MX2007001339A - Metodo para mejorar la biodisponibilidad de un inhibidor de renina. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona un metodo para mejorar la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, de preferencia de un derivado de amida del acido (-amino-(-hidroxi-(-aril-alcanoico, cuyo metodo comprende co-administrar a un mamifero, en especial a un ser humano, que necesite el tratamiento, una combinacion de un inhibidor de renina, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de proteinas de efusion.

Description

MÉTODOS PARA MEJORAR LA BIODISPONIBILIDAD DE UN INHIBIDOR DE RENIÑA Descripción de la Invención La vía oral es con frecuencia la vía más conveniente para la administración de fármacos, pero desafortunadamente muchos agentes terapéuticos no son oralmente activos debido a su pobre biodisponibilidad. La biodisponibilidad de muchos agentes terapéuticos se puede reducir por la acción de las denominadas proteínas de "bomba de efusión", las cuales expulsan activamente sustancias extrañas desde la célula para dar lugar, por ejemplo, al efecto de resistencia a múltiples fármacos. Estas proteínas de efusión de fármacos comprenden principalmente los transportadores tipo MDR (proteína de resistencia a múltiples fármacos) y MRP (proteína asociada con resistencia a múltiples fármacos). Algunas de las proteínas de efusión mejor estudiadas incluyen la glicoproteína-P (Pgp ó MDR1 ) y MRP2. Aunque las proteínas de efusión localizadas en membrana son bien conocidas como factores que contribuyen al síndrome de resistencia a múltiples fármacos adquirida que se presenta en muchos pacientes de cáncer después de quimioterapia repetida, sólo recientemente se ha mostrado que, por ejemplo la MDR1 , también se encuentra en el tejido normal, tal como en el intestino delgado, colon, hígado, y en células endoteliales de la barrera de sangre del cerebro. La presencia de estas proteínas de efusión en el tracto gastrointestinal (G l), en especial en el intestino delgado y colon, puede contribuir a la pobre biodisponibilidad de muchos fármacos de productos naturales (incluyendo los agentes contra el cáncer vinblastina y doxorrubicina). Por ejemplo, muchos agentes quimioterapéuticos dados oralmente no pueden mostrar una actividad antitumoral debido a su pobre biodisponibilidad y a su incapacidad para entrar en los tejidos gastrointestinales. Además, las proteínas de efusión presentes en los hepatocitos pueden reducir adicionalmente la biodisponibilidad de los agentes terapéuticos mediante la eliminación por la bilis (ver Faber y colaboradores, Adv. Drug Del. Rev. , 55, 107-124, 2003). Los agentes terapéuticos oralmente administrados deben superar varias barreras antes de alcanzar su sitio objetivo. El primer obstáculo importante que deben cruzar es el epitelio intestinal. Aunque los compuestos lipofílicos pueden difundirse fácilmente a través de la membrana de plasma apical, su paso subsecuente a través de la membrana basolateral y hasta la vena porta por ningún medio está garantizado. Las proteínas de bomba de efusión localizadas en la membrana apical, las cuales incluyen diferentes transportadores de fármacos de la familia del cásete de enlace de ATP (ABC), por ejemplo los transportadores ABC tales como MDR1 , MRP 1 , y MRP2, pueden impulsar a los compuestos desde adentro de la célula de regreso hacia el lumen intestinal, restringiendo su biodisponibilidad oral al impedir su absorción en la sangre. El segundo gran obstáculo que deben enfrentar es el hígado, en donde los fármacos se transportan pasivamente o mediante procesos de transporte saturables desde la sangre portal a través de las membranas de plasma de hepatocitos (senoidales) y las membranas de bilis (canaliculares) hasta la bilis. Las proteínas de bomba de efusión localizadas en las membranas canaliculares, que nuevamente incluyen diferentes transportadores de fármacos de la familia ABC, por ejemplo los transportadores ABC tales como MDR1 , la proteína de resistencia del cáncer de mama (BCRP), y MRP2, pueden impulsar a los compuestos de fármaco desde adentro de los hepatocitos hacia la bilis, restringiendo su biodisponibilidad oral mediante la promoción de la eliminación biliar. Por ejemplo, se ha demostrado que la MDR1 transporta la mayoría de los inhibidores de proteasa de VI H, y reduce su biodisponibilidad oral y la penetración en linfocitos, cerebro, testículos, y fetal, dando como resultado posiblemente mayores efectos limitantes sobre la eficacia terapéutica de estos fármacos. Por consiguiente, un planteamiento para mejorar la biodisponibilidad puede ser co-administrar un inhibidor de las proteínas de efusión, es decir, un compuesto que inhiba la función de las proteínas de efusión, con una sustancia de fármaco. En otras palabras, cuando se co-administra un inhibidor de proteínas de efusión con un agente terapéutico que también es un sustrato para ese sistema de efusión específico, se puede mejorar la biodisponibilidad oral y/o concentraciones farmacológicas activas en el sitio objetivo del agente terapéutico, mediante la inhibición del mecanismo de efusión desde adentro de la célula de regreso hacia el lumen intestinal y/o mediante la inhibición de la secreción hacia la bilis. Sin embargo, las proteínas de efusión exhiben una baja especificidad de sustrato, y transportan muchas clases de moléculas. La especificidad no es rigurosamente entendida, y no hay manera de predecir, a partir de la estructura molecular de una sustancia de fármaco, si ese fármaco específico será un sustrato para cierta proteína transportadora. Por consiguiente, en general no es posible predecir si un fármaco o compuesto particular estará sujeto a la acción de bombeo de efusión descrita anteriormente. También, si un fármaco particular tiene una baja biodisponibilidad oral, en general no es posible predecir si la baja biodisponibilidad es causada, total o parcialmente, por las proteínas de efusión descritas anteriormente, ni se puede predecir si aumentará la baja biodisponibilidad por la co-administración de un inhibidor de proteínas de efusión (ver Chan y colaboradores, Eur. J. Pharmaceut. Sci. , 21 , 25-51 , 2004). De una manera sorprendente, ahora se ha encontrado que muchos inhibidores de renina, por ejemplo los que se dan a conocer en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,559, 1 1 1 ; 6, 1 97,959; y 6,376,672, cuyo contenido total se incorpora a la presente como referencia, son sustratos para un sistema de efusión prominente, y son activamente transportados por los miembros de la familia ABC, en particular MDR1 y MRP2. Por consiguiente, la biodisponibilidad de estos inhibidores de renina se puede mejorar mediante la inhibición del mecanismo de efusión involucrado, en particular mediante la inhibición del transporte de fármacos por parte de MDR1 y/o MRP2. La Figura 1 muestra el efecto del inhibidor de reniña SPP1 00 sobre la actividad de la ATPasa en las vesículas de membrana que expresan altos niveles de MDR1 . La Figura 2 muestra el transporte bidireccional del inhibidor de renina SPP 100 a través de monocapas celulares Caco-2 en la dirección de apical (AP) a basolateral (BL) y de basolateral a apical. La Figura 3 muestra el efecto del inhibidor de MDR1 , PSC833, sobre la permeabilidad del inhibidor de renina SPP1 00 a través de las monocapas celulares Caco-2. La Figura 4 muestra el efecto del inhibidor de MDR1 , PSC833, sobre la concentración del inhibidor de renina SPP 100 en plasma y sobre la eliminación biliar en ratas durante una infusión intravenosa constante. La Figura 5 muestra los valores del área debajo de la curva (AUC) de dosis normalizada del inhibidor de renina SPP100 en el plasma de ratas después de una sola aplicación oral en ausencia y en la presencia de PSC833. Los inhibidores de renina a los que se aplica la presente invención son cualquiera de aquéllos que tienen una actividad inhibidora de renina in vivo, y, por consiguiente, tienen utilidad farmacéutica, por ejemplo, como agentes terapéuticos para el tratamiento de hipertensión, insuficiencia cardíaca congestiva, hipertrofia cardíaca, fibrosis cardíaca, cardiomiopatía posterior a infarto, complicaciones resultantes de diabetes, tales como nefropatía, vasculopatía y neuropatía, enfermedades de los vasos coronarios, restenosis en seguida de angioplastía, presión intra-ocular elevada, glaucoma, crecimiento vascular anormal, hiperaldosteronismo, estados de ansiedad y desórdenes cognoscitivos. En particular, la presente invención se refiere a los derivados de amida de ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, como se dan a conocer en la Patente Norteamérica Número 5,559, 1 1 1 . De conformidad con lo anterior, la presente invención proporciona un método para mejorar la biodisponibilidad, de preferencia la biodisponibilidad oral, de un inhibidor de renina, cuyo método comprende co-administrar a un mam ífero, en especial a un ser humano, que necesite dicho tratamiento, una combinación de un inhibidor de renina y un inhibidor de proteínas de efusión. El inhibidor de proteínas de efusión se administra en una cantidad tal que se mejore la biodisponibilidad de un inhibidor de renina en comparación con lo que sería la biodisponibilidad en ausencia del inhibidor de proteínas de efusión (por ejemplo, el 1 0 por ciento cuando se administre oralmente a seres humanos). Un inhibidor de proteínas de efusión y un inhibidor de renina de preferencia se co-administran cada uno en una cantidad tal que la combinación tenga un efecto terapéutico deseado, por ejemplo un efecto anti-hipertensivo. En particular, la presente invención proporciona un método para mejorar la biodisponibilidad de un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, cuyo método comprende co-administrar a un mam ífero, en especial a un ser humano, que necesite dicho tratamiento, una combinación de un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de proteínas de efusión. El término "co-administración" de una combinación de un inhibidor de renina, en particular de un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, y un inhibidor de proteínas de efusión, significa que los dos componentes se pueden administrar juntos como una composición farmacéutica o como parte de la misma forma de dosificación unitaria. La co-administración también incluye administrar un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, y un inhibidor de proteínas de efusión por separado, pero como parte del mismo régimen terapéutico. Los dos componentes, si se administran por separado, no necesariamente se tienen que administrar esencialmente al mismo tiempo, aunque pueden hacerlo si así se desea. Por consiguiente, la co-administración incluye, por ejemplo, administrar un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, más un inhibidor de proteínas de efusión, como dosificaciones o formas de dosificación separadas, pero al mismo tiempo. La co-administración también incluye la administración separada en diferentes tiempos y en cualquier orden. Un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, de la presente invención, se puede emplear en la forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, en una forma anhidra, o como un hidrato o un solvato del mismo. Todas estas formas son útiles dentro del alcance de la presente invención. El término "inhibidor de proteínas de efusión", como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier compuesto, a un compuesto farmacéutico o a un excipiente, que inhiba la acción de cualquier transportador ABC, por ejemplo los que se dan a conocer en Bakos y colaboradores, Mol. Pharmacol. , 57, 760-768 (2002), y en Maarten y colaboradores, AIDS, 16, 2295-2301 (2002). En adición, se puede observar que un inhibidor de proteínas de efusión que mejore la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, puede operar mediante uno o más de una variedad de mecanismos. Es decir, como es bien conocido en la materia, puede ser un inhibidor competitivo o no competitivo, o puede operar mediante un mecanismo mixto. El que este inhibidor pueda afectar a la efusión de cierto inhibidor de renina depende, entre otras cosas, de las afinidades relativas del inhibidor de renina y del inhibidor de proteínas de efusión; de las solubilidades acuosas relativas del inhibidor de renina y del inhibidor de proteínas de efusión, debido a que esto afectaría a la concentración de los dos en la bomba de efusión in vivo cuando estén en competición; de la solubilidad acuosa absoluta del inhibidor de proteínas de efusión, debido a que debe alcanzar una concentración suficiente en la bomba de efusión in vivo para inhibir efectivamente la efusión; y de la dosis del inhibidor de proteínas de efusión. Para el propósito de esta invención, un inhibidor de proteínas de efusión es cualquier compuesto que mejore la exposición sistémica de un inhibidor de renina, cuando el inhibidor de renina se dosifique oralmente o por cualquier otra vía , y que sea un sustrato y/o un inhibidor de una o más de las proteínas de efusión de fármacos / actividades de las células epiteliales intestinales o de los hepatocitos. Como se describe anteriormente en la presente, la presente invención proporciona un método para mejorar la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, cuyo método comprende co-administrar una combinación de un inhibidor de renina y un inhibidor de proteínas de efusión. De preferencia, el inhibidor de proteínas de efusión de la presente invención es un inhibidor de MDR 1 , por ejemplo PSC833. Preferiblemente, se co-administra un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico de la presente invención, que tiene la fórmula: en donde R< es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alq uilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R3 y R son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; se co-administra con un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833. De manera más preferible, un derivado del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico de la presente invención tiene la fórmula (I), en donde R, es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R4 son isopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; se co-administra con un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833. De manera más preferible, un derivado del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico de la presente invención el cual es hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S)4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico, también conocido como SPP100, se co-administra con un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833. Como se describe en la presente en lo anterior, se pueden coadministrar un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoíco, y un inhibidor de proteínas de efusión, como una composición farmacéutica. Los componentes se pueden administrar juntos en cualquier forma de dosificación convencional, usualmente también junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Para la administración oral, la composición farmacéutica que comprende un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, y un inhibidor de proteínas de efusión, puede tomar la forma de soluciones, suspensiones, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, microemulsiones, paquetes de dosis unitaria, y similares. Se prefieren las tabletas y las cápsulas de gelatina que comprenden al ingrediente activo junto con: a) diluyentes, por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa, y/o glicina; b) lubricantes, por ejemplo sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o de calcio, y/o polietilenglicol; para tabletas también c) aglutinantes, por ejemplo silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio, y/o polivinilpirrolidona; si se desea d) desintegrantes, por ejemplo almidones, agar, ácido alg ínico o su sal sódica, o mezclas efervescentes; y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes, y edulcorantes. Las composiciones inyectables de preferencia son soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y los supositorios se preparan de manera conveniente a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Estas composiciones se pueden esterilizar y/o pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservadores, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y/o reguladores del pH. En adición, también pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas. Estas composiciones se preparan de acuerdo con los métodos convencionales de mezcla, granulación o recubrimiento, respectivamente, y contienen de aproximadamente el 0.1 al 75 por ciento, de preferencia de aproximadamente el 1 al 50 por ciento del ingrediente activo. De manera más específica, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de renina, de preferencia un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, en combinación con un inhibidor de proteínas de efusión, estando este inhibidor de proteínas de efusión presente en una cantidad tal que, en seguida de la administración, se mejora la biodisponibilidad del inhibidor de renina por cuando menos el 5 por ciento.

De preferencia, una composición farmacéutica de la presente invención comprende un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833. De una manera preferible, una composición farmacéutica de la presente invención comprende un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico de la fórmula: en donde Ri es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alq uilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R3 y R4 son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en combinación con un inhibidor de MDR 1 , por ejemplo PSC833. De manera más preferible, una composición farmacéutica de la presente invención comprende un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico de la fórmula (I), en donde R< es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R4 son isopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en combinación con un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833. Más preferiblemente, una composición farmacéutica de la presente invención comprende hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico en combinación con un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833. De preferencia, la biodisponibilidad del inhibidor de renina, en particular del derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, por ejemplo SPP1 00, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, se mejora por cuando menos el 5 por ciento. La biodisponibilidad de un fármaco se puede evaluar como es conocido en la técnica, mediante la medición de la AUC, en donde la AUC es el área debajo de la curva (AUC) que gráfica la concentración en suero o plasma de un fármaco a lo largo de la ordenada (eje-Y), contra el tiempo a lo largo de la abscisa (eje-X). En general, los valores para el área debajo de la curva representan un número de valores tomados de todos los sujetos en una población de prueba y, por consiguiente, son valores medios promediados sobre toda la población de prueba. La co-administración de un inhibidor de renina y un inhibidor de proteínas de efusión también puede aumentar la Cmax en relación con la dosificación del inhibidor de renina en ausencia de un inhibidor de proteínas de efusión, y esto se proporciona como un aspecto adicional de la invención. La Cmax es también bien entendida en este campo como una abreviatura para la máxima concentración de fármaco en el suero o plasma de un sujeto de prueba. Debido a que la presente invención tiene un aspecto que se relaciona con el tratamiento con una combinación de compuestos que se pueden co-administrar por separado, la invención también se refiere a la combinación de composiciones farmacéuticas separadas en una forma de estuche. El estuche comprende dos composiciones farmacéuticas separadas: ( 1 ) una composición que comprende un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, más un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable; y (2) una composición que comprende un inhibidor de proteínas de efusión, más un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Las cantidades de (1 ) y (2) son tales que, cuando se co-administran por separado, se mejora la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, por cuando menos el 5 por ciento. El estuche comprende un recipiente para contener las composiciones separadas, tal como un frasco dividido o un paquete de lámina dividido, en donde cada compartimiento contiene una pluralidad de formas de dosificación (por ejemplo, tabletas) que comprenden (1 ) ó (2). De manera alternativa, en lugar de separar las formas de dosificación que contienen los ingredientes activos, el estuche puede contener compartimientos separados, cada uno de los cuales contenga una dosificación entera, la cual a su vez comprenda formas de dosificación separadas. Un ejemplo de este tipo de estuche es un paquete de ampolla en donde cada ampolla individual contenga dos (o más) tabletas, comprendiendo una (o más) tableta(s) una composición farmacéutica ( 1 ), y comprendiendo la segunda (o más) tableta(s) una composición farmacéutica (2). Típicamente, el estuche comprende instrucciones para la administración de los componentes separados. La forma de estuche es particular-mente conveniente cuando los componentes separados se administran de preferencia en formas de dosificación diferentes (por ejemplo, oral y parenteral), se administran a intervalos de dosificación diferentes, o cuando el médico que prescriba desee la titulación de los componentes individuales de la combinación. En el caso de la presente invención, por consiguiente, un estuche comprende: ( 1 ) una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, por ejemplo SPP1 00, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo o diluyente farmacéutica-mente aceptable, en una primera forma de dosificación; (2) una composición que comprende un inhibidor de proteínas de efusión en una cantidad tal que, en seguida de su administración, se mejora la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, en particular un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, por ejemplo SPP100, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por cuando menos el 5 por ciento, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, en una segunda forma de dosificación; y (3) un recipiente para contener a las primera y segunda formas de dosificación. Finalmente, la presente invención se refiere al uso de un inhibidor de proteínas de efusión, en particular un inhibidor de MDR1 , por ejemplo PSC833, para la fabricación de un medicamento para mejorar ia biodisponibilidad, de preferencia la biodisponibilidad oral, de un inhibidor de renina, de preferencia un derivado de amida del ácido d- amino-?-hidroxí-?-aril-alcanoico, por ejemplo SPP100, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las proteínas de efusión involucradas en la efusión de fármaco de una sustancia de fármaco se pueden identificar, y los parámetros cinéticos correspondientes se pueden determinar, es decir, Constante de Michaelis-Menten y Máximo Transporte de Fármaco (Km y Jmax), empleando métodos conocidos en la materia, por ejemplo mediante un ensayo de ATPasa usando vesículas de membrana Sf9 (Spodoptera fruigiperda) que expresen altos niveles del transportador ABC seleccionado. En este ensayo, los transportadores ABC eliminan los sustratos hacia afuera de las células mediante el empleo de hidrólisis de ATP como una fuente de energ ía. La hidrólisis de ATP produce fosfato inorgánico (Pi), el cual se puede detectar mediante una simple reacción colorimétrica. La cantidad de fosfato inorgánico liberado por el transportador es proporcional a la actividad del transportador. Las preparaciones de membrana que contienen transportadores ABC muestran una actividad de ATPasa de la línea base, mientras que los inhibidores inhiben la actividad de ATPasa de la línea base, y/o la actividad de ATPasa medida en la presencia de un agente estimulante. Se pueden llevar a cabo los estudios tanto de activación como de inhibición. Como se ilustra en la presente, en el Ejemplo 1 (Figura 1 ), SPP100 aumenta la actividad de ATPasa en las vesículas de membrana que expresan altos niveles de MDR1 con un valor Km de aproximadamente 3 µM, sugiriendo que el sistema de efusión involucrado en el transporte de SPP100 es posiblemente MDR1 .

De manera alternativa, se puede determinar y aproximar la afinidad de una sustancia de fármaco con el transportador in vitro mediante un ensayo de células Caco-2, como se describe, por ejemplo, en Camenisch y colaboradores, Pharm. Act. Helv. , 71 , 309-327 (1 996), o como se ilustra en la presente, en los Ejemplos. La identificación de la proteína transportadora y la eficacia de un compuesto para inhibir el sistema de efusión involucrado, también se pueden determinar en el ensayo de células Caco-2. Por ejemplo, SPP100 se identifica como un compuesto de permeabilidad baja a moderada (permeabilidad intrínseca <80 por ciento), siendo adicionalmente un sustrato para un sistema de efusión prominente (Figura 2). Sin embargo, en la presencia del inhibidor de MDR1 , PSC833, la permeabilidad de SPP1 00 aumenta de una manera significativa, es decir, PSC833 inhibe la efusión de SPP100 con un valor IC50 de aproximadamente 0.1 µM (Figura 3). El efecto in situ de la co-administración de un inhibidor de proteínas de efusión, por ejemplo un inhibidor de MDR 1 , sobre la excreción biliar de un inhibidor de renina, se puede investigar mediante una comparación de la cantidad del compuesto excretado hacia la bilis, en la presencia y en ausencia de un inhibidor de proteínas de efusión. Por ejemplo, en la presencia de PSC833, la eliminación biliar de SPP1 00 se redujo por el 97 por ciento, comparándose con el grupo de control (Figura 4). De una manera similar, se puede investigar el efecto in vivo de la co-administración de un inhibidor de proteínas de efusión, por ejemplo un inhibidor de MDR1 , sobre la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, mediante la comparación de los parámetros farmacocinéticos, Cma - y AUCs, en la presencia y en ausencia de un inhibidor de proteínas de efusión. Como se ilustra en la presente, en el Ejemplo 4 (Figura 5), en ratas oralmente dosificadas, La AUC (O-toitimo) con dosis normalizada de SPP1 00 aumentó en la presencia de PSC833 por aproximadamente 70 veces, comparándose con el grupo de control exclusivamente dosificado con SPP1 00. La descripción anterior describe completamente la invención, incluyendo sus modalidades preferidas. Las modificaciones y mejoras de las modalidades específicamente dadas a conocer en la presente, están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones. Sin mayor elaboración, se cree que un experto en la materia puede, utilizando la descripción anterior, utilizar la presente invención hasta su grado más completo. Por consiguiente, los Ejemplos de la presente se deben interpretar como meramente ilustrativos y no como una limitación del alcance de la presente invención de ninguna manera. Ejemplo 1 : Ensayo de ATPasa. Se mide la efusión mediada por la MDR1 humana, la MRP1 humana, o la MRP2 humana, mediante la incubación de las vesículas de membrana purificadas en ausencia y en la presencia de un agente estimulante (Verapamil [40 µM] para MDR1 , NEM-GS [1 0 mM] para MRP1 , y Probenecid [1 mM] para MRP2), con diferentes concentraciones de una sustancia de fármaco [0.046, 0. 1 37, 0.41 , 1 .23, 3.7, 1 1 .1 , 33.3, y 1 00 µM], en un regulador de transporte a un pH de 7.4 a 37°C.

Se preparará una solución de suministro 5 mM del agente terapéutico de interés, en un solvente orgánico común, por ejemplo sulfóxido de dimetilo, etanol, metanol, y acetonitrilo, de tal manera que la adición de la solución de suministro o sus diluciones a la mezcla de ensayo produzca las concentraciones finales anteriormente mencionadas, y el solvente orgánico utilizado sea el 2 por ciento del volumen total (volumen/volumen). Todas las soluciones utilizadas en este ensayo se mantendrán a un pH de 7.4. Se utilizarán vesículas de membrana mantenidas a -80°C para los experimentos de ATPasa. La efusión mediada por el transportador se puede determinar como se describe en la literatura (Sarkadi, B. Price, E. Boucher, R. Germann, U. y Scarborough, G. , J. Biol. Chem. 1992, 267: 4854-4858). Dicho de una manera breve, la suspensión de membrana en la presencia o en ausencia de un fármaco de prueba, agente estimulante, Na3VO4 60 mM, y Glutationa 2 mM (solamente para los transportadores MRP1 y MRP2), se pasa por pipeta a una placa de 96 pozos, y se transfiere a 37°C durante 5 mins para la preincubación. La reacción de ATPasa se inicia mediante la adición de una solución de Mg-ATP 25 mM y la incubación subsecuente a 37°C (20 mins para MDR1 , 60 mins para MRP 1 , y 30 mins para MRP2). Después, se detiene la reacción de ATPasa mediante la adición de SDS (al 5 por ciento) a cada incubación. Después de la adición del reactivo de detección colorimétrica de molibdato de amonio/acetato de zinc, la placa se incuba durante 25 mins adicionales a 37°C. Después de la incubación, se mide la OD a 730 nm. Utilizando una curva estándar de fosfato previamente determinada, se puede calcular el fosfato inorgánico liberado [nmol/pozo]. Los valores OD se presentarán como promedios ± desviaciones estándares de los experimentos realizados (n = 2). Todos los análisis estadísticos se llevan a cabo utilizando Microsoft EXCEL 5.0c. Con el fin de calcular la denominada actividad de ATPasa del transportador específico (sensible a Na3VO ) para cada fármaco y concentración de fármaco ensayado, los valores de fosfato inorgánico (Pi) determinados en la presencia de Na3VO4 se tienen que sustraer de los valores de fosfato inorgánico medidos sin Na3VO . La actividad del transportador sensible a Na3VO4 en términos de fosfato inorgánico liberado/miligramo de proteína de membrana/ min, se puede determinar dividiendo los números entre la cantidad de proteína de membrana agregada a cada pozo, y el tiempo de incubación en mins (Figura 1 ). Ejemplo 2: Ensayo de células Caco-2. Se utilizan monocapas celulares Caco-2 sobre filtros de PET durante 21 a 25 días, para los experimentos de transporte. El flujo de los compuestos a través de las monocapas celulares Caco-2 cultivadas sobre filtros de PET, así como a través de los filtros de PET solos sin células Caco-2, se determina como sigue: Antes del experimento de transporte, el medio de cultivo en el compartimiento de aceptor (0.2 ml para el lado apical y 1 .0 ml para los lados basolaterales) es reemplazado con solución aceptora (HBSS, cuando sea pertinente conteniendo el inhibidor de interés) previamente incubada a 37°C. Para iniciar el experimento, el medio en el compartimiento de donador (0.35 ml para el lado apical y 1 .1 5 ml para los lados basolaterales) es reemplazado con solución donadora (compuesto en HBSS, cuando sea pertinente conteniendo el inhibidor de interés) previamente incubada a 37°C. Se eliminan alícuotas de 1 50 microlitros del lado donador y aceptor después de aproximadamente 1 y 1 20 mins. Los experimentos de transporte en ambas direcciones apical a basolateral y basolateral a apical, se llevan a cabo por triplicado a 37°C en una incubadora sin agitación. Lo adecuado de las células Caco-2 para los experimentos de transporte se examina midiendo la permeabilidad de [3H]-manitol a <0.1 µM y [3H]-propranolol a <0.1 µM desde los lados apical a basolateral durante 1 20 mins en un total de 6 monocapas celulares representativas (3 para cada compuesto) dentro del mismo lote de células. Las muestras radioactivas se analizan mediante conteo de cintilación de líquidos. Todas las demás muestras no radiomarcadas se mantienen congeladas a -20°C hasta el análisis mediante cromatografía de líquidos / espectrometría de masas en fila (LC-MS/MS). Los valores de transporte de los compuestos probados se determinan empleando la siguiente ecuación (Artursson y colaboradores, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1 75: 880-885, 1 991 ): P rapo - — Q ?t - A C en donde Papp (cm/min) es el coeficiente de permeabilidad aparente, ?Q es la cantidad del compuesto que se encuentra en el compartimiento de aceptor en el tiempo t, ?t (min) es el período de tiempo de incubación, Co (µg/ml) es la concentración inicial del compuesto en el compartimiento del donador, y A (cm2) es el área superficial de la membrana. Para las muestras marcadas, el límite de cuantificación (LOQ) se toma como el valor de concentración de muestra más bajo obtenido a partir de la escala radioactiva, que es significativamente más alto que el valor de control medido, y para el cual el error estándar de la medición es menor que el 20 por ciento. Bajo las condiciones de este estudio, el límite de cuantificación de la radioactividad absoluta es de 2 dpm para SPP100 marcado con [14C], correspondiente a 12 nmol/l. Los valores Pa pp se presentan como promedios ± desviaciones estándares de los experimentos de transporte realizados (n = 3). El significado estadístico en las diferencias entre cualesquiera dos conjuntos de datos dados, se examina mediante la prueba-f. El nivel de probabilidad para la asignación de significado de la diferencia es p < 0.025. Todos los análisis estadísticos se llevaron a cabo utilizando Microsoft EXCEL 5.0c. Para la concentración de 1 µM de SPP 100 dentro de un período de tiempo de 120 mins, es detectable un transporte apical a basolateral de aproximadamente 0.2»10"5 cm/min. Por otra parte, el transporte basolateral a apical ocurrió con un valor de permeabilidad de aproximadamente 10*1 0"5 cm/min, el cual es significativamente más alto que el transporte apical a basolateral. Para la concentración de 1 , 5, 10, y 50 µM de SPP1 00, se observa un aumento gradual del transporte apical a basolateral, aproximándose a un valor de permeabilidad en planicie de aproximadamente 7*10"5 cm/min a 1 0 µM . Por otra parte, el transporte basolateral a apical no cambia de una manera significativa con concentraciones crecientes. Los valores de recuperación para el transporte por Caco-2 de SPP 100 (1 , 5, 10, y 50 µM) son en general muy altos (< 1 00 por ciento), indicando que SPP100 no se enlaza con el soporte del filtro o con el medio ambiente de incubación plástico. El flujo apical a basolateral para el marcador paracelular Manitol y el marcador transcelular Propranolol, siempre está debajo de los valores Papp umbrales de 3»1 0"5 cm/min, y de 90»1 0"5 cm/min, respectivamente. Las permeabilidades del filtro de apical a basolateral determinadas en general son más altas que los datos de permeabilidad de Caco-2 correspondientes, indicando que la difusión del filtro no es el paso limitante de velocidad para el transporte de Caco-2 (Figuras 2 y 3). Ejemplo 3: Experimento de rata canulada en el conducto biliar in situ. El siguiente estudio se puede emplear para elucidar la involucración de MDR1 y/o MRP2 en la excreción biliar de SPP1 00 en la rata. Por consiguiente, se evalúa la eliminación biliar de SPP100 en ratas machos anestesiadas y canuladas en el conducto biliar durante una infusión intravenosa constante de hemifumarato de SPP 1 00 marcado con [14C] antes y después de la administración de PSC833 (un inhibidor conocido de MDR1 y MRP2) o Probenecid (un inhibidor selectivo conocido de MRP2).

Los animales que se pueden utilizar son, por ejemplo, ratas HAN :WIST albinas machos, con 4 a 5 animales en cada grupo de tratamiento. El hemifumarato de SPP1 00 marcado con [14C] se administra en una solución de cloruro de sodio al 0.9 por ciento, y el PSC833 y Probenecid en una mezcla de etanol/ polietilenglicol 200/solución de glucosa al 5 por ciento, en una proporción de 1 /3/1 . En todos los grupos de tratamiento, se alcanza una concentración constante del compuesto progenitor en plasma mediante inyección intravenosa de bolo (2 ml/kg) de solución de bolo de hemifumarato de SPP 1 00 marcado con [14C] (0.01 5 ml de base/ml) con infusión intravenosa subsecuente (6.67 ml/hora/ kg) de solución de infusión de hemifumarato de SPP1 00 marcado con [14C] (0.022 ml de base/ ml). Después de dos horas, se lleva a cabo la administración del bolo intravenoso de los siguientes compuestos: grupo de tratamiento 1 : una mezcla de 1 /3/1 de etanol/polietilenglicol 200/solución de glucosa al 5 por ciento (5 ml/kg; veh ículo); grupo de tratamiento 2: PSC833 con una dosis de 1 0 ml/kg ; y grupo de tratamiento 3: Probenecid con una dosis de 50 ml/kg. Para todos los grupos de tratamiento, se recolectan muestras de sangre a las 0.5, 1 , 1 .33, 1 .67, 2, 2.33, 2.67, 3 horas después del tratamiento, e inmediatamente se procesa la sangre a plasma. Se recolecta la bilis durante el marco de tiempo de 1 a 3 horas a intervalos de 20 mins. Método de detección: Para la radioactividad total en todas las muestras: LSC; LOQ de 3.4 microgramos/litro para plasma y bilis; y para la detección del patrón de metabolitos en las reservas seleccionadas de muestras: HPLC con detección de radioactividad. En seguida de la administración intravenosa del vehículo (etanol/polietilenglicol 200/ solución de glucosa al 5 por ciento), no se detecta efecto alguno sobre la concentración de 14C en plasma ni sobre la eliminación biliar de los compuestos marcados con [14C] durante la infusión constante de hemifumarato de SPP1 00 marcado con [14C] en las ratas canutadas en el conducto biliar. En seguida de la administración de PSC833, la concentración de 14C muestra una tendencia hacia un aumento dependiente del tiempo en plasma, y una reducción significativa en la bilis. La eliminación biliar resultante de los compuestos marcados con [14C] suma aproximadamente el 7 por ciento del valor obtenido antes de la administración de PSC833. En seguida de la administración de Probenecid, no se observa efecto alguno sobre las concentraciones en plasma de los compuestos marcados con [14C] en las ratas canuladas en el conducto biliar. Sin embargo, el Probenecid conduce a un aumento en el flujo biliar (el valor después de la administración es aproximadamente el 65 por ciento más alto que el valor antes de la administración), y a una reducción de la concentración de [14C] en la bilis (el valor es aproximadamente el 40 por ciento más bajo que el valor antes de la administración). No obstante, la eliminación biliar es similar en ambos intervalos de tiempo (antes y después de la administración de Probenecid). A partir de estos resultados (Figura 4), se puede concluir que MDR 1 parece tener un papel importante en la eliminación biliar de SPP 100 y compuestos relacionados con SPP100. Adicionalmente, MRP2 parece no estar involucrada en la excreción biliar de SPP100 y compuestos relacionados con SPP1 00. Ejemplo 4: Experimento de biodisponibilidad in vivo. Se puede emplear el siguiente estudio para investigar la biodisponibilidad oral relativa de SPP100 en ratas machos en seguida de una sola administración oral de hemifumarato de SPP1 00 con o sin co-administración oral de PSC833. Con el fin de elucidar una dependencia en la dosis del PSC833 co-administrado, se dan diferentes dosis de PSC833 (0, 5, 12.5, 25, y 50 ml/kg) en una dosis definida de hemifumarato de SPP1 00 (6 ml de base libre/kg). Los animales que se pueden utilizar son, por ejemplo, ratas HAN:WIST albinas machos, con 5 animales en cada grupo de tratamiento. Se administra hemifumarato de SPP1 00 en una solución de cloruro de sodio al 0.9 por ciento, y PSC833 en una mezcla de etanol/polietilenglicol 200/solución de glucosa al 5 por ciento, en la proporción de 1 /3/1 (vehículo).

Primero, se administra el vehículo (5 ml/kg), y segundo, se administra el hemifumarato de SPP1 00 (2 ml/kg) a las ratas mediante intubación (diferencia de tiempo: 2 a 3 mins). Todas las ratas reciben hemifumarato de SPP1 00 con una dosis de 6 ml de base libre/kg. Se administran las siguientes dosis de PSC833: grupos de tratamiento 1 y 6: una mezcla de 1 /3/1 de etanol/polietilenglicol 200/solución de glucosa al 5 por ciento (5 ml/kg ; vehículo); grupo de tratamiento 2: 50 ml/kg de PSC833; • grupo de tratamiento 3: 25 ml/kg de PSC833; grupo de tratamiento 4: 12.5 ml/kilo-gramo de PSC833; y grupo de tratamiento 5: 5 ml/kg de PSC833. Se recolectan muestras de sangre sublingualmente a las 0.25, 0.5, 1 , 2, 4, 8, 24, y 48 horas después de la administración. Se utiliza el plasma para el análisis bioquímico. Métodos analíticos: HPLC-MS/MS utilizando APCI en modo positivo de SRM para SPP100, el límite de cuantificación más bajo en plasma está en el intervalo de 0.6 ng/ml a 0.7 ng/ml. ± En ratas oralmente dosificadas con hemifumarato de SPP1 00 (6 ml de base/kg) y vehículo, SPP100 solamente se detecta en plasma hasta 2 horas después de la dosificación. Cmax se suma hasta aproximada-mente 24.8 ± 27 ng/ml, y se alcanza tmax a las 0.44 ± 0.1 horas después de la dosificación. El valor de AUC (O-túi,,, ) con dosis normalizada es de 2.38 ± 3.4 [(ng*h/ml)/(ml/kg)].

En ratas oralmente dosificadas con hemifumarato de SPP1 00 (6 ml de base/kg) y PSC833 (5, 12.5, 25, y 50 ml/dosis), SPP 1 00 se detecta en plasma hasta 24 ó 48 horas después de la dosificación. Comparándose con las ratas que reciben el vehículo, Cmax aumenta hasta valores de 35.7 ± 1 8, 1 1 5 ± 93, 81 .4 ± 1 9, y 26.7 ± 1 8 ng/ml, y tmax hasta valores de 4.8 ± 1 .8, 4.95 ± 4.2, 1 5.2 ± 1 8, y 3.06 ± 1 .9 horas para dosis de PSC833 de 5, 1 2.5, 25, y 50 ml/kg, respectivamente. Los valores de AUC (0-tu?t?mo) con dosis normalizada son aproximadamente 23, 69, 76, y 1 7 veces más altos que en el grupo de veh ículo para las dosis de PSC833 co-administradas de 5, 12.5, 25, y 50 ml/kg , respectivamente. No se pudo dar una razón para el valor fre? bajo relativo para la dosis de PSC833 de 50 ml/kg, comparándose con la dosis de 25 ml/kg (Figura 5). A partir de estos resultados, se puede concluir que cuando menos una o ambas proteínas transportadoras de efusión ABC, M DR1 y M RP2, parecen tener un papel importante en la extensión de la exposición sistémica de SPP100 después de su administración oral. Ejemplo 5: [14C]-(2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S, 5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico, [14C]-SPP100, hemifumarato.

A. Metil-éster del ácido ciano-[1 C]-dimetil-acético. En una ampolleta se coloca una solución de metóxido de sodio (1 1 9 ml, 2.2 mmol) en metanol (2 ml) a temperatura ambiente. Se agrega cianoacetato de metilo (99 ml, 1 .0 mmol) a 0°C. La mezcla se agita durante unos cuantos minutos a temperatura ambiente, y luego se congela a -1 92°C bajo nitrógeno, y se transfiere al vacío yoduro de metilo marcado con [14C] (3.7 GBq a 2.04 GBq/mmol, 1 .82 mmol, disponible en Amersham Biosciences), a la mezcla de reacción. La ampolleta se sella al vacío, y se deja calentar lentamente a temperatura ambiente durante un período de 1 hora. La ampolleta se vibra a 50°C durante 16 horas. Luego la ampolleta se vuelve a congelar a -1 92°C, y el solvente volátil y el [14C]-yoduro de metilo se eliminan mediante liofilización. Luego se analiza el metil-éster del ácido ciano-[14C]-dimetil-acético mediante cromatografía de gases, para asegurar que se forme un subproducto mono-metilado al <0.2 por ciento. Entonces se utiliza el material para el siguiente paso sin mayor purificación. B. 2-ciano-2,2-[14C]-dimetil-acetamida. Se burbujea gas de amoníaco en un matraz que contiene metanol seco durante 30 min a temperatura ambiente, o hasta que la molaridad sea de 5 M o mayor. Se agrega el compuesto del título A crudo, metíl-éster del ácido ciano-[14C]-dimetil-acético, al NH3 5.5 M en MeOH recién preparado (3 ml, 16.5 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas, después de lo cual, todo el material de inicio se convierte al producto de nitrilo, como es evidenciado por el análisis de cromatografía de gases, de acuerdo con el siguiente método: 10 min a 70°C, luego incrementando la temperatura por 1 0°C/min hasta 200°C, luego quedándose a 200°C durante 10 minutos. En seguida de que se termina la reacción, se elimina el solvente mediante liofilización, y el producto se purifica mediante cromatografía por evaporación (acetato de etilo ? acetato de etilo/metanol al 1 0 por ciento), para dar 2.813 GBq de la 2-ciano-2,2-[14C]-d ¡metí I-aceta mida. C. 3-am i no-2,2-[14C] -di metil -propionamida. Al compuesto del título B recién purificado, 2-ciano-2,2-[14C]-dimetil-acetamida (2.813 GBq , 77 ml, 0.69 mmol), se le agrega una solución 5.5 M de NH3 recién preparada en MeOH a temperatura ambiente, seguida por Rh al 5 por ciento/AI2O3 (33 ml). La reacción se agita a 55°C durante hasta 5 horas, y se monitorea mediante cromatografía de gases cada hora, hasta que todo el material de inicio se convierte en producto. Método de cromatografía de gases: 1 min a 80°C, luego se incrementa por 20°C/ min hasta 240°C, seguido por 1 min a 240°C. En seguida de que se termina la reacción , la mezcla se filtra a través de Celite (Hyflo), el solvente se elimina sobre un evaporador giratorio, y el producto se purifica mediante cromatografía por evaporación (CH2CI2 /MeOH al 2 por ciento/ NH3 ? CH2CI2 / MeOH al 1 0 por ciento / NH3), para dar 2.7 GBq de 3-amino-[14C]-2,2-dimetil-propionamida como un sólido blanco. Este producto se puede almacenar como un sólido durante períodos de más de 1 semana. Para un almacenamiento a largo plazo, la 3-amino-2,2-[14C]-dimetil-propionamida se puede disolver en EtOH / tolueno al 20 por ciento a -80°C en una concentración no mayor de 50 MBq/ml. D. [14C]-(2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metox¡-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico,[14C]-SPP100, hemifumarato. El compuesto de titulo C, 3-amino-2,2-[14C]-dimetil-propionamida , se puede emplear para la preparación del compuesto del título D, hemifumarato marcado con [14C], de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, como se describe en la Patente Norteamérica Número 6,730,798.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1 . Un método para mejorar la biodisponíbilidad de un inhibidor de renina, cuyo método comprende co-administrar a un mam ífero que necesite el tratamiento, una combinación de un inhibidor de renina y un inhibidor de proteínas de efusión, donde el inhibidor de renina es un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el inhibidor de proteínas de efusión es un inhibidor de MDR1 .

3. Un método de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico tiene la fórmula: en donde Ri es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R2 es alquilo C1 - o alcoxi C1 -4; y R3 y R son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Un método de conformidad con la reivindicación 3, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es un compuesto de fórmula (I), en donde R< es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R4 son isopropilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. Un método de conformidad con la reivindicación 4, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxí-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico.

6. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde el inhibidor de MDR1 es PSC833.

7. Un método para mejorar la biodisponíbilidad de un inhibidor de renina, que comprende co-administrar, a un mam ífero en necesidad de tal tratamiento, una combinación de un inhibidor de renina y un inhibidor de proteínas de efusión, en donde el inhibidor de proteínas de efusión es PSC833.

8. Un método de conformidad con la reivindicación 7, donde el inhibidor de renina es un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. Un método de conformidad con la reivindicación 8, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico tiene la fórmula: (I) en donde R* es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R2 es alquilo C1 -4 o alcoxi C?. ; y R3 y R4 son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. Un método de conformidad con la reivindicación 9, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es un compuesto de fórmula (I), en donde R es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R4 son isopropilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 1 1 . Un método de conformidad con la reivindicación 1 0, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es hemífumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi )-bencil]-8-metil-nonanoico. 1 2. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de renina en combinación con un inhibidor de proteínas de efusión, el inhibidor de proteínas de efusión está presente en una cantidad tal que, en seguida de la administración, se mejora la biodisponibilidad de un inhibidor de renina por cuando menos el 5 por ciento, donde el inhibidor de renina es un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 13. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 2, en donde el inhibidor de proteínas de efusión es un inhibidor de MDR1 . 14. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 12 ó 1 3, en donde en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico tiene la fórmula: en donde RT es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alq uilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R3 y R4 son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 1 5. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es un compuesto de la fórmula (I), en donde R* es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R son isopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 16. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 5, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico. 17. Una composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 3 ó 16, en donde el inhibidor de MDR1 es PSC833. 18. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de renina en combinación con un inhibidor de proteínas de efusión, el inhibidor de proteínas de efusión está presente en una cantidad tal que, en seguida de la administración, se mejora la biodisponibilidad de un inhibidor de renina por cuando menos el 5 por ciento, donde el inhibidor de proteínas de efusión es PSC833. 1 9. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 5, en donde el inhibidor de renina es un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 20. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 9, en donde en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico tiene la fórmula: en donde R* es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R2 es alquilo C1 -4 o alcoxi C?-4; y R3 y R4 son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 21 . Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 20, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoíco es un compuesto de la fórmula (I), en donde R< es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R4 son isopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 22. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 21 , en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico. 23. Un uso de un inhibidor de proteínas de efusión para la fabricación de un medicamento para mejorar la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 24. Un uso de conformidad con la reivindicación 23, en donde el inhibidor de proteínas de efusión es un inhibidor de MDR1 . 25. Un uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 ó 24, en donde en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico tiene la fórmula: en donde R, es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R2 es alquilo C1 -4 o alcoxi C1 -4; y R3 y R4 son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 26. Un uso de conformidad con la reivindicación 25, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es un compuesto de la fórmula (I), en donde Ri es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R4 son isopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 27. Un uso de conformidad con la reivindicación 26, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propil)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico. 28. Un uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 27, en donde el inhibidor de MDR1 es PSC833. 29. Un uso de un inhibidor de proteínas de efusión para la fabricación de un medicamento para mejorar la biodisponibilidad de un inhibidor de renina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde el inhibidor de proteínas de efusión es PSC833. 30. Un método de conformidad con la reivindicación 29, en donde el inhibidor de renina es un derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 31 . Un método de conformidad con la reivindicación 30, en donde en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril alcanoico tiene la fórmula: en donde Ri es alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y R2 es alquilo C?-4 o alcoxi C1 -4; y R3 y R son independientemente alquilo de 1 a 4 átomos de carbono ramificado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 32. Un método de conformidad con la reivindicación 31 , en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es un compuesto de fórmula (I), en donde R< es 3-metoxipropoxi; R2 es metoxi; y R3 y R son isopropilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 33. Un método de conformidad con la reivindicación 32, en donde el derivado de amida del ácido d-amino-?-hidroxi-?-aril-alcanoico es hemifumarato de (2-carbamoil-2-metil-propíl)-amida del ácido (2S,4S,5S,7S)-5-amino-4-hidroxi-2-isopropil-7-[4-metoxi-3-(3-metoxi-propoxi)-bencil]-8-metil-nonanoico.