MX2008006361A - Procesos de purificacion para compuestos de tipo de equinocandina - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona un método para preparar y purificar compuestos de tipo de equinocandina, tal como pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B. Estos compuestos son productos de fermentación que se usan para preparar productos semisintéticos tales como lo productos fungicidas Caspofungina, Micafungina, y anidulafungina.

Description

PROCESOS DE PURIFICACION PARA COMPUESTOS DE TIPO DE EQUINOCANDINA Campo de la invención La invención comprende procesos para purificar compuestos de tipo de equinocandina que incluyen pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B.

Antecedentes de la invención La pneumocandina B0, WF 11899A y la equinocandina B son todos miembros de la familia de las equinocandinas , que tienen la estructura general: Son productos de la fermentación que se usan para preparar productos semisintéticos, tales como Caspofungina , Micafungina y Anidulafungina , respectivamente. Todas tienen actividad fungicida.

La caspofungina es la primera de una clase nueva de las equinocandinas y funciona inhibiendo la síntesis de la membrana celular. La caspofungina tiene el nombre químico 1- [ ( 4R, 5S ) -5- [ (2-aminoetil) amino] -N2- (10, 12-dimetil-l-oxotetradecil ) -4- hidroxi-L-ornitina] -5- [ (3R) -3-hidroxi-L-ornitina] pneumocandina B0, el Número de Registro de CAS 179463-17-3, y la siguiente estructura química (Fórmula I).

Fórmula I La caspofungina se revela en la Patente Estadounidense N° 5.378.804. La caspofungina es comercializada en la forma de su sal de diacetato en Estados Unidos por Merck & Co . , Inc. con el nombre comercial CANCIDAS®. CANCIDAS® se administra pr via intravenosa para el tratamiento de infecciones tales como Aspergillus y Candida y para la prevención de infecciones halladas en paciente immunodeficientes .

La anidulafungina es comercializada en Estados Unidos por Pfizer con el nombre comercial Eraxis® y se administra por via intravenosa para el tratamiento de infecciones tales como Candida .

La micafungina es comercializada en la forma de su sal de sodio en Estados Unidos por Astellas con el nombre comercial Mycamine ® y se administra por vía intravenosa para el tratamiento de infecciones tales como Candida.

Los procesos para la preparación de caspofungina consisten en el uso de pneumocandina . La Pneumocandina se revela en la Patente Estadounidense N° 5.194.377 y tiene la siguiente estructura química : La Pneumocandina se prepara mediante reacciones de fermentación, donde la fermentación y los caldos mezclados generalmente contienen numerosos subproductos que ueden esr difíciles de separar del producto deseado. La Patente Estadounidense N° 6.610.822 describe la purificación de de los compuestos de tipo de equinocandina, tales como pneumocandina, F 11899 y equinocandina B y realizando varias operaciones de extracción, el primero para remover impurezas no polares, el segundo para remover impurezas polares y luego la "extracción hacia atrás" del producto, optativamente, en una combinación con la purificación cromatográfica . La Patente Estadounidense N° 6.610.822 proporciona un proceso de purificación largo y que connsume tiempo.

La Patente Estadounidense N° 5.021.403 describe un proceso de purificación de compuestos de tipo de equinocandina tales como pneumocandina , WF 11899 y equinocandina B realizando varias cromatografías. Por lo tanto, este proceso no es adecuado para la fabricación a gran escala, no es económico y consume tiempo.

La Patente Estadounidense N° 6.506.726 y la Patente Estadounidense N° 6.590.073 describen la purificación de compuestos de tipo de equinocandina, especialmente de equinocandina B desacilada mediante cromatografía. Las sustancias purificadas son echinocandin nuclea, que contienen por lo menos un grupo amino que se puede protonar en la presencia de un ácido. Por lo tanto, este proceso no es adecuado para sustancias que no tienen un grupo amino que se protona, tales como pneumocandina, WF 11899 y equinocandina B.

Existe una necesidad en el arte de procesos adicionales para purificar compuestos de tipo de equinocandina, usando técnicas que sean viables para su uso en escala industrial.

Extracto de la invención La invención comprende procesos para purificar un compuesto de tipo de equinocandina, que incluyen las pneumocandinas . En una realización, la invención comprende un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende: (a) extraer impurezas de un caldo entero que tiene un compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar para obtener un primer sistema de dos fases que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) remover la fase orgánica para obtener la fase acuosa; (c) extraer el compuesto de tipo de equinocandina de la fase acuosa con un segundo solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un segundo sistema de dos fases; y (d) recuperar el compuesto de tipo de equinocandina purificado de la fase orgánica del segundo sistema de dos fases, en donde los solventes orgánicos inmiscibles con agua de los pasos (a) y (c) son diferentes .

En otra realización, la invención comprende un proceso para purificar compuestos de tipo de equinocandina que comprende cristalizar compuestos de tipo de equinocandina usando por lo menos un antisolvente.

En aún otra realización, la invención comprende un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende: (a) extraer impurezas de un caldo entero que tiene un compuesto de tipo equinocandina con por lo menos un solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar para obtener un primer sistema de dos fases que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) remover la fase orgánica para obtener la fase acuosa; (c) extraer el compuesto de tipo de equinocandina de la fase acuosa con un segundo solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un segundo sistema de dos fases; (d) recuperar el compuesto de tipo de equinocandina, y (e) cristalizar el compuesto de tipo de equinocandina usando por lo menos un antisolvente, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua de los pasos (a) y (c) son diferentes.

En una realización, la invención comprende un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende « combinar el compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un antisolvente y un portador sólido.

En otra realización, la invención comprende un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende: (a) extraer el compuesto de tipo de equinocandina de un caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido de un caldo de fermentación con un solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un sistema de dos fases que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) recuperar el compuesto de tipo de equinocandina; y (c) combinar el compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un antisolvente y un portador sólido para obtener un compuesto de tipo de equinocandina purificado .

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 es un diagrama de flujo que ilustra una realización de los procesos de purificación en pasos.

Decripción Detallda de la Invención La invención comprende procesos para purificar pneumocandina u otros compuestos de tipo de equinocandina. Como se utiliza en la presente, a menos que se defina de otro modo, el término "compuestos de tipo de Equinocandina" se refiere a compuestos que tienen la siguiente estructura general que incluyen derivados de ellos : en donde R es hidrógeno o -C(0)R'; R' es un grupo alquilo, un grupo alquenilo, un grupo alquinilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo que unido sobre él por lo menos un grupo amino que se puede protonar en la presencia de un ácido; Ri es -H o -OH; R2 es -H o -CH3; R3 es -H, CH3, -CH2CONH2 o -CH2CH2NH2; R4 es -H o -OH; R5 es -OH, -OP03H2, o -OS03H; R6 es -H o -OS03H, y R7 es -H o -CH3.

Preferentemente, R es linoleoilo, 10, 12-dimetil myristoilo, o palmitoilo. Preferentemente, Ri, R4 y R5 son OH. Preferentemente, R3 es Me, o CH2CONH2.

Preferentemente cuando R es linoleoilo, Rx, y R4 son OH, R3 y R7 son Me, y R6 es H, es decir el compuesto es equinocandina B. Preferentemente, cuando R es 10 , 12-dimetil myristoilo, Ri, y R4 son OH, R3 es CH2CONH2, R5 es OH, y R6 y R son H, es decir el compuesto es pneumocandina B0.

Preferentemente, cuando R es palmitoilo, Ri, y R4 son OH, R3 es CH2CONH2, R5 es OH, R6 es 0S03H, y R7 es CH3, es decir el compuesto es F11899A.

Preferentemente, los compuestos de tipo de Equinocandina son pneumocandina B0, F-11899, y equinocandina. Estos productos no son altamente solubles en solventes convencionales, tales como ésteres, alcoholes inferiores y agua. Por lo tanto, son difíciles de purificar mediante extracciones convencionales. En consecuencia, los procesos conocidos para su purificación son generalmente complicados e ineficientes, especialmente cuando se manipulan grandes cantidades de estos compuestos.

La presente invención ofrece compuestos para purificar compuestos de tipo de Equinocandina, que son adecuados para cualquier escala, que incluyen la escala industrial. Estos procesos de la presente invención son simples en que los pasos del proceso no son complicados, fáciles de fabricar en escala para un proceso de escala industrial, y económicos mientras que proporcionan compuestos de tipo de equinocandina de una pureza que es suficiente para un nuevo procesamiento para obtener un ingrediente farmacéutico activo tal como por ejemplo los fungicidas caspofungina , anidulafungina, y micafungina. El primer proceso de la presente invención usa la baja solubilidad característica de los compuestos de tipo de Equinocandina.

Como se utiliza en la presente, a menos que se mencione de otro modo, el término "solvente inmiscible con agua" se refiere a un solvente o una mezcla de solventes que cuando se mezcla con agua no forma una sola mezcla pero forma un sistema de por lo menos dos fases. Por el contrario, un "solvente miscible con agua" se refiere a un solvente o una mezcla de solventes que cuando se mezcla con agua forma una sola fase de solución.

Como se utiliza en la presente, a menos que se utilice de otro modo, el término "portador sólido" se refiere a un material (compuesto) que es inerte y que se mantiene sin disolver en los solventes del proceso pero es capaz de formar una mezcla con el compuesto ( s ) .

Como se utiliza en la presente, a menos que se mencione de otro modo en la presente, el término "no polar" se refiere a solventes orgánicos que tienen un índice de polaridad de 0 a 2,4. Ejemplos de dichos solventes son tolueno, heptano, hexano, octano y ciclohexano .

Como se utiliza en la presente, a menos que se mencione de otro modo, el término "débilmente polar" se refiere a solventes orgánicos que tienen un índice de polaridad de 2,4 a 5,1, que excluye los solventes orgánicos. Ejemplos de dichos solventes son metil etil cetona, acetona, éter diisopropílico, éter dietílico, acetato de isobutilo, acetato de n-propilo, acetato de etilo, diclorometano, y acetato de isopropilo. El índice de polaridad se puede medir de acuerdo con Synder, J. Chromatographic science 16, 223-234 (1978) .

En una realización, la invención comprende un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende: (a) extraer impurezas de un caldo entero que tiene un compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar para obtener un primer sistema de dos fases que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) remover la fase orgánica para obtener la fase acuosa; (c) extraer el compuesto de tipo de equinocandina de la fase acuosa con un segundo solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un segundo sistema de dos fases; y (d) recuperar el compuesto de tipo de equinocandina purificado, en donde los solventes orgánicos inmiscibles con agua de los pasos (a) y (c) son diferentes.

Cuando el compuesto de tipo de equinocandina es pneumocandina B0, la pneumocandina impurificada inicial (tal como la pneumocandina en un caldo de fermentación) se puede preparar, por ejemplo, mediante el proceso descrito en la Patente Estadounidense N° 6.610.822.

Preferentemente, el compuesto de tipo de equinocandina está presente en el caldo entero a una concentración de 0,2 a 15 g/L, más preferentemente, de 0,2 a 8 g/L. La concentración del compuesto de tipo de equinocandina en el caldo de fermentación se puede determinar mediante un análisis de HPLC.

En el proceso de la presente invención, el caldo de fermentación que tiene el compuesto de tipo de equinocandina se combina con el solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar para obtener el primer sistema de dos fases. Generalmente, el sistema de dos fases comprende impurezas, tales como aceites vegetales, aminoácidos, y proteínas de tamaño molecular pequeño en la fase orgánica inmiscible con agua no polar o débilmente polar y el compuesto de tipo de equinocandina y el micelio en la fase acuosa, que es el medio acuoso del caldo de fermentación. Por lo tanto, en algunas realizaciones, la fase acuosa también puede contener partículas insolubles.

En consecuencia, los solventes orgánicos inmiscibles con agua no polares o débilmente polares incluyen solventes en donde el compuesto de tipo de equinocandina tiene baja solubilidad. Preferentemente, los solventes orgánicos inmiscibles con agua no polares o débilmente polares incluyen, en forma no taxativa, alcanos alifáticos de C5_8, hidrocarburos aromáticos de e-Br éteres de C4-8, y ésteres de C3-6. Preferentemente, el alcano alifático de C5-8 es heptano, hexano, octano o ciclohexano. Preferentemente, el hidrocarburo aromático de C -ß es tolueno. Preferentemente, el éter de C4_8 es éter dietílico, éter diisopropílico o éter dibutílico. Preferentemente, el éster de C3-6 es acetato de iso-butilo, acetato de n-butilo, acetato de n-propilo, acetato de isopropilo o acetato de etilo. Más preferentemente, el solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es acetato de iso-butilo, acetato de n-butilo, acetato de n-propilo, acetato de isopropilo o acetato de etilo .

En el proceso de la presente invención, la cantidad del solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar que se usa para obtener un primer sistema de dos fases puede ser del 5% al 90% en volumen del caldo entero, según la eficiencia de la separación de las dos fases. Si hay una separación de fases eficiente, el 5%-25% es generalmente suficiente. Sin embargo, si hay una separación de fases no óptima, se debe usar el 50%-90%. Preferentemente, la cantidad del solvente inmiscible con agua usada es del 10% al 50%, más preferentemente del 30% al 50%, más preferentemente el 505 en volumen del caldo entero.

La extracción proporciona un caldo de fermentación purificado, que es la fase acuosa del paso (b) . Esta fase habitualmente se purifica lo suficiente para continuar el proceso de extracción con solamente un paso de extracción adicional.

La fase acuosa del paso (b) luego se extrae con un segundo solvente inmiscible con agua, para remover el compuesto de tipo de equinocandina de la fase acuosa. Esta extracción proporciona el segundo sistema de dos fases que comprende el compuesto de tipo de equinocandina en la fase orgánica inmiscible con agua, que es preferentemente una fase orgánica polar obtenida con la extracción con un alcohol y denominada fase orgánica, y el micelio y las sustancias que no son solubles en agua en la fase orgánica permanecen en la fase acuosa. Ejemplos para sustancias que no son solubles en una fase orgánica polar son varios aminoácidos y sales de aminoácidos, enzimas, y proteínas. Un segundo solvente orgánico inmiscible con agua del paso (c) es uno que tiene alta afinidad para el compuesto de tipo de equinocandina . Preferentemente, el segundo solvente orgánico inmiscible con agua es un alcohol, más preferentemente un alcohol de C4-6, aún más preferentemente, un alcohol de C4-5, más preferentemente, isobutanol o n-butanol.

La extracción del paso (c) se puede repetir para aumentar adicionalmente el rendimiento del compuesto de tipo de equinocandina en la fase orgánica. En una realización preferida de la presente invención, el paso de la extracción (c) se repite.

El compuesto de tipo de equinocandina luego se recupera de la fase orgánica mediante cualquier método conocido en el arte, tal como evaporando el solvente. La recuperación proporciona un concentrado de la fase orgánica que tiene el compuesto de tipo de equinocandina. El concentrado puede ser una solución concentrada o un residuo aceitoso del compuesto de tipo de equinocandina, denominado residuo concentrado.

El residuo concentrado obtenido puede entonces purificarse cristalizando el compuesto de tipo de equinocandina usando por lo menos un antisolvente.

En una realización, la presente invención proporciona un proceso para purificar compuestos de tipo de equinocandina que comprenden cristalizar compuestos de tipo de equinocandina usando por lo menos un antisolvente.

La cristalización comprende mezclar el compuesto de tipo de equinocandina con un antisolvente para precipitar el compuesto de tipo de equinocandina. Preferentemente, el antisolvente se agrega al compuesto de tipo de equinocandina.

Los compuestos de tipo de equinocandina iniciales preferentemente se obtienen de extracciones del caldo de fermentación. Las extracciones se pueden hacer, por ejemplo, mediante el proceso que se revela en la presente o mediante cualquier otro método conocido para un experto en el arte.

Los compuestos de tipo de equinocandina iniciales pueden estar en la forma de un residuo concentrado, obtenido mediante el proceso descrito anteriormente.

Como se utiliza en la presente, el término antisolvente se refiere a un liquido que se agrega a una mezcla de un solvente y un sólido para reducir la solubilidad del sólido en el solvente.

Un antisolvente adecuado produce la precipitación del compuesto de tipo de equinocandina . En consecuencia, un antisolvente adecuado es tal que cuando el compuesto de tipo de equinocandina tiene baja solubilidad. Preferentemente, los antisolventes adecuados incluyen, en forma no taxativa, acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN) , mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y acetato de iso-butilo, y mezclas de acetonitrilo con acetato de iso-butilo. Los antisolventes más preferidos son acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de tere-butilo, acetonitrilo, acetona y acetato de isopropilo y aún más preferentemente, acetonitrilo. Preferentemente, la cantidad del antisolvente se agrega en una relación de por lo menos 2:1 del antisolvente : éster, más preferentemente de 5:1 a 2:1, aún más preferentemente de 3:1 a 2:1 v/v, respectivamente.

En una realización preferida el antisolvente es acetonitrilo y está presente en una cantidad tal que la relación de acetonitrilo : agua es por lo menos 2:1 v/v, respectivamente. En otra realización preferida, el antisolvente es acetona y está presente en una cantidad tal que la relación de acetona : éster es por lo menos 2:1 v/v, respectivamente.

En algunas realizaciones, cuando el antisolvente es acetato de etilo o acetato de isobutilo, la precipitación también incluye un paso de enfriamiento o el agregado de un segundo antisolvente, tal como ACN o acetona, para inducir la precipitación. Dicho paso de enfriamiento puede ser enfriar la mezcla del residuo concentrado y el antisolvente a una temperatura de 5°C a -20°C, más preferentemente de 5°C a 0°C.

En otra realización, por ejemplo, cuando el antisolvente es ACN o acetona, la precipitación también comprende enfriar a una temperatura de 5°C a -20°C, más preferentemente de 5°C a 0°C, para aumentar el rendimiento del producto precipitado.

La precipitación proporciona una suspensión, que se puede mantener a dicha temperatura durante un periodo de tiempo suficiente para aumentar el rendimiento del producto precipitado. Preferentemente, la suspensión se mantiene durante por lo menos 15 minutos, más preferentemente durante 10 horas a 24 horas, más preferentemente durante 20 horas.

En otro proceso de la invención, se utiliza un portador sólido en el proceso de purificación, eliminando de este modo el primer paso de extracción donde se extraen las impurezas, como se necesita por ejemplo en el proceso descrito anteriormente. Además, es necesaria una cantidad más pequeña de solventes en el paso(s) de extracción, y también en el paso de cristalización, haciendo que el proceso sea muy atractivo, especialmente para la fabricación a gran escala.

Este proceso comprende los pasos de (a) extraer el compuesto de tipo de equinocandina del caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido de un caldo de fermentación con un solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un sistema de dos fases que tiene una fase acuosa y una fase orgánica; (b) recuperar el compuesto de tipo de equinocandina; y (c) combinar el compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un antisolvente y un portador sólido para obtener un compuesto de tipo de equinocandina purificado.

Inicialmente , el caldo de fermentación se combina con un solvente inmiscible con agua para obtener un sistema de dos fases. El solvente orgánico inmiscible con agua es el descrito anteriormente, preferentemente el solvente orgánico inmiscible con agua es un alcohol inmiscible con agua. En una realización preferida, la extracción se lleva a cabo a un pH de 2 a 8, preferentemente de 5 a 7. Cuando se extrae a pH ácido, tal como pH 2 a 4, la extracción preferentemente se lleva a cabo mientras se enfria y después del primer enfriamiento el caldo de fermentación y el solvente inmiscible con agua polar para evitar la descomposición del producto. Preferentemente, el enfriamiento es a una temperatura de 0°C a 10°C, más preferentemente de 0°C a 5°C. Generalmente, el pH se ajusta a una gama de 2 a 8 agregando una base o un ácido, según el pH del caldo de fermentación. Las bases adecuadas son, por ejemplo, bases de amonio, tales como hidróxido de amonio, o soluciones acuosas diluidas de base alcalina, tales como hidróxido de sodio. Los ácidos adecuados son, por ejemplo, ácidos acéticos o soluciones acuosas diluidas de ácidos sulfúricos.

El paso de la extracción se puede repetir para aumentar el rendimiento del compuesto de tipo de equinocandina en la segunda fase orgánica inmiscible con agua. Preferentemente, la extracción se repite a 2-4 extracciones, más preferentemente se prefiere un total de 3 extracciones en este paso de la extracción.

El compuesto de tipo de equinocandina luego se recupera desde la fase orgánica mediante cualquier método conocido en el arte, tal como evaporando el solvente. La recuperación proporciona un concentrado de la fase orgánica que tiene el compuesto de tipo de equinocandina . El concentrado puede ser una solución concentrada o un residuo aceitoso del compuesto de tipo de equinocandina denominado en la presente residuo concentrado. Este residuo crudo del compuesto de tipo de equinocandina se puede obtener removiendo el solvente casi hasta secarlo para obtener un concentrado. La remoción del solvente orgánico inmiscible con agua se puede repetir varias veces agregando un solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar, tal como acetato de isobutilo, y evaporando los solventes, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es diferente del solvente inmiscible con agua del paso (a) del proceso precedente.

Optativamente, el proceso comprende un paso de lavado adicional del concentrado obtenido, antes de cristalizar el compuesto de tipo de equinocandina combinándolo con un antisolvente y un portador sólido como en el paso c) . Este paso de lavado comprende combinar el concentrado obtenido con agua. En una realización preferida, el lavado comprende dos pasos, uno usando agua que tiene un pH de 4 a 6,5, preferentemente de 4 a 4,5, y un segundo, usando agua que tiene un pH de 4 a 6,5, preferentemente de 6 a 6,5. Además, cuando se realiza el enfriamiento del concentrado obtenido, por ejemplo a 5°C, se puede usar agua que tiene un pH inferior a 4, por ejemplo agua que tiene un pH de 3. Los lavados pueden eliminar aproximadamente del 20% al 50% en peso de residuos sólidos que se originaron en el caldo de fermentación y que pueden estar presentes en el concentrado. Además, el concentrado se puede tratar con carbón activo antes de cristalizar el compuesto de tipo de equinocandina combinándolo con un antisolvente y un portador sólido como en el paso c) . Este tratamiento comprende mezclar carbón activo y el concentrado y luego filtrar el carbón activo.

El concentrado obtenido luego se puede purificar adicionalmente combinándolo con por lo menos un antisolvente y un portador sólido para obtener un compuesto de tipo de equinocandina purificado .

En una realización, la invención comprende un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende combinar el compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un antisolvente y un portador sólido. Preferentemente, el antisolvente y el portador sólido se agregan al compuesto, de tipo de equinocandina.

Los compuestos de tipo de equinocandina se obtienen, preferentemente, de extracciones del caldo de fermentación. Las extracciones pueden hacerse, por ejemplo, mediante los procesos revelados en la presente o mediante cualquier otro método conocido para un experto en el arte.

Los compuestos de tipo de equinocandina iniciales pueden estar en la forma de un residuo concentrado, obtenido mediante los procesos descritos anteriormente.

La precipitación del compuesto de tipo de equinocandina ocurre sobre el portador sólido, por lo tanto el compuesto de tipo de equinocandina se absorbe sobre el portador sólido y en consecuencia se separa de las impurezas que todavía están presentes en el concentrado obtenido en los pasos del proceso previos. En la precipitación de la sustancia de interés con un antisolvente, cuando se utiliza un volumen más pequeño del antisolvente se obtiene una alta pureza de la sustancia precipitada, pero este volumen más pequeño del antisolvente también complica su filtración. El portador sólido facilita la filtración de la sustancia precipitada que de otro modo es difícil de filtrar. Los portadores sólidos adecuados incluyen, en forma no taxativa, carbón activo, tierra diatomácea, harina de trigo, almidón de maíz, almidón de papa, bentonita, perlita, avicel, perlita hidrófoba, harina de lignito activo, carbonos, productos de celulosa y cualquier otro producto sólido, que se puede suspender en la solución de solvente del proceso de la presente invención.

En este paso del proceso, se prepara una mezcla combinando el portador sólido y el concentrado obtenido en el paso previo. La mezcla luego se combina con un antisolvente. Preferentemente, un antisolvente adecuado es el descrito anteriormente además del acetato de isopropilo y del acetato de isobutilo. Generalmente, después del agregado del antisolvente, se obtiene una suspensión.

La suspensión luego se filtra, para remover el portador sólido y el producto absorbido.

El proceso también comprende suspender el portador sólido filtrado y el producto absorbido para remover las trazas de otro liquido. El solvente utilizado para crear la suspensión puede ser un solo solvente, tal como ACN o acetona o una mezcla de dos solventes, en ambos de los cuales el compuesto de tipo de equinocandina posee baja solubilidad. Cuando se utiliza una mezcla de dos solventes, el primer solvente es uno en el cual las impurezas son solubles, tales como acetato de isobutilo, acetato de isopropilo y acetato de etilo, octano y el segundo es acetonitrilo o acetona.

Además, el producto y el portador sólido se puede recuperar de la suspensión mediante cualquier método conocido para un experto en el arte, tal como por ejemplo mediante filtración y el secado posterior del producto sólido filtrado. Preferentemente, el producto se puede separar del portador sólido combinando el complejo del portador sólido y el compuesto de tipo de equinocandina con un solvente en el cual el producto es soluble, como por ejemplo en alcoholes, por ejemplo metanol, etanol, n-propanol, iso-propanol , n-butanol, iso-butanol, en DMF, o DMSO. El portador sólido luego se filtra para obtener el producto purificado. El producto filtrado que contiene el producto purificado luego se puede purificar mediante cualquier método de precipitación o de cromatografía conocido.

El compuesto de tipo de equinocandina purificado puede utilizarse adicionalmente para preparar productos sintéticos, tales como caspofungina , anidulafungina o micafungina.

Habiendo descrito la invención con referencia a ciertas realizaciones preferidas, otras realizaciones se harán evidentes para un experto en el arte a partir del tratamiento de la memoria descriptiva. La invención se define además con referencia a los siguientes ejemplos que describen detalladamente los procesos de la invención. Aunque los ejemplos se centran en pneumocandina B0, WF 11899A y equinocandina B, un experto en el arte reconocería que los procesos se pueden adaptar con escasa o ninguna experimentación para purificar otros productos naturales en la familia de las equinocandinas . También será evidente para los expertos en el arte que se pueden practicar muchas modificaciones, tanto de los materiales y métodos, sin apartarse del alcance de la invención.

Ejemplos Ejemplo 1 Paso a: Purificación Un kilogramo de un caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 se combinó con 0,5 litro de acetato de iso-butilo para formar un sistema de dos fases. Las dos fases se separaron con un centrifugador. La fase de acetato de iso-butilo se removió. La totalidad de la pneumocandina B0 permaneció en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado luego se extrajo con 500 mi de iso-butanol. La extracción luego se repitió con otros 500 mi de iso-butanol. Las dos fases de iso-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de iso-butanol de 1090 mi. El rendimiento total de la purificación y las extracciones fue aproximadamente del 100%.

Paso b: Cristalización La fase de iso-butanol se dividió en cinco porciones de 200 mi. La pneumocandina B0 cruda se cristalizó desde cada una de las porciones mediante los siguientes procesos. i) Una porción de 200 mi se concentró a 3,5 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 17,5 mi de acetato de iso- butilo. La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C. La solución luego se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 37%. ii) Otra porción de 200 mi se concentró a 3,5 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 17,5 mi de acetonitrilo . La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C. La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 75%. iii) Otra porción de 200 mi se concentró a 3,5 g bajo presión reducida. Luego se agregaron otros 17,5 mi de acetato de etilo. La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C.

La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 84%. iv) Otra porción de 200 mi se concentró a 3,5 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 3,5 mi de acetato de butilo y 10,5 mi de acetonitrilo . La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°. La solución luego se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 83%. v) Una porción de 200 mi se concentró a 3,5 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 3,5 mi de acetato de etilo y ,5 mi de acetonitrilo. Posteriormente, luego se agregaron 17,5 mi de acetato de iso-butilo. La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C. La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 74%.

Ejemplo 2 Paso a: Purificación Un kilogramo de un caldo de fermentación que contiene pneumocandina B0 se combinó con 0,5 litro de acetato de n-butilo para formar un sistema de dos fases. Las dos fases se separaron con un centrifugador. La fase de acetato de n-butilo se removió de manera tal que la pneumocandina B0 permaneció en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado luego se extrajo con 500 mi de n-butanol. La extracción luego se repitió con otros 500 mi de n-butanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de n-butanol de 1150 mi.

Paso b: Cristalización La fase de n-butanol se concentró a 18 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 18 mi de acetato de iso-butilo y 54 mi de acetonitrilo . La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C.

La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 64%.

Ejemplo 3 Paso a: Purificación Un kilogramo de un caldo de fermentación que contiene pneumocandina Bo se combinó con 0,5 litro de acetato de n-propilo para formar un sistema de dos fases. Las dos fases se separaron con un centrifugador. La fase de acetato de n-propilo se removió de manera tal que la pneumocandina B0 permaneció en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado luego se extrajo con 500 mi de iso-butanol. La extracción luego se repitió con otros 500 mi de iso-butanol. Las dos fases de iso-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de iso-butanol de 1140 mi.

Paso b: Cristalización La fase de iso-butanol se concentró a 9 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 9 mi de acetato de iso-butilo y 27 mi de acetonitrilo . La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C. La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 80%.

Ejemplo 4 Paso a: Purificación Un kilogramo de un caldo de fermentación que contiene pneumocandina Bo se combinó con 0,5 litro de tolueno para formar un sistema de dos fases. Las dos fases se separaron con un centrifugador. La fase de tolueno se removió de manera tal que la pneumocandina B0 permaneció en el caldo de fermentación purificado.

El caldo de fermentación purificado luego se extrajo con 500 mi de iso-butanol. La extracción luego se repitió con otros 500 mi de iso-butanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de iso-butanol de 1120 mi.

Paso b: Cristalización La fase de iso-butanol se concentró a 12 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 12 mi de acetato de iso-butilo y 36 mi de acetonitrilo . La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C. La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 52%.

Ejemplo 5 Paso a: Purificación Un kilogramo de un caldo de fermentación que contiene pneumocandina Bo se combinó con 0,5 litro de acetato de hexano para formar un sistema de dos fases. Las dos fases se separaron con un centrifugador. La fase de hexano se removió de manera tal que la pneumocandina Bo permaneció en el caldo de fermentación purificado .

El caldo de fermentación purificado luego se extrajo con 500 mi de iso-butanol. La extracción luego se repitió con otros 500 mi de iso-butanol. Las dos fases de n-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de iso-butanol de 910 mi.

Paso b: Cristalización La fase de iso-butanol se concentró a 18 g bajo presión reducida. Luego se agregaron 18 mi de acetato de iso-butilo y 54 mi de acetonitrilo . La solución resultante luego se enfrió a 0°C-5°C. La solución se dejó en reposo durante aproximadamente 20 horas, durante las cuales ocurrió la cristalización. Los cristales resultantes luego se filtraron desde la solución y se secaron. El rendimiento del producto crudo fue del 88%.

Ejemplo 6 El caldo fermentado se filtró y el micelio filtrado se dividió en varias partes. Cada parte de los micelios filtrados se suspendió en un solvente en un volumen de 2 veces la masa de la parte del micelio filtrado. Después de agitar, los micelios se filtraron desde el solvente. Cada solvente removió impurezas. Los solventes tales como acetato de etilo, hexano, éter de petróleo y diclorometano derivaron en la purificación con una pérdida despreciable. Los solventes tales como acetona, metanol, etanol, n-propanol, isopropanol y acetonitrilo derivaron en la purificación a una pérdida significativa.

Ejemplo 7 Paso a: Se extrajeron 190 kg de caldo fermentado con pneumocandina , que contenia 414,8 g de pneumocandina B0, con 95 L de iso-butanol a pH 5,0-7,0. El paso de la extracción se repitió con otros 95 L de isobutanol. Las dos fases de isobutanol resultantes se combinaron para obtener una fase de isobutanol de 191 L.

La fase de iso-butanol combinada se evaporó al volumen de 25 L. Este concentrado se lavó dos veces con 12,5 L de agua a pH 4,0-4,5. Después del lavado ácido el concentrado se lavó dos veces con 6 L de agua a pH 6,0-6,5.

El concentrado lavado se aclaró con 193 g de carbón activo. Después del tratamiento con carbón el concentrado se evaporó a un volumen de 4,8 L. Se agregaron 3,6 L de acetato de iso-butilo a un concentrado final y la solución se evaporó nuevamente a 4,8 L. Este paso se repitió.

El concentrado final obtenido contenia 296,7 g de pneumocandina Bo . El rendimiento fue del 71,5%.

Paso b: Precipitación de pneumocandina B0 cruda a diferentes portadores 1. Se agregaron 59,4 g de tierra diatomácea (el tipo usado fue FW-14) a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de una mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta de filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 87,2 g de producto crudo -que contiene 13,88 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 89,9%. 2. Se agregaron 59,4 g harina de maíz a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de una mezcla de acetonitrilo-acetato de etilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 77, 09 g de producto crudo -que contienen 8,72 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 56,5%.

Se agregaron 59,4 g de almidón de maíz a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 80,02 g del producto crudo -que contenían 12,63 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 81,8%.

Se agregaron 59,4 g de almidón de papa a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 78,31 g del producto crudo -que contenían 14,56 g de pneumocandina B0-. El rendimiento de la precipitación fue del 94,3%.

Se agregaron 59,4 g de bentonita (el tipo usado fue S-100) a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 80,97 g del producto crudo -que contenían 11,14 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 72,2%.

Se agregaron 59,4 g de bentonita (el tipo usado fue T2-350) a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 81,14 g del producto crudo -que contenían 10,70 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 69,3%.

Se agregaron 59,4 g de carbón activo a un concentrado final de 500 mi de volumen. Se agregaron 800 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 1000 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 109,02 g del producto crudo -que contenían 25, 44 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 82,4%.

Se agregaron 19,8 g de perlita (el tipo usado fue CP-800) a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 47,46 g del producto crudo -que contenían 13,54 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 87,7%.

Se agregaron 59,4 g de Avicel (el tipo usado fue 200) a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 81,65 g del producto crudo -que contenían 9,62 g de pneumocandina Bo~. El rendimiento de la precipitación fue del 62,3%.

Se agregaron 29,7 g de lignito activo a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 53,56 g del producto crudo -que contenían 13,45 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 87,1%.

Se agregaron 19,8 g de perlita hidrófoba a un concentrado final de 250 mi de volumen. Se agregaron 400 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 500 mi de mezcla de acetonitrilo-acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 43,83 g del producto crudo -que contenían 13,43 g de pneumocandina B0- . El rendimiento de la precipitación fue del 86,9%.

Ejemplo 8 Paso a Se extrajeron 100,0 kg de caldo fermentado diluido con F-11899A, que contenía aproximadamente 36,5 g de WF-11899A con 100,0 L de iso-butanol a pH 5,0-7,0. El paso de extracción se repitió con 60,0 L adicionales de iso-butanol. Las dos fases de iso-butanol resultantes se combinaron para obtener una fase de iso-butanol de 161,0 L. La fase de iso-butanol combinada se evaporó al volumen de 12,3 L. Este concentrado se lavó dos veces con 6,0 L de agua a pH 4,0-4,5. Después del lavado ácido el concentrado se lavó con 6,0 L de agua a pH 6,0-6,5.

El concentrado lavado se aclaró con 9,1 g de carbón activo. Después del tratamiento con carbón el concentrado se dividió en dos partes. La primera parte (6,9 L) se evaporó a un volumen de 1,3 L. Un volumen igual (1,3 L) de acetato de isobutilo se agregó al concentrado y la solución se evaporó nuevamente al volumen del paso previo. El paso se repitió dos veces. El peso del concentrado final fue de 740,41 g.

La segunda parte (3,3 L) se evaporó a un peso de 337,3 g. Se agregó un volumen (300 mi) de acetato de iso-butilo a un concentrado y la solución se evaporó nuevamente al volumen del paso previo. Este paso se repitió dos veces. El peso del segundo concentrado final fue de 316,07 g.

El concentrado final obtenido contenia 20,25 g de WF-11899A. El rendimiento fue del 55,5%.

Paso b: Precipitación de WF-11899A (FR-901379) cruda a diferentes portadores 1. Se agregaron 6,0 g de tierra diatomácea (el tipo usado fue FW-14) y 5,0 mi de acetato de isopropilo a un concentrado final de 10 g de peso. Se agregaron 35 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 5 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 10 mi de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 10,0 g del producto crudo -que contenían 213,1 mg de WF-11899A. El rendimiento de la precipitación fue del 98,6%. 2. Se agregaron 300,0 g de tierra diatomácea (el tipo usado fue FW-14) y 178,0 mi de acetato de isopropilo a un concentrado final de 336, 0 g de peso. Se agregaron 1176 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 5 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 336 mi de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 451,6 g del producto crudo -que contenían 6,66 g de WF-11899A. El rendimiento de la precipitación fue del 91,7%.

Se agregaron 6,0 g de perlita (el tipo usado fue CP-800) y 5,0 mi de acetato de isopropilo a un concentrado final de 10 g de peso. Se agregaron 35 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 5 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 10 mi de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 9,61 g del producto crudo -que contenían 221,3 mg de WF-11899A. El rendimiento de la precipitación fue del 98,3%.

Se agregaron 6,0 g de Avicel (el tipo usado fue 200) y 5,0 mi de acetato de isopropilo a un concentrado final de 10 g de peso. Se agregaron 35 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 5 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 10 mi de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 9,71 g del producto crudo -que contenían 202,4 mg de F-11899A. El rendimiento de la precipitación fue del 93,6%.

. Se agregaron 400, 0 g de Avicel (el tipo usado fue 200) y 200,0 mi de acetato de isopropilo a un concentrado final de 404,0 g de peso. Se agregaron 1414 mi de acetonitrilo a la suspensión y la mezcla se agitó durante 5 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y la torta del filtro se suspendió con 404 mi de acetonitrilo. La torta del filtro se secó a 40°C durante 12 horas. Se prepararon 549,2 g del producto crudo -que contenían 8,31 g de WF- 11899A. El rendimiento de la precipitación fue del 95,5%.

Ejemplo 9 Paso a: El caldo fermentado con equinocandina se extrae con medio volumen de iso-butanol a pH 5,0-7,0. El paso de extracción se repitió con medio volumen adicional de iso-butanol. Las dos fases de iso-butanol resultantes se combinan.

La fase de iso-butanol combinada se concentra y se lava a pH ácido y neutro. El concentrado lavado se aclara con carbón.

Después del tratamiento con carbón el concentrado se evapora a un residuo aceitoso. Se agrega acetato de isobutilo al concentrado final y la solución se evapora nuevamente al volumen inicial. Este paso se repite.

Paso b: Precipitación de equinocandina cruda Se agrega tierra diatomácea (el tipo usado fue FW-14) al concentrado final. Se agrega acetonitrilo a la suspensión para precipitar el producto crudo. La mezcla se agita 1 hora adicional a temperatura ambiente. La mezcla se filtra y la torta del filtro se suspende con una mezcla de acetonitrilo : acetato de isobutilo 1:1. La torta del filtro se seca a 40°C durante 12 horas.

Ejemplo 10: Separación de la sustancia activa, pneumocandina B0, del portador Diez kilogramos del producto crudo pneumocandina B0 (sobre tierra diatomácea, ensayo: 13,07%, pureza de HPLC: 35,7%) que contenia 1307 g de la sustancia activa se agitaron con 100 L de propanol normal durante 1 hora. La tierra diatomácea se filtró y se lavó con 10 L de propanol normal. La solución propanólica combinada (aproximadamente 110 L) se evaporó bajo presión reducida a un volumen de 11,4 L. Se agregaron 46 L de acetato de isopropilo al concentrado y la mezcla se enfrió a (-) 10°C - (-)20°C. La mezcla se agitó durante otras 16-18 horas a (-) 10°C - (-)20°C. El material precipitado se filtró y se lavó con 10 L de acetato de isopropilo. La pneumocandina B0 se secó a 40°C durante aproximadamente 12 horas. La masa del producto fue 4,89 kg. El ensayo fue del 26,21% y la pureza de HPLC fue de 41,12. El rendimiento del paso fue del 98%.

Claims (67)

REIVINDICACIONES

1. Un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende: (a) extraer impurezas de un caldo entero que tiene un compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar para obtener un primer sistema de dos fases que comprende una fase acuosa y una fase orgánica; (b) remover la fase orgánica para obtener la fase acuosa; (c) extraer el compuesto de tipo de equinocandina de la fase acuosa con un solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un segundo sistema de dos fases; y (d) remover el compuesto de tipo de equinocandina purificado, en donde los solventes orgánicos inmiscibles con agua de los pasos (a) y (c) son diferentes.

2. El proceso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto de tipo de equinocandina se selecciona del grupo formado por pneumocandina B0, F-11899 y equinocandina.

3. El proceso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde el compuesto de tipo de equinocandina está presente en el caldo entero a una concentración de 0,2 a 15 g/L.

4. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar se selecciona del grupo formado por alcanos alifáticos de C5_8, hidrocarburos aromáticos de ^-Q, éteres de 04_8 y ésteres de C3_6.

5. El de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es heptano, hexano, octano, ciclohexano, tolueno, éter dietilico, éter diisopropilico, éter dibutilico, acetato de iso-butilo, acetato de n-butilo, acetato de n-propilo, acetato de isopropilo y acetato de etilo.

6. El proceso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es acetato de iso-butilo, acetato de n-butilo, acetato de n-propilo, acetato de isopropilo o acetato de etilo.

7. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la cantidad del solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar en el primer sistema de fase es del 5% al 90% en volumen del caldo entero.

8. El proceso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la cantidad del solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es del 50% al 90% en volumen del caldo entero.

9. El proceso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la cantidad del solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es del 10% al 50% en volumen del caldo entero.

10. El proceso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la cantidad del solvente orgánico inmiscible con agua no polar o débilmente polar es del 30% al 50% en volumen del caldo entero.

11. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua del paso (c) es un alcohol inmiscible con agua .

12. El proceso de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el alcohol inmiscible con agua es un alcohol de C4-6-

13. El proceso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde el alcohol de C4-6 es isobutanol o n-butanol.

14. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la extracción del paso (c) se repite.

15. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que también comprende el paso de cristalizar el compuesto de tipo de equinocandina , preferentemente mediante un proceso que comprende mezclar el compuesto de tipo de equinocandina recuperado con por lo menos un antisolvente.

16. El proceso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde el antisolvente se selecciona del grupo formado por acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de tere-butilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN) , mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y mezclas de acetonitrilo (ACN) y acetato de iso-butilo.

17. El proceso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el antisolvente es acetonitrilo.

18. El proceso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el antisolvente se acetato de etilo o acetato de isobutilo y la precipitación se induce mediante un paso de enfriamiento o mediante el agregado de un segundo antisolvente.

19. El proceso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el paso de enfriamiento es a una temperatura de 5°C a -20°C.

20. El proceso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el enfriamiento es a una temperatura de 5°C a 0°C.

21. El proceso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el segundo antisolvente es acetona o acetonitrilo .

22. El proceso de acuerdo con la reivindicación 21, en donde el segundo antisolvente es acetonitrilo o acetona y la precipitación se induce enfriando a una temperatura de 5°C a -20°C.

23. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22, que también comprende enfriar la mezcla del compuesto de tipo de equinocandina y el antisolvente a una temperatura de 5°C a -20°C durante un periodo de por lo menos 15 minutos.

24. El proceso de acuerdo con la reivindicación 23, en donde el enfriamiento es a una temperatura de 5°C a 0°C.

25. El proceso de acuerdo con la reivindicación 23 o 24, en donde le periodo es de 10 horas a 24 horas.

26. El proceso de acuerdo con la reivindicación 25, en donde le periodo es de 20 horas.

27. Un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende cristalizar un compuesto de tipo de equinocandina usando por lo menos un antisolvente.

28. El proceso de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el compuesto de tipo de equinocandina inicial se obtiene de las extracciones del caldo de fermentación.

29. El proceso de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el antisolvente se selecciona del grupo formado por acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de tere-butilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN) , mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y mezclas de acetonitrilo (ACN) y acetato de iso-butilo.

30. El proceso de acuerdo con la reivindicación 29, en donde el antisolvente es acetonitrilo.

31. El proceso de acuerdo con la reivindicación 29, en donde el antisolvente es acetato de etilo o acetato de isobutilo y la precipitación se induce mediante un paso de enfriamiento o mediante el agregado de un segundo antisolvente.

32. El proceso de acuerdo con la reivindicación 31, en donde le paso de enfriamiento es a una temperatura de 5°C a -20°C.

33. El proceso de acuerdo con la reivindicación 32, en donde el enfriamiento es a una temperatura de 5°C a 0°C.

34. El proceso de acuerdo con la reivindicación 31, en donde el segundo antisolvente es acetona o acetonitrilo .

35. El proceso de acuerdo con la reivindicación 34, en donde el segundo antisolvente es acetonitrilo o acetona y la precipitación se induce enfriando a una temperatura de 5°C a -20°C.

36. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 27 a 35, que también comprende enfriar la mezcla del compuesto de tipo de equinocandina recuperado y el antisolvente a una temperatura de 5°C a -20°C durante un periodo de por lo menos 15 minutos .

37. El proceso de acuerdo con la reivindicación 36, en donde le enfriamiento es a una temperatura de 5°C a 0°C.

38. El proceso de acuerdo con la reivindicación 36 o 37, en donde el periodo es de 10 horas a 24 horas.

39. El proceso de acuerdo con la reivindicación 38, en donde le periodo es de 20 horas.

40. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que también comprende convertir el compuesto de tipo de equinocandina purificado en caspofungina, anidulafungina o micafungina .

41. Un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende: (a) extraer el compuesto de tipo de equinocandina de un caldo de fermentación o de un micelio filtrado obtenido desde un caldo de fermentación, con un solvente orgánico inmiscible con agua para obtener un sistema de dos fases que comprende una fase acuosa y una fase orgánica o para obtener una fase orgánica que contiene agua; (b) recuperar el compuesto de tipo de equinocandina; y (c) combinar el compuesto de tipo de equinocandina recuperado con por lo menos un antisolvente y un portador sólido para obtener un compuesto de tipo de equinocandina purificado.

42. El proceso de acuerdo con la reivindicación 41, en donde el solvente orgánico inmiscible con agua del paso (a) es un alcohol inmiscible con agua.

43. El proceso de acuerdo con la reivindicación 42, en donde el alcohol inmiscible con agua es un alcohol de C4-6.

44. El proceso de acuerdo con la reivindicación 43, en donde el alcohol de C4-6 es isobutanol o n-butanol .

45. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 44, en donde la extracción del paso (a) se lleva a cabo a un pH de 2 a 8.

46. El proceso de acuerdo con la reivindicación 45, en donde le pH es de 5 a 7.

47. El proceso de acuerdo con la reivindicación 45, en donde el pH es de 2 a 4 y la extracción se lleva a cabo mientras se enfria a una temperatura inferior a 10°C.

48. El proceso de acuerdo con la reivindicación 47, en donde le enfriamiento es a una temperatura de 0°C a 10°C.

49. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 48, en donde el paso de extracción (a) se repite.

50. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 49, que también comprende un paso de lavado del compuesto de tipo de equinocandina, antes de combinar el compuesto de tipo de equinocandina con recuperado con un antisolvente y un portador sólido en el paso c) .

51. El proceso de acuerdo con la reivindicación 50, en donde el paso de lavado comprende combinar el compuesto de tipo de equinocandina con agua.

52. El proceso de acuerdo con la reivindicación 51, en donde el paso de lavado comprende dos paso, uno usando agua que tiene un pH de 4 a 6,5, y un segundo, usando agua que tiene un pH de 4 a 6,5.

53. El proceso de acuerdo con la reivindicación 52, en donde el primer lavado con agua tiene un pH de 4 a 4,5 y el segundo lavado con agua tiene un pH de 6 a 6,5.

54. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 50 a 53, en donde el lavado elimina del 20% al 50% en peso de residuos sólidos que se originan en el caldo de fermentación.

55. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 54, que también comprende un paso de tratar el compuesto de tipo de equinocandina con carbón activo antes de combinar el compuesto de tipo de equinocandina recuperado con un antisolvente y un portador sólido como en el paso (c) .

56. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 55, que también comprende el paso de cristalizar el compuesto de tipo de equinocandina que comprende combinarlo con por lo menos un antisolvente y un portador sólido para obtener un compuesto de tipo de equinocandina purificado.

57. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 56, en donde el portador sólido se selecciona del grupo formado por carbón activo, tierra diatomácea, harina de trigo, almidón de maíz, almidón de papa, bentonita, perlita, avicel, perlita hidrófoba, harinas de lignito activo, carbonos y productos de celulosa.

58. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 57, en donde el antisolvente se selecciona del grupo formado por acetato de etilo, acetato de isobutilo, acetato de n-butilo, acetato de tere-butilo, acetato de isopropilo, acetona, acetonitrilo (ACN) , mezclas de acetonitrilo con acetato de etilo y mezclas de acetonitrilo (ACN) con acetato de iso-butilo.

59. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 58, en donde la recuperación del compuesto de tipo de equinocandina comprende filtrar la mezcla del compuesto de tipo de equinocandina, el portador sólido y el antisolvente y suspender el portador sólido filtrado al cual se absorbe el compuesto de tipo de equinocandina en un solvente seleccionado del grupo formado por acetonitrilo, acetona o una mezcla de dos solventes orgánicos.

60. El proceso de acuerdo con la reivindicación 59, en donde la mezcla de dos solventes orgánicos comprende un primer solvente seleccionado del grupo formado por acetato de isobutilo, acetato de isopropilo, acetato de etilo, octano y un segundo solvente seleccionado del grupo formado por acetonitrilo o acetona.

61. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 60, en donde el compuesto de tipo de equinocandina se separa del portador sólido que comprende el paso de combinar el portador sólido al cual se absorbe el compuesto de equinocandina con un solvente en el cual el compuesto de tipo de equinocandina es soluble .

62. El proceso de acuerdo con la reivindicación 61, en donde le solvente en el cual es soluble el compuesto de tipo de equinocandina se selecciona del grupo formado por metanol, etanol, n-propanol, iso-propanol , n-butanol, iso-butanol, dimetilformamida (DMF), sulfóxido de dimetilo (DMSO), una mezcla de ellos y una mezcla de ellos en agua.

63. Un proceso para purificar un compuesto de tipo de equinocandina que comprende combinar un compuesto de tipo de equinocandina con por lo menos un antisolvente y un portador sólido .

64. El proceso de acuerdo con la reivindicación 63, en donde el compuesto de tipo de equinocandina inicial se obtiene de extracciones del caldo de fermentación.

65. El proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 41 a 64, que también comprende el paso de convertir el compuesto de tipo de equinocandina . purificado es caspofungina, anidulafungina o micafungina.

66. El uso de un proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la fabricación de una equinocandina fungicida.

67. El uso de acuerdo con reivindicación 66, en donde la equinocandina fungicida caspofungina, micafungina y anidulafungina .