MX2010010999A - Formas de sal cristalinas de compuestos antifolatos y metodos de fabricacion de las mismas. - Google Patents

Abstract

La presente invención provee métodos de preparación de compuestos antifolatos de acuerdo con la fórmula que se representa más abajo; particularmente, los métodos de la invención se pueden usar para preparar compuestos que muestran biodisponibilidad mejorada, haciéndolos particularmente útiles en composiciones farmacéuticas; los compuestos preparados de acuerdo con los métodos de la invención son útiles en el tratamiento de múltiples condiciones que incluyen proliferación celular anormal, enfermedades inflamatorias, asma y artritis. (Ver fórmula).

Description

ORMAS DE SAL CRISTALINAS DE COMPUESTOS ANTIFOLA MÉTODOS DE FABRICACIÓN DE LAS MISMAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente solicitud está dirigida a formas de sal crist puestos farmacéuticamente activos y métodos de fabricación d puestos. Más específicamente, los métodos son útiles para puestos antifolatos, particularmente compuestos enantioméri s.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El ácido fólico es una vitamina B soluble en agua conoci bre sistemático ácido N-[4-(2-amino-4-hidroxi-pteridin-6-ilmeti dina, una porción de ácido para-aminobenzoico y una por mato. El ácido fólico y sus derivados son necesarios para el meta ecimiento, participando particularmente en la síntesis de tir oácidos y purinas en el cuerpo. Se sabe que los derivados d , como los folatos naturales, tienen efectos bioquímicos compar o fólico. Se sabe que el ácido fólico forma derivados genación, por ejemplo en el anillo 1 ,4-diazina, o mediante m aldehidilación o formación de puente, en donde la sustitu ralmente en las posiciones N5 o N10. Se ha estudiado la eficaci os en varios usos que incluyen la reducción de la severidad o in efectos del nacimiento, enfermedad cardiaca, ataque cerebral, pé emoria y demencia asociada con la edad.

Los compuestos antifolatos, como los folato cturalmente similares al ácido fólico; sin embargo, los com latos funcionan interrumpiendo el metabolismo del ácido fóli o fólico, se ha mostrado que los antifolatos presentan efectos fisi s, tales como la capacidad de destruir células cancerosas oca ptosis.

Los monoglutamilatos folatos y monoglutamilatos antifol sportados a través de las membranas celulares en forma reduci cida por portadores específicos para esas formas respectiv esión de estos sistemas de transporte varía con el tipo de cél iciones del crecimiento celular. Después de entrar en las cé oría de los folatos y muchos antifolatos son modifica lutamilación, en donde un residuo de glutamato se enlaza ndo residuo de glutamato en el grupo a-carboxi por medio de u ídico. Esto lleva a la formación de poli-L-v-glutamilatos, usualm ión de tres a seis residuos de glutamato. Las enzimas que actú olatos tienen una mayor afinidad por las formas poliglutamiladas , generalmente los folatos poliglutamilados muestran un tie ART).

El portador de folato reducido (RFC), que es una glicoprot membrana, desempeña una función activa en la ruta del fol porta folato reducido a las células de mamífero a través del me iado por portador (a diferencia del mecanismo mediado por recep también transporta antifolatos, tales como metotrexate. vención en la capacidad del RFC para funcionar puede af cidad de las células para captar folatos reducidos.

Los folatos poliglutamilados pueden funcionar como co enzima, mientras que los antifolatos poliglutamilados fu oralmente como inhibidores de enzima. Además, la intromisió abolismo del folato impide la síntesis de novo del ADN y íoácidos, permitiendo así citotoxicidad selectiva antifolato. El meto i estructura se presenta en la fórmula (2), es un antifolato que se h I tratamiento del cáncer, particularmente en el tratamiento de la l ? como referencia, mostraron que la poliglutamilación de los an ¡cos no era esencial para la actividad antitumoral y que incluso p nveniente, ya que la poliglutamilación puede llevar a la pérdid idad farmacológica y la especificidad de objetivo del fármaco. esto se descubrieron muchos antifolatos clásicos no poligluta se Nair et al. (1998) Proc. Amer. Assoc. Cáncer Research 39:431 rpora aquí como referencia. Un grupo particular de antifol lutamilables se caracteriza por un grupo metilideno (esto ituyente =CH2) en la posición 4 de la porción de glutamato. trado que la presencia de este grupo químico altera la actividad compuesto antifolato. Véase Nair et al. (1996) Cellular Phar , que se incorpora aquí como referencia.

También se han estudiado más derivados del ácido fóli ueda de antifolatos con mayor estabilidad metabólica, que permi lores y administración menos frecuente al paciente. Por ejempl estructura se presenta en la fórmula (3).

Se ha mostrado que el enantiómero L de MDAM prese or actividad fisiológica. Véase la patente de EE. UU. No. 5,550,1 ncorpora aquí como referencia. Otro ejemplo de antifolato ñado para mejorar la estabilidad metabólica es ZD1694, que se fórmula (4).

Como se muestra en la fórmula (5), M-Trex abarca un puestos en donde X puede ser CH2, CHCH3t CH(CH2CH3), NH, o La eficacia de los antifolatos como compuestos farmacé na de otros factores además de la inercia metabólica que se >a. Las múltiples enzimas implicadas en el metabolismo del aci tro del cuerpo presentan una gama de elección de objetivos )ición con los antifolatos. En otras palabras, es posible v olatos según la enzima que deben inhibir. Por ejemplo, olatos inhiben principalmente la dihidrofolato reductasa (DHFR), an suministrar los antifolatos de forma segura y eficaz sidad del tratamiento.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee compuestos antifolatos e muestran propiedades mejoradas o deseables de otra manera, y odos de preparación de los compuestos antifolatos. Los com íolatos preparados de acuerdo con los métodos de la invenció eriblemente en una forma que muestra excelente biodisponibilidad D son particularmente útiles en composiciones farmacéutica alidades específicas, los compuestos antifolatos preparados medi Ddos de la invención están en forma de un enantiómero particul jado, tal como el enantiómero (S). En modalidades adición puestos antifolatos preparados mediante los métodos de la in enfermedades autoinmunes.

En un aspecto, la invención provee compuestos antifoi n forma y propiedades particularmente deseables. En alidades, la invención provee compuestos de acuerdo con la fórm en donde: X es CHR8 o NR8¡ ??, ?2, y Y3 son independientemente O, o S; \ y V2 son independientemente O, S, o NZ; Z es H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo onalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, o alcarilo; nilo, o -C(0)-alquinilo; así como también ésteres, amidas, tos, enantiómeros y profármacos farmacéuticamente aceptable os.

En otras modalidades, la invención está dirigida a com latos de acuerdo con la siguiente fórmula: en donde: X es CHR8 o NR8; ??, Y2 y Y3 son independientemente O, o S; ^/^ y V2 son independientemente O, S, o NZ; Z es H, alquilo sustituido opcionalmente, nalmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo su nalmente, acilo, -C(0)-alquilo, -C(0)-alquenilo, o -C(0)-alquinil , amida, sal, solvato, enantiomero o profármaco farmacéutic able de los mismos; en donde el compuesto es enantioméricamente puro tiómero (S).

En modalidades adicionales, la invención está diri uestos antifolatos de acuerdo con la siguiente fórmula: en donde: X es CHR8 en donde el compuesto es enantioméricamente tiómero (S).

En otras modalidades, la invención está dirigida olatos de acuerdo con la siguiente fórmula: en donde: X es CHR8 o NR8¡ R3 es H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo s nalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, alcoxi s nalmente, hidroxilo, o halógeno; y R , Rs, R6, R7 y Re son independientemente H, alquilo s puestos antifolatos de acuerdo con la fórmula (11): En modalidades específicas, el compuesto antifolato na de una sal cristalina. Por ejemplo, X+ puede representar un tal alcalino, particularmente sodio o potasio. En otras mo feridas, el compuesto antifolato es enantioméricamente puro intiómero (S).

En modalidades específicas, la invención provee un c folato que es una sal cristalina de metal alcalino del ácido (S)-2-{ Tiino-quinazolin-e-i -etill-benzoilaminoJ^-metilen-pentanodioico, eños aproximadamente 95%.

Además, la invención provee el compuesto sal dipotá o (S)-2-{4-[2-(3,4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]benzoilamino}-4-anodioico, en donde el compuesto es cristalino. Preferiblem puesto muestra una pureza, enantiomérica para el enantiómero (S enos aproximadamente 95%.

En otro aspecto, la presente invención provee métod arar compuestos antifolatos como los que se describen arri as modalidades, el método generalmente comprende el método t i esquema de reacción I que se da más abajo. Particularmente, el e comprender los siguientes pasos: 1) Proveer un reactivo inicial que comprende una por ilo con uno o más sustituyentes susceptibles de ser ciclizad ar un heterociclo aromático fusionado 2,4-disustituido que geno, y un sitio de adición para una reacción de acoplamiento; 4) Hacer reaccionar el compuesto del paso 3) con un re mato sustituido con metileno que además está sustituido opcion 5) Opcionalmente hacer reaccionar el compuesto del pas tivos adecuados para alterar el estado del residuo de glutam plo para formar un ácido o una sal.

En algunas modalidades, el método de la invención prender un paso para formar un compuesto intermediario que ti a enantiomérica deseada. Por ejemplo, en una modalidad, el iprende el paso de hacer reaccionar el ácido 4-[2-(2,4-diamino-qui -etil]-benzoico con clorhidrato del éster dimetílico del ácido (S)-2-len-pentanodioico, para formar un intermediario de éster dimet o (S)-2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-anodioico.

En modalidades adicionales, el método puede comprend zoilam¡no}-4-met¡len-pentariodioico. El compuesto antifolato es > alina que es enantioméricamente pura para el enantiómero (S).

En una modalidad específica, la invención provee otro preparar un compuesto antifolato. Particularmente, el compuest a de una sal cristalina que es enantioméricamente pura ntiómero (S). De acuerdo con esta modalidad, el método compr er reaccionar ácido 6-nitro-/r?-toluico con trietilamina y cloroformiat lo para formar un producto de reacción; (b) hacer reaccionar el paso (a) con POCI3 para formar un segundo producto de reac er reaccionar el producto del paso (b) con 4-metoxicarbonilbenz formar un tercer producto de reacción; (d) hacer reaccionar el paso (c) con hidrógeno en presencia de un catalizador para fo rto producto de reacción; (e) hacer reaccionar el producto del pas hidrato de cloroformamidina para formar un quinto producto de r íacer reaccionar el producto de reacción del paso (e) con ácido cl X en donde X+ es un catión de metal alcalino, y el compue orma de una sal cristalina que es enantioméricamente pura tiómero (S).

En otras modalidades, el método de preparación puestos antifolatos de acuerdo con la invención incluye la prepara nos compuestos intermediarios. La preparación de tales interm ie proveer beneficios múltiples. Por ejemplo, la formaci mediano puede ser útil como un paso de purificación para a ucto de reacción y eliminar cualquier impureza no aislada con el p reacción. Esto es particularmente posible cuando el co ompuesto cristalino estable. Tales formas cristalinas son particul ces de mostrar una estabilidad prolongada en almacenamiento.

En una modalidad, el método de la invención comprende ormar un compuesto intermediario cristalino estable haciendo re o (S)-2-{4-[2-(2l4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-tanodioico con un contraion orgánico adecuado, tal como (R)-il)etilamina o una porción de ácido glutámico.

En otras modalidades, la presente invención está di posiciones farmacéuticas. En una modalidad, la invención pro posición farmacéutica que comprende un compuesto antifo rdo con la siguiente fórmula: Ri y R2 son independientemente H, alquilo s onalmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo s onalmente, o alcarilo; R3 es H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo s onalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, alcoxi s nalmente, hidroxilo, o halógeno; y R4, R5, R6, R7 y Re son independientemente H, alquilo s nalmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo s onalmente, acilo, -C(0)-alquilo, -C(0)-alquenilo, o -C(0)-alquinil r, amida, sal, solvato, enantiómero o profármaco farmacéuti table del mismo. Preferiblemente, el compuesto es enantioméri para el enantiómero (S). Las composiciones comprenden riblemente, un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otras modalidades, la invención provee méto imiento. En particular, la invención puede estar dirigida a un mé en donde: X es CHR8 o NR8; Yi. Y2 y Y3 son independientemente O, o S¡ \ y V2 son independientemente O, Sf o NZ; Z es H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo nalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, o alcarilo; R1 y R2 son independientemente H, alquilo analmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo analmente, o alcarilo; para el enantiómero (S). Los métodos se pueden efectuar con S compuestos de acuerdo con la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Habiendo descrito así la invención en términos gener nuación se hará referencia a los dibujos anexos, que no necesari dibujados a escala, y en donde: La figura 1 es una gráfica del patrón de difracción de ray de un compuesto de sal de acuerdo con una modalidad de la inv DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A continuación se describirá la invención más detallad ndo referencia a varias modalidades. Estas modalidades se pro La presente invención provee métodos de prepara puestos antifolatos. Los compuestos antifolatos son particularmen mposiciones farmacéuticas. En modalidades preferidas, los com olatos se preparan en forma de sales, particularmente sales d lino. Los métodos de la invención proveen compuestos antifol as que muestran actividad y biodisponibilidad incrementadas y s en el tratamiento de varias condiciones y enfermedades, partícul el tratamiento de proliferación celular anormal, inflamación, a.

I. Definiciones El término "antifolato metabólicamente inerte", como se u ifica compuestos que son (i) análogos del ácido fótico cap rumpir el metabolismo del folato, y (ii) no poliglutamilables. En alidades, el término también puede significar compuestos que so iculares, el alquilo se refiere a grupos que comprenden de 1 a 1 carbono ("alquilo de CMO"). En modalidades adicionales, el al re a grupos que comprenden de 1 a 8 átomos de carbono ("alquil de 1 a 6 átomos de carbono ("alquilo *de Ci_6w), o de 1 a 4 át ono ("alquilo de CW). En modalidades específicas, el alquilo se ilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, ci hexilmetilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo y 2,3-dimetilbutilo. ituido se refiere a alquilo sustituido con una o más p iccionadas del conjunto que consiste en halógeno (por ejemplo, C ilquilo halogenado (por ejemplo, CF3, 2-Br-etilo, CH2F, CH2CI, C CF3); hidroxilo; amino; carboxilato; carboxamido; alquilamino; a >xi; ariloxi; nitro; azido; ciano; tio; ácido sulfónico; sulfato; ácido f ato; y fosfonato.

El término "alquenilo", como se usa aquí, significa p tenilo, 4-pentenilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4-hexen enilo. Alquenilo sustituido se refiere alquenilo sustituido con un ciones seleccionadas del conjunto que consiste en halógeno (por F, Br y I); alquilo halogenado (por ejemplo, CF3, 2-Br-etilo, CH2 2CF3, o CF2CF3); hidroxilo; amino; carboxilato; carboxamido; alq mino; alcoxi; ariloxi; nitro; azido; ciano; tío; ácido sulfónico; sulfa ónico; fosfato; y fosfonato.

El término "alquinilo", como se usa aquí, significa p uilo en donde por lo menos un enlace C-C saturado está reempla enlace triple. En modalidades particulares, el alquinilo se refiere i comprenden de 1 a 10 átomos de carbono ("alquinilo de C dalidades adicionales, el alquinilo se refiere a grupos que compren átomos de carbono ("alquinilo de CW), de 1 a 6 átomos de quinilo de Ci_6"), o de 1 a 4 átomos de carbono ("alquinilo de jalidades específicas, el alquinilo puede ser etinilo, 1-propinilo, 2- El término "alcoxi", como se usa aquí, significa grupos al ena recta o ramificada enlazados por un átomo de oxígeno (esto ilo), en donde el alquilo es como se describe arriba. En mod iculares, alcoxi se refiere a grupos enlazados por oxíge prenden de 1 a 10 átomos de carbono ("alcoxi de CMO"). En mod onales, el alcoxi se refiere a grupos enlazados por oxíge prenden de 1 a 8 átomos de carbono ("alcoxi de C-i-e"), de 1 a 6 át ono ("alcoxi de C^")t o de 1 a 4 átomos de carbono ("alcoxi d )xi sustituido se refiere a alcoxi sustituido con una o más p iccionadas del conjunto que consiste en halógeno (por ejemplo, Cl ilquilo halogenado (por ejemplo, CF3l 2-Br-etilo, CH2F, CH2CI, C CF3); hidroxilo; amino; carboxilato; carboxamido; alquilamino; a xi; ariloxi; nitro; azido; ciano; tio; ácido sulfónico; sulfato; ácido f ato; y fosfonato.

El término "halo" o "halógeno", como se usa aquí, signifi o, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico„fosfato, o fosfonato.

Los términos "aralquilo" y "arilalquilo", como se us ifican un grupo arilo como se define arriba, enlazado a la molé io de un grupo alquilo como se define arriba.

Los términos "alcarilo" y "alquilarilo", como se us ifican un grupo alquilo como se define arriba, enlazado a la mol io de un grupo arilo como se define arriba.

El término "acilo", como se usa aquí, significa un éster oxilico en donde la porción no carbonilo del grupo éster se selec ilo recto, ramificado o cíclico, o alquilo inferior; alcoxialquilo oximetilo; aralquilo incluso bencilo; aríloxialquilo como fenoxime so fenilo sustituido opcionalmente con halógeno, alquilo de C C6 C6; ésteres de sulfonato tales como alquil- o aralquil-sulfonilo anosulfonilo; éster de mono-, di- o trifosfato; tritilo o monomet cilo sustituido; trialquilsililo como dimetil-t-butilsililo o difenilmetilsi ectivamente.

El término "análogo", como se usa aquí, significa un cor el que uno o más átomos individuales o grupos funcionales h plazados con un átomo diferente o un grupo funcional d uciendo generalmente un compuesto con propiedades similares.

El término "derivado", como se usa aquí, significa un cor se forma de un compuesto inicial similar uniendo otra molécula o puesto inicial. Además, los derivados de acuerdo con la i rcan uno o más compuestos formados de un compuesto p iante la adición de uno o más átomos o moléculas, o med binación de dos o más compuestos precursores.

El término "profármaco", como se usa aquí, significa c ípuesto que, cuando se administra a un mamífero, es convertido Imente en un compuesto de la invención.

El término "metabolito activo", como se usa aquí, sig ritos en la presente especificación.

El término "vehículo farmacéuticamente aceptable", com , significa un vehículo usado convencionalmente en la técni itar el almacenamiento, administración o efecto curativo de un gicamente activo.

El término "administración intermitente", como se us ifica la administración de una dosis terapéuticamente efectiva posición de acuerdo con la invención, seguida por un peri ontinuación, que entonces va seguido por otra administración s terapéuticamente efectiva, y así sucesivamente.

El término "agente antiproliferativo", como se usa aquí, ompuesto que reduce la hiperproliferación de las células.

El término "proliferación celular anormal", como se U ifica una enfermedad o condición caracterizada por el crecim iplicación inadecuada de uno o más tipos de células, con res El término "tumor", como se usa aquí, significa un rmal de células dentro de un organismo multicelular, que resulta siva división celular descontrolada y progresiva, también plasma. Un tumor puede ser benigno o maligno.

El término "trastornos fibróticos", como se usa aquí, sis y otras complicaciones médicas de la fibrosis que se originan tmente de la proliferación de fibroblastos.

Se entiende que la nomenclatura química que usa los y "L" o "R" y S" se refiere a la configuración absoluta o dis mensional de los átomos o grupos alrededor de un elemento qu de ser un centro, usualmente un átomo, un eje, o un plano. Com í, el sistema "D/L" y los sistemas "R/S" se usan intercambiablem anera que "D" en el primer sistema corresponde a "R" en el ma, y "L" en el primer sistema corresponde a "S" en el segundo si céuticas útiles para el tratamiento de enfermedades y con onadas con, o susceptibles de ser tratadas por, la interrupc c : bolismo del folato u otros mecanismos biológicos relacionados bolismo del folato. Los compuestos de la invención se pueden d cuerdo con varias fórmulas específicas, que se describen aba ularmente.

En una modalidad, la invención comprende com latos que se pueden preparar de acuerdo con uno o más de los íntesis aquí descritos. En particular, los compuestos pueden in ienen la estructura provista más abajo en la fórmula (6): nalmente, o aicarilo; R3 es H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo S nalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, alcoxi S nalmente, hidroxilo, o halógeno; y R , R5, R6, 7 y e son independientemente H, alquilo su nalmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo S nalmente, acilo, -C(0)-alquilo, -C(0)-alquenilo, o -C(0)-alquin también ésteres, amidas, sales, solvatos, enantiómeros o profá céuticamente aceptables de los mismos.

En otra modalidad, la invención comprende compuestos en preparar de acuerdo con los métodos aquí descritos y que ti ctura provista en la fórmula (7): nalmente, alquenilo sustituido opcionalmente, alquinilo s nalmente, acilo, -C(0)-alquilo, -C(O)-alquenik), o -C(0)-alquin también ésteres, amidas, sales, solvatos, enantiómeros o profá acéuticamente aceptables de los mismos.

En otra modalidad, la invención comprende compuestos en preparar de acuerdo con los métodos aquí descritos y que ti ctura provista en la fórmula (8): en donde: X es CHR8 o NR8; ??. Y2, y Y3 son independientemente O, o S: nalmente, hidroxilo, o halógeno; y R8 es H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo S nalmente, alquinilo sustituido opcionalmente, acilo, -C(O)-alquik), nilo, o -C(0)-alquinilo; así como también ésteres, amidas, tos, enantiómeros o profármacos farmacéuticamente aceptables os.

De aquí en adelante, para facilitar la comprensión al l nte invención se describe particularmente haciendo referencia a lidades específicas, tales como algunos compuestos cristalinos, al o enantiómeros específicos de un compuesto específico, tal uesto de fórmula (9) que se da más abajo. La descripció ción con respecto al compuesto de fórmula (9), o formas cri s de sal o enantiómeros específicos del mismo, no se debe co tiva del alcance de la invención. Mas bien, la invención abarca liñas, formas de sal o enantiómeros de varios compuestos esp Se ha mostrado que el compuesto de fórmula (9) tiene ra la proliferación celular anormal, trastornos de inflam rmedades autoinmunes. Este compuesto puede ser partícul cido con el nombre de ácido 2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-£oilamino}-4-metilen-pentanodioico. El compuesto también pu )cido como gamma-metilen-glutamato-5,8, 1 O-tridesaza-aminopt jidesaza MDAM. El compuesto antifolato de fórmula (9) llutamilable ni hidroxilable, y es capaz de interrumpir el metaboli o. El compuesto también muestra eficacia para matar gran can as de leucemia humanas y células de tumor sólido humano en ría su uso en la presente invención. Tal actividad se puede do los métodos de análisis y bioensayos estándares reconocido rtos en la materia como generalmente útiles para identific idad.

De acuerdo con una modalidad de la invención, las v jicamente activas adecuadas comprenden uno o más aná ados de los compuestos arriba descritos. En realidad, puesto, como los descritos arriba, puede producir una familia e ogos o derivados que tienen actividad similar y por lo tanto la uti rdo con la presente invención. Similarmente, un solo compues escritos arriba puede representar un solo miembro de una familia mayor de compuestos útiles de acuerdo con la presente invenci iguiente la presente invención abarca completamente no puestos arriba descritos, sino también los análogos y derivados d puestos, particularmente los identificables por métodos c ionar materiales iniciales enantioméricos, o separando los isóm compuestos de la presente invención. Los isómeros puede eros geométricos. Los ejemplos de isómeros geométricos inclu ación, isómeros cis o isómeros trans por un enlace doble. Se con isómeros entre los compuestos preparados de acuerdo con la nción.

El compuesto de fórmula (9), en particular, es un co l; el centro quiral está indicado con un asterisco. Por consigui puesto antifolato de fórmula (9) puede existir como dos enant rados -el enantiómero (R) o el enantiómero (S). Típicam puesto antifolato de fórmula (9) existe como una mezcla racémic enantiómeros.

Se conocen varios métodos para preparar las amente activas y determinar su actividad. Tales métodos incl ibas estándares aquí descritas y otros pruebas similares muy co (i¡) Cristalización simultánea mediante la cual los enant iduales se cristalizan separadamente de una solución del ra ble solo si este último es un conglomerado en estado sólido; (iii) Resoluciones enzimáticas mediante las cual ración parcial o completa de un racemato en virtud de las di cidades de reacción de los enantiómeros con una enzima; (iv) Síntesis enzimática asimétrica, una técnica mediant lo menos un paso de la síntesis utiliza una reacción enzimáti ner un precursor sintético enantioméricamente puro o enrique tiómero deseado; (v) Síntesis química asimétrica mediante la cual el ena ado se sintetiza de un precursor aquiral bajo condiciones que p etría (esto es, quiralidad) en el producto, que se puede lograr lizadores quirales o auxiliares quirales; (vi) Separaciones de diasterómeros, mediante las cu ucir un predominio en solución del diasterómero a partir del ena ado, o en donde la cristalización preferente del diasterómero a tiómero deseado perturba el equilibrio de tal manera que finalm cia, todo el material se convierte en el diasterómero cristalino a ntiómero deseado. El enantiómero deseado se libera entonce terómeros¡ (viii) Resoluciones cinéticas que comprenden la re ial o completa de un racemato (o una resolución adicional puesto parcialmente resuelto), en virtud de velocidades de ¡guales de los enantiómeros con un reactivo o catalizador q ímico bajo condiciones cinéticas; (ix) Síntesis enantioespecífica de precursores no ra liante la cual se obtiene el enantiómero deseado partiendo de m ales no quirales y en donde la integridad estereoquímica n prometida durante la síntesis, o solo mínimamente; acciones en la fase gaseosa móvil con una columna que confi adsorbente fija quiral no racémica; (xii) Extracción con disolventes quirales, mediante la tiómeros se separan en virtud de la disolución preferente tiómero en un disolvente quiral particular; y (xiii) Transporte a través de membranas quirales, med un racemato se pone en contacto con una barrera de membrana amente, la barrera separa dos fluidos miscibles, uno conteni mato, y una fuerza impulsora tal como diferencias de concent ión ocasiona el transporte preferente a través de la barrera de me eparación ocurre como resultado de la naturaleza quiral no racémi brana que permite el paso de solo un enantiómero del racemato.

En modalidades particulares, los métodos de la in een preferiblemente la formación de compuestos antifolatos e isoméricamente enriquecida, tal como una mezcla de enantióm osible la determinación directa de las cantidades de cada enan ente en la mezcla (por ejemplo, como % en peso) por m ctroscopía de RMN y cromatografía en columna quiral.

Los compuestos quirales típicamente se preparan co cla racémica de los enantiómeros (R) y (S). En una modali enté invención comprende un método de preparación del co (S)-2-{4 2-(2,4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-anodioico, que se muestra en la fórmula (10). El compuesto de es el enantiómero (S) del compuesto mostrado en la fórmula ( ajoso tener un método para preparar selectivamente el enantióm to que este puede ser particularmente útil en las compo acéuticas en vista de su mayor actividad en comparación tiómero (R). tiómero especificado. En modalidades preferidas, los método ción proveen compuestos antifolatos que tiene una pureza enanti el enantiómero (S) de por lo menos aproximadamente 75%. E ras, por lo menos aproximadamente 75% del compuesto a do mediante el método está en la forma (S). En moda nales, los métodos de la invención proveen compuestos antifolat una pureza enantiomérica para el enantiómero (S) de por lo imadamente 80%, por lo menos aproximadamente 85%, por lo imadamente 90%, por lo menos aproximadamente 95%, por lo imadamente 96%, por lo menos aproximadamente 97%, por lo imadamente 98%, por lo menos aproximadamente 99%, por lo imadamente 99.5%, por lo menos aproximadamente 99.6%, s aproximadamente 997%, o por lo menos aproximadamente 99.

Los compuestos aquí descritos para usarse e osiciones farmacéuticas de la invención, en algunas modal Los ejemplos de las sales farmacéuticamente aceptable puestos útiles de acuerdo con la invención incluyen las sales de cido. Sin embargo, las sales de ácidos farmacéuticamente no ac en ser útiles, por ejemplo, en la preparación y purificación puestos. Las sales de adición de ácido adecuadas de acuerd ente invención incluyen las de ácidos orgánicos e inorgánicos. L ridas incluyen las formadas del ácido clorhídrico, bromhidrico, s rico, cítrico, tartárico, láctico, pirúvico, acético, succínico, f ico, oxaloacético, metanosulfónico, etanosulfónico, p-toluenos enosulfónico e isetiónico. Otras sales de adición de ácido útiles i del ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido málic >nico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido s tera. Los ejemplos particulares de sales farmacéuticamente ac yen, sin limitación, sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bi itos, fosfatos monoácidos, fosfatos diácidos, metafosfatos, pirof delatos. Una sal de adición de ácido puede ser reconvertida en por tratamiento con una base adecuada.

Si un compuesto de la invención es un ácido, la sal dés e preparar mediante cualquier método adecuado conocido, in miento del ácido libre con una base orgánica o inorgánica tal c a (primaria, secundaria o terciaria), un hidróxido de metal al linotérreo, o similar. Ejemplos ilustrativos de las sales adecuadas i sales orgánicas derivadas de aminoácidos como glicina y miaco, aminas primarias, secundarias y terciarias, y aminas cíclic ridina, morfolina y piperazina, y sales inorgánicas derivadas d ¡o, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y li Si un compuesto útil de acuerdo con la invención es una deseada se puede preparar mediante cualquier método a )cido, incluso el tratamiento de la base libre con un ácido inorgá ? ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítric Los ésteres de los compuestos de acuerdo con la nción se pueden preparar mediante la modificación de los grupos arboxilo que pueden estar presentes en la estructura molec puesto. También se pueden preparar amidas y profármacos us icas conocidas para los expertos en la materia. Por ejemplo, se arar amidas partiendo de ésteres usando los reactivos d cuados, o se pueden preparar partiendo de un anhídrido o cloruro reacción con amoniaco o una alquilamina inferior. Además, se sr ésteres y amidas de los compuestos de la invención por reac igente de carbonilación (por ejemplo, formiato de etilo, anhídrido jro de metoxiacetilo, cloruro de benzoilo, isocianato de )formiato de etilo, cloruro de metanosulfonilo), y una base adecu íplo, 4-dimetilaminopiridina, piridina, trietilamina, carbonato de pot disolvente orgánico adecuado (por ejemplo, tetrahidrofurano, mol, piridina, ?,?-dimetilformamida), a una temperatura de 0 °C ración de sales de los compuestos antifolatos anteriormente d odalidades preferidas, la invención provee un método de prepar sal del compuesto de acuerdo con la fórmula (9). Por consiguient uede preparar como la forma racémica del compuesto, como la fo tioméricamente pura del compuesto, o como la for tioméricamente pura del compuesto. De esta manera, la fórm ee compuestos que son particularmente preferidos de acuerdo co alidades de la invención. x+ En la fórmula (11 ), el asterisco identifica un átomo q ie ser cualquier contraion adecuado formador de sal, y cada X+ pu I o diferente. En modalidades específicas, X+ es un metal alcali rificación, pueden ser particularmente útiles en las compo céuticas en vista de sus propiedades fisicoquímicas favorables.

Los compuestos antifolatos que están en forma de ular una sal disódica o una sal dipotásica, y que tioméricamente puros para el enantiómero (S), pued ularmente útiles en composiciones farmacéuticas. Por consigui mente útil tener métodos de preparación de compuestos antifola en una forma de sal enantioméricamente pura. Por ejemplo, lidad, la invención está dirigida a una sal disódica o una sal di ácido 2-{4-[2-(2,4-diamino-quina2olin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-r nodioico que está enantioméricamente pura para el enantiómero manera, la invención también abarca un método de preparació uesto de acuerdo con la fórmula (12) en donde X+ es sodio o na modalidad, la invención abarca una sal disódica del ácido (S)- iamino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-metilen-pentanodioic Los compuestos farmacéuticamente activos usados posiciones farmacéuticas pueden existir en diferentes forma ipio, los compuestos pueden existir en formas cristalinas es aestables y en formas isotrópicas y amorfas. La presente i ee métodos que abarcan la preparación de todas estas formas.

Las formas cristalinas y amorfas de los compuesto ción se pueden caracterizar por su patrón único de difracción de polvo (esto es, los picos de separación interplanar expres stroms) del material. El equipo útil para medir dichos datos es c ejemplo, un difractómetro de rayos X XRD-6000 de Shimadzu; puesto de acuerdo con la fórmula (12) en una forma cristalina e onde el compuesto tiene una pureza enantiomérica para el ena omo la que aquí se describe.

En una modalidad de la invención, un compuesto a de ser una sal disódica caracterizada por los siguientes picos apro "separación d" (esto es, picos de separación interplanar a cción de rayos X, en forma polvo: 4.8750, 7.3490, 8.1221 , 701 , 12.4449, 14.5270, 16.0326, 17.1551 , 20.6738, 21.1909, 306, 23.2841 , 23.9665, 24.4918, 28.3375, 29.1428, 30.8958, 960, 34.5226 y 35.4153. El patrón de difracción de rayos X en po forma de !a sal disódica se ilustra en la figura 1 (que se describe lie en el ejemplo 1 más abajo).

Las composiciones farmacéuticas de la presente in bién incluyen profármacos y metabolitos activos de los com sforilación, para producir un compuesto activo. En moda * ridas, los compuestos de esta invención tienen actividad antiproli a las células que proliferan anormalmente, o son metabo ando un compuesto que presenta tal actividad.

Se conocen varios ligandos de profármaco. En gen ación, acilación u otra modificación lipofílica de uno o más hetero ompuesto, tal como un residuo de amina o ácido carboxílico libre, laridad y permite el paso hacia las células. Los ejemplos de uyentes que pueden reemplazar uno o más átomos de hidrógen rción de amina o ácido carboxílico libre incluyen, sin limitaci ntes: arilo; esteroides; carbohidratos (incluso azúcares) glicerol; alcoholes; acilo (incluso acilo inferior); alquilo (incluso or); éster sulfonato (incluso alquil o arilalquil-sulfonilo, tal nosulfonilo y bencilo en donde el grupo fenilo está su III. Métodos de síntesis Se describen varios procedimientos para sintetizar com latos en la patente de EE. UU. No. 4,996,207; la patente de EE. 0, 128; Abraham et al. (1991) J. Med Chem. 34:222-227; y Roso 1991) J. Med. Chem. 34:203-208; todas las cuales se incorpor referencia. La presente invención provee un método de síntesis cularmente útil para la preparación de antifolatos que están en un al farmacéuticamente útil, o que están en una forma enantioméric , o que están en una forma cristalina farmacéuticamente estab as modalidades, el método de la invención incluye los siguientes 1) Proveer un reactivo inicial que comprende una por ¡lo con uno o más sustituyentes susceptibles de ser ciclizad ar un heterociclo aromático fusionado 2,4-disustituido que geno, y un sitio de adición para una reacción de acoplamiento; mato sustituido con metileno que además está sustituido opcion 5) Opcionalmente hacer reaccionar el compuesto del pas tivos adecuados para alterar el estado del residuo de glutam plo para formar un ácido o una sal.

El método de síntesis de acuerdo con la m hórmente descrita se puede describir en general de acuerdo ema de reacción provisto a continuación.

ESQUEMA DE REACCION I Fórmula (8) En el esquema de reacción I, RG y CG indican un grupo grupo reactivo protegido temporalmente, y X, Y f Y2, Y3, Vi, V2, on como se define arriba. En una modalidad particular, CG es es -OH, -CN, -N02l o -NH2, y el paso de ciclización se efectúa activo que contiene una amina, tal como clorhidrato de cloroforma En modalidades específicas, la naturaleza general del e acción I se puede particularizar para llegar a los compuestos an eíficos que se describen arriba. Por ejemplo, en el esquema de paso 4) se puede alterar para llegar a un compuesto antifolato q Como se observa en la reacción anterior, el carbono quir ón de glutamato sustituido con metileno está en la forma (S) óptic Similarmente, el compuesto formado retiene esta estereoqu ién está en la forma (S) enantioméricamente pura. Convenient estereoquímica se puede conservar a través de reacciones ulterio La reacción que se muestra arriba es particularmente rar compuestos que tienen una estereoquímica deseada, iguiente, el método de la invención puede ser un proceso indepe la preparación de compuestos antifolatos enantioméricamente pu manera, en algunas modalidades, la invención puede com En la reacción anterior, el ácido 4-[2-(2,4-diamino-quin il]-benzoico se hace reaccionar con clorhidrato del éster dimetí (S)-2-amino-4-metilen-pentanodioico para formar el éster dimet (S)-2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]benzoilamino}-4-anodioico. Este compuesto puede ser sometido a reacciones ul ejemplo para formar el ácido dioico correspondiente (por iante reacción con una base en un disolvente adecuado, t onitrilo). Este sería particularmente útil en la formación del comp ula (10).

El esquema de reacción I también se puede particulariza tra modalidad se puede agregar hidróxido de potasio para form ásica. El compuesto de sai se puede precipitar entonces medi os convencionales. Esta formación de la sal doble se ilustra a e X+ es como se define arriba.

Fórmula (9) Fórmula (11) Esta reacción también se puede efectuar sobre un compu rmula (10)( que es la forma enantioméricamente pura del ácido reacción produciría una sal de acuerdo con la fórmula (12).

De esta manera, es evidente que en modalidades adic odalidades específicas anteriormente indicadas del esquema de r pueden combinar para formar sales de compuestos antifolat uestos intermediarios es útil para aumentar la pureza del pr ndo el compuesto deseado de cualquier impureza de reacción intr S pasos iniciales del proceso.

Por consiguiente, en algunas modalidades, el métod ción está dirigido a un método de preparación de un co ediano útil en la producción de compuestos anti cularmente, el método puede comprender proveer un het ático fusionado 2,4-disustituido que contiene nitrógeno, acoplado ón de bencilo que está p-sustituido con una porción de gl tuido con metileno (que opcionalmente también está sustituida), ionar el compuesto con un contraion orgánico adecuado. El p ión de formación del compuesto intermediario se ilustra más a e X, ??, Y2, Y3, Vi, V2, R1, R2 y R3 son como se define arriba.

Contraion RiVi En modalidades especificas, el contraion orgánico usa aración del compuesto intermediario puede ser una porción l, ramificada o cíclica, sustituida opcionalmente, que tiene de os de carbono. En una modalidad particular, el contraion orgáni aftil)etilamina. En otra modalidad, el contraion orgánico es una po o glutámico. Además, el contraion orgánico puede eoquímica específica. Por ejemplo, en una modalidad espe raion orgánico puede ser (f?)-(+)-1 -(2-naftil)etilamina. Para f ración, más abajo se muestra una reacción particular en donde (+)-1-(2-naftil)etilamina para formar el compuesto intermediario ( aftil)etilamina del ácido (S)-2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-zoilamino}-4-metilen-pentanodioico. Desde luego, la reacción abajo se puede alterar usando un contraion orgánico diferente, t porción de ácido glutámico. Además, el compuesto inicial en la la reacción descrita arriba en general, opcionalmente se puede uso posterior o se puede someter a uno o más pasos de puri siguientemente, el compuesto intermediario se puede convertir d ompuesto inicial. Por ejemplo, el compuesto de acuerdo con la se puede convertir de vuelta al compuesto de fórmula (10), por endo una solución del compuesto y ajustando adecuadamente el ipio, agregando un ácido adecuado). Esto se describe más en el e se da más abajo.

Los métodos sintéticos de la invención son particularme preparar compuestos antifolatos para usarse en compo acéuticas. Los compuestos preparados de acuerdo con los mét vención muestran mayor actividad y biodisponibilidad, y por lo t ces de proveer un beneficio terapéutico a dosis totales reducidas.

Los compuestos formados de acuerdo con los métod ora aquí como referencia.

IV. Composiciones farmacéuticas La presente invención provee particularmente compos céuticas que comprenden uno o más compuestos antifolatos co quí se describen, o ésteres, amidas, sales, solvatos, análogos, de fármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Adem osiciones de la invención se pueden preparar y suministrar ad de combinaciones. Por ejemplo, la composición puede com sola composición que contiene todos los ingredientes ativamente, la composición puede comprender múltiples compos comprenden ingredientes activos separados pero destinados istrados simultáneamente, en sucesión, o en tiempos muy cercan Las composiciones farmacéuticas se pueden prepara Las composiciones farmacéuticas de la invención i riblemente un compuesto antifolato en una cantidad terapéutic tiva, como se describe mas abajo. En algunas modalidades, la ompuesto antifolato en las composiciones se basa en el peso tot posición. Por ejemplo, en algunas modalidades, la com acéutica comprende un compuesto antifolato en una canti imadamente 0.01 mg/g a aproximadamente 100 mg/g. En mod ionales, la composición farmacéutica comprende un compuesto a a cantidad de aproximadamente 0.02 mg/g a aproximadamente 8 aproximadamente 0.05 mg/g a aproximadamente 75 m imadamente 0.08 mg/g a aproximadamente 50 mg imadamente 0.01 mg/g a aproximadamente 30 mg imadamente 0.25 mg/g a aproximadamente 25 mg/g, imadamente 0.5 mg/g a aproximadamente 20 mg/g. La cant pre que las composiciones logren la administración de un co o aqui se describe. Véase "Remington's Pharmaceutical Scienc Mack Publishing Company, Eaton, Pensilvania, 1990, que se i í como referencia en su totalidad. Las composiciones farmacéu rdo con la presente invención son adecuadas para varios m inistro, incluso administración oral, parenteral (que incluye intr muscular, subcutánea, intradérmica, intraarticular, intrasinovial, in -arterial, intracardiaca, subcutánea, intraorbital, intracapsular, intr lesternal y transdérmica), tópica (que incluye dérmica, bucal y su nonar, vaginal, uretral y rectal. La administración también puede lio de aerosol nasal, implante quirúrgico, pintura quirúrgica interna nfusión, o mediante catéter, stent, balón u otro dispositivo de su iodo más útil o conveniente de administración puede variar, depe ?cialmente de la condición del receptor y el trastorno trata adyuvante, que puede consistir en uno o mas ingrediente binación de los ingredientes activos con los adyuvantes, uno o entonces físicamente para presentar la composición en una f inistro adecuada (por ejemplo, dándole forma de una tableta ensión acuosa).

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la ción, adecuadas para dosis oral pueden tener varias formas tal ulas, tabletas, capletas y obleas (que incluyen de disolución r escentes), cada una conteniendo una cantidad predetermin te activo. Las composiciones también pueden estar en forma de ulos, solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, y e a (aceite en agua y agua en aceite). Los agentes activos tam en suministrar como un bolo, electuario o pasta. Se oralmente que los métodos de preparación de las formas farma materia. Es de notar que las dosis también variarán con la seve ndición que se quiere aliviar. Además, se entiende que para C to particular, los regímenes de dosificación específicos se debe el tiempo de acuerdo con las necesidades individuales y el sional de la persona que administra o supervisa la administració posiciones, y que las escalas de dosificación aquí indicad ámente ejemplares y no pretenden limitar el alcance o práctic posición reclamada. El ingrediente activo se puede administrar un uede dividir en varias dosis más pequeñas para administrar a in empo variables.

Una cantidad terapéuticamente efectiva de acuerdo nción puede ser determinada basándose en el peso corporal del r ejemplo en una modalidad, una cantidad terapéuticamente efectiv s compuestos de la invención está en la escala de aproximadam o profármaco presenta actividad por sí solo, la dosis efectiva s ar como arriba, usando el peso de la sal o profármaco, o media ios conocidos para los expertos en la materia.

Se contempla que las composiciones de la invenc prenden uno o más compuestos aquí descritos se administr idades terapéuticamente efectivas a un mamífero, preferiblem ano. Una dosis efectiva de un compuesto o composición miento de cualquiera de las condiciones o enfermedades aquí e ser determinada fácilmente usando las técnicas convenci rvando los resultados obtenidos bajo circunstancias análogas, erar que la cantidad efectiva de las composiciones varíe de acuerd 3, sexo, edad e historia médica del sujeto. Desde luego, tambi Dres podrían alterar la cantidad efectiva de la composición que s inistrar, que incluyen, sin limitación, la enfermedad específica impl -1882, que se incorpora aqui como referencia.

V. Combinación de agentes activos Para usarse en el tratamiento de varias enfermed iciones, las composiciones farmacéuticas de la invención puede ompuestos antifolatos anteriormente descritos en varias combin ejemplo, en una modalidad, una composición farmacéutica de la invención puede comprender un solo compuesto antifola rito, tal como el compuesto de acuerdo con la fórmula (12). lidad, una composición farmacéutica de acuerdo con la invenció render dos o más compuestos antifolatos aquí descrito lidades adicionales, una composición farmacéutica de acuerdo ción puede comprender uno o más compuestos antifolat ritos, con uno o más compuestos adicionales conocidos qu ción se pueden administrar con los agentes activos adicionale a composición, con los compuestos antifolatos aquí descrito tes activos adicionales se pueden administrar en una forma de su rada de las composiciones farmacéuticas de la invención.

VI. Artículos de fabricación La presente invención también incluye un artículo de fab provee una composición farmacéutica que comprende uno puestos antifolatos aquí descritos, opcionalmente en combinación s agentes activos adicionales. El artículo de fabricación puede i X u otro recipiente que contiene una composición adecuada para cuerdo con la presente invención, junto con cualquier vehículo, e i o líquida. En particular, el artículo de fabricación puede compre lue incluye un recipiente con una composición de acuerdo provistas en envases de burbujas, bolsas o similares p inistración en combinación.

El artículo de fabricación incluye también instrucciones e na etiqueta sobre el recipiente o en forma de un inserto incluido en la que se envasa el recipiente, para efectuar el métod ción. Las instrucciones también pueden estar impresas en la ca se envasa el frasco. Las instrucciones contienen información tal suficiente e información de administración, a fin de facilitar al suj ÍCO la administración de la composición farmacéutica. Se anticipa ÍCO abarca cualquier doctor, enfermera, profesional técnico, cón encargado de atención de la salud que pueda administrar la comp omposición farmacéutica también puede ser autoadministrada o. abolismo del ácido fólico. En modalidades especificas, la i ee métodos de tratamiento de condiciones tales como proliferació rmal, inflamación (que incluye enfermedad inflamatoria del in tis (particularmente artritis reumatoide), psoriasis y asma.

Parte experimental Ahora se describirá la presente invención haciendo r ecífica a varios ejemplos. Los siguientes ejemplos no se co ativos de la invención y más bien se proveen como mod plares. Como se usa en uno o más de los siguientes ejempl 4" se refiere a un compuesto de fórmula (9), y tal referencia pued más al compuesto como racémico o "D/L", o como un ena ficado (esto es, la forma L o la forma D). "MTX" se refiere a metotr os formados que se sospecha que forman las sales se analiz cción de rayos X en polvo (XRPD).

CUADRO 1 Tipo de Contraion Tipo de Contra contraion contraion idos Sulfúrico Acidos Benzoic inerales carboxílicos Clorhídrico Cítrico idos Bencenosulfónico Fumáric lfónicos 1 ,2-Etanodisulfónico Glicólic Etanosulfónico Maleico Isetiónico DL-Máli Metanosulfónico Oxálico 1 ,5-Naftalenodisulfónico Succíni 2-Naftalenosulfónico DL-Tart Toluenosulfónico Bases Amonio inoácidos L-Arginina Calcio L-Lisina Potasio Sodio o fosfórico, ácido succínico y ácido DL-tartárico. Los patrones d os sólidos obtenidos usando estos ácidos fueron similares al p D del compuesto ácido cristalino de fórmula (9).

De las diversas bases probadas se generaron bases cri do metóxido de calcio. Usando hidróxido de amonio e hidró sio se obtuvieron sólidos que presentan patrones de XRPD de ipalmente amorfo o con picos amplios de baja intensidad. El p D de los sólidos obtenidos de una sal de sodio presentó un ximadamente 5.0 2°?. Los intentos de sal usando L-arginina y ujeron sólidos que presentan patrones de XRPD de ipalmente amorfo o con picos amplios.

Se comparó la higroscopicidad y la solubilidad aproxi ciones acuosas y amortiguadoras de las sales de amonio, besilato to, sulfato, HCI, mesilato, napsilato, potasio, disodio y tosilato. rvación visual y no necesariamente reflejan la solubilidad en el eq lgunas muestras, cuando los sólidos permanecieron, la suspen ó después de 1 y 2 días para determinar la disolución. La sal de ró una solubilidad en agua aproximada de >1 16 mg/ml, y la sal de ró una solubilidad aproximada de > 98 mg/ml. Las sales re raron una solubilidad en agua aproximada de 0.4 mg/ml o menor.

Cuando se probaron en una solución amortiguadora d to 20 mM), las tendencias de la solubilidad fueron similare rvadas en agua. Las sales de disodio y dipotasio mostraron la sol alta (>32 mg/ml y >16 mg/ml, respectivamente). La solubilidad d ilato fue >1.1 mg/ml, y la solubilidad del besilato fue >2.0 mg/ml. ras sales examinadas mostraron solubilidades <0.2 mg/ml.

Basándose en los datos anteriores, las sales de b ilato, potasio y sodio se probaron en estudios de solubilidad adici vo de !os dos sistemas disolventes. La sal dipotásica poco crist puesto de fórmula (11), que se denominó la forma A (K), se ob /IPA. Los sólidos obtenidos de agua/acetona mostraron una crist amente mejorada, pero los sólidos fueron todavía poco cristalinos.

Se hizo un examen abreviado de polimorfismo de la sal compuesto de fórmula (9) y se aislaron y caracterizaron dos alinas (denominadas las formas A y B). También se generó ?? rfa. La forma A de la sal disódica fue un sólido cristalino no higro contenía aproximadamente 4.5 moles de agua por mol de la sal ompuesto de fórmula (11). Como se describe arriba, la forma A dica fue un sólido cristalino obtenido usando un sistema agua/I ma agua/acetona. Un análisis de Karl Fischer confirmó un cont de 14.8% (equivalente a aproximadamente 4.75 moles de agua al disódica). Los estudios de higroscopicidad mostraron que el r\ Fischer mostró 17.5% de agua (aproximadamente 6 moles).

En la figura 1 se ilustra la gráfica del patrón de difrac X en polvo (radiación Cu Ka) de la sal disódica racémica del co rmula (11) -la forma A de la sal disódica de arriba-, mostra idad de señal a 2°?. En el cuadro 2 se proveen los picos de sep lanar de ángulos 2°? específicos, las alturas absolutas de los p ración Dt y las intensidades relativas de los picos, de los diverso dos en la figura 1.

CUADRO 2 Posición (2°?) Altura (Cts) Separación D (A) Intensidad relativa ( 4.8750 449.49 18.10095 16.28 7.3490 472.36 12.01931 17.1 1 8.1221 2314.59 10.87699 83.85 10.5019 1101.18 8.41690 39.89 11.8701 279.44 7.44962 10.12 12.4449 1386.78 7.10681 50.24 EJEMPLO 2 esis de la sal dísódica del ácido (S)-2-f4-r2-(2,4-diamino-quina ¡H-etill-benzoilaminoM-metilen-pentanodioico Paso 1 Se disolvió ácido 6-nitro-m-toluico (173 g, 0.96 I ometario (2.3 L) y se enfrió a 5 °C. Se le agregó trietilamina ( mol) durante 5 minutos, formándose una solución amarilla trans mperatura interna de reacción durante la adición fue < 10 °C. La nfrió a 5 °C y se le agregó cloroformiato de iso-butilo (102 mi, 1. nte 5 minutos, con una temperatura interna de reacción durante la 10 °C. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2. olución se enfrió a -1 °C y se le agregó NH3 líquido (90 g) en p a obtener un pH de aproximadamente 11 ; la mezcla se agitó du Paso 2 Una solución del producto de reacción preparado en el g, 0.93 mol) en dimetilíormamida (1 L) se enfrió a 0 °C. Se le (96 mi, 1.03 mol) durante 20 minutos, con una temperatura te la adición de < 12 °C; la mezcla se agitó 2 horas a 15 °C hast nversión completa. La mezcla de reacción se enfrió a 1 °C y se le (1.4L) durante 30 minutos, formándose una suspensión amarilla-mperatura interna al final de la adición era de 18 °C. Esta solu a 5 °C, se le agregó NH3 acuoso (1.1 Lt 25%) hasta alcanzar u imadamente 10, y la mezcla se agitó 1.5 horas a -5 °C. El sólido vó con agua (1 L) y se secó produciendo un sólido beige (152 g, lido se suspendió en diclorometano (1 L) y se filtró. El filtr entró dando un producto puro como un sólido blanco (114.8 g, miento). A continuación se muestra la reacción general. mi). La mezcla resultante se agitó calentando a reflujo durante acción se enfrió a 25 °C y se le agregó, gota a gota y con agitac cla de AcOH (84 mi) y agua (600 mi). El precipitado se filtró y se acetona (500 mi). El sólido resultante se filtró, se lavó con acet > para producir un producto sólido amarillo (77.1 g, 53% de rendi ntinuación se muestra la reacción general.

Paso 4 El producto de reacción preparado en el paso 3 (220.8 se disolvió en tetrahidrofurano (3.7 L) y se le agregó un cataliza rendía Pd al 10% sobre carbón (2.29 g, 0.02 mol). La atmó Paso 5 Una solución del producto de reacción preparado en el , 0.4 mol) en sulfolano (635 mi), se calentó a 120 °C y se le idrato de cloroformamidina (141 g, 1.23 mol), La mezcla de rea a 140 °C durante 1 hora. Después, la mezcla se enfrió a 40 °C gó agua (1.3 L) y amoniaco acuoso al 25% (280 mi) para alcanza proximadamente 9. El sólido amarillo formado se filtró y se lavó c o el producto crudo (120 g). A continuación se muestra la r ral de ciclización, que resulta en la creación del anillo de qui tuido con amino. mi, 2M), seguido por agua (500 mi), para alcanzar un imadamente 4, El sólido amarillo formado se filtró y se lavó c mi). El sólido se mezcló con acetona (500 mi), se filtró y se secó °C para dar 80 g de producto crudo, ácido 4-[2-(2,4-diamino-quin il]-benzoico (86% de rendimiento). A continuación se muestra la r ral. Nótese que se pueden usar otros ácidos para quitar e ctor de alquilo y producir el ácido carboxílico.

Paso 7 Se mezcló el ácido 4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-6 oico del paso 6 (67 g, 0.22 mol), clorhidrato del éster dimetílico d anodioico (91 g, 86% de rendimiento) no era homogéneo, uestra la reacción general.

Paso 8 El éster dimetílico del ácido (S)-2-{4-[2-(2,4-d¡amino-quin il]-benzoilamino}-4-metilen-pentanodioico (90 g, 0.19 mol) se me (600 mi) y acetonitrilo (600 mi). A la mezcla se le agregó una idróxido de sodio (25 g) en agua (200 mi) a una temperatura de 1 cla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 ho Jucto se precipitó agregando ácido clorhídrico hasta un pH de Paso 9 El ácido (S)-2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin- oilamino}-4-metilen-pentanodioico (aproximadamente 33.5 g) se metanol (300 mi) y la mezcla se calentó en un baño (T = 50 °C). tó a 10, aproximadamente, agregando una solución acuosa de h odio 4M (40 mi). A la mezcla de reacción se le agregó acetona (1 btuvo una solución transparente. Se le agregó más acetona a la acción en dos porciones (150 mi y 300 mi) durante un periodo d precipitar el producto. La mezcla de reacción se enfrió a tem EJEMPLO 3 / Síntesis de un intermediario cristalino estable El ácido (S)-2-{4-[2-(2,4 l¡amino-qu¡nazolin-6 oilamino}-4-metilen-pentanodioico (82 g, 0.18 mol) se mezcló co mi). A la mezcla se le agregó una solución de (R)-(+)-1-(2-naftil)et , 0.21 mol) en tetra h id rotura no (200 mi). La mezcla de reac có por filtración a través de un filtro CELITE®. El producto, (R)-( etilamina del ácido (S)-2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-6 El compuesto de (R)-(+)-1-(2-naftil)etilamina, cristalino y onvirtió de vuelta a la forma del ácido dioico mezclándolo con ag y ajustando el pH a 13, aproximadamente, agregando hidróxido so 4 M. La mezcla de reacción se extrajo con diclorometano ( ase orgánica se desechó y el pH de la fase acuosa se ba ximadamente, agregando ácido clorhídrico. El producto precipi , se lavó con agua (200 mi) y se secó. A continuación se mu ción general.

EJEMPLO 4 Inhibición del transporte de G3?1??? El transporte de 2 µ? de [3H]MTX (metotrexate) a 37° por tactas de leucemia humana CCRF-CE se analizó media ométodo que utiliza lavados repetidos en solución salina helad ver el fármaco extracelular. Tal método se describe en McGuir Cáncer Res 1989;49:4517-25 y McGuire JJ, et ai, Cane ;66:3836-44, ambas incorporadas en la presente como referenci idad. Las pellas celulares lavadas se solubilizaron en 1 mi de Tritó 3% a 37°C durante 1 hora antes de transferir a frascos de escintila gregaron 10 mi de fluido de escintilación Ecoscint (National Diag ta, GA) y se cuantificó la radioactividad en un contador de esci man LS6500. La radiomarca intracelular se analizó por HPL ués de la adición de 25 µ? de [3H]MTX para llegar a una conce de 2 µ?, inmediatamente se tomaron 2 alícuotas (100 µ?) en a helada y se procesaron. Los controles de cada experimento m la incorporación de [3H]MTX en ausencia de análogo fue lineal d bajo estas condiciones; la incorporación de control fue típicament l/107 células/5 min. Los valores de Cl50 se determinaron y se en el cuadro 3.

Se hizo una HPLC analítica en un sistema de HPLC de uments usando el controlador Dynamax y el módulo de captura d a computadora Macintosh, como lo describen McGuire JJ, et al. 1990;265:14073-9, que se incorpora aquí como referencia dad. Se hizo la HPLC de fase inversa en C18 (0.4 X 25 cm; sorb, 5 µ) a 25°C. La detección fue por medio de la absorbancia nm. Para MTX (tr, =31.6 min) y 7-OH-MTX (tr, =35.2 min), el gr CUADRO 3 Compuesto Inhibición del transporte de [3H] TX (CI50) (µ?) Aminopterina 1.5 D-MTX 49 DL-CH-1504 1.7 L-CH-1504 1.1 D-CH-1504 7.6 Como se ilustra en el cuadro 3, la forma enantioméric 1504 (L-CH-1504) fue transportada más eficientement xpresan el portador de folato reducido (RFC) en comp compuestos probados.

EJEMPLO 5 Cultivo celular e inhibición del crecimiento 9-47. Los valores de CE50 (concentración de fármaco efectiva par ecimiento celular en 50%) se interpolaron de gráficas del porce imiento con respecto a un cultivo de control tratado con disolvent garitmo de la concentración del fármaco, haciendo una regresión l os puntos datos en cualquier lado de 50% de crecimiento rel lando la concentración inhibidora que corresponde al 5 ¡miento relativo. Los resultados se dan en el cuadro 4.

CUADRO 4 Compuestos Inhibición del crecimiento (CE50) (nM) MTX 15 DL-CH-1504 8.6 L-CH-1504 6.1 D-CH-1504 29 EJEMPLO 6 Concentración plasmática Se administró CH-1504 racémico a ratas Lewis hemb s, por vía oral a una dosis única de 10 mg/kg (ve ximetilcelulosa 0.11 % /Tween 80 0.45%, forma farma nsión). Se extrajeron aproximadamente 750 µ? de sangre de l ar 1 h y 3 h después de la administración. Seis horas despué istración se extrajo toda la sangre de la vena femoral bajo aneste dietílico. La sangre recolectada se centrifugó inmediatament er una muestra de plasma. Se extrajo L- y D- CH-1504 del plas ción en fase sólida, y luego se cuantificaron por LC/MS/MS. o 5 se muestran las concentraciones plasmáticas de L- y D- CH-1 muestra. Las concentraciones plasmáticas de L- y D- CH-1 CUADRO 5 Tiempo Dosis después de la Concentración plas No. de animal (mg/kg) administración (ng/ml) (h) L-CH-1504 1 10.6 YF01 3 9.82 6 8.53 1 3.16 10 YF02 3 1.77 1.67 1 3.60 YF03 3 5.34 6 10.0 EJEMPLO 7 Concentración plasmática ro 6 se muestran las concentraciones plasmáticas de L- y D- CH- muestra. En todas las muestras no se pudo confirmar la isom H-1504 6 horas después de la administración de cada enan s resultados ilustran nuevamente concentraciones pla ificativamente más altas de la forma L del fármaco.

CUADRO 6 Tiempo Dosis No. de después de la Concentración pla npuesto (mg/kg) animal administración (ng/ml) (h) L-CH-1504 1 118 YF11 3 59.7 6 21.7 T 144 H-1504 10 YF12 3 61.9 6 22.7 T 139 Teniendo el beneficio de las enseñanzas presentada ripción anterior, el experto en la materia a la que pertene ción puede considerar muchas modificaciones y otras modalidad ción aquí expuesta. Por lo tanto, se entiende que la invenció a las modalidades específicas reveladas y que las modificac modalidades se consideran incluidas dentro del alcance dicaciones anexas. Aunque se utilizan aquí términos especifi únicamente en un sentido genérico y descriptivo y no con fi ción.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto antifolato de acuerdo con la siguiente f onde: X es CHR8 o NR8¡ R3 es H, alquilo sustituido opciona nilo sustituido opcionalmente, alquinilo sustituido opcionalmente tuido opcionalmente, hidroxilo, o halógeno; y R4, R5) R6, R7 y endientemente H, alquilo sustituido opcionalmente, alquenilo s ásica. 4. - El compuesto antifolato de conformidad con la reivin racterizado además porque muestra una pureza enantiomérica tiómero (S) de por lo menos aproximadamente 90%. 5. - El compuesto antifolato de conformidad con la reivin racterizado además porque es de acuerdo con la siguiente fórmul onde el compuesto está en forma de una sal cristalina tioméricamente pura para el enantiómero (S), y en donde X+ raion. 10. - El compuesto antifolato de conformidad con la reivin racterizado además porque muestra una pureza enantiomérica tiómero (S) de por lo menos aproximadamente 90%. 11. - El compuesto antifolato de conformidad con la reivin racterizado además porque muestra una pureza enantiomérica tiómero (S) de por lo menos aproximadamente 99%. 12 - El compuesto antifolato de conformidad con la reivin racterizado además porque es una sal cristalina de metal álca (S)-2-{4-[2-(2,4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-anodioico, en donde el compuesto muestra una pureza enanti el enantiómero (S) de por lo menos aproximadamente 95%. 13. - El compuesto antifolato de conformidad con la reivin aracterizado además porque el metal alcalino se selecciona del consiste en sodio, potasio, y combinaciones de los mismos. 17. - El compuesto de conformidad con la reivindica cterizado además porque muestra una pureza enantiomérica ntiómero (S) de por lo menos aproximadamente 95%. 18. - Un método de preparación de un compuesto antif a de una sal cristalina que es enantioméricamente pura tiómero (S), el método comprendiendo: (a) hacer reaccionar ácid luico con trietilamina y cloroformiato de iso-butilo para formar un cuerdo con la siguiente fórmula: hacer reaccionar el producto del paso (a) con POCI3 para fo ucto de acuerdo con la siguiente fórmula: atalizador para formar un producto de acuerdo con la siguiente fór iclizar el producto del paso (d) para formar un producto de acuerd iente fórmula: acer reaccionar el producto del paso (e) con un ácido para fo ucto de acuerdo con la siguiente fórmula: o OH acer reaccionar el producto del paso (g) con una base para for ucto de acuerdo con la siguiente fórmula: cer reaccionar el producto del paso (h) con una base de metal formar el compuesto antifolato de acuerdo con la siguiente fórmul étodo comprendiendo el paso de hacer reaccionar ácido ino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoico con éster dimetilico del ácid no-4-metilen-pentanodioico, preferiblemente en forma de la sal cl formar un intermediario de éster dimetilico de ácido (S)-2-{ ino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-metilen-pentanodioico; cionar el intermediario éster dimetilico del ácido (S)-2-{4-[2-(2,4- azolin-6-il)-etil]-benzoilamino}-4-metilen-pentanodioico con una b iar el ácido (S)-2-{4-[2-(2I4-diamino-quinazolin-6-il)-etil]-benzoil ilen-pentanodioico; y hacer reaccionar el ácido (S)-2-{4-[2-(2,4- - - - - - - - cterizado además porque comprende precipitar la sal agrega Ivente orgánico. 22. - El método de conformidad con la reivindicac cterizado además porque el compuesto antifolato preparado mué za enantiomérica para el enantiómero (S) de por lo imadamente 75%. 23. - El método de conformidad con la reivindicac cterizado además porque el compuesto antifolato preparado mue za enantiomérica para el enantiómero (S) de por lo imadamente 90%. 24. - El método de conformidad con la reivindicac cterizado además porque el compuesto antifolato preparado mue za enantiomérica para el enantiómero (S) de por lo imadamente 99%.