-D-qlucopiranosil-(1?4)13-(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2- (F(bencMoxi)carboninamino>-2-desoxi-a-D-qlucopiranósido (34): A una solución, enfriada a 0°C, del compuesto 33 (51.8 mg, 0.014 moles) en una mezcla de diclorometano/metanol 2/3 v/v (982 µ?) que contiene tamiz de 3Á (125 mg) se añade en atmósfera de argón una solución 1M de metilato de sodio en metanol (21.0 µ?). Después de 5 horas a temperatura ambiente, se neutraliza el medio de reacción con resina Dowex® 50WX4 H + . Después de filtración y concentración, se purifica el residuo por cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 95 x 2 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) para dar el compuesto 34 (31.4 mg).
CCF: Rf = 0.47, gel de sílice, diclorometano/acetona 7/3 v/v.
Metí I (metí ?-4-O-al i ?-3-O-bencil -2-O-trietil amonios ulf onato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-tr iet ilamoni os ulfo nato-a -D-glucopi ra nosil)-(1?4)-T(met il-3-?-bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranosil-(1- 4)1a-(metil-3-Q-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-{f(benciloxi)carboninamino)-2-desoxi-6-Q-trietilamoniosulf onato-g-D-glucopiranósido (35); Se trata el compuesto 34 (31.5 mg, 10.6 moles) como en la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 35 (47.0 mg) después de cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 100 x 1.2 cm, diclorometano/metanol 1/1 v/v).
CCF: Rf = 0.55, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 16/11/2.6/7 v/v/v/v.
Metil(4-Q-alil-3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L-idopiranosilurónico de I i t i o ) -( 1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-litio-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-G(3-0- bencil-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosilurónico de litio)-(1?4)-(2-az¡do-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-g-D-glucopiranosM-(1?4)1¾-(3-0-bencil-2-Q-litiosulfonato-g-L-idopiranosilurónico de litio)-(1?4)-3-Q-bencil-2- (G( be nciloxi)carbon¡namino>-2 -des oxi-6- O- litios ulfo nato -g-D-qlucopiranósido (36): A una solución del compuesto 35 (47 mg, 12.5 prnoles) en una mezcla de tetrahidrofurano/metanol 1/1 v/v (2.0 mi) se añade, a 0°C, una solución 1 M de hidróxido de litio en agua (500 µ?; c.s.p. para tener una concentración final 0.2M). Después de 1 hora a 0°C después de 4 horas a temperatura ambiente, se neutraliza el medio de reacción con ácido acético después se deja a -20°C durante 16 horas. Se deposita la mezcla de reacción sobre una columna de gel Sephadex® LH20 eluye con una mezcla de metanol/agua 4/1 v/v para conducir al compuesto 36 (38.9 mg). Metil(4-0-prop¡l-2-0-sodiosulfonato-q-L-idopiranosiluronato de sodio) -M?4)-(2 -a mino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfo nato -g-D-glucopiranosil)-(1— >4)-r2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1-?4)-(2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-o-D-glucopiranosil-(1?4)" -(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-am¡no-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-g-D-glucopiranósido (37); Una solución del compuesto 36 (40 mg, 10.8 µ?-noles) en una mezcla de rerc-butanol/agua 6/9 v/v (1 mi) se trata bajo presión de hidrógeno (1100 kPa (11 bar)) en presencia de paladio sobre carbono al 10% (80 mg, 2 x cantidad del compuesto que se tiene que reducir) a 40°C durante 4 horas. Después de filtración (filtro Millipore® LSWP 5 µ??), la solución se deposita sobre una columna de resina Chelex® 100 (1 mi) eluye con agua después se concentra a sequedad. El compuesto bruto así obtenido (27 mg), se utiliza tal cual en la etapa siguiente.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2781.10; masa experimental: 2782.05 ± 0.30 u.m.a.
Esquema de Reacción 7: Preparación del heptasacárido 43; Metiirmetil(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-alucopiranosil)-(1?4)-2-Q-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranósidoluronato (40); Se agita una mezcla de imidato 38 (1.1 g, 1.22 moles), preparada de acuerdo al método descrito por C. Tabeur y colaboradores, BioOrg. Med. Chem. (1999) 7, 2003-2012, aceptor de glicosilo 39 (864 mg, 2.44 moles), preparado de acuerdo al método descrito por Koshida, S. y colaboradores, Tetrahedron Lett., 1999, 40, 5725-5728 y tamiz molecular de 4Á en polvo (914 mg) en tolueno (43 mi) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1 M de triflato de ferc-butildimetilsililo en diclorometano (183 µ?). Después de 1 hora de agitación, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración sobre Celite® y concentración, se cromatografía el residuo obtenido sobre columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) seguido por una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v) para dar el compuesto 40 (936 mg).
CCF: Rf = 0.38, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v.
Metiirmetil(met¡l-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desox¡-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-2-0-acetil-3-0-bencil- -L- idopiranósidoluronato (41); Se trata el compuesto 40 (2.56 g, 2.34 moles) de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 23 para dar el compuesto 41 (2.17 g) después de cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v).
CCF: Rf = 0.35, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v.
Metiirmetil(met¡l-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulino¡l-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi- -D-glucopiranosil)-(1—4)-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-2-0-acetil-3-0-bencil-<x-L-idopiranósidoluronato (42); Se agita una mezcla de imidato 38 (1.1 g, 1.22 moles), aceptor de glicosilo 41 (1.2 g, 1.20 moles) y tamiz molecular de 4A en polvo (903 mg) en diclorometano (42 mi) en atmósfera de argón, durante 1 hora, a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1 M de triflato de terc-butildimetilsililo en diclorometano (181 µ?). Después de 15 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se purifica el residuo obtenido por cromatografía sobre columna de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) seguido por una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v) para dar 1.63 g del compuesto 42.
CCF: Rf = 0.30, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v.
Metiirmetil-(metil-2-Q-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-acet¡l-2-azido-3-0-bencil-2-desox¡-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-g-L-i dop irán osilu ron ato )-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-gluco iranosil)-(1?4)-2-0-acetil-3-Q-bencil-g-L-idopiranósidoluronato (43); Se trata el compuesto 42 (3.90 g, 2.25 moles) de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 23. Una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v) da el compuesto 43 (3.39 g).
CCF: Rf = 0.33, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v.
Esquema de Reacción 8: Preparación del disacárido 50; (3.4-Di-0-bencil-2-0-(4-metoxi)bencil-6-0-ferc-butildimetilsilil-g-L-idopiranosil)-( 1?4)-1.6-anhidro-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-B-D-glucopiranosa (45); A una solución del compuesto 44 (32.3 g, 42.2 moles) (descrita en la preparación del compuesto No. 108 de la Solicitud de Patente Internacional WO 2006/021653) en N,N-dimetilformamida (210 mi) se añade, a 0°C y en argón, bromuro de bencilo (25 mi, 211 moles) después NaH al 55% (3 g, 126 moles). Después de 20 minutos de agitación magnética, se añade metanol (30 mi), se concentra el medio de reacción a vacío, se diluye el medio de reacción en acetato de etilo, se lava con agua después con una solución acuosa saturada en cloruro de sodio, se seca (Na2S04), filtra y concentra. Se lleva el residuo obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
LC-EM m/z 871.7 [(M + NH4)+]. TR = 13.86 min. (2-0-acetil-3,4-di-0-bencil-6-0-ferc-butildimetilsilil-a-L-idopiranosil)-(1?4)-1.6-anhidro-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-P-p-glucopiranosa (46); A una solución del compuesto 45 bruto (38.6 g) en diclorometano (1.6 I) se añade agua (80 mi) después a 0°C, DDQ (14.2 g). Después de 4 horas 45 minutos de agitación a 0°C, se diluye el medio con diclorometano y se añade una solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio. Se lava a continuación la fase orgánica con agua, se seca (Na2S04), filtra y concentra. Se lleva el compuesto obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
Se disuelve el residuo obtenido en diclorometano (350 mi), después se añade trietilamina (13 mi), 4-dimetilaminopiridina (2 g) y anhídrido acético (60 mi). Después de 10 minutos de agitación magnética a 0°C, después de 1 hora 45 minutos a temperatura ambiente, se diluye la mezcla de reacción con diclorometano, después se lava sucesivamente con una solución acuosa al 10% de hidrogenosulfato de potasio, agua, después se seca la fase orgánica (Na2S04), filtra y concentra.
Se purifica el residuo obtenido sobre sílice (acetato de etilo - ciclohexano) para proporcionar el compuesto 46 (26.8 g).
LC-EM m/z 798.3 [(M + Na)+]. TR = 12.97 min.
(Met¡l2-0-acetil-3,4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1, 6 -anhidro -2-azido-3-Q-benc¡l-2-desoxi-B-D-glucopiranosa (47); A una solución del compuesto 46 (26.3 g, 33.9 moles) en acetona (1.4 I) se añade, a 0°C, una solución de Cr03 (10.5 g) en H2S04 3.5M acuoso (47 mi). Después de 4 horas de agitación mecánica a 0°C, se diluye el medio de reacción con diclorometano, se lava con agua hasta neutralidad, después se seca la fase orgánica (Na2S04), filtra y concentra. Se lleva el compuesto obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
Se disuelve el residuo obtenido en N, /V-dimetilformanida (210 mi) y se añade hidrogenocarbonato de potasio (17 g) así como ioduro de metilo (21 mi). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 horas, después se concentra a vacío. Se diluye el residuo con acetato de etilo después se lava con agua, con una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio, con una solución acuosa saturada en cloruro de sodio, después se seca (Na2S04), se filtra y se concentra. Se lleva el compuesto obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
LC-EM m/z 707.3 [(M + NH4)+]. TR = 10.37 min.
(Metil2-0-acetil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1— >4)-i ,6-di-0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a,P-D-glucopiranosa (48); Se disuelve el residuo bruto obtenido en la etapa precedente en anhídrido acético (177 mi), después se añade ácido trifluoroacético (TFA) (17.7 mi). Se agita la mezcla de reacción durante 16 horas, después se concentra, se co-evapora en tolueno y se purifica sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo), para dar el compuesto 48 (17.4 g).
LC-EM m/z 809.3 [(M + NH4)+]. TR = 10.81 min.
(Metil2-0-acet¡l-3,4-di-0-bencil-q-L-idopiranosiluronato)-(1 -4)-6-Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-q.P-D-glucopiranosa (49); A una solución del compuesto 48 (7 g, 8.84 moles) en éter dietílico (303 mi) se añade, a 0°C y en argón, bencilamina (BnNH2) (29.7 mi). Después de 1 hora de agitación magnética a 0°C después 6 horas a temperatura ambiente, se neutraliza la mezcla de reacción con una solución acuosa de HCI 1N en frío, se lava con agua, se seca (Na2S04), filtra y concentra y purifica sobre gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano) para conducir al compuesto 49 (5.95 g).
LC-EM m/z 767.7 [(M + NH4)+]. TR = 1.64 min.
(Metil2-0-acetil-3,4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a.B-D-glucopiranosa tricloroacetimidato (50); A una solución del compuesto 49 (5.94 g, 7.9 moles) en diclorometano (150 mi) se añade, en argón, carbonato de cesio (Cs2C03) (4.1 g), después tricloroacetonitrilo (CCI3CN) (3.9 mi). Después de 45 minutos de agitación a temperatura ambiente, se filtra la mezcla de reacción, después se concentra. Se purifica el residuo sobre gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano + 0.1% de trietilamina) para dar el compuesto 50 (5.7 g).
LC-EM m/z 912.0 [(M + NH4)+]. TR = 1.81 min.
Esquema de Reacción 9: Preparación del heptasacárido 55; Metil(metil(metil-2-0-acetil-3,4-di-0-bencil-a-L-idopi ranos il uronato)-(1?4)-(6-0-acetil-2-azido-3-0-benci 1-2-desoxi-a-D-glucopiranosM)-(1?4)-r(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-i_-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1 -?4)1;-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranósido)uronato (51); Se agita una mezcla de aceptor de glicosilo 43 (200 mg, 0.12 moles), ¡midato 50 (163 mg, 0.18 moles) y tamiz molecular de 4A en polvo (137 mg) en diclorometano (6.5 mi) en atmósfera de argón durante 1 hora a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1M de triflato de terc-butildimetilsililo en diclorometano (27 µ?). Después de 1 hora, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se purifica el residuo obtenido por cromatografía sobre columna de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 90 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) seguido por una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 2/1 v/v) para dar el compuesto 51 (212 mg).
CCF: Rf = 0.38, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v.
Meti metil(metil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-gtu copi ranos ?4)-r(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-q-D-glucopiranosil)-(1?4)l7-3-0-bencil-a-L-idopiranósidojuronato (52); El compuesto 51 (271 mg, 0.11 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 27 para dar el compuesto 52 (186 mg) después de una cromatografía sobre columna de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) seguido de una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 5/3 v/v).
CCF: Rf = 0.65, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 4/3 v/v.
M etilfmetil (metí l-3,4-di-0-bencil-2-0-trietil amonios ulf onato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulf onato-a-D-qlucopiranosil)-f 1?4)-r(metil-3-Q-bencil-2-O-trietilamonio-sulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1—4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamonio-sulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)T?-3-0-bencil-2-Q-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranósido)uronato (53); El compuesto 52 (172 mg, 0.08 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 53 (196 mg) después de una cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
RMN de 1H (D20) d de los principales protones anoméricos: 5.41; 5.38; 5.345.15; 5.14; 5.05; 5.15; 5.02 ppm.
(Metil(3,4-dí-0-bencil-2-0-l¡tiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de I i ti o ) - -?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-O-litiosulfo nato-a -D-glucopi ra nosil)-(1?4)-r(3-Q-bencM-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-g-D-glucopiranosil -(1 -?4)l2-3-Q-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L- idopiranósidoluronato de litio (54); El compuesto 53 (186 mg, 70.7 prnoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 29 para dar el compuesto 54 (141 mg) después de cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v).
CCF: Rf = 0.24, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 27/19/4.2/11 v/v/v/v.
(Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sod¡osulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1—4¾1?-2-Q-sodiosulfonato-o-L-idopiranósido)uronato de sodio (55); Se trata una solución del compuesto 54 (60.0 mg, 0.022 moles) en una mezcla de ferc-butanol/agua 1/1 v/v (6 mi) bajo presión de hidrógeno (< 20 kPa (200 mbar)) en presencia de paladio sobre carbono al 10% (60 mg) a temperatura ambiente. Después de 24 horas de agitación, se filtra el medio de reacción (filtro Millipore® LSWP 5 µ? ) después se concentra a sequedad. El producto bruto 55 así obtenido (48.7 mg) se utiliza tal cual en la etapa siguiente. Esquema de Reacción 10: Preparación del aceptor de glicósido 60; Metilf metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-acetil-3-0-bencil-2-bencilox¡carbonilamino-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (57); A una solución del compuesto 56 (23.5 g, 30 moles; preparado de acuerdo al método descrito en Carbohydrate Research (1987), 167, 67-75) en diclorometano (600 mi) se añade, a 0°C y en atmósfera inerte, 4-dimetilaminopiridina (733 mg, 6 moles), hidrocloruro de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (11.5 g, 60 moles) y ácido levulínico (6.2 mi, 60 moles). Después de 16 horas de agitación a temperatura ambiente, se diluye la mezcla con diclorometano (1.5 I). Se lava la fase orgánica sucesivamente con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio al 10%, con agua, con una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio después con agua, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra después se evapora a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía instantánea sobre una columna de gel de sílice (ciciohexano/acetato de etilo 1/3) para dar el compuesto 57 (22.6 g).
Rf = 0.37, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 1/3 v/v.
Metil(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2-benciloxicarbonilamino-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (58); A una solución del compuesto 57 (20.2 g, 23 moles) en una mezcla de tetrahidrofurano/metanol 1/1 (140 mi) se añade, en atmósfera inerte, [tBu2SnCI(OH)]2 (226 mg, 0.79 moles) preparado de acuerdo a A. Orita y colaboradores, Chem. Eur. J. (2001) 7, 3321. Se agita el medio de reacción durante 38 horas a 35°C. Después de concentración, se lleva el residuo (20.8 g) sin purificación a la etapa siguiente.
Rf = 0.23, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 1/3 v/v.
Metil(metil-2-Q-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-benciloxicarbonilamino-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-glucopiranósido (59); A una solución del compuesto bruto 58 (23 moles) en diclorometano (190 mi) se añade, a 0°C y en atmósfera inerte, trietilamina (8 mi, 57.5 moles), 4-dimetilaminopiridina (1.4 g, 11.5 moles) y cloruro de íerc-butildifenilsililo (12 mi, 46.0 moles). Se agita el medio de reacción durante 16 horas, a temperatura ambiente. Se diluye la mezcla de reacción con diclorometano. Se lava la fase orgánica sucesivamente con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, después con agua, se seca sobre sulfato de sodio, filtra, después se evapora. Se purifica el residuo por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 2/1) para dar el compuesto 59 (24.4 9).
Rf = 0.42, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v.
Metil(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-be ncil-2-benciloxi carbón i lamí ??-6-O-terc-butildifenilsilil-2-desoxi-q-D-glucopiranósido (60); A una solución del compuesto 59 (22.6 g, 20.0 moles) en una mezcla de tolueno/etanol 1/2 (2.5 I) se añade acetato de hidrazina (9.21 g, 100.0 moles). Se agita el medio de reacción durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de concentración, se purifica el residuo por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 2/1) para dar 17.6 g del compuesto 60.
Rf = 0.40, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v. Esquema de Reacción 11: Preparación del donador de glicósido 65, (Metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1-0-acetil-2-az¡do-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-qlucop¡ranosa (62): A una solución de 61 (11 g, 13.7 moles) (preparada de acuerdo al método descrito por C. Tabeur y colaboradores, Carbohydr. Res., 281 (1996) 253-276) en una mezcla de metanol/tetrahidrofurano 1/1 (80 mi) se añade [tBu2SnCI(OH)]2 (0.55 g) preparado de acuerdo a A. Orita y colaboradores, Chem. Eur. J. (2001) 7, 3321. Después de agitación a 35°C durante 5.5 horas, después a temperatura ambiente durante 16 horas, después de nuevo a 35°C durante 4 horas, se concentra la mezcla de reacción a vacío, después se purifica por cromatografía para conducir al compuesto 62 (5.97 9).
LC-EM m/z 780.2 [(M + Na)+]. TR = 9.14 min.
(Metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levul¡noil-a-L-idopiranosiluronato)-(1— >4)-1 -Q-acetil-2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosa (63); El compuesto 62 (5.97 g, 7.88 moles) se pone en solución en diclorometano (63 mi). A 0°C y en argón, se añaden sucesivamente 4-dimetilaminopiridina (0.481 g), trietilamina (2.7 mi) y cloruro de f e re- b u t i I d i f e n i I s i I i I o (4 mi). Después de 4 horas de agitación magnética, se diluye el medio de reacción en diclorometano, se lava con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio al 10%, agua, se seca (Na2S04), filtra y concentra. Se purifica el residuo obtenido sobre sílice (acetato de etilo/heptano) para proporcionar el compuesto 63 (7 9)- LC-EM m/z 1018.3 [(M + Na)+]. TR = 12.33 min.
(Metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-2-azido-3-Q-bencil-6-Q-<erc-butildifenilsilil-2-desoxi-a.B-D-glucopiranosa (64); A una solución del compuesto 63 (7 g, 7.03 moles) en éter dietílico (70 mi), se añade, a 0°C, bencilamina (BnNH2) (29 mi). Después de 15 minutos de agitación a 0°C, después 6 horas a temperatura ambiente, se diluye la mezcla de reacción con acetato de etilo, después se neutraliza con HCI 1N frío, se lava con agua, se seca (Na2S04), filtra y concentra y purifica sobre gel de sílice (acetato de etilo/tolueno) para conducir al compuesto 64 (5.86 g).
LC-EM m/z 976.3 [(M + Na)+]. TR = 27.6/27.8 min.
(Metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-2-az ido -3- O- bencil-6 -O-terc-butildifenilsilil-2-desoxi-g.B-D-glucopiranosatricloro acetimidato (65); A una solución del compuesto 64 (6.5 g, 6.81 moles) en diclorometano (140 mi) y en presencia de tamiz molecular de 4A en polvo (7 g), se añade en argón, carbonato de cesio (Cs2C03) (3.5 g), después a 0°C, tricloroacetonitrilo (CCI3CN) (3.4 mi). Después de 15 min de agitación a 0°C, después 5 horas a temperatura ambiente, se filtra la mezcla de reacción, después se concentra. Se purifica el residuo sobre gel de sílice (acetato de etilo/tolueno 1/4 + 0.1% de trietilamina) para dar el compuesto 65 (6.33 g).
LC-EM m/z 1119.1 [(M + Na)+]- TR = 31.2.
Esquema de Reacción 12: Preparación del tetrasacárido 67; Metil(metil-2-0-acetil-3-Q-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-( 2-azido-3-Q-bencil -6- O-terc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4 -(metil2-Q-acetil-3-Q-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-benciloxicarbonilamino-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranósido (66): Se agita una mezcla de aceptor de glicosilo 59 (8.80 g, 9.00 moles), imidato 65 (6.58 g, 6.00 moles) y tamiz molecular de 4A en polvo (4.50 g) en diclorometano (210 mi), en atmósfera de argón, durante 1 hora, a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1 M de triflato de terc-butildimetilsililo en diclorometano (900 µ?). Después de 1 hora 20 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración sobre Celite® y concentración, se cromatografía el residuo obtenido sobre columna Sephadex® LH20 (190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1) para dar 8.26 g del compuesto 66.
Rf = 0.30, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1.
Metí l( metí ?-2-O-acetil -3-O-bencil-g-L-idopi ra nos iluro nato)-(1?4)-(2-az¡do-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-p-gl ucopi ranos i I )-( 1?4)-(meti ?-2-O-acetil -3-O-bencil-a-L-idopi ra nosiluro nato )-(1?4)-3- O- bencil-2-benciloxicarbonilamino-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (67) Se transforma el compuesto 66 (8.26 g, 4.31 moles) en compuesto 67 (6.41 g) de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la síntesis del compuesto 23.
Rf = 0.34, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1. Esquema de Reacción 13: Preparación del hexasacárido 69; Metil(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-4-0-levulinoil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-benc¡l-6-0-f ere-bu tildife nilsilil-2-desoxi-a-D-glucopi ra nosil)-(1?4)-(metil-2-Q-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1-?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-benci l-2-benciloxi carbón Mam i ??-6-O-f ere-bu tildife nilsilil-2-desoxi-g-D-glucopi ra nósido (68); Se agita una mezcla de aceptor de glicosilo 67 (7.42 g, 4.09 moles), imidato 65 (6.73 g, 6.1 moles) y tamiz molecular de 4Á en polvo (4.60 g) en diclorometano (215 mi), en atmósfera de argón, durante 1 hora, a 25°C. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1 M de triflato de rerc-butildimetilsililo en diclorometano (920 µ?). Después de 1 hora 30 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración sobre Celite®, se diluye el medio de reacción con diclorometano (800 mi). Se lava la fase orgánica sucesivamente con una solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio al 2%, con agua, después se seca sobre sulfato de sodio, filtra, después se evapora a sequedad. Se purifica el residuo obtenido por cromatografía sobre columna Sephadex® LH20 (190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1) seguido por una cromatografía sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 6/1) para dar 6.13 g del compuesto 68.
Rf = 0.46, gel de sílice, tolueno/acetato de etilo 4/1 v/v.
Metil(metil-2-0-acetil-3-Q-bencil-g-L-idopi ranos Muronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-p-gl tico pi ranos i l)-(1?4)-(metil-2-0-acetil-3-Q-bencil-a-i_-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-f,erc-butildifenilsilM-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-a-l-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-benciloxicarbonilamino-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-glucopiranósido (69); El compuesto 68 (7.14 g, 2.59 moles) se transforma en compuesto 69 (6.07 g) de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 23.
Rf = 0.37, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v. Esquema de Reacción 14: Preparación del disacárido 73; (3,4-Di-0-bencil-2-0-(4-metoxi)bencil-6-Q-ferc-butildimetilsilil-g-L-idopiranosil)-(1?4)-1,6-anhidro-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-B-D-glucopiranosa (70); A una solución del compuesto 44 (32.3 g, 42.2 moles) (descrito en la preparación del compuesto No. 108 de la Solicitud de Patente Internacional WO 2006/021653) en N,N-dimetilformamida (210 mi) se añade a 0°C y en argón, bromuro de bencilo (25 mi), después NaH a 55% (3 g). Después de 20 min de agitación magnética, se añade metanol (30 mi), se concentra el medio de reacción a vacío, se diluye el bruto de reacción con acetato de etilo, se lava con agua después con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se seca (Na2S04), filtra y concentra. Se lleva el residuo obtenido (38.6 g) a la etapa siguiente sin purificación.
LC-EM m/z 871.7 [(M + NH4)+]. TR = 13.86 min. (2-0-acetil-3.4-di-0-bencil-6-0-ferc-butildimetilsilil-g-L-idopiranosil)-(1?4)-1.6-anhidro-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-P-p-qlucopiranosa (71); A una solución del compuesto 70 bruto (38.6 g) en diclorometano (1.6 I) se añade agua (80 mi), después a 0°C, DDQ (14.2 g). Después de 4 horas 45 minutos de agitación a 0°C, se diluye el medio con diclorometano y se añade una solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio. Se lava a continuación la fase orgánica con agua, se seca (Na2S0 ), filtra y concentra. Se lleva el compuesto obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
Se disuelve el residuo obtenido en diclorometano (350 mi), después trietilamina (13 mi), 4-dimetilaminopiridina (2 g) y se añade anhídrido acético (60 mi). Después de 10 min de agitación magnética a 0°C, después 1 hora 45 minutos a temperatura ambiente, se diluye la mezcla de reacción en diclorometano, después se lava sucesivamente con una solución acuosa al 10% de hidrogenosulfato de potasio, agua, después se seca la fase orgánica (Na2S04), filtra y concentra. Se purifica el residuo obtenido sobre sílice (acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el compuesto 71 (26.8 g).
LC-EM m/z 798.3 [(M + Na)+]. TR = 12.97 min.
(Met¡l2-0-acetil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1.6-anh¡dro-2-azido-3-Q-benc¡l-2-desoxi-3-D-qlucopiranosa (72); A una solución del compuesto 71 (26.3 g, 33.9 moles) en acetona (1.4 I) se añade, a 0°C, una solución de Cr03 (10.5 g) en H2S04 3.5M acuoso (47 mi). Después de 4 horas de agitación mecánica a 0°C, se diluye el medio de reacción con diclorometano, se lava con agua hasta neutralidad, después se seca la fase orgánica (Na2S04), filtra y concentra. Se lleva el compuesto obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
Se disuelve el residuo obtenido en /V,A/-dimetilformanida (210 mi) y se añade hidrogenocarbonato de potasio (17 g) así como ioduro de metilo (21 mi). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 horas, después se concentra a vacío. Se diluye el residuo con acetato de etilo, después se lava con agua, con una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio, con una solución acuosa saturada en cloruro de sodio, después se seca (Na2S04), filtra y concentra. Se lleva el compuesto obtenido a la etapa siguiente sin purificación.
LC-EM m/z 707.3 [( + NH4)+]. TR = 10.37 min.
(Metil2-0-acetil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-1.6-di-0-acetil-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a.B-D-qlucopiranosa (73); Se disuelve el residuo bruto obtenido en la etapa precedente en anhídrido acético (177 mi), después se añade ácido trifluoroacético (TFA) (17.7 mi). Se agita la mezcla de reacción durante 16 horas, después se concentra, se co-evapora en tolueno y se purifica sobre gel de sílice (ciciohexano-acetato de etilo), para dar el compuesto 73 (17.4 g).
LC-EM m/z 809.3 [(M + NH4)+]- TR = 10.81 min.
Esquema de Reacción 15: Preparación del donador glicosilo 77; 77 76 ( Metil-2-O-aceti 1-3.4-di-O-ben cil-a-L-i do piran osiluron ato) -(1?4)-1 -0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosa (74); A una solución del compuesto 73 (5.05 g, 6.3 moles) en una mezcla de metanol/tetrahidrofurano 1/1 (76 mi) se añade [tBu2SnCI(OH)]2 (0.25 g, 0.88 moles), preparado de acuerdo a A. Orita y colaboradores, Chem. Eur. J. (2001) 7, 3321. Después de agitación a temperatura ambiente durante 72 horas, se concentra la mezcla de reacción a vacío, después se purifica por cromatografía para conducir al compuesto 74 (2.89 g).
LC-EM m/z 772.4 [(M + Na)+]. TR = 10.23 min.
( Metil-2-O-aceti 1-3.4-di-O-ben cil-a-L-ido piran osilu ron ato) -(1?4)-1 -0-acetil-2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-glucopiranosa (75): El compuesto 74 (2.89 g, 3.86 moles) se pone en solución en diclorometano (31 mi). A 0°C y en argón, se añaden sucesivamente trietilamina (1.3 mi), 4-dimetilaminopiridina (0.235 g) y cloruro de ferc-butildifenilsililo (2 mi). Después de 3 horas de agitación magnética, se diluye el medio de reacción en diclorometano, se lava con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio al 10%, agua, se seca (Na2S04), filtra y concentra. Se purifica el residuo obtenido sobre sílice (acetato de etilo/ciciohexano) para proporcionar el compuesto 75 (3,4 g).
LC-EM m/z 1010.6 [(M + Na)+]. TR = 13.10 min.
(Metil-2-0-acet¡l-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-2-azido-3-0-bencil-6-Q-ferc-butildifenilsil¡l-2-desoxi-a,ß-D-glucopiranosa (76); A una solución del compuesto 75 (3.44 g, 3,48 moles) en éter dietílico (35 mi), se añade, a 0°C, bencilamina (BnNH2) (14.5 mi). Después de 8 horas de agitación a temperatura ambiente, se pone la mezcla de reacción a -18°C durante 16 horas, después de nuevo 2.5 horas a temperatura ambiente. Se diluye entonces el medio con acetato de etilo, después se neutraliza con HCI 1N frío, se lava con agua, se seca (Na2S04), filtra y concentra y purifica sobre gel de sílice (acetato de etilo/ciciohexano 15/85) para dar 76 (3.83 g)- LC-EM m/z 963.6 [(M + NH4)+]. TR = 12.37; 12.47 min.
(Metil-2-0-acetil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a.ß-D-glucopiranosa tricloroacetimidato (77): A una solución del compuesto 76 (2.99 g, 3.16 moles) en diclorometano (60 mi) y en presencia de tamiz molecular de 4Á en polvo (3 g), se añaden, a 0°C en argón, carbonato de cesio (Cs2C03) (1.6 g), después tricloroacetonitrilo (CCI3CN) (1.6 mi). Después de 20 min de agitación a 0°C, 7 horas a temperatura ambiente, almacenamiento a -18°C durante 16 horas, después agitación magnética 8 horas a temperatura ambiente, almacenamiento a -18°C durante 16 horas, y por último agitación magnética 1 hora a temperatura ambiente, se filtra la mezcla de reacción, después se concentra. Se purifica el residuo sobre gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 15/85 + 0.1% de trietilamina) para dar el compuesto 77 (2.69 g).
LC-EM m/z 1113.4 [(M + Na)+]. TR = 14.58 min.
Esquema de Reacción 16: Preparación del octasacárido 79; Metil(metil-2-0-acetil-3,4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(metil-2-0-acetil-3-0-bencil-g-L-idopi ra nos i I u ronato)-(1?4)-( 2-azido-3-Q-ben cil-6-O-f erc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)T2-(metil-2-0-acetil-3-Q-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2-benciloxicarbonilamino-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-qlucopiranósido (78): Se agita una mezcla de aceptor de glicosilo 69 (3.50 g, 1.32 moles), imidato 77 (2.16 g, 1.98 moles) y tamiz molecular de 4Á en polvo (1.48 g) en diclorometano (69 mi) en atmósfera de argón, durante 1 hora, a temperatura ambiente. Se enfría la mezcla de reacción a -20°C y se añade una solución 1 M de triflato de rerc-butildimetilsililo en diclorometano (297 µ?). Después de 2 horas 30 minutos, se neutraliza el medio de reacción por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración sobre Celite®, se diluye el medio de reacción con diclorometano (400 mi). Se lava la fase orgánica sucesivamente con una solución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio al 2%, con agua, después se seca sobre sulfato de sodio, filtra, después se evapora a sequedad. Se purifica el residuo obtenido por cromatografía sobre columna Sephadex® LH20 (190 x 3.2 cm, diclorometano/etanol 1/1) seguido por una cromatografía sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 4/1) para dar 3.04 g del compuesto 78.
Rf = 0.30, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 3/1.
Metil(metil-3.4-di-Q-benc¡l-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-q-D-qlucopiranosil)-(1-?4)-r(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifen¡lsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)T?-(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-benciloxicarbonilamino-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranósido (79); A una solución del compuesto 78 (2.23 g, 0.623 moles) en una mezcla de diclorometano/metanol 2/3 (187 mi) que contiene tamiz de 3Á (78 mg) se añade en atmósfera de argón y a 0°C una solución 1M de metilato de sodio en metanol (99.7 µ?). Después de 24 horas a temperatura ambiente, se neutraliza el medio de reacción con resina Dowex AG 50 WX4 H + . Después de filtración y concentración, se cromatografía el residuo sobre columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1) seguido por una cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 100/0?66/34) para dar 1.80 g del compuesto 79.
Rf = 0.38, gel de sílice, ciciohexano/acetato de etilo 3/1 v/v. Esquema de Reacción 17: Preparación de los octasacaridos 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86 y 87; Metil(metil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6- O- ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)1?-(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2- (benciloxi)carbonM1amino>-2-desoxi-g-D-qlucopiranósido Í80L.
Metil(metil-3.4-di-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-f ere-bu tildife nilsilil-2-desoxi-g-D-glucopi ra nosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D -qlucopi ra nosil)-(1?4)-(meti 1-3-0- bencil-q-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-(r(benciloxi)carbon¡namino -2-desoxi-q-D-qlucopiranósido (81); Met¡l(metil-3,4-di-Q-bencil-g-L-¡dopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-g-L-idopi ra nos i I uron ato)-(1?4)-(2-az ido -3- O-bencil -6 -O-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q- bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2- (r(benciloxi)carboniHamino>-2-desoxi-a-D-qlucopiranósido Í82Ü etil(metil-3,4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1-?4)-r(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)l9-(metil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1-?4)-3-Q-bencil-2- (r(benciloxi)carbonil1amino)-2-desoxi-g-D-glucopiranósido A una solución del compuesto 79 (373 mg, 0.11 moles) en metanol (14 mi) se añade fluoruro de amonio (324 mg, 8.74 moles). Después de 20 horas de agitación a temperatura ambiente, se deposita la mezcla de reacción sobre una columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) seguido por una cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 1/0?7/3 v/v) para dar sucesivamente: -El compuesto 80 (58.8 mg).
CCF: Rf = 0.63, gel de sílice, tolueno/acetona 65/35 v/v. -El compuesto 81 (44.4 mg).
CCF: Rf = 0.53, gel de sílice, tolueno/acetona 65/35 v/v. -El compuesto 82 (37.7 mg).
CCF: Rf = 0.45, gel de sílice, tolueno/acetona 65/35 v/v. -Una mezcla del compuesto 83 y del compuesto 84 (54.0 mg).
-Una mezcla del compuesto 85 y del compuesto 86 (48.3 mg).
-El compuesto 87 (26,6 mg).
CCF: Rf = 0.14, gel de sílice, tolueno/acetona 65/35 v/v.
Metil(met¡l-3,4-d¡-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencM-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(met¡l-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-benc¡l-2-(r(benciloxi)carbon¡namino)-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (83); Metil(metil-3.4-di-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-.erc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)1?-(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2- (r(benciloxi)carboninamino)-2-desoxi-g-D-glucopiranósido La mezcla de los compuestos 83 y 84 (260 mg) se purifica por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (tolueno/metanol 100/0?85/15 v/v) para dar el compuesto 83 (27.8 mg).
CCF: Rf = 0.22, gel de sílice, tolueno/metanol 85/15 v/v.
Se purifican de nuevo las fracciones restantes por cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (diclorometano/metanol 100/0?97/3 v/v para dar el compuesto 84 (45.3 mg).
CCF: Rf = 0.13, gel de sílice, tolueno/metanol 85/15 v/v.
Metil(metil-3.4-di-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)- metil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2-{T(benciloxi) carbonil1amino)-2-desoxi-g-D- lucopiranósido (85); Metil(metil-3.4-di-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-gluco iranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1-?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-D- lucopiranosil)-(1-?4 -(metil-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-bencil-2-(r(benciloxi)carboninamino -2-desoxi-a-D-glucopi ranos ido (86): La mezcla de los compuestos 85 y 86 (135 mg) se purifica por cromatografía HPLC sobre columna de gel de sílice C18 (Waters® Sunfire, 5 µp?, 150 x 19 mm, acetonitrilo/agua 9/1 + ácido trifluoroacético al 0.1%) para dar sucesivamente: -El compuesto 85 (32.6 mg), después de una cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2698.96; masa experimental: 2698.55 + 0.65 u.m.a.
-El compuesto 86 (26.5 mg), después de una cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2698.96; masa experimental: 2698.95 ± 1.05 u.m.a.
Esquema de Reacción 18: Preparación del octasacárido 91; Met¡t(metil-3.4-di-O-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-a-L-idopi ra nos il u ronato)-( 1?4)-(2-azido-3-Q-benci ?-6-O-f erc-but8ldifenilsilil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-g-p-glucopiranosih-H— >4)-(metil-3-0-bencil-2-0-tG^etilamon¡osulfonato-g-L-idopiranos^luronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-Q-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil3-Q-bencil-2-0-tri etilamoni os ulfo nato -g-L-idopi ra nos iluro nato )-(1?4)-3- O-bencil-2-{r(benc¡loxi)carboniHamino)-2-desoxi-6-0-trietilamoníosulfonato-g-D-glucopiranósido (88); El compuesto 81 (69 mg, 23.5 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 88 (85.1 mg) después de cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
CCF: Rf = 0.62, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 17/9/2,2/5 v/v/v/v.
Metil (metí l-3,4-di-0-benc¡l-2-0-amon ios ulfonato-g-L- idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-0-amoniosulfonato-q-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-0-amoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-amoniosulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-0-amoniosulfonato-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-0-bencil-2- (r(benciloxi)carboninamino)-2-desoxi-6-Q-amoniosulfonato-a-D-glucopiranósido (89); A una solución del compuesto 88 (85.1 mg, 21.1 pmoles) en metanol (2.7 mi) se añade fluoruro de amonio (31.3 mg, 0.846 moles). Después de 48 horas a 55°C, la mezcla de reacción se deposita sobre columna de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm) eluye con N, /V-dimetilformamida para dar el compuesto 89 (64 mg). [a]D 19.4° (c 1.0; MeOH).
Metil(3.4-di-0-bencil-2-0-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D- lucopiranosil)-(1?4)-(3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1-?4)-(3-Q-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L-idopi ra nos iluro nato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-Q-litiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-3-Q-bencil-2-(r(benciloxi)carboninamino)-2-desoxi-6-O-litiosulfonato-a-D-glucopi ranos ido (90); El compuesto 89 (63.3 mg; 17.8 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 29. Una cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v) da el compuesto 90 (49.8 mg). [a]D 14.6° (c 1 ,0; MeOH).
Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-Q-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-Q-sodiosulf onato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— >4)-(2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-O-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-am¡no-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-g-D-glucop¡ranósido íilli A una solución del compuesto 90 (7.6 mg; 2.6 moles) en una mezcla de ferc-butanol/agua 1/1 v/v (516 µ?) se añaden, a temperatura ambiente, sucesivamente formiato de amonio (21.2 mg; 0.33 Minóles) y paladio sobre carbono al 10% (49.4 mg). Después de 4 horas de agitación, se filtra el medio de reacción (filtro Millipore® LSWP 5 µ?t?) y se deposita sobre una columna de gel Sephadex® G-25 fino (95 x 2 cm) eluye con una solución acuosa de NaCI 0.2M. Se reúnen las fracciones que contienen el compuesto deseado, y se depositan sobre una columna de gel Sephadex® G-25 fino (95 x 2 cm), eluye con agua. El producto bruto 91 así obtenido (5.5 mg) se utiliza tal cual en la etapa siguiente.
Esquema de Reacción 19: preparación del octasacárido 95; Metil(metil-3.4-di-0-bencil-2-Q-trietilamoniosulfonato-a-L-idopi ranos il u ronato)-( 1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-Q-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q- bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)- (1— >4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-Q-tri etilamoniosulfo nato -a-L-idopi ra nos iluro nato) -( 1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-ferc-butildifenilsilil-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-0-tri etilamoniosulfo nato -a-L-idopi ra nosiluro nato )·(1?4) -3- ?-bencil-2-(r(benciloxi)carboniHamino)-2-desoxi-6-Q-trietilamoniosulfonato-a-D-glucopi ranos ido (92); El compuesto 82 (16.5 mg, 5.6 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 92 (21.5 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
CCF: Rf = 0.73, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 28/16/3.8/9 v/v/v/v.
Metil(metil-2-0-amoniosulfonato-3,4-di-Q-bencil-a-L-ídopi ra nosiluro nato) -(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil -2 -desoxi-a -D-q lucopi ranos ¡I )-(1 -?4)-(metil -2-O-amon ios ulf onato-3-O-benci I-g-L-idop¡ranosiluronato)-(1?4)-(6-Q-amoniosulf onato-2-azido- 3-0-bencil-2-desoxi-q-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-Q-amoniosul fonato-3- O- be ncil-q-L-idopi ra nosiluro nato )-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2- 0-amoniosulfonato-3-Q-bencil-g-L-idop¡ranosiluronato)-(1?4)- 6-0-amoniosulfonato-3-0-bencil-2- (r(benciloxi)carbon¡namino -2-desoxi-a-D-glucop¡ ranos ido £931i El compuesto 92 (21.5 mg, 5.3 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 89 para dar el compuesto 93 (21.5 mg) después de cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 95 x 2 cm, N, A/-dimetilformamida) .
CCF: Rf = 0.63, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 11/7/1.6/4 v/v/v/v.
Metil(3,4-di-0-bencil-2-Q-litiosulfonato-a-L- ¡dopiranosiluronato de I i t i o ) -í 1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-Q-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-e-0-litiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-g-i_-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-3-Q-bencil-2-fr(bencilox¡)carbon¡namino>-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-g-D-glucopiranósido (94); El compuesto 93 (14.7 mg, 4.1 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 31 para dar el compuesto 94 (13.0 mg) después de cromatografía de exclusión por tamaños (Sephadex® LH20, 95 x 2 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v).
CCF: Rf = 0.56, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 28/16/3.8/9 v/v/v/v. etil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-O-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-a-D-glucopiranósido (95); A una solución del compuesto 94 (13 mg, 4.4 prnoles) en una mezcla de ferc-butanol/agua 1/1 v/v (883 µ?) se añaden formiato de amonio (36 mg, 0.57 moles) y paladio sobre carbono al 10% (34 mg). Después de 4 horas de agitación a temperatura ambiente, se filtra el medio de reacción (filtro Millipore® LSWP 5 pm) y se concentra a sequedad. Se deposita el residuo sobre una columna de gel Sephadex® G25-fino (95 x 2 cm) eluye con una solución acuosa de NaCI 0.2M. Se reúnen las fracciones que contienen el compuesto deseado, y se depositan sobre una columna de gel Sephadex® G-25-fino (95 x 2 cm), eluye con agua. El producto bruto 95 así obtenido (2.5 mg) se utiliza tal cual en la etapa siguiente.
Esquema de Reacción 20: preparación del octasacárido 99; Metil(metil-3,4-di-0-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfonato-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(metil-3-0-bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)- (1 - 4 -(2-azido-3-0-bencil-6-0-f1erc-butildifenils¡lil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-0-trietilamoniosul fo nato -a-L-idopi ra nos iluro nato )-(1?4)l 7-3-0-bencil-2-fr(benciloxi)carboniHamino)-2-desoxi-6-Q-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranósido (96); El compuesto 83 (35.1 mg, 12.0 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 96 (46.3 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v). [a]D 111° (c 0.95; CH2CI2).
M etil (metí ?-2-O-amon ios ulfonato-3.4-d i-O-benc i I -a-Lid op i ranosil uro nato) -(1?4)-(6-Q-a moni osulfo nato-azi do-3- O-bencil-2-desox¡-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-0-amoniosulfonato-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-O-amon ¡osulfonato-3-O-bencil-g-L-idopi ranosil uronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-benc¡l-2-desoxi-a-D-qlucopiranos¡l)-(1?4)-(metil-2-O-amoniosulf onato-3-O-bencil-q-L-idopiranosiluronato)-(1 -?4)-6-0-amoniosulfonato-3-0-bencil-2- (r(benciloxi)carbon¡nam¡no)-2-desoxi-g-D-glucopiranósido Í97Ü El compuesto 96 (45.0 mg, 11.2 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 89 para dar el compuesto 97 (30.8 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, N, /V-dimetilformamida). [a]D 14.7° (c 0.95; MeOH).
Metil(3,4-di-0-bencil-2-Q-l¡t¡osulfonato-g-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2- desoxi-e-0-litiosulfonato-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(3-0-bencil-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)1?-(metil-3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L-idopiranosil uro nato de I i tio) -( 1?4)-3-Q-bencil-2- (r(benciloxi)carbonil1amino -2-desoxi-6-0-litiosulfonato-g-D-glucopiranósido (98); El compuesto 97 (27.1 mg, 7.6 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 29 para dar el compuesto 98 (20.7 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v). [ct]D 14.4° (c 1.01 ; MeOH).
Metil(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1— >4)1¾-(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-amino-2-desox¡-6-0-sodiosulfonato-g-D-glucopiranósido (99); El compuesto 98 (17.5 mg, 5.9 prnoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 91 para dar el compuesto 99 (9.5 mg).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2081.38; masa experimental: 1993.28 + 0.14 u.m.a. (ácidos idurónicos observados en forma COOH).
Esquema de Reacción 21: preparación del octasacárido 104; Metí I (metí l-3.4-di-0-bencil-a-L-idopi ra nos Muronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenils¡lil-2-desox¡-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(metil-3-0-bencil-g-L-id op i ranos iluro na to)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-6-0-ferc-butildifenilsilil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)1?-(metil-3- 0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-0-benzoil-3-Q-bencil-2-(r(benciloxi)carboninamino)-2-desoxi-a-D-glucopiranósido (100); Una solución del compuesto 80 (355 mg, 0.117 moles), anhídrido benzoico (75.8 mg, 0.335 moles) y trietilamina (47.3 µ?, 0.335 moles) en 1 ,2-dichloroetano (5.6 mi) se agita a 60°C, durante 24 horas, después 64 horas a temperatura ambiente. Se deposita la mezcla de reacción sobre una columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm), eluye con una mezcla de diclorometano/etanol 1/1 v/v seguido por una cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice (tolueno/acetona 100/0?85/15 v/v) para dar el compuesto 100 (193.2 mg).
CCF: Rf = 0.38, gel de sílice, ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v.
Metil(metil-3,4-di-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-M?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-M?4)-r(metil-3-0-bencil-a-L-idopiranosiluronato)-(1-?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)12-(met¡l-3-0-benc¡l-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-Q-benzoil-3-Q-bencil-2-(r(benciloxi)carboniHamino)-2-desoxi-a-D-qlucopiranósido (101): El compuesto 100 (60.0 mg, 0.018 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 89 para dar el compuesto 101 (46.1 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2564,66; masa experimental: 2563.66 + 0.19 u.m.a.
Metí l(metil-3.4-di-0-bencil-2-Q-trietilamon ios ulf o nato-a -L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desox¡-6-0-trietilamoniosulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(metil-3-Q-bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-az¡do-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)1¾-(metil-3-Q-benzi-2-0-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-Q-benzoil-3-0-bencil-2-(r(benciloxi)carbonil1amino>-2-desoxi-g-D-qlucopiranósido (102): El compuesto 101 (42.9 mg, 0.016 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 102 (28.7 mg) después de cromatografía sobre columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol 1/1 v/v) después cromatografía instantánea sobre columna de gel de sílice C 8 (40-60 µ?p; A: metanol, agua al 5%, acetato de amonio 23 mM; B: acetonitrilo, metanol al 45%, agua al 5%, acetato de amonio 17 mM; A ? B 100/0?70/30) seguido de desalado sobre columna Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v).
Metí l(3,4-di-Q-bencil-2-0-l ¡tíos ulf onato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-benc¡l-2-desox¡-6-0-litiosulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(3-0- bencil-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)1?-(3-0-bencil-2-O-litiosulfonato-g-L-idopiranosil uro nato de litio)-(1?4)-3-Q-bencil-2-fr(benciloxi)carbonin amino)-2-desoxi-a-D-qlucopiranósido 03?: El compuesto 102 (28.7 mg, 7.5 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 29 para dar el compuesto bruto 103 (17.3 mg).
Metil(2-0-sod¡osulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-( ?4)-(2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-q-D-glucopiranosil)-(1?4)l2-(2-Q-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-amino-2-desoxi-g-D-glucopiranósido (104); El compuesto 103 (17.3 mg, 5.7 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 91. El compuesto bruto 104, así obtenido, se saponifica de nuevo. A una solución del compuesto bruto 104 en una mezcla de tetrahidrofurano/metanol 1/1 v/v (506 µ?) se añade, a 0°C una solución 0.7M de hidróxido de litio en agua (202 µ?, c.s.p para tener una concentración final 0.2M). Después de 1 hora a 0°C, después 16 horas a temperatura ambiente, se cromatografía el medio de reacción sobre una columna de exclusión (Sephadex G 25 fino, 95 x 2 cm, NaCI 0.2M después Sephadex® G 25 fino, 95 x 2 cm, agua) para dar el compuesto 104 (6.5 mg).
RMN de 1H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.45; 5.44; 5.43; 5.26; 5.25; 5.24; 5.18 4.98 ppm.
Esquema de Reacción 22: preparación del octasacarido 108, Metil(metil-3,4-di-0-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-g-L-idopi ranos iluro nato ?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-d esoxi-6- O-trietilamoniosulfonato-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-Q-bencil-2-O-trietilamoniosulfonato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-6-0-ferc-butildifenilsililo-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1-?4)-(metil-3-Q-bencil-2-0-trietilamoniosul fo nato -a-L-idopi ra nosiluro nato ?4)-(2-azido-3-O-benci l-2-desoxi-6-Q-trietil amonios ulf onato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-0-trietilamoniosulfonato-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-3-Q-benc¡l-2-desoxi-2-r(benciloxi)carbon¡namino-6-Q-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranósido (105); El compuesto 85 (31.4 mg, 11.6 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 28 para dar el compuesto 105 (40.2 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v).
MetiKm etil-2-O-amoniosulfo nato -3. -d i- O- be ncil -a-L-idopi ra nosiluro nato )-(1?4)-(6-Q-amoniosulfonato-2-az¡do-3-0-bencil-2-desoxi-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-Q-amoniosul fo na to-3- O- bencil-g-L-idopi ra nosiluro nato )-(1?4)-(2-az¡do-3-0-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosih-(1?4)-(met¡l-2-0-amoniosulfonato-3-0-bencil-g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(6-0-amoniosulfonato-2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-q-D-glucopiranosil)-(1?4)-(metil-2-Q-amoniosulfonato-3-0-bencil- g-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-6-Q-amoniosulf onato-3-?-bencil-2-r(benciloxi)carboninamino-2-desoxi-g-D-glucopiranósido (106): El compuesto 105 (38.4 mg, 9.68 pinoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 89 para dar el compuesto 106 (28.4 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, N, A/-dimetilformamida).
Rf = 0.21 (AcOEt-piridina-AcOH-H2028/16/3.8/9).
Metil(3.4-d¡-0-bencil-2-0-lit¡osulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1 -?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-Q-lit¡osulfonato-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-Q-bencil-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de lit¡o)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-q-D-glucopiranosil)-(1?4)-(3-0-bencil-2-Q-litiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-3-Q-bencil-2-desox¡-2-f(benciloxi)carboninamino-6-Q-litiosulfonato-g-D-glucopiranósido (107); El compuesto 106 (28.4 mg, 7.62 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 89 para dar el compuesto 107 (28.0 mg) después de cromatografía sobre columna de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v).
Rf = 0.12 (AcOEt-piridina-AcOH-HzO 28/16/3.8/9). etil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1-4)-(2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-a-D-qlucopiranosih-(1 -4)-(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1-4)-(2-amino-2-desoxi-a-D-qlucopiranosil)-(1-4)-(2-Q-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1 -4)-(2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-g-D-glucopi ranosil)-(1 -4)-(2-O-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1 -4)-2-amino-2-desoxi-6-Q-sodiosulf onato-g-D-gtucopiranósido (108); El compuesto 107 (5.8 mg, 2.85 moles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del compuesto 91 para dar el compuesto 108 (2.5 mg) que se utiliza tal cual en la etapa siguiente.
RMN de H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.45; 5.44; 5.42; 5.26; 5.25; 5.24; 5.17 5.03 ppm.
Esquema de Reacción 23: preparación del octasacárido 111; eti I (meti I -3.4 -di-O-bencil-2-O-triet Mamón ios ulf onato-a-L-idopiranosiluronato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfo nato -g-D-glucopi ra nosil)-r(1?4)-(metil -3- enhene i ?-2-O-trietilamoniosulfonato-g-L-idopiranosil uro nato)-(1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-trietilamoniosulfonato-a-D-glucopiranosil)1¾-(1?4)-(metil-3-0-bencil-2-Q-trieti lamoniosulfo nato -g-L-idopi ra nos il uro nato )-(1?4)-3- O-bencil-2-benciloxicarbonilamino-2-desoxi-6-Q-trietilamoniosulfonato-g-D-glucopiranósido (109): El compuesto 87 (37.0 mg, 0.15 moles) se seca por co-destilación de /V,A/-dimetilformamida (3 x 1.4 mi), después se pone en solución de N, /V-dimetilformamida (1.4 mi). A esta solución se añade complejo trióxido de azufre-trietilamina (109 mg; 6.01 moles). Se agita la mezcla durante 16 horas a 55°C protegido de la luz, después se elimina el exceso de reactivo con metanol (25 µ?). Se deposita el medio de reacción sobre una columna Sephadex LH20 (120 x 3 cm), eluye con mezcla diclorometano/etanol 1/1 para conducir al compuesto 109 (59,8 mg).
Rf = 0.26, gel de sílice, acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 28/16/3.8/9. etil(3.4-di-0-bencil-2-Q-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de I i ti o>-( 1?4)-(2-azido-3-Q-bencil-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-a-D-glucopiranosil)-r(1?4)-(3-Q-bencil-2-O-litiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-(2-azido-3-0-bencil-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-a-D-glucopiranosil)1?-(1?4)-(3-0-bencil-2-0-litiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de litio)-(1?4)-3-Q-benc¡l-2-benciloxicarbonilamino-2-desoxi-6-0-litiosulfonato-a-D-glucopiranósido (110); A una solución del compuesto 109 (57.3 mg, 13.7 µ????ße) en una mezcla de tetrahidrofurano/metanol 1/1 v/v (2.2 mi) se añade, a 0°C, una solución 0.7M de hidróxido de litio en agua (0.88 mi; c.s.p concentración final de 0.2 ). Después de 1 hora a 0°C, después 16 horas a temperatura ambiente, se deposita el medio de reacción sobre una columna Sephadex® LH20 (120 x 3 cm), eluye con mezcla diclorometano/etanol/agua 50/50/1 v/v/v para conducir al compuesto 110 (38.1 mg). [ct]D 13.1° (c 1.0; MeOH).
Metil(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-am¡no-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-a-D- glucopiranosiD-Td?4)-(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-a-D-glucopiranosil)1?-(1?4)-(2-Q-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— »4)-2-amino-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-a-D-qlucopiranósido (111); A una solución del compuesto 110 (40 mg, 12.8 pmoles) en una mezcla de ferc-butanol/agua 1/1 v/v (2.6 mi) se añaden formiato de amonio (105 mg, 1.67 moles) y paladio sobre carbono al 10% (260 mg). Después de 4 horas de agitación a temperatura ambiente, se filtra el medio de reacción (filtro Millipore® LSWP 5 pm) y se concentra a sequedad. Se deposita el residuo sobre una columna de gel Sephadex® G25-fino (95 x 2 cm), eluye con una solución acuosa de NaCI 0.2 M. Se reúnen las fracciones que contienen el compuesto deseado y se depositan sobre una columna de gel Sephadex® G-25-fino (95 x 2 cm), eluye con agua. El producto bruto 111, así obtenido (14.7 mg), se utiliza tal cual en la etapa siguiente.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2285.47; masa experimental: 2197.20 + 0.34 u.m.a. (ácidos idurónicos observados en forma de COOH).
Ejemplos de compuestos de acuerdo a la invención: Ejemplo 1 Metí l(4-0-propil-2-Q-sod ios ulf onato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1 -?4)-(2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-r(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)- (1?4)-f 2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio( sulfonatoamtno)-a-D-qlucopiranosil-(1?4)l2-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio) -d?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfo nato -2 -sodio (sulfonatoamino)-g-D-qlucopiranósido (compuesto No. 1); A una solución del compuesto 30 (180 mg, 0.077 moles) en una solución saturada acuosa de hidrogenocarbonato de sodio (15 mi, 100 ml/moles) recientemente preparada se añade, a 0°C y en atmósfera de argón, hidrogenocarbonato de sodio sólido (1.17 g, 13.9 moles), después en porciones en 30 minutos complejo piridina-trióxido de azufre (985 mg, 6.19 moles). Después de 16 horas a temperatura ambiente, se deposita la mezcla de reacción sobre una columna de Sephadex® G-25 fino (90 x 3 cm), eluye con una solución acuosa de NaCI 0.2M. Se reúnen las fracciones que contienen el compuesto deseado y se depositan sobre una columna de Sephadex® G-25 fino (90 x 3 cm), eluye con agua. Después de concentración de las fracciones que contienen el compuesto deseado, se obtienen 200 mg del compuesto 1.
RMN de 1H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.455.42 (2 H); 5.22 5.21; 5.20; 5.18; 5.03 ppm.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2735.72; masa experimental: 2734 u.m.a.
Ejemplo 2j Metí l(4-Q-propil -2-O-sod ios ulf onato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-qlucopiranosil)-(1?4)-r(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-( 1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-qluco ¡ranosil-(1?4)1a-f 2-O-sod i os ulf on ato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-M?4)-2-desoxi-6-Q-sodiosulfo nato -2 -sodio (sulfonatoamino)-g-D-glucopiranósido (compuesto No. 2); El compuesto 37 (29.5 mg, 11.56 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 2 (7.4 mg) después de purificación en cromatografía de intercambio iónico (columna SAX, condiciones: 0.5 ml/min, A: H20, B: NaCI 2M, gradiente al 30% de B al 90% en 30 min) seguido por una cromatografía sobre columna de gel Sephadex® G-25 fino (54 x 1.7 cm, agua).
RMN de 1H [600 MHz] (DzO) d de los protones anoméricos: 5.45 5.42 5.41 (2 H); 5.225.21 (2H); 5.20; 5.18; 5.03 ppm.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 3401.12; masa experimental: 3400.40 ± 0.76 u.m.a.
Ejemplo 3: rMetil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sod¡o(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1 -?4)-G(2-?-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-f 2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)l¾-2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranósidol-uronato de sodio (compuesto No.3): El compuesto bruto 55 (48.7 mg) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 3 (37.6 mg).
RMN de 1H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.43 (2H); 5.35; 5.255.24; 5.19; 5.18; 5.09 ppm.
Ejemplo 4: Metil(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1 -?4)-f2-desoxi-2-sodioísulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-g-L-idoplranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio (sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-Q-sodiosulf onato-g-L- idopiranosiluronato de sodio)-M?4)-2-desoxi-6-Q sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-qlucopiranósido (compuesto No.4) El compuesto 91 (5.5 mg, 2.64 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 4 (4,5 mg).
RMN de H [600 MHz] (DzO) d de los protones anoméricos: 5.44; 5.40; 5.31; 5.255.24; 5.22; 5.16; 5.03 ppm.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2489.55; masa experimental: 2465.63 + 0.64 u.m.a.
Ejemplo 5: Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sod¡osulfonato-g-i_-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)- (1?4)-(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desox¡-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranósido (compuesto No. 5); El compuesto 95 (2.5 mg, 1.2 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 5 (1.9 mg).
RMN de 1H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.455.435.33; 5.25; 5.235.21; 5.16; 5.05 ppm.
Ejemplo 6: Metil(2-0-sod¡osulforiato-a-L-idopiranosiluronato de sodio) -(1?4)-(2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-Q-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-O-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— >4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-O-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranósido (compuesto No.6); El compuesto 99 (8.9 mg, 4.28 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 6 (7.3 mg).
RMN de H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.46; 5.32 (2 H); 5.26 5.255.21; 5.20; 5.05 ppm.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2489.55; masa experimental: 2488.00 ± 1.5 u.m.a.
Ejemplo 7: Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sod¡o(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-O-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranos¡l)-(1?4)-(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1-?4)-2-desoxi-6-Q-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranósido (compuesto No. 7): El compuesto 108 (3.7 mg, 1.42 pmoles) se trata de acuerdo mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 7 (1.8 mg).
R N de 1H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.465.42; 5.31; 5.26 5.24; 5.22; 5.18; 5.03 ppm.
Ejemplo 8: Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio) -(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-f(1— »4)-(2-Q-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)1¾-(1?4)-(2-Q-sodiosulf onato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-(sulfonato)amino-a-D-glucopiranósido (compuesto No. 8); El compuesto 111 (42 mg, 18.4 pmoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 8 (44.1 mg).
RMN de H [600 MHz] (D20) d de los protones anoméricos: 5.45; 5.44; 5.25; 5.24 (2H); 5.20; 5.04 ppm.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2693.84; masa experimental: 2692.97 + 0.18 u.m.a.
Ejemplo 9: Metil(2-0-sodiosulfonato-g-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-Q-sod¡osulf onato-2-sodio(sulfonato)amino-a-D-glucopiranosil)-r(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranosil)1;-(1?4)-(2-Q-s odios ulf o nato -g-L-idopiranosiluronato de sodio) -d?4)-2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-g-D-glucopiranósido (compuesto No. 9il El compuesto 104 (6.5 mg, 2.98 prnoles) se trata de acuerdo al mismo modo de operación que el descrito para la preparación del ejemplo 1 para dar el compuesto 9 (6.0 mg).
RMN de 1H [600 MHz] (DzO) d de los protones anoméricos: 5.44 (2H); 5.43; 5.22 (2H); 5.19; 5.18; 5.05 ppm.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa teórica = 2591.60; masa experimental: 2591.80 ± 0.33 u.m.a.
Los compuestos de acuerdo a la invención han sido objeto de ensayos farmacológicos que permiten determinar el efecto agonista de los receptores de FGF y su actividad sobre la angiogénesis, así como sobre la revascularización posisquémica.
Modelo de angiogénesis in vitro: actividad específica para FGF2: El modelo de angiogénesis in vitro corresponde a una reordenación de células endoteliales venosas humanas sobre una matriz biológica. La matriz se realiza distribuyendo en cada pocilio de una placa de 96 pocilios (Becton Dickinson 353872), 60 µ? de Matrigel® diluidos a 1/3 (Factor de crecimiento reducido Matrigel®: Becton Dickinson 356230) en colágeno (colágeno Cola de rata, tipo I: Becton Dickinson 354249). La matriz biológica endurece después de 1 hora a 37°C.
Las células endoteliales venosas humanas (HUVEC ref: C-12200-Promocell) sembradas sobre la matriz biológica a 7800 células/pocilio en 120 µ? de medio EBM® (Medio Basal Endotelial, Lonza C3121) + SVF al 2% (suero fetal bovino-Lonza) + hEGF (Factor de Crecimiento Epidérmico Humano Recombinante-Lonza) 10 pg/ml. Las células se estimulan con 10 ng/ml de FGF2 (R&D Systems / 234-FSE - 0 50) o con los productos de la invención durante 18 horas a 37°C en presencia de 5% de C02. Después de 24 horas, las células se observan al microscopio (objetivo X4) y el análisis de la longitud de los pseudo-túbulos se efectúa con la ayuda de un programa de imagen (BIOCOM-logiciel Visiolab 2000).
En este ensayo de angiogénesis in vitro, los compuestos de la invención presentan una actividad específica comprendida entre 10"6 M y 10"12 M. Por ejemplo, los compuestos No. 1 y 7 son activos a 10"6 M. compuesto 10 de la siguiente fórm ensayado en forma de sal de sodio, ha demostrado también una actividad en este ensayo de angiogénesis in vitro.
Por otro lado, se ha demostrado en un análisis celular in vitro que el octasacárido No. 8 de acuerdo a la invención, el heptasacárido No. 3 y el decasacárido No. 2 son mejores activadores del FGF-2 que su análogo hexasacarídico (compuesto descrito por C. Tabeur y colaboradores en Bioorg. & Med. Chem., 1999, 7, 2003-2012). Además, la mayoría de los demás compuestos octasacarídicos de acuerdo a la invención, como por ejemplo el compuesto No. 7, tiene la misma actividad que el octasacarídico No. 8 en modelos in vitro.
Implante de celulosa en el modelo de ratón Este modelo es una adaptación del modelo descrito por Andrade y colaboradores (Microvascular Research, 1997, 54, 253-61) para ensayar productos farmacológicos susceptibles de activar la aparición de angiogénesis.
Los animales (ratones blancos BALB/c J consanguíneos) son anestesiados con una mezcla Xilazina (Rompun®, 10 mg/kg) / Cetamina (Imalgéne® 1000, 100 mg/kg) por vía ¡ntraperitoneal. Se afeita el lomo del animal y se desinfecta con Hexomedine®. Se crea una bolsa de aire subcutánea en el lomo del ratón por inyección de 5 mi de aire estéril. Se realiza una incisión de aproximadamente 2 cm, en lo alto del lomo del animal para introducir un implante de celulosa estéril (disco de 1 cm de diámetro, espesor de 2 mm, Cellspon® ref 0501) impregnado con 50 µ? de solución estéril que contiene el producto que se tiene que ensayar. Después se sutura la incisión y se limpia con Hexomedine®.
Los días siguientes a la colocación del implante, los ratones pudieron recibir en el implante el producto por una inyección a través de la piel (50 µ?/implante/día) bajo anestesia gaseosa (Isoflurano al 5 % (Aerrane®, Baxter).
Siete días después de la colocación de la esponja, se sacrifican los ratones mediante una dosis letal de Pentobarbital sódico (CEVA salud animal), administrada por vía intraperitoneal. Se recorta la piel a continuación, aproximadamente 1 cm alrededor de la esponja evitando la cicatriz para sacar la piel y la esponja. Se recorta la esponja a continuación en varios trozos y se pone en un tubo Ribolyser® que contiene 1 mi de amortiguador de lisis (Detección de Muerte Celular ELISA, Roche). Se agitan los tubos 4 veces consecutivas, durante 20 segundos, fuerza 4, en un molino celular (FastPrep® FP 120). Se centrifugan los tubos a continuación 10 min a 2000 g a 20°C y se congelan los sobrenadantes a -20°C, esperando la dosificación de hemoglobina. El día de la dosificación, se centrifugan los tubos de nuevo después de descongelación y se mide la concentración de hemoglobina con el reactivo de Drabkin (Sigma, volumen a volumen) por lectura en un espectrofotómetro a 405 nm contra una gama de patrones de hemoglobina bovina (Sigma).
La concentración de hemoglobina en cada muestra se expresa en mg/ml después de la regresión polinomial realizada a partir de la gama. Los resultados se expresan en valor medio (± sem) para cada grupo. Las diferencias entre los grupos se ensayan con una ANOVA seguido por un ensayo de Dunnett sobre la raíz cuadrada de los valores.
En este ensayo in vivo, los compuestos de la invención han demostrado una actividad específica comprendida entre 5 y 45 ng/sitio. Así, los compuestos 1 y 7 son activos a la concentración de 45 ng/sitio.
Por lo tanto parece que, los compuestos de acuerdo a la invención tienen una actividad agonista de los receptores de FGF y una actividad sobre la angiogénesis, así como sobre la revascularización posisquémica. Estos compuestos pueden ser utilizados para la preparación de medicamentos, especialmente de medicamentos útiles para el tratamiento de enfermedades que requiere una activación de los receptores de FGF o de medicamentos útiles en patologías que requieren una activación de la angiogénesis y una revascularización posisquémica.
Así, de acuerdo a otro de sus aspectos, la invención tiene como objeto medicamentos que comprenden un compuesto de fórmula (?)/( ) o el compuesto 10 o una sal aceptable farmacéuticamente de estos últimos.
Más generalmente, la invención tiene por objeto medicamentos que comprenden un compuesto de fórmula (I): en donde: -R-i representa un grupo -OS03" ó grupo hidroxilo, -R2 representa o un grupo -O-alquilo o un monosacárido de fórmula (II), donde R representa un grupo alquilo: -R3 representa un disacárido de fórmula (III): en donde: -R4 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R5 representa un disacárido de fórmula (IV): en donde: -R6 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R7 representa o un grupo hidroxilo o un monosacárido de fórmula (V) más adelante o un disacárido de fórmula (VI): (V) (VI) en donde: -R8 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo o un disacárido de fórmula (VII): en donde Ri0 representa un grupo -O-alquilo, con la condición de que: R9 represente un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo cuando R2 represente un monosacárido de fórmula (II) tal como se definió anteriormente; R7 represente un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente cuando R2 representa un grupo -O-alquilo y R4, R6 y Re no representan simultáneamente grupos hidroxilos.
Tales compuestos reagrupan los de fórmula (?)/(G) definidos anteriormente, así como el heptasacárido 10 definido anteriormente, descrito en la Solicitud de Patente de Estadounidense 2006/0079483 A1.
Estos medicamentos encuentran uso en terapéutica, especialmente en el tratamiento de isquemia (isquemia cardíaca, isquemia arterial de las extremidades inferiores), tratamiento de enfermedades asociadas a una constricción o una obstrucción de las arterias o la arteritis, tratamiento de la angina de pecho, tratamiento de la tromboangeítis obliterante, tratamiento de la ateroesclerosis, tratamiento de la inhibición de la reestenosis después de angioplastia o endoarterectomía, tratamiento de la cicatrización, tratamiento para la regeneración muscular, tratamiento para la supervivencia de mioblastos, tratamiento de la neuropatía periférica, tratamiento de daños nerviosos posoperatorios, tratamiento de deficiencias nerviosas tales como la enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad priónica y degeneración neuronal del alcohólico, tratamiento de demencias, tratamiento para mejorar la supervivencia del injerto de páncreas bioartificial en el paciente diabético, tratamiento para mejorar la revascularización de injertos y la supervivencia de injertos, tratamiento de la degeneración retiniana, tratamiento de la retinitis pigmentaria, tratamiento de la artrosis, tratamiento de la pre-eclampsia o el tratamiento de lesiones vasculares y del síndrome de distrés respiratorio agudo, tratamiento para la reparación de los cartílagos, tratamiento para la reparación y protección ósea, tratamiento para la reparación y protección de los folículos pilosos y para la protección y la regulación del crecimiento capilar.
La isquemia es una disminución de la circulación arterial en un órgano producida por una disminución de la concentración de oxígeno en los tejidos lesionados. En los mecanismos de revascularización pos-isquémicos, entran en juego dos mecanismos principales: la angiogénesis y la arteriogénesis. La angiogénesis es el proceso de generación de nuevos vasos capilares a partir de vasos pre-existentes. La arteriogénesis contribuye al desarrollo (incremento del tamaño y del calibre) de vasos colaterales alrededor de la zona isquemiada o sin vascularización.
Entre los factores de crecimiento implicados en estos procesos de revascularización, la familia de FGF y principalmente FGF-2 es la que se ha descrito más ampliamente (Post, M. J., Laham, R., Sellke, F. W. & Simons, M. Therapeutic angiogénesis in cardiology using protein formulations. Cardiovasc Res 49, 522-31 , 2001).
Así, el FGF2 y sus receptores representan objetivos muy pertinentes para las terapias que pretenden inducir los procesos de angiogénesis y de arteriogénesis (Khurana, R. & Simons, M. Insights from angiogenesis triáis using fibroblast growth factor for advanced arteriosclerotic disease. Trends Cardiovasc Med 13, 116-22, 2003).
Una de las aplicaciones de los compuestos de la invención es el tratamiento pos-isquémico después de oclusión al nivel cardíaco o de arterias periféricas. En lo que se refiere al tratamiento de la isquemia cardíaca, uno de los ensayos clínicos más prometedores es un ensayo clínico en donde se secuestra FGF-2 en micro-esferas de alginato en presencia de heparina (Laham, R. J. y colaboradores Local perivascular delivery of basic fibroblast growth factor in patients undergoing coronary bypass surgery: results of a phase I randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Circulation 100, 1865-71, 1999). Estos micro-esferas se implantaron cerca del foco isquémico a nivel del miocardio. Después de 90 días, ninguno de los pacientes tratados con FGF2 presentaba ningún síntoma cardíaco isquémico. En comparación, con el grupo control, 3 de los 7 pacientes presentaban a los 90 días síntomas persistentes y en 2 pacientes se tuvo que recurrir a cirugía vascular. De manera interesante, el beneficio de la terapia se mantuvo después de 3 años de seguimiento. Estas observaciones sugieren que los compuestos que mimetizan el FGF2 pueden representar una terapia preferente para el tratamiento de las consecuencias de la isquemia cardíaca.
Se han realizado tres ensayos clínicos sobre la inyección de FGF2 en la arteria coronaria durante el tratamiento del estrechamiento de las arterias coronarias (Laham, R. J. y colaboradores Intracoronary basic fibroblast growth factor (FGF-2) in patients with severe ischemic heart disease: results of a phase I open-label dose escalation study. J Am Coll Cardiol 36, 2132-9, 2000; Simons, M. y colaboradores Pharmacological treatment of coronary artery disease with recombinant fibroblast growth factor-2: double-blind, randomized, controlled clinical trial. Circulation 105, 788-93, 2002; Unger, E. F. y colaboradores Effects of a single intracoronary injection of basic fibroblast growth factor in stable angina pectoris. Am J Cardiol 85, 1414-9, 2000). El resultado de estos tres ensayos muestra que las infusiones intra-coronarias de FGF2 se toleran bien y mejoran significativamente el estado de los pacientes. Así, los compuestos descritos en la invención pueden encontrar una aplicación en el tratamiento de las enfermedades asociadas a un estrechamiento de las arterias coronarias y principalmente en el tratamiento de la angina de pecho.
Las enfermedades de las arterias distales y principalmente las arterias de los miembros inferiores se deben a la obstrucción crónica de las arteriolas que irrigan las extremidades. Estas patologías afectan principalmente a los miembros inferiores. En un ensayo clínico de fase I, pacientes con patologías de las arterias periféricas que implican la claudicación recibieron inyecciones de FGF2 (Lazarous, D. F. y colaboradores Basic fibroblast growth factor in patients with intermittent claudication: results of a phase I trial. J Am Coll Cardiol 36, 1239-44, 2000). En este contexto, el FGF2 fue bien tolerado por los pacientes y los datos clínicos sugieren un efecto beneficioso del FGF2 principalmente en la mejora en el andar. Estos datos clínicos sugieren que los compuestos de la invención representan una herramienta terapéutica preferente para el tratamiento de enfermedades asociadas a una obstrucción de las arterias distales.
La enfermedad de Buerger o tromboangeítis obliterante afecta a las estructuras vasculares distales y se caracteriza por una arteritis distal de las piernas con dolores y úlceras. En este contexto, una inducción de la angiogénesis y de la vasculogénesis representará una terapia para esta patología. Los compuestos de tal invención representan una terapia preferente para la tromboangeítis obliterante.
La neuropatía periférica es una afección axonal o desmielinizante del nervio periférico motor y/o sensitivo que implica una desensibilización de los miembros distales. Una de las complicaciones secundarias principales de la diabetes es el desarrollo crónico de una neuropatía periférica. En este contexto, se ha demostrado que el FGF2 induce una regeneración axonal que podrá ser una terapia preferente en el tratamiento de la lesión de los nervios periféricos y, por lo tanto, en la neuropatía periférica (Basic fibroblast growth factor isoforms promote axonal elongation and branching of adult sensory neurons in vitro. Klimaschewski L, Nindl W, Feurle J, Kavakebi P, Kostron H. Neuroscience. 2004;126 (2): 347-53). Debido a la actividad agonista de los receptores de FGF, los compuestos de tal invención representarán un tratamiento preferente en la neuropatía periférica en el paciente sano o diabético.
Se establece claramente que FGF2 es un activador de las células nerviosas durante el desarrollo. Resultados recientes sugieren que FGF2 será igualmente un factor pivotal para promover la regeneración de las neuronas en el adulto (Sapieha PS, Peltier M, Rendahl KG, Manning WC, Di Polo A., Fibroblast growth factor-2 gene delivery stimulates axon growth by adult retinal ganglion cells after acute optic nerve injury. Mol Cell Neurosci. 2003 Nov; 24 (3): 656-72.). Por las actividades agonistas de los receptores de FGF, los compuestos de tal invención representarán una terapia preferente en la reparación de daños nerviosos posoperatorios, en la reparación de deficiencias nerviosas tales como la enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad priónica, degeneración neuronal del alcohólico o en el caso de demencias.
La proliferación y la migración de las células musculares lisas vasculares contribuyen a la hipertrofia íntima de las arterias y juegan así un papel preponderante en la aterosclerosis y en la reestenosis después de angioplastia y endoarterectomía. Se ha demostrado que un factor angiógeno, el VEGF, reducía significativamente el espesamiento de la íntima acelerando la re-endotelializacíón (Van Belle, E., Maillard, L, Tío, F. O. & Isner, J. M. Accelerated endothelialization by local delivery of recombinant human vascular endothelial growth factor reduces in-stent intimal formation. Biochem Biophys Res Commun 235, 311-6, 1997). Así, los compuestos de la presente invención que tienen una actividad pro-angiógena se pueden utilizar en el tratamiento de la aterosclerosis y en la inhibición de la reestenosis después de angioplastia o endoarterectomía.
La red vascular es esencial para el desarrollo y el mantenimiento de los tejidos. Promoviendo la administración de los nutrientes, del oxígeno y de las células, los vasos sanguíneos ayudan a mantener la integridad funcional y estructural de los tejidos. En este contexto, la angiogénesis y la vasculogénesis permiten mantener y perfundir los tejidos después de una isquemia. Los factores de crecimiento angiogénicos como el VEGF y FGF2 favorecen así la revascularización para la regeneración de los tejidos. Los compuestos presentes en la invención podrían representar un tratamiento preferente en el tratamiento para la regeneración de los músculos.
Los procesos de regeneración muscular en los músculos distróficos o normales dependen del aporte de citocinas y de factores de crecimiento angiogénicos a nivel local (Fibbi, G., D'Alessio, S., Pucci, . , Cerletti, M. & Del Rosso, M. Growth factor-dependent proliferation and invasión of muscle satellite cells require the cell-associated fibrinolytic system. Biol Chem 383, 127-36, 2002). Se ha propuesto que el sistema FGF era un sistema crítico de la regeneración muscular, de la supervivencia y de la proliferación de los mioblastos (Neuhaus, P. y colaboradores Reduced mobility of fibroblast growth factor (FGF)-deficient myoblasts might contribute to dystrophic changes in the musculature of FG F2/FG F6/mdx triple-mutant mice. Mol Cell Biol 23, 6037-48, 2003). El FGF2 así como los compuestos de tal invención podría explotarse con el fin de promover la regeneración cardíaca. Éstos mejorarían así la perfusión del miocardio después de una isquemia (Hendel, R. C. y colaboradores Effect of intracoronary recombinant human vascular endothelial growth factor on myocardial perfusión: evidence for a dose-dependent effect. Circulation 101, 118-21, 2000) así como la supervivencia y la progresión de mioblastos trasplantados y principalmente en la distrofia muscular de Duchenne.
La angiogénesis es un fenómeno esencial durante la cicatrización cutánea. Los nuevos vasos formados aportan el oxígeno y los nutrientes necesarios para la reparación tisular. En el caso de pacientes diabéticos, la cicatrización es un proceso lento y difícil que presenta defectos de angiogénesis. Los FGF forman parte de los factores de crecimiento más implicados en los procesos de angiogénesis durante la fase de cicatrización. Determinados FGF están muy sobrerregulados en las células de la dermis después de una herida cutánea. Debido a las actividades agonistas de los receptores de FGF, los compuestos de tal invención representarán una terapia preferente para el tratamiento de la cicatrización en el paciente sano o diabético.
El trasplante de páncreas bio-artificial es una técnica muy prometedora para el tratamiento de determinados tipos de diabetes. Se ha demostrado, en la rata diabética, que la vascularización en el páncreas bio-artificial era mucho más importante cuando los páncreas se impregnaban de microesferas que contenían FGF2 (Sakurai, Tomonori; Satake, Akira, Sumi, Shoichiro, Inoue, Kazutomo, Nagata, Natsuki, Tabata, Yasuhiko. The Efficient Prevascularization Induced by Fibroblast Growth Factor 2 With a Collagen-Coated Device Improves the Cell Survival of a Bioartificial Páncreas. Páncreas. 28 (3): e70-e79, Abril 2004). Esta revascularización mejora así la supervivencia de los páncreas bio-artificiales implantados y, por lo tanto, la supervivencia del injerto. Por las actividades agonistas de los receptores de FGF, los compuestos de la mencionada invención representarán una terapia preferente en la mejora de la supervivencia del injerto de páncreas bioartificial en el paciente diabético y, de manera más general, en la mejora de la revascularización de los injertos y, por lo tanto, en la supervivencia de los injertos.
La retinitis pigmentaria es una patología que implica la degeneración progresiva de la retina caracterizada por una degeneración de los fotorreceptores y una obliteración de los vasos retiñíanos. Lahdenranta y colaboradores (An anti-angiogenic state ¡n mice and humans with retinal photoreceptor cell degeneration. Proc Nati Acad Sci U S A 98, 10368-73, 2001) han propuesto que los factores de crecimiento angiogénicos regulan la coordinación neuronal y la vascularización asociada de la retina funcionando simultáneamente como factores de supervivencia de los fotorreceptores y como reguladores de las células endoteliales. En este contexto, la inyección intravítrea de FGF2 retarda la degeneración de los fotorreceptores actuando sobre la supervivencia y sobre la angiogénesis retinianas (Faktorovich, E. G., Steinberg, R. H., Yasumura, D., Matthes, M. T. & LaVail, M. M. Basic fibroblast growth factor and local injury protect photoreceptors from light damage in the rat. J Neurosci 12, 3554-67.1992). Estas observaciones demuestran el interés de los compuestos descritos en la invención como terapia en la degeneración retiniana y principalmente en la retinitis pigmentaria.
En el ámbito de la artrosis, se han realizado numerosos estudios para restaurar el cartílago articular destruido. En este contexto, se ha indicado que la proliferación y la diferenciación de condrocitos estaban estimuladas por FGF2 in vitro (Kato Y, Gospodarowicz D. Sulfated proteoglycan synthesis by confluent cultures of rabbit costal chondrocytes grown in the presence of fibroblast growth factor. J Cell Biol. 1985 Feb; 100 (2): 477-85). Además, Cuevas y colaboradores han demostrado que el FGF2 induce la reparación del cartílago in vivo (Cuevas P, Burgos J, Baird A. Basic fibroblast growth factor (FGF) promotes cartilage repair in vivo. Biochem Biophys Res Commun. 31 de Oct de 1988;156 (2): 611-8). Takafuji y colaboradores han demostrado igualmente que los implantes de FGF2 mejoran de manera significativa los cartílagos temporo-mandibulares de conejos que padecen artrosis (Takafuji H, Suzuki T, Okubo Y, Fujimura K, Bessho K Regeneration of articular cartilage defects in the temporomandibular joint of rabbits by fibroblast growth factor-2: a pilot study. Int J Oral Maxillofac Surg. 2007 Oct; 36 (10): 934-7). Estas observaciones demuestran el interés de los compuestos descritos en la invención como terapia en el tratamiento de la artrosis y de la reparación de cartílagos.
En el campo de la reparación ósea, una de las necesidades esenciales es encontrar agentes que estimulen la formación del hueso. Entre los factores de crecimiento principales, está establecido que la administración sistémica de FGF2 facilita la reparación del hueso (Acceleration of fracture healing in nonhuman primates by fibroblast growth factor-2. Kawaguchi H, Nakamura K, Tabata Y, Ikada Y, Aoyama I, Anzai J, Nakamura T, Hiyama Y, Tamura M. J Clin Endocrinol etab. 2.001 Feb; 86 (2), 875-880). La aplicación local de FGF2 en las matrices de gelatina acelera la reparación ósea en primates lo que sugiere la utilidad clínica de FGF2 en el tratamiento de las fracturas. Debido a las propiedades agonistas para los receptores de FGF, los compuestos de la mencionada invención podrían representar un tratamiento preferente en la reparación ósea.
La pre-eclampsia es una patología de la placenta asociada a un defecto de vascularización (Sherer, D. M. & Abulafia, O. Angiogenesis during implantation, and placental and early embryonic development. Placenta 22, 1-13, 2001). Estos defectos de vascularización son debido a un defecto de angiogénesis y conllevan perturbaciones a nivel de la placenta que pueden resultar en la muerte del feto. Los compuestos de la invención podrían ser un tratamiento preferente para paliar un defecto de angiogénesis en las placentas pre-eclámpticas.
Además de los efectos inductores de la angiogénesis, los factores de crecimiento como el VEGF o el FGF2 protegen a las células endoteliales frente a los inductores intrínsecos y extrínsecos de la muerte celular programada. La vía de señalización intrínseca se activa por las mitocondrias en respuesta a un estrés como la ausencia de nutrientes o los daños al ADN, mientras que la vía de señalización extrínseca se induce por la unión de factores pro-apoptóticos como el TNF-a o Fas. Actualmente está claramente descrito que el VEGF y FGF2 son dos factores de supervivencia de las células endoteliales (Role of Raf in Vascular Protection from Distinct Apoptotic Stimuli: A Alavi, J.D. Hood, R. Frausto, D. G. Stupack, D. A. Cheresh: Science 4 de Julio de 2.003: Vol. 301. n° 5.629, pág. 94-96). El Síndrome de Distrés Respiratorio Agudo (SDRA) se caracteriza por problemas cardiovasculares y neuropsiquiátricos. En el marco de los problemas cardio-vasculares los pacientes presentan lesiones vasculares importantes y principalmente una elevada inducción de la muerte celular programada de las células endoteliales. Recientemente, Hamacher & al. han demostrado que los fluidos de lavados broncoalveolares de pacientes afectados con SDRA presentaban una actividad pro-apoptótica contra las células endoteliales micro-vasculares de pulmón (Factor-alfa de necrosis tumoral y angiostatina son mediadores de citotoxicidad endotelial en lavados broncoalveolares de pacientes con síndrome de distrés respiratorio agudo. Am J Respir Crit Care Med. 1 de sep de 2002; 166 (5): 651-6: Hamacher J, Lucas R, Lijnen HR, Buschke S, Dunant Y, Wendel A, Grau GE, Suter PM, Ricou B.). Debido a su actividad de supervivencia sobre las células endoteliales, los productos de la invención podrían presentar un tratamiento preferente en la mejora vascular de los pacientes afectados con lesiones vasculares y principalmente de los pacientes afectados con SDRA.
La sobrerregulación endógena de FGF7 (o KGF) y de FGF18 parece ser un mecanismo importante para favorecer la proliferación, la migración y la protección de los folículos pilosos en los casos patológicos o que resultan de un tratamiento tumoral (Comprehensive Analysis of FGF and FGFR Expression in Skin: FGF18 Is Highly Expressed in Hair Follicles and Capable of Inducing Anagen from Telogen Stage Hair Follicles. Mitsuko Kawano, Akiko Komi-Kuramochi, Masahiro Asada, Masashi Suzuki, Junko Oki, Ju Jiang y Toru Imamura). Debido a su actividad agonista sobre los receptores de FGF, los compuestos de la mencionada invención podrían presentar un tratamiento preferente para la reparación y la protección de los folículos pilosos y en la protección y la regulación del crecimiento capilar.
De acuerdo a otro de sus aspectos, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden, como principio activo, un compuesto de acuerdo a la invención o un compuesto 10. Estas composiciones farmacéuticas contienen una dosis eficaz de al menos un compuesto de acuerdo a la invención o un compuesto 10, o una sal aceptable desde un punto de vista farmacéutico, de tal compuesto, así como al menos un excipiente aceptable desde un punto de vista farmacéutico. Tales excipientes se seleccionan de acuerdo a la forma farmacéutica y el modo de administración deseado, entre los excipientes habituales que son conocidos por el experto en la técnica.
Así, la invención tiene por objeto una composición farmacéutica que comprende, como principio activo, al menos un compuesto de fórmula (I) en donde: -Ri representa un grupo -OS03" ó grupo hidroxilo, -R2 representa o un grupo -O-alquilo o un monosacárido de fórmula (II), donde R representa un grupo alquilo: -R3 representa un disacárido de fórmula (III): en donde: -R4 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R5 representa un disacárido de fórmula (IV): en donde: -R6 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R7 representa o un grupo hidroxilo o un monosacárido fórmula (V) más adelante o un disacárido de fórmula (VI): (V) (VI) en donde: -R8 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo o un disacárido de fórmula (VII): en donde R10 representa un grupo -O-alquilo, con la condición de que: R9 represente un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo cuando R2 represente un monosacárido de fórmula (II) tal como se definió anteriormente; R7 represente un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente cuando R2 represente un grupo -O-alquilo y R4l R6 y R8 no representen simultáneamente grupos hidroxilo, o una sal aceptable farmacéuticamente de tal compuesto, así como al menos un excipiente aceptable farmacéuticamente.
Tales compuestos reagrupan los de fórmula (?)/( ) definidos anteriormente, así como el heptasacárido 10 definido anteriormente, descrito en la Solicitud de Patente Estadounidense 2006/0079483 A1.
En las composiciones farmacéuticas de la presente invención para la administración oral, sublingual, subcutánea, intramuscular, intravenosa, tópica, local, intratraqueal, intranasal, transdérmica o rectal, el principio activo anterior, o su sal, puede administrarse en forma unitaria de administración, mezclado con excipientes farmacéuticos clásicos, a los animales y a humanos para la prevención o el tratamiento de los trastornos o enfermedades anteriores.
Las formas unitarias de administración apropiadas comprenden las formas por vía oral, tales como comprimidos, cápsulas blandas o duras, polvos, gránulos y soluciones o suspensiones orales, las formas de administración sublingual, bucal, intratraqueal, intraocular, intranasal, por inhalación, las formas de administración tópica, transdérmica, subcutánea, intramuscular o intravenosa, las formas de administración rectal y los implantes. Para la aplicación tópica, se pueden utilizar los compuestos de acuerdo a la invención en cremas, geles, pomadas o lociones.
Las formas de administración inyectables son ventajosas en particular, comprendiendo de manera clásica el compuesto activo puesto en solución en agua para inyección, en presencia de cloruro de sodio. La dosis unitaria de compuesto activo debe adaptarse al efecto terapéutico buscado; puede estar comprendida por ejemplo entre 0.1 y 100 mg de principio activo.
La presente invención, de acuerdo a otro de sus aspectos, se refiere igualmente al uso de un compuesto de acuerdo a la invención o de un compuesto 10, o una de sus sales aceptables farmacéuticamente, para el tratamiento de las patologías anteriores indicadas.
Así, la invención tiene por objeto un compuesto de fórmula (I) en donde: -Ri representa un grupo -OS03" ó grupo hidroxilo, -R2 representa o un grupo -O-alquilo o un monosacárido de fórmula (II), donde R representa un grupo alquilo: representa un disacárido de fórmula (III) en donde: -R4 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R5 representa un disacárido de fórmula (IV): en donde: -R6 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R7 representa o un grupo hidroxilo o un monosacárido fórmula (V) más adelante o un disacárido de fórmula (VI): (V) (VI) en donde: -R8 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo o un disacárido de fórmula (VII): en donde R 0 representa un grupo -O-alquilo, con la condición de que: R9 represente un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo cuando R2 represente un monosacárido de fórmula (II) tal como se definió anteriormente; R7 represente un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente cuando R2 represente un grupo -O-alquilo y R R4, R6 y R8 no representen simultáneamente grupos hidroxilo, o una sal aceptable farmacéuticamente de tal compuesto, para el tratamiento de las patologías indicadas anteriormente Tales compuestos reagrupan los de fórmula (?)/( ) definidos anteriormente, así como el heptasacárido 10 definido anteriormente, descrito en la Solicitud de Patente Estadounidense 2006/0079483 A1.
La presente invención, de acuerdo a otro de sus aspectos, se refiere igualmente a un método de tratamiento de las patologías indicadas anteriormente, que comprende la administración a un paciente de una dosis eficaz de un compuesto de acuerdo a la invención o de un compuesto 10 o una de sus sales aceptables farmacéuticamente.
Los medicamentos, composiciones farmacéuticas y método de tratamiento de acuerdo a la invención pueden referirse igualmente a cualquiera de los subgrupos de compuestos definidos anteriormente.

Claims (25)

REIVINDICACIONES
1. Compuestos oligosacarídicos que responden fórmula (I): en donde: -Ri representa un grupo -OS03" ó grupo hidroxilo, -R2 representa o un grupo -O-alquilo o un monosacárido de fórmula (II), donde R representa un grupo alquilo: presenta un disacárido de fórmula (III) en donde: -R4 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R5 representa un disacárido de fórmula (IV): en donde: -R6 representa un grupo -OS03"óo un grupo hidroxilo, -R7 representa o un grupo hidroxilo o un disacárido fórmula (VI): en donde: -R8 representa un grupo -OS03" ó un grupo hidroxilo, -R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo o un disacárido de fórmula (VII): en donde R10 representa un grupo -O-alquilo, con la condición de que: Rg represente un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo cuando R2 represente un monosacárido de fórmula (II) tal como se definió anteriormente; R7 represente un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió anteriormente cuando R2 represente un grupo -O-alquilo y R,, R4, R6 y R8 no representen simultáneamente grupos hidroxilo; en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
2. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1, en donde R2 representa un monosacárido de fórmula (II) y R7 representa un grupo hidroxilo.
3. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1 ó la reivindicación 2, que responden a la fórmula (1-1) más adelante, en donde R7 representa un grupo hidroxilo y R, R,, R y R6 son tal como se define en la reivindicación 1: (1-1) en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
4. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1, en donde R2 representa un grupo -O-alquilo.
5. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1 ó la reivindicación 4, que responden a la fórmula (I-2) más adelante, en donde R2 representa un grupo -O-alquilo y R-,, R , R6, R8 y R9 son tal como se define en la reivindicación 1: en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
6. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1, en donde: R2 representa un grupo -O-alquilo y R7 representa un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió en la reivindicación 1, en donde R9 representa un disacárido de fórmula (VII) tal como se definió en la reivindicación 1.
7. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1 ó la reivindicación 6, que responden a la fórmula (I-3) más adelante, en donde R2 y Rg son tal como se define en la reivindicación 6 y Ri, R4, Re, Re y Río son tal como se define en la reivindicación 1: (I-3) en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
8. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1, en donde: R2 representa un grupo -O-alquilo y R7 representa un disacárido de fórmula (VI) tal como se definió en la reivindicación 1, en donde R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo.
9. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 1 ó la reivindicación 8, que responden a la fórmula (I-2) más adelante, en donde R,, R4, R6 y Ra son tal como se define en la reivindicación 1, R2 representa un grupo -O-alquilo y R9 representa o un grupo hidroxilo o un grupo -O-alquilo: en forma ácida o en forma de cualquiera de sus sales aceptables farmacéuticamente.
10. Compuestos de acuerdo a la reivindicación 8 ó la reivindicación 9, en donde R9 representa un grupo -O-alquilo.
11. Compuestos de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizados por que responden a la fórmula (G), en donde R2, R4, R6 y 7 son tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9:
12. Compuestos de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, seleccionados entre los siguientes compuestos: -Metil(4-0-propil-2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-[(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— 4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil-(1?4)]2-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 1); -Metil(4-0-propil-2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1 -?4)-[(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— 4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil-(1?4)]3-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 2); -[Met¡l(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranos¡l)-(1?4)-[(2-0-sodiosulfonato-a-L-¡dopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desox¡-6-0-sodiosul fonat o-2 -sodio(sulfo natoamino)-a-D-gluco pira nosil)-(1?4)]2-2-0-sod¡osulfonato-a-L-idop¡ranósido]-uronato de sodio (No. 3); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-s odios ulfonato-a-L-id op irán osil uro nato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopi ra nosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfo nato-a -L-idopi ra nosiluro nato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfo na to-2 -sodio (sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No.4); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranos¡l)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-glucopi ra nosil)-(1-?4)-(2-0-sodiosulfo nato-a- L-idopi ra nosiluro nato de sodio) -(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)- (1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 5); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopíranosiluronato de sodio)-(1 - >4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-g luco p ¡ra n os il )-( 1?4)-(2-0-sodiosulfo nato-a- L- ido piran osil uro nato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-g luco p irán os il)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No.6); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1— >4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopi ra nosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfo nato-a -L-idopi ra nosiluro nato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio (sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranósido (No. 7); -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)-[(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonatoamino)-a-D-glucopiranosil)]2- (1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)- (1?4)-2-desoxi-6-0-sod¡osulfonato-2-(sulfonato)amino-a-D-glucopiranósido (No. 8) y -Metil(2-0-sodiosulfonato-a-L-idop¡ranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desoxi-6-0-sodiosulfonato-2-sodio(sulfonato)amino-a-D-g luco piran os ¡I )-[( 1?4)-(2-0-sodios ulfonato-a-L-idopiranosiluronato de sodio)-(1?4)-(2-desox¡-6-0-sod¡osulfonato-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-glucopiranosil)]2-(1?4)-(2-0-sodiosulfonato-a-L-idop¡ranosiluronato de sodio)-(1?4)-2-desoxi-2-sodio(sulfonatoam¡no)-a-D-glucopiranósido (No. 9).
13. Medicamento, caracterizado por que comprende un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y en donde R7 representa o un grupo hidroxilo o un monosacárido de fórmula (V) más adelante o un disacárido de fórmula (VI), donde R8 y Rg son tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10: (V) (VI) o una sal aceptable farmacéuticamente de este último.
14. Medicamento de acuerdo a la reivindicación 13, caracterizado por que comprende un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal aceptable farmacéuticamente de este último.
15. Medicamento de acuerdo a la reivindicación caracterizado por que comprende el compuesto 10: o una sal aceptable farmacéuticamente de este último.
16. Composición farmacéutica, caracterizada por que comprende un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y en donde R7 representa o un grupo hidroxilo o un monosacárido de fórmula (V) más adelante o un disacárido de fórmula (VI), donde R8 y Rg son tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10: (V) (VI) o una sal aceptable farmacéuticamente de este último, así como al menos un excipiente aceptable farmacéuticamente.
17. Composición farmacéutica, caracterizada por que comprende un compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o una sal aceptable farmacéuticamente de este último, así como al menos un excipiente aceptable farmacéuticamente.
18. Composición farmacéutica, caracterizada por que comprende el compuesto 10: o una sal aceptable farmacéuticamente de este último, así como al menos un excipiente aceptable farmacéuticamente.
19. Compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y en donde R7 representa o un grupo hidroxilo o un monosacárido de fórmula (V) más adelante o un disacárido de fórmula (VI), donde R8 y Rg son tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10: (V) (VI) para su uso en el tratamiento de patologías que requieren una activación de los receptores de FGF.
20. Compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, o sal aceptable farmacéuticamente de este último, para su uso en el tratamiento de patologías que requieren una activación de los receptores de FGF.
21. Compuesto 10 ó una sal aceptable farmacéuticamente de este último: para su uso en el tratamiento de patologías que requieren una activación de los receptores de FGF.
22. Compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, para su uso en el tratamiento de patologías que requieren una activación de la angiogénesis y una revascularización pos-isquémica.
23. Compuesto de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, para su uso en el tratamiento de isquemia tal como isquemia cardíaca e isquemia arterial de las extremidades inferiores, tratamiento de enfermedades asociadas a una constricción o una obstrucción de las arterias o la arteritis, tratamiento de la angina de pecho, tratamiento de la tromboangeítis obliterante, tratamiento de la ateroesclerosis, tratamiento de la inhibición de la reestenosis después de angioplastia o endoarterectomía, tratamiento de la cicatrización, tratamiento para la regeneración muscular, tratamiento para la supervivencia de mioblastos, tratamiento de la neuropatía periférica, tratamiento de daños nerviosos posoperatorios, tratamiento de deficiencias nerviosas tales como la enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad priónica y degeneración neuronal del alcohólico, tratamiento de demencias, tratamiento para mejorar la supervivencia del injerto de páncreas bioartificial en el paciente diabético, tratamiento para mejorar la revascularización de injertos y la supervivencia de injertos, tratamiento de la degeneración retiniana, tratamiento de la retinitis pigmentaria, tratamiento de la artrosis, tratamiento de la pre-eclampsia o el tratamiento de lesiones vasculares y del síndrome de distrés respiratorio agudo, tratamiento para la reparación de los cartílagos, tratamiento para la reparación y protección ósea, tratamiento para la reparación y protección de los folículos pilosos y para la protección y la regulación del crecimiento capilar.
24. Compuesto de fórmula 20A, en donde Pg, Pg' y Pg", idénticos o diferentes entre sí, representan grupos protectores:
25. Compuesto de acuerdo a la reivindicación 24, en donde Pg, Pg' y Pg" representan respectivamente grupos bencilo, alilo y acetilo.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2949115B1 (fr) 2009-08-14 2012-11-02 Sanofi Aventis OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
FR2970969B1 (fr) * 2011-01-27 2013-10-18 Sanofi Aventis Oligosaccharides 3-o-alkyles activateurs des recepteurs des fgfs, leur preparation et leur application en therapeutique
GB201516066D0 (en) 2015-09-10 2015-10-28 Young & Co Llp D Treatment of retinitis pigmentosa

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2597484B1 (fr) * 1986-04-17 1988-12-23 Sanofi Sa Glycosaminoglycanes de type heparine ou heparane-sulfate dotes d'une activite sur la division et la differentiation cellulaires, leur preparation et leurs applications therapeutiques.
EP0300099A1 (en) 1987-07-20 1989-01-25 Akzo N.V. New pentasaccharides
WO1992018546A1 (en) * 1991-04-17 1992-10-29 Glycomed, Inc. Sulfated polysaccharides as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
IL102758A (en) 1991-08-23 1997-03-18 Akzo Nv Glycosaminoglycanoid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
FR2704226B1 (fr) 1993-04-22 1995-07-21 Sanofi Elf 3-desoxy oligosaccharides, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
ATE190619T1 (de) 1993-09-01 2000-04-15 Akzo Nobel Nv Biskonjugate, die zwei saccharide und einen spacer enthalten
FR2749849B1 (fr) * 1996-06-14 1998-09-04 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2751334B1 (fr) 1996-07-19 1998-10-16 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2773804B1 (fr) 1998-01-19 2000-02-18 Sanofi Sa Polysaccharides de synthese, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques le contenant
US6617316B1 (en) 1999-10-22 2003-09-09 Aventis Pharma Oligosaccharides, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
FR2800074B1 (fr) * 1999-10-22 2001-12-21 Aventis Pharma Sa Nouveaux oligosaccharides, leur preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
SK288335B6 (sk) * 2001-09-12 2016-02-02 Sigma-Tau Research Switzerland S.A. Čiastočne alebo úplne N-desulfatovaný, N-reacetylovaný heparín, spôsob jeho prípravy, jeho použitie na prípravu liečiva s inhibičným účinkom na heparanázu, s antiangiogénnym a protizápalovým účinkom a farmaceutický prostriedok s jeho obsahom
RU2333222C2 (ru) * 2002-06-18 2008-09-10 Гликорес 2000 С.Р.Л. Эпимеризованные производные полисахарида к5 с высокой степенью сульфатирования
US7582737B2 (en) * 2004-07-20 2009-09-01 Academia Sinica Orthogonally protected disaccharide building blocks for synthesis of heparin oligosaccharides
FR2873377B1 (fr) 2004-07-23 2006-10-13 Sanofi Synthelabo Derives d'azasucre, inhibiteurs d'heparanases, leur procede de preparation, les compositions en contenant et leur utilisation
FR2949114B1 (fr) * 2009-08-14 2011-08-26 Sanofi Aventis OCTASACCHARIDES N-ACYLES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
FR2949115B1 (fr) 2009-08-14 2012-11-02 Sanofi Aventis OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE

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