MX2010009514A - Metodo de preparacion de combretastatina. - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a un método de preparación de una combretastatina (A): fórmula (1) en forma de una base o de una sal de adición con un ácido, que consiste en acoplar en presencia de una base y de T3P la sal del compuesto (Z)-amino de fórmula (II) con un derivado dela L-serina doblemente protegido de fórmula (III) en la cual PG designa un grupo protector de la función amina de manera que se obtiene el compuesto de fórmula (Z)-(Ib): fórmula (IV) luego, en desproteger y abrir el ciclo de (Z)-(lb) en presencia de un ácido de manera que se obtiene la combretastatina (A) en forma de sal; y, eventualmente, agregando una base de manera que se obtiene la combretastatina (A) en forma de base, habiendo sido obtenida la sal del compuesto (Z)-amino mediante un enriquecimiento de la sal del compuesto amino de fórmula (V) en isómero (Z).

Description

METODO DE PREPARACION DE COMBRETASTATINA Campo de la Invención La presente solicitud se refiere a un método de preparación de una combretastatina (A): (A) en forma de base o de una sal de adición con un ácido.

Antecedente de la Invención El documento de la patente US 6759555 describe un método de preparación de una combretastatina de fórmula: en la cual X representa -NH2 o uno de los siguientes grupos: donde PG designa un grupo protector de la función amina.

En el artículo Bioorg. ed. Chem. 2000, 8, 2417-2425 y en el documento de la patente US 2003/0220404 se describen también métodos de preparación de combretastatinas.

El artículo J. Pept. Res. 1999, 54(1), 54-65 compara activadores de ácido en la formación de enlaces peptídicos y concluye que el mejor es el TDBTU.

En Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 3231-3244 se describe la preparación de la combretastatina de la fórmula (A) con un acoplamiento utilizando como activador de ácido el DCC, HOBt-H20 (etapa e, compuesto 10).

En Chem. Commun. 1999, 1847-1848 se describe el T3P en la preparación de enlaces amida; sin embargo, se describe que el T3P conduce a más epimerización y a peores rendimientos que el HAPyU (ver tabla 3).

En estos documentos, no se describe ni sugiere el método objeto de la reivindicación 1. Asimismo, no se describen ni el enriquecimiento de la sal del compuesto amino con ayuda de alcohol bencílico y acetonitrilo ni el acoplamiento con ayuda del T3P.

Problema Técnico Las combretastatinas o derivados del estilbeno presentan una fuerte actividad citotóxica y debido a ello son utilizables como anticancerosos. Sin embargo, son los isómeros (Z) los que presentan la actividad citotóxica más fuerte. Estos compuestos se describen especialmente en los documentos de las patentes de Estados Unidos números US 5731353, US 5561122 o US 6759555. La solicitante ha mejorado el método de preparación de la combretastatina (A).

Breve descripción de la invención La invención se refiere a un método de preparación de una combretastatina (A): en forma de base o de una sal de adición con un ácido, que consiste en acoplar en presencia de una base y de T3P de fórmula (III): el compuesto (Z)-am o la sal del compuesto (Z) , donde B" designa un contraanión, con un derivado de la L-serina doblemente protegido de fórmula (II) en la cual PG designa un grupo protector de la función amina de manera que se obtiene el compuesto de fórmula (Z)-(lb): después en desproteger y abrir el ciclo de (Z)-(lb) en presencia de un ácido de forma que se obtiene la combretastatina (A) en forma de sal (-NH3+) y eventualmente en añadir una base de manera que se obtiene la combretastatina (A) en forma de base (-NH2), habiendo sido obtenida la sal del compuesto (Z)-amino mediante un enriquecimiento de la sal del compuesto amino de fórmula: en isómero (Z), donde B" designa un contraanión, que consiste: • en añadir alcohol bencílico a una suspensión de una mezcla de las sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino en acetonitrilo y después • en separar mecánicamente la sal del compuesto amino enriquecido en isómero (Z).

La invención se refiere también al enriquecimiento de la sal del compuesto amino de fórmula: en isómero (Z) , donde ?G designa un contraanión , que consiste: • en añadir alcohol bencílico a u na suspensión de una mezcla de las sales de los compuestos (Z)- y (E) -amino en acetonitrilo y • en separar mecánicamente la sal del com puesto amino enriquecido en isómero (Z) .

La invención se refiere también a la uso del T3P de fórmula (I I I) para realizar en presencia de una base el acoplamiento entre el compuesto (Z)-amino o la sal del compuesto (Z) -amino con el derivado de la L-serina doblemente protegido.

La proporción acetonitrilo / sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino expresada en peso está comprendida entre 5 y 1 7, preferentemente entre 1 0 y 1 2. La temperatura a la cual se lleva a cabo el enriquecimiento está comprendida, preferentemente, entre 20 y 70 °C. La proporción alcohol bencílico / sales de los compuestos (Z) - y (E)-amino expresada en peso está comprendida entre 1 y 4, preferentemente entre 2 y 3.

Descripción Detallada de la I nvención El esq uema 1 a continuación descri be las etapas de reacción (i) a (iv) de un método de preparación de la combretastatina (A): Esq uem a 1 etapa (i): reacción de Wittig entre el nitrometoxi benzaldehido y el bromuro o cloruro de trimetoxibencilfosfonio en presencia de una base, que conduce a la sal del compuesto nitro, que se presenta en forma de una mezcla de los dos isómeros (Z) y (E) del 2-metoxi-5-[2-(3 ,4,5-trimetoxifenil)vinil]nitrobenceno ((Z)- y (E)-nitro); etapa (¡i): reducción de la mezcla que conduce a una mezcla de los com puestos (Z)- y (E)-amino que se transforman en sales (B" designa un contra-anión , por ejemplo CI o S042") , segu ida de una etapa de separación del compuesto (Z) -amino; etapa (iii): acoplamiento de la sal del compuesto (Z) -amino con un derivado de la L-serina doblemente protegido en las funciones -OH y amino (compuesto de fórmula (I I)) que conduce al compuesto (Z) -(l b) .

PG designa un grupo protector de la función amina: puede tratarse por ejemplo de ter-butoxicarbonilo (BOC), de benziloxicarbonilo (CBZ) o de 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (F OC); etapas (iv) y (v): desprotección y apertura del ciclo que conduce a la combretastatina (A) en forma salificada o no salificada.

La etapa (i) se describe en el documento de la patente de Estados Unidos US 5731353 así como en Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2417-2425 (esquema 1). La reacción se lleva a cabo en un solvente orgánico como por ejemplo un solvente aromático (por ejemplo tolueno) en presencia de una base, preferentemente fuerte como MeONa o NaH. La proporción (Z)/(E) es del orden de 75/25.

La etapa (ii) de reducción, descrita en el documento de la patente US 6759555 se lleva a cabo en presencia de hierro en exceso (más de 2 equivalentes respecto de (la)). La reducción en presencia de zinc, como la descrita en el documento de la patente US 5525632 (ejemplo 2, etapa 2) también es posible, pero no es completa (rendimiento = 49,3%) y conduce además a la formación de una cantidad importante de subproducto «azo». El compuesto (Z)-amino de una pureza suficiente se obtiene luego mediante una o varias separaciones complicadas. La separación que sigue a la reducción se realiza mediante cristalizaciones sucesivas. Una primera cristalización permite eliminar el compuesto (E)-amino, luego una segunda cristalización permite aislar el (Z)-amino (ver el documento de la patente US 6759555, ejemplo 1).

El acoplamiento de la etapa (iii) se realiza ventajosamente en presencia de un activador de ácido como por ejemplo EDCI (cloruro de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida), DCC (diciclohexilcarbodiimida), TOTU (o- [etoxicarbonil]cianometilenamino)-N,N,N',N'-tetrametiluronio tetrafluoroborato), HBTU (o-benzotriazol-1 -?-?,?,?',?'-tetrametiluroniohexafluorofosfato), PivCI (cloruro de pivaloilo) o N,N-carbonildiimidazol. Se denomina activador de ácido («coupling agent») un compuesto cuya función es activar la función ácido -COOH a fin de favorecer la formación de un enlace peptídico. Para más detalles acerca de los activadores de ácido, se puede tomar como referencia la revista ChemFiles Vol.7, N°2, página 3, editada por Aldrich Chemical o bien Tetrahedron report N°672, 2004, 60, 2447-2467, «Recent development of peptide coupling reagents in organic synthesis» ("Desarrollo reciente de los reactivos acopladores de péptidos en síntesis orgánica"). La revista Tetrahedron 2005, 61, 10827-10852 revela que existen muchos activadores de ácido disponibles.

La etapa (iv) se lleva a cabo en presencia de un ácido con el fin de favorecer la apertura del ciclo y de obtener la combretastatina (A) en forma de una sal (-NH3+). Se trata de una desprotección / apertura de ciclo. En presencia de BOC, se utiliza de manera ventajosa ácido clorhídrico, por ejemplo en forma de solución metanólica, y se obtiene el clorhidrato. La com bretastatina (A) en forma de base se obtiene neutralizando la sal con ayuda de u na base, por ejemplo sosa (cf. ejemplo 1 , etapa (Mi)) .

Método de Acuerdo con la I nvención El método de la presente invención retoma las mismas etapas del esquema 1 , pero se han mejorado las etapas (ii) y (iii) . En efecto, en la invención , en el curso de la etapa (ii) , el isómero (Z) de la sal del compuesto amino se obtiene mediante el método que consiste: • en añadir alcohol bencílico a una suspensión de una mezcla de las sales de los compuestos (Z)- y (E) -amino en acetonitrilo y • en separar mecánicamente la sal del compuesto ami no enriquecido en isómero (Z) .

Asimismo, el isómero (Z) se obtiene por "enriquecimiento"; este término significa que después de las dos etapas del método descritas previamente, se aumenta la proporción del isómero (Z) respecto del isómero (E) ; también se puede hablar de método de separación del isómero (Z) a partir de una mezcla de los isómeros (Z) y (E)) . Respecto de una (re)cristalización , el enriquecimiento presenta la ventaja de ser a la vez directo y sencillo de llevar a cabo. Permite obtener el compuesto amino enriquecido en isómero (Z) con un pequeño contenido residual de isómero (E) (que puede ir hasta < 1 % mol; cf. ejemplo 1 en el que la pureza del producto es de 99,93% en (Z) y 0,07% en (E)) . La separación mecánica puede ser por ejemplo una filtración o una centrifugación. Después de la separación mecánica, la sal del isómero (Z) puede , eventualmente , lavarse y secarse .

Preferentemente, la suspensión presenta una proporción acetonitrilo / sales de los com puestos (Z) - y (E) -amino expresada en peso com prendida entre 5 y 1 7, preferentemente entre 1 0 y 1 2 (es decir, que el peso de acetonitrilo en la suspensión está comprendido entre 5 y 1 7 x el peso de los compuestos (Z) - y (E) -amino) .

La cantidad de alcohol bencílico que se añade es, preferentemente, tal que la proporción alcohol bencílico / sales de los compuestos (Z) - y (E)-amino expresada en peso está comprendida entre 1 y 4 , preferentemente entre 2 y 3 (es decir, que el peso de alcohol bencílico añadido está comprendido entre 1 y 4 x el peso de los compuestos (Z)- y (E)-amino) . Esta proporción permite mantener una relación (Z)/(E) elevada para el producto final . La función del alcohol bencílico es disolver de manera preferencial la sal del compuesto (E)-amino.

El en riquecimiento se lleva a cabo preferentemente a una temperatura comprendida entre 20 y 70 °C, ventajosamente entre 30 y 70 °C, preferentemente entre 35 y 65 °C. Por encima de 70° C, el com puesto amino comienza a degradarse lentamente.

A continuación se describe un método preferido de preparación de la suspensión . Se reducen los compuestos (Z)- y (E)-nitro con ayuda de ditionito de sodio (Na2S204) en un solvente que puede ser una mezcla de agua y alcohol , por ejemplo una mezcla agua/metanol. Tras la reducción , se introduce en el medio de reacción un ácido fuerte (por ejemplo HCI o H2S04) que reacciona con los i ntermedios de la reacción así como con los restos de ditionito y de disulfito. Se obtiene entonces una mezcla de las sales de los compuestos (Z) - y (E) -amino (por ejemplo, clorhid rato o sulfato) . Entonces se añade una base fuerte para obtener las bases li bres (-N H3+ d - N H2) que se extraen con un solvente orgánico, por ejem plo un solvente clorado como el diclorometano (DCM) . Se añade a la fase orgán ica un ácido fuerte en un alcohol, luego se desplaza el alcohol con acetonitrilo de forma que se obtenga una suspensión de las sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino en acetonitrilo. El ácido fuerte puede ser HCI o H2S04 (B" = Cl o S042") . El desplazamiento del solvente se puede hacer añadiendo el acetonitrilo tras haber eli minado bajo vacío el alcohol más o menos completamente. La adición de acetonitrilo se puede hacer tam bién acompañando a la eliminación del alcohol bajo vacío. Preferentemente el alcohol es un alcohol ligero, como metanol o etanol.

Para la etapa (ni) , el acoplamiento entre la sal del com puesto (Z)-amino y el derivado de la L-serina doblemente protegido de fórmula (I I) se realiza en un solvente orgánico con ayuda de ácido propanofosfonico (T3P) como activador de ácido en presencia de una « base. La función de la base es atrapar las especies ácidas y desplazar la sal hacia la base libre. La cantidad de base añadida está comprendida entre 2 y 3 equivalentes, respecto de la sal del compuesto (Z)-amino (ver ejemplo 1 , en el que se utilizan 2 ,7 eq.) . Asimismo, es posible acoplar directamente el compuesto (Z)-amino con el compuesto de fórmula (I I ) en presencia de T3 P y de una base; en este caso, la proporción de base añadida es menos importante, comprendida entre 1 y 2 eq. (aproximadamente 1 eq menos que si se parte de la sal) .

La base puede ser una amina terciaria, como por ejem plo trietilamina (TEA) , diisopropiletilamina (D I EA) , N-metilmorfolina (N M M) o metilpi peridina. El solvente orgánico puede ser diclorometano (DCM) , tolueno, metilisobutilcetona (M I BK) , acetato de etilo, acetonitrilo, tetrahidrofurano (TH F) , Me-tetrahidrofurano (Me-TH F) o ciclopentilmetiléter.

La fórmula del T3P es: La ventaja de utilizar el T3P en vez de otro activador de ácido es que los subproductos del T3P son fácilmente eli minables (todos los subproductos son solubles en agua) y que se trata de un activador barato. Además, la reacción se puede llevar a cabo en presencia del compuesto (Z) -amino (en forma de sal o de base) y del compuesto (I I) puestos juntos, de acuerdo con un método "one pot": así pues, se hace reaccionar juntos en el mismo recipiente el compuesto (Z) -amino (en forma de sal o de base) , el compuesto (I I) en presencia del T3 P y de una base. Este' no es el caso de todos los agentes de acoplamiento, puesto que algunos, como el PivCI (cloruro de pivaloilo) , necesitan para la misma reacción una activación previa de la función ácido del compuesto (II) antes de poder añadir la sal del compuesto (Z)-amino.

Por último, hemos observado que el T3P no conduce a una epimerización del centro asimétrico, lo cual permite obtener la combretastatina (A) con una buena pureza y un buen rendimiento. También se ha observado que el T3P permite obtener un buen rendimiento en producto de acoplamiento (ver tabla III).

La reacción de acoplamiento se lleva a cabo generalmente a una temperatura comprendida entre 5 °C y 70 °C, por ejemplo bajo reflujo de DCM. La proporción de T3P respecto de compuesto (Z)-amino está comprendida entre 1 y 2 eq, preferentemente entre 1.5 y 1.8 eq.

Ejemplos Ejemplo 1 (de acuerdo con la invención) Etapa (i): Sobre una mezcla a una temperatura de 5-10°C, constituida por tolueno (91.1 litros), bromuro de trimetoxibencilfosfonio (15.35 kg, 29.33 moles) y 4-metoxi-3-nitrobenzaldehido (5.06 kg, 27.93 moles), se vierte una solución de metilato de sodio (5.66 kg, 29.34 moles). Al final de la reacción, se añaden 0.32 litros (5,59 moles) de ácido acético. Tras mantenerlo a 20 °C, el medio se filtra. La torta formada se lava con tolueno (11.1 litros). Los filtrados se lavan varias veces con agua (20.2 litros) y luego se concentran bajo vacío. Entonces se añade el alcohol isopropílico (87,6 litros) y se concentra el medio y luego se enfría. La suspensión se filtra entonces a 10 °C. El producto aislado se seca bajo vacío (6.46 kg , 52.2%) . La pureza del producto aislado es del orden de 78% en (Z) y de 22% en (E) .

Etapa (i i) : Sobre un medio constituido por metanol (1 00 mi) , los compuestos (Z) y (E) -nitro a reducir (20 g , 0.058 moles) y ditionato de sodio (36.8 g , 0. 179 moles 3.1 eq) , se añade agua (80 mi) a 50 °C. Una vez acabada la reacción (se dejó 1 h a 50 °C) , se añade el ácido clorh ídrico (36.3 mi , 0.406 moles) . El tratamiento se real iza vertiendo agua (70 mi) y DCM (80 mi) , luego sosa (lejía de sosa 30,5 % , 1 0N) hasta pH = 7. Se elimina la fase acuosa tras reextracción con DCM (20 mi) y luego se concentra la fase DCM bajo vacío (aproxi madamente 200 mbar a 35°C) y se sustituye por acetonitrilo (1 60 mi) ; se efectúa el cambio de solvente del DCM hacia el acetonitrilo a presión reducida, de manera que se guarde un volumen de reacción de aproximadamente 200 mi . Se vierte el ácido clorhídrico metanolico (27 mi, 0.081 moles) y luego se evapora el solvente a presión reducida (90 m bar) de manera que se efectúe el cambio de solvente de metanol-acetonitrilo hacia el acetonitrilo a volumen constante de aproximadamente 233 mi. Al final del cambio de solvente, se ajusta el volumen total (solvente + compuestos orgánicos) a 280 mi .

Se obtiene entonces una suspensión en forma de papilla blanca. Entonces se añade a la suspensión el alcohol bencílico (46 mi) a 45±3 °C. Tras enfriar hasta 25 °C, se filtra entonces el medio y se lava con acetonitrilo (30 mi) y alcohol bencílico (3.3 mi) . El producto aislado se seca entonces bajo vacío (11.7 g, 74.4%). Este producto presenta una pureza determinada por HPLC de 99.93 % en (Z) y 0,07% en (E). Al final de la etapa (ii), se ha obtenido por lo tanto, simple y directamente, la sal del compuesto (Z)-amino con una buena pureza.

Etapa (iii): Sobre un medio constituido por DCM (500 mi), el compuesto (Z)-amino en forma de clorhidrato (50 g, 0.142 moles) y L-serina doblemente protegida de fórmula (II) con PG=BOC (L-serina-N-BOC-acetonida; 41.8 g, 0.170 moles), se vierte TEA (53.4 mi, 0.383 moles) a 20°C y luego una solución de T3P en DCM (154 g, 0.242 moles). El medio se lleva a reflujo y luego se añade agua (500 mi). Tras decantación y concentración, se añaden el ácido clorhídrico metanólico (189.5 mi, 1.136 moles) y metanol (189.5 mi). Tras decantación de las fases, se añade al medio de agua (300 mi). Se añade a la fase acuosa el acetato de isopropilo (650 mi) y luego la sosa (115 mi, 1.150 moles) se vierte a 20°C. La fase orgánica decantada y lavada se concentra bajo vacío y luego se calienta a 65 °C. A esta temperatura se añaden el metanol (35 mi) y luego el ácido clorhídrico metanólico (47.4 mi, 0.142 moles). Tras enfriamiento y filtración, se aisla el producto (49.6 g, 79.5 %). El producto final presenta una pureza de 99.2%.

Ejemplo 2 (de acuerdo con la invención) En un reactor de 1.6 litros equipado con una doble cámara, se cargan el compuesto (Z)-amino en forma de clorhidrato Z-aminostilo, HCI (50.0 g) , la N-BOC-acetonida (41 .8 g) y 500 mi de DCM . A continuación se vierten a 22 ± 3 °C 53.4 mi de trietilamina (2.7 eq.) y luego una solución de T3P en DCM a 50% (1 .7 eq .) . Se agita a reflujo del DCM durante 1 hora. A continuación se enfría la mezcla a 22 ± 3 °C y se añaden 500 mi de agua desmineralizada. Se deja decantar y se separan las fases. Se lava la fase DCM con 500 mi de una solución acuosa de hidrogenofosfato de sodio al 6 % en peso (30 g) , luego con 500 mi de agua desmineralizada. Se concentra la fase DCM a presión reducida de 360 a 1 50 mbar hacia 40-50 °C. A continuación se vierte una solución de HCI en metanol de 3 mol/1 (379 mi, 8 eq.) y luego 300 mi de agua desmineralizada. Se deja decantar y se separan las fases. Se vuelve a extraer la fase DCM/metanol con agua desmineralizada (200 mi) y se separan las fases. Se añaden 650 mi de acetato de isopropilo y luego 1 1 5 mi de una solución de hidróxido de sodio al 30 % (8.1 eq .) . Se deja decantar y se lava la fase orgánica con 400 mi de agua desmineralizada. Se deja decantar y se separan las fases. Luego se concentra la fase orgánica a presión reducida de 1 60 a 60 m bar hasta 300-350 mi y se efectúa un cam bio de solvente DCM?acetato de isopropilo. Se calienta después la mezcla a 62°C, se añaden 35 mi de metanol y se vierte una solución de ácido clorh ídrico en el metanol de 3 mol/l (47,4 mi, 1 eq.). A continuación se deja enfriar hasta tem peratura ambiente y se filtra la papilla blanca. Se lava el sólido final.

En los ejemplos 3-6, se retoma la etapa (ii) con cantidades diferentes de compuestos (Z) y (E)-nitro de partida. La proporción acetonitrilo /sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino se fija en 10.8 y la proporción alcohol bencílico/ sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino es variable.

Ejemplo 3 (de acuerdo con la invención) Sobre un medio constituido por metanol (50 mi), los compuestos (Z) y (E)-nitro a reducir (15 g, 0.043 moles) y ditionato de sodio (27.2 g, 0.133 moles), se vierte agua (60 mi) a 50 °C. Una vez acabada la reacción, se añade ácido clorhídrico (26.2 mi, 0.314 moles). El tratamiento se realiza vertiendo agua y DCM y luego sosa hasta pH = 7. A la fase DCM, se añade ácido clorhídrico metanólico (18.9 mi, 0.0586 moles) y después se reemplaza el solvente por acetonitrilo. Entonces se obtiene una papilla. Se añade entonces el alcohol bencílico (31 mi) a la suspensión a 50 °C y se mantiene a 65 °C durante 2 horas. Tras enfriarse, el medio se filtra y se lava. El producto aislado se seca entonces bajo vacío.

Ejemplos 4-6: idénticos al ejemplo 3, pero con una cantidad diferente de alcohol bencílico.

Tabla I propo rción en rendí peso pureza miento alcohol HPLC del Z- bruto en Z- bencílico / amino amino sales Z+E amino Ej.4 1.96 99.5% 82.0% Ej.3 2.09 99.6% 81.0% Ej.5 2.25 99.7% 77.0% Ej.6 2.38 99.9% 75.6% proporción acetonitrilo / sales Z+E amino = 10.8 En los ejemplos 5 y 7-9, la proporción alcohol bencílico / sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino se fija en 2.25 y la proporción acetonitrilo / sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino es variable.

Tabla II proporción alcohol bencílico / sales Z+E amino = 2,25 Los ejemplos 10-14 describen resultados de acoplamiento (etapa (iii)) utilizando otros agentes de acoplamiento distintos del T3P.

Ejemplo 10 (comparativo): uso de TOTU Se retoman las condiciones de la etapa (iii), pero en presencia de TOTU como activador de ácido (1 eq. de TOTU + 5 eq. de TEA). Entonces, el rendimiento final no es más que 71 %.

Ejemplo 11 (comparativo): uso de TOTU Sobre un medio constituido por DCM (10 mi), el compuesto (Z)-amino en forma de clorhidrato (0.50 g, 1.4 mmoles) y L-serina doblemente protegida de fórmula (II) con PG = BOC (L-serina-NBOC-acetonida; 0.35 g, 1.4 mmoles), se vierte TEA (0.71 g, 7.0 mmoles) a 5 °C y luego TOTU (0.46 g, 1.4 mmoles). El medio se mantiene a 5 °C durante 24 horas y luego se añade agua (5 mi). Tras decantación, se analiza la fase orgánica por HPLC. El rendimiento dosificado del producto de acoplamiento es de 50.1 % y su pureza de 69.3 %.

Ejemplo 12 (comparativo): uso de BOP-CI (cloruro bis(2-???-3-oxazolidinihfosfínico) Sobre un medio constituido por DCM (5 mi), el compuesto (Z)-amino (0.50 g, 1.4 mmoles) y L-serina doblemente protegida de fórmula (II) con PG = BOC (L-serina-NBOC-acetonida; 0.35 g, 1.4 mmoles), se vierte NMM (0.42 g, 4.2 mmoles) a 5 °C y luego el BOP-CI (0.72 g, 2.8 mmoles). El medio se mantiene a 5 °C durante 24 horas y luego se añade agua (5 mi). Tras decantación, se analiza la fase orgánica por HPLC. El rendimiento dosificado del producto de acoplamiento es de 29.1 % y su pureza de 91.6 %.

Ejemplo 13 (comparativo): uso de PvCIQP (hexafluorofosfato de clorotripirrolidinofosfonio) Sobre un medio constituido por acetato de etilo (10 mi), el compuesto (Z)-amino (0.50 g, 1.4 mmoles) y L-serina doblemente protegida de fórmula (II) con PG = BOC (L-serina-NBOC-acetonida; 0.70 g, 2.8 mmoles), se vierte NMN (0.42 g, 4.2 mmoles) a 5°C y luego el PyClOP (1.2 g, 2.8 mmoles). El medio se mantiene a 5 °C durante 24 horas y luego se añade agua (5 mi). Tras decantación, se analiza la fase orgánica por HPLC. El rendimiento dosificado del producto de acoplamiento es de 53.3 % y su pureza de 83.9 %.

Ejemplo 14 (comparativo): uso de PvBROP (hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio) Sobre un medio constituido por Me-CN(5 mi), el compuesto (Z)-amino (0.50 g, 1.4 mmoles) y L-serina doblemente protegida de fórmula (II) con PG = BOC (L-serina-NBOC-acetonida; 0.35 g, 1.4 mmoles), se vierte NMN (0.42 g, 4.2 mmoles) a 25 °C y luego el PyBROP (0.65 g, 1.4 mmoles). El medio se mantiene a 25 °C durante 24 horas y luego se añade agua (5 mi). Tras decantación, se analiza la fase orgánica por HPLC. El rendimiento dosificado del producto de acoplamiento es de 24.9 % y su pureza de 75.4 %.

Tabla III rendimi ento P agente dosificado ureza de base del producto por acoplamiento de HPLC acoplamiento (Z)-(lb) Ej.2 T3P TEA - 2,7 99,7% - eq.

Ej.11 TOTU TEA - 5 50,1 % 6 eq. 9,3% Ej.12 BOP-CI NMN - 3 29,1 % 9 eq. 1 ,6% Ej.13 PyCIOP NMN - 3 53,3% 8 eq. 3,9% Ej.14 PyBROP NMN - 1 24,9% 7 eq. 5,4% Se observa que el T3P permite obtener un mejor rendimiento en producto de acoplamiento que los compuestos TOTU, BOP-CI, PyClOP o PyBROP.

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1. Método de preparación de una combretastatina (A): en forma de base o de una sal de adición con un ácido, que consiste en: • acoplar en presencia de una base y de T3P de fórmula (III): compuesto (Z)-amino o la sal del compuesto (Z)-amino , donde B" designa un contra-anión, con un derivado de la L-serina doblemente protegido fórmula (II) en la cual PG designa un grupo protector de la función amina de manera que se obtenga el compuesto de fórmula • luego, en desproteger y abrir el ciclo de (Z)-(lb) en presencia de un ácido de manera que se obtiene la combretastatina de fórmula (A) en forma de sal; • y, eventualmente, en añadir una base de manera que se obtiene la combretastatina de fórmula (A) en forma de base, habiendo sido obtenida la sal del compuesto (Z)-amino mediante un enriquecimiento de la sal del compuesto amino de fórmula: en isómero (Z), donde B" designa un contraanión, que consiste: • en añadir alcohol bencílico a una suspensión de una mezcla de las sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino en acetonitrilo y después • en separar mecánicamente la sal del compuesto amino enriquecido en isómero (Z).

2. Método de enriquecimiento de la sal del compuesto amino de fórmula en isómero (Z), donde B" designa un contraanión, que consiste: • en añadir alcohol bencílico a una suspensión de una mezcla de las sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino en acetonitrilo y • en separar mecánicamente la sal del compuesto amino enriquecido en isómero (Z).

3. Método de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en el cual la separación mecánica es una filtración.

4. Método de preparación de una combretastatina (A): en forma de base o de una sal de adición con un ácido, que consiste en: • acoplar en presencia de una base y de T3P, el compuesto la sal del compuesto (Z)-amino , donde B' designa un contra-anión, con un derivado de la L-serina doblemente protegido fórmula (I I) en la cual PG designa un gru po protector de la función amina de manera q ue se obtenga el compuesto de fórmu la (Z) -(l b) : luego , en desproteger y abrir el ciclo de (Z)-(l b) en presencia de un ácido de manera que se obtiene la com bretastatina (A) en forma de sal ; y, eventualmente, en añadir una base de manera que se obtiene la combretastatina (A) en forma de base.

5. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, en el cual PG representa BOC, CBZ o FMOC.

6. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, en el cual B" designa CI" o S042".

7. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6, en el cual PG representa BOC y B" designa CI".

8. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual la base es una amina terciaria.

9. Método de acuerdo con la reivindicación 8, en el cual la base es trietilamina (TEA) , diisopropiletilamina (DIEA) , N- metilmorfolina ( MM) o metilpiperidina.

10. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, en el cual el compuesto (Z)-amino o la sal del compuesto (Z)-amino y el compuesto de fórmula (II) reaccionan juntos en el mismo recipiente en presencia de T3P y de la base.

11. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 10, en el cual la proporción acetonitrilo / sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino expresada en peso está comprendida entre 5 et 17, preferentemente entre 10 y 12.

12. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11, en el cual la temperatura a la cual se lleva a cabo el enriquecimiento está comprendida entre 20 y 70 °C.

13. Método de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 12, en el cual la proporción alcohol bencílico / sales de los compuestos (Z)- y (E)-amino expresada en peso está comprendida entre 1 et 4, preferentemente entre 2 y 3.

14. Uso de T3P de fórmula (III) para realizar el acoplamiento entre el compuesto (Z)- amino de fórmula compuesto (Z)-amino de fórmula: donde B" designa un contraanión con u n derivado de la L-serina doblemente protegida fórmula (I I) en la cual PG designa un grupo protector de la función amina.

15. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 4 en el cual PG designa BOC , CBZ o FMOC y/o B" desig na Cl" o S042".

1 6. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 4 o 1 5 en el cual la base es una amina terciaria.

17. Uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 4 a 1 6, en el cual el compuesto (Z)-amino o la sal del compuesto (Z) -amino y el compuesto de fórmula (I I) reaccionan juntos en el mismo recipiente en presencia de T3P y de la base.