MX2008000272A

MX2008000272A - Manguito de fuerza electromagnetica variable en tiempo para la expansion de celulas y metodo de uso del mismo.

Info

Publication number: MX2008000272A
Application number: MX2008000272A
Authority: MX
Inventors: Clayton R Parker
Original assignee: Regenetech Inc
Priority date: 2005-06-29
Filing date: 2006-06-22
Publication date: 2008-03-11
Also published as: CA2613408A1; KR20080023755A; BRPI0613092A2; EP1896566A1; IL188443A0; WO2007005306A1; JP2008544754A

Abstract

Un manguito de fuerza electromagnetica variable en tiempo en donde el manguito de fuerza electromagnetica variable en tiempo comprende una fuente de fuerza electromagnetica variable en tiempo conectado operativamente a una espiral electricamente conductora que puede recibir de forma removible un recipiente de cultivo. La presente invencion tambien se refiere a un metodo para la expansion celular que comprende proporcionar un manguito de fuerza electromagnetica variable en tiempo se introduce en un recipiente de cultivo y que en uso distribuye una fuerza electromagnetica variable en tiempo a las celulas contenidas dentro del recipiente de cultivo para la expansion celular.

Description

MANGUITO DE FUERZA ELECTROMAGNÉTICA VARIABLE EN TIEMPO PARA LA EXPANSIÓN DE CÉLULAS Y MÉTODO DE USO DEL MISMO Campo de la Invención La presente invención se refiere en general a un manguito para la expansión de células, y de manera más particular a un manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo que recibe de forma removible un recipiente de cultivo. La presente invención también se refiere a un manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo que, cuando está en uso, suministra una fuerza electromagnética variable en tiempo a células en un recipiente de cultivo para la expansión de células en el mismo .

Antecedentes de la Invención Durante muchos años han existido métodos para cultivar células . Estos métodos comprenden cultivar células en cultivos bidimensionales que utilizan cámaras de cultivo tal como matraces y cajas de petri, y otros comprenden cultivar células en cultivos tridimensionales que utilizan cámaras de cultivo tal como bio-reactores . Los métodos para optimizar el cultivo de células incluyen adicionar moléculas a las células en un cultivo tal como factores de crecimiento, hormonas y otros que, por ejemplo, regulan de forma ascendente o descendente la expansión de las células.

REF..188974 Algunos métodos se optimizan para cultivar células individuales y otros se optimizan para cultivar tejido. Además, en un esfuerzo para producir más células o construcciones más grandes de tejido durante el tiempo, se realizan cultivos de células bajo condiciones varias. La patente de los Estados Unidos número 6,673,597 de Wolf et al . , describe el uso de una fuerza electromagnética variable en tiempo ("TVEMF") para cultivar células en cultivo. Wolf et al., describe el uso de electrodos para suministrar una fuerza electromagnética a un cultivo celular para el crecimiento del mismo. En aquellos casos donde se usa una espiral conductora, en lugar de electrodos, para la distribución de una TVEMF a un cultivo celular, la espira está integral con una cámara de cultivo y fijada a éste. Puesto que se pueden introducir las células expandidas en un cultivo en el cuerpo humano para la regeneración de tejido o tratamiento de malignidades humanas, la cámara de cultivo debe ser estéril. Si la fuente de la TVEMF que se va a distribuir a las células en una cámara de cultivo está integral con la cámara de cultivo entonces se debe esterilizar ya sea la cámara de cultivo sin perturbar la fuente de la TVEMF, un proceso que es difícil y consumidor de tiempo, y si el recipiente se va a descartar después de cada uso, entonces la espiral integral de T'VEMF tiene que ser descartada con éste. De cualquier manera, una espiral integral de TVEMF es un planteamiento costoso a la expansión celular. En consecuencia, sería altamente deseable tener un manguito de TVEMF que comprenda una espiral eléctricamente conductora que tiene una porción interior en donde la porción interior define un espacio en donde se recibe de forma removible un recipiente de cultivo. También es altamente deseable tener un manguito de TVEMF que comprenda un soporte de espiral con una porción interior y una porción exterior, una espiral eléctricamente conductora enrollada alrededor de la porción exterior del soporte de espiral; y una fuente de TVEMF, y en donde la porción interior del soporte de la espiral define un espacio en donde se recibe de forma removible un recipiente de cultivo. Además, es altamente deseable tener un manguito de TVEMF que, cuando está en uso, se introduce a un recipiente de cultivo que contiene células y suministra una TVEMF a las células en un recipiente de cultivo para la expansión celular. La presente invención supera los problemas asociados con los métodos anteriores y actuales de cultivo celular, y presenta ventajas no vistas antes .

Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a un manguito de TVEMF que comprende una espiral eléctricamente conductora que tiene una porción interior y una porción exterior en donde la porción interior define un espacio en donde se recibe en forma removible un recipiente de cultivo, y una fuente de TVEMF conectada operativamente a la espiral eléctricamente conductora. De manera preferente, la espiral eléctricamente conductora es sustancialmente rígida. La presente invención también se refiere a un manguito de TVEMF que comprende un soporte de espiral con una porción interior y una porción exterior en donde la porción interior define un espacio en el cual se recibe de forma removible un recipiente de cultivo, una espiral eléctricamente conductora enrollada alrededor de la porción exterior del soporte de espiral, y una fuente de T'VEMF conectada operativamente a la espiral eléctricamente conductora. La presente invención también se refiere a un método de expansión celular que comprende los pasos de proporcionar un manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo que comprende una espiral eléctricamente conductora, que tiene una porción interior y una porción exterior, conectado operativamente a una fuente de fuerza electromagnética variable en tiempo; introducir un recipiente de cultivo que contiene células a la porción interior de la espiral eléctricamente conductora del manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo; y suministrar una fuerza electromagnética variable en tiempo a las células en el recipiente de cultivo a través del manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo para la expansión celular. El manguito de TVEMF puede distribuir de manera preferente una TVEMF en la forma de una onda cuadrada de impulso (que sigue una curva de Fourier) a las células en el recipiente de cultivo, y la TVEMF puede ser de manera preferente de aproximadamente 0.05 gausios a aproximadamente 6 gausios . Otros aspectos, características y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción de las modalidades preferidas de la invención dadas para el propósito de descripción. Esta invención se puede describir más completamente por las modalidades preferidas como se describe más adelante en la presente, pero no se propone que se limite a esto.

Breve Descripción de las Figuras En las figuras, La Figura 1 es una vista lateral elevada de un manguito de TVEMF; La Figura 2 es una vista frontal elevada de un manguito de TVEMF; La Figura 3 es una vista frontal elevada de un manguito de TVEMF adyacente de forma removible a y que abarca un recipiente de cultivo; La Figura 4 es una vista lateral elevada de un manguito de TVEMF; La Figura 5 es una vista lateral elevada de un manguito de TVEMF que se introduce a un recipiente de cultivo; La Figura 6 es una vista lateral elevada de un manguito de TVEMF; La Figura 7 es una vista lateral elevada en sección transversal de un manguito de TVEMF gue se introduce a un recipiente de cultivo giratorio; y La Figura 8 es una vista lateral elevada en sección transversal de un manguito de TVEMF adyacente de forma removible a y que abarca un recipiente de cultivo giratorio.

Descripción Detallada de la nvención En las figuras, las Figuras 1-6 ilustran modalidades preferidas de un manguito 10 de T'VEMF que puede suministrar un TVEMF a células dentro de un recipiente de cultivo. Las Figuras 7 y 8 ilustran una modalidad preferida de un manguito 10 de TVEMF que es giratorio y que puede suministrar una TVEMF a células dentro de un recipiente giratorio de cultivo. La Figura 1 es una vista lateral elevada de una modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF que comprende una espiral 5 eléctricamente conductora y una fuente 9 de TVEMF conectada de manera operativa a la espiral 5 eléctricamente conductora. La frase "operativamente conectada", y palabras y frases similares, se propone que signifique que la fuente de TVEMF se puede conectar a la espiral eléctricamente conductora de una manera tal que cuando esté en operación, la fuente de TVEMF pueda impartir una TVEMF a la espiral eléctricamente conductora a través de una conexión conductora, de manera preferente con al menos un alambre eléctricamente conductor. La fuente de TVEMF se puede fijar de manera preferente a la espiral eléctricamente conductora, y puede estar preferentemente integral ' con la espiral eléctricamente conductora. En la presente invención, la espiral eléctricamente conductora puede ser cualquier material que conduzca electricidad. La espiral eléctricamente conductora puede ser de manera preferente, pero no se limita a, los siguientes materiales conductores; placa, oro, cobre, aluminio, hierro, plomo, titanio, uranio, un metal ferromagnético, y zinc, o combinaciones de los mismos. La espiral eléctricamente conductora también puede comprender de manera preferente agua salina. La espiral eléctricamente conductora de la presente invención puede ser de manera preferente sustancialmente rígida. "Sustancialmente rígida", se propone a todo lo largo de esta invención que signifique que la espiral eléctricamente conductora puede mantener una forma sin la necesidad de soporte. La espiral eléctricamente conductora puede ser cualquier forma, de manera sustancialmente preferente cilindrica, preferentemente con una sección transversal sustancialmente elíptica, de manera más preferente con una sección transversal sustancialmente ovalada, y de manera más preferente con una sección transversal sustancialmente circular. La espiral eléctricamente conductora también puede ser de manera preferente un solenoide, una espiral eléctricamente conductora, ajustadamente enrollada. Además, la espiral eléctricamente conductora se puede enrollar de manera preferente en aisladores eléctricos que comprenden, pero no se limitan a, caucho, plástico, silicones, vidrio y cerámica. De manera preferente, el aislador eléctrico proporciona rigidez a la espiral eléctricamente conductora. En la modalidad preferida ilustrada en la Figura 1, la espiral 5 eléctricamente conductora se enrolla alrededor de la porción exterior de un soporte 3 de espiral . El soporte de espiral de la presente invención se puede hacer de manera preferente de un material no conductor y no magnético, de manera más preferente no metálico y de manera más preferente plástico, por ejemplo, polietileno. Además, el soporte de espiral puede comprender de manera preferente un material conductor, de manera preferente hierro. No unido por teoría, un núcleo de hierro se piensa que mejora el campo magnético de un solenoide. La porción exterior del soporte de espiral tiene una forma que es compatible con la espiral eléctricamente conductora. Por "compatible" se quiere decir que el soporte de espiral presta soporte a la espiral eléctricamente conductora y dicta y mantiene de manera preferente la forma de la espiral eléctricamente conductora. La espiral eléctricamente conductora se puede enrollar alrededor de la porción exterior del soporte de espiral que soporta una forma de la espiral eléctricamente conductora, de manera preferente que tiene una sección transversal sustancialmente ovalada, de manera más preferente una sección transversal sustancialmente elíptica, y de manera más preferente una sección transversal sustancialmente circular. En esta modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF, la espiral 5 eléctricamente conductora y el soporte 3 de espiral se colocan en, de manera preferente en forma removible, una base 11 que proporciona soporte estacionario a esto. La Figura 2 es una vista frontal elevada de una modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF, también ilustrado en la Figura 1, que representa la espiral 5 eléctricamente conductora enrollada alrededor de la porción exterior del soporte 3 de espiral y en donde la espiral 5 eléctricamente conductora y el soporte 3 de espiral se colocan en, de manera preferente de forma removible, una base 11.

La Figura 3 es una vista frontal elevada de una modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF, también ilustrado en las Figuras 1 y 2, que tiene además un recipiente 1 de cultivo en la porción interior del soporte 3 de espiral enrollado con la espiral 5 eléctricamente conductora. En la presente invención, la espiral eléctricamente conductora, y el soporte de espiral cuando está presente, tiene una porción interior que define un espacio en el cual se recibe de manera removible un recipiente de cultivo. "Recibido de forma removible" y términos similares se refieren a una característica de un espacio en donde se introduce un recipiente de cultivo a éste y se remueve éste como se desee. Por ejemplo, se recibe de forma removible un recipiente de cultivo por el espacio en la porción interior de la espiral eléctricamente conductora o el soporte de espiral cuando está presente. El espacio puede acomodar un recipiente de cultivo de modo que el recipiente de cultivo se pueda remover y/o desmontar del espacio cuando se desee. El espacio en la porción interior del soporte de espiral puede ser de cualquier forma que tiene de manera preferente un lado en el cual se coloca de forma removible al menos un recipiente de cultivo. El recipiente de cultivo de la presente invención puede ser un recipiente de cultivo que se puede acompañar por, y contener dentro de, la porción interior de la espiral eléctricamente conductora, y el soporte de espiral cuando es aplicable, que incluye, pero no se limita a, un recipiente de cultivo de bio-reactor, un recipiente de cultivo de bioreactor giratorio, un matraz, una placa, una caja de petri, y/o un recipiente de cultivo desechable. Por "abarca" es decir que la espiral eléctricamente conductora, y el soporte de espiral donde es aplicable, circundan el recipiente de cultivo. Además, el recipiente de cultivo puede ser un recipiente de cultivo individual o más de un recipiente de cultivo. El recipiente de cultivo de la presente invención también es capaz de soportar y mantener un cultivo celular, de manera preferente la expansión de una célula, agregado celular, tejido, o estructura tipo tejido. La Figura 4 es una vista lateral elevada de otra modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF de la presente invención que tiene una espiral 105 eléctricamente conductora y una fuente 109 de TVEMF operativamente conectada. La espiral 105 eléctricamente conductora se enrolla en una forma sustancialmente cilindrica, preferentemente con una sección transversal sustancialmente ovalada, y de manera más preferente con una sección transversal sustancialmente circular, y de manera más preferente con una sección transversal sustancialmente elíptica. La espiral 105 eléctricamente conductora en esta modalidad es sustancialmente rígida y está preferentemente aislada. El aislador eléctrico puede proporcionar de manera preferente rigidez a la forma de la espiral eléctricamente conductora. La espiral eléctricamente conductora del manguito 10 de TVEMF tiene una sección transversal que es suficientemente grande para recibir de manera removible y abarcar un recipiente de cultivo. Además, la espiral 105 eléctricamente conductora está adyacente de forma removible al recipiente 101 de cultivo. Por "adyacente de forma removible a", y términos similares, se quiere decir que la espiral eléctricamente conductora puede estar cerca de, cercana a, o chocando el recipiente de cultivo, de modo que se puede remover fácilmente de, o desmontar del recipiente de cultivo. La Figura 5 ilustra una vista lateral elevada de aún otra modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF que tiene una espiral 205 eléctricamente conductora y una fuente 209 de T'VEMF conectada operativamente a la espiral 205 eléctricamente conductor. En esta modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF, la espiral 205 eléctricamente conductora se enrolla alrededor de una porción exterior de un soporte 203 de espiral. La Figura 5 ilustra además el manguito 10 de TVEMF que se introduce a un recipiente 201 de cultivo, por ejemplo, una caja de petri. En esta modalidad preferida, el recipiente 201 de cultivo se coloca en un tubo ascendente 213, que a su vez se coloca en una base 211, de manera preferente colocada de manera removible, de modo que el tuvo ascendente 213 se pueda remover de la base 211 y se pueda limpiar, esterilizar, y/o mantener de otro modo como sea necesario. La espiral 205 eléctricamente conductora se coloca en, de una manera preferentemente removible, la base 211. Para introducir el recipiente 201 de cultivo al manguito 10 de TVEMF, el recipiente 201 de cultivo se coloca en el tubo ascendente 213, y la espiral 205 eléctricamente conductora y el soporte 203 de espiral entonces se colocan sobre el recipiente 201 de cultivo. El término "introducir", y términos similares, se propone que se refiera a la recepción removible y acomodo de un recipiente de cultivo en la porción interior de la espiral eléctricamente conductora, o el soporte de espiral donde sea aplicable. La manipulación de un manguito de TVEMF de modo que abarque, y esté adyacente de forma removible a, un recipiente de cultivo se considera la introducción de un manguito de TVEMF a un recipiente de cultivo. Adicionalmente, la manipulación de un recipiente de cultivo de modo que se abarque por un manguito de TVEMF también se considera que introduce un recipiente de cultivo a un manguito de TVEMF. En la presente invención, en el uso, una vez introducida, la espiral eléctricamente conductora del manguito de TVEMF está adyacente de forma removible al recipiente de cultivo y al mismo tiempo abarca el recipiente de cultivo . La Figura 6 es una vista lateral elevada de la modalidad preferida del manguito 10 de TVEMF ilustrada en la Figura 5. El manguito 10 de TVEMF comprende una espiral 205 eléctricamente conductora y una fuente 209 de TVEMF conectada de forma operativa. En la Figura 6, como en la Figura 5, la espiral 205 eléctricamente conductora se enrolla alrededor de la porción exterior de un soporte 203 de espiral. El soporte 203 de espiral está adyacente de forma removible a, y abarca, un recipiente de cultivo y el soporte 203 de espiral, enrollada con la espiral 205 eléctricamente conductora, se coloca de forma removible en una base 211. La Figura 7 es una vista lateral elevada en sección transversal de otra modalidad preferida de un manguito 10 de TVEMF y su introducción a un recipiente 301 de cultivo giratorio. El manguito 10 de TVEMF de la modalidad preferida en la Figura 6 comprende una espiral 305 eléctricamente conductora y una fuente 309 de TVEMF conectada operativamente a la espiral 305 eléctricamente conductora. En esta modalidad preferida, la espiral 305 eléctricamente conductora se enrolla alrededor de la porción exterior de un soporte 303 de espiral y el manguito 10 de T'VEMF es giratorio. En un primer extremo, un primer alambre conductor 325 y un segundo alambre conductor 326 se conectan a la fuente 309 de TVEMF. En un segundo extremo, los alambres 325, 326 se conectan a al menos un anillo para facilitar la rotación de la espiral 305 eléctricamente conductora, de manera preferente un primer anillo 321 y un segundo anillo 322, respectivamente. También en la Figura 7 se representa un alojamiento 312 de motor soportado por una base 311. Un motor 313 se fija dentro del alojamiento 312 de motor y se conecta por un primer alambre 314 y un segundo alambre 315 a una caja 316 de control que aloja un dispositivo de control en el mismo por lo que se puede controlar de forma creciente la velocidad del motor 313 al girar la perilla 317 de control. Extendiéndose desde el alojamiento 312 de motor está un árbol 318 de motor. Un montaje giratorio 328 recibe de forma removible un soporte 329 giratorio de recipiente de cultivo, de manera preferente desechable, .que recibe de forma removible un recipiente 301 de cultivo giratorio que se fija de forma removible dentro del soporte 329 giratorio de recipiente de cultivo, de manera preferente por un tornillo 331. En la Figura 7, de manera preferente el manguito 10 de TVEMF y el recipiente 301 de cultivo giratorio se montan de forma removible al montaje 328 giratorio. El montaje 328 giratorio se recibe por el árbol 318 de motor. Cuando la perilla 317 de control se enciende, el recipiente 301 de cultivo giratorio junto con el soporte 303 de espiral, enrollado por la espiral 305 eléctricamente conductora, se puede girar de manera preferente de forma simultánea. Adicionalmente, en la operación, el manguito 10 de TVEMF permanece adyacente de forma removible a, y abarca, el recipiente 301 de cultivo giratorio, en tanto que al mismo tiempo, suministra una T'VEMF a las células en el recipiente 301 de cultivo giratorio. El recipiente de cultivo giratorio puede ser de manera preferente desechable en donde se puede descartar y se usa uno nuevo en los cultivos celulares posteriores . El recipiente de cultivo giratorio también se puede esterilizar de manera preferente, por ejemplo en un autoclave, después de cada uso y reutilizar para los cultivos celulares posteriores. Un recipiente de cultivo desechable se puede fabricar y envasar en un ambiente estéril, permitiendo de este modo que se use por el profesional médico o de investigación tanto como se usan otros dispositivos médicos desechables . La Figura 8 ilustra una vista lateral elevada en sección transversal del manguito 10 de TVEMF en la modalidad preferida de la Figura 7 adyacente de forma removible a, y que abarca, un recipiente 301 de cultivo giratorio. En operación, se introduce un recipiente de cultivo a un manguito de TVEMF. La fuente de TVEMF del manguito de TVEMF se enciende y se distribuyen a TVEMF a través de la espiral eléctricamente conductora en un recipiente de cultivo abarcado por, y adyacente de forma removible a, el manguito de TVEMF. En el uso, la TVEMF se distribuye a todo lo largo del recipiente de cultivo, y por lo tanto, a las células contenidas en el mismo, de manera preferente en una distribución casi uniforme. En la presente invención, el término "células", o cualquier otro término similar, se propone que incluya, pero no se limita a células individuales, células unidas a substratos de unión celular, agregados celulares, tejidos, y estructuras tipo tejido. El término "expansión" se propone que incluya crecimiento en el tamaño de los tejidos, estructuras tipo tejido, y/o agregados celulares, y/o el crecimiento en el número de células en un recipiente de cultivo. Debido a que la presente invención proporciona un método para suministrar una TVEMF a células en un recipiente de cultivo para la expansión del mismo, un manguito de TVEMF se va a hacer de un tamaño y configurar para recibir de forma removible el recipiente de cultivo de modo que se pueda suministrar una TVEMF a las células en el recipiente de cultivo, de manera preferente en una distribución casi uniforme. Puesto que el manguito de TVEMF de la presente invención está adyacente de forma removible al recipiente de cultivo, el manguito de TVEMF se puede reutilizar para cultivos celulares secuenciales. También, debido a que el manguito de TVEMF está removiblemente adyacente al recipiente de cultivo, un manguito de TVEMF individual puede acomodar diferentes tipos, formas y tamaños de recipientes de cultivo. El tamaño de la espiral eléctricamente conductora y el número de veces que se enrolla son tal que cuando se suministra una TVEMF a la espiral eléctricamente conductora, se genera una TVEMF en el recipiente de cultivo para la expansión de células en el mismo. El manguito de TVEMF puede generar una TVEMF preferentemente desde aproximadamente 0.05 gausios a aproximadamente 6 gausios, de manera más preferente desde aproximadamente 0.05 gausios a aproximadamente 0.5 gausios, y de manera más preferente de aproximadamente 0.5 gausios . La TVEMF está de manera preferente en una onda delta, de manera más preferente en una onda cuadrada diferenciada, y de manera más preferente en una onda cuadrada (que sigue una curva de Fourier) . De manera preferente, la onda cuadrada de impulso tiene una frecuencia de aproximadamente 2 a aproximadamente 25 ciclos/segundo, de manera más preferente de aproximadamente 5 a aproximadamente 20 ciclos/segundo, y por ejemplo de aproximadamente 10 ciclos/segundo, y la espiral eléctricamente conductora tiene un valor de RMS de aproximadamente 1 a aproximadamente 1000 mA, de manera preferente de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mA, por ejemplo, 6 mA. Sin embargo, estos parámetros no se propone que sean limitantes a la TVEMF de la presente invención, y como tales, pueden variar en base a otros aspectos de esta invención. La TVEMF se puede medir por equipo normal, por ejemplo, un medidor de gausios de sensor de células EN331. Además se contempla que el manguito de TVEMF pueda estar equipado con un dispositivo de control de temperatura. El dispositivo de control de temperatura, de manera preferente es un sensor automatizado, y detecta la temperatura en la porción interior de la espiral eléctricamente conductora, y el soporte de espiral donde es aplicable. En el uso, si el dispositivo de control de temperatura detecta una lectura de temperatura en la porción interior de la. espiral eléctricamente conductora, y el soporte de espiral cuando está presente, que es más alta que la deseada, el dispositivo de control de temperatura puede alertar al usuario del cambio de temperatura, de manera preferente con una alarma. No unido por teoría, pero cuando hay una alta resistencia eléctrica, se genera calor. De esta manera, el espacio en donde se recibe de manera removible un recipiente de cultivo puede llegar a ser caliente dependiendo del diámetro de la espiral eléctricamente conductora y de la cantidad de electricidad suministrada a la misma. Puesto que se pueden hacer varios cambios en los manguitos de TVEMF, como se contemplan en la presente invención, sin apartarse del alcance de la invención, se propone que toda la materia contenida en la presente se interprete como ilustrativa y no limitante.

Método Operativo Se recolectaron células sanguíneas periféricas, PBC, de donadores y se hizo una matriz de cultivo con la sangre entera que se recolectó en donde las células (0.75 x 10d células/ml) se suspendieron en medio Dulbecco modificado de Iscove (IMDM) (GIBCO, Grand Island, NY) complementado con albúmina de humano al 5 % (HA) , 100 ng/ml de G-CSF humano recombinante (Amgen Inc., Thousand Oaks, CA) , y 100 ng/ml de factor de células madre humano recombinante (SCF) (Amgen) . Se introdujeron 10 ppm de D-penicilamina [ácido de D(-)-2-Amino-3-mercapto-3-metilbutanoico] (Sigma-Aldrich) , un agente quelador de cobre, disuelto en DMSO, en la mezcla celular. El propósito del agente quelante de cobre es reducir, no unido por teoría, al cantidad de cobre en la sangre periférica antes de la expansión con T'VEMF. ?o unido por teoría, se cree que la disminución en la cantidad de cobre disponible puede mejorar la expansión celular.

Ejemplo 1.- Expansión Celular en un Bio-Reactor Giratorio Se coloca una primera muestra de la mezcla de cultivo, preparada con antes, en un bio-reactor giratorio que tiene una cámara de cultivo de 75 ml . Se colocan 0.75 x 106 células/ml de la matriz de cultivo en la cámara de cultivo de 75 ml, para un volumen total de mezcla de cultivo de 75 ml. Se suministra una fuerza electromagnética variable en tiempo de aproximadamente 0.5 gausios en una onda cuadrada de impulso a las células en el recipiente de cultivo de bio- reactor giratorio a través del manguito de TVEMF que abarca y está adyacente de forma removible al bio-reactor giratorio, por ejemplo en las Figuras 7 y 8. Se coloca una segunda muestra en un bio-reactor giratorio sin ninguna TVEMF aplicada a la misma. Diferente de la condición de TVEMF, todas las otras condiciones fueron idénticas como entre la primera y segunda muestra. Los recipientes de cultivo se giraron a una velocidad de aproximadamente 10 RPM. Los cultivos se cultivaron a 37°C y en C02 al 5 % . Las células de la primera y segunda muestra se dejaron expandir durante siete días y después del séptimo día de expansión las células se lavaron con PBS (solución amortiguadora de fosfato) y se contaron por técnicas convencionales de conteo, por ejemplo al usar un contador celular Coulter. Por determinación visual, se encontró que la primera mezcla de cultivo que se expuso a una TVEMF mediante el manguito de TVEMF tiene más de cinco veces el crecimiento o expansión de la muestra que no se expuso a una T'VEMF.

Ejemplo 2.- Expansión Celular en una Caja de Petri Una primera muestra de la mezcla de cultivo, preparada como antes, se colocó en una caja de petri y se suministró una TVEMF de aproximadamente 0.5 gausios, en una onda cuadrada de impulso, al manguito de TVEMF que abarcó, y estuvo adyacente a, la caja de petri, por ejemplo en las Figuras 5 y 6. Se colocó una segunda muestra en una caja de petri sin ninguna TVEMF aplicada a ésta. Diferente de la condición de TVEMF, todas las otras condiciones fueron idénticas como entre la primera y segunda muestra. Los cultivos se cultivaron en una incubadora a 37°C y en C02 al 5 %. Las células de la primera y segunda muestra se dejaron expandir durante siete días y después del séptimo día de expansión, las células se lavaron con PBS (solución amortiguadora de fosfato) y se contaron por técnicas convencionales de conteo, por ejemplo al usar un contador celular Coulter. Por determinación visual, se encontró que la mezcla de cultivo que se expuso a una TVEMF mediante el manguito de TVEMF tiene más de dos veces el crecimiento o expansión de la muestra que no se expuso a una TVEMF. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims

Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo, caracterizado porque comprende: una espiral eléctricamente conductora que tiene una porción interior y una porción exterior en donde la porción interior define un espacio en el cual se recibe de forma removible a un bio-reactor giratorio; y una fuente de fuerza electromagnética variable en tiempo conectada operativamente a la espiral eléctricamente conductora.
2. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora es sustancialmente rígida.
3. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo es giratorio alrededor de un eje.
4. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porgue el eje es sustancialmente horizontal.
5. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el eje es sustancialmente vertical.
6. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora es un solenoide.
7. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora es sustancialmente cilindrica.
8. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora tiene una sección transversal sustancialmente circular.
9. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora tiene una sección transversal sustancialmente ovalada.
10. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora tiene una sección transversal sustancialmente elíptica.
11. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el recipiente de cultivo es giratorio alrededor de un eje.
12. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora está aislada.
13. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende un soporte de espiral que tiene una porción interior en donde el soporte de espiral es polietileno, en donde el soporte de espiral está localizado en la porción interior de la espiral eléctricamente conductora, y en donde la porción interior del soporte de espiral recibe de forma removible el recipiente de cultivo.
14. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo, caracterizado porgue comprende: un soporte de espiral que tiene una porción interior y una porción exterior en donde la porción interior define un espacio en el cual se recibe de forma removible un bio-reactor giratorio y en donde el soporte de espiral es polietileno; una espiral eléctricamente conductora enrollada alrededor de la porción exterior del soporte de espiral; y una fuente de fuerza electromagnética variable en tiempo conectada operativamente a la espiral eléctricamente conductora.
15. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo es giratorio alrededor de un eje.
16. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el eje es sustancialmente horizontal.
17. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el eje es sustancialmente vertical.
18. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora es un solenoide.
19. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora tiene una sección transversal sustancialmente circular.
20. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora tiene una sección transversal sustancialmente ovalada.
21. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora tiene una sección transversal elíptica.
22. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el recipiente de cultivo es giratorio alrededor de un eje.
23. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la espiral eléctricamente conductora está aislada.
24. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porgue el soporte de espiral es no conductor.
25. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el soporte de espiral comprende un material conductor.
26. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el material conductor es hierro.
27. Manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porgue además comprende un dispositivo de control de temperatura para controlar la temperatura en el recipiente de cultivo .
28. Método para la expansión celular, caracterizado porque comprende los pasos de: proporcionar un manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo que tiene una porción interior y una porción exterior; - preparar una mezcla de cultivo que comprende células de sangre periférica; - colocar la mezcla de cultivo en un recipiente de cultivo; - introducir el recipiente de cultivo que contiene células de sangre periférica a la porción interior del manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo; - suministrar una fuerza electromagnética variable en tiempo a las células en el recipiente de cultivo a través del manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo; y - expandir las células de sangre periférica a una concentración en el recipiente de cultivo dentro de una cantidad de tiempo .
29. Método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porgue la porción interior del manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo comprende además un soporte de espiral que tiene una porción interior y una porción exterior en donde la espiral eléctricamente conductora se enrolla alrededor de la porción exterior del soporte de espiral y en donde la porción interior del soporte de espiral define un espacio que lo recibe de forma removible el recipiente de cultivo.
30. Método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la porción interior del manguito de fuerza electromagnética variable en tiempo comprende además una espiral eléctricamente conductora que tiene una porción interior y una porción exterior en donde la porción interior define un espacio que recibe de forma removible el recipiente de cultivo.
31. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado. porque la fuerza electromagnética variable en tiempo es una onda cuadrada.
32. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque la fuerza electromagnética variable en tiempo es de aproximadamente 0.05 gausios a aproximadamente 6 gausios.
33. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque la fuerza electromagnética variable en tiempo es de aproximadamente 0.05 gausios a aproximadamente 0.5 gausíos .
34. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque la fuerza electromagnética variable en tiempo es aproximadamente 0.5 gausios .
35. Método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la onda cuadrada tiene una frecuencia de aproximadamente 2 ciclos/segundo a aproximadamente 25 ciclos/segundo.
36. Método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porgue la onda cuadrada tiene una frecuencia de aproximadamente 5 ciclos/segundo a aproximadamente 20 ciclos/segundo.
37. Método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la onda cuadrada tiene una frecuencia de aproximadamente 10 ciclos/segundo.
38. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque la fuerza electromagnética variable en tiempo es una onda cuadrada diferenciada.
39. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porgue la fuerza electromagnética variable en tiempo es una onda delta.
40. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porgue las células de sangre periférica que se expanden son células madre de adulto de sangre periférica.
41. Método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el paso de expansión es durante al menos siete días .
42. Método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque las células se expanden al menos dos veces el número que se colocaron en el recipiente de cultivo.
43. Método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque las células se expanden al menos cinco veces el número que se colocaron en el recipiente de cultivo.
44. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque la mezcla de cultivo comprende además un agente quelante de cobre.
45. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque el recipiente de cultivo es un bio-reactor giratorio.
46. Método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque además comprende el paso de hacer girar el bio-reactor giratorio después del paso de introducir el bio-reactor giratorio al manguito.
47. Método de conformidad con la reivindicación 28 ó 29, caracterizado porque las células de sangre periférica de la mezcla de cultivo son células madre de adulto de sangre periférica.