MX2007009222A - Moduladores de adam-9. - Google Patents

Abstract

La invencion proporciona la identificacion y caracterizacion de una enfermedad y antigeno asociado con el cancer, KID24. La invencion tambien proporciona moduladores de KID24, incluyendo una familia de anticuerpos monoclonales que se unan al antigeno KID24, y metodo para el diagnostico y tratamiento de varias canceres humanos y enfermedades asociadas con el KID24.

Description

MODULADORES DE ADAM-9 CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se encuentra en el campo de la biología e inmunoterapia. Más específicamente, se relaciona con descubrimientos acerc del ADAM-9, un antigeno conocido, y anticuerpos policlonales; y monoclonales y otros agentes que se unen a este antigeno La invención proporciona además métodos para el diagnóstico y/o tratamiento de una variedad de enfermedades humanas y cánceres asociados con un ADAM-9, usando moduladores del ADAM-9 incluyendo agonistas y antagonistas, y péptidos que se unen al ADAM-9, incluyendo anticuerpos anti-ADAM-9.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Además de esos usos conocidos en diagnóstico, los anticuerpos han mostrado ser útiles como agentes terapéuticos. Por ejemplo, la inmunoterapia, o el uso de anticuerpos para propósitos terapéuticos han sido usados en años recientes para tratar el cáncer. La inmunoterapia pasiva implica el uso de anticuerpos monoclonales en tratamientos del cáncer. Véase por ejemplo, Cáncer : Principies and Practice of Oncology, 6 th Edition (2001) Chapt . 20 pp. 495-508. Esos anticuerpos jbueden tener actividad biológica terapéutica inherente tanto por inhibición directa del Ref. 184199 crecimiento de células tuunr-orales o la sobrevivencia y por su capacidad para reclutar la actividad de células asesinas naturales del sistema inmune del cuerpo. Esos agentes pueden ser administrados solos o en conjunto con radiación o agentes quimioterapéuticos. El RLtuximab y Trastuzumab, aprobados para el tratamiento del 1 nfoma no-Hodgkin y cáncer de mama, respectivamente, son c os ejemplos de esos agentes terapéuticos. De manera alternativa, pueden ser usados anticuerpos para producir conjugados de anticuerpos donde el anticuerpo esté ligado a u n agente tóxico y dirija ese agente al tumor uniéndose especificamente al tumor. El Gemtuzumab-ozogamicina es un ejemp o de un conjugado de anticuerpo aprobado usado para el tratamiento de la leucemia. Los anticuerpos monoclonales <|}ue se unen a células cancerosas y tienen usos potenciales pfra diagnóstico y terapias han sido descritos en publicacianes. Véanse, por ejemplo, las siguientes solicitudes de patente que describen, in ter alia , algunos pesos moléculares de proteinas blanco: Patente Estadounidense No. 6,054, 561 (200kD c-erbB-2 (Her2) , y otros antigenos desconocidos de 40-200 KD de tamaño) y Patente Estadounidense No. 5,656,4 44 (proteina oncofetal de 50 kD y 55kD) . Los ejemplos de anticuerpos en ensayos clínicos y/o aprobados para el tratam ento de tumores sólidos incluyen: Trastuzumab (antigeno: 180 kD, HER2/neu) , Edrecolomab (antigeno 40-50 kD, Ep-CAM) , Antilóbulos de grasa de leche humana (HMFG1) (antigeno>200kD, HH Mucina), Cetuximab (antigeno: 150 kD y 170 kD, receptor de EGF , Alemtuzumab (antigeno: 21-28 kD, CD52), y Rituximab (antigeno: 35 kD, CD20) . Los blancos del antigeno trastuzumab (receptor de Her-2), que son usados para tratar el cáncer de mama y el cetuximab (receptor de EG , el cual está en ensayos clínicos para el tratamiento de va rios cánceres, están presentes a un nivel detectable sobre ur gran número de tejidos de adultos humanos normales incluyendo la piel, colon, pulmón, ovarios, higado y páncreas. El margen de seguridad en el uso de esos agentes terapéuticos es proporcionado posiblemente por la diferencia en el nivel de expresión o en acceso de o actividad del anticuerpo en esos sitios Además de los blancos del cáncer, los agentes terapéuticos de anticue rpos también han mostrado ser efectivos contra la infl mación crónica y otros trastornos inmunes. Un ejemplo de agente terapéutico de anticuerpo aprobado para el tratamiento de trastornos inmunes es el Infliximab (antigeno: TNFa). Otro tipo de rjLnmunoterapia es la inmunoterapia activa, o vacunación, cc n un antigeno presente sobre un cáncer especifico o un plásmido recombinante de ADN que dirige la expresión del antigeno, el cual evoque entonces la respuesta inmune del ind ividuo, es decir, que induzca al individuo a producir activ menté anticuerpos contra su propio cáncer. La inmunización activa no ha sido usada tan frecuentemente como la inminoterapia pasiva o inmunotoxinas. Han sido sugeri los varios modelos de progreso de enfermedad (incluyendo el cáncer) . Las teorías van desde la causa por un solo eventi infeccioso o/transformador a la evolución de un tipo de ejido que se incrementa "como una enfermedad" o "como un cáncer" conduciendo finalmente a uno con una capacidad complet amenté patógena o maligna. Algunos argumentan que con el cá icer, por ejemplo, un solo evento mutacional es suficient para producir una enfermedad maligna, mientras que otros argumentan que también son necesarias alteraciones subsecuentes. Algunos otros han sugerido que el incremente de la carga mutacional y el grado del tumor son necesarias tanto para inhibirse asi como para el progreso de neoplasias via una continuación de los eventos de selección de la muiación a nivel celular. Algunos objetivos del cáncer se encuentran únicamente en tejidos tumorales, mientras que otras están presentes en tejidos normales y son sobrerregulados y/o sobreexpresados en tejidos tumorales. En esas sit aciones, los investigadores han sugerido que la sobreexpresión está ligada a la adquisición de la enfermedad maligna , mientras otros sugieren que la sobreexpresión es merament s un marcador de una tendencia a lo largo de una trayectoria hacia un incremento del estado de la enfermedad.

Un diagnóstico y/o anticuerpo terapéutico ideal seria especifico para ur antigeno presente sobre un gran número de cánceres, perc ausente o presente únicamente a bajos niveles sobre cualquier tejido normal. El descubrimiento, caracterización y aislamiento de un antigeno novedoso que esté asociado específicamente con cánceres seria útil de muchas maneras. Primero, el antigeno podria ser usado para producir anticuerpos monoclonales contra el antigeno. Un anticuerpo idealmente tendría actividad biológica contra células cancerosas y podría reclutar la respuesta del sistema mmune a los antigenos extraños. Un anticuerpo podria ser administrado como agente terapéutico solo o en combinación con los tratamientos a|ctuales o usados para preparar inmunoconjugados ligados a agentes tóxicos. Un anticuerpo con la misma especificidad pero con baja o ninguna actividad biológica cuando sea administrado solo podria ser útil dado que podria ser usado un anticuerpo para preparar un inmunoconj ugado con un radioisótopo, una toxina o un agente quimioterapéutico o liposoma que contenga un agente quimioterapéutico, con la forma conjugada siendo biológicamente activa en virtud de que el anticuerpo dirige las toxinas a las células que contienen el antigeno. Un aspecto deseable para un diagnóstico y/o anticuerpo terapéutico ideal es el descubrimiento caracterización de un antigeno que esté asociado con una variedad de cánceres. Existen pocos antigenos que sean expresados sobre un númer?o de tipos de cáncer (por ejemplo, antigeno "pan-cáncer") que tengan expresión limitada sobre células no cancerosas. El] aislamiento y purificación de ese antigeno seria útil para producir anticuerpos (por ejemplo, de diagnóstico o terapéuticos) dirigidos al antigeno. Un anticuerpo que se une al antigeno "pan-cáncer" podria hacer blanco en una variedad de cánceres encontrados en diferentes tejidos en contraste con un anticuerpo contra un antigeno asociado con solo un tipc especifico de cáncer. El antigeno también seria útil para al descubrimiento de fármacos (por ejemplo, moléculas pequeñas) y para la caracterización adicional de la regulación, crecimiento y diferenciación celular . Los ADAM (U? Dominio de Desintegrina y Metaloproteasa, por sus sr.glas en inglés) son una familia de proteinas que se piensa sc :n importantes en una amplia gama de procesos biológicos como ..a adhesión celular, fusión celular y proteólisis. En general, son proteinas transmembranales que tienen homología con prot einas del veneno de serpiente que tiene la capacidad de degrradar los componentes de la membrana basal y unirse a integri.ras, perturbando de este modo las interacciones célula-matriz. Debido a la similitud en la función con las proteinas del veneno de serpiente, los ADAM también son conocidos como proteinas MDC (ricas en Desintegrina y Cisteina similares a la Metaloproteasa) . La MDC9 o ADAM-9 (Meltrina ?) es un miembro de la familia ADAM/Proteina MDC. La secuencia de la proteina ha sido descrita en las solicitudes de Patente Estadounidense Nos. 20040091473 y 20020042368. La expresión de ADAM-9 ha sido encontrada en riñon de rata y también ha mostrado ser sobrerregulada en carcinomas hepatocelulares usando microarreglos de proteina, sin embargo, el significado de este descubrimiento con el progreso del cáncer no está claro. El ADAM-9 también ha mostrado estar implicado en la dispersión del factor del crecimiento epidérmico debido a la heparina (HB-EGF) , en sl procesamiento de la proteina precursora amiloide, y como un ligando para varias integrinas. Aunque está ¿.ltamente conservado entre ratones, humanos y Xenopus es, ampliamente expresado en diferentes tejidos, un ratón agéni que contiene ADAM-9 no muestra evidencias de anormalidaaes patológicas. Han sido usados anticuerpos policlonales y monoclonales contra ADAM-9 en la identificación de proteinas novedosas asociadas con carcinoma hepatocelular en arreglos de proteinas (Tannapfel et al., J of Pa thology 2003; 201: 238-49) y también en modelos de aterosclerosis usando células de músculo liso vascular venoso (VSMC) para ensayar la exéresión de ADAM-9 (Al-Fakhri et al.

J. Cell ular Biochem (2 003)89:808-823), sin embargo el significado de ADAM-9 cqmo marcador no está claro. Esta técnica anterior no enseña o sugiere anticuerpos de ADAM-9 como agentes terapéutico:;, o que la expresión de ADAM-9 juegue un efecto causal en el cáncer. Lo que se necesitan son blancos novedosos sobre la superficie de células enfermas y/o cancerosas que puedan ser usados para el diagnóstico y tratamiento de esas enfermedades y/o cánceres con anticuerbos y otros agentes que reconozcan específicamente los blancos de la superficie celular. Existe además, una necesidad, soare la base de los descubrimientos descritos aqui, de anticuerpos novedosos y otros agentes que reconozcan específicamente blancos sobre la superficie de las células que puedan modulaibr, ya sea reduciendo o aumentando, las actividades que promuevan la enfermedad de ADAM-9. Un objetivo de esta invención es identificar antagonistas de ADAM-9 humano que sean capaces de inhibir sus actividades asociadas con una enfermedad. Otro objetivo es proporcionar compuestos novedosos para usarse en el ensayo de ADAM-9, y para usarse como inmunógejnos o para seleccionar anticuerpos anti-ADAM-9 humano. Como será descri to con mayor detalle más adelante, los inventores de la prresente han hecho descubrimientos relacionados con el polipéptido conocido, ADAM-9, al cual no referiremos aqui como KID24, identificado como el blanco del antigeno de los antagonlistas, moduladores y anticuerpos novedosos proporcionados a ¡.Iquí Todas las refer ncias, publicaciones y solicitudes de patente descritas aquí se incorporan por lo tanto como referencia en su totalidad SUMARIC DE LA INVENCIÓN La invención descrita aqui se relaciona con el descubrimiento de que el péptido conocido ADAM-9 (también referido aqui como KID24) como se muestra aqui está presente sobre una variedad de canceres humanos tanto primarios como metastásicos, y que los anticuerpos anti-KID24 pueden ser usados para tratar esos rránceres. La invención proporciona antagonistas, moduladores y anticuerpos monoclonales de KID24 que se unen al KID24, el cual se expresa sobre una variedad de cánceres humanos. En un aspecto, la invención es una familia de anticuerpos monoclonales que se unen al KID24. En otro aspecto, la invención es rm anticuerpo monoclonal anti-KID24 que es producido por la linea celular anfitriona KIDNEY.5.3F2.2G8 depositada en Mayo 2, 2003, en la American Type Culture Collection con la Designación de Depósito de Patente de PTA #5174. En otro aspecto más, la invención es un método para generar anticuerpo monoclonal anti-KID24 reactivo con células enfermas y/o cancerosas, que comprende los pasos de: (a) inmunizar un mamífero anfitrión con un inmunógeno; (b) obtener linfocitos del mamífero; (c) fusionar linfocitos (b) con una linea de célula de mieloma para producir un hibridoma; (d) cultivar el hibridoma de (c) para producir anticuerpos monoclonales; y (e) separar los anticuerpos para seleccionar solo aquellos anticuerpos que se unan a células o lineas celulares enfermas y/o cancerosas pero que no se unan a células o lineas célula res no cancerosas o normales, o se unan a células normales en un menor nivel o en una forma diferente . En otro aspectc , la invención es un método para generar un anticuerpo an?i-KID24 que comprende cultivar una célula anfitriona que cod {¡.fica para un anticuerpo o progenie del mismo bajo condiciones que permitan la producción del anticuerpo, y purificar el anticuerpo anti-KID24. En otro aspecto , la invención proporciona métodos para generar cualquiera de los anticuerpos (o polipéptidos) descritos aqui expresandb uno más polinucleótidos que codifiquen para el anticuerpo (el cual puede ser expresado por separado como una so ¡la cadena ligera o pesada, o sean expresadas a más de una cadena ligera y una cadena pesada de un vector) en una célula adecuada, generalmente seguido por la recuperación y/o aislartjiento del anticuerpo o polipéptidos de interés. En otro aspecto, la invención es un anticuerpo anti-KID24 o un polipéptido (el cual puede o no ser un anticuerpo) que inhibe competitivamente la unión preferente de un anticuerpo anti-KID24 a KID24. En algunas modalidades, la invención es un anticuerpo o un polipép?ido (el cual puede o no ser un anticuerpo) que se una preferiblemente al mismo o diferentes epitopes sobre el KID24 u ctros anticuerpos anti-KID24. En otro aspecto , la invención es un modulador de KID-24 (el cual puede o no ser un polipéptido) que inhiba competitivamente la unión preferente de un anticuerpo anti-KID24 al KID24. En algún?|as modalidades, la invención puede ser una molécula pequeña o compuesto químico que se una preferiblemente al mismo o diferente epitope sobre el KID24 como otros anticuerpos ant Í-KID24. En otro aspee to más, la invención es una composición que comprende la unión del KID24 por un anticuerpo especifico para una epitope del KID24. En una modalidad, el anticuerpo es un anti-KID24. En otra modalidad, son administrados dos o más anticuerpos anti-KID24, con esos anticuerpos trazando dos p más epitopes diferentes sobre el KID-24. En algunas modalidades, el anticuerpo anti-KID24 está ligado a un agente terapéutico o una marca detectable. En otro aspecto, la invención es un anticuerpo que comprende un fragmento o una región del anticuerpo anti-KID24. En una modalidad, el fragmento es una cadena ligera del anticuerpo. En otra modalidad, el fragmento es una cadena pesada del anticuerpo. En otra modalidad más, el fragmento contiene una o más regiones variables de una cadena ligera y/o una cadena pesada del anticuerpo. En otra modalidad más, el fragmento contiene una o más regiones de determinación de la complementariedad (CDk) de una cadena ligera y/o una cadena pesada del anticuerpo. En otro aspe cto, la invención proporciona polipéptidos, (los cuales pueden o no ser anticuerpos) que comprenden cualquiera de los siguientes: (a) una o más CDR (o fragmentos de las mismas) de la cadena ligera o pesada; (b) tres CDR de la cadena 1 .igera; (c) tres CDR de la cadena pesada; (d) tres CDR de la cadena ligera y tres CDR de la cadena pesada; (e) la región variable de la cadena ligera; f ) la región variable de la cadena pesada del anticuerpo anti-KID24 En otro aspect?, la invención es un anticuerpo humanizado. En algunas modalidades, el anticuerpo humanizado comprende una o más CDR ce anticuerpo anti-KID24 no humano.

En algunas modalidades, e 1 anticuerpo humanizado se une al mismo o diferente epitope como otros anticuerpos anti-KID24.

Generalmente, un anticuerpo humanizado de la invención comprende una o más (una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o fragmentos de las mismas) CDR que son las mismas y/o derivadas de CDR del anticuerpo anti-KID24 no humano original. En algunas modalidades, el anticuerpo humano se une al mismo o diferente epitope que otros anticuerpos anti- KID24 En otro aspecto, la invención es un anticuerpo quimérico que comprende regiones variables derivadas de las regiones variables de una cadena pesada y una cadena ligera de un anticuerpo anti-KID24 no humano y regiones constantes derivadas de regiones constantes de una cadena pesada y una cadena ligera de un anticu srpo humano. En otro aspecto, la invención es un polinucleótido aislado que codifica para un anticuerpo mu-anti-KID24 que es producido por una célula aihfitriona con un número de depósito de ATCCPTA#5174, o la progenia de la misma. Esta invención abarca polipéptidos de anticuerpo que tienen las actividades de unión o biológicas inherentes de cualquiera de los anticuerpos especificados anteriormente. En otro aspecto, la invención proporciona pojlinucleótidos que codifican para cualquiera de los anticrruerpos (incluyendo fragmentos de anticuerpos) asi como otros polipéptidos descritos aqui, En otro aspecto la invención es una composición farmacéutica que comprenqle cualquiera de los polipéptidos (incluyendo cualquiera de los anticuerpos descritos aqui) o polinucleótidos descritps aquí, como composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-KID24 ligado a un agente quimioterapéutico, de un anticuerpo que comprende un fragmento del anticuerpo anti-KID24, una anticuerpo humanizado de un anticuerpo de KID24 no humano, un anticuerpo quimérico que comprende regiones variables derivadas de regiones variables de ar.ticuerpo anti-KID24 no humano, y regiones constantes derivadas de un anticuerpo humano, o un anticuerpo humano con una o más propiedades de un anticuerpo anti-KID24 no humano, o del anticuerpo anti-KID24 descrito aqui ligado a un agente quimioterapéutico (como una porción radioactiva) , y un excipiente farmacéuticamente aceptable. En un aspecto, a invención es una composición que comprende un anticuerpo nti-KID24 unido al KID24 presente sobre una célula enferma o cancerosa. En modalidades preferidas, la célula cancerosa es seleccionada del grupo que consiste de células de cáncer de riñon, ovario, pulmón, próstata, pancreático, co. on y mama. En algunas modalidades, la célula cancerosa es a Lslada. En algunas modalidades, la célula cancerosa en una muestra biológica. Generalmente, la muestra biológica es de un individuo, como de un humano. En otro aspecto , la invención es un método para diagnosticar una enfermedad en un individuo detectando el KID24 en células del indi IViduo, particularmente enfermedades o trastornos asociados con respuestas inflamatorias o autoinmunes en los individuos. En otros aspectos de la invención, se proporciona]n métodos para modular respuestas inflamatorias o autoinmunes en individuos. Las enfermedades y condiciones resultantes de trastornos inflamatorios y autoinmunes que puedan se r objeto de tratamiento usando las composiciones y métodos de la invención incluyen, a manera de ilustración y no de limitación, esclerosis múltiple, meningitis, encefalitis, apoplíejia, otros traumas cerebrales, enfermedad del intestino inflamatorio incluyendo la colitis ulcerativa y enfermedad e Crohn, miastenia gravis, lupus, artritis reumatoide, asnr?, diabetes de aparición juvenil aguada, demencia relacior?ada con el SIDA, aterosclerosis, nefritis, retinitis, dermftitis atópica, psoriasis, isquemia miocárdica y lesión pulmónar aguda mediada por leucocitos, Otras indicador es más para el uso terapéutico de los anticuerpos y otros a (entes terapéuticos de la invención incluyen la administraciór a individuos en riesgo de rechazo de un órgano o injerto, Dürante años recientes ha habido una mejora considerable en la eficiencia de las técnicas quirúrgicas para trasplantar tejidos y órganos como piel, riñon, higado, corazón, pulmón, páncreas y médula ósea. Quizá el problema relevante pr -ncipal es la ausencia de agentes satisfactorios para induc Lr inmunotolerancia en el receptor al injerto u órgano tras plantado. Cuando son trasplantados células u órganos alogéni ros en un anfitrión (es decir, que el donador y el recepto] son individuos diferentes de la misma especie) , es profcable que el sistema inmune del anfitrión monte una respuesta inmune a los antigenos externos en el trasplante (enfermedad anfitrión contra injertos) que conduzca a la destrucción del tejido trasplantado. En otro aspecto la invención es un método para diagnosticar si un individuo tiene cáncer, que comprende determinar si existe expresión del KID24 sobre células seleccionadas del individuo, donde la expresión del KID24 sobre las células es i .ndicativa del cáncer. En algunas modalidades, la expresión del KID24 es determinada usando un anticuerpo anti-KID24. E.n algunas modalidades, el método implica detectar el nivel de expresión de KID24 de las células. El término "detección" como se usa aqui incluye detección cualitativa y/o cuantitativa (niveles de medición) con o sin referencia a un control . En otro aspecto más, la invención es un método de diagnóstico del cáncer eh un individuo detectado de KID24 sobre o liberado de las células del individuo, donde el cáncer es seleccionado del grupo que incluye, pero sin limitarse a tumores de la glándula adrenal, cánceres asociados con el SIDA, sa ccoma de partes blandas alveolares, tumores astrociticos, cáncer de vejiga (carcinoma de células escamosas y carcinoma de células transitorias), cáncer óseo (adamantinoma, quistes c seos aneurismales, osteocondroma, osteosarcoma) , cánceres ie cerebro y la médula espinal, tumores cerebrales metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo carótido, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromofóbicas, carcinoma de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, histiocitomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmoplásicas, ependimomas, tumores de Ewing, condrosarcoma mixoide extraesquelético, fibrogénesis imperfecta ósea, displas ¡ia fibrosa de huesos, cáncer de vejiga y conductos bri liares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de cabeza y cuello, tumores de células de los islotes, Sarcoma de Kaposi, cáncer de rriñon (nefroblastoma, carcinoma de células renales papilares) , leucemias, lipoma/tumores lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de h igado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular) , linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adenojcarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, neuroblastoma, tumores n uroendocrinos, cáncer de ovario, cánceres pancreáticos, carcinomas tiroides papilares, tumores paratiroideos, cánceres pediátricos, tumores del revestimiento nervioso periférico, faeocromocitoma, tumores pituitarios, cáncer de próstata, melanoma unveal posterior, trastornos hematológicos raros, cáncer metastásico renal, tumor rabdoide, rabdomisárcoma, sarcomas, cáncer de piel, sarcomas de tejidos blandos, cáncer de células escamosas, cáncer de estómago, sarcoma sinovial, cáncer testicular, carcinoma timico, timoma, cáncer metastásico tiroide y cánceres uterinos (ca rcinoma del cervix, carcinoma endometrial y leiomioma) . En otro aspecto , la invención es un método para ayudar al diagnóstico del cáncer (como, pero sin limitarse a cáncer de riñon, ovario, pulmón, próstata, pancreático, de colon o mama) en un indiyiduo, que comprende, determinar la expresión de KID24 en una muestra biológica del individuo. En algunas modalidades, la :xpresión del KID24 es determinado usando anticuerpos anti¬]¡(ID24. En algunas modalidades, el método es detectar el n: vel de expresión de KID24 de las células. El KID24 liberad ) del cáncer puede contribuir a los niveles elevados de KID2 4 o una porción del mismo, siendo detectable en fluidos corporales (por ejemplo, sangre, secreciones salivales o secreciones mucinosas de intestino) . En otro aspecto más, la invención es un método para tratar el cáncer administ rando una cantidad efectiva de un anticuerpo que se une a suficiente KID24 para reducir el crecimiento de células cancerosas. En algunas modalidades, el anticuerpo es un anticuerpo anti-KID24 En ciertas modalidades, las células cancerosas son seleccionadas del grupo que incluye pero no se limita a tumores de la glándula adrenal, cánceres asociados con el SIDA, sarcoma de partes blandas alveolares, tumores astrociticos, cáncer de vejiga (carcinoma de células escamosas y carcinoma de células transitorias), cáncer óseo (adamantinoma, quistes óseos aneurismales, osteocondroma, osteosarcoma) , cánceres cerebrales y de la médula espinal, tumores cerebrales metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo carótido, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromófogas, carci .noma de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrecta.., histiocitomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmoplásicos, ependimomas, tumores de Ewing, condrosarcoma mixoide extraesquelético, fibrinogénesis imperfecta ósea, displasia fibrosa del hueso, cáncer de vesícula y conductos biliares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de cabeza y cuello, tumores de células del islote, Sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon (nefroblastoma, carcinoma de células renales papilares), leucemias, lipoma/tum Dres lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de higado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular) , linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adenocarcinoma, carcinoma de células escaír osas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, neuroblástoma, tumores neuroendocrinos, cáncer de ovario, cánceres pancreáticos, carcinomas tiroides papilares, tumores paratiroides, cánceres pediátricos, tumores del revestimiento nervioso periférico, faecromocitoma, tumores pituitarios, cáncer de próstata, melanoma unveal posterior, trastornos hematológicos raros, cáncer metastásico renal ., tumor rabdoide, rabdomisarcoma, sarcomas, cáncer de piel, sarcomas de tejidos blancos, cáncer de células escamosas, cáncer de estómago, cáncer sinovial, cáncer testicular, carcinoma timico, timoma, cáncer metastásico de la tiroides y cánceres uterinos (carcinoma del cervix, carcinoma endometrial y leiomioma) . En ciertas modalidades preferidas, las células cancerosas son seleccionadas del grupo dje tumores sólidos, incluyendo pero sin limitarse a cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, sarcoma, cáncer metastásico renal, cáncer metastático de la tiroides y carcinoma de células claras. En otro aspecto más, la invención es un método para prevenir o retrasar el desarrollo de metástasis en un individuo que tenga o haya tenido un tumor primario, que comprende administrar una cantidad efectiva de un modulador de KID24. Este modulador puede ser dado solo o en conjunto con otras terapias, como radiación, quimioterapia o cirugía.

En ciertas modalidades preferidas, el tumor primario ha sido sometido a al menos una ronda de cirugía, radiación y/o quimioterapia antes de 1 a administración del modulador de KID24. En otras modalidades, el modulador de KID24 es administrado antes de o concurrentemente con el tratamiento del individuo con cirugía, radiación y/o quimioterapia. En ciertas modalidades particularmente preferidas, ese modulador de KID24 es al menos un anticuerpo anti-KID24 En otro aspecto , la invención es un método para inhibir el crecimiento y/o proliferación de células cancerosas in vi tro o en un individuo que comprende administrar una cantidad efectiva de una composición que comprende un anticuerpo anti-KID24 asociado con (incluido o ligado a) un agente quimioterapéutico al cultivo celular o muestra, o al individuo. En otro aspecto más, la invención es un método para liberar un agente terapéutico a una célula cancerosa a un individuo administrando al] individuo una cantidad efectiva de al menos un miembro de una familia de anticuerpos, la cual se une específicamente al KID24. En otras modalidades, es proporcionado un anticuerpo anti-KID24 a un individuo en combinación con (incluido ligado a) otro agente terapéutico, En algunas modalidades, el anticuerpo anti-KID24 es un anticuerpo humanizado derivado de un anticuerpo nombrado aqui (generalmente, pero que no necesariamente comprende una o más CDR parciales o intactas del anticuerpo) . En algunas modalidades, el anticuerpo anti-KID24 es un anticuerpo humano con una o más propiedades del anticuerpo nombrado. En algunas modalidades, el agente quimioterapéutico (como una toxina o una molécula radioactiva) es liberado en las células cancerosas (se internaliza) . En algunas modalidades, el agente es saporina. En otro aspecto , la invención es un método para tratar el cáncer en un individuo que comprende administrar una cantidad efectiva de una composición que comprende un anticuerpo anti-KID24 asociado con (ligado a) un agente quimioterapéutico al indiviiduo. La presente intención proporciona además métodos para modular, ya sea mejorando o reduciendo, la asociación del KID24 con un patrón de señalización citoplásmica. La asociación del KID24 on un patrón de señalización citoplásmica puede ser rijmpactada por el contacto de una molécula de KID24 que se presente sobre la superficie celular, con un agente que module la unión del patrón de señalización de KID24. Los agentes que bloquean o reducen la asociación del KID24 con sus patrones de unión y/o señalización pueden ser usados para modular procesos biológicos y patológico que estén implicados en la inflamación o respuestas inmunes mediadas por el KID24. Los pprroocceessooss ppaattoollóóggiiccooss qquuee implican esta acción incluyen el crecimiento celular asocia o con tumores, Los agentes pueden ser probados por su capacidad para bloquear, reducir, itjejorar o modular de otro modo la asociación del KID24 coh un patrón de unión, como un anticuerpo anti-KID24. Específicamente, un agente puede ser probado por la capacidad para modular una interacción incubando un péptido que c omprenda el sitio de interacción de KID24 (típicamente en su conformación nativa o que exista sobre células vivas intadtas) con un patrón de unión y un agente de prueba, y determinar si el agente de prueba reduce o mejora la unión del patrón de unión al péptido KID24. Los agonistas, antagonistas y otros moduladores de la función del KID24 se incluyen expresamente dentro del alcance de esta invención. Esos agonistas, antagonistas y moduladores son polipéptiaos que comprenden uno o más sitios determinantes antigénicos en el KID24, o comprenden uno o más fragmentos de esos siti DS, variantes de esos sitios, o peptidomiméticos de esos sitios. Esos compuestos agonistas, antagonistas y moduladores del KID24 son proporcionados en forma lineal o cíclica, opcionalmente comprenden al menos un aminoácido residual qu 2 no se encuentra comúnmente en la naturaleza o es al memos un isóstero de amida. Esos compuestos pueden estair glicosilados. Los agonistas, antagonistas y otros moduiLadores de la función del KID24 de esta invención son usados; de manera deseable en todas las modalidades y métodos descritos anteriormente con referencia a los anticuerpos Otros aspectos eje esta invención se relacionan con el antigeno identificado, ADAM-9, referido aqui como KID24. Este antigeno es adecuado para usarse como un inmunógeno y para una variedad de propósitos de investigación, diagnóstico y terapéutico. En ciertos aspeerjtos, la invención es un método para llegar al diagnóstico de enfermedades en un individuo que comprende los pasos de: (i) ensayar por la presencia del KID24 en una muestra de sangre o tejido obtenida de un individuo; (ii) detectar si la muestra tiene un incremento en la cantidad de marcador de KID24 con relación a una muestra de sangre o tejido normal no enfermo) ; y (iii) correlacionar un incremento de la cantidad del marcador con un diagnóstico positivo o correlacionar la ausencia de un incremento de la cantidad del marcador c?n un diagnóstico negativo de la enfermedad. En ciertas modalidades, el marcador es detectado usando de un anticuerpo anti-KID24. En ciertas modalidades, el método es efectuado por una técnica seleccionada del grupo que consiste de formaci?n de imágenes con radionúclidos, citometria de flujo e inmiJnohistoquimica .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra los resultados de una inmunoprecipitación (ippt) usando mu-anti-KID24 sobre lisados celulares de linea de cé ulas de carcinoma de riñon, A498, seguidos por análisis western blotting con anticuerpos mu-anti-KID24. La flecha apu?ta hacia la banda especifica de ~75 kDa en la muestra de ippt con mu-anti-KID24. La Figura 1 también muestra los resultados de una inmunoprecipitación (ippt) usando un anticuerpo ADAM-9 comercial sobre lisados de células A498 seguida por análisis western blotting con anticuerpos mu-anti-KID24 Los carriles marcados con "PG" representan muestras de condiciones control preclaras con proteina G. Los carrile marcados con "IgG" representan muestras inmunoprecipitadas con anticuerpos IgG control. Los carriles marcados con ?KID24" representan muestras inmunoprecipitadas con ant icuerpos mu-anti-KID24. Las Figuras 2?. y 2B muestran los resultados graficados del efecto el mu-anti-KID24 y Mab-ZAP (un anticuerpo anti-IgG conjugado con saporina) sobre el crecimiento de la linea celular de carcinoma de ovario humano, ES-2, y linea celular de ca rcinoma pancreático humano, HPAF-II. La Figura 2A muestra los nfesultados graficados del efecto del mu-anti-KID24 y Mab-ZAP s ibre el crecimiento de células ES-2 y la Figura 2B muestra los esultados graficados del efecto del mu-anti-KID24 y Mab-ZAP sobre el crecimiento de células HPAF-II. La Figura 3 muestra tumores representativos de células de Merkel impiar tadas en la cápsula subrenal de ratones desnudos. Los ratones fueron tratados con control con PBS o 50 mg/kg de anticuerpos mu-anti-KID24 2 veces a la semana durante 3 semanas comenzando el dia 21 después del implante del tumor.

Las Figuras 4A y 4B muestran la disección del omentum representativa de ratones desnudos implantados con tumores de células de Merkel en la cápsula subrenal. Los ratones fueron tratados c on control con PBS o 50 mg/kg de anticuerpos mu-anti-KID24 2 veces a la semana durante 3 semanas partiendo el dia 21 después del implante del tumor, La Figura 4A muestra el oír entum disectado de un ratón tratado con control con PBS. La 3 flechas/cabezas de flecha están dirigidas a metástasis pr' isentes en el omentum. La Figura 4B muestra el omentum disectado de un ratón tratado con mu-anti-KID24. No se observaron metástasis visibles.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención proporciona un antigeno ADAM-9 (KID24), el cual se expresa en cél ulas cancerosas de varios tipos de tejidos, incluyendo pero s .n limitarse a cánceres de páncreas, colon, pulmón y próstata, Además, la invención proporciona anticuerpos monoclonales y polipéptidos que se unen al KID24 y métodos para producir o u sar esos anticuerpos y polipéptidos para diagnosticar y tratar varias enfermedades, incluyendo pero sin limitarse a cánceres húmanos asociados con la expresión y/o sobreexpresión de KID24.

I. Técnicas Generales La práctica de la presente invención empleará a menos que se indique otra cosa, técnicas convencionales de biología molecular .ndluyendo técnicas recombinantes) microbiología, biología celular, bioquímica e inmunología, las cuales están dentro de¡ la experiencia de la técnica. Esas técnicas son explicadas ccjmpletamente en la literatura, como, Molecular Cloning: A Labora tory Manual , segunda edición (Sambrook et al., 19E 9) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Syn thesís (MJ. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Labora tory Notebook (J.E. Cellis, ed. , 1998) Academic Press; Animal Cell Cul ture (R.I. Freshney, ed., 1987); In troduction to Cell and Tissue Cul ture (J.P. MatHer and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Cul ture : Labora tory Procedures (A.

Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Methods ir. Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimen tal Immunology (D.M. Weir and CC.

Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J-M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Curren t Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reactíon , (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immu iology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999) ; Immunobiology (CA. Janeway and P. Travers, 1997); An tibodies (P. Finch, 1997 ); An tibodies : a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press , 1988-1989); Monoclonal an tibodies practical approach (PJ Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000) ; Using antibodies : a labora tory manual (E. Harlow and D Lañe (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The An tib?dies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995) ; and Cáncer: Principies and Practice o? Oncology (V.T. DeVita et al, eds., J.B. Lippincott Company, 1993) II. Definiciones "KID24" se refiere a un antigeno polipeptidico novedoso con un peso molec ular de aproximadamente 75kDa (bajo condiciones reductoras) contra el cual son dirigidos los anticuerpos de la present e invención. El antigeno KID24 es una proteina de la superf icie celular unida por anticuerpos anti-KID24 y presente solire el páncreas y varios tipos de carcinomas. Este antigeno puede tener más de un epitope diferente, y algunas modalidades de esta invención comprenden moduladores del KID24 que están dirigidos contra uno o dos o más epitopes específicos del antigeno KID24. Actualmente se cree que el KID24 puede estar sobreexpresado en ciertas células cancerosas en fomparación con sus contrapartes titulares normales Los agonistas, a ntagonistas y otros moduladores de la función de KID24 se incluyen expresamente dentro del alcance de esta invención. Esos agonistas, antagonistas y moduladores son polipéptipos que comprenden uno o más de los sitios determinantes antigénicos en el KID24 o comprenden uno o más fragmentos de esos sitios, variantes de esos sitios o péptidomiméticos de esos sitios. Esos agonistas, antagonistas y compuestos moduladores del KID24 son proporcionados en forma lineal o cíclica, y opcionalmente comprende al menos un aminoácido residual que comúnmente no se encuentra en la naturaleza o al menos una isoster amida. Esos compuestos pueden estar glicosilados De manera más especifica, el término "modulador de KID24" como se usa aqui, se define como cualquier compuesto que (1) es capaz de perturbar o bloquear la interacción entre el KID24 humano y sus lig ¡andos nativos a un anticuerpo anti-KID24; (2) es capaz de unlirse al KID24 humano y sus ligandos nativos o un anticuerpo anti-KID24; (3) contiene un sitio antigénico que puede sen: usado para producir anticuerpos capaces de unirse al KID24 humano y sus ligando nativos o un anticuerpo anti-KID24; (4 contiene un sitio antigénico que puede ser usado para la sseparación de anticuerpos capaces de unirse al KID24 humano y s us ligandos nativos o un anticuerpo anti-KID24; (5) contiene un sitio antigénico que puede ser usado en la producción de anticuerpos capaces de perturbar o bloquear la interacción emtre el KID24 humano y sus ligandos nativos o un anticuerpo anti-KID24; (6) contiene un sitio antigénico que puede ser usado para la separación de anticuerpos capaces de perturbar o bloquear la interaccicon entre el KID24 humano y s s ligandos nativos o un anticuerpo anti-KID24. Los moduladores de KID24 pueden ser "agonistas de KID24" o "antagonistas de KID24" dependiendo de su actividad mejora o inhibe la acti vidad biológica normal del KID24, respectivamente . Los agonistas, antagonistas y moduladores de KID24 incluyen variantes del KID24, antagonistas peptidicos de KID24, peptidomiméticos y moléculas pequeñas, anticuerpos anti-KID24 y variantes de inmunoglobulina, variantes de aminoácido de KID24 inc Luyendo variantes de sustitución, supresión y adición de aminoácidos, o cualquier combinación de las mismas, e inmunoglobulinas quiméricas. Los agonistas de KID24, antagonistas y rr oduladores de KID24 de la invención se basan en la identificac ion del inventor de los dominios de KID24 implicados en la unión del KID24 humano a sus ligandos nativos o anticuepos anti -KID24. De este modo, la invención proporciona agonistas, antagonistas y moduladores de KID24 con estructuras moleculares que duplican o imitan uno o más de los dominios de unión de anti-KID24 del KID24 humano. Como se usa aquji, el término "variante del KID24" denota cualquier variante de aminoácido del KID24 humano, incluyendo variantes de s istitución, supresión y adición de aminoácidos o cualesquier combinaciones de las mismas. La definición abarca moléculas quiméricas como quimeras de KID24 humanas/no humanas y otras moléculas híbridas. También se incluye en la definición cualquier fragmento de una molécula variante del KID24 que comprenda la variación de regiones híbridas de la molécula. Un "anticuerpo" es una molécula de inmunoglobulina capaz de unirse específicamente a un blanco, como un carbohidrato, polinucleótr.do, lipido, polipéptido, etc., a través de al menos un sitio de reconocimiento de antigeno, localizado en la regic n variable de la molécula de inmunoglobulina. Como se usa aqui, el término abarca no únicamente anticuerpos po .iclonales o monoclonales intactos, sino también fragmentos de los mismos (como Fab, Fab' , F(ab')2, Fv) , una sola cadlena (ScFv), mutantes de los mismos, variantes naturales, proteinas de fusión que comprendan una porción de anticuerpo con un sitio de reconocimiento de antigeno de la espec ificidad requerida, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprenda un sitio de reconocimiento de antigeno de la especificidad requerida Un "anticuerpo monoclonal" se refiere a una población de anticuerpo homogénea donde el anticuerpo monoclonal está comprendido de aminoácidos (naturales y no naturales) que están impl Lcados en la unión selectiva de un antigeno. Los anticuer os monoclonales son altamente específicos, estando dl,irigidos contra un solo sitio antigénico. El término "anticuerpo monoclonal" abarca únicamente anticuerpos mbnoclonales intactos y anticuerpos monoclonales de longitud completa, sino también fragmentos de los mismos (como Fab, Fabi' , F(ab')2, Fv) , de una sola cadena (ScFv) , mutantes de los mismos, proteinas de fusión que comprendan una porción de anticuerpo, anticuerpos monoclonales humanizados, anticuerpos monoclonales quiméricos, y cualquier otra configuración modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprenda un sitio de reconocimiento de antigeno de la especificidad requerida y la capacidad para unirse a ur. antigeno. No se pretende limitarse con respecto a la fuente clleí anticuerpo o la forma en la cual sea producido éste (por e emplo, por hibridoma, selección con fago, expresión recombinainte, animales transgénicos, etc.).

El término incluye inmunoglobulina completa asi como los fragmentos, etc, descrito B anteriormente bajo la definición de "anticuerpo". Los anticuerpos "humanizados" se refieren a una molécula quimérica, prep rada generalmente usando técnicas recombinantes, que tienen un sitio de unión de antigeno derivado de una inmunoglobulina de una especie no humana y la estructura de inmunoglobu ina restante de la molécula basada en la estructura y/o secuencia de una inmunoglobulina humana. El sitio de unión de antigeno puede comprender dominios ha sido reportada por Sato, K. et al . (1993) Cáncer Res 53:851-856. Riechmann, L. . et al . , (1988) Nature 332:323-327; Verhoeyen, M., et al (1988) Science 239; 1534-1536; Kettleborough, C.A., et al . (1991) Protein Engineering 4 :773-3783 ; Maeda, H., et al . , (1991) Human Antibodies Hybridoma 2 : 124-134 ; Go raían, S.D. et al . , (1991) Proc Nati Acad Sci USA 88:4181-4185; Tempest, P.R., et al . , (1991) Bio/Technology 9 :266-271 ; Co, M.S., et al . , (1991) Proc Nati Acad Sci USA 88 :286 9-2873 ; Cárter, P., et al . , (1992) Proc Nati Acad Sci USA 8 9 :4285-4289 ; y Co, M. S. et al . , (1992) J Immunol 148 :114 9-1154. En algunas modalidades, los anticuerpos humanizados preservan todas las secuencias de CDR (por ejemplo, un anticuerpo de ratón humanizado el cual contiene seis CDR de lo;5 anticuerpos de ratón) . En otras modalidades, los anticuerpos humanizados tienen uno o más CDR (una, dos, tres, cuatro, cinco, seis) las cuales pueden estar alteradas con respecto al anticuerpo original, las cuales son también llamadas una o más CDR "derivadas" de una o más CDR del anticuerpo original. Un epitope que se "une específicamente" o se "une preferentemente" (usado de manera intercambiable aqui) a un anticuerpo o un polipéptico es un término bien comprendido en la técnica, y los mét odos para determinar esa unión especifica o preferente son también bien conocidos en la técnica. Se dice que una molécula que exhibe "unión especifica" o "unión preferente" si reacciona o se asocia de manera más frecuente, ce manera más rápida, con mayor duración y/o con mayor a finidad con una célula o sustancia particular que lo hace cor células o sustancias alternativas. Un anticuerpo se une específicamente" o une preferentemente" a un blanco si se une con mayor afinidad, avidez, más facilidad, y/o con mayor duración que se une a otras sustancias. Por e; emplo, un anticuerpo que se une especifica o preferenteme nte a un epitope de KID24 es un epitope que se une a este epitope de KID24 con mayor afinidad, avidez, o más fájcilmente y/o con mayor duración que la que se une a otros epitopes de KID24 o epitopes no de KID24. También debe comprenderse leyendo esta definición que, por ejemplo, un anticuerpo (o porción o epitope) que se une especifica o preferentemerite a un primer blanco puede o no unirse especifica o preferentemente a un segundo blanco. Por lo tanto, la "unión especifica o "unión preferente" no necesariamente requiere (aunque puede incluir) la unión exclusiva. De manera general, pero no necesaria, la referencia a la unión significa unión preferente. El término inmunológicamente activo" con referencia a un epitope qu e es o "permanece inmunológicamente activo" se refiere a la capacidad de un anticuerpo (por ejemplo, el anticuerpo KID24) para unirse al epitope bajo diferentes condiciones, por ejemplo, después de que el epitope haya sido somepido a condiciones reductoras y desnaturalizantes. Diferentes funci .ones biológicas están asociadas con anticuerpos anti KID24 inícluyendo, pero sin limitarse a, la capacidad para unirse al Y. ID24 (incluyendo el KID24 o células cancerosas, incluyendo perjo sin limitarse a células de cáncer de páncreas, colon, pulmór o próstata) ; capacidad para unirse a una porción de KID24 qué se exponga sobre la superficie de una célula viviente (espejcialmente una célula cancerosa) in vviittrroo oo iinn vviivvoo;; ccaappacidad para liberar un agente quimioterapéutico a célu las cancerosas (como células de cáncer de páncreas, colon, pulmón o próstata) expresar KID24; capacidad para liberar un agente terapéutico o marcador detectable en células de cáncer que expresan KID24. Como se ddiissccuuttee aaqquuii,, llooss ppoolliippéérpjtidos (incluyendo los anticuerpos) de la invención pueden tener cualquiera de una o más de esas características Un "anticuerpo equivalente de anti-KID24" o "polipéptido equivalente de anti-KID24" se refiere a un aannttiiccuueerrppoo oo ppoolliippééppttiiddo que tiene una o más funciones biológicas asociadas con un anticuerpo anti-KID24, como, por ejemplo, especificidad de [unión. Como se usa éfii'. , "agente" se refiere a un compuesto biológico, farmacéutico o químico. Los ejemplos no limitantes incluyen moléculas orgánicas o inorgánicas complejas, un péptido, ur a proteina, un oligonucleótido, un anticuerpo, un derivado de anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, un derivado de vitamina, un carbohidrato, una toxina, o un compuest o quimioterapéutico. Pueden ser sintetizados varios compuestos, por ejemplo, moléculas pequeñas y oligómeros (por ejemplo, oligopéptidos y oligonucleótidos) y compuestos orgánicos sintéticos sobre la base de varias estruc rrruras centrales. Además, pueden proporcionarse varias fue ntes naturales para la separación, ccoommoo eexxttrraaccttooss ddee ppllaannttaass o animales, y similares. Un experto en la técnica puede reconocer fácilmente que no existe limite sobre la naturaleza estructural de los agentes de la presente invención. Los agentes que pueden ser empleados en los métodos de esta invención pueden ser seleccionados de manera aleatoria o seleccionados de manera racional. Como se usa aqui, se dice que un agente es seleccionado aleatoriamente cuando el agente es elegico aleatoriamente sin considerar las secuencias especificas implicadas en la asociación del KID24 ccoonn ssuuss ppaattrroonneess ddee uunniióónn nativos o anticuerpos conocidos. Un ejemplo de agentes selecc: onados aleatoriamente es el uso de una biblioteca química o una biblioteca peptidica combinada, Como se usa aqui, se dice que un agente es seleccionado o diseñado d s manera racional cuando el agente eess eelleeggiiddoo ssoobbrree uunnaa bbaassee no aleatoria que toma en cuenta la secuencia del sitio blanco/o su conformación en relación con la acción del agente. Con respecto a los agentes anti-KID24, actualmente se cree que existen al menos tres epitopes sobre el KID24 contra los cuales los anticuerpos pueden ser dirigidos y por lo tanto al menos tres sitios de acción para los agentes que bloquean la interacción KID24/interacción anti-KID24. Esta invenció también abarca agentes que actuar en los sitios de interacc ion entre el KID24 y su patrón de unión nativo, aunque otros ligandos y sus sitios interactivos con KID24 activos también son abarcados dentro del alcance de esta invención, ya sea actualmente conocidos o identificados posteriormente. Los agenjtes pueden ser seleccionados de manera racional o diseñados de manera racional utilizando las secuencias peptidicas que constituyen sitios de contacto del complejo receptor/ligando y/o KID24/anticuerpo anti-KID24. Por ejemplo, un agente peptidico de manera racional puede ser un péptido cuya secuencia de aminoácido sea idéntica a un epitope que aparezca sobre: el KID24 como se exponga sobre la superficie de una célula viva en su ambiente nativo. Ese agente reducirá o bloque ara la asociación del anticuerpo anti-KID24 con el KID24, o la asociación del KID24 con su ligando nativo, según se djesee, por unión al anticuerpo anti- KID24 o al ligando nativo. Como se usa áqui, el término "marcado", con respecto al anticuerpo, pretende abarcar la marcación directo del anticuerpo por acoplamiento (es decir, enlace fisico) de una sustancia detectablel como un agente radioactivo o un fluoróforo (por ejemplo isotiocianato de fluoresceina (FITC) o ficoeritrina (PE)) al anticuerpo, asi como la marcación indirecta de la sonda o anticuerpo por reactividad con una sustancia detectable. Como se usa aqui, el término "asociación", con respecto al anticuerpo incluye la unión covalente y no covalente o unión a un agente (por ejemplo, agente quimioterapéutico). El an:icuerpo puede ser asociado con un agente (por ejemplo, agente quimioterapéutico) , por unión directa o unión indirecta via la unión a una plataforma común, de modo que el anticuerpo dirija la localización del agente a la célula cancerosa a la cual se une el anticuerpo donde el anticuerpo y el agente no se disocian sustancialmente bajo condiciones fisiológicas, de modo que el agente no sea dirigida a la misma célula cancerosa a la cual el cuerpo se una o de modo que la potencia del ac[ente no disminuye. Una "muestra biológica" abarca una variedad de tipos de muestras obteni das de un individuo y pueden ser usadas en un ensayo de diagnóstico o verificación. La definición abarca muestra? de saliva, sangre y otro liquido de origen biológico, muestras de tejido sólido como un espécimen de biopsia o cultivos de tejido o células derivadas de los mismos, y la progenie de los mismos, por ejemplo, células obtenidas de una muestra de tejido recolectadas del individuo que se sospeche tenga cáncer, o modalidades preferidas de tejido de ovario, pulmón, próstata, páncreas, colon y mama. La defini .-ion también incluye muestras que hayan sido manipuladas en cualquier forma después de su procuración, como por: tratamiento con reactivos, solubilización, o enriqu :cimiento de ciertos componentes, como proteinas o polinucl .eótidos, o inclusión en una matriz semisólida o sólida para propósitos de corte. El término "muestra biológica" abare ::a una muestra clínica, y también incluye células en cultive , sobrenadantes, lisados celulares, suero, plasma, fluido biol .ógico y muestras de tejido. El término "célula anfitriona" incluye una célula individual o un cultivo celular que pueda ser o haya sido receptor de un vector para la incorporación de insertos polinucleotidicos . Las c slulas anfitrionas incluyen a la progenie de una célula anf itriona, y la progenie puede no ser necesariamente idéntica ( en morfología o en el complemento del ADN genómico) a la célula madre original debido a mutación natural, accid sntal o deliberada. Una célula anfitriona incluye célul as transfectadas in vivo con un polinucleótido de esta invención. Como se usa aqui prevenir o retrasar el desarrollo de metástasis" (o metástalsis) significa suspender, detener, impedir, aletargar, retardar, estabilizar y/o posponer el desarrollo de la metástasis. Este retraso puede ser de longitudes de tiempo variable, dependiendo de la historia del cáncer y/o el ser individual tratado. Como es evidente para un experto en la té :cnica, un retraso suficiente y significativo puede, en efecto, abarcar la prevención, para que el individuo no desarrolle metástasis. Una 'cantidad efectiva" de una composición farmacéutica, en una modalidad, es una cantidad suficiente para obtener resultados bnenéficos o deseados incluyendo, sin limitación, resultados cl.Lnicos, como contracción del tamaño del tumor (en el contexto del cáncer, por ejemplo, cáncer de mama o próstata), retardo del crecimiento de las células cancerosas, retraso del desarrollo de metástasis, disminución de los síntomas resultantres de la enfermedad, incremento de la calidad de vida de aqu silos que padecen de la enfermedad, disminución de la dosis de: otros medicamentos requeridos para tratar una enfermedad, mejorar el efecto de otro medicamento como via la dirección y/o internalización, retraso del progreso de la enfermedad, y/o prolongación de la sobrevivencia de los indi iduos. Una cantidad efectiva puede ser administrada en una o más administraciones. Para los propósitos de esta invención, una cantidad efectiva de fármaco, compuesto o composición farmacéutica es una cantidad suficiente para reducir la proliferación de (o destruir) células cancerosas y para reducir y/o retardar el desarrollo, o crecimiento de metástasis de células cancerosas, ya sea directa o indirectamente . En algunas modalidades, una cantidad efectiva de un fármaco, compuesto o composición farmacéutica puede o no ser logrado en conjunto con otro fármaco, compuesto, o composición farmacéutica. De este modo, una "cantidad e fectiva" puede ser considerada en el contexto de la administración de uno o más agentes quimiot erapéut icos, y un solo agente puede ser considerado para ¡proporcionarse en una cantidad efectiva si, en conjunto con uno o más de otros agentes puede ser o es logrado un resultado deseable. Aunque las necesidades individuales varian, la determinación de los intervalos óptimos de las cantidades efectivas de cada componente está dentro de la experiencia de la técnica. Las dosis típicas comprenden de 0.1 a 100 mg/kg/peso corporal. Las dosis preferidas comprenden de 1 a 100 mg/kg/peso corporal. Las dosis preferidas comprenden de 10 a 20 mg/kg/peso corporal y 10 a 100 mg/kg/peso corporal, y las dosis preferidas comprenden de aproximadamente 1 a 10 mg/kg/peso corporal Como se usa aqui una molécula de ácido nucleico o agente, anticuerpo, comporfición o célula, etc, que se diga "aislada" cuando esa mol écula de ácido nucleico, agente, anticuerpo, composición o célula, etc., está sustancialmente separada de las moléculas de ácido nucleico, anticuerpos, agentes, composiciones o células contaminantes, etc. de su fuente original. Un "individuo" es un vertebrado, preferiblemente un mamjLfero, de manera más preferible un humano. Los mamiferbs incluyen, pero no se limitan a, animales de granja, animales para deportes, mascotas, primates, ratones y ratas. Los términos 'polipéptido", "oligopéptido", 'péptido" y "proteina" s n usados de manera intercambiable aqui para referirse a polímeros de aminoácidos de cualquier longitud. Los polimeros pueden ser lineales o ramificados, pueden comprender aminoá ¡eidos modificados, y pueden estar interrumpidos por aminoácridos. El término también abarca un polimero de aminoácidos que haya sido modificado de manera natural o por intervención; por ejemplo, formación de enlaces disulfuro, glicosilaci .ón, lipidación, acetilación, fosforilación, o cualquie:j: otra manipulación o modificación, como conjugación con un componente de marcación. También incluidos dentro de la definición están, por ejemplo, polipéptidos que contiene dos o más análogos de un aminoácido (incluyendo, por ejemplo, aminoácidos no naturales, etc.) asi como otras modificaciones conocidas en la técnica. Debe comprenderse que, debido a que los polipéptidos de esta invención se basan en un anticuerpo, los polipéptidos pueden encontrarse como cadenas individuales o cadenas asociadas.

Una "región variable" de un anticuerpo se refiere a la región variable de la cadena ligera del anticuerpo o la región variable de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o en combinación. Una "región constante" de un anticuerpo se refiere a la región constante de .a cadena ligera del anticuerpo o la región constante de la cadena pesada del anticuerpo, ya sea sola o en combinación. También abarcados dentro del alcance de la invención están peptidomiméticos de los agonistas, antagonistas y moduladores (incluyendo anticuerpos anti- KID24) del péptido KID24 descritos aqui. Esos peptidomiméticos incluye péptidos donde al menos un aminoácido residual est:a sustituido con un aminoácido residual que no se encuentra comúnmente en la naturaleza, como el isómero del aminoácido o una especie N-alquilada del aminoácido. En otras modialidades, los peptidomiméticos son construidos reemplazando al menos un enlace amida (— C ( . dbd. O)—NH-) en un agoni sta, antagonista o moduladores del péptido KID24 con un isdstero de amida. Los isósteros de amida adecuados incluyen --CH.sub.2 -NH-, -CH.sub.2 -S-, -CH.sub.2 - S(0).sub.n - (donde n es 1 or 2), -CH.sub.2 ~CH.sub.2 -, ~CH. dbd. CH- ¡E or Z), -C( .dbd:0) ~CH.sub.2 ~, -CH (CN)-NH-, -C(OH)-CH.sub. 2 --, and -0- C(.dbd.O)- NH- . Los enlaces amida en un agomista, antagonista o modulador de péptido de KID24 que son candidatos adecuados para el reemplazo con los isósteros de amida incluyen enlaces que son hidrolizables por las es •terasas o proteasas endógenas del sujeto pretendido del tratamiento con agonista, antagonista o modulador del péptido KID2 4. Como se usa aquí, "sustancialmente puro" se refiere a material que es al menos 50% puro (es decir libre de más preferida al menos 90% puro, de manera más preferible a.L menos 95% puro, de manera más preferible al menos 98% puro, de manera más preferible al menos 99% puro o más puro. "Toxina" se refiere a cualquier sustancia, la cual efectúa una respuesta adversa dentro de una célula. Por ejemplo, una toxina dirigr.da a una célula cancerosa tenia un eeffeeccttoo aaddvveerrssoo,, aallgguunnaass veces dañino, sobre la célula cancerosa. Los ejemplos de toxina incluyen, pero no se limitan a, radioisótopos, caliqueamicina y maitansinoides . Como se usa aqu ., "tratamiento" o "tratar" es el método para obtener r¡esultados benéficos o deseados incluyendo y preferiblemente resultados clínicos. Para propósitos de esta intención, los resultados clínicos benéficos o deseados incl .uyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: reducción de la proliferación de (o destrucción) de las célalas cancerosas u otras enfermas, reducción de la metástasiá de células cancerosas encontradas es el método de Kohier y Milstein, Nature 256:495-497 (1975] o una modificación del fismo. Típicamente, los anticuerpos monoclonales son desarrollados en especies no humanas, como ratones. En general, es usado un ratón o rata para la inmunización pero también pueden ser usados otros animales Los anticuerpos son producidos inmunizando los ratones con una cantidad inmunogénica de células, extractos celulares o preparaciones de proteína que contienen KID24 humano. El inmunógeno puede ser, pero no se limita a, células primarias, líneas celulares cultivadas, células cancerosas, ácidos nucleicos o tejido. En una modalidad, se usan células epiteliales de riñon fetal humano. En otra modalidad, se usan células progenitoras de vejiga o pancreáticas humanas. Los métodos para aislar y cul zivar células de riñon fetal humano se detallan en el ejemplo 1. Las células usadas para la inmunización, por ejemplo, células de riñon fetal humano, pueden ser cultivadas durante un periodo de tiempo (al menos 24 horas) antes de uso como inmunógeno. Las células (por ejemplo células de riñon fletal humano) pueden ser usadas como inmunogenos en si o en combinación con un adyuvante no desnaturalizante como el Ribi. En general, las células deberán mantenerse intact s y preferiblemente viables cuando se usen como inmunógenos. Las células intactas pueden permitir que los antigenos sean detectados mejor que las células rotas por el animal inmunizado. El uso de adyuvantes el antígeno, se unirán a ¡la placa, y no son enjuagadas con el resto de la suspensión. Las células B resultantes, o en todas las células de bazo disociadas, pueden entonces ser fusionadas con células de mieloma (por ejemplo, X63-Ag8.653 y aquellas del Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, CA) . Puede ser x. sado polietilen glicol (PEG) para fusionar las células de bazo o linfocitos con las de mieloma para formar un hibridoma El hibridoma es entonces cultivado en un medio selectivo (por ejemplo, medio con hipoxantina, aminopterina, timidina, e?(? otras circunstancias conocido como medio HAT"). Los hibrridomas resultantes son entonces cultivados por dilución limitante, y son ensayados por la producción de anticuerpos que se unan específicamente al inmunógeno (por ejemplo, las superficies de las células de riñon fetal humano, s iperficie de líneas de células cancerosas, Ag-KID24, etc ) usando FACS o inmunohistoquímica (separación con IHC) . Los hibridomas que secretan anticuerpo monoclonal seleccionado son entonces cultivados ya sea in vi tro (por ejemplo, en botellas de cultivo tisular o reactores de fibra hueca ) , o in vivo (por ejemplo, como ascitos en ratones) . El ejemplo 3 proporciona detalles adicionales acerca de los métodos utilizados para obtener y separar un anticuerpo anti -KID24. Como otra alternativa a la técnica de fusión celular, pueden ser usadas células B inmortalizadas con EBV para producir anticuerpos monoclonales de la invención objetivo. Los hibridomas se expanden y subclonan, si se desea, y los sobrenadantes son ensayados por la actividad anti-inmunógeno por procedimientos de ensayo convencionales (por ejemplo, FACS, IHC, radioinmunoensayo, inmunoensayo enzimático, inmunoensayo por fluorescencia, etc.). En otra alternat.iva, el anticuerpo monoclonal anti¬ KID24 y cualquier otro anticuerpo equivalente pueden ser secuenciados y producidos de manera recombinante por cualesquier medios conocr.dos en la técnica, (por ejemplo, humanización, uso de ratones transgénicos para producir anticuerpos completamente humanos, tecnología de presentación de fagos, etc.). En una modalidad, el anticuerpo monoclonal anti-KID24 es secuenciadd y la secuencia polinucleótida es entonces clonada en ur vector para su expresión propagación. La secuencia que codifica para el anticuerpo de interés puede ser mantemida en un vector en una célula anfitriona y la célula anfitriona puede entonces ser expandida y congelada para su uso futuro. La secuencia polinucleotídica del anticuerpo monoclonal anti-KID24 y cualquier otro anticuerpo equivalente puede ser usado para la manipulación genética para generar un anticuerpo "humanizado para mejorar la afinidad, otras características del anticmerpo. El principio general en la humanización de un anticuerpo implica retener la secuencia básica de la porción de unión del antígeno del anticuerpo, barriendo por lo tanto el resto no humano del anticuerpo con secuencias de anticuerpo humano. Existen cuatro pasos generales para humanizar un anticuerpo monoclonal. Esos son: (1) determinar la secuencia de nucleótidos y aminoácidos predichos a los dominicjs variables ligero y pesado del anticuerpo inicial (2) diseñar el anticuerpo humanizado, es decir, decidir cual región del marco del anticuerpo usado durante el proceso de humanización (3) las metodologias/técnicas de humanización reales y (4) la transfección y expresión del anticuerpo humanizado. Véanse, por ejemplo, las Patent. :s Estadounidenses Nos. 4,816,567; 5,807,715; 5,866,692; y 6, 331,415. Han sido de. ;critas numerosas moléculas de anticuerpos "humanizado' <jjue comprenden un sitio de unión de antígeno derivado de una inmunoglobulina no humana, incluyendo anticuerpos qúiméricos que tiene regiones V de roedor o roedor modificada y sus regiones determinantes de la complementariedad (CDR) fusionadas de dominios constantes humanos. Véase, por ejempl o, Winter et al. Nature 349:293-299 (1991), Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:4220- 4224 (1989), Shaw et al. J Immunol 138:4534-4538 (1987), y Brown et al. Cáncer fies. 47:3577-3583 (1987). Otras referencias describen CDR de ratón injertadas en una región del marco (FR) de soporte humano, antes de la fusión con un dominio constante de anti cuerpo humano apropiado. Véase, por ejemplo, Riechmann et al. Nature 332:323-327 (1988), Verhoeyen et al. Science 239:1534-1536 (1988), y Jones et al. Nature 321:522-525 (1986 . Otra referencia describe las CDR de ratón, soportadas porrj regiones del marco de roedor en cubiertas de manera recombinante. Véase, por ejemplo, la Publicación de Patente Europea No. 519,596. Esas moléculas "humanizadas" son diseñadas para minimizar una respuesta inmunológica indeseable hacia molécula de anticuerpo antihumano de ratón, lo c?al limita la duración y efectividad de las aplicaciones terapféuticas de aquellas porciones en receptores humanos. Otros métodos para humanizar anticuerpos que puedan ser utilizados son descritos por Daugherty et al., Nucí. Acids Res., 19 : 2¡4'71-2476 (1991) y las Patentes Estadounidenses Nos. 6, L80,377; 6,054,297; 5,997,867; y 5,866, 692. La invención también abarca fragmentos de región variable de cadena indivicual ("scFv") de anticuerpos de esta invención, como mu-anti-KID24. Los fragmentos de la región variable de una sola cadena se producen ligando las regiones variables de cadena lige:ra y/o pesada usando un péptido enlazante corto. Bird et al. (1988) Science 242: 423-426 describe ejemplos de pépti .dos enlazantes los cuales forman un puente de aproximadamente 3.5 nm entre el carboxi terminal de una región variable y el amino terminal de la otra región variable. Han sido diseñados y usados enlazantes de otras secuencias, de Bird et al, (1988). Los enlazantes pueden a su vez ser modificados para funciones adicionales, como la unión de fármacos o unión a soportes sólidos. Las variantes de una sola cadena pueden ser producidas de manera recombinante o sintética. Para la producción sintética de scFv, puede ser usado un sintetizador automatizado. Para la producción recombinante de scFv, un plásmido adecuado que contenga un polinucleótido que codifique para scFv puede ser introducido en una sola célula anfitriona, ya sea eucariótica, como células de levadura, pLantas, insectos o mamíferos, o procariótica, como E. coli. Los polinucleótidos que codifican para el scFv de interés pueden ser producidos por manipulaciones de rutina, como ligación de polinucleótidos. El scFv resultante puedé ser aislado usando técnicas de purificación de proteína estandar conocidas en la técnica, La invención incluye modificaciones agonistas, antagonistas, moduladores y anticuerpos de KID24, incluyendo anticuerpos funcionalmente equivalentes y polipéptidos que no afectan significativamente sus propiedades y variantes que tienen más o menos actividad. La modificación de los polipéptidos es una práctica de rutina en la técnica y no necesita ser descrita ccj>n detalle aquí. Los ejemplos de polipéptidos modificado 3 incluyen polipéptidos con sustituciones conservativa s de aminoácidos residuales, una o más supresiones o adiciónes de aminoácidos que no cambian de manera significativamente dañina la actividad funcional, o el uso de análogos químico s. Los aminoácidos residuales que pueden ser sustituidos de manera conservativa por otros incluyen pero no se limitan a: glicina/alanina; valina/ isoleucina/leucina; aspanragina/glutamina; ácido aspártico/ ácido glutámico; serina/treonina; lisina/arginina; y fenilalanina/tirosina . Es;os polipéptidos también incluyen polipéptidos glicosilado 3 y no glicosilados, así como polipéptidos con otras modificaciones postraslacionales, como, por ejemplo, glic?silación con diferentes azúcares, acetilación y fosforilación. Preferiblemente, las sustituciones de aminoácidos serán conservativas, es decir, que el aminoácido constituido poseería propiedades químicas similares a los del aminfácido original. Esas sustituciones conservativas son conocid s en la técnica, y anteriormente ya han sido proporcionados ejemplos. Las modificaciones de aminoácidos pueden fluctuar del cambio o modificación de uno o más aminoácidos hasta er]l rediseño completo de una región, como la región variable Los cambios en la región variable pueden alterar la afinidad y/o especificidad de unión. Otros métodos de modificación incluyen usar técnicas de acoplamiento conocidas er la técnica, incluyendo pero sin limitarse a, medios enz.Lmáticos, sustitución oxidativa y quelación. Las modificaciones pueden ser usadas, por ejemplo, para la unión de marcas para inmunoensayo, como la unión de las porciones radioactivas para radioinmunoensayo. Los polipéptidos modificados son producidos usando procedimientos establecí .dos en la técnica y pueden ser separados usando ensayos estándar conocidos en la técnica. La invención también abarca proteínas de fusión que comprende uno o más fragmlentos o regiones de los polipéptidos y anticuerpos de esta invención. En una modalidad, se proporciona un polipéptido de fusión que comprende al menos aminoácidos contiguos de la región de cadena ligera variable y al menos 10 aminoácidos de la región de caden¿ pesada variable. En otra modalidad, el polipéptido de fusión contiene una región consqante de inmunoglobulina heterólogo.

En otra modalidad, el polipéptido de fusión contiene una región variable de caden a ligera y una región variable de cadena pesada de un anticuerpo producido a partir de un hibridoma depositado con la ATCC como se describe aquí. Para los propósitos de esta ir vención, una proteína de fusión de anticuerpo contiene uno o más polipéptidos anti-KID24 y otra secuencia de aminoácidos a la cual no se une la molécula nativa, por ejemplo, una s ecuencia heteróloga o una secuencia homologa de otra región. Un polipéptido anti-KID24, otros agonistas, antagonistas y moduladores de KID24 pueden ser creados por métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, de manera sintética o recombinante. Un método para producir agonistas, antagonistas y moduladores del péptido KID24 implica la sintesis química del polipéptido seguida por el tratamiento bajo condiciones oxidantes apropiadas para obtener la conformación nativa, e.. decir, los enlaces disulfuro correctos. Esto puede ser logrado utilizando metodologías bien conocidas por aquel los expertos en la técnica (véase Kelley, R. F. & Winkle r, M. E. en Genetic Engineering Principies and Methods, S?stlow, J. K., ed., Plenum Press, N. Y., vol. 12, pp 1-19 (19190); Stewart, J. M. & Young, J. D. Solid Phase Peptide Synthesis Pierce Chemical Co . Rockford, IU. (1984); véase también las Patentes Estadounidenses Nos. 4,105,603; 3,972,859; 3,8¿2,067; y 3,862,925). Los polipéptidos de la invención pueden ser preparados convenientemente usando síntesis peptídica en fase sólida (Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85:2149 (1964); Houghten, Proc. Nati. Acac . Sci. USA 82:5132 (1985)). En otra alternativa más, los anticuerpos completamente humanos pueden ser obtenidos usando ratones comercialmente disponibles que han sido modificados para expresar proteínas de inmunoglobulina humanas específicas.

Los animales transgénicos que son diseñados para producir una respuesta inmune más de seable (por ejemplo, anticuerpos completamente humanos) o más robusta también pueden ser usados para la generadón de anticuerpos humanizados o humanos. Los ejemplos de ésa tecnología son el Xenomouse™ de Abgenix, Inc. (Fremont, C y el HuMAb-Mouse® y el TC Mouse™ de Medarex, Inc. (Princetc n, NJ) . De manera alternativa, los anticuerpos pueden ser producidos de manera recombinante y expresados usando cualquier método conocido en la técnica. Los anticuerpos pueden ser producidos de manera recombinante aislando primero los anticuerpos producido:; a partir de animales anfitriones, obteniendo la secuencia genética, y usando la secuencia genética para expresar el anticuerpo de manera recombinante en las células anfitrionafe (por ejemplo, células CHO) . Puede ser empleado otro método para expresar la secuencia del anticuerpo en plantas (por ejemplo, tabaco) o leche transgénica. Los métodos p ara expresar de manera recombinante el anticuerpo en plantas o leche ya han sido descritos, Véanse, por ejemplo, Peet ers, et al. (2001) Vaccine 19:2756; Lonberg, N. and D. Huszar (1995) Int. Rev. Immunol 13:65; and Pollock, et al. (1999) /Imrrunol Methods 231:147. Los métodos para producir derivados de anticuerpos, por ejemplo, humanizados, de una sola cadena, etc., son conocidos en la técnica. En otra alterna tiva, los anticuerpos pueden ser conocidos de manera re?ombinante por la tecnología de presentación de fagos, léanse, por ejemplo, las Patentes Estadounidenses Nos 5,565,3|32; 5,580;717; 5,733,743; 6,265,150; y Winter et al., Annu. Rev. Isposit Immunol. 12:433-455 (1994).

Los anticuerpos o proteínas de interés pueden ser sometidos a secuenciamien o por degradación de Edman, la cual es bien conocida por aquellos expertos en la técnica. La información peptídica generada de espectrometría de masas o degradación de Edman pue e ser usado para diseñar sondas o cebadores que sean usados para clonar la proteina de interés, Un método alternativo para clonar la proteina de interés es "el tamizado usando KID24 purificado o porciones del mismo para células qu 5 expresan el anticuerpo o proteina de interés. El procedimiento de "tamizado" es conocido obteniendo una biblioteca de ADNc de tejidos o células que expresan el anticuerpo o ] roteína de interés, sobreexpresando los ADNc en un segundo tipo de célula, y separando las células transfectadas de segundo tipo de célula por una unión especifica al KID2 . Las descripciones detalladas de los métodos usados en la rrrlonación de genes de mamíferos que codifican para proteína de la superficie celular por "tamizado" pueden encontrase en la técnica. Véanse, por ejemplo Aruffo, A. and S ed, B. Proc. Nati. Acad. Sd. USA, 84, 8573-8577 (1987) y Stqphan, J. et al., Endocrinology 140: 5841-5854 (1999). Los ADNc que coc ifican para anticuerpos anti-KID24, y otros agonistas, antagonistas y moduladores del péptido KID24 pueden ser obtenidos por transcripción inversa de los ARNm de un tipo de célula particular de acuerdo a métodos estándar en la técnica. Específicamente, el ARNm puede ser aislado usando varias encimas líticas o soluciones químicas de acuerdo a los procedr.mientos expuestos en Sambrook, et al., supra o extraídos pon: resinas de unión de ácido nucleico comercialmente disponible siguiendo las instrucciones acompañantes proporcionada.s por los fabricantes (por ejemplo, Qiagen, Invitrogen, Pronega) . Los ADNc sintetizados son entonces introducidos en un vector de expresión para producir el anticuerpo o proteina de interés en células de un segundo tipo. Esto implica que un vector de expresión debe ser replicable en las células anfitrionas ya sea como epitomas o como una parte integral ciel ADN cromosomal. Los vectores de expresión adecuados incluyen pero no se limitan a plásmidos, vectores virales, incluyendo adenovirus, virus adenoasociados, retrovirus y cósmidos. Los vectores qu contienen los polinucleótidos de interés pueden ser introducidos en la célula anfitriona por cualquiera de un número ce medios apropiados, incluyendo la electroporación, transfec -ion empleando cloruro de calcio, cloruro de rubidio, fosfato de calcio, DEAE-dextran, u otras sustancias, bombardeo con microproyectiles; lipofección; e infección (por ejemplo, donde el vector es un agente infeccioso como un vaccinia virus) . La elección de introducir los vectores o polinucle?tidos con frecuencia dependerá de las características de la célula anfitriona.

Puede ser usada cualquier célula anfitriona capaz de sobreexpresar ADN hete rólogos para el propósito de aislar los genes de acuerdo al amticuerpo, polipéptido o proteína de interés. Los ejemplos no Limitantes de células anfitrionas de mamífero incluyen pero nc se limitan a células COS, HeLa, y CHO. Preferiblemente, la 3 células anfitrionas expresan los ADNc a un nivel de aproxImadamente 5 veces más de manera más preferible 1 veces más, o de manera aún más preferible 20 veces más que el anticuerpo o proteina endógeno correspondiente de interés, si está presente, las células anfitrionas. La separación de las células anfitrionas por una unión especifica al KID24 es efectuada por un inmunoensayo o FACS. Una célula que sobretexprese el anticuerpo o proteína de interés puede ser identifi cada . También están disponibles varias técnicas las cuales pueden ahora ser empleadas para producir agonistas, antagonistas y moduladores del péptido KID24 mutantes que codifican para adiciones, supresiones o cambios en la secuencia de aminoácidos; de la proteina resultante al agonista, antagonista o molécula moduladora del péptido KID24 original . La invención incluye polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos de los anticuerpos de esta invención. Los polipéptidos de esta invención pueden ser producidos por procedimiehtos conocidos en la técnica. Los polipéptidos pueden ser producidos por degradación proteolítica o de otro tipo de anticuerpos, por métodos recombinantes (es decir, polipéptidos individuales o de fusión) , como se descr:.bió anteriormente o por síntesis química. Los polipéptido!; de los anticuerpos, especialmente los polipéptidos más cortos de hasta aproximadamente 50 aminoácidos, son producidos convenientemente por síntesis química. Los métodos por síntesis química son conocidos en la técnica y se encuentra i comercialmente disponibles. Por ejemplo un polipéptidos a: ti-KID24 puede ser producido por un sintetizador de polipéptidos sistematizados que empleé el método en fase sólida.

IV. Métodos para separar polipéptidos y anticuerpos monoclonales Pueden ser usados varios métodos para separar polipéptidos y anticuerpos; monoclonales que se unen al KID24 Debe comprenderse que unión" se refiere a una unión biológica e inmunológicamsnte relevante, es decir, unión la cual es específica para sl antigeno único para el cual se codificó la molécula de inmunoglobulina, o a la cual está dirigida el péptido. No se refiere a la unión no específica que puede ocurrir cuando es usada una inmunoglobulina a una concentración muy alta contra un blanco no especifico. En una modalidad, los anticuerpos monoclonales son separados por la otros tejidos no cancerosos de los individuos que padecen de cáncer o tejidos de indlividuos sin cáncer son usados como control. El tejido puede ser incluido en una sustancia sólida o semisólida que evite el daño durante el congelamiento (por ejemplo, gel de agarosa u OCT) y entonces cortado para tensión. Pueden ser usado >¡3 diferentes órganos y en diferentes grados para separar anticeerpos monoclonales. Los ejemplos de tejidos que pueden ser ufados para propósitos de separación incluyen pero no se limi ran ovario, mama, pulmón, próstata, colon, riñon, piel, ti .roides, cerebro, corazón, hígado, estómago, nervios, vas os sanguíneos, huesos, tractos digestivos superior y páipcreas. Los ejemplos de diferentes tipos de cáncer que pue ; den ser usados para propósitos de separación incluyen per :o no se limitan a carcinomas, adenocarcinomas, sarcoma,s, adenosarcomas, linfomas, leucemias . En otra alterna tiva más, pueden ser usadas líneas celulosas cancerosas como BT474 (ATCC# HTB-20), MCF7 (ATCC# HTB-22), ES-2 (ATCC# CRL-1978), SKOV3 (ATCC# HTB-77), SKMES-1 (ATCC# HTB-58), CA130 (Línea celular de adenocarcinoma de pulmón patentada por Raven), CaLu3 (ATCC# HTB-55), 9926 (Línea celular de adenoc:arcinoma de pulmón patentada por Raven, AsPC-1 (ATCC# CFJL-1682), Hs700T (ATCC# HTB-147), Colo205 (ATCC# CCL-222), HT-29 (HTB-38), Cos7 (ATCC# CRL-1651), RL-65 (ATCC# CRL- L0345), A204 (ATCC# HTB-82), G292 (ATCC# CRL- 1423), HT108¡ (ATCC# CCL-121), MG63 (ATCC# CRL-1427), RD (ATCC# CCL-1316), RD-ES (ATCC# HTB-166) , SKES-1 (ATCC# HTB-86), SKLMS-1 (ATCC# HTB-88), SKUT-1 (ATCC# HTB-114), SW684 (ATCC# HTBJ91), SW872 (ATCC# HTB-92), 786-0 (ATCC# CRL-1932), A498 (ATCC# HTB-44), Caki-2 (ATCC# HTB-47), 22RV1 (ATCC# CRL-2505), DU145 (ATCC# HTB-81), LNCaP (ATCC# CRL-1740), HMEC (BioWh .ttaker CC-2251) , HuVEC (Células endoteliales primarias) , MDA-MB-175-VII (ATCC# HB-25), MDA-MB-361 (ATCC# HB-27), SK-BR-3 (ATTC# HTB-30), 9979 (Línea celular de adenocarcinoma de pulmón patentada por Raven) , A549 (ATCC# CCL-185), S 480 (ATCC# CCL-228), SW948 (ATCC# CCL-237), 293 (ATCC# CRLJ1573), PC3 (ATCC# CRL-1435), TDH-I (Línea celular de cáncer de próstata patentada por Raven) , Hs746T (ATCC# HTB-135), NÍCI-N87 (ATCC# CRL-5822) y células normales de sus tejidos respectivos para separar anticuerpos monoclonales que sean específicos para tejido canceroso. Los cultivos celulares primar?ios son de bajo pase derivados de tejidos normales de difeirentes órganos incluyendo pero sin limitarse a riñon, ovario, mama, pulmón, próstata, colon, riñon, piel, tiroides, músculo liso aórtico, y células endoteliales pueden ser u sados como controles negativos. Las células cancerosas o no cancerosas pueden hacerse crecer sobre portaobjetos o cubreobjetos, o sobre superficies de plástico, o preparadas en CellArrayMR, como se describe en la WO 01/43869, y separada por la unión del anticuerpo usado IHC, como se describió anteriormente para tejidos. De manera alternativa, las células pueden ser removidas de la superficie de crecimiento usando medios no proteolíticos y centrifugando en un sedimrpnto, el cual es entonces incluido y tratado como tejidos para análisis por IHC como se describió anteriormente. Las célula?s pueden ser inoculadas en animales inmunodeficientes, permitiéndose que crezca un tumor, entonces ese tumor puede ser cosechado, e incluido, y usado como fuente de tejido para el análisis por IHC. En otra alternativa, pueden ser' separadas células individuales incubando con el antr.cuerpo primario, un anticuerpo "reportero" secundario ligado a una molécula fluorescente y entonces analizado usando una máquina de clasificación celular activada por fluorescencia (FACS). En otra alternativa, pueden ser usadas ELISAS con células vivas para separar anticuerpos que sean específicos para líneas celulares de cáncer (cono las listadas anteriormente) y células normales de sus tejidos respectivos. Las células pueden ser cultivadas solre placas de 96 pozos y entonces hacerse crecer hasta la confluencia. El medio de crecimiento es entonces removido de las células son bloqueadas con amortiguador de bloqueo, Pueden ser agregados anticuerpos primarios y entonces 1 as placas lavadas y agregarse anticuerpos secundarios si las placas pueden ser reveladas revelando un sustrato el cambio de color puede ser detectado usando un lectolr de placas Pueden ser utilizados varios sistemas de detección diferentes para detectar la unión de los anticuerpos al corte de tejido. Típicamente, lia inmunoistoquimica implica la unión de un anticuerpo primario al tejido y entonces se generó un anticuerpo secundario reactivo contra las especies del anticuerpo primario y se: conjugó a un marcador detectable (por ejemplo, peroxidasa de rábano, HRP, o diaminobencedina, DAB) . Un método alternativo que pude ser usado es anticuerpos complementarios de imagen especular policlonales o poliMICA.

La técnica de los poliMICA (Anticuerpos Complementarios de Imagen Especular policlorJales), descrita por D.C. Mangham y P.G. Isaacson (Histopatho?ogy (1999) 35 (2 ): 129-33) , puede ser usada para probar la unión de anticuerpos primarios (por ejemplo, anticuerpos anti-KID24) a tejidos normal y cancerosos. Varios tipos de equipos de detección polyMICAMR se encuentran comercialmente disponibles en The Binding Site Limited (P.O. Box 4073 Birmingham B29 6AT England) . El producto No. HK004.D es i.n equipo de detección polyMICMR el cual usa cromógeno DAB. E producto No. HK004.A es un equipo de detección polyMICMR el cual uso cromógeno AEC. De manera alternativa, el anticuerpo primario puede ser marcado directamente con el marcad or detectable. El primer paso en la separación por IHC para seleccionar un anticuerpo apropiado es la unión de anticuerpos primarios dirigidos en ratones (por ejemplo, anticuerpos anti-KID24) a uno o más inmunógenos (por ejemplo, muestras de células o tej idos) . En una modalidad, la muestra de tejido es cortes de tejido congelado de diferentes órganos. Las células o muestras de tejido pueden ser cancerosas o no cancerosa;;. Los tejidos congelados pueden ser preparados, cortados, con o sin fijación, y la IHC es efectuada por cualquiera de un número de métodos conocidos por un experto en la técnica. Véase, por ejemplo, Stephan et al. Dev. Biol. 212: 264-277 (1999), y Stephan et al. Endocrinology 140: 5841-54 (1999) .

V. Métodos para caracterizar anticuerpos anti-KID24 Pueden ser usados varios métodos para caracterizar anticuerpos anti-KID24. U n método es identificar el epítope al cual se une. El mapa del epítope se encuentra comercialmente disponible de varias fuentes, por ejemplo, Pepscan Systems (Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, The Holanda) . El mapa del epitjope puede ser usado para determinar la secuencia a la cual se une el anticuerpo anti-KID24. El epitope puede ser un epitope lineal, es decir, contenido en una sola extensión e aminoácidos, o un epítope conformacional formado por una interacción tridimensional de aminoácidos que puede no necesariamente estar contenido en una sola extensión. Pueden ser aislados o sintetizados (por ejemplo, de manera recombinante) péptidos de longitudes variables (por ejemplo, de al menos 4-6 aminoácidos de longitud) y usados para ensayos de unión con anticuerpo anti- KID24. El epítope al cual se une el anticuerpo anti-KID24 puede ser determinado en una separación sistémica usando péptidos de superposr.ción derivados de secuencias extracelulares y determinando la unión por el anticuerpo anti- KID24. Otro método más que puede ser usado para caracterizar un anticuerpo anti-KID24 es usar ensayos competitivos con otros anticuerpos que se sabe se unen al mismo antígeno, es decir, KID24 para determinar si los anticuerpos anti-KID24 se unen al mismo epítope que otros anticuerpos. Los ejempl .DS de anticuerpos comercialmente disponibles para el KID24 pueden estar disponibles y pueden ser identificados usando . ' os ensayos de unión enseñados aquí. Los ensayos competitivos son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, y esos procedimientos y datos ilustrativos se detallain mejor en los ejemplos. Los anticuerpos anti-KID24 puísden ser caracterizados además por los tejidos, tipo de canee ¡r o tipo de tumor al cual se unen. Otro método pa :a caracterizar anticuerpos anti-KID24 es por el antigeno al cual se unen. Los anticuerpos anti-KID24 fueron usados en el análisis Western blotting con lisados celulares de ovarios cánceres humanos. Como es sabido por un extremo en la técnica, el análisis Western blotting puede implicar correr lisados celulares y/o fracciones celulares sobre un gen desnaturalizante o no desnaturalizante, transf Lriendo las proteínas a papel de microcelulosa, y sondeando entonces la mancha con un anticuerpo (por ejemplo, anticuerpo anti-KID24) para ver cuales proteinas son unidas por el anticuerpo. Este procedimiento es detallado mejor en el Ejemplo 4. El KID24 se asocia con varios canee res humanos de diferentes tejidos incluyendo, pero sin lip itarse al de colon, mama, ovario, páncreas y pulmón. La descripción adicional del KID24 se da en los Ejemplos 6 y 7 VI . Métodos ce diagnósti co de cáncer usando an ticuerpos an ti -KID24 y m Moduladores de KID24 Los anticuerpo >s monoclonales para el KID24 producidos por los métodcrs descritos aquí pueden ser usados para identificar la prresencia o ausencia de células cancerosas en una varieda.d de tejidos, incluyendo pero sin limitarse a ovario, mamai, pulmón, próstata, colon, riñon, páncreas, piel, tiroides, cerebro, corazón, hígado, estómago, nervios, vasos sanguíneas, huesos y, tracto digestivo superior, para propósitos; de diagnóstico. Los anticuerpos monoclonales para el KID24 producidos por lo métodos descritos aquí también pu den ser usados para identificar la presencia o ausencia de células cancerosas, o el nivel de las mismas, que estén circulando en sangre después de su liberación de un tumor s jlido. Ese antígeno en circulación puede ser un antígeno de KID24 o un fragmento del mismo que retenga la capacidad par ser detectado de acuerdo a los métodos enseñados aquí. Esa detección puede ser efectuada por análisis FACS usando los métodos estándar comúnmente usados en la técnica. Esos usos pueden implicar la formación de un complejo entre el KID2 5 y un anticuerpo que se une específicamente al KID24. Los ejemplos de esos anticuerpos incluyen pero no se limitan a aquellos anticuerpos monoclonales anti-KID24 producidos por el hibridoma depositado en la ATCC c on la designación PTA# 5174. La formación de ese complejo puede ser in vi tro o in vivo . Sin ser limitados por la teoría, el anticuerpo anti-KID24 puede unirse al KID24 a través del dominio extracelular del KID24 puede entonces internalizarse. En una modalidad preferida de los métodos de diagnóstico de esta inve nción, el anticuerpo contiene una marca detectable. Los e emplos de marcas que pueden ser usadas incluyen un agente radioactivo o un fluoroforo, como el fluoroisotiocianato o ficoeritrina . Como con otro s anticuerpos conocidos usados comercialmente para diagnóstico y propósitos terapéuticos, el antígeno blanco de esta i?vención es expresado ampliamente en tejido normal. También está sobrerregulado en algunos tumores. Por lo tanto, 1 as dosis y rutas particulares para liberar los anticuerpos de esta invención como los usados para agentes de diagnóstico y terapéuticos serán diseñadas al tumor o estado de enfermeqad a la mano, asi como al individuo particular que esté siendo tratado, Un método de uso de los anticuerpos para diagnóstico es para la formación de imágenes de tumores in vivo ligando el anticuerpo a un agente radioactivo o radioopaco, administrar el anticuerpo al individuo y usar una máquina de rayos X u otra formadora de imágenes para visualizar la localizad í>n del anticuerpo marcado en la superficie de células canqerosas que expresan el antígeno. El anticuerpo es administrado a una concentración que promueve la unión a condiciones fisiológicas . Las técnicas in vi tro para la detección del KID24 son de rutina en la técnica e incluyen ensayos inmunosorbentes ligados a enzima (ELISA) , inmunoprecipitaciones, r-nmunofluorescencia, inmunoensayo enzimático (EIA) , radioinmunoensayo (RÍA) y análisis Western blot. En aspectos de esta invención, los métodos de formación de imágenes radiográficas de tumores son neoplasmas, o de medición de la efectividad de un método de tratamiento con un anticuerpo marcado radioactivamente, comprende el paso de administrar un anticuerpo específico del tumor, marcado radioactivamente a un individuo siguiendo la práctica de esta invención. El anticuerpo marcado radioactivamente puede ser un anticuerpo monoclonal o policlonal que comprenda una marca radioactiva, preferiblemente seleccionada del grupo que consiste de Tecnesio-99m, Indio-111, Yodo-131, Renio-186, Renio-188, Samario-153, Lutecio-177, Cobre-64, Escandio-47, Itrio-90.

Los anticuerpos monoclonales marcados con radionúclidos terapéuticos como el Yodo-131, Renio-188, Holmio-166, Samario-153 y Escandio-4 7, los cuales no comprometen la inmunorreactividad de los anticuerpos y no se degradan in vivo, son especialmente preferidos. Los expertos en la técnica apreciaran que se conocen otros isótopos radioactivos, y pueden ser adecuados para aplicaciones específicas. La formación de imágenes radiológicas puede ser conducida usando tomografía computarizada de emisión fotónica simple (SPECT), Terapia de Emisión de Posición (PET), Tomografía Computarizada (CT) o Formación de Imágenes por Resonancia Magnética (MRI). La formación de imágenes correlativas, la cual permite una mayor definición anatómica de la localización de metastasis localizadas por formación de imágenes radioinmunológica s, también se contempló, En otros métodos, las células cancerosas son removidas y el tejido preparado para inmunohistoquímica por métodos bien conocidos en la técnica (por ejemplo, incluyendo en un compuesto de congelación, congelando y cortando, con o sin fijación; fijación e inclusión en parafina con o sin varios métodos de recupera ción de antígenos y contratinción) . Los anticuerpos monoclona Les también pueden ser usados para identificar células cancerosas en diferentes etapas de desarrollo. Los anticuerpos también pueden ser usados para determinar cuales tumores individuales expresan el antígeno sobre su superficie a un nivel predeterminado y son de este modo candidatos para inmunoterapia usando anticuerpos dirigidos contra el a ntígeno. Los anticuerpos pueden reconocer cánceres primarios y metastáticos del riñon, ovario, próstata y páncreas y cánceres primarios del pulmón que expresen KID24. Como se usa aqui, la detección puede incluir la detección cualitativa y/o cuantitativa y puede incluir comparar el nivel medido para una célula normal para un nivel incrementado d 5 expresión de KID24 en células cancerosas . La invención también proporciona métodos para ayudar al diagnóstico del cáncer (como el cáncer pancreático, de colon, pulmón o prósta?a) en un individuo usando cualquier anticuerpo que se una al KID24 y cualesquier otros métodos que puedan ser usados para determinar el nivel de expresión del KID24. Como se usan aqui, los métodos para "ayudar al diagnóstico" significan q e esos métodos ayudan a hacer una determinación clínica con respecto a la clasificación, o naturaleza del cáncer, y pueden o no ser concluyentes con respecto al diagnóstico definitivo. En consecuencia, un método para ayudar al dia? nóstico del cáncer puede comprender el paso de detectar el nivel de KID24 en una muestra biológica del individuo y/o determinar el nivel de expresión del KID24 en la muestra. Los anticuerpos que reconocen el antigeno o una porción dfl mismo también pueden ser usados para crear inmunoensayos de diagnóstico para detectar el antigeno liberado secretado de células cancerosas vivas o muertas en fluidos corporales, incluyendo pero sin limitarse a la sangre, saliva, orina, fluido pulmonar o fluido de los ascitos . No todas las qélulas en un tumor particular de expresarán KID24, y células cancerosas en otros tejidos pueden expresar KID24, de este modo un individuo deberá ser seleccionado por la presencia o ausencia de KID24 sobre células cancerosas para determinar la utilidad de la inmunoterapia en el indiJviduo. Los anticuerpos anti-KID24 producidos por los método s descritos aquí pueden ser usados para determinar si un individuo diagnosticado con cáncer puede ser considerado candidato para inmunoterapia usando anticuerpos dirigidos contra KID24. En una modalidad, un tumor canceroso o una muestra de biopsia pueden ser probados por la expresión de KID24, usando anticuerpos dirigidos contra KID24 Los individuos con células cancerosas que expresen KID24 son candidatos adecuados para inmunoterapia usando anticuerpos dirigí dos contra KID24. La tinción con anticuerpo anti-KID24 tamfc ién puede ser usada para distinguir tejidos cancerosos de tejidos normales. Los métodos de uso de anticuerpos anti-KID24 para propósitos de diagnóstico son útiles tanto antes como después de cualquier forma de tratamiento anticáncer, por ejemplo, quimioterapia o terapia ccn radiación, para determinar cuales tumores responden de manera más probable a un tratamiento dado, pronostico para un individuo con cáncer, subtipo del tumor u origen de la enfermedad metastásico y progreso de la enfermedad o respuesta al tratamiento . Las composiciónes de esta invención también son adecuadas para el diagnióstico de estados de enfermedad diferentes al cáncer, usartido los métodos descritos de manera general anteriormente e n aplicación con otras células enfermas (no cancerosas Los estados de enfermedad adecuados para usarse en los métodos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, enfermedades o trastornos asociados con respuestas inflamatorias o autoinmunes en individuos Los métodos descritos anteriormente pueden ser usados para modular respuestas inflamatorias o autoinmunes en individuos. Las enfermedades y condiciones resultante de trastornos inflamatorios c autoinmunes que puedan ser objeto de diagnóstico y/o trata:n?ento usando las composiciones y métodos de la invención íincluyen, a manera de ilustración y no de limitación, e sclerosis múltiple, meningitis, encefalitis, apoplejía, otros traumas cerebrales, enfermedades del intestino inflamatorio incluyendo la colitis ulcerativas y enfermedades de Crohn, miastenia gravis, lupus, artritis reumatoide, a?sm,a , diabetes de aparición juvenil aguda, demencia asociada con el SIDA, aterosclerosis, nefritis, retinitis, dermátitis atópica, psoriasis, isquemia miocárdica y lesión pulmónar mediada por leucocitos, aguda. Otras indicaciones más para diagnóstico y/o uso terapéutico de los anticuerpos y otros agentes terapéuticos de la invención incluyen la administración a individuos en riesgo de rechazo de c rganos o injertos. Durante años recientes a existido una considerable mejora en la eficacia de las técnicas quirúrgicas para trasplantar tejidos y órganos como piel, riñones , hígado, corazón, pulmón, páncreas y médula ósea. Quizá el ¡ >roblema sobresaliente principal es la ausencia de agent ?S satisfactorios para inducir inmunotolerancia al injerto u órgano transplantado. Cuando son trasplantadas célul s u órganos alogénicos en un anfitrión (es decir, el d nador y el receptor son individuos diferentes de la misma especie) , es probable que el sistema inmune del anfitrión monte una respuesta inmune a los antigenos externos en el. trasplante (enfermedad anfitrión contra injerto) conduciendo a la destrucción del tejido transplantado . En los usos des rrritos en otra parte está solicitud que expone su uso para antjicuerpos anti-KID24 también abarcan el uso de otros agonistas, antagonistas y moduladores de KID24 como se describe aquí. En esas modalidades, los agonistas, antagonistas u otros moduladores no anticuerpos de KID24 son sustituidos por el anticuerpo de KID24 en los pasos descritos, y las alterad mes dentro del alcance del experto en la técnica se hacen aldaptar el método a la composición moduladora de KID24 sustituida .

VII. Composiciones de esta invención La invención también abarca composiciones, incluyendo composiciones farmacéuticas, que comprenden anticuerpos anti-KID24, polipéptidos derivados de anticuerpos anti-KID24, polinucleótidqs que comprenden la secuencia que codifica para anticuerpos anti-KID24, y otros agentes como se describe aquí. Como se usa aquí, las composiciones comprenden además uno o más anticuerpos, polipéptidos y/o proteinas que se unen a KID24, agonistas, antagonistas, moduladores de KID24 y/o uno o más polinucleótidos que comprenden secuencias que codifican para uno o más anticuerpos, polipéptidos y proteínas q e se unen a KID24 cualquier porción reporte ra usada en los procedimientos de diagnóstico discutidos aqi Los agentes ag nista, antagonista o modulador del péptido KID24, polipéptic os y proteínas de esta invención, incluyendo los anticuerpos anti-KID24, son identificados y caracterizados además por cualquier (uno o más) de los siguientes criterios: (a la capacidad para unirse a KID24 (incluyendo KID24 sobre élulas cancerosas, incluyendo pero sin limitarse a células cancerosas pancreáticas, de colon, pulmón o próstata); (b) capacidad para inhibir completamente la unión preferente de un anticuerpos anti-KID24 conocido al KID24, incluyendo la capac idad para unirse preferentemente al mismo epitope de KID24 al cual el anticuerpo original se une preferentemente, (c) capacidad para unirse a una porción del KID24 que está expuesto sobre la superficie de una célula viva in vi tro o in vivo; (d) la capacidad para unirse a una porción del KID24 que está expuesta sobre la superficie de células cancerosas vivas, como, pero sin limitarse a células de cáncer de ovario, próstata, pancreático, pulmón, colon o mama ; la capací .dad para liberar un agente quimioterapéutico o marcador detectable de células cancerosas ¡como, pero sin limitarse a células de cáncer de ovario, próstata, pancreático, pu .món, colon o mama) que exprese un KID24; (f) la capacidad pa Lra liberar un agente terapéutico en células cancerosas (como, pero sin limitarse a células de cáncer de pulmón) que expíese un KID24. En algunas modalidades, el anticuerpo de la invención es un anticuerpo que es producido por una célula anfitriona como un númerf de depósito de la ATCC No. PTA# 5174, o progenia de la misma. La presente invención también abarca varias formulaciones de anticuerpos producidos por esos hibridomas depositados y anticuerpos equivalentes o fragmentos polipeptídicos (por ejemplo, Fab, Fab', F(ab')2c Fv, Fc, etc.), anticuerpos quiméricos, una sola cadena ((SSccFFvv)),, mmuuttaanntteess ddee llooss mismos, proteínas de fusión que comprenden una fusión de anticuerpos, anticuerpos humanizados, y cualquier otra configuración modificada de cualquiera de esos anticuerpos equivalentes que comprenda un sitio de reconocimiento del antígeno (KID24), de la especificidad requerida. La invención también proporciona anticuerpos humanos que presentan una o más características biológicas de un miembro de la familia del anti-KID24. Los anticuerpos equivalentes de la familia del anti-KID24 (incluyendo los anticue rpos humanizados y anticuerpos hhuummaannooss)),, ffrraaggmmeennttooss ppooiipeptidicos y polipéptidos que comprenden cualquiera de esos fragmentos son identificados y caracterizados por cualquiera (uno o más) de los cinco criterios descritos anteri Drmente. En algunas modalidades, los anticuerpos,-ppoolliippééppttiiddooss yy pprrootteeíínnaass dde la invención que se unen al KID24 son anticuerpos, polipéptidos y proteínas que inhiben competitivamente la unión precedente de un anticuerpo anti-KID24 especificada aquí al KID24. En algunas modalidades, los anticuerpos, los polipéptidos y las proteínas unen preferiblemente al mismo epítope sobre el KID24 está un anticuerpo mu-anti-KID24 s e une preferiblemente. En consecuenc :La, la invención proporciona cualquiera de los siguientes (o composiciones, incluyendo composiciones farmacéutic s, que comprenden cualquiera de los siguientes): (a) un anticuerpo producido por la célula anfitriona con un nijmero de depósito identificado anteriormente o su progenlie; (b) una forma humanizada de un anticuerpo; (c) un anticuerpo que comprende una o más de las regiones variables de cadana ligera y/o cadena pesada de un anticuerpo; (d) un ant icuerpo quimérico que comprende regiones variables homo logas o derivadas de regiones variables de una cadena esada y una cadena ligera de ese anticuerpo, y regiones constantes homologas o derivadas de regiones constantes de una cadena pesada y una cadena ligera de un anticuerpo humano; (e) un anticuerpo que comprende una o más de la CDR de cadena ligera y/o cadena pesada (al menos una, dos, tres, cuatro, cineo, o seis) de ese anticuerpo; (f) un anticuerpo que comprende una cadena pesada y/o ligera de ese anticuerpo; (g) un anticuerpo humano que es equivalente a ese anticuerpo. Una forma humanizada del anticuerpo puede o no tener CDR idénticas a las del anticuerpo original, o el anticuerpo producido por una célula anfitriona, un número de depósito identificado anteriormente. La determinación de las regiones CDR está también dentro de las destrezas de la técnica. En algunas modal .Ldades, la invención proporciona un anticuerpo el cual comprende al menos una CDR que es sustancialmente homologa a al menos una CDR, al menos dos, al menos tres, al menos cfatro, al menos cinco CDR de un anticuerpo producido por uno de los hibridomas depositados identificados anterior en algunas modalidades, sustancialmente homologas a todas las seis CDR de uno de esos anticuerpos, o derivadas de uno de esos anticuerpos), o anticuerpo producido por la célula anfitriona con el número de depósito identificado anteriormente. Otras modalidades incluyen anticuerpos que tienen al menos dos, tres, cuatro, cinco, o seis CDR que s ;on sustancialmente homologas a al menos dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR de un anticuerpo producido a partir de un hibridoma depositado como se identifica aquí, o derivado de ese anticuerpo. Debe comprenderse que, para lo >s propósitos de esta invención, la especificidad de unión y/o actividad total (la cual puede ser en términos de liberación de un agente quimioterapéutico a o en células cancerosas para reducir el crecimiento y/o proliferación de las células cancerosas, para inducir la muerte celular apoptótica en la célula cancerosa, para retrasar el desarrollo de metástasis y/o tratamiento paleativo) generalmente se retiene, aunque el grado de actividad puede variar rsn comparación con el anticuerpo producido por un hibridoma depositado (puede ser mayor o menor) . La invención también proporciona métodos para producir cualquiera de e ;s;os anticuerpos. Los métodos para producir anticuerpos son conocidos en la técnica y son descritos aquí La invención tajnbién proporciona polipéptidos que comprenden una secuencia ce aminoácidos de los anticuerpos de la invención. En alguñas modalidades, el polipéptido comprende una o más regiones variables de cadena ligera y/o cadena pesada del antier.,erpo. En algunas modalidades, el polipéptido comprende una o más CDR de cadena ligera y/o cadena pesada del anticuerpo. En algunas modalidades el polipéptido comprende tres CDR de la cadena ligera y/o cadena pesada del anticuerpo. En algunas modalidades, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos del anticuerpo que tiene cualquiera de 1 DS siguientes: al menos cinco aminoácidos contiguos dp una secuencia del anticuerpo original, al menos 8 aminoácidos contiguos, al menos aproximadamente 10 aminoácidos contiguos, al menos aproximadamente 15 aminoácidos contiguos, al menos aproximadamente 20 amr.noácidos contiguos, al menos aproximadamente 25 amr.noácidos contiguos, al menos aproximadamente 30 aminoácidos contiguos, donde al menos tres de los aminoácidos son de una región variable del anticuerpo. En una modalidad, la regi 5n variable es de una cadena ligera del anticuerpo original En otra modalidad, la región variable es de una cadena pesada del anticuerpo. En otra modalidad, los 5 (o más) aminoácidos contiguos son de una región determinante de la complementariedad (CDR) del anticuerpo. En algunas mocalidades de esta invención, las células de esta invención que expresan KID24, una porción de KID24, anticuerpo anti-KIÜ24 u otros polipéptidos de unión de KID24 de esta invención son administrados directamente a un individuo para modular la, actividad biológica del KID24 in vivo endógena de individuo VIII. Métodos de uso de moduladores del KID24 y an ti cuerpos an ti -KID24 pa. fia propósi tos terapéuticos Los anticuerpos monoclonales para el KID24 pueden ser usados para propósit DS terapéuticos en individuos con cáncer u otras enfermedade s. La terapia con anticuerpos anti-KID24 puede implicar la fc rmación de complejos tanto in vi tro como in vivo como se describió anteriormente. En una modalidad, el anticuerpo rrjonoclonal anti-KID24 puede unirse a y reducir la proliferacion de células cancerosas. Debe comprenderse que el anticuerpo es administrado a una concentración que promueve la unión condiciones fisiológicas (por ejemplo, in vivo) . En otra modalidad, los anticuerpos monoclonales para el KID24 pueden ser usados para la inmunoterapia dirigida a células cancerosas de diferentes tejidos como páncreas, colon, pulmón o próstata y otros tipos de cánceres como el sarcoma. En otra modalidad, el anticuerpo monoclonal anti-KID24 so Lo puede unirse a y reducir la división celular en la céµula cancerosa. En otra modalidad, el anticuerpo monoclonal anti-KID24 puede unirse a células cancerosas y retrasar el desarrollo de metástasis. En otra modalidad, a un individuo con cáncer se le dio un tratamiento paliativo con anticuerpo anti-KID24. El tratamiento paliativo de un individuo con cáncer implica tratar o disminuir los síntomas adversos de la enfermedad, o síntomas iatrogénicos resultantes de otros tratamientos dados para la enfermedad sin afectar directamente e 1 progreso del cáncer. Esto incluye tratamientos para soportar el dolor, apoyo nutricional, problemas sexuales, istensión psicológica, fatiga, trastornos psiquiátricos, nauseas, vómito, etc. En esas situado nes, el anticuerpo anti-KID24 puede ser administrado con agentes que mejoren o dirijan la respuesta inmune del propio individuo, como un agente que refuerce la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos ADCC) . En otras modalidades, al menos un residuo de fucosa presente en un anticuerpo anti-KID24 es removido de los oligosacáridos de ese anticuerpo, una modificación para mejorar la ADCC. En moda idades similares, los residuos de fucosa presentes en un an :icuerpo anti-KID24 son modificados para alterar su composi ion en el grado requerido para mejorar la ADCC en comparación con el anticuerpo original, no modificado . En otra modalida d más, el anticuerpo anti-KID24 es conjugado o asociado con una molécula radioactiva, toxina (por ejemplo, caliquea iciña) , molécula quimioterapética, liposomas y otras ves Lculas que contengan compuestos quimioterapéuticos y administrado a un individuo que necesite de ese tratamiento para diirigir esos compuestos a la célula cancerosa que contiene el antigeno reconocido por el anticuerpo y de este modo eliminar las células cancerosas o enfermas. Sin limitarse a ninguna teoría en particular, el anticuerpo anti-KID24 es internalizado por la célula que contiene KID24 en su sup rficie, liberando de este modo la porción conjugada a la célula para inducir el efecto terapéutico. En otra modalidad más, el anticuerpo puede ser empleado como terapia aidyuvante al momento de la remoción quirúrgica de un cáncer que exprese el antígeno para retrasar el desarrollo de metástas s. El anticuerpo también puede ser administrado antes de la c irugía (terapia neoadyuvante) en un individuo con un tumor que exprese el antígeno para hacer disminuir el tamaño del tumor y de este modo permitir o simplificar la cirugía, arhalizar el tejido durante la cirugía y/o hacer disminuir la desifiguración resultante. Se contempló la dosificación del ciclo celular en la práctica de esta invenición. En esas modalidades, es usado un agente quimioterapéutico para sincronizar el ciclo celular del tumor u otras célu.-as enfermas blanco en una etapa predeterminada. Posteriormente, se hizo la administración del anticuerpo anti-KID24 de esta invención (solo o con una porción terapéutica adicibnal). En modalidades alternativas, se usó un anti-KID24 parra sincronizar el ciclo celular y reducir la división celular antes de la administración de una segunda ronda de tratamiento; la segunda ronda puede ser la administración de un antr.cuerpo anti-KID24 y/o una porción terapéutica adicional. Los agentes quimioterapéuticos incluyen moléculas radioactivas, toxinas, también referidas como citotoxinas o agentes citotóxicos, los c uales incluyen cualquier agente que sea dañino a la viabilidac de las células cancerosas, agentes y liposomas y otras vesículas que contengan los compuestos quimioterapéuticos. L s ejemplos de agentes quimioterapéuticos adecuaclos incluyen, pero no se limitan a 1-dehidrotestosterona, 5-fluorouracil decarbacina, 6-mercaptopurina, 6-tioguan Lna, actinomicina D, adriamicina, aldesleucina, agentes alquilantes, alopurinol sódico, levamisol HCL, lidoca ína, lomustina, maitansinoide, mecloretamina HCL, acétate de medroxiprogesterona, acetato de megestrol, melfalan HCL, mercaptipurina, mesna, metotrexato, metiltestosterona, mitramicina, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, nilutamida, acetato de octreotida, ondansetron HCL, paclitaxel, pami dronato disódico, pentostatina, pilocarpina HCL, plimicin a, polifeprosan 20 con implante de carmustina, porfimer sódico, procaína, procarbazin HCL, propranolol, rituximab, sargramostim, estreptozotocina, tamoxifen, taxol, teni osido, tenoposido, testolactona, tetracaina, tioepa cl Drambucil, tioguanina, tiotepa, topotecan HCL, citrato de toremifen, trastuzumab, tretinoina, valrubicina, sulfato de v[Linblastina, sulfato de vincristina, y tartrato de vinorrelbina . En una modalidad preferida, la citotoxina es especialmente preferida e n la división o división celular rápida, de modo que las células que no se dividen están relativamente libres de lo >s efectos tóxicos Los anticuerpos de la invención pueden internalizarse dentro de ías células enfermas o de carcinoma a las cuales se unen y son por lo tanto particularmente útiles para aplicaciónes terapéuticas, por ejemplo, liberación a las células: de las toxinas necesarias para intenalizarse para su actividad adversa. Los ejemplos de esas toxinas incluyen, pero no se limitan a, saporina, caliqueamicina, auristatina y maytansinoide. Los anticuerpos o polipéptidos de la invención pueden ser asociados (incluyendo conjugados o ligados) a una molécula radioactiva, toxina, u otros agentes terapéuticos, o a liposomas u otras vesículas que contengan agentes terapéuticos covalente p no covalentemente, directa indirectamente. El antic:uerpo puede ser ligerado a la molécula radioactiva, la toxina o la molécula quimioterapéutica en cu alquier lugar a lo largo del anticuerpo en tanto el ar ticuerpo sea capaz de unirse a su KID24 blanco. Una toxina o a gente quimioterapéutico puede ser acoplado (por ejemplo, unido covalentemente) a un anticuerpo monoclonal adecuado ya sea directa o indirectamente (por ejemplo, vía un grupo enlazante, o de manera alternativa, de una molécula enlazante de sitios de unión apropiados, como una molécula plataforma como se describe en la patente Estadounidense 5,552,391 La toxina y el agente quimioterapéutico de presente invención puede ser acoplada directamente a las proteínas blanco particulares usando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, es posible una reacción directa entre un agente y un anticuerpo cuando uno posea un sustituyentes ca£>az de reaccionar con el otro. Por ejemplo, un grupo nucleofílico, como un grupo amino o sulfhidrilo, sobre uno puede ser capaz de reaccionar con un grupo que contenga un qarbonilo, como un anhídrido o un haluro de ácido, o con un grupo alquilo que contenga un buen grupo sobresaliente (por ejemplo, un haluro) sobre el otro. Los anticuerpos o polipéptidos también pueden ser ligados a un agente quimioterapéutico vía un microportador . Los microsoportes se refieren a una partícula biodegradable o a no biodegradable que eí; insoluble en agua y que tiene un tamaño de menos de aproximadamente 150, 120 ó 100 mm de tamaño, de manera más conún menos de aproximadamente 50-60 µm, de manera preferible menos de aproximadamente 10, 5, 2.5, 2 ó 1.5 µm. Los microsoportes incluyen "nanoportadores, los cuales son microsoportes que tienen un tamaño de menos de aproximadamente µrt, preferiblemente menos de aproximadamente 500 nm. E Isas partículas son conocidas en la técnica. Los microsoporees en fase sólida pueden ser partículas formadas de copolímeros naturales compatibles, polímeros sintéticos o copolímeros sintéticos, que pueden incluir o excluir microsop ortes formados de agarosa o agarosa reticulada, asi como otros materiales biodegradables conocidos en la técnica, Los microsoportes en fase sólida biodegradables pueden ser formados a partir de polímeros los cuales son degradables i por ejemplo, poli (ácido láctico), poli (ácido glicólico) y copolimeros de los mismos) o erosionable (por ejemplo, poli (orto esteres como el 3,9-dietiliden-2, ,8, 10-tetrao aespiro [5.5] undecano (DETOSU) o poli (anhídridos) , como poli (anhídridos) de ácido sebácico) bajo condiciones fisiológr.cas de mamíferos. Los microsoportes también pueden estar en fase líquida (por ejemplo, basados en aceites o lípidos), como liposomas, iscoms (complejos estimulantes inmunes, los cuales son complejos estables de colesterol y fosfolípidos;, saponina activa con adyuvantes) sin antígeno, o gotas o micelas encontradas en emulsiones aceite en agua ig? en aceite, siempre que los microsoportes en fase líquida sean biodegradables. Los microsoportes en fase líquida biodegradables típicamente incorporan un aceite biodegradable, un número de los cuales son conocidos en la té rrnica, incluyendo el escualeno y aceites vegetales. Los microsoportes son típicamente de forma esférica, pero los microsoportes que se desvían de la forma esférica también son acep- ables (por ejemplo, elipsoides, en forma de varilla, etc) . Debido a su naturaleza insoluble (con respecto al agua) , los mic rosoportes son filtrables de agua y soluciones basadas en agua (acuosas) . El anticuerpo D conjugados polipeptídicos de la presente invención pueden incluir un enlazante bifuncional que contenga un grupo capa z de acoplarse a un agente tóxico o agente quimioterapéutico y un grupo capaz de acoplarse al anticuerpo. Un enlazante puede funcionar, como un separador para distanciar un anticuerpo de un agente para evitar la interferencia con las capacidades de unión. Un enlazante puede ser escindidle o nb escindible. El enlazante también puede servir para incrementar la reactividad química de un sustituyente sobre un agente o un anticuerpo, y de este modo incrementar la eficiencia del acoplamiento. Un incremento en la reactividad química tlambién puede facilitar el uso de agentes, o grupos funciona les sobre agentes, lo cual en otras circunstancias no sería posible. El enlazante bifuncional puede ser acoplado al anti cuerpo por medios que son conocidos en la técnica. Por ejemplo, un enlazante que contenga una porción activa, como un N hidroxisuccinimida éster, puede ser usado para el acoplamie nto a residuos de lisina en el anticuerpo via un enlace amida. En otro ejemplo, un enlazante que contenga un residuo de amina o hidrazina nucleofílica puede ser acoplado a gj.rrupos aldehido producidos por la oxidación glicolítica ds residuos de carbohidrato del anticuerpo. Además de eso:; métodos directos de acoplamiento, el enlazante puede ser acoplado indirectamente al anticuerpo por medio de un soporte intermedio como un aminodextrano . En esas modalidades el enílace modificado es vía lisina, carbohidrato, o un soport intermedio. En una modalidad, el enlazante se acopla selectivamente al sitio para liberar los residuos tiol en la proteína. Las porciones que son adecuadas al acoplamiento selectivo a grupos tiol sobre proteínas son bien conocidas en la técnica. Los ejemplos incluyen compuestos disulfuro, compuestos de oí-halocarbonilo y - halocarboxilo, y maleimidas. Cuando está presente una función amina nucleofílica en la misma molécula como un grupo a-halo carbonilo o grupo carboxilo existe el potencial de que ocurra ciclización vía la alquü.ación intramolecular de la amina Los métodos para evitar e:5te problema son bien conocidos por un experto en la técnicai, por ejemplo, por preparación de moléculas en las cuales .as funciones amina y a-halo están separadas por grupos inflexibles, como grupos arilo o trans-alquenos, que hacen la ciclización indeseable estereoquímicamente desfavorable . Véase, por ejemplo, la Patente Estadounidense No . 6,441,163 para la preparación de conjugados e maytasinoid=s y anticuerpo vía una porción disulfuro . Uno de los enlazantes escindibles que puede ser usado para la preparación de conjugados de anticuerpo-fármaco es un enlazante lábil a ácido basado a ácido cis-aconítico que toma ventaja del ambiente ácido de los diferentes compartimientos intracelulares como los endosomas encontrados durante la endocitosis mediada por un receptor y los lisosomas. Véase, por ejerrpío, Shen et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 102 : 1048-10$4 (1981) para la preparación de conjugados de daunorrubic|ina con soportes macromoleculares; Yang et al., J. Nati. Cañe . Inst. 80:1154-1159 (1988) para la preparación de conjugados de daunorrubicina con un anticuerpo antimelanoma; Dillman et a1., Cáncer Res. 48:6097-6102 (1988) para el uso de un enlaz nte lábil al ácido en una forma similar para preparar onjugados de daunorrubicina con anticuerpo anti-células T; Trouet et al., Proc. Nati. Acad. Sd. 79:626-629 (1982) paira enlazar la daunorrubicina a un anticuerpo vía un brazo seoarador peptídico. Un anticuerpo o polipéptido) de esta invención puede ser conjugado (enlaz ado) a una molécula radioactiva por cualquier método conocido en la técnica. Para una discusión de los métodos para marca: radiactivamente anticuerpos véase "Cáncer Therapy with Monocional AnticuerposT" , D. M. Goldenberg ed. (CRC Press, Boca Ratón, 1995) . De manera alterrnativa, una anticuerpo puede ser conjugado con un segundo anticuerpo para formar un heteroconjugado de anticuerpo de acuerdo a lo descrito por Segal en la Patente E stadounidense No. 4,676,980. La formación de anticuerpos reticulados puede dirigir el sistema inmune a tipos específico s de células, por ejemplo, células cancerosas o enfermas que .expresen KID24. Esta invención también proporciona métodos para prevenir o retardar el desarrollo de metástasis en un individuo que tiene o ha tenido un tumo primario, incluyendo, pero sin limitarse a, cáaneeres pancreáticos, colon, pulmón o próstata) administrando un anticuerpo anti-KID24 u otro modulador del KID24. Este modulador puede ser dado solo o en conjunto con otras terapias, como radiación, quimioterapia, o cirugía. En ciertas modal!dades preferidas, el tumor primario ha sido sometido a al menos una ronda de cirugía, radiación y/o quimioterapia antes de la administración del modulador de KID24. En algunas circunstancias, el tumor primario puede parecer haber sido removido completamente por el tratamiento anterior. En otras modalidades, el modulador de KID24 es administrado antes de o concurrentemente con el tratamiento del individuo con cirugía, radiación y/o quimioterapia. En algunas modalidades, esos métodos de prevención o retraso del desarrollo de metástasis en un individuo que tiene o ha tenido cáncer comprende lá administración de un modulador de KID24 (como un anticuerpo que se una al KID24) en conjunto con (o enlazado a) otra pe rción terapéutica, como un marcador detectable o un agente quimioterapéutico. En algunas modalidades, el anticue po es una forma humanizada o quimérica de un anticuerpo anti-KID24 no humana. En otra modalidad más, el anticuerpo puede ser empleado como terapia adyuvante al momento de la remoción quirúrgica de un cáncer que exprese el antígeno para retrasar el desarrollo de metástasis. El anticuerpo o anticuerpo asociado con el agente q uimioterapéutico también puede ser administrado antes de la cirugía (terapia neoadyuvante) en un individuo con un tumor q ue exprese el antigeno para hacer disminuir el tamaño del tumor y de este modo permitir o simplificar la cirugía, analizar el tejido durante la cirugía y/o hacer disminuir el desfiguro resultante. En otra modalidad, cualquiera de los moduladores de KID24, como un anticuerpo anti-KID24, puede ser empleado como terapia después del tratamiento (por ejemplo, tratamiento quirúrgico, radioterapéutico, quimioterapéutico, etc.) de un tumor primario para retrasar o prevenir el desarrollo de metástasi . El modulador KID24 puede ser administrado solo o ligado a un agente quimioterapéutico. En algunas modalidades, el anticuerpo es una forma humanizada o quimérica de un anticuerpo de anti-KID24 no humano. En otra modalidad más, cualquiera de las modalidades de unión de KID24 descritas aquí puede unirse células cancerosas que expresen KID24 e induce una respuesta inmune activa contra las; células cancerosas que expresen KID24. En algunos casos, la respuesta inmune activa puede causar la muerte de las células cancerosas (por ejemplo, la unión del anticuerpo a la s células cancerosas induciendo la muerte celular apoptótica) , o inhibe el crecimiento (por ejemplo, bloqueo del progreso del ciclo celular) de las células cancerosas En otros casos, cualquiera de los anticuerpos novedosos descritos aqui puede unirse a células cancerosas y la toxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) puede eliminar las células cancerosas a las cuales se une el anti-KID24. En con secuencia, la invención proporciona métodos para estimular u na respuesta inmune que comprende minimizar cualquiera de las composiciones descritas aquí, En algunos casos, la unión del anticuerpo también puede activar respuestas inmunes celulares y humorales y reclutar más células asesinas naturales o incrementar la producción de citocinas (por ejemplo, IL-2, IFN-g, IL-12, TNF-a, TNF-b, etc.) que aqtivan aún más el sistema inmune del individuo para destruir las células cancerosas. En otra modalidad más, los antiduerpos anti-KID24 puede unirse a células cancerosas, y mac rófagos u otras células fagocíticas pueden opsonizar las célul.as cancerosas. Pueden ser usadas para la administración varias formulaciones de anticuerpos anti-KID24 o fragmentos de los mismos. En algunas modalidades, los anticuerpos anti-KID24 o fragmentos de los mismo pueden ser administrados puros.

Además del agente farmacológicamente activo, las composiciones de la prresente invención pueden contener ciertos soportes farmacéuiticamente aceptables adecuados que comprendan excipientes y auxiliares que sean bien conocidos en la técnica y sean sustancias relativamente inertes que faciliten la administración de una sustancia farmacológicamente efectiva o que faciliten el procesamiento de los compuestos activos en las preparaciones que puedan ser usadas farmacéuticamente para la liberación al sito de acción. Por ejemplo, u? excipiente puede dar forma o consistencia, o actuar como un diluente. Los excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a agentes estabilizadores, agente Irjumectantes y emulsificantes, sales para hacer variar la o >smolaridad, agentes encapsulantes, amortiguadores, mejoradote s de la penetración de la piel Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua, por ejemplo, sales solubles en agua. Además, pueden ser administradas suspensiones de los compuestos activos según sea apropiado para suspensiones de inyección oleosa. Los s;olventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de ajonjolí o esteres de ác :|ido graso sintéticos, por ejemplo, oleato de etilo y tr .glicéridos. Las suspensiones de inyección acuosas pueden :ontener sustancias que incrementen la viscosidad de la suspensión e incluyen, por ejemplo, carboximetil celulosa sódica, sorbitol, y/o dextran.

Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizadores. También pueden ser usados liposomas para encapsular el agente para liberarlo a la célula. La formulación farmacéutica para la administración sistémica de acuerdo a la invención puede ser formulada para administración enteral, parenteral o tópica. En realidad, los tres tipos de formulaciones pueden ser usadas simultáneamente para lograr la liberación sistémica del ingrediente activo, Los excipientes así como 1as formulaciones para la liberación de fármacos parenterales y no parenterales se exponen en Remington , The Science anc Pra ctice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000) . Las formulaciones adecuadas para la administración oral incluyen cápsulas de gelatina dura o blandas, pildoras, tabletas, incluyendo abletas recubiertas, elixires, suspensiones, jarabes, o inhalaciones y formación de liberación controlada de 1as mismas. Generalmente esos agentes son formulados para la administración por inyec Clón (por ejemplo, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intramuscularmente, etc) , aunque también pueden ser usadas otras formas de administración (por ejemplo, oral, mucosa, etc.). En consecuencia, los anticuerpos anti-KID24 son combinados preferiblemente con vehículos farmacéuticament e aceptables como solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y similares. El régimen de dosificación particular, es decir, la dosis, hora y repetición, dependerán del individuo particular y la historia médica part icular. Generalmente, se administra una dosis de al menos aproximadamente 100 ug/kg de peso corporal, de manera más preferible de al menos aproximadamente 250 ug/kg de peso corporal, de manera aún más preferible al menos ap roximadamente 750 ug/kg de peso corporal, de manera más pr eferible al menos aproximadamente 3 mg/kg de peso corporal, d manera aún más preferible al menos aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal, de manera aún más preferible, al menos a Droximadamente 10 mg/kg de peso corporal . Consideraciones empíricas como la vida media, generalmente contribuirán a la determinación de la dosis. Los anticuerpos, los cuales son compatibles con el sistema inmune humano como los anticuerpos humanizados o anticuerpos completamente humanos, p? edén ser usados para prolongar la vida media del anticuerpo y para evitar que el anticuerpo sea atacado por el sistema inmune del anfitrión. La frecuencia de la administración puede ser determinada y ajustada sobre el curso de la terapia, y se basa en la reducción del número de células cancerosas, mantenimiento de la reducción de células cancerosas, reducción de la proliferación de las células cancerosas, o retraso del desarrollo de metástasis. De manera alternativa, las formulaciones de liberación continua sostenida de anticuerpos anti-KID24 pueden ser apropiadas, Varias formulaciones y dispositivos para lograr la liberación sostenida son conocidas en la técnica. En una modalidad, las dosis para los anticuerpos anti-KID24 pueden ser determinadas empíricamente en individuos a quienes se les ha dado una o más administraciones. A los individuos se les dan dosis crecientes de un anticuerpo anti-KID24. Para evaluar la eficacia de los anticuerpos anti-KID24, puede ser seguido un marcador del estado de la enfermedad cancerosa específico. Esas incluyen la medición directa del tamaño del tumor vía palpación u observación visual, medición indirecta del tamaño del tumor por rayos X u otras técnicas de formación de imágenes; una mejora de aiDuerdo a lo evaluado por la biopsia directa del tumor y exap en microscópico de la muestra del tumor; la medición de un marcador indirecto del tumor (por ejemplo PSA para el cáncer de próstata) , una disminución en el dolor o parálisis; mejora del habla, visión, respiración u otra discapacidad asociaida con el tumor; incremento del apetito o un incremento e..n calidad de vida de acuerdo a lo medido por pruebas aceptadas o prolongación de la sobrevivencia. Será evidente a un experto en la técnica que la dosis variará dependliendo del individuo, el tipo de cáncer, la etapa de caneeir, si el cáncer ha pasado la etapa de metástasis a otro lugar en el individuo, y los tratamientos pasados y que estén siendo usados actualmente. Otras formulaciones incluyen formas de liberación adecuadas conocidas en la técnica incluyendo, pero sin limitarse a, soporte como liposomas. Véase, por ejemplo, Mahato et al. (1997) Pharm . Res . 14:853-859. Las preparaciones liposómicas incluyen, pero no se limitan a, citofectinas, vesículas multilamelares y vesículas unilamelares . En algunas modalidades, puede estar presente más de un anticuerpo. Los anticuerpos pueden ser monoclonales o policlonales. Esas composiciones pueden contener al menos uno, al menos dos, al menos 3, al menos 4, al menos 5 anticuerpos diferentes que sean reactivos contra carcinomas, adenocarcinomas, sarcomas o adenosarcomas . El anticuerpo anti-KID24 puede ser me?clado con uno o más anticuerpos reactivos contra carcinomas, adenocarcinomas, sarcomas, o adenocarcinomas en órgano >3 incluyendo, pero sin limitarse a ovario, mama, pulmón, pros tata, colon, riñon, piel, tiroides, huesos, tracto digestivo superior y páncreas. En una modalidad, se usa una mezda de diferentes anticuerpos anti-KID24. Una mezcla de anticuerpos, como se denota con frecuencia en la técnica, puede ser particularmente útil para tratar una gama amplia de población de individuos. Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar, pero no para limlitar la invención.

EJEMPLOS Ej emplo 1 . Preparación ds células de riñon humano con un inmunógeno Se obtuvieron ri ñones fetales humanos con una edad de gestación entre 10 y L8 semanas de Advanced Biosciences Research en el condado dé Alameda, California. Los riñones fueron procuradsos y lievados al laboratorio en medio de cultivo tisular sobre hi elo húmedo. Inmediatamente de su piezas de tejido digeridos fueron centrifugados a lOOOxg durante 5 minutos y lavadas dos veces con medio I/3F. El sedimento fue resuspendido en 10 ml I/3F que contenía insulina (10 ug/ml), transferrina (10 ug/ml), factor del crecimiento epidémrico (20 ng/ml), somatotropina (0.005 IU/ml) , extracto de pitur-taria de cerdo (0.2%) y suero de pollo (0.1%) y cultivado en placas de 10 cm prerrecubiertas con fibronectina. Bajo esas condiciones de cultivo, las células de riñon fetal humano se unr.eron a las placas recubiertas con sustrato y crecieron como una monocapa. El medio de cultivo fue cambiado dos veces a 1 .a semana. Para cosechar lais células, las monocapas de células fueron enjuagadas una vez con solución salina de Hanks libre de calcio y magnesio, incubadas en EDTA lOmM en solución salina de Hanks a 37°C durlante 15 minutos. Las células fueron desprendidas de la superficie de cultivo pipeteando suavemente. La suspensi celular fue sedimentada por centrifugación a lOOOxg durante 5 minutos. El sobrenadante fue removido y las células fueron resuspendidas a medio libre de suero (medio I/3F) con adyuvante no desnaturalizante según fue apropiado.

Ej emplo 2. Generación de a ni ticuerpos monoclonales Se rehidrató ún adyuvante no desnaturalizante (Ribi, R730, Corixa, Hamalton MT) hasta 2 ml en solución salina amortiguada con fosfato. 100 µl de este adyuvante rehidratado fueron entonce s mezclados suavemente con algo del sedimento celular del ejemplo 1 para ser usado para la inmunización. Se inyectarfon aproximadamente 106 células de riñon fetal humano por ratón en ratones Balb/c vía el muslo, aproximadamente una o dos veces a la semana. El programa de inmunización preciso es e1 siguiente: Día cero, inmunización más Ribi. Día 3, inmunización más Ribi. Día 7, inmunización más Ribi. Día 24, irajnunización menos Ribi. Día 29, inmunización menos Ribi. E ía 32, inmunización menos Ribi. Día 36, inmunización menos Rifc i. Día 44, inmunización menos Ribi.

Día 51, inmunización menos Ribi. Dia 69, sangrado para pruebas de título. Día 7 1, Inmunización más Ribi. Día 74, inmunización más Ribi. Día 1, inmunización más Ribi. Día 91, refuerzo de perfusión (sojn Ribi). Día 104, cosecha de nodos para fusión. El día 69, se extrajo una gota de sangre de la cola de cada animal inmunizado para probar el título de anticuerpos contra células de riñon fetal humano usando análisis FACS. Cuando el título alcanzó al menos 1:2000, los ratones fueron sacrificados usando C02 seguido por dislocación cervical. Los nodos linfáticos fueron cose chados para la preparación de hibridoma .

Los linfocitos ce los ratones fueron fusionados con la línea de mieloma de ratón X63-Ag8.653 usando polietilen glicol 4000 al 35%. El dia 10 después de la fusión, los sobrenadantes de hibridoirf fueron separados por la presencia de anticuerpos monoclonal|es específicos de células de riñon fetal humano por clarificación celular activada por fluorescencia (FACS). El medio condicionado de cada hibridoma fue incubado durante 30 inutos con una alícuota de células de riñon fetal humano, Después de la incubación, las muestras de células fu eron lavadas, resuspendidas en 0.1 ml de diluente e incubadas con 1 µg/ml de fragmento F(ab')2 conj ugado con FITC de anti-IgG de ratón de cabra durant e 30 min a 4°C. Las células fueron lavadas, resusp endidas en 0.2 ml de diluente de FACS y analizadas u sando un analizador de células FACScan (Becton Dickinson; San José CA; Los clones de hibridoma fueron selecciónados para su expansión, clonación y caracterización adicional sobre la base de su unión a la superficie de las células de riñon humano por FACS. Se seleccionó un hibridoma que produce un anticuerpo monoclonal designado como mu-anti-KI 324, el cual se une a un antígeno designado como KID24. El hibridoma que produce anticuerpos mu-anti-KID24 fue expandido adicionalmente en medio de crecimiento adecuado pa ca sostener el crecimiento del hibridoma y purificación del anticuerpo. consistente de tiocianato de potasio 3M/Tris 50mM pH 7.8, y PBS (solución salina amortiguada con fosfato), Tris 3M pH 9.0. Para purificar el anticuerpo anti-KID24 humano de ratón referido aquí como mu-anti-KID24, se midió el volumen del sobrenadante y se agregó un volumen igual de amortiguador de unión al sobrenadante La mezcla se dejó equilibrar a temperatura ambiente. El sobrenadante fue clarificado pasándolo a través de un filtro de 0.22 µm. El sobrenadante fue cargado sobre una col umna proteína-G Sefarosa usando el sistema Explorador AKTA (Amersham Biosciences) y entonces se lavó con 5-10 volúmenes de columna de amortiguador de unión.

El anticuerpo monoclonal fue eluido con el amortiguador de elusión, y se recolectaron las fracciones. Las fracciones fueron neutralizadas tras elusión con la adición de Tris 3M, pH 9.0 a tubos vacíos (1/ 60 volumen de las fracciones) . Las fracciones pico que conter ían el anticuerpo monoclonal fueron reunidas. Las mezclas r unidas fueron inyectadas vía un cásete deslizador prehumefiecido (corte de 10,000 MW; Pierce #66810) y dializadas en PBS Ix a 4°C (con 3 cambios de amortiguador de al menos 4 horas de diálisis por cambio) . El anticuerpo monoclonal purificado fue filtrado de manera estéril (Acrodisc de 0.2µm) y almacenado a 2-8 °C Se tomó una muqstra de anticuerpo purificado para la determinación de la concentración de la absorbancia de UV (A280) y electroforesis sqibre gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) . Las SDS-PAGE se efectuó bajo condiciones no reductoras y reductoras pnra el análisis y el peso molecular, identificación del patrón de unión tipico de los anticuerpos monoclonales y evaluación de la pureza. Después de la purificación del anticuerpo monoclonal mu-anti-KID24 el sobrenadante de hibridoma, este probado por la unión a cbélulas de riñon fetal humano. Las muestras celulares fuerron preparadas, y se describió anteriormente y se incubaron con el anticuerpo purificado a varias concentraciones. D sspués de la incubación las células fueron lavadas, resuspendrí.das en 0.1 ml de diluente incubadas con lµg de fragmento F(atí>)'2 conjugado con FIAC de anti-IgG de ratón durante 30 mi . utos a 4°C. Las células fueron lavadas, resuspendidas e;n 0.5 ml de diluente de FACS y analizadas usando un clasificador celular FACScan (Becton Dickinson, San José, CA) Una desviación del origen sobre el histograma del FACScan indicó que el anticuerpo purificado estaba aún unido a las células de riñon fetal humano. En otros experimentos, se probó la unión del anticuerpo mu-anti-KID24 a KID24 usando ELISA con células vivas. Se usó el siguiente método, aunque son aplicables otros métodos comúnmente ronocidos en el campo. Las células HT- 29, SKOV3, SKMES-I, SW480, SKBR-3, y HPAFII) se hicieron crecer en suero bovino fetal (FBS) al 10% que contenía medios hasta la confluencia sobrb placas de 96 pozos tratadas con lisados. Los lisados fueron centrifugados a 14,000 x durante una hora a 4°C. El lisado clarificado fue entonces preclarificado durante 2 horas a 4°C con 5 µl de perlas de CNBR 4MB de Sefarose CDnjugadas con IgG humano (lmg/ml) (Amersham Pharmacia) . Las perlas de IgG humanas fueron centrifugadas y removidas, y entonces el lisado preclarificado fue incubado con anticuerpo monoclonal mu-anti-KID24 conjugado ccn perlas de CNBr 4MB sefarosa (conjugadas a lmg/ml) durante 2 horas a 4°C. Las perlas mu-anti-KID24 fueron centrifugadas y removidas después de 2 horas de incubación. Tant la IgG humanas como las perlas de mu-anti-KID24 fueron lavadas individualmente tres veces con 1 ml de amortiguador de lisr.s y entonces lavadas tres veces con 1 ml de HBSS+. Las perlas lavadas fueron eluidas mediante la adición de 30 µl de amortiguador de muestra de SDS-PAGE e hirviendo a 99°C durante 5 minutos . Las muestras f ueron entonces resueltas sobre un gel de gradiente de 4-20% de Novex (Invitrogen), y trasferidas sobre una membrana de nitrocelulosa de 0.2µm (Invitrogen) y visualizadas por análisis western blotting con µg/mancha de mu-anti- ID24 o 5µg/mancha de anticuerpos anti-ADAM-9 de cabra. Para la detección con estreptavidina conjugada con HRP, la nitrocelulosa fue) bloqueada primero durante 1 hora con amortiguador de bloqudo (5% de leche en polvo descremada en solución salina amortr.guada con Tris que contenía 0.05% de Tween-20 (TBST, Sigma Chemicals) . La estreptavidina conjugada con HRP fue diluida en PBST a 1 µg/ml y expuesta a la nitrocelulosa durante 30 minutos a temperatura ambiente. La nitrocelulosa fue ent onces lavada tres veces con PBST antes de la visualización con ECL+. Los resultados usando este protocolo de anticuerpos mu-anti-KID2 1 muestran una banda de peso molecular específica en aproximadamente 75 kDa bajo condiciones reductoras. también estuvo presente una banda específica al mismo peso molecular cuando se usaron anticuerpos anti-ADAM-9 de cabra. El resultado de este experimento se muestra en la Figura 1.

Ej empl o 5. Cara eteri zación del an tigeno al cual se un e el mu-an ti -KID24 usanao Espectrometría de Masas en Serie (MS /MS) El antígeno al cual se une el mu-anti-KID24 es aislado y sometido a espectrometría de masas en serie de acuerdo al método de Kane et al., J Bio Chem. 2002 Junio 21; 211 ( 25 ) : 22115-8. Las proteínas son separadas por SDS-PAGE, y el gel fue teñido con un reactivo de Azul Coomassie coloidal (Invitrogen) . Las proteínas de interés fueron digeridas en el gel con tripsina. Los pép idos trípticos fueron secuenciados por cromatografía de 1 quido microcapilar MS/MS en un 1 espectrómetro de masas d trampa (Thermo-Finnigan LCDQ DECA XP) , como se describe en Wu et al., Nature 405: 477-82 (2000). De manera alternativa, pueden se : usados otros métodos de espectrometría de masas comúnmente conoci|dos, como la espectrometría de masas MALDI como en la práctica d esta invención.

Ejemplo 6. Métodos de ínm nohistoquimica Muestras de tejido congelado de pacientes con cáncer fueron incluidas en compuesto OCT y congeladas rápidamente en isopentano con hielo seco. Los criocortes se efectuaron con un microtomo Leica 3050 CM con un espesor de 8-10 µm y se montaron descongelados sobre portaobjetos SuperFrost Plus (VWR #48311-703). Los cortes fueron fijados con 75% de acetona/25% de etanol a 10°C y se dejaron secar al aire 2-4 a temperatura ambiente. Los cortes fijos fueron almacenados a -80°C hasta su uso. Para la inmuno istoquimica, los cortes de tejido fueron recuperados, lavado s en Tween al 0.05% amortiguado con Tris (TB-T) y bloqueados en amortiguador de bloqueo (TB-T, suero de cabra normal al 5% y 100 µg/ml de avidina) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Los portaobjetos fueron entonces incubados con el mu-anti-KID24 y anticuerpos monoclonales control diluidos en amortiguador de bloqueo (1 µg/ml) durante 60-90 minutos a temperatura ambiente. Los cortes fueron entonces lavados tres veces con amortiguador de bloqueo. Los anticuerpos monoclonales unidos fueron detectados con conjugados de anti-IgG + IgM (H+L) F(ab')2 de ratón de cabra-peroxidasa y diaminobencidin sustrato de la peroxidasa (1 mg/ml, Sigma cat. No. D 5637) en amortiguador de acetato de sodio 0.1 M pH 5.05 y peróxido de hidrógeno al 0.003% (Sigma cat. No, H1009) . Los portaobjetos teñidos fueron contrateñidos cor hematoxilina y examinados bajo microscopio Nikon. En algunos casos, pueden ser usados tejidos fijos en formaldehído incluidos en parafina para la inmunohistoquímica después; de que sean empleados métodos de recuperación de antigeno apropiados. Uno de esos métodos de recuperación de antigeno es descrito en Mangham and Isaacson, Histopa thology 35:129-33 (1999). Otros métodos de recuperación y/o detección de antígenos pueden ser usados por un experto en la técnica. Se obtuvieron resultados de experimentos efectuados uisando tejidos congelados o, donde fue apropiado, tejido fijo con recuperación de antígeno y detección con polyMICA. Se evaluó la unión del anticuerpo anti-KID24 a una variedad de tejidos normales y cancerosos. En todas las clases, la unlión del anticuerpo en tejidos fijos control se correlacionó con la de los tejidos congelados. Los resultados de los tejidos congelados fueron usados únicamente si los dos eran igual a lo>s controles. Por conveniencia, un resumen de los resultados combinados de varios experimentos usando tejido quirúrgico congelado de diferentes f uentes se muestra a continuación en la Tabla 1, Tabla 2 y Tabl a 3.

Tabla 1. Distribución del KID24 en tejidos humanos normales Tipo de tejido Resultados Piel 1+ glándulas sudoríparas y +/- epidermis basal Hígado Negativo Riñon 1+ túbulos Pulmón Negativo Páncreas Negativo 1+ tinción de unas cuantas células ductales) Tabla 2. Distribución del KID24 en tejidos tumorales humanos Tipo de tejido Resultados Colon 1+ a 2+ timción en 5/5 tumores Mama Negativo em 4/4 tumores Páncreas +/- a 2+ ti nción en 4/4 tumores Próstata 1+ a 2+ tinción en 3/4 tumores; Negativo en 1/4 tumores Riñon Negativo sn 4/5 tumores; +/- tinción en 1/5 tumores Pulmón +/- a 3+ tinción en 6/7 tumores; Negativo en 1/7 tumores Ovario Negativo en 4/4 tumores Ejemplo 7. Resul tados de 1a inmunocitoquímica Se usó anticue :po monoclonal mu-anti-KID24 para probar la reactividad on varias líneas celulares con diferentes tipos de ejidos. Los resultados fueron calificados como ' + ' para una tinción positiva débil, '++' para una tinción positiva moderada, '+++' para una tinción positiva fuerte y '-' para una tinción negativa. Los resultados de la inmunohistoquímica fueron obtenidos usando la tecno logia CellArrayMR, como se describe en la WO 01/43869. Las células de diferentes líneas celulares establecidas fueron removi das de la superficie de crecimiento sin usar proteasas, empaqjaetas e incluidas en compuesto OCT. Las células fueron conge adas y cortadas, entonces teñidas usando un protocolo de IHC estándar . Los resultados e la unión del anticuerpo mu-anti-KID24 a varias líneas céLulas normales y tumorales humanas establecidas se recopilar n por conveniencia en la tabla 4. Los experimentos represen :ados en la Tabla 4 incluyen ELISA con células vivas y experimentos de unión con CellArray1 MR usando los métodos descritos aquí.

Tabla 4. Resultados de la Inmunocitoquimica Reactividad Reactividad Linea ATCC# Órgano Tipo de célula Arreglo ELISA con celular celular células vivas HMEC CC-2251* Mama Epitelial mamaria normal HuVEC Primario Células Adulto normal endoteliales humano BT474 HTB-20 Mama Carcinoma ductal MCF7 HTB-22 Mama Adenocarcinoma MDA175 HB-25 Mama Carcinoma ductal MDA361 HB-27 Mama Adenocarcinoma SK-BR-3 HTB-30 Mama Adenocarcinoma adicionales por la unión de mu-anti-KID24 usando protocolos de citometría de flujo es tándar que son bien conocidos en el campo. Los resultados se resumen en la Tabla 5 a usando un lector de placa ls de fluorescencia a una longitud de onda de excitación de 320nm ( y una longitud de onda de emisión a 405nm) . El ensa yo enzimático in vi tro se efectuó de acuerdo al protocolo del fabricante . De manera breve , se agregaron 200ng/rxn de rhADAM- 9 ECD ( R&D Systems # 939-AD-020 ) a Tris 25 mM, ZnC12 a 2 . 5 µM, y Brij 35 a 0 . 005% a un pH de 9.0. También se agregaron varias concentraciones de mu-anti-KID24 y esta reacción fue incubada du: rante 5 minutos a temperatura ambiente con agitación moderada. Se ag regaron 10 µM de sustrato peptídico fluorogénico (R&D Systems #ES003) de modo que el volumen final fue de 100 µl/pozo. La reacción fue: incubada durante la noche a 37 °C. Las placas fueron entonces le Ldas sobre un lector de placas de fluorescencia a un O. D. 405nm, Las condiciones control (sin enzima) sin ECM de ADAM- 9 no mostraron fl uorescencia, lo cual se esperaba debido a que el sustrato es únicamepte fluorogénico si es escindido. Las condiciones control positi ras sin mu-anti-KID24 mostraron una fluorescencia máxima . El me -anti-KID24 fue capaz de bloquear la actividad del ECM de ADAM-9 en una forma dependiente de la dosis. Los resultados mostraron que el mu -anti-KID24 puede bloquear la actividad enzimática de ADAM- 9 in vitro.

Ej emplo 10. El mu-anti -KID24 es capaz de inhibir la formación de colonias en agar blando con las líneas de células tumorales de colon] HCT11 6, SW620 y HT29. Los efectos i? vi tro del mu-anti-KID24 fueron probados en tres lineas c ululares de tumor de colon, HCT116, SW620 y HT29. Se usaron pi otocolos estándar para la formación de colonias en agar blandib , bien conocidos en la técnica. El mu-anti-KID24 , a una conce ntración final de 1 µg/ml fue capaz de inhibir la formación de colonia en agar blando de células HCT116 aproximadamente al 60% en comparación con el control. Se observaron resultados >imilares con células SW620 (14% de inhibición en comparación con el control) y células HT29 (22% de inhibición en comparadón con el control) .

Ej emplo 11 . In\ terna li za ción del mu-anti -KID24 y anti -IgG de ra tón conj ugacio con toxina El Mab-ZAP (Adv nced Targeting Systems, San Diego, CA) es un anti-IgG de rratón conjugado con saporina, una toxina que inhibe la sintesis de proteína. Esta toxina es impermeable a la membrana celular. Si una membrana monoclonal se une a un antígeno c e la superficie celular que sea internalizable, el conjug do con la toxina puede unirse al monoclonal unido e internalizarse, matando eventualmente la célula. Depende de la internalización para demostrar actividad tóxica, al Mab-2AP le puede servir para evaluar si o no un antígeno de supe ficie dado servirá como un blanco adecuado para cualquie toxina que dependa de la internalización para expresar efectos tóxicos celulares. Por lo tanto, el Mab-ZAP si ve como modelo para toxinas que dependen de la intern|alización como maitansinoides y caliqueamicinas . Para probar la internalización del mu-anti-KID24 y anti-IgG de ratón conj ugado con saporina por células tumorales y efectuar la eliminación de células tumorales después de la internalización de la saporina, se removió una línea de células de carcihoma de ovario humano ES-2 y líneas de célula de adenocarcinjoma pancreático humano HPAF-II de matraces patrón con 10 mM EDTA y se centrifugaron. Las células fueron resuspendidas a 50,000 células/ml en el medio de crecimiento apropiado y se cultivaron 100 µl por pozo de placas de 96 pozos. Inme iiatamente se agregó anticuerpo de mu-anti-KID24 a los pozos apropiados con un concentrado lOx, para tener una concentraci ón final de 10 µg/ml. después de 15 minutos a temperatura ambi ente, se agregó Mab-ZAP (Cat. # IT- 04) a los pozos apropiados con un concentrado de lOx para obtener una concentración final de 0.001 nM a 10 nM. Después de 4 días de crecimiento, se agregó MTT (5 mg/ml de patrón en PBS, dilución 1:10 en el pozo) durante 4 horas a 37°C. Las placas fueron agitadas usualmente para solubilizar el precipitado de MTT azul, y las placas fueron leídas a un lector de placas a un O.D. 540 nm. Hubo una disminución en la tinción de MTT en las ambas células ES-2 y HPAF II en presencia de mu-anti-KID24 en comparación de la tinción en ausencia mu-anti-KID24 cuando se agregó Mab-ZAP por enpima de 0.01 nM, indicando el crecimiento de las células de cáncer humano ES-2 y HPAF-II fue inhibido en presencia de mu-anti-KID24 y Mab-ZAP y mu-anti-KID24 y anti-IgG ce ratón conjugado con toxina la internalización. Los resultados de un experimento de internalización de acuerdo a los métodos de este Ejemplos se muestran en la Figura 2, mostrando que el mu-anti-KID24 se internalizó .

Ejemplo 12. Efi cacia anti -tumor del anticuerpo mu-anti - KID24 en un Modelo de Flanco Subcutáneo de Tumores Humanos Este estudio se diseñó para probar la actividad antitumor sensible a la dosis para un anticuerpo anti-KID24 en un modelo de flanco subcutáneo usando tumores humanos consistentes de cédulas D5< 4 (línea celular de glioma) . Se suspendieron células D54 cultivadas en Matrigel (libre de rojo de fenol, Becton Dickinson Biosciences Discovery Labware) y solufión de PBS (1:1) a una densidad de 5x 105 células y se implantaron en el flanco de un ratón desnudo via una inyección subcutánea. Al día 19 después de la inoculación, los xenoinjertos resultantes fueron de aproximadamente 100 mm3 y los ratones fueron agrupados aleatoriamente, pesados y tratados con 100 mg/kg de anticuerpo mu-anti-KID24 o Acm control. Los anticuerpos fueron administrados por inyección IP tres veces por semana.

Se dio una inyección de Sham de vehículo al grupo control para igualar la tensión p roducida por la dosis. Los animales fueron examinados diariamente durante el tratamiento y se estimó el volumen medio del tumor (MTV) tres veces por semana. La toxicidad del animal fue evaluada por la determinación de cambios en el peso corporal y mortalidad. Los ratones tra :ados con mu-anti-KID24 tuvieron un tamaño de tumor significativamente menor (aproximadamente 45% menor, p < 0.02) en compairación con los ratones tratados con vveehhííccuulloo yy aannttiiccuueerrppoo ccoonnitrol al final del estudio (42 días después de la inoculacióni) . También se observaron tendencias similares a la dosis de 6C mg/kg de anticuerpo mu-anti-KID24. También se efréctuaron experimentos adicionales usando células de fibrosa , humano, HT1080, en ratones SCID-Beige. Se suspendieron 5x 105 células en PBS y se mezclaron con un volumen igual de Matrigel (libre de rojo de fenol, Becton Dickinson Biosci enees Discovery Labware) y se inocularon en los flancos de ratones SCID-Beige. A los 5 dias después de la inoculacióni, los ratones fueron tratados con inyecciones IP de vehículo (PBS) , 100 mg/kg de anticuerpo control o 100 mg/kg ce anticuerpo mu-anti-KID24. Los volúmenes de tumor se expresaron como la media ± DEM, n = 10 animales/grupo. El por ci .ento de inhibición del crecimiento del tumor de acuerdo a lo medido por el tamaño del tumor se ddeetteerrmmiinnóó aall ffiinnaall ddeell estudio (16 días después de la 1 inoculación) . Los ratones tratados con mu-anti-KID24 tuvieron un tamaño de tumor significa ;ivamente menor (19% más pequeño, p < 0.05) en comparación con los ratones tratados con vehículo y anticuerpo control.

Ejemplo 13. Eficacia anti-tumor y anti-metástasis del anticuerpo mu-anti -KID24_ en un modelo de tumor de cápsula subrenal Este estudio fue diseñado para probar la actividad anti-tumor sensible a la dosis, para un anticuerpo mu-anti-KID24 en un modelo de tumor de cápsula subrenal usando células Merkel cultivadas de un carcinoma de células de Merkel (cáncer neuroendocrriño de piel) . Se preparó colágeno de cola de rata tipo I por un método estándar. De manera breve, las colas de ratas criadas maduras fueron removidas y lo tendones fueron aislados y pesados. Un gramo de tendón produce 100 ml de solución de colágeno, y cada cola produce aproximadamente de 1 a 1.5 gramos de tendón. Para extraer el colágeno, los tendones fueron colocados en una solución de ácido acético diluido (200 µl de ácido acético glacial por gramo de tendón en 100 ml de agua) que conter ia penicilina, estreptomicina, y fungisona y se agitó suavemente a 4°C durante al menos una semana. La solución entonces centrifugada el sobrenadante de colágeno flue almacenado a 4°C hasta su uso. Para este estudio, se prepararon 50 µl de botones de colágeno polimerizando el colágeno de cola de rata en una solución de endurecimiento que tenía solución salina balanceada de Earle ' s Balanced Salt Solution (EBSS) , NaOH y NaHC03. Después de la polimerización, se agregaron 5x 10' células de Merkel por bot ón de colágeno. Las células fueron incubadas en colágeno dir.rante la noche a 37 °C antes del implante. Para el implantre de las células bajo la cápsula renal, los ratones fuerr Dn anestesiados completamente con tribromoetanol. Se hizo una cavidad en la cápsula del riñon para permitir la colocación de las células, lo cual se hizo a través de un método quir irgico paralumbar al riñon derecho y/o izquierdo. En algunos estudios, ambos riñones recibieron xenoinjertos. Después de la cirugía, los animales se dejaron recuperar sobre una superflicie caliente y se observaron hasta que se recuperaron completamente la anestesia. Las grapas de la heridas se removieron 1 0 días después de la cirugía, Para cada grupo de dosis de tratamiento, el mu-anti-KID24 fue diluido en PBS a la concentración apropiada para administrar 0.01 ml/gramo de peso corporal. Los grupos control recibieron PBS (0 01 ml/gramo de peso corporal) . La dosificación fue iniciada el día 2 después del implante, y las dosis de mu-anti-KID24 y PBS control fueron administradas dos veces a la semana, caurante 3 semanas, como inyecciones rápidas individuales en 1 cavidad intraperitoneal Al final del periodo de dosificación, los animales fueron anestesiados y lo tumores y tejido adyacente fueron removidos e incubados en un amortiguador de digestión que contenia proteinasa K (1 45 mg/ml) y ARNasa A (0.07 mg/ml) durante la noche a 55°C peor el análisis por PCR. Para generar un molde para el análisis por PCR, se aisló ADN genómico de tumores usando el sistema de purificación genómico Wiz ard SV (Promega) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Cada muestra de ADN fue resuspendida en un volumer final de 200 µl La cantidad de ADN humano en los tumores fue cuantificada usando PCR en tiempo real en un sistema Applied Biosystems SDS7000, con cebadores y sondas específicas para el gen ribosomal humano REL19. Cada muestra fu e digerida inicialmente con BstXl para asegurar una amplificación eficiente. Cada mezcla de reacción contenia 5 µl de ADN patrón o molde, 5 µl de amortiguador de reacci ón Taqman Gold lOx (Applied Biosystems) , 5 unidades de BstXl, MgCl2 4mM, 2.5 mM de cada mezcla de desoxinucleótido , 250 mM de cada cebador, 150 nM de sonda, 1.5 unidades de Taqgold (Applied Biosystems) y agua hasta un volumen final de: 50 µl . Las condiciones del ciclo térmico usado fueron 30 mr.ñutos a 45°C para la digestión con BstXl, 10 minutos a 95°C ¡para la inactivación con BstXl y Taq caliente inicial, seguido por 40 ciclos de: 95°C durante 20 segundos (desnaturalización) y 60°C durante 1 minuto (alargamiento! Se genera una furva estándar usando diluciones en serie de cuatro veces del ADN genómico humano (BD Biosdences Clonetech) fluctuando de 400 a 0.09 ng de ADN/reacción. Las concentraciones de ADN y muestra fueron interpoladas de la curva estándar. Cada mu estra del tumor fue analizada en reacciones PCR por duplicado y se determinaron las concentraciones de ADN promedio. Para esos experimentos, los tumores de células de Merkel tratados con mu-anti-KID24 a una concentración de 50 mg/kc mostraron una disminución del 50% en la cantidad de ADN humano cuando se compararon con los tumores tratados con PBS control. Se e f ectuarc? n experimentos de cápsula subrenal similares sob re tumores de célula de Merkel establecidos. Las célu las se Merkel fueron tratadas como se describió ante riormente y los tumores fueron implantados como se describió anteriormente. Se permitió que los tumo res crecieran durante 21 días antes de la administración del anticuerpo. A los 21 días después del imp lante del tumor, los ratones fueron dosificados con 50 mg/kg de mu-ant i-KI D24 o PBS control dos veces a la semana durante 3 semanas.

Al final del estudio, los ratones fueron sacrificados y los tumores removido 3. Como se muestra en la Figura 3, los tumores de los ratones tratados con mu-anti-KID24 son significati vamente más pequeños que los tumores encontrados en los ratones tratados con PBS. También fue significa tivo el número de metástasis encontrada en los rato nes tratados con mu-ant i-KI D24 en comparación con loa ratones tratados con PBS. La metástasis puede encontrarse en el omentum, diafragma, bazo, ovario y pulmones de los ratones tratados con PBS. No s; encontraron metástasis en los ratones tratados con mu-anti-KID24. La Figura 4A muestra el omentum de un ratón tratado con PBS. Las flechas /cabe zas de flecha apuntan hacia las metástasis que pueden ser encontradas en el tejido.

La Figura 4B muestra el omentum de un ratón tratado con mu-ant i-KI D24. No pueden ser observadas metástasis (bajo el microscopio de disección) en el te j ido . Debe comprenderse que los ejemplos y modalidades descritos aqui son para pcopósitos ilustrativos únicamente y que varias modificaciones o cambios a la luz de las mismas serán sugeridas por los expertos en la técnica y se incluyen dentro del espíritu y punt o de vista de esta solicitud. Todas las publicaciones, patente s y solicitudes de patentes citadas aquí se incorporan por lo tanto como referencia en su totalidad para todos los propósitos en el mismo grado como si cada publicación individual, patente o solicitud de patente fuera indicada específica e individualmente incorporada como referencia . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invencion, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (21)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Una inmunocflobulina sustancialmente purificada o un fragmento de unión de antígeno de la misma, que se une específicamente al KID24, que se une preferiblemente al mismo epítope sobre el KID24 que se une preferiblemente al anticuerpo mu-anti-KID24 , caracterizada porque tiene al menos una o más de la siguiente? características a. la capacidad de unirse al KID24 sobre una célula cancerosa; b. la capacidad de unirse a una porción del KID24 que está expuesta sobre la superficie de una célula cancerosa viva in vi tro o in vivo; c. la capaci dad de proporcionar un agente terapéutico o marcador de :ectable a una célula cancerosa que expresa KID24 ; y d. la capacidad de liberar el agente terapéutico o mmaarrccaaddoorr ddeetteeccttaabbllee aa uunnaa célula cancerosa que expresa KID24.
2. 2. Una inmunoglobulina purificada o el fragmento de unión de antígeno de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la célula cancerosa se selecciona del grupo que consiste de células cancerosas de tumores de glándula adrenal, cánceres asociados con el SIDA, sarcoma de partes blandas alveolare:s, tumores astrociticos, cáncer de vejiga (carcinoma de céluilas escamosas y carcinoma de células transitorias), cáncer óseo (adamantinoma, quistes óseos aneurismales, osteocondroma, osteosarcoma) , cánceres de cerebro y la médula espinal, tumores cerebrales metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo carótido, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromofóbicas, carcinoma ce células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, histi citomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmoplásicas, ependimomas, tumores ce Ewing, condrosarcoma mixoide extraesquelético, fibrogénesis imperfecta ósea, displasia fibrosa de huesos, cáncer de vejiga y conductos biliares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de abeza y cuello, tumores de células de los islotes, Sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon (nefroblastoma, carcinom de células renales papilares) , leucemias, lipoma/tumores lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de hígado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular), linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adenocarcinoma, carcinoma de células escap osas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, neurobl .estoma, tumores neuroendocrinos, cáncer de ovario, cánceres pancreáticos, carcinomas tiroides papilares, tumores paratiroideos, cánceres pediátricos, tumores del revestimiento nervioso periférico, faeocromocitoma, tumores pituitarios, cáncer de próstata, melanoma unveal posteriolr, trastornos hematológicos raros, cáncer metastásico rena ., tumor rabdoide, rabdomisarcoma, sarcomas, cáncer de piel, sarcomas de tejidos blandos, cáncer de células escamosas, cáificer de estómago, sarcoma sinovial, cáncer testicular, carcinoma tímico, timoma, cáncer metastásico de tiroides y cánceres uterinos (carcinoma del cervix, carcinoma endometrial y leiomioma) .
3. 3. Una secuencia de ácido nucleico aislada, caracterizada porque codifica para la inmunoglobulina o fragmento de unión de ant geno de la misma de conformidad con la reivindicación 1.
4. 4. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el ácido nucleico está ligado operativamente al promotor,
5. 5. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 4, carácter izado porque el promotor y el ácido nucleico están contenidos en un vector de expresión,
6. 6. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la inmunoglobulina es un anticuerpo monoclonal
7. 7. Una línea dé célula transfectada, transformada o infectada con un vector caracterizada porque contiene ácido nucleico de conformidad cpon la reivindicación 3.
8. 8. Un método para producir una inmunoglobulina sustancialmente purificacda o un fragmento de unión de antígeno de la misma, aracterizado porque comprende los pasos de: a. Hacer crecerá una linea celular transformada con el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 3 bajo condiciones en las cuales el polipéptido de la inmunoglobulina o fragfento de unión de antígeno es expresado; y b. Cosechar e L! polipéptido o fragmento de la inmunoglobulina expresada.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la línea celular es un hibridoma.
10. 10. El método d|e conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el hibridoma es ATCC No. PTA # 5174
11. 11. El método dé conformidad con la reivindicación , caracterizado porque la inmunoglobulina es un anticuerpo monoclonal.
12. 12. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una dosis terapéuticamente efectiva de la inmunoglobulina purificada o el fragmento de unión de antígeno de conformidad cojn la reivindicación 1, junto con un soporte farmacéuticamente aceptable
13. 13. Una compo>3ición farmacéutica, caracterizada porque comprende una dos¡is terapéuticamente efectiva de un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión de antígeno del mismo que se une específicamente al KID24, y tiene al menos una de las siguientes cara cteristicas : a. la capacida.d de unirse al KID24 sobre una célula cancerosa; b. la capacidad de unirse a una porción del KID24 que está expuesta sobre la superficie de una célula cancerosa viva in vitro o in vivo; la capad .dad de proporcionar un agente terapéutico o marcador de:ectable a una célula cancerosa que expresa KID24; y d. la capacidad de liberar el agente terapéutico o marcador detectable a una célula cancerosa que expresa KID24; junto con un soporte farmacéuticamente aceptable.
14. 14. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque comprende una porción terapéutica adiciomal .
15. 15. Una linea celular aislada, caracterizada porque consiste de ATCC tío. PTA # 5174, o progenie de las mismas .
16. 16. Un método para liberar un agente quimioterapéutico a una célula cancerosa, caracterizado porque comprende administr ar una composición que comprende un anticuerpo anti-KID24 asociado con el agente quimioterapéutico, donde la célula cancerosa es seleccionada del grupo que consiste cié tumores de la glándula adrenal, células cancerosas de cánceres asociados con el SIDA, sarcoma de partes blandas alveolarres, tumores astrociticos, cáncer de vejiga (carcinoma de células escamosas y carcinoma de células transitorias), cáncer ó >seo (adamantinoma, quistes óseos aneurismales, osteocondrroma, osteosarcoma) , cánceres de cerebro y la médula espinal, tumores cerebrales metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo carótido, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromofóbicas, carcinoma dle células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, histiocitomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmoplásicas, ependimomas, tumores de Ewing, condrosarcoma mixoide extraesquelético, fibrogénesis imperfecta ósea, displasia fibrosa de huesos, canee ;r de vejiga y conductos biliares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de cabeza y cuello, tumores de células de los islotes, Sarcona de Kaposi, cáncer de riñon (nefroblastoma, carcinoma de células renales papilares) , leucemias, lipoma/tumores lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de hígado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular) , linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, neuroblastoma, tumores neuroendocrinos, cáncer de ovario, cancere s pancreáticos, carcinomas tiroides papilares, tumores paratiroideos, cánceres pediátricos, tumores del revest imiento nervioso periférico, faeocromocitoma, tumores pituitarios, cáncer de próstata, melanoma unveal posterior, trastornos hematológicos raros, ccáánncceerr mmeettaassttáássiiccoo rreennaall, tumor rabdoide, rabdomisarcoma, sarcomas, cáncer de piel, sarcomas de tejidos blandos, cáncer de células escamosas, cáncer de estómago, sarcoma sinovial, cáncer testicular, carcinoma tímico, timoma, cáncer cánceres uterinos (carcinoma del cervix, carcinoma endometriial y leiomioma) .
17. 17. El método ce conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente quimioterapéutico es administrado a un individu o.
18. 18. Un método para inhibir el crecimiento de células cancerosas en u i individuo, caracterizado porque comprende administrar al individuo una cantidad efectiva de una composición que comprende un anticuerpo anti-KID24 asociado con un agente quimioterapéutico del individuo, donde las células cancerosas son seleccionadas del grupo que consiste de tumores d¿ la glándula adrenal, células cancerosas de cánceres aisociados con el SIDA, sarcoma de partes blandas alveolares, tumores astrocíticos, cáncer de vejiga (carcinoma de células escamosas y carcinoma de células transitorias) , cáncer óseo (adamantinoma, quistes óseos aneurismales, osteocondroma, osteosarcoma), cánceres de cerebro y la médula espinal, tumores cerebrales metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo carótido, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromofóbicas, carcinoma dlé células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, histiocitomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmoplásicas, ependimomas, tumores dle Ewing, condrosarcoma mixoide extraesquelético, fibrogéinesis imperfecta ósea, displasia fibrosa de huesos, cáncer de vejiga y conductos biliares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de cabeza y cuello, tumores de células de los islotes, Sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon (nefroblastoma, carcinoma de células renales papilares) , leucemias, lipoma/tumbres lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de hígado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular) , linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, neurobl astoma, tumores neuroendocrinos, cáncer de ovario, cancere s pancreáticos, carcinomas tiroides papilares, tumores parátiroideos, cánceres pediátricos, tumores del revest|imiento nervioso periférico, faeocromocitoma, tumores pituitarios, cáncer de próstata, melanoma unveal posterior, trastornos hematológicos raros, cáncer metastásico renal , tumor rabdoide, rabdomisarcoma, sarcomas, cáncer de piel, sarcomas de tejidos blandos, cáncer de células escamosas, car cer de estómago, sarcoma sinovial, cáncer testicular, carcinoma tímico, timoma, cáncer metastático de tiroides y cánceres uterinos (carcinoma del cervix, carcinoma endometrial y leiomioma) .
19. 19. El método ce conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el agente quimioterapéutico es llevado a las células canoerosas .
20. 20. El método díe conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo anti-KID24 es un anticuerpo monoclonal expresado por el hibridoma ATCC No. PTA # 5174 o progenie del mismo.
21. 21. Un método para detectar la presencia o ausencia de una célula cancerosa en un individuo, caracterizado porque comprende poner en contacto las células del individuo con un anticuerpo anti-KID24 y detectar un complejo KID24 de células y el anticuerpo, si lo hay, donde la célula cancerosa es seleccionada del grupo que consiste de tumores de la glándula adrenal, células cancerosas de cánceres asociados con e¡l SIDA, sarcoma de partes blandas alveolares, tumores astrotbíticos, cáncer de vejiga (carcinoma de células escamosas y carcinoma de células transitorias), cáncer óseo (adamantinoma, quistes óseos aneurismales, osteocondroma, osteosarcona) , cánceres de cerebro y la médula espinal, tumores cerebra Les metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo carótido, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromofóbicas, carcinoma de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, histiocitomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmo]plásicas, ependimomas, tumores de Ewing, condrosarcoma mi?? ide extraesquelético, fibrogénesis imperfecta ósea, displasia fibrosa de huesos, cáncer de vejiga y conductos bi liares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de cabeza y cuello, tumores de células de los islotes, Sarcoma de Kaposi, cáncer de r Lñón (nefroblastoma, carcinoma de células renales papila res) , leucemias, lipoma/tumores lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de hígado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular) , linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adeno carcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina o marcador detectable en una célula cancerosa que exprese KID24. 23. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una dosis terapéuticamente efectiva de un agente de conformidad con la reivindicación 22, junto con un soporte farmacéuticamente aceptable , 24. El modulador de KID24 de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de vajriantes de KID24, antagonistas del péptido KID24, peptidjomiméticos, moléculas pequeñas, anticuerpos anti-KID24 y variantes de inmunoglobulina, variantes de aminoácidos del KID24 humano incluyendo variantes de sustitución, supresión y adición de aminoácidos, o cualquier combinación de las mismas, e inmunoglobulinas quiméricas . 25. Un método para prevenir o retrasar el desarrollo de metástasis en un individuo que ha tenido un tumor primario, caracterizado porque comprende la administración de la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23. 26. El método dé conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la composición farmacéutica comprende una porción de diagnóstico o terapéutica adicional. 27. El método d5 conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el tumor primario ha sido tratado 1 7 previamente por cirugía, radiación o quimioterapia. 28. El método qe conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el tumor primario es seleccionado del grupo que consiste cle tumores de la glándula adrenal, cánceres asociados con e1 SIDA, sarcoma de partes blandas alveolares, tumores astrocíticos, cáncer de vejiga (carcinoma de células escamosas y carcinoma de células transitorias), cáncer óseo (adamantincma, quistes óseos aneurismales, osteocondroma, osteosarcoma) , cánceres de cerebro y la médula espinal, tumores cerebra Les metastásicos, cáncer de mama, tumores del cuerpo caróti do, cáncer cervical, condrosarcoma, dordoma, carcinoma de células renales cromofóbicas, carcinoma de células claras, cáncer de colon, cáncer colorrectal, histiocitomas fibrosos benignos cutáneos, tumores de células redondas pequeñas desmoplásicas, ependimomas, tumores de Ewing, condrosarcoma mixcide extraesquelético, fibrogénesis imperfecta ósea, displasia fibrosa de huesos, cáncer de vejiga y conductos biliares, enfermedad trofoblástica gestacional, tumores de células germinales, cánceres de cabeza y cuello, tumores de células de los islotes, Sarcoma de Kaposi, cáncer de riñon (nefroblastoma, carcinoma de células renales papilares) , leucemias, lipoma/tumores lipomatosos benignos, liposarcoma/tumores lipomatosos malignos, cáncer de hígado (hepatoblastoma, carcinoma hepatocelular), linfomas, cánceres de pulmón (carcinoma de células pequeñas, adenc carcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células grandes, etc.), meduloblastoma, melanoma, meningiomas, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, neuroblastoma, tumores neuroendocrinos, cáncer de ovario, cánceres pancreáticos, carcinomas tiroides papilares, tumores paratiroideos, cánceres pediátricos, tumores del revestimiento nervioso periférico, faeocromocitoma, tumores pituitarios, cáncer de próstata, melanoma unveal posterior, trastornos hematológicos raros, cáncer metastásico renal, tumor rabdoide, rabdomisárcoma, sarcomas, cáncer de piel, sarcomas de tejidos blandos, cáncer de células escamosas, cáncer de estómago, sar ;• rroma sinovial, cáncer testicular, carcinoma tímico, timoma, cáncer metastásico de tiroides y cánceres uterinos (carcinoma del cervix, carcinoma endometrial y leiomioma) .