MX2011001619A - Vacuna que comprende peptidos amb a 1 para uso en el tratamiento de alergia a ambrosia. - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con composiciones para evitar o tratar alergia a ambrosía mediante inducción de tolerancia. Las composiciones están basadas en combinaciones de fragmentos de péptidos derivados del alergeno principal en el polen de ambrosía, Amb a 1. La invención también se relaciona con productos, vectores y formulaciones las cuales pueden ser utilizadas para proporcionar polipéptidos de la invención en combinación La invención se relaciona adicionalmente con métodos in vitro para determinar si los linfocitos T reconocen un polipéptido de la invención y para determinar si un individuo tiene o está en riesgo de una condición caracterizada por síntomas alérgicos en respuesta a alergeno de ambrosía.

Description

VACUNA QUE COMPRENE PEPTIDOS AMB A 1 PARA USO EN EL TRATAMIENTO DE ALERGIA A AMBROSIA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con composiciones para evitar o tratar alergia a ambrosía.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION En reconocimiento de antígeno por linfocitos T requiere que las células presentadoras de antígeno (APC, por sus siglas en inglés) presenten fragmentos (péptidos) de antígeno sobre la superficie celular asociados con moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (CPH) . Los linfocitos T utilizan sus receptores de linfocito T (TCR, por sus siglas en inglés) específicos para antígeno con el fin de reconocer los fragmentos de antígeno presentados por las APC. El reconocimiento actúa como un activador para el sistema inmunitario con el fin de generar una gama de respuestas para erradicar el antígeno el cual ha sido reconocido.

El reconocimiento de antígenos externos por el sistema inmunitario de un organismo tal como el hombre en algunos casos puede resultar en enfermedades conocidas como condiciones atópicas . Los ejemplos de estas últimas son las enfermedades alérgicas que incluyen asma, dermatitis atópica y rinitis alérgica. En este grupo de enfermedades, los linfocitos B generan anticuerpos de la clase IgE (en humanos) REF: 217456 los cuales unen antígenos derivados externamente, los cuales se denominan en este contexto como alérgenos dado que estas moléculas inducen una respuesta alérgica. La producción de IgE específica de alérgeno depende de los linfocitos T los cuales también son activados (son específicos para) el alérgeno. Los anticuerpos IgE específicos de alérgeno se unen a la superficie de células tales como basófilos y mastocitos en virtud de la expresión por estas células de los receptores de superficie para IgE.

El reticulado de moléculas de IgE unidas a la superficie por alérgeno resulta en desgranulación de estas células efectoras lo que provoca liberación de mediadores inflamatorios tales como histamina, 5-hidroxitriptamina y mediadores lipidíeos tales como los sulfidoleucotrienos . Además de los eventos dependientes de IgE, ciertas enfermedades alérgicas tales como el asma están caracterizadas por eventos independientes de IgE.

Las enfermedades alérgicas mediadas por IgE actualmente son tratadas con agentes los cuales proporcionan alivio sintomático o prevención. Los ejemplos de estos agentes son las antihistaminas , agonistas ß2 y glucocorticosteroides . Además, algunas enfermedades mediadas por IgE son tratadas por procedimientos de eliminación de sensibilización que involucran la inyección periódica de componentes o extractos de alérgeno. Los tratamientos de eliminación de sensibilización pueden inducir una respuesta IgG que compite con IgE por el alérgeno o pueden inducir linfocitos T supresores específicos que bloquean la síntesis de IgE dirigida contra el alérgeno. Esta forma de tratamiento no siempre es eficaz y presenta el riesgo de generar efectos secundarios graves, particularmente choque anafiláctico general . Esto puede ser mortal a menos que se reconozca de inmediato y se trate con adrenalina. Un tratamiento terapéutico que puede disminuir o eliminar la respuesta alérgica- inmunitaria no deseada a un alérgeno particular, sin alterar la reactividad inmunitaria por otros antígenos extraños o activar una respuesta alérgica en si misma sería de gran beneficio para las personas con alergia.

Los al rgenos de ambrosía son reconocidos universalmente como la causa principal de enfermedades alérgicas en humanos y animales, incluyendo asma, rinitis alérgica y dermatitis alérgica. Las proteínas presentes en el polen de ambrosía son particularmente importantes. Por ejemplo, aproximadamente 75% de quienes padecen fiebre de heno en los Estados Unidos son alérgicos al polen de ambrosía. La fiebre de heno es el término común para una forma de alergia estacionaria caracterizada por estornudos, escurrimiento nasal y prurito en los ojos. El término "fiebre de heno" surge debido a que esta forma de enfermedad alérgica es más prevalente durante la "estación de recolección de heno" la cual corresponde a la estación de fluoración de muchas plantas que es cuando liberan las cantidades más grandes de polen. Es particularmente prevalente a fines del verano y principios del otoño típicamente desde fines de junio hasta fines de septiembre (en el hemisferio Boreal) .

Se ha calculado que para los adultos en Estados Unidos, la fiebre de heno es la quinta de las enfermedades crónicas principales y una causa mayor de abstencionismo en el trabajo, lo que resulta en casi 4 millones de días laborales perdidos o extraviados cada año, lo que resulta en un costo total de más de $700 millones de dólares en pérdida total de productividad. Las alergias son la condición crónica reportada con mayor frecuencia en niños, que se vuelven actividades limitantes para más de 40% de ellos. Cada año, las alergias constituyen más de 17 millones de visitas de gabinete de pacientes externos en los Estados Unidos; las alergias estacionales tales como la fiebre de heno constituyen más de la mitad de estas visitas por alergia.

Por lo tanto, un tratamiento terapéutico o preventivo sería un gran beneficio para los humanos quienes padecen o quienes se encuentran en riesgo de padecer de alergia a ambrosía.

SUMARIO DE LA INVENCION La alergia a ambrosía típicamente es causada por ambrosía común (Ambrosia artemisiifolia) . El alérgeno principal en el polen de ambrosía es Amb a 1. Esta proteína existe como numerosas isoformas diferentes, Amb a 1.1., 1.2, 1.3 y 1.4.

Los presentes inventores han descubierto que ciertas combinaciones de fragmentos peptídicos derivados de proteínas Amb a 1 son particularmente útiles para eliminar la sensibilidad de individuos a estos alérgenos. Las combinaciones de polimétidos de la invención se han seleccionado por su capacidad para unirse a muchas moléculas de CPH clase II, por ser altamente solubles, por no activar la liberación de histamina de basófilos extraídos de un conjunto de individuos alérgicos a ambrosía y por inducir una respuesta de citocina en una alta proporción de sujetos a partir de un conjunto de personas alérgicas a ambrosía. Las composiciones, productos, vectores y formulaciones de la invención por lo tanto se pueden proporcionar a individuos para evitar o tratar alergia a ambrosía mediante inducción de tolerancia .

Los péptidos de la invención se seleccionan como epítopos potenciales de linfocitos T mediante métodos in silico. Cuando se identifican regiones que contienen epítopos, se analizan adicionalmente para determinar cuales de ellas están altamente conservadas entre cuatro isoformas diferentes de Amb a 1. Estos polipéptidos candidatos después son cribados para determinar su uso potencial en inducción de tolerancia. De manera más específica, se analizan por características de solubilidad y la capacidad para inducir liberación de citocina a partir de los PBMC derivados de personas alérgicas a ambrosía. En la mayor parte de los casos, las secuencias peptídicas son manipuladas para mejorar la solubilidad y/o reducir la formación de dímeros .

Una dificultad asociada con los enfoques para la eliminación de sensibilización basado en inmunización peptídica se basa en de que manera seleccionar un tamaño y región apropiados del alérgeno como la base para el péptido que va a ser utilizado para inmunización. El tamaño del péptido de elección es crucial. Si el péptido es demasiado pequeño, la vacuna podría no ser eficaz para inducir una respuesta inmunológica . Si los péptidos son demasiado grandes o si el antígeno completo se introduce en un individuo, existe el riesgo de inducir reacciones adversas, tales como anafilaxia, las cuales pueden ser mortales. El riesgo puede ser mayor si los péptidos son poco solubles .

Los polipéptidos de la invención se han seleccionado por retener especificidad por linfocitos T y al mismo tiempo son de un tamaño suficientemente pequeño de manera que no poseen estructura terciaria significativa que pueda permitir que retenga la conformación de un epítopo que se una a IgE de la molécula completa. Por lo tanto, los polipéptidos de la invención no inducen reticulado significativo de moléculas IgE específicas adyacentes sobre células tales como mastocitos y basófilos y se ha demostrado que no provocan liberación significativa de histamina desde los basófilos humanos.

Una ventaja de la invención es la capacidad de los péptidos para dirigirse de manera general a moléculas del completo principal de histocompatibilidad (CPH) . Los receptores de linfocito T (TCR, por sus siglas en inglés) son altamente variables en su especificidad. La variabilidad se genera, como con moléculas de anticuerpo, mediante eventos de recombinación de genes dentro de la célula. Los TCR reconocen antígeno en forma de péptidos cortos unidos a las moléculas codificadas por los genes del complejo principal de histocompatibilidad (CPH) . Estos productos de gen son las mismas moléculas que dan lugar a "tipos de tejido" utilizados en transplante y también se les denomina como moléculas de antígeno leucocítico humano (HLA) , términos los cuales pueden ser utilizados de manera intercambiable. Las moléculas de CPH individuales poseen surcos de unión de péptidos los cuales, debido a su forma y carga son capaces únicamente de unir un grupo limitado de péptidos. Los péptidos unidos por una molécula de CPH pueden no necesariamente ser unidas por otras moléculas de CPH.

Cuando una molécula de proteína tal como un antígeno o alérgeno es captado por células presentadoras de antígeno tales como los linfocitos B, las células dendríticas, monocitos y macrófagos, la molécula es degradada enzimáticamente dentro de la célula. El proceso de degradación genera fragmentos peptídicos de la molécula los cuales, si son de tamaño, carga y forma apropiados, después se pueden unir dentro del surco de unión de péptidos de ciertas moléculas de CPH y subsecuentemente se pueden mostrar sobre la superficie de células presentadoras de antígeno. Si están presentes complejos péptido/CPH sobre la superficie de célula presentadora de antígeno en cantidades suficientes pueden después activar linfocitos T los cuales presenten los receptores de linfocitos T específicos para péptido/CPH apropiados .

Debido a la naturaleza polimórfica del CPH, los individuos en una población exogámica tal como el hombre expresarán diferentes combinaciones de moléculas de CPH sobre sus superficies celulares. Dado que diferentes moléculas de CPH pueden unir diferentes péptidos a partir de la misma molécula en base en el tamaño, carga y forma del péptido, diferentes individuos mostrarán un repertorio diferente de péptidos unidos a sus moléculas de CPH. La identificación de epítopos peptídicos que unan CPH universales en una población exogámica tal como el hombre es más difícil que en animales endogámicos (tales como algunas cepas de ratones de laboratorio) . En base en la expresión diferencial de CPH entre individuos y las diferencias inherentes en la unión y presentación de péptidos lo cual genera esto, es poco probable que un solo péptido se pueda identificar el cual sea de uso para tratamiento de eliminación de sensibilización en el ser humano.

Otra ventaja de la invención es la selección de péptidos y combinaciones de péptidos en base en las respuestas observadas en los PBMC recién aislados de personas alérgicas a ambrosía. En contraste con escenarios por artefactos en donde las líneas de células clónales se establecen a partir de pacientes alérgicos con el fin de probar las respuestas de linfocitos T, la evaluación de las respuestas ex vivo de PBMC recién aislados permite una percepción representativa de la importancia de la población relativa de diferentes péptidos sin la distorsión potencial inducida por el proceso de cultivo.

No obstante, las combinaciones de péptidos de la invención proporcionan una cobertura amplia de eficacia sobre la población humana al dirigirse a moléculas de CPH diferentes múltiples. Esta cobertura amplia se ilustra por la capacidad de las combinaciones peptídicas de la invención para provocar una respuesta de citocina positiva y muchos individuos dentro de una población. Por lo tanto, una vacuna formulada con los péptidos de la invención tendría una utilidad amplia.

La investigación de los inventores ha producido combinaciones de péptidos con las siguientes características: la combinación induce una respuesta de citocina en una proporción alta de personas de un conjunto de individuos alérgicos a ambrosía, los péptidos de las combinaciones son solubles , los péptidos de las combinaciones no inducen liberación significativa de histamina en un conjunto de individuos alérgicos a ambrosía.

En consecuencia, la presente invención proporciona una composición para uso en prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de las SEC ID NOS: 1 a 31. Típicamente, la composición comprende por lo menos cuatro polipéptidos , en donde los polipéptidos se seleccionan independientemente de cualquiera de los siguientes : (i) un polipéptido de la SEC ID NOS: 1 a 31; o (ii) una variante de un polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de '9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de: cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o - una secuencia la cual tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia en un individuo por cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o (iii) una variante de un polipéptido de conformidad con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de una secuencia que representa: un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o - un homólogo de un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia a un individuo a cualquiera de las secuencias del inciso (i) y tiene una longitud de por lo menos 9 aminoácidos y en donde el homólogo tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de los 9 aminoácidos contiguos en cualquiera de las secuencias del inciso (i) .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra la proporción de individuos quienes responden a diferentes combinaciones de péptidos de la invención, medidos por producción de IL-13 o IFN-?.

La figura 2 muestra la producción promedio de IL-10 (en pg/ml) por los PBMC de individuos alérgicos a ambrosía cuando se estimulan con diferentes péptidos de la invención.

La figura 3 muestra el nivel de IL-10 (pg/ml) producido por los PBMC a partir de individuos alérgicos a ambrosía cuando se estimulan con combinaciones de péptidos diferentes .

BREVE DESCRIPCION DE LAS SECUENCIAS Las SEC ID NOS: 1 a 31 proporcionan las secuencias de polipéptidos de la invención. Las SEC ID NOS: 32 en adelante proporcionan secuencias adicionales.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La invención se relaciona con péptidos y combinaciones de péptidos las cuales se pueden utilizar en inducción de tolerancia. Estos péptidos pueden comprender, consistir de o consisten esencialmente de las secuencias que se muestran en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31). También se pueden utilizar variantes de estos péptidos específicos. Las variantes pueden comprender, consistir o consisten esencialmente de secuencias las cuales son fragmentos de ya sea cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 u homólogos de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31.

En una modalidad, la invención se relaciona con una composición para uso en prevención o tratamiento de alergia a ambrosía. Típicamente, la composición típica comprende o consiste de por lo menos cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once o doce polipéptidos, hasta un máximo de trece. En otras palabras, la composición comprende entre cuatro y trece polipéptidos. Los polipéptidos se seleccionan independientemente de cualquiera de los siguientes: (i) un polipéptido de la SEC ID NOS: 1 a 31; o (ii) una variante de un polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de: cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o una secuencia la cual tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia en un individuo por cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o (iii) una variante de un polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de una secuencia que representa: un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o un homólogo de un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia a un individuo a cualquiera de las secuencias del inciso (i) y tiene una longitud de por lo menos 9 aminoácidos y en donde el homólogo tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de los 9 aminoácidos contiguos en cualquiera de las secuencias del inciso (i) .

La invención también proporciona productos y formulaciones que comprenden los polipéptidos de la invención y composiciones, productos y vectores que comprenden polinucleótidos capaces de expresar los polipéptidos de la invención para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia. La inducción de tolerancia típicamente será a un epítopo (por ejemplo, un epítopo de CPH clase II) presentado en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31.

ESPECIES DE AMBROSIA Las especies de ambrosía, Ambrosia arte isiifolia (ambrosía común) y, en menor grado, Ambrosia trífida (ambrosía gigante) son las responsables de una alta proporción de alergia a ambrosía en todo el mundo, particularmente alergias asociadas con polen de ambrosía, tal como la fiebre de heno. La ambrosía común es natural de América del Norte, pero se ha diseminado a la mayor parte de los continentes en todo el mundo. La ambrosía florece en el Hemisferio Boreal desde inicios de julio-mitad de agosto o hasta que llega un clima más frío. La ambrosía es una planta pionera la cual está bien adaptada para colonizar terrenos recién alterados. Aunque en habitat naturales con frecuencia se limita por competencia con otras plantas, pero en áreas en donde los humanos han eliminado la vegetación existente, la ambrosía se establece de manera amplia y agresiva. De esta manera, la ambrosía es muy abundante a lo largo de los lados de las carreteras rurales, en líneas de barreras, en terrenos de desperdicio, en excavaciones nuevas, en campos cultivados, jardines y en terrenos con poco mantenimiento. Como tal está bien adaptada para una amplia variedad de climas, puede tolerar un intervalo amplio de pH del suelo (desde aproximadamente 4.5 hasta aproximadamente 8.5) y también es resistente a salinidad alta.

FRAGMENTOS PEPTIDICOS DE ALERGENOS DE POLEN DE AMBROSIA El alérgeno principal en el polen de ambrosía es Amb a 1. Esta proteína existe en mucha isoformas diferentes, Amb a 1.1, 1.2, 1.3 y 1.4. Estas isoformas se establecen de manera completa en el ejemplo 1. Los presentes inventores han identificado las regiones en Amb a 1 las cuales comprenden epítopos de linfocito T que unen CPH clase II y los cuales están altamente conservados entre isoformas (véase análisis en el ejemplo 1) . En base en esta información, los péptidos derivados de las regiones relevantes de Amb a 1 son adecuados para evitar o tratar alergia a ambrosía por inducción de tolerancia de todas las isoformas de Amb a 1.

Los términos "péptido" y "polipéptido" se utilizan de manera intercambiable en la presente. Las proteínas anteriores también se denominan en la presente como "los alérgenos" .

Las tablas 3, 4 y 6 indican las secuencias de los péptidos de la invención en donde la indicación apropiada de la proteína original de la cual se deriva cada péptido.

COMBINACIONES DE PEPTIDOS Las combinaciones típicamente comprenden una combinación de por lo menos tres polipéptidos diferentes de la invención, hasta un máximo de trece polipéptidos diferentes. En consecuencia, la composición de la invención puede consistir de tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce o trece péptidos.

Las combinaciones polipeptídicas en la composición de la invención se seleccionan para proporcionar una cobertura tan amplia a la población humana como sea posible, es decir, la composición de la invención producirá una respuesta inmunitaria en una proporción alta de individuos alérgicos a ambrosía, preferiblemente más de 30%, 40%, 50%, 60% o 70% de las personas alérgicas a ambrosía en un conjunto o población de estas personas. El número de personas en una población de personas alérgicas a ambrosía puede . ser cualquier cantidad, típicamente de por lo menos 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 o por lo menos 100 personas. Preferiblemente, la población presenta frecuencias de alelo de CPH dentro del intervalo de frecuencias que son representativas de la población caucásica. Las frecuencias de alelo de población de referencia para 11 familias de alelo DRB1 comunes se muestran en la tabla 1 (datos de HLA Facts Book, Parham and Barber) .

La composición de la invención típicamente comprende : por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGWOl, RGW01A o RGW01B o una variante del mismo; y por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW03, RGW03A o RGW03B o una variante del mismo; y por lo menos un polipéptido que se selecciona del polipéptido de RGW04 o RGW04A o una variante del mismo.

Opcionalmente, la composición puede comprender adicionalmente por lo menos un polipéptido adicional que se selecciona de un polipéptido de cualquiera de RGW02, RGW09, RGW06 o RGW06A, RGW10, RGW10A, RGW05 o RGW05A o una variante del mismo.

Opcionalmente, la composición puede comprender adicionalmente por lo menos un polipéptido adicional que se selecciona de un polipéptido de cualquiera de RGW07, RGW07C, RGW07D o una variante del mismo. Por lo menos un polipéptido adicional preferiblemente es un polipéptido de RGW07D, o una variante del mismo.

De manera más específica, en una modalidad, la invención por lo tanto proporciona una composición que comprende entre tres y trece polipéptidos , que consiste de: a) por lo menos uno de los polipéptidos de RGWOl, RGW01A o RG 01B o una variante del mismo, preferiblemente RGW01; y b) por lo menos uno de los polipéptidos RGW03 , RGW03A o RGW03B o una variante del mismo, preferiblemente RGW03B; Y c) por lo menos uno de los polipéptidos de cualquiera de RGW04 o RG 04A o una variante del mismo, preferiblemente RGW04A; y opcionalmente d) por lo menos uno, preferiblemente dos, de manera más preferible tres de los polipéptidos de cualquiera de RG 02, RGW09, RGW06, RG 06A, RGW10, RGW10A, RGW05 o RGW05A o una variante del mismo, preferiblemente RG 02 y/o RG 06A y/o RGW05; y opcionalmente e) por lo menos uno de los polipéptidos de cualquiera de RG 07, RGW07C, RGW07D o una variante del mismo, preferiblemente RGW07D.

En otras palabras, una modalidad específica de la invención proporciona una composición para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende entre tres y trece secuencias peptídicas en donde la composición consiste de: a) por lo menos uno de los polipéptidos dentro de las siguientes secuencias: RGW01 GMIKSNDGPPI; RGW01A GLIKSHDPGPPV; RG 01B GLIKSNDGPAA; o una variante del mismo, y; b) por lo menos uno de los polipéptidos de las siguientes secuencias: RG 03 KDLLENGAIFVTSG; RGW03A DVFENGAIFVPSG; RGW03B RDLLENGAIFLPSG; o variantes de los mismos y; c) por lo menos uno de los polipéptidos con las siguientes secuencias: RG 04 KAGMIPAEPGEA; RG 4A SAGMIPAEPGEA; o variantes de los mismos, y opcionalmente ; d) por lo menos uno de los polipéptidos con las siguientes secuencias: RGW02 GSSQIWIDHSSLSKS; RGW0 KAGMIPAEPGEA; RG 4A SAGMIPAEPGEA; RG 06 WNSDKTIDGRGVKVE ; RGW06A AINNDKTIDGRGAKVE ; RGW09 ETRRSLKTSGAYN; RG 10 FGFFQWNNNYD ; RGW10A HGFFQWNNNYD; RG 05 KEGTLRFAAAQNRP ; RGW05A KEGTLRFGAAQNRP ; o variantes de los mismos, y opcionalmente ; e) por lo menos uno de los polipéptidos con las siguientes secuencias: RGWO7 GEAAIKLTSSAGVLS ; RGW07C KGEAAIKLTSSAGVLSK; RG 07D KGEAAIKLTSSAGVLSKK; o variantes de los mismos.

Se apreciará que los incisos (a) a (e) anteriores representan criterios rigurosos y altamente selectivos para la identificación de combinaciones adecuadas de la invención. Por ejemplo, si uno va a seleccionar seis péptidos de manera aleatoria a partir de las secuencias de la invención serían casi un millón de combinaciones posibles a partir de las cuales hacer una selección. En contraste, es útil considerar un ejemplo de una combinación de seis polipéptidos en la cual se aplican los criterios anteriores. Por ejemplo, considérese una combinación en donde se seleccionan los siguientes polipéptidos : i) en cualquiera de los polipéptidos RGW01, RGW01A o RG 01B y cualquiera de los polipéptidos de RGWO3 , RGWO3A o RGWO3B y cualquiera de los polipéptidos de RGWO4 y RGW04A; y ii) se seleccionan tres polipéptidos adicionales de los polipéptidos de cualquiera de RGWO2 , RGWO9 , RGWO6 , RGW06A, RGW10, RGW10A, RGWO5 o RGWO5A; y finalmente en base en esta selección, el número de posibles combinaciones representa una fracción mínima del total de combinaciones disponibles si no se aplican los criterios determinados por los inventores .

En base en lo anterior, una combinación particularmente preferida de la invención comprende o consiste de los polipéptidos de RGWOl. RGW03B, RGW04A, RGW02 , RGW05 y RGW06A o variantes de los mismos.

Una combinación adicional preferida comprende o consiste de los polipéptidos de RGWOl, RGW03B, RGW04A, RGW02, RGW05, RGW06A y RGW07.

En base en lo anterior, la composición opcionalmente puede comprender polipéptidos adicionales hasta un total de trece polipéptidos únicos. Estos polipéptidos adicionales se relacionan (es decir, típicamente son homólogos y/o fragmentos de) otras secuencias es decir, las SEC ID NOS: 1 a 31 que no están entre los polipéptidos ya seleccionados. Los polipéptidos adicionales típicamente son variantes funcionales de uno de los péptidos de las SEC ID NOS: 1 a 31. Los polipéptidos adicionales pueden ser idénticos a cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. La composición por lo tanto puede comprender hasta trece polipéptidos diferentes como se proporciona en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. No obstante, los polipéptidos adicionales opcionales no necesitan ser 100% idénticos a cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. Preferiblemente son por lo menos 65% idénticos a por lo menos 9 (por ejemplo, por lo menos 10, 11, 12 ó 13) o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31, no seleccionados de antemano entre uno o varios de los polipéptidos seleccionados previamente. Estos aminoácidos contiguos pueden comprender un epítopo de CPH clase II, por ejemplo el cual se une a cualquiera de las moléculas de CPH mencionado en la presente. En otras palabras, la composición puede opcionalmente comprender polipéptidos adicionales hasta un total de trece polipéptidos únicos, en donde los polipéptidos adicionales: (i) comprende una secuencia que tiene por lo menos 65% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS; 1 a 31 anteriores no seleccionados en los incisos (a) a (e) anteriores ; y (ii) tiene una longitud de 9 a 30 aminoácidos, en donde cada polipéptido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia .

Por lo tanto, con mayor detalle, la invención proporciona un producto que contiene entre tres y trece polipéptidos como se define en los incisos (a) a (e) anteriores; y opcionalmente: (f) Un polipéptido : (i) que comprende una secuencia que tiene por lo menos 65% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS; 1 a 31 anteriores no seleccionados en los incisos a) a d) anteriores; y (ii) tiene una longitud de 9 a 30 aminoácidos; y opcionalmente (g) un polipéptido como se define en el inciso f) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) anterior; y opcionalmente (h) un polipéptido como se define en el inciso f ) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a g) anterior; y opcionalmente (i) un polipéptido como se define en el inciso f ) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a h) anterior; y opcionalmente (j) un polipéptido como se define en el inciso f ) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a i) anterior; y opcionalmente (k) un polipéptido como se define en el inciso f) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a j) anterior; y opcionalmente (1) un polipéptido como se define en el inciso f ) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a k) anterior; y opcionalraente (m) un polipéptido como se define en el inciso f) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a l) anterior; y opcionalmente (n) un polipéptido como se define en el inciso f) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a m) anterior; y opcionalmente (0) un polipéptido como se define en el inciso f ) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a n) anterior; y opcionalmente (p) un polipéptido como se define en el inciso f) , pero que adicionalmente no se selecciona en el inciso f) a o) anterior, para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia.

Otra modalidad de la invención es una composición para uso en prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende uno o más polipéptidos , en donde el polipéptido se selecciona de cualquiera de los siguientes: (1) un polipéptido de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31; O (ii) una variante de un polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de: cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o una secuencia la cual tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia en un individuo por cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o (iii) una variante de un polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de una secuencia que representa ya sea: un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o un homólogo de un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia a un individuo a cualquiera de las secuencias del inciso (i) y tiene una longitud de por lo menos 9 aminoácidos y en donde el homólogo tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de los 9 aminoácidos contiguos en cualquiera de las secuencias del inciso (i) .

Las composiciones o productos de la invención pueden comprender variantes de cualquiera de las secuencias definidas en lo anterior. La variante típicamente comprende 1, 2, 3 o más de epítopos de CPH clase II presentes en el péptido correspondiente de la SEC ID NOS : 1 a 31.

En la presente se mencionan variantes funcionales. Las variantes pueden ser capaces de inducción de tolerancia a un individuo a un epítopo de CPH clase II en el péptido correspondiente de la SEC ID NO: 1 a 31 y por lo tanto típicamente comprenderá secuencias que se unen a la misma molécula de CPH clase II y/o es reconocida por un linfocito T el cual reconoce el epítopo correspondiente en el polipéptido de la SEC ID NO: 1 a 31.

Las variantes de la SEC ID NOS: 1 a 31 pueden ser fragmentos derivados por corte. Corte se refiere a la separación de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más aminoácidos de los extremos de las partes N y/o C-terminal y de un polipéptido de las SEC ID NOS: 1 a 31.

También se pueden generar fragmentos por una o más supresiones internas, con la condición de que no se rompa sustancialmente el núcleo de 9 aminoácidos que constituye el epítopo de linfocito T.

Por ejemplo, una variante de la SEC ID NO: 1 puede comprender un fragmento de la SEC ID NO: 1, es decir, una secuencia más corta. Esta puede incluir una supresión de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más aminoácidos del extremo N-terminal de la SEC ID NO: l o desde el extremo C-terminal de la SEC ID NO: 1. Estas supresiones se pueden realizar desde ambos extremos de la SEC ID NO: 1. Una variante de la SEC ID NO: 1 puede incluir aminoácidos adicionales (por ejemplo de la secuencia de la proteína original de la cual se deriva el péptido) extendiéndose más allá de uno o varios de los extremos de la SEC ID NO: 1. Una variante puede incluir una combinación de las supresiones y adiciones descritas antes. Por ejemplo, se pueden suprimir aminoácidos de un extremo de la SEC ID NO: l, pero se pueden agregar aminoácidos adicionales de la secuencia de proteína original de longitud completa en el otro extremo de la SEC ID NO: 1. La misma descripción de variantes anteriores también se aplica a las SEC ID NOS: 2 a 31. Una variante preferida de la SEC ID NO: 20 es el péptido KKGEAAI LTSSAGVLSK .

Un péptido variante puede incluir una o más sustituciones de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 o un fragmento de la misma. Un péptido variante puede comprender una secuencia que tiene por lo menos 65% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. De manera más preferible, una variante adecuada puede comprender por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95% o por lo menos 98% de identidad de aminoácidos con por lo menos 9 aminoácidos contiguos de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. Este nivel de identidad de aminoácidos se puede observar en cualquier sección del péptido, aunque preferiblemente es en la región del núcleo. El nivel de identidad de aminoácidos es superior a por lo menos 9 aminoácidos contiguos pero puede ser por lo menos 10, 11, 12, 13, 14, 15 o por lo menos 16 ó 17 aminoácidos, en base en el tamaño de los péptidos de comparación. En consecuencia, cualquiera de los niveles de identidad especificados en lo anterior puede estar a través de la totalidad de la longitud de la secuencia.

En relación con la secuencias de aminoácidos, el término "identidad de secuencia" se refiere a secuencias las cuales tienen el valor establecido cuando se determina utilizando el programa Clustal (Thompson et al, Nucleic Acids Res. 1994 Nov 11 ; 22 ( 22 ) : 4673 -80 ) con los siguientes parámetros: parámetros de alineación pareada-método: preciso, matriz; PAM, castigo por abertura de separación: 10.00, castigo por extensión de separación: 0.10; parámetros de alineación múltiple matriz: PAM, castigo por abertura de separación; 10.00, % de identidad para retraso: 30, castigo por separación de separaciones: activada, distancia de separación de separaciones: 0, matriz negativa: no, castigo por extensión de separación.- 0.20, castigos por separación específica de residuo: activada, castigos por separación hidrofílica: activada, residuos hidrofílicos : GPSNDQEKR. La identidad de secuencia en un residuo particular se pretende que incluya residuos idénticos los cuales han sido simplemente derivatizados .

Un péptido variante puede comprender 1, 2, 3, 4, 5 o más, o hasta 10 sustituciones de aminoácidos de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. Las variantes de sustitución preferiblemente involucran la sustitución de uno o más aminoácidos con el mismo número de aminoácidos y constituyen sustituciones conservadoras de aminoácidos. Por ejemplo, un aminoácido puede ser sustituido con un aminoácido alternativo que tenga propiedades similares, por ejemplo, otro aminoácido básico, otro aminoácido ácido, otro aminoácido neutro, otro aminoácido cargado, otro aminoácido hidrofílico, otro aminoácido hidrofóbico, otro aminoácido polar, otro aminoácido aromático u otro aminoácido alifático. Algunas propiedades de los 20 aminoácidos principales los cuales se pueden utilizar para seleccionar sustituyentes adecuados son las siguientes: Ala alifático, hidrofóbico, Met hidrofóbico, neutro neutro Cys polar, hidrofóbico, neutro Asn polar, hidrofílico, neutro Asp polar, hidrofílico, cargado Pro hidrofóbico, neutro (-) Glu polar, hidrofílico, cargado Gln polar, hidrofílico neutro (-) Phe aromático, hidrofóbico, Arg polar, hidrofílico, cargado neutro (+) Gly alifático, neutro Ser polar, hidrofílico neutro His aromático, polar, Thr polar, hidrofílico neutro hidrofílico, cargado (+) lie alifático, hidrofóbico, Val alifático, hidrofóbico, neutro neutro Lys polar, hidrofílico, cargado Trp aromático, hidrofóbico, (+) neutro Leu alifático, hidrofóbico, Tyr aromático, polar, neutro hidrofóbico Las variantes adicionales incluyen aquellas en las cuales, en vez de los aminoácidos que se encuentran de manera natural, el aminoácido el cual aparece es un análogo estructural del mismo. Los aminoácidos utilizados en las secuencias también se pueden modificar, por ejemplo marcar con la condición de que no se perjudique de manera significativa la función del péptido.

Cuando el péptido tiene una secuencia que varía de la secuencia de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 o un fragmento de la misma, las sustituciones se pueden producir a través de la longitud completa de las secuencias, dentro de la secuencia de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 o fuera de la secuencia de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. Por ejemplo, las variaciones descritas en la presente, tales como adiciones, supresiones, sustituciones y modificaciones se pueden presentar dentro de la secuencia de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. Un péptido variante puede comprender o consistir esencialmente de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 en las cuales se han realizado una, dos, tres, cuatro o más sustituciones de aminoácidos. Un péptido variante puede comprende un fragmento de la proteína original que es más grande que cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. En esta modalidad, las variaciones descritas en la presente, tales como la sustituciones y modificaciones se pueden presentar dentro y/o fuera de la secuencia de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31.

Los péptidos variantes de la invención son de una longitud de 9 a 30 aminoácidos, inclusive. Preferiblemente, pueden ser de 9 a 20, o de manera más preferible de 13 a 17 aminoácidos de longitud. Los péptidos pueden ser de la misma longitud que las secuencias peptídicas en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31.

Los péptidos pueden ser derivados químicamente del alérgeno polipeptídico, por ejemplo por separación proteolítica o se pueden derivar en un sentido intelectual del alérgeno polipeptídico, por ejemplo haciendo uso de la secuencia de aminoácidos del alérgeno polipeptídico y sintetizando péptidos basados en la secuencia. Los péptidos se pueden sintetizar utilizando métodos bien conocidos en el ámbito.

Cuando los polipéptidos comprenden residuos los cuales típicamente son difíciles de conservar durante la elaboración, estos residuos se pueden sustituir. Por ejemplo, el glutamato forma espontáneamente piroglutamato en solución particularmente cuando está presente en la parte N-terminal de un péptido. Así, los residuos de los péptidos de la invención los cuales correspondan a un residuo glutamato o glutamina en la secuencia de una secuencia de proteína de alérgeno nativa se pueden sustituir con piroglutamato en los péptidos de la invención en donde tal residuo está presente en la parte N-terminal de un péptido.

El término "péptido" incluye no solo moléculas en las cuales se unen los residuos aminoácidos por enlaces peptídicos (-C0-NH-) sino también moléculas en las cuales se invierte el enlace peptídico. Tales peptidomiméticos retro-inversos se pueden elaborar utilizando métodos conocidos en el ámbito, por ejemplo tales como los descritos en Meziere et al (1977) J. Immunol. 159, 3230-3237. Este enfoque involucra elaborar pseudopéptidos que contengan cambios que involucren a la estructura principal y no la orientación de las cadenas laterales. Meziere et al (1997) muestran que, por lo menos para las respuestas de linfocitos cooperadores (helper) T y CPH clase II, estos pseudopéptidos son útiles. Los péptidos retro-inversos , los cuales contienen enlaces NH-CO en vez de enlaces peptídicos CO-NH son mucho más resistentes a proteólisis .

De manera similar, el enlace peptídico se puede suministrar con lo anterior con la condición de que se utilice una porción enlazante apropiada la cual retenga la separación entre los átomos de carbono de los residuos aminoácidos; se prefiere particularmente si la porción enlazante tiene sustancialmente la misma distribución de carga y sustancialmente la misma planaridad que el enlace peptídico. También se apreciará que el péptido se puede bloquear convenientemente en su parte N o C-terminal de manera que ayude a reducir la susceptibilidad a digestión exoproteolítica . Por ejemplo, el grupo amino en la parte N-terminal de los péptidos se puede proteger al hacerlo reaccionar con un ácido carboxílico y el grupo carboxilo en la parte C-terminal del péptido se puede proteger al hacerlo reaccionar con una amina. Otros ejemplos de modificaciones incluyen glucosilación y fosforilación. Otra modificación potencial es que los hidrógenos en las aminas de la cadena lateral de R o K se pueden sustituir con grupos metileno (-NH2? -NH (Me) o -N(Me)2).

Los análogos de los péptidos de acuerdo con la invención también pueden incluir variantes peptídicas que incrementen o disminuyan la semivida del péptido in vivo. Los ejemplos de análogos capaces de incrementar la semivida de los péptidos utilizados de acuerdo con la invención incluyen análogos peptoides de los péptidos, derivados de D-aminoácido de los péptidos e híbridos péptido-peptoide . Una modalidad adicional de los polipéptidos variantes utilizados de acuerdo con la invención comprende formas de D-aminoácidos del polipéptido. La preparación de polipéptidos utilizando D-aminoácidos en vez de L-aminoácidos disminuye en gran medida la descomposición no deseada del agente por procesos metabólicos normales, disminuye las cantidades de agente que se necesita administrar así como la frecuencia de su administración.

Los péptidos que se proporcionan por la presente invención se pueden derivar de variantes de empalme de las proteínas originales codificadas por ARNm generadas por empalme alternativo de transcritos primarios que codifican para las cadenas proteínicas originales . Los péptidos también se pueden derivar de mutantes de aminoácidos, variantes de glucosilación y otros derivados covalentes de las proteínas originales las cuales retienen por lo menos una propiedad de unión de CPH de los alérgenos. Los derivados ejemplares incluyen moléculas en donde los péptidos de la invención son modificados covalentemente por sustitución, medios químicos, enzimáticos u otros apropiados con una porción diferente de un aminoácido como se encuentra de manera natural. Se incluyen adicionalmente variantes como se encuentran de manera natural de las proteínas originales encontradas en diferentes ácaros . Las variantes pueden ser codificadas por una variante alélica o representar una variante de empalme alternativa .

Las variantes como se describen en lo anterior se pueden preparar durante la síntesis del péptido o por una modificación posterior a la producción o cuando el péptido está en forma recombinante utilizando técnicas conocidas o mutagénesis dirigida al sitio, mutagénesis aleatoria o separación y/o ligación enzimática de ácidos nucleicos.

De acuerdo con la invención, los péptidos adicionales que pueden comprender la composición preferiblemente son variantes funcionales de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31. Es decir, los péptidos preferiblemente son capaces de inducir una respuesta inmunitaria. En particular, los péptidos preferiblemente son capaces de inducir producción de citocina en individuos alérgicos a ambrosía. Típicamente, la composición de la invención por lo tanto comprenderá por lo menos un polipéptido o variante del mismo el cual produce una respuesta de citocina en más de 45, 50, 55%, preferiblemente 60% o 65% de personas en una población de personas alérgicas a ambrosía. El número de personas en un panel de personas alérgicas a ambrosía puede ser cualquier número mayor que uno, por ejemplo por lo menos 20, 30, 40, 50, 80 o por lo menos 100 personas. Preferiblemente, la composición comprende por lo menos dos, tres o de manera más preferible cuatro péptidos. Preferiblemente, la respuesta de citocina es la producción de IL-13 o ILFN-?. La producción de citocina se puede medir por cualquier método adecuado. La producción de una citocina típicamente se considera que se ha llevado a cabo en respuesta a un péptido si la concentración de citocina producida en presencia del péptido es por lo menos 2, 3, 4 ó 5 veces por encima del nivel de fondo de la citocina que es producida en ausencia de un estímulo (es decir, la concentración producida por la misma persona en ausencia del péptido o de cualquier otro estímulo) . De manera alternativa, se puede considerar que la producción de una citocina se ha llevado a cabo si la cantidad de citocina producida excede un límite reconocido, habitualmente de 90, 95 o, preferiblemente de 100 pg/ml, típicamente de una muestra de aproximadamente 1.25 x 106 células en 250 µ? .

Los métodos adecuados para medir producción de citocina típicamente incluyen medir la liberación de citocina de células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) de una muestra tomada de un sujeto. La muestra habitualmente es sangre o suero. La liberación de citocina a partir de los PBMC se mide después de incubar las células en presencia de un péptido dado. Los sobrenadantes de la mezcla de incubación después se prueban para determinar la presencia de una citocina utilizando cualquier análisis adecuado, por ejemplo una ELISA, un análisis ELISPOT o análisis citométrico de flujo. Los métodos particularmente preferidos incluyen análisis de distribución de esferas Multiplex como se describe, por ejemplo, en Jager et al; Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, Vol . 10(l)p. 133-139. Habitualmente , la composición puede comprender por lo menos un péptido adicional o variante del mismo que no está entre los polipéptidos ya seleccionados, hasta un total de trece péptidos diferentes, lo cual produce una respuesta de citocina en más de 30%, 35%, 40%, preferiblemente 45% o 50% de las personas en una población de personas alérgicas a ambrosía.

La composición puede comprender además uno o más péptidos adicionales o variantes de los mismos que no están entre los polipéptidos ya seleccionados, hasta un total de trece péptidos diferentes, los cuales producen una respuesta de citocina en más de 10%, 15%, 20%, 25%, preferiblemente 30% o 35% de personas en una población de personas alérgica a ambrosía.

La composición puede comprender además uno o más péptidos adicionales los cuales inducen liberación de IL-10. Se conoce a IL-10 como un modulador inmunitario el cual puede desplazar la respuesta de los linfocitos T alejándolos de una respuesta de tipo alérgico. Una liberación significativa de IL-10 puede generar inducción de linfocitos T reguladores lo que genera o mejora la inducción de tolerancia de la presencia de los otros péptidos de la composición.

Preferiblemente, el péptido puede inducir liberación de IL-10 en por lo menos 35, 40, 45, 50 ó 55% de una población. En esta modalidad, el péptido por lo tanto es capaz de unirse a un subconjunto de alelos de CPH el cual es representativo de una porción equivalente de la población de la muestra. Preferiblemente, los péptidos inducen liberación de IL-10 en 55% o más, 65% o más, 70% o más, 75% o más, 80% o más, 85% o más o 90% o más de una población.

En la presente "inducción de liberación de IL-10" se define como una liberación la cual es mensurable por métodos utilizados habitualmente en el ámbito. Típicamente, la respuesta se mide in vitro utilizando linfocitos T obtenidos de personas alérgicas. Una "inducción" se califica como un nivel de IL-10 el cual es mayor que el observado en una muestra control en donde los linfocitos T no están expuestos al péptido. En algunas modalidades, una inducción de liberación de IL-10 adecuada para inducción de tolerancia se puede definir como una liberación de IL-10 por lo menos 35, 40, 45, 50 ó 55% de la cantidad promedio de IL-10 liberada en respuesta a la totalidad del alérgeno proteínico del cual el primer polipéptido es un fragmento. Debe entenderse que el alérgeno proteínico utilizado como una comparación puede ser el polipéptido intacto completo o puede ser una forma truncada que comprende los epítopos de linfocitos T los cuales median respuesta inmunitaria al alérgeno proteínico. Comúnmente, los péptidos individuales derivados de alérgeno proteínico mostrarán una liberación promedio de IL-10 que es mucho menor que la que se obtiene en respuesta al alérgeno proteínico completo o truncado, como se define en lo anterior. No obstante, los péptidos individuales que muestran liberación de IL-10 en por lo menos 35, 40, 45, 50 ó 55% de la liberación de IL-10 al alérgeno proteínico completo o truncado pueden ser agentes inductores de tolerancia particularmente adecuados. Los péptidos también pueden mostrar una respuesta promedio que es igual que o mayor que la respuesta observada en respuesta al alérgeno proteínico completo o truncado.

De manera alternativa, el nivel promedio de IL-10 liberado se puede medir en términos absolutos, en cuyo caso un nivel promedio superior a aproximadamente 400, 450, 500 ó 550 pg/ml se considerará que es una inducción, típicamente de una muestra de aproximadamente 1.25 x 10s células en 250 µ? .

Debe entenderse que el promedio puede ser la media, mediana o moda de liberaciones de IL-10 individuales observadas en la población. Debe entenderse que cuando una persona en la población muestra liberación de IL-10 inusualmente baja o inusualmente alta en comparación con los otros miembros de la población, debe ser excluido del promedio. Esto puede permitir una medición de un promedio que sea más representativo de las respuestas que se muestran en la población. El término "inusualmente bajo" o "inusualmente alto" se puede referir a los diferenciales de 10 veces o 20 veces en comparación con un promedio más representativo de las liberaciones de IL-10 que excluya los individuos que muestran características de liberación de IL-10 inusuales.

Las variables adecuadas capaces de unirse a TCR se pueden derivar empíricamente o se pueden seleccionar de acuerdo con criterios conocidos. Dentro de un péptido único existen ciertos residuos los cuales contribuyen a la unión dentro del surco de unión a antígeno de CPH y otros residuos que interactúan con regiones hipervariables del receptor de linfocitos T (Alien et al (1987) Nature 327:713-5).

Dentro de los residuos que contribuyen a la interacción del receptor de linfocitos T se ha demostrado una jerarquía la cual pertenece a la dependencia de activación de linfocitos T por sustitución de un residuo peptídico dado. Utilizando péptidos los cuales tienen uno o más residuos de contacto receptores de linfocitos T sustituidos con un aminoácido diferente, varios grupos han demostrado efectos profundos en el procedimiento de activación de linfocitos T. Evavold & Alien (1991) Nature 252:1308-10) demostraron la disociación de proliferación de linfocitos T y producción de citocina. En este modelo in vitro, un clon de linfocitos T específico para el residuo 64-76 de hemoglobina (en el contexto de I-Ek) fue expuesto con un análogo peptídico en el cual se realizó una sustitución conservadora de ácido glutámico en vez de ácido aspártico. Esta sustitución no interfirió significativamente con la capacidad del análogo para unirse a I-Ek.

Después de la exposición in vitro de un clon de linfocitos T con este análogo, no se detectó proliferación, auque se mantuvo la secreción de IL-4, así como la capacidad del clon para ayudar en las respuestas de los linfocitos B. En un estudio posterior el mismo grupo demostró la separación de citólisis mediada por linfocitos T de la producción de citocina. En este caso, la primera permaneció sin alteraciones mientras que la última se deterioró. La eficacia de los ligandos peptídicos alterados in vivo inicialmente se demostró en un modelo murino de EAE (encefalomielitis alérgica experimental) por McDevitt y colaboradores (Smilek efc al (1991) Proc . Nati. Acad Sci USA 88:9633-9637). En este modelo, se indujo EAE por inmunización con el péptido encefalitogénico Acl-11 de MBP (proteína básica de mielina) . La sustitución en la posición 4 (lisina) con un residuo alanina genera un péptido el cual se une bien a su elemento limitante (?a??ß?) pero el cual es no inmunogénico en la cepa PL/JxSJLFl susceptible y el cual además evitó el inicio de EAE cuando se administró antes o después de la inmunización con el péptido encefalitogénico . De esta manera se pueden identificar residuos en péptidos los cuales alteran la capacidad de los péptidos para inducir diversas funciones de los linfocitos T.

Ventajosamente, se pueden diseñar péptidos que favorezcan la proliferación de linfocitos T y la inducción de pérdida de sensibilización. Metzler y Wraith han demostrado capacidad tolerogénica mejorada de péptidos en los cuales se ha realizado sustituciones que incrementan la afinidad péptido-CPH (Metzler & Wraith (1993) Int Immunol ~:1159-65). El hecho de que un ligando peptídico alterado pueda provocar alergia de largo plazo y profunda en linfocitos T clonado se demostró por Sloan-Lancaster et al (1993) Nature 363:156-9.

Las composiciones de la invención son capaces de inducir una respuesta de fase tardía en un individuo que ha sido sensibilizado a los alérgenos. El término "respuesta de fase tardía" incluye el significado como se establece en Allergy and Allergy Diseases (1997) A. B. Kay (Ed.), Blackwell Science, pp. 1113-1130. La respuesta de fase tardía puede ser cualquier respuesta de fase tardía (LP ) . preferiblemente, los péptidos son capaces de inducir respuesta asmática tardía (LAR) o una respuesta rinítica tardía, o una respuesta cutánea de fase tardía o una respuesta ocular de fase tardía. Si un péptido particular puede generar o no una LPR se puede determinar utilizando métodos bien conocidos en el ámbito; un método preferido particularmente es el que se describe en Cromwell O, Durham SR, Shaw RJ, Mackay J y Kay AB . provocation tests and measurements of mediators from mast cells and basophils in asthma and allergic rhinitis. En: Handbook of Experimental Inmunology (4) Capítulo 127, Editor: Weir DM, Black ell Scientific Publications , 1986.

Así, de manera preferible, los péptidos individuales de la invención son capaces de inducir una LPR en un individuo quien ha sido sensibilizado a los alérgenos. Si un individuo ha sido sensibilizado o no a los alérgenos se puede determinar por procedimientos bien conocidos tal como la prueba de picaduras cutáneas con soluciones de extractos de alérgeno, inducción de LPR cutánea, antecedentes clínicos, exposición a alérgeno y prueba radioalergosorbente (RAST) para medición de IgE específico para alérgeno. Si una persona particular se espera que se beneficie o no del tratamiento se puede determinar por el médico en base, por ejemplo, en estas pruebas.

La pérdida de sensibilidad e inducción de tolerancia de un individuo a los alérgenos significa inhibición o amortiguamiento de las reacciones tisulares alérgicas inducidas por los alérgenos en individuos sensibilizados apropiadamente. Se ha demostrado que los linfocitos T pueden ser activados selectivamente y después se pueden volver insensibles o incapaces de responder. Además, la generación de alergia o eliminación de estos linfocitos T induce la pérdida de sensibilización de un paciente para un alérgeno particular. La pérdida de sensibilidad se manifiesta a si misma como una reducción en la respuesta a un alérgeno o un péptido derivado de alérgeno, o preferiblemente una eliminación de la respuesta, ante una segunda administración o administraciones posteriores del alérgeno o del péptido derivado de alérgeno. La segunda administración se puede realizar después de que ha transcurrido un periodo de tiempo adecuado para permitir que se produzca la pérdida de sensibilización; preferiblemente este es cualquier período entre un día y varias semanas. Se prefiere un intervalo de aproximadamente dos semanas .

Aunque las composiciones de la invención son capaces de inducir una LPR en un individuo alérgico a ambrosía, se apreciará que cuando se utiliza una composición para tratar a un paciente es preferible que se utilice una concentración suficientemente baja de la composición de manera que no se produzca una LPR observable pero que la respuesta sea suficiente para eliminar la sensibilidad parcialmente de los linfocitos T de manera que la siguiente dosis (preferiblemente más grande) se pueda suministrar, y así sucesivamente. De esta manera la dosis se incrementará hasta proporcionar pérdida de sensibilidad completa pero con frecuencia sin haber inducido incluso una LPR en el paciente. No obstante, la composición o péptido es capaz de hacerlo de esta manera a una concentración más alta que la administrada.

Las composiciones de la invención preferiblemente son capaces de inducir una respuesta de fase tardía en 50% o más de un conjunto de personas alérgicas a ambrosía de una población. De manera más preferible, las composiciones son capaces de inducir una LPR en 55% o más, 60% o más, 65% o más, 70% o más, 75% o más, 80% o más, 85% o más o 90% o más de personas sensibilizadas en un grupo. Si las composiciones son o no capaces de inducir una LPR en cierto porcentaje de un conjunto de personas se pueda determinar por métodos los cuales son bien conocidos en el ámbito.

Se comprenderá que los péptidos de la invención comprenden un epítopo de linfocitos T que consiste de un núcleo de 9 aminoácidos los cuales son una secuencia esencial mínima necesaria para unión de CPH clase II. No obstante, los péptidos también pueden comprender residuos adicionales que flanquean el núcleo de 9 aminoácidos. Por lo tanto los péptidos pueden comprender una región que contiene un epítopo de linfocito T en el cual algunos residuos se pueden modificar sin alterar la función del epítopo. En consecuencia, las variantes funcionales de los péptidos como se definen en lo anterior incluyen péptidos los cuales son alterados para mejorar su solubilidad en relación a la secuencia nativa de los péptidos. La solubilidad mejorada es útil para la inducción de tolerancia de sujetos a alérgenos de los cuales los péptidos de la invención se derivan, puesto que la administración de agentes poco solubles a sujetos genera respuestas inflamatorias no inductoras de tolerancia indeseables. Se puede mejorar la solubilidad de los péptidos al alterar los residuos que flanquean la región que contiene un epítopo de linfocitos T. Un péptido de la invención se puede manipular para que sea más soluble de manera que comprenda : i) N-terminal en los residuos del péptido los cuales flanquean a un epítopo de linfocito T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a los dos a seis aminoácidos contiguos inmediatamente N-terminales a los residuos en la secuencia de la proteína de la cual se deriva el péptido; y/o ii) en la parte C-terminal a los residuos del péptido los cuales flanquean a un epítopo de linfocitos T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a uno a seis aminoácidos contiguos inmediatamente C-terminales a los residuos en la secuencia de la proteína a partir de la cual se deriva el péptido; o iii) en las partes N y/o C-terminal a los residuos del péptido los cuales flanquean a un epítopo de linfocitos T, por lo menos un aminoácido se selecciona de arginina, lisina, histidina, glutamato y aspartato.

Opcionalmente, los péptidos pueden ser manipulados adicionalmente para que sean más solubles tal como: i) cualquier residuo cisteína en la secuencia nativa del péptido se sustituye con serina o ácido 2- aminobutírico; y/o ii) se suprime cualquier residuo en la parte N y/o C-terminal de la secuencia nativa del péptido los cuales no estén comprendidos en un epítopo de linfocitos T; y/o iii) se suprime cualquiera dos aminoácidos consecutivos que comprendan la secuencia Asp-Gly hasta en cuatro aminoácidos en la parte N y/o C-terminal de la secuencia nativa del péptido, los cuales no estén comprendidos en un epítopo de linfocito T.

ACIDOS NUCLEICOS Y VECTORES Los péptidos individuales que constituyen las composiciones y productos de la invención se pueden administrar directamente o se pueden administrar indirectamente por expresión a partir de una secuencia codificante. Por ejemplo, se puede proporcionar un polinucleótido que codifica para un péptido de la invención, tal como cualquiera de los péptidos descritos en lo anterior. Un péptido de la invención de esta manera se puede producir a partir o se puede suministrar en forma de un polinucleótido el cual lo codifica y es capaz de expresarlo. Cualquier referencia en la presente al uso, suministro o administración de un péptido de la invención se pretende que incluya el uso, suministro o administración indirectos del péptido vía expresión de un polinucleótido que lo codifica.

Los términos "molécula de ácido nucleico" y "polinucleótido" se utilizan de manera intercambiable en la presente y hacen referencia a una forma polimérica de polinucleótidos de cualquier longitud, ya sea desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos o análogos de los mismos. Los ejemplos no limitantes de polinucleótidos incluyen un gen, un fragmento de gen, ARN mensajero (AR m) , ADNc, polinucleótidos recombinantes , plásmidos, vectores, ADN aislado de cualquier secuencia, ARN aislado de cualquier secuencia, sondas de ácido nucleico y cebadores. Un polinucleótido de la invención se puede proporcionar en forma aislada o purificada. Una secuencia de ácido nucleico la cual "codifica" para un polipéptido seleccionado es una molécula de ácido nucleico la cual es transcrita (en caso de ADN) y traducida (en caso de ARNm) en un polipéptido in vivo cuando se coloca bajo el control de secuencias reguladoras apropiadas. Los límites de la secuencia codificante se determinan por un codón de inicio en la parte 5' (amino) terminal y un codón de detención de traducción en la parte 31 (carboxi) terminal . Para los propósitos de la invención, las secuencias de ácido nucleico pueden incluir, pero no se limitan a ADNc, a partir de ARNm viral, procariótico o eucariótico, secuencias genómicas de ADN o ARN viral o procariótico o incluso secuencias de ADN sintéticas. Una secuencia de finalización de transcripción se puede localizar 3' respecto a la secuencia codificante.

Los polinucleótidos de la invención se pueden sintetizar de acuerdo con métodos bien conocidos en el ámbito, como se describe a modo de ejemplo en Sambrook et al (1931, Molecular Cloning - a laboratory manual; Cold Spring Harbor Press) .

Las moléculas polinucleotídicas de la presente invención se pueden proporcionar en forma de un cásete de expresión el cual incluye secuencias de control unidas operablemente a la secuencia insertada y de esta manera se permite la expresión del péptido de la invención in vivo en un objetivo dirigido. A su vez, estos casetes de expresión típicamente se proporcionan dentro de vectores (por ejemplo plásmidos o vectores virales recombinantes) los cuales son adecuados para uso como reactivos para inmunización con ácido nucleico. Los casetes de expresión se pueden administrar directamente a un sujeto hospedador. De manera alternativa, un vector que comprende un polinucleótido de la invención se puede administrar a un sujeto hospedador. Preferiblemente el polinucleótido se prepara y/o administra utilizando un vector genético. Un vector adecuado puede ser cualquier vector el cual es capaz de transportar una cantidad suficiente de información genética y permite la expresión de un péptido de la invención.

La presente invención por lo tanto incluye vectores de expresión que comprenden tales secuencias polinucleotldicas . De esta manera, la presente invención proporciona un vector para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende cuatro o más secuencias polinucleotídicas las cuales codifican para polipéptidos diferentes de la invención y opcionalmente una o más secuencias polinucleotídicas adicionales las cuales codifican para polipéptidos diferentes, como se describe en la presente. El vector puede comprender 4, 5, 6 ó 7 secuencias polinucleotídicas las cuales codifican para polipéptidos diferentes de la invención .

Además, se apreciará que las composiciones y productos de la invención pueden comprender una mezcla de polipéptidos y polinucleótidos . En consecuencia, la invención proporciona una composición o producto como se define en la presente en lugar de cualquiera de uno del polipéptido está un polinucleótido capaz de expresar al polipéptido.

Los vectores de expresión se construyen habitualmente en el ámbito de biología molecular y pueden involucrar, por ejemplo, el uso de ADN plasmídico e iniciadores, promotores, mej oradores y otros elementos apropiados tales como, por ejemplo, señales de poliadenilación las cuales pueden ser necesarias y las cuales se colocan en la orientación correcta con el fin de permitir la expresión de un péptido de la invención. Otros vectores adecuados serán evidentes para las personas expertas en el ámbito. A modo de ejemplo adicional, a este respecto se hace referencia a Sambrook et al.

De este modo, se puede proporcionar un polipéptido de la invención al suministrar el vector con una célula y permitir que se lleve a cabo la transcripción a partir del vector. Preferiblemente, un polinucleótido de la invención o para uso en la invención en un vector está unido operablemente a una secuencia de control la cual es capaz de proporcionar la expresión de la secuencia codificante por la célula hospedadora, es decir, el vector es un vector de expresión .

El término "unido operablemente" se refiere a una distribución de elementos en donde los componentes descritos de esta manera están configurados de manera que realizan su función habitual. De este modo, una secuencia reguladora dada, tal como un promotor unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico es capaz de llevar a cabo la expresión de esa secuencia cuando están presentes las enzimas adecuadas. El promotor no necesita ser contiguo a la secuencia en la medida en que funcione para dirigir la expresión de la misma. Así, por ejemplo, pueden estar presentes secuencias intermedias no traducidas aunque transcritas, entre la secuencia promotora y la secuencia de ácido nucleico y la secuencia promotora aún se puede considerar "unida operablemente" a la secuencia codificante.

En el ámbito se han descrito numerosos sistemas de expresión, cada uno de los cuales habitualmente consisten de un vector que contiene un gen o secuencia nucleotídica de interés unido operablemente a secuencias de control de expresión. Estas secuencias de control incluyen secuencias promotoras transcripcionales y secuencias de inicio y finalización transcripcionales. Los vectores de la invención pueden ser, por ejemplo, vectores de plásmido, virus o fago proporcionados con un origen de replicacion, opcionalmente un promotor para la expresión del polipéptido y opcionalmente un regulador del promotor. Un "plásmido" es un vector en forma de un elemento genético extracromosómico . Los vectores pueden contener uno o más genes marcadores seleccionables , por ejemplo un gen de resistencia a ampicilina en el caso de un plásmido bacteriano o un gen de resistencia para un vector micótico. Los vectores se pueden utilizar in vitro, por ejemplo para la producción de ADN o AR o se pueden utilizar para transfectar o transformar una célula hospedadora, por ejemplo, una célula hospedadora de mamífero. Los vectores también se pueden adaptar para ser utilizados in vivo, por ejemplo para permitir la expresión in vivo del polipéptido.

Un "promotor" es una secuencia nucleotídica la cual inicia y regula la transcripción de un polinucleótido que codifica para un polipéptido. Los promotores pueden incluir promotores inducibles (en donde la expresión de una secuencia polinucleotídica unida operablemente al promotor se induce por analito, cofactor, proteína reguladora, etc.), promotores reprimibles (en donde la expresión de una secuencia polinucleotídica unida operablemente al promotor es reprimida por un analito, cofactor, proteína reguladora, etc.), y promotores constitutivos. Se pretende que el término "promotor" o "elemento de control" incluya regiones promotoras de longitud completa y segmentos funcionales (por ejemplo controles de transcripción o traducción) de estas regiones .

Un polinucleótido, cásete de expresión o vector de acuerdo con la presente invención adicionalmente puede comprender una secuencia de péptido señal. La secuencia de péptido señal generalmente se inserta en un enlace operable con el promotor de manera que el péptido señal se expresa y facilita la secreción de un polipéptido codificado por la secuencia codificante también en un enlace operable con el promotor .

Típicamente, una secuencia peptídica de señal codifica para un péptido de 10 a 30 aminoácidos, por ejemplo 15 a 20 aminoácidos. Con frecuencia los aminoácidos son predominantemente hidrofóbicos . En una situación típica, un péptido señal se dirige a una cadena polipeptídica en crecimiento que presenta el péptido señal al retículo endoplásmico de la célula que realiza la expresión. El péptido señal se separa en el retículo endoplásmico, lo que permite la secreción del polipéptido por medio del aparato de Golgi . Así, un péptido de la invención se puede proporcionar a un individuo por expresión a partir de células dentro del individuo y secreción desde estas células.

De manera alternativa, los polinucleótidos de la invención se pueden expresar de una manera adecuada para permitir la presentación de un péptido de la invención por una molécula de CPH clase II en la superficie de una célula presentadora de antígeno. Por ejemplo, un polinucleótido, un cásete de expresión o un vector de la invención pueden dirigirse a células presentadoras de antígeno, o la expresión de un péptido codificado se puede estimular de manera preferencial o se puede inducir en estas células.

Los polinucleótidos de interés pueden ser utilizados in vitro, ex vivo o in vivo en la producción de un péptido de la invención. Tales polinucleótidos se pueden administrar o utilizar en la prevención o tratamiento de alergia por inducción de tolerancia.

Los métodos para el suministro de genes se conocen en el ámbito. Véanse, por ejemplo, las patentes de E.U.A. números 5,399,346; 5,580,859 y 5,531,466. La molécula de ácido nucleico se puede introducir directamente en el sujeto receptor, mediante inyección estándar intramuscular o intradérmica; suministro transdérmico de partículas; inhalación; tópicamente o por modos de administración oral, intranasal o en mucosa. Alternativamente, la molécula se puede introducir ex vivo en las células que han sido extraídas de la persona. Por ejemplo, un polinucleótido, cásete de expresión o vector de la invención se pueden introducir en APC de una persona ex vivo. Las células que contienen la molécula de ácido nucleico de interés se reintroducen en el sujeto de manera tal que se puede generar una respuesta inmunitaria contra el péptido codificado por la molécula de ácido nucleico. Las moléculas de ácido nucleico utilizadas en estos procesos de inmunización generalmente se denominan en la presente como "vacunas de ácido nucleico" .

Los polipéptidos , polinucleótidos , vectores o células de la invención pueden estar presentes en forma sustancialmente aislada. Se pueden mezclar con portadores o diluyentes los cuales no interferirán con el uso destinado y aún así se considerarán como sustancialmente aisladas. También pueden estar en forma sustancialmente purificada, en cuyo caso generalmente comprenderán por lo menos 90%, por ejemplo por lo menos 95%, 98% o 99% de las proteínas, polinucleótidos, células o masa seca de la preparación.

CELULAS PRESENTADORAS DE ANTIGENO (APC) La invención abarca el uso in vitro de un método para producir una población de APC que presente los péptidos de la invención sobre su superficie, y que posteriormente puede ser utilizado en tratamiento. El método se puede llevar a cabo ex vivo sobre una muestra de células que han sido obtenidas de un paciente . Las APC producidas de esta manera por lo tanto forman un agente farmacéutico que puede ser utilizado en el tratamiento o prevención de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia. Las células serán aceptadas por el sistema inmunitario del individuo debido a que se derivan del mismo individuo. El suministro de células que han sido producidas de esta manera al individuo de quien originalmente se obtuvieron, por lo tanto constituye una modalidad terapéutica de la invención.

FORMULACIONES Y COMPOSICIONES Los péptidos, polinucleótidos , vectores y células de la invención se pueden proporcionar a un individuo ya sea de manera sola o combinada. Cada molécula o célula de la invención se puede proporcionar a un individuo en una forma aislada, sustancialmente aislada, purificada o sustancialmente purificada. Por ejemplo, un péptido de la invención se puede proporcionar a un individuo sustancialmente en forma libre de otros péptidos.

Aunque es posible que los péptidos, polinucleótidos o composiciones de acuerdo con la invención se puedan presentar en forma cruda, es preferible presentarlos como una formulación farmacéutica. Así, de acuerdo con un aspecto adicional de la invención, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia, que comprende una composición, vector o un producto de acuerdo con la invención junto con uno o más portadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables y opcionalmente uno o más ingredientes terapéuticos adicionales. Uno o varios de los portadores deben ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no deben ser perjudiciales a quien los reciba. Habitualmente , los portadores para inyección y la formulación final son estériles y libres de pirógenos .

La formulación de una composición que comprende el péptido, polinucleótidos o células de la invención se puede llevar a cabo utilizando químicas y metodología de formulación farmacéutica estándar, todo lo cual está disponible fácilmente para una persona habitualmente experta en el ámbito.

Por ejemplo, las composiciones que contienen una o más moléculas o células de la invención se pueden combinar con uno o más excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables. Las sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsificantes , sustancias amortiguadoras de pH y similares pueden estar presentes en el excipiente o vehículo. Estos excipientes, vehículos y sustancias auxiliares generalmente son agentes farmacéuticos que no inducen una respuesta inmunitaria en la persona quien recibe la composición y los cuales se pueden administrar sin toxicidad indebida. Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a líquidos tales como agua, solución salina, polietilenglicol , ácido hialurónico y etanol. Las sales farmacéuticamente aceptables también se pueden incluir en la presente, por ejemplo sales de ácido mineral tales como clorhidratos, bromhidratos , fosfatos, sulfatos y similares; y las sales de ácidos orgánicos tales como acetatos, propionatos, malonatos, benzoatos y similares. Una discusión exhaustiva de excipientes, vehículos y sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables está disponible en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co. , N. J. 1991) .

Las composiciones se pueden preparar, empacar o vender en una forma adecuada para administración en bolo o para administración continua. Las composiciones inyectables se pueden preparar, empacar o vender en forma de dosificación unitaria, por ejemplo como ampolletas o en recipientes de dosis múltiples que contienen un conservador. Las composiciones incluyen pero no se limitan a suspensiones, soluciones, emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, pastas y formulaciones implantables de liberación sostenida o biodegradables . Las composiciones pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen pero que no se limitan a agentes que mejoren la suspensión, la estabilización o la dispersión. En una modalidad de una composición para administración parenteral, el ingrediente activo se proporciona en forma seca (por ejemplo, como polvo o gránulos) para dilución o reconstitución con un vehículo adecuado (por ejemplo agua estéril sin pirógenos) antes de su administración parenteral de la composición reconstituida. Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar, empacar o vender en forma de una suspensión o solución acuosa u oleosa inyectable estéril. Esta suspensión o solución se puede formular de acuerdo con las técnicas conocidas y puede comprender, además del ingrediente activo, ingredientes adicionales tales como los agentes dispersantes, agentes humectantes o agentes que mejoren la suspensión descritos en la presente. Las formulaciones inyectables estériles se pueden preparar utilizando un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable tal como agua o 1 , 3 -butanodiol , por ejemplo. Otros diluyentes y solventes aceptables incluyen, pero no se limitan a solución de Ringer, solución isotónica de cloruro de sodio y aceites fijos tales como mono- o di-glicéridos sintéticos. Otras composiciones administrables parenteralmente las cuales son útiles incluyen aquellas las cuales comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina, en una preparación liposómica o como un componente de un sistema polimérico biodegradable . Las composiciones para liberación sostenida o implantación pueden comprender materiales poliméricos o hidrofóbicos farmacéuticamente aceptables tales como una emulsión, una resina de intercambio iónico, un polímero escasamente soluble o una sal escasamente soluble.

De manera alternativa, los péptidos o polinucleótidos de la presente invención pueden ser encapsulados , adsorbidos o asociados con portadores particulados. Los portadores particulados adecuados incluyen aquellos derivados de polímeros de polimetilmetacrilato así como micropartículas de PLG derivadas de poli ( láctidas) y poli (láctida-co-glicólidas) . Véase, por ejemplo, Jeffrey et al. (1993) Pharm. Res. 10:362-368. Otros sistemas y polímeros particulados también se pueden utilizar, por ejemplo polímeros tales como polilisina, poliarginina, poliornitina, espermina, espermidina así como conjugados de estas moléculas.

La formulación de cualquiera de los péptidos, polinucleótidos o células mencionados en la presente dependerá de factores tales como la naturaleza de la sustancia y el método de administración. Cualquiera de tales sustancias se puede administrar en una diversidad de formas de dosificación. Se pueden administrar oralmente (por ejemplo como comprimidos, trociscos, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables) por vía parenteral, epicutánea, subcutánea, por inhalación, intravenosa, intramuscular, intraesternal , transdérmica, intradérmica, sublingual, intranasal, bucal o por técnicas de infusión. La sustancia también se puede administrar como supositorios. Un médico será capaz de determinar la vía de administración adecuada para cada persona particular.

Las composiciones de formulaciones de la invención comprenderán una concentración adecuada de cada péptido/polinucleótido/célula para que sea eficaz sin provocar reacciones adversas. Habitualmente, la concentración de cada péptido y la composición estará en el intervalo de 0.03 a 200 nmol/ml. De manera más preferible en el intervalo de 0.3 a 200 nmol/ml, de 3 a 180 nmol/ml, de 10 a 150 nmol/ml o 30 a 120 nmol/ml. La composición o formulaciones tendrán una pureza de más de 95% o 98% o una pureza de por lo menos 99%.

En una modalidad, por lo tanto, los péptidos, polinucleótidos , células o composiciones de la invención se utilizan para tratamiento en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. Los agentes se pueden administrar de manera separada, simultánea o secuencial . Se pueden administrar en composiciones iguales o diferentes. En consecuencia, en un método de al invención, el sujeto también puede ser tratado con un agente terapéutico adicional .

De esta manera una composición se puede formular para que comprenda una molécula y/o célula de la invención y también una o más moléculas terapéuticas adicionales. Una composición de la invención puede ser utilizada de manera alternativa de modo simultáneo, secuencial o separado con una o más composiciones terapéuticas adicionales como parte de un tratamiento combinado.

METODOS TERAPEUTICOS Y PERSONAS QUE VAN A SER TRATADAS La presente invención se relaciona con péptidos, polinucleótidos , vectores y células que son capaces de eliminar la sensibilidad o generar tolerancia en los individuos humanos a los alérgenos descritos en lo anterior y por lo tanto son útiles en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía. La invención proporciona composiciones, productos, vectores y formulaciones para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía o inducción de tolerancia. La invención también proporciona un método de inducción de tolerancia o eliminación de sensibilidad a personas alérgicas a ambrosía que comprende administrar, solos o en combinación los polipéptidos/polinucleótidos/células de la invención como se describe en lo anterior.

El individuo que va a ser tratado o al que se le proporciona con la composición o fomulación de la invención preferiblemente es un humano. Se apreciará que la persona que va a ser tratada puede saberse que es sensibilizada a los alérgenos, que se encuentra en riesgo de ser sensibilizada o que se sospecha que ha sido sensibilizada. La persona puede ser probada para sensibilización utilizando técnicas bien conocidas en el ámbito y como se describe en la presente. De manera alternativa, la persona puede tener antecedentes familiares de alergia a ambrosía. Puede no ser necesario probar un individuo para sensibilización a ambrosía debido a que el individuo puede mostrar síntomas de alergia cuando se expone a ambrosía. Por exposición se quiere indicar proximidad, por ejemplo, a una planta de ambrosía o una sustancia o producto derivado de una planta de ambrosía o una sustancia o producto que contenga o que comprenda cualquiera de los anteriores. La sustancia o producto derivado de una planta de ambrosía típicamente es polen de ambrosía. Mediante el término proximidad se quiere indicar 10 metros o menos, 5 metros o menos, 2 metros o menos, 1 metro o menos o 0 metros de los artículos descritos antes. Los síntomas de alergia pueden incluir ojos irritados, flujo nasal, dificultades para respirar, piel con comezón y enrojecida o exantema.

La persona que va a ser tratada puede ser de cualquier edad. No obstante, de manera preferible la persona puede estar en el intervalo de edades de 1 a 90, 5 a 60, 10 a 40 o de manera más preferible 18 a 35 años de edad.

Preferiblemente, el individuo que va a ser tratado es de una población que presenta frecuencias de alelo de CPH dentro del intervalo de frecuencias que son representativas de la población caucásica. Las frecuencias de alelo de la población de referencia para 11 familias de alelo DRB1 comunes se muestran en la tabla 1 (datos de HLA Facts Book, Pharman and Barber) .

TABLA 1 Las frecuencias de referencia se obtienen por análisis de estudios múltiples que reportan frecuencias y las cantidades que se muestran son medias de valores . Preferiblemente, por lo tanto, el individuo que va a ser tratado es de una población que tiene frecuencias de alelo CPH equivalentes como la población de referencia para los alelos a los que se hace referencia en la tabla 1 (tal como, por lo menos, 1, 2, 3, 4, 5 o la totalidad de los alelos, por ejemplo dentro de los intervalos de estas cantidades más o menos 1, 2, 3, 5, 10, 15 o 20%.

Preferiblemente, el individuo es de una población en donde las frecuencias de alelo de los siguientes alelos DRBl son: 4 - por lo menos 9% 7 - por lo menos 10% 11 - por lo menos 8%.

La persona puede haber presentado alergia a ambrosía durante por lo menos 2 semanas, 1 mes, 6 meses, 1 año o 5 años. La persona pudo haber padecido de exantema, congestión nasal, escurrimiento nasal y/o tos causada por la alergia. La persona pudo o no habérsele administrado con otras composiciones/compuestos los cuales tratan alergia a ambrosía.

La persona típicamente vive en una región geográfica con un clima tibio y húmedo. La persona típicamente padece de alergia a ambrosía en una estación particular. La estación típicamente corresponde a la estación de fluoración de ambrosía, la cual típicamente es de verano a otoño, preferiblemente a fines del verano (de julio a agosto en el hemisferio boreal) o a inicios del otoño (septiembre a octubre en el hemisferio boreal) . La persona alérgica a ambrosía típicamente es alérgica al polen de ambrosía.

INMUNOTERAPIA DE COMBINACION Dado que muchos individuos son alérgicos o pueden requerir eliminación de sensibilidad a varios antígenos polipeptídicos , la presente invención también proporciona un medio para eliminar la sensibilidad de personas que son alérgicas a antígenos múltiples. La "tolerancia" inducida en una persona a un primer antígeno polipeptídico o alérgeno puede crear en la persona un "ambiente tolerogénico" en donde las respuestas inmunitarias inapropiadas a otros antígenos pueden ser reguladas por disminución con el fin de proporcionar tolerancia a los otros antígenos.

Este hallazgo significa que los individuos alérgicos a alérgenos múltiples pueden ser tratados en un período de tiempo muy reducido y que los individuos gravemente alérgicos a algunos alérgenos (por ejemplo, cacahuate) pero un poco menos alérgicos a otros alérgenos (por ejemplo pelo de gato) se pueden beneficiar del tratamiento en donde se establece tolerancia al alérgeno más ligero y después este ambiente tolerogénico se utiliza para proporcionar tolerancia a otro alérgeno más fuerte. Además, las personas quienes padecen de un trastorno autoinmune quienes adicionalmente han sido sensibilizados (o que de alguna otra manera son inmunes) a un antígeno o alérgeno no relacionado se pueden beneficiar de un régimen de tratamiento en donde se establece primero tolerancia a un antígeno o alérgeno no relacionado y después este ambiente tolerogénico se utiliza para proporcionar tolerancia al autoantígeno asociado con el trastorno autoinmune.

Por lo tanto, se proporciona un método para eliminar la sensibilidad de una persona alérgica a ambrosía, al alérgeno de ambrosía, como se describe en lo anterior y uno o más antígenos polipeptídicos diferentes adicionales. En una primera etapa, el método involucra administrar al individuo una composición/producto/formulación (composición primaria) de acuerdo con esta invención, como se describe en la presente y en donde la administración se lleva a cabo de una manera suficiente para generar un estado hiposensible (de tipo respuesta) contra el alérgeno de ambrosía. Una vez que se ha establecido un estado hiposensible hacia el alérgeno de ambrosía o se ha producido por lo menos un desplazamiento hacia la eliminación de sensibilización, el método permite la administración de una composición secundaria que comprende un segundo antígeno polipeptídico diferente al cual se va a sensibilizar al individuo. La administración de la composición secundaria se lleva a cabo de manera tal que aprovecha el ambiente tolergénico establecido por el uso de la composición primaria, en donde ahora es posible establecer tolerancia al segundo antígeno polipeptídico diferente. La composición secundaria se coadministra ya sea con la primera composición primaria o un fragmento más grande del alérgeno a partir del cual se deriva la composición primaria. Mediante el término "coadministrar" se quiere indicar la administración simultánea o concurrente, por ejemplo, cuando los dos están presentes en la misma composición o se administran en composiciones separados casi al mismo tiempo pero en sitios diferentes, así como el suministro de antígenos polipeptídicos en composiciones separadas en momentos diferentes. Por ejemplo, la composición secundaria se puede suministrar antes o subsecuente al suministro de la primera composición en el mismo sitio o en uno diferente. La sincronización entre administraciones puede variar desde aproximadamente varios segundos de diferencia hasta varios minutos de diferencia, varias horas de diferencia o incluso varios días de diferencia. Además se pueden utilizar diferentes métodos de administración.

El segundo antígeno polipeptídico preferiblemente es un alérgeno diferente del alérgeno de ambrosía. Los alérgenos adecuados para uso en los métodos de la invención por supuesto se pueden obtener y/o producir utilizando métodos conocidos. Las clases de alérgenos adecuados incluyen, pero no se limitan a otros alérgenos de ambrosía, polen, pelo de animal (especialmente pelo de gato) , pastos, mohos, polvos, antibióticos, venenos de insectos pungentes, una diversidad de alérgenos ambientales (que incluyen sustancias químicas y metales), fármacos y alimentos. Los alérgenos comúnes de árboles incluyen el polen de chopo, álamo, fresno, abedul, alce, roble, olmo, nogal y nogal de nuez lisa; los alérgenos de plantas comunes incluyen aquellos de artemisa, ambrosía, llantén menor, acedorilla y quenopodio blanco; alérgenos de plantas de contacto incluyen aquellos de roble venenoso, hiedra venenosa y ortigas; alérgenos de pasto comunes incluyen los alérgenos de ballico, fleo, sorgo de Alepo, grama, cañuela y espiguilla; los alérgenos comunes también se pueden obtener de mohos u hongos tales como Alternaría, Fusarium, Hor-nodendrum, Aspergillus, Micropolyspora, Mucor y actinomicetos termofílieos; los alérgenos epidérmicos se pueden obtener de polvo casero u orgánico (típicamente de origen micótico) o de fuentes animales tales como plumas, pelo de perro, alérgenos de alimentos comunes incluyen leche y queso (lácteos, huevo, trigo, nueces (por ejemplo cacahuate) , alimentos marinos (por ejemplo crustáceos), chícharos, frijoles y alérgenos de gluten; los alérgenos ambientales comunes incluyen metales (níquel y oro) , sustancias químicas (formaldehído, trinitrofenol y turpentina) , látex, caucho, fibra (algodón o lana) , arpillera, colorantes para el pelo, cosméticos, alérgenos detergentes y de perfumes; los alérgenos de medicamentos comunes incluyen alérgenos de anestésicos locales y salicilato; los alérgenos de antibióticos incluyen alérgenos de penicilina, tetraciclina y sulfonamida; y los alérgenos de insectos comunes incluyen abeja, avispas y veneno de hormigas así como alérgenos de cálix de cucaracha. Los alérgenos particularmente bien caracterizados incluyen, pero no se limitan a alérgeno de gato mayor Fel di, fosfolipasa A2 (PLA) de veneno de abeja (Akdis et al. (1996) J. Clin. Invest. 9_8: 1676-1683) , alérgeno de polen de abedul Bet v 1 (Bauer et al. (1997) Clin. Exp. Immunol . 107:536-541) , y el alérgeno de pasto recombinante multi-epitópico rKBG8.3 (Cao et al. (1997) Immunology 90:46-51). Estos y otros alérgenos adecuados están disponibles comercialmente y/o se pueden preparar fácilmente como extractos siguiendo técnicas conocidas .

Preferiblemente, el segundo alérgeno polipeptídico se selecciona de la lista de secuencias de alérgenos y números de acceso de base de datos (números de acceso NCBI Entrez) siguientes. NCBI es el National Center for Biotechnology information y es una división del US National Institutes of Health. El sitio de la red de NCBI, desde el cual se puede buscar acceso a la base de datos es www.ncbi.nlm.nih.gov/. Las secuencias de alérgeno y los números de acceso de base de datos (números de acceso NCBI Entrez) : Dermatofagoides pteronyssinus Derp 1 ívDnVLAIASI AI^ VKYVQSNCI JAINHI^DI^ GNAPAEIDIJIQMR^ EQELVDCASQHGCHGDTIPRGmYIQHNG QESYYRYVAREQSaa P AQR FGISNYCQIYPPNVNKIREAIAQTHSAIAVnGIKDLDA QF YHAVN GYSNAQGVDYW^ YPYWDL Der 2 MMYKEX!ISIXVAAVARDQVD^ QI-EAVFEANQNTKTAKIEIK^ KYTWVPKIAPKSENVVYTV^ Derp3 TIIJ)BYWILTAAHCVAGQ ^ QIDDlAIJKLKSPMKI^QK AKAVGIJ'AKGSDVKVGDQVRVSGW SYSIJSEIJ iVDIA SRKECNELYSKANAEVTD MICGGDVANGG DSCQ GDSGGPVVDVKNNQWGIVSWGYGCA^ Der KYXNPHnaX SvTTXLME Derp5 MKF1IAFFV ATLAVMTVS GEDKKHD YQ>ffiFDI¾LMER^ EQINHFBEKFIKEMKDKIVABMDTTLAMro LEMAKKS GDE-ERDLKKEE A V DE V Derp 6 AIGXQPAAEAEAPFQISLMK Der 7 M KLIIIAAAAFVAVSADPIHYDK^^ DHSD _FERHIGIIDIJGE]-IMR QVRGLKQMK V LVGVHDDWSMEYDIAYKIXSD^ SFEVRQFANVVNHIGGI^IU)PIFAVI^DVLTAIFQDTV A ELERNNQ Der 9 IVGGSNASP GD AVYQIAL Dermatopbagoides farinae Der f 1 MIOTVIAIASI VLTVYARPASIK^ YVEAKGAINHLSDI-SIJ^ mrSBIJ)IJlSUlTVTTIRMQGGCGSCWAFSGVAA ELVDCASQHGCHGimPRGffiYIQQNGVVE^ IS YCQIYPPDVKQIREALTQ^AIAVnGI DLRAFQHYDGRTO^ NYHAVIWGYGSTQGDDYWIVIWSWDTTWGDSGYGWQ PYWIM Derf2 MISKII£I^I VAAWADQ\toVK^ TLEAm)ANQOT A IEI ASIX)GI-Ero YTWN IAPl^ENVVVTV LIGDNGVIACAI^ Dcr f3 mTIVVUAANlIATO SIIJDEY TLTAAHCVNGQSAKKI^IRYNTIJ HASG^ mDNDVAIJ_KI TPMTIJ3QTOAKP WI^ GSYSI^SEIX^RVDIDVVSREQCDQLYSKAGADVSEN ICGGDVANGGVDSC QGDSGGPVVDVATXQIVGIVSWGYGCAR GYPGVYmVG n^WIESKRS Q Derf4 AVGGQDADLAEAPFQISLLK Der f7 MMKFLLIAAVAFV AVS ADPIHYDKrrBEINKAIDD AJAAIEQSE IDPMKVPDH AD I¾RHVGIVDFKGEIAMR IEARGIXQMKRQGDA QVHDDIVSMEYDIA.Y LGDLHPTTHVISDIQDFW KN Las secuencias de alérgeno de acaro adicional (acceso NCBI entrez) : 1170095; 1359436; 2440053; 666007; 487661; 1545803; 84702; 84699; 625532; 404370; 1091577; 1460058; 7413; 9072; 387592. Gato Secuencias de Felis (acceso NCBI entrez) : 539716; 539715; 423193; 423192; 423191; 423190; 1364213; 1364212; 395407; 163827; 163823; 163825; 1169665; 232086; 1169666.

Látex Secuencias de Hevea: Hevbl AEDEDNQQGQGEGHYIXiF^ DlffiGPVKNVA LYNl^SYIPNGALKPVDSTWASVT^ VSAJRAAPEAARSI.ASSI GQTKIIAKVFYGEN Hevb3 MAEEVEEBRIXYLDFVRA^ KTVVTPVYYIPI^VKFVDKT^ RIVTJOVASSVFOTGVQEGAKALYANL^^ NVVVPTAX^SB Y-^VVRGTTCQGYRVSSYLPIXPTI^ Secuencias de Hevea adicionales (acceso NCBI entrez) : 3319923 3319921; 3087805; 1493836; 1480457; 1223884 3452147 ; 3451147; 1916805; 232267; 123335; 2501578; 3319662 3288200 ; 1942537; 2392631; 2392630; 1421554 ; 1311006; 494093 3183706 ; 3172534; 283243; 1170248; 1708278; 1706547; 464775 266312; 231586; 123337; 116359; 123062; 2213877; 542013 2144920 ; 1070656; 2129914; 2129913 ; 2129912; 100135 ; 82026 1076559 82028; 82027; 282933; 280399; 100138; 1086972 108697; 1086976; 1086978; 1086978; 1086976; 1086974; 1086972 913758; 913757; 913756; 234388; 1092500; 228691; 1177405 18839; 18837; 18835; 18833; 18831; 1209317; 1184668; 168217 168215; 168213; 168211; 168209; 348137.

Ballico Secuencias de Lolium: 126385 Lol p l MASSSSVIXWAIJFAVFI/JSAHGIAKVPPGP ITAEY GDKWLDA STWYGK PESCSGEAVTVTlTODNEBPIAPYHroi^GHAFGSMAKKGEE^ QFRRVKCKYPDDTKPTFITVEKASNPKYlA^ DKWffil ESWGAVWRTOTPD LTGPFTVRYT^ SYSAK 126386 Lol p 2a AAPVEFTVEKGSDEK DLAI^EE^^ GVWEKSDKPIICGPFNFRFVSEKGM^^ 126387 Lolp 3 TKVDLTVEKGSDAKTLVOJI Y^^ WEVKSAICTLTGPMNFRFLSKGGMKNVFOEVr^ 2498581 Lolp 5a MA VQKYTVAIJFLR GPRGGP G S YAADAGYTPAAAATPATP AA P AGGWR BGDDRRAEAAGGRQRIASRQPWPPIJTPIJ iTSSP^SRPPSPSPPRASSPTSA AKAPGIJPKLIJTAYDVAYKAAEAHPRGQV V PATEEVIAAKIPTGELQIVDKIDAAF IAATAANAAP^ AI-NECTGGAMRPTSSSPPSRPRSSRPTPPPSPAAPEVKYAVraAALTXArrA TQAQKAGKPAAAAATAAATVATAAATAAAVIJTPL^^ 2498582 Lol p 5b MAVQimTVAIJT^VALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATP ATPATPAAWSG ATTEEQKIJE INAGFKAAVAAAAVVPPAD GTATNKAFVEGIASGYADQSKNQLTSKIJD YVATT^TEALRVIAGTLEVHAVKPAAEBVK^ ATAANAAPANDKFIVFPJ^TnWAI VSI-GAAYDS Q AT APE VKYTVSET AL A VTAMS EAEKEATP AAAATATPTP AAAT ATAT PAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGY V 455288 Lol p isoforma 9 MAVQ HTVAIi^AVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATTP ATPATPAAWSGKAI EEQKIIEKINAG]^ GTAimAFVEGI ^GYADQSK QLTS LDAALKI YEAAQGATPEAKYDA YVATLTEAIJ&VIAGTLEVHAV PAAEEVK^ ATAANAAPANDKFnfFBNTO^^ KQATAPEVKYTVSETAD KA AMSEAEI^ PAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGYKV 1582249 Lol p 11 D GPGFVWGRVYCDPO AGFETNVSHNVEGAWAVDC^ ATTD DGWYKIEIDQDHQEEICTVA^ IKQQGIRYANPIAFFR EPLKECGGILQAY Secuencias de Lolium adicional (acceso NCBI entrez) : 135480; 417103; 687261; 687259; 1771355; 2388662; 631955; 542131; 542130; 542129; 100636; 626029; 542132; 320616; 320615; 320614; 100638; 100634; 82450; 626028; 100639; 283345; 542133; 1771353; 1763163; 310877; 310875; 250525; 55317; 515377; 510911; 939932; 439950; 2718; 168316; 168314; 485371; 2388664; 2832717; 2828273; 548867.

Arbol de olivo Secuencias de olivo 416610 Ole e l EDIPQPPVSQFHIQGQVYCDTCP GFITE^ EVGYTRAEGLYSMLVERDHKNEFCETM NTVNGTTRTVNP JFFKKEA^ Parietaria Secuencias de parietaria: 2497750 Par jP2 RTVSMAALVVIAAAIAWTSSAEPAPAPAPG^ BEKEPSKECCSGTKKI^EEVKTO KCDIKTTT^PITADFDCS IQSTIFRGYY 1352506 Par jP5 VRAI.MPC PFVQG EKEPS GCCSGA EU-DGETKTGP KTYSDmGKlVSBVPKHCGIVDSKIJPIDVN DCKT^ GPVTGPSDPAH ARLERPQIRVPPPAPEKA 1532056 Par jP8 MRTVSN-AALVAHLAAALA^ EEKEPSKSCCSGTKKIiiEEVKTTEQK^ KCGnTTI PITADPOCSKIBSTIFRGYY 1532058 Par j P9 MRTYSAPSAVALVV AAGIAWTSI-ASVAPPAPAPGSBETCGTVVR^ IJ'FVQGKEKEPSKGCCSGAKRIJDGETKTGLQRVIlACE QTAMKTYSDIDGK LVSB KHCX-WDSKIJTlDVr^^ H ARLERPQIRVPPPAPEKA 2497749 Par jP9 RTVSARSSVALVVTVAAVLVWTSSASVAPAPAPGSEETCGTW PFVOGKE EPSKGCCSGAKRIJDGBTXTGPQRVHACEaQTA KTTSDmGKL VSEXTKHOIIN^S IPPIDVNMDCXTIXJVLH^GN 1086003 Par j 1 MVRAIJrfPCLPFVQGKEK^ KTYSDroGKLVSEVP HCGl^S I-PProV MIXXW GPVTGPSRSRPPTTECHGWRDPRI^FRPPHRKKIW Secuencias de parietaria adicionales (acceso NCBI entrez) : 543659; 1836011; 1836010; 1311513; 1311512; 1311511; 1311510; 1311509; 240971.

Fleo Secuencias de Pleum: Phl l MASSSSVI VVVIÍAVFLGSAYGPKW^ TGAGP DNGQACQY DVDKPPFSGMTGCG TTIFKSQRGCQSCFE1 CTKPE ACSGEPWVHTI DNEEPIAPYHFDI^GHAFGAMA ^ FRRVKCKYPEGTKVTTE¾VEKGS^ DKW1EIJESWGAIWRIDTP13KITGPFTVRYTTE SYES Phlpl MASSSSVIX AIJAVFLGSAHGIPKWPGPNrrATYGDKWIJ^AKST G^ TAAGPKDNGGACGY D VD PPFS G1OTGCG TPIFKS GRGCGS CFBIKCTKPE ACSGEPVVVHrroDNEEPIAAYHFDI^GIAFGSMA -KGDEQKJ^ PJIVKC YPEGTKVTFHVE GSNI'NYIALLVKFSGDGDW WIAJ-KESWGAIWRIDTPEVL GPFT^RYTT GGT A YES Pbl 2 MSMASSSSSSIiAMAVIAALFAGAWOT GDTMAEVEIJREHGSDE VAlvnTGEGGVWTTO K VFDDVVPBKYTIGATYAPEE Phlp5 ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEOKIIEK^ D YKT ATTGAASNKAFAEGI^AlffKGAAESSSKAALTSKj-DAAYK^ TAEGATPEAKYDAYVATISBALRIIAGTL^^ KVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAF^ AVKQAYAAWATAPEVKYTVFETAIJO-AFTAM AAVGAATGAATAATGGY V Phlp5 DKYKTFVATFGAASNKAFAEGI^ AEPKGAAESS SKAALTSKLD AAYKI ^ TAEGATFEAKYDAYVATI^EAI-RIIAGTI^VHAV^ VDSAFKVAATAANAAPA DKI WEAAFNNAI AST AVKQAYAATVATAPEVKYTVFETAIJSXA AAVGAATGAATAATGGYKV Phl 5b AAAAWR GPRGGPGRSY ADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQ 1EDIN VGFKAAVAAAASWAAD FKTTEAAFTSSSKAAAA APGLV^ YKAAVGATPBA FDSFVASLTEAnVIAGAI£VHA P\re LQiroiODAAF AATAAATAPArC FTVFEAA SI^AAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALT ATTAMSEVQKVSQPATGAA TVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV Phl Sa ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKAI EEQKIJE ^ AIAGAGVQPADKY TF^ATFGPASNKAFAEGI^GEP GAAESSSKAALTSK IZ>AAYKIAYKTAEGATl¾Al!CH)AYVAT^ K AGEI^VffiKVDAAFKVAATAANAAPAI^^ YESY FIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETAI-K.^ KPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKV Phlp5 MAVQ YTVAIJ^VALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQ KIIEDINVGFKAAVAAAAS W AADKí^^ GLWKLD AAYSVSYKAAVGATPEA FDSFVASLTEAI^VIAGALEVH^ AKffAGEI^EDKIDAAI^AATAAATA^ KCIPSIJBAAVKQAYAAWAAAPQV YAVFEAALTKAITAMSBVQ VSQPA^ GAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV Phl 5 MAVQKYWAHTLAVALVAGPAASYA KXIEDINVGFKAAVAAAASWAADKF^ AAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEAI-RVIAGAL^^ PKIPAGEIX^II íaDAAFKVAATAAATAPADDKFTW DTYKCffSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALT¾M PATGAATVAAGAATTATGAASGAATVAAQGY V Phlp5 ADAGYAPATTAAAGAEAGKATTEEQKUBDINVGFKAAVA KmAAFTSSSKAATAKAPGLVP mAAYSVAYKAAVGATPEA ^ LTEALRVIAGALEVHAVKPV EEPG A IPAGELQI^ APADD FTVFEAAFKECAT ESTGGAYDTYKCff QV YAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAA TVAAGGYKY PhlpS SVKRSNGSAEVHRGAWMIGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKA TTBEQKIIEDINVGFKAAVAAAASV^ KIJ)AAYSVAY AAVGATPEAKFDSFVASLTEAIilVIAGALE BEPGMAKLffAGELQnDKJDAAFKVAATA^ TGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAAW Q VSQPATGAATVAAGAATTAAQAASGAATVAAGGYKV Phlp5 MAVHQYTVALFLAVALVAGPAGSYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP AGAEPAGKATTBBQKIJE INAGFKAAIAAAAGVPP NKAFAEGIi!GEPKGAAESSSKAALTSKIJDA^ VATVSEAUU GTI£VHA\^AAEEVKV^^ NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYE^ APEVKYTVFETAljaArrA SEAQKAAKPAAAATATATAA ATGGYKV Phl 5 ADIX3YGGPATPAAPAIL\APAOKATT^^ D YKTFVATFGAAS AF AEQLS AEP GAAES S S AALTSKLD AAY LAY TAEQATPEAKYDAYVATI^EAIJIIAQTLEVHAW^ KVDSAF VAATAA AAPAND FTVFEAAF NAD^ AVKQAYAATVATAPEV YTVFETA1X AFTA SEAQKAAKPATEATATAT AAVGAATGAATAATGGYKV Phlp5b AAAAWR GPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKIJEDJN VGFB-AAVAAAASVPAADKTCTFEAA^ YKAAVGATPBAKPDSFVASLTEALR^ IXJHDKIDAAF VAATAAATAPADDKFrVT¾AAFN^ SI^AAVKQAYAAWAAAPQV YAVFBAALTKAITAMSEVQ VSQPATGAA TVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV Phl Sa ADIXJYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAG ATTEEQinjEKINAGF^ ALAGAGVQP ADKYRTFVATFGP ASN AFAEGLS GEPKGAAES SSKAALTSK LDAAY IAYKTAEGATPEAKTO KVIPAGEI^VIE VDAAF VAATAAN^^ YESYKFIPAI-EAAVKQAYAAWATAPE PAAAATATATAAVGAATGAATAATGGY V Phlp5 AWRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAG ATTEEQIOJEDI VGF KAAVAAAASVPAGDKF TFEAAFTSSS AATAKAPGLVP0J5AAYSVAYKA AVGATPEAKTOSFVASLTEAIJVL^GAIJBVHAVKPVTEE^ D E>AAPKVAATAAATAPADDKFn^EAAF KA^ AAV QAYAAWAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQ VSQPATGAATVA AGAATTATGAASGAATVAAGGY V PhlpSb MAWWIGPRGGPGIU3YTADAGYAPATPAAAGAAA FKAAVAARQItfAADKFKTFEAASPMIPR^ VGATPEA TOSFVASLTEAI< V1AGAI£VHAV P KTOAAFKVAATAAATAPADD E^ AVKQAYAATVAAAAEVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATOAATVAA GAATT AGAAS G AATV AAGGYKV PhlpS MAVHQYTVAI-FIAVALVAGPAASYAAD^ AEAAPAGKATTEEQ IJE INAGFKAALA AAGVQPADKYR NKAFAEGISGEPKGAAESSSKAALTSKI^ VATI^EAIJIIIAGTI^VTHAVKPAAEEVK^ NAAPANDKFIVFEAAFNDAI ASTGGAYESY I^ APEV YTVFETAIJCKAITA SEAQ AAKPAA^ ATGGYKV Pblp 5 BAPAGKATTEBQKIJEKINAG EGLSGEPKGAAESSSKAALTSKIJ5AAYKIAYKTAEGATPBA YDAYVATLS EAIJRIIAGTI^VHAV AAEBVKVffAAEI^ NDKFTVFEAAFl^EIKASTGGAYESYK-FIPA^ TVFETAI-KKArrAMSEAQKAA iPPLPPPPQPPPLAATGAATAATG^ PhlpS MAVHQYTVAU^VALVAGPAASYAA LGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP AEAAP AGKATTEBQK T .TE INAGFKAAIAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS NKAFAEGI^GEPKGAAESSSKAALTSKIJDAAYKIAYKTA^ VATI^EAIJUIAGTI^VHAVKPAAEEVKVIPAGE NAAPANDKFTVFEAAPI^AIIASTGGAYESY APEVXYTVFETAIJXArrA SBAQKAAKPAAAAT ATGGYKV Phlp5b MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAA^ F AAVAARQRPAAD FKTT¾AASPRHPRPIJQGAGLWKIJ3 VGATPEA TOSFVASLTEAIJlVIAGAIJE iAV PVTE^ KTOAAFKVAATAAATAPADDKFIVFEAAFNKAI^ AV QAYAA AAAAEV YAVFEAALT ATTAMSEVQKVSQPATGAATVAA G AATT AAGAAS GAATV AAGGYKV Phlp5a ADLGYGP ATP AAPAAGYTPATP AAP AGADAAGKATTEEQKT .TF. INAGFKA ALAGAG V QP D YRTFV ATFGP AS KAF AEGLS GEPKG AABS S SKAALTSK ID YKIAY TAEGATTEAKYDAYVAT^ KVlPAGEUJVIHKAnDAAFKVAAT^ YBSYKFIPAI AAVKQAYAATVATAPEV YTVFETALK An KPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV PhlpS MAVHQY AIJFIAVALVAGPAA^ AEAAPAGKATTEEQKT ,????-NAGFKAALAAAAGVQP AD Y TFVATFGAAS NKAFAEGLS GEPKGAAESSS AALTSKJJDAAYKLAYKTAEGATPEAKYD AY VATI^EAIJUIAGTLEVHAV P AAEEV Vff AATAA NAAPANDKFm¾AAFNDAIKASTGGAYE^ APEV YTVFETAIJaCAITAMSEAQKAA PAAAATATATA^ ATGGYKV Phl 6 ATTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNI.ADAVSKAPQLVP ADHAAPEDKYEAFVlJffSEAIJmAGTPEVHAV PGA Phlp6 S APQLWKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYT^^ VKPGA Phlp6 ADKY TTEAAF VSSKR^ADAVSK^ DKYBAFVIJHFSEAIJEfflAGTPEVHAV PGA Phlp6 TEEQHLJEDVNASFRAAMATTANVP^ APQLVPKIJDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFV^^ PGA Phlp6 I A VPPAD Y FEAAFIYSSKRNl-ADAVSKAPQLV^ DHAAPH)KrraAFVI-HFS& Phlp6 MVAMFIAVAVVLGIATSFTAEGGKATTEEQ PAD YKTFEAAFIVSSKRNIADAVSKAPQL I^ EDKYEAFVUffSEALRIIAGTPEVHAV PGA Phlp7 MADDMERIFK-RFDTNGDGKB GFTOFNEraFCNA PGDdKDVAKVF Phl ll MSWQTYVDEHI CTIEGHHLASAAIIXJHDGT^ DFDEP OHI^TGMFVAGAKYMVIQGEPGRVIRG KG AGGITI KTGQ ALV VGIYDEPMT GQCNMVVERLGDYLVEQGM Secuencias de Phleum adicionales (acceso NCBI entrez) 458878; 548863; 2529314; 2529308; 2415702; 2415700; 2415698; 542168; 542167; 626037; 542169; 541814; 542171; 253337; 253336; 453976; 439960.

Avispa (y relacionada) Secuencias de Vespula: 465054 ALLERGEN VES V 5 MEISGLVYUIIVTIIDIJYGK^ WSYGLTKQEKQDnJOíHNDFRQ EIAYVAQ ANQCQYGHDTCRDVA YQVGQNVALTGSTAAKYDDPVKLV K WEDEV DY PKK- FSGI^FIJTGHYTQMVW WHKHYLVCNY GPSGNFMNEELYQTK 1709545 ALLBRGEN VBS M 1 GPKCPFireD SfflBITEU&^^ SASEKNETISLAKALVDKDN^ RLVGQYIATITQKXVKDYKISMAN^ BnC^PARPSTOSNHCSERIX!ETDA^ KNNPGCGRFFSEVCSHTRAVI^^ CVGLNAKKYP SRGSFYWVESTAPFCNNKGKII 1352699 ALLERGEN VES V 1 MEE M IICYI-II^^ ENKNRDLYTLQTl^NHPEFKKKTITRPV^ D YMVISIDWQTAACrNEAAGIXYLYYPTAAROT ff!i^ ISMA IRLIGHSLGAHA^ CSERIX^ETOAEYVQIIHTSNYI STEKTI JTVDFYM SHSRAVJYMAECKHECCUG^ FYVPVESTAPFCNNKGKN 1346323 ALLERGEN VES V 2 SERPKRVFNIYWNVPT™ PGEFPALI^IJKDGKY KRNGGVPQEGN^ DFERWRPIFRQNWGN KIHK-^ RFFMEETLKIAKKTRKQADW^ MSWIJKNQNVLLPSVY QELTPDQW YWYWQDETNTFLTETOVKKTT^ QDYIXTVLGPIAINVTEAV 549194 ALLERGEN VES VI 5KVNYC K( 1GGVHTACKY GTSTKPNCG YVKAYGLTEAEKQBIOCVH DFRQKVAKGI^TOGNPGPQPPAKNMNNLVWNDEIANI^ HDT(_303TEKYPVGQNIAKRSTT^ NNIJKKTGHYTQMVWA T1EIGCGS VKYV ^ GPSGNFRN EKLYEKK Secuencias de Vespula adicionales (acceso NCBI entrez) 549193; 549192; 549191; 549190; 549131; 117414; 126761; 69576; 625255; 627131; 627188; 627187; 482382; 112561; 627186; 627185; 1923233; 317645; 317647; 745570; 225764; 162551.

Secuencias de alérgeno de árbol (principalmente secuencias de abedul): 114922 Bet v i MGVFNYETETTSVffAAW^ K_KISFPEGFPFKY\TÜ}RVDE^ PDGGSILKISNKYHTKGDHEVKAEQV N 130975 Betv 2 MS WQTYVDEHLMCDID GQ ASNSLAS AIVGHD GS VWAQS S SFPQF PQEITGI MKDFEEP GHIAPTGLHLGGIKYMVIQ GE AGA V1RGKKGS GGITIK TGQ ALV FGIYEBPVITPGQCWM ERI JDYLJDQGL 1168696 Betv 3 ^CSTEAMEKAGHGHASTPRKE^^ GHIYDBLSRAI-MIXHJBTD^ FAYGGEDEDDNEEDMR SII^QEEADSFGGFKVFDEDGIX YISARELQMVL G 1X FSEGSEIDRVE N1 SVDS KDGRVDFFE 809536 Bet v 4 MADDHPQDKAERERIFKR- ? AEIDTDGD GF1SFQEFTDFGRANRG1X DVA IF 543675 Que a I = Quercus alba = árboles de roble (fragmento) GVFTXESQBTSVIAPAXLFBCALFL 543509 Car b I - Carpinus betulus = carpe (fragmento) GVFN5fEAETTSVffAAIUJ^ 543491 Aln g I - Alnus glutinosa = aliso (fragmento) GVFNYKAETPSVffAARI-FX^ 1204056 Rubisco VQC^QVWPPLGIJC FETLSYIJPPl^SEQLAKEVDYI^^ VYREHNRSPGYYIXJRYWTM IGFDDK Secuencias de alérgeno de árbol adicionales (número de acceso NCBI entrez): 131919; 128193; 585564; 1942360; 2554672; 2392209; 2414158; 1321728; 1321726; 1321724; 1321722; 1321720; 1321718; 1321716; 1321714; 1321712; 3015520; 2935416; 464576; 1705843; 1168701; 1168710; 1168709; 1168708; 1168707; 1168706; 1168705; 1168704; 1168703; 1168702; 1842188; 2564228; 2564226; 2564224; 2564222; 2564220; 2051993; 1813311; 1536831; 534910; 534900; 534318; 1340000; 1339998; 2149808; 66207; 2129477; 1076249; 1076247; 629480; 481805; 81443·; 1361968; 1361967; 1361966; 1361965; 1361964; 1361963; 1361962; 1361961; 1361960; 1361959; 320546; 629483 ; 629482; 629481; 541804; 320545; 81444; 541814:; 629484; 474911; 452742; 1834387; 298737; 298736; 1584322; 1584321; 584320; 1542873; 1542871; 1542869; 1542867; 1542865; 1542863; 1542861; 1542859; 1542857; 1483232; 1483230; 1483228; 558561; 551640; 488605; 452746; 452744; 452740; 452738; 452736; 452734; 452732; 452730; 452728; 450885; 17938; 17927; 17925; 17921; 297538; 510951; 231331; 231329; 166953 .

Cacahuate Secuencias de cacahuate 1168391 Ara h l MRGRVSPIAOJJ JILVIASVSATHAKSSPYQ KTCOT IXQKA(^RCnO^YDPRCVYDPRGHTGTTNQRSPPGERTRGRQPGDYDDD RRQPRREEGGRWGPAGPREREREEDWRQPREDWRRPSHQQPRKIRPEGREG EQEWGTPGSHVREETSRNOTFYFPSRRFSTRYGNQNGmVLQRFDQRSRQF QNI^ HRIVQIEAKP n VIPKHADA^ DEGHAIRIPSGFISYILNRHDNQNIJR.VAKISMPV>^ LX)GFSR T]_JBAAFNAEF^IRRVIXEE^ V VSKFJiVFJiLTXHAKSVSKKGSE PD KNPQLQDLDMMLTCVEIKEGAI-M^ AVRCTQQ^RGRREEEEDEDEEEEGSN EVRRYT^ NASSEI-HIXGFGINAENNHRIFIAGD^ KNQ ESHFVSARPQSQSQSPSSPEKESPEKEDQEEENQGGKGPII^ Ambrosía Secuencias de Ambrosia 113478 Amb a l MGIKHCCTILYFIIALVTIJ^^ WRGKADWAENRKAI^DCAQGFAKGTC^ TLRFGAAQNRPLWDFARDMVIRI2)REIA^ VK IHHtniMHDIVVOTGGlJD^ -AVDGUDA HGSTHF VSNCLFTQHQYLIIJFWDro NWQR PNIJRHGFVQVVNNNYER GSYALGGSAG^ EWGRYGESAN-SESINWNWRSYMDVFBNGA^ AEPGEAVLRLTSSAGVLSCQPGAPC 11347 Am a2 MGIKHCCYILYFIl-ALVTLVQAG C CKPDWAENRQAI rNCAQGFG Ara KIGTIJtfGATQDRPLWIIFQRDMIIYIXJQ TlMNVKNVnHNIDIHD VRVI^ GD AIHV GS SDIWI DHCTLSK-SFDGLVDVNWGSTGVTIS^^ FVAPDFIYK NVCIiTGAQEPEWMTWNWRTQ>ro AEQNAGMMQAEPGDMVPQLTMNAGVLTCSPGAPC 113477 Amb a 1.3 MGKQCCraYFTLALVAIXQPVR^^ RG AD E NRQAI-ADCAQGFAKGTY^GGKWGDVYTVTSNI^ HCSI-SKSFDGLVDVTI JSTHVTIS CK^ VAFT4MFTONVDQRMPRCRFGFFQ SAPTDXQGNR FILAPDDQIKKNVIARTGTGAAESlviAWNWR^ PVQSAGMIPAEPGEAAIKLTSSAGVFSCHPGAPC 113476Ambal.2 GIKHC VTLYFTLALVILI^PVRSAE^ ^C ADWAN RQALADCAQGFAKGTY GGKHGDVYTVTSDKDDDVANP KEGTOFAAAQNRPLWIIF R MXnHI-NQEL DHCSLSKASDGI-I rn jSSHVTVSNCKFrQHQFV^ AWAPNMFTDHVDQR PRCRFGra NRFFAPDDDKiaS^ TPEQKAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCHQGAPC 113475 Amb a 1.1 RGKADWAENRKALAD C AQGFG GTVGG D GDIYTVTSELDDD VANPKEG LF^GAAQNRPLWIIEERDMVIRLDKEMVVNSD TIDGRGAKVE^ VK VDHISDNMHDV VNPGGIJK^ I^ SVDGLVDAKIXmTRLTVSNSIJFTQHQFVII G TFTDNVIXJRIV-PRCSHGFTQVV NNYDKWGSYA^ PDERSKK VLGiUiGEAAAESM WNWRT KDV^ QSAGM1PAEPGBSALSLTSSAGVLSCQPGAPC Secuencias de cedro 493634 Ciy j IB precursor MDSPCLVAIi SFAqGS(-m>l^roSCWRGDS WAQimiKIADCAVGFGS SmGGKGGDLYIATmSDDDPVNPPGTLRYGATRDR^^ PMYIAGYKTFIXJRGAQVYIGNGGPCVTI RVSNV^ INESFGVEPVHPQDGDALTIJRTATMWroHNSFSNSSDGLVDVTLTS NLFFNHHKVMSLGHDDAYSro HVA N YDPWmAIGGSS PTE.SEGNSF APNESYK QVTTRIGCKT W QSTQDVFYNGAYWSSGKYEGG IYTEaCEAFNV¾N GVLTCSLS RC 493632 Cry j IA precursor MDSPC VALLVI^FVIGSCFSDNPIDSCWGDSN AQNRMKIADCAVGFGS STMGG GGDLYT OTNiSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWn^ MPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFK VH ESFGVEPVHPQDGDALTLRTATOIW^ SN IITNHH ^MIIXHDDAYSD VHV A NNYDP WTIYAIGGS SNPTTLSEGNSFT PNF^ YKKQVTIPJGCKTS S S C SNWVWQSTQDVFY GAYFYSSGKYEGG IYTXKEAFNVP^ AGVLTCSLSK C 1076242 Cryj ? precursor - Cedro japonés MAMKIJAPMAFLAMQL^ RHDAINIFNVE YGAVGDGKHDC VNNIJWGPCQPHFTPICVDGIIA^ VIDGQGKQWWAGQCXWWGREI(_M}RDR^ FHL GNCTGVKnGISrrAPRDSP-STTDGlDIFAS NF ^^ AIG TGSSNIVIHDUCGPGHGISIGSIX ^ WQGGSGMASHIIYE^G ?MI SEOTIlJNQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYK NRGTSATAAAIQIXCSDSMPOm^ lKCHGCSPCKA-??^VHRIMPQEYYPQRWICSCHGKIY^ 1076241 Cryj ll rotein - Cedro japonés MAMKFlAPMAFVAMQLnMAAAEDQ HD AI IFNVEKYGAVGD ??????? AFSTAWQAAC PS AMLLVP GNKKFV VNNLFFNGPCQPHFTFXVDGIIAAYQ VIDGQGKQWWAGQCKW GREIC^RDROT FHLVFGNC¾G\TQIGISlTAPRDSPNTOGnOT TGSSNINnEDUCGPGHGISIGSLGRENSRAEVSYVHV GAinTO WQGGSGMASHHYE VEMINSENPI-JNQFYCTSASACXJNQI^ ^GTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKllSDISIJ^^ VIPAC NI^PSAKi BSKSrl HPKTVMVK NKCHGCSPC AKLVIVHRIMPQ 541803 Cry j I precursor - Cedro japonés STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTI-RYGATRDRPLWIIFS G MNKLKM PMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFK^^ INESFGVEPVHPQDGDALTT-RTAT IWIDHl^FSNSS > ^FNHHKVMLI^HDDAYSDDKS HV AN NYDPWTIY AIGGS S PTII^EGNSFT APNE S Y KQ VTIRIGC TS S S C S >TVmVQSTQDVFYNGAYFVSSGKY^^ GVLTCSLS C 541802 Ciyj I precursor- Cedro japonés MDSPCLVAIXWSFVIGSCTSDNPIDSC STMGGKGGDLYTVTOSDDDPVNPAPGTIJIYGATRDRPL OT PMYIAGY TTOGRGAQVYIGNGGPCVFKIW VLI ESTOVEPVHPQDGDALTIRTAT IWIDHNSFS^ SNr^LFFNHH VMSIXfflDDA^ VHVANNNYDPWTTYAIGGSSNPT1I5EGN SNWVWQSTQDVFiTiGAYFYSSGKYEGGMY^ AGVLTCSLSKRC Perro Secuencia de canes: Canf 1 MKTIXLnGFSUAILQAQDTPALGKDWA VTPMIIJKAQKGGNI^A ITMLTO GKYT AYEGQRW FIQP SP VRDHYILYCEGEI-HGRQIRMA LLGRDPEQS QEALEDFREFSRA GL NQEDLELAQSETCSPGGQ Fragmento de albúmina sérica EAYKSEIAH YNDIX5EEHFRGLVL Fragmento de albúmina sérica ISSAKERFKCASLQKFGDRAl^^ KECCHGDI ECADDRADLAKYMCENQDSIST^ QCLAEV EIUJBI GDIIPSIAADFVBDKBVCK]^ QBA DVFLGTFLYEYSRRHPEYS VSL I1JRI KEYEATLBKCCATDDPPTCY AK^H-I^EFl^LVDEPQNLVKl^CELFEK I 3BYGFQNALLWYTK -APQVSTPTLVVEVSRK JKVGTKCC^ CADDFLS Canf 2 MQL T GLAHCGLQAQEGNHEEPQGGI^ WGHFRVFIHSMSAKIXJMJIGDEJPQDGQCE^ HNDLYI.AEVDPK3YIILYMINQY EDIGLH DQIVVLSDDDRCQGSRD Proteína de alérgeno de perro adicional (acceso NCBI entrez): 1731859 Caballo Secuencias de Equus: 1575778 Equ el SMRVFVDVIRA1-DNSSLYAEY QTKV GECTEFPMVTOKTEEDGWSI YDG YÍTVPRISEFE DEHIILYLVMPD GIVKENIIDLTKIDRCFQLRGNGVAQA 3121755 Equ c 2 SQXPQSETDYSQLSGE OTIYGAAS IXK Euroglyphus (acaro) Secuencias de Euroglyphus: Eur m 1 (variantes) TYACSINSVSIJSEIJ^I-RSIJITV^ MSUDLAEQELVDCASQNQCHGDTIPRGffiYIQQNG QEHYYPYVAREQSC HRPNAQRYGI-KNYCQISPPDSNRTRQALTQTH AVAVnGIKD TI QHDNGYQPNYHAVNIVGYGOTÍ^VDYWIVRNSWDTT^ ANINL Eur m 1 (variantes) TYACSI SVSIJSEIJJIJWIJITVTPIRMQGGCGSCWAFS MSIJDI-AEQBLVDCASQNGCHGDTIPRGmYIQQNG QEHYYPYVAREQSC HPJ>NAQRYGL30 rYGQISPPDSN IRQA^ TIMQHDNGYQPNYHAVNIVGY GOTQGVDYWTVRNSWDTTWGDNGYGYFA ANINL Eur m 1 (variantes) ETNACSINGNAP AEHDU QIvíRTVTPIRMQGGCGS CWAFS GV AATES AYLAY PJ^QSIJDI^QELVDCASQHGCTGDTTPRGIEYIQHNGWQESYYRYVAREQS CRRPNAQRFGISNYCQIYPPNANK3PJ-AIA^ TOQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAA NIDL Eur m 1 (variantes) E SACR1NSVNWSEI-DLRSLRTVITIRMQGGCG RNTSIJDI^EQELVDCASQHGCHGDTTPRGEYIQQNGVVEERSYPYVAREQQ CRRPNSQHYGISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVnGI^ THQHDNGYQPNYHAVNWGYGSTQGVDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQA GNNL Secuencias de Poa (espiguilla) 113562 ALERGENO DE POLEN POA P 9 MAVQKYTVAH^VALWGPAASYA^ APKATTOBQKMffilUNVGFK-AAVA EAI^TEPKGAAVDSSKAALTSKI )AAYKLAY SAEGATPEAXYDDYVATLS EAlJUlAGraVHGVKPAAEEV ATPAGBljQVm VDAAI^ NDKFTVFEAAF DAKASTG^ YTVFETAIJKXAJTAMS QAQ AAKP AAAATGTATAAVGAATGAATAAAGGY KV 113561 POA P 9 MAVHQYTVAIJPIAVALVAGPAASYAADVGYGAPATIATPATPAAPAAGYT PAAPAGAAP ATTDEQ T .TF. INAGFKAAVAAAAG AVDKYKTFVATFGT AS KAFAEALSTEPKGAAAASS AVLTSKIJ3AAYKIAYKSAEGATTE^ AYVATL£EAUUIAGTU-V^ AANAAPAÍOKFIVFEAAFND^ ATAPAV YTVFETAL KAn'A SQAQKAAKPAAAVTATATGAVGAATGAV GAATGAATAAAGGY TGAATPTAGGYKV 113560 POA P 9 MDKANGAYKTAIJAASAVAPAEKÍTWQATim KVAAYTPAAPAGAAPKATTDEQKIJE^^ VATFGAAS KAFABAI^TBPKGAAVASSKAVLTSKI-DAAY IAY PEAKYDAYVATLSEAnilIAGTLE GVKPAAEEVKAff FKVAATAA AAPA1^ FTVI¾AAFM)AKASTGGAYQSYKF^ SYAATVATAPAVKYTVFE AL AITAMSQAQKAA]^ AATGAATAAAGGYKV Secuencias de cucaracha 2833325 Crpl M TALVF AAW AFV AARFPDH D YKQLADKQFLAKQ njTOQVEVGIPMTSKQTS ATTVFPS GE V^^ REQAIMLYDI YFAMDYDTFYKTACW O^VMIJPPPYBVYFm^HDVIHlVlAQKYWMKNAGSG QIYARYT^RLSJNTDI-PDVYPíYYS ÍVKS VTNFDLYYIADI NYEECRVEDAIDFGYAFDEHM IEGI^MDSPNFYFYGSIYHMYHSMIGHIVDPYHKM YQLWKRVDHI-FQKYKNRILÍ^^ MSIID AVYVNNTDQIS^^ IXJPKYDYLGRíYDLNDRRHY^ DSYRTFYKKVQEAYEGKSQYYVD GHOTCGYPENLIJPKGKKGGQAYTFY V TTYV QDEHDFEPYNYKAFSYCGVGSEPJYPDNK-PLG^ YTTNMYFKDVIIFH KYDEVGVQGH 2231297 Crp2 IffiIHSnGIITFAn?PSRRHARRGV^ FXALYDAIRSPEFQS]ISTL AMQRSEHHQ Li ) GVDVD AARNLQDDL^FLHSI.EPISPRHRHGIJ'RQRRRSA^ AIJEFANFímKEHGLDVVDYINEIHSnGIPPF^ VIAIU?VDEIXAIJQEKLETSPDFKALYDAIRSPEFO^ LRDKGVD VDHFIRVD QGTLRTLS S GQRNI^DDLhTOFIAIJPTDQILAIAMDYL ANDAEVQELVAYLQSDDFHKITrTIF^^ HGIJPFVPPSQIÜiAItflGVGINGI^^ DAIDLRSSRA 1703445 Blag 2 MGIiaVT^AVATITH EIX^ FDSTSQWWASQECVGGACVCPNI^^ VGRGIEDSL TSNLTTSQQDI^^ TVI-ENFVEENIiAPWSlHHARFQDGEOT DDSWIQ¾LDGVKIGDTWAPA KTTTOMCOJX!SKff^ SDHFHGDFFVDHYYSEF WENK™GFGRSVESV 1705483 Blag4 AVLALCATDTIANEDCFRHE^ DI^SYDDALVSKYTDSQG NRT I GRT FEGN FnDYN^ IATDYENYAIVBGCPAAANGHVI ^ NQHKKAffiEDIJCHFNIJ YEDLHSTCH 2326190 Bla S YKLTYCTVKAl^EPIRFI-I^YGEKDFEDYBJQ DGKQT¾QSVAISRYIX3KQFGI^GKDDWEN^^ ADE S Q KWDPI-KKETIPYY^^ Secuencias adicionales de cucaracha (números de acceso NCBI Entrez) 2580504; 1580797; 1580794; 1362590; 544619; 544618; 1531531; 1580792; 1166573; 1176397; 2317849.

Secuencias de alérgeno (general): Números de acceso NCBI 2739154; 3719257; 3703107; 3687326; 3643813; 3087805; 1864024; 1493836; 1480457; 2593176; 2593174; 1575778; 763532; 746485; 163827; 163823; 3080761; 163825; 3608493; 3581965; 2253610; 2231297; 2317849; 3409499; 3409498; 3409497; 3409496; 3409495; 3409494; 3409493; 3409492; 3409491; 3409490; 3409431; 3409488; 3409487; 3409486; 3409485; 3409484; 3409483; 3409482; 3409481; 3409480; 3409479; 3409478; 3409477; 3409476; 3409475; 3409474; 3409473; 3409472; 3409471; 3409470; 3409469; 3409468; 3409467; 3409466; 3409465; 3409464; 3409463; 3409462; 3409461; 3409460; 3409459; 3409458; 3409457; 3409456; 3318885; 3396070 ; 3367732; 1916805; 3337403; 2851457; 2851456; 1351295; 549187; 136467; 1173367; 2499810; 2498582; 2498581; 1346478; 1171009; 126608; 114091; 2506771; 1706660; 1169665; 1169531; 232086; 416318; 114922; 2497701; 1703232; 1703233; 1703233; 1703232; 3287877; 3122132; 3182907; 3121758; 3121756; 3121755; 3121746; 3121745; 3319925; 3319923; 3319921; 33.19651; 3318731; 3318779; 3309647; 3309047; 3309045; 3309043; 3309041; 3309039; 3288200; 3288068; 2924494; 3256212; 3256210; 3243234; 3210053; 3210052; 3210051; 3210050; 3210049; 3210048; 3210047; 3210046; 3210045; 3210044; 3210043; 3210042; 3210041; 3210040; 3210039; 3210038; 3210037; 3210036; 3210035; 3210034; 3210033; 3210032; 3210031; 3210030; 3210029; 3210028; 3210027; 3210026; 3210025; 3210024; 3210023; 3210022; 3210021; 3210020; 3210019; 3210018; 3210017; 3210016; 3210015; 3210014; 3210013; 3210012; 3210011; 3210010; 3210009; 3210008; 3210007; 3210006; 3210005; 3210004; 3210003; 3210002; 3210001; 3210000; 3209999; 3201547; 2781152; 2392605; 2392604; 2781014; 1942360; 2554672; 2392209; 3114481; 3114480; 2981657; 3183706; 3152922 ; 3135503 ; 3135501; 3135499; 3135497; 2414158; 1321733; 1321731; 1321728; 1321726; 1321724; 1321722; 1321720; 1321718; 1321716; 1321714; 1321712; 3095075; 3062795; 3062793; 3062791; 226662S; 2266623; 2182106; 3044216; 2154736; 3021324; 3004467; 3005841; 3005839; 3004485; 3004473; 3004471; 3004469; 3004465; 2440053; 1805730; 2970629 ; 2959318; 2935527 ; 2935416; 809536; 730091; 585279; 584968; 2498195; 2833325; 2498604; 2498317; 2498299; 2493414; 2498586; 2498585; 2498576; 2497749; 2493446; 2493445; 1513216 ; 729944; 2498099; 548449; 465054; 465053; 465052; 548671; 548670; 548660; 548658; 548657; 2832430; 232084; 2500822; 2498118; 2498119; 2498119; 2498118; 1708296; 1708793; 416607; 416608; 416608; 416607; 2499791; 2498580; 2498579; 2498578; 2498577; 2497750; 1705483; 1703445; 1709542; 1709545; 1710531; 1352699; 1346568; 1346323; 1346322; 2507248; |1352240; 1352239; 1352237; 1352229; 1351935; 1350779; 1346806; 1346804; 1346803; 1170095; 1168701; 1352506; 1171011; 1171008; 1171005; 1171004; 1171002; 1171001; 1168710; 1168709; 1168708; 1168707; 1168706; 1168705; 1168704; 1168703; 1168702; 1168696; 1168391; 1168390; 1168348; 1173075; 1173074; 1173071; 1169290; 1163170; 1168402; 729764; 729320; 729979; 729970; 729315; 730050; 730049; 730048; 549194; 549193; 549192; 549191; 549190; 549131; 549188; 549185; 549184; 549183; 549182; 549181; 549180; 549179; 464471; 585290; 416731; 1169666; 113478; 113479; 113477; 113476; 113475; 130975; 119656; 113562; 113561; 113560; 416610; 126387; 126386; 126385; 132270; 416611; 416612; 416612; 416611; 730035; 127205; 1352238; 125887; 549186; 137395; 730036; 133174; 114090; 131112; 126949; 129293; 124757; 129501; 416636; 2801531; 2796177; 2796175; 2677826; 2735118; 2735116; 2735114; 2735112; 2735110; 2735108; 2735106 ; 273531; 2735102 ; 2735100 ; 2735098 ; 2735096 ; 2707295 ; 2154730; 2154728; 1684720; 2580504 ; 2465137; 2465135; 2465133; 2465131; 2465129; 2465127; 2564228; 2564226; 2564224; 2564222; 2564220; 2051993; 1313972; 1313970; 1313968; 1313966; 2443824 ; 2488684; 2488683; 2488682; 2488681; 2488680; 2488679; 2488678; 2326190 ; 2464905; 2415702; 2415700; 2415698; 2398759; 2398757; 2353266 ; 2338288 ; 1167836; 414703 ; 2276458 ; 1684718 ; 2293571 ; 1580797 ; 1580794 ; 2245508 ; 2245060; 1261972; 219055 ; 1881574 ; 511953 ; 1532058; 1532056; 1532054; 1359436; 666007; 487661; 217308; 1731859; 217306; 217304; 1545803; 1514943; 577696; 516728; 506858; 493634; 493632; 2154734; 2154732; 543659; 1086046; 1086045; 2147643; 2147642; 1086003; 1086002; 1086001; 543675; 543623; 543509; 543491; 1364099; 2147108; 2147107; 1364001; 1085628; 631913; 631912; 631911; 2147092; 477301; 543482; 345521; 542131; 542130; 542129; 100636; 2146809; 480443; 2114497; 2144915; 72355; 71728; 319828; 1082946; 1082945; 1082944; 539716; 539715; 423193; 423192; 423191; 423190; 1079187; 627190; 627131; 627188; 627187; 482382; 1362656; 627186; 627185; 627182; 482381; 85299; 85298; 2133756; 2133755; 1079186; 627181; 32314; 32313; 112559; 112558; 1362590; 2133564; 1085122; 1073171; 627144; 627143; 627142; 627141; 280576; 102835; 102834; 102833; 102832; 84703; 84702; 84700; 84699; 84698; 84696; 477888; 477505; 102575; 102572; 478272; 2130094; 629813; 629812; 542172; 542168; 542167; 481432; 320620; 280414; 626029; 542132; 320615; 320614; 100638; 100637; 100635; 82449; 320611; 320610; 280409; 320607; 320606; 539051; 539050; 539049; 539048; 322803; 280407; 100501; 100498; 100497; 100496; 1362137; 1362136; 1362135; 1362134; 1362133; 1362132; 1362131; 1362130; 1362129; 1362128; 100478; 2129311; 1076531; 1362049; 1076486; 2129817; 2129816; 2129815; 2129814; 2129813; 2129812; 2129805; 2129804; 2129802; 2129801; 2129800; 2129799; 479902; 479901; 2129477; 1076247; 629480; 1076242; 1076241; 541803; 541802; 280372; 280371; 1361968; 1361967; 1361966; 1361965; 1361964; 1361963; 1361962; 1361961; 1361960; 1361959; 320546; 2119763; 543622; 541804; 78825; 478824; 478823; 421788; 320545; 81444; 626037; 626028; 539056; 483123; 481398; 481397; 100733; 100732; 100639; 625532; 1083651; 322674; 322673; 81719; 81718; 2118430; 2118429; 2118428; 2118427; 419801; 419800; 419799; 419798; 282991; 100691; 322995; 322994; 101824; 626077; 414553 ; 398830 ; 1311457; 1916292 ; 1911819; 1911818; 1911659; 1911582; 467629; 467627; 467619 ; 467617 ; 915347; 1871507; 1322185; 1322183; 317645 ; 317647 ; 1850544 ; 1850542 ; 1850540 ; 283117; 452742; 1842045 ; 1839305; 1836011; 1836010; 1829900; 1829319; 1829318; 1829317; 1829316; 1829315; 1829314; 1825459 ; 1803187 ; 159653 ; 1773369 ; 1769849; 1769847; 608690 ; 310877 ; 310875; 1438761; 1311513; 1311512; 1311511; 1311510; 1311509; 1311631; 1246120; 1246119; 1246118; 1246117; 1246116; 1478293; 1478292; 1311642; 1174278; 1174276; 1086972; 1086974; 1086976; 1086978; 1086978; 1086976; 1086974; 1086972; 999009; 999356; 999355; 994866; 994865; 913758; 913757; 913756; 913285; 913283; 926885; 807138; 632782; 601807; 546852; 633938; 544619; 544618; 453094; 451275; 451274; 407610; 407609; 404371; 409328; 299551; 299550; 264742; 261407; 255657; 250902; 250525; 1613674; 1613673; 1613672; 1613671; 1613670; 1613304; 1613303; 1613302; 1613240; 1613239; 1613238; 1612181; 1612180; 1612179; 1612178; 1612177; 1612176; 1612175; 1612174; 1612173; 1612172; 1612171; 1612170; 1612169; 1612168; 1612167; 1612166; 1612165; 1612164; 1612163; 1612162; 1612161; 1612160; 1612159; 1612158; 1612157; 1612156; 1612155; 1612154; 1612153; 1612152; 1612151; 1612150; 1612149; 1612148; 1612147; 1612146; 1612145; 1612144; 1612143; 1612142; 1612141; 1612140; 1612139; 1093120; 447712; 447711; 447710; 1587177; 158542; 1582223; 1582222; 1531531 ; 1580792 ; 886215; 1545317; 1545315; 1545313; 1545311; 1545831; 1545887; 1545885; 1545883; 1545881; 1545879; 1545877; 1545875; 166486 ; 1498496 ; 1460058; 972513; 1009442 ; 1009440 ; 1009438 ; 1009436 ; 1009434 ; 7413 ; 1421808 ; 551228; 452606 ; 32905; 1377859 ; 1364213; 1364212; 395407; 22690 ; 22688 ; 22686; 22684 ; 488605 ; 17680 ; 1052817 ; 1008445 ; 1008443 ; 992612; 706811 ; 886683; 747852 ; 939932 ; 19003 ; 1247377 ; 1247375; 1247373; 862307 ; 312284 ; 999462; 999460 ; 999458 ; 587450 ; 763064 ; 886209 ; 1176397 ; 1173557 ; 902012; 997915; 997914; 997913; 997912; 997911; 997910; 99790; 997908; 997907; 997906; 997905; 997904; 997903; 997902; 997901; 997900; 997319; 997318; 997317; 997316; 997315; 997314; 997313; 997312; 910984; 910983; 910982; 910981; 511604 ; 169631 ; 16962 ; 169627 ; 168316 ; 168314 ; 607633 ; 555616; 293902 ; 485371 ; 455288 ; 166447 ; 166445 ; 166443 ; 166435 ; 162551 ; 160780; 552080 ; 156719 ; 156715 ; 515957 ; 515956 ; 515955 ; 515954 ; 515953 ; 459163; 166953 ; 386678 ; 169865.

Los alergenos/antígenos preferidos particularmente incluyen: proteína de pelo de gato Fel di; proteínas de ambrosía Der Pl, Der P2 y Der P7; proteína de ambrosía amb a 1.1, a 1.2, al.3 o al .4 ; proteínas de ballico lol pl y lol p5; proteínas de fleo phl pl y phl p5 ; proteínas de grama Cyn d 5; proteínas alternativas de Alternaría Alt a 1, Alt a 2 y Enolasa (Alt a 6); proteína de abedul B vi y P14; proteínas de cucaracha alemana Bla g 1, Bla g 2, Bla g 3, Bla g 4, Bla g 5 y Bla g 6; proteína de artemisa Art v 1; proteína de cardo ruso Sal k 1 y Sal k 2 ; cacahuate Ara hl , Ara h2 , Ara h3, Ara h4 , Ara h5 , Ara h6, profilinas vegetales o proteínas de transferencia de lípidos o antígeno leucocítico humano.

METODOS DE ADMINISTRACION Una vez formuladas, las composiciones de la invención se pueden suministrar a un sujeto in vivo utilizando una diversidad de rutas y técnicas conocidas. Por ejemplo, se puede proporcionar una composición como una solución, suspensión o emulsión inyectable y se puede administrar por vía parenteral, subcutánea, epicutánea, epidérmica, intradérmica, intramuscular, intraarterial , intraperitoneal , inyección intravenosa utilizando una aguja y jeringa convencionales o utilizando un sistema de inyección de chorro de líquido. Las composiciones también se pueden administrar tópicamente a la piel o tejido de la mucosa, por ejemplo nasalmente, por vía intratraqueal , intestinal, rectal o vaginal o se pueden proporcionar como una aspersión finamente dividida adecuada para administración respiratoria o pulmonar. Otros modos de administración incluyen administración oral, supositorios, administración sublingual y técnicas de administración transdérmica activa o pasiva.

Cuando se va a administrar un péptido de la invención se prefiere que se administra al péptido en un sitio en el cuerpo en donde tendrá la capacidad de ponerse en contacto con células presentadoras de antígeno adecuadas y en donde tendrá la oportunidad de ponerse en contacto con los linfocitos T del individuo. Cuando se va a administrar un APC, se prefiere administrar el APC en un sitio en el cuerpo en donde tendrá la capacidad de ponerse en contacto y activar linfocitos T adecuados del individuo.

REGIMENES DE ADMINISTRACION La administración de los péptidos/polinucléotidos/células (tal como la compsición que contiene una pluralidad de péptidos) puede ser por cualquier método adecuado como se describe en lo anterior. Las cantidades adecuadas del péptido se pueden administrar empíricamente, pero de manera típica están en el intervalo indicado en lo siguiente. Una administración única de cada péptido puede ser suficiente para tener un efecto benéfico para el paciente pero se apreciará que puede ser benéfico si el péptido se administra más de una vez, en cuyo caso los regímenes de administración típica pueden ser, por ejemplo, una o dos veces a la semana durante 2-4 semanas, cada 6 veces, o una vez al día durante una semana cada cuatro a seis meses. Como se apreciará, cada péptido o polinucleótido , o combinación de péptidos y/o polinucleótidos se pueden administrar a un paciente solos o en combinación.

Las dosificaciones para administración dependerán de numerosos factores que incluyen la naturaleza de la composición, la vía de administración y la programación y sincronización del régimen de administración. Las dosis adecuadas de una molécula de la invención pueden estar en el orden de hasta 15 yg, hasta 20 µ?, hasta 25 \ig, hasta 30 pg, hasta 50 µ?, hasta 100 g, hasta 500 yg o más por administración. Las dosis adecuadas pueden ser menores de 15 µ?, pero por lo menos de 1 ng, o por lo menos 2 ng, o por lo menos 5 ng o por lo menos 50 ng, o por lo menos 100 ng, o por lo menos 500 ng, por lo menos 1 pg o por lo menos 10 yg. Para algunas moléculas de la invención, la dosis utilizada puede ser mayor, por ejemplo de hasta 1 mg, hasta 2 mg, o hasta 3 mg, hasta 4 mg, hasta 5 mg o mayor. Las dosis se pueden proporcionar en una formulación líquida, a una concentración adecuada para permitir un volumen apropiado para administración por la vía seleccionada.

KITS La invención también se relaciona con una combinación de componentes descritos en la presente adecuados para uso en el tratamiento de la invención los cuales son empacados en forma de un kit en un recipiente. Los kits pueden comprender una serie de componentes para permitir suministrar un tratamiento de la invención. Por ejemplo, un kit puede comprender uno o más péptidos, polinucleótidos y/o células de la invención diferentes, o uno o más péptidos, polinucleótidos o células de la invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales adecuados para administración simultánea o para administración secuencial o separada. Opcionalmente el kit puede contener uno o varios reactivos adecuados adicionales o instrucciones y similares.

La invención se ilustra por los siguientes Ej emplos : EJEMPLO 1 Epítopos de linfocitos T potenciales Las regiones de Amb a 1 descritas a continuación se identificaron como opciones potenciales que comprenden uno o más epítopos de linfocitos T: TABLA 2 Las secuencias proporcionadas para las regiones G, I y J en la solicitud de prioridad, GB 0815258.3 son las Siguientes: GEAAIKLTSSAGVLSCRP (Región G) , HGFFQWNNNYDRGTYA (Región I) y ETRRLTTSGAYN (Región J) . Estas secuencias se han corregido en la Tabla 2 de manera que corresponden a las regiones relevantes de la secuencia de longitud completa de Amb a 1 isoforma 1.3 como se proporcionan en lo siguiente.

Las regiones que se muestran en la Tabla 2 después se analizan adicionalmente para encontrar cuales de ellas están altamente conservadas entre las 4 isoformas diferentes de Amb al como se muestran en lo siguiente (1.1, 1.2, 1.3 y 1.4). Para las siguientes secuencias, se utilizan los siguientes tipos de texto para indicar regiones de interés: Región A, Región B, Región C, Región D, Región E, Región F, Región G, Región H, Región I, Región J.

Los siguientes péptidos se considera que están altamente conservados y por lo tanto se utilizaron posteriormente para pruebas adicionales.

TABLA 3 Péptido Derivada de Secuencia SEC ID NO: la región de interés RGW01 A GMIKSNDGPPI 1 RGW01A A GLIKSHDGPPV 2 RG 01B A GLIKSNDGPAA 3 RGW02G B GSSQIWIDHSSLSKS 4 RG 02A B GSSQIWIDHCSLSKS 5 RGW02B B GGSQIWIDHCSLSKA 6 RGW03 C KDLLENGAIFVTSG 7 RG 03A C DVFENGAIFVPSG 8 RG 03B C RDLLENGAIFLPSG 9 RGW0 D KAGMIPAEPGEA 10 RGW4A D SAGMIPAEPGEA 11 RGW05 E KEGTLRFAAAQNRP 12 RG 05A E KEGTLRFGAAQNRP 13 RGW06 F WNSDKTIDGRGVKVE 14 RGW06A F AINNDKTIDGRGAKVE 15 RG 07 G GEAAIKLTSSAGVLS 16 RG 07A G GEAVLRLTSSAGVLS 17 RGW07B G GESALSLTSSAGVLS 18 RGW07C G KGEAAIKLTSSAGVLSK 19 Péptido Derivada de Secuencia SEC ID NO: la región de interés RG 07D G KGEAAIKLTSSAGVLSKK 20 RGW08 H GSTHVTISNSKF 21 RGW08A H GSTHVTISNCKF 22 RGW08B H GSTHFTVSNCLF 23 RGW08C H GSTHFTVSNSLF 24 RGW08D H GTTRLTVSNSLF 25 RGW09 J ETRRSLKTSGAYN 26 RGW10 I FGFFQWNNNYD 27 RGW10A I HGFFQW YD 28 RGW11 I VNNNYDRWGTYA 29 RGW11A I V YDKWGSYA 30 RGW11B I VN YERWGSYA 31 Como sera evidente, las secuencias anteriores no necesariamente son idénticas a las secuencias nativas de las regiones de interés. En particular, los péptidos de la invención se pueden manipular para mejorar la solubilidad y/o reducir la formación de dímeros y/o reducir la probabilidad de reticulado de IgE en relación con las secuencias nativas. La siguiente tabla (Tabla 4) proporciona ilustraciones específicas de los principios anteriores como se aplicaron por los inventores para producir los péptidos de la Tabla 3 (SEC ID NOS: 1 a 31) .

TABLA 4 Secuencia Identificación" i GRAVE Comentarios GMIKSNDGPPIL Región A 5.84 -0.083 GMIKSNDGPPI RGW01 5.84 -0.436 El péptido (SEC ID NO: 1) manipulado tiene una calificación GRAVE menor : más soluble GSSQIWIDHCSLSKS Región B 6.73 -0.273 GSSQIWIDHSSLSKS RG 02 6.73 -0.493 El péptido (SEC ID NO: 4) manipulado tiene ser en lugar de cys (evita la formación de dímero) y tiene una calificación GRAVE menor: más soluble DKDLLENGAIFVTSGSDPVL Región C TPVQ RDLLENGAIFLPSG RGW03B El péptido (SEC ID NO: 9) manipulado es significa ivamente más corto: evita el riesgo de liberación de histamina vía reticulado de IgE AIKLTSSAGVFSCHP Región G GEAAIKLTSSAGVLS RGW07 6.00 0.69 El péptido (SEC ID NO: 6) manipulado carece de cys en los últimos tres residuos (para evitar formación de dímero) y tiene L que sustituya a F como se presenta en 1.1, 1.2 y 1.4 Las hileras resaltadas en gris en la tabla anterior representan la secuencia nativa de una región. Los péptidos modificados de acuerdo con la invención se muestran debajo de cada secuencia nativa. Los residuos en negrilla y subrayados representan adiciones o sustituciones de la secuencia nativa.

ANALISIS DE CITOCINA Y SELECCION DE COMBINACIONES PREFERIDAS Los perfiles de secreción de citocina a partir de PBMC de 50 personas se analizaron en respuesta a la estimulación de péptido utilizando los péptidos de las SEC ID NOS: 1 a 31. Los sobrenadantes del análisis de liberación de citocina se probaron para determinar la presencia de IL-13 e IFN-? utilizando análisis de distribución de esferas multiplex.

Un análisis de liberación de citocina típico requiere 40 x 106 PBMC por persona. Con mayor detalle, 250 µ? de una solución de 200 µ?/ml de la concentración apropiada de antígeno o péptido se distribuye en los pozos apropiados de placas de 48 pozos. Las placas se incuban en un incubador de C02 5% humidificado a 37°C durante un máximo de 4 horas. Un volumen de 250 µ? de una suspensión de 5 x 106 células/ml de PBMC después se agrega a cada pozo y las placas se regresan al incubador durante 5 días. Después de la estimulación, las muestras del sobrenadante de cultivo se cosecha para pruebas por análisis de esfera multiplex de acuerdo con procedimientos estándar. Los datos se analizan para sujetos que tienen una respuesta a interferón ? o IL-13 mayor de 100 pg/ml y los péptidos se clasifican en base en el % de tasa de respuesta, como se muestra en la Tabla 5.

TABLA 5 Número de respuestas % de > 100 pg/ml respuestas RGW 01 34 68 RGW OIA 25 50 RGW 03 25 50 RGW 01B 24 48 RGW 04 23 46 RGW 03A 22 44 RGW 03B 22 44 RGW 10 21 42 RGW 04A 20 40 RGW 10A 20 40 RGW 05 19 38 RGW 02 18 36 RGW 09 18 36 RGW 06 17 34 RGW 06A 17 34 RGW 11A 17 34 RGW 05A 16 32 RGW 08B 10 20 RGW 11B 10 20 RGW 02B 9 18 Número de respuestas % de > 100 pg/ml respuestas RGW 07A 9 18 RGW 11 8 16 RGW 08A 6 12 RGW 08D 6 12 RGW 02A 5 10 RGW 07B 5 10 RGW 08 4 8 RGW 07 2 4 RGW 08C 2 4 En base en lo anterior, se selecciona una combinación preferida de la invención que contenga: RGW01 (potencialmente sustituido con RGW01A o RGW01B) ; y uno de RGW03, RGW03A o RGW03B; y uno de RGW04 o RG04A.

De los péptidos remanentes, los siguientes más potentes son RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 o RGW10A, RGW05 o RGW05A. Una combinación peptídica preferida habitualmente puede comprender por lo menos un péptido adicional que se selecciona de este grupo.

Dado que la solubilidad es un criterio clave para que se administre los péptidos a los pacientes, adicionalmente se realizan pruebas de solubilidad in vi tro para evaluar la solubilidad de péptidos en un ambiente ácido ( H 2.97, HC1 0.1 mM, 0.5% (p/v) , 1-tioglicerol (aproximadamente 46 mM) , trehalosa 230 mM) . Por ejemplo, se ha encontrado que RGW03B tiene una solubilidad de 3.85 mg/ml en comparación con <0.62 mg/ml de RGW03. En consecuencia, los inventores han determinado que RGW03B es preferido sobre RG 03.

La figura 1 muestra el número de personas quienes responden a una mezcla de núcleo de RGW01, RGW03B y RGW04A. Un análisis combinado de IFNy positivo o respuestas de IL-13 para los péptidos representados en la mezcla de núcleo muestra que estos 3 péptidos proporcionan una cobertura para 38/50 de personas alérgicas a ambrosía (76% de la población de estudios) . Esto indica que los péptidos de la mezcla de núcleo se unen a la mayor parte de las moléculas DR CPH clase II y que estos complejos son reconocidos por los linfocitos T en la mayor parte de las personas alérgicas . También se muestra el efecto aditivo de agregar RGW06A. Se muestra claramente el beneficio de agregar epítopos del segundo grupo de péptidos .

Se realizan análisis de citocina adicional para evaluar la liberación de IL-10 del mismo conjunto de individuos, inducidos por los péptidos de las SEC ID NOS: 1 a 31. El análisis de la respuesta IL-10 muestra que RGW07 y RGW07B inducen cantidades significativas de IL-10 (figura 2) . RGW07, por sí mismo, induce IL-10 en 49/50 personas. Una combinación peptídica preferida por lo tanto habitualmente comprenderá por lo menos un péptido adicional que se selecciona del grupo RGW07. Un análisis combinado de respuestas positivas de IFNy o IL-13 representado en la mezcla de 6 péptidos identificados en la figura 1 (RGWOl + RGW03B + RGW04A + RGW02 + RGW05 + RGW06A) junto con RGW07 proporciona una respuesta positiva de IFNy o IL-13 en 49/50 sujetos. De esta manera, la combinación de péptidos cubre eficazmente la totalidad de la población de estudio y se puede esperar cobertura completa cuando se utilicen variantes de solubilidad mejorada de RGW07 (véase abajo) . Las combinaciones de péptidos comprenden RGWOl + RGW03B + RGW04A + RGW02 + RGW05 + RGW06A) o variantes de las mismas junto con RGW07 o variantes de las mismas también tienen la ventaja de proporcionar una respuesta IL-10 positiva (véase más adelante y la figura 3) .

La prueba de solubilidad muestra que RGW07 tiene poca solubilidad en un ambiente ácido y de esta manera se agregan residuos lisina adicionales a RGW07 (indicado en la Tabla 6) . Los péptidos modificados se prueban para solubilidad y su capacidad para inducir IL-10 a partir de PBMC en presencia de la mezcla de péptidos identificados en la figura 1 (RGWOl + RGW03B + RGW04A + RGW02 + RGW05 + RGW06A) . Los controles incluyen la mezcla peptídica sin la variante RGW07 y con el alérgeno completo de Amb a 1. Los resultados se muestran en la figura 3.

TABLA 6 - SOLUBILIDAD DE RGW07 Y VARIANTES 0 En base en estos análisis se encontró que RGW07D es preferido tanto por su solubilidad como por su capacidad para inducir IL-10 en presencia de los otros seis péptidos.

EJEMPLO 2 - ANALISIS DE LIBERACION DE HISTAMINA 5 El propósito de este análisis es identificar péptidos individuales que sean capaces de activar basófilos de la sangre (como un sustituto para mastocitos de tejido) lo que resulta en liberación de histamina que pueda resultar en reacciones alérgicas durante el tratamiento. Los péptidos o Q combinaciones de péptidos que induzcan liberación de histamina con frecuencia se pueden considerar inadecuados para inclusión en la vacuna peptídica.

La liberación de histamina requiere la reticulación de moléculas IgE específicas adyacentes sobre la superficie <- del basófilo. Los péptidos que son evaluados son pequeños (con una longitud de 11 a 18 aminoácidos) y por lo tanto no presentan estructura terciaria significativa que pueda permitir que retengan la conformación de un epítopo que se una a IgE de la molécula completa. Además, los monómeros peptídicos en solución, incluso si son unidos por IgE, no serán capaces de reticular a moléculas de IgE adyacentes.

Se evaluó la liberación de histamina a partir de sangre completa periférica recién extraída - de personas alérgicas a ambrosía. Se utilizaron basófilos de sangre periférica como un sustituto de mastocitos de tejido los cuales no son prácticos para analizar. Se incubó sangre in vitro con péptidos individuales identificados en el ejemplo 1 (RGW01, RGW02, EGW03B, RGW04A, RGW05 , RG 06A, RG 07 Y RGW07D) . De manera adicional, se analizaron las respuestas a mezclas preferidas de 7 péptidos identificados en el ejemplo 1. Las mezclas preferidas probadas de 7 péptidos consisten de i) RGW01, RGW02, EGW03B, RG 04A, RGW05, RGW06A, RGW07 y ii) RG 01, RG 02, EG 03B, RGW04A, RGW05, RGW06A y RGW07D.

Se midió en cada sujeto la liberación de histamina en respuesta al extracto de alérgeno de ambrosía completo para confirmar sensibilización de basófilos. Se incluyó en cada análisis un control positivo que representa la liberación total de histamina generada por congelamiento/recalentamiento de células dos veces . Se generó un control negativo para liberación espontánea de histamina al incubar células únicamente en amortiguador.

El análisis se realizó utilizando el kit de inmunoanálisis de liberación de histamina (Immunotech Histamine Reléase Ummuniassay) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de la exposición in vitro de basófilos sanguíneos con péptidos, mezclas de péptidos, alérgeno completo o amortiguador en pozo de placa de microtitulación, se separaron los sobrenadantes y la histamina en las muestras se convirtió a acilhistamina . Las muestras aciladas se probaron por una prueba de ELISA competitiva para acilhistamina.

Los péptidos se analizaron para determinar su capacidad para inducir liberación de histamina sobre un intervalo de 5 log 10 (1 a 10,000 ng/ml) . El intervalo de concentración analizado se seleccionó en base en las dosis teóricas in vivo de péptido que se pueden obtener durante terapia. Por ejemplo, una dosis de 31 µg (aproximadamente equivalentemente a 3 nmol/péptido) de cada péptido que entra a un volumen de sangre de 5 litros, resultará en una concentración de sangre de 6 ng/ml, en el extremo inferior del intervalo de dosis de análisis de liberación de histamina. Se utilizó en el extracto de alérgeno de ambrosía completo sobre un intervalo de concentración ligeramente mayor (10 a 100,000 ng/ml). ge realizaron mediciones únicas para cada dilución. Después de completar las pruebas de ELISA, se determinaron las concentraciones individuales de histamina por interpolación a partir de una curva estándar generalizada en el análisis de ELISA. Los resultados de las muestras se ajustaron para permitir dilución. Cuando dos o más diluciones consecutivas de una preparación de péptido/alergeno inducía >15% de la liberación de histamina total observada en el control positivo congelado y recalentado (>15% del control positivo) o cuando se obtenía un valor único de >15% del control positivo en la concentración más alta probada (10 µg/ml para péptidos) se consideraba una "liberación de histamina positiva" .

Se completaron durante el estudio un total de 49 análisis de liberación de histamina. De estos, 6 análisis se rechazaron debido a concentraciones inaceptablemente altas (>15% del control positivo) de liberación espontánea en el medio más los pozos de control negativos de amortiguador. Por lo tanto se incluyeron en el análisis un total de 43 personas. Una cantidad de 20 de estas personas se probaron con ei péptido RGW07D y la mezcla que lo contenía. Los hallazgos del estudio se resumen en la tabla 7.

TABLA 7 *Los péptidos 1-6 y RGW07D en combinación son >15% en dos personas únicamente a 10 µ9/p?1.

Los resultados se muestran para la dosis más alta de péptidos probados en el análisis (10 . El control de alérgeno de ambrosía indujo liberación significativa de histamina en 65% de las 43 personas. Incluso a la concentración más baja de 10 ng/ml, el extracto de alérgeno completo indujo liberación significativa de histamina en 22/43 (51%) de las personas con una media de liberación para las 43 personas de 30% del control positivo. El extracto de ambrosía completo crudo contiene aproximadamente 0.5% de un alérgeno principal Amb al, enfatizando la gran sensibilidad del análisis de basófilos in vitro para determinar la seguridad de los péptidos los cuales, a 10 µg/ml están presentes en un exceso de >10,000 sobre Amb al en el extracto crudo a 10 ng/ml.

Los datos muestran que los ocho péptidos individuales no inducen liberación de histamina significativa a partir de los basófilos de personas alérgicas a ambrosía cuando se comparan con el alérgeno completo. Una combinación de péptidos RGW01, RGW02, EGW03B , RGW04A, RGW05, RG 06A, RGW07 tampoco indujo una liberación de histamina significativa en las 43 personas.

La combinación de péptidos RGW01, RG 02, EGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A y RGW07D proporciona una respuesta positiva débil en 2 personas con valores de 16% y 20% del control positivo en la concentración péptido más alta de 10 µg/ml . Laos valores de liberación en % a las cuatro concentraciones menores probadas son <15%, es decir, negativas. Dada la gran cantidad de dosis pepti-dica probada en este análisis en comparación con las probables concentraciones en sangre de los péptidos después de dosificación clínica - la concentración más alta probada representa un exceso de >1000 veces sobre las concentraciones sanguíneas esperadas - no se anticipa que esta combinación de péptidos provoque ni tampoco liberación de histamina significativa por activación y desgranulación de basófilos o mastocitos mediada por IgE o mediada por péptido directo.

EJEMPLO 3; ENSAYO CLINICO DE COMBINACION PEPTIDICA Se prueba una .mezcla preferida de 7 péptidos que consiste de los péptidos RGW01, RGW02, EGW03B, RGW04A, RGW05, RGW06A y RG 07D, en un ensayo clínico a ciegas, aleatorizado controlado con placebo. Se evalúa la eficacia de esta mezcla para reducir síntomas alérgicos. El diseño de estudio del ensayo clínico es de conformidad con las líneas de guía de buena práctica clínica.

Se realizó una selección de sujetos alérgicos a ambrosía al identificar una respuesta cutánea en fase tardía (LPSR, por sus siglas en inglés) y calificaciones de la prueba de provocación en conjuntiva (CPT, por sus siglas en inglés) después de exposición con alérgeno de ambrosía. Los detalles de los análisis LPSR y CPT se proporcionan en lo siguiente. Se realizaron titulaciones con el fin de identificar concentraciones mínimamente eficaces del alérgeno completo para generación de una calificación apropiada de LPSR y CPT. Se tomaron muestras de sangre para evaluar las concentraciones de igE específicas para ambrosía.

Las respuestas básales en piel y conjuntiva al alérgeno de ambrosía para todos los sujetos se establecieron utilizando una exposición basal la cual se lleva a cabo entre 1 a 4 semanas antes de la administración de la medicación de estudio. Una inyección intradérmica de alérgeno de ambrosía a una concentración mínimamente eficaz identificada en el cribado se administra en la superficie volar del antebrazo seleccionado. Los sujetos se determinan para asegurar que experimenten una respuesta cutánea de fase temprana (EPSR) , una CPT y una respuesta cutánea de fase tardía (LPSR) para el alérgeno de ambrosía completo y la magnitud de la reacción basal se registra como sigue: 15 minutos (± 3 minutos) después de la inyección, el contorno de cualquier EPSR se dibuja sobre la piel con un bolígrafo. Los diámetros más grande y ortogonal se miden y se registran para cada respuesta y el área de la respuesta en cada brazo se calcula.

A un mínimo de 30 minutos después de la inyección, el alérgeno de ambrosía en la concentración mínimamente eficaz identificado en el cribado se instila en un ojo seleccionado. El sujeto clasificó el prurito y el observador clasificó el enrojecimiento y acumulación de lágrimas y después realizó una calificación después de 5 minutos (± 2 minutos) . El sistema de calificación se muestra en la tabla 8 siguiente.

Ocho horas (± 10 minutos) después de cada inyección se dibujó el contorno de la respuesta de fase tardía sobre la piel con un bolígrafo. El diámetro más grande y ortogonal se midió y registró para cada respuesta y se calculó el área de la respuesta en cada brazo.

Las personas quienes produjeron una reacción basal adecuada se les asignó a grupos de dosificación, se les distribuyó de manera aleatoria y se les introdujo a la fase de tratamiento .

TABLA 8 La fase de tratamiento consiste de un período de 6 semanas para cada sujeto. Durante este período, un grupo de sujetos recibió una inyección intradérmica única ya sea de la mezcla preferida (0.03, 0.3, 3, 1, 12 nmoles de cada péptido por dosis) o placebo con diluyente en la visita 1 de fase de tratamiento en el día 1. Se realizaron inyecciones intradérmicas en la superficie flexora del antebrazo seleccionado. Después se realizó una administración repetida en las visitas de fase de tratamiento 2, 3 y 4, con una separación de dos semanas (14 ± 2 días) . Un conjunto de 10 sujetos recibió tratamiento a cada nivel de dosis (8 recibieron la mezcla preferida y 2 placebo). El primer grupo recibió 0.03 nmoles de cada péptido en la mezcla y cada grupo subsecuente en el grupo recibió el siguiente nivel de dosis más alto.

En un período de 19 a 28 semanas después del inicio del tratamiento los sujetos presentaron sus respuestas cutáneas y de conjuntiva al alérgeno completo se volvieron a probar en una exposición posterior a tratamiento (PTC, por sus siglas en inglés) . Las respuestas cutáneas al alérgeno de ambrosía se determinaron por medición de EPSR y LPSR, como se describe en lo anterior. El área promedio de respuesta se calcula como se describe en lo anterior. Las respuestas de conjuntiva a alérgeno de ambrosía se determinan por medición de CPT como se describe en lo anterior. Las muestras de sangre se toman de la medición de IgE específico para ambrosía.

El área de EPSR promedio después del tratamiento se compara con el área EPSR basal para cada sujeto. El cambio total en el área EPSR para la totalidad de los diez pacientes en cada conjunto se evaluó después. El área LPSR promedio después del tratamiento se compara con el área LPSR basal para cada sujeto. El cambio general al área LPSR para la totalidad de los diez pacientes en cada conjunto se evalúa después. La calificación CPT después del tratamiento se compara con la calificación CPT basal para cada sujeto. El cambio general en la calificación CPT para la totalidad de los diez pacientes en cada conjunto se evalúa después.

MODALIDADES ADICIONALES DE LA INVENCION I. Una composición para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende por lo menos tres polipéptidos , en donde los polipéptidos se seleccionan independientemente de cualquiera de los siguientes: (i) un polipéptido de cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31; O (ii) una variante del polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido de una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de: cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o - una secuencia la cual tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia en un individuo a cualquiera de las secuencias del inciso (i) , o (iii) una variante de un polipéptido de acuerdo con el inciso (i) , en donde la variante es un polipéptido con una longitud de 9 a 30 aminoácidos que comprende una región que consiste de una secuencia que representa ya sea: un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) ; o un homólogo o un fragmento de cualquiera de las secuencias del inciso (i) , secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia a un individuo a cualquiera de las secuencias del inciso (i) y que tiene una longitud de por lo menos 9 aminoácidos y en donde el homólogo tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera de los 9 aminoácidos contiguos de la secuencia del inciso (i) .

II. La composición de acuerdo con el inciso I, en donde la composición: a) es capaz de inducir tolerancia por lo menos 55% o por lo menos 60% de un conjunto de individuos alérgicos a ambrosía en la población; y/o b) comprende por lo menos tres polipéptidos que se seleccionan del inciso I(i) o variantes del mismo como se definen en los incisos I(ii) o I(iii) y/o c) comprende por lo menos un polipéptido adicional hasta un total de trece polipéptidos únicos/diferentes, en donde los polipéptidos adicionalmente : - comprenden una secuencia que tienen por lo menos 65% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 anteriores no seleccionadas en el inciso (a) ; y tiene una longitud de 9 a 30 aminoácidos; y/o d) comprende hasta un máximo de trece polipéptidos .

III. La composición de acuerdo con el inciso I o II, que comprende por lo menos un polipéptido de acuerdo con el inciso 11(c) el cual tiene una longitud de 9 a 20 ó 13 a 17 aminoácidos y/o en donde el polipéptido tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31.

IV. Una composición de acuerdo con cualquiera de los incisos precedentes, que comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW01, RG 01A o RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3) o una variante del mismo como se define en el inciso I(ii) o (iii) .

V. Una composición de acuerdo con el inciso IV, en donde por lo menos un polipéptido es el polipéptido RGW01, o una variante del mismo.

VI. Una composición de acuerdo con el inciso IV o V, que comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW03B, RGW03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 ó 7), o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii) ; VII. Una composición de acuerdo con el inciso VI, en donde por lo menos el polipéptido es el polipéptido RGW03B o una variante del mismo.

VIII. Una composición de acuerdo con cualquiera de los incisos IV a VII, que comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 u 11) o una variante del mismo como se define en el inciso I(ii) o (iii).

IX. Una composición de acuerdo con los incisos IV a VIII, que comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 O RGW10A, RGW05 o RGW05A (SEC ID NOS: 4, 26, 14, 15, 27, 12 ó 13) , o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii) .

X. Una composición de acuerdo con cualquiera de los incisos IV a IX, que comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW07, RGW07C o RG 07D (SEC ID NOS: 16, 19 ó 20), o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii) .

XI. Una composición de acuerdo con el inciso X, en donde por lo menos un polipéptido es RGW07D (SEC ID NOS: 20) .

XII. Una composición de acuerdo con cualquiera de los incisos precedentes, que consiste de: a) por lo menos uno de los polipéptidos de RGWOl, RGW01A o RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3), o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii) ; y b) por lo menos uno de los polipéptidos de RGW03B, RGW03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 ó 7), o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii); y c) por lo menos uno de los polipéptidos de RGW04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 ó 11), o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii); y opcionalmente d) por lo menos uno de los polipéptidos de RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 o RGW10A, RGW05 o RGW05A (SEC ID NOS: 4, 26, 14, 15, 27, 12 ó 13), o una variante del mismo, como se define en el inciso I(ii) o (iii); y opcionalmente e) por lo menos uno de los polipéptidos de RGW07, RGW07C o RGW07D (SEC ID NOS: 16, 19 ó 20), o una variante del mismo como se define en el inciso I(ii) o (iii) .

XIII. La composición de acuerdo con cualquiera los incisos precedentes, en donde uno o más de los polipéptidos tiene una o más modificaciones que se seleccionan de las siguientes : (i) acetilación N-terminal; (ii) amidación C-terminal; (iii) uno o más hidrógenos en las aminas de cadena lateral de Arginina y/o Lisina sustituidos con un grupo metileno; (iv) glucosilación; y (v) fosforilación.

XIV. La composición de acuerdo con cualquiera de los incisos precedentes, en donde por lo menos uno de los péptidos ha sido manipulado para ser soluble de manera que comprende : i) N-terminal a los residuos de péptidos los cuales flanquean un epítopo de linfocito T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a dos a seis aminoácidos contiguos inmediatamente N-terminal a los residuos en la secuencia de proteína a partir de la cual se deriva el péptido; y/o ii) C-terminal a los residuos del péptido el cual flanquea a un epítopo de linfocito T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a uno a seis aminoácidos contiguos inmediatamente C-terminales a los residuos en la secuencia de la proteína de la cual se deriva el péptido; o iii) N y/o C-terminal a los residuos del péptido los cuales flanquean un epítopo de linfocitos T, por lo menos un aminoácido que se selecciona de arginina, lisina, histidina, glutamato y aspartato, en donde el polipéptido tiene una solubilidad de por lo menos 3.5 mg/ml y el epítopo de linfocito T tiene una solubilidad de menos de 3.5 mg/ml.

XV. La composición de acuerdo con los incisos precedentes, en donde por lo menos uno de los péptidos ha sido manipulado para ser soluble de manera que, adicionalmente : i) cualquier residuo cisteína en la secuencia nativa del péptido es sustituida con serina o ácido 2-aminobutírico ; y/o ii) cualquier residuo hidrofóbico en hasta 3 aminoácidos en la parte N y/o C-terminal de la secuencia nativa del péptido, los cuales no están comprendidos en un epítopo de linfocito T se suprimen y/o iii) cualesquiera dos aminoácidos consecutivos que comprenden la secuencia Asp-Gly en hasta cuatro aminoácidos en la parte N y/o C-terminal de la secuencia nativa del péptido, los cuales no están comprendidos en un epítopo de linfocitos T, son suprimidos.

XVI. La composición de acuerdo con cualquiera de los incisos precedentes, en donde cada polipéptido tiene una concentración en el intervalo de 0.03 a 200 nmol/ml, 0.3 a 200 nmol/ml o 30 a 120 nmol/ml.

XVII. Una composición para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende por lo menos tres secuencias polinucleotídicas las cuales, cuando se expresan, provocan la producción de una composición como se define en cualquiera de los incisos I a XVI.

XVIII. La composición de acuerdo con el inciso XVII, en donde cada secuencia polinucleotídica capaz de expresar un polipéptido diferente está presente en vectores polinucleotídicos iguales o diferentes.

XIX. Un vector para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende por lo menos tres secuencias polinucleotídicas cada una de las cuales codifica para un polipéptido diferente como se define en el inciso I y opcionalmente una o más secuencias polinucleotídicas adicionales las cuales codifican para polipéptidos diferentes como se define en el inciso II.

XX. Un vector para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende entre tres y trece secuencias polinucleotídicas diferentes, cada una de las cuales codifica para un polipéptido diferente, como se define en el inciso I o II, en donde por lo menos un polinucleótido codifica para un polipéptido que se selecciona de cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos: a) RGW01, RGW01A o RG 01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3); b) RGW03B, RGW03A o RG 03 (SEC ID NOS: 9, 8 ó 7) ; y c) RGW04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 Ó 11) .

XXI . Un producto que contiene entre tres y trece polipéptidos , en donde por lo menos un polipéptido se selecciona de cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos: a) RGW01, RGW01A o RG 01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3) o una variante de los mismos, como se definen en los incisos I (ii) o (iii) ; b) RGW03B, RGW03A O RG 03 (SEC ID NOS: 9, 8 Ó 7) o una variante de los mismos, como se definen en los incisos I (ii) o (iii) ; ; y C) RGW04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 Ó 11) O una variante de los mismos, como se definen en los incisos I(ii) o (iii) ; en donde cada polipéptido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial para prevenir o tratar alergia a ambrosía por inducción de tolerancia.

XXII. Un producto que contiene entre tres y trece secuencias polinucleotídicas , cada una de las cuales codifica para un polipéptido diferente como se define en el inciso I o II, en donde por lo menos un polinucleótido codifica para un polipéptido que se selecciona de cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos: a) RGW01, RGW01A o RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3); b) RG 03B, RG 03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 Ó 7) ; y c) RG 04 o RG 04A (SEC ID NOS: 10 Ó 11); y en donde cada polipéptido diferentes para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía en un humano.

XXIII. Una formulación farmacéutica para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia que comprende una composición de acuerdo con los incisos I a XVIII; un vector de acuerdo con cualquiera de los incisos XIX o XX; o un producto de acuerdo con cualquiera de los incisos XXI o XXII; y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

XXIV. La composición, vector o producto de acuerdo con el inciso XXIII, formulada para administración oral, administración nasal, administración epicutánea, administración subcutánea, administración sublingual, administración intradérmica, administración bucal o para administración por inhalación o por inyección.

XXV. La composición como se define en cualquiera de los incisos I a XVIII o un producto como se define en el inciso XXI o XXII, que comprende adicionalmente un alérgeno polipeptídico adicional para uso en inducción de tolerancia de un individuo al alérgeno polipéptido adicional.

XXVI. Un método in vitro para determinar si los linfocitos T reconocen un polipéptido como se define en el inciso I que comprende poner en contacto a los linfocitos T con el polipéptido y detectar los linfocitos T son estimulados por el polipéptido.

XXVII. Un método in vitro para determinar si un individuo tiene o está en riesgo de una condición en donde la condición está caracterizado por síntomas alérgicos en respuesta a un alérgeno de ambrosía, el método comprende probar si el individuo tiene linfocitos T los cuales responden a una composición como se define en cualquiera de los incisos I a XVIII, por lo que se determina si el individuo tiene o está en riesgo de la condición.

XXVIII. Un método de acuerdo con el inciso XXVII, en donde una respuesta inmunitaria de linfocitos T a la composición se mide al poner en contacto la composición con linfocitos T en una muestra tomada del sujeto, bajo condiciones las cuales permiten que la composición y los linfocitos T interactúan; y determinar si cualquiera de los linfocitos T son estimulados o no y de esta manera determinar si la respuesta inmunitaria de los linfocitos T está o no presente o ausente.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (15)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Una composición para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia, caracterizada porque comprende: (i) por lo menos un polipéptido original que se selecciona de RB 03B, RGW03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 ó 7) o una variante del mismo; (ii) por lo menos un polipéptido original que se selecciona de RGWL01, RGW01A o RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3) o una variante del mismo; (iii) por lo menos un polipéptido original que se selecciona de RG 04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 u 11) o una variante del mismo; y (iv) opcionalmente uno o más polipéptidos originales que se seleccionan independientemente de cualquiera de las SEC ID NOS: 4-6 y 12-31 o variantes de los mismos ; en donde las variantes son-. (a) un polipéptido de una longitud de 9 a 20 aminoácidos que comprende una región que consiste de: - la secuencia peptídica original equivalente; o una secuencia homologa la cual tiene por lo menos 65% de homología con la secuencia peptídica original equivalente, secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia a un individuo para la secuencia peptídica original equivalente, o (b) un polipéptido con una longitud de 9 a 20 aminoácidos que comprende una región que consiste de una secuencia que representa ya sea: un fragmento de la secuencia peptídica original equivalente; o un homólogo de un fragmento de la secuencia peptídica original equivalente, secuencia la cual es capaz de inducir tolerancia a un individuo a la secuencia peptídica original equivalente y que tiene una longitud de por lo menos 9 aminoácidos y en donde el homólogo tiene por lo menos 65% de homología con cualquiera 9 aminoácidos contiguos en la secuencia peptídica original equivalente.

2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la composición: a) es capaz de inducir tolerancia por lo menos 50% o por lo menos 60% de un conjunto de individuos alérgicos a ambrosía en la población; y/o b) comprende por lo menos un polipéptido adicional hasta un total de 13 polipéptidos únicos/diferentes, en donde los polipéptidos adicionalmente : comprenden una secuencia que tiene por lo menos 65% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS: 1 a 31 anteriores, no se seleccionadas en los incisos (i) a (iv) ; y tiene una longitud de 9 a 30 aminoácidos; y/o c) comprende hasta un máximo de trece polipéptidos .

3. La composición de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque comprende por lo menos un polipéptido de acuerdo con el inciso b) de conformidad con la reivindicación 2 (b) el cual tiene una longitud de 9 a 20 o de 13 a 17 aminoácidos y/o en donde el polipéptido tiene por lo menos 70% de identidad de secuencia con por lo menos 9 o más aminoácidos contiguos en cualquiera de las SEC ID NOS : 1 a 31.

4. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende el polipéptido RG 01, o una variante del mismo como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; el polipéptido RG 03B, o una variante del mismo como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; y el polipéptido RGW04A, o una variante del mismo como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1.

5. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende por lo menos un polipéptido que se selecciona de un polipéptido de RGW02, RGW09, RGW06, RGW06A, RGW10 o RGW10A, RG 05 o RG 05A (SEC ID NOS: 4, 26, 14, 15, 27, 12 ó 13), O una variante del mismo como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación l; y opcionalmente que comprende de manera adicional un polipéptido de RGW07, RG 07C o RGW07D (SEC ID NOS: 16, 19 ó 20) o una variante del mismo como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1.

6. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque comprende RGW01 o una variante de la misma como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; RGW03B o una variante de la misma como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; RGW04A o una variante de la misma como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; RG 02 o una variante de la misma como se define en la reivindicación 1(a) o (b) ; RG 05 o una variante de la misma como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; RGW06A o una variante de la misma como se define en el inciso a) o b) de conformidad con la reivindicación 1; y RG 07D o una variante de la misma como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) .

7. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque: (i) uno o más de los polipéptidos tienen una o más modificaciones que se seleccionan de las siguientes: (a) acetilación N-terminal; (b) amidación C-terminal; (c) uno o más hidrógeno en las aminas de cadena lateral de arginina y/o lisina está sustituida con un grupo metileno; (d) glucosilación; y (e) fosforilación; y/o (ii) por lo menos uno de los péptidos ha sido manipulado para ser soluble de manera que comprende : (a) N-terminal a los residuos del péptido los cuales flanquean un epítopo de linfocitos T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a los dos a seis aminoácidos contiguos inmediatamente N-terminal a los residuos en la secuencia de la proteína de la cual se deriva el péptido; y/o (b) C-terminal a los residuos del péptido los cuales flanquean un epítopo de linfocitos T: uno a seis aminoácidos contiguos que corresponden a uno a seis aminoácidos contiguos inmediatamente C-terminal a los residuos en la secuencia de la proteína de la cual se deriva el péptido; o (c) N y/o C-terminal a los residuos del péptido los cuales flanquean a un epítopo de linfocito T, por lo menos un aminoácido que se selecciona de arginina, lisina, histidina, glutamato y aspartato, en donde el polipéptido tiene una solubilidad de por lo menos 3.5 mg/ml y el epítopo de linfocito T tiene una solubilidad de menos de 3.5 mg/ml; y/o (iii) por lo menos uno de los péptidos ha sido manipulado para ser soluble de manera que adicionalmente : (a) cualquier residuo cisteína en la secuencia nativa del péptido es sustuido con serina o ácido 2-aminobutírico; y/o (b) cualquier residuo hidrofóbico en hasta 3 aminoácidos en la parte N y/o terminal de la secuencia nativa del péptido, los cuales no están comprendidos en un epítopo de linfocito T, son suprimidos; y/o (c) se suprimen cualesquiera dos aminoácidos consecutivos que comprenden la secuencia Asp-Gly en hasta 4 aminoácidos en la parte N y/o C-terminal de la secuencia nativa del péptido, los cuales no están comprendidos en un epítopo de linfocito T, son suprimidos; y/o (iv) cada polipéptido tiene una concentración en el intervalo de 0.03 a 200 nmol/ml, 0.3 a 200 nmol/ml o 30 a 120 nmol/ml.

8. Una composición para uso en prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia, caracterizada porque comprende por lo menos tres secuencias polinucleotídicas las cuales, cuando se expresan, provocan la producción de una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde opcionalmente cada secuencia polinucleotídica capaz de expresar un polipéptido diferente está presente en los vectores polinucleotídicos iguales o diferentes.

9. Un vector para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia, caracterizado porque comprende entre 3 y 13 secuencias polinucleotídicas diferentes cada una de las cuales codifica para un polipéptido diferente de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, en donde por lo menos un polinucleótido codifica para un polipéptido que se selecciona de cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos : a) RGW01, RGW01A O RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 Ó 3) o una variante del mismo como se define en la reivindicación Ka) o (b) ; b) RGW03B, RGW03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 ó 7) 0 una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; y C) RGW04 O RGW04A (SEC ID NOS: 10 U 11) O una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) .

10. Un producto que contiene entre tres y trece polipéptidos , caracterizado porque por lo menos un polipéptido se selecciona de cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos: a) RGW01, RGW01A o RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3) o una variante del mismo como se define en la reivindicación Ka) o (b) ; b) RGW03B, RGW03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 ó 7) o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1(a) o (b) ; y c) RGW04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 u 11) o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1(a) o (b) ; en donde cada polipéptido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial para evitar o tratar alergia a ambrosía por inducción de tolerancia.

11. Un producto que contiene entre tres y trece secuencias polinucleotídicas en donde cada una codifica para un polipéptido diferente de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque por lo menos un polinucleótido codifica para un polipéptido que se selecciona de cada uno de los siguientes grupos de polipéptidos: a) RGW01, RG 01A o RGW01B (SEC ID NOS: 1, 2 ó 3) o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1 (a) o (b) ; b) RGW03B, RG 03A o RGW03 (SEC ID NOS: 9, 8 Ó 7) o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1(a) o (b); y c) RGW04 o RGW04A (SEC ID NOS: 10 u 11) o una variante del mismo como se define en la reivindicación 1(a) o (b) ; y en donde cada polipéptido diferente es para uso simultáneo, separado o secuencial en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía en un humano.

12. Una formulación farmacéutica para uso en la prevención o tratamiento de alergia a ambrosía por inducción de tolerancia, caracterizada porque comprende una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8; un vector de conformidad con la reivindicación 9; o un producto de conformidad con la reivindicación 10 u 11; y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable; en donde opcionalmente la composición, vector o producto se formula para administración oral, administración nasal, administración epicutánea, administración subcutánea, administración sublingual, administración intradérmica, administración bucal o para administración por inhalación o por inyección.

13. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o el producto de conformidad con la reivindicación 10 u 11, caracterizada porque comprende adicionalraente un alérgeno polipeptídico adicional para uso en inducción de tolerancia de un individuo a un alérgeno polipeptídico adicional.

14. Un método in vitro para determinar si los linfocitos T reconocen una composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende poner en contacto a los linfocitos T con la composición y detectar si los linfocitos T son estimulados por la composición.

15. Un método in vitro para determinar si un individuo tiene o se encuentra en riesgo de una condición en donde la condición está particularizada por síntomas alérgicos en respuesta a un alérgeno de ambrosía, caracterizado porque comprende probar si el individuo tiene linfocitos T que responden a una composición como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, y de esta manera determinar si el individuo tiene o se encuentra en riesgo de la condición; en donde opcionalmente una respuesta inmunitaria de linfocitos T a la composición se mide al poner en contacto la composición con linfocitos T de una muestra tomada del sujeto bajo condiciones que permiten que la composición y los linfocitos T interactúen; y determinar si cualquiera de los linfocitos T son o no estimulados y de esta manera determinar si está presente o ausente una respuesta inmunológica de linfocitos T o no.