MX2007001509A

MX2007001509A - Antagonismo de la actividad del receptor de interleuquina 21.

Info

Publication number: MX2007001509A
Application number: MX2007001509A
Authority: MX
Inventors: Mary Collins; Matthew J Whitters; Deborah A Young; Marion T Kasaian; Kyriaki Dunussi-Joannopoulos; Richard Michael O'hara Jr
Original assignee: Wyeth Corp
Priority date: 2004-08-05
Filing date: 2005-08-05
Publication date: 2007-03-27
Also published as: AU2005332996A1; KR20070057789A; IL181044A0; JP2008508885A; NO20070973L; ECSP077226A; US20080241098A1; WO2006135385A3; WO2006135385A2; RU2007102287A; EP1773394A2; US20060039902A1; AR051071A1; TW200608995A; BRPI0514138A; CR8891A; CA2574848A1

Abstract

Se describen metodos y composiciones para inhibir la actividad de la interleuquina-21 (IL-21)/el receptor de IL-21 (MU-1) usando antagonistas de IL-21 o del receptor IL-21 ("IL-21R" o "MU-1"). Los antagonistas de IL-21/IL-21R pueden usarse para inducir la supresion inmune in vivo, por ejemplo, para tratar, mejorar o prevenir los trastornos autoinmunes inflamatorios, incluyendo, por ejemplo, la enfermedad intestinal inflamatoria (IBD), la artritis reumatoide (RA), el rechazo de transplantes/injertos, la soriasis, el asma, la fibrosis y el lupus eritematoso sistemico (SLE).

Description

ANTAGONISMO DE LA ACTIVIDAD DEL RECEPTOR DE INTERLEUQUINA 21 Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de los EEUU con N° de Acta 60/599086, presentada el 5 de Agosto de 2004, y la Solicitud Provisional de los EEUU con N° de Acta 60/639176, presentada el 23 de Diciembre de 2004, ambas incorporadas por completo en la presente documentación a modo de referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con métodos y composiciones para antagonizar, reducir y/o inhibir la actividad del receptor de interleuquina-21 (IL-21 )/IL-21 (MU-1) usando antagonistas de receptores IL-21. Los métodos y las composiciones descriptas en la presente documentación son útiles como agentes inmunoterapéuticos. - ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La IL-21 humana es una citoquina que tiene homología de secuencia con IL-2, IL-4 e IL-15 (Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63). A pesar de la homología de secuencia reducida entre las citoquinas tipo interleuquina, las citoquinas comparten un plegamiento común en una estructura de "haz de cuatro hélices" que es representativa de la familia. La mayor parte de las citoquinas se unen a receptores de citoquina clase I o clase II. Los receptores de citoquina clase II incluyen los receptores de IL-10 y los interferones, mientras que los receptores de citoquina clase I incluyen los receptores de IL-2 a IL-7, IL-9, IL-11 , IL-12, IL-13 e IL-15, así como los factores de crecimiento hematopoyético, la leptina y la hormona de crecimiento (Cosman (1993) Cytokine 5:95-106). El receptor de IL-21 humano (IL-21 R) es un receptor de citoquina clase I que se expresa en tejidos linfoides, en particular en células NK, B y T (Parhsh-Novak et al. (2000) supra). Se describen las secuencias de nucleótidos y aminoácidos que codifican la interleuquina 21 (IL-21) humana y su receptor (IL-21R) en WO 00/53761 ; WO 01/85792; Parrish-Novak et al. (2000) supra; y Ozaki et al. (2000) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 97:11439-44. IL-21R tiene la mayor homología de secuencia con la cadena ß del receptor de IL-2 y la cadena a del receptor de IL-4 (Ozaki et al. (2000) supra). Al unirse el ligando, IL-21 R se asocia con la cadena gamma común del receptor de citoquina (?c), que es compartida por los receptores de IL-2, IL-3, IL-4, IL-7, IL-9, IL-13 e IL-15 (Ozaki et al. (2000) supra; Asao et al. (2001) J. Immunol. 167:1-5). La distribución linfoide dispersa de IL-21 R sugiere que IL-21 puede participar en la regulación inmune. Más aún, los estudios in vitro han demostrado que IL-21 modula significativamente la función de las células B, las células T CD4+ y CD8+, y las células NK (Parrish-Novak et al. (2000) supra; Kasaian et al. (2002) Immunity. 16:559-69). Aún así, la evidencia que apoya el efecto regulador de IL-21 in vivo es limitada.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se describen métodos y composiciones para interferir con la actividad y/o la interacción entre la interleuquina-21 (IL-21) y un receptor de IL-21 (también conocido en la presente documentación como "IL-21 R" o "MU-1"), por ejemplo, usando antagonistas de IL-21 o IL-21 R (también conocidos en la presente documentación como "antagonistas de IL-21/IL-21 R", "antagonistas" o "antagonistas de la vía de IL-21/IL-21 R"). Por ejemplo, los solicitantes han demostrado que la reducción de la actividad de IL-21 R usando un antagonista de IL-21 , por ejemplo, una proteína de fusión que incluye el dominio extracelular de IL-21 R fusionado a una región de inmunoglobulina Fc, mejora los síntomas inflamatorios en varios modelos animales diferentes, útiles para predecir razonablemente los trastornos inflamatorios y/o autoinmunes, tales como la enfermedad intestinal inflamatoria (IBD), la artritis reumatoide (RA), el rechazo de transplantes/injertos, la enfermedad del injerto versus el huésped, el asma, el lupus eritematoso sistémico (SLE) (incluyendo una forma de glomerulonefritis), y la psoriasis (Ejemplos 7-14). La expresión del ARNm de IL-21 R es regulada positivamente en las patas de ratones con artritis inducida por colágeno (CÍA) (Ejemplo 8). Además, un ratón con deficiencia de IL-21 R presentó una reducción de los síntomas en un modelo de asma (Ejemplo 12).

Por consiguiente, pueden usarse antagonistas de la actividad de IL-21/IL-21 R para inducir la supresión inmune in vivo, por ejemplo, para tratar o prevenir trastornos inflamatorios o autoinmunes. Estos antagonistas también pueden usarse para tratar o prevenir un trastorno inmune asociado a células, por ejemplo, un trastorno asociado con la actividad aberrante de una o más células T maduras (por ejemplo, células T CD8+ o CD4+ maduras), células NK maduras, células B, macrófagos y megacariocitos. Por consiguiente, en un aspecto, la invención proporciona un método para tratar (por ejemplo, curar, suprimir, demorar), mejorar (por ejemplo, disminuir, aliviar, reducir, aminorar) y/o prevenir (por ejemplo, prevenir el inicio, prevenir la ocurrencia o el relapso) de un trastorno inflamatorio o autoinmune en un sujeto. El método incluye: administrar al sujeto un antagonista de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, en una cantidad suficiente para tratar, mejorar o prevenir el trastorno, o en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad de las células inmunes y/o la cantidad de dichas células. El antagonista de IL-21/IL-21 R puede administrarse al sujeto solo o en combinaciones de antagonistas de IL-21/IL-21 R, o en combinación con otras modalidades terapéuticas, como se describe en la presente documentación. Preferiblemente, el sujeto es un mamífero, por ejemplo, un ser humano, que sufre o está en riesgo de contraer un trastorno inflamatorio o autoinmune. Por ejemplo, puede usarse el método para tratar o prevenir un trastorno inflamatorio o autoinmune en un sujeto. Los ejemplos de estos trastornos incluyen, sin limitaciones, el rechazo de transplantes/injertos; la diabetes mellitus (por ejemplo, de tipo I); la esclerosis múltiple; un trastorno artrítico (por ejemplo, artritis reumatoide (RA), la artritis reumatoide juvenil, la osteoartritis, la artritis psoriática, o la espondilitis anquilosante (preferiblemente la RA)); la miastenia gravis; la vasculitis; el lupus eritematoso sistémico (SLE); la glomerulonefritís; la tiroiditis autoinmune; un trastorno inflamatorio cutáneo (por ejemplo, la dermatitis (incluyendo la dermatitis atópica y la dermatitis eccematosa), el escleroderma, o la psoriasis); el lupus eritematoso; una fibrosis o un trastorno fibrótico (por ejemplo, la fibrosis pulmonar o la fibrosis hepática); un trastorno respiratorio (por ejemplo, el asma o la COPD); un trastorno atópico (por ejemplo, incluyendo la alergia); o un trastorno inflamatorio intestinal (por ejemplo, una IBD, por ejemplo, la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerativa). Se prefiere el tratamiento de un trastorno seleccionado entre el lupus eritematoso, un trastorno inflamatorio cutáneo (por ejemplo, la psoriasis), un trastorno inflamatorio intestinal (por ejemplo, la IBD, la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerativa), el rechazo de transplantes/injertos, el asma, un trastorno atópico, o la artritis reumatoide, usando los antagonistas de IL-21 o IL-21 R de la presente invención. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21 R interactúa, por ejemplo, se une a un IL-21 o un IL-21 R, preferiblemente de mamífero, por ejemplo, un IL-21 o un IL-21 R humano (conocido en la presente documentación como "antagonista de IL-21" y "antagonista de IL-21 R", respectivamente), y reduce o inhibe una o más actividades de IL-21 y/o IL-21 R. Los antagonistas preferidos se unen a IL-21 o IL-21 R con gran afinidad, por ejemplo, con una afinidad constante de al menos aproximadamente 107 M"1, preferiblemente aproximadamente 108 M"1, y más preferiblemente aproximadamente entre 109 M"1 y 1010 M"1 o mayor. Por ejemplo, un antagonista de IL-21/IL-21 R puede reducir y/o inhibir la actividad de IL-21 R neutralizando IL-21. En una realización, el antagonista puede ser una proteína de fusión que incluye un fragmento de un IL-21 R fusionado a un fragmento que no pertenece a IL-21 R, por ejemplo, una región de inmunoglobulina Fc. En otras realizaciones, el antagonista es un anticuerpo anti-IL-21R o anti-IL-21 , o un fragmento de unión a antígeno de este, una forma soluble del receptor IL-21 , un péptido o una pequeña molécula inhibidora. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21R es un anticuerpo anti-IL-21 R o anti-IL-21 , o un fragmento de unión a antígeno de este; por ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o con una única especificidad que se une a un IL-21 , por ejemplo, un IL-21 , o un receptor de IL-21 humano, por ejemplo, un polipéptido de un receptor de IL-21 humano, o una porción de unión a antígeno de éste (por ejemplo, Fab, F(ab')2, Fv o un fragmento Fv de cadena simple). Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo humano, humanizado, quimérico o generado in vitro de un IL-21 humano o un polipéptido de un receptor de IL-21 humano. Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo neutralizador.

En otras realizaciones, el antagonista de IL-21/IL-21 R incluye la totalidad o un fragmento de un polipéptido de IL-21 , por ejemplo, un dominio inhibidor de la unión al receptor de IL-21 de un polipéptido de IL-21 , por ejemplo, un polipéptido de IL-21 humano (por ejemplo, un polipéptido de IL-21 humano como se describe en la presente documentación que tiene una secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID N° 19), o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella; o codificado por una secuencia de nucleótidos correspondiente indicada en SEQ ID N° 18, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. Como alternativa, el antagonista incluye la totalidad (por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-538 o 20-538 de SEQ ID N° 2; o aproximadamente entre los aminoácidos 1-529 o 20-529 de SEQ ID N° 10), o un fragmento de un polipéptido de un receptor de IL-21 , por ejemplo, un dominio de unión a IL-21 de un polipéptido de un receptor de IL-21 , por ejemplo, un fragmento soluble de un IL-21 R (por ejemplo, un fragmento de un IL-21 R que comprende el dominio extracelular de un IL-21 R murino o humano; por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2 (humano), o aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-236 de SEQ ID N° 10 (murino), o codificado por los nucleótidos correspondientes de SEQ ID N° 1 o 9, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. En una realización, el antagonista es una proteína de fusión que comprende los polipéptidos de IL-21 o el receptor de IL-21 mencionados, o fragmentos de éstos, por ejemplo, fusionados a una segunda porción, por ejemplo, un polipéptido (por ejemplo, una cadena de inmunoglobulina, una secuencia de un polipéptido GST, Lex-A o MBP). En una realización preferida, la proteína de fusión incluye al menos un fragmento de un polipéptido IL-21 R capaz de unirse a IL-21 , por ejemplo, un fragmento soluble de un IL-21 R (por ejemplo, un fragmento de un IL-21R que comprende el dominio extracelular de IL-21 R murino o humano, por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2 (humano), o aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-236 de SEQ ID N° 10 (murino), o codificado por los nucleótidos correspondientes de SEQ ID N° 1 o 9, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella), por ejemplo, fusionado a una segunda porción, por ejemplo, un polipéptido (por ejemplo, una cadena de inmunoglobulina, un fragmento Fc, la región constante de la cadena pesada de varios isotipos, incluyendo lgG1 , lgG2, lgG3, lgG4, IgM, lgA1 , lgA2, IgD e IgE). Por ejemplo, la proteína de fusión puede incluir el dominio extracelular de IL-21R humano, por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1- 235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2, por ejemplo, fusionado a una cadena de inmunoglobulína Fc humana (por ejemplo, IgG humana, por ejemplo, lgG1 humana, por ejemplo, una lgG1 humana de ocurrencia natural o una forma mutada de lgG1 humana). En una realización, la secuencia Fc humana ha sido mutada en uno o más aminoácidos, por ejemplo, mutada en los residuos 254 y 257 de SEQ ID N° 28 a partir de la secuencia de ocurrencia natural, para reducir la unión al receptor Fc. En otras realizaciones, la proteína de fusión puede incluir el dominio extracelular de un IL-21 R murino, por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-235 de SEQ ID N° 10 (murino), por ejemplo, fusionado a una cadena de inmunoglobulina Fc murina (por ejemplo, IgG murina, por ejemplo, lgG2a murina o una forma mutada de lgG2a murina). Las proteínas de fusión también pueden incluir una secuencia conectora que une la primera porción, por ejemplo, un fragmento IL-21 R, con la segunda porción, por ejemplo, el fragmento de inmunoglobulina. En otras realizaciones, pueden agregarse secuencias de aminoácidos adicionales al extremo N o C de la proteína de fusión para facilitar la expresión, la flexibilidad estérica, la detección y/o el aislamiento o la purificación. Se detallan ejemplos de proteínas antagonistas de fusión que pueden usarse en los métodos de la invención en las FIGS. 7-15. En una realización, la proteína de fusión incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada, por ejemplo, entre SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, SEQ ID N° 31 , SEQ ID N° 33, SEQ ID N° 35, SEQ ID N° 37 o SEQ ID N° 39, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. En otras realizaciones, la proteína de fusión incluye una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada, por ejemplo, entre SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, SEQ ID N° 32, SEQ ID N° 34, SEQ ID N° 36 o SEQ ID N° 38, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. Las proteínas de fusión preferidas tienen la secuencia de aminoácidos indicada como SEQ ID N° 25 o SEQ ID N° 29 (FIGS. 8A-8C y 10A-10C, respectivamente), o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. En otras realizaciones, la proteína de fusión incluye una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótídos seleccionada, por ejemplo, entre SEQ ID N° 24 o SEQ ID N° 28 (FIGS. 8A-8C y 10A-10C, respectivamente), o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. Más preferiblemente, la proteína de fusión tiene la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID N° 29, o tiene una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID N° 28 (FIG. 10A-10C). El antagonista de IL-21/IL-21R que se describe en la presente documentación, por ejemplo, la proteína de fusión descripta en la presente documentación, puede derivatizarse o unirse a otra molécula funcional, por ejemplo, otro péptido u otra proteína (por ejemplo, un fragmento Fab'). Por ejemplo, la proteína de fusión o un anticuerpo, o una porción de unión a antígenos, puede unirse en forma funcional (por ejemplo, por unión química, fusión genética, asociación no covalente u otros medios) con una o más entidades moleculares adicionales, tales como un anticuerpo (por ejemplo, un anticuerpo biespecífico o multiespecífico), toxinas, radioisótopos, agentes citotóxicos o citostáticos, entre otros. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21R que se describe en la presente documentación, por ejemplo, las composiciones farmacéuticas de éste, se administra en una terapia de combinación, es decir, combinado con otros agentes, por ejemplo, agentes terapéuticos útiles para tratar trastornos inflamatorios o autoinmunes, por ejemplo, un trastorno seleccionado entre uno o más de los siguientes: un trastorno artrítico (incluyendo la RA, la artritis reumatoide juvenil, la osteoartritis, la artritis psoriática o la espondilitis anquilosante); la SLE; la glomerulonefritis; un trastorno inflamatorio cutáneo (por ejemplo, psoriasis); un trastorno respiratorio (por ejemplo, asma, COPD); un trastorno atópico; un trastorno fibrótico (por ejemplo, fibrosis pulmonar o fibrosis hepática); un trastorno inflamatorio intestinal (por ejemplo, una IBD, por ejemplo, la enfermedad de Crohn o la colitis ulcerativa); o el rechazo de transplantes/injertos. Por ejemplo, la terapia de combinación puede incluir uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, un anticuerpo anti-IL-21 o anti-IL-21 R, o una porción de unión a antígeno de éste; una proteína de fusión IL-21R; una receptor IL-21 R soluble; un inhibidor peptídico o una pequeña molécula inhibidora, coformulados con él, y/o coadministrados con él, uno o más agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo, uno o más inhibidores de citoquinas y factores de crecimiento, inmunosupresores, agentes antiinflamatorios, inhibidores metabólicos, inhibidores enzimáticos y/o agentes citotóxicos o citostáticos, como se describe en la presente documentación. Los ejemplos de agentes terapéuticos adicionales preferidos que pueden coadministrarse y/o coformularse con uno o más antagonistas de IL- 21/IL-21 R incluyen, sin limitaciones, uno o más de los siguientes: antagonistas de TNF (por ejemplo, anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro, o fragmentos de unión a antígeno de éstos, que se unen a TNF; fragmentos solubles de un receptor de TNF, por ejemplo, el receptor de TNF p55 o p75 humano o derivados de éste, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™), proteína de fusión del receptor de TNF p55 kDa e IgG; antagonistas enzimáticos de TNF, por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE)); antagonistas de IL-6, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22; agentes debilitantes de células T y B (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 o antí-CD22); pequeñas moléculas inhibidoras, por ejemplo, metotrexato y leflunomida; sirolimus (rapamicina) y análogos de éstas, por ejemplo, CCI-779; Cox-2 e inhibidores de cPLA2; NSAID; inhibidores de p38, TPL-2, Mk-2 e inhibidores de NFPb; RAGE o RAGE soluble; P-selectina o inhibidores de PSGL-1 (por ejemplo, pequeñas moléculas inhibidoras, anticuerpos contra éstas, por ejemplo, anticuerpos contra P-selectina); agonistas del receptor de estrógeno beta (ERB) o antagonistas de ERB-NF?b. Los agentes terapéuticos adicionales más preferidos que pueden coadministrarse y/o coformularse con uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: un fragmento soluble de un receptor de TNF, por ejemplo, un receptor de TNF humano p55 o p75, o derivados de éste, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™); metotrexato, leflunomida o un sirolimus (rapamicina) o un análogo de ésta, por ejemplo, CCI-779.

En otro aspecto, se proporciona un método para reducir la actividad de una célula inmune (por ejemplo, la actividad de una o más de las siguientes: una célula T madura (CD8+ madura, CD4+, célula T de nodo linfático, célula T de memoria), una célula NK madura, una célula B, una célula presentadora de antígenos (APC), por ejemplo, una célula dendrítica, un macrófago, un megacariocito o una población de células, por ejemplo, una población de células inmunes mixtas o sustancialmente purificadas. El método incluye poner en contacto la célula inmune con un antagonista de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, un antagonista como se describe en la presente documentación, en una cantidad suficiente para disminuir la actividad de la célula inmune. En otro aspecto, la invención proporciona una proteína de fusión que incluye al menos un fragmento de un polipéptido IL-21 R, que es capaz de unirse a un polipéptido de IL-21 , por ejemplo, un fragmento soluble de un IL-21 R (por ejemplo, un fragmento de un IL-21R que comprende el dominio extracelular de IL-21R murino o humano; por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2 (humano), o aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-236 de SEQ ID N° 10 (murino), o codificado por los nucleótidos correspondientes de SEQ ID N° 1 o SEQ ID N° 9, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella), por ejemplo, fusionada a una segunda porción, por ejemplo, un polipéptido (por ejemplo, una cadena de inmunoglobulina, un fragmento Fc, una región constante de cadenas pesadas de varios isotipos, incluyendo lgG1 , lgG2, lgG3, lgG4, IgM, lgA1 , lgA2, IgD, y IgE). Por ejemplo, la proteína de fusión puede incluir el dominio extracelular del IL-21 R humano, por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2, por ejemplo, fusionado a una cadena de inmunoglobulina Fc humana (por ejemplo, IgG humana, por ejemplo, lgG1 humana o una forma mutada de la lgG1 humana). En una realización, se ha mutado la secuencia Fc humana en uno o más aminoácidos, por ejemplo, se la ha mutado en los residuos 254 y 257 de SEQ ID N° 28, respecto de la secuencia tipo salvaje, para reducir la unión al receptor Fc. En otras realizaciones, la proteína de fusión puede incluir el dominio extracelular del IL-21R murino, por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-236 de SEQ ID N° 10 (murino), por ejemplo, fusionado a una cadena de inmunoglobulina Fc murina (por ejemplo, IgG murina, por ejemplo, lgG2a murina o una forma mutada de la lgG2a murína). Las proteínas de fusión pueden incluir adicíonalmente una secuencia conectora que una el fragmento IL-21 R con la segunda porción. En otras realizaciones, pueden agregarse secuencias de aminoácidos adicionales a los extremos N o C de la proteína de fusión para facilitar la expresión, la detección y/o el aislamiento o la purificación. La invención también proporciona secuencias de ácidos nucleicos que codifican las proteínas de fusión descriptas en la presente documentación. En otro aspecto, la invención proporciona células huésped y vectores que contienen los ácidos nucleicos de la invención. Preferiblemente, la célula huésped es una célula eucariota, por ejemplo, una célula de mamífero, una célula de insecto, o una célula de levadura, o una célula procariota, por ejemplo, E. coli. Por ejemplo, la célula de mamífero puede ser una célula cultivada o una línea celular. Los ejemplos de células de mamíferos incluyen las líneas de células linfocíticas (por ejemplo, NSO), las células de ovario de hámster chino (CHO), las células COS, las células de oocitos y las células de un animal transgénico, por ejemplo, células epiteliales mamarias. Por ejemplo, los ácidos nucleicos que codifican las proteínas de fusión descriptas en la presente documentación pueden expresarse en un animal transgénico. En una realización, se colocan los ácidos nucleicos bajo el control de un promotor con especificidad tisular (por ejemplo, un promotor con especificidad mamaria) y el anticuerpo se produce en un animal transgénico. Por ejemplo, la proteína de fusión se secreta en la leche del animal transgénico, tal como una vaca, un cerdo, un caballo, una oveja, una cabra o un roedor transgénico. En otro aspecto, la invención provee un proceso para producir una proteína de fusión, por ejemplo, una proteína de fusión como se describe en la presente documentación. El proceso comprende: (a) desarrollar un cultivo de la célula huésped de la presente invención en un medio de cultivo apropiado y (b) purificar la proteína de fusión a partir del cultivo. También se proporcionan las proteínas producidas de acuerdo con estos métodos. En otro aspecto, la invención provee composiciones, por ejemplo, composiciones farmacéuticas, que incluyen un vehículo aceptable para el uso farmacéutico y al menos uno de los antagonistas de IL-21/IL-21 R que se describen en la presente documentación (por ejemplo, una proteína de fusión descripta en la presente documentación). En una realización, las composiciones, por ejemplo, las composiciones farmacéuticas, comprenden una combinación de dos o más antagonistas de IL-21/IL-21 R. Las combinaciones de los antagonistas de IL-21/IL-21 R y una droga, por ejemplo, un agente terapéutico (por ejemplo, una o más citoquinas e inhibidores de factores de crecimiento, inmunosupresores, agentes antiinflamatorios, inhibidores metabólicos, inhibidores enzimáticos, y/o agentes citotóxicos o citostáticos, como se describe en la presente documentación) o un antígeno, por ejemplo, un péptido antigénico y/o una célula presentadora de antígenos, también están dentro del alcance de la invención. En una realización, la composición farmacéutica incluye un antagonista de IL-21/IL-21 R y al menos un agente terapéutico adicional en un vehículo aceptable para el uso farmacéutico. Los ejemplos de agentes terapéuticos adicionales preferidos que pueden coformularse en una composición, por ejemplo, una composición farmacéutica, con uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R, incluyen, sin limitaciones, uno o más de los siguientes: antagonistas de TNF (por ejemplo, anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro, o fragmentos de unión a antígeno de éstos, que se unen a TNF; fragmentos solubles de un receptor de TNF, por ejemplo, el receptor de TNF p55 o p75 humano o derivados de éste, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™), proteína de fusión del receptor de TNF p55 kDa e IgG; antagonistas enzimáticos de TNF, por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE)); antagonistas de I L-6, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22; agentes debilitantes de células T y B (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 o anti-CD22); pequeñas moléculas inhibidoras, por ejemplo, metotrexato y leflunomida; sirolimus (rapamicina) y análogos de éstas, por ejemplo, CCI-779; Cox-2 e inhibidores de cPLA2; NSAID; inhibidores de p38, TPL-2, Mk-2 e inhibidores de NFPb; RAGE o RAGE soluble; P-selectina o inhibidores de PSGL-1 (por ejemplo, pequeñas moléculas inhibidoras, anticuerpos contra éstas, por ejemplo, anticuerpos contra P-selectina); agonistas del receptor de estrógeno beta (ERB) o antagonistas de ERB-NF b. Los agentes terapéuticos adicionales más preferidos que pueden coadministrarse y/o coformularse con uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: un fragmento soluble de un receptor de TNF, por ejemplo, un receptor de TNF humano p55 o p75, o derivados de éste, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™); metotrexato, leflunomida o un sirolimus (rapamicina) o un análogo de ésta, por ejemplo, CCI-779. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar, mejorar o prevenir un trastorno atópico en un sujeto, por ejemplo, un mamífero, por ejemplo, un ser humano. El método incluye administrar al sujeto un antagonista de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, en una cantidad suficiente para tratar, mejorar o prevenir el trastorno, o en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad de las células inmunes y/o la cantidad de dichas células. En una realización, el trastorno atópico es asma alérgico. En otra realización, el trastorno atópico es dermatitis atópica, urticaria, eccema, rinitis alérgica o enterogastritis alérgica. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21 R puede administrarse en combinación con otro agente terapéutico, por ejemplo, un inhibidor de citoquina, un inmunosupresor, un agente antiinflamatorio, un inhibidor enzimático, un antagonista de leucotrieno, un broncodilatador, un agonista del adrenoceptor beta 2, un antimuscarínico o un estabilizador de los mastocitos. Los ejemplos de agentes terapéuticos preferidos que pueden administrarse en combinación con un antagonista de IL-21/IL-21 R para tratar, mejorar o prevenir un trastorno atópico incluyen, por ejemplo, antagonistas de TNF, antagonistas de IL-6, antagonistas de IL-12, antagonistas de IL-15, antagonistas de IL-17, antagonistas de IL-18, antagonistas de IL-22, agentes debilitantes de células T, agentes debilitantes de células B, metotrexato, leflunomida, sirolímus (rapamicína) o análogos de éstos, inhibidores de Cox-2, inhibidores de cPLA2, NSAID e inhibidores de p38. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar, mejorar o prevenir un trastorno autoinmune en un sujeto. El método incluye: administrar al sujeto un antagonista de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, en una cantidad suficiente para tratar, mejorar o prevenir el trastorno, o en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad de las células inmunes y/o la cantidad de dichas células. En una realización, el trastorno autoinmune es lupus, por ejemplo, SLE. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21 R puede administrarse en combinación con otro agente terapéutico, por ejemplo, un inhibidor de citoquína, un inhibidor de factores de crecimiento, un inmunosupresor, un agente antíinflamatorio, un inhibidor metabólico, un inhibidor enzimático, un agente citotóxico o un agente citostático. Los ejemplos de agentes terapéuticos preferidos que pueden administrarse en combinación con un antagonista de IL-21/IL-21 R para tratar, mejorar o prevenir un trastorno autoinmune incluyen, por ejemplo, antagonistas de TNF, antagonistas de IL-6, antagonistas de IL-12, antagonistas de IL-15, antagonistas de IL-17, antagonistas de IL-18, antagonistas de IL-22, agentes debilitantes de células T, agentes debilitantes de células B, cloroquina, hidroxicloroquina, metotrexato, leflunomida, sirolimus (rapamicina) o análogos de éstos, inhibidores de Cox-2, inhibidores de cPLA2, NSAID e inhibidores de p38. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar, mejorar o prevenir un trastorno fibrótico en un sujeto. El método incluye: administrar al sujeto un antagonista de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, en una cantidad suficiente para tratar, mejorar o prevenir el trastorno, o en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad de las células inmunes y/o la cantidad de dichas células. Por ejemplo, el sujeto puede padecer o estar en riesgo de contraer fibrosis en un órgano interno (por ejemplo, fibrosis hepática, fibrosis renal o fibrosis pulmonar), un trastorno fibrótico dérmico o una condición fibrótica ocular. En otro aspecto, la invención proporciona un método para transplantar o injertar órganos, tejidos o células a un sujeto. El método incluye administrar al sujeto un antagonista de IL-21/IL-21R, por ejemplo, antes, durante o después del transplante o el injerto. Los órganos y tejidos transplantados/injertados pueden incluir, sin limitaciones, por ejemplo, corazón, riñon, hígado, pulmón, páncreas, médula ósea, cartílago, córnea, tejido neuronal y células de éste. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21 R se administra en combinación con otro agente terapéutico, por ejemplo, un inhibidor de citoquina, un inhibidor de factores de crecimiento, un inmunosupresor, un agente antiinflamatorio, un inhibidor metabólico, un inhibidor enzimático, un agente citotóxico y un agente citostátíco. Los ejemplos de agentes terapéuticos preferidos que pueden administrarse en combinación con los antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen, por ejemplo, rapamicina, ciclosporina, anticuerpos anti-CTLA-4, anticuerpos anti-CD40, anticuerpos anti-CD40L y anticuerpos anti-CD154. En otro aspecto, la invención proporciona un método para evaluar y tratar los síntomas del rechazo de transplantes/injertos, o un trastorno asociado con el rechazo de transplantes/injertos, por ejemplo, la fibrosis o la enfermedad del injerto versus el huésped (GVHD), en un receptor de transplantes/injertos. El método incluye identificar un sujeto con síntomas de rechazo de transplantes/injertos y administrar un antagonista de IL-21/IL- 21 R, por ejemplo, en una cantidad suficiente para tratar o mejorar los síntomas del rechazo de transplantes. Los síntomas del rechazo de transplantes/injertos incluyen, por ejemplo, inflamación, función reducida de los órganos, biopsia anormal y fibrosis. En otra realización, la invención provee un método para prevenir (por ejemplo, reducir el riesgo) el rechazo de transplantes/injertos, o un trastorno asociado con el rechazo de transplantes/injertos, que comprende administrar un antagonista de IL-21/IL-21 R. En otro aspecto, la invención proporciona métodos para tratar, mejorar o prevenir el rechazo de transplantes/injertos, o un trastorno asociado con el rechazo de transplantes/injertos, en un sujeto. El método comprende administrar al sujeto un antagonista de IL-21/IL-21 R en una cantidad suficiente para tratar, mejorar o prevenir (por ejemplo, reducir el riesgo) el rechazo, o en una cantidad suficiente para inhibir o reducir la actividad de las células inmunes y/o la cantidad de dichas células. Los órganos o los tejidos transplantados pueden incluir, por ejemplo, corazón, riñon, hígado, pulmón, páncreas y médula ósea. En una realización, el antagonista de IL-21/IL-21 R puede administrarse en combinación con otro agente terapéutico, por ejemplo, un inhibidor de citoquina, un inhibidor de factores de crecimiento, un inmunosupresor, un agente antiinflamatorio, un inhibidor metabólico, un inhibidor enzimático, un agente citotóxico o un agente citostático. Los ejemplos de agentes terapéuticos preferidos que pueden administrarse en combinación con los antagonistas de IL-21/IL-21 R para tratar, mejorar o prevenir el rechazo de transplantes/injertos incluyen, por ejemplo, rapamicina, ciclosporina, anticuerpos anti-CTLA-4, anticuerpos anti-CD40, anticuerpos anti-CD40L y anticuerpos anti-CD154. Los siguientes conjuntos de términos se usan indistintamente en la presente documentación: "MU-1" e "IL-21 R", y péptidos, polipéptidos y proteínas. A menos que se indique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente documentación tienen el mismo significado que le dan aquellos entrenados en la técnica a los que concierne esta invención. Aunque pueden usarse métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descriptos en la presente documentación en la práctica o la evaluación de la invención, más adelante se describen métodos y materiales apropiados. Todas las publicaciones, las solicitudes de patentes, las patentes y otras referencias mencionadas en la presente documentación se incorporan por completo a modo de referencia. En caso de conflicto, se controlará la presente memoria descriptiva, incluyendo las definiciones. Además, los materiales, los métodos y los ejemplos son solamente ilustrativos y no pretenden limitar la invención. Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS En la FIG. 1 se ilustra la secuencia de ADNc completa de IL-21 R/MU-1 muríno. La secuencia de nucleótidos corresponde a los nucleótidos 1-2628 de SEQ ID N° 9. En las FIGS. 2A-2B se ¡lustra la secuencia de aminoácidos de IL-21 R/MU-1 murino y humano. En la FIG. 2A se ilustra la secuencia de aminoácidos de IL-21R/MU-1 murino (que corresponde a los aminoácidos 1-529 de SEQ ID N° 10). Hay una secuencia directriz predicha en los aminoácidos 1-19 (predicha por SPScan) con una puntuación de 10.1 (en negrita). Hay un dominio transmembrana predicho en los aminoácidos 237-253 de SEQ ID N° 10 (subrayado). Los motivos de señalización predichos incluyen las siguientes regiones: Box 1 : aminoácidos 265-274 y Box 2: aminoácidos 310-324 (en negrita y subrayado); hay seis tirosinas en los aminoácidos en las posiciones 281 , 319, 361 , 368, 397 y 510, de SEQ ID N° 10. El motivo WSXWS (SEQ ID N° 8) está localizado entre el residuo de aminoácido 214 y el residuo de aminoácido 218 (grande, en negrita). Los sitios de anclaje STAT potenciales incluyen los aminoácidos 393-398 y los aminoácidos 510-513 de SEQ ID N° 10. En la FIG. 2B se ilustra la secuencia de aminoácidos de MU-1 humano (que corresponde a SEQ ID N° 2). Se indica la localización de la secuencia señal predicha (aproximadamente los aminoácidos 1-19 de SEQ ID N° 2); el motivo WSXWS (aproximadamente los aminoácidos 213-217 de SEQ ID N° 2); y el dominio transmembrana (aproximadamente los aminoácidos 236-252, 236-253, 236-254 de SEQ ID N° 2 (subrayado)). También se indican los sitios de unión JAK potenciales, los motivos de señalización y los sitios de anclaje STAT. La localización aproximada de estos sitios está recuadrada. En la FIG. 3 se ilustra la comparación GAP de secuencias de ADNc de MU-1 humano y murino (que corresponden a los ácidos nucleicos 1-2665 de SEQ ID N° 1 y los ácidos nucleicos 1-2628 de SEQ ID N° 9, respectivamente). HuMU-1 = MU-1 humano, murMU-1 = MU-1 murino. Parámetros de alineamiento GAP: Ponderación de falta de coincidencia = 50, Coincidencia promedio = 10.000, Ponderación de longitud = 3, Falta de coincidencia promedio = 0.000, Porcentaje de identidad = 66.1 16. En la FIG. 4 se ilustra una comparación GAP de la proteína MU-1 humana (que corresponde a los aminoácidos de SEQ ID N° 2) y la proteína MU-1 murina (que corresponde a los aminoácidos de SEQ ID N° 10). El alineamiento se generó empleando la matriz de sustitución de aminoácidos BLOSUM62 (Henikoff y Henikoff (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-19). Parámetros de alineamiento GAP = Ponderación de falta de coincidencia: 8, Coincidencia promedio = 2.912, Ponderación de longitud = 2, Falta de coincidencia promedio = -2.003; Porcentaje de identidad = 65.267. En la FIG. 5 se ilustra una alineamiento de múltiples secuencias de los aminoácidos de MU-1 humano (que corresponde a SEQ ID N° 2), MU- 1 murino (que corresponde a SEQ ID N° 10) y la cadena de beta de la IL2 humana (N° de acceso GENBANK® M26062). Las directrices y los dominios transmembrana están subrayados. Se indican los motivos de los módulos de los receptores de cítoquina conservados en negrita. Se indican las regiones de señalización potenciales subrayadas y en negrita. En la FIG. 6 se ¡lustra la señalización a través de MU-1. MU-1 fosforila STAT 5 en el clon quimérico E7 EPO-MU-1. Bajo las condiciones especificadas en el Ejemplo 3, la señalización a través de MU-1 resulta en la fosforilación de STAT 5 en todos los puntos de tiempo evaluados. El tratamiento de los controles o las células BAF-3 quiméricas con IL-3 resultó en la fosforilación de STAT 3, pero no STAT 1 ó 5. En las FIGS. 7A-7B se ilustra un alineamiento entre las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del monómero de IL-21 R (que corresponde a los aminoácidos 20-235 de SEQ ID N° 2), fusionado en el lado amino terminal con la secuencia directriz de la abeja melífera y las marcas His6 (aminoácidos 1 -44 de SEQ ID N° 23). Se presentan las secuencias de nucleótidos y aminoácidos como SEQ ID N° 22 y SEQ ID N° 23, respectivamente. En las FIGS. 8A-8C se ilustra un alineamiento entre las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del dominio extracelular del IL-21 R (que corresponde a los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2), fusionado en el extremo C a través de un conector (que corresponde a los aminoácidos 236-243 de SEQ ID N° 25) a la secuencia Fc de la inmunoglobulina G1 (lgG1 ) humana (que corresponde a los aminoácidos 244-467 de SEQ ID N° 25). Se indican las secuencias de nucleótidos y aminoácidos como SEQ ID N° 24 y SEQ ID N° 25, respectivamente. En las FIGS. 9A-9C se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21 R humano (que corresponde a los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2) fusionado en el extremo C a través de un conector (que corresponde a los aminoácidos 236-243 de SEQ ID N° 27) a la secuencia Fc de la inmunoglobulina humana G1 (lgG1) (que corresponde a los aminoácidos 244-467 de SEQ ID N° 27) y la marca de secuencia His6 (que corresponde a los aminoácidos 468-492 de SEQ ID N° 27). Se indican las secuencias de nucleótidos y aminoácidos como SEQ ID N° 26 y SEQ ID N° 27, respectivamente. En las FIGS. 10A-10C se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótídos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21R humano (que corresponde a los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2) fusionado en el extremo C a través de un conector (que corresponde a los aminoácidos 236-243 de SEQ ID N° 29) a la secuencia Fc mutada de la inmunoglobulina humana G1 (lgG1) (que corresponde a los aminoácidos 244-467 de SEQ ID N° 29). La secuencia Fc humana ha sido mutada en los residuos 254 y 257 respecto de la secuencia tipo salvaje para reducir la unión al receptor Fc. Se indican las secuencias de nucleótidos y aminoácidos como SEQ ID N° 28 y SEQ ID N° 29, respectivamente. En las FIGS. 11A-11B se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótídos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21 R humano (que corresponde a los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2) fusionado en el extremo C a una secuencia de marca de rodopsina. Se indican las secuencias de nucleótidos y aminoácidos como SEQ ID N° 30 y SEQ ID N° 31, respectivamente. En las FIGS. 12A-12C se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21 R humano (que corresponde a los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2) fusionado en el extremo C a un sitio de corte EK y una región lgG1 Fc mutada (que corresponde a los aminoácidos 236-470 de SEQ ID N° 33). Se indican las secuencias de nucleótidos y aminoácidos como SEQ ID N° 32 y SEQ ID N° 33, respectivamente. En las FIGS. 13A-13B se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21 R murino fusionado en el extremo C a la inmunoglobulina G2a (lgG2a) de ratón. Se indican las secuencias de nucleótídos (genómicas) y aminoácidos como SEQ ID N° 34 y SEQ ID N° 35, respectivamente. En las FIGS. 14A-14B se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21 R murino fusionado en el extremo C a secuencias de marca Flag e His6. Se indican las secuencias de nucleótidos (genómicas) y aminoácidos como SEQ ID N° 36 y SEQ ID N° 37, respectivamente. En las FIGS. 15A-15B se ilustra un alineamiento de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos del dominio extracelular de IL-21 R murino (directriz de abeja melífera) fusionado en el extremo C a secuencias de marca Flag e His6. Se indican las secuencias de nucleótidos (genómicas) y aminoácidos como SEQ ID N° 38 y SEQ ID N° 39, respectivamente. La FIG. 16 es una tabla que resume los cronogramas de tratamiento profiláctico, terapéutico y semi-terapéutico para los experimentos que usan modelos de artritis inducida por colágeno (CÍA) en ratones. La FIG. 17 es un gráfico que ilustra los efectos de MulL-21 RFc (200 µg/ratón 3x/semana) sobre un ratón CÍA semi-terapéutico en función de los días posteriores al tratamiento. Se usó Ig de ratón (200 µg/ratón 3x/semana) como control. Las FIGS. 18A-18B son fotografías que ilustran la expresión incrementada de ARNm de IL-21 R en las patas artríticas de ratones con CÍA (figura A) en comparación con controles negativos (figura B). En las FIGS. 19A-19B y 20 se ilustran gráficos lineales que presentan una reducción marcada en la calificación clínica de los síntomas tipo IBD en ratas tratadas con mulL-21RFc y mEnbrel, en comparación con la IgG control. En la FIG. 19A-19B, la figura 19A es una fotografía que presenta la hibridizacíón in situ del ARNm de MU-1 en los linfocitos y los nodos linfáticos del intestino humano normal. La FIG. 21 es un gráfico lineal que presenta el porcentaje de supervivencia de injertos respecto de los días posteriores a la transferencia post-adoptiva, en ratones inyectados con células T transducidas por medios retrovírales que expresan IL-21 , mulL-21RFc o un control (GFP). La FIG. 22A-22B es un gráfico lineal que presenta un mejoramiento en las calificaciones clínicas de lesiones psoriáticas en un modelo de transferencia adoptiva CD45Rbhigh, después administrar MulL-21RFc. En la FIG. 22A-22B, la FIG.22A presenta fotografías de ratones antes y después del tratamiento con MulL-21 RFc. La FIG. 23 es un gráfico lineal que ilustra los niveles de hiper-respuesta en las vías respiratorias (AHR) de ratones sensibilizados con ovoalbúmina (OVA) atacados con solución salina amortiguada con fosfato (PBS) u OVA. A los ratones se le administraron dosis crecientes consecutivas de metacolina. El cambio de Penh (pausa mejorada) es un indicador de la AHR. Las FIGS. 24A-24D son gráficos de barras que ilustran la cantidad de células en fluido de lavado broncoalveolar (BALF) de ratones sensibilizados con OVA y atacados con PBS u OVA. En la FIG. 24A se ilustra la cantidad total de células en el BALF. En la FIG. 24B se ¡lustra la cantidad de eosinófilos en el BALF. En la FIG. 24C se ilustra la cantidad de linfocitos en el BALF. En la FIG. 24D se ¡lustra la cantidad de neutrófilos en el BALF. Las barras sin llenar indican los ratones WT atacados con PBS; las barras llenas indican los ratones WT atacados con OVA; las barras grises indican los ratones IL-21R -/- atacados con PBS; las barras rayadas indican los ratones IL-21 R -/- atacados con OVA. * indica p<0.05, determinado por medio de una prueba U de Mann-Whitney. Las FIGS. 25 y 26 son gráficos que ilustran los niveles de citoquinas en el BALF de ratones sensibilizados con OVA y atacados con OVA. En la FIG. 25 se ilustran los niveles de TNFa e IL-5. En la FIG. 26 se ilustran los niveles de IL-13. Las barras sin llenar indican los ratones WT atacados con PBS; las barras llenas indican los ratones WT atacados con OVA; las barras grises indican los ratones IL-21 R -/- atacados con PBS; las barras rayadas indican los ratones IL-21 R -/- atacados con OVA. * indica p<0.05, determinado por medio de una prueba de U de Mann-Whitney. Las FIGS. 27A-27B son gráficos de barras que ilustran los niveles de IgE en suero en ratones sensibilizados con OVA y atacados con OVA o PBS. En la FIG. 27A se ilustran los niveles de IgE total en suero. En la FIG. 27B se ilustran los niveles de IgE específica anti-OVA. Las barras sin llenar indican los ratones WT atacados con PBS; las barras llenas indican los ratones WT atacados con OVA; las barras grises indican los ratones IL-21 R -/- atacados con PBS; las barras rayadas indican los ratones IL-21R -/-atacados con OVA. * indica p<0.05, determinado por medio de una prueba de U de Mann-Whitney. Las FIGS. 28A-28D son gráficos que ilustran los niveles de dsADN de anticuerpos en circulación en ratones MRL-Fas/pr después de un tratamiento con MulL-21 RFc o control. En la FIG. 28A se ilustran los niveles de IgGl En la FIG. 28B se ilustran los niveles de lgG2a. En la FIG. 28C se ilustran los niveles de lgG2b. En la FIG. 28D se ilustran los niveles de lgG3. * indica p<0.05, determinado por medio de una prueba de U de Mann-Whitney. Las FIGS. 29A-29D son gráficos que ilustran la IgG total en circulación en ratones MRL- asp? después de un tratamiento con MulL-21 RFc o control. En la FIG. 29A se ¡lustran los niveles de lgG1. En la FIG. 29B se ilustran los niveles de lgG2a. En la FIG. 29C se ilustran los niveles de lgG2b. En la FIG. 29D se ilustran los niveles de lgG3. * indica p<0.05, determinado por medio de una prueba de U de Mann-Whitney. La FIG. 30 es un gráfico que ilustra niveles de fluorescencia en riñones de ratón coloreados con IgG-FITC anti-ratón de cabra. La FIG. 31 es un diagrama esquemático que ilustra ejemplos de efectos de IL-21 sobre las respuestas inmunes. La FIG. 32 es un diagrama esquemático que ¡lustra ejemplos de estrategias para inhibir la vía de IL-21/IL-21 R. La FIG. 33 es un diagrama esquemático que ilustra un ejemplo de proteína de fusión soluble del receptor IL-21 RFc. La FIG. 34 es un gráfico lineal que ilustra la calificación promedio para la psoriasis de grupos de ratones tratados con MulL-21RFc y tratados con control estimulados con E. tenella ("Etenella"). La FIG. 35 es un gráfico lineal que ilustra una reducción en la pérdida de peso en ratones estimulados con E. tenella y tratados con MulL- 21 RFc, en comparación con los ratones tratados con control. El índice de peso se define como la relación entre el peso medido y el peso inicial. La FIG. 36A es un gráfico lineal que ilustra una reducción en la calificación fecal promedio en ratones estimulados con E. tenella y tratados con MulL-21 RFc, en comparación con los ratones tratados con control. La FIG. 36B es un gráfico que ilustra las calificaciones fecales de ratones estimulados con E. tenella de cada grupo de tratamiento el día 77 después de la transferencia. La FIG. 37A es un gráfico que ilustra los niveles de IFN-? en suero en ratones estimulados con E. tenella y tratados con MulL-21 RFc, en comparación con los ratones tratados con control. La FIG. 37B es un gráfico que ¡lustra las calificaciones fecales para ratones estimulados con E. tenella y tratados con MulL-21 RFc, en comparación con los ratones tratados con control. La FIG. 38 es un gráfico lineal que ilustra la incorporación de 3H-timidina en células CD45RBhl y CD45RB10 activadas después de un tratamiento con IL-21. Las FIGS. 39A-39B son gráficos de barras que ilustran un incremento en la secreción de las citoquinas por células CD45RBhl activadas después de un tratamiento con IL-21. La FIG. 40 es un gráfico de barras que ¡lustra una reducción en la secreción de citoquinas por células CD45RBhl activadas después de un tratamiento con MulL-21RFc. Las FIG. 41A-41 B son gráficos de barras (A) y dispersión (B) que ilustran que, en el modelo de GVHD de SLE, los ratones con knockout de IL-21 R injertados con células de bazo B6 bm12 no producen autoanticuerpos anti-dsADN (A), y que no se observan depósitos de IgG en los riñones de estos ratones (B).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se describen métodos y composiciones para inhibir la actividad de la interleuquina-21 (IL-21)/el receptor de IL-21 (MU-1) usando antagonistas de IL-21 o del receptor de IL-21 ("IL-21R" o "MU-1"). Pueden usarse antagonistas de IL-21/IL-21R para inducir la supresión inmune in vivo, por ejemplo, para tratar o prevenir trastornos inflamatorios o autoinmunes. (por ejemplo, trastornos asociados con una actividad aberrante de una o más células T maduras (células T CD8+ maduras, CD4+ maduras), células NK maduras, células B, macrófagos y megacahocitos, incluyendo el rechazo de transplantes/injertos, la psoriasis y trastornos autoinmunes tales como la artritis reumatoide y la IBD). En una realización, los solicitantes han demostrado que una reducción en la actividad de IL-21 R usando una proteína de fusión neutralizadora que incluye el dominio extracelular de IL-21 R fusionado a una región de inmunoglobulina Fc mejora los síntomas de inflamación en animales modelo con artritis inducida por colágeno (CÍA) (Ejemplo 7), así como en modelos animales de IBD (Ejemplos 9 y 11), rechazo de injertos (Ejemplo 10), psoriasis (Ejemplo 11) y lupus (Ejemplo 13). La expresión del ARNm de IL-21R es regulada positivamente en las patas de ratones con artritis inducida por colágeno (CÍA) (Ejemplo 8). Los ratones con deficiencia de IL-21 R presentan una reducción en la inflamación de las vías respiratorias inducida por colágeno (Ejemplo 12). Por consiguiente, pueden usarse agentes que se unen a IL-21 R que antagonizan la actividad de IL-21/IL-21 R para inducir la supresión inmune in vivo, por ejemplo, para tratar o prevenir trastornos inflamatorios o autoinmunes (por ejemplo, glomerulonefrítis, rechazo de transplantes/injertos, psoriasis, trastornos atópicos, asma, trastornos autoinmunes, tales como artritis reumatoide y SLE, e IBD (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa)). Con el fin de poder comprender mejor la presente invención, primero se definirán determinados términos. Se proporcionan definiciones adicionales en la descripción detallada. Los términos "MU-1", "proteína MU-1 ", "receptor de interleuquina-21" o "IL-21 R", como se los usa en la presente documentación, designan un receptor de la familia de la citoquina clase I, también conocido como NILR (WO 01/85792; Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63; Ozaki et al. (2000) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 97:11439-444). MU-1 es homólogo a la cadena ß compartida por los receptores IL-2 e IL-15, e IL-4a (Ozaki et al. (2000) supra). Al unirse el ligando, IL-21 R/MU-1 es capaz de interactuar con una cadena de receptor de citoquina ? en común (?c) (Asao et al. (2001) J. Inmunol. 167:1-5) e inducir la fosforilación de STAT1 y STAT3 (Asao et al. (2001)) o STAT5 (Ozaki et al. (2000)). MU-1 presenta una distribución amplia en tejidos linfoides. El término "MU-1" designa un receptor (preferiblemente de mamífero, por ejemplo, de origen murino o humano) capaz de interactuar, por ejemplo, capaz de unirse a IL-21 (preferiblemente de mamífero, por ejemplo, IL-21 murino o humano), que tiene una de las siguientes características: (i) una secuencia de aminoácidos de un polipéptido MU-1 IL-21 R/MU-1 de mamífero de ocurrencia natural, o un fragmento de éste, por ejemplo, una secuencia de aminoácidos presentada en SEQ ID N° 2 (humana) o SEQ ID N° 10 (murina), o un fragmento de ésta; (ii) una secuencia de aminoácidos sustancialmente homologa, por ejemplo, al menos 85%, 90%, 95%, 98% o 99% homologa a una secuencia de aminoácidos presentada en SEQ ID N° 2 (humana) o SEQ ID N° 10 (murina), o un fragmento de ésta; (iii) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos de IL-21R/MU-1 de mamífero de ocurrencia natural, o un fragmento de ésta (por ejemplo, SEQ ID N° 1 (humana) o SEQ ID N° 9 (murina), o un fragmento de ésta); (iv) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos sustancialmente homologa, por ejemplo, al menos 85%, 90%, 95%, 98%, 99% homologa a una secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID N° 1 (humana) o SEQ ID N° 9 (murina), o un fragmento de ésta; (v) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos degenerada de una secuencia de IL-21 R/MU-1 de ocurrencia natural, o un fragmento de ésta, por ejemplo, SEQ ID N° 1 (humana) o SEQ ID N° 9 (murina), o un fragmento de ésta; o (vi) una secuencia de nucleótidos que hibridiza con una de las secuencias de nucleótidos anteriores bajo condiciones severas, por ejemplo, condiciones muy severas. El IL-21 R/MU-1 es de mamífero, preferiblemente de origen humano. Se indica la secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos predicha de IL-21R/MU-1 en SEQ ID N° 1 y SEQ ID N° 2, respectivamente. El análisis de la secuencia de aminoácidos de IL-21 R/MU-1 humano (SEQ ID N° 2; FIG. 2B) reveló las siguientes características estructurales: una secuencia directriz (aproximadamente los aminoácidos 1-19 de SEQ ID N° 2 (FIG. 2B)); un motivo WSXWS (aproximadamente los aminoácidos 213-217 de SEQ ID N° 2); un dominio transmembrana (aproximadamente los aminoácidos 236-252 de SEQ ID N° 2 (FIG. 2B)); un dominio extracelular aproximadamente entre los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2; y un dominio intracelular aproximadamente entre 253-538 de SEQ ID N° 2. Se cree que el IL-21R/MU-1 humano maduro tiene la secuencia de los aminoácidos 20-538 de SEQ ID N° 2. Se depositó el ADNc de IL-21 R/MU-1 en la Colección Americana de Tipos de Cultivo el 10 de Marzo de 1998, bajo el número de acceso ATCC 98687. Puede usarse cualquier forma de las proteínas IL-21 R/MU-1 con una longitud menor que la completa en los métodos y las composiciones de la presente invención, siempre que retenga la capacidad de unirse a un polipéptido de IL-21. Pueden producirse proteínas de IL-21R/MU-1 con una longitud menor que la completa, por ejemplo, IL-21 R soluble, expresando un fragmento correspondiente del polinucleótido que codifica la proteína MU-1 completa en una célula huésped. Estos fragmentos de polinucleótidos correspondientes también son parte de la presente invención. Pueden prepararse polinucleótidos modificados como se describió previamente empleando procedimientos convencionales de biología molecular, incluyendo la construcción de mutantes de deleción apropiadas deseadas, métodos de mutagénesis dirigida a sitios específicos o reacciones en cadena de la polimerasa usando oligonucleótidos cebadores apropiados. Como se lo usa en la presente documentación, un "polipéptido IL-21 R/MU-1 soluble" es un polipéptido IL-21 R/MU-1 incapaz de anclarse en una membrana. Estos polipéptidos solubles incluyen, por ejemplo, polipéptidos MU-1 o IL-21 R que carecen de una porción suficiente de su dominio transmembrana para anclarse al polipéptido, o que están modificados de modo tal que el dominio transmembrana no es funcional, por ejemplo, un fragmento soluble de un IL-21R (por ejemplo, un fragmento de un IL-21R que comprende el dominio extracelular de IL-21 R murino o humano) incluye una secuencia de aminoácidos aproximadamente entre los aminoácidos 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2 (humano), o aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-236 de SEQ ID N° 10 (murino). Además, un polipéptido IL-21 R/MU-1 soluble puede incluir, por ejemplo, puede estar fusionado a una segunda porción, por ejemplo, un polipéptido (por ejemplo, una cadena de inmunoglobulina, GST, Lex-A o una secuencia de polipéptido MBP). Por ejemplo, una proteína de fusión puede incluir al menos un fragmento de un polipéptido IL-21 R capaz de unirse a IL-21 , por ejemplo, un fragmento soluble de un IL-21 R (por ejemplo, un fragmento de un IL-21 R que comprende el dominio extracelular de IL-21 R murino o humano; por ejemplo, aproximadamente entre los aminoácidos 1-235, 1-236, 20-235, 20-236 de SEQ ID N° 2 (humano), o aproximadamente entre los aminoácidos 1-236, 20-236 de SEQ ID N° 10 (murino), fusionado a una segunda porción, por ejemplo, un polipéptido (por ejemplo, una cadena de inmunoglobulina, un fragmento Fc, una región constante de cadena pesada de los distintos isotipos, incluyendo: lgG1 , lgG2, lgG3, lgG4, IgM, lgA1 , lgA2, IgD y IgE). El término "interleuquina-21" o "IL-21" designa una cítoquina que presenta homología de secuencia con IL-2, IL-4 e IL-15 (Parrish-Novak et al. (2000) Nature 408:57-63). A pesar de la baja homología de secuencia entre las interleuquinas de citoquína, las citoquinas comparten un pliegue común en una estructura de "haz de cuatro hélices" que es representativa de la familia. Se expresa primariamente en células T CD4+ activadas, y se ha informado que tiene efecto sobre las células NK, B y T (Parrish-Novak et al. (2000) supra; Kasaían et al. (2002) supra). IL-21 se une a IL-21 R (también conocido en la presente documentación como MU-1 y NILR). Al unirse IL-21 , la activación de IL-21 R conduce a la señalización de STAT5 o STAT3 (Ozaki et al. (2000) supra). El término "IL-21" o "polipéptído IL-21" designa una proteína (preferiblemente de mamífero, por ejemplo, de origen murino o humano) que es capaz de interactuar, por ejemplo, unirse a IL-21 R (preferiblemente de mamífero, por ejemplo, IL-21 murino o humano) y que tiene una de las siguientes características: (i) una secuencia de aminoácidos de un IL-21 de mamífero de ocurrencia natural, o un fragmento de ésta, por ejemplo, una secuencia de aminoácidos presentada en SEQ ID N° 19 (humano) o un fragmento de ésta; (ii) una secuencia de aminoácidos sustancialmente homologa, por ejemplo, al menos 85%, 90%, 95%, 98%, 99% homologa a una secuencia de aminoácidos presentada en SEQ ID N° 19 (humano) o un fragmento de ésta; (iii) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos de un IL-21 de mamífero de ocurrencia natural, o un fragmento de ésta (por ejemplo, SEQ ID N° 18 (humano) o un fragmento de ésta); (iv) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos que es sustancialmente homologa, por ejemplo, al menos 85%, 90%, 95%, 98%, 99% homologa a una secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID N° 18 (humano), o un fragmento de ésta; (v) una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos degenerada de una secuencia de nucleótidos de IL-21 de ocurrencia natural, o un fragmento de ésta, por ejemplo, SEQ ID N° 19 (humano) o un fragmento de ésta; o (vi) una secuencia de nucleótidos que hibridiza con una de las secuencias de nucleótidos anteriores bajo condiciones severas, por ejemplo, bajo condiciones muy severas. La frase "una actividad biológica" de un polipéptido MU-1 o IL-21 R designa una o más de las actividades biológicas de la proteína madura MU-1 correspondiente, incluyendo, sin limitaciones, (1) la interacción, por ejemplo, la unión con un polipéptido de IL-21 (por ejemplo, un polipéptido de IL-21 humano); (2) la asociación con moléculas de transducción de señales, por ejemplo, ?c, JAK1 ; (3) la fosforilación y/o la activación estimulatoria de proteínas STAT, por ejemplo, STAT5 y/o STAT3; y/o (4) la modulación, por ejemplo, la estimulación o la disminución, la proliferación, la diferenciación, la función de las células efectoras, la actividad citolítica, la secreción de citoquinas y/o la supervivencia de las células inmunes, por ejemplo, células T (células T CD8+, CD4+), células NK, células B, macrófagos y magacariocitos). Como se lo usa en la presente documentación, un "antagonista de IL-21/IL-21 R" que es útil en el método de la invención designa un agente que reduce, inhibe o disminuye de otro modo una o más actividades biológicas de un polipéptido IL-21 R/MU-1. En una realización preferida, el antagonista interactúa, por ejemplo, se une a un polipéptido IL-21 R/MU-1. En otra realización preferida, el antagonista interactúa, por ejemplo, se une a un polipéptido de IL-21. El antagonismo usando un antagonista de IL-21/IL-21 R no indica necesariamente una eliminación total de la actividad biológica del polipéptido IL-21 R/MU-1 y/o el polipéptido IL-21. Como se lo usa en la presente documentación, una "cantidad efectiva para el uso terapéutico" de un antagonista de IL-21/IL-21 R designa una cantidad de un agente que es efectiva, al administrar una o múltiples dosis a un sujeto, por ejemplo, un paciente humano, para curar, reducir la severidad, mejorar o prevenir uno o más síntomas de un trastorno, o para prolongar la supervivencia del sujeto más allá de lo esperado en ausencia de dicho tratamiento. Como se lo usa en la presente documentación, "una cantidad efectiva para el uso profiláctico" de un antagonista de IL-21/IL-21 R designa una cantidad de un antagonista de IL-21/IL-21 R que es efectiva, al administrar una o múltiples dosis a un sujeto, por ejemplo, un paciente humano, para prevenir o demorar la ocurrencia del inicio o la recurrencia de un trastorno, por ejemplo, un trastorno como se describe en la presente documentación. Los términos "inducir", "inhibir", "potenciar", "elevar", "incrementar", "disminuir" o semejantes, por ejemplo, que denotan diferencias cuantitativas entre dos estados, designan al menos diferencias de significación estadística entre los dos estados. En este contexto, el término "en combinación" significa que los agentes se proporcionan en forma sustancialmente contemporánea, de manera simultánea o consecutiva. Si se los administra de manera consecutiva, al principio de la administración del segundo compuesto, el primero de los dos compuestos preferiblemente aún puede detectarse a concentraciones efectivas en el sitio del tratamiento o en el sujeto. Como se lo usa en la presente documentación, una "proteína de fusión" designa una proteína que contiene dos o más porciones asociadas operativamente, por ejemplo, porciones conectadas, por ejemplo, porciones proteicas. Preferiblemente, las porciones están asociadas en forma covalente. Las porciones pueden estar asociadas directamente o pueden estar conectadas a través de un espaciador o un conector. Como se lo usa en la presente documentación, el término "anticuerpo" designa una proteína que comprende al menos una y preferiblemente dos regiones de cadenas pesadas (H) variables (abreviadas en la presente documentación como VH), y al menos una y preferiblemente dos regiones de cadenas livianas (L) variables (abreviadas en la presente documentación como VL). Las regiones VH y VL pueden subdividirse adicionalmente en regiones de hipervariabílidad, denominadas "regiones determinantes de la complementariedad" ("CDR"), separadas por regiones que están más conservadas, denominadas "regiones de marco" (FR). La extensión de la región de marco y las CDR ha sido definida con precisión (véanse, por ejemplo, Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Inmunological Interest, quinta edición, Departamento de Salud y Serviicos Humanos de los EEUU, Publicación del INS N° 91-3242, y Chotia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-17, que se incorporan en la presente documentación a modo de referencia). Cada VH y VL está compuesta por tres CDR y cuatro FR dispuestos entre el extremo amino y el extremo carboxilo en el siguiente orden: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Además, el anticuerpo puede incluir una región constante en las cadenas pesada y liviana, para formar una cadena pesada y una cadena liviana de inmunoglobulina, respectivamente. En una realización, el anticuerpo es un tetrámero de dos cadenas de inmunoglobulina pesadas y dos cadenas de inmunoglobulina livianas, donde las cadenas de inmunoglobulina pesadas y livianas están interconectadas, por ejemplo, por enlaces disulfuro. La región constante de la cadena pesada está compuesta por tres dominios, CH1 , CH2 y CH3. La región constante de la cadena liviana está compuesta por un dominio, CL. La región constante de las cadenas pesada y liviana contiene un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos típicamente median en la unión del anticuerpo con tejidos o factores del huésped, incluyendo varias células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema de complemento clásico. Como se lo usa en la presente documentación, el término "inmunoglobulina" designa una proteína que consiste en uno o más polipéptidos sustancialmente codificados por genes de inmunoglobulina. Los genes de inmunoglobulina humana reconocidos incluyen los genes de las regiones constantes kappa, lambda, alfa (lgA1 y lgA2), gamma (lgG1 , lgG2, lgG3, lgG4), delta, épsilon y mu, así como los diversos genes de la región variable de la inmunoglobulina. Las "cadenas livianas" completas de las inmunoglobulinas (de aproximadamente 25 KDa o 214 aminoácidos) están codificadas por un gen de región variable en el extremo NH2 (aproximadamente 110 aminoácidos) y un gen de región constante kappa o lambda en el extremo COOH. Del mismo modo, las "cadenas pesadas" de la inmunoglobulína (de aproximadamente 50 kDa o 446 aminoácidos) están codificadas por un gen de región variable (de aproximadamente 116 aminoácidos) y uno de los genes de región constante mencionados previamente, por ejemplo, gamma (que codifica aproximadamente 330 aminoácidos). Como se lo usa en la presente documentación, un "isotipo" designa la clase de anticuerpos (por ejemplo, IgM o IgGI) codificada por los genes de región constante de la cadena pesada. El término "fragmento de unión a antígeno" de un anticuerpo (o simplemente la "porción del anticuerpo", o el "fragmento"), como se lo usa en la presente documentación, designa uno o más fragmentos de un anticuerpo completo que retienen la capacidad de unirse específicamente a un antígeno (por ejemplo, CD3). Los ejemplos de los fragmentos de unión comprendidos dentro del término "fragmento de unión a antígeno" de un anticuerpo incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1 ; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un enlace disulfuro en la región bisagra; (iíi) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1 ; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un único brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341 :544-546), que consiste en un dominio VH; y (vi) una región determinante de la complementaríedad aislada (CDR). Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, están codificados por genes separados, pueden unirse, usando métodos de recombinación, a través de un conector sintético que les permite prepararlos como una proteína de cadena única, donde las regiones VL y VH se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena simple (scFv); véanse, por ejemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-26; y Huston et al. (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 85:5879-83). Estos anticuerpos de cadena simple también están abarcados en el término "fragmento de unión a antígeno" de un anticuerpo.

Estos fragmentos de anticuerpos se obtienen usando procedimientos convencionales conocidos por aquellos entrenados en la técnica, y se analizan la utilidad de los fragmentos del mismo modo que para los anticuerpos intactos. Las secuencias similares u homologas (por ejemplo, con al menos aproximadamente 85% de identidad de secuencia) a las secuencias descriptas en la presente documentación también son parte de esta memoria descriptiva. En algunas realizaciones, la identidad de secuencia puede ser de aproximadamente 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o mayor. Como alternativa, existe identidad sustancial cuando los segmentos de ácidos nucleicos hibridizan bajo condiciones de hibridización selectivas (por ejemplo, condiciones de hibridización muy severas) con el complemento de la cadena. Los ácidos nucleicos pueden estar presentes en células completas, en un lisado celular o en una forma parcialmente purificada o sustancíalmente pura. Los cálculos de "homología" o "identidad de secuencia" entre dos secuencias (los términos se usan indistintamente en la presente documentación) se realizan como se indica a continuación. Se alinean las secuencias con el objeto de realizar una comparación óptima (por ejemplo, pueden introducirse regiones de falta de coincidencia en una o ambas de una primera y una segunda secuencia de aminoácidos o ácidos nucleicos para obtener un alineamiento óptimo, y pueden descartarse las secuencias no homologas para realizar la comparación). En una realización preferida, la longitud de una secuencia de referencia alineada para realizar la comparación es de al menos 30%, preferiblemente al menos 40%, más preferiblemente al menos 50%, aún más preferiblemente al menos 60%, y aún más preferiblemente al menos 70%, 80%, 90%, 100% de la longitud de la secuencia de referencia. Luego se comparan los residuos de aminoácidos o los nucleótidos en las posiciones de los aminoácidos o los nucleótidos correspondientes. Cuando una posición en la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente en la segunda secuencia, luego las moléculas son idénticas en dicha posición (como se la usa en la presente documentación, la "identidad" de aminoácidos o ácidos nucleicos es equivalente a la "homología" de aminoácidos o ácidos nucleicos). El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función de la cantidad de posiciones idénticas compartidas por las secuencias, teniendo en cuenta la cantidad de faltas de coincidencia y la longitud de cada región de falta de coincidencia, que haya sido necesario introducir para obtener un alineamiento óptimo de las dos secuencias. Puede efectuarse la comparación de las secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias usando un algoritmo matemático. En una realización preferida, se determina el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos usando el algoritmo de Needleman y Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48:444-53), que ha sido incorporado en el programa GAP del conjunto de software GCG (disponible en www.gcg.com), empleando una matriz BLOSUM 62 o una matriz PAM250, una ponderación de falta de coincidencia de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ó 4, y una ponderación de longitud de 1 , 2, 3, 4, 5 ó 6. En aún otra realización preferida, se determina el porcentaje de identidad entre dos secuencias de nucleótidos usando el programa GAP en el conjunto de software GCG (disponible en www.gcg.com), empleando una matriz NWSgapdna.CMP, una ponderación de falta de coincidencia de 40, 50, 60, 70 u 80 y una ponderación de longitud de 1 , 2, 3, 4, 5 ó 6. Un conjunto de parámetros particularmente preferidos (y aquél que debería usar el encargado de la determinación, si no está seguro de qué parámetros deberían aplicarse si una molécula está dentro de las limitaciones de identidad de secuencia u homología de la invención) comprende una matriz de calificación BLOSUM 62 con una penalidad de falta de coincidencia de 12, una penalidad de extensión de falta de coincidencia de 4 y una penalidad de desplazamiento de marco de falta de coincidencia de 5. También puede determinarse el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos o nucleótidos usando el algoritmo de Meyers y Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17), que ha sido incorporado en el programa ALIGN (versión 2.0), usando una tabla de Ponderación de residuos PAM120, una penalidad de longitud de falta de coincidencia de 12 y una penalidad de falta de coincidencia de 4. Como se lo usa en la presente documentación, el término "hibrídiza bajo condiciones severas" describe condiciones para la hibridización y el lavado. Las condiciones severas son conocidas por aquellos entrenados en la técnica y pueden hallarse en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. En esta referencia se describen métodos acuosos y no acuosos, y puede usarse cualquiera de ellos. Un ejemplo preferido de condiciones de hibridización severas son una hibridización en cloruro de sodio/citrato de sodio 6X (SSC) a aproximadamente 45°C, seguida por uno o más lavados en SSC 0.2X, 0.1% de SDS a 50°C. Otro ejemplo de condiciones de hibridización severas comprenden una hibridización en SSC 6X a aproximadamente 45°C, seguida por uno o más lavados en SSC 0.2X, 0.1 % de SDS a 55°C. Otro ejemplo de condiciones de hibridización severas comprenden una hibridización en SSC 6X a aproximadamente 45°C, seguida por uno o más lavados en SSC 0.2X, 0.1% de SDS a 60°C. Preferiblemente, las condiciones de hibridización severas comprenden una hibridización en SSC 6X a aproximadamente 45°C, seguida por uno o más lavados en SSC 0.2X, 0.1 % de SDS a 65°C. Las condiciones muy severas particularmente preferidas (y las condiciones que deberían usarse si el encargado de la hibridización no está seguro de qué condiciones deberían aplicarse para determinar si una molécula está dentro de un límite de hibridización de la invención) comprenden fosfato de sodio 0.5 M, 7% de SDS a 65°C, a lo que siguen uno o más lavados en SSC 0.2X, 1% SDS a 65°C. Los polinucleótidos aislados de la presente invención pueden usarse como sondas y cebadores de hibridización para identificar y aislar ácidos nucleicos con secuencias idénticas o similares a aquellos que codifican los polinucleótídos descriptos. Los métodos de hibridización para identificar y aislar ácidos nucleicos incluyen la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), las híbridizaciones Southern, la hibridización in situ y la hibridización Northern, y son bien conocidos por aquellos entrenados en la técnica. En la presente documentación se proporcionan descripciones adicionales de las condiciones y las reacciones de hibridización. Las reacciones de hibridización pueden efectuarse bajo distintas condiciones de severidad. La severidad de una reacción de híbridización incluye la dificulta con la que hibridizarán una con otra dos moléculas de ácidos nucleicos cualquiera. Preferiblemente, cada polinucleótido que hibridiza lo hace con el polinucleótido correspondiente bajo condiciones de severidad reducida, más preferiblemente condiciones severas, y más preferiblemente condiciones muy severas. En la Tabla 1 a continuación se presentan ejemplos de condiciones de severidad: las condiciones muy severas son aquellas que son al menos tan severas, por ejemplo, como las condiciones A-F; las condiciones severas son al menos tan severas como, por ejemplo, las condiciones G-L; y las condiciones de severidad reducida son al menos tan severas como, por ejemplo, las condiciones M-R.

CUADRO 1 1La longitud del híbrido es aquella anticipada para las regiones hibridizadas de los polinucleótidos que hibridizan. Cuando se hace hibridizar un polinucleótido con un polinucleótido blanco de secuencia desconocida, se asume que la longitud del híbrido es aquella del polinucleótído que hib diza. Cuando se hacen hibridizar polinucleótidos de secuencia conocida, puede determinarse la longitud del híbrido alineando las secuencias de los polinucleótidos e identificando la o las regiones con complementariedad de secuencia óptima. 2Puede reemplazarse el SSPE (SSPE 1X es NaCI 0.15 M, NaH2PO4 10 mM, y EDTA 1.25 mM, pH 7.4) por SSC (SSC 1X es NaCI 0.15 M y citrato de sodio 15 mM) en los amortiguadores de hibridización y lavado; los lavados se realizan durante 15 minutos una vez completada la hibridización.

TB* - TR*: Se anticipa que la temperatura de hibridización de los híbridos con menos de 50 pares de bases de longitud es 5-10°C menor que la temperatura de fusión (Tm) del híbrido, donde Tm se determina de acuerdo con las siguientes ecuaciones. Para los híbridos con menos de 18 pares de bases de longitud, Tm(°C) = 2(# de bases A + T) + 4(# de bases G + C). Para los híbridos de entre 18 y 49 pares de bases de longitud, Tm(°C) = 81.5 + 16.6(log10Na+) + 0.41 (%G + C) - (600/N), donde N es la cantidad de bases en el híbrido y Na+ es la concentración de iones sodio en el amortiguador de hibridización (Na+ para SSC 1X = 0.165 M). Se proporcionan ejemplos adicionales de condiciones severas para hibridizar polinucleótidos en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Capítulos 9 & 1 1 , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989), y Ausubel et al., editores, Current Protocols in Molecular Biology, Secciones 2.10 & 6.3-6.4, John Wiley & Sons, Inc. (1995), incorporados en la presente documentación a modo de referencia. Los polinucleótidos aislados de la presente invención pueden usarse como sondas y cebadores de hibridización para identificar y aislar ADN con secuencias que codifican variantes alélicas de los polinucleótidos descriptos. Las variantes alélicas son formas alternativas de ocurrencia natural de los polinucleótidos descriptos que codifican polipéptidos que son idénticos o tienen una similitud significativa respecto de los polipéptidos codificados por los polinucleótídos descriptos. Preferiblemente, las variantes alélicas tienen al menos 90% de identidad de secuencia (más preferiblemente al menos 95% de identidad; más preferiblemente al menos 99% de identidad) con los polinucleótidos descriptos. Los polinucleótidos aislados de la presente invención también pueden usarse como sondas y cebadores de hibridización para identificar y aislar ADN con secuencias que codifican polipéptidos homólogos a los polinucleótidos descriptos. Estos homólogos son polinucleótidos y polipéptidos aislados a partir de una especie diferente de aquella que contiene los polipéptidos y los polinucleótidos descriptos, o son de la misma especie, pero presentan una similitud de secuencia significativa con los polinucleótidos y los polipéptidos descriptos. Preferiblemente, los polinucleótidos homólogos tienen al menos 50% de identidad de secuencia (más preferiblemente al menos 75% de identidad; más preferiblemente al menos 90% de identidad) con los polinucleótidos descriptos, mientras que los polipéptidos homólogos tienen al menos 30% de identidad de secuencia (más preferiblemente al menos 45% de identidad; más preferiblemente al menos 60% de identidad) con los polipéptídqs descriptos. Preferiblemente, los homólogos de los polinucleótidos y los polipéptidos descriptos son aquellos aislados a partir de especies de mamíferos. Los polinucleótidos aislados de la presente invención también pueden usarse como sondas y cebadores de híbridización para identificar células y tejidos que expresan los polipéptidos de la presente invención, y las condiciones bajo las que se expresan. Se interpreta que los antagonistas de IL-21/IL-21 R de la presente invención pueden presentar sustituciones de aminoácidos adicionales conservativas o no esenciales, que no tengan efectos sustanciales sobre sus funciones. Una "sustitución de aminoácidos conservativa" es una donde se reemplaza el residuo de aminoácido por un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. En la técnica se han definido familias de residuos de aminoácidos con cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales acidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparragina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolína, fenilalanina, metionina, triptofano), cadenas laterales con ramificaciones beta (por ejemplo, threonina, valína, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). El término "célula huésped recombinante" (o simplemente "célula huésped"), como se lo usa en la presente documentación, designa una célula en la que se ha introducido un vector de expresión recombinante. Deberá comprenderse que estos términos no designan solamente la célula particular en cuestión, sino también la progenie de dicha célula. Como pueden efectuarse determinadas modificaciones en las generaciones sucesivas debido a influencias mutacionales o ambientales, esta progenie, de hecho, puede no ser idéntica a la célula progenitora, pero aún puede incluirse en el alcance del término "célula huésped" como se lo usa en la presente documentación.

Antagonistas de IL-21/IL-21 R En una realización, puede fusionarse un polipéptido IL-21R/MU- 1 , o fragmentos activos de éste, con una segunda porción, por ejemplo, una inmunoglobulina o un fragmento de ésta (por ejemplo, un fragmento de unión a Fc de ésta). Por ejemplo, pueden fusionarse formas solubles de IL-21R/MU-1 a través de secuencias "conectoras" con la porción Fc de una inmunoglobulina. También pueden usarse otras proteínas de fusión, tales como aquellas con GST, Lex-A o MBP. Las proteínas de fusión también pueden incluir una secuencia conectora para unir el fragmento de IL-21 o IL-21 R con la segunda porción. Por ejemplo, la proteína de fusión puede incluir un conector peptídíco, por ejemplo, un conector peptídico de entre 4 y 20, más preferiblemente entre 5 y 10 aminoácidos de longitud; en una realización, el conector peptídico tiene 8 aminoácidos de longitud. Cada uno de los aminoácidos en el conector peptídico se selecciona del grupo que consiste en Gly, Ser, Asn, Thr y Ala; en una realización, el conector peptídico incluye un elemento Gly-Ser. En otras realizaciones, la proteína de fusión incluye un conector peptídico y el conector peptídico incluye una secuencia con la fórmula (Ser-Gly-Gly-Gly- Gly)y donde y es 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8. En otras realizaciones, pueden agregarse secuencias de aminoácidos adicionales en el extremo N o C de la proteína de fusión para facilitar la expresión, la detección y/o el aislamiento o la purificación. Por ejemplo, puede unirse la proteína de fusión IL-21/IL-21 R a una o más porciones adicionales, por ejemplo, GST, una marca Hisß, una marca FLAG. Por ejemplo, la proteína de fusión puede unirse adicionalmente a una proteína de fusión GST, donde se fusionen las secuencias de la proteína de fusión con el extremo C de secuencias GST (es decir, glutatión S-transferasa). Estas proteínas de fusión pueden facilitar la purificación de la proteína de fusión MU-1. En otra realización, la proteína de fusión incluye una secuencia señal heteróloga (es decir, una secuencia de polipéptido que no está presente en un polipéptido codificado por un ácido nucleico de MU-1) en su extremo N. Por ejemplo, puede retirarse la secuencia señal nativa de MU-1 y puede reemplazársela por una secuencia señal de otra proteína. En determinadas células huésped (por ejemplo, células huésped de mamíferos), puede incrementarse la expresión y/o la secreción de MU-1 mediante el uso de una secuencia señal heteróloga. Puede producirse una proteína quimérica o de fusión de la invención empleando procedimientos convencionales de ADN recombinante. Por ejemplo, se unen fragmentos de ADN que codifican las distintas secuencias de polipéptidos en marco de lectura de acuerdo con procedimientos convencionales, por ejemplo, empleando extremos romos o sesgados para la unión, digestión con enzimas de restricción para proporcionar los extremos apropiados, relleno con extremos cohesivos según sea apropiado, tratamiento con fosfatasa alcalina para evitar uniones indeseadas, y unión enzimática. En otra realización, puede sintetizarse el gen de fusión de acuerdo con procedimientos convencionales, incluyendo sintetízadores de ADN automatizados. Como alternativa, puede efectuarse la amplificación por PCR de los fragmentos genéticos usando cebadores de anclaje que den lugar a salientes complementarias entre dos fragmentos genéticos consecutivos, que luego se alinearán y amplificarán nuevamente para generar una secuencia genética quimérica (véase, por ejemplo, Ausubel et al. (editores) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1992). Más aún, existen muchos vectores de expresión disponibles comercialmente que codifican una porción de fusión (por ejemplo, una región Fc de una cadena pesada de inmunoglobulina). Puede clonarse un ácido nucleico que codifica MU-1 en uno de estos vectores de expresión, de modo que la porción de fusión quede unida en el marco de lectura con la proteína de inmunoglobulina. En algunas realizaciones, los polipéptidos de fusión de MU-1 existen como oligómeros, tales como dímeros o trímeros. El primer polipéptido, y/o los ácidos nucleicos que codifican el primer polipéptído, puede construirse usando métodos conocidos en la técnica. En algunas realizaciones, se proporciona el polipéptido MU-1 como una variante de un polipéptido MU-1 que tiene una mutación en la secuencia de MU-1 de ocurrencia natural (tipo salvaje) que resulta en una mayor afinidad (respecto de la secuencia no mutada) que une el polipéptido MU-1 con un lL-21. En algunas realizaciones, la porción del polipéptido MU-1 se proporciona como una variante del MU-1 que tiene mutaciones en la secuencia de MU-1 de ocurrencia natural (tipo salvaje) que resulta en una secuencia de MU-1 más resistente a la proteólisis (respecto de la secuencia no mutada). En algunas realizaciones, el primer polípéptido incluye un polipéptido MU-1 completo. Como alternativa, el primer polipéptido comprende menos que un polipéptido MU-1 completo. Un péptido señal que puede incluirse en la proteína de fusión es MPLLLLLLLLPSPLHP (SEQ ID N° 21). Si se lo desea, pueden insertarse adicionalmente uno o más aminoácidos entre la primera porción del polipéptido que comprende la porción MU-1 y la segunda porción del polipéptido. El segundo polipéptido preferiblemente es soluble. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido mejora la vida media, (por ejemplo, la vida media en suero) del polipéptido unido. En algunas realizaciones, el segundo polipéptido incluye una secuencia que facilita la asociación del polipéptido de fusión con un segundo polipéptido MU-1. En realizaciones preferidas, el segundo polipéptido incluye al menos una región de un polipéptido de inmunoglobulina. En la técnica se conocen polipéptidos de fusión de inmunoglobulina, y se los describe, por ejemplo, en las Patentes de los EEUU N° 5516964, 5225538, 5428130, 5514582, 5714147 y 5455165. En algunas realizaciones, el segundo polípéptido comprende un polipéptido de inmunoglobulina completo. Como alternativa, el segundo polipéptido comprende menos que un polipéptido de inmunoglobulina completo, por ejemplo, una cadena pesada, una cadena liviana, Fab, Fab2, Fv o Fc. Preferiblemente, el segundo polipéptido incluye la cadena pesada de un polipéptído de inmunoglobulina. Más preferiblemente, el segundo polipéptido incluye la región Fc de un polipéptido de inmunoglobulina. En otro aspecto de la invención, el segundo polipéptido tiene una función efectora menor que la función efectora de una región Fc de una cadena pesada de inmunoglobulina. La función efectora de Fc incluye, por ejemplo, la unión al receptor Fc, la fijación de complemento y la actividad de debilitamiento de células T (véase, por ejemplo, la Patente de los EEUU N° 6136310). En la técnica se conocen métodos evaluar la actividad de debilitamiento de células T, la función efectora de Fc y la estabilidad de los anticuerpos. En una realización, el segundo polipéptido tiene poca o ninguna afinidad por el receptor Fc. En una realización alternativa, el segundo polipéptido tiene poca o ninguna afinidad por la proteína de complemento C1q. Una secuencia preferida para el segundo polipéptido incluye la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N° 17. Esta secuencia incluye una región Fc. Los aminoácidos subrayados son aquellos que difieren de los aminoácidos hallados en la posición correspondiente de la secuencia de inmunoglobulina tipo salvaje: HTCPPCPAPEA GAPSVF FP PKPKDT MI S RT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVD GVEVHNAK TKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPVPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPP SREE TKNQVSLTC VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID N° 17) En las FIGS. 7-15 se presentan ejemplos de proteínas de fusión antagonísticas que pueden usarse en los métodos de la invención. En una realización, la proteína de fusión incluye una secuencia de aminoácidos seleccionada, por ejemplo, entre SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, SEQ ID N° 31 , SEQ ID N° 33, SEQ ID N° 35, SEQ ID N° 37 o SEQ ID N° 39, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. En otras realizaciones, la proteína de fusión incluye una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada, por ejemplo, entre SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, SEQ ID N° 32, SEQ ID N° 34, SEQ ID N° 36 o SEQ ID N° 38, o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. Las proteínas de fusión preferidas tienen la secuencia de aminoácidos presentada en SEQ ID N° 25 o SEQ ID N° 29 (FIGS. 8A-8C y 10A-10C, respectivamente), o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. En otras realizaciones, la proteína de fusión incluye una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada, por ejemplo, entre SEQ ID N° 24 o SEQ ID N° 28 (FIGS. 8A-8C y 10A-10C, respectivamente), o una secuencia al menos 85%, 90%, 95%, 98% o más idéntica a ella. Más preferiblemente, la proteína de fusión tiene la secuencia de aminoácidos presentada en SEQ ID N° 29, o tiene una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos indicada en SEQ ID N° 28 (FIG. 10A-10C). En otras realizaciones, los antagonistas de IL-21/IL-21R son anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de éstos, que se unen a IL-21 o IL-21 R, preferiblemente, IL-21 o IL-21 R de mamíferos (por ejemplo, humanos o murínos). Las proteínas MU-1 de la invención también pueden usarse para inmunizar animales para obtener anticuerpos policlonales y monoclonales que reaccionen específicamente con la proteína MU-1 , y que puedan inhibir la unión de ligandos al receptor. Estos anticuerpos pueden obtenerse usando MU-1 completo como inmunógeno, o usando fragmentos de MU-1. También pueden usarse fragmentos de MU-1 más pequeños para inmunizar los animales. Además, los péptidos inmunogénicos pueden contener un residuo de cisteina en el extremo carboxilo, y están conjugados con un hapteno, tal como hemocianina de cangrejo cacerola (KLH). Pueden generarse péptidos inmunogénicos adicionales reemplazando los residuos de tirosina por residuos de tirosina sulfatada. En la técnica se conocen métodos para sintetizar estos péptidos. Los anticuerpos neutralizadores o no neutralizadores (preferiblemente anticuerpos monoclonales) que se unen a proteínas MU-1 también pueden ser útiles en el tratamiento de las condiciones descriptas previamente. Estos anticuerpos monoclonales neutralizadores pueden ser capaces de bloquear la unión de ligandos a la cadena del receptor MU-1. Además, la presente invención provee composiciones que comprenden un anticuerpo que reacciona específicamente con un IL-21 o un IL-21 R. Pueden generarse anticuerpos monoclonales (mAbs) humanos dirigidos contra IL-21 o IL-21 R usando ratones transgénicos que contienen los genes de inmunoglobulina humana, en vez del sistema basado en ratón. Se usan esplenocitos de estos ratones transgénicos inmunizados con el antígeno de interés para producir hibridomas que secretan mAbs humanos con afinidades específicas por epitopes para una proteína humana (véanse, por ejemplo, Wood et al., Publicación Internacional WO 91/00906, Kucherlapati et al., Publicación Internacional WO 91/10741 ; Lonberg et al., Publicación Internacional WO 92/03918; Kay et al., Publicación Internacional WO 92/03917; Lonberg et al. (1994) Nature 368:856-59; Green et al. (1994) Nat. Genet. 7:13-21 ; Morrison et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 81 :6851-55; Bruggeman et al. (1993) Year Inmunol. 7:33-40; Tuaillon et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 90:3720-24; Bruggeman et al. (1991 ) Eur. J. Inmunol. 21 :1323-1326). También pueden generarse anticuerpos monoclonales empleando otros métodos conocidos por aquellos entrenados en la técnica de la tecnología de ADN recombinante. Se ha desarrollado un método alternativo, conocido como el método de "presentación de anticuerpos de combinación", para identificar y aislar fragmentos de anticuerpos con una especificidad antigénica particular, y puede utilizárselos para producir anticuerpos monoclonales; este método es bien conocido en la técnica. Después de inmunizar un animal con un inmunógeno, se clona el repertorio de anticuerpos de la reserva de células B resultantes. En general, se conocen métodos para obtener la secuencia de ADN de las regiones variables de una población diversa de moléculas de inmunoglobulina usando una mezcla de oligómeros cebadores y PCR. Por ejemplo, pueden usarse oligonucleótidos cebadores mixtos que corresponden a secuencias directrices 5' (péptido señal) y/o secuencias de marco 1 (FR1), así como cebadores de una región conservada 3' constante, para realizar la amplificación por PCR de las regiones variables de las cadenas pesada y liviana a partir de una cantidad de anticuerpos murínos (Larrick et al. (1991) Biotechniques 11 :152-56). También puede usarse un procedimiento similar para amplificar las regiones variables de las cadenas pesada y liviana a partir de anticuerpos humanos (Larrick et al. (1991) Methods: Companion to Methods in Enzymology 2:106- 10). Pueden producirse anticuerpos quiméricos, incluyendo cadenas de inmunoglobulina quiméricas, empleando procedimientos de ADN recombinante conocidos en la técnica. Por ejemplo, se digiere un gen que codifica la región Fc constante de una molécula de anticuerpo monoclonal murino (o de otra especie) con enzimas de restricción para remover la región que codifica la Fc murina, y se sustituye la porción de un gen que codifica la región constante Fc humana (véanse, por ejemplo, Robinson et al., Publicación Internacional de Patente PCT/US86/02269; Akira et al., Publicación Europea de Patente 184187; Taniguchi, Publicación Europea de Patente 171496; Morrison et al., Publicación Europea de Patente 173494; Neuberger et al., Publicación Internacional WO 86/01533; Cabilly et al. Patente de los EEUU N° 4816567; Cabilly et al., Publicación Europea de Patente 125023; Better et al. (1988) Science 240:1041-43; Liu et al. (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 84:3439-43; Liu et al. (1987) J. Inmunol. 139:3521-26; Sun et al. (1987) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 84:214-18; Nishimura et al. (1987) Canc. Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-49; Shaw et al. (1988) J. Nati. Cáncer Inst. 80:1553-59). Puede humanizarse un anticuerpo o una cadena de inmunoglobulina empleando métodos conocidos en la técnica. Pueden generarse anticuerpos humanizados, incluyendo cadenas de ¡nmunoglobulina humanizadas, reemplazando secuencias de la región variable Fv que no participan directamente en la unión de antígenos por secuencias equivalentes de regiones variables Fv humanas. Se proporcionan métodos generales para generar anticuerpos humanizados en Morrison (1985) Science 229:1202-07; Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214; y Queen et al., Patentes de los EEUU N° 5585089, 5693761 y 5693762, cuyos contenidos se incorporan en la presente documentación a modo de referencia. Estos métodos incluyen aislar, manipular y expresar las secuencias de ácidos nucleicos que codifican la totalidad o una parte de las regiones variables Fv de inmunoglobulina de al menos una de las cadenas pesadas o livianas. Las fuentes de estos ácidos 5 nucleicos son bien conocidas por aquellos entrenados en la técnica, y pueden obtenerse, por ejemplo, a partir de un hibridoma que produce un anticuerpo contra un blanco predeterminado. Luego puede clonarse el ADN recombinante que codifica el anticuerpo humanizado, o un fragmento de éste, en un vector de expresión apropiado. Pueden producirse moléculas de anticuerpos o inmunoglobulinas humanizadas o injertadas con CDR efectuando in injerto con CDR o una sustitución por CDR, donde pueden reemplazarse una, dos o todas las CDR de una cadena de inmunoglobulina (véanse, por ejemplo, la Patente de los EEUU N° 5225539; Jones et al. (1986) Nature 321 :552-25; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; Beidler et al. (1988) J. Inmunol. 141 :4053-60; Winter, Patente de los EEUU N° 5225539, cuyos contenidos se incorporan en la presente documentación a modo de referencia. Winter describe un método de injerto de CDR que puede usarse para preparar los anticuerpos humanizados de la presente invención (Solicitud de Patente del Reino Unido GB 2188638A, presentada el 26 de Marzo de 1987; Winter, Patente de los EEUU N° 5225539, cuyos contenidos se incorporan en la presente documentación a modo de referencia). Pueden reemplazarse todas las CDR de un anticuerpo humano particular por al menos una porción de una CDR no humana, o pueden reemplazarse solamente algunas de las CDR por CDR no humanas. Solamente es necesario reemplazar la cantidad de CDR necesarias para unir el anticuerpo humanizado a un antígeno predeterminado.

Los anticuerpos monoclonales, quiméricos y humanizados que han sido modificados, por ejemplo, mediante la deleción, la adición o la sustitución de otras porciones del anticuerpo, por ejemplo, la región constante, también están dentro del alcance de la invención. Por ejemplo, puede modificarse un anticuerpo: (i) eliminando la región constante; (ii) reemplazando la región constante por otra región constante, por ejemplo, una región constante cuyo objeto es incrementar la vida media, la estabilidad o la afinidad del anticuerpo, o una región constante de otra especie o clase de anticuerpo; o (iii) modificando uno o más aminoácidos en la región constante para alterar, por ejemplo, la cantidad de sitios de glicosilación, la función de las células efectoras, la unión con receptores Fc (FcR) y la fijación de complementos, entre otros. En la técnica se conocen métodos para alterar la región constante de un anticuerpo. Pueden producirse anticuerpos con una función alterada, por ejemplo, afinidad alterada por un ligando efector, tal como un FcR en una célula, o el componente C1 del complemento, reemplazando al menos un residuo de aminoácido en la porción constante del anticuerpo por un residuo diferente (véase, por ejemplo, E.P. 388151 A1 , Patente de los EEUU N° 5624821 y Patente de los EEUU N° 5648260, cuyos contenidos se incorporan en la presente documentación a modo de referencia). Podrán describirse tipos de alteraciones similares que, de aplicarse a inmunoglobulinas de especies murinas o diferentes, reducirán o eliminarán estas funciones.

Por ejemplo, es posible alterar la afinidad de una región Fc de un anticuerpo (por ejemplo, una IgG, tal como una IgG humana) por un FcR (por ejemplo, Fc gamma R1), o para la unión con C1q, reemplazando el/los residuo(s) específico(s) por uno o más residuos con una funcionalidad apropiada en su cadena lateral, o introduciendo un grupo funcional cargado, tal como glutamato o aspartato, o tal vez un residuo aromático no polar, tal como fenilalanina, tirosina, triptofano o alanina (véase, por ejemplo, la Patente de los EEUU N° 5624821 ). En el ámbito público se conocen las secuencias de aminoácidos de los polipéptidos IL-21. Por ejemplo, la secuencia de nucleótidos y aminoácidos de un IL-21 humano está disponible en GENBANK®, con el N° de Acceso X 011082. A continuación se presenta la secuencia del IL-21 descripto: 1 gctgaagtga aaacgagacc aaggtctagc tctactgttg gtacttatga gatccagtcc 61 tggcaacatg gagaggattg tcatctgtct gatggtcatc ttcttgggga cactggtcca 121 caaatcaagc tcccaaggtc aagatcgcca catgattaga atgcgtcaac ttatagatat 181 tgttgatcag ctgaaaaatt atgtgaatga cttggtccct gaatttctgc cagctccaga 241 agatgtagag acaaactgtg agtggtcagc tttttcctgc tttcagaagg cccaactaaa 301 gtcagcaaat acaggaaaca atgaaaggat aatcaatgta tcaattaaaa agctgaagag 361 gaaaccacct tccacaaatg cagggagaag acagaaacac agactaacat gcccttcatg 421 tgattcttat gagaaaaaac cacccaaaga attcctagaa agattcaaat cacttctcca 481 aaagatgatt catcagcatc tgtcctctag aacacacgga agtgaagatt cctgaggatc 541 taacttgcag ttggacacta tgttacatac tctaatatag tagtgaaagt catttctttg 601 tattccaagt ggaggag (SEQ ID N° 18) A continuación se presenta la secuencia de aminoácidos del polipéptido IL-21 humano descripto: MRSSPGNMERIVICLMVIFLGTLVHKSSSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVET NCE SAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEF E RFKS LQKMIHQHLSSRTHGSEDS (SEQ ID N° 19) La invención también comprende ácidos nucleicos que hibridizan con la secuencia de nucleótidos detallada en SEQ ID N° 1 , SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, SEQ ID N° 32, SEQ ID N° 34, SEQ ID N° 36 o SEQ ID N° 38, bajo condiciones muy severas (por ejemplo, SSC 0.1X a 65°C). Los polinucleótidos aislados que codifican proteínas o proteínas de fusión MU-1 , pero que difieren de la secuencia de nucleótidos detallada en SEQ ID N° 1 , SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, SEQ ID N° 32, SEQ ID N° 34, SEQ ID N° 36 o SEQ ID N° 38 en virtud de la degeneración del código genético, también están comprendidos por la presente invención. Las variaciones en la secuencia de nucleótidos detalladas en SEQ ID N° 1 , SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, SEQ ID N° 32, SEQ ID N° 34, SEQ ID N° 36 o SEQ ID N° 38, causadas por mutaciones puntuales o por modificaciones inducidas, también están incluidas en la invención. Los polinucleótidos aislados de la invención pueden unirse operativamente a una secuencia de control de la expresión, tal como los vectores de expresión pMT2 o pED descríptos en Kaufman et al. (1991) Nucleic Acids Res. 19:4485-90, con el fin de producir la proteína MU-1 en forma recombinante. En la técnica se conocen muchas secuencias apropiadas para controlar la expresión. También se conocen métodos generales para expresar proteínas recombínantes, y se presentan ejemplos de éstos en Kaufman (1990) Methods in Enzymology 185:537-66. Como se lo define en la presente documentación, "unido operativamente" designa unido por medios enzimátícos o químicos para formar una unión covalente entre el polinucleótido aislado de la invención y la secuencia de control de la expresión, de modo tal que la proteína MU-1 se expresa en una célula huésped que ha sido transformada (transfectada) con el polinucleótido/la secuencia de control de la expresión unida. El término "vector", como se lo usa en la presente documentación, hace referencia a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al que está unida. Un tipo de vector es un "plásmido", que designa un rizo de ADN circular de cadena doble en el que pueden unirse segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector viral, con el que pueden unirse segmentos de ADN adiconales en el genoma viral. Determinados vectores son capaces de replicarse en forma autónoma en una célula huésped en la que se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen de replicación bacteriano y vectores epísomales de mamíferos). Otros vectores (por ejemplo, vectores no episomales de mamíferos) pueden integrarse en el genoma de una célula al introducirse en la célula huésped, y por consiguiente se replican junto con el genoma huésped. Más aún, determinados vectores son capaces de dirigir la expresión de los genes a los que están unidos operativamente. Estos vectores se conocen en la presente documentación como "vectores de expresión recombinantes" (o simplemente "vectores de expresión"). En general, los vectores de expresión útiles en los procedimientos de ADN recombinante comúnmente toman la forma de plásmidos. En la presente memoria descriptiva, puede usarse "plásmido" y "vector" en forma indistinta, ya que el plásmido es la forma de uso más común de un vector. Sin embargo, la invención incluye otras formas de vectores de expresión, tales como vectores virales (por ejemplo, retrovírus, adenovirus y virus adeno-asociados con replicación defectuosa), que tienen funciones equivalentes. El término "secuencia reguladora" incluye promotores, potenciadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación) que controlan la transcripción o la traducción de los genes de las cadenas de anticuerpos. Estas secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en Goeddel (1990) Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA. Aquellos entrenados en la técnica podrán apreciar que el diseño del vector de expresión, incluyendo la selección de las secuencias reguladoras, puede depender de factores tales como la selección de la célula huésped que se desea transformar, el nivel de expresión deseado para la proteína, etcétera. Las secuencias reguladoras preferidas para efectuar la expresión en células huésped de mamíferos incluyen elementos virales que dirigen niveles de expresión proteica elevados en células de mamíferos, tales como los promotores y/o los potenciadores derivados del promotor FF-1a y la poli A de BGH, citomegalovirus (CMV) (tales como el promotor/potenciador de CMV), el virus de simio 40 (SV40) (tales como el promotor/potenciador de SV40), adenovirus, (por ejemplo, el promotor tardío mayor de adenovirus (AdMLP)) y poliomas. Para hallar descripciones adicionales de elementos reguladores virales, y secuencias de éstos, véanse, por ejemplo, las Patentes de los EEUU N° 5168062, 4510245, 4968615. Los vectores de expresión recombinantes de la invención pueden contener secuencias adicionales, tales como secuencias que regulan la replícación del vector en las células huésped (por ejemplo, orígenes de replicación) y genes marcadores de selección. El gen marcador de selección facilita la selección de las células huésped en las que se lo ha introducido (véanse, por ejemplo, las Patentes de los EEUU N° 4399216, 4634665, 5179017). Por ejemplo, típicamente el gen marcador de selección confiere resistencia a drogas, tales como G418, higromicina o metotrexato, a una célula huésped en la que se ha introducido el vector. Los genes marcadores de selección preferidos incluyen el gen de dihidrofolato reductasa (DHFR) (para usar en células huésped dhfr- con selección/amplificación con metotrexato) y el gen neo (para efectuar una selección con G418). Una cantidad de tipos de células pueden actuar como células huésped apropiadas para expresar la proteína o la proteína de fusión de MU-1. Puede usarse cualquier tipo de célula capaz de expresar proteínas MU-1 funcionales. Las células huésped de mamíferos apropiadas incluyen, por ejemplo, células COS de mono, células de ovario de hámster chino (CHO), células de riñon humano 293, células epidérmicas humanas A431 , células Colo205 humanas, células 3T3, células CV-1 , otras líneas de células de primates transformadas, células diploides normales, cepas de células derivadas de cultivos in vitro de tejidos primarios, explantes primarios, células HeLa, células L de ratón, células BHK, HL-60, U937, HaK, Rat2, BaF3, 32D, FDCP-1 , PC12, M1x o C2C12. También puede producirse la proteína o la proteína de fusión MU-1 uniendo operativamente el polinucleótido aislado de la invención con secuencias de control apropiadas en uno o más vectores de expresión de insectos, y empleando un sistema de expresión en insectos. Existen materiales y métodos relacionados con sistemas de expresión con baculovirus/células de insectos disponibles comercialmente, por ejemplo, en Invitrogen, San Diego, CA (por ejemplo, el conjunto de elementos MAXBAC®), y estos métodos son bien conocidos en la técnica, como se describe en Summers y Smith, Boletín de la Estación Agrícola Experimental de Texas N° 1555 (1987), incorporado en la presente documentación a modo de referencia. También pueden producirse formas solubles de la proteína MU-1 en células de insectos usando polinucleótidos aislados apropiados, como se describió previamente. Como alternativa, puede producirse la proteína o la proteína de fusión MU-1 en eucariotas inferiores, tales como levaduras, o en proca otas, tales como bacterias. Las cepas de levaduras apropiadas incluyen Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces strains, Candida o cualquier cepa de levadura capaz de expresar proteínas heterólogas. Las cepas bacterianas apropiadas incluyen Escherichia coli, Bacillus subtilis, Salmonella typhimuríum, o cualquier cepa bacteriana capaz de expresar proteínas heterólogas. La expresión en bacterias puede resultar en la formación de cuerpos de inclusión que incorporen la proteína recombinante. Por consiguiente, puede ser necesario plegar nuevamente la proteína recombínante para producir material activo o más activo. En la técnica se conocen varios métodos para obtener proteínas heterólogas plegadas correctamente a partir de cuerpos de inclusión bacterianos. Estos métodos comprenden generalmente solubilizar la proteína a partir de los cuerpos de inclusión, luego desnaturalizar la proteína por completo usando un agente caotrópico. Cuando hay residuos de cisteína presentes en la secuencia de aminoácidos primaria de la proteína, es comúnmente necesario efectuar el nuevo plegamiento en un ambiente que permita la formación correcta de puentes disulfuro (un sistema redox). Se describen métodos generales para efectuar este nuevo plegamiento en Kohno (1990) Meth. Enzym. 185:187-95; en E.P. 0433225 y la Patente de los EEUU N° 5399677 se describen otros métodos apropiados. La proteína o la proteína de fusión MU-1 también puede expresarse como un producto de animales transgénicos, por ejemplo, como un componente de la leche de vacas, cabras, cerdos u ovejas transgénicas, caracterizadas por la presencia de células somáticas o germinales que contienen una secuencia de polinucleótídos que codifica la proteína o la proteína de fusión MU-1. Puede prepararse la proteína o la proteína de fusión MU-1 desarrollando un cultivo de células huésped transformadas bajo condiciones de cultivo necesarias para expresar la proteína deseada. Luego puede purificarse la proteína deseada expresada a partir del medio de cultivo o los extractos celulares. Pueden purificarse formas solubles de la proteína o la proteína de fusión MU-1 a partir de medios acondicionados. Pueden purificarse las formas unidas a membrana de la proteína MU-1 de la invención preparando una fracción total de membrana a partir de las células que presentan expresión, y extrayendo las membranas con un detergente no ¡ónico, tal como TRITÓN® X-100. Puede purificarse la proteína o la proteína de fusión MU-1 usando métodos conocidos por aquellos entrenados en la técnica. Por ejemplo, puede concentrarse la proteína MU-1 de la invención usando un filtro de concentración proteica disponible comercialmente, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración AMICON® o PELLICON® (Millipore, Billerica, MA). Después del paso de concentración, puede aplicarse el concentrado a una matriz de purificación, tal como un medio de filtración en gel. Como alternativa, puede emplearse una resina de intercambio aniónico, por ejemplo, una matriz o un sustrato que tiene grupos díetilaminoetilo (DEAE) o polietenilenimina (PEÍ) unidos. Las matrices pueden ser de acrilamida, agarosa, dextrano, celulosa o de otros tipos empleados comúnmente en la purificación de proteínas. Como alternativa, puede emplearse un paso de intercambio catiónico. Los sistemas de intercambio catiónico apropiados incluyen varias matrices ¡nsolubles que comprenden grupos sulfopropilo o carboximetilo. Se prefieren los grupos sulfopropilo (por ejemplo, columnas S-SEPHAROSE®). La purificación de la proteína o la proteína de fusión MU-1 a partir de un sobrenadante de cultivo también puede incluir uno o más pasos en columna, sobre resinas de afinidad tales como concanavalina A-agarosa, hepa na-TOYOPEARL® o azul Cibacron 3GA SEPHAROSE®; o de cromatografía de interacción hidrofóbica, usando resinas tales como feníl éter, butil éter o propil éter; o de cromatografía de inmunoafinidad. Finalmente, puede emplearse uno o más pasos de cromatografía líquida de alto desempeño de fase inversa (RP-HPLC) con medios de RP-HPLC hidrofóbicos, por ejemplo, gel de sílice con grupos metilo u otros grupos alifáticos unidos, para purificar adicionalmente la proteína MU-1. también pueden usarse columnas de afinidad que incluyen anticuerpos contra la proteína MU-1 en la purificación, de acuerdo con métodos conocidos. También pueden usarse algunos o todos los métodos de purificación anteriores, en varias combinaciones o con otros métodos conocidos, para proporcionar una proteína recombinante sustancialmente purificada. Preferiblemente, la proteína MU-1 aislada se purifica de modo que esté sustancialmente libre de otras proteínas de mamíferos. También pueden usarse las proteínas o las proteínas de fusión MU-1 de la invención para buscar agentes capaces de unirse a MU-1. Los ensayos de unión que usan una proteína de unión deseada, inmovilizada o no, son bien conocidos en la técnica y pueden usarse para este propósito con la proteína MU-1 de la invención. Pueden usarse ensayos de análisis basados en células purificadas o basados en proteínas (libres de células) para identificar estos agentes. Por ejemplo, puede inmovilizarse la proteína MU-1 en forma purificada en un vehículo y puede medirse la unión de ligandos potenciales a la proteína MU-1 purificada.

Composiciones farmacéuticas Los antagonistas de IL-21/IL-21 R pueden usarse como una composición farmacéutica cuando se los combina con un vehículo aceptable para el uso farmacéutico. Esta composición puede contener, además de los antagonistas de IL-21/IL-21 R y el vehículo, varios diluyentes, rellenos, sales, amortiguadores, estabilizadores, solubilizadores y otros materiales bien conocidos en la técnica. El término "aceptable para el uso farmacéutico" designa un material no tóxico que no interfiere con la efectividad de la actividad biológica de los ingredientes activos. Las características del vehículo dependerán de la ruta de administración. La composición farmacéutica de la invención puede tomar la forma de un liposoma en el que se combinan uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R, y otros vehículos aceptables para el uso farmacéutico, con agentes antipáticos, tales como los lípidos que existen en forma agregada, tales como micelas, monocapas insolubles, cristales líquidos o capas lamelares en solución acuosa. Los lípidos apropiados para las formulaciones de liposomas incluyen, sin limitaciones, monoglicéridos, diglicéridos, sulfátidos, lisolecitina, fosfolípidos, saponina, ácidos biliares y semejantes. La preparación de estas formulaciones liposomales está dentro del nivel de aquellos entrenados en la técnica, como se describe, por ejemplo, en las Patente de los EEUU N° 4235871 , 4501728, 4837028 y 4737323, todas incorporadas en la presente documentación a modo de referencia. Como se lo usa en la presente documentación, el término "cantidad efectiva para el uso terapéutico" designa la cantidad total de cada componente activo de la composición farmacéutica o el método que es suficiente para beneficiar significativamente al paciente, por ejemplo, para mejorar los síntomas, curar o incrementar la velocidad de curación de estas condiciones. Cuando se lo aplica a un ingrediente activo individual administrado solo, el término hace referencia a dicho ingrediente solo.

Cuando se lo aplica a una combinación, el término hace referencia a las cantidades combinadas de los ingredientes activos que resultan en el efecto terapéutico, ya sea que se las administre en combinación, en serie o en forma simultánea. Para poner en práctica el método de tratamiento o el uso de la presente invención, se administra una cantidad efectiva para el uso terapéutico de un antagonista de IL-21/IL-21 R a un sujeto, por ejemplo, un mamífero (por ejemplo, un ser humano). Pueden administrarse uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R de acuerdo con el método de la invención, solos o en combinación con otras terapias, como se describe con mayor detalle en la presente documentación. Cuando se lo coadministra con uno o más agentes, puede administrarse el antagonista de IL-21 y/o IL-21 R en forma simultánea con el segundo agente, o en forma consecutiva. Si se lo administra en forma consecutiva, el médico a cargo decidirá la secuencia apropiada para administrar el o los antagonistas de IL-21/IL-21 R en combinación con otros agentes. La administración de un antagonista de IL-21/IL-21 R usado en la composición farmacéutica o para poner en práctica el método de la presente invención puede efectuarse de una variedad de formas convencionales, tales como ingestión oral, inhalación o inyección cutánea, subcutánea o intravenosa. Se prefiere la administración intravenosa al paciente. Cuando se administra una cantidad efectiva para el uso terapéutico de un agonista o un antagonista de IL-21/IL-21 R por vía oral, el agente aglutinante tomará la forma de una tableta, una cápsula, un polvo, una solución o un elixir. Cuando se la administre bajo la forma de una tableta, la composición farmacéutica de la invención podrá contener adicionalmente un vehículo sólido, tal como una gelatina o un coadyuvante. La tableta, la cápsula y el polvo pueden contener entre aproximadamente 5 y 95% de agente aglutinante, y preferiblemente entre aproximadamente 25 y 90% de agente aglutinante. Cuando se la administra como un líquido, puede agregarse un vehículo líquido, tal como agua, petróleo, aceites de origen animal o vegetal, tal como aceite de maní, aceite mineral, aceite de soja, aceite de sésamo o aceites sintéticos. Además, la forma líquida de la composición farmacéutica puede contener solución salina fisiológica, dextrosa u otra solución de sacárídos, o glicoles, tales como etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Cuando se la administra en forma líquida, la composición farmacéutica contiene entre aproximadamente 0.5 y 90% en peso del agente aglutinante, y preferiblemente entre aproximadamente 1 y 50% de agente aglutinante. Cuando se administra una cantidad efectiva para el uso terapéutico de un antagonista de IL-21/IL-21 R por inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, el agente aglutinante tomará la forma de una solución acuosa libre de pirógeno aceptable para el uso parenteral. La preparación de estas soluciones proteicas aceptables para el uso parenteral, que tienen el pH, la isotonicidad, la estabilidad y factores semejantes apropiados, está dentro del alcance de aquellos entrenados en la técnica. Una composición farmacéutica preferida para una inyección intravenosa, cutánea o subcutánea deberá contener, además de un agente aglutinante, un vehículo isotónico, tal como una inyección de cloruro de sodio, una inyección de Ringer, una inyección de dextrosa, una inyección de dextrosa y cloruro de sodio, una inyección de Ringer lactada u otros vehículos conocidos en la técnica. La composición farmacéutica de la presente invención también puede contener estabilizadores, preservantes, amortiguadores, antioxidantes u otros aditivos conocidos por aquellos entrenados en la técnica. La cantidad de un antagonista de IL-21/IL-21 R en la composición farmacéutica de la presente invención dependerá de la naturaleza y la severidad de la condición a tratar, y de la naturaleza de los tratamientos previos a los que haya sido sometido el paciente. Finalmente, el médico a cargo decidirá la cantidad de agente aglutinante con la cual tratará a cada paciente individual. Inicialmente, el médico a cargo administrará dosis bajas de agente aglutinante y observará la respuesta del paciente. Podrán administrarse dosis mayores de agente aglutinante hasta obtener el efecto terapéutico óptimo para el paciente, y en este punto generalmente no se incrementará más la dosificación. Se contempla que las distintas composiciones farmacéuticas usadas para poner en práctica el método de la presente invención deberán contener entre aproximadamente 0.1 µg y aproximadamente 100 mg de antagonista de IL-21/IL-21 R por kg de peso corporal. La duración de la terapia intravenosa usando la composición farmacéutica de la presente invención variará dependiendo de la severidad de la enfermedad y la condición a tratar, y de la respuesta idíosincrátíca potencial de cada paciente individual. Se contempla que la duración de cada aplicación del antagonista de IL-21/IL-21 R estará en el rango de entre 12 y 24 horas administración intravenosa continua. Finalmente, el médico a cargo decidirá la duración apropiada de la terapia intravenosa usando la composición farmacéutica de la presente invención. Se espera que los polinucleótidos y las proteínas de la presente invención presentarán uno o más de los usos o las actividades biológicas (incluyendo aquellas asociadas con los ensayos citados en la presente documentación) identificadas en la presente documentación. Los usos o las actividades descriptas para las proteínas de la presente invención pueden proporcionarse administrando o usando estas proteínas, o administrando o usando los polinucleótidos que codifican estas proteínas (tales como, por ejemplo, en terapia génica o en vectores apropiados para introducir el ADN).

Usos de los antagonistas de IL-21/IL-21 R para reducir la actividad de las células inmunes En aún otro aspecto, la invención proporciona un método para inhibir la actividad de una célula inmune, por ejemplo, células T maduras (células T CD8+ maduras, células T CD4+ maduras), células NK maduras, células B, macrófagos y magacahocitos, o una población de éstas, que comprende poner en contacto una población de células T con un antagonista de IL-21/IL-21 R, en una cantidad suficiente para inhibir la actividad de la célula inmune o la población de células inmunes. Los antagonistas de IL-21 y/o IL-21 R (por ejemplo, una proteína de fusión o un anticuerpo neutralizador, como se describe en la presente documentación) también pueden administrarse a los sujetos en los que se desee inhibir una respuesta inmune. Estas condiciones o trastornos incluyen, por ejemplo, trastornos autoínmunes (por ejemplo, trastornos artríticos, RA, IBD), SLE, asma, glomerulonefritis, psoriasis, o transplantes de injertos/órganos (y el rechazo relacionado con éstos). Los solicitantes han demostrado que una reducción de la actividad de IL-21 R mediante el uso de una proteína de fusión neutralizadora, que incluye el dominio extracelular de IL-21 R fusionado a una región Fc de inmunoglobulína, mejora los síntomas de inflamación en modelos animales de artritis inducida por colágeno (CÍA) (Ejemplo 7), así como en modelos animales de la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerativa y la IBD (Ejemplos 9 y 11), rechazo de injertos (Ejemplo 10), psoriasis (Ejemplo 11) y lupus (Ejemplo 13). La expresión del ARNm de IL-21 R está regulada positivamente en las patas de ratones con CÍA (Ejemplo 8). Los ratones con deficiencias de IL-21 R presentan una reducción en la inflamación de las vías respiratorias inducida por antígenos (Ejemplo 12). Por consiguiente, pueden usarse agentes aglutinantes de IL-21 R que antagonizan la actividad de IL-21/IL-21 R para inducir la supresión inmune in vivo, por ejemplo, para tratar o prevenir las patologías asociadas con las células inmunes, incluyendo los trastornos autoinmunes (por ejemplo, trastornos artríticos, RA, IBD), SLE, glomerulonefritis, asma, psoriasis, o transplante de injertos/órganos. El mapa del ADN de IL-21 R también presenta el locus cromosómico de la enfermedad de Crohn, por lo que proporciona un soporte adicional para el uso de antagonistas de IL-21/IL-21 R en el tratamiento de la enfermedad de Crohn y otras enfermedades intestinales inflamatorias. Este método también puede usarse para modular (por ejemplo, inhibir) la actividad, por ejemplo, la proliferación, la diferenciación, la supervivencia de una célula inmune, y por consiguiente puede usarse para tratar o prevenir una variedad de trastornos inmune. Los ejemplos no limitantes de los trastorno que pueden tratarse o prevenirse incluyen, sin limitaciones, el rechazo de transplantes, las enfermedades autoinmunes (incluyendo, por ejemplo, diabetes mellitus, artritis (incluyendo RA, RA juvenil, osteoartritis (OA), artritis psoriática), esclerosis múltiple, encefalomielitis, míastenia gravis, SLE, glomerulonefritis, tiroiditis autoinmune, dermatitis (incluyendo dermatitis atópica y dermatitis eccematosa), psoriasis y condiciones cutáneas relacionadas (por ejemplo, condiciones asociadas con el daño provocado por los rayos UV, por ejemplo, fotoenvejecímiento, dermatitis atópica, linfoma de células T cutáneas, tales como micosis fungoides, dermatitis de contacto alérgica e irritante, liquen plano, alopecia areata, vitíligo, pénfigoide en cicatrices oculares y urticaria), síndrome de Sjogren, enfermedad de Crohn, úlcera aftosa, iritis, colitis ulcerativa, espondiloartropatía, espondilitis anquilosante, asma intrínseco, asma alérgico, enfermedad obstructiva pulmonar cónica(COPD), fibrosís pulmonar intersticial, lupus eritematoso cutáneo, escleroderma, erupciones relacionadas con drogas, uveítis autoinmune, encefalomielitis alérgica, granulomatosís de Wegener, hepatitis, síndrome de Stevens-Johnson, erupciones idiopáticas, enfermedad de Graves, sarcoidosis, fibrosis hepática, cirrosis biliar primaria, uveítis posterior, enfermedad del injerto versus el huésped, y alergia, tal como alergia atópica. Los trastornos preferidos que pueden tratarse usando los antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen los trastornos artríticos (por ejemplo, RA, RA juvenil, OA, artritis psoriática y espondilitis anquilosante (preferiblemente, artritis reumatoide)), esclerosis múltiple, diabetes tipo I, lupus (SLE), IBD (enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa), asma, vasculitis, alergia, escleroderma, glomerulonefritis y psoriasis. En otra realización, pueden usarse los antagonistas de IL-21/IL-21 R, solos o en combinación con otros agentes terapéuticos como los que se describen en la presente documentación (por ejemplo, antagonistas de TNF), para tratar el mieloma múltiple y los tumores linfocíticos malignos B relacionados (Brenne et al. (2002) Blood 99(10):3756-62). Usando los antagonistas de IL-21/IL-21 R, es posible modular las respuestas inmunes de una cantidad de formas. La regulación negativa puede tomar la forma de la inhibición o el bloqueo de una respuesta inmune que ya está en progreso, o puede comprender la inducción de una respuesta inmune. Pueden inhibirse las funciones de las células T activadas suprimiendo las respuestas de las células T o induciendo tolerancia específica en células T, o ambas. La inmunosupresión de las respuestas de las células T es generalmente un proceso activo, sin especificidad antigénica, que requiere de la exposición continua de las células T al agente supresor. La tolerancia, que comprende la inducción de la ausencia de respuesta o la anergia en las células T, se distingue de la inmunosupresión porque generalmente presenta especificidad antigénica y persiste después de que ha terminado la exposición al agente generador de tolerancia. En términos operativos, puede demostrarse la tolerancia a través de la ausencia de una respuesta de las células T al provocar una nueva exposición a un antígeno específico en ausencia del agente generador de tolerancia. La regulación negativa o la prevención de las funciones inmunes, por ejemplo, usando antagonistas de IL-21/IL-21 R, será útil en situaciones de transplante de tejidos, piel y órganos, y en la enfermedad del injerto versus el huésped (GVHD). Por ejemplo, la inhibición de la función de las células T reducirá la destrucción de los tejidos en el transplante de tejidos. Típicamente, en los transplantes de tejidos, el rechazo del transplante comenzará con el reconocimiento de éste como extraño por las células T, a lo que seguirá una reacción inmune que destruirá el transplante. La administración de un antagonista de IL-21/IL-21R, solo o en combinación con una molécula que inhiba o bloquee la interacción con otros efectores inmunes, antes, durante o después del transplante, podrá servir para reducir las respuestas inmunes.

Podrá evaluarse la eficacia de los antagonistas de IL-21/IL-21 R en la prevención del rechazo de transplantes de órganos o la GVHD usando modelos en animales que puedan predecir la eficacia y la dosificación en seres humanos. Los ejemplos de sistemas apropiados que pueden usarse incluyen injertos cardiacos alogenéicos en ratas e injertos xenogenéicos de islotes pancreáticos en ratones, ambos usados para examinar los efectos de inmunosupresión de las proteínas de fusión CTLA4 Ig in vivo, como se describe en Lenschow et al. (1992) Science 257:789-92 y Turka et al. (1992) Proc. Nati. Acad. Sci U.S.A., 89:11102-05. También pueden evaluarse los antagonistas de IL-21/IL-21 R en otros modelos animales, por ejemplo, en modelos murinos de aloinjertos cardiacos vascularizados, y aloinjertos cutáneos de grosor completo. El modelo puede servir para evaluar el rechazo de tejidos con faltas de coincidencias de MHC competas, y puede combinar el bloqueo de IL-21 con la transfusión de linfocitos específicos para el donante. Además, pueden usarse modelos murinos de GVHD (véase, por ejemplo, Paul ed., Fundamental Inmunology, Raven Press, Nueva York (1989) pp. 846-47) para determinar el efecto de los antagonistas de IL-21/IR-21R in vivo sobre el desarrollo de GVHD o SLE. También puede evaluarse la eficacia de los antagonistas de IL-21/IL-21 R en la prevención del rechazo de transplantes de órganos o la GVHD en combinación con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, un inmunosupresor, tal como rapamicína, ciclosporina o CTLA4lg. Los antagonistas de IL-21/IL-21 R también pueden tener utilidad terapéutica en el tratamiento de enfermedades autoinmunes. Muchos trastornos autoinmunes son el resultado de la activación inapropiada de las células T, las cuales reaccionan contra los tejidos del huésped y promueven la producción de citoquinas y autoanticuerpos que participan en la patología de las enfermedades. La prevención de la activación de las células T autorreactivas puede reducir o eliminar los síntomas de enfermedad. Puede usarse la administración de antagonistas de IL-21/IL-21 R, solos o en combinación con otros agentes (por ejemplo, como se describe en la presente documentación), para inhibir la activación de las células T y prevenir la producción de autoanticuerpos o citoquinas derivadas de células T que participen en el proceso de enfermedad. Adicionalmente, los antagonistas de IL-21/IL-21 R, solos o en combinación con otros agentes (por ejemplo, como se describe en la presente documentación), incrementa la tolerancia con especificidad antigénica de las células T autorreactivas y conduce a un alivio a largo plazo de la enfermedad. Puede determinarse la eficacia de estos agentes en la prevención o el alivio de los trastornos autoinmunes usando una cantidad de modelos animales bien caracterizados de enfermedades autoinmunes humanas. Los ejemplos incluyen encefalitis autoinmune murina experimental, lupus eritematoso sístémico en ratones MRL/lpr/lpr o ratones híbridos NZB, artritis autoinmune inducida por colágeno en ratones, diabetes mellitus en ratones NOD y ratas BB, y miastenia gravís murina experimental (véase, por ejemplo, Paul editor, Fundamental Inmunology, Raven Press, Nueva York (1989) pp. 840-56). En una realización, se administran los antagonistas de IL-21/IL-21 R, por ejemplo, composiciones farmacéuticas de éstos, en una terapia de combinación, es decir, combinados con otros agentes, por ejemplo, agentes terapéuticos útiles para tratar condiciones o trastornos patológicos, tales como trastornos inmunes e inflamatorios En este contexto, el término "en combinación" denota que los agentes se administran en forma sustancialmente contemporánea, ya sea en forma simultánea o consecutiva Si se los administra en forma consecutiva, al inicio de la administración del segundo compuesto, el primero de los dos compuestos preferiblemente aún podrá detectarse en concentraciones efectivas en el sitio de tratamiento o en el sujeto Por ejemplo, la terapia de combinación puede incluir uno o más antagonistas de IL-21/IL-21R, por ejemplo, un anticuerpo o una porción de unión a antígeno de éste (por ejemplo, un anticuerpo quimérico, humanizado, humano o generado m vitro, o un fragmento de unión a antígeno de éste) contra IL-21 o un receptor de IL-21 , una proteína de fusión de IL-21 , un receptor IL-21 soluble, un inhibidor peptídico o una pequeña molécula inhibidora), coformulado y/o coadministrado con uno o más agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo, una o más citoquinas e inhibidores de factores de crecimiento, inmunosupresores, agentes antiinflamatopos, inhibidores metabólicos, inhibidores enzimáticos y/o agentes citotóxicos o citostáticos, como se describe con mayor detalle en la presente documentación Además, puede usarse uno o más antagonistas de IL-21/IL- 21 R descnptos en la presente documentación en combinación con dos o más de los agentes terapéuticos descriptos en la presente documentación. Estas terapias de combinación pueden utilizar ventajosamente dosificaciones menores de los agentes terapéuticos administrados, por lo que se evitan las toxicidades o las complicaciones posibles asociadas con las distintas monoterapias. Más aún, los agentes terapéuticos descriptos en la presente documentación actúan sobre vías que difieren de la vía del receptor IL-21/IL-21 R, y por consiguiente se espera que mejoren y/o presenten sinergísmo con los efectos de los antagonistas de IL-21/IL-21R. Los agentes terapéuticos preferidos usados en combinación con un antagonista de IL-21/IL-21R son aquellos agentes que interfieren en distintas etapas en la respuesta autoinmune e inflamatoria subsiguiente. En una realización, puede coformularse y/o coadmínistrarse uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R descriptos en la presente documentación con uno o más agentes adicionales, tales como otras citoquinas u otros antagonistas de factores de crecimiento (por ejemplo, receptores solubles, inhibidores peptídicos, pequeñas moléculas, fusiones de ligandos); o anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de éstos que se unan a otros blancos (por ejemplo, anticuerpos que se unan a otras citoquinas o factores de crecimiento, sus receptores u otras moléculas en la superficie de las células); y citoquinas antiinflamatorias o agonistas de éstas. Los ejemplos no limitantes de agentes que pueden usarse en combinación con el antagonista de IL-21/IL-21 R descripto en la presente documentación incluyen, sin limitaciones, antagonistas de una o más interleuquinas (IL) o sus receptores, por ejemplo, antagonistas de IL-1 , I L-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-18 e IL-22; antagonistas de citoquinas o factores de crecimiento o sus receptores, tal como el factor de necrosis tumoral (TNF), LT, EMAP-II, GM-CSF, FGF y PDGF. También pueden combinarse los antagonistas de IL-21/IL-21 R con inhibidores, por ejemplo, con anticuerpos contra moléculas de la superficie celular, tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), CD90 o sus ligandos, incluyendo CD154 (gp39 o CD40L), o LFA-1/ ICAM-1 y VLA-4?/CAM-1 (Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med. Res. Rev. 22(2): 146-67). Los antagonistas preferidos que pueden usarse en combinación con los antagonistas de IL-21/IL-21 R descriptos en la presente documentación incluyen antagonistas de IL-1 , IL-6, IL-12, TNFa, IL-15, IL-17, IL-18 e IL-22. Los ejemplos de aquellos agentes incluyen antagonistas de IL-12, tales como anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro (o fragmentos de unión a antígeno de éstos) que se unen a IL-12 (preferiblemente IL-12 humano), por ejemplo, el anticuerpo descrípto en WO 00/56772, Genetics Institute/BASF); inhibidores del receptor de IL-12, por ejemplo, anticuerpos contra el receptor de IL-12 humano; y fragmentos solubles del receptor de IL-12, por ejemplo, el receptor de IL-12 humano. Los ejemplos de antagonistas de IL-6 incluyen anticuerpos (o fragmentos de unión a antígeno de éstos) contra IL-6 o su receptor, por ejemplo, anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro contra IL-6 humano o su receptor, fragmentos solubles del receptor de IL-6, y proteínas de unión a IL-6. Los ejemplos de antagonistas de IL-15 incluyen anticuerpos (o fragmentos de unión a antígeno de éstos) contra IL-15 o su receptor, por ejemplo, anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro contra IL-15 humano o su receptor, fragmentos solubles del receptor IL-15 y proteínas de unión a IL-15. Los ejemplos de antagonistas de IL-18 incluyen anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro (o fragmentos de unión a antígeno de éstos), contra IL-18 humano, fragmentos solubles del receptor IL-18 y proteínas de unión a IL-18 (IL-18BP, Mallat et al. (2001) Circ. Res. 89:e41-45). Los ejemplos de antagonistas de IL-1 incluyen inhibidores e la enzima convertidora de interleuquina-1 (ICE), tales como Vx740, antagonistas de IL-1 , por ejemplo, IL-1 RA (ANIKINRA™, Amgen), sILI RII (Inmunex), y anticuerpos contra el receptor de IL-1 (o fragmentos de unión a antígeno de éstos). Los ejemplos de antagonistas de TNF incluyen anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro (o fragmentos de unión a antígeno de éstos) contra TNF (por ejemplo, TNFa humano), tales como D2E7, (anticuerpo contra TNFa humano, Patente de los EEUU N° 6258562; BASF), CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (anticuerpo anti-TNFa humanizado; Celltech/Pharmacía), cA2 (anticuerpo anti-TNFa quimérico; REMICADE™, Centocor); fragmentos de anticuerpos anti-TNF (por ejemplo, CPD870); fragmentos solubles de receptores de TNF, por ejemplo, receptores de TNF humanos p55 o p75, o derivados de éstos, por ejemplo, 75 kdTNFR- IgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™; Inmunex; véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A), p55 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 55 kDa del receptor de TNF e IgG (Lenercept)); antagonistas enzimáticos, por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE) (por ejemplo, un derivado de ácido alfa-sulfonil hidroxámico, WO 01/55112, y el inhibidor TACE de N-hidroxiformamida GW 3333, -005, o -022); y TNF-bp/s-TNFR (proteína de unión a TNF soluble; véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S284; Amer. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology (1995) Vol. 268, pp. 37-42). Los antagonistas de TNF preferidos son fragmentos solubles de los receptores de TNF, por ejemplo, receptores de TNF humanos p55 o p75, o derivados de éstos, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG, e inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE). En otras realizaciones, puede administrarse el antagonista de IL-21-/IL-21R descripto en la presente documentación en combinación con uno o más de los siguientes: antagonistas de IL-13, por ejemplo, receptores de IL-13 solubles (slL-13) y/o anticuerpos contra IL-13; antagonistas de IL-2, por ejemplo, DAB 486-IL-2 y/o DAB 389-IL-2 (proteínas de fusión IL-2; Seragen; véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223), y/o anticuerpos contra IL-2R, por ejemplo, anti-Tac (anti-IL-2R humanizados; Protein Design Labs, Cáncer Res. (1990) Mar 1 ; 50(5):1495-502). Aún otra combinación incluye antagonistas de IL-21 en combinación con inhibidores anti-CD4 no debilitantes (IDEC-CE9.1/SB 210396 (anticuerpo para primates anti-CD4 no debilitante; IDEC/SmithKIine)). Aún otras combinaciones preferidas incluyen los antagonistas de la vía coestimulatoria CD80 (B7.1) o CD86 (B7.2), incluyendo anticuerpos, receptores solubles o ligandos antagonísticos; así como ligandos glicoproteicos de p-selectina (PSGL), citoquinas anti-inflamatorias, por ejemplo, IL-4 (DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; IL-10 recombinante DNAX/Scheríng); IL-13 y TGF, y agonistas de éstos (por ejemplo, anticuerpos agonistas). En otras realizaciones, puede coformularse y/o coadministrarse uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R con una o más drogas antíinflamatorias, inmunosupresores o inhibidores metabólicos o enzimáticos. Los ejemplos no limitantes de las drogas o los inhibidores que pueden usarse en combinación con el antagonista de IL-21 descripto en la presente documentación incluyen, sin limitaciones, uno o más de los siguientes: drogas antiínflamatorias no esteroidales (NSAID), por ejemplo, ibuprofeno, tenidap (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S280), naproxeno (véase, por ejemplo, Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213), meloxicam, píroxicam, diclofenac e indometacina; sulfasalazina (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S281); corticosteroides, tales como prednisolona; drogas antiinflamatorias supresoras de citoquina (CSAID); inhibidores de la biosíntesis de nucleótidos, por ejemplo, inhibidores de la biosíntesis de purinas, antagonistas de folato (por ejemplo, metotrexato de ácido (N-[4- [[(2.4-d¡amino-6-ptehdinil)met¡l]metilamino]benzo¡l]-L-glutámico); e inhibidores de la biosíntesis de pirimidina, por ejemplo, inhibidores de dihidroorotato deshidrogenasa (DHODH) (por ejemplo, leflunomida (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S131 ; Inflammation Research (1996) Vol. 45, pp. 103-107). Los agentes terapéuticos preferidos para usar en combinación con los antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen NSAID, CSAID, inhibidores de (DHODH) (por ejemplo, leflunomida) y antagonistas de folato (por ejemplo, metotrexato). Los ejemplos de inhibidores adicionales incluyen uno o más de los siguientes: corticosteroides (orales, inhalados e inyectados en forma local); inmunosupresores, por ejemplo, ciclosporina, tacrolimus (FK-506); e inhibidores de mTOR, por ejemplo, sirolímus (rapamicina) o derivados de rapamicina, por ejemplo, derivados de rapamicina solubles (por ejemplo, derivados de éster de rapamicina, por ejemplo, CCI-779 (Elit (2002) Current Opinión Investig. Drugs 3(8): 1249-53; Huang et al.. (2002) Current Opinión Investig. Drugs 3(2):295-304); agentes que interfieren con la señalización por proinflamatorias, tales como TNFa o IL-1 (por ejemplo, inhibidores de IRAK, NIK, IKK, p38 o MAP quinasa); inhibidores de COX2, por ejemplo, celecoxib y variantes de éste, MK-966, véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S81); inhibidores de fosfodiesterasa, por ejemplo, R973401 (inhibidor de fosfodiesterasa tipo IV; véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S282)); inhibidores de fosfolipasa, por ejemplo, inhibidores de la fosfolipasa citosólica 2 (cPLA2) (por ejemplo, análogos de trifluorometil cetona (Patente de los EEUU N° 6350892)); inhibidores del factor de crecimiento de las células del endotelio vascular o del receptor del factor de crecimiento, por ejemplo, inhibidores de VEGF y/o inhibidores de VEGF-R; inhibidores de la angiogénesis. Los agentes terapéuticos preferidos para usar en combinación con los antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen inmunosupresores, por ejemplo, ciclosporina, tacrolimus (FK-506); e inhibidores de mTOR, por ejemplo, sirolimus (rapamicina) o derivados de rapamícina, por ejemplo, derivados de rapamicína solubles (por ejemplo, derivados de éster de rapamicina, por ejemplo, CCI-779; inhibidores de COX2, por ejemplo, celecoxib y variantes de éste; e inhibidores de fosfolipasa, por ejemplo, inhibidores de la fosfolipasa citosólida 2 (cPLA2) (por ejemplo, análogos de trifluorometil cetona). Otros ejemplos de agentes terapéuticos que pueden combinarse con un antagonista de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: 6-mercaptopurinas (6-MP); azatioprina sulfasalazina; mesalazina; olsalazina cloroquina/hidroxícloroquina; pencilamina; aurotiomalato (intramuscular y oral); azatioprina; colchicina; agonistas del adrenorreceptor beta-2 (salbutamol, terbutalína, salmeteral); xantinas (teofilina, aminofilina); cromoglicato; nedocromil; cetotifeno; ipratropio y oxitropio; micofenolato mofetil; agonistas de adenosina; agentes antitrombótico; inhibidores del complemento; y agentes adrenérgicos. El uso de los antagonistas de IL-21/IL-21 R descriptos en la presente documentación, en combinación con otros agentes terapéuticos, para tratar o prevenir trastornos inmunes específicos, se describe con mayor detalle en la presente documentación.

Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir trastornos artríticos (por ejemplo, RA, artritis inflamatoria, RA juvenil OA y artritis psoriática) con los que puede combinarse un antagonista de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: antagonistas de IL-12 como se describe en la presente documentación, NSAID; CSAID; TNF, por ejemplo, antagonistas de TNFa como se describe en la presente documentación; anticuerpos anti-CD4 no exhaustivos como se describe en la presente documentación; antagonistas de IL-2 como se describe en la presente documentación; citoquinas antiinflamatorias, por ejemplo, IL-4, IL-10, IL-13 y TGFa, o agonistas de éstos; antagonistas del receptor de IL-1 o IL-1 , como se describe en la presente documentación); inhibidores de fosfodiesterasa como se describe en la presente documentación; inhibidores de COX-2 como se describe en la presente documentación; lloprost (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatísm (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S82); metotrexato; talidomida (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S282) y drogas relacionadas con la talidomida (por ejemplo, Celgen); leflunomida; inhibidores de la activación del plasminógeno, por ejemplo, ácido tranexámico (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S284); inhibidores de citoquina, por ejemplo, T-614; véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S282); prostaglandina E1 (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S282); azatioprina (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S281); un inhibidor de la enzima convertidora de interleuquina-1 (ICE); zap-70 y/o un inhibidor Ick (inhibidor de la tirosín quinasa zap-70 o Ick); un inhibidor del receptor del factor de crecimiento de las células del endotelio vascular como se describe en la presente documentación; un inhibidor de la angiogénesis como se describe en la presente documentación; drogas corticosteroidales antiínflamatorias (por ejemplo, SB203580); inhibidores de TNF-convertasa; interleuquina-11 (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S296); IL-13 (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S308); inhibidores de IL-17 (véase, por ejemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, N° 9 (suplemento), S120) oro; penicilamina; cloroquina; hidroxicloroquina; clorambucil; ciclofosfamida ciclosporina; irradiación linfoide total; globulina anti-timocítos; toxinas CD5 péptídos de administración oral y colágeno; lobenzarit disodio; Agentes Reguladores de Citoquína (CRA) HP228 y HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); oligonucleótidos de fosforotioato antisentido ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptores de complemento solubles 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); prednisona; orgoteína; polisulfato de glicosaminoglicano; minociclina; anticuerpos anti-IL-2R; lípidos marinos y botánicos (ácidos grasos de peces y semillas de plantas; véase, por ejemplo, DeLuca et al. (1995) Rheum. Dis. Clin. North Am. 21 :759-777); auranofina; fenilbutazona; ácido meclofenámico; ácido flufenámico; globulina inmune intravenosa; zileuton; ácido mícofenólico (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamicina); amiprilosa (terafectina); cladribina (2- clorodeoxiadenosina); y azaribina. Las combinaciones preferidas incluyen uno o más antagonistas de IL-21 en combinación con metotrexato o leflunomida, y en casos de artritis moderada o severa, ciclosporina. Los ejemplos preferidos de inhibidores para usar en combinación con los antagonistas de IL-21/IL-21 R en el tratamiento de trastornos artríticos incluyen antagonistas de TNF (por ejemplo, anticuerpos quiméricos, humanizados, humanos o generados in vitro, o fragmentos de unión a antígeno de éstos, que se unen a TNF; fragmentos solubles de un receptor de TNF, por ejemplo, el receptor de TNF humano p55 o p75, o derivados de éste, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™), proteína de fusión de 55 kDa del receptor de TNF e IgG; antagonistas anzimáticos de TNF, por ejemplo, inhibidores de la enzima convertidora de TNFa (TACE)); antagonistas de IL-6, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22; agentes debilitantes de células T y células B (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 o anti-CD22); pequeñas moléculas inhibidoras, por ejemplo, metotrexato y leflunomida; sirolimus (rapamicina) y análogos de ésta, por ejemplo, CCI-779; Cox-2 e inhibidores de cPLA2; NSAID; inhibidores de p38, inhibidores de TPL-2, Mk-2 y NF?b¡ RAGE o RAGE soluble; P-selectina o inhibidores de PSGL-1 (por ejemplo, pequeñas moléculas inhibidoras, anticuerpos contra éstas, por ejemplo, anticuerpos contra P-selectina); agonistas del receptor de estrógeno beta (ERB) o antagonistas de ERB-NFkb. Los agentes terapéuticos adicionales más preferidos que pueden coadministrarse y/o coformularse con uno o más antagonistas de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: un fragmento soluble de a receptor de TNF, por ejemplo, receptor de TNF humano p55 o p75, o derivados de éste, por ejemplo, 75 kdTNFR-lgG (proteína de fusión de 75 kDa del receptor de TNF e IgG, ENBREL™); metotrexato, leflunomida, o un sirolimus (rapamicina) o un análogo de éste, por ejemplo, CCI-779. Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir la esclerosis múltiple con los cuales puede combinarse un antagonista de IL-21-/IL-21 R incluyen los siguientes: interferones, por ejemplo, interferón-alfa 1a (por ejemplo, AVONEX™; Biogen) e ¡nterferón-1b (BETASERON™; Chiron/Berlex); Copolímero 1 (Cop-1 ; COPAXONE™; Teva Pharmaceutícal Industries, Inc.); oxígeno hiperbárico; inmunoglobulina intravenosa; clabribina; antagonistas de TNF como se describe en la presente documentación; corticosteroides; prednisolona; metílprednisolona; azatioprina; ciclofosfamida; ciclosporína; metotrexato; 4-aminopiridina; y tizanidina. Otros antagonistas que pueden usarse en combinación con IL-21 incluyen anticuerpos o antagonistas de otras citoquinas o factores de crecimiento humanos, por ejemplo, TNF, LT, IL- 1 , IL-2, IL-6, I L-7, IL-8, IL-12 IL-15, IL-16, IL-18, EMAP- 11 , GM-CSF, FGF y PDGF. Pueden combinarse los antagonistas de IL-21 descriptos en la presente documentación con anticuerpos contra moléculas de la superficie celular, tales como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 o sus ligandos. Los antagonistas de IL-21 también pueden combinarse con agentes, tales como metotrexato, ciclosporina, FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, NSAID, por ejemplo, ibuprofeno, corticosteroídes, tales como prednisolona, inhibidores de fosfodiesterasa, agonistas de adenosina, agentes antitrombóticos, inhibidores del complemento, agentes adrenérgicos, agentes que interfieren con la señalización por citoquinas proinflamatorias, como se describe en la presente documentación, inhibidores de las enzimas convertidoras de IL-1 b (por ejemplo, Vx740), anti-P7s, PSGL, inhibidores de TACE, inhibidores de la señalización por células T, tales como inhibidores de quinasas, inhibidores de metaloproteinasa, sulfasalazina, azatloprina, 6-mercaptopurinas, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, receptores de citoquína solubles y derivados de éstos, como se describe en la presente documentación, y citoquínas antiínflamatorias (por ejemplo IL-4, IL-10, IL-13 y TGF). Los ejemplos de agentes terapéuticos preferidos para tratar la esclerosis múltiple con los cuales pueden combinarse los antagonistas de IL-21 incluyen interferón-b, por ejemplo, IFNß-1a y IFNß-1b; copaxona, cortícosteroides, inhibidores de IL-1 , inhibidores de TNF, anticuerpos contra los ligandos CD40 y CD80, antagonistas de IL-12. Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir la enfermedad intestinal inflamatoria (enfermedad de Crohn; colitis ulcerativa) con los cuales puede combinarse un antagonista de IL-21/IL-21R incluyen los siguientes: budenósido; factor de crecimiento epidérmico; corticosteroídes; ciclosporina, sulfasalazina; aminosalicilatos; 6-mercaptopurina; azatioprina; metronídazol; inhibidores de lipoxígenasa; mesalamina; olsalazina; balsalazida; antioxídantes; inhibidores de tromboxano; antagonistas de receptor de IL-1 ; anticuerpos monoclonales anti-IL-1 ; anticuerpos monoclonales antí-IL-6; factores de crecimiento; inhibidores de elastasa; compuestos de piridinil-imidazol; antagonistas de TNF como se describe en la presente documentación; citoquínas IL-4, IL-10, IL-13 y/o TGFb, o agonistas de éstas (por ejemplo, anticuerpos agonistas); IL-11 ; pdrodrogas de prednisolona conjugadas con glucurónido o dextrano, dexametasona o budesonída; oligonucleótidos de fosforotioato antísentido ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptor de complemento soluble 1 (TP10; T Cell Sciences, Inc.); mesalazina de liberación lenta; metotrexato; antagonistas del factor de activación de plaquetas(PAF); ciprofloxacína; y lignocaína. En una realización, puede usarse un antagonista de IL-21/IL-21 R en combinación con uno o más anticuerpos dirigidos contra otros blancos que participan en la regulación de las respuestas inmunes, por ejemplo, en el rechazo de transplantes, la enfermedad del injerto versus el huésped u otros trastornos relacionados con la respuesta inmune. Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir las respuestas inmunes con los cuales puede combinarse un antagonista de IL-21/IL-21 R de la invención incluyen los siguientes: anticuerpos contra moléculas de la superficie celular o sus ligandos, incluyendo, sin limitaciones, CD25 (IL-2 receptor-a), CD11a (LFA-1 ), CD54 (ICAM-1), CD4, CD40, CD40L, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-1 ) y/o CD86 (B7-2). En aún otra realización, puede usarse un antagonista de IL- 21/IL-21 R en combinación con corticosteroídes; sirolimus (rapamicína) y análogos de éstos, por ejemplo, CCI-779; ciclosporina A; FK506; FTY720; azatioprina; ciclofosfamida; metotrexato; anticuerpos anti-IL-2R, por ejemplo, basiliximab, daclízumab; cA2 (anticuerpo anti-TNFa quimérico; REMICADE™, Centocor); anticuerpos anti-CD3 (por ejemplo, muromonab-CD3); Copolímero 1 (Cop-1 ; COPAXONE™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); desoxíspergualina; y micofenolato mofetil. Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir la psoriasis y otras condiciones cutáneas con los cuales puede combinarse un antagonista de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: inhibidores de CD2 o de las interacciones de LFA-3 (por ejemplo, polipéptidos CD2 o LFA solubles, tales como fusiones Fc, o anticuerpos contra CD2 o LFA-3), ciclosporina A, prednisona, FK506, metotrexato, PUVA, luz UV, esteroides, retinoides, interferón o mostaza de nitrógeno. Los ejemplos de agentes preferidos que pueden usarse en combinación con un antagonista de IL-21/IL-21 R incluyen ciclosporina A y metotrexato. Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir el asma con los cuales puede combinarse un antagonista de IL-21/IL-21R incluyen uno o más de los siguientes: broncodilatadores inhalados, por ejemplo, pirbuterol, bitolterol, metaproterenol; agonistas del adrenoceptor beta 2, por ejemplo, albuterol, terbutalina, salmeterol, formoterol; antimuscarínicos, por ejemplo, ipratropio, oxitropio; corticosteroides sistémicos, por ejemplo, prednisona, prednisolona, dexametasona; corticosteroides inhalados, por ejemplo, fluticasona, budesonida, beclometasona, mometasona; antagonistas de leucotrieno, por ejemplo, montelukast sodio, zafirlukast; estabilizadores de mastocitos, por ejemplo, cromolin sodio, nedocromíl; omalizumab (XOLAIR™; Genentech/Novartis); o inhibidores de COX-2, como se describe en la presente documentación. Los ejemplos no limitantes de agentes para tratar o prevenir el lupus (por ejemplo, el SLE) con los cuales puede combinarse un antagonista de IL-21/IL-21 R incluyen uno o más de los siguientes: antagonistas de IL-6/IL-6R, por ejemplo, anticuerpos anti-IL-6 o antí-IL-6R; NSAID; corticosteroides, por ejemplo, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona; azatioprina, ciclofosfamida, hidroxicloroquina o cloroquina. Por consiguiente, otro aspecto de la presente invención se relaciona con conjuntos de elementos para llevar a cabo la administración combinada de los antagonistas de IL-21/IL-21 R con otros compuestos terapéuticos. En una realización, el conjunto de elementos comprende uno o más agentes aglutinantes formulados en un vehículo farmacéutico, y al menos un agente, por ejemplo, un agente terapéutico, formulado según sea apropiado, en una o más preparaciones farmacéuticas separadas.

EJEMPLOS DE TRASTORNOS La artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria autoinmune que provoca dolor, hinchazón, rigidez y pérdida de función en las articulaciones. La artritis reumatoide comúnmente se presenta en un patrón simétrico. La enfermedad puede afectar las articulaciones de las muñecas y los dedos en la porción más próxima a la mano. También puede afectar otras partes del cuerpo, además de las articulaciones. Además, la gente con artritis reumatoide puede sufrir de fatiga, fiebre ocasional y un malestar general. Los factores positivos para la diagnosis de la artritis reumatoide incluyen el anticuerpo en sangre del "factor reumatoide" y los anticuerpos contra citrullína. Los antagonistas de IL-21/IL-21R pueden ser útiles para tratar, prevenir o aliviar la artritis reumatoide, o uno o más síntomas de la artritis reumatoide. El lupus eritematoso sistémico (SLE) es un trastorno autoinmune que conduce a la inflamación y el dañó de varios tejidos corporales. El SLE puede estar mediado por autoanticuerpos dirigidos contra el ADN propio. El lupus puede afectar muchas partes del cuerpo, incluyendo las articulaciones, la piel, los riñones, el corazón, los pulmones, los vasos sanguíneos y el cerebro. Aunque puede haber varios síntomas presentes, algunos de los más comunes incluyen la fatiga extrema, las articulaciones con dolor o hinchazón (artritis), la fiebre sin explicación, las erupciones cutáneas y los problemas renales (por ejemplo, la glomerulonefrítis). Los ejemplos de síntomas del lupus incluyen las articulaciones con dolor o hinchazón, la fiebre sin explicación y la fatiga extrema. Puede aparecer una erupción cutánea rojiza en la nariz y las mejillas. También puede haber erupciones en la cara y las orejas, la parte superior de los brazos, los hombros, el pecho y las manos.

Otros síntomas del lupus incluyen dolor en el pecho, pérdida de peso, anemia, úlceras bucales y dedos de las manos o los píes pálidos o púrpuras en situaciones de frío o estrés. Algunas personas también experimentan cefaleas, mareos, depresión, confusión o convulsiones. Los factores positivos para la diagnosis del SLE incluyen los anticuerpos anti-nucleares en circulación, los anticuerpos anti-DNA y los anticuerpos anti-Sm. Los antagonistas de IL-21/IL-21 R pueden ser útiles para tratar, mejorar (aliviar), o prevenir el SLE o uno o más síntomas del SLE. La espondilitis anquilosante es un trastorno autoinmune que no solamente afecta solamente la columna, sino que también afecta las caderas, los hombros y las rodillas, ya que se inflaman los tendones y los ligamentos alrededor de los huesos y las articulaciones, lo que resulta en dolor y rigidez. La espondilitis anquilosante tiende a afectar la gente en la adolescencia tardía o la adultez temprana. Los antagonistas de IL-21/IL-21 R pueden ser útiles para tratar, prevenir o aliviar la espondilitis anquilosante, o uno o más síntomas de ésta. La enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) es el nombre general de las enfermedades que provocan la inflamación del intestino. Dos ejemplos de enfermedades intestinales inflamatorias son la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerativa. Los antagonistas de IL-21/IL-21R pueden ser útiles para tratar, prevenir o aliviar la enfermedad intestinal inflamatoria o uno o más síntomas de la enfermedad intestinal inflamatoria. La enfermedad de Crohn provoca la inflamación del intestino delgado. La enfermedad de Crohn comúnmente ocurre en la porción inferior del intestino delgado (el ilion), pero puede afectar cualquier parte del tracto digestivo, desde la boca hasta el ano. La inflamación puede extenderse hasta el recubrimiento profundo del órgano afectado, lo que provoca dolor y hace que los intestinos se evacúen frecuentemente, lo que resulta en diarrea. Los síntomas más comunes de la enfermedad de Crohn son el dolor abdominal, comúnmente en el área inferior derecha, y diarrea. También puede haber hemorragia rectal, pérdida de peso y fiebre. La hemorragia puede ser seria y persistente, lo que conduce a anemia. La visualización directa del intestino puede ser útil para determinar la extensión de la inflamación. La colitis ulcerativa es una enfermedad que provoca inflamación y lesiones, provocadas úlceras, en el recubrimiento del intestino grueso. La inflamación ocurre comúnmente en el recto y la parte inferior del colon, pero puede afectar el colon completo. La colitis ulcerativa raramente afecta el intestino delgado, excepto por la sección final, denominada ilion terminal. La inflamación hace que el colon se evacué con frecuencia, lo que provoca diarrea. Las úlceras se forman en lugares donde la inflamación ha matado las células que recubren el colon; estas úlceras sangran y producen pus. Los síntomas más comunes de la colitis ulcerativa son el dolor abdominal y la diarrea con hemorragia. Los pacientes también pueden experimentar fatiga, pérdida de peso, pérdida de apetito, hemorragia rectal y pérdida de fluidos corporales y nutrientes. Aproximadamente la mitad de los pacientes tienen síntomas leves. Otros sufren de fiebre frecuente, diarrea con hemorragia, náuseas y calambres abdominales severos. La colitis ulcerativa también puede causar problemas tales como artritis, inflamación ocular, enfermedad hepática (hepatitis, cirrosis y colangitis esclerosante primaria), osteoporosis, erupciones cutáneas y anemia. La diagnosis de colitis ulcerativa típicamente depende de la identificación de sangre en las heces y la visualízación directa del colon. La psoriasis es una enfermedad cutánea crónica que comprende descamación e inflamación. La psoriasis ocurre cuando las células cutáneas surgen rápidamente desde su origen debajo de la superficie de la piel y se agrupan en la superficie antes de que tengan la oportunidad de madurar. Comúnmente, este movimiento (también denominado recambio) ocurre en aproximadamente un mes, pero en la psoriasis puede ocurrir solamente en unos pocos días. En su forma típica, la psoriasis se presenta como parches de piel inflamada cubierta con escamas plateadas. Estos parches, que algunas veces se conocen como placas, comúnmente pican o duelen. Comúnmente aparecen en los codos, las rodillas, otras partes de las piernas, el cuero cabelludo, la parte inferior de la espalda, la cara, las palmas y las suelas de los pies, pero pueden aparecer en la piel de otras partes del cuerpo. La diagnosis de la psoriasis se basa primariamente en estos síntomas característicos. Una biopsia de piel puede ser útil en la diagnosis. Los antagonistas de IL-21/ IL-21 R pueden ser útiles para tratar, prevenir o aliviar la psoriasis, o uno o más síntomas de psoriasis. La artritis psoriática ocurre en algunos pacientes con psoriasis, un trastorno de descamación de al piel. La artritis psoriática comúnmente afecta las articulaciones en los extremos de los dedos de las manos y los pies, y se ve acompañada por cambios en las uñas de los dedos de las manos y los pies. Puede ocurrir dolor en la espalda si se ve afectada la columna. Los antagonistas de IL-21/IL-21R pueden ser útiles para tratar, prevenir o aliviar la psoriasis, o uno o más síntomas de la psoriasis o la artritis psoriática. Las enfermedades glomerulares incluyen trastornos proliferativos y no proliferativos. La glomerulonefritis es un trastorno que se manifiesta a través de inflamación intraglomerular y proliferación celular (véase, por ejemplo, Hricik et al. (1998) New Eng. J. Med. 339:888-99). Las glomerulopatías no proliferativas y esclerosantes incluyen la glomerulopatía membranosa, la nefropatía diabética, la glomeruloesclerosis focal segmentada, la enfermedad de la membrana basal delgada, la amiloidosis, la nefropatía de cadenas livianas, la nefropatía relacionada con VIH, el síndrome de Alport, las glomerulopatías inducidas por drogas y las enfermedades de cambios mínimos. La inflamación que acompaña la enfermedad glomerular surge en gran medida debido a las lesiones glomerulares mediadas por anticuerpos que son el resultado de la autoinmunidad. La activación de la inmunidad humoral puede conducir a la producción de anticuerpos contra la superficie de las células glomerulares (por ejemplo, membranas básales), y se depositan complejos de antígenos- anticuerpos en circulación en el glomérulo, lo que, según se informa, contribuye a la patología de la glomerulonefritis. Por consiguiente, las lesiones glomerulares y la glomerulonefritis comúnmente resultan en trastornos autoinmunes sistémicos mayores, tales como, por ejemplo, SLE, hepatitis y trastornos fibróticos. La glomerulonefritis también puede asociarse con la nefropatía de IgA, la púrpura de Henoch-Schonlein, la infección (causada, por ejemplo, por bacterias, virus, protozoos), vasculítidos, crioglobulinemia, nefritis hereditaria, granulomatosis (por ejemplo, granulomatosis de Wegener, poliangitis microscópica y síndrome de Churg-Strauss), enfermedad de las membranas básales glomerulares, síndrome de Goodpasture, síndrome nefrítico (como ocurre, por ejemplo, con la diabetes mellitus, el lupus (por ejemplo, el SLE), la amiloidosis, el uso de drogas, el cáncer y la infección), lipodistrofia, enfermedad de células en hoz, deficiencias de complemento, glomerulonefritis proliferativa de membrana, nefritis relacionada con lupus, y nefropatía membranosa relacionada con lupus. Los antagonistas de IL-21/IL-21 R pueden ser útiles para tratar, mejorar o prevenir la glomerulonefritís, o uno o más síntomas de la glomerulonefritis, y otras enfermedades glomerulares. Pueden usarse antagonistas de IL-21/IL-21 R para prevenir o tratar el rechazo de tejidos/injertos, o los síntomas asociados con el rechazo, por ejemplo, antes, durante o después del transplante de un órgano, un tejido o células, por ejemplo, transplante de corazón, pulmón, hígado, riñon, páncreas o médula ósea. El rechazo de transplantes/injertos ocurre cuando el sistema inmune del organismo huésped provoca una respuesta inmune contra antígenos distintos de los propios en el tejido transplantado, por ejemplo, tejido singenéico, alogenéico o xenogenéico. El rechazo puede ser mediado, por ejemplo, por anticuerpos, linfocitos o ambos, y puede manifestarse de una variedad de formas, incluyendo, por ejemplo, el rechazo hiperagudo (por ejemplo, durante el período post-transplante temprano), el rechazo agudo y el rechazo crónico (generalmente, un proceso de desarrollo lento que provoca una declinación progresiva en la función del injerto). El rechazo comúnmente es acompañado por inflamación, y puede resultar en daños y/o fallas en el tejido o el órgano transplantado, por ejemplo, vasculopatía, fibrosis o pérdida de función del órgano. Durante el rechazo, el huésped puede experimentar malestar general, dolor o hinchazón en el área del transplante, y/o fiebre. Pueden monitorearse los transplantes de órganos y tejidos para determinar el rechazo, por ejemplo, examinando biopsias en busca de signos de rechazo, o evaluando la función de los órganos. Las señales histopatológicas de rechazo incluyen, por ejemplo, una mayor expresión de antígenos HLA clase II, por ejemplo, en las células tubulares renales después de un transplante de riñon. Puede evaluarse la función hepática, por ejemplo, midiendo los niveles de bilirrubina y enzimas hepáticas en suero, por ejemplo, fosfatasa alcalina; puede evaluarse la función renal, por ejemplo, midiendo los niveles de creatina en suero. La osteoartritis (OA) se caracteriza por la degradación del cartílago en las articulaciones. Esto permite que los huesos bajo el cartílago se rocen unos con otros, lo que provoca dolor, hinchazón y pérdida de movilidad en las articulaciones. Con el correr del tiempo, la articulación puede perder su forma normal, y pueden desarrollarse espuelas óseas u oesteofitos en los bordes de la articulación. Adicionalmente, pueden desprenderse trozos de hueso o cartílago y flotar en el interior del espacio de la articulación, lo que provoca más dolor y daño. La gente que sufre OA típicamente tiene dolor articular y movimiento limitado. A diferencia de otras formas de artritis, la OA afecta solamente las articulaciones y no los órganos internos. Los factores positivos para la diagnosis de la OA incluyen la pérdida de cartílago observada por rayos X. Los antagonistas de IL-21/IL-21 R pueden ser útiles para tratar, prevenir o aliviar la OA, o uno o más síntomas de OA.

Trastornos respiratorios Pueden usarse antagonistas de IL-21/IL-21R para tratar trastornos respiratorios, incluyendo, sin limitaciones, asma (por ejemplo, asma alérgico y no alérgico); bronquitis (por ejemplo, bronquitis crónica); enfermedad obstructiva pulmonar crónica (COPD) (por ejemplo, enfisema, por ejemplo, el enfisema inducido por el cigarrillo); condiciones que comprenden inflamaciones en las vías respiratorias, eosinofilia, fibrosis y producción excesiva de mucus, por ejemplo, fibrosis quística, fibrosis pulmonar y rinitis alérgica. Los antagonistas de IL-21/IL-21R para tratar o prevenir el asma incluyen aquellos empleados para el asma extrínseco (también conocido como asma alérgico o asma atópico), el asma intrínseco (también conocido como asma no alérgico o asma no atópicos) o combinaciones de ambos, lo que se conoce como asma mixto. El asma extrínseco o intrínseco incluye incidentes causados o asociados, por ejemplo, con alérgenos, tales como polen, esporas, pastos o malezas, escamas dérmicas originadas en mascotas, polvo, ácaros, etcétera. Como los alérgenos y otros irritantes se presentan en varios momentos durante el año, este tipo de incidentes también se conocen como asma estacional. En el grupo del asma extrínseco también se incluye el asma bronquial y la aspergilosis broncopulmonar alérgica. El asma que puede tratarse o aliviarse empleando los métodos de la presente invención incluye aquél causado por agentes infecciosos, tales como virus (por ejemplo, virus de resfrío y gripe, virus respiratorio sincícial (RSV), paramixovirus, rinovirus y virus de influenza). Las infecciones de RSV, rinovirus y virus de influenza son comunes en los niños, y la infección viral es una causa principal de enfermedades en el tracto respiratorio en niños pequeños y jóvenes. Los niños con bronquiolitis viral pueden desarrollar silbido crónico y asma, lo que puede tratarse usando los métodos de la invención. También se incluyen las condiciones asmáticas que pueden ser provocadas en algunos asmáticos por el ejercicio y/o el aire frío. Los métodos son útiles para los tipos de asma asociados con la exposición al humo (por ejemplo, el humo inducido por el cigarrillo e industrial), así como las exposiciones industríales y ocupacionales, tales como humo; ozono; gases nocivos; dióxido de azufre; óxido nitrógenos; vapores, incluyendo isocianatos, de pintura, plásticos, poliuretanos, barnices, etcétera; polvos de madera, plantas o otros polvos orgánicos; etcétera. Los métodos también son útiles para los incidentes asmáticos asociados con los aditivos para alimentos, los preservantes u otros agentes farmacológicos. También se incluyen los métodos para tratar, inhibir o aliviar los tipos de asma conocidos como asma silencioso, o variantes de asma con tos. Los métodos descriptos en la presente documentación también son útiles para tratar y aliviar el asma asociado con el reflujo gastroesofágico (GERD), que puede estimular la broncoconstricción. El GERD, junto con las secreciones corporales retenidas, la tos suprimida y la exposición a alérgenos e irritantes en el dormitorio, pueden contribuir a las condiciones asmáticas, y se han conocido comúnmente como asma de noche o asma nocturno. En los métodos de tratamiento, inhibición o alivio del asma asociado con el GERD, puede usarse una cantidad efectiva para el uso farmacéutico del antagonista de IL-21/IL-21R descripto en la presente documentación, en combinación con una cantidad efectiva para el uso farmacéutico de un agente para tratar el GERD. Estos agentes incluyen, sin limitaciones, los agentes que inhiben bombas de protones, tales como las tabletas de pantoprazol sodio de liberación demorada de marca PROTONIX®, las cápsulas de omeprazol de liberación demorada de marca PRILOSEC®, las tabletas de rebeprazol sodio de liberación demorada de marca ACIPHEX®, o las cápsulas de lansoprazol de liberación demorada de marca PREVACID®.

Trastornos atópicos y síntomas de éstos "Atópícas" designa un grupo de enfermedades donde comúnmente hay una tendencia hereditaria al desarrollo de una reacción alérgica. Los ejemplos de trastornos atópicos incluyen alergia, rinitis alérgicas, dermatitis atópica y fiebre de heno. Puede administrarse un antagonista de la vía de IL-21/IL-21R para mejorar un trastorno atópico, o uno o más síntomas de éste. Los síntomas de la rinitis alérgica (fiebre de heno) incluyen narices con picazón, exceso de flujo, estornudos o mucosidad, y picazón en los ojos. Puede administrarse un antagonista de la vía de IL-21/IL-21R para mejorar uno o más de estos síntomas. La dermatitis atópica es una enfermedad crónica que afecta la piel. Hay información sobre dermatitis atópica disponible, por ejemplo, en la Publicación del INS N° 03-4272. En la dermatitis atópica, la piel puede desarrollar una picazón extrema, lo que puede conducir al enrojecimiento, la hinchazón, el quiebre, la exudación de fluido transparente y finalmente el descascaramiento y la caída de mas. En muchos casos, hay períodos de tiempo en los que la enfermedad empeora (denominados exacerbaciones o picos) seguidos por períodos donde la piel mejora o se aclara por completo (denominados remisiones). La dermatitis atópica comúnmente se conoce como "eccema", que es un término general para varios tipos de inflamaciones cutáneas. La dermatitis atópica es el tipo de eccema más común. Los ejemplos de dermatitis atópica incluyen: eccema o dermatitis de contacto alérgica (por ejemplo, que se manifiesta algunas veces como una reacción de enrojecimiento, picazón y exudación cuando la piel entra en contacto con una sustancia extraña, tal como una hiedra o determinados preservantes en cremas y lociones); el eccema de contacto (por ejemplo, una reacción localizada que incluye enrojecimiento, picazón y quemadura cuando la piel entra en contacto con un alérgeno o un irritante, tal como un ácido, un agente limpiador u otra sustancia química); el eccema dishidrótico (por ejemplo, una irritación de al piel que afecta las palmas de las manos y las suelas de los píes caracterizada por ampollas transparentes y profundas que pican y queman); la neurodermatitis (por ejemplo, parches escamosos de la piel sobre la cabeza, la parte inferior de las piernas, las muñecas o los antebrazos causados por una picazón localizada (tal como una picadura de insecto) que se irritan intensamente cuando se los rasca); el eccema numular (por ejemplo, que se manifiesta como parches con forma de moneda de piel irritada, más comúnmente sobre los brazos, la espalda, la cola y la parte inferior de las piernas, que pueden descascararse, presentar escamas y picazón); el eccema seborreico (por ejemplo, que se manifiesta como parches de piel amarillenta, aceitosa, escamosa en el cuero cabelludo, la cara y ocasionalmente otras partes del cuerpo). Otros síntomas particulares adicionales incluyen la dermatitis de estasis, el pliegue atópico (por ejemplo, el pliegue de Dennie-Morgan), la queilítis, las palmas hiperlineales, los párpados hiperpigmentados: párpados que presentan un color más oscuro debido a inflamaciones o fiebre de heno, ictiosis, queratosis pilosa, liquenificacíón, pápulas y urticaria. Puede administrarse un antagonista de la vía de IL-21/IL-21 R para mejorar uno o más de estos síntomas.

Trastornos fibróticos Aunque la producción de colágeno es un proceso muy regulado, su alteración puede resultar en el desarrollo de fibrosis tisular. La acumulación anormal de materiales fibrosos puede conducir finalmente a la falla de órganos (Border et al. (1994) New Engl. J. Med. 331 :1286-92). Las lesiones en los órganos conducen a una respuesta fisiológica estereotípica: hemostasis inducida por plaquetas, a lo que sigue un influjo de células inflamatorias y fibroblastos activados. Las citoquinas derivadas de estos tipos celulares dirigen la formación de nueva matriz extracelular y vasos sanguíneos (tejido de granulación). La generación de tejido de granulación es un programa orquestado cuidadosamente en el que se regula positivamente la expresión de los inhibidores de proteasas y las proteínas de la matriz extracelular, y se reduce la expresión de las proteasas, lo que conduce a la acumulación de matriz extracelular. El desarrollo de condiciones fibróticas, inducidas o espontáneas, es provocado al menos en parte por la estimulación de la actividad de los fibroblastos. El influjo de células inflamatorias y fibroblastos activados en el órgano lesionado depende de la capacidad de estos tipos de células de interactuar con la matriz intersticial, que contiene primariamente colágeno. Muchas de las enfermedades asociadas con la proliferación de tejido fibrosos son crónicas y comúnmente debilitantes, incluyendo, por ejemplo, enfermedades cutáneas, tales como el escleroderma. Algunas, incluyendo la fibrosis pulmonar, pueden ser fatales, debido en parte al hecho de que los tratamientos actualmente disponibles para esta enfermedad tienen efectos colaterales significativos y generalmente no son eficaces para desacelerar o detener la progresión de la fibrosis (Nagler et al. (1996) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 154:1082-86). Los trastornos fibróticos incluyen trastornos caracterizados por fibrosis, por ejemplo, fibrosís de un órgano interno, un trastorno fibrótico dérmico y condiciones fibróticas oculares. La fibrosis de los órganos internos (por ejemplo, el hígado, el pulmón, el riñon, los vasos sanguíneos del corazón, el tracto gastrointestinal) ocurre en trastornos tales como la fibrosis pulmonar, la mielofibrosis, la cirrosis hepática, la glomerulonefritis mesangial proliferativa, la glomerulonefritis crescéntica, la nefropatía diabética, la fibrosis renal intersticial, la fibrosis renal en pacientes que reciben ciclosporina, y la nefropatía asociada con VIH. Los trastornos fibróticos cutáneos incluyen, por ejemplo, escleroderma, morfea, queloídes, cicatrices hipertróficas, colagenoma cutáneo familiar y nevi de tejido conectivo tipo colágeno. Las condiciones fibróticas oculares incluyen condiciones tales como retinopatía diabética, cicatrización post-quirúrgica (por ejemplo, después de cirugía de glaucoma y después de cirugía de estrabismo), y vitreoretinopatía proliferativa. Otras condiciones fibróticas que pueden tratarse con los métodos de la presente invención incluyen: artritis reumatoide, enfermedades asociadas con dolor articular prolongado y lesiones deterioradas, esclerosis sistémica (incluyendo esclerosis sistémica progresiva), polimiositis, dermatomiositis, fascitis eosinofílica, morfea (escleroderma localizado), síndrome de Raynaud y poliposis nasal. Puede administrarse un antagonista de la vía de IL-21/IL-21R para tratar o prevenir trastornos fibróticos, o para mejorar uno o más de los síntomas de estos trastornos.

ENSAYOS PARA MEDIR LA ACTIVIDAD DE ANTAGONISTAS DE IL-21/IL-21 R COMO MODULADORES DE LA PRODUCCIÓN DE CITOQUINAS Y LA PROLIFERACIÓN/DIFERENCIACIÓN CELULAR Puede evaluarse la actividad de los antagonistas de IL-21/IL-21 R como moduladores de la producción de citoquinas y la proliferación/diferenciación celular usando cualquiera de una cantidad de ensayos de proliferación celular convencionales dependientes de factores para líneas celulares, incluyendo, sin limitaciones, 32D, DA2, DA1G, T10, B9, B9/11 , BaF3, MC9/G, M+(preB M+), 2E8, RB5, DA1 , 123, T1165, HT2, CTLL2, TF-1 , Mo7e y CMK. Los ensayos para la proliferación de células T o timocitos incluyen, sin limitaciones, aquellos descriptos en Current Protocols in Inmunology, editado por J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M.

Shevach, W Strober, publicado por Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (Capítulo 3, In vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Capítulo 7, Inmunologic studies in Humans); Takai et al. (1986) J. Inmunol. 137:3494-500; Bertagnolli et al. (1990) J. Inmunol. 145:1706-12; Bertagnolli et al. (1991 ) Cellular Inmunology 133:327-41 ; Bertagnolli et al. (1992) J. Inmunol. 149:3778-83; Bowman et al. (1994) J. Inmunol. 152:1756-61. Los ensayos para la producción de citoquinas y/o la proliferación de células de bazo, células de nodos linfáticos o timocitos incluyen, sin limitaciones, aquellos descriptos en Policlonal T cell stimulation, Kruisbeek, A. M. y Shevach, E. M. en Current Protocols in Inmunology. J. E.e. a. Coligan editores. Vol 1 pp. 3.12.1-3.12.14, John Wiley and Sons, Toronto. 1994; y Measurement of mouse and human Interferon gamma, Schreiber, R. D. en Current Protocols in Inmunology. J. E.e. a. Coligan editores. Vol 1 pp. 6.8.1-6.8.8, John Wiley and Sons, Toronto. 1994. Los ensayos para la proliferación y la diferenciación de células hematopoyéticas y línfopoyéticas incluyen, sin limitaciones, aquellos descriptos en Measurement of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4, Bottomly, K., Davis, L. S. y Lipsky, P. E. en Current Protocols in Inmunology. J. E.e. a. Coligan editores. Vol 1 pp. 6.3.1-6.3.12, John Wiley and Sons, Toronto. 1991 ; deVries et al. (1991) J. Exp. Med. 173:1205-11 ; Moreau et al. (1988) Nature 336:690-92; Greenberger et al. (1983) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 80:2931-38; Measurement of mouse and human interleukin 6, Nordan, R. en Current Protocols in Inmunology. J. E.e. a. Coligan editores. Vol 1 pp. 6.6.1-6.6.5, John Wiley and Sons, Toronto. 1991 ; Smith et al. (1986) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 83:1857-61 ; Measurement of human Interleukin 11 , Bennett, F., Giannotti, J., Clark, S. C. y Turner, K. J. en Current Protocols in Inmunology. J. E.e. a. Coligan editores. Vol 1 pp. 6.15.1 John Wiley and Sons, Toronto. 1991; Measurement of mouse and human Interleukin 9, Ciarletta, A., Giannotti, J., Clark, S. C. y Turner, K. J. en Current Protocols in Inmunology. J. E.e. a. Coligan editores. Vol 1 pp. 6.13.1 , John Wiley and Sons, Toronto. 1991. Los ensayos para las respuestas de células T clonadas a antígenos (que identificarán, entre otros, proteínas que afecten las interacciones entre las células APC-T y los efectos directos de las células T medíante la medición de la proliferación y la producción de citoquina) incluyen, sin limitaciones, aquellos descriptos en Current Protocols in Inmunology, editado por J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach, W Strober, publicado por Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (Capítulo 3, In vitro assays for Mouse Lymphocyte Function; Capítulo 6, Cytokines and their cellular receptors; Capítulo 7, Inmunologic studíes in Humans); Weinberger et al. (1980) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 77:6091-95; Weinberger et al. (1981) Eur. J. Inmun. 11 :405-11 ; Takai et al. (1986) J. Inmunol. 137:3494-500; Takai et al. (1988) J. Inmunol. 140:508-12.

EJEMPLOS La invención se ilustrará adicionalmente en los siguientes ejemplos no limitantes.

EJEMPLO 1 Aislamiento y caracterización de ADNc de MU-1 murino Se aisló un fragmento parcial del homólogo murino del receptor MU-1 por PCR, usando oligonucleótidos derivados de las secuencias humanas. Se preparó ADNc a partir de ARN aislado de timos murinos de 17 días de edad, y a partir de la línea de células T murinas 2D6. Se amplificó un fragmento de ADN de aproximadamente 300 nucleótidos a partir del ADNc por PCR con los siguientes oligonucleótidos, que corresponden a las regiones 584-603 y 876-896, respectivamente, de la secuencia de ADNc humano de la FIG. 1 (que corresponde a SEQ ID N° 1): AGCATCAAGCCGGCTCCCCC (5p)(SEQ ID N° 11) CTCCATTCACTCCAGGTCCC (3p) (SEQ ID N° 12) Se efectuó la amplificación usando polimerasa Taq en amortiguador Taq 1X que contenía 1.5 mM de cloruro de magnesio por 30 ciclos a 94°C por un minuto, 50°C por 1 minuto, y 72°C por un minuto. Se determinó la secuencia de ADN de este fragmento, y se obtuvieron los dos oligonucleótidos a partir de una porción interna de este fragmento, con las siguientes secuencias: TTGAACGTGACTGRGGCCTT (5P) (SEQ ID N° 13) TGAATGAAGTGCCTGGCTGA (3P) (SEQ ID N° 14) Se usaron los oligonucleótidos para amplificar un fragmento interno de 262 nucleótídos del producto de PCR original (que corresponde a los nucleótidos 781-1043 en la secuencia de ADNc murino de FIG. 1 , y SEQ ID N° 9), que se usó como sonda de hibridización para analizar una biblioteca de ADNc aislada a partir de la línea de células T 2D6. Se hibridizaron los filtros a 65°C usando condiciones de hibridización convencionales con SSC 5X, y se lavó en SSC a 65°C. Se aislaron veinte clones que hibridizaron con la sonda en un análisis de 426000 clones. Se determinó la secuencia de ADN de dos clones independiente. La secuencia completa del clon #6 confirmó que era el homólogo murino completo de MU-1 humano (SEQ ID N° 9). Se detalla la secuencia de nucleótidos completa de MU-1 murino en la FIG. 1 (que corresponde a SEQ ID N° 9). La secuencia de nucleótídos tiene una secuencia directriz predicha en los nucleótidos 407-464, la secuencia codificante en los nucleótidos 407-1993, el codón de terminación en los nucleótidos 1994-1996. Los nucleótidos 1-406 corresponden a la región 5' no traducida, y los nucleótidos 1997-2628 corresponden a la región 3' no traducida (SEQ ID N° 9). Se detalla la secuencia proteica predicha para MU-1 murino en la FIG. 2 (que corresponde a SEQ ID N° 10). Esta proteína MU-1 murina contiene una secuencia directriz predicha determinada por SPScan (calificación = 10.1) (que corresponde a los aminoácidos 1-19 de SEQ ID N° 10), y un dominio transmembrana predicho (que corresponde a los aminoácidos 237-253 de SEQ ID N° 10). Los motivos de señalización predichos incluyen las siguientes regiones en FIG. 2B: Recuadro 1 : aminoácidos 265-274 de SEQ ID N° 10; Recuadro 2: aminoácidos 310-324 de SEQ ID N° 10, seis residuos de tirosina en las posiciones 281 , 319, 361 , 368, 397 y 510 de SEQ ID N° 10. Los sitios de anclaje STAT potenciales incluyen STAT5: EDDGYPA (SEQ ID N° 20); STAT3: YLQR.

EJEMPLO 2 Comparación entre MU-1 humano y murino Se usó el algoritmo GAP para comparar los aminoácidos de MU-1 humano y murino. Se clonó MU-1 humano usando una región de 70 aminoácidos del receptor de IL-5 humano (SEQ ID N° 3) para efectuar una búsqueda en una base de datos GenBank, así como los cebadores para PCR (SEQ ID N° 4 y 5), y olígonucleótidos de hibridización (SEQ ID N° 6 y 7). Se presenta una comparación de las secuencias de las proteínas murinas y humanas predichas en la FIG. 4. los aminoácidos fueron 65.267% idénticos usando el algoritmo GAP. Se generó el alineamiento usando la matriz de sustitución de aminoácidos BLOSUM62 (Henikoff y Heníkoff (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 89: 10915-19). Parámetros de alineamiento GAP = Ponderación de falta de coincidencia: 8, Coincidencia promedio = 2.912, Ponderación de longitud = 2, Falta de coincidencia promedio = -2.003; Porcentaje de similitud = 69.466. Se ilustra una comparación de las secuencias de nucleótidos de ADNc humano y murino en la FIG. 3. Las secuencias de ADN son 66.116% idénticas cuando se las alinea usando el algoritmo GAP. Parámetros de alineamiento GAP: Ponderación de falta de coincidencia = 50, Coincidencia promedio 10.000, Ponderación de longitud = 3, Falta de coincidencia promedio = 0.000, Porcentaje de similitud = 66.198. Las proteínas MU-1 humanas y de ratón son miembros de la superfamilia de receptores de citoquina tipo 1. La evaluación de la secuencia de MU-1 murino y humano revela la presencia de motivos de señalización Box-1 y Box-2 potenciales. Hay seis residuos de tirosine presentes en el dominio citoplasmático, los cuales también podrían ser importantes para señalizar las funciones de MU-1. La comparación de las secuencias de MU-1 con otros miembros de la familia sugirió la presencia de sitios de unión potenciales para STAT 5 y STAT 3.

EJEMPLO 3 Determinación de las vías de señalización STAT usadas por MU-1 humano Se modificaron células BAF-3 para que expresaran un receptor de citoquina quimérico, que consistió en el dominio extracelular del receptor EPO humano y el dominio intracelular del receptor MU-1. Las células BAF-3 que expresaron los receptores huEPORJMU-l(cyto) quiméricos proliferaron en respuesta a EPO humano soluble. Se analizaron estas células para determinar cuáles moléculas STAT se fosforilaban como respuesta a la señalización EPO. Brevemente, se dejaron reposar células progenitoras BAF-3 no modificadas de control y células BAF-3 quiméricas EPOR/MU en un medio que contenía IL-3, y se las estimuló nuevamente con IL-3 o EPO por 0, 15, 30 y 60 minutos. Las células se precipitaron y se suspendieron nuevamente en amortiguador de lisis helado que contenía ortovanadato para preservar las tirosinas fosforiladas. Se sometieron cantidades iguales de lisados celulares a electroforesis por SDS-PAGE, y se las transfirió a membranas de nitrocelulosa para efectuar un análisis de Western. Se colorearon las transferencias por duplicado para hallar las formas fosforiladas y nofosforiladas de STAT 1 , 3, 5 y 6, usando anticuerpos específicos para cada forma de la molécula STAT. Se usaron células HELA, no activadas y activadas interferón alfa, como controles positivos. Estos resultados indicaron que, bajo estas condiciones específicas, la señalización a través de MU-1 resulta en la fosforilación de STAT 5 en todos los puntos de tiempo evaluados (T = 0, T = 15', T = 30', T = 60'). El tratamiento de los controles o las células BAF-3 quiméricas con IL-3 resultó en la fosforilación de STAT 3, pero no STAT 1 ó 5.

EJEMPLO 4 Expresión tisular de MU-1 murino y humano EJEMPLO 4.1 Análisis de Northern Se efectuaron Northern blots de ARN poliA+ de varios tejidos (Clonetech, Palo Alto, CA) según lo recomienda el fabricante. Para las transferencias murinas, se usó un fragmento de 262 nucleótidos, que correspondía a los nucleótidos 781-1043 de FIG. 1 y SEQ ID N° 9, para la hibridización. Se detectó un único transcripto de MU-1 murino en tejido de bazo, pulmón y corazón murino adulto. El transcripto más grande observado en tejidos humanos no se observó en tejidos de ratón. Se detectaron dos transcriptos de MU-1 humano en tejidos línfoides de humanos adultos, PBL, timo, bazo y nodulos linfáticos, y en pulmones fetales.

EJEMPLO 4.2 Hibridización in situ Los estudios de hibridización in situ fueron realizados por Phylogency Inc., de Columbus, OH (de acuerdo con el método de Lyons et al. (1990) J. Cell. Biol. 111 :2427-36). Brevemente, se desparafinaron secciones en parafina seriadas de 5-7 micrones, se las fijó, se digirió con proteinasa K, se las trató con tri-etanolamina y se deshidrató. Se prepararon los ARNc a partir de moldes de ADNc para generar sondas en el sentido del marco de lectura y antisentido. Se sintetizaron los transcriptos de ARNc de acuerdo con las condiciones del fabricante (Ambion) y se marcó con 35S-UTP. Se sometieron las secciones a hibridización durante la noche, se lavó bajo condiciones severas, se trató con ARNasa A, se las sumergió en emulsión de rastreo y se las expuso por 2-3 semanas. Luego se hibridízaron secciones de control con sondas en el sentido del marco de lectura para indicar el nivel de fondo del procedimiento. La sonda murina consistió en un fragmento de 186 bp que correspondió a los nucleótidos 860-1064 (SEQ ID N° 9). La sonda humana fue un producto de PCR de 23 bp generado a partir de ADN de MU-1 humano. Se observó la expresión de MU-1 murino en los nodos linfáticos del intestino delgado de los adultos en los centros germinales. Los nodos linfáticos especializados y los parches de Peyer también presentaron expresión de MU-1 murino. Se detectó la expresión de MU-1 humano en los centros germinales de los nodulos linfáticos en la corteza. La médula, que contiene macrófagos, no presentó MU-1 humano. En bazo humano, se detectó la expresión de MU-1 humano en las regiones de pulpa blanca, pero no en la pulpa negra.

EJEMPLO 5 Expresión de MU-1 humano en células y líneas de células Se realizaron análisis de protección de ARNasa sobre células T humanas y líneas de células B humanas en reposo y activadas, Raji y RPMl 8866, y en la línea de células T. Se activaron las células T humanas con anti-CD3 y anti-CD28. Se activaron las líneas celulares con éster de forbol e ionomicina. Se construyó el plásmido productor de ribosondas MU-1 insertando un producto de PCR de 23 bp (se efectuó la PCR usando el cebador 5 CACAAAGCTTCAGTATGAGCTGCAGTACAGGAACCGGGGA (SEQ ID N° 15) y el cebador 3' CACAGGATCCCTTTAACTCCTCTGACTGGGTCTGAAAGAT (SEQ ID N° 16) en los sitios BamHI y Hindlll del vector pGEM3zf(-) (Promega, Madison, Wl)). Para preparar la ribosonda, se linealizó el plásmido productor de ribosondas con Hindlll. El ADN resultante se extrajo con fenol/cloroformo y se precipitó con etanol. Se usó ARN polimerasa T7 para preparar la ribosonda de acuerdo con el protocolo sugerido por el proveedor (PharMingen, San Diego, CA). Se realizó el ensayo de protección de ARNasa usando el sistema de ensayo de protección deribonucleasa con sondas múltiples RIBOQUANT™ de PharMingen. Se incluyeron 2.0 µg de ARN total en cada reacción de RPA. Después de digerir con ARNasa, se analizaron las ribosondas en un sistema de separación rápida de ácidos nucleicos QUICKPOINT™ (Novex, San Diego, CA). Los geles se secaron y se expusieron de acuerdo con la sugerencia del proveedor. El ARN de MU-1 humano está regulado positivamente en células CD3+ humanas purificadas y estimuladas con anti-CD3 + anti-CD28, en comparación con las poblaciones sin estimulación. MU-1 también está regulado positivamente en poblaciones de células T esimuladas en forma sesgada con Th1 y Th2. Las líneas de células B RPMl 8866 y Raji expresaron MU-1 en forma constitutiva, al tiempo que la línea de células T Jurkat no lo hizo. EJEMPLO 6 Unión de MU-1 humano a citoquinas conocidas Se construyeron proteínas de fusión de Ig humana y murina, y se las inmovilizó en chips Biacore con el objeto de identificar el ligando de MU-1. Se evaluó la unión a MU-1 en una variedad de medios acondicionados, así como en un panel de citoquinas conocidas. También se evaluaron algunas citoquinas en combinación con otras cadenas receptoras en la familia para considerar la posibilidad de que MU-1 pudiera requerir una segunda cadena receptora para unirse al ligando. Se evaluaron las siguientes citoquínas, y se descubrió que no se unían a MU-1 : mlL-2, hlL-2, hlL-15, mlL- 7, TSLP, TSLP + IL-7, TSLP + IL-7R, TSLP + IL-7g, TSLP + IL-2, TSLP + IL-2 + IL-2Rbeta, IL2-Rbeta, IL-2Rgamma, IL-7R, IL-2 + IL-2Rbeta, IL-2 + IL- 2Rgamma, IL-15 + IL-2Rbeta, IL-15 + IL-2Rgamma, IL-7 + IL-2Rgamma, IL-2 + IL-7R, IL-15.+ IL-7R, IL-7 + IL-7R. También se inmovilizaron receptores conocidos, y se evaluó la unión a MUFc con resultados negativos. IL-15 se une a IL-2Rb, pero no a IL-2Rg o MUFc.

EJEMPLO 7 La inhibición de la actividad de IL-21/IL-21R mejora la severidad de los síntomas en ratones con artritis inducida por colágeno (CÍA) Este ejemplo demuestra que los antagonistas IL-21R, por ejemplo, las proteínas de fusión IL-21 R-lg (proteína IL-21 RFc murina o "mulL-21 RFc") o los anticuerpos anti-IL-21 R, mejoran los síntomas en el modelo de CÍA murina. Se usaron ratones DBA/1 (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME) macho en todos los experimentos. Se indujo artritis usando colágeno tipo II bovino (Chondrex, Redmond, WA). Se disolvió el colágeno tipo II bovino (Chondrex) en ácido acético 0.1 M y se emulsificó en un volumen igual de coadyuvante completo de Freund (Sigma) que contenia 1 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis (cepa H37RA). Se inyectaron 100 µg de colágeno bovino por vía subcutánea en la base de la cola el día 0. El día 21 , se inyectaron los ratones por vía subcutánea, en la base de la cola, con una solución que contenía 100 µg de colágeno bovino en ácido acético 0.1 M que había sido mezclado con un volumen igual de coadyuvante incompleto de Freund (Sigma). Los animales sin tratamiento recibieron el mismo conjunto de inyecciones, menos colágeno. Se indica el protocolo de dosificación en forma esquemática en la FIG. 16. Se administró MulL-21 RFc con propósitos profilácticos o terapéuticos a ratones DBA. En el régimen terapéutico, se inició el tratamiento cuando se observó la enfermedad por dos días consecutivos en un ratón. Se monitoreó la progresión de la enfermedad en los ratones al menos tres veces por semana. Se asignó una calificación clínica a los miembros individuales sobre la base del siguiente índice: 0 = normal, sin hinchazón; 1 = eritema visible acompañado por 1-2 dígitos hinchados, o hinchazón leve en el tobillo; 2 = eritema pronunciado, caracterizado por una hinchazón moderada de la pata y/o dos dígitos hinchados; 3 = hinchazón extensa de la pata entera, es decir, extensión hacia la articulación del tobillo o la muñeca; 4 = resolución de la hinchazón, anquilosis de la pata; dificultad en el uso del miembro o rigidez en la articulación. Por consiguiente, la suma de todas las calificaciones de los miembros para cualquier ratón proporcionó una calificación corporal total de 16. En varias etapas de la enfermedad, se sacrificaron los animales, se cosecharon los tejidos y se fijaron las patas en formalina al10% para analizar la histología, o paraformaldehído al 4%, pH 7.47, se descalcificó en EDTA al 20% (pH 8.0), y se embebió parafina para la hibridización in situ. Usando microscopía óptica, se calificaron las patas con un método de calificación de 5 grados (0-4) para caracterizar la intensidad y la extensión de la artritis. Se usaron infiltrados inflamatorios para la calificación, además de otros cambios relacionados con la inflamación, tal como la formación de pannus, la presencia de fibras en la membrana sinovial, la erosión del cartílago articular y/o el hueso subcondral. Se determinaron los grados de histología usando lecturas de patas individuales: NAD = 0 o sin anormalidades descubiertas; 1 = ligera a moderada; 2 = leve a moderada; 3 = marcada; y 4 = masiva. Se observó una reducción en la severidad de los síntomas después del tratamiento profiláctico de los ratones CÍA usando mulL-21 RFc (100 µg o 200 µg) administrado por vía ¡ntraperitoneal (IP) día por medio, comenzando el primer día posterior a la inyección de colágeno (datos no indicados). Se ilustran los efectos de mulL-21 RFc (200 µg/ratón 3x/semana) sobre un ratón con CÍA semi-terapéutico en función de los días posteriores al tratamiento en la FIG. 17. Se usó Ig de ratón (200 µg/ratón 3x/semana) como control. Se observa una reducción en la calificación de severidad a partir del día 7 posterior al tratamiento. Estos experimentos demuestran que la administración de un antagonista de IL-21 R, por ejemplo, proteínas de fusión IL-21 R-Fc, a ratones CÍA, con fines profilácticos o semi-terapéuticos, mejora significativamente los síntomas de artritis.

EJEMPLO 8 Hibridización in situ de transcriptos de IL-21R Se determinó la expresión de ARNm de IL-21 R de ratones con CÍA. Se usaron ribosondas de IL-21 R muríno antisentido (FIG. 18A); se usaron sondas en el sentido del marco de lectura como controles negativos (FIG. 18B). Se prepararon sondas marcadas con digoxigenina con el uso de una mezcla de marca de ADN DIG (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania), como lo describe el fabricante. Se detectó la expresión de ARNm del receptor de IL-21 en macrófagos, neutrófilos, fibroblastos, una subpoblación de linfocitos, sinoviocitos y epidermis (FIG. 18A). Se observó una coloración menor en las patas control o con sondas en el sentido del marco de lectura (FIG. 18B). Las células con expresión positiva de ARNm de mlL-21 R fueron los neutrófilos (N) y los macrófagos (M). La hibridización in situ demostró la expresión mejorada de IL-21 R en las patas de ratones artríticos.

EJEMPLO 9 La inhibición de la actividad de IL-21/IL-21R mejora la severidad de los síntomas tipo IBP en el modelo en rata HLA-B27 Este ejemplo demuestra que los antagonistas de IL-21 R, por ejemplo, las proteínas de fusión IL-21R-lg (proteína IL-21 RFc murina o "muIL- 21RFc") o los anticuerpos anti-IL-21R, mejoran los síntomas tipo IBD en el modelo en rata HLA-B27. Se generó un polipéptido de fusión del receptor de IL-21 murino y Fc (MulL-21RFc) como se describió en la presente documentación, y se evaluó su capacidad de aliviar la inflamación intestinal en el modelo en rata HLA-B27. Se ha usado extensamente el modelo en rata HLA-B27 para evaluar terapias IBD, ya que el modelo de inflamación intestinal observado en el modelo comparte vahas características clínicas, histológicas e inmunológicas con la IBD en seres humanos (revisado, por ejemplo, en Elson et al. (1995) Gastroenterology, 109:1344-67; Blanchard et al. (2001) European Cytokine Network 12:111-18; Kim et al. (1999) Arch. Pharm. Res. 22:354-60). Por ejemplo, HLA-B27 de rata sobreexpresa el alelo B27 del complejo de histocompatibilidad mayor humano I y los productos genéticos de B2-microglobulina. Estos productos genéticos están asociados con el desarrollo de enfermedades inflamatorias crónicas, tales como la IBD. Las ratas utilizadas en el estudio habían desarrollado una inflamación crónica del tracto gastrointestinal (Gl), como lo evidenciaron las señales clínicas de diarrea persistente. Se le asignó una calificación clínica (0-3) a las heces sobre la base del siguiente: 0 = normal con pellets de heces formados; 1 = suave, con pellets de heces formados; 2 = blando, sin formación de pellets de heces; y 3 = diarrea acuosa (véase la FIG. 19). Se monitorearon las ratas por 18 días, durante lo cual se analizaron las heces para determinar la progresión de la enfermedad. Una calificación clínica de 3 indica diarrea persistente (indicada en el control de IgG). Se administró MulL-21 RFc (6 mg/kg IP, 3X semana) a cinco ratas HLA-B27 transgénicas/grupo por un período de 18 días. A otro grupo se le administraron 6 mg/ml de mEnbrel (fusión de receptor de TNF y Fc soluble), un control positivo. A un tercer grupo, que consistió en una cantidad igual de ratones, se le administró IgG como un control, del mismo modo y con la misma dosificación. Se detectó una reducción marcada de la calificación clínica en los grupos tratados con MulL-21 RFc y mEnbrel, en comparación con el control con IgG (véanse las FIGS. 19 y 20). La administración de MulL-21 RFc demostró una eficacia similar a mEnbrel en el mejoramiento de los síntomas tipo IBD. Los resultados de este estudio demuestran que la administración de MulL-21 RFc disminuye la inflamación intestinal con una eficacia similar a la de mEnbrel en un modelo HLA-B27 en rata, en comparación con las ratas a las que se había administrado IgG control (véanse las FIGS. 19 y 20). Se confirmó el alivio de los síntomas, expresado en términos de calificación fecal mejorada, a través de análisis histológicos. Las ratas tratadas con MulL-21RFc presentaron una calificación de severidad de la enfermedad significativamente menor que aquellas tratadas con el control, IgG, en lo referente a la ulceración, la inflamación, la profundidad de las lesiones y la fibrosís (véase el cuadro A, a continuación). Al análisis histológico se le asignó una calificación clínica de 0-2 ó 0-3, como se indicó, donde una mayor calificación indica una mayor severidad en el modelo de IBD en rata. Se detectó una disminución significativa de la inflamación en el intestino en todas las categorías examinadas en grupos tratados con MulL-21RFc y mEnbrel, respecto del control. MulL-21RFc presentó una eficacia similar a la de mEnbrel en el mejoramiento de las señales histológicas de severidad de la enfermedad. Para apoyar una extensión de los resultados presentados previamente a seres humanos, en la FIG. 19 (panel del lado derecho) se presenta la hibridización in situ de ARNm de MU-1 en los linfocitos y los nodos linfáticos del intestino humano normal, lo que indica la expresión de ARNm de MU-1 en el órgano relevante para la enfermedad.

CUADRO A IL21 R soluble reduce las señales clínicas de IBD en el modelo de autoinmunidad en ratas HLAB27 Calificación histológica de la severidad de la enfermedad en el modelo de IBD en rata * señal < vehículo (p < 0.05) en ANOVA y la prueba de rango múltiple nueva de Duncan EJEMPLO 10 La inhibición de la actividad de IL-21/IL-21R demora el rechazo de injertos de piel alogenéicos en ratones Este ejemplo demuestra que los antagonistas de IL-21R, por ejemplo, las proteínas de fusión IL-21 R-lg (proteína IL-21 RFc murina o "mulL-21 RFc") o los anticuerpos anti-IL-21 R, demoran el rechazo de injertos de piel alogenéicos en ratones, por lo que prolongan la supervivencia del injerto. Se demostró que la administración de MulL-21 RFc demoraba el rechazo de injertos de piel alogenéícos en ratones inyectados con células T transducidas por medios retrovirales. En la FIG. 21 se ilustra un gráfico que presenta el porcentaje de supervivencia del injerto respecto de los días transcurridos después de la transferencia adoptiva. En este modelo, los ratones desnudos presentan injertos de piel alogenéicos curados, debido a que no se detectan células T en ellos. Cuando se inyectaron células T B6 activadas, que habían sido modificadas en forma retroviral para secretar GFP control o IL-21 , en ratones desnudos, se rechazaron los injertos (véase la FIG. 21). Se habían modificado las células T para secretar MulL-21 RFc (del que se esperaba que neutralizara la IL-21 secretada por estas células), los injertos sobrevivían por intervalos de tiempo más largos, como se indica en la FIG. 21 (indicado por IL-21 R-Fc, en comparación con los controles de GFP y IL-21). Se usaron diez ratones para GFP y MulL-21RFc, respectivamente; se usaron quince ratones para los controles de IL-21. Estos resultados demuestran la participación de los antagonistas de IL-21 R en la prolongación de la supervivencia de los injertos.

EJEMPLO 11 La inhibición de la actividad de IL-21/IL-21R reduce los síntomas de enfermedad en un modelo de transferencia adoptiva CD45RB hi Este ejemplo demuestra que los antagonistas de IL-21 R, por ejemplo, las proteínas de fusión IL-21 R-lg (proteína de IL-21 RFc murina o "mulL-21 RFc") o los anticuerpos anti-IL-21 R, mejoran los síntomas en un modelo de psoriasis y enfermedad intestinal inflamatoria (IBD) en ratón. La transferencia de células T CD4+ CD45RBhl no expuestas en ratones con inmunodefíciencía combinada severa (SCID) resultó en colitis y/o lesiones cutáneas similares a la psoriasis, dependiendo de las condiciones de alojamiento en las jaulas. Se separaron las células T CD4+ BALBc CD45RBhl (población no expuestas) de las células de bazo primero mediante una selección negativa en columnas para las células T CD4+, y luego se las separó por citometría de flujo, con una selección por expresión elevada de CD45. Se transfirieron 4*105 células de esta población a ratones C.B-17 SCID hembra, y se evaluaron las señales de psoriasis e IBD en los ratones durante varias semanas. Los ratones alojados en jaulas bajo condiciones estáticas desarrollaron la enfermedad intestinal inflamatoria; ratones alojados bajo condiciones regulares con cambios de flujo de aire también desarrollaron psoriasis. Se analizó la psoriasis en los ratones en una escala de 1-6: 1 = leve, eritema moderado (usualmente en los párpados y las orejas) en <2% del cuerpo; 2 = presencia leve de escamas y eritema ente moderado y severo (usualmente en las orejas y la cara) en 2-10% del cuerpo; 3 = eritema severo y presencia de escamas (en las orejas, la cara y el tronco) en 10-20% del cuerpo; 4 = eritema muy severo en 20-40% del cuerpo; 5 = eritema muy severo en 40-60% del cuerpo; 6 = eritema muy severo en 60-100% del cuerpo. Se analizó la IBD en los ratones a través de la pérdida de peso y la calificación fecal: 0 = normal; 1 = suave; 2 = diarrea; 3 = diarrea con sangre y mucus. El tratamiento con mulL-21 RFc fue efectivo para mejorar los síntomas semejantes a la psoriasis. En los ratones que desarrollaron inflamaciones cutáneas, el tratamiento con una inyección intraperitoneal de 200 µg de mulL-21RFc 3x por semana, comenzado ocho semanas después de la transferencia de células CD45RBhl, resultó en la reducción del eritema, la formación de escamas y la pérdida de cabello, en comparación con los ratones control tratados con Ig anti-E. tenella (FIG. 22A-22B). El tratamiento de los ratones receptores de CD45RBhl con 200 µg de mulL-21 RFc 3x por semana en el momento de la transferencia celular resultó en el inicio demorado de la psoriasis y en una enfermedad con menor severidad clínica, en comparación con los controles con el correr del experimento (FIG. 34). Se resumen los resultados del experimento en el cuadro B.

CUADRO B El tratamiento usando mulL-21 RFc también fue efectivo para mejorar los síntomas de inflamación intestinal El tratamiento de ratones de receptores de CD45RBhl con 200 µg o 400 µg de mulL-21 RFc tres veces por semana en el momento de la transferencia de las células resultó en una reducción significativa de las señales clínicas de colitis, determinadas a través de la pérdida de peso corporal (FIG 35) y la calificación fecal (FIG 36A-36B), en comparación con los ratones tratados con Ig control Se resumen los resultados en el cuadro C, a continuación La evaluación macroscópica de los cólones de ratones receptores de CD45RBhl demostró un espesamiento y una hinchazón severa, que casi fue suprimida casi por completo en los ratones tratados con mulL-21RFc En términos microscópicos, los ratones tratados con control también presentaron un grado mayor de hiperplasia epitelial e infiltración leucocitapa en la lámina propia/la submucosa, en comparación con los ratones tratados con mulL-21 RFc Adicionalmente, se midieron las citoquinas en suero en los ratones tratados con control y los ratones tratados con mulL-21 RFc De las distintas citoqumas medidas, solamente se detectó interferón gamma (IFN-?) en suero. El tratamiento con dosis de 200 µg o 400 µg de mulL-21 RFc resultó en niveles en suero significativamente reducidos de IFN-?, en comparación con los ratones tratados con Ig control (FIG. 37A-37B). Puede usarse IFN-? como marcador biológico de la eficacia de los antagonistas de IL-21 R sobre la IBD.

CUADRO C IBD#14 IBD (heces) Tratamiento Incidencia Dia de inicio Prueba de Valor Prueba de de lBD promedio T promedio T más alto 400 ug anti 9/10 36.22±14.86 1.77810.441 Etenella 200 ug mlL- 6/10 36.67±13.74 0.954 1.16710.408 0.018 21 r 400 ug mlL- 8/10 45.5117.485 0.261 110 7.E-04 21 r Se evaluó la respuesta a IL-21 de subconjuntos CD45RB >h¡ (no expuestas) y CD45RB10 (de memoria) en un ensayo de proliferación. En el modelo de transferencia de IBD, solamente las células no expuestas provocaron la enfermedad, y esta enfermedad pudo suprimirse agregando la población de memoria. En este ensayo, se estimularon poblaciones purificadas con anti-CD3 unido a placa, y se evaluó la incorporación de 3H- timidina en respuesta a IL-21. La población no expuesta presentó una respuesta significativamente incrementada a IL-21 en comparación con la población de memoria (FIG. 38). Esto sugiere que IL-21 es una citoquina importante para la expansión de esta población in vivo. La adición de IL-21 a células CD4+ CD45RBhl activadas en cultivo indujo la secreción de múltiples citoquinas. Se trataron las células T CD45RBhi CD4+ estimuladas con anti-CD3 con 100 unidades/ml de IL-2 o 1 ng/ml, 10 ng/ml o 100 ng/ml de IL-21. En respuesta a IL-21 , las células CD45RBhi secretaron mayores niveles de I L-2, IL-4, IL-10, IL-17, IL-18, IL-22, IFN-? y TNFa (FIG. 39A-39B). El bloqueo de la IL-21 endógena mediante la adición de 50 µg/ml o 100 µg/ml de mulL-21 RFc resultó en menores niveles de cítoquinas en estos cultivos, en comparación con los cultivos tratados con una Ig control (FIG. 40). Tomados en conjunto, estos resultados indican que IL-21 es un participante potencial potente en las respuestas inflamatorias en este modelo, y que puede obtenerse un beneficio terapéutico de los antagonistas IL-21 R en las enfermedades mediadas por Th1 , tales como la enfermedad de Crohn y la psoriasis.

EJEMPLO 12 Los ratones que carecen de IL-21R presentan una reducción en la inflamación de las vías respiratorias inducida por antígenos Este ejemplo demuestra que los ratones transgénicos que carecen del receptor IL-21 (IL-21 R -/-) presentan una respuesta significativamente reducida a la inflamación de las vías respiratorias inducida por antígenos y la hiper-respuesta de las vías respiratorias. Se inmunizaron ratones C57BL/6 IL-21 R -/- y tipo salvaje (WT +/+) (de 8-12 semanas de edad) empleando una inyección intraperítoneal de 20 µg de OVA emulsificado en 2.25 mg de alumbre (Alum Inject; Pierce) los días 0 y 14. Los días 26, 27 y 28, se atacaron las vías respiratorias con un aerosol de 5% de OVA en PBS por 30 minutos. Cuarenta y ocho horas después del último ataque con OVA, se evaluaron los cambios en la resistencia pulmonar de los animales y la respuesta dinámica a metacolina aerosolizada. La sensibilización y el ataque con OVA resultaron en un incremento significativo en la hiper-respuesta de las vías respiratorias después de aplicar metacolina en aerosol en ratones WT +/+, en comparación con los ratones WT +/+ sensibilizados con OVA y atacados con PBS (FIG. 23). Sin embargo, no hubo diferencia en la hiper-respuesta de las vías respiratorias en ratones IL-21 R -/- sensibilizados con OVA/atacados con OVA ante la metacolina aerosolizada para el rango de dosificación completo, en comparación con los ratones WT +/+ sensibilizados con OVA/atacados con OVA (FIG. 23). Luego se sacrificaron los animales y se recolectó sangre y fluido de lavado broncoalveolar (BALF) para analizar la inflamación pulmonar, los niveles de cítoquina y las titulaciones de IgE total y anti-OVA. Se recolectó BALF a partir del lavado broncoalveolar con 3x 0.7 ml de PBS. La cantidad de células totales en BALF aumentó aproximadamente 36 veces después del ataque con OVA en ratones WT +/+, en comparación con los controles atacados con PBS, en contraste con un incremento de 3 veces respecto de los controles atacados con PBS en animales IL-21 R -/- (FIG. 24A). Además, la cantidad total de células en BALF de los ratones IL-21 R -/- sensibilizados con OVA atacados con OVA fue significativamente menor que aquella observada en los animales WT +/+ sensibilizados con OVA/atacados con OVA. No hubo diferencia en la cantidad total de células en BALF entre los ratones IL-21 R -/- y WT +/+ sensibilizados con OVA/atacados con PBS (FIG. 24A). El ataque con OVA resultó en un incremento significativo en los eosinófilos en BALF en ratones WT +/+ e IL-21 R -/-, en comparación con los controles sensibilizados del mismo modo pero atacados con PBS. Las cantidades absolutas de eosinófilos en BALF estuvieron significativamente atenuadas en los animales IL-21 -/-, en comparación con aquellas observadas en los animales WT +/+ sensibilizados con OVA/atacados con OVA (FIG. 24B). La eliminación de IL-21 R también atenuó significativamente el incremento en la cantidad de linfocitos (FIG. 24C) y neutrófilos (FIG. 24D) en BALF después del ataque con OVA. Los niveles de IL-5, IL-13 y TNFa en BALF aumentaron significativamente en los ratones WT +/+ sensibilizados con OVA/atacados con OVA, en comparación con los controles atacados con PBS (FIGS. 25 y 26). En contraste, la sensibilización y el ataque con OVA indujeron un incremento muy modesto en los niveles de estas citoquinas en BALF de ratones IL-21 R -/-, en comparación con los controles atacados con PBS, los niveles fueron significativamente menores que aquellos observados en los animales WT sensibilizados con OVA/atacados con OVA (FIGS. 25 y 26). Se cuantificaron los niveles de TNFa e IL-5 en BALF usando un conjunto de elementos que comprendía un conjunto de esferas citométricas (Th1/Th2 de ratón, Cytokine CBA, BD Biosciences, San Diego, CA). Se cuantificaron los niveles de IL-13 en BALF por ELISA. Como se muestra en las FIGS. 27A-27B, los niveles de IgE total e IgE anti-OVA después de la sensibilización con OVA/el ataque con OVA en IL-21 R -/- fueron mucho menores en comparación con aquellos en los ratones WT+/+ tratados en forma idéntica. Sin embargo, no hubo diferencias significativas en los ratones IL-21 R -/- y WT +/+ cuando se compararon los niveles de IgE totales o específicas para OVA después de un ataque con PBS. Estos resultados sugieren que la inhibición de las respuestas mediadas por IL-21 puede proporcionar un valor terapéutico en el tratamiento de la alergia y el asma.

EJEMPLO 13 La inhibición de la actividad de IL-21/IL-21R mejora la severidad de los síntomas en un modelo de lupus MRL-FASl r Este ejemplo demuestra que los antagonistas de IL-21R, por ejemplo, las proteínas de fusión IL-21 R-lg (proteína IL-21 RFc murina o "muIL- 21 RFc") o los anticuerpos anti-IL-21 R, mejoran síntomas semejantes a los del lupus eritematoso sistémico (SLE) en un modelo en ratón MRL-Fas/pr. Se usaron ratones MRL-Fas/p? macho para todos los experimentos. Estos ratones presentaban múltiples síntomas similares a los del SLE humano, incluyendo ADN de autoanticuerpos, la destrucción de múltiples tejidos y glomerulonefritis de complejos inmunes. Se inyectaron 400 µg de MulL-21 RFc o un isotipo control por vía ¡ntraperitoneal tres veces por semana, comenzando a las 10 semanas de edad, y se analizó la progresión de la enfermedad en los ratones en forma semanal. A las 15 semanas, se sacrificaron los ratones para continuar el análisis. Cada grupo de tratamiento contenía 10 ratones. El tratamiento con MulL-21 RFc redujo significativamente los niveles de autoanticuerpos anti-dsADN en circulación (FIG. 28A-28D) e IgG total en suero (FIG. 29A-29D) en ratones MRL-Fas'pr, determinados por ELISA. Brevemente, para medir los autoanticuerpos anti-dsADN, se aplicó dsADN sobre una placa de titulación, se agregaron anticuerpos en suero y se detectaron los anticuerpos usando un anticuerpo secundario anti-ratón. Para medir la IgG total, se adhirió suero a una placa de titulación, a lo que siguió una detección usando un anticuerpo secundario anti-ratón. El tratamiento con MulL-21 RFc también redujo la acumulación de depósitos de IgG en riñones de ratones MRL-Fas,p?. A las 15 semanas, se sacrificaron los ratones y se colorearon secciones de riñon congeladas (5 µm) con IgG-FITC de cabra anti-ratón. Se calificó la intensidad de la fluorescencia en una escala de entre O y 3. En la FIG. 30 se muestra la intensidad total de la fluorescencia medida en secciones de riñon de ratones tratados y de control. Estos resultados demuestran que el tratamiento terapéutico con un antagonista de IL-21 R puede aliviar los síntomas semejantes a los del lupus.

EJEMPLO 14 Modelo animal de lupus y GVHD: Ausencia de formación de autoanticuerpos y depósito de IgG en los riñones de ratones con deficiencia de IL-21R injertados con células de bazo B6 bm12 Se realizaron experimentos para investigar la respuesta de ratones con knockout (KO) de IL-21 R en el modelo de enfermedad crónica de injerto versus huésped (GVHD) de lupus eritematoso sistémíco (SLE) (Chen et al. (1998) J. Inmunol. 161 :5880-85). Este modelo comprende aspectos representativos de SLE y GVHD. Los animales usados fueron ratones B6.C-H2<bm12>/KhEG (bm12), Jackson Labs (células de bazo); IL-21 R-2 KO, Charles River Labs (CRL); ratones tipo salvaje C57/B6 (WT), Charles River Labs; y ratones tipo salvaje C57/B6, Taconic (TAC) (Germantown, NY). Se sacrificaron los ratones donantes apropiados el día de la inducción de la enfermedad por exposición a CO2. Se cosecharon los bazos y se los molió. Se usaron las células rojas de la sangre usando NH4CI 0.16 M: TrisCI 0.17 M (9:1) en 1 ml de solución de lisis por bazo, por un total de 5 minutos con mezcla ocasional. Se contaron las suspensiones celulares usando azul tripán, y se ajustó hasta una concentración final de 2x108 células/ml usando solución salina estéril amortiguada con fosfato. Luego se inyectaron 0.5 ml de la suspensión celular apropiada por vía intraperitoneal en el ratón receptor apropiado (como se indica en la Tabla 2 a continuación). Luego se monítorearon las proteínas en la orina y la pérdida/ganancia de peso en los ratones receptores en los ratones receptores en forma semanal. Cada dos semanas, se exsanguinó cada ratón a través del seno retro-orbital, y se almacenó el suero para realizar análisis adicionales. Se efectuaron ensayos de ELISA en todo el suero recolectado en cada uno de los puntos de tiempo (como se describe en Zouali y Stollar (1986) J. Inmunol. Methods 90:105-10) para detectar los autoanticuerpos contra ADN de cadena doble. 12 semanas después de inducir la enfermedad, se sacrificó la mitad de los animales de cada grupo y se recolectaron los bazos y los riñones. Se preservó el riñon izquierdo (intacto) en formalina no amortiguada al 10% y se coloreó con H&E. Se realizó la calificación de la coloración de acuerdo con el método de Chen et al., supra. Los parámetros de calificación incluyeron: infiltración linfocítica perivascular, infiltración linfocítica intersticial, hipercelularidad y engrosamiento de la membrana basal. El riñon derecho se cortó en forma longitudinal y se embebió cada mitad, con el lado cortado hacia abajo, en un cassette de bloque de tejido. Se analizó el riñon derecho usando técnicas inmunohistoquímicas para determinar la presencia de depósitos inmunes, específicamente IgG, IgM y C3.

CUADRO 2 Se muestran los resultados de estos experimentos en la FIG. 41A-41 B. No se detectaron anti-dsADN autoanticuerpos en ninguno de los ratones con knockout de IL-21 R en ningún punto de tiempo (FIG. 41 A). Además, en la FIG. 41 B se ilustra que no se observan depósitos de IgG en los riñones de ratones con deficiencia de IL-21 R veinte semanas después de inducir la enfermedad, en comparación con los ratones con GVHD. Por consiguiente, los ratones con deficiencia de IL-21 R no generan autoanticuerpos en el modelo de GVHD-SLE ni forman depósitos de IgG en los riñones. Por consiguiente, el tratamiento de los individuos con antagonistas de IL-21/IL-21 R puede proporcionar una terapia efectiva para el SLE y la GVHD. Los contenidos de todas las referencias, las solicitudes de patentes pendientes (incluyendo 60/599086, presentada el 5 de Agosto de 2004 y 60/639176, presentada el 23 de Diciembre de 2004), las solicitudes de patentes publicadas (incluyendo 2003/0108549, presentada el 4 de Octubre de 2002), y las patentes publicadas citadas en esta solicitud se incorporan en la presente documentación a modo de referencia.

Equivalentes Aquellos entrenados en la técnica reconocerán o podrán evaluar, sin usar más que experimentación de rutina, muchos equivalentes de las realizaciones específicas de la invención descriptas en la presente documentación. Estos equivalentes están abarcados por las siguientes reivindicaciones.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. El uso de un antagonista de IL-21/IL-21 R seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-IL-21 R, un anticuerpo anti-IL-21 , una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 R, una porción de unión a antígeno de un anticuerpo antí-IL-21 y un fragmento soluble de IL-21 R, en la fabricación de un medicamento útil para tratar, mejorar o prevenir un trastorno autoinmune o inflamatorio en un sujeto mamífero.

2. El uso de un antagonista de IL-21/IL-21 R seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-IL-21 R, un anticuerpo anti-IL-21 , una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 R, una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 y un fragmento soluble de IL-21 R, en la fabricación de un medicamento útil para tratar, mejorar o prevenir un trastorno seleccionado del grupo que consiste en un trastorno artrítico, un trastorno atópico, un trastorno respiratorio, un trastorno inflamatorio cutáneo, un trastorno inflamatorio intestinal, un trastorno fibrótico, lupus eritematoso sistémico, rechazo de transplantes/injertos y un trastorno asociado con el rechazo de transplantes/injertos, en un sujeto mamífero.

3. El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde el anticuerpo anti-IL-21 R es capaz de unirse a un IL-21 R compuesto por una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica a la secuencia detallada en SEQ ID N° 2, y donde el IL-21 R es capaz de unirse a un IL-21.

4. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno artrítico se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, osteoartritis, artritis psoriática y espondilitis anquilosante.

5. El uso como el que se reclama en la reivindicación 4, en donde el trastorno artrítico es artritis reumatoide.

6. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno respiratorio es asma o enfermedad obstructiva pulmonar crónica.

7. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno fibrótico se selecciona del grupo que consiste en fibrosis de un órgano interno, un trastorno fibrótico dérmico, una condición fibrótica ocular, esclerosis sistémica, polimiositis, dermatomiositis, fascitis eosinofílica, síndrome de Raynaud, glomerulonefritis y poliposis nasal.

8. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno inflamatorio intestinal se selecciona del grupo que consiste en enfermedad intestinal inflamatoria, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn.

9. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno inflamatorio cutáneo es psoriasis.

10. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno atópico se selecciona del grupo que consiste en asma alérgico, dermatitis atópica, urticaria, eccema, rinitis alérgica y enterogastritis alérgica.

11. El uso como el que se reclama en la reivindicación 10, en donde el trastorno atópico es asma alérgico.

12. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno asociado con el rechazo de transplantes/ínjertos es la enfermedad del injerto versus el huésped.

13. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es rechazo de transplantes/injertos.

14. El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es lupus eritematoso sistémico.

15. El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde el sujeto mamífero es un ser humano.

16. El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde el fragmento soluble de IL-21 R está compuesto por un dominio extracelular de IL-21 R y un fragmento de inmunoglobulina Fc.

17. El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde el dominio extracelular de IL-21 R comprende aproximadamente los aminoácidos 1-235 de SEQ ID N° 2.

18. El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde el fragmento soluble de IL-21 R está compuesto por una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica a la secuencia detallada en SEQ ID N° 29.

19. El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, donde el antagonista de IL-21/IL-21R es un anticuerpo anti-IL-21R, o una porción de unión a antigeno de éste.

20. El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde el antagonista de IL-21/IL-21 R es un anticuerpo anti-IL-21 , o una porción de unión a antígeno de éste.

21. Una proteína de fusión que está compuesta por un dominio extracelular de un IL-21 R y un fragmento de inmunoglobulina Fc, donde el IL-21 R tiene una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica a la secuencia detallada en SEQ ID N° 2, y donde la proteína de fusión es capaz de unirse a IL-21.

22. La proteína de fusión de la reivindicación 21 , que está compuesta por una secuencia de aminoácidos al menos 90% idéntica a la secuencia detallada en SEQ ID N° 29.

23. Un vector que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión de la reivindicación 21.

24. Una célula huésped recombinante que comprende el vector de la reivindicación 23.

25. Un método para producir una proteína de fusión que comprende: (a) cultivar la célula huésped recombínante de la reivindicación 24 bajo condiciones que permiten la expresión de la proteína de fusión; y (b) recuperar la proteína de fusión.

26. Una composición farmacéutica que comprende un antagonista de IL-21/IL-21 R y un vehículo aceptable para el uso farmacéutico.

27. La composición farmacéutica de la reivindicación 26, donde el antagonista de IL-21/IL-21 R se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo anti-IL-21 R, un anticuerpo anti-IL-21 , una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 R, una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 y un fragmento soluble de IL-21 R.

28. La composición farmacéutica de la reivindicación 27, donde el fragmento soluble de IL-21 R está compuesto por un dominio extracelular de un IL-21 R y un fragmento de inmunoglobulina Fc.

29. El uso de un antagonista de IL-21/IL-21 R seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-IL-21 R, un anticuerpo anti-IL-21 , una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 R, una porción de unión a antígeno de un anticuerpo anti-IL-21 y un fragmento soluble de IL-21 R en la fabricación de un medicamento útil para tratar, prevenir o mejorar el rechazo de transplantes/injertos en un mamífero receptor de un transplante/injerto.

30. El uso como el que se reclama en la reivindicación 29, en donde el síntoma del rechazo de transplantes/ínjertos se selecciona del grupo que consiste en inflamación, función reducida de los órganos, señales de rechazo en biopsia y fibrosis.