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MX2011004051A - Benzimidazoles heterociclicos como moduladores de trpm8. - Google Patents

Benzimidazoles heterociclicos como moduladores de trpm8.

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Publication number
MX2011004051A
MX2011004051A MX2011004051A MX2011004051A MX2011004051A MX 2011004051 A MX2011004051 A MX 2011004051A MX 2011004051 A MX2011004051 A MX 2011004051A MX 2011004051 A MX2011004051 A MX 2011004051A MX 2011004051 A MX2011004051 A MX 2011004051A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
hydrogen
compound
trifluoromethyl
fluoro
methyl
Prior art date
Application number
MX2011004051A
Other languages
English (en)
Inventor
Shelley K Ballentine
Mark R Player
Carl R Illig
Sanath K Meegalla
Daniel J Parks
William Parsons
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Pharmaceutica Nv filed Critical Janssen Pharmaceutica Nv
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Abstract

Se describen compuestos, composiciones y métodos para tratar varias enfermedades, síndromes, afecciones y trastornos incluyendo dolor; tales compuestos están representados por la formula (I) como sigue: (ver fórmula (I) en donde W1, W2, W3, R1, R1a, R2, R2a, R3, y, Q, y X están definidos en la presente.

Description

BENZIMIDAZOLES HETEROCÍCLICOS COMO MODULADORES DE TRPM8 CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a los benzimidazoles heterocíclicos que actúan como moduladores del receptor TRPM8. La presente invención se refiere, además, a los procesos para la preparación de benzimidazoles heterocíclicos y su uso en el tratamiento de varias enfermedades, síndromes, y trastornos, que incluyen los que provocan dolor inflamatorio, dolor neuropático, intolerancia al frío o alodinia por frío, dolor vascular periférico, prurito, incontinencia urinaria, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, hipertensión pulmonar y ansiedad, que incluyen otros trastornos relacionados con la tensión, y combinaciones de estos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los canales de potencial receptor transitorio (TRP) son canales de cationes no selectivos que se activan por una variedad de estímulos. Muchos miembros de la familia de canales iónicos se han identificado hasta la fecha, los cuales incluyen el receptor de frío-mentol, también llamado TRPM8 (Mckemy DD, y otros Nature 2002, 4 6(6876), 52-58). Colectivamente, los canales TRP y los receptores tipo TRP relacionados imparten la capacidad de respuesta sensorial de toda la exposición térmica continua que responde selectivamente a umbrales de temperaturas que se encuentran en intervalos desde caliente nociva hasta fría nociva, así como a ciertas sustancias químicas que imitan estas sensaciones Específicamente, se sabe que el TRPM8 se estimula con el frío a temperaturas frías, así como por el mentol y la icilina, los cuales pueden ser responsables de la sensación de enfriamiento terapéutico que estos agentes provocan.
El TRPM8 se localiza en las neuronas nociceptivas primarias (A-delta y fibras C) y también se modula por señales del segundo mensajero mediadas por inflamación (Abe, J. y otros, Neurosci. Lett. 2006, 397(1 -2), 140-144; Premkumar, L. S. y otros, J. Neurosci. 2005; 25(49), 11322-11329). La localización del TRPM8 en las fibras A-delta y C pueden proporcionar una base para la sensibilidad anormal al frío en afecciones patológicas en donde esas neuronas se alteran, lo que resulta en dolor, frecuentemente de naturaleza ardiente (Kobayashi, K. y otros, J. Comp. Neurol. 2005, 493(4), 596-606; Roza, C. y otros, Pain 2006, 720(1-2), 24-35; y Xing, H. y otros, J. Neurophysiol. 2006, 95, 1221-30). La intolerancia al frío y las sensaciones de ardor paradójicas inducidas por agentes químicos o el enfriamiento térmico son muy similares a los síntomas observados en un amplia gama de trastornos clínicos, lo que supondría una justificación sólida para el desarrollo de moduladores de TRPM8 como nuevos agentes antihiperalgésicos o antialodínicos. Además, se conoce que el TRPM8 se expresa en el cerebro, pulmón, vejiga, tracto gastrointestinal, vasos sanguíneos, próstata y células inmunes, lo que proporciona la posibilidad para la modulación terapéutica en una amplia gama de enfermedades.
En la solicitud internacional de patente núm. WO 2006/040136A1 de Bayer Healthcare AG, Lampe, T. y otros, se describe, supuestamente, derivados de 4-benciloxi-fenilmetilamida sustituidos como antagonistas del receptor 1 de mentol frío (CMR-1) para el tratamiento de trastornos urológicos. La solicitud internacional de patente núm. WO 2006/040103A1 de Bayer Healthcare AG describe, supuestamente, métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento y/o profilaxis de enfermedades o trastornos respiratorios. Las solicitudes internacionales de patente núms. WO 2007/017092A1 , WO 2007/017093A1 y WO 2007/017094A1 , de Bayer Healthcare AG describen, supuestamente, benciloxifenilmetil carbamato, amida del ácido 2-benciloxibenzoico sustituido y derivados amida del ácido 4-benciloxibenzoico sustituido para el tratamiento de enfermedades asociadas con el receptor de mentol frío (CMR, por sus siglas en inglés), también conocido como TRPM8.
Existe una necesidad en la materia de antagonistas de TRPM8, que se puedan usar para tratar una enfermedad, síndrome o afección en un mamífero en el cual la enfermedad, síndrome o afección se ve afectado por la modulación de los receptores de TRPM8, tales como el dolor, las enfermedades que conducen a ese dolor, y la disfunción pulmonar o vascular.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) Fórmula (I) en donde W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de Wi, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R es fluoro, cloro, trifluorometilo, (1 -hidroxi-1 -metil)etilo, 2,2,2- trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; o R1 y R3 se toman juntos para formar una sola porción de -OCF20- fundida; R1a es hidrógeno, fluoro, cloro o bromo; R2 es hidrógeno, alquilo de C1- , fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci.3alcoxi(Ci-6)alquilo, ciclopropilo, -CH=CHCH20H o alquenilo de C2-4 unido a través de un átomo de carbono insaturado; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno o fluoro o se combina con R1 para formar - OCF20-; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; V es NH y Q es CH2; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o alquilo de C- ; X es CH2, C(CH3)2, CF2 u O; con la condición de que cuando V es NH, X sea distinto a O; y enantiómeros, diastereómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de éstos.
La presente invención se relaciona, además, con una composición farmacéutica que comprende, consistente de y/o consistente esencialmente de un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable, y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de éste.
Además, se proporcionan los procesos para preparar una composición farmacéutica que comprende, consistente de, y/o consistente esencialmente de mezclar un compuesto de la Fórmula (I) y un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable, y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención se dirige además a los métodos para tratar o mejorar un trastorno modulado por TRPM8 en un sujeto, que incluye un mamífero y/o humano, en el cual la enfermedad, síndrome o afección se afecta por la modulación de los receptores de TRPM8, tal como dolor, las enfermedades que conducen a tal dolor, y disfunción pulmonar y o vascular por medio del uso de un compuesto de la Fórmula (I). Particularmente, los métodos de la presente invención se dirigen a tratar o mejorar un trastorno modulado por el receptor TRPM8 que incluye dolor inflamatorio, intolerancia al frío o alodinia por frío, dolor vascular periférico, prurito, incontinencia urinaria, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, hipertensión pulmonar y ansiedad, incluso otros trastornos relacionados con la tensión, por medio del uso de un compuesto de la Fórmula (I).
La presente invención está dirigida, además, a métodos para producir los presentes compuestos y composiciones farmacéuticas y medicamentos de estos.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El término "independientemente" significa que cuando es posible usar más de uno de esos sustituyentes, dichos sustituyentes pueden ser iguales o diferentes entre sí.
El término "alquilo" usados solos o como parte de un grupo subsiguiente, se refieren a cadenas de carbono rectas y ramificadas que tienen de 1 a 8 átomos de carbono o cualquier número dentro de esta escala. Por lo tanto, los números designados de los átomos de carbono (por ejemplo, C-i-s) se referirán independientemente al número de átomos de carbono en una porción alquilo o a la porción alquilo de un sustituyente más grande que contiene alquilo. En los grupos sustituyentes con varios grupos alquilo, tales como (Ci-6aiqu¡io)2amino los grupos de Ci-6alquilo de dialquilamino pueden ser similares o diferentes.
El término "alcoxi" se refiere a un grupo sustituyente O-alquilo, en donde el alquilo es como definió más arriba. En cuanto a la sustitución, una cadena de alquilo y alcoxi se puede sustituir en un átomo de carbono.
Los términos "alquenilo" y "alquinilo" se refieren a cadenas de carbono rectas y ramificadas con 2 o más átomos de carbono, en donde una cadena de alquenilo tiene al menos un enlace doble en la cadena y una cadena de alquinilo tiene al menos un enlace triple en la cadena.
El término "cicloalquilo" se refiere a anillos de hidrocarburo monocíclicos o policíclicos, saturados o parcialmente insaturados de 3 a 14 miembros de átomos de carbono. Los ejemplos de tales anillos incluyen, y no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y adamantilo. Igualmente, "cicloalquenilo" se refiere a un cicloalquilo que contiene al menos un enlace doble en el anillo. Además, un "cicloalquilo benzofusionado" es un anillo de cicloalquilo que se fusiona a un anillo de benceno. Un "cicloalquilo heteroarilo-fusionado" es un anillo de cicloalquilo que se fusiona a un anillo de heteroarilo de 5 ó 6 miembros (que contiene uno de O, S ó N y, opcionalmente, un nitrógeno adicional).
El término "heterociclilo" se refiere a un anillo cíclico no aromático de 5 a 7 miembros en el cual 1 a 2 miembros son nitrógeno, o un anillo cíclico no aromático de 5 a 7 miembros en el cual cero, uno o dos miembros son nitrógeno y hasta dos miembros son oxígeno o azufre; en donde, opcionalmente, el anillo contiene cero a un enlaces insaturados y, opcionalmente, cuando el anillo es de 6 ó 7 miembros, éste contiene hasta dos enlaces insaturados. Como se usa en la presente descripción "heterociclilo benzofusionado" incluye un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros fusionado a un anillo de benceno. Como se usa en la presente descripción "heterociclilo heteroarilo-fusionado" se refiere a un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros fusionado a un anillo heteroarilo de 5 ó 6 miembros (que contiene uno de O, S o N y, opcionalmente, un nitrógeno adicional). Como se usa en la presente descripción "heterociclilo cicloalquilo-fusionado" se refiere a un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros fusionado a un anillo cicloalquilo o cicloalquenilo de 5 a 7 miembros. Además, como se usa en la presente descripción "heterociclil heterociclil-fusionado" se refiere a un anillo heterocíclico monocíclico de 5 a 7 miembros fusionado a un anillo heterociclilo de 5 a 7 miembros (de la misma definición que anteriormente pero ausente la opción de otro anillo fusionado).
Por ejemplo, los compuestos de la invención, los miembros del anillo del átomo de carbono que forman el anillo de heterociclilo son completamente saturados. Otros compuestos de la invención pueden tener un anillo de heterociclilo parcialmente saturado. Como se usa en la presente descripción "heterociclilo" incluye, además, un heterociclo monocíclico de 5 a g 7 miembros puenteado para formar anillos bicíclicos. Tales compuestos no se consideran que sean completamente aromáticos y no se refieren como compuestos de heteroarilo. Los ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, y no se limitan a, pirrolinilo (que incluyen 2/-/-pirrol, 2-pirrolinilo o 3-pirrolinilo), pirrolidinilo, 2-imidazolinilo, imidazolidinilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo y piperazinilo.
El término "arilo" se refiere a un anillo monocíclico aromático insaturado de 6 miembros de carbono o a un anillo policíclico aromático insaturado de 10 a 14 miembros de carbono. Los ejemplos de esos anillos de arilo incluyen, y no se limitan a, fenilo, naftalenilo o antracenilo. Los grupos arilo preferidos para la práctica de esta invención son fenilo y naftalenilo.
El término "heteroarilo" se refiere a un anillo aromático de 5 ó 6 miembros, en donde el anillo consiste de átomos de carbono y tiene al menos un miembro heteroátomo. Los heteroátomos adecuados incluyen nitrógeno, oxígeno y azufre. En el caso de anillos de 5 miembros, el anillo heteroarilo contiene un miembro de nitrógeno, oxígeno o azufre, y puede contener, además, hasta tres átomos de nitrógeno adicionales. En el caso de anillos de 6 miembros, el anillo heteroarilo puede contener de uno a tres átomos de nitrógeno. Para el caso en el que el anillo de 6 miembros tiene tres átomos de nitrógeno, como máximo dos átomos de nitrógeno son adyacentes.
Opcionalmente, el anillo de heteroarilo se fusiona a un anillo de benceno para formar un "heteroarilo benzo fusionado"; similarmente, el anillo de heteroarilo es opcionalmente fusionado a un anillo de heteroarilo de 5 ó 6 miembros (que contiene uno de O, S o N y, opcionalmente, un nitrógeno adicional) para formar un "heteroarilo heteroaril-fusionado"; similarmente, el anillo de heteroarilo se fusiona opcionalmente a un anillo de cicloalquilo de 5 a 7 miembros o un anillo del heterociclo de 5 a 7 miembros (como se definió arriba pero ausente la opción de otro anillo fusionado) para formar un "heteroarilo cicloalquil-fusionado". Los ejemplos de grupos heteroarilos incluyen, y no se limitan a, furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, pirídinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; ejemplos de grupos heteroarilos con anillos de benceno opcionalmente fusionados incluyen indolilo, isoindolilo, indolinilo, benzofurilo, benzotienilo, indazolilo, bencimidazolilo, benztiazolilo, benzoxazolilo, benzisoxazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, quinolizinilo, quinolinilo, isoquinolinilo o quinazolinilo.
El término "arilalquilo" significa un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo (p. ej., bencilo, fenetilo). Similarmente, "arilalcoxi" indica un grupo alcoxi sustituido con un grupo arilo (por ejemplo, benciloxi).
El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo. Los sustituyentes que se sustituyen con múltiples halógenos se sustituyen de una manera que proporciona compuestos que son estables.
Donde quiera que aparezcan los términos "alquilo" o "arilo" o cualquiera de sus raíces prefijo en un nombre de un sustituyente (por ejemplo, ariloalquilo, alquilamino) se debe interpretar que el nombre incluye las limitaciones dadas anteriormente para "alquilo" y "arilo". Los números designados de los átomos de carbono (por ejemplo, C-i-Ce) se refieren, independientemente, al número de átomos de carbono en una porción alquilo, una porción arilo, o en la porción alquilo de un sustituyente mayor en el cual el alquilo aparece como su raíz prefijo. Para los sustituyentes alquilo y alcoxi, el número de átomos de carbono designado incluye todos los miembros independientes incluidos dentro de un intervalo determinado especificado. Por ejemplo alquilo de C-i-6 pudiera incluir metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, y hexilo individualmente, así como sub-combinaciones de éstos (por ejemplo d. 2. C-i-3, C-i-4, C1-5, C2-6. C3-6, C4-6> Cs-6, C2-5. etc.).
Generalmente, bajo las reglas de la nomenclatura estándar usada en esta descripción, la porción terminal de la cadena lateral designada se describe primero, seguida por la funcionalidad adyacente hacia el punto de unión. Así, por ejemplo, un sustituyente "fenilC C6 alquilamidoCi-Cealquilo" se refiere a un grupo de la Fórmula: A menos que se indique de otra forma, se considera que la definición de cualquier sustituyente o variable en una localización particular en una molécula, es independiente de sus definiciones en otra parte de esa molécula. Se entiende que los sustituyentes y los patrones de sustitución en los compuestos de esta invención pueden seleccionarse por el experto en la materia para proveer compuestos que sean químicamente estables y que puedan ser sintetizados fácilmente mediante las técnicas conocidas, así como también mediante los métodos que se exponen en la presente descripción.
El término "sujeto", como se usa en la presente descripción, se refiere a un animal, preferentemente, un mamífero, más preferentemente, un humano, que ha sido objeto de tratamiento, observación o experimento.
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sistema de tejidos, animal o humano, que el investigador, veterinario, médico u otro especialista clínico está buscando, que incluye el alivio o el alivio parcial de los síntomas de la enfermedad, síndrome, trastorno o desorden que se está tratando.
El término "composición" abarca un producto que comprende los ingredientes específicos en las cantidades terapéuticamente efectivas, así como también cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
El término "antagonista" se usa para referirse a un compuesto capaz de producir, en dependencia de las circunstancias, un antagonismo funcional de un canal iónico de TRPM8, que incluye pero que no se limita a, los antagonistas competitivos, los antagonistas no competitivos, los agonistas desensibilizantes, y los agonistas parciales.
Como se usa en la presente descripción "hipersensibilidad inflamatoria" se refiere a una afección que se caracteriza por una o más señales de inflamación, que incluyen edema, eritema, hipertermia y dolor, y/o por una respuesta fisiológica o patofisiológica exagerada a uno o más tipos de estimulación, que incluyen estimulación térmica, mecánica, y/o química.
El término "modulado por TRPM8" se usa para referirse a la condición de ser afectado por la modulación del receptor TRPM8, que incluye el estado a ser mediado por el receptor TRPM8.
Una modalidad de la invención es un método de tratar o prevenir al menos una de las siguientes enfermedades, síndromes, y afecciones seleccionadas del grupo que consiste de migraña, neuralgia post herpética, neuralgia post traumática, neuralgia post quimioterapia, síndrome I y II de dolor regional complejo (CRPS l/ll), fibromialgia, enfermedad inflamatoria del intestino, pruritis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, dolor de muelas, dolor de huesos y piresis en un sujeto, en donde el método comprende, consiste de, y/o consiste esencialmente de administrar al sujeto, que incluye un animal, un mamífero y un humano con necesidad de ese tratamiento o prevención, una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista de TRPM8 que es un compuesto de la Fórmula (I).
Otra modalidad de la invención es un método de tratar o prevenir al menos una de las siguientes enfermedades, síndromes, y afecciones seleccionadas de hipertensión, enfermedad vascular periférica, enfermedad de Raynaud, lesión por reperfusión o congelación en un sujeto, el método comprende administrar al sujeto, que incluye un animal, un mamífero y un humano con necesidad de ese tratamiento o prevención una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista de TRPM8 que es un compuesto de la Fórmula (I).
Una modalidad adicional de la invención es un método para acelerar la recuperación post-anestésica o recuperación post-hipotermia en un sujeto, que incluye un animal, un mamífero y un humano, el método comprende administrar al sujeto, que incluye un animal, un mamífero y un humano con necesidad de esa recuperación acelerada, una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista de TRPM8 que es un compuesto de la Fórmula (I).
Una modalidad de la presente invención está dirigida a compuestos de la Fórmula (I) Fórmula (I) en donde a) Wi es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de W2 y W3 es N; y cuando uno de W-i , W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; b) R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; o R1 y R3 se toman juntos para formar una sola porción de -OCF20- fundida; c) R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; d) R a es hidrógeno o fluoro; e) R2 es hidrógeno, alquilo de C1-4, fluoro, cloro, bromo, ciano trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci-3alcoxi(Ci-6)alquilo o -CH=CHCH2OH; f) R2 es Ci^alquilo, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(C1-6)alquilo, o -CH=CHCH2OH; g) R2 es metilo, fluoro, cloro, bromo, trifluorometilo, o h¡droxi(C-|. 6)alquilo; h) R2a es hidrógeno o metilo; i) R3 es hidrógeno o se toma con R1 para formar -OCF2O-; j) R3 es hidrógeno; k) V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; V es NH y Q es CH2; y V es O y Q es CH2; I) V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; m) R4 es hidrógeno o metilo; n) X es CH2, CF; 2, u O; o) X es CH2 u O; con la condición de que cuando V es NH, X es distinto y enantiómeros, diastereómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de éstos; y cualquier combinación de las modalidades a) a o) anteriores, siempre que se entienda que se excluyen las combinaciones en las que las diferentes modalidades del mismo sustituyente se pudieran combinar.
Una modalidad de la presente invención está dirigida a compuestos de la Fórmula (I) Fórmula (I) en donde W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; o R1 y R3 se toman juntos para formar una sola porción de -OCF2O- fundida; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es hidrógeno, alquilo de C1-4, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(C1-6)alquilo, Ci-3alcox¡(Ci-6)alqu¡lo o -CH=CHCH2OH; R es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno o se combina con R1 para formar -OCF20- V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; V es NH y Q es CH2; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2, CF2 u O; con la condición de que cuando V es NH, X es distinto a O; y enantiómeros, diastereómeros, solvatos y farmacéuticamente aceptables de éstos.
Una modalidad de la presente invención está dirigida a compuestos de la Fórmula (I) Fórmula (I) en donde Wi es C(R¿a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de W-i , W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es hidrógeno, alquilo de C-M, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci-3alcoxi(Ci.6)alquilo o -CH=CHCH2OH; R es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2, CF2 u O; y enantiómeros, diastereómeros, solvatos farmacéuticamente aceptables de éstos.
Una modalidad de la presente invención está dirigida a compuestos de la Fórmula (I) Fórmula (I) en donde W2 es CH W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de W-i , W2 y W3 es N; y cuando uno de Wi, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es alquilo de C-u, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci-3alcox¡(Ci-6)alquilo o -CH=CHCH2OH; R es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2, CF2 u O; y enantiómeros, diastereómeros, solvatos farmacéuticamente aceptables de éstos.
Una modalidad de la presente invención está dirigida a compuestos de la Fórmula (I) Fórmula (I) en donde Wi es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de Wi, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1 -hidroxi-1 -metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es metilo, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci-3alcoxi(C1-6)alquilo o -CH=CHCH2OH; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2 u O; y enantiómeros, diastereómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de éstos.
Una modalidad adicional de la presente invención se dirige a un compuesto de la Fórmula (I) Fórmula (I) seleccionado del grupo que consiste de: un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \Ai es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a, R2, R a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde \N-\ es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde W es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es fluoro, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde WT es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a, R2, R a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a es fluoro, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N<i es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es O; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CF2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es 2,2,2-trifluoroetilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \Ni es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 se combina con R3 para formar -OCF20-, R1a, R2 y R2a son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es difluorometoxi, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es fluoro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2¡ un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es metilo y X es CH2; un compuesto en donde W es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es bromo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es (1-hidroxi-1-metil)etilo, R1a, R2, R a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es NH, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es difluorometoxi, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es ciano, R a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W! es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es 3-hidroxipropilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \?/? es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R2a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es 1-hidroxi-prop-2-en-3-ilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es fluoro, R1a es fluoro, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es metilo y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es 0; un compuesto en donde WT es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W-i es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a, R2, R2a, y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde \N-¡ es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde \N<> es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es bromo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde WT es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es ciano, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2¡ un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2; un compuesto en donde \N<i es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es fluoro, R2 es hidrógeno, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2¡ un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R a, R2, R2a, y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es CH2CH2C(CH3)2OH, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es fluoro, R1a es fluoro, R3 es cloro, R2a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R2a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es fluoro, R3 es metilo, R a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometoxi, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es 0, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es CH2CH2CH2OCH3, R a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es N, W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es N, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es N, R1 es trifluorometilo, R1a, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; y enantiómeros, diastereómeros, solvatos y sales farmacéuticamente aceptables de éstos.
Una modalidad adicional de la presente invención se dirige a los compuestos 1-58, representados a continuación en la Tabla 1.
TABLA 1 Aun otra modalidad adicional de la presente invención se dirige a los compuestos de la Fórmula (I) en donde los compuestos tienen una fórmula seleccionada del grupo que consiste de a) Compuesto 27 Para su uso en medicina, las sales de los compuestos de la Fórmula (I) se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas. Sin embargo, otras sales pueden ser útiles en la preparación de los compuestos de la Fórmula (I) o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de los compuestos de la Fórmula (I) incluyen sales de adición ácidas que pueden, por ejemplo, formarse por medio de mezclar una solución del compuesto con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosfórico. Además, en donde los compuestos de la Fórmula (I) tienen una porción ácida, las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas de estas pueden incluir sales de metales alcalinos, tales como sales de sodio o potasio; sales metálicas de tierras alcalinas, tales como sales de calcio o magnesio; y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados, tales como sales de amonio cuaternario. Así, las sales farmacéuticamente aceptables representativas incluyen acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, cansilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicollilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, idrobromuro, hidrocloruro, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de amonio N-metilglucamina, oleato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietiodida y valerato.
Los ácidos y bases representativos que se pueden usar en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos que incluyen ácido acético, ácido 2,2-dicloroacético, aminoácidos acilados, ácido adípico, ácido algínico, ácido ascórbico, ácido L-aspártico, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamidobenzoico, (+)-ácido canfórico, ácido canforsulfónico, ácido (+)-(1 S)-canfor-10-sulfónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciclámico, ácido dodecilsulfúrico, ácido etano-1 ,2-disulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroxi-etanosulfónico, ácido fórmico, ácido fumárico, ácido galactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptónico, ácido D-glucónico, ácido D-glucorónico, ácido L-glutámico, ácido a-oxo-glutárico, ácido glicólico, ácido hipúrico, ácido bromhídrico, ácido clorhídrico, ácido (+)-L-láctico, ácido (±)-DL-láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido (-)-L-málico, ácido malónico, ácido (±)-DL-mandélico, mácido etanosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, ácido naftaleno-1 ,5-disulfónico, ácido1-hidroxi-2-naftoico, ácido nicotínico, ácido nítrico, ácido oléico, ácido orótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido fosfórico, ácido L-piroglutámico, ácido salicílico, ácido 4-amino-salicílico, ácido sebácico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tánico, ácido (+)-L-tartár¡co, ácido tiociánico, ácido p-toluenosulfónico y ácido undecilénico; y bases que incluyen amoniaco, L-arginina, benetamina, benzatina, hidróxido de calcio, colina, deanol, dietanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)-etanol, etanolamina, etilenodiamina, /V-metil-glucamina, hidrabamina, 1/- -¡midazol, L-lisina, hidróxido magnésico, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperazina, hidróxido potásico, 1 -(2-hidroxietil)-pirrolidina, amina secundaría, hidróxido sódico, trietanolamina, trometamina y hidróxido de zinc.
Las modalidades de la presente invención incluyen los profármacos de los compuestos de la Fórmula (I). Generalmente, tales profármacos serán derivados funcionales de los compuestos que son fácilmente convertibles in vivo en el compuesto necesario. Así, en las modalidades de los métodos de tratamiento o prevención de la presente invención, el término "administrar" abarca el tratamiento o prevención de las diferentes enfermedades, afecciones, síndromes ytrastornos divulgados, con el compuesto específicamente descrito o con un compuesto que puede no ser específicamente descrito, pero que se convierte en el compuesto especificado in vivo después de la administración a un paciente. Los procedimientos convencionales para seleccionar y preparar derivados profármacos adecuados se describen por ejemplo en "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
Cuando los compuestos de acuerdo con las modalidades de esta invención tienen por lo menos un centro quiral, pueden existir por consiguiente como enantiómeros. Cuando los compuestos poseen dos o varios centros quirales, también pueden existir como diastereómeros. Se debe comprender que tales isómeros y mezclas de éstos se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Además, algunas de las formas cristalinas de los compuestos pueden existir como polimorfos y por lo tanto se consideran incluidos en la presente invención. Además, algunos de los compuestos pueden formar solvatos con agua (es decir, hidratos) o disolventes orgánicos comunes, y tales solvatos también se consideran incluidos dentro del alcance de esta invención. El técnico con experiencia entenderá que el término compuesto, como se usa en la presente descripción, incluye compuestos solvatados de la Fórmula I.
En los casos en los que los procesos para la preparación de los compuestos de acuerdo con ciertas modalidades dan lugar a una mezcla de estereoisómeros, estos isómeros pueden separarse mediante técnicas convencionales, tales como cromatografía preparativa. Los compuestos se pueden preparar de forma racémica, o se pueden preparar enantiómeros individuales mediante síntesis enantioespecífica o mediante resolución. Los compuestos pueden, por ejemplo, resolverse en sus componentes enantiómeros mediante técnicas estándar, tales como la formación de pares diastereoméricos mediante la formación de sal con un ácido ópticamente activo tal como ácido tartárico (-)-dip-toluoil-D- y/o ácido tartárico (+)-dip-toluoil-L- seguido de cristalización fraccional y regeneración de la base libre. Los compuestos también se pueden resolver mediante la formación de ésteres o amidas diastereoméricos, seguidos por separación cromatográfica y eliminación del auxiliar de helicidad. Alternativamente, los compuestos se pueden resolver usando una columna de HPLC helicoidal.
Una modalidad de la presente invención se dirige a una composición que incluye una composición farmacéutica, que comprende, consistente de, y/o consistente esencialmente de, el (+)-enantiómero de un compuesto de la Fórmula (I) en donde dicha composición está sustancialmente libre del (-)-isómero de dicho compuesto. En el presente contexto, sustancialmente libre significa menor que aproximadamente 25 %, preferentemente, menor que aproximadamente 10 %, con mayor preferencia, menor que aproximadamente 5 %, aún con mayor preferencia, menor que aproximadamente 2 % y, aún con mayor preferencia, menor que aproximadamente 1 % del (-)-isómero calculado como . . . . (Masa (+) - Enantiómero) 1 ?? % (+) - Enantiómero = - — - x 100 (Masa (+) - Enantiómero) + (Masa(-) - Enantiómero) Otra modalidad de la presente invención es una composición que incluye una composición farmacéutica, que comprende, consistente de, y consistente esencialmente del (-)-enantiómero de un compuesto de la Fórmula (I), en donde dicha composición está sustancialmente libre del (+)-¡sómero de dicho compuesto. En el presente contexto sustancialmente libre significa menor que aproximadamente 25 %, preferentemente, menor que aproximadamente 10 %, con mayor preferencia, menor que aproximadamente 5 %, aún con mayor preferencia, menor que aproximadamente 2 % y aún con mayor preferencia, menor que aproximadamente 1 % del (+)-¡sómero calculado como (Masa (-) - Enantiómero) , ?? %(-) - Enantiómero = — - x 100 (Masa (+) - Enantiómero) + (Masa(-) - Enantiómero) Durante cualquiera de los procedimientos de preparación de los compuestos de varias modalidades de la presente invención puede ser necesario o deseable proteger los grupos sensibles o reactivos en cualquiera de las moléculas involucradas. Esto se puede hacer por medio de grupos protectores convencionales, como los que se describen en Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; y T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1999. Los grupos protectores se pueden eliminar en una etapa posterior conveniente con métodos conocidos en la materia.
Aún cuando los compuestos de las modalidades de la presente invención (incluso sus sales farmacéuticamente aceptables y solvatos farmacéuticamente aceptables) se pueden administrar solos, éstos se administrarán, generalmente, en mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable, y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable seleccionado en correspondencia con la ruta de administración pretendida y la práctica farmacéutica o veterinaria estándar. Así, las modalidades particulares de la presente invención se refieren a composiciones farmacéuticas y veterinarias que comprenden los compuestos de la Fórmula (I) y al menos un portador farmacéuticamente aceptable, un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable.
A modo de ejemplo, en las composiciones farmacéuticas de las modalidades de la presente invención, los compuestos de la Fórmula (I) se pueden mezclar con cualquier aglutinante(s), lubricante(s), agente(s) de suspensión, agente(s) de recubrimiento, agente(s) solubilizante adecuado(s), y combinaciones de estos.
Las formas sólidas de dosificación oral, tales como tabletas o cápsulas, que contienen los compuestos de la presente invención se pueden administrar en al menos una forma de dosificación a la vez, según el caso. También es posible administrar los compuestos en formulaciones de liberación sostenida.
Las formas orales adicionales en las cuales los compuestos de la presente invención se pueden administrar incluyen elixires, soluciones, jarabes, y suspensiones, cada una puede contener opcionalmente agentes aromatizantes y agentes colorantes.
Alternativamente, los compuestos de la Fórmula (I) se pueden administrar mediante inhalación (intratraqueal o intranasal) o en forma de un supositorio o pesario, o pueden ser de aplicación tópica en forma de una loción, solución, crema, pomada o polvos de talco. Por ejemplo, se pueden incorporar en una crema que comprende, consistente de, y/o consistente esencialmente de una emulsión acuosa de polietilenglicol o parafina líquida. También se pueden incorporar a una concentración de entre aproximadamente 1 % y aproximadamente 10 % por peso de la crema, en un ungüento que comprende, consistente de, y/o consistente esencialmente de una cera blanca o base de parafina blanda blanca, junto con cualquiera de los estabilizadores y conservantes que sean necesarios. Una forma alternativa de administración incluye la administración transdérmica mediante el uso de un parche transdérmico o de piel.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención (así como los compuestos de la presente invención solos) también pueden inyectarse por vía parenteral, por ejemplo, por vía ¡ntracavernosa, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica o por vía intratecal. En este caso, las composiciones también incluirán al menos uno de un portador adecuado, un excipiente adecuado, y un disolvente adecuado.
Para la administración por vía parenteral, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se usan mejor en forma de una solución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo, suficiente sales y monosacáridos para hacer la solución isotónica con la sangre.
Para la administración bucal o sublingual, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar en forma de tabletas o pastillas, las cuales pueden ser formuladas de una manera convencional.
A modo de ejemplo adicional, las composiciones farmacéuticas que contienen al menos uno de los compuestos de la Fórmula (I) como el ingrediente activo pueden ser preparadas al mezclar el(los) compuesto(s) con un portador farmacéuticamente aceptable, un diluyente farmacéuticamente aceptable, y/o un excipiente farmacéuticamente aceptable, de acuerdo a las técnicas convencionales de preparación de compuestos farmacéuticos El portador, excipiente, y diluyente pueden tomar una amplia variedad de formas en dependencia de la ruta de administración deseada (por ejemplo, oral, parenteral, etc.). Así, para las preparaciones orales líquidas, tales como suspensiones, siropes, elixires y soluciones, los portadores, excipientes y diluyentes adecuados incluyen agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservantes, estabilizantes, agentes colorantes, y similares; para las preparaciones orales sólidas, tales como polvos, cápsulas y tabletas, los portadores, excipientes y diluyentes adecuados incluyen almidones, azúcares, diluyentes, agentes granuladores, lubricantes aglutinantes, agentes desintegradores y similares. Las preparaciones orales sólidas se pueden recubrir, además, opcionalmente, con sustancias tales como, azúcares, o recubrirse entéricamente con el fin de modular el sitio principal de absorción y desintegración. Para la administración por vía parenteral, el portador, excipiente y disolvente incluirá, usualmente, agua estéril, y se pueden añadir otros ingredientes para incrementar la solubilidad y la preservación de la composición. Las suspensiones o soluciones inyectables también se pueden preparar por medio del uso de portadores acuosos junto con los aditivos apropiados, como solubilizadores y conservantes.
Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) ouna composición farmacéutica de éste incluye un intervalo de dosis de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 3000 mg, particularmente, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg, o más particularmente de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo, en un régimen de aproximadamente de 1 a 4 veces al día para un humano promedio (70 kg), aunque es evidente para un experto en la materia que la cantidad terapéuticamente efectiva para los compuestos activos de la invención variará al igual que las enfermedades, síndromes, afecciones, y trastornos que son tratados.
Para la administración oral, una composición farmacéutica se proporciona, preferentemente, en forma de tabletas que contienen aproximadamente 0.01 , aproximadamente 10, aproximadamente 50, aproximadamente 100, aproximadamente 150, aproximadamente 200, aproximadamente 250 y aproximadamente 0.01 miligramos del compuesto inventivo como ingrediente activo.
Ventajosamente, un compuesto de la Fórmula (I) puede administrarse en una única dosis diaria, o la dosis total diaria puede administrarse en dosis divididas de dos, tres y cuatro veces por día.
Las dosificaciones óptimas de un compuesto de la Fórmula (I) a ser administrado pueden ser fácilmente determinadas y variarán con el compuesto particular usado, el modo de administración, la fuerza de la preparación, y el avance de la enfermedad, síndrome, afección o trastorno. Además, los factores asociados con el sujeto que se va a tratar, que incluyen: edad, peso, dieta y tiempo de administración, resultará en la necesidad de ajusfar la dosis para alcanzar un nivel terapéutico adecuado. Las dosificaciones anteriores de esta manera ilustran el caso promedio. Pudieran existir, por supuesto, casos individuales en donde se ameritan intervalos de dosificaciones mayores o menores, y estos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Los compuestos de la Fórmula (I) se puede administrar en cualquiera de las composiciones anteriores y regímenes de dosificación o por medio de aquellas composiciones y regímenes de dosificación establecidos en la materia cada vez que se requiera el uso de un compuesto de la Fórmula (I) para un sujeto que lo necesita.
Como antagonistas del canal de ion de TRPM8, los compuestos de la Fórmula (I) son útiles en los métodos para tratar y prevenir una enfermedad, un síndrome, una afección o un trastorno en un sujeto, que incluye un animal, un mamífero y un ser humano, en el cual la enfermedad, el síndrome, la afección, o el trastorno se ve afectado por la modulación de los receptores de TRPM8. Tales métodos comprenden, consisten en, y consisten esencialmente en la administración a un sujeto, que incluye un animal, un mamífero y un ser humano en necesidad de tal tratamiento o prevención de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, sal o solvato de la Fórmula (I). Particularmente, los compuestos de la Fórmula (I) son útiles para prevenir o tratar el dolor o enfermedades, síndromes, afecciones o trastornos que causan tal dolor, o disfunción pulmonar o vascular. Más particularmente, los compuestos de la Fórmula (I) son útiles para prevenir o tratar el dolor inflamatorio, afecciones de hipersensibilidad inflamatoria, dolor neuropático, ansiedad, depresión y enfermedades cardiovasculares agravadas por el frío, que incluyen enfermedad vascular periférica, hipertensión vascular, hipertensión pulmonar, enfermedad de Raynaud, y enfermedad arterial coronaria, mediante la administración a un sujeto que necesite de éstos de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I).
Ejemplos de dolor inflamatorio incluyen dolor debido a una enfermedad, afección, síndrome, trastorno o un estado de dolor como la enfermedad intestinal inflamatoria, dolor visceral, migraña, dolor postoperatorio, osteoartritis, artritis reumatoide, dolor de espalda, dolor de espalda baja, dolor en las articulaciones, dolor abdominal, dolor en el pecho, parto, enfermedades musculoesqueléticas, enfermedades de la piel, dolor de muelas, piresis, quemaduras, quemaduras solares, mordedura de serpiente, mordeduras de serpientes venenosas, picadura de araña, picadura de insecto, vejiga neurogénica, cistitis intersticial, infección urinaria, rinitis, dermatitis de contacto/hipersensibilidad, prurito, eczema, faringitis, mucositis, enteritis, síndrome del intestino irritable, colecistitis, pancreatitis, síndrome de dolor postmastectomía, dolor menstrual, endometriosis, dolor de cabeza sinusal, cefalea tensional, o aracnoiditis.
Un tipo de dolor inflamatorio es la hiperalgesia inflamatoria, la cual puede ser además distinguida como hiperalgesia somática inflamatoria o hiperalgesia visceral inflamatoria. La hiperalgesia somática inflamatoria se caracteriza por la presencia de un estado hiperalgésico inflamatorio en el cual existe una hipersensibilidad al estímulo químico, mecánico y/o térmico. La hiperalgesia visceral inflamatoria también se caracteriza por la presencia de un estado hiperalgésico inflamatorio, en el cual existe irritabilidad visceral incrementada.
Los ejemplos de hiperalgesia inflamatoria incluyen una enfermedad, síndrome, afección, trastorno o estado de dolor que incluye inflamación, osteoartritis, artritis reumatoide, dolor de espalda, dolor en las articulaciones, dolor abdominal, enfermedades musculoesqueléticas, enfermedades de la piel, dolor post-operatorio, dolores de cabeza, dolor de muela, quemaduras solares, picaduras de insectos, vejiga neurogénica, incontinencia urinaria, cistitis intersticial, infección urinaria, tos, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis, dermatitis de contacto/ hipersensibilidad, prurito, eczema, faringitis, enteritis, síndrome del intestino irritable, enfermedades inflamatorias del intestino incluyendo la enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.
Una modalidad de la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de la hiperalgesia somática inflamatoria en la cual existe una hipersensibilidad a los estímulos térmicos, mecánicos y/o químicos, dicho método comprende la etapa de administrar a un sujeto en necesidad de tal tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, sal o solvato de la Fórmula (I).
Una modalidad adicional de la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de la hiperalgesia inflamatoria visceral en la cual existe una irritabilidad visceral incrementada, dicho método comprende, consiste de, y/o consiste esencialmente de la etapa de administrar a un sujeto en necesidad de tal tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, sal o solvato de la Fórmula (I).
Una modalidad adicional de la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de la alodinia neuropática al frío, en la cual existe una hipersensibilidad al estímulo de enfriamiento, dicho método comprende, consiste de, y/o consiste esencialmente de la etapa de administrar a un sujeto en necesidad de tal tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, sal o solvato de Fórmula (I).
Los ejemplos de una afección de hipersensibilidad inflamatoria incluyen incontinencia urinaria, hipertrofia prostética benigna, tos, asma, rinitis y hipersensibilidad nasal, prurito, dermatitis de contacto y/o alergia dérmica, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
Los ejemplos de un dolor neuropático incluyen dolor debido a una enfermedad, síndrome, afección, trastorno estado de dolor que incluye cáncer, trastornos neurológicos, cirugía de columna vertebral y nervios periféricos, tumor cerebral, lesión cerebral traumática (TBI, por sus siglas en inglés), traumatismo de la médula espinal, síndrome de dolor crónico, fibromialgia, síndrome de fatiga crónica, neuralgias (neuralgia trigeminal, neuralgia glosofaríngea, neuralgia postherpética y causalgia), lupus, sarcoidosis, neuropatía periférica, neuropatía periférica bilateral, neuropatía diabética, dolor central, neuropatías asociadas con lesión de la médula espinal, derrames cerebrales, esclerosis lateral amiotrófica (ALS, por sus siglas en inglés), enfermedad de Parkinson, esclerosis múltiple, neuritis ciática, neuralgia de la articulación mandibular, neuritis periférica, polineuritis, dolor del muñón, dolor del miembro fantasma, fracturas óseas, dolor neuropático oral, dolor de Charcot, síndrome de dolor regional complejo I y II (CRPS l/ll), radiculopatía, síndrome de Guillain-Barré, meralgia parestésica, síndrome del fuego de la boca, neuritis óptica, neuritis postfebril, neuritis migrañosa, neuritis segmentaria, neuritis de Gombault, neuronitis, neuralgia cervicobraquial, neuralgia craneal, neuralgia geniculada, neuralgia glosofaríngea, neuralgia migrañosa, neuralgia idiopática, neuralgia intercostal, neuralgia mamaria, neuralgia de Morton, neuralgia nasociliar, neuralgia occipital, neuralgia roja, neuralgia del Sluder, neuralgia esplenopalatina, neuralgia supraorbital, neuralgia vidiana o vulvodinia.
Un tipo de dolor neuropático es la alodinia neuropática al frío, la cual se puede caracterizar por la presencia de un estado alodínico asociado a neuropatía en el cual existe una hipersensibilidad a los estímulos de enfriamiento. Ejemplos de alodinia neuropática al frío incluyen alodinia, debido a una enfermedad, padecimiento, síndrome, trastorno o estado de dolor, que incluye dolor neuropático (neuralgia), dolor que surge de la cirugía de la columna vertebral o de los nervios periféricos, traumatismo, lesión cerebral traumática (TBI), neuralgia trigeminal, neuralgia postherpética, causalgia, neuropatía periférica, neuropatía diabética, dolor central, ictus, neuritis periférica, polineuritis, síndrome de dolor regional complejo I y II (CRPS l/ll) y radiculopatía.
Los ejemplos de ansiedad incluyen ansiedad social, trastorno de estrés post-traumático, fobias, fobia social, fobias especiales, trastorno de pánico, trastorno obsesivo-compulsivo, trastorno de estrés agudo, trastorno de ansiedad por separación, y trastorno de ansiedad generalizado.
Los ejemplos de depresión incluyen depresión severa, trastorno bipolar, trastorno afectivo estacional, depresión postparto, depresión maníaca, y depresión bipolar.
Métodos sintéticos generales Los compuestos representativos de la presente invención se pueden sinterizar de acuerdo con los métodos sintéticos generales que se describen más adelante y que se ilustran en los esquemas que siguen. Ya que los esquemas son una ilustración, la invención no debe interpretarse como limitada por las reacciones químicas específicas y las condiciones específicas descritas en los esquemas y ejemplos. Los distintos materiales de partida que se usan en los esquemas están comercialmente disponibles o se pueden preparar por métodos que están dentro del conocimiento de las personas versadas en la materia. Las variables son como se definió en la presente descripción y dentro del conocimiento de las personas versadas en la materia.
Las abreviaciones usadas en la presente especificación, particularmente en los esquemas y los ejemplos, son de la siguiente manera: Abreviatura Significado AcOH ácido acético AIBN azobisisobutironitrílo ac. acuoso atm atmósfera BOC íerc-butiloxtcarbonilo Comp Compuesto CSA ácido canforsulfónico DCC /v,/V-diciclohexilcarbodiim¡da DCE 1 ,2-dicloroetano Abreviatura Significado DC diclorometano DIPEA düsopropiletilamina DMA / ,rV-d¡metilacetam¡da DME 1 ,2-dimetoxietano DMF v,/V-dimetilformamida DMSO sulfóxido de dimetilo dppf 1 , 1 '-b/'s-(difen¡lfosf¡no)ferroceno EDCI hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida EtOAc acetato de etilo EtOH etanol hora(s) HCI ácido clorhídrico HOBt 1 -hidroxibenzotriazol MeOH metanol min minuto(s) NCS W-clorosuccinimida PHMS polimetilhidrosiloxano PyBroP bromotripirrolidinofosfonio hexafluorofosfato ta temperatura ambiente S-Fos 2-diciclohexilfosfino-2',6'-dimetoxibifenilo sat. saturado TBSCI cloruro de ferc-butildimetilsililo TEA trietilamina THF tetrahidrofurano TLC cromatografía de capa fina Lo siguiente describe la metodología general que se puede usar para producir isoxazolinil benzimidazoles de la Fórmula (I).
Un compuesto adecuadamente sustituido de la Fórmula 1-2, en donde Z es cloro, bromo, o yodo y R2 es distinto a cloro o bromo, puede servir como un producto intermedio útil para la construcción de la porción biarilo de los compuestos de la presente invención como se muestra en el Esquema I. Cuando no se encuentra comercialmente disponible, un compuesto de la Fórmula I-2 en donde Wi es C(R2a), W2 es CH y W3 es C(R2) se puede preparar mediante la halogenación de un compuesto correspondiente adecuadamente sustituido de la Fórmula 1-1 por medio del uso de una variedad de reactivos. (Para un estudio, ver: Coombes, R. G. "Organic Reaction Mechanisms (Electrophilic Aromatic Substitution)"; John Wiley & Sons, Ltd. (Nueva York), 2003; p 287-295.) Un reactivo preferido para la brominación es bromo en un solvente adecuado tal como DCM, tetraclorometano o preferentemente, ácido acético. Un reactivo preferido para la cloración es cloruro de sulfurilo en un solvente adecuado tal como DCM o tetraclorometano. Los reactivos preferidos para la yodación incluyen yodo en un solvente adecuado tal como DCM o tetraclorometano o, con mayor preferencia, yodo y una sal de plata tal como sulfato de plata en un solvente adecuado tal como etanol.
Un compuesto de la Fórmula 1-2 se pueden acoplar después con un ácido aril borónico adecuadamente sustituido, reactivo de trialquilestaño, trialquilsilano, y similares, de la Fórmula 1-3 (en donde Y es la funcionalidad de acoplamiento reactivo) por una variedad de reacciones de acoplamiento (por ejemplo, las reacciones de Suzuki, Stille, y Hiyama) que son de conocimiento de las personas versadas en la materia. (Para una revisión de las reacciones de Suzuki, ver: Miyaura; N.; Suzuki, A. Chem. Rev. 1995, 95, 2457. Para un estudio de las reacciones de Stille, ver: Fariña, V.; Krishnamurthy, V.; Scott, W. J. "The Stille Reaction"; Organic Reactions 1997, 50, 1-652. Para las referencias a la química de Hiyama, ver: Sahoo, A. K.; Oda, T.; Nakao, y Y. Hiyama Adv. Synth. Catal. 2004, 346, 1715-1727 y T. Nakao, Y, y otros, J. Amer. Chem. Soc. 2005, 127, 6952-6953). Un método particularmente útil es la reacción de acoplamiento cruzado de Suzuki catalizada con paladio (ver además, Huff, B. y otros, Org. Syn. 1997, 75, 53-60, y Goodson, F. E. y otros, Org. Syn. 1997, 75, 61-68). Los catalizadores de paladio adecuados para esta reacción incluyen acetato de paladio (II), cloruro de paladio (II), bis(acetonitrilo)-dicloro-paladio(ll), dicloro-bis(di-terc-butilfenilfosfina)-paladio (II) y similares; o preferentemente, aducto de [1 ,1 '-/?/'s-(difenilfosfino)-ferroceno]-paladio (II) dicloruro diclorometano ((dppfJPdCfe-DCM) y tetrakis-(trifenilfosfina)-paladio(O) (Pd(PPh3)4). Las reacciones se pueden llevar a cabo además en presencia o ausencia de ligandos añadidos para el paladio el cual, cuando se usa, incluye uno o más de uno de trifenilfosfina, tri-o-tolilfosfina, tri(terc-butil)-fosfina, 1 ,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno, bis[2-(difenil-fosfino)fenil] éter, 2-diciclohexilfosf¡no-2',6'-dimetoxibifenilo, 1 -butil-3-metilimidazolium hexafluorofosfato, y similares. Las bases adecuadas para esta transformación incluyen carbonato de cesio, carbonato potásico, carbonato sódico, fluoruro de cesio, fluoruro potásico, terc-butóxido potásico, terc-butóxido sódico, hidróxido sódico acuoso, bicarbonato sódico acuoso o, preferentemente, fosfato potásico o carbonato sódico acuoso. Los solventes útiles incluye etanol, THF, DMF, tolueno, benceno o, preferentemente, DME o dioxano.
En este caso, una mezcla de un compuesto de la Fórmula I-2 y un compuesto de la Fórmula I-3 (en donde Y es un ácido borónico o éster) en una mezcla de DME y agua que contiene carbonato sódico y una cantidad catalítica de un catalizador de paladio preferido se puede calentar a aproximadamente 90 °C para dar el producto intermedio de la Fórmula I-4.
Cuando R2 es fluoro, cloro, o bromo, R2 se puede introducir después del acoplamiento del biarilo como se describe en la presente partiendo de un compuesto adecuadamente sustituido de la Fórmula I-5 para dar un intermedio biarilo de la Fórmula I-6, seguido por la halogenación por medio del uso de las condiciones descritas en la presente para producir un compuesto de la Fórmula 1-4.
Alternativamente, cuando Wi es C(R2a), W2 es CH, y W3 es C(R2), las parejas de acoplamiento de biarilo se pueden invertir como se muestra en el Esquema II de manera que un grupo halo está o el anillo de arilo en un compuesto de la Fórmula II-2 (Z = yodo, bromo, o cloro) y un borónico ácido o porción éster (Y = B(OH)2 o B(OR)2 donde B(OR)2 es, por ejemplo, pinacolatoborilo o neopentilglicolatoborilo) está en un compuesto de la Fórmula 11-1 , con el uso de catalizadores, ligandos opcionales, bases y solventes descritos para el Esquema I. En este caso, una mezcla de un compuesto de la Fórmula 11-1 y un compuesto de la Fórmula II-2; en una mezcla de solventes de DME y agua; en presencia de una base tal como carbonato sódico; y una cantidad catalítica de un catalizador de paladio preferido; se puede calentar hasta 90 °C para dar el producto intermedio de la Fórmula I-4.
Cuando no se encuentran fácilmente disponibles, los ésteres borónicos de la Fórmula 11-1 se pueden sinterizar de los derivados halo correspondientes de la Fórmula I-2, en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, y W3 es C(R2), por una reacción de boronación catalizada por paladio (ver, por ejemplo, Ishiyama, T. y otros, J. Org. Chem. 1995, 60, 7508-10 y Murata, M. y otros, J. Org. Chem. 2000, 65, 164-8). Las condiciones preferidas incluyen el tratamiento con un reactivo de diboro tal como bis(pinacolato)diboro, un catalizador de paladio tal como (dppf)PdCI2) y una base, preferentemente, acetato potásico, en un solvente adecuado tal como DMSO, DMF o preferentemente, dioxano.
ESQUEMA II ?-1 El grupo nitro de un compuesto de la Fórmula 1-4 se puede reducir a un grupo amino como se muestra en el Esquema III para proporcionar un compuesto de la Fórmula 111-1 mediante una variedad de métodos estándares (ver: M. Hudlicky, "Reductions in Organic Chemistry"; Ellis Horwood, Ltd.: Chichester, RU, 1984). Estos incluyen, en donde sea adecuado, hidrogenación catalítica por medio del uso de metal paladio como un catalizador en un solvente adecuado tal como metanol o etanol o reducción con metal hierro o zinc en presencia de un reactivo ácido adecuado o solvente tal como ácido clorhídrico o ácido acético, o por medio del uso de cloruro de hierro y amonio en etanol y agua. Un método preferido es con hierro en polvo como agente reductor en una mezcla de etanol y ácido acético o clorhídrico y con calentamiento a 50-80 °C.
ESQUEMA III Como se ¡lustra en el Esquema IV, un producto intermedio de la Fórmula IV-3 (en donde V es C(R4) y Q es O) se puede producir a través de la reacción de cicloadición [3+2] de un óxido de nitrilo generado in situ y un alqueno apropiadamente sustituido de la Fórmula IV-2. (Para un estudio de esta química, ver: Jaeger, Volker; Colinas, Pedro A., Eds. "Chemistry of Heterocyclic Compounds (Synthetic Applications of 1 ,3-Dipolar cicloaddition Chemistry toward Heterocycles and Natural Products)"; John Wiley & Sons, Ltd. (Nueva York), 2002; Capítulo 59, p 361-472.) Las condiciones preferidas para esta reacción incluyen la generación del óxido de nitrilo de etil clorohidroximinoacetato (Comp. IV-1) en un solvente adecuado, preferentemente, DCM, en presencia del alqueno de la Fórmula IV-2 con una trialquilamina, tal como diisopropiletilamina, como una base.
ESQUEMA IV IV-1 IV-3 IV-4 El éster resultante de la Fórmula IV-3 se puede saponificar por un número de métodos comunes para producir el ácido carboxílico correspondiente; por ejemplo, por la acción de hidróxido de litio en una mezcla solvente de agua y metanol para dar el ácido carboxílico de la Fórmula IV-4.
El cloruro ácido de un compuesto de la Fórmula IV-4 se puede preparar por medio del uso de cualquiera de un número de agentes de cloración conocidos estándar tales como cloruro de tionilo o, preferentemente, cloruro de oxalilo como se muestra en el Esquema V con DCM como el solvente y preferentemente, con DMF se añadió como un catalizador. El cloruro ácido producido de esta forma se puede añadir a un compuesto de la Fórmula 111-1 en presencia de un limpiador ácido y en un solvente adecuado, tal como trietilamina en DCM, para dar una mezcla de los intermedios de bifenilo mono-acilados de la Fórmula V-1. Un producto bifenilo di-acilado se puede generar además durante el curso de la reacción y se puede separar de la mezcla mono-acilada a través de métodos cromatográficos convencionales.
ESQUEMA V V-1 La mezcla del compuesto de la Fórmula V-1 puede ciclarse a un benzimidazol de la Fórmula VI-1 (Esquema VI) por la acción de un catalizador ácido mientras se calienta a aproximadamente 100 °C en un solvente adecuado. Un catalizador ácido preferido es el ácido (1 S)-(+)-10-canforsulfónico y un solvente preferido es dioxano. Otros catalizadores ácidos adecuados incluyen el ácido toluenosulfónico y el ácido acético. Otros solventes adecuados incluyen tolueno y ácido acético.
ESQUEMA VI VI-l El Esquema VII describe la metodología general que se puede usar para producirbenzimidazoles de la Fórmula (I) que contienen las porciones heterocíclicas correspondientes de oxazolina (en donde V es O y Q es CH2); y ¡midazolina(en donde V es NH y Q es CH2).
ESQUEMA VII III-l VII-2 En este enfoque, un compuesto de la Fórmula VII-2 puede ser un precursor común útil. Un compuesto de la Fórmula VII-2 se puede producir por la reacción de una diamina de la Fórmula I II— 1 con un compuesto triclorometil-sustituido adecuadamente reactivo de la Fórmula Vll-1 tal como metil 2,2,2-tricloroacetamidato, en presencia de un catalizador ácido tal como ácido acético y en un solvente adecuado tal como DCM o metanol; y, con mayor preferencia, en presencia de ácido acético como catalizador y solvente (Venable, J. d. y otros, J. Med. Chem. 2005, 48, 8289-98).
El Esquema VIII ilustra la reacción de varios dinucleófilos de la Fórmula VIII-1 con un compuesto de la Fórmula VII-2, en un solvente adecuado, y en presencia o ausencia de una base para proporcionar heterociclos de la Fórmula VIII-2. Las condiciones preferidas incluyen el uso de TEA o DIPEA como una base en DMF, DCM o, preferentemente, THF como un solvente.
ESQUEMA VIII VIII-2 El Esquema IX ilustra una ruta para la preparación de varios derivados de la Fórmula VIII-1 , específicamente aquellos de las Fórmulas VIII-1a, VII 1-1 b, y VII 1-1 c, que son útiles para la preparación de los compuestos de la Fórmula (I).
ESQUEMA IX IX-1 IX-2 VIII-la IX-4 IX-3 IX-6 IX-5 VIH-lb IX-7 VIII-lc Una diamina de la Fórmula VIIMa (en donde V es NH, y Q es CH2) se puede preparar por una reacción inicial tipo Strecker (ver, por ejemplo, la solicitud de patente núm. WO 2006/028545) al reaccionar una cetona adecuadamente sustituida de la Fórmula IX-1 con una amina y un derivado cianuro tal como cianotrimetilsilano, o cianuro sódico o potásico, en presencia de un ácido tal como ácido acético o ácido clorhídrico, para dar un aminonitrilo de la Fórmula IX-2. La reducción posterior del grupo ciano de un compuesto de la Fórmula IX-2 para dar un compuesto de la Fórmula VII a puede efectuarse por un número de métodos. Se pueden usar agentes reductores tal como hidruro de litio aluminio, alano, hidruro o borano de litio trimetoxialuminio en un solvente adecuado tal como THF o dietil éter. (Para una revisión y las condiciones preferidas, ver: Hudlicky, M. "Reductions in Organic Chemistry"; Ellis Horwood, Ltd.: Chichester, UK, 1984.) Un método de reducción alternativo es por hidrogenación sobre un catalizador de metal en un solvente alcohólico tal como metanol o etanol, a presiones de aproximadamente 0 a aproximadamente 689.5 kPal (0 a aproximadamente 100 psi) y, más particularmente, a una presión de aproximadamente 206.8 a 344.7 kPal (aproximadamente 30 a aproximadamente 50 psi). Los catalizadores útiles incluyen níquel Raney, rodio, paladio y platino. Un catalizador ácido tal como ácido acético, ácido perclórico, ácido sulfúrico o ácido clorhídrico puede usarse durante la reacción de hidrogenación. Cuando un catalizador ácido no está presente, se puede añadir amoniaco opcionalmente a la reacción para suprimir la formación de posibles productos secundarios.
La formación de cianohidrina puede emplearse para dar un compuesto de la Fórmula IX-3 por el tratamiento de una cetona de la Fórmula IX-1 con un derivado cianuro en presencia de un catalizador (para un estudio, ver: Gregory, R. J. Chem. Rev. 1999, 99, 3649). Las condiciones de la reacción pueden incluir el uso de cianotrimetílsilano (TMSCN), cianuro potásico y 18-corona-6 en DCM (ver: Greenlee, W. J.; Hangauer, D. G. Tetrahedron Lett. 1983, 24, 4559). La reducción posterior del nitrilo por medio del uso de los métodos descritos anteriormente para la formación de un compuesto de la Fórmula VIIMa después se puede emplear para proporcionar un amino alcohol de la Fórmula VIII-1 b (en donde V es O y Q es CH2).
La hidrólisis de un compuesto de la Fórmula IX-3 se puede usar para dar el hidroxi ácido correspondiente de la Fórmula IX-4 por tratamiento con un ácido fuerte tal como ácido sulfúrico concentrado o ácido clorhídrico concentrado en un solvente adecuado tal como agua, con o sin un co-solvente adicionado tal como dioxano, etanol o ácido acético. El acoplamiento de amoniaco en una forma adecuada tal como una sal de amonio, por ejemplo NH4CI, con un ácido de la Fórmula IX-4 por medio del uso de la formación del enlace amida convencional puede proporcionar un compuesto de la Fórmula IX-5 para un estudio, ver: M. Bodansky y A. Bodansky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, NY (1984)). Los métodos preferidos incluyen el uso de bromotripirrolidinofosfonio hexafluorofosfato (PyBroP), N,N-diciclohexilcarbodiimida (DCC) o, con mayor preferencia, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida hidrocloruro (EDCI) en presencia de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), con una base tal como DIPEA, TEA o, preferentemente, 4-metilmorfolina y en un solvente tal como DCM, THF, dioxano o, preferentemente, DMF. La reducción de amida de un compuesto de la Fórmula IX-5 por medio del uso de métodos de reducción tal como con borano, unido con THF o sulfuro de dimetilo, en un solvente adecuado tal como THF a temperatura de reflujo, proporciona una ruta alternativa para un compuesto de la Fórmula VIII-1 b.
La conversión de un compuesto de la Fórmula IX-6 al amino éster correspondiente de la Fórmula IX-7 (en donde R9 es alquilo de C-i-2) puede ser llevado a cabo por un número de procedimientos estándar usado para la formación de éster en aminoácidos y péptidos (para un estudio, ver: Bodansky; M.; Bodansky, A. "The Practice of Peptide Synthesis"; Springer-Verlag: NY, 1984) tal como por la acción de cloruro de tionilo en metanol o etanol a aproximadamente 0 °C, o por la acción de trimetilsilil-diazometano (cuando R9 es metil) en un solvente adecuado tal como metanol o etanol. La reducción posterior del éster por medio del uso de métodos estándar (ver: Hudlicky, M. "Reductions in Organic Chemistry"; Ellis Horwood, Ltd.: Chichester, UK, 1984) puede proporcionar un compuesto de la Fórmula VIII-1c (en donde V es O y Q es CH2). Cuando no se encuentra comercialmente disponible, un compuesto de la Fórmula IX-6 puede derivarse del aminonitrilo previamente descrito de la Fórmula IX-2 por hidrólisis del grupo ciano por medio del uso de ácido sulfúrico concentrado o, preferentemente, 6-12 M ácido clorhídrico a temperaturas de50-100 °C, con o sin un solvente añadido tal como dioxano.
El Esquema X describe una ruta alternativa para los compuestos de la Fórmula VI-1.
ESQUEMA X X-1 VI-1 El grupo amino de un compuesto de la Fórmula 1-4 se puede acilar por un derivado de cloruro ácido de un ácido carboxílico de la Fórmula IV-4. El cloruro ácido puede prepararse de un compuesto de la Fórmula IV-4 por medio del uso de un agente de cloración convencional como se describe en el Esquema V. Un equivalente de cloruro ácido se puede añadir a un compuesto de la Fórmula I-4, en presencia de una base, en un solvente adecuado, tal como hidruro sódico en THF, para dar un intermedio de bifenilo mono-acilado de la Fórmula X-1. Cuando más de 1 equivalente de cloruro ácido se usa, los compuestos ? ,/V-diacilados se pueden generar, además, durante el curso de la reacción y se pueden separar del compuesto mono-acilado X-1 a través de métodos cromatográficos convencionales. Un compuesto de la Fórmula X-1 puede ciclarse a un benzimidazol de la Fórmula VI-1 por la acción de un catalizador ácido y un agente reductor adecuado mientras se calienta a aproximadamente 100 °C en un solvente adecuado. Un agente reductor preferido es hierro en polvo, un solvente preferido es ácido acético, y un catalizador ácido preferido es ácido acético. Otros catalizadores ácidos adecuados incluyen el ácido (1S)-(+)-10-canforsulfónico y el ácido toluenosulfónico. Otros solventes adecuados incluyen tolueno.
El Esquema XI ¡lustra una síntesis alternativa de los compuestos de la Fórmula VI-1 que usa los productos intermedios de la Fórmula XI-3 (en donde V es CH(R4), y Q es O).
ESQUEMA XI rv-2 XI-2 XI-3 Los compuestos de la Fórmula XI-2 pueden prepararse por la reacción de dimetoxi-acetaldehído con hidroxilamina acuosa en un solvente adecuado, tal como DMF, y la clorooxima generada in-situ puede después añadirse a una solución de un alqueno de la Fórmula IV-2 y un limpiador ácido en un solvente adecuado tal como DIPEA en DCM por medio del uso de un procedimiento similar al de Liu, K., y otros; J. Org. Chem. 1980 45, 3916-3918. En donde los compuestos de la Fórmula XI-1 no se encuentran comercialmente disponibles, éstos se pueden producir de la cetona correspondiente por una reacción de olefinación de Wittig. (Por ejemplo, ver: March, J. "Advanced Organic Chemistry"; John Wiley and Sons, Inc.: NY, 1992 y Maryanoff; Reitz Chem. Rev. 1989, 89, 863-927.) El dimetilcetal resultante de los compuestos de la Fórmula XI-2 se pueden hidrolizar por un número de métodos comunes para producir el aldehido correspondiente, por ejemplo, por la adición de una resina de intercambio catiónico fuertemente acídica tal como la resina Amberlyst-15 o la resina Dowex 50 en acetona (ver, Coppola, G. M.; Synthesis 1984, 1021-1023), para dar los aldehidos de la Fórmula XI-3. La reacción de diaminas de la Fórmula 111-1 con aldehidos de la Fórmula XI-3 en presencia de Na2S205 en un solvente adecuado, tal como DMF, proporciona los compuestos de la Fórmula VI-1.
Una persona con experiencia en la materia reconocerá que los grupos protectores pueden ser necesarios en ciertas etapas de lasíntesis dependiendo de los sustituyentes y grupos funcionales presentes en los reactantes, y aquellos con experiencia en la materia reconocerán dónde se pueden emplear los grupos adecuados. (Para listas de grupos protectores adecuados, condiciones de protección y desprotección y una revisión de la química, ver: Greene, T. W.; G. M. Wuts, P. G. M. "Protective Groups in Organic Synthesis"; John Wiley y Sons, Inc.: NY, 1999.) Las reacciones aceleradas por microondas pueden desarrollarse además por medio del uso de unidades de microondas comerciales diseñados para este propósito, por ejemplo, el instrumento Personal Chemistry Smith Synthesizer.
El producto de cada etapa del proceso se puede separar de la mezcla de reacción y purificado antes del uso como material de partida en una etapa posterior. Las técnicas de separación típicamente incluyen evaporación, extracción, precipitación y filtración. Las técnicas de purificación típicamente incluyen cromatografía de columna (Still, W. c. y otros, J. Org. Chem. 1978, 43, 2921), cromatografía de capa fina, HPLC preparativa, cristalización, trituración, y destilación.
Los materiales de partida y producto de cada etapa del proceso se confirmaron por métodos espectroscópicos, espectrométricos y analíticos que incluyen resonancia magnética nuclear (NMR), espectrometría de masa (MS) y cromatografía en líquido (HPLC).
Para preparar los compuestos de la presente invención se usaron solventes comunes conocidos por aquellos con experiencia en la materia, tales como pero sin limitarse necesariamente a, éter etílico, THF, dioxano, metanol, etanol, isopropanol, DMF, benceno, tolueno, hexanos, ciclohexano, DCM, DME, y DCE. Los compuestos de la presente invención pueden aislarse como la sal de adición ácida y pueden contener uno o más equivalentes del ácido. La base libre se puede obtener además por técnicas conocidas por aquellos con experiencia en la materia.
EJEMPLOS ESPECÍFICOS Los reactivos se compraron a proveedores comerciales. Se realizaron microanálisis en Quantitative Technologies, Inc., Whitehouse, Nueva Jersey y se expresaron en porcentaje en peso de cada elemento por peso molecular total. El espectro de resonancia magnética nuclear (NMR) para los átomos de hidrógeno se midieron en el solvente indicado con (TMS) como estándar interno en un espectrómetro Bruker Avance o Varían (300 ó 400, ó 500 MHz). Los valores se expresan en partes por millón debajo de TMS. Los espectros de masa (MS) se determinaron en un espectrómetro Agilent como (ESI) m/z (M+H+) por medio del uso de una técnica de electrorociado. Las rotaciones ópticas se obtuvieron en un polarímetro Perkin-Elmer por medio del uso de la línea D de sodio como longitud de onda de la luz. A menos que se indique de otra manera los materiales usados en los ejemplos se obtuvieron de proveedores comerciales fácilmente disponibles, o se sintetizaron mediante los métodos estándares conocidos para el experto en análisis químico. Los grupos sustituyentes, que varían entre los ejemplos, son hidrógeno a menos que se indique de otra manera.
EJEMPLO 1 Hidrocloruro de 3-r7-trifluorometil-5-(2-trifluorometil-feni0-1H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Cornp. 27) A. Etíl 1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxilato A un frasco a presión de 300 mi equipado con una barra de agitación magnética se añadió metilenociciohexano (5.83 g, 60.6 mmol) y EtOH (150 ml). Se añadieron después etil éster del ácido nitro-acético (16.8 mi, 52 mmol) y DABCO (680 mg, 6.06 mmol). El EtOH adicional (30 mi) se añadió para enjuagar los lados del frasco, el cual se tapó herméticamente. La mezcla se calentó hasta 80 °C por 42 h y después se enfrió hasta la temperatura ambiente. El solvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se dividió en tres porciones iguales. Cada porción se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :4, v/v durante 30 min, y se produjo 8.12 g (64 %) del éster deseado. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 4.34 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.91 (s, 2H), 1.71 - 1.88 (m, 4H), 1.60 - 1.71 (m, 2H), 1.39 - 1.53 (m, 4H), 1.37 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
B. Ácido 1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxílico El etil 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxilato (8.12 g, 38.5 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 200 mi equipado con una barra de agitación magnética, y se añadieron MeOH (75 mi) y agua (25 mi). Hidróxido de litio monohidrato (1.77 g, 42.3 mmol) se añadió como un sólido. La reacción se agitó a TA por 20 h, y los solventes se eliminaron a presión reducida. El sólido resultante se trituró con éter y se recogió por filtración. El sólido se disolvió después en agua (200 mi) y se acidificó hasta pH 2 con 3 M HCI ac. El precipitado se aisló por filtración, se lavó bien con agua, se secó al aire, y se secó al vacío. El filtrado se extrajo tres veces con DCM (50 mi). Los extractos combinados se secaron sobre mgS04 anhidro y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El precipitado inicial y el material de la extracción se combinaron, para dar 5.81 g (83 %) del compuesto del título. H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 2.93 (s, 2H), 1.72 - 1.89 (m, 4H), 1.60 - 1.72 (m, 2H), 1.37 - 1.54 (m, 4H).
C. 4-Bromo-2-nitro-6-trifluorometil-fenilamina Se colocó 2-Nitro-6-trifluorometil-fenilamina (10.0 g, 48.5 mmol) en un matraz de fondo redondo de 200 mi equipado con una barra de agitación magnética. Se añadieron ácido acético glacial (100 mi) y bromo (3.24 mi, 63.1 mmol), y la mezcla se agitó a TA por 18 h. La mezcla se vertió en hielo (200 mi), y el exceso de bromo se apagó con 10 % Na2S203 ac. (25 mi). El precipitado se aisló por filtración y se lavó con agua. El sólido se secó al aire y después se secó al vacío para producir 13.8 g (100 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.49 (d, J = 2.3 Hz, 1 H), 7.83 (d, J = 1.8 Hz, 1H).
D. 5-Nitro-3,2'-bis-trifluorometil-bifenil-4-ilamina El 4-Bromo-2-nitro-6-trifluorometil-fenilamina (10.0 g, 35.2 mmol, preparado en la etapa anterior), ácido 2-trifluorometilfenilborónico (8.70 g, 45.8 mmol), y (dppf)PdCI2 DCM (1.44 g, 1.76 mmol) se colocaron en un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con una barra de agitación magnética y condensador de reflujo. El matraz se evacuó y se purgó nuevamente con Ar. El DME (150 mi) y 2 M Na2C03 ac. (50.0 mi, 100 mmol) se añadieron a través de una cánula. La mezcla se agitó a 90 °C durante 18 h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc (100 mi), y después se lavó con agua (100 mi) y salmuera (100 mi). Las capas orgánicas combinadas se extrajeron dos veces con EtOAc (50 mi). Los extractos combinados se secaron sobre mgSO4 y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó en una columna preempacada de Si02 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :4, v/v durante 30 min, y se produjo 11.3 g (92 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.35 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.61 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.75 (br. s., 2H).
E. 5,2'-Bistrifluorometil-bifenil-3.4-diamina El 5-N¡tro-3,2'-bis-trifluorornetil-b¡fenil-4-ilamina (1 1.3 g, 32.5 mmol se colocó preparado en la etapa anterior) en un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con una barra de agitación magnética. El EtOH anhidro (150 mi) y 3M HCI ac. (30 mi) se añadieron a través de una jeringa. El hierro en polvo (9.07 g, 162 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a 80 °C por 6 h. La reacción se enfrió hasta TA y se filtró a través de una almohadilla de Celita. La torta del filtro se lavó con MeOH (300 mi). El solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc (150 mi) y se lavó con agua (150 mi). La capa acuosa se diluyó con salmuera (100 mi) y se extrajo dos veces con EtOAc (50 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con aHC03 sat. ac, se secaron sobre mgS0 , se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El material se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
F. (4-Amino-5.2'-bis-trifluorometil-bifenil-3-il)-amída del ácido 1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxílico Se colocó ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (4.17 g, 22.8 mmol, preparado en la etapa B de este Ejemplo) en un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con una barra de agitación magnética, se añadió DCM (45 mi) y DMF (50 µ?) a través de una jeringa. A la solución agitada se añadió cloruro de oxalilo (2.60 mi, 29.6 mmol) en forma de gotas a través de una jeringa. Después de completar la adición, la reacción se agitó a TA por 2 h. El solvente se eliminó a presión reducida, el residuo resultante se disolvió en DCM (230 mi), y esta solución de cloruro ácido se colocó en un embudo de goteo.
Se colocó 5,2'-Bistrifluorometil-bifenil-3,4-diamina (10.4 g, 32.5 mmol, preparada en la etapa E de este Ejemplo) en un matraz de fondo redondo de 1000 ml equipado con una barra de agitación magnética, y se añadió DCM (300 mi) y TEA (9.53 mi, 68.4 mmol). La solución de cloruro ácido preparada anteriormente se añadió en forma de gotas durante un periodo de 4 h a la mezcla de reacción agitada. Después de completar la adición, la solución se agitó a TA por 1 h, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min, y se produjo 9.22 g (83 %) del compuesto del título. Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C23H2 F6N3O2: 486.2 (M+H); encontrado: 486.1.
G. 3-r7-Trifluorometil-5-(2-trifluorometil-fenin-1 H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El (4-Amino-5,2'-bis-trifluorometil-bifenil-3-il)-amida del ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (9.22 g, 19.0 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 250 mi equipado con una barra de agitación magnética. Se añadió dioxano seco (200 mi) y CSA (883 mg, 3.80 mmol). El matraz se equipó con un condensador de reflujo, y la mezcla se agitó a 100 °C por 7.5 h. La reacción se enfrió hasta TA, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc (100 mi) y se lavó dos veces con NaHC03 sat. ac. (50 mi). El extracto orgánico se secó sobre mgS04, se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en una cantidad mínima de MeOH (50 mi) y se colocó en un congelador por 1 h. El precipitado resultante se aisló por filtración y se lavó con MeOH. El precipitado se purificó por recristalización a partir de MeOH caliente (30 mi), para dar un sólido amarillo pálido, el cual se secó bajo alto vacío. El filtrado se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S¡O2 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min. El precipitado sólido y el material purificado en la columna se combinaron, y se produjo 8.12 g (91 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 Hz, CDCI3) d: 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.77 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.68 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.48 (s, 1 H), 3.33 (s, 2H), 1.63 - 1.82 (m, 6H), 1.35 - 1.58 (m, 4H).
H. Hidrocloruro de 3-|7-trifluorometil-5-(2-trifluorometil-feniP-1 H-benzimidazol-2-il1-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El 3-[7-Trifluorometil-5-(2-trifluorometil-fenil)-1/-/-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (524 mg, 1.12 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi, se añadió MeOH seco (2 mi), y la mezcla se calentó hasta que el sólido se disolvió. Esta mezcla se añadió a un vial de 40 mi que contenía éter (20 mi) y 1 M HCI en éter (1.12 mi, 1.12 mmol), lo que resultó en una solución homogénea. La solución se transfirió a un matraz de fondo redondo de 100 mi, el solvente se eliminó a presión reducida, y el sólido se secó al vacío, para dar 469 mg (83 %) de la sal de HCI deseada. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.73 - 7.81 (m, 1H), 7.71 (s, 1 H), 7.63 - 7.70 (m, 1 H), 7.55 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.48 (s, 1H), 3.33 (s, 2H), 1.62 - 1.83 (m, 6H), 1.33 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H19F6N3O: 468.1 (M+H); encontrado: 468.3. Análisis elemental: calcul. para C23H19F6N3O: C, 59.10; H, 4.10; F, 24.39; N, 8.99; encontrado: C, 59.06; H, 4.04; F, 24.30; N, 9.04 (% H20 0.39, Pd < 1 ppm).
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp Datos 1 3-[5-(2-tr¡fluoromet¡l-fen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 Hz, d4-MeOH) d: 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.65 (td, J = 7.6, 0.8 Hz, 1 H), 7.64 (br s, 1 H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.54 (br s, 1 H), 7.43 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 3.29 (s, 2H), 1.71 - 1.91 (m, 6H), 1.48 - 1.64 (m, 4H). Espectro de masa (LC S, ESI pos.): calcul. para C22H20F3N30: 400.2 ( +H); encontrado: 400.2. 7 Hidrocloruro de 3-[5-(2-trifluorometoxi-fenil)-1 H-benz¡midazol-2-il]-1-oxa-2-aza- esp¡ro[4.5]dec-2-eno 1H-N R (400 MHz, d6-DMSO) d:7.72 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 7.57 - 7.63 (m, 1 H), 7.47 - 7.56 (m, 3H), 7.42 (dd, J = 8.3, 1.3 Hz, 1 H), 3.31 (s, 2H), 1.62 - 1.80 (m, 6H), 1.34 - 1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H20F3N3O2: 416.2 (M+H); encontrado: 416.2. 14 Hidrocloruro de 3-[7-fluoro-5-(2-trifluoromet¡l-fenil)-1 H-benz¡m¡dazol-2-¡l]-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.74 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 (s, 1 H), 7.03 (d, J = 11.4 Hz, 1 H), 3.31 (s, 2H), 1.60 - 1.81 (m, 6H), 1.29 - 1.58 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19F4N3O: 418.2 (M+H); encontrado: 418.4. 15 Hidrocloruro de 4-metil-3-[5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.72 - 7.78 (m, 1 H), 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.59 - 7.68 (m, 1 H), 7.56 (s, 1 H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.51 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 1.33 - 1.90 (m, 10H), 1.27 (d, J = 7.3 Hz, 3H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H22F3N3O: 414.2 (M+H); encontrado: 414.4. 23 Sal del ácido 3-[5-(2-fluoro-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno trifluoroacético 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.76 (s, 1 H), 7.71 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.59 (td, J = 8.0, 1.5 Hz, 1 H), 7.47 - 7.51 (m, 1H), 7.38 - 7.47 (m, 1 H), 7.27 - 7.38 (m, 2H), 3.30 (s, 2H), 1.63 - 1.80 (m, 6H), 1.34 - 1.56 (m, 4H). 28 Hidrocloruro de 4-metil-3-[7-trifluormetil-5-(2-trifluorometil-fen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 - oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.73 - 7.81 (m, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 7.63 - 7.70 (m, 1 H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.48 (s, 1 H), 3.50 (q, J = 7.2 Hz, 1 H), 1.76 - 1.87 (m, 1 H), 1.48 - 1.76 (m, 8H), 1.32 - 1.44 (m, 1 H), 1.30 (d, J = 7.3 Hz, 3H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H19F6 3O: 482.2 (M+H); encontrado: 482.3. 51 Hidrocloruro de 3-[5-(2-trifluorometoxifenil)-7-trifluorometil-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa- 2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (s, 1H), 7.66 - 7.73 (m, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.50 - 7.62 (m, 3H), 3.33 (s, 2H), 1.62 - 1.83 (m, 6H), 1.34 - 1.61 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H19F6N3O2: 484.1 (M+H); encontrado: 484.2. 53 Hidrocloruro de 3-[5-(2-fluorofenil)-7-trifluorometil-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.92 (s, 1 H), 7.71 (s, 1H), 7.62 - 7.70 (m, 1 H), 7.44 - 7.52 (m, 1 H), 7.32 - 7.41 (m, 2H), 3.33 (s, 2H), 1.61 - 1.83 (m, 6H), 1.35 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19F4N3O: 418.2 (M+H); encontrado: 418.2. 54 Hidrocloruro de 3-[4,7-dimetil-5-(2-trifluorometilfenil)-1 /- -benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.73 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.64 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.92 (s, 1 H), 3.37 (s, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.62 - 1.85 (m, 6H), 1.31 - 1.55 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C24H24F3N3O: 428.2 (M+H); encontrado: 428.3.
EJEMPLO 2 3-r5-(2-Trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-in-1.8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 9) A. Etil 1 ,8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxilato Se usó el método de Schlosser, M. y otros, (Tetrahedron 1990, 46, 2411-2424). Se colocó la mezcla bromuro de metiltrifenilfosfonio/amida sódica "iluro instantáneo" (Aldrich) (1.2 eq., 2.5 g, 6.0 mmol) en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética, y el frasco se evacuó y se purgó nuevamente con Ar. Se añadió éter seco (10 mi) a través de una jeringa, y la reacción se agitó a TA por 2 h. Tetrahidropiran-4-ona (0.46 mi, 5.0 mmol) se añadió en forma de gotas a través de una jeringa, y la reacción se agitó a TA por 16 h. La reacción se apagó con agua, y la capa acuosa se extrajo dos veces con éter (5 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre mgS04 anhidro, y se filtraron.
La solución de éter se transfirió a un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con una barra de agitación magnética, y DIPEA (1.1 eq., 0.96 mi, 5.5 mmol) se añadió a través de una jeringa. Acetato de etil 2-cloro-2-(hidroxiimino) (1 eq., 758 mg, 5.00 mmol) se disolvió en DCM (50 mi) y se colocó en un embudo de goteo. La solución de DCM se añadió en forma de gotas a la mezcla de reacción de éter vigorosamente agitada durante un periodo de 2 h. La solución resultante se agitó a TA por 3 días. El solvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 24 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 2:3, v/v durante 30 min, y se produjo 264 mg (25 %) del éster deseado. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 4.35 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89 (ddd, J = 1 1.7, 8.6, 3.4 Hz, 2H), 3.63 - 3.76 (m, 2H), 2.99 (s, 2H), 1.87 - 1.98 (m, 2H), 1.74 - 1.87 (m, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
B. 3-r5-(2-trifluorometil-fenin-1 H-benzimidazol-2-ill-1.8-d¡oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó de acuerdo con las etapas D a h del Ejemplo 1. H-NMR (400 MHz, d6-DMSO + di-TFA) d: 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.71 - 7.78 (m, 1 H), 7.68 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.60 - 7.67 (m, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.48 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.26 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 3.75 - 3.87 (m, 2H), 3.54 - 3.68 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 1.79 - 1.94 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H115F5N3O: 402.1 (M+H); encontrado: 402.2.
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 2 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp Datos 10 8,8,-D¡fIuoro-3-[5-(2-tr¡fluorometil-fen¡l)-1 H-benzim¡dazol-2-¡l]-1-oxa-2-aza-espiro [4.5]dec-2-eno H-NMR (400 MHz, d6-D SO + di-TFA) d: 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.71 - 7.78 (m, 1H), 7.69 (d, J = 8.3 Hz, H), 7.59 - 7.67 (m, 1 H), 7.56 (s, 1 H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.27 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 3.45 (s, 2H), 1.85 - 2.23 (m, 8H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H 8F5N3O: 436.1 (M+H); encontrado: 436.2.
EJEMPLO 3 Hidrocloruro de 3-í4-metil-5-(2-trifluorometil-fenih-1H-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 24) A. 1-Bromo-2-metil-3.4-dinitro-benceno El compuesto del título se preparó mediante una adaptación del procedimiento descrito por Mundla, S. R. (Tetrahedron Lett. 2000, 41, 4277- 4279). Se colocó 2-Bromo-6-nitrotolueno (1.09 g, 5.05 mmol) en un matraz de fondo redondo de 50 mi equipado con una barra de agitación magnética. Conc. Se añadió H2S04 (10 mi), y el sólido se dejó disolver. La reacción se enfrió en un baño de hielo, y ácido nítrico humeante (1.5 eq., 0.340 mi, 7.57 mmol) se añadió en forma de gotas a través de una jeringa a un índice tal que la temperatura de la mezcla se mantuvo por debajo de 10 °C. Después de completar la adición, la reacción se dejó calentar hasta TA y agitar por 2 h. La mezcla de reacción se vertió en hielo triturado, y el precipitado se aisló por filtración. El sólido se lavó con agua (30 mi) y y se dejó secar al aire. El producto crudo se purificó por medio de cromatografía en columna con una columna preempaquetada con 40 g de Si02 y se usó EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :4, v/v como eluyente durante 30 min después de los cuales se obtuvieron 879 mg (67 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 2.45 (s, 3H).
B. Hidrocloruro de 4-metil-3-r5-(2-trifluorometil-fenin-1H-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó de acuerdo con las etapas D a h del Ejemplo 1. H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.87 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.75 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.66 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.52 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.38 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 3.38 (s, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.64 -1.83 (m, 6H), 1.34 - 1.56 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H22F3N3O: 414.2 (M+H); encontrado: 414.3.
EJEMPLO 4 Hidrocloruro de 3-r5-(2-fluoro-6-trifluorometoxi-fenil)-1H-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 8) 2-Fluoro-1-yodo-6-trifluorometoxibenceno (612 mg, 2.00 mmol, preparado como se describe en la patente núm. WO2005/097136), ácido pinacol éster 4-amino-3-nitrofenilborónico (1.3 eq., 687 mg, 2.60 mmol), y (dppf)PdCl2 DCM (0.05 eq., 81.6 mg, 0.100 mmol) se colocaron en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética. El vial se vació y se limpió a contracorriente con Ar y se añadió DME (10 mi) y Na2C03 2M acuoso (4 mi) con una jeringa. El vial se tapó herméticamente y se colocó en un bloque de calentamiento donde la reacción se agitó a 90 °C por 24 h. La reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc, y se lavó secuencialmente con agua y salmuera. El extracto orgánico se secó sobre mgSÜ4 anhidro y se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 2:3, v/v durante 30 min, y se produjo 548 mg (87 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.21 (s, 1 H), 7.30 - 7.47 (m, 2H), 7.18 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.14 (t, J = 8.6 Hz, 1 H), 6.91 (d, J = 6.6 Hz, 1 H), 5.37 (br. s., 2H).
B. Hidrocloruro de 3-r5-(2-fluoro-6-trifluorometoxifenil)-1 H-benzimidazol-2-¡l1-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó de acuerdo con el Ejemplo 1 , etapas E a H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.55 - 7.62 (m, 1H), 7.45 (t, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.40 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.30 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 3.31 (s, 2H), 1.63 - 1.80 (m, 6H), 1.33 - 1.57 (m, 4H).
Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19F4N3O2: 434.1 (M+H); encontrado: 434.2.
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 4 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp. Datos 12 Hidrocloruro de 3-[5-(2,2-difluoro-benzo[1 ,3]dioxol-4-il)-1 H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2- aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.95 (d, J = 1.0 Hz, 1 H), 7.76 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.67 (dd, J = 8.5, 1.6 Hz, 1 H), 7.55 (dd, J = 8.0, 1.1 Hz, 1 H), 7.41 (dd, J = 8.1 , 1.3 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 1.63 - 1.82 (m, 6H), 1.37 - 1.55 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19F2N3O3: 412.1 (M+H); encontrado: 412.4. 13 Hidrocloruro de 3-[5-(2-difluorometoxi-fenil)-1 H-benz¡m¡dazol-2-il]-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.72 (d, J = 1.0 Hz, 1 H), 7.71 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.48 - 7.55 (m, 1 H), 7.47 (dd, J = 5.6, 1.8 Hz, 1 H), 7.45 (dd, J = 6.1 , 1.5 Hz, 1 H), 7.37 - 7.41 (m, 1 H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.16 (t, J = 74 Hz, 1 H), 3.32 (s, 2H), 1.63 - 1.83 (m, 6H), 1.37 - 1.56 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H21F2N3O2: 398.2 (M+H); encontrado: 398.4. 26 Sal del ácido 3-[5-(2,6-difluoro-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno trifluoroacético 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.43 - 7.54 (m, 1H), 7.33 (dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1 H), 7.19 - 7.29 (m, 2H), 3.30 (s, 2H), 1.63 - 1.79 (m, 6H), 1.35 - 1.55 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C21H19F2N3O: 368.2 (M+H); encontrado: 368.2.
EJEMPLO 5 3-(5-r2-(2,2,2-Tr¡fluoroet¡n-fen¡ll-1H-benzimidazol-2-il)-1-oxa- 2-aza-espirof4.51dec-2-eno (Comp. 11) A. 1 -(2-Bromo-fenin-2,2,2-trifluoro-etanol El compuesto del título se preparó mediante una adaptación del método descrito en Xue, Y. y otros, (Bioorg. Med. Chem. 2007, 15, 2156- 2166). El hidrato de fluoruro de tetrabutilamonio (0.05 eq., 131 mg, 0.050 mmol) se colocó en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética, y el vial se evacuó y se purgó nuevamente con Ar. El THF seco (25 mi) se añadió a través de una jeringa, y 2-bromobenzaldehído (1.16 mi, 10.0 mmol) y trimetilsililtrifluorometano (1.3 eq., 1.90 mi, 13.0 mmol) se añadieron secuencialmente a través de una jeringa. La reacción se agitó a TA por 16 h, y se añadió CF3TMS adicional (1 mi). Después de agitar por 2 h, la reacción se vertió en 3 M HCI ac. (30 mi) y se agitó a TA por 2 h. La mezcla de reacción se extrajo tres veces con DCM (30 mi), y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgSC anhidro, se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida, y se produjo 1.83 g (72 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.60 (dd, J = 8.1 , 1.3 Hz, 1 H), 7.40 (td, J = 7.6, 1.1 Hz, 1 H), 7.27 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1 H), 5.56 -5.68 (m, 1 H), 2.77 (d, J = 4.8 Hz, 1H).
B. Ácido tiocarbóico 0-r -(2-bromo-fenil)-2,2.2-trifluoro-etill éster O-fenil éster El compuesto del título se preparó mediante una adaptación del método descrito en Robins, M. J. y otros, (J. Am. Chem. Soc. 1983, 05, 4059-4065). El 1-(2-Bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (615 mg, 2.41 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética. El DCM (4 mi) y TEA (1.2 eq., 0.403 mi, 2.89 mmol) se añadieron a través de una jeringa. Clorotionoformiato de fenilo (1.1 eq., 0.367 mi, 2.65 mmol) se añadió en forma de gotas a través de una jeringa a la solución enfriada con agua. Después de completar la adición, la reacción se agitó a TA por 16 h, se vertió en agua, y se extrajo tres veces con DCM (10 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgS0 anhidro se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por medio de cromatografía en columna con una columna preempacada de S1O2 de 12 g y se usó EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :4, v/v como eluyente durante 30 min después de los cuales se obtuvieron 695 mg (74 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.58 - 7.68 (m, 2H), 7.36 - 7.48 (m, 3H), 7.27 - 7.36 (m, 2H), 7.04 - 7.15 (m, 3H).
C. 1 -Bromo-2-(2.2.2-trifluoro-etin-benceno Se usó el método de Fu, G. C. y otros, (J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 6949-6950). El ácido tiocarbónico 0-[1-(2-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etil] éster O-fenil éster (353 mg, 0.902 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética. Polimetilhidrosiloxano (PMHS) (5 eq., 300 mg, 4.51 mmol) se añadió a través de una pipeta, y tolueno (0.9 mi) y n-butanol (5.5 eq., 0.454 mi, 4.96 mmol) se añadieron a través de una jeringa. (B^Sn^O (0.038 eq., 17 µ?, 0.034 mmol) se añadió a través de una microjeringa, y AIBN (0.15 eq., 22.2 mg, 0.135 mmol) se añadió como un sólido. La reacción se tapó herméticamente, se colocó en un bloque de calentamiento, y se agitó a 80 °C por 14 h.
Se añadió (Bu3Sn)20 (17 µ?) y AIBN (22 mg) adicional y la reacción se agitó por 14 h adicionales a 80 °C. La reacción se enfrió hasta TA, se diluyó con THF (4 mi), y se apagó con 2M NaOH ac. (1 mi). La reacción se agitó a TA por 12 h y se extrajo tres veces con éter (10 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con 1M HCI y salmuera, se secaron sobre mgS04 anhidro, se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 12 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:17, v/v durante 30 min, y se produjo 70 mg (34 %) del compuesto del título. H-NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 7.61 (dd, J = 8.0, 1.1 Hz, 1 H), 7.35 - 7.40 (m, 1 H), 7.31 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1 H), 7.19 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1 H), 3.63 (q, J = 10.6 Hz, 2H).
D. 3-(5-r2-(2.2.2-Trifluoroetin-fenin-1 H-benzimidazol-2-»l>-1 -oxa-2-aza-esp¡ror4.51dec-2-eno Los procedimientos descritos en el Ejemplo 4, etapas A y B se usaron para preparar el compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.64 - 7.82 (m, 1 H), 7.52 - 7.64 (m, 1 H), 7.45 - 7.52 (m, 1 H), 7.36 - 7.43 (m, 2H), 7.28 - 7.36 (m, 1H), 7.13 - 7.27 (m, 1 H), 3.48 (q, J = 11.1 Hz, 1 H), 3.29 (s, 2H), 1.69 - 1.91 (m, 6H), 1.46 - 1.63 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H22F3N3O: 414.2 (M+H); encontrado: 414.3.
EJEMPLO 6 Hidrocloruro de 3-r7-cloro-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzim¡dazol-2-in-1-oxa-2-aza-espirof4.51dec-2-eno (Comp. 16) A. 3-Nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina 4- Bromo-2-nitroanilina (10.1 g, 46.7 mmol), ácido 2-trifluorometilfenilborónico (1.3 eq., 11.5 g, 60.7 mmol), y (dppf)PdCI2 DCM (0.05 eq., 1.91 g, 2.34 mmol) se colocaron en un matraz de fondo redondo de 500 mi equipado con una barra de agitación magnética. El vial se vació y se limpió a contracorriente con Ar y se añadió DME (180 mi) y Na2C03 2M acuoso (60 mi) COA? una jeringa. El matraz se tapó herméticamente, y la reacción se agitó a 90 °C por 16 h. La reacción se enfrió hasta TA, se diluyó con EtOAc, y se lavó secuencialmente con agua y salmuera. El extracto orgánico se secó sobre mgS04 anhidro y se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se cargó seco en 25 g de S1O2 y se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S¡C<2 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v durante 20 min, y se produjo 12.8 g (97 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.1 1 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.75 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.54 - 7.62 (m, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.44 - 7.53 (m, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.36 (dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1 H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H).
B. 3-cloro-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-¡lamina Se usó el procedimiento de Nickson, T. E. y otros, (Synthesis 1985, 669-670). El 3-Nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (12.7 g, 45.0 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 250 mi equipado con una barra de agitación magnética y un condensador de reflujo, y se añadió acetonitrilo seco (150 mi). El sólido se dejó disolver, y NCS (1.5 eq., 9.02 g, 67.5 mmol) se añadió como un sólido. La reacción se calentó a 80 °C por 3 días. La reacción se enfrió hasta TA, se diluyó con EtOAc, después se lavó dos veces con agua (20 mi) y una vez con salmuera (30 mi). Los extractos combinados se secaron sobre mgS04 y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El material crudo se cromatografió en una columna preempacada de Si02 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min, y se produjo 6.96 g (49 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.10 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.57 - 7.62 (m, 1 H), 7.56 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 7.44 - 7.54 (m, 1 H), 7.32 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 6.64 (br. s., 2H).
C 3-r7-cloro-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2- ¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El Ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (4.02 g, 21.9 mmol, como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) se colocó en un matraz de fondo redondo equipado con una barra de agitación magnética. Se añadieron DCM (40 mi) y DMF (50 µ?). El Cloruro de oxalilo (2.5 mi, 28.5 mmol) se añadió en forma de gotas a través de una jeringa, y la mezcla se agitó a TA por 1 h. El solvente se eliminó a presión reducida. El 3-Cloro-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (6.96 g. 21.9 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo equipado con una barra de agitación magnética. El matraz se evacuó y se purgó nuevamente con argón y se añadió THF seco (50 mi). La mezcla se enfrió hasta 0 °C en un baño de hielo, después se añadió NaH (2.64 g, 65.8 mmol, 60 % dispersión en aceite) en pequeñas porciones. El cloruro ácido preparado anteriormente se tomó en THF seco (20 mi) y se añadió en forma de gotas a la solución de 3-cloro-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina a 0 °C durante 10 min. Después que se completó la adición, la mezcla se dejó agitar unos 30 min adicional a 0 °C después se calentó hasta TA y se agitó a esa temperatura por 6 h. La mezcla se apagó con agua, se diluyó con salmuera, y se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos combinados se secaron sobre mgS0 y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en AcOH y se colocó en un matraz de fondo redondo equipado con una barra de agitación magnética. Se añadió Fe en polvo (6.14 g, 110 mmol). El matraz se tapó herméticamente, y la mezcla se calentó hasta 80 °C por 1 h. La mezcla se enfrió hasta TA y se vertió en hielo. El precipitado resultante se filtró y se lavó con agua. El filtrado se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se secaron sobre mgS04 y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El material crudo se cromatografió en una columna preempacada de S1O2 de 80 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min. El material resultante se recristalizó a partir de eOH y se aisló por filtración, y se produjo 5.12 g (54 %) del compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d: 13.52 (br. s., 1 H), 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.75 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.35 (s, 1 H), 7.25 (s, 1H), 1.63 - 1.82 (m, 6H), 1.34 - 1.60 (m, 4H).
D. Hidrocloruro de 3-r7-cloro-5-(2-trifluorometilfeniO-1H-benzimidazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno 3-[7-cloro-5-(2-tr¡fluoromet¡lfen¡l)-1 /-/-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (2.39 g, 5.52 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 100 mi. Se añadió EtOAc (10 mi), y el sólido se dejó disolver. HCI (5.52 mi, 5.52 mmol, 1 M en éter) se añadió en forma de gotas a través de una jeringa con movimiento giratorio rápido para garantizar un mezclado suficiente. La mezcla se sónico por 2 min, lo que resultó en un precipitado blanco, el cual se aisló por filtración y se lavó dos veces con EtOAc (10 mi) después una vez con éter (20 mi). El sólido se secó bajo alto vacío, y se produjo el compuesto del título (2.43 g, 94 %). 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 3.33 (s, 2H), 1.63 - 1.81 (m, 6H), 1.32 - 1.58 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19CIF3N3O: 434.1 (M+H); encontrado: 434.4.
EJEMPLO 7 Hidrocloruro de 3-r7-bromo-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-esp¡ror4.51dec-2-eno (Comp. 17) Se usó el método de Siegel, J. S. y otros, (Org. Lett., 2006, 8, 4989-4992). 3-N¡tro-2'-tr¡fluoromet¡l-b¡fen¡l-4-¡lam¡na (302 mg, 1.07 mmol, como se preparó en el Ejemplo 6, etapa A) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética, y ácido acético glacial (2 mi) se añadió a través de una pipeta. El sólido se dejó disolver, y se añadió bromo (1.07 eq., 59.0 µ?, 1.14 mmol) en forma de gotas a través deuna microjeringa. La reacción se tapó herméticamente y se agitó a TA por 30 min, durante este tiempo se formó un precipitado. La reacción se vertió en hielo triturado, y el precipitado se aisló por filtración. El precipitado se lavó con agua (50 mi), se disolvió en DCM (40 mi), se secó sobre mgS04 anhidro, se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El material crudo se cromatografió en una columna preempacada de Si02 de 24 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :4, v/v durante 20 min, y se produjo 341 mg (88 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.72 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.51 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.70 (br. s., 2H).
B. Hidrocloruro de 3-r7-bromo-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó de acuerdo con el Ejemplo 1 , etapas E a H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (d, J = 7.1 Hz, 1 H), 7.75 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.41 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 3.33 (s, 2H), 1.62 - 1.81 (m, 6H), 1.32 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22Hi9BrF3N30: 478.1 (M+H); encontrado: 478.3.
EJEMPLO 8 Hidrocloruro de 3-r5-(2-difluorometoxifenil)-7-metil-1rV-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 20) A. Pinacol éster del ácido 4-amino-5-metil-3-nitrofenilborónico El compuesto del título se preparó mediante una adaptación del método descrito por Lee, Y.-K. y otros,. {J. Med, Chem. 2008, 51, 282-297). 4-Bromo-6-metil-2-nitroanilina (1.16 g, 5.02 mmol), £>/s-(pinacolato)-diboro (3.0 eq., 3.81 g, 15.0 mmol), (dppf)PdCI2 DCM (0.1 eq., 420 mg, 0.514 mmol), y acetato potásico (4.0 eq., 1.96 g, 20.0 mmol) se colocaron en un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con una barra de agitación magnética. El matraz se equipó con un condensador de reflujo, y el aparato se evacuó y se purgó nuevamente con Ar. El dioxano seco (50 mi) se añadió a través de una jeringa, y la reacción se calentó hasta reflujo por 18 h. La reacción se enfrió hasta TA, se diluyó con EtOAc (50 mi), y se filtró. El filtrado se concentró a presión reducida y se purificó por cromatografía de columna en una columna preempacada de Si02 de 40 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min, y se produjo 1.09 g (78 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.48 (s, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 6.33 (br. s., 2H), 2.23 (s, 3H), 1.34 (s, 12H).
B. Hidrocloruro de 3-r5-(2-difluorometoxifenil)-7-metil-1AV-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiroí4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó de acuerdo con el Ejemplo 4 etapas A y B. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.55 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 7.6, 1.8 Hz, 1 H), 7.43 - 7.49 (m, 1H), 7.37 (dd, J = 7.6, 1.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.29 (s, 1 H), 7.16 (t, J = 74 Hz, 1H), 3.37 (s, 2H), 2.63 (s, 3H), 1.65 - 1.83 (m, 6H), 1.34 - 1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H23F2N3O2: 412.2 (M+H); encontrado: 412.3.
EJEMPLO 9 Hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-esp¡ror4.51dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3H-benzim¡dazol-4-carbonitrilo (Comp. 21) A. 3-vodo-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina Se usó el método de Koradin, C. y otros, (Tetrahedron 2003, 59, 1571-1587). 3-N¡tro-2'-tr¡fluoromet¡l-b¡fenil-4-ilamina (752 mg, 2.66 mmol, como se preparó en el Ejemplo 6, etapa A) se colocó en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética, y se añadió EtOH anhidro (27 mi). Se añadió yodo (1.4 eq., 945 mg, 3.72 mmol) como un sólido a la solución agitada. Se añadió sulfato de plata (1.4 eq., 1.16 g, 3.72 mmol) en una porción como un sólido, y la reacción se agitó a TA por 24 h. La reacción se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en DCM (30 mi), se lavó con 10 % Na2S203 ac. (10 mi), se secó sobre mgS04 anhidro, se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 40 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :4, v/v, y se produjo 902 mg (83 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.17 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.94 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.76 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.58 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.74 (br. s., 2H).
B. 3-ciano-5-nitro-2'-trifluorometil-b¡fenil-4-ilamina El compuesto del título se preparó mediante una adaptación del método descrito por Youngblood, W. J. (J. Org. Chem. 2006, 71, 3345-3356).
El a-yodo-S-nitro- '-trifluorometil-bifenil^-ilamina (230 mg, 0.564 mmol, preparado en la etapa anterior) y Cu(l)CN (1.5 eq., 7.57 mg, 0.845 mmol) se colocaron en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética. El DMA seco (2.5 mi) se añadió a través de una jeringa, y el vial se tapó herméticamente y se colocó en un bloque de calentamiento. La reacción se agitó a 140 °C por 14 h, se enfrió hasta TA, y se vertió en agua. El precipitado se aisló por filtración y se lavó con agua (10 mi). El precipitado se disolvió en EtOAc (25 mi), se secó sobre mgS04 anhidro, se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por TLC preparativa en una placa de Si02 de 2000 pm desarrollada con EtOAc/hexanos, 1 :9 v/v, y se produjeron 86 mg (50 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 IVIHz, CDCI3) d: 8.37 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.71 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 7.62 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.55 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.31 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.84 (br. s., 2H).
C. Hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-¡n-6- 2-trifluorometil-fenil)-3H-benzimidazol-4-carbon¡trilo El compuesto del título se preparó de acuerdo con el Ejemplo 1 , etapas E a H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.74 - 7.81 (m, 1 H), 7.71 (s, 2H), 7.64 - 7.70 (m, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 3.35 (s, 2H), 1.63 - 1.82 (m, 6H), 1.31 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H19F3N4O: 425.2 (M+H); encontrado: 425.2.
EJEMPL0 10 Hidrocloruro de 3-r2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-6- f 2-trifluorometilfenil)-3H-benzimidazol-4-in-propan-1 -ol (Comp. 22) A. 3-(4-Amino-5-n¡tro-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-prop-2- El 3-Yodo-5-n¡tro-2'-thfluorometil-b¡fen¡l-4-¡lam¡na (466 mg, 1.14 mmol, como se preparó en el Ejemplo 9, etapa A), (Ph3P)2PdCI2 (0.05 eq., 40.1 mg, 0.057 mmol), y Cul (0.05 eq., 10.2 mg, 0.054 mmol) se colocaron en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética. El vial se evacuó y se purgó nuevamente con Ar, y THF anhidro (6 mi) y TEA (4.0 eq., 0.64 mi, 4.56 mmol) se añadieron a través de una jeringa. El alcohol de propargilo (4 eq., 0.270 mi, 4.56 mmol) se añadió a través de una jeringa, y la reacción se agitó a TA por 16 h. La solución se diluyó con EtOAc (20 mi) y se filtró. El solvente se eliminó a presión reducida, y el producto crudo se purificó por cromatografía de columna en una columna preempacada de S1O2 de 24 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:2, v/v durante 20 min, y se produjo 279 mg (73 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.10 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.73 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.53 - 7.59 (m, 1 H), 7.53 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 7.43 - 7.51 (m, 1 H), 7.29 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.82 (br. s., 2H), 4.59 (s, 2H).
B. 3-(4,5-Diamino-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-propan-1-ol El 3-(4-Amino-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-prop-2-in-1-ol (148 mg, 0.440 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética, y EtOH seco (2 mi) se añadió a través de una jeringa. A la solución de etanol se añadió 10 % Pd sobre carbón activado (27 mg), y el vial se tapó con un septo de goma. Se burbujeó gas hidrógeno a través de la solución agitada por 3 min, y la reacción se agitó bajo una atmósfera de H2 a 1 atm por 16 h. El vial se ventiló, la reacción se filtró, y el filtro se lavó tres veces con MeOH (5 mi). El solvente se eliminó a presión reducida para dar 101 mg (73 %) del compuesto deseado. H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.68 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.48 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.38 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.30 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.61 (s, 1 H), 6.60 (s, 1 H), 3.65 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.48 (br. s., 4H), 2.66 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1 .86 (quin, J = 6.6 Hz, 2H).
C. 5-r3-(terc-Butil-dimetil-silanoxi)-propin-2'-trifluorometil-bifenil-3.4-diamina El 3-(4,5-Diamino-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-propan-1 -ol (101 mg, 0.324 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética, y DCM (2 mi) se añadió a través de una pipeta. Imidazol (1.1 eq., 24.5 mg, 0.356 mmol) y TBSCI (1.1 eq., 53.7 mg, 0.356 mmol) se añadieron secuencialmente como sólidos, y la reacción se agitó a TA por 2 h. La reacción se filtró, el precipitado se lavó una vez con DCM (5 mi), y el filtrado se concentró a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna en una columna preempacada de Si02 de 24 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :1 , v/v durante 30 min, y se produjo 93.2 mg (68 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.49 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.38 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.61 (s, 1 H), 6.59 (s, 1 H), 3.66 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.52 (br. s., 4H), 2.65 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.75 - 1.87 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).
D. Hidrocloruro de 3-r2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometilfenil)-3H-benzimidazol-4-in-propan-1-ol El compuesto del título se preparó de acuerdo con el Ejemplo 1 , etapas F a H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.85 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.73 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.63 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.48 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.37 (s, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 3.45 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 3.01 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.79 - 1.90 (m, 2H), 1.61 - 1.79 (m, 6H), 1.31 - 1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C25H26F3N3O2: 458.2 (M+H); encontrado: 458.3.
EJEMPLO 11 3-r2-(1-Oxa-2-aza-espiror4.5ldec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometilfenil)-3H-benzimidazol-4-¡n-prop-2-en-1 -ol (Comp. 25) A. 3-(4,5-Diamino-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-prop-2-en-1- 3-(4-Amino-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-prop-2-in-1-ol (131 mg, 0.390 mmol, como se preparó en el Ejemplo 10, etapa A) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética, y EtOH (4 mi) se añadió a través de una jeringa seguido por agua (1 mi). Cloruro de amonio (10 eq., 209 mg, 3.90 mmol) y Fe en polvo (5 eq., 109 mg, 1.95 mmol) se añadieron como sólidos. El vial se tapó herméticamente, se colocó en un bloque caliente, y se agitó a 80 °C por 16 h. La reacción se enfrió hasta TA, se filtró, y los sólidos se lavaron tres veces con MeOH (5 mi). El filtrado se concentró a presión reducida, el residuo se disolvió en EtOAc (20 mi) y se lavó con agua (20 mi), y La capa acuosa se extrajo tres veces con EtOAc (10 mi). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 mi), se secaron sobre mgS0 anhidro, se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida, y se produjeron 95 mg del compuesto del título como una mezcla 1 :1 con 3-(4,5-diamino-2'-trifluorometilbifenil-3-il)-prop-2-in-1-ol. La mezcla se llevó a la próxima etapa.
B. 5-r3-(terc-Butildimetilsilanoxi)-propenin-2'- trifluorometilbifenil-3.4-diamina El procedimiento descrito en el Ejemplo 10, etapa C se usó con la mezcla cruda de 3-(4,5-diamino-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-prop-2-en-1-ol y 3-(4,5-diamino-2'-trifluorometilbifenil-3-il)-prop-2-in-1-ol. El producto crudo se purificó por TLC preparativa en una placa de S1O2 de 2000 pm desarrollada con EtOAc/hexanos, 1 :4 v/v, y se produjeron 55.6 mg (43 % durante dos etapas) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.72 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.41 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.65 (s, 1H), 6.52 (s, 1 H), 6.45 (d, J = 11.4 Hz, 1 H), 5.95 (dt, J = 11.6, 6.1 Hz, 1 H), 4.31 (dd, J = 6.3, 1.0 Hz, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.02 (s, 6H). c. 3-r2-(1-Oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-in-6-(2-trifluorometilfenil)-3H-benzimidazol-4-¡n-prop-2-en-1 -ol El compuesto del título se preparó de acuerdo con el Ejemplo 1 , etapas F y G. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.66 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.44 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.58 - 7.35 (br. m, 1 H), 6.77 - 7.16 (m, 2H), 6.08 (dt, J = 11.7, 6.7 Hz, 1 H), 4.32 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.67 - 1.91 (m, 6H), 1.43 - 1.65 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C25H24F3N3O2: 456.2 (M+H); encontrado: 456.1.
EJEMPLO 12 3-r5-(2-Fluoro-6-trifluorometil-fenil)-1H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 6) A. 2'-Fluoro-3-nitro-6'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina Por medio del uso del procedimiento para la etapa A en el Ejemplo 4, el compuesto del título se preparó a partir de 1 -bromo-2-fluoro-6-trifluorometilbenceno (0.850 mi, 6.09 mmol) y pinacol éster del ácido 4-amino-3-nitrofenilborónico (1.3 eq., 2.09 g, 7.92 mmol) en 89 % de rendimiento (1.62 g). 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.10 (s, 1 H), 7.53 - 7.61 (m, 1 H), 7.43 -7.53 (m, 1 H), 7.35 (t, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.30 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 6.89 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 5.47 (br. s., 2H).
B. 2'-Fluoro-6'-trifluorometil-bifenil-3,4-diamina El 2'-Fluoro-3-nitro-6'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (754 mg, 2.51 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética, después se añadieron EtOH (20 mi) y agua (5 mi). Cloruro de amonio (10 eq., 1.34 g, 25.1 mmol) se añadió como un sólido, y después se añadió hierro en polvo (5 eq., 701 mg, 12.6 mmol). El vial se tapó herméticamente y se colocó en un bloque de calentamiento, en donde la reacción se agitó a 80 °C por 14 h. La reacción se enfrió hasta TA, se vertió en agua, y se extrajo tres veces con EtOAc (40 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgS04 anhidro, se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida para dar 662 mg (98 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.52 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.39 (td, J = 7.9, 5.7 Hz, 1 H), 7.25 - 7.32 (m, 1H), 6.71 - 6.77 (m, 1 H), 6.60 - 6.67 (m, 2H), 3.45 (br. s., 4H).
C. 3-r5-(2-Fluoro-6-trifluorometil-fenilM H-benzimidazol-2-ill-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno Los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas F y g se usaron para preparar el compuesto del título. H-NMR (400 MHz, d6-DMSO + di-TFA) d: 7.63 - 7.77 (m, 4H), 7.57 (s, 1 H), 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 3.31 (s, 2H), 1.63 - 1.85 (m, 6H), 1.34 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19F4N3O: 418.2 (M+H); encontrado: 418.2.
EJEMPL0 13 2-f 2-G2-? -Oxa-2-aza-espiror4.5ldec-2-en-3-il)-1 H-benzimidazol-5-ill-fenil}-propan-2-ol (Comp. 18) A. 3-(5-bromo-1H-benzimidazol-2-il)-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (283 mg, 1.55 mmol, como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) y 4-bromobenceno-1 ,2-diamina (1.3 eq., 377 mg, 2.02 mmol) en 68 % de rendimiento general (299 mg) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas F y G. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) 5: 7.74 (s, 1 H), 7.51 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.40 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1 H), 3.25 (s, 2H), 1.69 - 1.88 (m, 6H), 1.43 - 1.63 (m, 4H).
B. 2-(2-G2-(1 -Oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il -1 H-benzimidazol-5-M1-fenil)-propan-2-ol Por medio del uso del procedimiento para la etapa D en el Ejemplo 1 , el compuesto del título se preparó a partir de 3-(5-bromo-1H-benzimidazol-2-il)-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (150 mg, 0.449 mmol, preparado en la etapa anterior) y 3,3-dimetil-3H-benzo[c][1 ,2]oxaborol-1-ol (2.0 eq., 145 mg, 0.898 mmol, preparado como se describió en la patente núm. US2007/259936) y (dppf)PdCI2 DCM (0.10 eq., 36.6 mg, 0.045 mmol) con 9 % de rendimiento (16.4 mg). H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.82 (dd, J = 8.1 , 1.3 Hz, 1 H), 7.53 - 7.68 (m, 1 H), 7.47 (br. s., 1H), 7.35 (td, J = 7.6, 1.6 Hz, 1 H), 7.19 - 7.24 (m, 2H), 7.05 (dd, J = 7.6, 1.3 Hz, 1 H), 3.28 (s, 2H), 1.69 - 1.90 (m, 6H), 1.46 - 1.65 (m, 4H), 1.33 (s, 6H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C24H27N3O2: 390.2 (M+H); encontrado: 390.4.
EJEMPLO 1 2-r5-(2-Trifluorornetoxi-feniO-1 H-benzimidazol-2-il1-3-oxa-1 -aza-espiror4.51dec-1-eno (Comp. 2) A. Terc-butil éster del ácido (4-bromo-2-terc-butoxicarbonilamino-feniQ-carbámico El 4-Bromo-benceno-1 ,2-diamina (1.87 g, 10.0 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 100 mi equipado con una barra de agitación magnética. Se añadió DCM (50 mi), BOC-anhídrido sólido (5.46 g, 25.0 mmol) y 2.5 M NaOH acuoso (10 mi). La mezcla se agitó a TA por 3 d. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo tres veces con DCM (20 mi). Los extractos combinados se secaron sobre mgS04 y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió en una columna preempacada de S1O2 de 50 g, que eluye con EtOAc/hexanos, 1 :9, v/v para proporcionar 3.40 g (88 %) del compuesto del título.
B. Terc-butil éster del ácido (3-terc-butoxicarbonilamino- 2'-trifluorometoxi-bifenil-4-i0-carbámico El compuesto del título se preparó a partir de terc-butil éster del ácido (4-bromo-2-terc-butoxicarbonilam¡no-fenil)-carbámico (preparado en la etapa anterior) y ácido 2-trifluorometoxifenilborónico de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 , etapa D. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.59 (br. s., 2H), 7.37 - 7.42 (m, 1 H), 7.26 - 7.34 (m, 3H), 7.24 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1 H), 7.00 (br. s., 1 H), 6.94 (br. s., 1 H), 1.52 (s, 9H), 1.50 (s, 9H). c. 2-Triclorometil-5-(2-trifluorometoxi-fenil)-1H-benzimidazol El Terc-butil éster del ácido (3-terc-butoxicarbonilamino-2'-trifluorometoxi-bifenil-4-il)-carbámico (573 mg, 1.22 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética. El DCM (10 mi) y TFA (5 mi) se añadieron, y la mezcla se agitó a TA por 12 h. El solvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se disolvió en DCM y se lavó con 2M NaOH ac. El extracto orgánico se secó sobre mgS04 y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en AcOH (5 mi) y se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética. La mezcla se enfrió hasta 0 °C, se trató con metil-2,2,2-tricloroacetimidato (0.167 mi, 1.35 mmol) a través de una jeringa, y se agitó a TA por 3 días. El solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por medio de cromatografía en columna con una columna preempacada de SÍO2 de 12 g y se usó EtOAc/hexanos, 0:1 a 2:5, v/v como eluyente durante 30 min después de los cuales se obtuvieron 409 mg (85 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.71 - 7.77 (m, 2H), 7.52 - 7.57 (m, 1 H), 7.39 - 7.51 (m, 4H).
D. (1-Amino-ciclohexiD-metanol Polvo de LiAIH4 (2.28 g, 60.0 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 200 mi equipado con una barra de agitación magnética. El matraz se evacuó y se purgó nuevamente con Ar, se enfrió hasta 0 °C, y se cargó con THF seco (10 mi) a través de una cánula. Ácido 1-amino-ciclohexilcarboxílico (2.86 g, 20.0 mmol) se añadió en pequeñas porciones como un sólido. Al completar la adición, la mezcla se calentó hasta reflujo por 12 h. La mezcla se enfrió hasta 0 °C, se trató lentamente con Na2CÜ3 sat. ac. (50 mi), se calentó hasta TA, y se agitó por 2 h. Un precipitado blanco se formó, el cual se separó por filtración, se lavó con THF (75 mi), y se lavó dos veces con EtOAc (100 mi). El filtrado se concentró al vacío. El residuo se disolvió en DCM (50 mi), se secó sobre Na2S04, y se concentró al vacío para proporcionar 2.80 g (97 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 3.33 (s, 2H), 1.45 - 1.56 (m, 6H), 1.31 - 1.45 (m, 4H).
E. 2-G5-( 2-trifluorometoxi-feniD-1 H-benzimidazol-2-¡n-3-oxa-1 -aza-espiror4.51dec-1 -eno El 2-Triclorometil-5-(2-trifluorometoxi-fenil)-1 H-benzimidazol (241 mg, 0.610 mmol, preparado en la etapa B de este Ejemplo) y (1-amino-ciclohexil)-metanol (315 mg, 2.44 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocaron en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética.
Se añadió agua (8 mi), y la mezcla se enfrió hasta O °C y se agitó a esa temperatura por 1 h. La disolución completa de los materiales de partida no ocurrió, por lo tanto la mezcla se calentó hasta TA, se trató con dioxano (8 mi), y se agitó a TA por 14 h. La mezcla se extrajo tres veces con EtOAc (20 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgS04 y se concentraron al vacío. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna de S1O2 de 12 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 2:5, v/v durante 30 min. La columna se repitió bajo estas condiciones, y se produjeron 24.6 mg (10 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.78 (br. s., 1 H), 7.46 - 7.64 (m, 5H), 7.27 -7.46 (m, 1 H), 4.27 (s, 2H), 1.60 - 1.82 (m, 6H), 1.47 - 1.58 (m, 1 H), 1.33 - 1.46 (m, 3H).
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 14 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp Datos 2-[5-(2-tr¡fluorometox¡-fenil)-1 H-benz¡mldazol-2-¡l]-1 -oxa-3-aza- esp¡ro[4.5]dec-2-eno 1 H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.74 (br. s., 2H), 7.50 - 7.56 (m, 1 H), 7.37 - 7.48 (m, 4H), 3.82 (s, 2H), 1.78 - 1 .96 (m, 4H), 1 .66 - 1.77 (m, 2H), 1 .47 - 1 .62 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H20F3N3O2: 416.2 (M+H); encontrado: 416.1. 2-[5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-3-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1 H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.73 (br. s, 1 H), 7.65 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.60 (br. s, 1 H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.43 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.29 (br. d, J = 6.8 Hz, 1 H), 3.84 (s, 2H), 1 .80 - 1.98 (m, 4H), 1 .69 - 1.79 (m, 2H), 1 .43 - 1 .65 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H20F3N3O: 400.2 (M+H); encontrado: 400.1 . 2-[5-(2-tr¡fluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-¡l]-3-oxa-1 -aza- espiro[4.5]dec-1 -eno 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.71 (br. s, 1 H), 7.65 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.62 (br. s, 1 H), 7.56 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.42 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.29 (d, J = 6.6 Hz, 1 H), 4.32 (s, 2H), 1 .75 - 1 .94 (m, 4H), 1 .65 - 1.75 (m, 2H), 1 .41 - 1 .65 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H20F3N3O: 400.2 (M+H); encontrado: 400.2. 2-(1,3-D¡aza-espiro[4.5]dec-2-en-2-il)-5-(2-trifluoromet¡l-fen¡l)-1H-benzim¡dazol ?-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d (ppm): 7.80 - 7.84 (m, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.69 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.39 - 7.47 (m, 2H), 3.99 (s, 2H), 1.76 - 2.03 (m, 6H), 1.45 - 1.69 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.) calcul. para C22H2iF3N4: 399.2 (M+H), encontrado: 399.2. 2-[5-(2-trifluorometil-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-3,8-dioxa-1-aza- espiro[4.5]dec-1 -eno 1 H-NMR (400 MHz, CDCI3) d (ppm): 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.48 - 7.79 (m, 4H), 7.42 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.23 - 7.35 (m, 1H), 4.36 (s, 2H), 3.97 - 4.09 (m, 2H), 3.65 - 3.78 (m, 2H), 1.78 - 1.94 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.) calcul. para C21H18F3N3O2: 402.1 (M+H), encontrado: 402.1.
EJEMPLO 15 Hidrocloruro de 3-r5-(2-cloro-fenil)-7-trifluorometil-1H-benzimidazol-2-ill-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 30) A. 2'-cloro-5-nitro-3-tr¡fluorometil-bifenil-4-ilamina El 4-Bromo-2-nitro-6-trifluorometil-fen¡lamina (1.01 g, 3.55 mmol), ácido 2-clorofenilborónico (1.5 eq., 833 mg, 5.33 mmol), y (dppf)PdCI2 DCM (0.05 eq., 145 mg, 0.178 mmol) se colocaron en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética. El vial se vació y se limpió a contracorriente con Ar y se añadió DME (15 mi) y Na2CÜ3 2M acuoso (5 mi) con una jeringa. El vial se tapó herméticamente y se colocó en un bloque de calentamiento donde la reacción se agitó a 90 °C por 18 h. La mezcla se enfrió hasta TA, se diluyó con EtOAc, y se lavó con agua. Las capas acuosas se combinaron y se extrajeron con EtOAc. Los extractos combinados se secaron sobre mgS0 anhidro y se filtraron, y el solvente se eliminó a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de Si02 de 24 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0 a 1 :4, v/v durante 20 min, y se produjeron 1.05 g (94 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.47 - 7.53 (m, 1 H), 7.30 - 7.37 (m, 3H), 6.76 (br. s., 2H).
B. 3-r5-(2-cloro-fenil)-7-trifluorometil-1H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (61 1 mg, 3.33 mmol, como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) se colocó en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética. El DCM (6 mi) y DMF (1 gota) se añadieron a través de una jeringa. A la solución agitada se añadió cloruro de oxalilo (1.3 eq., 0.367 mi, 4.33 mmol) en forma de gotas a través de una jeringa. Después de completar la adición, la reacción se agitó a TA por 1 h. El solvente se eliminó a presión reducida, y el residuo resultante se disolvió en THF seco (7 mi).
El 2'-Cloro-5-nitro-3-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (1 eq., 1.06 g, 3.33 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética. El vial se evacuó y se purgó nuevamente con Ar, y se añadió THF seco (10 mi). La mezcla se enfrió hasta 0 °C en un baño de hielo, y NaH (3 eq., 400 mg, 9.99 mmol, 60 % dispersión en aceite) se añadió en pequeñas porciones. La solución de cloruro ácido preparada anteriormente se añadió en forma de gotas durante un periodo de 10 min a la mezcla de reacción agitada. La solución resultante se agitó a 0 °C por 30 min después se calentó hasta TA y se agitó por 16 h. La mezcla se apagó con agua y salmuera, y se extrajo tres veces con EtOAc (20 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgS04 anhidro y se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en ácido acético glacial (20 mi) y se colocó en un vial de 40 mi equipado con un barra de agitación. Se añadió Fe en polvo (5 eq., 930 mg, 16.7 mmol), el vial se tapó, y la mezcla se agitó a 80 °C por 1 h. La mezcla se enfrió hasta TA y se vertió en hielo (100 mi). El precipitado se filtró, y el sólido se lavó con agua, se disolvió en EtOAc, se secó sobre mgS04 anhidro, y se concentró a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 40 g que eluye con EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min, y se produjeron 1.14 g (79 %) del compuesto deseado. H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 13.52 (br. s., 1 H), 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.75 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.35 (s, 1 H), 7.25 (s, 1 H), 3.33 (s, 2H), 1.63 - 1.82 (m, 6H), 1.33 -1.59 (m, 4H).
C. Hidrocloruro de 3-r5-(2-cloro-fenil)-7-trifluorometil-1H-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El 3-[5-(2-cloro-fenil)-7-trifluorometil-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (1.14 g, 2.63 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 100 mi, y se añadió EtOAc (10 mi). El HCI (1 eq., 2.60 mi, 2.63 mmol, 1 M solución en éter) se añadió a través efe una jeringa. El solvente se eliminó a presión reducida, y el sólido se secó bajo alto vacío por 3 días, y se produjeron 1.12 g (90 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.80 (s, 1 H), 7.60 -7.66 (m, 1 H), 7.59 (s, 1 H), 7.52 - 7.58 (m, 1 H), 7.43 - 7.51 (m, 2H), 1.61 - 1.82 (m, 6H), 1.32 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H19CIF3N3O: 434.1 (M+H); encontrado: 434.2.
EJEMPLO 16 Hidrocloruro de 3-r5-(2-Fluoro-fenil)-1H-benzimidazol-2-il1-1 ,8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 31) A. 2'-Fluoro-3-nitro-bifenil-4-ilamina Una solución de 4-bromo-2-nitro-fenilamina (2.17 g, 10.0 mmol) en dioxano (40 mi) se trató con ácido 2-fluorofenilborónico (1.40 g, 10.0 mmol) y NaHC03 (40.0 mi, 80.0 mmol, 2 M acuoso). La mezcla se desgasificó a través de una sonicación y se purgó con Ar. Se añadió Pd(PPh3)4 (116 mg, 0.100 mmol), y la mezcla se calentó hasta 80 °C por 12 h. La mezcla se diluyó con agua (40 mi) y se extrajo dos veces con EtOAc (40 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre mgS04 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó en sílice (EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :1 , v/v) para obtener 1.80 g (78 %) del compuesto del título. H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.36 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 7.64 (dt, J = 8.6, 2.0 Hz, 1 H), 7.45 (td, J = 7.8, 1.8 Hz, 1 H), 7.30 - 7.38 (m, 1 H), 7.13 - 7.27 (m, 2H), 6.91 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 6.18 (br. s., 2H).
B. Etil éster del ácido 1,8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxílico A un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 500 mi bien ventilado se añadió una mezcla de bromuro de metil trifenilfosfonio/amida sódica ("iluro instantáneo", 22.9 g, 5.49 mmol) y éter seco (100 mi). La mezcla se agitó a TA por 1 h y se filtró a través de un embudo de vidrio fritado directamente hacia una solución de tetrahidro-piran-4-ona (5.00 g, 4.99 mmol) en éter (20 mi). Esta mezcla se agitó a TA por 4 h. El acetato de etil-2-cloro-2-(hidroxiamino) (8.32 g, 5.49 mmol) en DCM (100 mi) se añadió en forma de gotas a través de un embudo de adición durante 3 h, y la mezcla se agitó por 2.5 días. Se añadió agua (100 mi) y la mezcla se extrajo tres veces con DCM (200 mi, 100 mi, 100 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgS04 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó en una columna Sepra Si 50 SPE de 200-g (Isco system: régimen de flujo = 30 ml/min; eluyente = EtOAc/heptano, 1 :9 v/v por 10 min, después 1 :9 a 2:3 v/v durante 40 min) para proporcionar el compuesto del título (3.00 g, 28 %) como un aceite color canela. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 4.35 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.89 (ddd, J = 1 1.8, 8.7, 3.3 Hz, 2H), 3.65 - 3.75 (m, 2H), 2.99 (s, 1.89 - 1.97 (m, 2H), 1.76 - 1.86 (m, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
C. Ácido 1.8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxílico Una solución de etil éster del ácido 1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxilico (3.00 g, 1.41 mmol, preparado en la etapa anterior) en MeOH (60 mi) y agua (20 mi) se trató con LiOH (649 mg, 1.55 mmol) a TA por 2.5 h. El MeOH se eliminó al vacío. La solución acuosa resultante se acidificó con 1 N HCI ac. y se extrajo tres veces con EtOAc (100 mi, 100 mi, 50 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgSO4 y se concentraron al vacío para proporcionar el compuesto del título (2.50 g, 96 %) como un sólido blanco. H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 3.86 - 3.95 (m, 2H), 3.74 (dt, J = 11.8, 4.7 Hz, 2H), 3.01 (s, 2H), 1.91 - 1.99 (m, 2H), 1.80 - 1.89 (m, 2H).
D. (2'-Fluoro-3-nitro-bifenil-4-il)-amida del ácido1 ,8-dioxa- 2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carboxílico Una solución de ácido 1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (87.7 mg, 0.474 mmol, preparado en la etapa anterior) en CH2CI2 (10 mi) se trató con cloruro de oxalilo (41.3 µ?, 0.474 mmol) y DMF (1 gota) a TA por 1 h. Simultáneamente, una solución de 2'-fluoro-3-nitro-bifenil-4-¡lamina (100 mg, 0.431 mmol, preparada en la etapa A de este Ejemplo) en THF seco (10 mi) se trató con NaH (51.7 mg, 1.29 mmol, 60 % dispersión en aceite) a TA por 1 h. La solución de cloruro ácido se concentró al vacío, se tomó en THF seco (10 mi), y se añadió lentamente a la solución de 2'-fluoro-3-nitro-bifenil-4-ilamina. La mezcla se dejó agitar por 20 min a TA, se apagó con NH4CI sat. ac, se diluyó con agua, y se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgS04 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó en una columna Sepra Si 50 SPE de 40 g (Isco system: régimen de flujo = 20 ml/min; eluyente = EtOAc/hexanos, 1 :9 v/v por 10 min, después 1 :9 a 2:3 v/v durante 40 min) para proporcionar el compuesto del título (131 mg, 76 %) como un sólido amarillo. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 1 1.58 (s, 1 H), 8.87 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 8.47 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.89 (dt, J = 8.8, 1.6 Hz, 1 H), 7.47 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 1 H), 7.24 - 7.31 (m, 1 H), 7.20 (ddd, J = 10.9, 8.3, 1.0 Hz, 1 H), 3.92 (ddd, J = 11.8, 8.8, 3.2 Hz, 2H), 3.71 - 3.82 (m, 2H), 3.10 (s, 2H), 1.94 - 2.03 (m, 2H), 1.83 - 1.93 (m, 2H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C20H18FN3O5: 400.1 (M+H); encontrado: 400.1.
E. 3-r5-(2-Fluoro-fenil)-1 H-benzímidazol-2-??-1.8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno Una solución de ácido 1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (2'-fluoro-3-nitro-bifenil-4-il)-am¡da (131 mg, 0.327 mmol, preparada en la etapa anterior) en ácido acético glacial (10 mi) se trató con Fe en polvo (91.2 mg, 1.36 mmol) y se calentó hasta 100 °C con un condensador de reflujo por 4 h. El pH de la mezcla se ajustó a 7 con 6M NaOH ac. La mezcla acuosa resultante se extrajo tres veces con EtOAc (50 mi), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre mgS04 y se concentraron al vacío. El residuo se purificó en una columna Sepra Si 50 SPE de 40 g (Isco system: régimen de flujo = 25 ml/min; eluyente = EtOAc/hexanos, 1 :9 v/v por 10 min, después 1 :9 a 2:3 v/v durante 40 min) para proporcionar el compuesto del título (98.8 mg, 86 %) como un sólido blanco hueso. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.78 - 7.90 (m, 1H), 7.55 - 7.68 (m, 1 H), 7.46 - 7.54 (m, 2H), 7.29 -7.39 (m, 1H), 7.14 - 7.26 (m, 2H), 3.97 (ddd, J = 11.7, 8.1 , 3.4 Hz, 2H), 3.70 -3.81 (m, 2H), 3.47 (s, 2H), 1.99 - 2.08 (m, 3H), 1.87 - 1.98 (m, 2H). Espectro de masa (LC S, ESI pos.): calcul. para C20H18FN3O2: 352.1 (M+H); encontrado: 352.2.
F. Hidrocloruro de 3-r5-(2-fluoro-fenil)-1H-benzimidazol-2-in-1,8-dioxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno Una solución de 3-[5-(2-fluoro-fenil)-1 /-/-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (98.8 mg, 0.281 mmol, preparada en la etapa anterior) en EtOH (5 mi) se trató con HCI (56.2 µ?, 0.281 mmol, 5 M en isopropanol) a TA por 2 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se disolvió en una cantidad mínima de EtOH (2.5 mi) con sonicación y calentamiento. La solución se enfrió hasta TA, y se añadieron los hexanos en forma de gotas hasta que la solución se volvió turbia. La solución se dejó asentarse por 2 min después se trató con hexanos adicionales. El precipitado resultante se filtró, se lavó con hexanos, y se secó al aire para proporcionar el compuesto del título (63.7 mg, 58 %) como un sólido blanco. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.85 (s, 1 H), 7.77 - 7.83 (m, 1 H), 7.70 - 7.77 (m, 1 H), 7.46 - 7.53 (m, 1 H), 7.32 - 7.41 (m, 1 H), 7.21 - 7.27 (m, 1 H), 7.13 - 7.21 (m, 1 H), 3.78 - 3.88 (m, 2H), 3.63 - 3.73 (m, 2H), 3.32 - 3.36 (m, 2H), 1.85 - 1.98 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C20H18FN3O2: 352.1 (M+H); encontrado: 352.3.
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 16 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp Datos 32 Hidrocloruro de 3-[7-metil-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2- aza-espi ro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.74 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.61 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.53 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.30 (s, 1 H), 3.83 (ddd, J = 11.8, 7.3, 4.7 Hz, 2H), 3.68 (dt, J = 11.8, 4.8 Hz, 2H), 3.36 (s, 2H), 2.63 (s, 3H), 1.86 - 1.96 (m, 4H). 33 Hidrocloruro de 3-[7-bromo-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa- 2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (Ej. 7, etapa A pero bromado con NBS) 1 H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.75 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.59 - 7.65 (m, 1 H), 7.50 - 7.59 (m, 3H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 3.77 - 3.88 (m, 2H), 3.62 - 3.72 (m, 2H), 3.36 (s, 2H), 1.84 - 1.93 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C2i Hi7BrF3N302: 480.1 (M+H); encontrado: 480.2. 34 Hidrocloruro de 3-[7-cloro-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1H-N R (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.61 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.47 (br. s., 1 H), 7.37 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.78 - 3.87 (m, 2H), 3.67 (dt, J = 11.8, 4.8 Hz, 2H), 3.35 (s, 2H), 1.83 - 1.93 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C21H17CIF3N3O2: 436.1 (M+H); encontrado: 436.3. 35 Hidrocloruro de 2-(1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fen¡l)- 3H-benzimidazol-4-carbonitrilo 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.57 - 7.65 (m, 1 H), 7.49 - 7.56 (m, 2H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 3.81 (dt, J = 11.8, 5.8 Hz, 2H), 3.63 - 3.72 (m, 2H), 3.36 (s, 2H), 1.85 (t, J = 5.4 Hz, 4H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C22H17F3N4O2: 427.1 (M+H); encontrado: 427.2.
Hidrocloruro de 8,8-dimet¡l-3-[5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2- aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.71 - 7.77 (m, 2H), 7.58 - 7.65 (m, 2H), 7.50 - 7.57 (m, 1 H), 7.46 (dd, J = 8.6, 1.0 Hz, 1 H), 7.36 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 3.24 (s, 2H), 1.82 - 1.93 (m, 2H), 1.71 - 1.81 (m, 2H), 1.55 (ddd, J = 13.5, 9.1 , 4.2 Hz, 2H), 1.26 - 1.36 (m, 2H), 0.93 (d, J = 3.5 Hz, 6H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C24H24F3N3O: 428.2 (M+H); encontrado: 428.3.
Hidrocloruro de 3-[5-(cloro-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-8,8-dimetil-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1 H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.78 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 7.60 (d, J 8.6 Hz, 1 H), 7.45 - 7.49 (m, 1 H), 7.30 - 7.39 (m, 3H), 3.25 (s, 2H), 1.84 - 1.92 (m, 2H), 1.72 - 1.81 (m, 2H), 1.56 (ddd, J = 13.5, 9.1 , 4.2 Hz, 2H), 1.26 - 1.35 (m, 2H), 0.93 (d, J = 3.5 Hz, 6H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H24CIN30: 393.2 (M+H); encontrado: 393.3.
Hidrocloruro de 3-[5-(2,6-difluoro-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno 1 H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.82 (dd, J = 8.6, 0.8 Hz, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 7.63 (dd, J = 8.6, 1.5 Hz, 1 H), 7.39 (tt, J = 8.5, 6.4 Hz, 1 H), 7.06 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.78 - 3.88 (m, 2H), 3.64 - 3.73 (m, 2H), 3.34 (s, 2H), 1.86 - 1.95 (m, 4H).
Hidrocloruro de 8,8-dimetil-3-[7-trifluorometil-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H- benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1 H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.57 - 7.64 (m, 1 H), 7.49 - 7.55 (m, 1 H), 7.41 (s, 1 H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 3.27 (s, 2H), 1.76 - 1.86 (m, 2H), 1.66 - 1.76 (m, 2H), 1.53 (ddd, J = 13.3, 8.9, 4.3 Hz, 2H), 1.25 - 1.35 (m, 2H), 0.92 (d, J = 2.5 Hz, 6H). Espectro de masa (LCMS, APCI pos.): calcul. para C25H23F6N30: 496.2 (M+H); encontrado: 496.3. 40 Hidrocloruro de 3-[5-(2-cloro-fen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec- 2-eno 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.76 - 7.82 (m, 1H), 7.72 - 7.75 (m, 1 H), 7.61 (dd, J = 8.6, 1.5 Hz, 1 H), 7.44 - 7.50 (m, 1 H), 7.29 - 7.40 (m, 3H), 3.78 - 3.88 (m, 2H), 3.63 - 3.73 (m, 2H), 3.35 (s, 2H), 1.87 - 1.95 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C20H18CIN3O: 368.1 (M+H); encontrado: 368.2. 41 Hidrocloruro de 3-[7-cloro-5-(2-tr¡fluorometil-fenil)-1H-benz¡midazol-2-il]-8,8-d¡met¡l-1- oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.69 - 7.83 (m, 2H), 7.44 - 7.67 (m, 2H), 7.25 - 7.42 (m, 2H), 3.26 (s, 2H), 1.61 - 1.86 (m, 4H), 1.44 - 1.58 (m, 2H), 1.21 - 1.35 (m, 2H), 0.85 - 0.95 (m, 6H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C24H23CIF3N3O: 462.2 (M+H); encontrado: 462.3.
Hidrocloruro de 3-[7-trifluorometil-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 - -benzimidazol-2-il]-1 ,8- dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.76 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.72 (s, 1H), 7.59 - 7.65 (m, H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.52 (s, 1H), 7.39 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.78 - 3.86 (m, 2H), 3.63 - 3.72 (m, 2H), 3.37 (s, 2H), 1.82 - 1.91 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H,7F6N302: 470.1 (M+H); encontrado: 470.2.
EJEMPLO 17 Hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-5-(2-trifluorometil-fen¡l)-1H-imidazof4,5-blpiridina (Comp. 56) A. 3-nitro-6-(2-trifluorometil-fenin-piridin-2-ilamina A una solución de 6-cloro-2-nitro-piridin-3-ilamina (143 mg, 1.00 mmol), ácido 2-trifluorometilfenilborónico (285 mg, 1.50 mmol) y K3PO4 (424 mg, 2.00 mmol) en tolueno (5 mi) se añadieron S-Fos (16.4 mg, 0.040 mmol) y Pd(OAc)2 (4.49 mg, 0.020 mmol). La mezcla resultante se agitó a 90 °C bajo Ar por 4 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta TA, se diluyó con EtOAc (20 mi) y se filtró a través de una almohadilla de Celita. El filtrado se concentró, y el residuo resultante se purificó en sílice (EtOAc/hexanos, 0:1 a 1 :1 v/v) para obtener el compuesto del título (130 mg, 46 %). 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.39 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.46 - 7.62 (m, 2H), 7.39 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.76 (d, J = 8.6 Hz, 1 H).
B. 6-(2-Trifluorometil-fenil)-piridina-2.3-diamina A una solución de 2-nitro-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-ilamina (130 mg, 0.460 mmol, preparada en la etapa anterior) en EtOH (10 mi), se añadió 10 % Pd/C (60 mg). La mezcla resultante se hidrogenó a 344.7 kPal (50 psi) por 3 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celita, y el filtrado se concentró al vacío para obtener el compuesto del título, el cual se usó directamente en la próxima etapa sin purificación adicional. 1H- NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.62 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.41 - 7.49 (m, 1 H), 7.29 7.41 (m, 2H), 6.81 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.64 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 4.31 (br. s. 2H), 3.34 (br. s., 2H).
C. 1-Oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-ácido carboxílico r2-amino-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-il1-amida El compuesto del título se preparó a partir de 6-(2-trifluorometil-fenil)-pir¡dina-2,3-diamina (preparada en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 16, etapa D. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.26 (s, 1 H), 7.70 - 7.76 (m, 2H), 7.55 - 7.61 (m, 1 H), 7.45 - 7.52 (m, 2H), 6.87 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 4.72 (s, 2H), 3.03 (s, 2H), 1.75 - 1.88 (m, 5H), 1.66 -1.75 (m, 2H), 1.48 (br. s., 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos ): calcul. para C21 H21F3N4O2: 419.2 (M+H); encontrado: 419.2.
D. Hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-5-(2-trifluorometil-fenil)-1H-imidazor4.5-b1piridina El compuesto del título se preparó a partir de [2-amino-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-il]-amida del ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 16, etapas E y F, excepto que el hierro en polvo se omitió en la etapa E. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 8.08 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.69 - 7.76 (m, 1H), 7.61 - 7.68 (m, 1 H), 7.58 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 3.32 (s, 2H), 1.72 - 1.90 (m, 6H), 1.47 - 1.65 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C2iH19F3N40: 401.2 (M+H); encontrado: 401.2.
EJEMPL0 18 Hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3H-imidazor4,5-c1piridina fComp. 57) A. 4-nitro-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-ilamina El compuesto del título se preparó a partir de 5-bromo-3-nitro-piridin-2-ilamina (solicitud de patente núm. WO 2005037197) y ácido 2-trifluorometilfenilborónico de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 17, etapa A. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 9.26 (s, 1 H), 7.77 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.59 - 7.66 (m, 1 H), 7.52 - 7.59 (m, 1 H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.79 (s, 1 H).
B. r4-Nitro-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-il1-amida del ácido 1 -oxa-2-aza-espirof4.51dec-2-eno-3-carboxílico El compuesto del título se preparó a partir de 4-nitro-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-ilamina (preparado en la etapa anterior) y ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 16, etapa D. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 9.45 (s, 1 H), 8.93 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.65 (t, J = 7.1 Hz, 1 H), 7.59 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 2.97 (s, 2H), 1.73 - 1.90 (m, 5H), 1.62 - 1.73 (m, 3H), 1.40 - 1.54 (m, 2H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C21 H19F3N4O4: 449.1 (M+H); encontrado: 449.2.
C. Hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3H-imidazor4.5-c1p¡ridina El compuesto del título se preparó a partir de [4-nitro-6-(2-trifluorometil-fenil)-piridin-3-il]-amida del ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 16, etapas E y F. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.94 (s, 1 H), 7.84 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.69 - 7.76 (m, 1 H), 7.60 - 7.68 (m, 2H), 7.56 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 4.56 (s, 2H), 1.73 - 1.90 (m, 6H), 1.48 - 1.66 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para 401.2 (M+H); encontrado: 401.2.
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 18 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp. Datos Hidrocloruro de 2-(1 -oxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifIuorometil-fenil)- 3H-imidazo[4,5-b]piridina 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH/CDCI3) d: 8.28 (br. s., 1 H), 7.73 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.58 (t, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1H), 7.33 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 3.23 (s, 2H), 1.64 - 1.83 (m, 7H), 1.40 - 1.52 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C21H19F3N4O: 401.2 (M+H); encontrado: 401.3.
EJEMPLO 19 Hidrocloruro de 3-r7-metil-5-(2.6-difluorofenin-1H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 48) A. 3-Dimetoximet¡l-1 -oxa-2-aza-espiroí4.51dec-2-eno A un vial de 40 mi equipado con una barra de agitación magnética se añadió DMF (10 mi) y dimetoxi-acetaldehído (1.50 mi, 10.0 mmol). Se añadió hidroxilamina acuosa (0.640 mi, 10.5 mmol) a través de una jeringa, y la mezcla se agitó por 2 h a TA. El NCS (1.40 g, 10.5 mmol) se añadió en pequeñas porciones como un sólido. La mezcla se agitó 1 h adicional a TA, se diluyó con DCM (40 mi), se secó sobre mgS04, y se filtró. El sólido se lavó con DCM. El filtrado se diluyó hasta un volumen de 100 mi y se transfirió a dos jeringas de 60 mi. Metileno-ciclohexano (2.40 mi, 20.0 mmol), DIPEA (1.92 mi, 11.0 mmol), y DCM (10 mi) se colocaron en un matraz de fondo redondo de 200 mi equipado con una barra de agitación magnética. La solución de clorooxima preparada anteriormente se añadió en forma de gotas con una bomba de jeringa a una tasa de 0.0774 ml/min hasta que se completó la adición. La mezcla se agitó a TA por 3 días, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se disolvió en agua (50 mi) y se extrajo tres veces con hexanos (25 mi). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre mgSÜ4 y se concentraron al vacío. El material se usó en la próxima etapa sin purificación.
B. 1 -Oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3-carbaldehído El 3-Dimetoximetil-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (1.06 g, 4.97 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 50 mi equipado con un barra de agitación. Se añadieron acetona (20 mi), agua (0.3 mi), y resina Amberlyst-15 (200 mg). La mezcla se agitó temperatura ambiente por 24 h. Los sólidos se eliminaron por filtración y se enjuagaron con acetona (20 mi), y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 40 g que eluye con EtOAc/heptano, 0:1 a 3:2, v/v durante 30 min, y se produjeron 451 mg (54 %) del compuesto deseado. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 9.90 (s, 1H), 2.81 (s, 2H), 1.72 - 1.87 (m, 4H), 1.58 - 1.69 (m, 2H), 1.40 - 1.53 (m, 4H).
El compuesto del título se preparó a partir de 2-metil-6-nitro-4- (4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenilamina (como se preparó en el Ejemplo 8, etapa A) y 2-bromo-1 ,3-difluoro-benceno de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 4, etapa A y Ejemplo 1 , etapa E. 1H- NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.17 (tt, J = 8.3, 6.3 Hz, 1 H), 6.87 - 6.97 (m, 2H), 6.76 (s, 1 H), 6.72 (s, 1 H), 3.44 (br. s., 4H), 2.21 (s, 3H).
D. 3-r7-Metil-5-(2,6-difluorofenil)-1 H-benzimidazol-2-ill-1 - oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El 2\6'-Difluoro-5-metil-bifenil-3,4-diamina (186 mg, 0.792 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi equipado con un barra de agitación, y se añadió DMF seco (2 mi). El 1-Oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno-3-carbaldehído (122 mg, 0.730 mmol, preparado en la etapa B de este Ejemplo) se añadió como una solución en DMF (2 mi). Se añadió Na2S205 sólido (153 mg, 0.803 mmol), y la mezcla se calentó hasta 100 °C por 4 h. La mezcla fría se vertió en agua (100 mi) y se extrajo tres veces con EtOAc (50 mi). Los extractos combinados se secaron sobre mgS04 y se filtraron, y los solventes se eliminaron a presión reducida. El residuo se purificó por medio de cromatografía en columna con una columna preempaquetada con 4 g de S1O2 y se usó EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:17, v/v como eluyente durante 30 min después de los cuales se obtuvieron 105 mg (38 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.43 - 7.55 (m, 2H), 7.15 - 7.30 (m, 3H), 3.35 (s, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.63 - 1.83 (m, 6H), 1.34 - 1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H21F2N3O: 382.2 (M+H); encontrado: 382.2.
E. Hidrocloruro de 3-l7-metil-5-(2.6-difluorofenil)-1H-benzimidazol-2-??-? -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-[7-metil-5-(2,6-difluorofenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1, etapa H. H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.43 - 7.55 (m, 2H), 7.15 - 7.30 (m, 3H), 3.35 (s, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.63 - 1.83 (m, 6H), 1.34 - 1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H21 F2N3O: 382.2 (M+H); encontrado: 382.2.
EJEMPLO 20 Hidrocloruro de 3-r7-metil-5-(2-fluorofenil)-1H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Cornp. 47) A. 2'-Fluoro-5-metil-bifenil-314-diamina El compuesto del título se preparó a partir de 4-bromo-2-met¡l-6-nitro-fenilamina y 2-(2-fluoro-fenil)-4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]d¡oxaborolano por medio del uso de los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas D y E. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.36 (td, J = 7.8, 1.9 Hz, 1 H), 7.16 - 7.23 (m, 1 H), 7.03 - 7.15 (m, 2H), 6.84 (s, 1 H), 6.79 - 6.82 (m, 1 H), 3.47 (br. s., 4H), 2.20 (s, 3H).
B. 3-f7-Metil-5-(2-fluorofenin-1 H-benzimidazol-2-??-? -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno 1-Oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carbaldehído (167 mg, 1.00 mmol, como se preparó en el Ejemplo 19, etapa B) se colocó en un matraz de fondo redondo de 25 mi equipado con una barra de agitación magnética. El 2'-Fluoro-5-metil-bifenil-3,4-diamina (218 mg, 1.01 mmol, preparado en la etapa anterior) se añadió como una solución en EtOH (10 mi). El matraz se equipó con un condensador de reflujo (parte superior abierta al aire), y la mezcla se calentó hasta 80 °C por 6 h. La mezcla fría se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por medio de cromatografía en columna con una columna preempaquetada con 40 g de Si02 y se usó EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v como eluyente durante 30 min después de los cuales se obtuvieron 159 mg (44 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.57 (br. s., 1 H), 7.50 (td, J = 7.8, 1.9 Hz, 1H), 7.31 - 7.37 (m, 1 H), 7.08 - 7.28 (m, 4H), 2.64 (s, 3H), 2.31 (s, 2H), 1.69 - 1.89 (m, 6H), 1.47 - 1.64 (m, 4H).
C. Hidrocloruro de 3-l7-metil-5-(2-fluorofenin-1K-benzimidazol-2-in-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-[7-metil-5-(2-fluorofenil)-1/-/-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 , etapa H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.54 - 7.65 (m, 2H), 7.39 - 7.49 (m, 1 H), 7.28 - 7.38 (m, 3H), 3.36 (s, 2H), 2.63 (s, 3H), 1.65 - 1.82 (m, 6H), 1.32 - 1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C22H22FN3O: 364.2 (M+H); encontrado: 364.2.
EJEMPLO 21 Hidrocloruro de 3-r7-metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benz¡midazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 46) A. 5-Metil-2'-trifluorometil-bifenil-3.4-diamina El compuesto del título se preparó a partir de 4-bromo-2-metil-6-nitro-fenilamina y 4,4,5, 5-tetrametil-2-(2-trifluorometil-fenil)- [1 ,3,2]dioxaborolano de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas D y E. H-NMR (400 MHz, CDCI3) 5: 7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.47 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.36 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.30 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.59 (s, 1H), 6.61 (s, 1 H), 3.41 (br. s., 4H), 2.19 (s, 3H).
B. 3-r7-Metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1 fí-benzimidazol-2-in- 1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno 1-Oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carbaldehído (135 mg, 0.807 mmol, como se preparó en el Ejemplo 19, etapa B) se colocó en un vial de 4 mi equipado con una barra de agitación magnética. Se añadió 40 % NaHS03 acuoso (0.8 mi) a través de una jeringa, y la mezcla se agitó a TA por 2 h. El 5-Metil-2'-tr¡fluorometil-bifenil-3,4-diamina (246 mg, 0.923 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi equipado con una barra de agitación magnética. Se añadió EtOH (2 mi). La solución de 1-oxa-2- aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carbaldehído se añadió a la solución de 5-metil-2'-trifluorometil-b¡fenil-3,4-diamina. El matraz que había contenido la solución de 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carbaldehído se lavó con EtOH (0.5 mi) y agua (0.25 mi), y esta se añadió, además, a la solución de 5-metil-2'-trifluorometil-bifenil-3,4-diamina. La mezcla se calentó hasta 90 °C por 2 h. La mezcla se vertió en agua, y el precipitado se aisló por filtración. El sólido se lavó con agua, se disolvió en EtOAc, se secó sobre mgS04, se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de columna por medio del uso de una columna preempacada de S1O2 de 40 g que eluye con EtOAc/heptano, 0:1 a 3:7, v/v durante 30 min, y se produjo 136 mg (41 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, d4- MeOH) d: 7.76 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.26 - 7.49 (m, 2H), 7.03 (br. s., 1 H), 2.63 (br. s., 3H), 1.69 - 1.88 (m, 6H), 1.45 - 1.63 (m, 4H).
C. Hidrocloruro de 3-r7-metil-5-(2-trifluorometilfenilMH-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-[7-metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1/-/-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1, etapa H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.73 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.63 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1H), 7.10 (s, 1 H), 3.34 (s, 2H), 2.60 (s, 3H), 1.64 - 1.84 (m, 6H), 1.33 -1.57 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H22F3N3O: 414.2 (M+H); encontrado: 414.2.
EJEMPLO 22 Hidrocloruro de 3-r5-(2-clorofenil)-1H-benzimidazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 45) A. 3-(5-bromo-1 H-benzimidazol-2-il)-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 4-bromo-benceno-1 ,2-diamina y ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas F y G. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.74 (s, 1 H), 7.51 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.40 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1 H), 3.25 (s, 2H), 1.69 - 1.87 (m, 6H), 1.45 - 1.63 (m, 4H).
B. 3-r5-(2-clorofen¡n-1H-benzimidazol-2-¡n-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-(5-bromo- H-benzimidazol-2-il)-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (preparado en la etapa anterior) y ácido 2-cloro-benceno-borónico de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 , etapa D. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.46 - 7.76 (m, 3H), 7.29 - 7.42 (m, 4H), 3.27 (s, 2H), 1.69 - 1.87 (m, 6H), 1.46 - 1.62 (m, 4H).
C. Hidrocloruro de 3-r5-(2-clorofenih-1H-benzimidazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espirof4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-[5-(2-clorofenil)- 1 H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 , etapa H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.71 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.56 - 7.62 (m, 1 H), 7.35 - 7.52 (m, 4H), 3.31 (s, 2H), 1.63 - 1.81 (m, 6H), 1.35 - 1.55 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C21 H20CIN3O: 366.1 (M+H); encontrado: 366.2.
EJEMPLO 23 Hidrocloruro de 3-r7-(3-metoxi-propil)-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 52) A. 5-(3-metoxi-propil)-2'-trifluorometil-bifenil-3,4-diamina El compuesto del título se preparó a partir de 3-yodo-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (como se preparó en el Ejemplo 9, etapa A) y 3-metoxi-propino de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 10, etapas A y B.
B. Hidrocloruro de 3-r7-(3-metoxi-propil)-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-ilM-oxa-2-aza-espiror4.5ldec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 5-(3-metoxi-propil)-2'-trifluorometil-bifenil-3,4-diamina (preparado en la etapa anterior) y ácido 1- oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas F a H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.86 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.74 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.41 (s, 1 H), 7.11 (s, 1 H), 3.31 - 3.41 (m, 2H), 3.36 (s, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.03 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.86 - 1.98 (m, 2H), 1.63 - 1.83 (m, 6H), 1.32 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C26H28F3N3O2: 472.2 (M+H); encontrado: 472.3.
EJEMPLO 24 Hidrocloruro de 3-l7-cloro-4-metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 55) A. 5-cloro-2-metil-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina El compuesto del titulo se preparó a partir de 1-bromo-5-cloro-2-metil-4-nitro-benceno y ácido 2-trifluorofenilborónico de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas D y E. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.72 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.20 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.03 (s, 1 H), 6.64 (s, 1 H), 4.01 (br. s., 2H), 1.90 (s, 3H).
B. A -(5-cloro-2-metil-3-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-il)-acetamida El 5-cloro-2-metil-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (384 mg, 1.34 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 50 mi equipado con una barra de agitación magnética. Se añadió anhídrido acético (1.5 mi). La mezcla se agitó a TA por 1 h y después se enfrió hasta 0 °C. A un vial de 4 mi enfriado a 0 °C se añadió AcOH (0.27 mi), anhídrido acético (0.31 mi), y ácido nítrico (0.45 mi). La mezcla de nitración se añadió en forma de gotas a través de una pipeta a la solución preparada anteriormente, se mantuvo la temperatura por debajo de 10 °C. Al completar la adición, la mezcla se agitó a 0 °C por 1 hora y se vertió en hielo. El precipitado resultante se aisló por filtración, se lavó con agua, y se disolvió en EtOAc. La solución se secó sobre mgS04 y se filtró, y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se purificó por medio de cromatografía en columna con una columna preempaquetada con 40 g de S1O2 y se usó EtOAc/hexanos, 0:1 a 3:7, v/v como eluyente durante 30 min después de los cuales se obtuvieron 301 mg (60 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 7.54 - 7.68 (m, 2H), 7.50 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 2.21 (s, 3H), 1.98 (s, 3H).
C. Hidrocloruro de 3-r7-cloro-4-metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-in-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de A -(5-cloro-2-metil-3-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-il)-acetamida (preparado en la etapa anterior) y ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 1 , etapas E a H. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.87 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.75 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.66 (t, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.40 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.07 (s, 1 H), 3.34 (s, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.62 - 1.83 (m, 6H), 1.31 - 1.61 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H21CIF3N3O: 448.1 (M+H); encontrado: 448.3.
EJEMPLO 25 Metanosulfonato de 3-r7-cloro-5-f2-trifluorometoxifenil)-1H-benzimidazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 50) A. 3-r7-cloro-5-(2-trifluorometoxifenil)-1fí-benzimidazol-2-in-1-oxa-2-aza-espirof4.5ldec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 4-bromo-2-nitro-fenilamina, ácido 2-trifluorometoxifenilborónico, y ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 6, etapas A a C. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.51 - 7.65 (m, 2H), 7.36 - 7.50 (m, 4H), 3.31 (br. s., 3H), 1.68 - 1.90 (m, 6H), 1.45 - 1.64 (m, 4H).
B. Metanosulfonato de 3-l7-cloro-5-(2-trifluorometoxifenil)-1/7-benzimidazol-2-¡n-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El 3-[7-cloro-5-(2-trifluorometoxifenil)-1 -/-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (64.0 mg, 0.142 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un vial de 8 mi, y se añadió EtOAc (1 mi). Se añadió ácido metanosulfónico (9.22 µ?, 0.142 mmol) a través de una microjeringa. El solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se trituró con éter (4 mi), y el solvente se eliminó a través de una pipeta. Se repitieron la trituración y la eliminación del solvente. El sólido se secó bajo alto vacío para producir 72.3 mg (93 %) del compuesto del título. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.59 - 7.66 (m, 1 H), 7.45 - 7.59 (m, 4H), 7.40 (s, 1 H), 3.32 (s, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.59 - 1.82 (m, 6H), 1.30 - 1.59 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C23H19CIF3N3O2: 450.1 (M+H); encontrado: 450.2.
EJEMPLO 26 Metanosulfonato de 3-|7-cloro-5-(2-fluorofenil)-1 H-benzim¡dazol-2-il1-1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno (Comp. 49) A. 3-cloro-2'-fluoro-5-nitro-bifenil-4-ilamina El compuesto del título se preparó a partir de 4-bromo-2-nitro-fenilamina y ácido 2-fluorofenilborónico de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 6, etapas A y B. 1H-NMR (400 MHz, CDCI3) d: 8.32 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.81 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.42 (td, J = 7.8, 1.8 Hz, 1 H), 7.30 -7.38 (m, 1 H), 7.23 (dd, J = 7.6, 1.3 Hz, 1 H), 7.13 - 7.22 (m, 1 H), 6.64 (br. s., 2H).
B. 3-r7-cloro-5-(2-fluorofenil)-1H-benzimidazol-2-in-1 -oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-cloro-2'-fluoro-5-nitro-bifenil-4-ilamina (preparado en la etapa anterior) y ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 16, etapas B y C. 1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH) d: 7.64 (br. s., 1 H), 7.52 (td, J = 7.8, 1 .8 Hz, 1 H), 7.48 (s, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 1 H), 7.27 (td, J = 7.5, 1.3 Hz, 1 H), 7.21 (ddd, J = 1 1.1 , 8.2, 1 .1 Hz, 1 H), 1 .71 - 1.88 (m, 6H), 1.48 - 1.66 (m, 4H).
C. Metanosulfonato de 3-l7-cloro-5-(2-fluorofenil¾-1 H-benzimidazol-2-¡n-1 -oxa-2-aza-espiro[4.5ldec-2-eno El compuesto del título se preparó a partir de 3-[7-cloro-5-(2-fluorofenil)-1 /- -benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 25, etapa B. 1H-NMR (400 MHz, d6-DMSO) d: 7.57 - 7.66 (m, 2H), 7.49 (s, 1 H), 7.41 - 7.48 (m, 1 H), 7.33 - 7.38 (m, 1 H), 7.28 - 7.33 (m, 1 H), 3.33 (s, 2H), 2.32 (s, 3H), 1 .62 - 1.83 (m, 6H), 1 .33 - 1 .58 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C2iH19CIFN30: 384.1 (M+H); encontrado: 384.3.
Los siguientes compuestos representativos de la presente invención se prepararon por medio de los procedimientos descritos en el Ejemplo 26 y con los reactivos, materias primas y condiciones conocidas para aquellos con experiencia en la materia: Comp. Datos Metanosulfonato de 3-[7-cloro-5-(2,6-d¡fluorofenil)-1H-benzimidazol-2-¡l]-1- oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno 1 H-NM (400 MHz, d6-D SO) d: 7.46 - 7.57 (m, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.41 (s, 1 H), 7.20 - 7.31 (m, 2H), 3.34 (s, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.62 - 1.81 (m, 6H), 1.30 1.58 (m, 4H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C21H18CIF2N3O: 402.1 (M+H); encontrado: 402.2.
EJEMPLO 2-Metil-4-r2-(1-oxa-2-aza-espiror4.5ldec-2-en-3-in-6-(2-trifluorometilfenil)-3H-benzimidazol-4-in-butan-2-ol (Comp. 43) 4-(4,5-Diamino-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-2-met¡l-butan-2-ol El compuesto del título se preparó a partir de 3-yodo-5-nitro-2'-trifluorometil-bifenil-4-ilamina (como se preparó en el Ejemplo 9, etapa A) y 2- metil-but-3-¡n-2-ol de acuerdo con los procedimientos descritos en el Ejemplo 10, etapas A y B.
B. Ácido 1-Oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-eno-3 carboxílico r4-amino-5-(3-hidroxi-3-metil-butil)-2'-trif1uorometil-bifenil-3-in-amida El 4-(4,5-Diamino-2'-trifluorometil-bifenil-3-il)-2-metil-butan-2-ol (57.5 mg, 0.170 mmol, preparado en la etapa anterior) se colocó en un matraz de fondo redondo de 50 mi equipado con una barra de agitación magnética. El DCM (15 mi), PyBrOP (95.0 mg, 0.204 mmol), y DI PEA (36.0 µ?, 0.204 mmol) se añadieron a través de una jeringa. El ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (31.0 mg, 0.170 mmol, como se preparó en el Ejemplo 1 , etapa B) en DCM (10 mi) se colocó en un embudo de adición y se añadió en forma de gotas durante 2 h. Después de completar la adición, la mezcla se agitó a TA por 2 h. El solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió en una columna preempacada de Si02 de 40 g que eluye con EtOAc/heptano, 0:1 a 3:7, v/v durante 20 min, y se produjeron 34.4 mg (40 %) del compuesto del título. Espectro de masa (LCMS, ESI pos.) calcul. para C27H32F3N3O3: 504.2 (M+H), encontrado: 504.1.
C. 2-Metil-4-r2-(1-oxa-2-aza-espiror4.51dec-2-en-3-il)-6- 2-trifluorometilfenil)-3H-benzimidazol-4-¡n-butan-2-ol El compuesto del título se preparó a partir {4-amino-5-[3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-3-metil-butil]-2'-trifluorometil-bifenil-3-ilo}-ami^ del ácido 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno-3-carboxílico (preparado en la etapa anterior) de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 1 , etapa G. H-NMR (400 MHz, d6-DMSO + d TFA) d: 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.63 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.08 (s, 1 H), 3.33 (s, 2H), 2.97 - 3.10 (m, 2H), 1.63 - 1.83 (m, 8H), 1.35 - 1.57 (m, 4H), 1.18 (s, 6H). Espectro de masa (LCMS, ESI pos.): calcul. para C27H30F3 3O2: 486.2 (M+H); encontrado: 486.1.
Los siguientes compuestos de la Fórmula (I) se prepararon mediante los esquemas y ejemplos descritos en la presente descripción.
Comp. núm. Nombre del Comp. 1 3-[6-(2-tr¡fluorornetil-fenil)-1H-benzirriidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 2 2-[6-(2-tr¡fluorometoxi-fen¡l)-lH-benz¡m¡dazol-2-il]-3-oxa-1-aza-esp¡ro[4.5]dec-l-eno; 3 2-[6-(2-trifluorometoxi-fenil)-1H-benz¡midazol-2-il]-1-oxa-3-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-eno; 4 2-[6-(2-trifluorometil-fen¡l)-1H-benzimidazol-2-¡l]-1-oxa-3-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 5 2-[6-(2-tr¡fluorometil-fenil)-1H-benz¡m¡dazol-2-il]-3-oxa-1-aza-espiro[4.5]dec-1-eno; 6 3-[5-(2-fljoro^-trifluoromet¡l-fenil)-1H-benzimidazol-2-¡l]-1-oxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-eno; 7 3-[5-(2-trifluorometoxi-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-eno; 8 3-[5-(2-fluoro-6-tr¡fluorometox¡-fen¡l)-1H-benzim¡dazol-2-¡l]-1-oxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-eno; 9 3-[5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benz¡m¡dazol-2-¡l]-1 ,8-dioxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-eno; 10 8,8-d¡fluoro-3-[5-(2-tr¡fluoromet¡lfenil)-1H-benz¡m¡dazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 11 3-{5-[2-(2,2,2-Trifluoroetil)-fenil]-1H-benzimidazol-2-il}-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[5-(2,2-d¡fluoro-benzo[1 ,3]d¡oxol-4-il)-1 H-benz¡m¡dazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 12 esp¡ro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[5-(2-difluorometoxifenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec- 13 2-eno; hidrocloruro de 3-[7-fluoro-5-(2-trifluorometilfen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 14 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 4-metil-3-[5-(2-tr¡fluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 15 esp¡ro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[7-cloro-5-(2-trifluorometilfen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 16 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[7-bromo-5-(2-trifluorometilfenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza- 17 espiro[4.5]dec-2-eno; 18 2^2-[2-(1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3Hl)-1H 3enzirn¡dazol-5-il]-fen¡l}-propan-2-ol; hidrocloruro de 2-(1 ,3-diaza-esp¡ro[4.5]dec-2-en-2-il)-5-(2-trifluorometil-fenil)-1H- 19 benzimidazol; hidrocloruro de 3-[5-(2-difluorometoxifenil)-7-metil-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 20 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3H- 21 benzimidazol-4-carbonitrilo; hidrocloruro de 3-[2-(1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometilfen¡l)-3H- 22 benzimidazol-4-il]-propan-1 -ol; Sal del ácido 3-[5-(2-fluorofenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno, 23 trifluoroacético; hidrocloruro de 4-metil-3-[5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza- 24 espiro[4.5]dec-2-eno; 3-[2-(1-Oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometilfenil)-3H-benzirnidazol-4-il]-prop- 25 2-en-1-ol; Sal del ácido 3-[5-(2,6-difluorofenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno 26 trifluoroacético; Comp. núm. Nombre del Comp. hidrocloruro de 3-[7-trifluorometil-5-(2-trifluorometilferi¡l)-1 H-benzirri¡dazol-2-il]-1-oxa-2-a2a- 27 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 4-metil-3-[7-trifluorometil-5-(2-trifluorometilfenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2- 28 aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 29 2-[5-(2-Trifluorometil-fenil)-1H-benzimidazol-2-irj-3,8-dioxa-1-aza-espiro[4.5]dec-1-eno; hidrocloruro de 3-[5-(2-cloro-fenil)-7-trifluorometil-1H-benzim¡dazol-2-¡l]-1-oxa-2-aza- 30 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[5-(2-fluoro-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2- 31 eno; hidrocloruro de 3-t7-metil-5-(2-trifluorometil-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1,8-dioxa-2-aza- 32 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[7-Bromo-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H-benzimidazol-2-¡l]-1 ,8-dioxa-2-aza- 33 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[7-cloro-5-(2-tr¡fluorometil-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza- 34 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 2-(1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3H- 35 benzimidazol-4-carbonitrilo; hidrocloruro de 8,8-dimetil-3-[5-(2-trifluorometil-fenil)-1H-benz¡midazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 36 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[5-(cloro-fenil)-1H-benzimidazol-2-il]-8,8-dimetil-1-oxa-2-aza-esp¡ro[4.5]dec- 37 2-eno; hidrocloruro de 3-[5-(2,6-difluoro-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2- 38 eno; hidrocloruro de 8,8 l¡met¡l-3-[7-tr¡fluorometil-5-(2-trifluoromet^ 39 2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 40 hidrocloruro de 3-[5-(2-cloro-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[7-cloro-5-(2-trifluoromet¡l-fenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-8,8-dimetil-1-oxa-2- 41 aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 3-[7-tr¡fluorometil-5-(2-tr¡fluorometil-fenil)-1H-benz¡midazol-2-il]-1 ,8-dioxa-2-aza- 42 espiro[4.5]dec-2-eno 2-metil-4-[2-(1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-tr¡fluorometilfen¡l)-3H-benzimidazol-4- 43 il]-butan-2-ol; metanosulfonato de 3-[7-cloro-5-(2,6-difluorofenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- 44 espiro[4.5]dec-2-eno; 45 hidrocloruro de 3-[5-(2-clorofenil)-1 H-benzimidazol-2-¡ri-1 -oxa-2-aza-espira[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-|7-metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2-aza- 46 espiro[4.5]dec-2-eno; hidrocloruro de 3-[7-metil-5-(2-fluorofenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2- 47 eno; 48 hidrocloruro de 3-[7-metil-5-(2,6-difluorofenil)-1 H-benzimidazol-2-¡l]-1-oxa-2-aza- espiro[4 5]dec-2-eno; 49 metanosulfonato de 3-[7-cloro-5-(2-fluorofenil)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa-2-aza- espiro[4.5]dec-2-eno; Comp. núm. Nombre del Comp. 50 metanosulfonato de 3-[7-cloro-5-(2-trifluorometoxifen¡l)-1H-benzimidazol-2-il]-1-oxa- 2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 51 hidrocloruro de 3-[5-(2-trifluorometox¡fenil)-7-trifluorometil-1H-benz¡m¡dazol-2-¡l]-1- oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 52 hidrocloruro de 3-[7-(3-metoxi-propil)-5-(2-trifluoromet¡lfen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]- 1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 53 hidrocloruro de 3-[5-(2-fluorofenil)-7-trifluorometil-1 H-benzimidazol-2-¡l]-1 -oxa-2- aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 54 hidrocloruro de 3-[4,7-dimetil-5-(2-trifluorometilfen¡l)-1 H-benzimidazol-2-il]-1 -oxa-2- aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 55 hidrocloruro de 3-[7-cloro-4-metil-5-(2-trifluorometilfenil)-1 /-/-benzimidazol-2-il]-1- oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-eno; 56 hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-5-(2-trifluorometil-fenil)-1 H- imidazo[4,5-b]piridina; 57 hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3H- imidazo[4,5-c]piridina; y 58 hidrocloruro de 2-(1-oxa-2-aza-espiro[4.5]dec-2-en-3-il)-6-(2-trifluorometil-fenil)-3/- - imidazo[4,5-b]piridina; y sales farmacéuticamente aceptables de éstos.
EJEMPLOS BIOLÓGICOS Modelos in vitro EJEMPLO 1A Ensayo funcional de TRPM8 canino In Vitro La actividad funcional de los compuestos de la Fórmula (I) se determinó por medio de la medición de los cambios en la concentración de calcio intracelular por medio del uso de un colorante fluorescente sensible a Ca2+. Los cambios en la señal fluorescente fueron supervisados mediante un lector de placas de fluorescencia, ya sea un FLIPR™ (Molecular Devices) o FDSS (Hamamatsu). El aumento de la concentración intracelular de Ca2+ se detectó fácilmente tras la activación con icilina.
A las 24 horas antes del ensayo, las células HEK293 que expresan establemente el TRPM8 canino se sembraron en placas de 384 pocilios de pared negra, recubiertas de poli-D-lisina de base clara (BD Biosciences, NJ, Estados Unidos) y se cultivaron toda la noche en 5 % CO2 a 37 °C. El día del ensayo se eliminó el medio de cultivo, y las células se cargaron con Colorante Calcio 3 (Molecular Devices) por 35 min a 37 °C, sometido a CO2 5 % y después por 25 min a temperatura ambiente y atmosférica. Posteriormente, las células se probaron para los incrementos inducidos por agonistas en los niveles de Ca2+ intracelular por medio del uso de FLIPR™ o FDSS. Las células se retaron con un compuesto de la Fórmula (I) (a concentraciones variadas) y el Ca2+ intracelular se midió por 5 minutos antes de la adición de icilina a todos los pocilios para lograr una concentración final que produce aproximadamente un 80 % de la respuesta máxima. Los valores de EC50 o IC50 para los compuestos de la presente invención se determinaron de ocho estudios puntuales dosis-respuesta. Las curvas se generaron por medio del uso del promedio de los pocilios cuadruplicados para cada punto de dato. Los datos resultantes se muestran el la Tabla 2.
TABLA 2 %lnh.
Comp. a 0.200µ? ICso (nM) 1 99.5 3.1 2 106 7.0 3 60 n.d. 4 84 61 5 94 6.0 6 102 0.6 7 102 1.1 8 102 0.8 9 101 6.7 10 102 0.9 11 102 1.5 12 87 91 13 102 2.5 14 102 2.2 15 102 3.9 16 102 3.3 17 102 2.7 18 102 7.9 19 50 n.d. 20 103 1.8 21 103 0.7 22 103 0.2 23 103 2.9 24 103 5.6 25 100 0.8 26 100 2.3 27 100 0.8 28 101 1.1 29 71 100 30 97 1.0 31 99 13.4 32 100 4.9 33 100 1.7 34 100 4.0 35 100 5.2 lnh.
Comp. a 0.200µ? ICso (nM) 36 99 12.5 37 99 5.2 38 99 8.3 39 99 6.3 40 98 11.0 41 92 50.2 42 100 1.4 43 99 1.7 44 100 2.1 45 97 2.4 46 97 1.8 47 97 6.9 48 97 3.9 49 101 6.1 50 101 1.9 51 97 1.2 52 97 1.0 53 97 1.7 54 97 5.8 55 97 4.7 56 101 4.6 57 102 2.7 58 101 2.0 EJEMPLO 1 B Ensayo funcional de TRPM8 humano y de rata in vitro Las células HEK293 se cultivaron rutinariamente como monocapa en medio esencial mínimo de Dulbecco suplementado con 10 % FBS, 1 mm L-glutamina, 100 unidades/ mi penicilina y 100 ug/ ml estreptomicina. Las células se mantienen en 5 % CO2 a 37 °C.
Para la expresión funcional de TRPM8, el ADNc de longitud completa que codifica el TRPM8 humano y de rata se subclonaron en vectores de expresión de mamíferos pCI-NEO. Los constructos de expresión se transfectaron transitoriamente en células HEK293 de acuerdo con las instrucciones FuGENE 6 transfection reagent® (ROCHE). Dentro de veinticuatro horas las células transfectadas transitoriamente se cosecharon y se sembraron directamente en placas de ensayo o se crioconsevaron para uso futuro.
Las células transfectadas pueden ser crioconservadas o transfectadas frescas y colocadas en placas de 384-pocillos en recubiertas de poli-D-lisina de base clara (BD Biosciences, NJ, Estados Unidos) a una densidad de 10,000 células por pocilio en medio de cultivo y cultivadas toda la noche. Al día siguiente, todo el medio se eliminó y las células se incubaron con 52 µ? de 0.5 X tinte de calcio-3 (Molecular Devices) preparado en amortiguador de ensayo completo que contenía 20 mm HEPES, 0.1 % BSA, y 2.5 mm probenecid a 37 °C por treinta y cinco minutos. Las células se incubaron después por unos quince minutos adicionales a temperatura ambiente antes de iniciar los experimentos. Después de la incubación, las placas se insertaron en un instrumento FDSS, en donde las células se retaron con compuestos de la Fórmula (I) (a concentraciones variables) y Ca2+ intracelular se midieron por 5 min antes de la adición de icilina a la concentración ECeo- Los valores IC50 para los compuestos de la Fórmula (I) se determinaron de ocho estudios puntuales de dosis-respuesta.
La intensidad de fluorescencia máxima (Fl) que se alcanzó con la adición de icilina se exportó del FDSS y se analizó posteriormente por medio del uso de GraphPad Prism 3.02 (Graph Pad Software Inc., CA, U.S.A.), en donde el dato se normalizó al porcentaje de la respuesta máxima. Las curvas de dosis respuesta del promedio de los pocilios cuadriplicados para cada punto de datos se analizaron por medio del uso de regresión no lineal de cualquiera de las dosis-respuesta sigmoidal o dosis-respuesta sigmoidal (pendiente variable). Finalmente, los valores IC50 se calcularon con curva de dosis de mejor ajuste determinada por Prism.
EJEMPLO 2 Ensayos de fijación de membrana de TRPM8 Para los experimentos de fijación de membrana, las células HEK293 se transfectaron establemente con TRPM8 canino y se cultivaron en DMEM suplementado con 10 % suero fetal bovino, 100 unidades/ml penicilina, 100 mg/ml estreptomicina y 1 mg/ml G418. Las células se mantienen a 37 °C y en 5 % C02.
La solución extracelular contiene (en mm): NaCI, 132; EGTA, 1 ; KCI, 5.4; mgCI2, 0.8; HEPES, 10; glucosa, 10; pH=7.4. Los registros se realizaron por medio del uso de la técnica de fijación de membrana de célula completa convencional, 1-2 días después de colocar las células en los cubreobjetos de vidrio a densidades adecuadas para el registro de una sola célula. Las corrientes se amplificaron por un amplificador de fijación de membrana y se filtraron a 2 kHz (Axopatch 200B, Molecular Devices, Union City, CA). Se aplicó mentol (100 mm) a la célula a 0.5 ml/min a través de un sistema perfusión alimentado por gravedad. Los registros que incluían la activación del mentol se realizaron a 22 °C.
En los experimentos en donde las temperaturas varían, las rampas de temperatura se generaron por enfriamiento del perfusato en un enfriador en línea (Modelo SC-20, Warner Instruments, Hamden, CT) controlado por un controlador de temperatura (Model CL-100, Warner Instruments). La temperatura en el área adyacente a la célula registrada se midió con una termo-microsonda en miniatura hecha a la medida conectada a un termómetro de control (Model TH-8, Physitemp, Clifton, NJ), y muestreada por medio del uso de Digidata 1322A y pClamp 9.0 (Molecular Devices), ya que son las corrientes medidas simultáneamente en el modo de fijación de membrana de célula completa. La corriente se muestreó continuamente (a 100 Hz) a un potencial de mantenimiento de -60 mV.
Los compuestos de la Fórmula (I) se diluyeron de 10 mm soluciones madre de DMSO (almacenadas a -20 °C) en una solución extracelular que contenía 100 pm mentol o sometida al enfriamiento. Las concentraciones crecientes de un compuesto se aplicaron a una célula de manera acumulativa y las respuestas dependientes de la concentración se midieron después de la activación en estado estacionario se alcanzó por 100 pm mentol o por enfriamiento a 10 °C. Una concentración de saturación de un antagonista de referencia se aplicó al final de un experimento (en presencia de 100 mm mentol o 10 °C temperatura) para establecer los valores iniciales a partir de los cuales todas las otras mediciones se sustrajeron.
El porcentaje de inhibición por un compuesto se calculó como sigue: 100x(1-lCOmp lo)¡ en donde lCOmp y lo son amplitudes de corriente en estado estacionario en presencia o ausencia de una concentración de compuestos de la Fórmula (I). Los datos de concentración-respuesta se establecieron para una función lógica como sigue: R = 100/(1 +c/ ICso)p; en donde, R es el porcentaje de inhibición, p es el coeficiente de Hill y c es la concentración de los compuestos de la Fórmula (I).
Modelos In Vivo EJEMPLO 3 Inhibición del comportamiento inducido por icilina en roedores la icilina se desarrolló inicialmente como un compuesto de "superenfriamiento" por Delmar Chemicals Ltd. Posteriormente, demostró ser uno de los más potentes agonistas de TRPM8 conocidos (McKemy, D. D. y otros,. Nature 2002, 416(6876), 52-8), con un EC50 = 0.2 pm en la estimulación del influjo de ion calcio en las células transfectadas TRPM8 (Behrendt, H. J. y otros, Brit. J. Pharmacol. 2004, 141{4), 737-45). Las pruebas iniciales in vivo de icilina mostraron que esta causa sacudidas de "perro mojado" en ratas. Un temblor similar o comportamiento de saltos se evidenció también en ratones, conejos, gatos, perros y monos. En humanos, la icilina produjo una sensación de frialdad al contacto con las membranas mucosas, sensación de picor frío cuando 0.1 mg se gotearon sobre la lengua y frialdad en la boca, faringe y pecho con una duración de 30-60 minutos cuando se ingirieron 5-10 mg oralmente (Wei, E. T.; Seid, D. A. J. Pharm. Pharmacol. 1983, 35, 110). La inhibición o reversión del comportamiento de sacudidas inducido por la icilina en roedores proporciona evidencia para la utilidad de los antagonistas de TRPM8 de la Fórmula (I) en el tratamiento o prevención de una enfermedad, síndrome, trastorno, o afección en un sujeto en el cual la enfermedad, síndrome, trastorno o afección se afecta por la modulación de los receptores de TRPM8.
EJEMPLO 3A Inhibición de los escalofríos del "perro mojado" inducidos por la icilina en ratas Ratas machos Sprague Dawley (220-450 g, Charles River Labs, n= 6-9/ tratamiento) se usaron para evaluar la capacidad de los compuestos seleccionados de la Fórmula (I) para bloquear los escalofríos de "perro mojado" (WDS) inducidos por la icilina. Los compuestos de la Fórmula (I) se administraron en un vehículo adecuado, tal como hidroxipropil- -ciclodextrina (??ß??), metocelulosa, 10 % Solutol, o H20, o similares, por la ruta adecuada, i.p. o p.o., 30 - 120 minutos antes de la icilina. La icilina se administró en PEG-400 o solutol 10 % /H20, a 1.0 o 3.0 mg/kg, i.p. y se contaron los escalofríos de "perro-mojado" espontáneos a los 10-20 minutos después de administrada la icilina. Los resultados se presentan como un porcentaje de inhibición de los escalofríos, que se calculó como [1-(conteo de WDS con el compuesto de prueba/conteo de WDS en el vehículo)] x 100.
EJEMPLO 3B Inversión del comportamiento inducido por icilina en ratas Ratas machos Sprague Dawley (225-450 g, Charles River Labs, n= 4-6/ tratamiento) se usaron para evaluar la capacidad de los compuestos seleccionados de la Fórmula (I) para invertir los escalofríos de "perro mojado" inducidos por la icilina. La icilina se administró en PEG-400 o solutol 10 % /H20, a 1.0 o 3.0 mg/kg, i.p. y se contaron los escalofríos de "perro-mojado" (WDS) espontáneos a los 10-20 minutos después de administrada la icilina. Los animales que mostraron 10 o más sacudidas se aleatorizaron en los grupos de tratamiento y se les administró inmediatamente los compuestos de la Fórmula (I) en un vehículo adecuado, tal como hidroxipropil-ß- ciclodextrina (HP ß CD), metocelulosa, 10 % Solutol, o H20, o similares, y por la ruta adecuada, tal como i.p. o p.o. Las "sacudidas de "perro mojado" espontáneas se contaron 60-70 minutos después de la administración del compuesto. Los resultados se presentan como un porcentaje de inhibición de los escalofríos, que se calculó como [1-(conteo de WDS con el compuesto de prueba/conteo de WDS en el vehículo)] x 100. El dato resultante se muestra en la Tabla 3.
TABLA 3 EJEMPLO 3C Cambio a la derecha de la curva de efecto de la dosis de icilina en ratas A ratas Sprague Dawley machos (200-400 g, Charles River Labs, n=6-9/ tratamiento) se administró icilina en un vehículo adecuado (por ejemplo, PEG-400, 10 % Solutol) a 0.1 - 30 mg/kg, i.p. Las "sacudidas de "perro mojado" espontáneas se contaron 10-20 minutos post-icilina para generar una curva dosis-efecto de icilina. Un compuesto de la presente invención se administró oralmente en hidroxipropil-3-ciclodextrina 60 minutos antes del reto con icilina para evaluar la capacidad del compuesto para inhibir las sacudidas de "perro mojado" espontáneas (WDS) producidas por un intervalo de dosis de icilina. La ED5o de la curva dosis-efecto de icilina generada en presencia del antagonista de TRPM8 puede compararse con la generada en presencia de vehículo para determinar la magnitud del cambio a la derecha.
EJEMPLO 4 Modelo in vivo de dolor inflamatorio subagudo: hiperalqesia inducida por carragenina La inyección intraplantar de carragenina en la pata trasera de ratas causa una fuerte respuesta inflamatoria aguda caracterizada por enrojecimiento, hinchamiento e hipersensibilidad de la pata a estímulos térmicos y mecánicos típicamente con picos a las 3-6 horas después de la aplicación y persiste durante 12-24 horas.
EJEMPLO 4A Hipersensibilidad al calor radiante inducida por carragenina en rata Para evaluar el efecto de los compuestos de prueba de la Fórmula (I) en la hiperalgesia inflamatoria, las latencias de respuesta al calor radiante se evaluaron 3 horas después de la inyección intraplantar de carragenina (Lambda, Tipo IV, 200 ul) en una sola pata trasera en ratas Sprague-Dawley machos. El compuesto de prueba se administró 2 horas antes de o 1 hora después de la inyección de carragenina. El propósito fue determinar si el compuesto podía prevenir o retardar la hipersensibilidad asociada con este inflamogeno. Las latencias de respuesta térmica de iniciales se determinaron antes de cualquier tratamiento y otra vez 3 horas después de la inyección de carragenina. El porcentaje de inversión de la hiperalgesia en relación con el tratamiento con el vehículo (%R) se calculó para los dos paradigmas de tratamiento con el compuesto de acuerdo con la siguiente fórmula.
%R = (Latencia post compuesto - Latencia post vehículo)/ ((Latencia inicial - Latencia post vehículo) x 100 % EJEMPLO 5 Modelo in vivo para dolor inflamatorio crónico: hiperalgesia inducida-adyuvante completo de Freund (CFA) La inyección intraplantar de adyuvante completo de Freund (CFA) en roedores resulta en una reacción inflamatoria de larga duración, caracterizada por una hipersensibilidad pronunciada a los estímulos térmicos y mecánicos. Esta hipersensibilidad tiene picos entre 24-72 horas después de la inyección y puede durar por varias semanas. Para evaluar si los compuestos de prueba de la Fórmula (I) invierten la hipersensibilidad establecida, una inyección intraplantar de 100 µ? de CFA (suspendida 1 : 1 en una emulsión de solución salina y Mycobacteríum tuberculosis atenuada caliente en aceite mineral) puede inyectarse en una sola pata trasera de ratas Sprague-Dawley (típicamente macho en un intervalo de 150-350 g). Este paradigma se puede conducir, además, con un régimen de dosificación múltiple o una dosificación profiláctica diseñado para alterar el curso del desarrollo de la hiperalgesia. Esta prueba predice el efecto analgésico, anti- alodínico y antihiperalgésico de numerosos agentes clínicos efectivos, que incluyen acetaminofeno, NSAID tal como aspirina e ibuprofeno, y opioides, tal como morfina.
EJEMPLO 5A Hipersensibilidad al calor radiante inducida por CFA Cada rata se colocó en una cámara de prueba en una superficie de vidrio caliente y se dejó aclimatar por aproximadamente 10 minutos. Un estímulo térmico radiante (haz de luz) se orienta después a través del vidrio sobre la superficie plantar de cada pata trasera por turno. El estímulo térmico se corta automáticamente por un relé fotoeléctrico cuando la pata se mueve o cuando se alcanza el tiempo de corte (20 segundos para el calor radiante a -5 Amps). Una latencia de respuesta inicial (valores iniciales) para el estímulo térmico se registra para cada animal antes de la inyección de CFA. Veinticuatro horas después de la inyección intraplantar de CFA, la latencia de respuesta del animal al estímulo térmico se re-evaluó y se comparó al tiempo de respuesta inicial de los animales. Solamente las ratas que exhiben al menos un 25 % de reducción en la latencia de respuesta (es decir, hiperalgesia) se incluyeron en los análisis posteriores. Inmediatamente después de la evaluación de la latencia post-CFA, el compuesto de prueba o vehículo (usualmente Solutol, hidroxipropil metilcelulosa, hidroxipropil beta-ciclodextrina o PEG-400) se administró i.p. o p.o. a las ratas. Las latencias de abandono al tratamiento post-compuesto se evaluaron a intervalos de tiempo fijos, típicamente 30, 60 y 120 minutos. El porcentaje de inversión (%R) de la hipersensibilidad se calculó de acuerdo con la siguiente fórmula: % Inversión = (respuesta tratamiento-respuesta CFA)/(respuesta inicial- respuesta CFA) x 100.
EJEMPLO 5B Hipersensibilidad al frío en la pata inducida por CFA Antes de la inyección intraplantar con CFA, los ratones o ratas se colocaron individuamente en cámaras de observación elevadas con pisos de malla de alambre. A través del piso de malla una serie de tres aplicaciones de acetona (0.04 -0.10 ml/aplicación) se roció en la parte inferior de la pata por medio del uso de un dispositivo de jeringa multidosis. Una respuesta positiva se manifiesta por el retiro abrupto y lamido de la pata. La duración acumulativa del lamido se registra para cada uno de los tres ensayos, los que se promedian después para dar la respuesta del individuo. Veinticuatro horas después de la inyección con CFA, las duraciones de lamida por acetona se elevaron marcadamente, lo que implica una hipersensibilidad al enfriamiento. Los compuestos de prueba de la Fórmula (I) pueden evaluarse para su capacidad para retornar las duraciones de lamida de la pata provocados por acetona a los niveles pre-CFA (típicamente cerca de cero) después de la administración sistémica. El porcentaje de inhibición se calculó como sigue %inhibic¡ón = [1 -(duración de la lamida tratamiento/ duración de la lamida vehículo)] x 100.
EJEMPLO 6 Modelos de dolor visceral irritante abdominal inducido químicamente Un irritante químico (tal como ácido acético, caolín, bradikinina, fenil-p-(benzo) quinina, bromo-acetilcolina, o zimosan) se inyecta en los ratones intraperitonealmente, y causa una contracción de la musculatura abdominal, que se caracteriza por una elongación del cuerpo extendiéndose a través de las extremidades traseras. El número de esas respuestas se cuantifica y se reduce por pretratamiento de agentes analgésicos, y se forman así las bases para una prueba de tamizado (Collier, H. O. y otros, Brit. J. Pharmacol. Chemother. 1968, 32(2): 295-310). Este tipo de prueba irritante abdominal se usó para predecir el efecto analgésico de numerosos agentes clínicamente efectivos, la potencia de éstos en la prueba irritante abdominal iguala la magnitud de la dosis necesaria para aliviar el dolor clínico. Estos agentes incluyen acetaminofeno, NSAID tal como aspirina e ibuprofeno, opioides, tales como morfina y codeína, y otros analgésicos de acción central, tal como tramadol.
Una modificación del modelo irritante abdominal inducido químicamente de dolor visceral es pretratar a los animales con agentes conocidos por inducir respuestas inflamatorias después de la inyección ¡ntraperitoneal (tal como LPS, zimosan, o tioglicolato). Una dosis intraperitoneal pequeña de tal inflamogeno, administrada horas o días antes del reto con el irritante químico agudo, demostró aumentar el número de contracciones abdominales observadas (Ribeiro, R. A. y otros, Pat Eur. J. Pharmacol. 2000, 387(1), 1 1 -8). Aunque algunos agentes analgésicos son efectivos para mitigar la nocicepción visceroquímica aguda, otros, particularmente los que dependen de la inducción del receptor, son más efectivos para prevenir o invertir la mejora de las respuestas del comportamiento causadas por un estímulo inflamatorio precondicionado. Debido a la regulación ascendente del receptor TRPM8 en la inflamación, los antagonistas de TRPM8 que son efectivos para reducir el número medio de contracciones se predijeron para proporcionar acción analgésica en uso clínico humano.
La capacidad de los compuesto de la Fórmula (I) para mitigar las contracciones abdominales inducidas por el irritante químico después de un estímulo inflamatorio precondicionado se puede estudiar como sigue. Tioglicolato (3 %, p/v, 2-3 mi i.p.) se inyectó en ratones CD1 machos (20-40 g, Charles River Labs), a un volumen de dosificación máximo de 80 mi/ kg, para inducir inflamación peritoneal. Después de un período de pre-inflamación de veinticuatro horas estos ratones se dosificaron oralmente con los compuestos de la Fórmula (I) (30 mg/kg; n=10) o vehículo (HPMC con 2 % Tween80; n=9) y después una hora más tarde se sometieron a un reto con irritante abdominal de ácido acético (1 %, 10 ml/ kg, i.p.). Inmediatamente después de la inyección de ácido acético, los ratones se colocaron individualmente en campanas de vidrio (aproximadamente 15 cm de diámetro) para contar las contracciones abdominales durante los próximos 15 minutos. El número total de contracciones abdominales se resumió para cada grupo de tratamiento y se empleó en la siguiente fórmula para calcular el porcentaje de inhibición %l = [1 -(contracciones compuesto de prueba / contracciones vehículo)] x 100.
EJEMPLO 7 Modelos in vivo de dolor neuropático El nervio ciático es la inervación sensorimotor principal de pata y pie (trasero). La lesión al nervio ciático o sus nervios espinales constituyentes frecuentemente resultan en comportamiento relacionado con el dolor. En ratas y ratones, la ligadura apretada del nervio espinal L5 con sutura de seda, ligadura apretada parcial del nervio ciático con sutura de seda o ligadura floja del nervio ciático con sutura de gut crómico cada uno resulta en comportamientos reminiscentes de dolor neuropático en humanos. Estas lesiones (uno por animal) se realizaron quirúrgicamente en roedores anestesiados. Ambas lesiones del nervio espinal y nervio ciático resultan en alodinia, una respuesta dolorosa a estímulos normalmente inocuos, e hiperalgesia, una respuesta exagerada a estímulos normalmente nocivos. Es importante notar que estos dos comportamientos relacionados con el dolor se provocaron por procedimientos de prueba y que el uso normal de la pata (por ejemplo, caminar) no está relativamente comprometido, excepto el "espasmo" ocasional de la pata. Posteriormente a la cirugía, los comportamientos de los sujetos, tal como aseo, alimentación, y aumento de peso, son normales, excepto para la hipersensibilidad (como se definió anteriormente) de la pata afectada.
Adicionalmente a la inducción por el daño al nervio que resulta de trauma accidental o de procedimientos quirúrgicos, el dolor neuropático puede inducirse además por la diabetes (Fox, A. y otros, Pain 1999, 81, 307-316) o por tratamiento con agentes quimioterapéuticos, tal como paclitaxel o vincristina (Yaksh, T. L. y otros, Pain 2001 , 93, 69-76).
Los agentes que atenúan el dolor neuropático en la clínica también son efectivos en modelos de dolor neuropático en roedores. Estos agentes incluyen el aprobado recientemente Cymbalta (Duloxetine, lyengar, S. y otros, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 311, 576-584), morfina (Suzuki, R. y otros, Pain 1999, 80, 215-228), y gabapentina (Hunter, J. c. y otros, Pat Eur. J. Pharmacol. 1997, 324, 153-160). El antagonista del receptor TRPV1 TRPM8 dual BCTC redujo la hiperalgesia mecánica y la alodinia táctil en el modelo de dolor neuropático de roedores por lesión de constricción crónica (Pomonis, J. D. y otros, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 306, 387-393; Behrendt, H. y otros, Brít. J. Pharm. 2004, 141, 737). La alodinia por frío es un síntoma particularmente debilitante de afecciones de dolor neuropático (Jorum, E. y otros, Pain 2003, 101, 229-235). El efecto antialodínico de los compuestos de la Fórmula (I) en este modelo de roedor es predictivo del efecto clínico de estos nuevos agentes.
EJEMPLO 7A Modelo de dolor neuropático inducido por lesión por constricción crónica (CCI) - hipersensibilidad inducida por acetona Ratas Sprague Dawley machos (225-450 g; n=5-8/ tratamiento) se usaron para evaluar la capacidad de los compuestos seleccionados de la Fórmula (I) para invertir la hipersensibilidad al frío inducida por CCI. Cuatro ligaduras flojas de 4-0 gut crómico se colocaron quirúrgicamente alrededor del nervio ciático izquierdo bajo inhalación de anestesia como es descrito por Bennett y otros, (Bennett, G. J.; Xie, Y. K. Pain 1988, 33(1), 87-107). Catorce a 35 días después de la cirugía CCI, los sujetos se colocaron en cámaras de observación elevadas que comprendían pisos de malla de alambre y cinco aplicaciones de acetona (0.05 ml/aplicación separada aproximadamente 5 minutos) se rociaron sobre la superficie plantar de la pata por medio del uso de una jeringa multidosis. Un retiro abrupto o levantamiento de la pata se consideró una respuesta positiva. El número de respuestas positivas se registró para cada rata durante los cinco ensayos. Después de determinar el retiro de los valores iniciales, los compuestos de la Fórmula (I) se administraron en un vehículo adecuado, tal como hidroxipropil-ß- ciclodextrina (HP ß CD), metilcelulosa, Methocel, 10 % Solutol, o H2O, o similares, por la ruta adecuada, i.p. o p.o. El número de retiros se volvió a determinar 1 a 3 h después de la administración del compuesto. Los resultados se presentan como un porcentaje de inhibición de sacudidas, los que se calcularon para cada sujeto como [1-(retiros compuesto de prueba / retiros pre-prueba)] x 100 y después se promediaron por tratamiento. El dato resultante se muestra en la Tabla 4.
TABLA 4 EJEMPLO 7B Modelo de dolor neuropático inducido por lesión por constricción crónica (CCI) - hipersensibilidad inducida por placa fría En ratas SD machos (175- 325 g), cuatro ligaduras flojas de 4-0 gut crómico se colocaron quirúrgicamente alrededor del nervio ciático izquierdo bajo inhalación de anestesia como es descrito por Bennet y otros. (Bennett, G.J.; Xie, Y. K. Pain 1988, 33(1), 87-107). Siete a 21 días después de la cirugía de lesión por constricción crónica (CCI) de la ciática los sujetos se pueden colocar sobre un dispositivo de placa fría comercial enfriado por elementos peltier de manera que la temperatura de la superficie se mantiene a 1 °C. Cada sujeto puede someterse a un período de acondicionamiento de 6 minutos seguido por un período de evaluación de 3 minutos durante el cual se registra la duración total del levantamiento de la pata trasera. Este procedimiento se repite a varios intervalos antes de y después de la administración sistémica del fármaco. Los compuestos de la Fórmula (I) pueden evaluarse para su capacidad de retornar la duración del levantamiento de la pata otra vez a los niveles pre-lesión. La duración del levantamiento de la pata durante el período de prueba de 3 minutos seguido de la administración del compuesto de prueba se toma como el porcentaje de duración del levantamiento de la pata durante el período de prueba de 3 minutos antes del tratamiento con el compuesto de prueba.
EJEMPLO 7C Modelo de dolor neuropático inducido por lesión por constricción crónica (CCI) -alodinia mecánica (prueba de von Frev) En ratas SD machos (175- 325 g), cuatro ligaduras flojas de 4-0 gut crómico se colocaron quirúrgicamente alrededor del nervio ciático izquierdo bajo inhalación de anestesia como es descrito por Bennet y otros, (Bennett, G. J.; Xie, Y. K. Pain 1988, 33(1), 87-107). Siete a 21 días después de la cirugía de lesión por constricción crónica (CCI) del ciático, los sujetos pueden colocarse sobre una armazón elevada de cámaras de plexigas con piso de malla de alambre u otro tipo de piso perforado. La medición de la alodinia mecánica se puede realizar por medio del uso de los pelos de von Frey (Semmes-Weinstein Monofilaments, Stoelting Co., IL), en donde las ratas pueden habituarse a las jaulas con fondo de malla de alambre antes de iniciar el experimento. La alodinia estática se puede probar en las ratas silvestres al tocar la superficie plantar de la pata trasera con pelos de von Frey en un orden de fuerza ascendente (1.2, 1.5, 2.0, 3.6, 5.5, 8.5, 12, 15, 29 y 76 g) por hasta 6 s o hasta que la rata responda retirando la pata. La cantidad inferior de fuerza necesaria para provocar una respuesta puede registrarse como el umbral de retirada en log g. Este procedimiento se repite a varios intervalos antes de y después de la administración sistémica del fármaco. Los compuestos de la Fórmula (I) pueden evaluarse por su capacidad de retornar la fuerza umbral, que provoca el retroceso de la pata a niveles pre-lesión.
EJEMPLO 8 Modelos de piresis / antipiresis-inducida por agentes inflamatorios Los compuestos de la Fórmula (I) pueden probarse en modelos animales de piresis, de acuerdo con los métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos por Kozak y otros, (Kozak, W.; Fraifeld, V. Front. Biosci. 2004, 9, 3339-55). La fiebre es un acompañamiento frecuente de la enfermedad inflamatoria. Los modelos animales usan las propiedades piréticas de la levadura y otros agentes inflamatorios, al inyectar una suspensión de levadura u otro agente subcutáneamente (Tomazetti, J. y otros, J. Neurosci. Methods 2005, 747(1), 29-35); Van Miert, A. S.; Van Duin, C. T. Pat Eur. J. Pharmacol. 1977, 44(3), 197-204). Por ejemplo, ratas Wistar machos (75-100 g) pueden alojarse en grupos de cuatro en una jaula a temperatura controlada (23 ± 1 °C) con un ciclo 12 h luz: 12 h oscuridad (luces encendidas a 07:00 h) y con comida de laboratorio estándar y agua de la llave ad libitum. Todas las temperaturas medidas pueden tomarse entre 08:00 y 19:00 h. Cada animal puede usarse en solamente un estudio. La temperatura rectal (TR) puede medirse al insertar una sonda termistor lubricada (diámetro externo: 3 mm) 2.8 cm en el recto del animal. La sonda puede unirse a un dispositivo digital, el cual muestra la temperatura en la punta de la sonda con una precisión 0.1 °C y registra los valores en el tiempo. Inmediatamente después de medir la temperatura rectal basal inicial, los animales pueden inyectarse con levadura de panadería seca comercialmente disponible (Saccharomyces cerevisiae) suspendida en 0.9 % NaCI (0.05-0.25 g/kg, i.p.) libre de pirógeno o 0.9 % NaCI (10 ml/kg). Los cambios en la TR se pueden registrar cada hora hasta 12 h, y expresar como la diferencia del valor basal. Debido a que se reportó anteriormente que la manipulación y la tensión relacionada con la medición de la temperatura alteran la temperatura rectal, estos animales se pueden habituar a la inyección y procedimiento de medición por 2 días antes de que los experimentos se lleven a cabo. En estas sesiones, los animales se pueden someter al mismo procedimiento de medición de temperatura descrito anteriormente, y se pueden inyectar intraperitonealmente (i.p.) con 0.9 % NaCI (10 ml/kg).
Para evaluar el efecto de los compuestos antipiréticos potenciales en la temperatura rectal basal, los animales de estudio pueden tener sus TR medidas por 4 h, y después de la cuarta medición de la TR se pueden inyectar subcutáneamente (s.c.) con el vehículo (tal como 10 % Solutol en agua estéril 5 ml/kg) o compuestos de la Fórmula (I) preparados en el vehículo. La TR se puede registrar después cada hora hasta 8 h después de las inyecciones del compuesto. Para evaluar el efecto de los compuestos de la Fórmula (I) en la hipertermia inducida por la levadura panadera, los animales de estudio pueden tener sus TR medidas y después inyectarse con una dosis pirogénica de levadura de panadería (por ejemplo, 0.135 g/kg). Los cambios de TR se pueden registrar cada hora hasta por 4 h, cuando se administraron los agentes antipiréticos potenciales tal como los compuestos de la Fórmula (I). La temperatura rectal puede monitorearse después durante las siguientes 8 h. La temperatura rectal basal y los cambios en la temperatura rectal pueden expresarse como media ± S.E.M. de las diferencias de TR a las 07:00 h. Los datos pueden analizarse por análisis de varianza de dos factores (ANOVA), con el tiempo de mediciones tratado como dentro del factor sujeto, en dependencia del diseño experimental. Los análisis retrospectivos se pueden llevar a cabo por la prueba-F por efecto simple y la prueba de Student-Newman-Keuls, cuando sea adecuado. Un valor de P < 0.05 se consideraría estadísticamente significativo.
La modificación de la respuesta pirética posterior por agentes terapéuticos puede monitorearse por telemetría rectal u otras mediciones de la temperatura corporal. Muchos agentes clínicamente relevantes, tales como acetaminofeno, aspirina e ibuprofeno, reducen la fiebre en estos modelos. El efecto atipirético de los antagonistas de TRPM8, tal como los compuestos de la Fórmula (I), en estas pruebas sería, además, predictivo de su efecto clínico.
EJEMPLO 9 Modelo de artritis reumatoide inducida por CFA Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de artritis reumatoide de acuerdo con métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos por Nagakura y otros (Nagakura, Y. y otros, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 306(2), 490-7). Por ejemplo, la artritis se puede inducir por inoculación de CFA en las ratas (ratas Lewis machos 150-225 g; Charles River). En resumen, 100 mg de Mycobacterium Butyricum (Difco, Detroit, MI) se pueden mezclar perfectamente con 20 mi de aceite de parafina. Después, la mezcla se puede poner en autoclave por 20 min a 120 °C. Cada rata se puede inyectar en la pata derecha (para trasera) con la mezcla en un volumen 0.1 -mi bajo inhalación de anestesia. Las ratas que sirven como controles pueden inyectarse 0.1 mi de solución salina. El dolor y otros parámetros de desarrollo de la enfermedad se pueden medir en las ratas tratadas con CFA o solución salina justo antes de la inoculación y hasta 28 días post-inoculación. La medición de los parámetros de dolor se lleva cabo para los criterios de valoración mecánico y térmico (caliente o frío). La medición de la alodinia mecánica se puede realizar por medio del uso de los pelos de von Frey (Semmes-Weinstein Monofilaments, Stoelting Co., IL), en donde las ratas pueden habituarse a las jaulas con fondo de malla de alambre antes de iniciar el experimento. La alodinia estática se puede probar en las ratas silvestres al tocar la superficie plantar de la pata trasera con pelos de von Frey en un orden de fuerza ascendente (1.2, 1.5, 2.0, 3.6, 5.5, 8.5, 12, 15, 29 y 76 g) por hasta 6 s o hasta que la rata responda retirando la pata. La cantidad inferior de fuerza necesaria para provocar una respuesta puede registrarse como el umbral de retirada en log g. La hiperalgesia térmica se puede evaluar por medio del uso de la prueba de calor radiante, en donde una fuente de calor radiante móvil se puede localizar debajo de una superficie de vidrio sobre la que se coloca la rata. El haz de luz se dirige a la pata trasera, y las latencias de la retirada de la pata se definen como el tiempo que toma para que la rata quite su pata trasera de la fuente de calor. La medición de hiperalgesia articular se puede realizar por una modificación del método previamente reportado (Rupniak, N. M. J. y otros, Pain 1997, 71, 89-97). El torso de cada rata se puede se puede sostener por detrás con la palma izquierda, y la flexión y extensión (uno tras otro y cinco veces en cada dirección) de tobillo dentro de sus límites de intervalo de movimiento se puede realizar con los dedos de la mano derecha. El número total de vocalizaciones emitidas después de la manipulación (la flexión y extensión, cinco veces en cada dirección) se pueden registrar para cada pata (la puntuación máxima es 10 para cada pata).
La puntuación de movilidad se puede realizar al modificar la escala de evaluación reportada por Butler y otros. (Butler, S.H. y otros, Pain 1992, 48, 73-81): puntuación 6, camina normalmente; puntuación 5, camina teniendo cuidado de la pata trasera ipsilateral (apoya la pata trasera ¡psilateral completamente en el piso); puntuación 4, camina teniendo cuidado de la pata trasera ipsilateral (apoya solamente el dedo de la pata trasera ipsilateral en el piso); puntuación 3, camina teniendo cuidado de ambas patas traseras (apoya la pata trasera contralateral completamente en el piso); puntuación 2, camina teniendo cuidado de ambas patas traseras (apoya solamente el dedo de la pata trasera contralateral en el piso); puntuación 1 , se arrastra solamente por medio del uso de las patas anteriores; y puntuación 0, no se mueve. El volumen de la pata se puede medir por el volumen de desplazamiento de la solución electrólito en un dispositivo pletismómetro comercialmente disponible. La pata trasera se puede sumergir hasta la unión de la piel peluda, y el volumen se puede leer en una pantalla digital. La puntuación de la rigidez de la articulación se puede realizar como sigue: el cuerpo de las ratas se puede sostener por detrás con la palma izquierda, y la flexión y extensión (una vez en cada dirección) del tobillo dentro de sus límites de intervalo de movimiento se puede realizar con los dedos de la mano derecha. Se puede confirmar de antemano que no hay restricción del movimiento de la articulación del tobillo en las manipulaciones de flexión y extensión en ratas no operadas, y la puntuación se puede realizar de acuerdo con la escala de evaluación reportada por Butler (Butler, S. H. y otros, Pain 1992, 48, 73-81): puntuación 2, hay restricciones en todo el intervalo de movimiento del tobillo en la flexión y extensión; puntuación 1 , hay una restricción en todo el intervalo de movimiento del tobillo en la flexión o extensión; y puntuación 0, sin restricción. Las mediciones para el volumen de la pata y rigidez de las articulaciones se puede llevar a cabo para las dos patas traseras.
Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden evaluar para la eficacia antihiperalgésica como sigue: treinta y dos ratas (8 ratas por dosis y cuatro dosis por compuesto) que se tratan con el CFA y otras ocho ratas de control no operadas se pueden usar para cada evaluación del fármaco. Los efectos analgésicos se pueden evaluar el día 9 post-inoculación, cuando la alodinia mecánica, hiperalgesia térmica, hiperalgesia articular, y rigidez de las articulaciones en la pata ipsilateral alcanzó casi el máximo, aunque los parámetros en la pata contralateral cambiaron sólo ligeramente y la alteración sistémica mostrada por el cambio de la puntuación de movilidad es menor. El día antes de la evaluación, se puede medir el peso corporal, alodinia mecánica, hiperalgesia térmica, e hiperalgesia articular para las 32 ratas que se usaron para la evaluación del compuesto. Las ratas se repartieron por cuatro grupos (ocho ratas por grupo) de manera que las diferencias en los promedios de esos parámetros entre los grupos se hacen pequeñas. Todas las evaluaciones del efecto analgésico y observaciones del comportamiento se pueden llevar a cabo por el observador que no conoce el tratamiento con el fármaco.
Los datos se expresan como la media +/- S.E.M. Las curvas tiempo-curso para la alodinia mecánica, hiperalgesia térmica, hiperalgesia articular, peso corporal, y volumen de la pata pueden someterse a análisis de varianza de dos factores de las mediciones repetidas con prueba retrospectiva. En los experimentos para la evaluación de los compuestos de la Fórmula (I), la diferencia en las puntuaciones entre los grupos de control de ratas no operadas y tratados con vehículo se puede analizar por la prueba t de Student para confirmar los cambios significativos en los parámetros de dolor en la pata ipsilateral. Los efectos analgésicos se pueden analizar por la prueba t de Dunnett y, en cada caso, los grupos tratados con el fármaco pueden compararse con el grupo tratado con el vehículo. En cada análisis estadístico la comparación se puede realizar para las patas en el lado correspondiente. P < 0.05 se considera estadísticamente significativo. En este modelo los analgésicos de acción central morfina y tramadol aliviaron completamente el dolor, mientras que los NSAID, indometacina y diclofenaco son parcialmente efectivos, lo que evidencia la capacidad de predicción clínica del modelo. El efecto analgésico de los compuestos de la Fórmula (I) en esta prueba pudieran predecir su utilidad clínica en el tratamiento de la artritis.
EJEMPL0 10 Modelo in vivo para la artritis: hiperalgesia articular de la rodilla inducida por inflamogenos Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de osteoartritis, de acuerdo con los métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos por Sluka y otros. (Sluka, K. A.; Westlund, K. N. Pain 1993, 55(3), 367-77). Por ejemplo, ratas Sprague-Dawley machos (Harían, Indianapolis, IN), que pesan de 225 a 350 g, se pueden anestesiar brevemente con halotano vaporizado y después inyectar una mezcla de 3 % carragenina y 3 % caolín (100 µ? en 0.9 % solución salina estéril) en la cavidad articular de una rodilla. Después de la inyección los animales se regresan a sus jaulas hasta el momento de la prueba. Para probar el comportamiento, los animales se colocan en jaulas de plástico claro individuales en la parte superior de una superficie de malla de alambre elevada que restringió el movimiento. Los animales se dejan aclimatar por aproximadamente 1 hora antes de la prueba. Los filamentos de Von Frey, como se describió anteriormente, se pueden usar después para probar la mejora en las respuestas a estímulos mecánicos. Los filamentos se pueden aplicar sucesivamente a través de la malla de alambre perpendicularmente a la superficie plantar entre las almohadillas de la tercera y cuarta falanges. El umbral de respuesta a los estímulos mecánicos se puede determinar antes de la inflamación de la articulación de la rodilla; 4 horas después de la inflamación para confirmar el desarrollo de la hiperalgesia; inmediatamente después de la administración del compuesto de prueba tal como los de la Fórmula (I) es decir, 5 horas después de la inflamación; y a las 8, 12, y 24 horas después de la inflamación.
La prueba de Kruskal-Wallis, una prueba no paramétrica, puede usarse para analizar los efectos en la frecuencia, intensidad, y grupo para la respuesta a estímulos mecánicos en el inicio, 4 horas después de la inflamación, y después del tratamiento con el compuesto (5 horas, 8 horas, 12 horas, y 24 horas después de la inflamación). Otra prueba retrospectiva entre los grupos se puede ejecutar por medio del uso de la prueba de rangos signados de Mann-Whitney. Los datos se pueden presentar como la media con percentiles 25 y 75. La significación es P < 05.
Además, el modo de andar del animal u otro comportamiento relacionado con el dolor puede anotarse como la medición dependiente del efecto doloroso de la artritis en la actividad de los animales (Hallas, B.¡ Lehman, S.; Bosak, A. y otros, J. Am. Osteopath. Assoc. 1997, 97(4), 207-14). El efecto del fármaco de prueba en el comportamiento normal del animal se puede cuantificar de cero, que significa sin respuesta, a tres para la discapacidad. El tratamiento con el analgésico efectivo incluye la indometacina clínicamente usada (Motta, A. F. y otros, Life Sci. 2003, 73(15), 1995-2004). Así, el beneficio de los compuestos de la Fórmula (I) en este modelo pronosticaría su relevancia clínica.
EJEMPLO 11 Modelos de dolor de cáncer de los huesos inducido por células de sarcoma Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de dolor de cáncer de los huesos de acuerdo con métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos en la literatura científica (El Mouedden, M.; Meert, T. F. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005, 82(1), 109-19; Ghilardi, J. R. y otros, J. Neurosci. 2005, 25(12), 3126-31). En la preparación para la inoculación de la célula e inducción del tumor, las células osteolíticas de sarcoma murino (NCTC 2472, American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, MD, Estados Unidos) se pueden cultivar en medio NCTC 135 (Invitrogen) que contiene 10 % suero de caballo (Gibco) y con pases 2 veces semanalmente de acuerdo con las directrices de ATCC. Para su administración las células se pueden desprender por raspado y después centrifugar a 1000x g. Las bolillas se pueden suspender en medio NCTC 135 fresco (2.5x106 célula/20 µ?) y después se usan para la inoculación intramedular en el fémur. Se pueden usar ratones C3H/HeNCrl machos (25-30 g, Charles River Labs) en estos experimentos. Después de la inducción de anestesia general con xilacina (10 mg/kg i.p.) y ketamina (100 mg/kg i.p.) la pata trasera izquierda se afeita y desinfecta con povidona-yodo seguido por 70 % etanol. Después, se puede realizar una incisión superficial de 1 cm sobre la rodilla con revestimiento de la rótula. El ligamento rotular puede cortarse, y exponer los cóndilos del fémur distal. Una aguja de calibre 23 puede insertarse al nivel de escotadura intercondílea y el canal intramedular del fémur para crear una cavidad para la inyección de las células. Veinte microlitros del medio (animales simulados) o medio que contiene células tumorales (aproximadamente 2.5x106 células) pueden inyectarse después en la cavidad ósea por medio del uso de una jeringa. Para evitar la fuga de células fuera del hueso, el sitio de inyección se puede sellar con acrílico dental y la herida se cierra con puntadas en la piel.
Los comportamientos de dolor se pueden evaluar en grupos separados (n =6) de ratones de tumor óseo y simulados con hiperalgesia confirmada como se evaluó por el comportamiento de levantamiento espontáneo. A los animales se les prueba el comportamiento durante un período de 3 semanas antes de y después de la inoculación del tumor. El peso corporal de los ratones se pueden registrar a través de todo el período experimental para ayudar a monitorear el estado general de salud. Para medir el levantamiento espontáneo, los animales pueden acostumbrarse en un cilindro de acrílico transparente de 20 cm de diámetro colocado sobre una superficie horizontal y, después de eso, se observan durante 4 min para el comportamiento de levantamiento espontáneo de la pata trasera izquierda. Después de la evaluación del comportamiento de levantamiento espontáneo, los animales se pueden colocar inmediatamente en una varilla rotatoria para ratones (por ejemplo, ENV-575M\, Med Associates Inc., GA, Estados Unidos) a una velocidad de 16 rpm por 2 min, en donde el uso de las extremidades durante la ambulación forzada se anota: 4=normal; 3=cojea; 2=no uso de la pata trasera izquierda parcial; 1=no uso de la pata trasera izquierda sustancial; 0=no uso de la pata trasera izquierda. La evaluación de la alodinia por frío se puede realizar al exponer la pata trasera ipsilateral del ratón a 5 aplicaciones de acetona repetidas (20 µ?) y se cuantifica la frecuencia levantamiento/lamido y/o duración. La evaluación post-mortem de la destrucción del hueso se puede evaluar por procesamiento ACT seguido por la exploración por medio del uso de un sistema tal como el sistema microtomográfico Skyscan 1076 para la toma de imágenes de animales pequeños (Skyscan 1076\, Skyscan, Aartselaar, Bélgica). Los parámetros histomorfométricos de la destrucción del hueso medidos se pueden correlacionar posteriormente con los criterios de valoración del comportamiento.
Los efectos antihiperalgésicos, antialodínicos y modificadores de la enfermedad de los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en este modelo murino de dolor de cáncer de hueso en grupos separados (n =6 por grupo de dosis). Se puede evaluar el comportamiento de los animales con hiperalgesia confirmada, como se evaluó por el levantamiento provocado por la acetona o espontáneo, por ejemplo, los días 15 y 22 después de la inoculación en el fémur distal del tumor antes y 1 h después de la administración sistémica del vehículo (por ejemplo, 20 % HPbCD en agua estéril) o los compuestos de la Fórmula (I). El análisis estadístico se puede realizar por ANOVA de un factor para comparar las mediciones del comportamiento y los parámetros óseos entre los grupos experimentales. Para comparar las mediciones del comportamiento y los parámetros óseos entre animales que portan el tumor y los simulados, se puede usar una prueba U de Mann-Whitney. Los resultados se consideran estadísticamente significativos a P <0.05 (dos vías). Los datos se expresan como la media+/-S.E.M.
El cáncer de hueso causa dolor intenso en humanos, imitados en modelos animales de dolor de cáncer de hueso en roedores tal como el descrito anteriormente. Los tratamientos analgésicos que son efectivos en este modelo incluyen inhibidores de COX-2 (Sabino, M. A., Ghilardi, J.R., Jongen, J. L. y otros, Cáncer Res. 2002, 62(24), 7343-9) y altas dosis de morfina (Luger, N.M. y otros, Pain 2002, 99(3), 397-406), agentes que se usan clínicamente para aliviar el dolor en pacientes que experimentan dolor de cáncer de hueso. Ya que este modelo imita estrechamente el estado de enfermedad en humanos, el hallazgo de que la alodinia por frío es un síntoma prominente (Lee, Seong y otros, Yonsei Med. J. 2005, 46(2), 252-9) soporta fuertemente el concepto que los antagonistas de TRPM8 de la presente invención proporcionarán alivio al dolor asociado con cáncer de hueso humano.
EJEMPL0 12 Modelos de tos inducidos por irritantes respiratoriosLos compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de actividad antitusígena, de acuerdo con métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos: Tanaka, M. y Maruyama, K. J. Pharmacol. Sci. 2005, 99(1 ), 77-82; Trevisani, M. y otros, Throax 2004, 59(9), 769-72; y Hall, E. y otros, J. Med. Microbiol. 1999, 48, 95-98. La prueba se realiza en cámaras transparentes ventiladas con un flujo de aire constante de 400 ml/min. El agente antitusígeno (ácido cítrico 0.25 M o capsaicina 30 mm) se puede nebulizar a través de un nebulizador miniultrasónico con una salida de 0.4 ml/min. La aparición de tos puede detectarse por medio de un micrófono tipo corbata y confirmarse por la postura característica del animal. Los sonidos de la tos se pueden registrar y almacenar digitalmente. Un observador a ciegas cuenta posteriormente el número de los esfuerzos de tos obtenidos. En algunos casos los animales pueden sensibilizarse por pre-exposición a ciertos agentes tal como la ovalbúmina. Un compuesto de prueba se puede administrar en el pico de la tos inducida por irritantes para evaluar los efectos antitusígenos del compuesto. Adicionalmente, los regímenes de dosificación profilácticos o múltiples se pueden usar para evaluar el compuesto de prueba para la modulación de la aparición y duración de la tos inducida por irritantes. Las variaciones de estas pruebas predicen los efectos antitusígenos de los agentes clínicos efectivos, que incluyen los antagonistas de NMDA tales como dextrorfano y dextrometorfano, opioides tal como la codeína, agonistas beta 2 tal como el salbutamol y antimuscarínicos tal como ipratropio (Bolser, D. C. y otros, Pat Eur. J. Pharmacol. 1995, 277(2-3), 159-64; Braga, P. c. Drugs Exper. Clin. Res. 1994, 20,199-203). La acción antitusígena del mentol en conejillo de indias y humanos (Eccles, R. Curr. Allergy Asthma Rep. 2003, 3(3), 210-4; Laude, E. A. y otros, Pulm. Pharmacol. 1994, 7(3), 179-84; Morice, A. H. y otros, Thorax 1994, 49(10), 1024-6) es predictiva de la utilidad clínica de los compuestos de la Fórmula (I) como agentes antitusígenos.
EJEMPLO 13 Modelos de prurito, dermatitis de contacto, eczema y otras manifestaciones de alergia dérmica, hipersensibilidad v/o inflamación inducidos por irritantes químicos Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de dermatitis de contacto o prurito, de acuerdo con métodos previamente documentados y validados, tal como Jos descritos en la literatura científica (Saint-Mezard, P. y otros, Eur. J. Dermatol. 2004, 14(b), 284-95; Thomsen, J. S. y otros, J. Exp. Dermatol. 2002, 11(4), 370-5; Weisshaar, E. y otros, Arch. Dermatol. Res. 1998, 290(6), 306-11 ; Wille, J. J. y otros, Skin Pharmacol. Appl. Skin Physiol. 1999, 72(1-2), 18-27). Los ratones (o especies tales como conejillo de indias o rata) se pueden sensibilizar con 25 mi de 0.5 % solución de dinitrofluorobenceno (DNFB se diluyó 4:1 en acetona: aceite de oliva inmediatamente antes de la aplicación u otros haptenos, tales como cloruro de 12-miristato-13 acetato, picril, oxazolona, capsaicina, ácido araquidónico, ácido láctico, ácido trans-retinoico o laurilsulfato sódico) pintada en la piel dorsal afeitada o no tratados (controles). Cinco días después, 10 mi de 0.2 % DNFB (una dosis no irritante) se puede aplicar por ambos lados de la oreja derecha y la misma cantidad de solvente solo sobre la oreja izquierda. El grosor de la oreja se puede monitorear diariamente por medio del uso de un calibre. Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden administrar en el pico de la inflamación para evaluar la actividad anti-alérgica de los compuestos. Adicionalmente, los regímenes de dosificación profilácticos o múltiples se pueden usar para evaluar el compuesto de prueba para la modulación de la aparición y duración de la actividad anti-alergia. Las variaciones de estas pruebas pueden predecir la actividad anti-alergia y prurito de los agentes clínicos efectivos. La capacidad de estos modeles para predecir el efecto terapéutico de los compuestos en las afecciones dérmicas humanas se soporta por la capacidad de la serotonina de las especies cruzadas para inducir el prurito (Weisshaar, E.; Gollnick, H. Skin Therapy Lett. 2000, 5(5), 1-2,5). Además, la propiedad de sensibilidad al contacto de los fármacos de importancia comercial y la capacidad de los moduladores del canal iónico para prevenir y tratar la sensibilización de la piel en estos modelos (Kydonieus, A. y otros, Los procedimientos de International Symposium on Controlled Reléase of Bioactive Materials 24to: 23-24, 1997) demostró la utilidad terapéutico de los compuestos de la Fórmula (I) en la sensibilización dérmica.
EJEMPL0 14 Modelos de rinitis v otras manifestaciones de hipersensibilidad nasal v/o inflamación inducidos por irritantes químicos Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de rinitis, de acuerdo con métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos en la literatura científica (Hirayama, Y. y otros, Eur. J. Pharmacol. 2003, 467(1-3), 197-203, Magyar, T. y otros, Vaccine 2002, 20(13-14), 1797-802, Tiniakov, R.L. y otros, J. Appl. Physiol. 2003, 94(5), 1821-8). Las pruebas se pueden realizar en ratón, conejillo de indias, perro o humano en respuesta al reto intranasal con uno o más irritantes tales como aire frío, capsaicina, bradikinina, histamina, polen, sulfato de dextrano, 2,4-tolileno diisocianato, Bordetella bronchiseptica, Pasteurella multodica o ácido acético. En algunos casos los animales se pueden sensibilizar por pre-exposición a ciertos agentes que incluyen, pero no se limitan a, artemisa o ovalbúmina. Antes de o después de la administración del irritante, el sujeto de prueba puede recibir, respectivamente, la administración profiláctica o terapéutica una o más veces de los compuestos de la Fórmula (I), o control vehículo, por la ruta enteral o parenteral. Las diferencias significativas indicativas de rinitis nasal o sensibilización para los sujetos tratados con el compuesto de prueba comparados con sujetos tratados con el vehículo se pueden tomar como evidencia de actividad anti-rinitis. Las variables independientes incluyen dosis, frecuencia y ruta de administración, intervalo de tiempo entre la administración profiláctica o terapéutica del compuesto de prueba y reto con irritantes así como genotipo sexual y no sexual del sujeto de prueba. La función íntima de la inflamación neurogénica en estos estados de hipersensibilidad demuestra que los compuestos de la Fórmula (I) insensibilizan o bloquean la sensibilización subyacentes a estos estados de enfermedad.
EJEMPLO 15 Modelos de ansiedad, trastorno de pánico y otras respuestas fóbicas o estresantes no adaptivas inducidos por conflictos Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de ansiedad, trastorno de pánicos y otras respuestas no adaptivas, de acuerdo con los métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos por Cryan y Holmes (Cryan, J.F., Holmes, A. Nat Rev. Drug Discov. 2005, 4(9), 775-90) o Braw y otros, (Braw, Y. y otros, Behav. Brain Res. 2006, 167, 261-269). Específicamente, para los estudios en ratas, pueden usarse los siguientes aparatos: una arena a campo abierto (62 cm x 62 cm) encerrada por paredes opacas (30 cm alto) y laberinto que consiste de dos brazos abiertos, 50 cm x 10 cm, y dos brazos cerrados, 50 cmx10 cm*40 cm con un techo abierto, dispuesto de manera que los dos brazos de cada tipo sean opuestos uno al otro. El laberinto se elevó a una altura de 70 cm. Las paredes de los brazos cerrados se hacen de Plexiglás negro, mientras que los pisos son de Plexiglás blanco. Las grabaciones en video se pueden analizar por medio del uso del sistema 'Observer' (Noldus Information Technology). Una rata sujeto se saca de su jaula hogar, se pesa y se coloca delicadamente en el centro de la arena a campo abierto. Se deja que la rata explore el campo abierto libremente al mismo tiempo que se graba en video su comportamiento por 5 min. Después de eso, ésta se transfirió al laberinto y se colocó en el centro, de frente a un brazo cerrado. El comportamiento de la rata puede grabarse en video nuevamente por 5 min, después de lo cual se regresa a su jaula hogar. El aparato se puede limpiar medio del uso de una solución de etanol al 70 % entre ratas.
Las mediciones a campo abierto y en laberinto se pueden agrupar en dos clases de comportamiento, básicamente 'comportamientos similares a la ansiedad' y 'actividad'. Las mediciones del comportamiento a campo abierto pueden incluir 1 ) mediciones de la ansiedad: % tiempo en el cuadro central, % número de entradas al cuadro central (del total de entradas al cuadro), % tiempo de congelación, latencia a la primera congelación (la congelación se anota cuando el sujeto está en un estado inmóvil por al menos 3 segundos; y 2) mediciones de la actividad: total de entradas a cuadros, número de incorporaciones (pararse sobre las dos patas traseras), latencia para la primera vez que se levanta en dos patas. Las mediciones en el laberinto pueden incluir 1) ansiedad: % tiempo en los brazos abiertos, % número de entradas a los brazos abiertos (del total de entradas), número de asomos de la cabeza desprotegida, latencia de entrar a los brazos abiertos; y 2) Actividad: total de entradas a todos los brazos. Los comportamientos similares a la ansiedad y actividad se pueden analizar por ANOVA de un factor en cada una de las mediciones, para cada una de las comparaciones entre-sujetos. Los análisis del laberinto se pueden realizar de un modo similar.
Las pruebas se pueden realizar, además, en ratón o rata, de este modo, para medir la evasión de otros estímulos ambientales aversivos tal como las pruebas anticonflicto de Geller o Vogel, la prueba luz/oscuridad y la prueba de la tabla con agujeros (ver Cryan, J. F.; Holmes, A. Nat. Rev. Drug Discov. 2005, 4(9), 775-90). Antes de la exposición ambiental, el sujeto de prueba puede recibir la administración profiláctica una o más veces de compuestos de la Fórmula (I), o vehículo control (por ejemplo, 10 % de solutol en agua estéril), por la ruta enteral o parenteral. Se puede medir el tiempo acumulativo o número de veces consumidos en el comportamiento aversivo. Las diferencias significativas en una o más de estas mediciones para los sujetos tratados con el compuesto de prueba comparados con los sujetos tratados con el vehículo se pueden tomar como evidencia de actividad ansiolítica. Debido a que estos modelos son farmacológicamente validados por la efectividad de los ansiolíticos clínicamente útiles (Cryan, J. F., Holmes, A. Nat Rev. Drug Discov. 2005, 4(9), 775-90), éstos serán útiles para la detección de compuestos ansiolíticos de la Fórmula (I).
EJEMPLO 16 Modelos de incontinencia urinaria de inducida por hipertrofia y presión de la vejiga Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en modelos animales de incontinencia urinaria de acuerdo con los métodos previamente documentados y validados, tal como los descritos en la literatura científica (Kaiser, S.; Plath, T. (Metagen Pharmaceuticals GmbH, Alemania patente DE 10215321); McMurray, G. y otros, Brit. J. Pharmacol. 2006, 147 Suppl 2, S62-79). TRPM8 se expresa en próstata humana, testículos, túbulos seminíferos, piel del escroto y vejiga inflamada (Stein, R. J. y otros, J. Urol. 2004, 172(3), 1175-8; Stein, R. J. y otros, J. Urol. 2004, 172(3), 1 175-8, ukerji y otros, BMC Urology 2006, 6,6). La excitación de los receptores TRPM8 a través del enfriamiento o la aplicación de mentol causa contracción en la vejiga y una disminución en el volumen umbral de micción (Tsukimi, Y., Mizuyachi, K. y otros, Urology 2005, 65(2), 406-10). Para evaluar los compuestos de la Fórmula (I) para la actividad de incontinencia urinaria potencial, las ratas Sprague-Dawley se implantaron quirúrgicamente con catéteres vesicales, lo que permite el suministro del fluido (típicamente solución salina) y el monitoreo de la presión (por medio del uso de un transductor de presión). Los registros de cistometría se pueden monitorear con un polígrafo para evaluar intervalo de evacuación, presión umbral, capacidad vesical, adaptabilidad vesical, y el número de contracciones espontáneas de la vejiga. Por ejemplo, el catéter vesical se puede conectar a una bomba de infusión Harvard, y la vejiga se perfunde toda la noche solución salina a 2 ml/h. La mañana siguiente el catéter vesical se puede unir (por medio del uso de un conector "T") a un transductor de presión Statham (Modelo P23Db) y a una bomba de infusión Harvard. Un vaso plástico unido a un transductor de desplazamiento de fuerza (Grass FT03) se puede colocar debajo de la jaula de la rata para recolectar y registrar el volumen de orina. La evaluación cistométrica de la función de la vejiga se puede iniciar por infusión de solución salina (20 ml/h) y después de la primera micción la infusión se mantiene por 20 min. Dos horas después del primer período de cistometría, las ratas se pueden dosificar oralmente con compuestos de la Fórmula (I) y una segunda cistometría se realizó entre 30 min y 4 h después de la administración del compuesto de prueba. El vehículo adecuado (por ejemplo, 10 % de solutol en agua estéril) se puede administrar similarmente a los grupos de ratas que sirvieron como controles y la cistometría se puede realizar en los mismos puntos de tiempo respectivos.
Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden evaluar además bajo condiciones de hipertrofia vesical e inestabilidad. Bajo anestesia, una ligadura de seda se aprieta alrededor de la uretra proximal de los roedores, lo que produce una obstrucción parcial de la salida y posterior desarrollo de la vejiga hipertrofiado dentro de 6-9 semanas (Woods, M. y otros, J. Urology 2001 , 766,1 142-47). Los registros de cistometría se pueden evaluar después como se describió anteriormente. Tales procedimientos preclínicos son sensibles a los compuestos que tienen utilidad clínica para el tratamiento de la incontinencia urinaria (Soulard, C. y otros, J. Pharmacol. Exp. Ther. 1992, 260(3), 1 152-8), y la actividad de los compuestos de la Fórmula (I) en este modelo sería predictivo de la utilidad clínica.
EJEMPLO 17 Modelo in vivo para estados de dolor central aumentados por el frío La lesión al cerebro o médula espinal, tal como el causado por trauma, interrupción del flujo sanguíneo o enfermedades neurodegenerativas precipitan, frecuentemente, una afección de dolor central. Los ejemplos de esas lesiones caracterizadas, en parte por una hipersensibilidad a estímulos fríos, incluyen la esclerosis múltiple ( orin, C. y otros, Clin. J. dolor 2002, 18(3), 191-5; Svendsen, K. b. y otros, Pain 2005, 114(3), 473-81), apoplejía o isquemia cerebral (Greenspan, J. d. y otros, Pain 2004, 109(3), 357-66) y lesión de la médula espinal (Defrín, R.; Ohry, A.; Blumen, N.; Urca, G. Pain 2001 , 89(2-3), 253-63; Defrín, R. y otros, Brain 2002, 125(PX 3), 501-10; Finnerup, N. b. y otros, Anesthesiology 2005, 102(5), 1023-30). Cada una de estas afecciones puede ser fácilmente modelada en animales para evaluar la capacidad de los compuestos de la Fórmula (I) para calmar el estado de hipersensibilidad. Por ejemplo, una lesión de la médula espinal (SCI) se puede realizar en ratas Sprague-Dawley adultas con un peso corporal de 150-200 g al momento de la cirugía (Erichsen y otros. Pain 2005, 116, 347-358). Las ratas se pueden anestesiar con hidrato de doral (300 mg/kg, i.p., Sigma, Estados Unidos) y un catéter se puede insertar en la vena yugular. Una incisión en la piel en la línea media se puede hacer después a lo largo de la espalda para exponer las vértebras T11-L2. Los animales se pueden posícionar debajo de un láser de ion argón sintonizable (Innova modelo 70, Coherent Láser Products División, CA, Estados Unidos) que opera a una longitud de onda de 514 nm con una potencia promedio de 0.17 W. La luz láser se puede dirigir dentro de un haz de luz delgado que cubre la vértebra T13 sola, la que se puede irradiar por 10 min. Inmediatamente antes de la irradiación, eritrosína B (Aldrich, 32.5 mg/kg se disolvió en 0.9 % solución salina) se puede inyectar intravenosamente a través del catéter de la yugular.
Debido al rápido metabolismo de la eritrosina B, la inyección puede repetirse después de 5 min para mantener las concentraciones en sangre adecuadas. Durante la irradiación, la temperatura del núcleo corporal se puede mantener a 37-38 °C con una almohadilla caliente. Después de la irradiación la herida se puede cerrar en capas y la piel se sutura junta.
Las ratas SCI se pueden probar rutinariamente con respecto a la presencia de comportamientos similares al dolor de 3-4 semanas después de la cirugía. El pelaje de los animales se puede afeitar al menos un día antes del examen del umbral de dolor cutáneo para evitar la sensibilización de los receptores de la piel. Durante la prueba las ratas se pueden sostener delicadamente en una posición derecha por el experimentador y el área de flanco y extremidades traseras se pueden examinar para la hipersensibilidad al estimulación sensorial. El día de la prueba con el fármaco, las ratas SCI se les puede administrar el fármaco de acuerdo con el programa experimental y se puede medir el transcurso del tiempo de los comportamientos similares al dolor. Para probar la presencia de alodinia por frío se puede rociar etil cloruro o acetona en la piel de los animales, frecuentemente aquellos que se determinó previamente ser sensibles a la estimulación mecánica por la prueba del filamento de von Frey. La respuesta posterior a la estimulación por frío se puede observar y clasificar de acuerdo con la siguiente escala: 0, respuesta no visible; 1 , respuesta localizada (movimiento de la piel) sin vocalización; 2, vocalización transitoria; 3, vocalización sostenida. El ANOVA de Kruskal Wallis por rangos se puede usar para analizar los efectos generales de los datos no paramétricos obtenidos en respuesta a la estimulación con frío seguido del pretratamiento con los compuestos de la Fórmula (I) o el vehículo.
EJEMPLO 18 Modelo in vivo para los escalofríos post-anestésicos El temblor post-anestésico espontáneo que se asemeja a los escalofríos es común durante la recuperación de la anestesia. Los riesgos para los pacientes postoperatorios incluyen un incremento en la velocidad metabólica de hasta 400 %, hipoxemia, dehiscencia de la herida, daño dental, y disrupcion de las reparaciones quirúrgicas delicadas. La etiología de temblor post-anestésico espontáneo se atribuye comúnmente a los escalofríos termorreguladores normales en respuesta a la hipotermia intraoperativa. En la mayoría de los salas de operación y de recuperación, los escalofríos se controlan por el uso de los humidificadores, mantas de calentamiento, e inhalación de oxígeno caliente humidificado. Sin embargo, el control farmacológico es una modalidad de tratamiento alternativa efectiva (Bhatnagar, S. y otros, Anesth. Intensive Care 2001 , 29(2), 149-54; Tsai, Y. C; Chu, K. S. Anesth. Analg. 2001 , 93(5), 1288-92). Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden evaluar para su capacidad de mitigar los sacudidas inducidas post-anestesia por medio del uso de modelos animales tales como los descritos por Nikki y otros, (Nikki, P.; Tammisto, T. Acta Anaesth. Scand. 1968, 72(3), 125-34) y Grahn (Grahn, D. A. y otros, J. Applied Physiology 1996, 81, 2547-2554). Por ejemplo, las ratas Wistar (machos, con un peso de 250-450 g) pueden ser quirúrgicamente implantadas con una serie de registro EEG/EMG para evaluar la actividad de temblor post-anestésico. Los electrodos de EEG se localizan bilateralmente 2 mm fuera de la línea media y adyacente a bregma y lamda. Después de un período de recuperación de una semana, el EEG frontal-occipital, EMG cruda, y las actividades EMG integradas, así como tres temperaturas (temperaturas de la piel, rectal, y del manto de agua durante la anestesia), y la temperatura ambiente postanestesia se pueden monitorear a través de todo el experimento por medio del uso de termopares cobre-constantino. Las señales EEG y EMG se pueden registrar en papel polígrafo (5 mm/s, polígrafo Grass modelo 7E) y, durante recuperación de la anestesia, el EEG se anota en la computadora en épocas de 10 segundos como sincronizado: amplitud alta (.100 pV), frecuencia baja (1-4 Hz dominado), características de actividad de sueño de ondas lentas (tipo SWS), o desincronizado: amplitud baja (75 µ?), frecuencia alta (5-15 Hz dominado), características de despertar y sueño con movimiento de ojos rápido (tipo W). La actividad EMG se puede cuantificar como el intervalo voltaje/tiempo sumado promediado al procesar la señal del EGM cruda a través de un integrador (Grass modelo 7P3, 0.5 s constante de tiempo). El día del experimento el animal se puede colocar en una caja de acrílico pequeña (15 x 15 x 15 cm) y exponer a la mezcla de un vapor-aire de halotano (4 % halotano). Inmediatamente después de la inducción de la anestesia, el animal se puede sacar del encierro y, posteriormente, se anestesia a través de un cono nasal. Después que cesa la anestesia se pueden evaluar dos etapas de recuperación: emergencia de la anestesia y restauración de la actividad del comportamiento (recuperación del comportamiento). La emergencia de la anestesia se puede definir como un incremento en la actividad del EMG tónica y un cambio en el EEG a partir de un patrón similar al SWS a un patrón similar al W. La recuperación del comportamiento ocurrió cuando el animal se levanta de una posición boca abajo e inicia movimientos coordinados. Los intervalos de tiempo desde que termina la anestesia a la emergencia y recuperación del comportamiento se puede medir en todos los animales. El dato de intervalo de tiempo puede someterse a análisis de varianza de mediciones repetidas y el método de Scheffe se puede emplear para probar las diferencias entre pares de medias.
EJEMPLO 19 Respuestas del vasopresor cardiovascular provocadas por frío Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden probar en animales y humanos para su capacidad de mitigar las respuestas del vasopresor cardiovascular provocadas por exposición al frío. El enfriamiento ambiental estacional se relaciona directamente con presión sanguínea elevada y un aumento de la incidencia de eventos coronarios en poblaciones humanas en todo el mundo (Barnett, A. G. y otros, J. Epidemiol. Community Heath 2005, 59, 551-557). La hipertensión pulmonar provocada por el frío y el agravamiento por el frío de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica son indicaciones clínicas susceptibles de agudizar la sensibilidad cardiopulmonar al frío (Mamo, P. y otros, Eur. Respiratory Review 2006, 75(101), 185; Acikel, M. y otros, Int. J. of Cardiol. 2004, 97, 187-192). La prueba clínica vasopresora al frío evalúa los cambios en la presión sanguínea (BP) y la percepción del dolor por frío durante un inmersión de 2-3 minutos de la mano en agua helada Esta prueba se puede usar para caracterizar los compuestos analgésicos (Koltzenberg, M. y otros, Pain 2006, 726(1-3), 165-74) y para evaluar la hipersensibilidad al frío (Desmeules, J. A. y otros, Arthrítis and Rheumatism 2003, 48(5), 1420-9). Los compuestos de la Fórmula (I) se pueden estudiar en un paradigma vasopresor al frío de ratas anestesiadas para determinar si el antagonismo de TRPM8 interferiría con la respuesta vasopresora de la presión sanguínea a la estimulación con frío de las patas delanteras. Las ratas Sprague-Dawley machos (300 -450 g) anestesiadas con pentobarbital sódico se instrumentaron con un catéter de la yugular y una cánula en la arteria carótida permanente conectada a un transductor de presión. El vehículo (por ejemplo, 20 % HPbCD en agua estéril) o compuesto de prueba se infunde (1 ml/kg) durante un minuto a través del catéter intravenoso. Diez minutos después, ambas extremidades anteriores se envuelven con hielo picado por 5 minutos. Alternativamente, el compuesto de prueba y los tratamientos con el vehículo pueden administrarse oralmente en un tiempo apropiado antes de las canulaciones quirúrgicas y el reto con frío. El porcentaje de cambios en presión arterial promedio en respuesta a este estímulo frío se calcularon para los pretratamientos con el vehículo y el compuesto de prueba. El porcentaje de inhibición atribuido al tratamiento con el compuesto de prueba se determinó después por medio del uso de la siguiente fórmula: % inhibición = [1- (% de cambio provocado por frío en compuesto de prueba post BP / % de cambio provocado por frío en vehículo post BP)] x 100.
EJEMPLO 20 Vasoconstricción inducida por frío: Ramificaciones por perfusión tisular El daño puede ocurrir en un tejido del cuerpo cuando se compromete o interrumpe el flujo de sangre. Las razones para el compromiso vascular incluyen enfermedad vascular periférica (Lamah, M. y otros, European Journal of Vascular and Endovascular Surgery 1999, 78(1 ), 48-51 ), lesión por congelación o traumática anterior, síndrome de Raynaud (Lutolf, O. y otros, Microvascular Research 1993, 46(3), 374-82), neuropatía diabética (Forst, T. y otros, Clinical Science 1998, 94(3), 255-61), intervención quirúrgica y desregulación autonómica (Gherghel, D. y otros, Investigative Ophthalmology and Visual Science 2004, 45(10), 3546-54). En el caso de reperfusión en reposo marginal, la vasoconstricción incrementada por temperatura fría puede agravar los síntomas y potenciar la lesión tisular (Cankar, K. y otros, Journal of Hand cirugía 2000, 25(3), 552-8; Lutolf, O. y oíros, Microvascular Research 1993, 46(3), 374-82.). Varias de estas condiciones puede ser fácilmente modelada en animales para evaluar la capacidad de los antagonistas de TRPM8, tales como los compuestos de la Fórmula (I) para conservar la perfusión tisular frente al enfriamiento local. Por ejemplo, evaluación con el láser Doppler del flujo sanguíneo de la piel se puede estudiar en las patas de las ratas anestesiadas (Hord, A. H. y otros, Anesthesia and Analgesia 1999, 88(1), 103-8), en donde la pata se somete a una serie de etapas de temperaturas decrecientes según se aplica por contacto físico con un elemento de enfriamiento de Peltier bajo control de una computadora. El láser Doppler mide la perfusión de la piel frente a la vasoconstricción inducida por enfriamiento y se genera así una relación temperatura x perfusión. Se anticipa que la administración sistémica de un antagonista de TRPM8 cambia esta curva hacia la perfusión de conservación a temperaturas reducidas en relación con el pretratamiento con el vehículo. Esta actividad se considera terapéutica en la protección de los tejidos de la hipo-perfusión e isquemia minimizando de ese modo los síntomas asociados (por ejemplo, dolor) y daño potencial a los tejidos.
Aunque la especificación anterior enseña los principios de la presente invención con ejemplos provistos para fines de ilustración, se entenderá que la práctica de la invención abarca todas las variaciones, adaptaciones o modificaciones usuales que entran dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes.

Claims (41)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de la Fórmula (I) en donde Wi es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de W-i, W2 y W3 es N; y cuando uno de W-?, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, cloro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; o R1 y R3 se toman juntos para formar una sola entidad de -OCF20- fundida; R a es hidrógeno, fluoro, cloro o bromo; R2 es hidrógeno, alquilo de C1-4, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, ciclopropilo, -CH=CHCH2OH o alquenilo de C2-4 unido a través de un átomo de carbono insaturado; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno o fluoro o se combina con R para formar -OCF20-; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; V es NH y Q es CH2; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o alquilo de Ci^; X es CH2, C(CH3)2, CF2 u O; con la condición de que cuando V es NH, X sea distinto a O; y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de éstos. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi, o difluorometoxi; o R1 y R3 se toman juntos para formar una sola porción de -OCF2O- fusionada. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etil, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi, o difluorometoxi. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1a es hidrógeno o fluoro. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es hidrógeno, C1-4alquilo, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(C1-6)alquilo, C1-3alcoxi(C1-6)alquilo, o -CH=CHCH2OH. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque R2 es alquilo de C- , fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(C1-6)alquilo, o -CH=CHCH2OH. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque R2 es metilo, fluoro, cloro, bromo, trifluorometilo, o hidroxi(Ci-6)alquilo. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2a es hidrógeno o metilo. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 es hidrógeno o se toma con R1 para formar -OCF20-. 10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque R3 es hidrógeno. 11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; V es NH y Q es CH2; y V es O y Q es CH2. 12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2. 13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R4 es hidrógeno o metilo. 14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque X es CH2, CF2, u O. 15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque X es CH2 u O. 16. Un compuesto de Fórmula (I) Fórmula (I) en donde Wi es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de Wi, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; o R y R3 se toman juntos para formar una sola porción de -OCF2O- fundida; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es hidrógeno, alquilo de C- , fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci-3alcoxi(Ci-6)alquilo o -CH=CHCH20H; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno o se combina con R para formar -OCF20-; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; V es NH y Q es CH2; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2, CF2 u O; con la condición de que cuando V es NH, X sea distinto a O; y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de éstos. 17. Un compuesto de Fórmula (I) Fórmula (I) en donde W1 es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de W-i, W2 y W3 es N; y cuando uno de W-i, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1- met¡l)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es hidrógeno, alquilo de C1- , fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, o -CH=CHCH2OH; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2, CF2 u O; y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de éstos. 18. Un compuesto de Fórmula (I) Fórmula (I) en donde W1 es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de W-i, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2,2,2-trifluoroetilo, trifluorometoxi o difluorometoxi; R1a es hidrógeno o fluoro; R2 es alquilo de C -4, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci-6)alquilo, Ci-3alcoxi(Ci-6)alquilo o -CH=CHCH2OH; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2, CF2 u O; y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de éstos. 19. Un compuesto de Fórmula (I) Fórmula (I) en donde \?? es C(R2a) o N; W2 es CH o N; W3 es C(R2) o N; de tal manera que solamente uno de Wi, W2 y W3 es N; y cuando uno de W-i, W2 y W3 es N, entonces R2 y R2a son hidrógeno; R1 es fluoro, trifluorometilo, (1-hidroxi-1-metil)etilo, 2 , 2 , 2-trif I uo roeti lo , trifluorometoxi o difluorometoxi; R a es hidrógeno o fluoro; R2 es metilo, fluoro, cloro, bromo, ciano, trifluorometilo, hidroxi(Ci. 6)alquilo, Ci-3alcoxi(Ci-6)alquilo o -CH=CHCH2OH; R2a es hidrógeno o metilo; R3 es hidrógeno; V y Q se seleccionan del grupo que consiste de V es CH(R4) y Q es O; y V es O y Q es CH2; R4 es hidrógeno o metilo; X es CH2 u O; y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de éstos. 20. Un compuesto de Fórmula (I) Fórmula (I) seleccionado del grupo que consiste de: un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es fluoro, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a es fluoro, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2¡ un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CF2; un compuesto en donde WT es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es 2,2,2-trifluoroetilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 se combina con R3 para formar -OCF20-, R1a, R2 y R2a son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es difluorometoxi, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es fluoro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2¡ un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es metilo y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es bromo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es (1 -hidroxi-1-metil)etilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es NH, Q es CH2 y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es difluorometoxi, R a es hidrógeno, R2 es metilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es ciano, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es 3-hidroxipropilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \Ni es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R2a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es 1-hidroxi-prop-2-en-3-ilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es fluoro, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W-, es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W-i es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es 0, R4 es metilo y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es O, Q es CH2 y X es O; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R a, R2, R2a, y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde \N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es bromo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde W1 es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es ciano, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es fluoro, R2 es hidrógeno, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2; un compuesto en donde \N<i es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R1a, R2, R2a, y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es C(CH3)2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno, y X es O; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es CH2CH2C(CH3)2OH, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es fluoro, R3 es cloro, R2a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde N es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es cloro, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde WT es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R2a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es fluoro, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R a es fluoro, R3 es metilo, R2a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde W es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometoxi, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es CH2CH2CH2OCH3, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N-\ es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es fluoro, R1a es hidrógeno, R2 es trifluorometilo, R2a es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es metilo, R2a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es C(R2), R es trifluorometilo, R a es hidrógeno, R2 es cloro, R2a es metilo, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde \N-\ es N, W2 es CH, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a es hidrógeno, R2 es hidrógeno, R3 es hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde Wi es C(R2a), W2 es N, W3 es C(R2), R1 es trifluorometilo, R1a, R2, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; un compuesto en donde es C(R2a), W2 es CH, W3 es N, R1 es trifluorometilo, R a, R2a y R3 son hidrógeno, V es CH(R4), Q es O, R4 es hidrógeno y X es CH2; y enantiómeros, diastereómeros y sales farmacéuticamente aceptables de éstos. . Un compuesto de la Fórmula (I), en donde los compuestos tienen una fórmula seleccionada del grupo que consiste de a) Comp. 27 y b) Comp. 16 o una sal farmacéuticamente aceptable de éstos 22. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y al menos uno de un portador farmacéuticamente aceptable, excipiente farmacéuticamente aceptable, y un diluyente farmacéuticamente aceptable. 23. La composición farmacéutica de la reivindicación 22, caracterizada además porque la composición es una forma de dosificación oral sólida. 24. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, caracterizada además porque la composición es un jarabe, un elixir, o una suspensión. 25. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la elaboración de un medicamento para tratar el dolor inflamatorio, afección de hipersensibilidad inflamatoria, dolor neuropático, ansiedad y depresión en un sujeto. 26. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde el dolor inflamatorio se debe la enfermedad intestinal inflamatoria, dolor visceral, migraña, dolor post-operatorio, osteoartritis, artritis reumatoide, dolor de espalda, dolor de espalda baja, dolor en las articulaciones, dolor abdominal, dolor en el pecho, parto, enfermedades musculoesqueléticas, enfermedades de la piel, dolor de muelas, piresis, quemaduras, quemaduras solares, mordedura de serpiente, mordeduras de serpientes venenosas, picadura de araña, picadura de insecto, vejiga neurogénica, cistitis intersticial, infección urinaria, rinitis, dermatitis de contacto/hipersensibilidad, prurito, eczema, faringitis, mucositis, enteritis, síndrome del intestino irritable colecistitis, pancreatitis, síndrome de dolor postmastectomía dolor menstrual, endometriosis, dolor de cabeza sinusal, cefalea tensional, o aracnoiditis. 27. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde el dolor inflamatorio es hiperalgesia inflamatoria. 28. El uso como el que se reclama en la reivindicación 27, en donde la hiperalgesia inflamatoria es hiperalgesia somática inflamatoria o hiperalgesia visceral inflamatoria. 29. El uso como el que se reclama en la reivindicación 28, en donde la hiperalgesia inflamatoria se debe la inflamación, osteoartritis, artritis reumatoide, dolor de espalda, dolor en las articulaciones, dolor abdominal, enfermedades musculoesqueléticas, enfermedades de la piel, dolor postoperatorio, dolores de cabeza, fibromialgia, dolor de muela, quemaduras, quemaduras solares, picaduras de insectos, vejiga neurogénica, incontinencia urinaria, cistitis intersticial, infección urinaria, tos, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis, dermatitis de contacto/ hipersensibilidad, prurito, eczema, faringitis, enteritis, síndrome del intestino irritable, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa. 30. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde dicha afección de hipersensibilidad inflamatoria es incontinencia urinaria, hipertrofia prostética benigna, tos, asma, rinitis, hipersensibilidad nasal, prurito, dermatitis de contacto, alergia dérmica, o enfermedad pulmonar obstructiva crónica. 31. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde el dolor neuropático se debe a cáncer, trastornos neurológicos, cirugía de columna vertebral y nervios periféricos, tumor cerebral, lesión cerebral traumática (TBI, por sus siglas en inglés), traumatismo de la médula espinal, síndrome de dolor crónico, fibromialgia, síndrome de fatiga crónica, una neuralgia, lupus, sarcoidosis, neuropatía periférica, neuropatía periférica bilateral, neuropatía diabética, dolor central, neuropatías asociadas con lesión de la médula espinal, derrames cerebrales, ALS (por sus siglas en inglés), enfermedad de Parkinson, esclerosis múltiple, neuritis ciática, neuralgia de la articulación mandibular, neuritis periférica, polineuritis, dolor del muñón, dolor del miembro fantasma, una fractura ósea, dolor neuropático oral, dolor de Charcot, síndrome de dolor regional complejo I y II (CRPS l/ll), radiculopatía, síndrome de Guillain-Barré, meralgia parestésica, síndrome del fuego de la boca, neuritis óptica, neuritis postfebril, neuritis migrañosa, neuritis segmentaria, neuritis de Gombault, neuronitis, neuralgia cervicobraquial, neuralgia craneal, neuralgia geniculada, neuralgia glosofaríngea, neuralgia migrañosa, neuralgia ¡diopática, neuralgia intercostal, neuralgia mamaria, neuralgia de Morton, neuralgia nasociliar, neuralgia occipital, neuralgia roja, neuralgia del Sluder, neuralgia esplenopalatina, neuralgia supraorbital, neuralgia vidiana o vulvodinia. 32. El uso como el que se reclama en la reivindicación 31 , en donde la neuralgia es neuralgia trigeminal, neuralgia glosofaríngea, neuralgia postherpética, o causalgia. 33. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde el dolor neuropático es alodinia neuropática al frío. 34. El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde la alodinia neuropática por frío es el dolor que surge de la cirugía de la columna vertebral o de los nervio periféricos, traumatismo, lesión cerebral traumática (TBI), neuralgia trigeminal, neuralgia postherpética, causalgia, neuropatía periférica, neuropatía diabética, dolor central, ictus, neuritis periférica, polineuritis, síndrome de dolor regional complejo I y II (CRPS l/ll) y radiculopatía. 35. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde la ansiedad es ansiedad social, trastorno de estrés post traumático, fobias, fobia social, fobias especiales, trastorno de pánico, trastorno obsesivo compulsivo, trastorno de estrés agudo, trastorno de ansiedad por separación, o trastorno de ansiedad generalizado. 36. El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde la depresión es depresión severa, trastorno bipolar, trastorno afectivo estacional, depresión post parto, depresión maníaca, o depresión bipolar. 37. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la elaboración de un medicamento para tratar la hiperalgesia somática inflamatoria en el cual existe una hipersensibilidad a los estímulos térmicos. 38. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la elaboración de un medicamento para tratar la hiperalgesia visceral inflamatoria en el cual existe una irritabilidad visceral aumentada. 39. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la elaboración de un medicamento para tratar la alodinia neuropática por frío en el que existe una hipersensibilidad a los estímulos de enfriamiento. 40. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la elaboración de un medicamento para tratar la enfermedad cardiovascular agravada por frío en un sujeto. 41. El uso como el que se reclama en la reivindicación 40, en donde la enfermedad cardiovascular se selecciona del grupo que consiste de enfermedad vascular periférica, vascular hipertensión, pulmonar e hipertensión, enfermedad de Raynaud, y enfermedad de las arterias coronarias.
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