MX2008010021A - Procesamientos para tratar perdida de peso indeseada o trastornos de la alimentacion mediante la administracion de un agonista para trkb - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere a procedimientos para tratar la pérdida de peso no deseada (tal como con caquexia y con el envejecimiento), trastornos de la alimentación (tal como anorexia nerviosa), o emesis inducida por opioides por medio de la administración periférica de una agonista para trkB;la invención también se refiere a composiciones y kits que comprenden un agonista para trkB.

Description

PROCEDIMIENTOS PARA TRATAR PERDIDA DE PESO INDESEADA O TRASTORNOS DE LA ALIMENTACION MEDIANTE LA ADMINISTRACION DE UN AGONISTA PARA TRKB CAMPO DE LA INVENCION Esta invención se refiere al uso de un agonista para trkB en el tratamiento y/o prevención de pérdida de peso indeseada, trastornos de la alimentación, o emesis inducida por opioides.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las neurotrofinas son una familia de proteínas pequeñas, homodiméricas que desempeñan un papel crucial en el desarrollo y el mantenimiento del sistema nervioso. Los miembros de la familia de las neurotrofinas incluyen el factor de crecimiento nervioso (NGF), el factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF), la neurotrofina-3 (NT-3), la neurotrofina-4/5 (NT - 4/5), la neurotrofina-6 (NT-6), y la neurotrofina-7 (NT-7). Las neurotrofinas, de forma similar a otros factores de crecimiento polipeptídicos, afectan a sus células diana mediante interacciones con los receptores de la superficie celular. De acuerdo con el conocimiento actual, dos clases de glucoproteínas transmembranosas actúan como receptores para las neurotrofinas. Las neuronas que responden a las neurotrofinas poseen un peso molecular reducido común (65-80 kDa), receptor de afinidad baja (LNGFR), también conocido como p75NTR o p75, que se une a NGF, BDNF, NT-3 y NT-4/5 con una KD de 2x10"9 M; y receptores de gran peso molecular (130-150 kDa), de afinidad elevada (KD en el entorno de 10~11 M), que son miembros de la familia trk de tirosina cinasas receptoras. Los miembros identificados de la familia de receptores Trk son trkA, trkB y trkC. Tanto BDNF como NT-4/5 se unen a los receptores trkB y p75NTR con una afinidad similar. Sin embargo, los ratones con mutaciones en NT-4/5 y BDNF muestran unos fenotipos que contrastan bastante. Mientras que los ratones NT-4/5"'" son viables y fértiles y muestran únicamente una leve deficiencia sensorial, los ratones BDNF_ " mueren durante las etapas postnatales tempranas con graves deficiencias neuronales y síntomas en el comportamiento. Fan y cois., Nat. Neurosci. 3(4): 350-7, 2000; Liu y cois., Nature 375: 238-241 , 1995; Conover et al., Nature 375: 235-238, 1995; Emfors y cois., Nature 368: 147-150, 1994; Jones y cois., Cell 76: 989-999, 1994. Diversas publicaciones reseñan que NT-4/5 y BDNF presentan actividades biológicas distintas in vivo y sugieren que las diferentes actividades pueden derivarse en parte de la activación diferenciada del receptor trkB y sus rutas de señalización aguas abajo mediante NT-4/5 y BDNF. Fan y cois., Nat. Neurosci. 3(4): 350-7, 2000; Minichiello y cois., Neuron. 21 : 335-45, 1998; Wirth y cois., Development. 130(23): 5827-38, 2003; López y cois., n.° de programa 38.6, Resumen de 2003, Society for Neuroscience.

Se ha demostrado que tanto BDNF como NT-4/5 presentan actividad de control de la glucosa en sangre y de lipidos en sangre y actividad contra la obesidad en los modelos de animales con diabetes de tipo II, tales como los ratones C57 db/db. Patente de Estados Unidos n.° 6,391 ,312; Itakura y cois., Metabolism 49: 29-33 (2000); solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2005/0209148; WO 2005/082401 . También se ha demostrado que BDNF presenta actividad contra la obesidad y actividad en la mejora de la resistencia a la leptina en ratones alimentados con una dieta rica en grasas. La publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2003/0036512. Kernie y cois, reseña que BDNF o NT-4/5 podrían invertir de forma transitoria el comportamiento de alimentación y la obesidad en ratones sin BDNF heterocigóticos en los que se redujo la expresión del gen BDNF. Kemie y cois., EMBO J. 19(6): 1290-300, 2000. Se ha reseñado que una mutación antisentido de novo de la sustitución de Y722C en trkB humano produce una fosforilación de los receptores y señalización a MAP cinasa deficientes, y esta mutación parece provocar un síndrome especial humano de obesidad por hiperfagia. Yeo y cois., Nat. Neurosci., 7: 1 187-1 189 (2004). Se ha estudiado los niveles en circulación de BDNF en las personas con obesidad y en los pacientes con anorexia nervosa. Monteleone y cois. Psychosomatic Medicine 66: 744-748, 2004; Nakazato y cois., Biol. Psychiatry 54: 485-490, 2003. De forma contraria a la predicción que se basa en los hallazgos de que las deficiencias en la producción de BDNF en los ratones se han asociado a una mayor ingesta de alimentos, menor gasto de energía y aumento de peso, el BDNF está reducido de forma significativa en los pacientes de anorexia nervosa y aumentado significativamente en los sujetos obesos comparado con los controles sanos no obesos. Se ha planteado la hipótesis de que en la anorexia nervosa, la reducción de BDNF, al promover la ingesta de alimentos, intenta compensar las conductas alteradas de los pacientes que provocan un equilibrio negativo; y en la obesidad, los niveles aumentados de BDNF pueden representar un mecanismo de adaptación para compensar la condición de desequilibrio de energía positivo al estimular el gasto de energía y disminuir la ingesta de comida. Monteleone y cois., Psychosomatic Medicine 66: 74-748, 2004. Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente que se citan en el presente documento se incorporan por la presente por referencia en su totalidad para todos los fines con el mismo alcance que si se indicara de forma específica e individual que cada publicación, patente o solicitud de patente se incorpora por referencia.

BREVE SUMARIO DE LA INVENCION La presente invención proporciona procedimientos para aumentar el peso corporal y/o ingesta de alimentos mediante la administración periférica de un agonista para trkB, que incluye un agonista selectivo para trkB. Estos procedimientos pueden usarse para tratar o prevenir la pérdida de peso indeseada (tal como la de la caquexia o por el envejecimiento), trastornos alimentarios (tales como anorexia nervosa), y emesis inducida por opioides. En un aspecto, la invención proporciona procedimientos para aumentar el peso corporal en un primate que comprende administrar de forma periférica al primate de una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para aumentar la ingesta de alimentos e un primate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para tratar o prevenir caquexia en un primate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para mejorar, reducir la incidencia o retrasar el desarrollo o progresión de caquexia en un primate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para tratar pérdida de peso indeseada en un pnmate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto la invención proporciona procedimientos para mejorar, reducir la incidencia o retrasar el desarrollo o progresión de pérdida de peso indeseada en un primate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de a agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para tratar o prevenir anorexia nervosa en un primate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para mejorar, reducir la incidencia o retrasar el desarrollo o progresión de anorexia nervosa en un primate que comprende administrar de forma periférica al primate una cantidad eficaz de un agonista para trkB. En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para tratar o prevenir emesis inducida por opioides en un individuo que comprende administrar de forma periférica al individuo una cantidad eficaz de un agonista para trkB En otro aspecto, la invención proporciona procedimientos para mejorar, reducir la incidencia o retrasar el desarrollo o progresión de opioid-induced emesis en un individual que comprende administrar de forma periférica al individuo una cantidad eficaz de un agonista para trkB. El agonista para trkB se administra de forma periférica. Por ejemplo, el agonista para trkB puede administrarse por una de las siguientes vías: intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, parenteral, inhalación, intraarterial, intracardiaca, intraventricular y transdérmica. En algunas modalidades, el individuo es un primate. En algunas modalidades, el primate es un ser humano. El agonista para trkB que puede usarse para los procedimientos que se describen en el presente documento, incluye, pero sin limitación, polipéptido BDNF, polipéptido NT-4/5, y anticuerpos contra agonistas para trkB. En algunas modalidades, el agonista para trkB es NT-4/5 humano. En algunas modalidades, el agonista para trkB es BDNF humano. En otras modalidades, el agonista para trkB es un anticuerpo contra agonista para trkB, que incluye un anticuerpo contra agonista para trkB que es selectivo para trkB. En algunas modalidades, el anticuerpo contra trkB es humano o humanizado. En otro aspecto, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un agonista para trkB, que incluye un agonista selectivo para trkB y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas pueden usarse para tratar o prevenir cualquiera de las enfermedades que se describen en el presente documento. En otro aspecto, la invención proporciona kits que comprenden un agonista para trkB para usar en cualquiera de los procedimientos que se describen en el presente documento. En algunas modalidades, los kits comprenden un envase, una composición que comprende una cantidad eficaz de un agonista para trkB, combinado con un excipiente farmacéuticamente aceptable, e instrucciones para usar la composición en cualquiera de los procedimientos que se describen en el presente documento. En otro aspecto, la invención también proporciona procedimientos para generar un anticuerpo monoclonal agonista que se une específicamente y activa un receptor, que comprende las etapas de: (a) inmunizar un mamífero huésped con una molécula inmunógena que comprende un dominio extracelular del receptor inyectando la molécula inmunógena al mamífero al menos dos veces en aproximadamente 15 días. Los procedimientos pueden comprender además las etapas de fusionar células linfoides del mamífero inmunizado con una línea celular inmortalizada 5 produciendo hibridomas que segregan anticuerpos monoclonales; cultivar los hibridomas en las condiciones que permiten la secreción de anticuerpos monoclonales; y seleccionar un hibridoma que segrega un anticuerpo monoclonal que se une y activa el receptor. En algunas modalidades; el receptor es un receptor que requiere dimerización para su activación. I 0 BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica que muestra el efecto de infusión diaria de NT-4/5 sobre el peso corporal en babuinos hembra obesos. El eje X corresponde a los días en los que se midió el peso corporal y el eje Y corresponde al peso corporal medido en términos de porcentaje del inicial (peso corporal antes de iniciar ningún tratamiento). Se usó un ANOVA de dos vías para comparar el grupo tratado con NT-4/5 y el grupo con vehículo. Los datos indican que el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 era 0 significativamente diferente del el grupo tratado con vehículo (F = 50.71 , P<0.0001 ). Los análisis de Bonferroni post hoc mostraron una diferencia significativa entre pares del grupo tratado con NT-4/5 (triángulos negros) con el grupo tratado con vehículo (cuadrados blancos). * indica P<0.05; ** indica P<0.01 ; y *** indica P<0.001 tal como se indica en la gráfica. La Figura 2 es una gráfica que muestra el efecto de la infusión diaria de NT-4/5 sobre la ingesta de alimentos en babuinos hembra obesos. El eje X corresponde a los días en los que se midió la ingesta de alimentos y el eje Y corresponde al número de galletas ingeridas por cada babuino al día. Se usó un ANOYA de dos vías para comparar el grupo tratado con NT-4/5 con el grupo tratado con vehículo. Los datos indican que la ingesta de alimentos del grupo tratado con NT-4/5 fue significativamente diferente del grupo tratado con vehículo (F = 262.5. P<0.0001 ). Los análisis de Bonferroni post hoc mostraron una diferencia entre pares significativa del grupo tratado con NT-4/5 (triángulos negros) con el grupo tratado con vehículo (cuadrados blancos). La barra negra continua de la gráfica indica el periodo durante el cual la comparación pareada arrojó. una P<0.05 o inferior. La Figura 3 es una gráfica que muestra el efecto de la infusión de NT-4/5 dos veces a la semana sobre el peso corporal en babuinos hembra obesos. El eje X corresponde a los días en los que se midió el peso corporal y el eje Y corresponde al peso corporal medido en términos de porcentaje del inicial (peso corporal antes de ningún tratamiento). Se usó un ANOVA de dos vías para comparar el grupo tratado con NT-4/5 con el grupo tratado con vehículo. Los datos indicaron que el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 es significativamente diferente del grupo tratado con vehículo (F = 34.81 , P<0.0001 ). Los análisis de Bonferroni post hoc mostraron una diferencia entre pares significativa del grupo tratado con NT-4/5 (triángulos negros) con el grupo tratado con vehículo (cuadrados blancos). * indica P<0.05; y ** indica P<0.01 . La Figura 4 es una gráfica que muestra el efecto de la infusión de NT-4/5 dos veces a la semana sobre la ingesta de alimentos en babuinos hembra obesos. El eje X corresponde a los días en los que se midió la ingesta de alimentos y el eje Y corresponde al número de galletas ingeridas por babuino al día. La Figura 5 es una gráfica que muestra el efecto de la infusión de NT-4/5 diaria y de la infusión semanal pegilada de NT-4/5 sobre el peso corporal de macacos delgados. El eje X corresponde a los días en los que se midió el peso corporal y el eje Y corresponde al peso corporal medido en términos de porcentaje del inicial (peso corporal antes de ningún tratamiento). Se usó un ANOVA de dos vías para comparar el grupo tratado con NT-4/5 o con NT-4/5 pegilado (PEG-NT-4/5) con el grupo tratado con vehículo. Los datos indicaron que el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 pero no el grupo tratado con NT-415 pegilado, era significativamente diferente del grupo tratado con vehículo (F = 54.98, P<0.0001 ). Los análisis de Bonferroni post hoc mostraron una diferencia entre pares significativa del grupo tratado con NT-4/5 (triángulos) con el grupo tratado con vehículo (cuadrados) pero no entre el grupo tratado con NT-415 pegilado (triángulos invertidos) y el grupo tratado con vehículo. *** indica P<0.001 tal como se indica en la gráfica. La Figura 6 es una gráfica que muestra el efecto de la infusión de NT-4/5 diaria y de la infusión semanal pegilada de NT-4/5 sobre la ingesta de alimentos de macacos delgados. El eje X corresponde a los días en los que se midió la ingesta de alimentos y el eje Y corresponde a número de galletas ingeridas por mono al día. Se usó un ANOVA de dos vías para comparar el grupo tratado con NT-4/5 o con NT-4/5 pegilado (PEG-NT-4/5) con el grupo tratado con vehículo. Los datos indicaron que el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 pero no el grupo tratado con NT-415 pegilado, era significativamente diferente del grupo tratado con vehículo (F = 33.82, P<0.0001 ). Los análisis de Bonferroni post hoc mostraron una diferencia entre pares significativa del grupo tratado con NT-4/5 (triángulos) con el grupo tratado con vehículo (cuadrados) los días 15, 16, 17, 19, 22, 23, 25, y 50, pero no una diferencia pareada significativa entre el grupo con NT-4/5 pegilado (triángulos invertidos) y el grupo tratado con vehículo. La Figura 7 es una gráfica que muestra el efecto de la inyección subcutánea diaria con NT-4/5 y diaria con NT-4/5 pegilado sobre el peso corporal de macacos delgados. El eje X corresponde a los días en los que se midió el peso corporal y el eje Y corresponde al peso corporal medido en términos de porcentaje del inicial (peso corporal antes de ningún tratamiento). Se usó un ANOVA de dos vías para comparar el grupo tratado con NT-4/5 o con NT-4/5 pegilado (PEG-NT-4/5) con el grupo tratado con vehículo. Los datos indicaron que peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 era significativamente diferente del grupo tratado con vehículo (F=19.10, P<0.0001 ). Los análisis de Bonferroni post hoc mostraron una diferencia entre pares significativa del grupo tratado con NT-4/5 (triángulos) con el grupo tratado con vehículo (cuadrados), y entre el grupo de NT-4/5 pegilado (triángulos invertidos) y el grupo tratado con vehículo. *** indica P<0.001 ; y ** indica P<0.01 . La Figura 8 es una gráfica que muestra efecto de una inyección única de NT-4/5 sobre la emesis inducida por morfina en hurones. El eje X corresponde al tipo de fármaco inyectado; y el eje Y corresponde al número de arcadas y vómitos durante un periodo de 60 minutos después de la inyección. Se usó un ANOVA de una vía con un análisis posterior a las pruebas de Dunnett para el análisis estadístico. Los valores de P se indican en la gráfica. La Figura 9A y la Figura 9B muestran la inducción de C-Fos en rombencéfalo de hurón mediante NT-4/5. La Figura 9A muestra el número de núcleos que se tiñen mediante un anticuerpo contra c-Fos en el área postrema. La Figura 9B muestra el número de núcleos que se tiñen mediante un anticuerpo contra c-Fos en el núcleo vago dorsal. La Figura 10 muestra el nivel de fosforilación de tirosina para trkB en un ensayo KIRA mediante diversos anticuerpos contra trkB (36D1 , 38B8, 37D12, 19H8(1 ), 1 F8, 2388, 18H6) comparado con NT-4/5 humano. La Figura 1 1 muestra una gráfica de la supervivencia de neuronas nodosas soportada por diversos anticuerpos contra agonistas para trkB. El eje X representa las diferentes concentraciones de los anticuerpos contra trkB añadidos al cultivo de neuronas nodosas embrionarias en el día 15 (E1 5) obtenido a partir de ratones Swiss Webster. El eje Y representa el número de neuronas a las 48 horas del plaqueo. Cada punto es una media de cuatro determinaciones y las barras de error muestran la varianza entre esa media de una desviación típica. Los datos indican que algunos de los anticuerpos contra trkB analizados pueden apoyar la supervivencia de las neuronas nodosas y que la concentración eficaz al 50% (CE50) de estos anticuerpos en estas condiciones de cultivo varían entre menos de 0.1 a más de 10 pM (Véase el cuadro 1 ). La Figura 12A y la Figura 12B son gráficas que muestran el efecto de las inyecciones intracraneales de anticuerpos contra agonistas para trkB sobre el peso corporal (Figura 12A) y ingesta de alimentos (Figura 128) en ratones. Se inyectaron anticuerpos y NT-4/5 el día 0. Se midió el peso corporal y la ingesta de alimentos a diario hasta el día 5. ** indica P<0.001 comparado con la IgG murina de control; ** Indica P<0.01 comparado con la IgG murina de control; y * indica P<0.05 comparado con la IgG murina de control. La Figura 13A y La Figura 13B son gráficas que muestran el efecto de las inyecciones intravenosas periféricas de anticuerpo contra agonista para trkB sobre el peso corporal (Figura 13A) y la ingesta de alimentos (Figura 13B) en macacos. Los anticuerpos se inyectaron el día 1. El peso corporal se controló semanalmente y la ingesta de alimentos se controló a diario. *** indica P>0.001 comparado con un vehículo de control; ** indica P>0.01 comparado con un vehículo de control; y' * indica P>0.05 comparado con un vehículo de control.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención proporciona procedimientos para tratar o prevenir la pérdida de peso indeseada (tal como la asociada a la caquexia o al envejecimiento), trastornos alimentarios (tales como anorexia nervosa), y emesis inducida por opioides que comprende administrar un agonista para trkB a un individuo o un sujeto.

I. Técnicas generales La práctica de la presente invención empleará, a no ser que se indique lo contrario, técnicas convencionales de biología molecular (que incluyen técnicas recombinantes), microbiología, biología celular, bioquímica e inmunología, que están dentro del alcance de la técnica. Dichas técnicas se explican completamente en la bibliografía, como tales: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda edición (Sambrook, y cois., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, editor, 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, editor, 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.l. Freshney, editor, 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather y P.E. Roberts. 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doile, J.B. Griffiths, y D.G. Newell, editores, 1993-8) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir y C.C. Blackwell, editores); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller y M.P. Calos, editores, 1987); Current Protocols In Molecular Biology (F.M. Ausubel, y cois., editores, 1987); PCR: The Polimerase Chain Reaction (Mullís, y cois., editores, 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. coligan y cois, editores, 1991 ); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway y P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., editor, IRL Press, 1988- 1989); Monoclonal Antibodies: a practical approach (P. Shepherd y C. Dean, editores, Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: a laboratory manual (E. Harlow y D. Lañe (Cold Spring Harbor laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti y J.D, Capra, editores, Harwood Academia Publishers, 1995).

II. Definiciones Tal como se usa en el presente documento, "tratamiento" es una estrategia para obtener resultados clínicos beneficiosos o deseados. Para los fines de esta invención, resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, uno o más de los siguientes: mejorar, disminuir la gravedad, aliviar uno o más síntomas asociados a una enfermedad. Por ejemplo, para el tratamiento de caquexia y/o pérdida de peso indeseada, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, disminuir la gravedad y/o aliviar uno o más cualesquiera de los siguientes: pérdida de peso, lipólisís, pérdida de proteína muscular y visceral, anorexia (es decir, pérdida del apetito), menor ingestión de alimentos/calorías, nauseas crónicas, fatiga y debilidad. Para el tratamiento de anorexia nervosa, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, uno o más cualesquiera de los siguientes: mejora del apetito, atenuación del resentimiento por la comida, subida de peso, mantenimiento del estado nutricional normal, hidratación y equilibrio de electrolitos, mantenimiento del peso corporal para la edad y altura, reducción de la frecuencia y duración de la hospitalización, y reducción del riesgo de muerte. Para el tratamiento de emesis inducida por opioides, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, pero sin limitación, reducir la gravedad y/o acortar la duración de las nauseas y/o vómitos, permitiendo así los beneficios clínicos completos de la reducción del dolor inducida por opioides. "Mejorar" una enfermedad o uno o más síntomas de la enfermedad quiere decir reducir o mejorar uno o más síntomas asociados a la enfermedad relativos a la no administración de un agonista para trkB. "Mejorar" también incluye acortar o reducir la duración de un síntoma. "Reducir la incidencia" de una enfermedad quiere decir cualquiera de reducir la gravedad (que puede incluir reducir la necesidad y/o la cantidad (por ejemplo la exposición) de otros fármacos y/o tratamientos que se usan generalmente para esta afección), duración, y/o frecuencia (que incluye, por ejemplo, retrasar o aumentar el tiempo hasta el siguiente ataque episódico en un individuo). Tal como entienden los expertos en la técnica, los individuos pueden variar en cuanto a su respuesta al tratamiento, y, por ello, por ejemplo, un procedimiento de reducir la incidencia de una enfermedad en un individuo refleja administrar el agonista para trkB basándose en una expectación razonable de que dicha administración puede probablemente provocar dicha reducción en la incidencia en ese individuo particular. Tal como se usa en el presente documento, "retrasar" el desarrollo de una enfermedad quiere decir diferir, entorpecer, ralentizar, retrasar, estabilizar y/o posponer la progresión de la enfermedad. Este retraso puede ser de unas cantidades de tiempo variables, dependiendo de la historia de la enfermedad y/o de los individuos que se estén tratando. Tal como es evidente para una persona de experiencia en la técnica, un retraso suficiente o significativo puede, de hecho, comprender la prevención, porque el individuo no desarrolla la enfermedad (por ejemplo, caquexia, anorexia nervosa y emesis inducida por opioides). Un procedimiento que "retrasa" el desarrollo del síntoma es un procedimiento que reduce la probabilidad de desarrollar el síntoma en un margen de tiempo dado y/o reduce la duración de los síntomas en un margen de tiempo dado, comparado con no usar el procedimiento. Dichas comparaciones se basan habitualmente en estudios clínicos, usando un número estadísticamente significativo de sujetos. "Desarrollo" o "progresión" de una enfermedad quiere decir manifestaciones iniciales y/o progresión posterior del trastorno. El desarrollo de una enfermedad puede ser detectable y evaluarse usando técnicas clínicas estándar notorias en la técnica. Sin embargo, el desarrollo también se refiere a una progresión que puede no ser detectable. Para los fines de esta invención, el desarrollo o progresión se refiere al transcurso biológico de los síntomas. "Desarrollo" incluye aparición, reaparición e inicio. Tal como se usa en el presente documento "inicio" o "aparición" de una enfermedad incluye inicio primero y/o reaparición. Tal como se usa en el presente documento, una "dosis eficaz" o "cantidad eficaz" de fármaco, compuesto, o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para producir resultados beneficiosos o deseados. Para el uso profiláctico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados tales como eliminar o reducir el riesgo, disminuir la gravedad o retrasar el inicio de la enfermedad, que incluye los síntomas bioquímicos, histológicos y/o del comportamiento de la enfermedad, sus complicaciones y los fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de Iña enfermedad. Para el uso terapéutico, los resultados beneficiosos o deseados incluyen resultados clínicos tales como reducir la intensidad, duración, o frecuencia del ataque de la enfermedad, y disminuir uno o más síntomas producidos por la enfermedad (bioquímicos, histológicos y/o del comportamiento), que incluyen sus complicaciones y fenotipos patológicos intermedios que se presentan durante el desarrollo de la enfermedad, aumentar la calidad de vida de los que padecen la enfermedad, disminuir la dosis de otras medicaciones necesarias para tratar la enfermedad, potenciar el efecto de otra medicación, y/o retrasar la progresión de la enfermedad de los pacientes. Una dosis eficaz puede administrarse en una o más administraciones. Para los fines de esta invención, una dosis eficaz de fármaco, compuesto, o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para lograr un tratamiento profiláctico o terapéutico ya sea de forma directa o indirecta. Tal como se entiende en el contexto clínico, una dosis eficaz de un fármaco, compuesto, o composición farmacéutica puede no lograrse junto con otro fármaco, compuesto, o composición farmacéutica. Así, una "dosis eficaz" puede considerarse en el contexto de administrar uno o más agentes terapéuticos, y un único agente puede considerarse que se administra en una cantidad eficaz si, junto con otro u otros agentes, puede lograrse o se logra un resultado deseable. Un "individuo" o un "sujeto" es un mamífero, más preferiblemente, un ser humano. Los mamíferos también incluyen, pero sin limitación, animales de granja, animales de deportes, primates (que incluyen seres humanos), caballos, perros, gatos, ratones y ratas. Un "agonista para trkB" se refiere a un agente que es capaz de unirse y activar un receptor trkB y/o ruta(s) aguas abajo mediadas por la función de señalización para trkB. Por ejemplo, el agonista puede unirse al dominio extracelular de un receptor trkB y así provocar la dimerización del receptor, provocando la activación del dominio de la cinasa catalítica intracelular. En consecuencia, esto puede provocar la estimulación del crecimiento y/o diferenciación de las células que expresan el receptor in vitro y/o in vivo. En algunas modalidades, un agonista para trkB se une a trkB y activa una actividad biológica para trkB. "Actividad biológica", cuando se usa junto con el agonista para trkB de la presente invención, generalmente se refiere a tener la capacidad de unirse y activar el receptor trkB y/o una ruta aguas abajo mediada por la función de señalización para trkB. Tal como se usa en el presente documento, "actividad biológica" engloba una o más funciones efectoras en común con las inducidas por la acción de NT-4/5 y/o BDNF, el ligando nativo para trkB, en una célula que expresa trkB. Sin limitación, las actividades biológicas incluyen uno o más cualesquiera de los siguientes: capacidad de unirse y activar trkB; capacidad de promover la dimerización del receptor trkB; la capacidad de promover el desarrollo, la supervivencia, función, mantenimiento y/o regeneración de células (que incluyen las células dañadas), en particular neuronas in vitro o in vivo, que incluyen neuronas periféricas (simpáticas, sensoriales, motoras y entéricas) y neuronas centrales (cerebro y médula espinal), células no neuronales, por ejemplo leucocitos de sangre periférica, células endoteliales y células de musculatura lisa vascular. Una actividad biológica preferida particular es la capacidad de aumentar el peso corporal y/o la ingesta de alimentos en un primate cuando se administra de forma periférica, para tratar (incluyendo la prevención) uno o más síntomas de caquexia y anorexia nervosa en un primate, y/o tratar (incluyendo la prevención) uno o más síntomas de la emesis inducida por opioides en un mamífero. Un "anticuerpo contra un agonista para trkB" (denominado de forma intercambiable "anticuerpo contra un agonista para trkB") se refiere a un anticuerpo que es capaz de unirse y activar un receptor trkB y/o ruta(s) aguas abajo mediadas por la función de señalización para trkB. Por ejemplo, el anticuerpo contra un agonista puede unirse al dominio extracelular de un receptor trkB y provocar así la dimerización del receptor, provocando la activación del dominio de cinasa. Consecuentemente, esto puede provocar la estimulación del crecimiento y/o diferenciación de las células que expresan el receptor in vitro y/o in vivo. En algunas modalidades, un anticuerpo contra un agonista para trkB se une a trkB y activa una actividad biológica para trkB. Tal como se usa en el presente documento, "administración periférica" o "administrado periféricamente", se refiere a introducir un agente en un sujeto fuera del sistema nervioso central (SNC) o de la barrera hematoencefálica (BHE). La administración periférica engloba cualquier vía de administración distinta de la administración directa a la médula espinal o el cerebro. La administración periférica puede ser local o sistémica. Un "anticuerpo" es una molécula de ¡nmunoglobulina capaz de unirse específicamente a una diana, tal como un carbohidrato, polinucleótído, lípido, polipéptido, etc., a través de al menos un sitio de reconocimiento de antígenos, localizado en la región variable de la molécula de la inmunoglobulina. Tal como se usa en el presente documento, el término engloba no sólo los anticuerpos policlonales o monoclonales intactos, sino también sus fragmentos (tales como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), monocatenarios (ScFv), sus mutantes, las proteínas de fusión que comprenden una porción de a nticuerpo (tales como anticuerpos de dominio), y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprende un sitio de reconocimiento de antígenos. Un anticuerpo incluye un anticuerpo de cualquier clase, tales como IgG, IgA, o IgM (o una subclase del mismo), y el anticuerpo no tiene que ser de ninguna clase particular. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo del dominio constante de sus cadenas pesadas, las inmunoglobulinas pueden asignarse a clases diferentes. Hay cinco clases principales de inmunoglobulinas; IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y varias de estas pueden dividirse además en subclases (isotipos), por ejemplo, IgG 1 , lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 e lgA2. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan alfa, delta, épsilon, gamma, y mu, respectivamente. Las estructuras subunitarias y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son notorias. Tal como se usa en el presente documento, "anticuerpo monoclonal" se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos a excepción de las posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en cantidades minoritarias. Los anticuerpos monoclonales son muy específicos, dirigiéndose contra un único sitio antigénico. Además, al contrario que con las preparaciones de anticuerpos policlonales, que habitualmente incluyen anticuerpos diferentes dirigidos contra determinantes (epitopos) diferentes, cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante del antígeno. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo que se obtiene a partir de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos, y es no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo mediante ningún procedimiento particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a usar de acuerdo con la presente invención pueden prepararse mediante el procedimiento de hibridomas que describieron por vez primera Kohler y Milstein, 1975, Nature, 256: 495, o pueden prepararse mediante procedimientos de recombinación de ADN tales como los que se describen en la patente de Estados Unidos n.° 4,816,567. Los anticuerpos monoclonales también pueden aislarse a partir de colecciones de fagos usando las técnicas que se describen en McCafferty y cois., 1990. Nature, 348: 552-554, por ejemplo. Tal como se usa en el presente documento, anticuerpos "humanizados" se refiere a formas de anticuerpos no humanos (por ejemplo murinos) que son inmunoglobulinas quiméricas específicas, cadenas de inmunoglobulinas, o sus fragmentos (tales como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 u otras subsecuencias de anticuerpos que se unen a antígenos) que contienen secuencias mínimas derivadas de inmunoglobulína no humana. En su mayoría, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los restos de una región determinante de la complementariedad (CDR) del receptor se sustituye por restos de una CDR de una especie no humana (anticuerpo donante) tal como un ratón, rata o conejo que tiene la especificidad, afinidad y actividad biológica deseadas. En algunos casos, los restos de la región estructural (FR) Fv de la inmunoglobulína humana se sustituyen por los residuos no humanos correspondientes. Además, el anticuerpo humanizado puede comprender residuos que no se encuentran ni en anticuerpo receptor ni en las secuencias de CDR importadas ni en las secuencias estructurales, pero se incluyen para refinar y optimizar más el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos de al menos uno, y habitualmente dos dominios variables, en los que todas o sustancialmente todas las regiones de CDR corresponden a las de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son las de una región consenso de la inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado óptimamente también comprenderá al menos una porción de una región o dominio constante (Fe) de inmunoglobulina, habitualmente la de una inmunoglobulina humana. Los anticuerpos pueden tener regiones Fe modificadas tal como se describe en el documento WO 99/58672. Otras formas de anticuerpos humanizados tienen una o más CDR (una, dos, tres, cuatro, cinco, seis) que se alteran con respecto al anticuerpo original, que también se denominan una o más CDR "derivadas a partir de" una o más CDR del anticuerpo original. Tal como se usa en el presente documento "anticuerpo humano" quiere decir un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos que corresponde a la de un anticuerpo producido por un ser humano y/o se ha preparado usando cualquiera de las técnicas para preparar anticuerpos humanos conocidos en la técnica o descritos en el presente documento. Esta definición de un anticuerpo humano incluye anticuerpos que comprenden al menos un polipéptido de cadena pesada humana o al menos un polipéptido de cadena ligera. Uno de tales ejemplos es un anticuerpo que comprende polipéptidos de cadena ligera murina y cadena pesada humana. Los anticuerpos humanos pueden producirse usando diversas técnicas conocidas en la técnica. En una modalidad, el anticuerpo humano se selecciona a partir de una colección de bacteriófagos, donde dicha colección de bacteriófagos expresa anticuerpos humanos (Vaughan y cois., 1996, Nature Biotechnology, 1 4: 309-314; Sheets y cois., 1998, PNAS, (USA) 95: 6157-6162; Hoogenboom y Winter, 1991 , J. Mol. Biol., 227: 381 ; Marks y cois., 1991 ,J. Mol. Biol. 222: 581 ). Los anticuerpos humanos también pueden prepararse induciendo locus de inmunoglobulina en animales transgénicos, por ejemplo, ratones en los que los genes de la inmunoglobulina endógenos se han inactivado parcial o completamente. Esta estrategia se describe en las patentes de Estados Unidos n.° 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825: 5,625, 126; 5,633,425; y 5,661 ,016. De forma alternativa, el anticuerpo humano puede prepararse inmortalizando linfocitos B humanos que producen un anticuerpo dirigido contra un antígeno diana (dichos linfocitos B pueden recuperarse de un individuo o pueden haberse inmunizado in vitro). Véase, por ejemplo, Cote y cois., Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1 985): Boemer y cois. 1991 , J. Immunol., 147 (1 ): 86-95; y la patente de Estados Unidos n.° 5,750,373. Una región variable de un anticuerpo se refiere a la región variable de la cadena ligera del anticuerpo o la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea solas o combinadas. Las regiones variables de la cadena pesada y ligera están constituidas cada una por cuatro regiones estructurales (FR) conectadas por tres regiones determinantes de la complementariedad (CDR) también conocidas como regiones hipervariables. Las CDR de cada cadena se mantienen juntas muy próximas mediante las FR y, con las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión de antígenos de los anticuerpos. Hay al menos dos técnicas para determinar las CDR: (1 ) una estrategia que se basa en la variabilidad de las secuencias entre especies (es decir, Kabat y cois. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5a edición, 1991 , National Institutes of Health, Bethesda MD); y (2) una estrategia basada en estudios cristalográficos de complejos entre antígeno y anticuerpo (Al-lazikani y cois. (1997) J. Molec. Biol. 273: 927-948)). Tal como se usa en el presente documento, una CDR puede referirse a CDR definidas por cualquiera de las dos estrategias o por una combinación de ambas estrategias. Una "región constante" de un anticuerpo se refiere a la región constante de la cadena ligera del anticuerpo o de la región constante de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o combinada. Un epítopo que "se une de forma preferencial" o "que se une de forma específica" (se usan de forma intercambiable en el presente documento) a un anticuerpo o un polipéptido es un término bien entendido en la técnica, y los procedimientos para determinar dicha unión específica o preferencial también son notorios en la técnica. Una molécula se dice que muestra "unión específica" o "unión preferencial" si reacciona o se asocia más frecuentemente, más rápidamente, con mayor duración y/o con mayor afinidad con una célula o sustancia particular que con células o sustancias alternativas. Un anticuerpo se une "de forma específica" o se une "de forma preferencial" o se une "de forma selectiva" a una diana si se une con mayor afinidad, avidez, más fácilmente y/o con mayor duración de lo que se une a otras sustancias. Por ejemplo, un anticuerpo que se une de forma específica o preferencial a un epítopo para trkB es un anticuerpo que se une a este epítopo con mayor afinidad, avidez, más fácilmente y/o con mayor duración de lo que se une a otros epítopos para trkB o epítopos distintos para trkB. También se entiende al leer esta definición que, por ejemplo, un anticuerpo (o resto o epítopo) que se une de forma específica o de forma preferencial a una primera diana puede unirse o no de forma especifica o de forma preferencial a una segunda diana. Por lo tanto, unión "específica" o unión "preferencial" o unión "selectiva" de un anticuerpo a trkB no requiere necesariamente (aunque puede incluir) unión exclusiva. Generalmente, pero no necesariamente, cuando se hace referencia a unión selectiva a trkB se quiere decir unión preferencial (por ejemplo, unión con una Cl50 a una concentración de al menos 3, 5, o, preferiblemente, al menos 10 veces o 100 veces menor para trkB que a otros receptores). El término "región Fe" se usa para definir una región del extremo C de una cadena pesada de inmunoglobulina. La "región Fe" puede ser una región de secuencia nativa de Fe o una región variable de Fe. Aunque los límites de la región Fe de una cadena pesada de inmuno-globulina pueden variar, la región de la cadena pesada de IgG humana se define habitualmente como un tramo desde un residuo de aminoácido de la posición Cys226, o desde Pro230, a su extremo carboxilo. La numeración de los restos de la región Fe es la del índice EU de Kabat. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5a edición, 1991 , National Institutes of Health, Bethesda MD, 1991 . La región Fe de una inmunoglobulina generalmente comprende dos dominios constantes CH2 y CH3. Tal como se usa en el presente documento, "receptor Fe" y "FcR" describen un receptor que se une a la región Fe de un anticuerpo. El FcR es una un FcR humano de secuencia nativa. Además, una FcR preferida es una que se une a un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FCyRI, FCyRIl, FCYRI II y FCyRIV, que incluyen variantes de alelos y formas con ayustes alternativos de estos receptores. Los receptores FCyRIl incluyen FCyRIIA (un "receptor activador") y FCyRIIB (un "receptor inhibidor"), que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en sus dominios citoplasmáticos. Los FcR se revisan en Ravetch y Kinet, 1991 , Ann. Rev. Immunol., 9: 457-92; Capely cois., 1004. Immunomethods, 4: 25-34; de Haas y cois., 1995, J. Lab. Clin. Med. , 126: 330-41 ; Nimmerjahn y cois. 2005, Immunity 23: 2-4. Los "FcR" también incluyen el receptor neonatal, FcRn, que es responsable de la transferencia de las IgG maternas al feto (Guyer y cois., 1976, J. Immunol., 1 1 7: 587; y Kim y cois. , 1994, J. Immunol. , 24: 249).

"Citotoxicidad dependiente de complemento" y "CDC" se refiere a la lisis de una diana en presencia de complemento. La ruta de activación del complemento se inicia mediante la unión del primer componente del sistema de complemento (C1 q) a una molécula (por ejemplo un anticuerpo) que forma complejos con un antígeno cognado. Para evaluar la activación del complemento puede realizarse un ensayo de CDC, por ejemplo tal como se describe en Gazzano-Santoro y cois., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996). Una "región Fe funcional" posee al menos una función efectora de una secuencia Fe nativa. "Funciones efectoras" ejemplares incluyen unión de C1 q; citotoxicidad dependiente de complemento (CDC); unión del receptor Fe; citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC); fagocitosis; regulación por disminución de los receptores de la superficie celular (por ejemplo receptor de linfocitos B; BCR), etc. Dichas funciones efectoras generalmente requieren combinar la región Fe con un dominio de unión (por ejemplo un dominio variable de anticuerpo) y puede evaluarse usando diversos ensayos conocidos en la técnica para evaluar dichas funciones efectoras de los anticuerpos. Una "región Fe de secuencia nativa" comprende una secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia de aminoácidos de una región Fe que se encuentra en la naturaleza. Una "región Fe variable" comprende una secuencia de aminoácidos que difiere de de una región Fe de secuencia nativa en virtud de al menos una modificación de un aminoácido pero que aún mantiene una función efectora de la región Fe de la secuencia nativa.

Preferiblemente, la región Fe variable tiene al menos una sustitución de aminoácido comparada con una región Fe de secuencia nativa o con la región Fe de un polipéptido progenitor, por ejemplo de aproximadamente uno a aproximadamente diez sustituciones de aminoácidos, y preferiblemente de aproximadamente uno a aproximadamente cinco sustituciones de aminoácidos de una región Fe de secuencia nativa o de la región Fe de un polipéptido progenitor. La región Fe variable en el presente documento preferiblemente poseerá al menos aproximadamente una identidad de secuencia del 80% con una región Fe de secuencia nativa y/o con una región Fe de un polipéptido progenitor, y lo más preferiblemente al menos aproximadamente una identidad de secuencia del 90% con ella, más preferiblemente, una identidad de secuencia de al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 96%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98%, al menos aproximadamente 99% con ella. Tal como se usa en el presente documento "citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos" y "ADCC" se refieren a una reacción mediada por células en las que células citotóxicas no específicas que expresan receptores Fe (FcR) (por ejemplo linfocitos citolíticos naturales (NK), neutrófilos, y macrófagos) reconocen el anticuerpo unido en una célula diana y posteriormente provocan la lisis de la célula diana. La actividad de ADCC de una molécula de interés puede evaluarse usando un ensayo de ADCC in vitro, tal como el que se describe en la patente de Estados Unidos n.° 5,500,362 o 5,821 ,337. Las células efectoras útiles para dichos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y linfocitos NK. De forma alternativa, o además, la actividad de ADCC de la molécula de interés puede evaluarse in vivo, por ejemplo, en un modelo animal tal como los que se describen en Clynes y cois., 1998, PNAS (USA), 95: 652-656. Tal como se usa en el presente documento, "vehículo farmacéuticamente aceptable" o "excipiente farmacéuticamente aceptable" incluyen cualquier material que, cuando se combina con un principio activo, permite al ingrediente mantener su actividad biológica y no reacciona con el sistema inmunitario del sujeto, Los ejemplos incluyen, pero sin limitación, cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándar tales como solución salina tamponada con fosfato, agua, emulsiones tales como emulsión de aceite/agua y diversos tipos de agentes humectantes. Los diluyentes preferidos para la administración en aerosol o parenteral son solución salina tamponada con fosfato o solución salina normal (0.9%). Las composiciones que comprenden dichos vehículos se formulan mediante procedimientos convencionales notorioes (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, A. Gennaro, editor, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; y Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20a edición, Mack Publishing, 2000). Los términos "polipéptido", "oligopéptido", "péptido" y "proteína" se usan de forma intercambiable en el presente documento para referirse a polímeros de aminoácidos de cualquier longitud. El polímero puede ser lineal o ramificado, puede comprender aminoácidos modificados, y puede estar interrumpido por moléculas distintas de aminoácidos. Los términos también engloban un polímero aminoacídico que se ha modificado de forma natural o mediante intervención; por ejemplo, formación de enlaces disulfuro, glucosilación, lipidación, acetilación, fosforilación o cualquier otra manipulación de modificación, tal como conjugación con un componente de marcado. También se incluyen en la definición, por ejemplo, polipéptidos que contienen uno o más análogos de un aminoácido (que incluye, por ejemplo, aminoácidos no naturales, etc.), así como otras modificaciones conocidas en la técnica. Se entiende que, debido a que los polipéptidos de esta invención tienen como base un anticuerpo, los polipéptidos puedan aparecer en forma de cadenas únicas o de cadenas asociadas. "Polinucleótido", o "ácido nucleico," tal como se usan de forma intercambiable en el presente documento, se refieren a polímeros de nucleotidos de cualquier longitud, e incluyen ADN y ARN. Los nucleotidos pueden ser desoxiribonucleótidos, ribonucleótidos, nucleotidos modificados o bases, y/o sus análogos, o cualquier sustrato que pueda incorporarse a un polímero mediante la ADN o ARN polimerasa. Un polinucleótido puede comprender nucleotidos modificados, tales como nucleotidos metilados y sus análogos. Si la hubiera, la modificación de la estructura del nucleótido puede realizarse antes o después del ensamblaje del polímero. La secuencia de nucleotidos puede estar interrumpida por componentes distintos de los nucleotidos. Un polinucleótido puede modificarse adicionalmente tras la polimerización, por ejemplo mediante conjugación con un componente de marcado. Otros tipos de modificaciones incluyen, por ejemplo, "caperuzas", sustitución de uno o más de los nucleótidos naturales por un análogo, modificaciones internucleotídicas tales como, por ejemplo, las de enlaces no cargados (por ejemplo, metilfosfonatos, fosfonatos, fosfotriésteres, fosfoamidatos, carbamatos, etc.) y con enlaces cargados (por ejemplo, fosforotioatos, fosforoditioatos, etc.), los que contienen restos pendientes, tales como, por ejemplo, proteínas (por ejemplo, nucleasas, toxinas, anticuerpos; péptidos de señal, ply-L-lisina, etc.), los que tienen intercaladores (por ejemplo, acridina, psotalen, etc.), los que contienen quelantes (por ejemplo, metales, metales radioactivos, boro, metales oxidativos, etc.), los que contienen alquiladores, los que tienen enlaces modificados (por ejemplo, ácidos nucleicos alfa anoméricos, etc.), así como formas no modificadas de los polinucleótido(s). Además, pueden sustituirse cualesquiera grupos hidroxilo que habitualmente están presentes en los azúcares, por ejemplo, mediante grupos fosfonato, grupos fosfato, grupos protegidos mediante grupos protectores estándar o activados para preparar enlaces adicionales a nucleótidos adicionales, o pueden estar conjugados a soportes sólidos. El OH de los extremos 5' y 3' puede estar fosforilado o sustituido con aminas o restos de grupos caperuza orgánicos de 1 a 20 átomos de carbono. También pueden derivarse otros hidroxilos a grupos protectores estándar. Los polinucleótidos también pueden contener formas análogas de azúcares de ribosa o desoxirribosa que se conocen de forma genral en la técnica, que incluyen, por ejemplo, 2'-O-met¡l-, 2 -O-alilo, 2'- fluoro- o 2'-az¡dorribosa, análogos de azúcares carbocíclicas, azúcares D-anoméricas, azúcares epiméricas tales como arabinosa, xilosas o lixosas, azúcares de piranosa, azúcares de furanosa, sedoheptulosas, análogos acíclicos y análogos de nucleósidos abásicos tales como metilhbósido. Uno o más enlaces fosfodiéster pueden sustituirse mediante grupos de enlace alternativos. Estos grupos de enlace alternativos incluyen, pero sin limitación, modalidades en las que el fosfato es sustituido por P(0)S ("tioato") P(S)S ("ditioato"), (0)NR2 ("amidato"), P(0)R, P(0)OR', CO o CH2 ("formacetal"), en los que cada R o R' es independientemente H o alquilo (1 -20 C) sustituido o no sustituido que opcionalmente contiene un enlace éter (-0-), arilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquenilo o araldilo. No todos los enlaces de un polinucleótido tienen que se idénticos. La descripción precedente se aplica a todos los polinucleotidos a los que se hace referencia en el presente documento, que incluyen ARN y ADN. Tal como se usa en el presente documento, "sustancialmente puro" se refiere un material que es puro al menos al 50% (es decir, libre de contaminantes), más preferiblemente, puro al menos al 90%, más preferiblemente, puro al menos al 95%, más preferiblemente, puro al menos si 98%, más preferiblemente, al menos 99% puro. Una "célula huésped" incluye una célula individual o un cultivo celular que puede ser o ha sido receptora de vector(es) para la incorporación de insertos polinucleotídicos. Las células huésped incluyen la progenie de una única célula huésped y la progenie pueden no ser necesariamente completamente idénticas (en morfología o en complemento de ADN genómico) a la célula progenitora original debido a una mutación natural, accidental, o deliberada. Una célula huésped incluye células transfectadas in vivo con un polinucleótido(s) de esta invención. Tal como se usa en el presente documento, "vector" quiere decir una construcción, que es capaz de administrar y preferiblemente expresar uno o más gen(es) o secuencia(s) de interés en una célula huésped. Ejemplos de vectores incluyen, pero sin limitación, vectores virales, vectores de expresión de ADN o ARN desnudo, plásmidos, cósmicos o vectores bacteriófagos, vectores de expresión de ADN o ARN asociados a agentes de condensación catiónicos, vectores de expresión de ADN o ARN encapsulados en liposomas y ciertas células eucariotas, tales como células productoras. Tal como se usa en el presente documento, "secuencia de control de la expresión" quiere decir una secuencia de ácido nucleico que dirige la transcripción de un ácido nucleico. Una secuencia de control de la expresión puede ser un promotor, tal como un promotor constitutivo o inducible, o un potenciador, La secuencia de control de la expresión está ligada operablemente a la secuencia de ácido nucleico a transcribir. El término "Kon", tal como se usa en el presente documento, se pretende que se refiera a la constate de velocidad de asociación de un anticuerpo a un antígeno. El término "Koff ", tal como se usa en el presente documento, se pretende que se refiera a la constante de velocidad de la disociación de un anticuerpo del complejo de anticuerpo/antígeno". El término "KD", tal como se usa en el presente documento, se pretende que se refiera a la constante de disociación en el equilibro de la interacción entre anticuerpo y antigeno interacción. Tal como se usa en el presente documento, la forma singular "uno", "una", y "la/el" incluye referencias en plural a no ser que se indique lo contrario.

III. Procedimientos de la Invención La presente invención engloba procedimientos para aumentar el peso corporal y/o la ingesta de alimentos mediante la administración periférica de un agonista para trkB. Estos procedimientos pueden usarse para tratar o prevenir la pérdida de peso indeseada (tal como caquexia) y trastornos alimentarios (tales como anorexia nervosa) en primates, y la emesis inducida por opioides en mamíferos; El procedimiento implica la administración periférica de una cantidad eficaz de uno más agonistas para trkB a un individuo que lo necesite (en el presente documento se describen diversas indicaciones y aspectos). Con respecto a todos los procedimientos que se describen en el presente documento, cuando se hace referencia a agonistas para trkB también incluye composiciones que comprenden uno o más de estos agentes. Estas composiciones pueden comprender además excipientes adecuados, tales como excipientes farmacéuticamente aceptables que incluyen tampones, que son notorios en la técnica. La presente invención puede usarse sola o combinada con otros procedimientos de tratamiento convencionales. La caquexia que puede tratarse y/o prevenirse mediante los procedimientos que se describen en el presente documento pueden ser provocados y/o asociarse a uno o más de los siguientes: enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfermedad renal crónica (ERC), insuficiencia cardíaca crónica (ICC), envejecimiento cáncer y SIDA. En algunas modalidades, los pacientes humanos que presentan caquexia tratada o que presentan pérdida de peso indeseada tratada tienen un Índice de masa corporal (IMC, calculado en términos de peso corporal por altura en metros cuadrados (kg/m2)) inferior a aproximadamente cualquiera de 25.0 kg/m2, 24.0 kg/m2, 23.0 kg/m2, 22.0 kg/m2, 21 .0 kg/m2, 20.0 kg/m2, 19.0 kg/m2, y 18.5 kg/m2. En algunas modalidades, os pacientes humanos que presentan caquexia tratada o que presentan pérdida de peso indeseada tratada tienen una ingesta de alimentos diaria inferior a aproximadamente 90%, aproximadamente 80%. aproximadamente 70%, aproximadamente 60%, aproximadamente 50%, aproximadamente 40%, aproximadamente 30%, aproximadamente 20%, o aproximadamente 10% del nivel de ingesta diaria normal recomendada o nivel premórbido. En algunas modalidades, los pacientes humanos que presentan anorexia nervosa tratada mediante los procedimientos que se describen en el presente documento tienen un IMC inferior a cualquiera de aproximadamente 18.5 kg/m2, 1 7.5 kg/m2, y 16.5 kg/m2 En algunas modalidades, los pacientes humanos que presentan anorexia nervosa tratada tienen una ingesta de alimentos diaria inferior a aproximadamente 90%, aproximadamente 80%, aproximadamente 70%, aproximadamente 60%, aproximadamente 50%, aproximadamente 40%, aproximadamente 30%, aproximadamente 20%, o aproximadamente 10% del nivel de ingesta diaria normal recomendada o nivel premórbido. El agonista para trkB se administra de forma periférica. Se entiende que aunque el agente se administra de forma periférica, un pequeño porcentaje del a agente puede atravesar la barrera hematoencefálica y provocar la administración al sistema nervioso central dependiendo de las propiedades del agente. En algunas modalidades, se administra menos de cualquiera de aproximadamente 1 %, aproximadamente 0.5%, aproximadamente 25% y aproximadamente 0.1 % del agonista para trkB que se administra de forma periférica (por ejemplo, anticuerpo contra el agonista para trkB) llega al SNC. El agonista para trkB puede administrarse a un Individuo mediante cualquier vía periférica adecuada. Debería ser obvio para una persona de experiencia en la técnica que los ejemplos que se describen en el presente documento no se pretende que sean limitantes sino que sean ilustrativos de las técnicas disponibles. Por consiguiente, en algunas modalidades, el agonista para trkB se administra a un individuo de acuerdo con procedimientos conocidos, tales como administración intravenosa, por ejemplo, de forma embolada o mediante infusión continua durante un periodo de tiempo, por vía intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, intrarticular, sublingual, intrasinovial, mediante insuflación, oral, inhalación o tópica. La administración puede ser sistémica, por ejemplo, administración intravenosa o localizada. Los nebulizadores disponibles comercialmente para las formulaciones líquidas, que incluyen nebulizadores de chorro y nebulizadores ultrasónicos son útiles para la administración. Las formulaciones líquidas pueden nebulizarse directamente y el polvo liofilizado puede nebulizarse tras la reconstitución. De forma alternativa, al agonista para trkB puede dársele forma de aerosol usando una formulación de fluorocarbono y un inhalador dosificador o inhalarse en forma de un polvo liofilizado y molido. Un agonista para trkB puede administrarse mediante técnicas de administración local específicas de sitio o dirigidas fuera del SNC o de la barrera hematoencefálica. Los ejemplos de técnicas de administración local específicas de sitio o dirigidas incluyen diversas fuentes depot implantables del agonista para trkB o catéteres de administración local, tales como catéteres de infusión, un catéter interno o un catéter de aguja, injertos sintéticos, apositos adventicios, derivaciones y prótesis u otros dispositivos implantables, vehículos específicos de sitio, inyección directa, o aplicación directa. Véase, por ejemplo la publicación de PCT n.° WO 00/5321 1 y la patente de Estados Unidos n.° 5,981 ,568. Pueden usarse diversas formulaciones de agonistas para trkB para la administración. En algunas modalidades, un agonista para trkB puede administrarse puro. En otras modalidades, se administra un agonista para trkB y un excipiente farmacéuticamente aceptable y puede estar en diversas formulaciones. Los excipientes farmacéuticamente aceptables son notorios en la técnica, y son sustancias relativamente inertes que facilitan la administración de a una sustancia farmacológicamente eficaz. Por ejemplo, un excipiente puede dar forma o consistencia, o actuar como diluyente. Los excipientes adecuados incluyen, pero sin limitación, agentes estabilizantes, agentes humectantes y emulsionantes, sales para variar la osmolalidad, agentes de encapsulado, tampones y potenciadotes de la penetración cutánea. Los excipientes así como las formulaciones para la administración parenteral y no parenteral de fármacos se describen Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20a edición, Mack Publishing, (2000). Generalmente, estos agentes se formulan para la administración mediante inyección (por ejemplo, por vía intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intramuscular, etc.), aunque también pueden usarse otras formas de administración (por ejemplo, oral, mucosa, transdérmica, inhalación, etc.). La posología particular, es decir, la dosis, el tiempo y la repetición dependerán del individuo particular y de la historia clínica de ese individuo, de la enfermedad particular (por ejemplo, caquexia, pérdida de peso indeseada, anorexia nervosa, y emesis inducida por opioides) a tratar y el agonista para trkB particular. De forma general, pueden usarse cualquiera de las siguientes dosis de agonista para trkB (por ejemplo, NT-4/5, BDNF, y un anticuerpo contra agonista para trkB): se administra una dosis de al menos aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 2 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 1 mg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 750 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 500 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 250 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 100 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 50 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 10 pg/kg de peso corporal; al menos aproximadamente 1 pg/kg de peso corporal o más. Las consideraciones empíricas, tales como la semivida, generalmente contribuirán a determinar la dosis. Para las administraciones repetidas en varios días o más, dependiendo de la afección, el tratamiento se mantiene hasta que se produce la deseada supresión de los síntomas de la enfermedad o hasta que se logran unos niveles terapéuticos suficientes. Por ejemplo, se contempla la administración de una a cinco veces a la semana. Otras pautas de administración incluyen una posología de hasta 1 vez al día, de 1 a 5 veces a la semana o menos frecuente. En algunas modalidades, el agonista para trkB se administra aproximadamente una vez a la semana, aproximadamente de 1 a 4 veces al mes. Puede usarse una pauta de administración intermitente con administraciones escalonadas separadas por de 2 días hasta 7 días o incluso 14 días. En algunas modalidades, el tratamiento puede iniciarse con una dosis diaria y cambiar después a una administración semanal e incluso mensual. El progreso de este tratamiento se controla fácilmente mediante técnicas y ensayos convencionales. En algunos individuos, puede ser necesaria más de una dosis. La frecuencia de la administración puede determinarse y ajustarse durante el transcurso del tratamiento. Por ejemplo, la frecuencia de la administración puede determinarse o ajustarse basándose en el tipo y gravedad de la enfermedad a tratar, independientemente de que el agente se administre con fines de prevención o terapéuticos, el tratamiento previo, la historia clínica del paciente y la respuesta al agente, y el juicio del médico a cargo. Habitualmente, el médico administrará un agonista para trkB hasta que se alcance una dosis que logre el resultado deseado. En algunos casos, puede ser apropiado el uso de formulaciones de liberación continua mantenida de agonista para trkB. En la técnica se conocen diversas formulaciones y dispositivos para lograr la liberación mantenida. Por ejemplo, el agonista para trkB puede administrarse mediante una bomba mecánica o embebido en un lecho matricial para la liberación mantenida o lenta. En una modalidad, las dosis de un agonista para trkB pueden determinarse de forma empírica en individuos a los que se les ha practicado una o más administraciones. Se administra a los individuos dosis crecientes de un agonista para trkB. Para evaluar la eficacia de un agonista para trkB, pueden controlarse los marcadores del estado de la enfermedad. Será obvio para una persona de experiencia en la técnica que la dosis variará dependiendo del individuo, la etapa de la enfermedad (tal como caquexia, anorexia nervosa y emesis inducida por opioides), y los tratamientos pasados y concurrentes que se estén usando. La administración de un agonista para trkB de acuerdo con el procedimiento de la presente invención puede ser continua o intermitente, dependiendo, por ejemplo, del estado fisiológico del receptor, de si el fin de la administración es terapéutico o profiláctico, y de otros factores conocidos por los practicantes expertos. La administración de un agonista para trkB puede ser esencialmente continua durante un periodo de tiempo seleccionado o puede ser en una serie de dosis espaciadas. Otras formulaciones adecuadas incluyen formas de administración adecuadas conocidas en la técnica que incluyen, pero sin limitación, vehículos tales como liposomas. Véase, por ejemplo, Mahato y cois. (1997) Pharm. Res. 14: 853-859. Las preparaciones liposómicas incluyen, pero sin limitación, citofectinas, vesículas multilaminares y vesículas unilaminares. La evaluación de la enfermedad se realiza usando procedimientos estándar conocidos en la técnica, por ejemplo, controlando el/los marcador(es) apropiado(s). Por ejemplo, para la caquexia, pueden controlarse los siguientes marcadores: peso corporal, albúmina en plasma, grasa corporal, masa del cuerpo delgado, fatiga, debilidad y apetito. Para la anorexia nervosa, pueden controlarse los siguientes marcadores: peso corporal, apetito y miedo a aumentar de peso. Para la emesis inducida por opioides pueden controlarse los siguientes marcadores: nauseas, vómitos, apetito, peso corporal, y otras complicaciones médicas asociadas.

IV. Composiciones y procedimientos de preparar las composiciones Los procedimientos de la invención usan un agonista para trkB, que se refiere a cualquier molécula que se une y activa el receptor trkB nativo y/o las rutas aguas abajo mediadas por la función de señalización para trkB. El agonista para trkB incluye cualquier ligando nativo de un receptor trkB, tal como NT-4/5 y BDNF. El agonista para trkB también incluye un ligando no nativo (por ejemplo, polipéptidos, compuesto derivados de péptidos, moléculas derivadas de péptidos cíclicos o derivadas de moléculas diferentes de los péptido) de un receptor trkB que se une y activa un receptor trkB nativo, imitando así una actividad biológica de un ligando nativo del receptor. Un ejemplo de ligandos no nativos de un receptor trkB es un anticuerpo contra un agonista para trkB. Los agonistas para trkB también incluyen moléculas pequeñas o peptidomiméticos (por ejemplo, péptidomiméticos de BDNF). Véase, por ejemplo, O'Leary y cois., J. Biol. Chem. 278: 25738-44, 2003. En algunas modalidades, el agonista para trkB de molécula pequeña no atraviesa de forma significativa la barrera hematoencefálica cuando se administra de forma periférica. Un agonista para trkB debería mostrar una o más cualesquiera de las siguientes características: (a) unirse a un receptor trkB; (b) unirse a un receptor trkB y activar la(s) actividad(es) biológica(s) para trkB y/o una o más rutas aguas abajo mediadas por la(s) función(es) de señalización para trkB; (c) unirse a un receptor trkB y aumentar el peso corporal y/o la ingesta de alimentos en un primate cuando se administra de forma periférica; (d) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de caquexia o pérdida de peso indeseada en un primate cuando se administra de forma periférica; (e) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la anorexia nervosa en un primate cuando se administra de forma periférica; (f) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la emesis inducida por opioides en un mamífero cuando se administra, de forma periférica: (g) promover la dimerización y activación del receptor trkB; y (h) aumentar la supervivencia neuronal dependiente del receptor trkB y/o el crecimiento de neuritas. En algunas modalidades, el agonista para trkB se une y activa el receptor trkB, pero no activa significativamente o de forma preferencial otro u otros receptores trk, tales como trkA y/o trkC. El agonista para trkB puede estar en forma de una composición para usar en cualquiera de los procedimientos que se describen en el presente documento. La composición que se usa en los procedimientos de la invención comprende una cantidad eficaz de un agonista para trkB. La composición puede comprender además vehículos, excipientes, o estabilizantes farmacéuticamente aceptables (Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20a edición (2000) Lippincott Williams y Wilkins, editor K. E. Hoover,), en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas.

Los vehículos, excipientes o estabilizantes adecuados son no tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones, y pueden comprender tampones tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos tales como metil o propilparabén; catecol; resorcinol; ciciohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 restos); proteínas, tales como albúmina de suero; gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparragina, histidina, arginína, o lísina; monosacáridos, disacárídos, y otros carbohidratos que incluyen glucosa, mañosa o dextranos; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; iones conjugados que forman sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo complejos de Zn y proteína); y/o tensíoactivos no iónicos tales como TWEEN™ , PLURONICS ™o polietilenglicol (PEG). Los excipientes farmacéuticamente aceptables se describen adícionalmente en el presente documento. Los agonistas para trkB que se describen en el presente documento pueden formularse para la liberación mantenida. Ejemplos adecuados de preparaciones de liberación mantenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen agonista para trkB, matrices que están en forma de artículos conformados, por ejemplo películas o microcápsulas. Ejemplos de matrices de liberación mantenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato) o poli(alcohol de vinílo)), poliláctidas(patente de Estados Unidos n.° 3,773,919), copolímeros de ácido L-glutámico y 7-etíl-Lglutamato, etilen-acetato de vinilo no degradable, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólíco degradables tales como el LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas por copolímero de ácido láctico-ácido glicólíco y acetato de leuprolida), acetato ¡sobutírato de sacarosa y ácido polí-D-(-)-3-hidroxibutílico. Otro ejemplo de sistema de liberación de fármacos de liberación mantenida que puede usarse es el ATRIGEL® fabricado por Atrix Laboratorios. Véase, por ejemplo la patente de Estados Unidos n.° 6,565,874. El sistema de administración de fármacos ATRIGEL® está constituido por polímeros biodegradables, similares a los que se usan en los suturas biodegradables, disueltos en vehículos biocompatible. Los agonistas para trkB pueden mezclarse en este sistema de administración líquido en el momento de la fabricación o, dependiendo del producto, pueden ser añadidos después por el médico en el momento del uso. Cuando se inyecta el producto líquido por vía subcutánea o intramuscular mediante una aguja de calibre pequeño o se introduce en sitios de tejidos accesibles a través de una cánula, el desplazamiento del vehículo con agua en los fluidos del tejido hace que el polímero precipite formando una película o implante sólido. Los agonistas para trkB encapsulados en el implante se liberan después de forma controlada al irse degradando la matriz polimérica con el tiempo. Dependiendo de las necesidades médicas del paciente, el sistema Atrigel puede administrar proteínas durante un periodo que varía en el intervalo desde días a meses. También pueden usarse sistemas de liberación mantenida inyectables, tales como ProLease®, Medisorb®, fabricados por Alkermes. En algunas modalidades, la invención proporciona composiciones (que se describen en el presente documento) para usar en cualquiera de los procedimientos que se describen en el presente documento, ya sea en el contexto de uso como medicamento y/o uso para la fabricación de un medicamento.

Polipéptidos NT-4/5 El agonista para trkB que se usan en los procedimientos de la invención incluye polipéptidos NT-4/5. Tal como se usa en el presente documento "polipéptido NT-4/5" incluye proteína madura natural (que se denomina de forma intercambiable "NT 4/5") tal como la NT-4/5 humana madura que se muestra en el Cuadro 1 más adelante, y en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2005/0209148 y PCT WO 2005/08240 y la Figura 1 de la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 20030203383 y las variantes de secuencias de aminoácidos naturales de NT-4/5; variantes de las secuencias de aminoácidos de NT-4/5; fragmentos peptídicos de NT-4/5 madura (tal como humana) y variantes de secuencias de aminoácidos; y formas modificadas de NT-4/5 madura y dichas variantes de secuencias de aminoácidos y fragmentos peptidicos en los que el polipéptido o péptido se ha modificado covalentemente mediante sustitución con un resto distinto de un aminoácido natural, en tanto en cuanto la variante de la secuencia de aminoácidos, el fragmento peptídico y la forma modificada del mismo muestren una o más actividades biológicas de un agonista para trkB y/o de proteína NT-4/5 madura natural. El agonista para trkB también incluye proteínas de fusión y conjugados que comprenden cualquiera de las modalidades de polipéptido NT-4/5 que se describen en el presente documento, por ejemplo, un polipéptido NT-4/5 conjugado o fusionado con un resto que aumente la semivida, tal como PEG, región Fe de IgG, albúmina o un péptido. Las variantes de secuencias de aminoácidos, los fragmentos peptidicos (que incluyen fragmentos de variantes), o formas modificadas del mismo consideradas no incluyen NGF, BDNF, o NT-3 de ninguna especie animal. Las variantes, fragmentos peptidicos, y formas modificadas de NT-4/5 natural se describen en las publicaciones de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2003/0203383: 2002/0045576; 2005/0209148; las patentes de Estados Unidos n.° 5,702,906; 6,506,728; 6,566,091 ; 5,830,858. Los polipéptidos NT-4/5 incluyen una o más cualesquiera de las modalidades que se describen en el presente documento. Por ejemplo, el polipéptido NT-4/5 comprende una secuencia natural con una o más inserciones, deleciones, o sustituciones de aminoácidos.

CUADRO 1 Secuencia de aminoácidos de NT-4/5 humano maduro y la secuencia de nucleótidos humana de NT-4/5 humano maduro Secuencia de aminoácidos (SEC. ID. N.°: 1 ): GVSETAPASRRGELAVCDAVSGWVTDRRTAVDLRGREVEVLGEVPAAGGSPLRQYFFETR CKADNAEEGGPGAGGGGCRGVDRRHWVSECKAKQSYVRALTADAQGRVG R ÍRÍDTACVC TLLSRTGRA Secuencia de nucleótidos (SEC. ID. N.°: 2): GGGGTGAGCG AAACTGCACCAGCGAGTCGTCGGGGTGAGCTGGCTGTGTGCGATGCAGTC AGTGGCTGGGTGACAGACCGCCGGACCGCTGTGGACTTGCGTGGGCGCGA GGTGGAGGTGTTGGGCGAGGTGCCTGCAGGTGGCGGCAGTCCCCTCCGCC AGTACTTCTTTGAAACCCGCTGCAAGGCTGATAACGCTGAGGAAGGTGGC CCGGGGGCAGGTGGAGGGGGCTGCCGGGGAGTGGACAGGAGGCACTGGGT ÁTCTGAGTGCAAGGCCAAGCAGTCCTATGTGCGGGCATTGACCGCTGATG- CCCAGGGCCGTGTGGGCTGGCGATGGATTCGAATTGACACTGCCTGCGTC TGCACACTCCTCAGCCGGACTGGCCGGGCCTGAG En algunas modalidades, el polipéptido NT-4/5 es un polipéptido NT-4/5 de mamífero que puede ser un NT-4/5 de mamífero natural, o un polipéptido NT-4/5 que se deriva a partir de NT-4/5 de mamífero natural y que tiene una secuencia que no corresponde a ninguna parte de NT-4/5 que no sea de mamífero natural. En algunas modalidades, el polipéptido NT-4/5 es un polipéptido NT-4/5 humano que puede ser un NT-4/5 humano natural, o un polipéptido NT-4/5 derivado de un NT-4/5 humano natural y que tiene una secuencia que no corresponde a ninguna parte de un NT-4/5 no humano natural. Los Polípéptídos NT-4/5, que incluye variantes, fragmentos peptídicos. formas modificadas de polipéptidos NT-4/5 (que incluyen NT-4/5 natural), proteína de fusión y conjugado de la invención se caracterizan por cualesquiera (una o más) de las siguientes características: (a) unirse a un receptor trkB; (b) unirse a un receptor trkB y activar la(s) actívidad(es) biológica(s) para trkB y/o una o más rutas aguas abajo mediadas por la(s) función(es) de señalización para trkB; (c) unirse a un receptor trkB y aumentar el peso corporal y/o la ingesta de alimentos en un primate cuando se administra de forma periférica; (d) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de caquexia o pérdida de peso indeseada en un primate cuando se administra de forma periférica; (e) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la anorexia nervosa en un primate cuando se administra de forma periférica; (f) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la emesis inducida por opioides en un mamífero cuando se administra, de forma periférica: (g) promover la dimerizacíón y activación del receptor trkB; y (h) aumentar la supervivencia neuronal dependiente del receptor trkB y/o el crecimiento de neuritas. Así todos los polipéptidos NT-4/5 (que incluyen variantes, fragmentos, y formas modificadas) son funcionales tal como se describe anteriormente. La actividad biológica de las variantes puede analizarse in vitro e in vivo usando procedimientos conocidos en la técnica y procedimientos que se describen en el presente documento. También pueden usarse los procedimientos que se describen en el presente documento para identificar un agonista contra trkB. Los polipéptidos NT-4/5 pueden presentar una actividad potenciada o una actividad reducida comparados con una proteína NT-4/5 natural. En algunas modalidades, las variantes funcionalmente equivalentes presentan al menos aproximadamente cualquiera de 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, o 95% de actividad comparadas con la proteína NT-4/5 nativa de la que se deriva el polipéptido NT-4/5 con respecto a uno o más de los ensayos biológicos que se describen anteriormente (o que se conocen en la técnica). En algunas modalidades, las variantes funcionalmente equivalentes tienen una CE50 (la mitad de la concentración mínima eficaz) de menos de aproximadamente cualquiera de 0.01 nM, 0.1 nM, 1 nM, 10 nM o 1 00 nM en la activación del receptor trkB in vitro (por ejemplo ensayos que se describen en el Ejemplo 6, y en los documentos US 2005/0209148 y PCT WO 2005/082401 ). Las variantes de secuencias de aminoácidos de NT-4/5 incluyen polipéptidos que tienen una secuencia de aminoácidos que difiere de NT-4/5 natural por la inserción, deleción y/o sustitución de uno o más restos aminoacídicos de la secuencia de NT-4/5 natural (por ejemplo, NT-4/5 humano maduro que se muestra en el Cuadro 1 ). Las variantes de secuencias de aminoácidos generalmente serán al menos aproximadamente 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idénticas a cualquier NT-4/5 natural (tal como NT-4/5 humano maduro que se muestra en la SEC. ID. N .°: 1 ). En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 70% a la secuencia de aminoácidos de la SEC. ID.

N.°: 1 . En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 85% a la secuencia de aminoácidos de la SEC. ID. N.°: 1 . En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 90% a la secuencia de aminoácidos de la SEC. ID. N.°: 1 . En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 95% a la secuencia de aminoácidos de la SEC. ID. N.°: 1 . Las variantes de secuencias de aminoácidos de NT-4/5 pueden generarse realizando mutaciones predeterminadas a un ADN de NT-4/5 previamente aislado. Las variantes de aminoácidos pueden diseñarse y generarse basándose en la estructura cristalina de NT-4/5 y del receptor trkB, Banfield y cois., Structure 9: 1 191 -9 (2001 ). Por ejemplo, los aminoácidos que no están directamente implicados en la interacción entre los monómeros de NT-4/5 y entre NT-4/5 y el receptor trkB pueden mutarse, por ejemplo, para introducir un sitio de unión de PEG. Pueden usarse procedimientos conocidos en la técnica para diseñar variantes de polipéptidos NT-4/5 que presentan una o más actividades biológicas potenciadas o reducidas comparadas con la proteína NT-4/5 natural. Existen dos variables principales a considerar a la hora de realizar dichas mutaciones predeterminadas: la localización del sitio de mutación y la naturaleza de la mutación. En general, la localización y la naturaleza de la mutación que se elige generalmente dependen de la característica de NT-4/5 a modificar. Por ejemplo, los antagonistas o superagonistas de NT-4/5 pueden seleccionarse inicialmente localizando los restos aminoacídicos que son idénticos o están muy conservados entre NGF, BDNF, NT-3, y NT-4. Esos restos después pueden modificarse in serie, por ejemplo, (1 ) sustituyendo primero con elecciones conservadoras y después con selecciones más radicales dependiendo de los resultados que se logren, (2) eliminando el resto diana, o (3) insertando restos de la misma clase o una diferente adyacentes al sitio localizado o combinaciones de las opciones 1-3. Una técnica de utilidad se denomina "escaneado con ala". Aquí, se identifica un resto aminoacídico o un grupo de restos diana y se sustituyen por alanina o polialanina. Después se definen los dominios que demuestran una sensibilidad funcional a las sustituciones con alanina introduciendo más variantes u otras en o por los sitios de la sustitución por alanina. Obviamente, dichas variaciones que, por ejemplo, convierten NT-4/5 en NGF, BDNF o NT-3 no están incluidas en el alcance de esta invención. Así, aunque el sitio para introducir una variación de la secuencia de aminoácidos es predeterminado, la naturaleza de la mutación per se no tiene porqué ser predeterminada. Por ejemplo, para optimizar el funcionamiento de una mutación en un sitio dado, se realiza un escaneado con ala o una mutagénesis aleatoria en el codón o región diana y las variantes de NT-4/5 se tamizan para determinar la actividad deseada. Las deleciones de secuencias de aminoácidos generalmente varían en el intervalo desde aproximadamente 1 a 30 restos, más preferiblemente, de aproximadamente 1 a 10 restos, y habitualmente son contiguas. Las deleciones pueden introducirse en regiones de baja homología entre BDNF, NGF, NT-3 y NT-4/5 para modificar la actividad de NT-4/5. Las deleciones de NT-4/5 en áreas de homología sustancial con BDNF, NT-3, y NGF pueden tener una mayor probabilidad de modificar la actividad biológica de NT-4/5 de forma más significativa. El número de deleciones consecutivas puede seleccionarse de forma que se conserve la estructura terciaria de NT-4/5 en el dominio afectado, por ejemplo, lámina plegada beta o hélice alfa. Las inserciones en las secuencias de aminoácidos incluyen fusiones en los extremos amino y/o carboxilo que varían en longitud desde un resto a polipéptidos que contienen mil o más restos, así como inserciones intrasecuencia de un único o de múltiples restos aminoacídicos. Las inserciones intrasecuencia (es decir, inserciones en la secuencia de NT-4/5 madura) pueden variar generalmente desde aproximadamente 1 a 10 restos, más preferiblemente, de 1 a 5, lo más preferiblemente 1 a 3. Un ejemplo de una inserción terminal incluye la fusión de una secuencia de señal heteróloga en el extremo N en el extremo N de la molécula de NT-4/5 para facilitar la secreción de NT-4/5 maduro por el huésped recombinante. Dichas señales generalmente serán homologas a la célula huésped que se pretenda e incluyen STII o Ipp para E. coli, factor alfa para levaduras y señales víricas tales como gD de herpes para las células de mamíferos. Otras inserciones incluyen la fusión de un polipéptido en el extremo N o C de NT-4/5. Otro grupo de variantes incluye aquellas en las que se ha eliminado al menos un resto aminoacídico de NT-4/5, y preferiblemente sólo uno, y se inserta un resto diferente en su lugar. Un ejemplo es la sustitución de arginina y lisina por otros aminoácidos para hacer que NT-4/5 sea resistente a la proteólisis por las serina proteasas, creando así una variante de NT-4/5 que es más estable. Los sitios de mayor interés para la mutagénesis por sustitución incluyen sitos en los que los aminoácidos que se encuentran en BDNF, NGF, NT-3, y NT-4 son sustancialmente diferentes en términos de volumen, carga o hidrofobicidad de la cadena lateral, pero en los que también existe un alto grado de homología en el sitio seleccionado entre diversos análogos animales de NGF, NT-3, y BDNF (por ejemplo entre todos los NGF animales, todos los NT-3 animales y todos los BDNF animales). Este análisis destacará los restos que pueden estar implicados en la diferenciación de la actividad de los factores tróficos y por lo tanto, las variantes en estos sitios pueden afectar dichas actividades. Los ejemplos de dichos sitios en NT-4/5 humano maduro numerados a partir del extremo N y las sustituciones ejemplares incluyen G77 a K, H, Q o R y R84 a E, F, P, Y o W de NT-4/5 de la SEC. ID. N.°: 1 , respectivamente. Otros sitios de interés son aquellos en los que los restos son idénticos entre los BDNF, NGF, NT-3, y NT-4/5 de todas las especies animales. Este grado de conformación sugiere la importancia de lograr una actividad biológica común a los cuatro factores. Por ejemplo, la sustitución de uno o más aminoácidos incluye sustituciones conservadoras. Los procedimientos de realizar sustituciones conservadoras son conocidos en la técnica. Por ejemplo, ala (A) puede sustituirse por val, leu, ile, preferiblemente por val; arg (R) puede sustituirse por lys, gln, asn, preferiblemente por lys; asn (N) puede sustituirse por gln, his, lys, arg, preferiblemente por gln; asp (D) puede sustituirse por glu; cys (C) puede sustituirse por ser; gln (O) puede sustituirse por asn; glu (E) puede sustituirse por asp; gly (G) puede sustituirse por pro; his (H) puede sustituirse por asn, gln, lys, arg; preferiblemente por arg; ile (I) puede sustituirse por leu, val, met, ala, phe, norleucina, preferiblemente por leu; leu (L) puede sustituirse por norleucina, ile, val, met; ala; phe, preferiblemente por ile; lys (K) puede sustituirse por arg; gln, asn, preferiblemente por arg; met (M) puede sustituirse por leu; phe; ile,- preferiblemente por leu; phe (F) puede sustituirse por leu, val, ile, ala, preferiblemente por leu; pro (P) puede sustituirse por gly; ser (S) puede sustituirse por thr; thr (T) puede sustituirse por ser; trp (W) puede sustituirse por tyr, tyr (Y) puede sustituirse por trp, phe, thr, ser, preferiblemente por phe; val (V) puede sustituirse por ile; leu; met; phe, ala; norleucina, preferiblemente por leu. Los sitios particularmente adecuados para las sustituciones conservadoras incluyen, numerados a partir del extremo N de la NT-4 humana madura (SEC. ID. N.°: 1 ), R1 1 , G12, E13, V16, D18, W23, V24, D26, V40, L41 , Q54, Y55, F56, E58, T59, G77, R79, G80, H85, W86, A99, L100, ?10? , W1 10, R1 1 1 , W1 12. 11 13, R1 14, 11 15, D1 16, y A1 18. Los restos de cisterna no implicados en el mantenimiento de la conformación adecuada de NT-4/5 también pueden sustituirse, generalmente con serina, para mejorar la capacidad oxidativa de la molécula y prevenir entrecruzamientos aberrantes. Los sitios distintos de los que se describen en este párrafo son adecuados para los estudios de deleción o de inserción que se describen anteriormente. Pueden lograrse modificaciones sustanciales seleccionando sustituciones que difieren significativamente en su efecto sobre el mantenimiento de (a) la estructura del esqueleto del polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo, en forma de conformación en lámina o en hélice, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio diana, o (c) el volumen de la cadena lateral. Los restos naturales están divididos en grupos basándose en las propiedades comunes de las cadenas laterales (algunos de estas pueden corresponder a diversos grupos funcionales): (1 ) hidrófobos: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrófilos neutros: cys, ser, thr; (3) ácidos: asp, glu; (4) básicos: asn, gln, his, lys, arg; (5) restos que influyen la orientación de la cadena: gly, pro; y (6) aromáticos: trp, tyr, phe. Las sustituciones no conservadoras supondrán intercambiar un miembro de una de estas clases por otro. Ejemplos de variantes incluyen de NT-4: el polipéptido de la SEC. ID. N.°: 1 con mutación de E67 a S o T (esto añade un sitio de glucosilación ligado en N); el polipéptido del resto aminoacídico R83 a Q94, G1 a C61 , G1 a C1 7, C17 a C61 , G17 a C78, C17 a C90, C17 a C1 19, C17 a C121 , R1 1 a R27, R1 1 a R34, R34 a R53, C61 a C78, R53 a C61 , C61 a C1 19, C61 a C78, C78 a C1 19, C61 a C90, R60 a C78, K62 a C1 19, K62 a K91 , R79 a R98, R83 a K93, ?? 01 a R1 1 1 , G1 a C121 de la SEC. ID. N.°: 1 ; el polipéptido comprende V40-C121 de la SEC. ID. N.°: 1 , por ejemplo, V40-C121 de la SEC. ID. N.°: 1 fusionado a un polipéptido en el extremo N y/o en el extremo C; el polipéptido que comprende la SEC. ID. N.°: 1 con deleción de C78, C61 , Q54- T59, R60-D82, H85-S88, W86-T101 (las deleciones del tramo de restos que se indica, inclusive); la SEC. ID. N.°: 1 con mutación de R53 a H, de K91 a H, de V108 a F, de R84 a Q, H, N, T, Y o W, y de D1 16 a E, N, Q, Y, S o T. También se incluye NT-4/5 (SEC. ID. N.°: 1 ) en el que la posición 70 está sustituida con un resto aminoacídico distinto de G, E, D o P; la posición 71 con otro aminoácido distinto de A, P o M; y/o la posición 83 con otro aminoácido distinto de R, D, S o K; así como fragmentos ciclados de NT-4. Se dice que dos secuencias de polinucleótidos o polipéptido s son "idénticas" si la secuencia de nucleótidos o aminoácidos de las dos secuencias es la misma cuando se alinean para una correspondencia máxima tal como se describe más adelante. Las comparaciones entre dos secuencias habitualmente se realizan comparando las secuencias en una ventana de comparación para identificar y comparar las regiones locales de similitud de las secuencias. Una "ventana de comparación" tal como se usa en el presente documento, se refiere a un segmento de al menos aproximadamente 20 posiciones contiguas, 30 a aproximadamente 75, 40 a aproximadamente 50, en el que puede compararse una secuencia con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de alinear las dos secuencias de forma óptima. La alineación óptima de secuencias para su comparación puede realizarse usando el programa de Megalign de la serie de programas de Lasergene de software bioinformática (DNASTAR, Inc., Madison, Wl), usando los parámetros por defecto. Este programa incluye diversos esquemas de alineación que se describen en las siguientes referencias: Dayhoff, M.O. ( 1978) A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relacioneships. En Dayhoff, M.O. (editor) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Supl. 3, páginas 345-358; Hein J. 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes páginas 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. y Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5: 1 51 -153; Myers, E. W. y Muller W., 1988, CABIOS 4: 1 1-17; Robinson, E.D., 1 971 ; Comb. Theor. 1 1 : 105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4: 406-425; Sneath, P.H.A. y Sokal, RR., 1973. Numerical Taxonomy: The Principies and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, VV.J. y Lipman, D.J., 1983, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80: 726-730. Preferiblemente, el "porcentaje de identidad de las secuencias" se determina comparando dos secuencias alineadas de forma óptima en una ventana de comparación de al menos 20 posiciones, en la que la porción de la secuencia de polinucleótidos o polipéptidos de la ventana de comparación pueden comprender adiciones o deleciones (es decir huecos) del 20 por ciento o menos, habitualmente de 5 a 1 5 por ciento, o 10 a 12 por ciento, con respecto a las secuencias de referencia (que no comprenden adiciones o deleciones) para la alineación óptima de las dos secuencias. El porcentaje se calcula determinando el número de posiciones en las que se encuentran las bases de ácido nucleico bases o restos aminoacidicos idénticos en ambas secuencias para obtener el número de posiciones que coinciden, dividiendo el número de posiciones que coinciden entre el número total de posiciones de la secuencia de referencia (es decir, el tamaño de la ventana) y multiplicando los resultados por 100 para obtener el porcentaje de identidad de las secuencias. Las variantes de las secuencias de aminoácidos de NT-4/5 pueden ser naturales o pueden prepararse sintéticamente, tal como introduciendo cambios de nucleótidos apropiados en un ADN de NT-4/5 previamente aislado o mediante síntesis in vitro de la variante de polipéptido que se desee. Tal como se indica anteriormente, dichas variantes pueden comprender deleciones, o inserciones o sustituciones, de uno o más restos aminoacidicos dentro de la secuencia de aminoácidos de NT-4/5 maduro (por ejemplo, la secuencia que se muestra en el Cuadro 1 ). Se realiza cualquier combinación de deleción, inserción, y sustitución para obtener una variante de secuencia de aminoácidos de NT-4/5, con la condición de que la variante de polipéptido posea una característica deseada. Los cambios de aminoácidos también pueden producir modificaciones adicionales de NT-4/5 tras la expresión en huéspedes recombinantes, por ejemplo introduciendo o moviendo sitios de glucosilación, o introduciendo secuencias de anclaje a la membrana (véase, por ejemplo, el documento PCT WO 89/01041 ). En algunas modalidades, el polipéptido NT-4/5 comprende una secuencia de aminoácidos codificada por un ácido nucleico que se híbrida en condiciones restrictivas a una secuencia de ácido nucleico (por ejemplo, la SEC. ID. N.°: 2) que codifica NT-4/5 humano maduro. Las variantes de polinucleótidos también, de forma alternativa, pueden ser sustancialmente homologas a un gen nativo, o a una porción o complemento del mismo. Dichas variantes de polinucleótidos pueden hibridarse en condiciones moderadamente restrictivas con una secuencia de ADN natural que codifica el polipéptido (o una secuencia complementaria). Las "condiciones moderadamente restrictivas" adecuadas incluyen prelavado en una solución de 5 X SSC, 0.5% DE SDS, EDTA 1 .0 mM (pH 8.0); hibridación a 50 °C-65 °C, 5 X SSC, toda la noche; seguido de lavado dos veces a 65 °C durante 20 minutos con cada una de las 2X, 0.5X y 0.2X SSC que contienen 0.1 % de SDS. Tal como se usa en el presente documento, "condiciones muy restrictivas" o "condiciones de alta restricción" son aquellas que: (1 ) emplean una potencia iónica baja y una temperatura elevada para lavar, por ejemplo cloruro sódico 0.015 M, citrato sódico 0.0015 M, dodecilsulfato sódico al 0.1 % a 50 °C; (2) emplean durante la hibridación un agente desnaturalizador, tal como formamida, por ejemplo, 50% (v/v) de formamida con 0.1 % de albúmina de suero bovina/0.1 % de Ficoll/0.1 % de polivinilpierrolidona/tampón de fosfato sódico 50 mM a pH 6.5 con cloruro sódico 750 mM, citrato sódico 75 mM a 42 °C; o (3) emplean formamida al 50%, 5 X SSC (NaCI 0.075 M, citrato sódico 0.075 M), fosfato sódico 50 mM (pH 6.6), 0.1 % de pirofosfato sódico, 5 x solución de Denhardt, ADN de esperma de salmón sometido a ultrasonidos (50 pg/ml), 0.1 % de SDS, y 10% de sulfato de dextrano a 42 °C, con lavados a 42 °C en 0.2 x SSC (cloruro sódico/citrato sódico y 50% de formamida a 55 °C, seguido de un lavado muy restrictivo que consiste en 0.1 x SSC que contiene EDTA a 55 °C. Otras condiciones de hibridación restrictivas ejemplares en 50% de formamida, 5 x SSC, 0.1 % de dodecilsulfato sódico, 0.1 % de pirofosfato sódico, fosfato sódico 50 mM a pH 6.8, 2 x solución de Denhardf, y 10% de sulfato de dextrano a 42 °C, seguido de un lavado en 0.1 x SSC y 0.1 % de SDS a 42 °C. La persona de experiencia reconocerá cómo ajusfar la temperatura, la potencia iónica, etc. según sea necesario para acomodar factores tales como la longitud de la sonda y similares. Las personas de experiencia ordinaria en la técnica apreciarán que, como resultado de la degeneración del código genético, existen muchas secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido tal como se describe en el presente documento. Algunos de setos polinucleotidos tienen una homología mínima con la secuencia de nucleótidos de cualquier gen nativo. Sin embargo, los polinucleotidos que varían debido a diferencias en el uso de los codones están contemplados de forma específica por la presente invención. Además, los alelos de los genes que comprenden las secuencias de polinucleotidos que se proporcionan en el presente documento están dentro del alcance de la presente invención. Los alelos son genes endógenos que se alteran como resultado de una o más mutaciones, tales como deleciones, adiciones y/o sustituciones de nucleótidos. El ARNm y la proteína resultantes pueden tener, pero no necesariamente, una estructura o función alterada. Los alelos pueden identificarse usando técnicas estándar (tales como hibridación, amplificación y/o comparación entre las secuencias de bases de datos). Los agonistas para trkB que se usan en los procedimientos de la invención también incluyen proteínas de fusión que comprenden la secuencia de aminoácidos de NT-4/5 (por ejemplo, NT-4/5 humana que se muestra en el Cuadro 1 ) o un fragmento peptídico funcional del mismo. Los polipéptidos NT-4/5 biológicamente activos pueden fusionarse con secuencias, tales como las secuencias que potencian la capacidad de reacción inmunológica, facilitan el acoplamiento del polipéptido a un soporte o a un vehículo, o facilitan el plegamiento y/o la purificación (por ejemplo, secuencias que codifican epítopos tales como Myc, HA derivado del influenza virus hemaglutinina, His-6, FLAG). Estas secuencias pueden fusionarse a un polipéptido NT-4/5 en el extremo N o en el extremo C. Además, la proteína o polinucleótido puede fusionarse con otros polipéptidos que aumentan su función o especifican su localización en la célula, tal como una secuencia de secreción. Los procedimientos para producir proteínas recombinantes por fusión que se describen anteriormente son conocidos en la técnica. La proteína recombinante por fusión puede producirse, plegarse y aislarse mediante procedimientos notorios en la técnica.

Los polipéptidos NT-4/5 que se describen en el presente documento pueden modificarse para aumentar sus semividas en un individuo. Por ejemplo, el polipéptido NT-4/5 puede pegilarse para reducir el aclaramiento sistémico con una pérdida mínima de actividad biológica. La invención también proporciona composiciones (que incluyen composiciones farmacéuticas) que comprenden un polipéptido NT-4/5 ligado a una molécula de PEG. En algunas modalidades, la molécula de PEG está ligada al polipéptido NT-4/5 a través de un enlace reversible. La semivida de un polipéptido NT-4/5 pegilado puede aumentarse en más de aproximadamente cualquiera de 2 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces y 30 veces respecto a la semivida del polipéptido NT-4/5 no pegilado. Los polímeros de polietilenglicol (PEG) pueden enlazarse a diversos grupos funcionales del polipéptido NT-4/5 usando procedimientos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Roberts y cois. Advanced Drug Delivery Reviews 54: 459-416 (2002); Sakane y cois. Pharm. Res. 14: 1086-91 (1991 ). El PEG puede enlazarse a los siguientes grupos funcionales del polipéptido: grupos amino, grupos carboxilo, extremos N modificados o naturales, grupos amino y grupos tiol. En algunas modalidades, uno o más restos aminoacídicos superficiales se modifican con moléculas de PEG. Las moléculas de PEG pueden ser de diversos tamaños (por ejemplo, que varían de aproximadamente 2 a 40 kDa). Las moléculas de PEG ligadas al polipéptido NT-4/5 pueden tener un peso molecular de aproximadamente cualquiera de 2000, 10,000, 15,000, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000 Da. La molécula de PEG puede ser una cadena única o ramificada. Para enlazar PEG y el polipéptido NT-4/5, puede usarse un derivado de PEG que tiene un grupo funcional en uno o ambos extremos. El grupo funcional se elige basándose en el tipo de grupo reactivo disponible en el polipéptido NT-4/5. Los procedimientos para enlazar derivados de enlace a polipéptidos son conocidos en la técnica. Roberts y cois., Advanced Drug Delivery Reviews 54: 459-476 (2002). El enlace entre el polipéptido NT-4/5 y el PEG también puede ser tal que pueda escindirse o que se degrade de forma natural (enlace reversible o degradable) en un individuo lo que puede mejorar la semivida pero minimizar la pérdida de actividad. El sitio de enlace de PEG en el polipéptido NT-4/5 también puede crearse mutando los restos superficiales a a un resto aminoacídico que tenga un grupo que reacciones con PEG, tal como, una cisteína. Por ejemplo, los siguientes aminoácidos de NT-4/5 humano (SEC. ID. N.°: 1 ) pueden mutarse para la unión de PEG G1 , V2, S3, E4, T5, S9, R10, T25, D26, R28, T29, V31 , E37, E39, L41 , E43, A46, A47, G48, G49, S50, R53, D64, N65, A66, E67, E68, G69, D82, R83, R84, H85, A104, Q105, G106, R107, V108, S125, y T127. Estos pueden aplicarse a los restos correspondientes de otras especies. Se han generado diversos NT-4/5 pegilados y se muestran en los Ejemplos 6 y 7 de la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2005/0209148 y el documento PCT WO 2005/082401 . El resto de serlna de la posición 60 de el NT-4/5 humano maduro puede cambiarse a cisteína para generar NT4-S50C que después se pegila, en el que el PEG se enlaza con la cisteína de la posición 50. Un ejemplo de una unión específica en el extremo N para PEG es mutar el resto de la posición 1 a una serina o treonina, seguido después de pegilación, en el que el PEG se enlaza con la serina de la posición 1 . El polipéptido NT-4/5 puede producirse por medios recombinantes, es decir, mediante la expresión del ácido nucleico que codifica el polipéptido NT-4/5 en cultivo celular recombinante, y, opcionalmente con purificación de la variante del polipéptido del cultivo celular, por ejemplo, mediante bioensayo de la actividad de la variante o mediante absorción en una columna de inmunoafinidad que comprende anticuerpos policlonales de conejo contra NT-4/5 (que se unen a al menos un epítopo inmunitario de la variante que también está presente en NT-4/5 nativo). Los fragmentos peptídicos pequeños, del orden de 40 restos o menos, se preparan de forma conveniente por procedimientos in vitro. El ADN que codifica el polipéptido NT-4/5 puede clonarse en un vector de expresión para expresar la proteína en una célula huésped. Los ejemplos de ácidos nucleicos que codifican el polipéptido NT-4/5 se describen en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2003/0203383. El ADN que codifica el polipéptido NT-4/5 en su forma madura puede enlazarse en su extremo amino a una señal de secreción. Esta señal de secreción preferiblemente es la presecuencia de NT-4/5 que normalmente d irige la secreción de NT-4/5 en las células humanas in vivo. Sin embargo, las señales de secreción adecuadas incluyen también señales de otros NT-4/5 animales, señales de NGF, NT-2, o NT-3, señales víricas o señales de polipéptidos segregados de la misma especie u otra relacionada. Puede usarse cualquier célula huésped (tal como E. coli) para expresar la proteína o polipéptido. El polipéptido NT-4/5 expresado puede purificarse. El polipéptido NT-4/5 puede recuperarse del medio de cultivo en forma de una proteína segregada, aunque también puede recuperarse a partir de lisados de células huésped cuando se expresa directamente sin señal de secreción. Pueden usarse los procedimientos de purificación de proteínas conocidos en la técnica. Los procedimientos para producir el polipéptido NT-4/5 y purificar el polipéptido NT-4/5 expresado se describen en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2003/0203383, y en la patente de Estados Unidos n.° 6, 184,360. El polipéptido NT-4/5 puede expresarse en E. coli y plegarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica. El NT-4/5 humano maduro también puede obtenerse comercialmente (por ejemplo, en R&D Systems, Minneapolis, MN, Sigma, St. Louis, MO, y Upstate Biotech., Temecula, CA).

Polipéptidos y anticuerpos contra agonista para trkB El agonista para trkB que se usa en los procedimientos de la invención también incluye polipéptidos contra agonista para trkB, que incluyen anticuerpos contra agonistas para trkB. Un polipéptido contra agonista para trkB (por ejemplo, un anticuerpo) debería mostrar cualesquiera una o más de las siguientes características: (a) unirse a un receptor trkB; (b) unirse a un receptor trkB y activar la(s) actividad(es) biológica(s) para trkB y/o una o más rutas aguas abajo mediadas por la(s) función(es) de señalización para trkB; (c) unirse a un receptor trkB y aumentar el peso corporal y/o la ingesta de alimentos en un primate cuando se administra de forma periférica; (d) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de caquexia o pérdida de peso indeseada en un primate cuando se administra de forma periférica; (e) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la anorexia nervosa en un primate cuando se administra de forma periférica; (f) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la emesis inducida por opioides en un mamífero cuando se administra, de forma periférica: (g) promover la dimerización y activación del receptor trkB; y (h) aumentar la supervivencia neuronal dependiente del receptor trkB y/o el crecimiento de neuritas. En algunas modalidades, el polipéptido contra agonista para trkB (por ejemplo, anticuerpo) es multivalente y se une al dominio extracelular de un receptor trkB. Se ha demostrado que las inmunoglobulinas que tienen capacidad de unirse y entrecruzarse o dimerizar la familia trk de receptores de neurotrofinas activan estos receptores y producen consecuencias en las neuronas que son similares a la exposición a una neurotrofina. Véase, la patente de Estados Unidos n.° 6,656,465: y el documento PCT WO 01 /98361 . Los anticuerpos contra agonistas para trkB pueden englobar anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales, fragmentos de anticuerpos (por ejemplo Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fe, etc.), anticuerpos quiméricos, monocatenarios (ScFv), sus mutantes; proteínas de fusión que comprenden una porción de anticuerpo y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprende un sitio de reconocimiento de antígenos de la especificidad necesaria. Los anticuerpos pueden ser murinos, de rata, humanos o de cualquier otro origen (que incluye anticuerpos humanizados). En algunas modalidades, el polipéptido (que incluye el anticuerpo) se une a trkB y no reacciona (se une) de forma significativa con otros receptores de neurotrofinas (tales como los receptores de neurotrofinas relacionados, trkA y/o trkC). El polipéptido contra agonista trkB puede unirse a trkB humano. El polipéptido contra agonista trkB también puede unirse a trkB humano y de roedor. En algunas modalidades, el polipéptido contra agonista trkB puede unirse a trkB humano y de rata. En algunas modalidades, el polipéptido contra agonista trkB puede unirse a trkB humano y de ratón. En una modalidad, el polipéptido reconoce uno o más epítopos del dominio extracelular para trkB humano. En otra modalidad, el anticuerpo es un anticuerpo de ratón o rata que reconoce uno o más epítopos del dominio extracelular para trkB humano. En algunas modalidades, el polipéptido se une a trkB human y no se une significativamente a trkB de otra especie de mamífero (en algunas modalidades, especies vertebradas). En algunas modalidades, el polipéptido se une a trkB humano así como a uno o más trkB de otras especies de mamíferos (en algunas modalidades, especies vertebradas). En otra modalidad, el polipéptido reconoce uno o más epítopos de un trkB que se selecciona a partir de uno o más de primate, canino, felino, equino y bovino. En algunas modalidades, las variantes funcionalmente equivalentes tienen una CE50 (la mitad de la concentración mínima eficaz) de menos de aproximadamente cualquiera de 0.01 nM, 0.1 nM, 1 nM, 10 nM o 1 00 nM en la activación del receptor trkB in vitro (por ejemplo ensayos que se describen en el Ejemplo 6, y en los documentos US 2005/0209148 y PCT WO 2005/082401 ). La afinidad de unión del polipéptido contra agonista trkB (por ejemplo, anticuerpo) a trkB puede ser cualquiera de aproximadamente 500 nM, aproximadamente 400 nM, aproximadamente 300 nM, aproximadamente 200 nM. aproximadamente 100 nM, aproximadamente 50 nM, aproximadamente 10 nM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 500 pM, aproximadamente 100 pM, o aproximadamente 50 pM a cualquiera de aproximadamente 2 pM, aproximadamente 5 pM, aproximadamente 10 pM, aproximadamente 1 5 pM, aproximadamente 20 pM, o aproximadamente 40 pM. , En algunas modalidades, la afinidad de unión es cualquiera de aproximadamente 100 nM, aproximadamente 50 nM, aproximadamente 10 nM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 500 pM, aproximadamente 1 00 pM, o aproximadamente 50 pM, o menos de aproximadamente 50 pM. En algunas modalidades, la afinidad de unión es menos de cualquiera de aproximadamente 100 nM, aproximadamente 50 nM, aproximadamente 10 nM, aproximadamente 1 nM, aproximadamente 500 pM, aproximadamente 1 00 pM, o aproximadamente 50 pM. Todavía en otras modalidades, la afinidad de unión es aproximadamente 2 pM, aproximadamente 5 pM, aproximadamente 10 pM, aproximadamente 1 5 pM, aproximadamente 20 pM, aproximadamente 40 pM o superior a aproximadamente 40 pM. Tal como es conocido en la técnica, la afinidad de unión puede expresarse en términos de KD, O constante de disociación, y una mayor afinidad de unión corresponde a una menor KD. Una forma de determinar la afinidad de unión de los anticuerpos a trkB es medir la afinidad de unión de fragmentos Fab del anticuerpo monofuncional. Para obtener fragmentos Fab monofuncionales, un anticuerpo (por ejemplo, IgG) puede escindirse con papaína o expresarse de forma recombinante. La afinidad de un fragmento de un anticuerpo contra trkB puede determinarse mediante resonancia de plasmón superficial (BIAcore3000™ . sistema de resonancia de plasmón superficial (SPR), BIAcore, INC, Piscataway NJ). Los chips CM5 pueden activarse con clorhidrato de N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) de acuerdo con las instrucciones del suministrador. Puede diluirse proteína de fusión para trkB-Fc ("htrkB") (o cualquier otro trkB, tal como trkB de rata) en acetato sódico 10 mM a pH 5.0 e inyectarse sobre el chip activado a una concentración de 0.0005 mg/ml. Usando tiempo de fluencia variable por los canales individuales del chip, pueden lograrse dos intervalos de densidad de antígenos: 200-400 unidades de respuesta (UR) para los estudios cinéticos detallados y 500-1000 UR para los ensayos de tamizado. El chip puede bloquearse con etanolamina. Los estudios de regeneración han demostrado que una mezcla de tampón de elución Pierce (n.° de producto 21004. Pierce Biotechnology, Rockford, IL) y NaCI 4 M (2:1 ) elimina de forma eficaz el Fab unido a la vez que se mantiene la actividad de htrkB del chip durante más de 200 inyecciones. El tampón HSS-EP (HEPES 0.01 M, a pH 7.4, NaCI 0.15 M, EDTA 3 mM, 0.005% de tensioactivo P29) se usa como tampón de procesamiento para los ensayos BIAcore. Se inyectan diluciones seriadas (0.1 - 10 x KD estimada) de las muestras de Fab purificadas se inyectan durante 1 minuto a 100 µ?/min y se dejan tiempos de disociación de hasta 2 horas. Las concentraciones de las proteínas Fab se determinan mediante ELISA y/o electroforesis en SDS-PAGE usando un Fab de concentración conocida (según se determina mediante análisis de los aminoácidos) como patrón. Las velocidades de asociación cinética (Kon) y las velocidades de disociación (K0ff) (generalmente medidas a 25 °C) se obtienen de forma simultánea al introducir los datos en un modelo de unión 1 :1 de Langmuir (Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods in Enzymology 6: 99-1 10) usando el programa BIAevaluation. Los valores de constante de disociación en el equilibrio (K0) se calculan en términos de En algunas modalidades, el polipéptido contra agonista para trkB (que incluye anticuerpo) presenta una función efectora reducida. Tal como se usa en el presente documento, un anticuerpo o un polipéptido que tiene una "función efectora reducida" (que se usa de forma intercambiable con la expresión "inmunológicamente inerte" se refiere a anticuerpos o polipéptidos que no tienen ninguna función efectora o que tienen una actividad o actividades reducidas de la función efectora (comparados con un anticuerpo o polipéptido que tiene una región constante no modificada o natural), por ejemplo, que no tiene actividad o tiene una actividad reducida en uno o más cualesquiera de los siguientes; a) desencadenar la lisis mediada por complemento; b) estimular la citotoxidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC); y C) activar la microglia. La actividad de función efectora puede estar reducida aproximadamente en cualquiera de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%.80%, 90%, 95%, 99% y 100%. En algunas modalidades, el anticuerpo se une a un receptor trkB sin desencadenar una lisis dependiente de complemento significativa o una destrucción mediada por células de la diana. Por ejemplo, el sitio de unión del receptor Fe de la región constante puede modificarse o mutarse para eliminar o reducir la afinidad de unión a ciertos receptores Fe, tales como FcvRI, FCYRI I , FCYRI I I, y/o FcyRIV. Para mayor simplicidad, se hará referencia a los anticuerpos entendiendo que las modalidades también se aplican a los polipéptidos. Se usa el sistema de numeración (Kabat y cois., Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5a edición, 1991 , National Institutes of Health, Bethesda MD, 1991 ) para indicar qué resto(s) aminoacídico(s) de la región constante (por ejemplo, de un anticuerpo IgG) están alterados o mutados. La numeración puede usarse para un tipo de anticuerpo específico (por ejemplo, lgG1 ) o una especie (por ejemplo, ser humano) entendiendo que pueden realizarse cambios similares entre tipos de anticuerpos y especies. En algunas modalidades los polipéptidos (que incluyen anticuerpos) que se unen a un receptor trkB de forma específica comprenden una región constante de cadena pesada que tiene una función efectora reducida. La región constante de la cadena pesada puede tener una secuencia natural o es una variante. En algunas modalidades, la secuencia de aminoácidos de una región constante de una cadena pesada natural está mutada, por ejemplo, mediante sustitución, inserción y/o deleción de aminoácidos, por lo que la función efectora de la región constante se reduce. En algunas modalidades, la N-glucosilación de la región Fe de una región constante de la cadena pesada también puede estar cambiada, por ejemplo, puede estar completa o parcialmente eliminada, por lo que la función efectora de la región constante se reduce. En algunas modalidades, la función efectora se reduce al eliminar la N-glucosilación de la región Fe (por ejemplo, del dominio CH 2 de IgG). En algunas modalidades, la N-glucosilación de la región Fe se elimina mutando el resto aminoacídico glucosilado o los restos adyacentes que son parte de la secuencia de reconocimiento de la glucosilación de la región constante. Las secuencias de tripéptidos asparragina-X-serina (N-X-S), asparragina-X-treonina (N-X-T) y asparragina-X-cisteína (N-X-C), donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática del resto de carbohidrato a la cadena lateral de asparragina para la N-glucosilación. La mutación de cualquiera de los aminoácidos de las secuencias de tripéptidos de la región constante proporciona una IgG no glucosilada. Por ejemplo, el sitio de N-glucosilación N297 de lgG 1 y lgG3 humanas puede mutarse a A, D, Q, K o H. Véase, Tao y cois., J. Immunology 143: 2595-2601 (1989); y Jefferis y cois., Immunological Reviews 163: 59-76 (1998). Se ha reseñado que lgG1 e lgG3 con sustitución de Asn-297 por GIn, His o Lys no se unen al FcyRI humano y no activan complemento, perdiendo completamente la capacidad de unión de C1 q para lgG 1 y reduciéndose espectacularmente para lgG3. En algunas modalidades, el aminoácido N de las secuencias de tripéptidos está mutado a uno cualquiera de los aminoácidos A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, P, Q, R, S, T, V, W, Y. En algunas modalidades, el aminoácido N de las secuencias de tripéptidos está mutado a una sustitución conservadora. En algunas modalidades, el aminoácido X de las secuencias de tripéptidos está mutado a prolina. En algunas modalidades, el aminoácido S de las secuencias de tripéptidos está mutado a A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, Y. En algunas modalidades, el aminoácido T de las secuencias de tripéptidos está mutado a A, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, Y. En algunas modalidades, el aminoácido C de las secuencias de tripéptidos está mutado a A, O, E, F, G, H, K, L, M, N, P, Q, R, V, W, Y. En algunas modalidades, el a minoácido que sigue al tripéptido está mutado a P. En algunas modalidades, la N-glucosilación de la región constante se elimina enzimáticamente (tal como N-glucosidasa F, endoglucosidasa F1 , endoglucosidasa F2, endoglucosidasa F3 y endoglucosidasa H). La eliminación de la N-glucosilación puede lograrse también produciendo el anticuerpo en una línea celular que presenta deficiencia de N-glucosilación. Wright y cois., J Immunol. 1 60(7): 3393-402 (1998). En algunas modalidades, el resto aminoacídico que interactúa con el oligosacárido unido al sitio de N-glucosilación de la región constante se muta para reducir la afinidad de unión a FcyRI. Por ejemplo, puede mutarse F241 , V264, D265 de lgG3 humana. Véase, Lund y cois., J. Immunology 157: 4963-4969 (1996). En algunas modalidades, la función efectora se reduce modificando regiones tales como 233-236, 297, y/o 327-331 de IgG humana tal como se describe en el documento WO 99/58572 y Armour y cois., Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy y cois., J. Immunology 164: 1 925-1933 (2000). Los anticuerpos que se describen en el documento PCT WO 99/58572 y Armour y cois, comprenden, además de un dominio de unión dirigido a la molécula diana, un dominio efector que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente homologa a toda o parte de una región constante de una cadena pesada de inmunoglobulina humana. Estos anticuerpos presentan capacidad de unirse a la molécula diana sin desencadenar una lisis dependiente de complemento significativa, ni una destrucción mediada por células de la diana. En algunas modalidades, el dominio efector presenta una afinidad reducida por FcyRI, FcyRIIa, y FcyRIII. En algunas modalidades, el dominio efector es capaz de unirse de forma específica a FcRn y/o FcyRI lb. Estos habitualmente se basan en dominios quiméricos que se derivan de dos o más dominios CH2 de cadena pesada de inmunoglobulina humana. Los anticuerpos modificados de este modo son particularmente adecuados para usar en un tratamiento crónico con anticuerpos, para evitar reacciones de inflamación y otras reacciones adversas del tratamiento convencional con anticuerpos. En algunas modalidades, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es una cadena pesada de lgG1 humana con cualquiera de las siguientes mutaciones: 1 ) A327A330P331 a G327S330S331 ; 2) E233L234L235G236 a P233V234A235 con G236 eliminado; 3) E233L234L235 a P233V234A235; 4) E233L234L235G236A327A330P331 a P233V234A235G327S330S331 con G236 eliminado; 5) E233L234L235A327A330P331 a P233V234A235G327S330S331 ; y 6) N297 a A297 o cualquier otro aminoácido excepto N. En algunas modalidades, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es una cadena pesada de lgG2 humana con las siguientes mutaciones: A330P331 a S330S331 . En algunas modalidades, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo es una cadena pesada de lgG4 humana con cualquiera de las siguientes mutaciones: E233F234L235G236 a P233V234A235 con G236 eliminado; E233F234L235 a P233V234A235; y S228L235 a P228E235. La región constante también puede modificarse para reducir la activación de complemento. Por ejemplo, la activación de complemento de anticuerpos IgG tras la unión del componente C1 del complemento puede reducirse mutando restos aminoacídicos En la región constante en un motivo de unión C1 (por ejemplo, motivo de unión C1 q). Se ha reseñado que una mutación a Ala para cada uno de D270, K322, P329, P331 de lgG1 humana reducía significativamente la capacidad del anticuerpo de unirse a C1 q y activar complemento. Para lgG2b murina, el motivo de unión C1 q constituye los restos E318, K320, y K322. Idusogle y cois., J. Immunology 164: 4178-4184 (2000); Duncan y cois., Nature 322: 738-740 (1988). El motivo de unión C1 q E318, K320, y K322 identificados para lgG2b murino se cree que es común para otros isotipos de anticuerpos. Duncan y cois., Nature 322: 738-740 (1988). La actividad de unión de C1 q por lgG2b puede evitarse sustituyendo uno cualquiera de los tres restos especificados por un resto que tiene una funcionalidad inapropiada en su cadena lateral. No es necesario sustituir solo los restos iónicos con Ala para evitar la unión de C1 q. También es posible usar otros restos no iónicos sustituidos con alquilo , tales como Gly, lie, Leu, o Val, o restos no polares aromáticos tales como Phe, Tyr, Trp y Pro en lugar de uno cualquiera de los tres restos para evitar la unión de C1 q. Además, también es posible usar restos no iónicos polares tales como Ser, Thr, Cys, y Met en lugar de los restos 320 y 322, pero no de 3 8, para evitar la actividad de unión de C1 q. La invención también proporciona anticuerpos que tienen una función efectora reducida en la que el anticuerpo tiene una región bisagra modificada. La afinidad de unión de IgG humana por sus receptores Fe puede controlarse modificando la región bisagra. Canfield y cois., J. Exp. Med. 173: 1 483-1491 (1991 ); Hezareh y cois.. J. Viral. 75: 12161-12168 (2001 ); Redpath y cois., Human Immunology 59: 720-727 (1998). Los restos aminoacídicos específicos pueden mutarse o eliminarse. La región bisagra modificada puede comprender una región bisagra completa derivada de un anticuerpo de una clase o subclase de anticuerpos diferente de las del dominio CH1 . Por ejemplo, el dominio constante (CH1 ) de un anticuerpo de clase IgG puede unirse a una región bisagra de un anticuerpo de clase lgG4. De forma alternativa, la nueva región bisagra puede comprender parte de una bisagra natural o una unidad repetida en la que cada unidad de la repetición se deriva de una región bisagra natural. En algunas modalidades, la región bisagra natural se altera convirtiendo uno o más restos cisteína en un resto neutro, tal como alanina, o convirtiendo restos situados de forma adecuada en restos cisteína, véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos n.° 5,677,425. Dichas alteraciones se realizan usando reacciones químicas de proteínas reconocidas en la técnica y, preferiblemente, técnicas de ingeniería genética y como se describe en el presente documento. Los polipéptidos que de forma específica se unen a un receptor trkB y se fusionan con una región constante de la cadena pesada que tienen una función efectora reducida también pueden usarse para los procedimientos que se describen en el presente documento. Un ejemplo de dichos polipéptidos de fusión es una inmunoadhesina. Véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos n.° 6, 153,189. También puede usarse otros procedimientos para preparar anticuerpos que tienen una función efectora reducida conocidos en la técnica. Los anticuerpos y polipéptidos con regiones constantes modificadas pueden analizarse en uno o más ensayos para evaluar el nivel de la reducción de la función efectora sobre la actividad biológica comparada con la del anticuerpo inicial. Por ejemplo, puede evaluarse la capacidad del anticuerpo o polipéptido con una región Fe alterada de unirse a complemento o a receptores Fe (por ejemplo; receptores Fe de la microglia), o una región bisagra alterada usando los ensayos que se describen en el presente documento así como cualquier ensayo reconocido en la técnica. Documento PCT WO 99/58572; Armour y cois., Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy y cois., J. Immunology 164: 1925-1933 (2000); Song y cois., Infection and Immunity 70: 5 77-5184 (2002). Los anticuerpos contra agonistas para trkB pueden prepararse usando inmunógenos que expresan uno o más dominios extracelulares para trkB. Un ejemplo de un inmunógeno es células con expresión elevada para trkB, que pueden obtenerse tal como se describe en el presente documento. Otro ejemplo de un inmunógeno que puede usarse es una proteína soluble (tal como una inmunoadhesina trkB) que contiene el dominio extracelular o una porción del dominio extracelular del receptor trkB. La vía y el calendario de inmunización del animal huésped generalmente se ajustan a las técnicas establecidas y convencionales para la estimulación de y producción de anticuerpos, tal como se describe adicionalmente en el presente documento. Las técnicas generales para la producción de anticuerpos humanos y murinos son conocidas en la técnica y se describen en el presente documento. Se contempla que cualquier sujeto mamífero que incluye seres humanos o sus células que producen anticuerpos pueden manipularse para que sirvan de base para la producción de líneas celulares de hibridoma de mamífero, incluido el ser humano. Habitualmente, el animal huésped se inocula por vía intraperitoneal con una cantidad de inmunógeno, que incluye las que se describen en el presente documento. Los hibridomas pueden prepararse a partir de los línfocitos y células de mieloma inmortalizadas usando la técnica de hibridación de células somáticas de Kohler, B. y Milstein, C. ( 1975) Nature 256: 495-497 o tal como la modificaron Buck, D. W. y cois., ( 1982) In vitro, 18: 377-381 . Pueden usarse las líneas de mieloma disponibles, que incluye pero sin limitación X63-Ag8.653 y las del Salk Institute, Cell Distribución Center, San Diego, Calif., EE. UU. en la hibridación. Generalmente, la técnica implica fusionar células de mieloma y células linfoides usando un fusógeno tal como polietilenglicol, o por medios eléctricos notorios para los expertos en la técnica. Después de la fusión, las células se separan del medio de fusión y se cultivan en un medio de cultivo selectivo, tal como medio de hipoxantina-aminopterina-timidína (HAT), para eliminar las células progenitoras no hibridadas. Puede usarse cualquiera de los medios que se describen en el presente documento, suplementados con o sin suero, para cultivar hibridomas que segregan anticuerpos monoclonales. Como alternativa a la técnica de fusión celular, pueden usarse linfocitos B inmortalizados EBV para producir los anticuerpos monoclonales contra trkB la presente invención. Los hibridomas se expanden y se subclonan, si se desea, y se analizan los sobrenadantes para determinar la actividad contra los inmunógenos mediante procedimientos de inmunoensayo convencionales (por ejemplo, radioinmunoensayo, inmunoensayo enzimático, o inmunoensayo por fluorescencia). Los hibridomas que pueden usarse como fuente de anticuerpos engloban todos los derivados, células progenie de los hibridomas progenitores que producen anticuerpos monoclonales específicos para trkB, o una porción de los mismos. Los hibridomas que producen dichos anticuerpos pueden cultivarse in vitro o in vivo usando procedimientos conocidos. Los anticuerpos monoclonales pueden aislarse del medio de cultivo o de los fluidos corporales, mediante procedimientos de purificación de inmunoglobulinas convencionales tales como precipitación con sulfato de amonio, electroforesis en gel, diálisis, cromatografía, y ultrafíltración, si se desea. La actividad indeseada, si la hubiera, puede eliminarse, por ejemplo, haciendo pasar la preparación sobre absorbentes formados por el inmunógeno unido a una fase sólida y eluyendo o liberando los anticuerpos deseados del inmunógeno. La inmunización de un animal huésped con un receptor trkB de ser humano u otras especies, o un fragmento del receptor trkB de ser humano u otras especies, o el receptor trkB de ser humano u otras especies, o un fragmento que contiene la secuencia de a minoácidos diana conjugada a una proteína que es inmunógena en la especie a inmunizar, por ejemplo, hemocianina de lapa californiana, albúmina de suero, tiroglobulina bovina o inhibidor de tripsina de soja usando un agente bifuncional o derivatizador, por ejemplo, éster de maleimidobenzoil sulfosuccinimida (conjugación a través de restos de cisteína), N-hidroxisuccinimida (a través de restos de lisina), glutaraldehído, anhídrido succínico, SOCI2 o R1 N=C=NR, donde R y R1 son grupos alquilo diferentes puede proporcionar una población de anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos monoclonales). Otro ejemplo de un inmunógeno es células con expresión alta para trkB, que puede obtenerse por medios recombinantes o aislando o enriqueciendo las células de una fuente natural que expresan un nivel elevado para trkB. Estas células pueden ser de origen humano o de otro animal, y pueden usarse como inmunógeno tal y como se aislan directamente o pueden procesarse de tal modo que se aumente o enriquezca la capacidad inmunógena, o la expresión para trkB (de un fragmento dtrkB). Dicho procesamiento incluye, pero sin limitación, el tratamiento de las células o sus fragmentos con agentes diseñados para aumentar su estabilidad o capacidad inmunógena, tal como, por ejemplo, formaldehído, etanol, acetona y/o diversos ácidos. Además, o antes o después de dicho tratamiento, las células pueden procesarse para enriquecer la concentración del inmunógeno deseado, en este caso trkB o un fragmento del mismo. Estas etapas de procesamiento pueden incluir técnicas de fraccionamiento de la membrana, que son notorias en la técnica. Si se desea, el anticuerpo (monoclonal o policlonal) contra trkB de interés puede secuenciarse y la secuencia de polinucleótidos puede clonarse después en el vector para su expresión o propagación. La secuencia que codifica el anticuerpo de interés puede mantenerse en un vector de una célula huésped y la célula huésped puede después expandirse y congelarse para su uso posterior. Como alternativa, la secuencia de polinucleótidos puede usarse para la manipulación genética para "humanizar" el anticuerpo o para mejorar la afinidad, u otras características del anticuerpo. Por ejemplo, la región constante puede diseñarse para que se parezca más a las regiones constantes humanas para evitar respuestas inmunitarias si se usa el anticuerpo en ensayos clínicos y tratamientos en seres humanos. Puede ser deseable manipular genéticamente la secuencia del anticuerpo para obtener una mayor afinidad por el receptor trkB y una mayor eficacia para activar el receptor trkB. Será obvio para una persona de experiencia en la técnica que pueden hacerse uno o más cambios de polinucleótidos en el anticuerpo contra trkB y todavía mantener su capacidad de unión de del dominio extracelular para trkB o de los epítopos para trkB. Existen cuatro etapas generales para humanizar un anticuerpo monoclonal. Estas son: (1 ) determinar la secuencia de nucleótidos y la secuencia prevista de aminoácidos del los dominios variables ligero y pesado del anticuerpo inicial (2) diseñar el anticuerpo humanizado, es decir, decidir qué región estructural del anticuerpo usar durante el proceso de humanización (3) la metodología/técnicas de humanización reales y (4) la transfeccion y expresión del anticuerpo humanizado. Véase, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; 6,331 ,415; 5,530,101 ; 5,693,761 ; 5,693,762; 5,585,089; 6,180,370; y 6,548,640. Por ejemplo, la región constante puede diseñarse para que se parezca más a las regiones constantes humanas para evitar respuestas inmunitarias si se usa el anticuerpo en ensayos clínicos y tratamientos en seres humanos. Véase, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 5,997,867 y 5,866,692. Se ha descrito un número de moléculas de anticuerpos "humanizados" que comprenden un sitio de unión de antígeno derivado de una inmunoglobulina no humana, que incluyen anticuerpos quiméricos que tienen regiones V de roedor o de roedor modificadas y sus regiones determinantes de la complementariedad asociadas (CDR) fusionadas a dominios constantes humanos. Véase, por ejemplo, Wintery cois. Nature 349: 293-299 (1991 ), Lobuglio y cois. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989), Shaw y cois. J Immunol. 138: 4534-4538 (1987), y Brown y cois. Cáncer Res. 47: 3577-3583 (1987). Otras referencias describen CDR de roedor injertadas en una región estructural (FR) humana de soporte antes de su fusión con un dominio constante de anticuerpo humano apropiado. Véase, por ejemplo, Riechmann y cois. Nature 332: 323-327 (1988), Verhoeyan y cois. Science 239: 1534-1536 (1988), y Jones y cois. Nature 321 : 522-525 (1986). Otra referencia describe CDR de roedor soportadas por regiones estructurales de roedor modificadas por recombinación. Véase, por ejemplo, la publicación de patente europea N.° 519,596. Estas moléculas "humanizada" se diseñan para minimizar una respuesta inmunológica indeseada hacia moléculas de anticuerpo de roedor contra ser humano que limita la duración y eficacia de las aplicaciones terapéuticas de esos restos en los receptores humanos. La región constante del anticuerpo puede diseñarse de tal forma que sea inmunológicamente inerte, por ejemplo que no desencadene una lisis mediada por complemento ni estimule la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC). En otras modalidades, la región constante se modifica tal como se describe en Eur. J. Immunol. (1999) 29: 2613-2624; solicitud PCT n.° PCT/GB99/01441 ; y/o solicitud de patente británica n.° 9809951 ,8. Véase, por ejemplo en el documento PCT/GB99/01441 ; la solicitud de patente británica n.° 9809951 ,8. Otros procedimientos para humanizar anticuerpos que también pueden utilizarse se describen en Daugherty y cois. Nucí. Acids Res. 19: 2471-2476 (1991 ) y en las patentes de Estados Unidos n.° 6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; 5,866,692; 6,210,671 ; 6,350,861 ; y la publicación PCT n.° WO 01 /27160. Todavía en otra alternativa, pueden obtenerse anticuerpos completamente humanos usando ratones disponibles comercialmente que se han diseñado para que expresen proteínas de ¡nmunoglobulina humana específica. También pueden usarse animales transgénicos que se diseñan para producir una respuesta inmunitaria más deseable (por ejemplo, anticuerpos completamente humanos) o más robusta para generar anticuerpos humanizados o humanos. Los ejemplos de dicha tecnología son Xenomouse™ de Abgenix, Inc. (Fremont, CA) y HuMAb-Mouse® y TC Mouse™ de Medarex, Inc. (Phnceton, NJ). En una alternativa, los anticuerpos pueden prepararse por medios recombinantes y expresarse usando cualquier procedimiento conocido en la técnica. En otra alternativa, los anticuerpos pueden prepararse por medios recombinantes mediante tecnología de presentación en bacteriófago. Véase, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos n.° 5,565,332; 5,580,717; 5,733,743 y 6,265,150; y Winter y cois., Annu. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994). De forma alternativa, puede usarse la tecnología de presentación en bacteriófago (McCafferty y cois. Nature 348: 552-553 (1990)) para producir anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpos in vitro a partir de repertorios de genes del dominio variable (V) de inmunoglobulinas de donantes inmunizados. De acuerdo con esta técnica, los genes del domino V del anticuerpo se clonan en marco o bien en un gen de proteína de la cubierta mayor o menor de un bacteriófago filamentoso, tal como M 3 o fd y se presenta como fragmentos de anticuerpos funcionales sobre la superficie de la partícula del bacteriófago. Debido a que la partícula filamentosa contiene una copia de ADN monocatenario del genoma del bacteriófago, las -selecciones basadas en las propiedades funcionales del anticuerpo también producen la selección del gen que codifica el anticuerpo que presenta esas propiedades. Así, el bacteriófago imita algunas de las propiedades del linfocito B. La presentación en bacteriófagos puede realizarse en una variedad de formatos; para una revisión véase, por ejemplo, Johnson, Kevin S. y Chiswell, David J., Current Opinión in Structural Biology 3: 564-571 (1993). Pueden usarse varias fuentes de segmentos del gen V para la presentación en bacteriófagos. Clackson y cois. , Nature 352: 624-628 (1991 ) aislaron un conjunto diverso de anticuerpos contra oxazolona a partir de una pequeña colección por combinación aleatoria de genes V derivados de los bazos de ratones inmunizados. Puede construirse un repertorio de genes V de donantes humanos no inmunizados y pueden aislarse anticuerpos contra un conjunto diverso de antígenos (incluidos los autoantígenos) siguiendo esencialmente las técnicas que describen Mark y cois., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1991 ), o Griffith y cois., EMBO J. 12: 725-734 (1993). En una respuesta inmunitaria natural, los genes de los anticuerpos acumulan mutaciones a una velocidad elevada (hipermutación somática). Algunos de los cambios introducidos conferirán una mayor afinidad y los linfocitos B que presentan inmunoglobulina s superficiales de afinidad elevada se replican de forma preferencial y se diferencian durante la posterior exposición al antígeno. Este proceso natural puede imitarse empleando la técnica conocida como "barajado de cadenas" Marks, y cois., Biotechnol. 10: 779-783 (1992)). En este procedimiento, la afinidad de los anticuerpos humanos "primarios" obtenida por presentación en bacteriófagos puede mejorarse sustituyendo secuencialmente los genes de la región V de la cadena pesada y ligera con repertorios de variantes naturales (repertorios) de los genes del dominio V obtenidos a partir de donantes no inmunizados. Esta técnica permite producir anticuerpos y fragmentos de anticuerpos con afinidades en el intervalo de pM-nM. Una estrategia para formar repertorios de anticuerpos en bacteriófagos muy amplios (también conocidos como "la madre de todas las colecciones") ha sido descrita por Waterhouse y cois. , Nucí. Acids Res; 21 : 2265-2266 ( 1993). También puede usarse el barajado de genes para derivar anticuerpos humanos de los anticuerpos de roedores, donde el anticuerpo humano tiene afinidades y especificidades similares al anticuerpo de roedor inicial. De acuerdo con este procedimiento, que también se denomina "sellado de epítopos", el gen del dominio V de la cadena pesada o ligera de los anticuerpos de roedores obtenidos por la técnica de presentación en bacteriófagos se sustituye por un repertorio de genes del dominio V humano, creando quimeras de roedor y ser humano. La selección con antígenos produce el aislamiento de regiones variables humanas capaces de restaurar un sitio de unión de antígenos funcional, es decir, el epítopo gobierna (sella) la pareja elegida. Cuando se repite el proceso para sustituir el dominio V de roedor que queda, se obtiene un anticuerpo humano (véase la Publicación de PCT n.° WO 93/06213, publicada el 1 de abril de 1993). Al contrario que con la humanización tradicional de los anticuerpos de roedor mediante injerto de CDR, esta técnica proporciona anticuerpos completamente humanos, que no tiene regiones estructurales ni restos de CDR de origen de roedor. Es obvio que aunque la descripción anterior se refiere a anticuerpos humanos, los principios generales que se describen son aplicables al diseño a medida de anticuerpos para usar, por ejemplo, en perros, gatos, primates, equinos y bovinos. El anticuerpo puede ser un anticuerpo biespecífico, un anticuerpo monoclonal que presenta especificidades de unión por al menos dos antígenos diferentes, puede prepararse usando los anticuerpos que se describen en el presente documento. Los procedimientos para preparar anticuerpos biespecíficos son conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Suresh y cois., 1986, Methods in Enzymology 121 : 210). Tradicionalmente, la producción recombinante de anticuerpos biespecíficos se basaba en la coexpresión de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulinas, donde las dos cadenas pesadas tienen especificidades diferentes (Millstein y Cuello, 983, Nature 305: 537-539). De acuerdo con una estrategia una estrategia de preparar anticuerpos biespecíficos, se fusionan dominios variables de anticuerpos con las especificidades de unión deseadas (sitios de combinación de anticuerpo y antígeno) a las secuencias de dominio constante de las inmunoglobulinas. La fusión preferiblemente es con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina, que comprende al menos parte de las regiones de bisagra, CH2 y CH3. Se prefiere tener la primera región constante de la cadena pesada (CH1 ), que contiene el sitio necesario para la unión de la cadena ligera, presente en al menos una de las fusiones. Los ADN que codifican las fusiones de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas y, si se desea, la cadena ligera de la inmunoglobulina se insertan en vectores de expresión separados y se cotransfectan a un organismo huésped adecuado. Esto proporciona una mayor flexibilidad para ajustar las proporciones mutuas de los tres fragmentos polipeptidicos en modalidades en las que proporciones desiguales de las tres cadenas de polipéptidos que se usan en la construcción proporcionan los rendimientos óptimos. Sin embargo es posible insertar secuencias codificantes para dos o las tres cadenas de polipéptidos en un vector de expresión cuando la expresión de al menos dos cadenas de polipéptidos en proporciones iguales produce rendimientos altos o cuando las proporciones no tienen una importancia particular. En una estrategia, los anticuerpos biespecíficos están compuestos por una cadena pesada de inmunoglobulina híbrida, con una primera especificidad de unión en un brazo y un par de cadena pesada y cadena ligera de inmunoglobulina híbrida (que proporciona una segunda especificidad de unión) en el otro brazo. Esta estructura asimétrica, con una cadena ligera de inmunoglobulina sólo en la mitad de la molécula biespecífica, facilita la separación del compuesto biespecífico deseado de las combinaciones de cadenas de inmunoglobulinas indeseadas. Esta estrategia se describe en la publicación de PCT n.° WO 94/04690. Los anticuerpos heteroconjugados, que comprenden dos anticuerpos unidos covalentemente, también están dentro del alcance de la invención. Dichos anticuerpos se han usado para dirigir células del sistema inmunitario contra células indeseadas (patente de Estados Unidos n.° 4,676,980), y para el tratamiento de la infección por VIH (Publicaciones de PCT n.° WO 91/00360 y WO 92/200313; y EP 03089). Los anticuerpos heteroconjugados pueden prepararse usando cualquier procedimiento de entrecruzamiento conveniente. Los agentes y técnicas de entrecruzamiento adecuados son notorios en la técnica, y se describe en la patente de Estados Unidos n.° 4,676,980. Los anticuerpos pueden prepararse de forma recombinante primero aislando los anticuerpos preparados a partir de animales huésped, obteniendo la secuencia génica y usando la secuencia génica para expresar el anticuerpo de forma recombinante en células huésped (por ejemplo, células CHO). Otro procedimiento que puede emplearse es expresar la secuencia del anticuerpo en plantas (por ejemplo, de tabaco), leche transgénica u otros organismos. Los procedimientos para expresar los anticuerpos de forma recombinante en plantas o leche se han descrito. Véase, por ejemplo, Peeters y cois. (2001 ) Vaccine 19: 2756; Looberg, N. y D. Huszar (1995) Int. Rev. Immunol 1 3: 65; y Pollock y cois. (1999) J Immunol Methods 231 : 147. Los procedimientos para preparar derivados de anticuerpos, por ejemplo, humanizados, monocatenarios, etc. son conocidos en la técnica. Los anticuerpos quiméricos o híbridos también pueden prepararse in vitro usando procedimientos conocidos de reacciones químicas de síntesis de proteínas, que incluyen los que usan agentes de reticulación. Por ejemplo, pueden construirse inmunotoxinas usando una reacción de intercambio de disulfuro o formando un enlace tioéter. Los ejemplos de reactivos adecuados para este fin incluyen iminotiolato y metil-4mercaptobutirimidato. También pueden producirse fragmentos de cadena Fv, tal como se describe en llíades y cois., 1997, FEBS Letters, 409: 437-441 . El acoplamiento de dichos fragmentos monocatenarios usando diversos enlazadores se describe en Kortt y cois., 1997, Protein Engineering, 10: 423-433. Una variedad de técnicas para la producción recombinante y la manipulación de anticuerpos es notoria en la técnica. Los anticuerpos pueden modificarse tal como se describe en la Publicación de PCT n.° WO 99/58572, publicada el 18 de noviembre de 1999. Estos anticuerpos comprenden, además de un dominio de unión dirigido a la molécula diana, un dominio efector que tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente homologa a todo o parte de un dominio constante de una cadena pesada de inmunoglobulina humana. Estos anticuerpos tienen capacidad de unirse a la molécula diana sin desencadenar una significativa lisis dependiente de complemento ni destrucción mediada por células de la diana. Preferiblemente, el dominio efector tiene capacidad de unirse de forma específica a FcRn y/o FcvRllb. Estos se basan habitualmente en dominios quiméricos derivados de dos o más dominios de cadena pesada de inmunoglobulina humana CH2. Se prefiere usar los anticuerpos modificados de este modo en el tratamiento crónico con anticuerpos, para evitar reacciones de inflamación y otras reacciones adversas del tratamiento convencional con anticuerpos. Los anticuerpos preparados o bien por inmunización de un animal huésped, o de forma recombinante deberían exhibir una o más cualesquiera de las actividades del agonista para trkB que se describen en el presente documento.

También pueden emplearse técnicas de inmunoensayos y de cribado por citometría de flujo tales como cribado celular por fluorescencia (FACS) para aislar anticuerpos que son específicos para trkB. Los anticuerpos pueden unirse a muchos vehículos diferentes. Los vehículos pueden ser activos y/o inertes. Los ejemplos de vehículos notorios incluyen polipropileno, poliestireno, polietileno, dextrano, nylon, amilasas, vidrio, celulosas naturales y modificadas, poliacrilamídas, azarosas y magnetita. La naturaleza del vehículo puede ser soluble o insoluble para los fines de la invención. Los expertos en la técnica sabrán de otros vehículos adecuados para unirse a anticuerpos, o serán capaces de discernirlos usando experimentación rutinaria. El ADN que codifica los anticuerpos contra agonistas para trkB pueden secuenciarse, tal como es conocido en la técnica. Generalmente, el anticuerpo monoclonal se aisla fácilmente y se secuencia usando procedimientos convencionales (por ejemplo, usando sondas de oligonucleótidos que son capaces de unirse de forma específica a genes que codifican las cadenas pesada y ligera de los anticuerpos monoclonanes). Las células de híbridoma sirven como fuente preferida de dicho ADNc. Una vez aislado, el ADN puede introducirse en vectores de expresión (tales como vectores de expresión que se describen en la publicación PCT n.° WO 87/04462), que después se transfieren a células huésped tales como células de E. coli, células COS de simio, células ováricas de hámster chino (CHO), células de mieloma que no producen otras proteínas de inmunoglobulinas, obteniendo la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células huésped recombinantes. Véase, por ejemplo, la publicación de PCT n.° WO 87/04462. El ADN también puede modificarse, por ejemplo, sustituyendo la secuencia codificante por dominios constantes de cadena pesada y ligera humana en lugar de las secuencias murinas homologas, Morrison y cois., Proc. Nat. Acad. Sci. 81 : 6851 (1984), o uniendo covalentemente la secuencia codificante de la inmunoglobulina a todo o parte de la secuencia codificante de un polipéptido distinto de una inmunoglobulina. De ese modo se preparan anticuerpos "quiméricos" o "híbridos" que tienen la especificidad de unión de un anticuerpo monoclonal contra trkB del presente documento. El ADN que codifica el anticuerpo contra agonista para trkB (tal como un fragmento de unión a antígeno del mismo) también puede usarse para la administración y expresión de un anticuerpo contra agonista para trkB en una célula deseada, tal como se describe en el presente documento. Las técnicas de administración de ADN se describen adicionalmente en el presente documento. Los anticuerpos contra trkB pueden caracterizarse usando procedimientos notorios en la técnica. Por ejemplo, un procedimiento es identificar el epítopo al que se unen que incluye resolver la estructura cristalina de un complejo de anticuerpo y antígeno, ensayos de competición, ensayos de expresión de fragmentos génícos y ensayos basados en péptidos sintéticos, tal como se describe, por ejemplo, en el Capítulo 1 1 de Harlow y Lañe, Using Antibodies, A Laboratory Manual, Coid Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, 1999. En un ejemplo adicional, puede usarse el mapeo de epítopos para determinar la secuencia a la que se une un anticuerpo contra trkB. El mapeo de epítopos está disponible comercialmente en varias fuentes, por ejemplo, Pepscan Systems (Edelhertweg 15,821 9 PH Lelystad, Holanda). El epítopo puede ser un epítopo lineal, es decir, contenido en un único tramo de aminoácidos, o un epítopo conformacional formado por una interacción tridimensional de aminoácidos, que no necesariamente deben estar contenidos en un único tramo. Los péptidos de longitudes variables (por ejemplo, al menos 4-6 aminoácidos de longitud) pueden aislarse o sintetizarse (por ejemplo, de forma recombinante) y usarse para ensayos de unión con un anticuerpo contra trkB. En otro ejemplo, el epítopo al que se une el anticuerpo contra trkB puede determinarse en un tamizado sistemático usando péptidos superpuestos que se derivan de la secuencia extracelular para trkB y determinando la unión por el anticuerpo contra trkB. De acuerdo con los ensayos de expresión de fragmentos génicos, el marco de lectura abierto que codifica trkB se fragmenta o bien de forma aleatoria o mediante construcciones genéticas específicas y se determina la reactividad de los fragmentos expresados para trkB con el anticuerpo a analizar. Los fragmentos génicos pueden producirse, por ejemplo, por PCR y después transcribirse y traducirse a proteína in vitro, en presencia de aminoácidos radioactivos. La unión del anticuerpo a los fragmentos para trkB marcados radioactivamente se determina después mediante inmunoprecipitación y electroforeseis en gel. También pueden identificarse ciertos epítopos usando colecciones grandes de secuencias peptídicas aleatorias que se presentan en la superficie de partículas de bacteriófagos (colecciones de bacteriófagos). Todavía otro procedimiento que puede usarse para caracterizar un anticuerpo contra trkB es usar ensayos de competición con otros anticuerpos que se sabe que se unen al mismo antígeno, es decir, el dominio extracelular para trkB para determinar si el anticuerpo contra trkB se une al mismo epítopo que otros anticuerpos. Los ensayos de competición son notorios para los expertos en la técnica. Los ejemplos de anticuerpos de utilidad en ensayos de competición incluyen los siguientes: anticuerpos 6.1 .2, 6.4.1 , 2345, 2349, 2.5.1 , 2344, 2248, 2250, 2253, y 2256. Véase la publicación de PCT n.° WO 01/98361 . El mapeo de epítopos también puede realizarse usando mutantes de intercambio de dominios tal como se describe en la Publicación de PCT n.° WO 01/98361 . Generalmente, esta estrategia es útil para los anticuerpos contra trkB que no presentan reacción entrecruzada significativa con trkA o trkC. Los mutantes de intercambio de dominios para trkB pueden prepararse sustituyendo los dominios extracelulares para trkB por los dominios correspondientes de trkC o trkA. La unión de cada anticuerpo contra agonista trkB a diversos mutantes de intercambio de dominios puede evaluarse y compararse con la unión a trkB de tipo silvestre (nativo) usando ELISA u otros procedimientos conocidos en la técnica. En otra estrategia, puede realizarse un escaneado con alanina. Los restos individuales del antígeno, el receptor trkB, se mutan sistemáticamente a otro aminoácido (habitualmente alanina) y el efecto de los cambios se evalúa analizando la capacidad del trkB modificado de unirse al anticuerpo usando ELISA u otros procedimientos conocidos en la técnica.

Polipéptidos BDNF El agonista para trkB que se usó en los procedimientos de la invención incluye polipéptidos BDNF. Tal como se usa en el presente documento, "polipéptido BDNF" incluye la proteína madura natural (denominada de forma intercambiable "BDNF") tal como BDNF madura humana que se muestra en la patente de Estados Unidos n.° 5,180,820 y variantes naturales de secuencias de aminoácidos de BDNF; variantes de secuencias de aminoácidos de BDNF; fragmentos peptídicos de BDNF madura (tal como humana) y dichas variantes de secuencias de aminoácidos; y formas modificadas de BDNF madura y dichas variantes de secuencias de aminoácidos y fragmentos peptídicos en los que el polipéptido o péptido se ha modificado covalentemente mediante sustitución con un resto distinto de un aminoácido natural, en tanto en cuanto la variante de la secuencia de aminoácidos, el fragmento peptídico y la forma modificada del mismo muestren una o más actividades biológicas de un agonista para trkB y/o de proteína BDNF madura natural. Los agonistas para trkB también incluyen proteínas de fusión y conjugados que comprenden cualquiera de las modalidades de polipéptido BDNF que se describen en el presente documento, por ejemplo, un polipéptido BDNF conjugado o fusionado con un resto que aumente la semivida, tal como PEG o un péptido. Las vanantes de secuencias de aminoácidos, los fragmentos peptídicos (que incluyen fragmentos de variantes), o formas modificadas del mismo consideradas no incluyen NGF, NT-4/5, o NT-3 de ninguna especie animal. Los polipéptidos BDNF incluyen una o más cualesquiera de las modalidades que se describen en el presente documento. Por ejemplo, el polipéptido BDNF comprende una secuencia natural con una o más inserciones, deleciones, o sustituciones de aminoácidos. En algunas modalidades, el polipéptido BDNF es un polipéptido BDNF de mamífero que puede ser un BDNF natural de mamífero, o polipéptido BDNF derivado de un BDNF natural de mamífero y que tiene una secuencia que no se corresponde con ninguna parte de un BDNF natural que no sea de mamífero. En algunas modalidades, el polipéptido BDNF es un polipéptido BDNF humano que puede ser un BDNF natural humano, o un polipéptido BDNF que se deriva de un BDNF natural humano y que tiene una secuencia que no se corresponde con ninguna parte de un BDNF natural que no sea humano. Los polipéptidos BDNF, que incluye variantes, fragmentos peptídicos, formas modificadas de polipéptidos BDNF (que incluyen BDNF natural), proteína de fusión y conjugado de la invención se caracterizan por cualquiera (una o más) de los siguientes características: (a) unirse a un receptor trkB; (b) unirse a un receptor trkB y activar la(s) actividad(es) biológica(s) para trkB y/o una o más rutas aguas abajo mediadas por la(s) función(es) de señalización para trkB; (c) unirse a un receptor trkB y aumentar el peso corporal y/o la ingesta de alimentos en un primate cuando se administra de forma periférica; (d) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de caquexia o pérdida de peso indeseada en un primate cuando se administra de forma periférica; (e) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la anorexía nervosa en un primate cuando se administra de forma periférica; (f) unirse a un receptor trkB y tratar, prevenir, invertir o mejorar uno o más síntomas de la emesis inducida por opioides en un mamífero cuando se administra, de forma periférica: (g) promover la dimerización y activación del receptor trkB; y (h) aumentar la supervivencia neuronal dependiente del receptor trkB y/o el crecimiento de neuritas. Así todos los polipéptídos BDNF (que incluyen variantes, fragmentos y formas modificadas) son funcionales tal como se describe anteriormente. La actividad biológica de las variantes puede analizarse in vitro e in vivo usando procedimientos conocidos en la técnica y procedimientos que se describen en el presente documento. Los polipéptídos BDNF pueden presentar una actividad potenciada o una actividad reducida comparados con una proteína BDNF natural. En algunas modalidades, las variantes funcíonalmente equivalentes presentan al menos aproximadamente cualquiera de 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, o 95% de actividad comparadas con la proteína BDNF nativa de la que se deriva el polipéptido BDNF con respecto a uno o más de los ensayos biológicos que se describen anteriormente (o que se conocen en la técnica). En algunas modalidades, las variantes funcionalmente equivalentes tienen una CE50 (la mitad de la concentración mínima eficaz) de menos de aproximadamente cualquiera de 0.01 nM, 0.1 nM, 1 nM, 10 nM o 100 nM en la activación del receptor trkB in vitro (por ejemplo ensayos que se describen en el Ejemplo 6, y en los documentos US 2005/0209148 y PCT WO 2005/082401 ). Las variantes de secuencias de aminoácidos de BDNF incluyen polipéptidos que tienen una secuencia de aminoácidos que difiere de BDNF natural por la inserción, deleción y/o sustitución de uno o más restos aminoacídicos de la secuencia de BDNF natural (por ejemplo, BDNF humano maduro que se muestra en el Cuadro 1 ). Las variantes de secuencias de aminoácidos generalmente serán al menos aproximadamente 65%, 70%, 75%, 80%, 85%. 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% idénticas a cualquier BDNF natural (tal como BDNF humano maduro). En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 70% a la secuencia de aminoácidos de BDNF humano maduro. En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 85% a la secuencia de aminoácidos de BDNF humano maduro. En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 90% a la secuencia de aminoácidos de BDNF humano maduro. En algunas modalidades, la variante es idéntica al menos aproximadamente en un 95% a la secuencia de aminoácidos de BDNF humano maduro. Dichas variaciones que, por ejemplo, convierten BDNF en NGF, BDNF o NT-3 no están incluidas en el alcance de esta invención. Así, aunque el sitio para introducir una variación de la secuencia de aminoácidos es predeterminado, la naturaleza de la mutación per se no tiene porqué ser predeterminada. Por ejemplo, para optimizar el funcionamiento de una mutación en un sitio dado, se realiza un escaneado con ala o una mutagénesis aleatoria en el codón o región diana y las variantes de BDNF se tamizan para determinar la actividad deseada. Las deleciones de secuencias de aminoácidos generalmente varían en el intervalo desde aproximadamente 1 a 30 restos, más preferiblemente, de aproximadamente 1 a 10 restos, y habitualmente son contiguas. Las deleciones pueden introducirse en regiones de baja homología entre BDNF, NGF, NT-3 y NT-4/5 para modificar la actividad de BDNF. Las deleciones de BDNF en áreas de homología sustancial con NT-4/5, NT-3, y NGF pueden tener una mayor probabilidad de modificar la actividad biológica de BDNF de forma más significativa. El número de deleciones consecutivas puede seleccionarse de forma que se conserve la estructura terciaria de BDNF en el dominio afectado, por ejemplo, lámina plegada beta o hélice alfa. Las inserciones en las secuencias de aminoácidos incluyen fusiones en los extremos amino y/o carboxilo que varían en longitud desde un resto a polipéptidos que contienen mil o más restos, así como inserciones intrasecuencia de un único o de múltiples restos aminoacídícos. Las inserciones intrasecuencia (es decir, inserciones en la secuencia de BDNF madura) pueden variar generalmente desde aproximadamente 1 a 10 restos, más preferiblemente, de 1 a 5, lo más preferiblemente 1 a 3. Un ejemplo de una inserción terminal incluye la fusión de una secuencia de señal heteróloga en el extremo N en el extremo N de la molécula de BDNF para facilitar la secreción de BDNF maduro por el huésped recombinante. Dichas señales generalmente serán homologas a la célula huésped que se pretenda e incluyen STII o Ipp para E. coli, factor alfa para levaduras y señales víricas tales como gD de herpes para las células de mamíferos. Otras inserciones incluyen la fusión de un polipéptido en el extremo N o C de BDNF. Otro grupo de variantes incluye aquellas en las que se ha eliminado al menos un resto aminoacídico de BDNF, y preferiblemente sólo uno, y se inserta un resto diferente en su lugar. Un ejemplo es la sustitución de arginina y lisína por otros aminoácidos para hacer que BDNF sea resistente a la proteólisis por las serina proteasas, creando así una variante de BDNF que es más estable. Los sitios de mayor interés para la mutagénesis por sustitución incluyen sitos en los que los aminoácidos que se encuentran en BDNF, NGF, NT-3, y NT-4/5 son sustancialmente diferentes en términos de volumen, carga o hidrofobicidad de la cadena lateral, pero en los que también existe un alto grado de homología en el sitio seleccionado entre d iversos análogos animales de NGF, NT-3, y NT-4/5 (por ejemplo entre todos los NGF animales, todos los NT-3 animales y todos los BDNF animales). Este a nálisis destacará los restos que pueden estar implicados en la diferenciación de la actividad de los factores tróficos y por lo tanto, las variantes en estos sitios pueden afectar dichas actividades. Otros sitios de interés son aquellos en los que los restos son idénticos entre los BDNF, NGF, NT-3, y NT-4/5 de todas las especies animales. Este grado de conformación sugiere la importancia de lograr una actividad biológica común a los cuatro factores. Por ejemplo, la sustitución de uno o más aminoácidos incluye sustituciones conservadoras. Los procedimientos de realizar sustituciones conservadoras son conocidos en la técnica. Por ejemplo, ala (A) puede sustituirse por val, leu, ile, preferiblemente por val; arg (R) puede sustituirse por lys, gln, asn, preferiblemente por lys; asn (N) puede sustituirse por gln, his, lys, arg, preferiblemente por gln; asp (D) puede sustituirse por glu; cys (C) puede sustituirse por ser; gln (O) puede sustituirse por asn; glu (E) puede sustituirse por asp; gly (G) puede sustituirse por pro; his (H) puede sustituirse por asn, gln, lys, arg; preferiblemente por arg; ile (I) puede sustituirse por leu, val, met, ala, phe, norleucina, preferiblemente por leu; leu (L) puede sustituirse por norleucina, ile, val, met; ala; phe, preferiblemente por ile; lys (K) puede sustituirse por arg; gln, asn, preferiblemente por arg; met (M) puede sustituirse por leu; phe; ile,- preferiblemente por leu; phe (F) puede sustituirse por leu, val, ile, ala, preferiblemente por leu; pro (P) puede sustituirse por gly; ser (S) puede sustituirse por thr; thr (T) puede sustituirse por ser; trp (W) puede sustituirse por tyr, tyr (Y) puede sustituirse por trp, phe, thr, ser, preferiblemente por phe; val (V) puede sustituirse por ile; leu; met; phe, ala; norleucina, preferiblemente por leu. Pueden lograrse modificaciones sustanciales seleccionando sustituciones que difieren significativamente en su efecto sobre el mantenimiento de (a) la estructura del esqueleto del polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo, en forma de conformación en lámina o en hélice, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio diana, o (c) el volumen de la cadena lateral. Los restos naturales están divididos en grupos basándose en las propiedades comunes de las cadenas laterales (algunos de estas pueden corresponder a diversos grupos funcionales): ( 1 ) hidrófobos: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrófilos neutros: cys, ser, thr; (3) ácidos: asp, glu; (4) básicos: asn, gln, his, lys, arg; (5) restos que influyen la orientación de la cadena: gly, pro; y (6) aromáticos: trp, tyr, phe. Las sustituciones no conservadoras supondrán intercambiar un miembro de una de estas clases por otro. Las variantes de las secuencias de aminoácidos de BDNF pueden ser naturales o pueden prepararse sintéticamente, tal como introduciendo cambios de nucleótidos apropiados en un ADN de BDNF previamente aislado o mediante síntesis in vitro de la variante de polipéptido q ue se desee. Tal como se indica anteriormente, dichas variantes pueden comprender deleciones, o inserciones o sustituciones, de uno o más restos a minoacídicos dentro de la secuencia de aminoácidos de BDNF maduro (por ejemplo, la secuencia que se muestra en el Cuadro 1 ). Se realiza cualquier combinación de deleción, inserción, y sustitución para obtener una variante de secuencia de aminoácidos de BDNF, con la condición de que la variante de polipéptido posea una característica deseada. Los cambios de aminoácidos también pueden producir modificaciones adicionales de BDNF tras la expresión en huéspedes recombinantes, por ejemplo introduciendo o moviendo sitios de glucosilación, o introduciendo secuencias de anclaje a la membrana (véase, por ejemplo, el documento PCT WO 89/01041 ). En algunas modalidades, el polipéptido BDNF comprende una secuencia de aminoácidos codificada por un ácido nucleico que se híbrida en condiciones restrictivas a una secuencia de ácido nucleico) que codifica BDNF humano maduro. Las variantes de polinucleótidos también, de forma alternativa, pueden ser sustancialmente homologas a un gen nativo, o a una porción o complemento del mismo. Dichas variantes de polinucleótidos pueden hibridarse en condiciones moderadamente restrictivas con una secuencia de ADN natural que codifica el polipéptido (o una secuencia complementaria). Las personas de experiencia ordinaria en la técnica apreciarán que, como resultado de la degeneración del código genético, existen muchas secuencias de nucleótidos que codifican un polipéptido tal como se describe en el presente documento. Algunos de setos polinucleótidos tienen una homología mínima con la secuencia de nucleótidos de cualquier gen nativo. Sin embargo, los polinucleótidos que varían debido a diferencias en el uso de los codones están contemplados de forma específica por la presente invención. Además, los alelos de los genes que comprenden las secuencias de polinucleótidos que se proporcionan en el presente documento están dentro del alcance de la presente invención. Los alelos son genes endógenos que se alteran como resultado de una o más mutaciones, tales como deleciones, adiciones y/o sustituciones de nucleótidos. El ARNm y la proteína resultantes pueden tener, pero no necesariamente, una estructura o función alterada. Los alelos pueden identificarse usando técnicas estándar (tales como hibridación, amplificación y/o comparación entre las secuencias de bases de datos). Los agonistas para trkB que se usan en los procedimientos de la invención también incluyen proteínas de fusión que comprenden la secuencia de aminoácidos de BDNF (por ejemplo, BDNF humana que se muestra en el Cuadro 1 ) o un fragmento peptídico funcional del mismo. Los polipéptidos BDNF biológicamente activos pueden fusionarse con secuencias, tales como las secuencias que potencian la capacidad de reacción inmunológica, facilitan el acoplamiento del polipéptido a un soporte o a un vehículo, o facilitan el plegamiento y/o la purificación (por ejemplo, secuencias que codifican epítopos tales como Myc, HA derivado del influenza virus hemaglutinina, His-6, FLAG). Estas secuencias pueden fusionarse a un polipéptido BDNF en el extremo N o en el extremo C. Además, la proteína o polinucleótido puede fusionarse con otros polipéptidos que aumentan su función o especifican su localización en la célula, tal como una secuencia de secreción. Los procedimientos para producir proteínas recombinantes por fusión que se describen anteriormente son conocidos en la técnica. La proteína recombinante por fusión puede producirse, plegarse y aislarse mediante procedimientos notorios en la técnica. Los polipéptidos BDNF que se describen en el presente documento pueden modificarse para aumentar sus semividas en un individuo. Por ejemplo, el polipéptido BDNF puede pegilarse para reducir el aclaramiento sistémico con una pérdida mínima de actividad biológica. La invención también proporciona composiciones (que incluyen composiciones farmacéuticas) que comprenden un polipéptido BDNF ligado a una molécula de PEG. En algunas modalidades, la molécula de PEG está ligada al polipéptido BDNF a través de un enlace reversible. La semivida de un polipéptido BDNF pegilado puede aumentarse en más de aproximadamente cualquiera de 2 veces, 5 veces, 10 veces, 20 veces y 30 veces respecto a la semivida del polipéptido BDNF no pegilado. Los polímeros de PEG pueden enlazarse a diversos grupos funcionales del polipéptido BDNF usando procedimientos conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Roberts y cois. Advanced Drug Delivery Reviews 54: 459-416 (2002); Sakane y cois. Pharm. Res. 14: 1086-91 ( 1991 ). El PEG puede enlazarse a los siguientes grupos funcionales del polipéptido: grupos amino, grupos carboxilo, extremos N modificados o naturales, grupos amino y grupos tiol. En algunas modalidades, uno o más restos aminoacídicos superficiales se modifican con moléculas de PEG. Las moléculas de PEG pueden ser de diversos tamaños (por ejemplo, que varían de aproximadamente 2 a 40 kDa). Las moléculas de PEG ligadas al polipéptido BDNF pueden tener un peso molecular de aproximadamente cualquiera de 2,000, 10,000, 15,000, 20,000, 25,000, 30,000, 35,000, 40,000 Da. La molécula de PEG puede ser una cadena única o ramificada. Para enlazar PEG y el polipéptido BDNF, puede usarse un derivado de PEG que tiene un grupo funcional en uno o ambos extremos. El grupo funcional se elige basándose en el tipo de grupo reactivo disponible en el polipéptido BDNF. Los procedimientos para enlazar derivados de enlace a polipéptidos son conocidos en la técnica. Roberts y cois., Advanced Drug Delivery Reviews 54: 459-476 (2002). El enlace entre el polipéptido BDNF y el PEG también puede ser tal que pueda escindirse o que se degrade de forma natural (enlace reversible o degradable) en un individuo lo que puede mejorar la semivida pero minimizar la pérdida de actividad. El sitio de enlace de PEG en el polipéptido BDNF también puede crearse mutando los restos superficiales a un resto aminoacídico que tenga un grupo que reacciones con PEG, tal como, una cisteína. El polipéptido BDNF puede producirse por medios recombinantes, es decir, mediante la expresión del ácido nucleico que codifica el polipéptido BDNF en cultivo celular recombinante, y, opcionalmente con purificación de la variante del polipéptido del cultivo celular, por ejemplo, mediante bioensayo de la actividad de la variante o mediante absorción en una columna de inmunoafinidad que comprende anticuerpos policlonales de conejo contra BDNF (que se unen a al menos un epítopo inmunitario de la variante que también está presente en BDNF nativo). Los fragmentos peptídicos pequeños, del orden de 40 restos o menos, se preparan de forma conveniente por procedimientos in vitro. El ADN que codifica el polipéptido BDNF puede clonarse en un vector de expresión para expresar la proteína en una célula huésped. Los ejemplos de ácidos nucleicos que codifican el polipéptido BDNF se describen en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2003/0203383. El ADN que codifica el polipéptido BDNF en su forma madura puede enlazarse en su extremo amino a una señal de secreción. Esta señal de secreción preferiblemente es la presecuencia de BDNF que normalmente dirige la secreción de BDNF en las células humanas in vivo. Sin embargo, las señales de secreción adecuadas incluyen también señales de otros BDNF animales, señales de NGF, NT-2, o NT-3, señales víricas o señales de polipéptidos segregados de la misma especie u otra relacionada. Puede usarse cualquier célula huésped (tal como E. coli) para expresar la proteína o polipéptido. El polipéptido BDNF expresado puede purificarse. El polipéptido BDNF puede recuperarse del medio de cultivo en forma de una proteína segregada, aunque también puede recuperarse a partir de lisados de células huésped cuando se expresa directamente sin señal de secreción. Pueden usarse los procedimientos de purificación de proteínas conocidos en la técnica. Los procedimientos para producir el polipéptido BDNF y purificar el polipéptido BDNF expresado son conocidos en la técnica. El polipéptido B DNF puede expresarse en E. coli y plegarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica. El BDNF humano maduro también puede obtenerse comercialmente (por ejemplo, en R&D Systems). Los procedimientos para generar y producir polipéptidos NT-4/5 pueden usarse también para generar y producir polipéptidos BDNF.

Identificación de agonistas para trkB Los agonistas para trkB (tales como anticuerpos) pueden identificarse usando procedimientos reconocidos en la técnica, que incluyen uno o más de los siguientes procedimientos. Por ejemplo, puede usarse el ensayo de activación de cinasas receptoras (KIRA) que se describe en la patente de Estados Unidos n.° 5,766,863 y 5,891 ,650. Este ensayo de tipo ELISA es adecuado para las mediciones cualitativas o cuantitativas de la activación de cinasas al medir la autofosforilación del dominio cinasa de una proteína tirosina cinasa receptora (rPTK, por ejemplo receptor trk), así como para la identificación y caracterización de agonistas o antagonistas potenciales de un rPTK seleccionado. La primera etapa del ensayo implica la fosforilación del dominio de cinasa de un cinasa receptora, en el presente caso un receptor trkB, en el que el receptor está presente sobre la membrana celular de una célula eucariota. El receptor puede ser un receptor endógeno o un ácido nucleico que codifica el receptor, o una construcción de receptor que puede transformar la célula. Habítualmente, se recubre una primera fase sólida (por ejemplo, un pocilio de una primera placa de ensayo) con una población sustancialmente homogénea de dichas células (habítualmente una línea celular de mamífero) de forma que las células se adhieran a la fase sólida. A menudo, las células son adherentes y por lo tanto se adhieren de forma natural a la primera fase sólida. Si se usa una "construcción de receptor", habitualmente comprende una fusión de una cinasa receptora y un polipéptido marcador. El polipéptido marcador es reconocido por el agente de captura, a menudo un anticuerpo de captura, en la parte de ELISA del ensayo. Después se añade un analito, tal como un agonista candidato, a los pocilios que tienen las células adherentes, de tal forma que la tirosina cinasa receptora (por ejemplo el receptor trkB) esté expuesto (o se ponga en contacto) con el analito. Este ensayo permite identificar los ligandos agonistas para la tirosina cinasa receptora de interés (por ejemplo trkB). Tras la exposición al analito, las células adherentes se solubilizan usando un tampón de lisis (que tiene detergente solubilizante en él) y agitación suave, liberando así el lisado celular que puede someterse a la parte de ELISA del ensayo directamente, sin necesidad de concentrar ni aclarar el lisado celular. El lisado celular así preparado están entonces listo para someterse a la etapa ELISA del ensayo. Como primer paso de la etapa ELISA, se recubre una segunda fase sólida (habitualmente un pocilio de una placa de microtitulación de ELISA) con un agente de captura (a menudo un anticuerpo de captura) que se une a de forma específica a la tirosina cinasa receptora o, en el caso de una construcción de receptor, al polipéptido marcador. El recubrimiento de la segunda fase sólida se realiza de tal modo que el agente de captura se adhiere a la segunda fase sólida. El agente de captura generalmente es un anticuerpo monoclonal, pero tal como se describe en los ejemplos del presente documento, también pueden usarse anticuerpos policlonales u otros agentes. El lisado celular obtenido se expone después o se pone en contacto con el agente de captura adherente de forma que el receptor o la construcción de receptor se adhiera (o sea capturado) a la segunda fase sólida. Después se realiza una etapa de lavado, de forma que se elimine el lisado celular no unido, dejando el receptor o construcción de receptor capturados. El receptor o construcción de receptor es adherente o capturado después se expone o se pone en contacto con un anticuerpo contra fosfotirosina que identifica los restos de tirosina fosforilados de la tirosina cinasa receptora. En la modalidad preferida, el anticuerpo contra fosfotirosina está conjugado (de forma directa o indirecta) con una enzima que cataliza un cambio de color de un reactivo con color no radioactivo. Por consiguiente, puede medirse la fosforilación del receptor mediante un posterior cambio de color del reactivo. La enzima puede estar unida al anticuerpo contra fosfotirosina directamente o puede conjugarse una molécula de conjugación (por ejemplo, biotina) al anticuerpo contra fosfotirosina y la enzima posteriormente puede unirse al anticuerpo contra fosfotirosina mediante la molécula de conjugación. Finalmente, la unión del anticuerpo contra fosfotirosina al receptor o construcción de receptor capturados se mide, por ejemplo, mediante el cambio de color del reactivo de color. Tras la identificación inicial, la actividad agonista de un candidato (por ejemplo, un anticuerpo monoclonal contra trkB) puede confirmarse adicionalmente y refinarse mediante bioensayos conocidos para analizar las actividades biológicas que se buscan. Por ejemplo, puede analizarse la capacidad de un candidato de actuar de agonista para trkB en el ensayo de crecimiento de neuritas PC12 usando células PC12 transfectadas con trkB de longitud completa (Jiah y cois., Cell Signal. 8: 365-70, 1996). Este ensayo mide el crecimiento de las ramificaciones de las neuritas en células de feocromocitoma de rata (PC12) en respuesta a la estimulación mediante ligandos apropiados. Estas células expresan trkA endógeno y por lo tanto responden a NGF. Sin embargo, no expresan trkB endógeno y por lo tanto están transfectadas con una construcción de expresión para trkB para provocar una respuesta contra agonistas para trkB. Después de incubar las células transfectadas con el candidato, se mide el crecimiento de las neuritas, y se cuenta por ejemplo, las células con neuritas que superan 2 veces el diámetro de la célula. Los candidatos (tales como anticuerpos contra trkB) que estimulan el crecimiento de neurita en células PC1 2 transfectadas demuestran actividad agonista para trkB. La activación para trkB también puede determinarse usando diversas neuronas específicas en etapas específicas del desarrollo embrionario. Las neuronas seleccionadas de forma adecuada pueden depender de la activación para trkB para la supervivencia y así es posible determinar la activación para trkB siguiendo la supervivencia de estas neuronas in vitro. La adición de candidatos a cultivos primarios de neuronas apropiadas conllevará la supervivencia de estas neuronas durante un periodo de al menos varios días si los candidatos activan trkB. Esto permite determinar la capacidad del candidato (tal como un anticuerpo contra trkB) de activar trkB. En un ejemplo de este tipo de ensayo, se disecciona el ganglio nodoso de un embrión de ratón E15, se disocia y las neuronas resultantes se plaquean en una placa de cultivo tisular a densidad baja. Después se añaden al medio los anticuerpos candidato y las placas se incuban durante 24-48 horas. Después de este tiempo, se evalúa la supervivencia de las neuronas mediante cualquiera de una variedad de procedimientos. Las muestras que recibieron un agonista habitualmente presentarán una mayor tasa de supervivencia que las muestras que reciben un anticuerpo de control, y esto permite determinar la presencia de un agonista. Véase, por ejemplo, Buchman y cois. (1993) Development 1 18(3): 989-1001 . Los agonista para trkB pueden identificarse por su capacidad de activar la señalización aguas abajo en una variedad de tipos celulares que expresan trkB bien de forma natural o tras la transfección de ADN que codifica trkB. Este trkB puede ser trkB humano o de otro mamífero (tal como un roedor o primate). La cascada de señalización aguas abajo puede detectarse por los cambios que se producen en una variedad de parámetros bioquímicos o fisológicos de la célula que expresa trkB, tal como el nivel de expresión de proteína o de fosforilación proteínica de proteínas o cambios en el estado metabólico o de crecimiento de la célula (que incluye supervivencia neuronal y/o crecimiento de neuritas, tal como se describe en el presente documento). Los procedimientos para detectar las sustancias bioquímicas o los parámetros fisiológicos relevantes son conocidos en la técnica.

V. Kits La invención también proporciona kits para usar en los presentes procedimientos. Los kits de la invención incluyen uno o más envases que comprenden un agonista para trkB purificado (por ejemplo, un NT-4/5 o BDNF natural y un anticuerpo contra un agonista para trkB) e instrucciones para usar de de acuerdo con cualquiera de los procedimientos de la invención que se describe en el presente documento. De forma general, estas instrucciones comprenden una descripción de la administración del agonista para trkB para tratar una enfermedad, tal como caquexia, anorexia nervosa, y emesis inducida por opioides, de acuerdo con cualquiera de los procedimientos que se describen en el presente documento. El kit puede comprender además una descripción de la selección de un individuo adecuado para tratar basándose en identificar si ese individuo tiene la enfermedad y la etapa de la enfermedad. Las instrucciones que se refieren al uso de agonista para trkB generalmente incluyen información relativa a la dosis, posología y vía de administración para el tratamiento que se pretenda. Los envases pueden ser monodosis, envases a granel (por ejemplo envases de dosis múltiples) o dosis subunitarias. Las instrucciones que se proporcionan en los kits de la invención habitualmente son instrucciones escritas en una etiqueta o prospecto (por ejemplo, una hoja de papel incluida en el kit), pero también son aceptables las instrucciones para su lectura mediante un aparato (por ejemplo, instrucciones contenidas en un disco de almacenamiento óptico). La etiqueta o prospecto indica que la composición se usa para tratar una enfermedad que se describe en el presente documento (tal como caquexia, anorexia nervosa, y emesis inducida por opioides). Pueden proporcionarse instrucciones para practicar cualquiera de los procedimientos que se describen en el presente documento. Los kits de esta invención están en un envase adecuado. Los envases adecuados incluyen, pero sin limitación, viales, cajas, tarros, envase flexible (por ejemplo, Mylar sellado o bolsas de plástico), y similares. También se contemplan los envases para usar combinados con un dispositivo específico, tal como un inhalador, dispositivo de administración nasal (por ejemplo, un atomizador) o un dispositivo de infusión tal como una minibomba. Un kit puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo el envase puede ser una bolsa de solución intravenosa o un vial que tenga un tapón perforable mediante una aguja de inyección hipodérmica). El envase también puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el envase puede ser una bolsa o vial con solución intravenosa que tenga un tapón perforable mediante una aguja de inyección hipodérmica). Ál menos un agente activo de la composición es un agonista para trkB. El envase puede comprender además un segundo agente farmacéuticamente activo. Los kits pueden proporcionar opcionalmente componentes adicionales tales como tampones e información para su interpretación.

Normalmente, el kit comprende un envase y una etiqueta o prospecto(s) sobre o asociado al envase. Los siguientes Ejemplos se proporcionan para ilustrar, pero no para limitar la invención. EJEMPLOS EJEMPLO 1 La infusión diaria de NT-4/5 produjo aumento de peso e hiperfaqia en babuinos obesos Tres babuinos hembra obesos (peso corporal que variaba entre 20-30 kg) recibieron una infusión intravenosa (IV) de NT-4/5 humano a 2 mg/kg una vez al día desde el día 1 al día 24. Otros tres babuinos hembra obesos (peso corporal que variaba entre 20-30 kg) recibieron una infusión IV de vehículo (PBS) una vez al día desde el día 1 al día 24. La ingesta de alimentos se midió a diario durante los primeros 45 días. Los animales se pesaron una vez a la semana durante los primeros 53 días y después se realizó un seguimiento el día 81 y el día 109 respectivamente. La Figura 1 muestra el efecto de la infusión diaria de NT-4/5 sobre el peso corporal de babuinos obesos. Tal como se muestra en la Figura 1 , el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo; y peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 volvió al nivel del grupo tratado con vehículo para el día 81 . Los datos indicaron que la infusión diaria con NT-4/5 produjo un aumento de peso prolongado pero reversible en los babuinos obesos. La Figura 2 muestra el efecto de infusión diaria con NT-4/5 sobre la ingesta de alimentos en babuinos obesos. Tal como se muestra en la Figura 2, la ingesta de alimentos del grupo tratado con NT-4/5 aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo; y la ingesta de alimentos del grupo tratado con NT-4/5 volvió al nivel del grupo tratado con vehículo para el día 33. Los datos indicaron que la infusión diaria con NT-4/5 produjo una hiperfagia reversible en babuinos obesos.

EJEMPLO 2 La infusión dos veces a la semana de NT-4/5 produjo aumento de peso pero no hiperfagia en babuinos obesos Tres babuinos hembra obesos (peso corporal que variaba entre -30 kg) recibieron una infusión intravenosa (IV) de NT-4/5 humano a 2 mg/kg una vez al día desde el día 1 al día 39. Otros tres babuinos hembra obesos (peso corporal que variaba entre 20-30 kg) recibieron una infusión IV de vehículo (PBS) dos veces a la semana desde el día 1 al día 39. La ingesta de alimentos se midió a diario durante los primeros 55 días. Los animales se pesaron a diario durante los primeros 66 días y después se realizó un seguimiento el día 94 y el día 122 respectivamente. La Figura 3 muestra el efecto de la infusión dos veces a la semana de NT-4/5 sobre el peso corporal de babuinos obesos. Tal como se muestra en la Figura 3, el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo; y peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 volvió al nivel del grupo tratado con vehículo para el día 94. Los datos indicaron que la infusión dos veces a la semana con NT-4/5 produjo un aumento de peso prolongado pero reversible en los babuinos obesos. La Figura 4 muestra el efecto de infusión dos veces a la semana con NT-4/5 sobre la ingesta de alimentos en babuinos obesos. Tal como se muestra en la Figura 4, la infusión dos veces a la semana de NT-4/5 no cambió significativamente la ingesta de alimentos en babuinos obesos según el análisis por ANOVA de dos vías. Los análisis de Bonferroni post hoc no mostraron una diferencia significativa entre pares entre el grupo tratado con NT-4/5 (triángulos negros) y el grupo tratado con vehículo (cuadrados blancos).

EJEMPLO 3 La infusión diaria de NT-4/5 produjo aumento de peso corporal e hiperfagia en macacos delgados Tres macacos hembra delgados (peso corporal variaba entre 3-5 kg) recibieron una infusión intravenosa (IV) de NT-4/5 humano a 2 mg/kg al d ía desde el día 1 al día 31 . Tres macacos hembra delgados (peso corporal variaba entre 3-5 kg) recibieron una infusión IV de NT-4/5 pegilado (NT4-G1 S pegilado) a 0.6 mg/kg de infusión una vez a la semana desde el día 1 al día 31 ; el NT-4/5 pegilado se generó introduciendo una mutación de la glicina de la posición 1 de la secuencia de NT-4/5 humano maduro a serina y uniendo PEG al primer aminoácido de serina como se describe en el Ejemplo 7 de la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos n.° 2005/0209148 y PCT WO 2005/082401 . Otros tres macacos hembra delgados (peso corporal variaba entre 3-5 kg) recibieron infusión IV de vehículo (PBS) una vez al día desde el día 1 a al día 31. La ingesta de alimentos se midió a diario durante los primeros 50 días. Los animales se pesaron una vez a la semana hasta el día 50. La Figura 5 muestra el efecto de la infusión diaria de NT-4/5 sobre el peso corporal en macacos hembra delgados. Tal como se muestra en la Figura 5, el peso corporal del grupo tratado a diario con NT-4/5, pero no así el que se trataba una vez a la semana con NT-4/5 pegilado, aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo. El peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 no había vuelto completamente al nivel del grupo tratado con vehículo. Los datos indicaron que la infusión diaria con NT-4/5 provocó un aumento del peso corporal en los macacos delgados. La Figura 6 muestra el efecto de la infusión diaria de NT-4/5 sobre la ingesta de alimentos en macacos hembra delgados. Tal como se muestra en la Figura 6, la ingesta de alimentos del grupo tratado a diario con NT-4/5, pero no así el que se trataba una vez a la semana con NT-4/5 pegilado, aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo. La ingesta de alimentos del grupo tratado con NT-4/5 no había vuelto completamente al nivel del grupo tratado con vehículo el día 38. Los datos indicaron que la infusión diaria con NT-4/5 provocó hiperfagia reversible en los macacos delgados. También se evaluó el efecto de NT-4/5 y NT-4/5 pegilado sobre el peso corporal mediante administración subcutánea. Tres macacos hembra delgados (peso corporal variaba entre 3-5 kg) recibieron una inyección subcutánea (SC) de NT-4/5 humano a 2 mg/kg al día desde el día 1 al día 21 . Tres macacos hembra delgados (peso corporal variaba entre 3-5 kg) recibieron una inyección SC de NT-4/5 pegilado a 1 mg/kg una vez al día desde el día 1 al día 21 . Otros tres macacos hembra delgados (peso corporal variaba entre 3-5 kg) recibieron una inyección SC de vehículo (PBS) una vez al día desde el día 1 al día 21 . Los animales se pesaron una vez a la semana hasta el día 21 . La Figura 7 muestra el efecto de la inyección SC diaria de NT-4/5 y de NT-4/5 pegilado sobre el peso corporal en macacos hembra delgados. Tal como se muestra en la Figura. 7, el peso corporal del grupo tratado con NT-4/5 aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo. Además, también el peso corporal del grupo tratado con pegilado NT-4/5 también aumentó significativamente comparado con el grupo tratado con vehículo.

EJEMPLO 4 La inyección subcutánea diaria de NT-4/5 no mostró ningún efecto significativo sobre el peso corporal y la ingesta de alimentos en conejos NZW Cinco conejos blancos de Nueva Zelanda macho y cinco hembra (peso corporal variaba entre 3-4 kg) recibieron una inyección subcutánea (SC) de NT-4/5 humano a 2 mg/kg al día desde el día 1 al día 15. Otros cinco conejos blancos de Nueva Zelanda macho y cinco hembra (peso corporal variaba entre 3-4 kg) recibieron una inyección SC de vehículo (PBS) una vez al día desde el día 1 al día 15. La ingesta de alimentos se midió a diario durante los primeros 15 días. Los animales se pesaron una vez a la semana hasta el día 15. No se observaron diferencias estadísticamente significativas entre el grupo tratado con NT-4/5 y el grupo tratado con vehículo para el peso corporal ni la ingesta de alimentos. Las comparaciones se realizaron entre los conejos macho tratados con NT-4/5 y los conejos macho tratados con vehículo, y entre los conejos hembra tratados con NT-4/5 y los conejos hembra tratados con vehículo.

EJEMPLO 5 Una única inyección de NT-4/5 no provocó vómitos pero puede reducir los vómitos inducidos por morfina en hurones Se estudió el efecto de NT-4/5 sobre la emesis en hurones hembra adultos con peso corporal de aproximadamente 1 kg (Marshall Farm, CT). Se administró un agente emético (0.05 mg/kg de 6-glucurónido morfina, M6G) por vía subcutánea como control positivo para establecer el nivel inicial antes de la administración de NT-4/5. Se inyectó una dosis creciente de NT-4/5 (0.1 , 1 , o 10 mg/kg) por vía subcutánea a 6 hurones (para cada dosis) solo para analizar si NT-4/5 podía causar cualquier efecto adverso tal como arcadas o vómitos. Además, se administraron dos dosis, 1 mg/kg y 10 mg/kg, de NT-4/5 10 minutos antes de M6G para analizar si NT-4/5 podría suprimir la emesis inducida por M6G. Los animales se devolvieron a su jaula y se observaron para determinar la latencia, el número de arcadas y de vómitos durante un periodo de 60 minutos después de la inyección. Tal como se muestra en la Figura 8, una única inyección de 0.1 , 1 o 10 mg/kg de NT-4/5 sola no provocó vómitos en los hurones, mientras que una única inyección SC de 0.05 mg/kg de M6G indujo la emesis de forma eficaz. Tanto 1 mg/kg como 10 mg/kg de NT-4/5 redujeron significativamente los vómitos inducidos por M6G en hurones. Para analizar el sitio de activación para trkB que pudiera ser responsable por el efecto contra la emesis de la inyección SC de NT-4/5 en los hurones, se analizó la activación por c-Fos para trkB en tronco encefálico del hurón. Se inyectó una única dosis de 10 mg/kg de NT-4/5 por vía subcutánea, seguido de 10 mg/kg intravenoso de cisplatina 5 minutos después, a cinco hurones hembra. Se administró una única dosis de inyección con vehículo, seguida de cisplastina 5 minutos después a otros cuatro hurones hembra como control negativo. Los animales se sacrificaron 1 hora después mediante pentobarbital sodio (65 mg/kg ip), fijado mediante perfusión intracardíaca con 1 l/kg de PBS seguido de 1 l/kg de paraformaldehído al 4% a pH 7.3. Se cortaron secciones de tronco encefálico a 30 pm y los cortes se incubaron en suero de burro normal al 10% (NOS) diluido en Tritón X- 00 al 0.1 % (en PBS) durante 1 hora seguido de incubación en anticuerpo de oveja contra Fos (1 : 1 ,000, OA-1 1 -0824, Genosys Biotechnologies, Cambridge; Reino Unido) en PBS con Tritón X-100 al 0.1 % y NOS al 10% durante 48 horas a 4 °C. Los cortes se lavaron en PBS y después se incubaron en solución de anticuerpo secundario biotilinado contra IgG de oveja durante 60 minutos a temperatura ambiente. La tinción se reveló usando la técnica de complejo de avidina biotina (Vectastain Elite avidin-biotin complex (ABC) Kit, Vector). En resumen, los cortes se incubaron en reactivo ABC durante 60 minutos a temperatura ambiente y después en una solución que contenía 3,3-diaminobencidina (0.5 mg/ml) durante 30-60 segundos. Después se montaron los cortes de tronco encefálico en portas para secar durante 24 horas, se deshidrataron durante 4 minutos cada uno en etanol al 50, 70, 95, y 100% y después se aclaraon en xileno, después de lo cual se montaron y se observaron. Las fronteras de los núcleos y los subnúcleos del nucleus tractus solitarius (NTS) se evaluaron en cortes adyacentes teñidos con violeta de cresilo. El número de núcleos neuronales inmunorreactivos con c-Fos se determinó bilateralmente para el área postrema, doral vagal nucleus (DMNX), y todos los subnúcleos del NTS a tres niveles por la extensión rostrocaudal del complejo dorsal del vago (DVC); 0.5-1 .0 mm rostral y 0.5 mm caudal al obex y en el obex. Se contaron tres cortes por nivel por animal y se promediaron. Los datos se compararon usando ANOVA con prueba de Tukey post hoc (Prism; GraphPad Software, San Diego, CA). El tratamiento con NT-4/5 aumentó significativamente el número de núcleos positivos para c-Fos en el área postrema comparado con los animales a los que se les inyectó vehículo (Figura 9A, P=0.0009, prueba t de Student). Por el contrario El tratamiento con NT-4/5 disminuyó significativamente el número de núcleos positivos para c-Fos en el núcleo dorsal del vago comparado con los animales a los que se inyectó vehículo (Figura 9B, P=0.0047, prueba t de Student). Por otra parte, el tratamiento con NT-4/5 no alteró significativamente el número de núcleos positivos para c-Fos en otros núcleos del tronco encefálico, que incluye los subnúcleos múltiples del NTS asi como los núcleos paraventriculares del hipotálamo. El área postrema, al contrario que la mayoría de otras áreas del cerebro, queda fuera de la barrera hematoencefálica y tiene total acceso a las macromoléculas de la circulación (para un ejemplo reciente, véase Yang y Ferguson, 2003, Regul. Pept. 1 12(1 -3): 9-1 7). La inducción de c-Fos es un evento inmediato temprano conocido de la activación para trkB por sus ligandos tales como BDNF y NT-4/5 (Ip y cois. 1993, J. Neurosci. 3(8): 3394-405 y Marsh y cois. 1993, J. Neurosci. 13(10): 4281-92). Estos datos juntos sugieren que el área postrema constituye al menos en parte una forma fiable de diana "accesible de forma periférica" de NT-4/5 u otros agonistas para trkB administrados de forma sistémica. La reducción de la expresión de c-Fos en el núcleo dorsal del vago (Figura 9B) puede reflejar una atenuación parcial del circuito del vómito por el pretratamiento con NT-4/5.

EJEMPLO 6 Generación y tamizado de anticuerpos contra agonistas para trkB Inmunización para generar agonistas monoclonales contra agonistas de Trk8: Se inyectó a un único ratón Balb/C 5 veces con un calendario habitual 8 pg de dominio extracelular para trkB como antígeno. Se expresó el dominio extracelular para trkB marcado con His (restos 31 -430) usando el vector pTriEx-2 Hygro (Novagen, Madison Wl) en células 293. El dominio extracelular para trkB se purificó usando resina Ni-NTA según las instrucciones del fabricante (Qiagen, Valencia, CA). Para las primeras 4 inyecciones, el antígeno se preparó mezclando trkB humano con sistema adyuvante RIBI y alumbre. En total se administraron 8 pg de antigeno mediante inyección en el cogote, las almohadillas plantares e IP, aproximadamente cada 3 días durante el transcurso de 1 1 días. El día 13, se sacrificó al ratón y se extrajo el bazo. Los linfocitos se fusionaron con células 8653 preparando clones de híbridomas. Se dejó que se reprodujeran los clones y después se seleccionaron como positivos contra TrkB mediante tamizado por ELISA con un ELISA tanto para TrkB humano como de rata. Tamizado por ELISA de anticuerpos contra trkB: se tamizaron sobrenadantes de clones de hibridoma en expansión de acuerdo con su capacidad de unirse tanto a trkB humano como de rata. Los ensayos se realizaron en placas de 96 pocilios recubiertas toda la noche con 100 µ? de 0.5 g/ml de proteína de fusión TrkB-Fc humana o de rata. El exceso de reactivos se lavó de los pocilios entre cada etapa con PBS que contenía Tween-20 al 0.05%. Las placas se bloquearon después con solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía BSA al 0.5%. Se añadió el sobrenadante a las placas y se incubó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió anticuerpo de cabra contra Fe de ratón conjugado con peroxidasa de rábano (HRP) para unirse a los anticuerpos de ratón unidos a TrkB. Después se añadió tetrametilbencidina como sustrato para HRP para detectar la cantidad de anticuerpo de ratón presente en el sobrenadante. Se terminó la reacción y se cuantificó la cantidad de anticuerpo relativa leyendo la absorbancia a 450 nm. Se demostró que cincuenta anticuerpos eran positivos en el ensayo por ELISA. Entre estos anticuerpos, cinco se analizaron adicionalmente y se demostraron que tenían actividad agonista. Véase el Cuadro 2 más adelante. Ensayo por KIRA: Se usó este ensayo para tamizar los anticuerpos que tirosina cinasa receptora para trkB humano. Sadick y cois. ( 1997) Experimental Cell Research 234(2): 354-61 . Utilizando una línea celular estable transfectada con trkB marcado con GD, se analizaron anticuerpos murinos purificados de los clones de hibridomas para determinar su capacidad de activar el receptor superficial de las células similares a la activación observada con los ligandos naturales, BDNF y NT-4/5. Los ligandos naturales indujeron la autofosforilación del dominio de cinasa del Receptor trkB. Después de exponer las células a diversas concentraciones de anticuerpos, se lisaron y se realizó un ELISA para detectar la fosforilación del receptor trkB. Se determinó la CE50 (que se muestra en el Cuadro 2 más adelantes y en la Figura 10) para cada agonista putativo para trkB y se comparó con la del ligando natural: NT-4/5. Ensayo de supervivencia de neuronas nodosas en E15: Las neuronas del ganglio nodoso obtenidas de embriones en E15 se mantuvieron mediante BDNF, de forma que a concentraciones de saturación del factor neurotrófico, la supervivencia era cerca del 100% a las 48 horas en cultivo. En ausencia de BDNF, menos del 5% de las neuronas sobrevivió 48 horas. Por lo tanto, la supervivencia de las neuronas nodosas en E15 es un ensayo sensible para evaluar la actividad de agonista de los anticuerpos contra trkB, es decir los anticuerpos contra agonistas estimularán la supervivencia de las neuronas nodosas de E15. Se sacrificaron ratones hembra Swiss Webster embarazadas del mismo tiempo mediante inhalación por C02. Se eliminaron los cuernos uterinos y se extrajeron los embriones en etapa embrionaria E15. Los ganglios nodosos se diseccionaron y después se tripsinizaron, se disociaron mecánicamente y se plaquearon a una densidad de 200-300 células por pocilio en medio sin suero definido en placas de 96 pocilios recubiertas con poli-L-ornitina y laminita. La actividad de agonista de los anticuerpos contra TrkB se evaluó de forma dependiente de la dosis por triplicado usando como referencia BDNF humano. Después de 48 horas las células en cultivo se sometieron a un protocolo de inmunocitoquímica automatizado realizado en una estación de trabajo con líquidos Biomek FX (Seckman Coulter). El protocolo incluía fijación (formaldehído al 4%, sacarosa al 5%, PBS), permeabilización (0.3% de Tritón X-100 en PBS), bloqueo de sitios de unión no específicos (5% de suero de cabra normal, 0.1 % de BSA, PBS) e incubación secuencial con anticuerpos primario y secundario para detectar las neuronas. Se usó un anticuerpo policlonal de conejo contra el producto génico proteínico 9.5 (PGP9.5, Chemicon), que es un marcador fenotípico neuronal establecido como anticuerpo primario. Se usó anticuerpo Alexa Fluor 488 de cabra contra conejo (Molecular Probes) como reactivo secundario junto con el tinte nuclear Hoechst 33342 (Molecular Probes) para marcar los núcleos de todas las células presentes en el cultivo. La adquisición de imágenes y el análisis de imágenes se realizaron en un Discovery-1/Genll Imager (Universal Imaging Corporation). Las imágenes se adquirieron de forma automática a dos longitudes de onda para Alexa flúor 488 y Hoechst 33342, usando la tinción nuclear como punto de referencia, dado que está presente en todos los pocilios para el sistema autofocus de imágenes del Imager. Se seleccionaron objetivos apropiados y el número de sitios de los que se obtenían imágenes por pocilio de forma que se abarcara toda la superficie del pocilio. Se ajustó el análisis de imágenes automatizadas para que contara el número de neuronas presente en cada pocilio después de 48 horas en cultivo basándose en su tinción específica con el anticuerpo contra PGP9.5. La aplicación cuidadosa de umbrales de la imagen y de filtros de selectividad basados en la morfología y la fluorescencia produjeron un recuento exacto de las neuronas por pocilio. Las CE50 (que se muestran en el Cuadro 2 más adelantes y en la Figura 1 1 ) se determinaron para cada anticuerpo contra agonista para trkB putativo y se compararon con las del ligando natural. El Cuadro 2 siguiente muestra los cinco anticuerpos contra trkB identificados y sus actividades sobre la supervivencia de las neuronas de ratones y la actividad de fosforilación sobre trkB humano.

CUADRO 2 Invecciones intracraneales de anticuerpos contra agonistas para trkB en ratones: Se obtuvieron ratones C57B6 macho reproductores retirados (de 8-12 meses de edad) de Charles River Laboratories (instalaciones de Hollister) y se dejaron aclimatar en un entorno de temperatura y humedad controladas, con un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas con acceso a comida y agua a voluntad durante al menos 5 días antes de la inyección. Se anestesió a cada ratón con isoflurano, para cortar una sección de pelo sobre el cráneo. Se fijó al ratón sobre el instrumento de cirugía estereotáxíca (Kopt modelo 900), anestesiado y se le dio calor con una manta eléctrica con ajuste medio. Se aplicó Betadine sobre la porción afeitada del cráneo para esterilizar la región. Se practicó una incisión longitudinal media de aproximadamente 1 cm de longitud sobre el cráneo que comenzaba justo detrás de las orejas hacia los ojos. Se descubrió el cráneo y se limpió un espacio circular de aproximadamente 1 cm de diámetro de la superficie del cráneo con una torunda de algodón para eliminar todo el tejido conjuntivo. La superficie se limpió con una torunda de algodón inmersa en peróxido de hidrógeno al 30%, para exponer el temporal. Usando la punta del taladro como sonda para medir la profundidad del cráneo, se ajustó el cráneo horizontal y verticalmente para asegurarse de que estaba nivelado antes de perforar. Se minimizó la desviación de la profundidad (con nivel cero en el temporal) a partir de 0.5 mm medio comparado con 0.5 mm lateral, así como 0.5 mm anterior comparado con 0.5 mm posterior, con una diferencia de de ± 0.05 mm. Según el atlas cerebral del ratón (Frankiin, K. B. J. y Paxinos. G. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. Academic Press. San Diego, 1997), las coordenadas para una única inyección intrahipotalámica lateral, eran las siguientes: 1 .30 mm posterior a partir del temporal; ( 1 .5 mm de la línea media; profundidad 5.70 mm de la superficie del cráneo (en el temporal). Se practicó un pequeño agujero a través del cráneo evitando tocar el cerebro. El taladro se sustituyó por una aguja de calibre 26 biselada unida a una jeringuilla Hamilton (modelo 84851 ) y se devolvió a las mismas coordenadas. Se inyectaron 2 µ? de compuesto en el hipotálamo lateral de forma incremental durante 2 minutos. La aguja se mantuvo en esta posición 30 segundos después de la inyección, después se levantó 1 mm. Después de otros 30 segundos, la aguja se levantó 1 mm. La aguja se extrajo completamente 30 segundos más tarde. La incisión después se cerró y se suturó con grapas de 2-9 mm (Autoclip, Braintree Scientific. Inc., Braintree, MA). La inyección se realizó el día 0. El peso corporal y la ingesta de alimentos se controlaron a diario hasta el día 15. Tal como se muestra en la Figura 12A y en la Figura 12B, las inyecciones intracraneales de anticuerpos 18H6 y 36D1 a la dosis especificada redujo significativamente el peso corporal y la ingesta de alimentos en los ratones. El anticuerpo IgG de control y 23B8, administrados a la dosis que se especifica no afectaron significativamente ni la ingesta de 5 alimentos ni el peso corporal. Se usó un ANOVA de dos vías con Bonferroni post hoc para el análisis estadístico. Esto indica que los anticuerpos contra agonistas para trkB tienen un efecto sobre el peso corporal y la ingesta de alimentos cualitativamente similar a NT-4/5, un agonista natural para trkB, cuando se inyecta directamente en el SNC. I 0 EJEMPLO 7 La invección periférica de anticuerpo contra agonista para trkB provocó una mayor ingesta de alimentos y peso corporal en monos Macacos hembra adultos delgados (que pesaban 3-5 kg al inicio) recibieron inyecciones intravenosas de anticuerpo monoclonal de ratón contra el agonista 38B8 y los otros tres animales recibieron vehículo dos veces a la semana. Se controló el consumo de comida a diario y el peso corporal una vez a la semana. Los análisis estadísticos se realizaron usando 0 PRISM (GraphPad Software Inc., San Diego, CA). Todos los datos y las gráficas se expresan en media ± error típico de la media (ETM). Los datos se analizaron mediante un ANOVA de 2 vías con pruebas de Dunnet post hoc (*P<0.05, **P<0.01 , *** P<0.001 ).

Los monos tratados dos veces a la semana con inyecciones de 5 mg/kg anticuerpo 38B8 contra agonista para trkB mostraron un aumento del 40% en la ingesta de alimentos acumulada (Figura 13A) y un aumento del 1 0% en peso (Figura 13B) en 2 semanas, lo que indica que la activación específica de la tirosina cinasa receptora trkB actúa de mediadora de la ingesta de alimentos, mayor ingesta calórica y mayor peso corporal. Se entiende que los ejemplos y modalidades que se describen en el presente documento son meramente ilustrativos y que les sugerirán diversas modificaciones o cambios en vista de los mismos a los expertos en la técnica y deben incluirse en el espíritu y ámbito de esta solicitud de patente.

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1 .- El uso de NT-4/5 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un medicamento útil para tratar caquexia, anorexia nerviosa, pérdida de peso no deseada o emesis inducida por opioides en un humano, en donde el medicamento está adaptado para ser periféricamente administrable.

2.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento es útil para tratar caquexia o pérdida de peso no deseada y el ser humano tiene un índice de masa corporal inferior a aproximadamente cualquiera de 25.0 kg/m2, 24.0 kg/m2, 2

3.0 kg/m2, 22.0 kg/m2, 21 .0 kg/m2, 20 kg/m2, 19.0 kg/m2 y 18.5 kg/m2. 3.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 ó 2, en donde la pérdida de peso no deseada está asociada al envejecimiento.

4. - El uso como se reclama en la reividicación 1 , en donde el medicamento es útil para tratar anorexia nerviosa y el ser humano tiene un índice de masa corporal inferior a aproximadamente cualquiera de 18.5 kg/m2, 1 7.5 kg/m2 o 16.5 kg/m2.

5. - El uso de un agonista para trkB o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un medicamento útil para tratar caquexia, anorexia nerviosa, pérdida de peso no deseada o emesis inducida por opioides en un ser humano, en donde el medicamento está adaptado para ser periféricamente administrable.

6. - El uso como se recima en la reivindicación 5, en donde el agonista para trkB es selectivo para trkB.

7. - El uso como se reclama en la reivindicación 5 ó 6, en donde el agonista para trkB es un anticuerpo contra el agonista para trkB.

8. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en donde el medicamento es útil para tratar caquexia o pérdida de peso no deseada y el ser humano tiene un índice de masa corporal inferior a aproximadamente cualquiera de 25.0 kg/m2, 24.0 kg/m2, 23.0 kg/m2, 22.0 kg/m2, 21 .0 kg/m2, 20 kg/m2, 1

9.0 kg/m2 y 18.5 kg/m2. 9. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en donde la pérdida de peso no deseada está asociada al envejecimiento.

10. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en donde el medicamento es útil para tratar anorexia nerviosa y el ser humano tiene un índice de masa corporal inferior a aproximadamente cualquiera de 18.5 Kg/m2, 1 7.5 Kg/m2 o 16.5 Kg/m2.