MX2008008928A - Vacunas e inmunoterapicos que usan il-15 optimizada de codones y metodos para usar los mismos - Google Patents

Abstract

Se describen moléculas deácidos nucleicos que codifican IL-15 o fragmentos del mismo, las cuales expresan proteínas a un nivel superior que las moléculas deácidos nucleicos con secuencias nativas de codificación para IL-15. También se describen las moléculas deácidos nucleicos con modificaciones adicionales tales como la ausencia de secuencias de codificación para las secuencias de señal IL-15 y/o la ausencia de secuencias no traducidas de IL-15 y/o las secuencias de señal que no son de IL-15. Los vectores, que incluyen plásmidos y vectores virales, que comprenden tales moléculas deácidos nucleicos, y a células hospederes que comprenden tales moléculas deácidos nucleicos se describen asícomo métodos de uso de tales moléculas deácidos nucleicos solas o en combinación con secuencias deácidos nucleicos que codifican a antígenos los cuales son parte de las moléculas deácidos nucleicos y/o parte de una molécula diferente deácido nucleido. Se describen las vacunas recombinantes y los patógenos vivos atenuados que codifican las proteínas de fusión, y métodos de uso de los mismos.

Description

VACUNAS E INMUNOTERAPICOS QUE USAN IL-15 OPTIMIZADA DE CODONES Y MÉTODOS PARA USAR LOS MISMOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico que incluyen una secuencia de ácido nucleico optimizada de codón que codifica IL-15 y fragmentos del mismo, vacunas mejoradas, métodos mejorados para inmunizar profilácticamente y/o terapéuticamente individuos contra antígenos, y para mejorar composiciones inmunoterapicas y mejorar métodos de inmunoterapia.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La inmunoterapia se refiere a modular las respuestas inmunes de la persona para impartir un efecto terapéutico deseable. Los inmunoterapicos se refieren a aquellas composiciones que, cuando se administran a un individuo, modulan el sistema inmune del individuo lo suficiente para reducir finalmente los síntomas que se asocian con respuestas inmunes indeseables o a aliviar finalmente síntomas al incrementar las respuestas inmunes deseables. En algunos casos, la inmunoterapia es parte de un protocolo de vacunación en el cual el individuo se le administra una vacuna que expone al individuo a un antígeno contra el cual el individuo genera una respuesta inmune. En tal caso, el Ref.: 194765 inmunoterapéutico incrementa la respuesta inmune y/o aumenta selectivamente una porción de la respuesta inmune (tal como el brazo celular o el brazo humoral) que es deseable para tratar o prevenir la condición, infección o enfermedad particular. Las vacunas son útiles para inmunizar individuos contra antígenos objetivo tales como alérgenos, antígenos patógenos o antígenos asociados con células involucrados en enfermedades humanas . Los antígenos asociados con células involucradas en enfermedades humanas incluyen antígenos de tumor asociados con cáncer y antígenos asociados con células involucradas en enfermedades autoinmunes . Al diseñar tales vacunas, se ha reconocido que las vacunas <3ue producen el antígeno objetivo en células del individuo vacunado son efectivas para inducir el brazo celular del sistema inmune. Específicamente, vacunas aliviadas vivas, vacunas recombinantes que usan vectores no virulentos, y vacunas de ADN cada una lleva a la producción de antígenos en la célula del individuo vacunado que resulta en la inducción del brazo celular del sistema inmune. Por otro lado, las vacunas eliminadoras o inactivadas, y vacunas de sub-unidad que comprende sólo proteínas no inducen buenas respuestas inmunes celulares no obstante que inducen una respuesta humoral. Una respuesta inmune celular a menudo es necesaria para proporcionar protección contra infección de patógeno y para proporcionar terapia mediada por lo inmune efectiva para el tratamiento de infección pro patógeno, cáncer o enfermedades autoinmunes. En consecuencia, las vacunas que producen el antígeno objetivo en células del individuo vacuna tal como vacunas atenuadas vivas, vacunas recombinantes que usan vectores no virulentos y vacunas de ADN se prefieren f ecuentemente . Aunque tales vacunas son a menudo efectivas para inmunizar individuos profilácticamente o terapéuticamente •contra infección pro patógeno o enfermedades humanas, hay una necesidad para vacunas mejoradas. Hay una necesidad para composiciones y métodos que producen una respuesta inmune aumentada . Similarmente, aunque algunos inmunoterapieos son útiles para modular respuesta inmune en un paciente que mantiene la necesidad para mejorar composiciones y métodos inmunoterapicos .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico que comprenden secuencias de ácido nucleico que codifican proteína IL-15 que comprende la SEQ ID NO:l o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de La presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico que comprenden la SEQ ID N0:1 o una fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 que están libres de secuencia de codificación para una secuencia de señal IL-15 y/o libre de región Kozak IL-15 y/o región no traducida 5' IL-15 y/o región no traducida 3' IL-15 y/o comprende una secuencia de codificación para una secuencia de señal no IL-15. La presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico que comprenden secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína IL-15 que comprende la SEQ ID N0:1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 y comprende además secuencias de codificación para un antígeno. La presente invención se refiere a composiciones que comprenden una molécula de ácido nucleico que comprende secuencia de ácido nucleico que comprende la SEQ ID N0:1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 y una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un antígeno. La presente invención se refiere además a métodos para modular una respuesta inmune en un individuo que comprende administrar al individuo una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID N0:1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15.

La presente invención se refiere además a vacunas recombinantes que comprenden una molécula de ácido nucleico que comprende la SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15. La presente invención se refiere a métodos para inducir una respuesta inmune en un individuo contra un antígeno que comprende administrar al individuo una molécula de ácido nucleico que comprende la SEQ ID N0:1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 como parte o en combinación con una molécula de ácido nucleico que codifica un antígeno o en combinación con un antígeno.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA FIGURA La Figura 1 muestra la SEQ ID N0:1.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se usa en la presente el término "proteína objetivo" es un medio para referirse a péptidos y proteínas codificados por constructos de gen de la presente invención que actúan como proteínas objetivo para una respuesta inmune. Los términos "proteína objetivo" e "antígeno" se usan intercambiablemente y se refieren a una proteína contra la cual una respuesta inmune puede presentarse. La proteína objetivo es una proteína antigénica que porta al menos un epítopo con una proteína del patógeno o tipo celular indeseable tal como una célula de cáncer o una célula involucrada en enfermedad autoinmune contra la cual una respuesta inmune se desea. La respuesta inmune dirigida contra la proteína objetivo protegerá al individuo contra y/o trata al individuo para la infección o enfermedad con la cual la proteína objetivo se asocia. Como se usa en la presente, el término "constructo genético" se refiere a las moléculas de ADN o ARN que comprende una secuencia de nucleótido que codifica una proteína objetivo o proteína inmunomodulada. La secuencia de codificación incluye señalizaciones de inicio y final ligadas operablemente a elementos reguladores que incluyen un promotor y una señal de adenilación capaz de dirigir la expresión en las células de los individuos a los cuales se les administra la molécula de ácido nucleico. Como se usa en la presente, el término "forma expresable" se refiere a constructos de gen que contienen los elementos reguladores necesarios ligados operablemente a una secuencia de codificación que codifica una proteína objetivo o una proteína inmunomodulada, de tal manera que cuando se presenta en la célula del individuo, la secuencia de codificación se expresará. Como se usa en la presente, el término "que porta un epítopo" se refiere a proteínas que comprenden al menos un epítopo que es idéntico a o substancialmente similar a un epítopo de otra proteína. Como se usa en la presente, el término "epítopo substancialmente similar" es un medio para referirse a un epítopo que tiene una estructura que no es idéntica a un epítopo de una proteína pero no obstante invoca una respuesta inmune celular o humoral que reacciona con tal proteína. Como se usa en la presente, el término "patógeno intracelular" es un medio para referirse a un virus u organismo patogénico que, al menos parte de su ciclo reproductivo o de vida, existe dentro de una célula hospedera y en esta produce o provoca que se produzca, proteínas patógenas . Como se usa en la presente, el término "enfermedades hiperproliferativas" es un medio para referirse a aquellas enfermedades y trastornos caracterizados por hiperproliferación de células. Como se usa en la presente, el término "proteína asociada con hiperproliterativo" es un medio para referirse a proteínas que se asocian con una enfermedad hiperproliferativa. Como se usa en la presente el término "proteína inmunomodulada" se refiere a una proteína que modula el sistema inmune de una persona a la cual la proteína inmunomoduladora se administra. Los ejemplos de proteínas inmunomoduladoras incluyen: IL-15, CD40L, TRAIL; TRAILrecDRC5, TRAIL-R2 , TRAIL-R3 , TRAIL-R4, RANK, RANK LIGAND, 0x40, Ox40 LIGAND, NKG2D, F4 181 lor MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, CD30, CD 153 (CD30L) , Fos, C-jun, Sp-I, Apl5 Ap-2, p38, p65Rel,MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, N1K, SAP K, SAPl, JNK2 , JNK1B2 , JNKlBl, JNK2B2 , JNK2B1, JNK1A2, JNK2A1, JNK3A1, JNK3A2 , NF-kappa-B2 , forma de empalme p49, NF-kappa-B2, forma de empalme plOO, NF-kappa-B2, forma de empalme pl05, precursor de cadena NF-kappa-B 50K, NFkB p50, IL-I humano, IL-2 humano, IL-4 humano, IL-4 murino, IL-5 humano, IL-10 humano, IL-15 humano, IL-18 humano, TNF-humano, TNF-ß humano, interleucina 12 humana, MadCAM-1, NGF IL-7, VEGF, TNF-R, Fas, CD40L, IL-4, CSF, G-CSF, GM-CSF, -CSF, LFA-3, ICAM-3, ICAM- 2, ICAM-I, PECAM, P150.95, Mac-1, LFA-I, CD34, RANTES, IL-8, MIP-la, E-selecton, CD2 , MCP-I, L-selecton, P-selecton, FLT, Apo-1, Fas, TNFR-I5 p55, WSL-I, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4 (TRAIL) , DR5 , KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR-6 , ICE, VLA-I, y CD86 (B7.2).

Introducción La invención proporciona una secuencia de ácido nucleico que codifica IL-15 que proporciona expresión de proteína mejorada con relación a la secuencia nativa. La secuencia que codifica IL-15 mejorada puede usarse en combinación con los descubrimientos establecidos en la solicitud PCT PCT/US04/189-62 presentada el 14 de junio 2004, Solicitud Provisional E.U.A. Número 60/478,210 presentada el 13 de junio 2003 y Solicitud Provisional E.U.A. Número 60/478,205 presentada el 13 de junio 2003, que se incorporan en la presente para referencia, particularmente aquellas que proporcionan secuencias que codifican la proteína IL-15 ligadas a péptido de señal no IL-15, particularmente péptido de señal igE, y el uso de tales constructos en vacunas y en constructor para administrar la proteína IL-15 como una proteína inmunomodulada. En algunas modalidades preferidas, la invención proporciona vectores, vacunas y composiciones inmunomoduladoras y métodos que comprenden moléculas de ácido nucleico que comprenden la secuencia de nucleótido de SEQ ID NO:l o fragmentos de los mismos que codifican fragmentos funcionales de IL-15. En algunas modalidades preferidas, tales moléculas de ácido nucleico se proporcionan libres de secuencias de codificación para secuencia de señal IL-15, y más preferiblemente libres de la región IL-15 Kozak y regiones no traducidas. En algunas modalidades preferidas, la invención proporciona vectores, vacunas y composiciones inmunomoduladoras y métodos que comprende moléculas de ácido nucleico que comprenden SEQ ID NO: l o fragmentos de la misma que codifican fragmentos funcionales de IL-15 que se ligan a secuencias de codificación para secuencia de señal IgE humana . Las secuencias nativas que codifican IL-15 se han modificado para mejorar la expresión. En mejoras previas, los elementos tales como secuencias de codificación para secuencia IL-15 y regiones no traducidas se eliminaron para mejorar la expresión. Estas mejoras previas pueden incorporarse y usarse en conjunto con la secuencia de codificación mejorada de la proteína IL-15 madura establecida en la SEQ ID N0:1. En modalidades preferidas, la molécula de ácido nucleico que incluye SEQ ID N0:1 está libre de las secuencias de codificación para péptido de señal IL-15, y preferiblemente otra proteína de señal tal como proteína de señal IgE se proporciona en este lugar. Por otro lado, la región IL-15 Kozak y regiones no traducidas se remueven así como se eliminan elementos inhibidores. La única secuencia IL-15 de tales constructos incluyen preferiblemente la secuencia IL-15 que codifica la secuencia de aminoácido de la proteína IL-15 madura libre de péptido de señal IL-15. De acuerdo a algunas modalidades, se proporcionan composiciones que comprenden una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína de fusión que comprende la secuencia de señal no IL-15 ligada a la proteína IL-15 codificada por la SEQ ID NO:l o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15. En algunas modalidades preferidas, la molécula está libre de secuencias de codificación para secuencia de señal IL-15. En algunas modalidades preferidas, la proteína de fusión es no inmunogénica en un humano. De acuerdo a algunas modalidades, se proporcionan composiciones que incluyen el constructo de ácido nucleico que comprende la SEQ ID N0:1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 y opcionalmente las otras mejoras previas descritas arriba también pueden incluirse en la misma molécula de ácido nucleico o una molécula de ácido nucleico diferente, una secuencia de ácido nucleico que codifica un antígeno. Generalmente, los antígenos, que se discuten enseguida, pueden ser cualquier proteína antigénica que incluye alérgenos, antígenos patógenos , antígenos asociados con el cáncer o antígenos ligados a células asociadas con enfermedades autoinmunes. En modalidades preferidas, el antígeno es un antígeno patógeno, más preferiblemente un patógeno seleccionado del grupo que consiste de VIH, HSV, HCV, y WNV. En algunas modalidades preferidas, los constructos de ácido nucleico son plásmidos. En algunas modalidades preferidas, la molécula de ácido nucleico se incorpora en un vector vírico tal como vacuna, adenovirus, virus asociado con adenovirus, retrovirus, RSV, VSV, virus de viruela o cualquier otro vector vírico aceptable útil como una vacuna o vector de terapia de genes.

Los constructos genéticos que comprenden la SEQ ID N0:1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 pueden incorporarse directamente en patógenos atenuados vivos de acuerdo a algún aspecto de la invención. Los ejemplos de tales patógenos útiles como vacunas se establecen a continuación. En modalidades preferidas, la IL-15 humana, preferiblemente libre de secuencia de señal IL-15, se liga a la secuencia de señal IgE humana . Las composiciones que incluyen secuencias de codificación para antígenos son útiles como vacunas. Las composiciones que no incluyen secuencias de codificación para antígenos pueden ser útiles como composiciones inmunomoduladoras . En algunas modalidades, los antígenos de proteína, también se proporcionan como un objetivo para la respuesta inmune que se aumentará por la expresión de IL-15.

En algunas modalidades preferidas, los constructos de ácido nucleico son plásmidos. En algunas modalidades preferidas, la molécula de ácido nucleico se incorpora en un vector vírico tal como vacuna, adenovirus, virus asociado con adenovirus, retrovirus, o cualquier otro vector vírico aceptable útil como una vacuna o vector de terapia de genes.

Los constructos genéticos que comprenden la SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma que codifica un fragmento funcional de IL-15 pueden incorporarse directamente en patógenos atenuados vivos de acuerdo con algunos aspectos de la invención. Los ejemplos de tales patógenos útiles como vacunas se establecen enseguida. En modalidades preferidas, la IL-15 humana, preferiblemente libre de secuencia de señal IL-15, se liga a secuencia de señal IgE humana. De acuerdo con algunas modalidades de la invención, las composiciones de la invención comprenden constructos genéticos que incluyen secuencias de codificación para antígenos y/o proteínas inmunogénicas . Tales composiciones se administran a un individuo para modular la actividad del sistema inmune del individuo y con ello aumentar la respuesta inmune contra el antígeno. Cuando las moléculas de ácido nucleico que codifican una proteína inmunomoduladora se toman por células del individuo, las secuencias de nucleótidos que codifican la proteína inmunomoduladora se expresan en las células y las proteínas por ello se administran al individuo. Aspectos de la invención proporcionan métodos para administrar la secuencias de codificación de las proteína en una molécula de ácido nucleico sencilla, en composiciones que comprenden diferentes moléculas de ácido nucleico que codifican uno o más de los varios factores de transcripción o factores intermediarios, como parte de vacunas recombinantes y como parte de vacunas atenuadas . De acuerdo con algunos aspectos de la presente invención, se proporcionan composiciones y métodos que inmunizan profilácticamente y/o terapéuticamente un individuo contra un patógeno o células relacionadas con la enfermedad, anormales . La vacuna puede ser cualquier tipo de vacuna tal como, una vacuna atenuada viva, una vacuna celular, una vacuna recombinante o una vacuna de ácido nucleico o ADN. La presente invención se refiere a composiciones para administrar las proteínas inmunomoduladas y métodos para usar las mismas. Las moléculas de ácido nucleico pueden administrarse usando cualesquiera de varias tecnologías bien conocidas incluyendo inyección de ADN (también referida como vacunación de ADN) , vectores recombinantes tales como adenovirus recombinante, virus recombinante asociado con adenovirus y vacuna recombinante. Las vacunas de ADN se describen en Patente E.U.A. Nos. 5,593,972, 5,739,118, 5,817,637, 5,830,876, 5,962,428, 5,981,505, 5,580,859, 5,703,055, 5,676,594, y las solicitudes de prioridad citadas en la presente, que se incorporan en la presente para referencia. Además de los protocolos de administración descritos en aquellas solicitudes, métodos alternativos de administrar ADN se describen en Patente E.U.A. Nos. 4,945,050 y 5,036,006, ambas de las cuales se incorporan en la presente para referencia. Las rutas de administración incluyen, pero no se limitan a, intramuscular, intransalmente, intraperitoneal, intradérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterialmente, intraocularmente y oral así como tópicamente, transdermalmente, por inhalación o supositorio o al tejido mucosal tal como por lavado al tejido vaginal, rectal, de uretra, bucal y sublingual. Las rutas preferidas de administración incluyen inyección al tejido mucosal, intramuscular, intraperitoneal, intradérmica y subcutánea. Los constructos genéticos pueden administrarse por medios que incluyen, pero no se limitan a, jeringas tradicionales, dispositivos de inyección sin aguja, o "pistolas de genes de bombardeo de microproyectiles" . Cuando se toman por una célula, los constructos genéticos pueden mantenerse presentes en una célula como una molécula extracromosomal funcional e/o integrarse en el ADN cromosonal de la célula. El ADN puede introducirse en las células donde se mantiene como un material genético separado en la forma de un plásmido o plásmidos. Alternativamente, el ADN lineal que puede integrarse en el cromosoma puede introducirse en la célula. Cuando se introduce ADN en la célula, los reactivos que promueven la integración del ADN en cromosomas pueden agregarse. Las secuencias de ADN que son útiles para promover la integración también pueden incluirse en la molécula de ADN. Alternativamente, puede administrarse ARN a la célula. También se contempla proporcionar el constructo genético como un minicromosoma lineal que incluye un centrómero, telómeros y un origen de replicación. Los constructos de genes pueden mantener parte del material genético en microorganismos vivos atenuados o vectores microbianos recombinantes que viven en las células . Los constructor de genes pueden ser parte de genomas de vacunas virales recombinantes donde el material genético ya sea se integra en el cromosoma de la célula o se mantiene extracromosomal . Los constructos genéticos incluyen elementos reguladores necesarios para la expresión de genes de una molécula de ácido nucleico. Los elementos incluyen: un promotor, un codón de inicio, un codón de paro, y una señal de poliadenilación. Además, se requieren a menudo aumentadores para la expresión de genes de la secuencia que codifica la proteína objetivo o la proteína inmunomodulada. Es necesario que estos elementos se liguen operablemente a la secuencia que codifica las proteínas deseadas y que los elementos reguladores estén operablemente en el individuo al cual se administran. Los codones de inicio y codón de paro se consideran generalmente que son parte de una secuencia de nucleótido que codifica la proteína deseada. Sin embargo, es necesario que estos elementos sean funcionales en el individuo al cual se administra el constructo de genes. Los codones de inicio y •terminación deberán estar en una estructura con la secuencia de codificación.

Los promotores y señales de poliadenilación usadas deberán estar funcionales dentro de las células del individuo . Los ejemplos de promotores útiles para practicar la presente invención, especialmente en la producción de una vacuna genética para humanos, incluyen, pero no se limitan a, promotores del virus de simio 40 (SV40) , promotor del virus de tumor mamario de ratón (MMTV, por sus siglas en inglés) , virus de inmunodeficiencia humano (MV, por sus siglas en inglés) tal como el promotor de repetición Terminal largo BIV (LTR, por sus siglas en inglés) , virus Moloney, ALV, Citomegalovirus (CMV, por sus siglas en inglés) tal como el promotor temprano inmediato CMV, virus Epstein Barr (EBV) , virus de sarcoma de Rous (RSV, por sus siglas en inglés) así como promotores de genes humanos tales como actina humana, miosina humana, hemoglobina humana, creatina de músculo humana y metalotioneina humana. Los ejemplos de señales de poliadenilación útiles para practicar la presente invención, especialmente en la producción de una vacuna genética para humanos, incluye, pero no se limita a, señales de poliadenilación SV40 y señales de poliadenilación LTR. En particular, la señal de poliadenilación SV40 que está en el plásmido pCEP4 <lnvitrogen, San Diego CA) , que se refiere como la señal de poliadenilación SV40, se usa.

Además de los elementos reguladores requeridos para la expresión de ADN, otros elementos también pueden incluirse en la molécula de ADN. Tales elementos adicionales incluyen aumentadores . El aumentador puede seleccionarse del grupo que incluye pero no se limita a: Actina humana, Miosina humana, Hemoglobina humana, creatina de músculo humana y aumentadores víricos tales como aquellos de CMV, RSV y EBV. Los constructos genéticos pueden proporcionarse con origen de replicación mamífero con objeto de mantener la característica extracromosomal del constructo y producir copias múltiples del constructo en la célula. Los plásmidos pVAXl, pCEP4 y pREP4 de Invitrogen (San Diego, CA) contienen el origen de replicación del virus Epstein Barr y la región de codificación EBNA-1 de antígeno nuclear que produce la replicación episomal de copia alta sin integración. En algunas modalidades preferidas que se refieren a aplicaciones de inmunización, las moléculas de ácido nucleico se administran que incluyen secuencias de nucleótido que codifican una proteína objetivo, la proteína inmunomodulada y, adicionalmente, genes para proteínas que aumentan además la respuesta inmune contra tales proteínas objetivo. Los ejemplos de tales genes son aquellos que codifican otras citoquinas y linfocinas tales como alfa-interferon, gamma-ínterferon, factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF) , TNF, GM-CSF, factor de crecimiento epidérmico (EGF) , IL- 1, IL-2, II- 4, IL-6, IL-10, IL-12 e IL- 15 incluyendo IL-15 que tiene la secuencia de señal eliminada e incluye opcionalmente la secuencia de señal de IgE. Un elemento adicional puede agregarse, que sirve como un objetivo para la destrucción celular si se desea eliminar células que reciben el constructo genético por cualquier razón. -Un gen de timidita cinasa del herpes (tk) en una forma que se puede expresar puede incluirse en el constructo genético. El fármaco gangciclovir puede administrarse al individuo y tal fármaco causará la eliminación selectiva de cualquier tk que produce la célula, de esta manera, proporcionando los medios para la destrucción selectiva de células con el constructo genético. Con objeto de maximizar la producción de proteína, pueden seleccionarse secuencias reguladoras que son bien apropiadas para la expresión de genes en las células del constructo a administrarse. Por otro lado, los codones pueden seleccionarse que se transcriben más eficientemente en la célula. Alguien de experiencia ordinaria en la técnica puede producir constructor de ADN que son funcionales en las células. En algunas modalidades, los constructos de genes pueden proporcionarse con objeto de producir secuencias de codificación para las proteínas inmunomoduladoras descritas en la presente ligadas al péptido de señal igE.

Un método de la presente invención comprende las etapas de administrar moléculas de ácido nucleico intramuscularmente, intranasalmente, intraperatonealmente, subcutáneamente, intradérmicamente, o tópicamente o por lavado al tejido mucosal seleccionado del grupo que consiste de inhalación, vaginal, rectal, de uréter, bucal y sublingual . En algunas modalidades, la molécula de ácido nucleico se administra a las células en conjunto con administración de un aumentador de la función del polinucleótido o un agente facilitador de la vacuna genética. Los aumentadores de la función del polinucleótido se describen en Número de Serie E.U.A. 5,593,972, 5,962,428 y Solicitud Internacional Número de Serie PCT/US94/ 0899 presentada el 26 de enero de 1994, que se incorporan cada una en la presente para referencia. Los agentes facilitadotes de vacuna genética se describen en Número de Serie E.U.A. 021,579 presentada el 1 de abril de 1994, que se incorpora en la presente para referencia. Los co-agentes que se administran en conjunto con moléculas de ácido nucleico pueden administrarse como una mezcla con la molécula de ácido nucleico o administrarse separadamente, simultáneamente, antes o después de la administración de moléculas de ácido nucleico. Además, otros agentes que pueden funcionar co o agentes de transfección y/o agentes de replicación y/o agentes inflamatorios y que pueden co-administrarse con un GVF incluyen factores de crecimiento, citoquinas y linfocinas tales como a-interferon, gamma-interferon, GM-CSF, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , TNF, factor de crecimiento epidérmico (EGF), ILA, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 y IL-15 así como factor de crecimiento de fibroblasto, agentes de superficie activa tales como complejos estimulantes de lo inmune (ISCOMS) , adyuvante incompleto de Freunds, análogo de LPS incluyendo lípido A monofosforilo (WL) , péptidos de muramilo, análogos de quinona y vesículas tales como escualeno y escualeno, y ácido hialurónico también puede usarse administrado en conjunto con el constructo genético. En algunas modalidades, una proteína inmunomodulada puede usarse como un GVF. En algunas modalidades, la molécula de ácido nucleico se proporciona en asociación con PLG para aumentar la administración/absorción. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención comprenden alrededor de 1 nanogramo hasta alrededor de 2000 microgramos de ADN. En algunas modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención comprenden alrededor de 5 nanogramos hasta alrededor de 1000 microgramos de ADN. En algunas modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas contienen alrededor de 10 nanogramos hasta alrededor de 800 microgramos de ADN. En algunas modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas contienen alrededor de 0.1 hasta alrededor de 500 .microgramos de ADN. En algunas modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas -contienen alrededor de 1 hasta alrededor de 350 microgramos de ADN. En algunas modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas contienen alrededor de 25 hasta alrededor de 250 microgramos de ADN. En algunas modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas contienen alrededor de 100 hasta alrededor de 200 microgramos de ADN. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención se formulan de acuerdo con el modo de administración a usarse. En casos donde las composiciones farmacéuticas son composiciones farmacéuticas inyectables, son estériles, libres de pirógenos y libres de partículas. Se usa preferiblemente una formulación isotónica. Generalmente, los aditivos para isotonicidad pueden incluir cloruro de sodio, dextrosa, manitol, sorbitol y lactosa. En algunos casos, se prefieren las soluciones isotónicas tales como solución salina amortiguada en fosfato. Los estabilizadores incluyen gelatina y albúmina. En algunas modalidades, se agrega un agente de vasoconstricción a la formulación. De acuerdo con algunas modalidades de la invención, se proporcionan métodos para inducir respuestas inmunes contra un antígeno al administrar las composiciones de la invención a un individuo. La vacuna puede ser una vacuna atenuada viva, una vacuna celular, una vacuna recombinante o una vacuna de ADN o ácido nucleico. Además de usar formas expresables de la secuencia de codificación de proteína inmunomoduladora para mejorar las vacunas genéticas, la presente invención se refiere a vacunas vivas atenuadas mejoradas y vacunas mejoradas que usan vectores recombinantes para administrar genes externos que codifican antígenos. Los ejemplos de vacunas vivas atenuadas y aquellas que usan vectores recombinantes para administrar antígenos externos se describen en Patente E.U.A. Nos.: 4,722,848; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749 5,174,993; 5,223,424; 10 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368 5,424,065; 5,451,499; 5,453,364; 5,462,734; 5,470,734; y 5,482,713, que se incorporan en la presente para referencia. Se proporcionan constructos de gen que incluyen la secuencia de nucleótido que codifica una proteína inmunomodulada ligada operablemente a secuencias reguladoras que pueden funcionar en la vacuna para efectuar la expresión. Los constructos de gen se incorporan en vacunas vivas atenuadas y vacunas recombinantes para producir vacunas mejoradas de acuerdo con la invención. La presente invención proporciona un método mejorado para inmunizar individuos que comprende la etapa de administrar constructos de gen a las células de individuos como parte de composiciones de vacuna que incluyen vacunas de ADN, vacunas vivas atenuadas y vacunas recombinantes. Los constructos de gen comprenden una secuencia de nucleótido que codifica una proteína inmunomodulada y que se ligan operablemente a secuencias reguladoras que pueden funcionar en la vacuna para efectuar la expresión. Las vacunas mejoradas resultan en una respuesta inmune celular aumentada. La presente invención es útil para producir respuestas inmunes aumentadas contra una proteína objetivo, esto es, proteínas asociadas específicamente con patógenos, alérgenos o las células "anormales" propias del individuo. La presente invención es útil para inmunizar individuos contra agentes patogénicos y organismos de tal manera que una respuesta inmune contra una proteína de patógeno proporciona inmunidad protectora contra el patógeno. La presente invención es útil para combatir enfermedades y trastornos hiperproliferativos tales como cáncer al producir una respuesta inmune contra la proteína objetivo que se asocia específicamente con las células hiperproliterativas . La presente invención es útil para combatir enfermedades y trastornos autoinmunes al producir una respuesta inmune contra una proteína objetivo que se asocia específicamente con células involucradas en la condición autoinmune . De acuerdo con algunos aspectos de la presente invención el ADN o ARN que codifica una proteína objetivo y proteínas inmunomoduladoras se introduce en las células del tejido de un individuo donde se expresa, de esta manera produciendo las proteínas codificadas. Las secuencias de ADN o ARN que codifican la proteína objetivo y una o ambas proteínas inmunomoduladoras se ligan a elementos reguladores necesarios para la expresión en las células de los individuos. Los elementos reguladores para expresión de ADN incluyen un promotor y una señal de poliadenilación. Además, otros elementos, tal como una región Kozak, también pueden incluirse en el constructo genético. En algunas modalidades, las formas expresables de secuencias que codifican la proteína objetivo y formas expresables de secuencias que codifican ambas proteínas inmunomoduladoras se encuentran en la misma molécula de ácido nucleico que se administra al individuo. En algunas modalidades, las formas expresables de secuencias que codifican la proteína objetivo se presentan en una molécula de ácido nucleico separada de las moléculas de ácido nucleico que contienen formas expresables de secuencias que codifican una o más proteínas inmunomoduladoras. En algunas modalidades, las formas expresables de secuencias que codifican la proteína objetivo y formas expresables de secuencias que codifican una o más de las proteínas inmunomoduladoras se presentan en una molécula de ácido nucleico que se separa de la molécula de ácido nucleico que contiene formas expresables de secuencias que codifican una o más de las proteínas inmunomoduladoras. Múltiples moléculas de ácido nucleico diferentes pueden producirse y administrarse de acuerdo con la presente invención y administrarse al individuo. Por ejemplo, en algunas modalidades, las formas expresables de secuencias que codifican la proteína objetivo se presentan en una molécula de ácido nucleico separada de las moléculas de ácido nucleico que contienen formas expresables de secuencias que codifican una o más de las dos proteínas inmunomoduladoras que se presentan en la molécula de ácido nucleico separada de las moléculas de ácido nucleico que contienen formas expresables de secuencias que codifican una o más de las proteínas inmunomoduladoras. En tales casos, las tres moléculas se administran al individuo. Las moléculas de ácido nucleico pueden proporcionarse como ADN de plásmido, las moléculas de ácido nucleico de vectores recombinantes o como parte del material genético proporcionado en una vacuna atenuada o vacuna de célula. Alternativamente, en algunas modalidades, la proteína objetivo y/o cualquier o ambas proteínas inmunomoduladoras puede administrarse como una proteína además de las moléculas de ácido nucleico que las codifican o en lugar de las moléculas de ácido nucleico que las codifican. Los constructos genéticos pueden comprender una secuencia de nucleótido que codifica una proteína objetivo o una proteína inmunomoduladora ligada operablemente a elementos reguladoras necesarios para la expresión de genes. De acuerdo con la invención, se proporcionan combinaciones de constructos de genes que incluyen uno de tales comprenden una forma expresable de la secuencia de nucleótido que codifica la proteína objetivo y una que incluye una forma expresable de la secuencia de nucleótido que codifica una proteína inmunomoduladora. La incorporación en una célula viva de las moléculas de ADN o ARN que incluyen la combinación de constructor de genes resulta en la expresión de ADN o ARN y la producción de la proteína objetivo y una o más proteínas inmunomoduladoras. Resulta una respuesta inmune aumentada contra la proteína objetivo. La presente invención puede usarse para inmunizar un individuo contra todos los patógenos tales como virus , organismos procarióticos y patogénicos eucarióticos tales como organismos patogénicos unicelulares y parásitos multicelulares. La presente invención es particularmente útil para inmunizar un individuo contra aquellos patógenos que infectan células y que no se encapsulan como virus, y procariotas tal como gonorrea, listeria y sigela. Además, la presente invención también es útil para inmunizar un individuo contra patógenos protozoarios que incluyen una etapa en el ciclo de vida donde son patógenos intracelulares .

La Tabla 1 proporciona un listado de algunas de las familias y géneros víricos para las cuales las vacunas de acuerdo con la presente invención pueden hacerse. Los constructos de ADN que comprenden secuencias de ADN que codifican los péptidos que comprenden al menos un epítopo idéntico o substancialmente similar a un epítopo que se exhibe en un antígeno patógeno tal como aquellos antígenos enlistados en las tablas, son útiles en vacunas. Por otro lado, la presente invención también es útil para inmunizar un individuo -contra otros patógenos incluyendo patógenos protozoarios procarióticos y eucarióticos así como parásitos multicelulares tales como aquellos enlistados en la Tabla 2.

Con objeto de producir una vacuna genética para proteger contra la infección por patógenos, el material genético que codifica proteínas inmunogenéticas contra las cuales puede montarse una respuesta inmune protectora deberá incluirse en un constructo genético como la secuencia de codificación para el objetivo. Si el patógeno infecta intracelularmente, para lo cual la presente invención es particularmente útil, o extracelularmente, es imposible que todos los antígenos patógenos produzcan una respuesta protectora. Debido a que el ADN y ARN ambos son relativamente pequeños y pueden producirse relativamente fácil, la presente invención proporciona la ventaja adicional de permitir la vacunación con antígenos patógenos múltiples. El constructo genético en la vacuna genética puede incluir material genético que codifica muchos antígenos patógenos. Por ejemplo, varios genes virales pueden incluirse en el constructo sencillo por ello proporcionando objetivos múltiples. Las Tablas 1 y 2 incluyen listas de algunos de los agentes patogénicos y organismos para los cuales pueden prepararse vacunas genéticas para proteger un individuo de la infección de estos. En algunas modalidades preferidas, los métodos para inmunizar un individuo contra el patógeno se dirigen contra VIH, HSV, HCV, WNV o HBV. Otro aspecto de la presente invención proporciona un método que proporciona una respuesta inmune protectora contra las células hiperproliferativas que son características en las enfermedades hiperproliferativas y a un método de tratamiento de individuos que padecen de enfermedades hiperproliferativas. Ejemplos de las enfermedades hiperproliferativas incluyen todas las formas de cáncer y psoriasis . Se ha descubierto que la introducción de un constructo genético que incluye una secuencia de nucleótidos la cual codifica una proteína asociada -una "célula hiperproliferativa" inmunogénica- dentro de las células de un individuo resulta en la producción de aquellas proteínas en las células vacunadas de un individuo. Para inmunizar contra las enfermedades hiperproliferativas, se administra un constructo genético que incluye una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína que se asocia con una enfermedad hiperproliterativa a un individuo. Con objeto de que la proteína asociada con la hiperproliferación sea un objetivo inmunogénico efectivo, debe ser una proteína que se produzca exclusivamente o a niveles superiores en células hiperproliferativas en comparación con las células normales. Los antígenos objetivos incluyen tales proteínas, fragmentos de las mismas y péptidos, los cuales comprenden al menos un epítopo encontrado en tales proteínas . En algunos casos , la proteína asociada con la hiperproliferación es el producto de una mutación de un gen que codifica una proteína. El gen mutado codifica una proteína que es casi idéntica a la proteína normal excepto que tiene una secuencia de aminoácidos ligeramente diferente la cual resulta en un epítopo diferente que no se encuentra en la proteína normal . Tales proteínas objetivo incluyen aquellas que son proteínas codificadas por los oncogenes tales como myb, myc, fyn, y el gen de transubicación bcr/abl, ras, src, P53, neu, trk y EGRF. Además de los productos de oncogenes como antígenos objetivo, las proteínas objetivo para tratamientos anti-cáncer y regímenes protectores incluyen regiones variables de anticuerpos hechos por los linfomas de células B y las regiones variables de receptores de células T de linfomas de células T, los cuales en algunas modalidades, también se usan como antígenos objetivo para enfermedad autoinmune. Otras proteínas asociadas al tumor se pueden usar como proteínas objetivo tales como proteínas que se encuentran a niveles superiores en células de tumor que incluyen la proteína reconocida por el anticuerpo monoclonal 17-IA y proteínas de enlace al folato o PSA. Aunque la presente invención se puede usar para inmunizar un individuo contra una o más formas diversas del cáncer, la presente invención es particularmente útil para inmunizar de forma profiláctica a un individuo que esté predispuesto a desarrollar un cáncer en particular o que haya tenido cáncer y por lo tanto sea susceptible a una recaída. Los desarrollos en la genética y en tecnología así como en la epidemiología permiten la determinación de la probabilidad y evaluación del riesgo para el desarrollo de cáncer en un individuo. Al usar la selección genética y/o historias de salud familiares, es posible predecir la probabilidad de que un individuo en particular tenga por desarrollar alguno de los diversos tipos de cáncer. Similarmente, aquellos individuos que ya han desarrollado el cáncer y que han sido tratados para remover el cáncer o que están de otra manera en nuevo tratamiento, son particularmente susceptibles a la recaída y nueva presencia. Como parte de un régimen de tratamiento, tales individuos se pueden inmunizar contra el cáncer que se les ha diagnosticado con objeto de combatir una recurrencia. Así, una vez que se conoce que un individuo ha tenido un tipo de cáncer y está en riesgo de una recaída, se puede inmunizar con objeto de preparar su sistema inmune para combatir alguna aparición futura del cáncer. La presente invención proporciona un método de tratamiento de individuos que padecen de enfermedades hiperproliferativas. En tales métodos, la introducción de constructos genéticos sirve como un inmunoterapéutico, al dirigir y promover el sistema inmune del individuo para combatir células hiperproliferativas que produzcan la proteína objetivo. La presente invención proporciona un método de tratamiento de individuos que padecen de enfermedades y trastornos autoinmunes al conferir una respuesta inmune protectora de base amplia contra los objetivos que se asocian con la autoinmunidad incluyendo receptores celulares y células las cuales producen anticuerpos "auto"-dirigidos . Las enfermedades autoinmunes mediadas por células T incluyen artritis reumatoide <RA, por sus siglas en inglés) , esclerosis múltiple (MS, por sus siglas en inglés) , síndrome de Sjogren, sarcoidosis, diabetes mellitas dependiente de insulina (IDDM, por sus siglas en inglés) , tiroiditis autoinmune, artritis reactiva, espondilitis anquilosante, escleroderma, polimiositis, dermatomiositis, psoriasis, vasculitis, granulomatosis de Wegener, enfermedad de Crohn y colitis ulcerante. Cada una de estas enfermedades se caracterizan por receptores de células T que se enlazan a antígenos endógenos e inician la cascada inflamatoria asociada con enfermedades autoinmunes . La vacunación contra la región variable de las células T produciría una respuesta inmune que incluye CTLs para eliminar a esas células. En RA, se han caracterizado diversas regiones variables específicas de receptores de células T (TCRs) que se involucran en la enfermedad. Estos TCR incluyen vß-3, vß-14, 20 Vß-17 y Va-17. Así, la vacunación con un constructo de ADN que codifique al menos una de estas proteínas producirá una respuesta inmune que dirigirá a las células objetivo involucradas en la RA. Ver: Howell, M.D., et al, 1991 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 88:10921-10925; Piliard, X., et al , 1991 Science 253:325- 329; Williams, W.V. , et al., 1992 J Clin. Invest. 90:32-6-333; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia. En la MS, diversas regiones variables específicas de TCRs que se involucran en la enfermedad se han caracterizado. Estos TCRs incluyen VfP y Va-10. Así, la vacunación con un constructo de AND que codifique al menos una de estas proteínas producirá una respuesta inmune que atacará a las células T involucradas en MS. Ver: Wucherpfennig, K. W. , et al., 1990 Science 248:1016-1019; Oksenberg, J.R., et . al, 1990 Nature 345:344-346; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia. En escleroderma, diversas regiones variables específicas de TCRs que se involucran en la enfermedad se han caracterizado. Estos TCRs incluyen Vß-6, Vß-8, Vß-14 y Va-16, Va-3C, Va-7, V -14, V -15, Va-16, Va-28 y Va-12. Así, la vacunación con un constructo de AND que codifica al menos una de estas proteínas producirá una respuesta inmune que dirigirá a las células T involucradas en escleroderma. Con objeto de tratar a los pacientes que padecen de enfermedad inmune mediada or células T, particularmente aquellas para las cuales la región variable del TCR todavía se tiene que caracterizar, se puede efectuar una biopsia sinovial. Muestras de las células T presentes se pueden tomar y la región variable de aquellos TCRs identificada al usar técnicas estándar. Se pueden preparar vacunas genéticas al usar esta información. Las enfermedades autoinmunes mediadas por células B incluyen Lupus (SLE) , enfermedad de Grave, miastenia gravis, anemia hemolítica autoinmune, trombocitopenia autoinmune, asma, crioglobulinemia, esclerosis biliar primaria y anemia perniciosa. Cada una de estas enfermedades se caracteriza por anticuerpos que se enlazan a antígenos endógenos e inician la cascada inflamatoria asociada con enfermedades autoinmunes. La vacunación contra la región variable de anticuerpos produciría una respuesta inmune que incluye CTLs para eliminar a aquellas células B que produzcan el anticuerpo. Con objeto de tratar pacientes que padecen de la enfermedad autoinmune mediada por células B, la región variable de los anticuerpos involucrados en la actividad autoinmune se deben identificar. Se puede efectuar una biopsia y se pueden tomar muestras de los anticuerpos presentes en el sitio de inflamación. La región variable de esos anticuerpos se puede identificar al usar técnicas estándar. Se pueden preparar vacunas genéticas al usar esta información. En el caso del SLE, se cree que un antígeno es ADN. Así, en pacientes a inmunizarse contra SLE, se puede seleccionar su suero para anticuerpos anti-DNA y se puede preparar una vacuna que incluya constructos de ADN que codifiquen la región variable de tales anticuerpos anti-DNA que se encuentren en los sueros. Son bien conocidos los aspectos estructurales comunes entre las regiones variables de ambos los TCRs y anticuerpos . La secuencia de ADN que codifica un TCR en particular o anticuerpo se puede encontrar generalmente al seguir métodos bien conocidos tales como aquellos descritos en Kabat, et al 1987 Sequence of Proteins of Immunological Interest U.S. Department of Health and Human Services, Bethesda MD, la cual se incorpora en la presente como referencia. Además, un método general para la clonación de regiones variables funcionales a partir de anticuerpos se puede encontrar en Chaudhary, V.K., et al, 1990 Proc. Nati. Acad Sci. USA 87:1066, la cual se incorpora en la presente como referencia.

Tabla 1 Familia Picornavirus Géneros: Rinovirus: (Médico) responsable de - 50% de los casos del resfriado común. Eterovirus : (Médico) incluye virus de la polio, virus coxsackie, ecovirus, y enterovirus humanos tales como el virus de hepatitis A. Aftovirus : (Veterinario) estos son virus ed la enfermedad de la fiebre aftosa. Antígenos objetivo: VPl, VP2 , VP3 , VP4 , VPG Familia de Calcivirus Géneros: Grupo Norwalk de Virus: (Médico) estos virus son un importante agente causante de la gastroenteritis epidémica.

Familia de Togavirus Géneros: Alfavirus: (Médico y Veterinario) ejemplos incluyen los virus Seniles, virus de RossRiver y encefalitis equina oriental y occidental virus . Reovirus : (Médico) virus de la rubéola.

Familia Flariviridue Ejemplos incluyen: (Médico) dengue, fiebre amarilla, encefalitis japonesa, encefalitis de St. Louis y virus de encefalitis que transporta la garrapata. Virus del Nilo Occidental (Genbank NC001563, AF533540, AF404757, AF404756, AF404755, AF404754, AF404753, AF481864, M12294, AF317203, AF196835, AF260969, AF260968, AF260967, AF206518 y AF202541) Antígenos objetivo representativos: E NS5 C Virus de la Hepatitis C: (Médico) estos virus no se colocan en una familia todavía pero se cree que sean ya sea un togavirus o un flavivirus. La mayor similitud es con la familia del togavirus.

Familia de Coronavirus : (Médico y Veterinario) Virus de la bronquitis infecciosa (aves de corral) Virus gastroentérico que se transmite en el ganado porcino (cerdo) Virus de encefalitis hemaglutíñante porcina (cerdo) Virus de peritonitis infecciosa en los felinos (gatos) Coronavirus entérico en felinos (gato) Coronavirus canino (perro) Coronavirus asociado con SARS Los coronavirus respiratorios humanos provocan -40 casos del resfriado común. EX. 224E, OC43 Nota - los coronavirus puede provocar hepatitis que no es A, B o C Antígenos objetivo: El - también llamado M o proteína de matriz E2 - también llamado S o proteína Spike E3 - también llamado BE o glicoproteína de hemaglutina-elterosa (no presente en todos los coronavirus) N - nucleocápsida Familia de Rabdovirus Géneros: Vesiliovirus Lyssavirus: (médico y Veterinario) Rabia Antígeno objetivo: proteína G Proteína N Familia Filoviridue: (Médico) Virus de la fiebre hemo rágica tales como los virus de Marburg y Ebola Familia de Paramyxovirus: Géneros: Paramyxovirus: (Médico y Veterinario) Virus de las paperas, virus de la enfermedad de New Castle (patógeno importante en los pollos) Morbillivirus : (Médico y Veterinario) Sarampión, moquillo canino Pneuminvirus : (Médico y Veterinario) Virus sincitial respiratorio Familia de Orthomyxovirus (Médico) El virus de la Influenza Familia de Bungavirus Géneros: Bungavirus: (Médico) encefalitis de California, LA Crosse Phlebovirus : (Médico) Fibere de Rift Valley Hantavirus : Puremala es un virus de la fiebre de hemahagina Nairvirus (Veterinario) enfermedad de las ovejas de Nairobi También muchos bungavirus no asignados Familia de Arenavirus (Médico) LCM, virus de la fiebre de Lassi Familia de Reovirus Géneros: Reovirus: un posible patógeno humano Rotavirus: gastroenteritis aguda en niños Orbivirus: (Médico y Veterinario) Fiebre de la garrapata de Colorado, Lebombo (humanos) , encefalosis equina, lengua azul Familia de Retroyirus Sub-Familia: Oncorivirinal : (Veterinario) (Médico) virus de leucemia de los felinos, HTLVI y HTLVII Lentivirinal : (Médico y Veterinario) VIH, virus de inmunodeficiencia de los felinos, infecciones en equinos, virus de la anemia Spumavirinal Familia de Papovavi us Sub-Familia: Polyomavirus : (Médico) virus BKU y JCU Sub-Familia: Papilomavirus : (Médico) muchos tipos virales asociados con cánceres o progresión maligna del papiloma.

Adenovirus (Médico) EX AD7, ARD., -O.B. - causa de enfermedad respiratoria -algunos adenovirus tales como el 275 causan enteritis Familia del Parvovirus (Veterinario) Parvovirus felino: provoca la enteritis de los felinos Panleucopeniavirus felino Parvovirus canino Parvovirus porcino Familia de virus del Herpes Sub-Familia: alphaherpesviridue Géneros: virus Simplex (Médico) HSVI (Genbank XI 4112, NCOO 1806), HSVII (NC001798) Varicellovinis : (Médico Veterinario) pseudorabia varicela zoster Sub-Familia - betaherpeeviridue Géneros: Cytomegalovirus (Médico) HCMV Muromegalovirus Sub-Familia, . Gammaherpesviridue Géneros: Lymphocryptovirus (Médico) EBV - (Burkitts lympho) Rhadinovirus Familia de virus de la Viruela Sub-Familia Chordopoxviridue (Médico-Veterinario) Géneros: Varióla. (Viruela) Vaccinia (Cowpox, de los pezones de las vacas) Parapoxivirus - Veterinario Auipoxvirus - Veterinario Capripoxvirus Leporipoxvirus Suipoxvirus Sub-Familia: Entemopoxviridue Familia de Hepadnavirus Virus de Hepatitis B No Clasificado Virus de Hepatitis delta Tabla 2 Patógenos Bacterianos Cocos patogénicos gram-positivos incluyen: pneumococo; estafilococo; y estreptococo. Cocos patogénicos gra -negativos incluyen: meningococos ; y gonococos.

Bacilos patogénicos entéricos gram-negativos incluyen: enterobacteriaceos; pseudomonas, acinetobacterias y eikenella, melioidosis; ,salmonela; shigelosis; hemophilus; cancroide; brucelosis; tularemia; yersinia (pasteurela) ; streptobacillus mortiliformis y spirillum; listeria monocytogenes ; erysipelothrix rhusiopathiae; difteria, cólera, ántrax; donovanosis (granuloma inguinal) ; y bartonelosis .

Bacterias anaeróbicas patogénicas incluyen: tétanos; botulismo; otros Clostridia; tuberculosis; lepra; y otras micobacterias. Enfermedades espiroquetales patogénicas incluyen: sífilis; - treponematosis : yaws (enfermedad por espiroqueta), pinta y sífilis endémica; y leptospirosis . Otras infecciones provocadas por bacterias patógenas superiores y hongos patogénicos incluyen: actinomicosis; nocardiosis; criptococosis, blastomicosis, histoplasmosis y coccidioidomicosis; candidiasis, aspergilosis, y mucormicosis; esporotricosis; paracoccidiodomicosis, petrielidiosis, torulopsosis, micetoma, y cromomicosis; y dermatofitosis .

Infecciones por Rickettsia incluyen rickettsia y rickettsioses . Ejemplos de infecciones por micoplasma y .clamidia incluyen: mycoplasma pneumoniae; lymphogranuloma venereum; psittacosis; e infecciones perinatales por clamidia.

Eucariotas Patogénicas Protozoarios y helmintos patogénicos e infecciones por ellos incluyen: amibiasis; malaria; leismaniasis; tripanosomiasis; toxoplasmosis; Pneumocystis carinii; babesiosis; giardiasis; triquinosis; filariasis; esquistosomiasis; nemátodos; tremátodos o gusanos planos; e infecciones por céstodos (solitaria) . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (23)

1. REIVINDICACIONES < Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma, caracterizada porque codifica un fragmento funcional de IL-15.
2. 2. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende SEQ ID NO: 1.
3. 3. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque está libre de la secuencia codificadora para una secuencia de señal IL-15.
4. 4. La molécula de ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque está libre de la región de Kozak para IL-15 Kozak y/o la región no traducida en 5' para IL-15 y/o la región no -traducida en 3' para IL-15.
5. 5. La molécula de ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 1-4, caracterizada porque comprende una secuencia codificadora para una secuencia de señal que no es IL-15.
6. 6. La molécula de ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 1-5, caracterizada porque comprende una secuencia codificadora para una secuencia de señal IgE.
7. 7. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1-6, caracterizada porque comprende además una secuencia codificadora para un antígeno.
8. 8. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el antígeno es un antígeno de patógeno, un antígeno asociado al cáncer o un antígeno ligado a las células con enfermedades autoinmunes.
9. 9. La molécula aislada de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el antígeno es un antígeno de patógeno a partir de un patógeno seleccionado del grupo que consiste de VIH, HSV, HCV, y WNV.
10. 10. La molécula aislada de ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 1-9, caracterizada porque la molécula aislada de ácido nucleico es un plásmido.
11. 11. La molécula de ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 1-9, caracterizada porque se incorpora dentro de un vector viral .
12. 12. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1-9, caracterizada porque se incorpora dentro de un patógeno vivo atenuado .
13. 13. Una composición caracterizada porque comprende una molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1-12, y una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un antígeno.
14. 14. La composición de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque el antígeno es un antígeno patógeno, un antígeno asociado con el cáncer o un antígeno ligado a células asociadas con enfermedades autoinmunes .
15. 15. La composición de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque el antígeno es un antígeno patógeno a partir de un patógeno seleccionado del grupo que consiste de VIH, HSV, HCV, y WNV.
16. 16. La composición de conformidad con las reivindicaciones 13-15, caracterizada porque las moléculas de ácido nucleico son plásmidos.
17. 17. Una composición farmacéutica inyectable, caracterizada porque comprende las moléculas de ácido nucleico de las reivindicaciones 1-12, o la composición de conformidad con las reivindicaciones 13-15.
18. 18. Un método para modular una respuesta inmune en un individuo, caracterizado porque comprende administrar al individuo una molécula de ácido nucleico de las reivindicaciones 1-6.
19. 19. Una vacuna recombinante caracterizada porque comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un antígeno y una secuencia de ácido nucleico de las reivindicaciones 1-6.
20. 20. La vacuna recombi-nante de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque el antígeno es un antígeno patógeno, un antígeno asociado con el cáncer, o un antígeno ligado a células asociadas con enfermedades autoinmunes .
21. 21. La vacuna recombinante de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porgue el antígeno es un antígeno patógeno a partir de un patógeno seleccionado del grupo que consiste de VIH, HSV, HCV, y WNV.
22. 22. La vacuna recombinante de conformidad con las reivindicaciones 19-21, caracterizada porque la vacuna recombinante es una vacuna recombinante de vaccinia.
23. 23. Un método para inducir una respuesta inmune en un individuo contra un antígeno, caracterizado porque comprende administrar al individuo una molécula de ácido nucleico de las reivindicaciones 7-12, o una composición de las reivindicaciones 13-16, o una vacuna recombinante de las reivindicaciones 19-22.