MX2010010256A

MX2010010256A - Cepa de lactobacillus rhamnosus.

Info

Publication number: MX2010010256A
Application number: MX2010010256A
Authority: MX
Inventors: Isabelle Chambaud; Artem Khlebnikov; Anne-Catherine Villain; Gianfranco Grompone; Thierry Saint Denis
Original assignee: Gervais Danone Sa
Priority date: 2008-03-19
Filing date: 2009-03-18
Publication date: 2010-12-06
Also published as: CA2718833A1; KR20110019355A; WO2009122042A3; EP2268792A2; ES2544687T3; RU2549699C2; US20110059058A1; PL2268792T3; CL2009000649A1; AR070984A1; CA2718833C; WO2009122042A2; RU2010142489A; CN102016005A; KR101645741B1; JP2011515085A; FR2928935A1; EP2268792B1; BRPI0909760A2; JP5539953B2

Abstract

La invención se refiere a una cepa novedosa de Lactobacillus rhamnosus que tiene propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras y a composiciones que contienen dicha cepa.

Description

CEPA DE LACTOBACILLUS RHAMNOSUS La presente invención se refiere a una nueva cepa de Lactobacillus rhamnosus que posee propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras.

Numerosos estudios científicos han reportado los efectos benéficos sobre la salud de ciertos microorganismos presentes en los alimentos fermentados, particularmente en los productos lácteos. Estos microorganismos se denominan comúnmente "probióticos". De acuerdo con la definición aceptada generalmente en la actualidad, los probióticos son: «microorganismos vivos que, cuando son consumidos en cantidades adecuadas, poseen un efecto benéfico sobre la salud del anfitrión» (Informe de FAO/OMX sobre la evaluación de las propiedades sanitarias y nutricionales de los probióticos en los alimentos, y comprendida la leche en polvo que contiene bacterias lácticas vivas; Córdoba, Argentina, 1 - 4 de octubre de 2001).

Se ha mostrado que el consumo de productos alimenticios que contienen bacterias probióticas puede producir efectos favorables sobre la salud a través, particularmente, del reequilibrio de la flora intestinal, del mejoramiento de la resistencia a las infecciones y de la modulación de la respuesta inmunitaria.

Los microorganismos probióticos que se utiliza en la alimentación humana son generalmente bacterias lácticas que pertenecen, principalmente, a los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium.

Sin embargo, los efectos benéficos para la salud generalmente no son comunes al conjunto de las bacterias de un m ismo género ni , inclusive, de una m isma especie. No se encuentran, generalmente, más que en alg unas cepas; además, los efectos observados pueden variar cualitativa y/o cuantitativamente de una cepa probiótica a otra , inclusive en el i nterior de una misma especie.

Para que un m icroorganismo se pueda considerar como potencialmente utilizable como probiótico debe satisfacer por lo menos uno, e ideal mente varios, de los sigu ientes criterios: - presentar actividad de inhibición ante los microorgan ismos patógenos que pudieran estar presentes en la flora intestinal , esta activid ad q ue puede ser resultado de, ya sea la capacidad de adherirse a las cél ulas i ntestinales, de ese modo excl uyendo o reduciendo la adherencia de los patógenos, ya sea de la capacidad de producir sustancias que inhiban los patógenos, o ya sea de la com binación de esas dos características; - presentar propiedades i nmunom od uladoras y, en particular, inmunoestim ulantes y/o antiinflamatorias.

Además, si ese microorganismo está destinado a ser incorporado en un producto lácteo, de preferencia debe presentar un crecimiento satisfactorio en la leche.

Por último, debe mantener una buena viabilidad en el transcurso de la producción y de la conservación del alimento al cual se incorpora , así como después de l a i ngestión de ese alimento por el con sumidor, de tal manera que pueda l legar al intestino y sobrevivir en el med io i ntestina l .

No obstante hay que señalar que si bien la viabilidad es esencial para responder a la definición actual de probiótico, se ha demostrado que algunos de los efectos beneficiosos que se asocian con las cepas probióticas también se pueden obtener aun en ausencia de bacterias vivas, y que son atribuibles a algunas fracciones bacterianas o a fracciones activas de sus supervivientes de cultivo. Por ejemplo, la Solicitud PCT WO2004093898 describe una preparación inmunomoduladora obtenida por el fraccionamiento del superviviente de cultivo de la cepa CNCM 1-2219.

Los ¡nvenciónres ahora han conseguido aislar una cepa de Lactobacillus rhamnosus que responde a los criterios indicados anteriormente.

La presente invención tiene como objetivo esta cepa, que ha sido registrada de acuerdo con el Tratado de Budapest, ante la CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes [Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos. -N.T.], 25 rué du Docteur Roux, Paris), el 9 de noviembre de 2006, bajo el número 1-3690.

La cepa posee las siguientes características: - Morfología: pequeños bacilos agazapados a veces en coccoides, aislados o en cadenas cortas.

- Fermentación de los azúcares siguientes (resultados obtenidos en una galería API 50 CH - Medio MRS API a 37°C durante 48h): ribosa, galactosa, D-glucosa, D-fructosa, D-manosa, L-sorbosa, ramnosa, manitol, sorbitol, Metil-D glucósido, N-acetilglucosamina, arbutina, esculina, salicina, maltosa, lactosa, trehalosa, melezitosa, beta gentiobiosa, D-turanosa, D-tagatosa, gluconato.

Por otra parte, posee propiedades antimicrobianas, las que se traducen en una fuerte capacidad para inhibir el crecimiento, en cultivo, de microorganismos patógenos.

Presenta, además, propiedades de adhesión a la mañosa. Se sabe que los gliconjugados ricos en mañosa, presentes en la superficie de las células epiteliales intestinales, desempeñan un papel en la fijación de las bacterias patógenas tales como las Escherichia coli enterotóxicas, las salmonelas, las Vibrio cholerae o Pseudomonas aeruginosa, y se ha informado que las propiedades de adhesión a la mañosa de algunas bacterias probióticas les permite entrar en competencia con esos patógenos e inhibir su adhesión a la mucosa intestinal, de este modo otorgándoles propiedades antiinfecciosas (Michail y Abernathy, Pediatr. Gastroenterol. Nutr., 35, 350-355 2002; Mangell et al., Dig Dis Sci., 47, 511-506, 2002). Sin embargo, estas propiedades había sido observadas, principalmente, en bacterias de la especie Lactobacillus plantarum (en particular, en la cepa L. plantarum 229v, que se describe en la Solicitud EP0817640, y en la cepa L. plantarum WCFS1), pero no en las bacterias de la especie Lactobacillus rhamnosus.

Asimismo, la cepa CNCM I-3690 tiene propiedades inmunomoduladoras y, en particular, antiinflamatorias.

La presente invención también comprende, como objetivo, las cepas de Lactobacillus rhamnosus susceptibles de obtenerse por mutagénesis o por transformación genética de la cepa CNCM I-3690. De preferencia, esas cepas conservan, por lo menos, las propiedades antimicrobianas o las propiedades inmunomoduladoras de la cepa CNCM 1-3690. Se puede tratar de cepas en las cuales uno o varios genes endógenos de la cepa CNCM 1-3690 ha(n) sido mutado(s) a manera de modificar, por ejemplo, algunas de sus propiedades metabólicas (por ejemplo, la capacidad de esta cepa para metabolizar los azúcares, su resistencia al tránsito intestinal, su resistencia a la acidez, su postacidificación o su producción de metabolitos). Asimismo, se puede tratar de cepas resultan de la transformación genética de la cepa CNCM 1-3690 por uno o varios genes de interés, que permiten, por ejemplo, conferir a dicha cepa características fisiológicas suplementarias o expresar las proteínas de interés terapéutico o vaccíneo que se desea administrar por medio de dicha cepa.

Estas cepas se pueden obtener a partir de la cepa CNCM 1-3690, mediante las técnicas clásicas de mutagénesis aleatoria o dirigida y de la transformación genética de lactobacilos, tales como los descritos, por ejemplo, por Gury et al., (Arch Microbiol., 182, 337-45, 2004) o Vélez et al., (Appl Environ Microbiol., 73, 3595-3604, 2007), o mediante la técnica denominada "genome shuffling" (Patnaik et al., Nat Biotechnol, 20, 707-12, 2002; Wang Y. et al., J Biotechnol., 129, 510-15, 2007).

La presente invención también tiene, como objetivo, las fracciones celulares que se puede obtener a partir de una cepa de Lactobacillus rhamnosus de acuerdo con la invención. Se trata, en particular, de preparaciones de ADN o de preparaciones de paredes bacterianas obtenidas a partir de cultivos de dicha cepa. Se puede tratar, asimismo, de supervivientes de cultivo o de fracciones de esos supervivientes.

La presente invención también tiene como objetivo las composiciones que comprenden una cepa de Lactobacillus rhamnosus de acuerdo con la invención o de una fracción celular obtenida a partir de aq uélla .

Estas com posiciones pueden ser, en particular, fermentos lácticos que asocian una cepa de Lactobacillus rhamnosus de acuerdo con la invención , con una o varias otras cepas de bacterias lácticas, probióticas o no.

Tam bién se puede tratar de productos alimenticios y, en particular, productos lácteos o de productos farmacéuticos o cosméticos que comprenden una cepa de Lactobacillus rhamnosus de acuerdo con la invención o de una fracción cel ular obtenida a partir de esa cepa.

Cuando dicha cepa está presente en forma de bacterias vivas, de preferencia estarán presentes en una proporción de por lo menos 1 05 ufe por gramo, de modo ventajoso de por lo menos 1 06 ufe por gramo de producto, de modo más ventajoso de por lo menos 1 07 ufe por gramo y de modo aún más ventajoso de por lo menos 1 08 ufe por g ramo.

La presente invención será entenderá mejor con la ayuda del complemento de descripción que viene a continuación y que se refiere a ejem plos q ue ilustra n las propiedades antim icrobianas, inm unomod uladoras y antiinfecciosas de la cepa CNC M I-3690.

Ejemplo 1 : comparación de las propiedades de la cepa CNCM I-3690 con las de las cepas probióticas conocidas Las propiedades de la cepa C N C M I-3690 se com pararon con las de diferentes cepas de la técnica anterior, conocidas por sus propiedades probióticas. ta de esas cepas se da en la Tabla I a continuación.

Tabla I Material y métodos 1- Actividad antimicrobiana La investigación de las actividades antimicrobianas se efectuó contra tres bacterias patógenas blanco: Escherichia coli E1392-75-2A, Salmonella enteritidis NIZO B1241 y Listeria monocytogenes 4B. Las bacterias lácteas se pusieron en cultivo en cajas de Petri conteniendo diferentes medios: LM17 (medio M17 (Terzaghi & Sandine, Appl. Microbiol. 29, 807-813, 1975) al que se agregó 1% de lactosa; medio Elliker (ELLIKER y col., J. Dairy Sci., 39, 1611-1612, 1956); y medio TGV (Triptona-Glucosa-Extracto de Carne).

Las cajas se incuban a 37°C hasta la aparición de colonias bacterianas. Los cultivos de Bifidobacterium se llevaron a cabo en condiciones de anaerobiosis. Un lecho de agar que contenía el medio BHI (infusión de cerebro-corazón) y se vierte después el patógeno en la superficie de las cajas. Las cajas se incuban otra vez a 37°C durante 24 h. A continuación, alrededor de cada colonia de bacterias lácticas se miden los diámetros de las zonas de inhibición del patógeno. El puntaje 1 corresponde a un diámetro comprendido entre 1 y 3 mm. El puntaje 2 corresponde a un diámetro comprendido entre 4 y 6 mm. El puntaje 3 corresponde a un diámetro superior a los 6 mm. Cada experimento se realizó tres veces en forma independiente para cada cepa.

Se sumaron los puntajes que se obtuvieron en los patógenos blanco en cada experimento para obtener, para cada bacteria láctica, un puntaje global de actividad antimicrobiana.

Los resultados se dan en la Tabla II a continuación.

Esos resultados muestran que entre las cepas ensayadas, la cepa CNC M 1-3690 es, con la cepa ATCC55544, la que posee la actividad microbia na más elevada . l-> ?-? O Tabla II 2 - Inmunomodulación Se evaluaron las propiedades inmunomoduladoras de las diferentes bacterias lácticas mediante la detección de la modulación inducida por esas bacterias sobre la respuesta inflamatoria de células epiteliales de colon (HT-29) , midiéndose el efecto de esas bacterias sobre la activación del regulador de transcripción N F-?^? y la secreción de la citocina proinflamatoria I L-8 por parte de las célu las HT-29 en presencia de una mezcla de TN Fa, I L-1 ß e I FNy (Cytomix) que simula las condiciones de una agresión inflamatoria .

Cultivo de las bacterias lácticas El crecimiento de las bacterias lácticas se efectúa en u n medio M RS (De Man et al . , J. Appl . Bacteriol . 23, 1 30-1 35, 1 960) o MRS complementado con L-cisteína (1 % final) o en un medio Elliker, de acuerdo con la especie de bacteria ensayada. Las bacterias se inocularon y cultivaron en un primer precultivo de 1 0 mi durante 16 horas a 37°C y se volvieron a cultivar al día siguiente en un segundo cultivo en 1 00 mi durante 1 6 h a 37°C y se recogieron al final de la fase estacionaria.

Cultivo v preparación de las células Las células HT29 se mantienen a 37°C y 5% de C02 en un medio Dulbecco's Modified Eagle Médium (DMEM) complementado con 4.5 g/L de D-Glucosa, L-Glutamina (concentración final 1 mM), aminoácidos (AA) no esenciales (concentración final 1 %), penicilina/estreptomicina (concentración final 1 %), suero de ternera fetal (SVF) (concentración final 10%) .

Las células HT-29 se siembran en placas de 12 pozos, a razón de 2 x 105 células por pozo en 2 mi de medio, dos días antes de los experimentos con respecto a la interacción con las bacterias y de estimulación con Cytomix.

Para medir la activación del regulador transcripcional NF-i^B, las células son transfectadas, el día siguiente al sembrado, con el plásmido reportero Ig-i^B-Luciferasa, tal como lo describen Tien et al. (J. Immunol., 176, 1228-37, 2006). Previamente a la transfección, las células se lavan y el medio se remplaza por el mismo medio sin antibióticos. La transfección se efectúa colocando, en cada pozo, 100 pL de una mezcla que contiene 75 ng de plásmido plg-i^B-luciferasa y 1 pL de Lipofectamina 2000 en 99 pL de medio OptiPro. A continuación, las placas se incuban durante 24 horas a 37°C y 5% de C02.

Interacción con las bacterias v estimulación por el Cytomix Las bacterias se recuperan al finalizar la fase estacionaria y se lavan dos veces con PBS antes de ponerlas en interacción con las células.

A continuación se incuban durante 2 horas con las bacterias, con una multiplicidad de infección de 100 bacterias por célula. Al cabo de dos horas de interacción con las bacterias, las células se incuban durante 6 horas en presencia de las bacterias y del Cytomix, en una proporción de 50 ng/mL de TNFa, 2.5 ng/mL de IL-?ß y 7.5 ng/mL de IFNy en el medio de incubación. Todas las incubaciones se llevan a cabo a 37°C y 5% de C02.

Con el objeto de determinar el nivel basal de activación de NF-i^B y de secreción de IL-8 en la ausencia de bacterias de ácido láctico, se realizó el mismo experimento efectuando la estimulación por Cytomix durante 6 horas, después de dos horas de incubación de las células en ausencia de bacterias.

Al cabo de 8 horas de incubación, se recupera 1 ml_ de medio para dosificar el IL8 secretado. Esta dosificación se efectúa mediante ELISA, utilizándose el juego «Chimioluminescent ELISAs QuantiGlo Human IL-8» (R&D Systems).

Para medir la activación de NF-^?, las células son Usadas en 100 microlitros de un tampón (Tris 25 mM, pH 7.9 MgCI2 8 mM, Tritón 1%, Glicerol 15 %), adicionado con DTT 1 mM. Para medir la actividad de la luciferasa, se añaden 10 microlitros de lisado celular al tampón de lectura (Tris 25 mM, pH 7.9, MgCI2 8 mM, Tritón 1%, Glicerol 15%), adicionado con DTT 1 mM, ATP 100 mM y Luciferina 2 nM/K2HP0 - pH 7.58. La medición se efectuó con ayuda de un luminómetro (BECKMAN COULTER).

Después de ese lapso total de interacción de 8 horas, se mide la activación de NF-nB y la secreción de IL-8.

Los valores de activación de NF- ? y de secreción de IL-8 se expresan en porcentajes con relación al nivel basal observado en ausencia de bacterias lácticas. Para cada cepa ensayada se calcula un puntaje promedio de inmunomodulación, sumando el porcentaje de activación de NF- ? y el porcentaje de secreción de IL-8. Estos resultados se dan en la Tabla III a continuación.

Tabla III Puntaje Fi^B- IL8- medio HT29 Género Especie Referencia HT29 HT29 IL8/NFKB (8) (9) (8+9)/2 DN 1 16 010 ou CNCM Lactobacillus rhamnosus 34,7 49,7 42 I-3690 Lactobacíllus paracasei CRL431 =ATCC55544 58,7 101 ,5 80 Lactobacillus rhamnosus LGG = ATCC 53103 78,0 81 ,0 80 ATCC 14917= DSMZ Lactobacillus plantarum 80,7 91 ,9 86 20174=WCFS1 Lactobacillus casei Shirota 94,0 99,7 97 Lactobacillus rhamnosus HN001 = NM97/09514 25,0 49,7 37 Lactobacillus johnsonii NCC533=La1 =l-1225 86,9 92,7 90 Probi 299v = DSM Lactobacillus plantarum 93,9 107,7 101 9843 Lactobacillus acidophilus La-5 93,8 89,5 92 Lactobacillus acidophilus NCFM 85,8 95,0 90 animalis Bifidobacterium BB12 = ATCC 27536 99,4 98,0 99 subsp. lactis Biogaia SD 21 12 Lactobacillus reuteri 82,0 87,9 85 ATCC55730 Bifidobacterium longum BB536 1 11 ,6 92,0 102 animalis Bifidobacterium HN019 = NM97/01925 107,7 101 ,2 104 subsp. lactis Lactobacillus reuteri DSMZ 20016 71 ,4 83,6 78 Bifidobacterium infantis ATCC 15697 77,5 96,3 87 Bifidobacterium breve BBC50 = 1-2219 97,5 103,6 101 Bifidobacterium breve ATCC 15700 1 17,7 104,6 1 11 NCC2705 = CNCM I- Bifidobacterium longum 87,8 91 ,4 90 2618 Estos resultados m uestra n q ue la cepa C N CM I-3690 inhibe poderosamente la respuesta inflamatoria de las células epiteliales HT-29. Entre las otras cepas ensayadas, únicamente la cepa HN001 posee propiedades antiinflamatorias comparables. 3-S upervivencia al estrés gástrico e i ntestinal Se utilizó un modelo ¡n vitro que refleja las condiciones de estrés gástrico y estrés intestinal.

Se prepararon cultivos de bacterias lácticas en leche suplementada con extracto de levadura. Los cultivos se i ncuban durante 24 a 48 horas, dependiendo de las especies (hasta la fase estacionaria de cultivo).

Estrés i ntestinal: se prepara u n jugo intestinal artificial compuesto por sales biliares de porci no (a razón de 3.3 g/l) y de tampón de carbonato NaHC03 (a 1 6.5 g/l). El pH se aj usta a 6.3. Se agrega 1 mi de ese j ugo intestinal a 100 µ? de cultivo bacteriano. Enseg uida, se i ncuban los cultivos d urante 5 horas. Después, se evalúan, en cajas, las poblaciones de bacterias antes y después del estrés.

Estrés gástrico: se prepara un jugo gástrico artificial . Está com puesto por ácido láctico (9 g/l), pepsina (3.5 g/l) y NaCI (2.2 g/l). El pH se ajusta a 3. 1 . Se agrega 1 mi de ese j ugo intestinal a 1 00 µ? de cultivo bacteriano. Los cultivos se incuban durante varios tiempos: 10 min, 30 min y 60 min. Las poblaciones de bacterias se evalúan en cajas.

Los valores se expresan de la manera sig uiente: Estrés gástrico = media [log (ufe 1 0 min/ufe 0) y log (ufe 0/ufc 0)] x 10 + media [log (ufe 30min/ufc 0) y log (ufe 10min/ufc 0)] x 20 + media [log (ufe 60min/ufc 0) y log (ufe 30min/ufc 0)] x 30.

Estrés intestinal = log (ufe 5 h/ufe 0 h). ufcXmin que es la concentración de bacterias expresada en Unidades Formadoras de Colonias (UFC) al cabo de X minutes de incubación.

Para el estrés gástrico, la supervivencia es buena cuando el valor es superior a -50; medianamente buena cuando el valor está comprendido entre -50 y -100 y mala cuando el valor es inferior a -100.

Para el estrés intestinal, la supervivencia es buena cuando el valor es superior a -0.5; medianamente buena cuando el valor está comprendido entre -0.5 y -1.5 y mala cuando el valor es inferior a -1.5.

Los resultados se dan en la Tabla IV siguiente.

Tabla IV Lactobacillus casei Shirota -1,50 r139,2 Lactobacillus rhamnosus HN001 = NM97/09514 0,00 -86,3 Lactobacillus johnsonii NCC533=La1=l-1225 0,69 20,3 Lactobacillus plantarum Probi 299v = DSM 9843 -1,04 -29,7 Lactobacillus acidophilus La-5 -0,23 43,3 Lactobacillus acidophilus NCFM -1,45 -63,0 animalis Bifidobacterium BB12 = ATCC 27536 0,07 -70,0 subsp. lactis Biogaia SD 2112 Lactobacillus reuteri 1,00 -4,6 ATCC55730 Bifidobacterium longum BB536 -1,12 -438,7 animalis Bifidobacterium HN019 = NM97/01925 3,40 114,0 subsp. lactis Lactobacillus reuteri DSMZ 20016 -1,91 -80,0 Bifidobacterium infantis ATCC 15697 2,79 -412,9 Bifidobacterium breve BBC50 = 1-2219 -0,91 -333,8 Bifidobacterium breve ATCC 15700 -0,14 -370,2 Bifidobacterium longum NCC2705 = CNCM 1-2618 -0,22 -319,2 Los resultados ilustrados en las Tablas II, III y IV anteriores muestran que, entre las diferentes cepas ensayadas, la cepa CNCM I-3690 es la única que presenta al mismo tiempo importantes propiedades antimicrobianas y propiedades antiinflamatorias, acompañadas, además, de muy buenas propiedades de resistencia a los estreses gástrico e intestinal.

Para ilustrar la superioridad de esta cepa, los diferentes puntajes obtenidos de esta cepa desde el punto de vista antimicrobiano se sumaron y se calculó una media de los resultados obtenidos para esta cepa desde el punto de vista de la inmunomodulación. La Figura 1 muestra el punto en el cual la cepa se diferencia en relación con otras cepas ensayadas.

Ejemplo 2: propiedades de adhesión a la mañosa, de la cepa CNCM I-3690 La capacidad de la cepa CNCM 1-3690 para adherirse de manera específica a la mañosa se determinó por medio de una prueba de aglutinación. Esta prueba se basa en la presencia de polisacáridos que contienen mañosa, en la superficie de células de Saccharomyces cerevisiae. Cuando las bacterias que se adhieren a la mañosa se ponen en contacto con S. cerevisiae, tiene lugar un fenómeno de aglutinación que es visible bajo el microscopio.

Este modelo permite evaluar las propiedades antiinfecciosas potenciales de una bacteria, que son resultado de su capacidad para competir con los patógenos en el nivel de adhesión a la mucosa intestinal.

Las cepas L. plantarum 229v y L. plantarum WCFS1, conocidas por su fuerte capacidad de adhesión a la mañosa, fueron las utilizadas a título de controles positivos.

Las cepas de Lactobacillus se cultivan en medio MRS, a una temperatura de 37°C. El crecimiento de las bacterias se detiene en la fase estacionaria y después las bacterias se lavan y se ajusta su concentración. El cultivo de S. cerevisiae se lleva a cabo en medio de "extracto de malta" (Oxoid).

Un volumen de 5 µ? de suspensión bacteriana se mezcla después con PBS o metil-a-D-manopiranósido (concentración final: 25 mM).

Después se añaden 100 µ? de una preparación que contiene 1% de células de S. cerevisiae. La mezcla se agita durante 10 min a temperatura ambiente y después se examina bajo microscopio y se atribuyen puntajes utilizándose la notación siguiente: Puntaje 0 = nada de aglutinación Puntaje 1 = aglutinación débil Puntaje 3 = aglutinación fuerte Puntaje 5 = aglutinación muy fuerte.

El experimento se repitió cuatro veces, en forma independiente para cada una de las cepas.

Los resultados se dan en la Tabla V a continuación.

Tabla V animalis Bifidobacterium BB12 = ATCC 27536 0 subsp. lactis Biogaia SD 2112 Lactobacillus reuteri 0 ATCC55730 Bifidobacterium longum BB536 0 animalis Bifidobacterium HN019 = NM97/01925 0 subsp. lactis Lactobacillus reuteri DSMZ 20016 0 Bifidobacterium infantis ATCC 15697 0 Bifidobacterium breve BBC50 = 1-2219 0 Bifidobacterium breve ATCC 15700 0 NCC2705 = CNCM I- Bifidobacterium longum 0 2618 Se observa que el porcentaje de células de S. cerevisiae aglutinadas por la cepa CNCM I-3690 es comparable con el porcentaje de células de S. cerevisiae aglutinadas por las cepas L. plantarum 229v y L. plantarum WCFS1.

Ejemplo 3: crecimiento de la cepa CNCM I-3690 en leche Se ensayaron las propiedades de crecimiento en leche de la cepa CNCM I-3690 empleándose el siguiente protocolo: Un medio constituido por leche descremada reconstituida con agua a la que se le agregó polvo de leche descremada, se inoculó con la cepa CNCM I-3690, en niveles que varían entre 5.5 x 106 ufc/g y 3.3 x 07 ufc/g.

Se midió la actividad de fermentación de la cepa, que está relacionada con su crecimiento, mediante el monitoreo continuo del pH del medio de crecimiento.

Los resultados se ilustran con la Figura 2.

Estos resultados m uestran que la cepa CNCM 1-3690 tiene la capacidad de crecer de modo eficaz en leche y que, en consecuencia, se puede utilizar en la elaboración de productos lácteos fermentados.

Claims

REIVINDICACIONES

1 . Una cepa de Lactobacillus rhamnosus que tiene propiedades antimicrobianas, i nm u nomoduladoras y de adhesión específica a la mañosa, depositada ante la CNCM bajo el número I-3690.

2. Un método para obtener una cepa de Lactobacillus rhamnosus, caracterizado porque comprende m utagénésis o transformación genética de la cepa CN CM I-3690.

3. Una cepa de Lactobacillus rhamnosus, caracterizada porque se puede obtener mediante el método que se reivindica en la reivindicación 2, y porque tiene las propiedades antimicrobianas y las propiedades inm unomod u latorias de la cepa C NCM 1-3690.

4. Una composición que comprende una cepa de Lactobacillus rhamnosus como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3.

5. La composición como se reivindica en la reivi ndicación 4, caracterizada porque es un producto alimenticio.

6. La cepa de Lactobacillus rhamnosus, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3, para uso como un med icamento.

7. La cepa de Lactobacillus rhamnosus para uso como u n medicamento como se reivindica en la reivindicación 6, caracterizada porque dicho medicamento está destinado al tratamiento de una infección microbiana.

8. La cepa de Lactobacillus rhamnosus para uso como un medicamento como se reivindica en la reivindicación 6, caracterizada porque dicho medicamento es antiinflamatorio.

9. Un método para obtener una fracción celular que tiene propiedades antimicrobianas y/o imunomoduladoras, caracterizado porque dicha fracción se obtiene a partir de un cultivo de una cepa de Lactobacillus rhamnosus como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3.

10. El método como se reivindica en la reivindicación 9, caracterizado porque dicha fracción celular se selecciona de: - una preparación de ADN o una preparación de pared bacteriana; - un sobrenadante de cultivo, o una fracción de dicho sobrenadante.

11. Un método para obtener una composición que tiene propiedades antimicrobianas y/o imunomoduladoras, caracterizado porque comprende obtener una facción celular mediante un método como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 9 y 10, y que incorpora a dicha fracción en dicha composición.

12. El método como se reivindica en la reivindicación 11, caracterizado porque dicha composición es una composición alimenticia.