MC2260A1

MC2260A1 - Formulations de produits radiopharmaceutiques,leur methode d'administration et leur procede de preparation

Info

Publication number: MC2260A1
Application number: MC912192A
Authority: MC
Inventors: Simon Jaime; R Garlich Joseph; Keith R; Mcmillan Kenneth
Original assignee: Dow Chemical Co
Priority date: 1990-06-18
Filing date: 1991-06-11
Publication date: 1993-04-26
Also published as: PT97996B; NO302510B1; JP2002114712A; GR3017430T3; AU6455994A; FI912933A0; IE71023B1; PT97996A; CA2044812C; FI912933L; KR100219964B1; EP0462787A1; CN1033143C; NO912345L; IS3717A7; HUT57994A; CY1891A; IE912057A1; IL98536A; DE69110554T2

Description

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FORMULATIONS DE PRODUITS RADIOPHARMACEUTIQUES. LEUR METHODE D'ADMINISTRATION ET LEUR PROCEDE DE PREPARATION

La présente invention concerne des formulations de produits radiapharmaceutiques, leur méthode

5 d'administration et leur procédé de préparation. Les formulations de produits radîopharmaceutiques ont plusieurs applications dans le traitement thérapeutique et/ou diagnostique d'animaux contre diverses maladies, en particulier contre le cancer.

1 o Le développement de métastases osseuses est un

événement courant et souvent désastreux pour un patient cancéreux. La souffrance, les fractures pathologiques, les ensuffisances neurologiques fréquentes et l'immobilité forcée, provoquées par ces lésions osseuses métastatiques, 15 abaissent significativement la qualité de vie du patient cancéreux. Le nombre des patients qui contractent une

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maladie de nature métastatique est élevé, puisque près de 50% de tous les patients qui contractent un cancer du sein, du poumon ou de la prostate subiront éventuellement des métastases osseuses. On voit également des métastases 5 osseuses chez des patients présentant un cancer du rein, de la thyroïde, de la vessie, du cerveau, et autres tumeurs, mais ceux-ci représentent ensemble moins de 20% des patients chez lesquels se développent des métastases osseuses. Un cancer des os par métastases menace rarement 10 la vie, et il arrive que les patients vivent pendant des années après la découverte des lésions osseuses. Initialement, le traitement se focalise sur le soulagement de la souffrance, ce qui permet de diminuer les besoins de médication narcotique et d'augmenter les possibilités 15 ambulatoires. Il est clair que l'on espère pouvoir guérir certains de ces cancers.

Les produits radiopharmaceutiques utilisés dans les formulations de la présente invention sont préparés sous la forme de leurs complexes métal-ligand, en particulier 20 l'agent samarium-153-acide éthylènediaminetétraméthylène-phosphonique ("153Sm-EDTMP"), décrit dans le brevet U.S. 4.898.724. Ce 153Sm-EDTMP, en particulier sous forme de formulation pharmaceutique, est utile pour soulager la souffrance ressentie dans les os et pour le traitement des 25 tumeurs calcifiantes ; cet emploi, ainsi que la préparation de ce composé, a été indiqué dans le Brevet U.S. 4.898.724, le Brevet Canadien 1.243.603 et la demande publiée de

F

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Brevet Européen 164.843. L'emploi supplémentaire de produits radiopharmaceutiques pour la suppression de la moelle osseuse est indiqué dans le brevet U.S. 4.853.209. Toutes ces références décrivent un emploi des produits 5 radiopharmaceutiques de la présente invention, en particulier de 153Sm-EDTMP, au sein d'une formulation préparée avec des véhicules appropriés, pharmaceutiquement acceptables.

Lorsque l'on administre un produit radio-10 pharmaceutique quelconque, l'un des problèmes qui se posent est le risque de dégradation radiolytique des molécules organiques présentes dans la formulation, qui peut modifier la biodistribution du radio-isotope ou entraîner la formation de sous-produits toxiques. Ni l'un ni l'autre de 15 ces phénomènes n'est souhaitable. Quand on a besoin de fortes doses de radioactivité, il existe un risque accru de dégradation des molécules organiques (par exemple EDTMP) par les radiations. Cette dégradation est plus susceptible de se produire lorsque l'on utilise des radionucléides 20 thérapeutiques (par exemple 153Sm) qui sont conçus pour délivrer de fortes doses de radiations.

Une approche que l'on a tentée pour empêcher la radiolyse consiste à ajouter à la formulation un inhibiteur de radicaux libres. Toutefois, l'inhibiteur ou ses produits 25 de dégradation peuvent être toxiques ou influencer la biodistribution du produit radiopharmaceutique. L'emploi d'un inhibiteur comme l'alcool benzylique est discuté par

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H. Ikebuchi et al., Radioisotopes 26(7), 451-7 (1977) ; B.J. Floor et al., J. Pharm. Sci. 74(2), 197-200 (1985) ; et A. Rego et al., J. Pharm. Sci. 71(11), 1219-23 (1982).

Un autre problème posé par les formulations 5 radiopharmaceutiques (comme indiqué dans le brevet U.S. 4.898.724 et la demande de Brevet Européen publiée N° 164.843) est qu'il peut arriver que l'on utilise un nombre de moles de ligand (par exemple EDTMP) excessif par rapport à la quantité de métal. Quand on injecte de grandes 10 quantités d'ions métalliques - (par exemple Sm3+), on injecte donc aussi une quantité beaucoup plus importante d'agent chélatant libre (par exemple EDTMP). Il se peut que l'excès de ligand présent puisse complexer les ions métalliques qui se trouvent dans le sang, ce qui peut conduire à des 15 complications pour le patient. Il est par conséquent souhaitable de disposer d'une formulation qui contienne une quantité minimale d'agent chélatant libre.

Un autre problème posé lors de l'administration de produits radiopharmaceutiques est le mode d'injection. 20 Typiquement, tous ces produits radiopharmaceutiques sont administrés par injections intraveineuses (I.V). Le patient peut éprouver un certain désagrément lorsqu'il subit une injection I.V., et il est quelquefois difficile de trouver, chez le patient, une veine appropriée accessible. 25 Par conséquent, il . serait avantageux de disposer d'une formulation pour des produits radiopharmaceutiques, qui subisse une radiolyse minimale avant emploi, puisse

V

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être injectée par plusieurs voies, et ne présente pas un excès de ligand libre (ou non complexé).

Les dessins annexés sont fournis pour illustrer la radiolyse de la façon suivante :

5 la figure 1 représente la radiolyse d1EDTMP avec

100 mCi/ml d'activité spécifique de 153Sm, en présence d'éthanol à 5% ("EtOH" ; +) , d'alcool benzylique à 0,9% ("BzOH" ; ♦) , à l'état gelé (A) et pour un témoin (■) .

La figure 2 représente la radiolyse d'EDTMP, en 10 nécessaires non inhibés, . pour différentes activités spécifiques de 153Sm : ■ 100 mCi/ml ; + 50 mCi/ml ; ♦ 30 mCi/ml ; A 30 mCi/ml.

De façon surprenante, on a maintenant trouvé une formulation améliorée pour l'administration de produits 15 radiopharmaceutiques, en particulier 153Sm-EDTMP, et cette formulation permet de réduire la radiolyse de 1'EDTMP sans altérer les performances du produit radiopharmacèutique. Les produits radiopharmaceutiques qui conviennent pour être utilisés dans les formulations de cette invention englobent 20 les complexes comprenant au moins un radionucléide complexé avec un ligand ou un sel physiologiquement acceptable de celui-ci.

Des exemples de radionucléides convenables sont : samarium-153 (153Sm), holmium-166 (166Ho), ytterbium-175 25 (175Yb), lutetium-177 (177Lu), yttrium-90 (90y) et gadolinium-159 (159Gd). 153Sm et 166Ho sont des radionucléides particulièrement préférés, et 153Sm est

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celui que l'on préfère par-dessus tout.

Des exemples de ligands convenables sont l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique ("EDTMP"),

1 ' acide diéthylènetriaminepentaméthylènephosphonique

5 ("DTPMP"), l'acide hydroxyéthyléthylènediaminetriméthylène-phosphonique ("HEEDTMP"), l'acide nitrilotriméthylène-phosphonique ("NTMP"), l'acide tris(2-aminoéthyl)amine-hexaméthylènephosphonique ("TTHMP"), l'acide 1-carboxy-éthylènediaminetétraméthylènephosphonique ("CEDTMP"),

10 l'acide bis (aminoéthylpipérazine) tétraméthylènephosphonique ("AEPTMP"), et l'acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécane-tétraméthylènephosphonique ("DOTMP"), ainsi que leurs sels physiologiquemerçt acceptables. Des ligands particulièrement préférés sont EDTMP, DTPMP, HEEDTMP, TTHMP, AEPTMP, CEDTMP 15 et DOTMP, et l'on préfère tout particulièrement EDTMP. Un produit radiopharmaceutique particulièrement préféré dans la mise en oeuvre de la présente invention est 153Sm-EDTMP, ainsi que ses sels physiologiquement acceptables.

Les présentes formulations peuvent également 20 contenir un ion métallique diva lent, à raison de 0,25 à 5 moles d'ion métallique divalent par mole de ligand, cet ion n'interférant pas avec la formation du complexe radio-pharmaceutique. Quand l'ion métallique divalent est ajouté avant le radionucléide, la formulation n'a pas besoin 25 d'être congelée jusqu'à ce qu'intervienne l'addition du radionucléide, et par la suite, elle n'en a besoin que s'il s'écoule un laps de temps important entre la préparation de

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la formulation de produit radiopharmaceutique et son utilisation. ,

On a également trouvé maintenant qu'il n'est pas nécessaire de réaliser les injections par voie 5 intraveineuse (I.V.) pour obtenir la biodistribution désirée du radionucléide, si l'on utilise une formulation de produit radiopharmaceutique de la présente invention. Plus précisément, quand on le souhaite ou que c'est nécessaire, on peut obtenir des biodistributions similaires 10 au moyen d'injection par voie intrapéritonéale (I.P.), sous-cutanée (S.C.) ou intramusculaire (I.M.).

Les présentes formulations de produits radiopharmaceutiques qui contiennent le métal divalent réduisent au minimum la quantité de ligand libre ou non complexé (par 15 exemple EDTMP) qui sera introduite dans le flux sanguin du mammifère. La présence du complexe du ligand et de ce métal divalent réduit la chélation par le ligand des autres métaux (par exemple calcium) présents dans le sang. L'effet nuisible de l'excès de ligand est ainsi diminué. Toutefois, 20 les métaux divalents ne doivent pas gêner la formation du complexe radiopharmaceutique (par exemple 153Sm-EDTMP). Les métaux divalents convenables sont Fe2+ et Mn2+, ainsi que les métaux alcalino-terreux, par exemple Mg2+, Ca2+, Sr2+ et Ba2+, le préféré étant Ca2+. On prépare ces formulations 25 de produits radiopharmaceutiques de telle sorte que soient présentes de 0,25 à 5 moles, en particulier de 0,5 à 3 moles, de préférence de 0,5 à 1 mole, mieux encore de 0,75

il

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à 1 mole et surtout de 0,9 à 1 mole de métal divalent par mole de ligand.

Il existe plusieurs façons de préparer de telles formulations de produit radiopharmaceutique et de métal divalent. L'une (Méthode A) consiste à préparer une formulation de métal divalent qui est ajoutée au complexe ligand-métal radioactif. Ce complexe ligand-métal radioactif peut éventuellement avoir été congelé, puis décongelé pour qu'on y ajoute le métal divalent, et peut, si on le souhaite, être congelé à nouveau, puis décongelé avant l'emploi. Une seconde façon (Méthode B) consiste à ajouter le métal divalent à une solution de l'ion métallique radioactif. On ajoute ensuite le ligand, pour former le complexe, puis cette formulation est congelée si on le souhaite. Comme il ne se produit pas de radiolyse jusqu'à ce que l'on ajoute le ligand, on opère une congélation si le délai avant emploi le rend souhaitable. Une troisième façon (Méthode C) consiste à administrer conjointement au patient le produit radiopharmaceutique, qui peut avoir été congelé et décongelé avant emploi, et une solution de l'ion métallique divalent, par exemple du gluconate de calcium, en deux injections I.V. distinctes, réalisées à peu près au même moment. Une quatrième façon (Méthode D) , la préférée, consiste à ajouter le métal divalent, sous la forme de son chlorure, ou. mieux encore de son hydroxyde, au ligand et à ajuster ensuite le pH, par exemple en ajoutant de 1'hydroxyde de sodium NaOH, et à

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lyophiliser éventuellement la solution pour obtenir une formulation lyophilisée de complexe ligand-métal divalent (kit). Pour reconstituer le kit, on utilise une solution acide de l'ion métallique radioactif, et l'on obtient ainsi 5 une formulation de produit radiopharmaceutique qui convient pour être utilisée et qui présente le pH souhaité. Mais dans n'importe laquelle des méthodes de préparation de la formulation de produit radiopharmaceutique, la période du radionucléide utilisé est un paramètre dont il faut tenir 10 compte (par exemple, pour 153-Sm, t^/2 = 46 heures environ) . Un autre paramètre important est la durée pendant laquelle le radionucléide se trouve en solution avec le ligand. La quantité de radioactivité et la durée pendant laquelle le radionucléide se trouve en solution avec le ligand 15 déterminent s ' il est souhaitable ou non de congeler la formulation de produit radiopharmaceutique.

Dans le mode préféré de réalisation (Méthode D), on prépare des kits contenant une formulation de ligand, à raison d'environ 1 équivalent de métal divalent par 20 équivalent de ligand. La solution de complexe ligand-métal divalent peut elle aussi être lyophilisée, et quand elle est reconstituée avec une solution du radionucléide, elle présente un pH valant de 7 à 8,5 et il se forme, de façon quantitative, un complexe de l'ion métallique radioactif. 25 La formulation de métal divalent est tout particulièrement préférée quand on utilise de grandes quantités de ligand, habituellement avec les doses relativement élevées de

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radionucléide que l'on utilise en particulier pour l'ablation de la moelle des os.

Ainsi, de préférence, les kits contenant le ligand, comme EDTMP, éventuellement en présence du métal divalent, 5 sont liophylisés de telle sorte que l'addition d'une quantité prédéterminée de solution de radionucléide dans de l'acide chlorhydrique de concentration convenable (de préférence 0,001 à IN, et mieux encore de 0,01 à 0,1N) ait pour résultat la formation quantitative du complexe ligand-10 radionucléide, par exemple Sm-EDTMP, et que la solution résultante ait un pH compris entre 7 et 8,5. Pour la formulation de produit radiopharmaceutique 153Sm-EDTMP, la concentration préférée d'EDTMP vaut 35 mg/ml et la concentration préférée de Sm vaut 3.10~4M (soit environ 15 278:1 pour EDTMP:Sm).

Les présentes formulations de produits radiopharmaceutiques, en particulier lès formulations de i C")

Sm-EDTMP, qu'elles contiennent ou non le métal divalent, peuvent être congelées dans le but de minimiser la 20 radiolyse du ligand, puis décongelées avant utilisation. On peut effectuer la congélation par tout moyen convenable qui maintient l'état stérile du produit (par exemple au moyen d'azote liquide ou de carboglace), et quand on désire ensuite utiliser la formulation, on la laisse se 25 décongeler.

On peut choisir la voie d'administration des présentes formulations parmi les voies I.V., I.P., S.C. ou

I

I.M.. Pour toutes les voies d'injection, les résultats de biodistribution sont semblables pour les présentes formulations de produits radiopharmaceutiques.

De façon surprenante, on a maintenant trouvé un 5 procédé amélioré de préparation de produits radiopharmaceutiques, en particulier 153Sm-EDTMP, et ce procédé permet de réduire la radiolyse du ligand sans altérer les performances du produit radiopharmaceutique. Les produits radiopharmaceutiques qui conviennent pour être utilisés 10 dans les formulations de cette invention englobent les complexes comprenant au moins un radionucléide complexé avec un ligand ou leurs sels physiologiquement acceptables.

Des exemples de radionucléides convenables sont : 15 samarium-153 (153Sm), holmium-166 (166Ho), ytterbium-175 (175Yb)f lutetium-177 (177Lu), yttrium-90 (90y) et gadolinium-159 ~(159Gd) . 153Sm et 166Ho sont des radionucléides particulièrement préférés, et 153Sm est celui que l'on préfère par-dessus tout. 20 Des exemples de ligands convenables sont l'acide

éthylènediaminetétraméthylènephosphonique ("EDTMP"),

1 ' acide diéthylènetriaminepentaméthylènephosphonique

("DTPMP"), l'acide hydroxyéthyléthylènediaminetriméthylène-phosphonique ("HEEDTMP"), l'acide nitrilotriméthylène-25 phosphonique ("NTMP"), l'acide tris(2-aminoéthyl)amine-hexaméthylènephosphonique ("TTHMP"), l'acide 1-carboxy-éthylènediaminetétraméthylènephosphonique ("CEDTMP"),

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1'acide bis(aminoéthylpipérazine)tétraméthylènephosphonique ("AEPTMP"), et l'acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécane-tétraméthylènephosphonique ("DOTMP"), ainsi que leurs sels physiologiquement acceptables. Des ligands particulièrement 5 préférés sont EDTMP, DTPMP, HEEDTMP, TTHMP, AEPTMP, CEDTMP et DOTMP, et l'on préfère tout particulièrement EDTMP. Un produit radiopharmaceutique particulièrement préféré dans la mise en oeuvre de la présente invention est 153Sm-EDTMP, ainsi que ses sels physiologiquement acceptables. Les sels 10 convenables, physiologiquement acceptables, ont été définis dans le brevet U.S. 4.898.724 et englobent les sels d'addition d'acide des bases qui forment un sel avec au moins un groupe acide du ligand utilisé et qui ne provoquent pas un effet physiologique contraire 15 significatif quand on les administre à un animal, à des doses compatibles avec la bonne pratique pharmaceutique. Les bases convenables englobent par exemple les hydroxydes, carbonates et bicarbonates des métaux alcalins et alcalino-terreux, comme 1'hydroxyde de sodium, 1'hydroxyde de 20 potassium, 1'hydroxyde de calcium, le carbonate de potassium, le bicarbonate de sodium et le carbonate de magnésium, ainsi que l'ammoniac et les aminés primaires, secondaires et tertiaires. On peut préparer ces sels physiologiquement acceptables en mettant 1'acide en contact 25 avec la base appropriée.

Définitions

Sm : samarium, tous les isotopes, qu'ils soient

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radioactifs ou non (la même convention est valable pour les autres radionucléides de l'invention)

153Sm : isotope radioactif du samarium, présentant une masse atomique de 153 (la même convention est valable pour les autres radionucléides de 1'invention)

EDTMP : acide éthylènediaminetétraméthylène-phosphonique

153Sm-EDTMP : 153samarium-acide éthylènediamine-tétraméthylènephosphonique, complexe en solution ; il contient à la fois des isotopes radioactifs et des isotopes non radioactifs du samarium.

"Activé" : on ajoute de 0,5 à 1 pCi de 153SmCl3 ou de H0CI3, en solution, comme traceur.

"Produit radiopharmaceutique" : produit pharmaceutique radioactif destiné au diagnostic et/ou à la thérapie, habituellement une solution aqueuse contenant un ion métallique radioactif (par exemple 153Sm) lié à un ligand organique1 (par exemple EDTMP).

"Kit" : ampoule contenant une formulation solide de ligand, comportant éventuellement un ion métallique divalent, à laquelle on ajoute une solution d'un ion métallique radioactif dans le but de former le complexe ligand-métal radioactif.

"Kit de X ml" : kit conçu pour recevoir X ml de solution d'un ion métallique radioactif, dans le but de former le complexe ligand-radionucléide.

"Reconstitution" : addition d'une solution acide de

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radionucléide à un kit, dans le but de former un complexe ligand-radionucléide.

TBA : hydroxyde de tétrabutylammonium BzOH : alcool benzylique 5 EtOH : éthanol

% : pourcent

HC1 : acide chlorhydrique NaOH : hydroxyde de sodium I.V. : injection intraveineuse 10 I.P. : injection intrapéritonéale

I.M. : injection intramusculaire S.C. : injection sous-cutanée MDP : méthylènediphosphonate Partie expérimentale générale 15 Pour déterminer le rendement en complexe, on utilise le procédé de séparation chromatographique par échange de cations. Ce procédé est décrit dans le brevet U.S. 4.898.724.

HPLC : chromatographie en phase liquide haute 20 performance ; la colonne utilisée est une colonne Hamilton® PRP-1, à polarité de phases inversée, et l'éluant est constitué d'une solution d'acétate de sodium 0,1M et de TBA 0,005M. Le débit vaut 1 ml/min, et la détection s'effectue à l'aide d'un détecteur radiométrique et d'un détecteur 25 U.V. (240 nm), couplés en série.

L'EDTMP est préparé à l'état pur, sous une forme convenable pour être utilisé en tant que produit

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pharmaceutique, selon le procédé décrit dans le brevet U.S. 4.937.333 et dans la demande publiée de brevet européen N° 411.941.

Le 153Sm est fourni par le réacteur de recherche de 5 l'Université du Missouri, Columbia, MO.

Pour ce qui est de l'eau distillée, on a utilisé de l'eau Barnstead NANOpure®.

Ca(0H)2 est utilisé sous la forme du dihydrate, fourni par MCB ou Aldrich, pur à 95%.

10 A moins d'indications contraires, tous les réactifs ont été achetés dans le commerce et utilisés tels quels.

On va maintenant expliquer plus en détail la présente invention à l'aide des exemples suivants, qui ne sont donnés que comme illustration de la présente invention 15 et ne limitent aucunement celle-ci.

Exemple 1 : Méthode A» pas d'addition de calcium

On prépare 3 ml d'une solution d'EDTMP 8.10~2M, qui contient aussi 3.10~4M de Sm. L'activité spécifique vaut 100 mCi/ml de 153Sm. On place trois fractions aliquotes de 20 200 /il (échantillons I, II et III) dans des ampoules en matière plastique et on les congèle à l'aide d'un bain d'acétone et de carboglace. Les ampoules sont conservées dans un congélateur. Une autre fraction de 500 /il est placée dans une ampoule en verre, et on y ajoute 4,3 /il 25 d'alcool benzylique pour obtenir une solution à 0,9% (p/v) (échantillon A) . Une autre fraction de 500 /xl est placée dans une ampoule en verre, et on y ajoute 31,8 /il d'éthanol

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pour obtenir une solution à 5% (p/v) (échantillon B).

On analyse les solutions par HPLC, et l'on surveille la dégradation en fonction du temps. La dégradation est mise en évidence par l'apparition, dans le chromatogramme radiométrique, de pics ne correspondant pas à Sm-EDTMP. Pour cette étude en fonction du temps, on laisse se décongeler, à température ambiante, le contenu congelé d'une ampoule en matière plastique, et on en analyse une fraction. On laisse la solution reposer, sans la congeler, pendant 2 à 4 heures, et on répète l'analyse de la solution. On utilise les deux autres ampoules en matière plastique pour obtenir, de façon semblable, des données correspondant à de plus longs intervalles de temps.

Les résultats font apparaître un seul pic radiométrique correspondant au produit désiré, pour les échantillons congelés, pendant 60 heures. Le témoin (échantillon *non inhibé) et les deux échantillons contenant de l'alcool benzylique ou de l'éthanol présentent plusieurs pics radiométriques. Dans le tableau 1 est indiqué le pourcentage de radiation qui ne correspond pas au produit désiré, en fonction du temps écoulé depuis la reconstitution.

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Tableau 1

Inhibition de la dégradation radiolytique (100 mCi/ml)

Echantillon

Temps (heures)

Dégradation (%)

Témoin

0,25

0

M

1,17

0

II

4,3

0,4

II

6,3

0,9

II

12,25

4,9

II

24,0

18,3

A

10,2

0,1

A

25,5

2,6

B

9,2

0,5

i

B

26,2

18,2

I

8,25

0

I

10,9

0

II

22, 6

0

II

27,0

0

III

48,2

0

III

70,5

0,1

A : 0,9% de BzOH, comparatif

25 B : 5% d'EtOH, comparatif

I : congelé, décongelé à 8,25 h et analysé, laissé décongeler jusqu'à 10,9 h pour analyse

30 II : congelé, décongelé à 21 h, analysé à 22,6 h et.

à 27 h

III : congelé, décongelé à 48,2 h, analysé, recongelé, puis décongelé à nouveau à 70,5 h pour analyse.

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Les échantillons A et B ne font pas partie de l'invention, mais les échantillons I, II et III en font partie.

Les résultats sont également représentés sur la 5 figure 1.

Exemple A (comparatif : témoin)

On prépare des échantillons selon le protocole

I

décrit dans l'exemple I, sauf que l'activité spécifique de 153Sm vaut 30, 30 et 50 mCi/ml (Echantillons C, D et E, 10 respectivement). Les résultats sont indiqués dans le tableau A.

Ces résultats, ainsi que celui du témoin (100 mCi/ml) de l'exemple 1, sont représentés graphiquement sur la figure 2. Ce graphique démontre que la vitesse de la 15 dégradation radiolytique est proportionnelle à l'activité spécifique du radionucléide.

I

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Tableau A

Dégradation radiolytique non inhibée

Echantillon

Temps (heures)

Dégradation (%)

C

0,3

0

C

2,25

0

C

4,47

0

C

6,75

0

C

11,3

0

C

21,25

0,7

C

35,0

1,4

c

53,0

3,1

D

0,17

0

D

2,42

0

D

4,5

0

D

6,6

0

D

10,75

0

D

20,6

0,4

D

33,8

1,2

D

52,83

2,1

E

2,0

0

E

5,25

0

E

7,6

0

E

11,5

0,2

• E

25,5

0,7

E

47, 0

6,5

20

Exemple 2 : méthode A. pas d'addition de calcium

On prépare deux solutions, comme décrit dans l'exemple 1, excepté qu'elles contiennent 27 mCi/ml de

153Sm, et on les congèle de la même façon que dans

5 l'exemple 1. On conserve les échantillons dans un récipient rempli de carboglace pulvérisée. On prélève des

échantillons après avoir laissé la solution se décongeler,

puis on recongèle la solution. On utilise le protocole par

HPLC de l'exemple 1 pour analyser les échantillons. Après

10 70 heures de maintien à l'état congelé, on ne détecte pas de pics radiométriques autres que celui correspondant au produit souhaité.

Exemple 3 : méthode A

On introduit dans un becher, à l'aide d'une

15 pipette, 3 ml d'une solution contenant 70 mg/ml d'EDTMP. On ajuste le pH de la solution à 10,26 environ à l'aide d'une solution de NaOH à 50% (p/p). Après avoir placé la solution dans un flacon à sérum, on élimine l'eau dans une étuve à

vide. On prépare ainsi trois flacons ("kits d'EDTMP").

20 On reconstitue trois kits d'EDTMP de 6,0 ml,

préparés selon le protocole ci-dessus, à l'aide d'une solution de 3.10~4M de H0CI3 dans HCl 0,1N. Chaque kit est • 1 fi fi active avec ■LOOHo (150 /il) . On mesure le pH de chaque échantillon de solution de complexe, et on trouve qu'il 25 vaut de 7,6 à 7,7. A l'un de ces échantillons (échantillon IV), on ajoute, du CaCl2 pour obtenir un rapport molaire Ca:EDTMP valant 1:1. A un autre échantillon (échantillon

21

V), on ajoute du CaCl2 pour obtenir un rapport molaire Ca:EDTMP valant 2:1. Le troisième échantillon constitue le témoin (sans addition de CaCl2). L'échantillon IV, à la suite de l'addition de CaCl2, présente un pH de 7,06 et on 5 l'ajuste alors à pH 7,5 à l'aide de NaOH à 50% (p/p) . L'échantillon V, à la suite de l'addition de CaCl2, présente un pH de 6,6, et on l'ajuste alors à pH 7,5 à l'aide de NaOH à 50% (p/p). On trouve que le pourcentage de complexation vaut 99%, pour les trois échantillons.

10 On injecte par voie I.V., à trois groupes de trois rats Sprague-Dawley, 100 /xl chacun du témoin, de l'échantillon IV ou de l'échantillon V. On détermine la biodistribution au bout de deux heures, et les résultats sont indiqués dans le tableau 2.

15 Tableau 2

Pourcentages de la dose injectée (166Ho), dans divers tissus

20

25

a : chiffre obtenu en multipliant par 25 le pourcentage trouvé dans le fémur b : estimation (43% du poids du corps) 30 c : estimation (6,5% du poids du corps)

d : moyenne sur trois rats

Tissu

Témoin**

Echantillon IVe* (1:1)

Echantillon Ve* (2:1)

Squelette3

53

46

43

Foie

0,07

0, 05

0, 07

Rein

0,60

0,30

Rate

0,01

0, 01

Muscles*3

0,34

0,43

Sangc

0,08

0,20

0,22

22

Les données indiquent que la biodistribution est semblable pour les trois échantillons.

Exemple 4 ; méthode D

On prépare un kit contenant du calcium (Ca-kit) 5 (rapport molair,e ca: EDTMP = 1:1), en agitant les réactifs suivants, à pH 1,97 :

Tableau 3

10

Réactif g

mmole ml eau

—

30

EDTMP (96%)

2,198

4,84

—

Ca(OH)2 (95%)

0,3766

4,83

—

15 On ajuste ensuite le pH à l'aide de NaOH 0,1N. A pH

1,97, la solution est limpide. A pH 2,8-3, la solution est trouble. A pH 5,8 environ, la solution est limpide, ainsi qu'à pH 10,5 environ.

Le procédé préféré de préparation du Ca-kit 20 consiste à peser le Ca(OH)2 et 1'EDTMP solides dans un becher, à ajouter l'eau et à agiter jusqu'à obtenir une solution limpide, puis à ajuster le pH à une valeur supérieure à 6.

On peut ensuite ajuster le pH à 9,2 et lyophiliser 25 la solution pour obtenir la formulation désirée sous forme de kit. L'addition d'une solution de Sm au kit entraîne la formation du complexe 153Sm-EDTMP que l'on peut alors injecter.

23

Exemple 5 : méthode D

On prépare une formulation de 153Sm-EDTMP en reconstituant un Ca-kit de 3 ml obtenu dans 1'exemple 4 (rapport molaire Ca:EDTMP = 1:1). On reconstitue le kit en 5 utilisant une solution de Sm 3.10~4M dans HCl 0,1N, activée avec 153Sm, et l'on ajuste le pH à 7,8 (échantillon VI). On prépare une formulation de ^53Sm-EDTMP (Ca:EDTMP =2:1) en modifiant le protocole de l'exemple 4 de façon appropriée. On reconstitue le kit en utilisant une solution de Sm 3.10~ 10 4M dans HCl 0,1N, activée avec 153Sm, et on ajuste le pH à 7,2 (Echantillon VII)'. On reconstitue également un kit de 6 ml, en tant que témoin ne contenant pas de Ca, avec 6,0 ml d'une solution de Sm 3.10~4M dans HCl 0,1N, activée avec 153Sm, et on ajuste le pH à 7,5. Par chromatographie 15 d'échange de cations, on détermine que le pourcentage de Sm (tous isotopes confondus) se trouvant sous forme de complexe vaut plus de 99%.

A trois rats Sprague-Dawley, on injecte par voie I.V. 100 /il de solution de 153Sm-EDTMP. On sacrifie les 20 rats 2 heures après l'injection. On détermine la quantité d'activité dans plusieurs tissus, en comparant les comptages obtenus dans le tissu considéré (mesurés à l'aide d'un compteur de rayonnement gamma au Nal) aux comptages obtenus dans des volumes standard de 100 /il de la solution 25 de réserve, et les résultats sont indiqués dans le tableau 4.

A

24

Tableau 4

Pourcentages de la dose injectée (153Sm)/ dans divers tissus

Tissu

Témoin**

Echantillon VId (1:1)

Echantillon VIId (2:1)

Squelette3

44

37

38

Foie

0,14

0,15

0,20

Rein

0,36

0,48

Rate

0,01

0, 01

Muscles*3

0,53

0,60

0,96

Sangc

0,21

0,37

0,51

a : chiffre obtenu en multipliant par 25 le pourcentage trouvé dans le fémur b : estimation (43% du poids du corps)

15 c : estimation (6,5% du poids du corps)

d : moyenne sur trois rats

Exemple 6 ; méthode D

Un Ca-kit de 3 ml, tel que préparé dans l'exemple 4, est reconstitué avec 3,0 ml de solution de SmCl3 3.10~4M 20 dans HCl 0,1M. Sur 2 ml de la solution obtenue, on vérifie le pH et on trouve qu'il vaut entre 7,0 et 8,0, au moyen d'une bande à pH colorpHast®. La solution est activée avec 1 à 2 jul de solution de 153Sm, comme traceur. De façon semblable, on reconstitue un kit témoin, contenant du Na, 25 mais pas de Ca, préparé comme dans l'exemple 3. On congèle également, dans de la carboglace, un Ca-kit reconstitué de façon à ce qu'il contienne 48,3 mCi/ml de 153Sm. Au bout de 21 jours, on décongèle les formulations congelées et on les utilise.

30 A cinq rats Sprague-Dawley, on injecte par voie

25

10

15

I.V. 100 /il de la formulation témoin ; à cinq autres rats Sprague-Dawley, on injecte 100 /il de la formulation du Ca-kit, vieille de 21 jours et fraîchement décongelée ; et à quatre autres rats Sprague-Dawley, on injecte 100 /il de solution de la formulation du Ca-kit (avec le traceur

153

Sm) .

On sacrifie les rats 2 heures après l'injection. On détermine la quantité d'activité dans plusieurs tissus, en comparant les comptages obtenus dans le tissu considéré (mesurés à l'aide d'un compteur gamma à Nal) aux comptages obtenus dans des volumes standard de 100 jul de la solution de réserve. Les doses calculées dans plusieurs tissus sont indiquées dans le tableau 5 ci-dessous.

Tableau 5

Pourcentages de la dose injectée (153Sm), dans divers tissus

Tissu

Témoin" sans Ca

Ca-kit congelé, vieux de 21 jours"

Ca-kit fraîchement activée

Squelette3

53

50

Foie

0,24

0,21

Rein

0,49

0,41

Rate

0,01

Muscles13

1,18

0,92

Sangc

0,16

0,21

0,20

20

25

30

pourcentage trouvé dans le fémur b : estimation (43% du poids du corps) c : estimation (6,5% du poids du corps) d : moyenne sur cinq rats e : moyenne sur quatre rats par 25 le

26

Exemple 7 ; méthode D

!

Dans un becher de 600 ml, contenant un barreau magnétique agitateur, on verse 18,210 g (40,126 mmoles) 5 d'EDTMP, 2,678 g (36,140 mmoles) de Ca(OH)2 et 400 ml d'eau. On agite le mélange à la température ambiante pendant 1 heure, au bout de laquelle la plus grande partie des matières solides est dissoute. On élève lentement le pH à l'aide d'une solution de NaOH à 50%, tout en poursuivant 10 l'agitation jusqu'à ce que toutes les matières solides soient dissoutes. Une fois le mélange devenu homogène, on élève lentement la valeur du pH jusqu'à 9,2 à l'aide d'une solution de NaOH à 50%. La solution devient trouble à pH 3,6 et redevient homogène à pH 5,8. On transfère la 15 solution dans une fiole jaugée de 500 ml et on complète le volume à 500 ml en ajoutant de l'eau. Le pH vaut alors 9,17. On filtre ensuite la solution sur un filtre de 0,45 micron et on la distribue dans un grand nombre de kits de 3, de 6 ou de 18 ml. On congèle les kits à l'aide d'un bain 20 d'acétone et de carboglace, puis on les place dans un appareil de lyophilisation. Au bout de 4 jours, on en retire les kits, qui sont alors mis sous vide, scellés, étiquetés et emmagasinés.

On reconstitue un Ca-kit de 3 ml, puis parmi ceux 25 préparés ci-dessus, ainsi qu'un kit témoin (Na) chacun à l'aide de 3 ml d'une solution de Sm 3.10~4M dans HCl 0,1M, activée avec 153Sm en quantité correspondant à celle d'un traceur (1 à 2 /x 1) . On détermine le pourcentage de complexe

27

par chromatographie d'échange de cations, et on trouve qu'il vaut, dans chaque cas, plus de 99%. Dans les deux cas, le pH de la solution vaut entre 7 et 8. On prélève trois fractions de 100 /il de chacun des kits, pour les 5 utiliser comme échantillons standard.

A cinq rats Sprague-Dawley (150-200 g) , on injecte par voie I.V. 100 /il du Cà-kit reconstitué, et on injecte à quatre rats Sprague-Dawley 100 /il du kit témoin reconstitué. Au bout de 2 heures, on sacrifie les rats et 10 on prélève des échantillons de tissus. Ces échantillons de tissus sont soumis à un comptage, ainsi que les échantillons standard, et on détermine la biodistribution. Les résultats sont indiqués dans le tableau 6.

Tableau 6

15 Pourcentages de la dose injectée (153Sm), dans divers tissus

Tissu

Ca-kit, % de dos!

Kit témoin (jNa) % de dose

Os

50

53

Foie

0,21

0,24

Rein

0,41

0,49

Rate

0,01

0, 01

Muscles

0,92

1,18

Sang

0,02

0,16

Urinec

52

51

a : moyenne sur 5 rats b : moyenne sur 4 rats c : trouvée dans le papier qui se trouvait dans la 30 cage

28

Il apparaît que les deux formulations donnent des biodistributions équivalentes.

Exemple 8 et exemple comparatif B : méthode D

Quand on compare la formulation de Ca-kit à la 5 formulation de Na-kit, les deux formulations étant administrées à des rats Sprague-Dawley par injection I.V. rapide, le Ca-kit présente une DL50 3,5 fois plus grande que celle du Na-kit. Les deux kits sont préparés selon le protocole de l'exemple 5. Les résultats de biodistribution 10 obtenus avec ces kits . sont semblables. Grâce à l'augmentation de la DL50, le Ca-kit offre un facteur de sécurité supplémentaire.

Exemple 9 : méthode D

On prépare une formulation de 153Sm-EDTMP en 15 reconstituant un kit de 3 ml, préparée selon le protocole de l'exemple 3. On reconstitue ce kit en ajoutant 3 ml d'une solution de 153Sm dans HCl 0,1M. Le kit reconstitué contient 3.10~4M de Sm et 35 mg/ml d'EDTMP.

Par chromatographie d'échange de cations, on 20 détermine que le pourcentage de Sm se trouvant sous forme de complexe est supérieur à 99%. Deux rats Sprague-Dawley reçoivent une ihjection I.M. dans la cuisse droite, et deux autres rats reçoivent une injection S.C. au niveau du cou, au-dessus de la clavicule. Chaque rat reçoit 100 /il de 25 solution de 153Sm-EDTMP.

On sacrifie les rats 2 heures après l'injection. On détermine la quantité d'activité dans plusieurs tissus en

29

comparant les comptages obtenus pour le tissu considéré (mesurés à l'aide d'un compteur gamma à Nal) aux comptages obtenus pour des volumes standard de 100/xl de la solution de réserve. Dans le tableau 7 ci-dessous, on indique la 5 dose trouvée dans plusieurs tissus et on la compare à celle obtenue à la suite d'injections I.V. exécutées de façon similaire.

Tableau 7

Pourcentages de la dose injectée (153Sm), dans divers 10 tissus

Tissu

1

S.C.d

I.M.d

I. V.d

Squelette3

49

45

50

Foie

0,14

0,35

0,14

Rein

0,32

0,36

Rate

0,006

0,005

0, 001

Musclesb

0,40

0,053

0,22

Sangc

0,45

0,35

0,12

20 a : chiffre obtenu en multipliant par 25 le pourcentage trouvé dans le fémur b : estimation (43% du poids du corps)

c : estimation (6,5% du poids du corps)

d : moyenne sur 2 rats

25 Les résultats donnés dans le tableau 7 indiquent que les biodistributions sont semblables, indépendamment du mode d'administration.

Exemple 10

On reconstitue 5 kits d'EDTMP de 3 ml, préparés 30 selon le protocole de l'exemple 4, à l'aide des solutions

30

indiquées dans' le tableau 8, et on mesure le pH des solutions obtenues.

Tableau 8 Concentrations

[Ca]

[HCl]

pH

M

0,0375

0,087

7,42±0,03

0,060

0, 072

7,40 ± 0 , 06

0,070

0,065

7,39 ± 0,05

10 Les solutions contiennent environ 1 mCi/ml de

1 C')

Sm, et elles présentent une concentration totale de Sm de 3.10~4M, ainsi que la concentration de Ca indiquée dans le tableau ci-dessus pour chaque échantillon, et l'on détermine que le rendement en complexe vaut plus de 99% 15 pour chaque échantillon.

On utilise les solutions acides contenant Ca, décrites dans le tableau 8, pour titrer des kits existants d'EDTMP de 3,0 ml, afin d'étudier l'effet du volume de solution utilisée pour la reconstitution sur le pH final. 20 On ajoute 2 ml de chaque solution à chaque kit, et on mesure le pH. On ajoute 2,0 ml supplémentaires, en fractions de 200 /il, en mesurant le pH après chaque addition. Les résultats obtenus montrent que, pour toutes les solutions, on peut ajouter jusqu'à 3,6 ml de solution à 25 un kit de 3,0 ml, sans que le pH s'abaisse à une valeur inférieure à 7,0.

On a étudié l'effet de l'addition de Ca sur l'osmolalité des kits reconstitués. On utilise les

31

solutions indiquées dans le tableau 8 pour reconstituer des kits d'EDTMP de 3,0 ml. Après la reconstitution, on mesure le pH de la solution et on en détermine l'osmolalité en mesurant l'abaissement du point de congélation. Les 5 résultats sont indiqués dans le tableau 9.

Tableau 9

Effet de l'addition dé calcium sur la molalité de la solution

10

15

tels qu'ils sont formulés, sont hypertoniques et que l'addition de Ca aux solutions de radionucléide utilisées pour reconstituer les kits ne fait que faiblement augmenter 20 1'hypertonicité. Quand on discute de l'influence de la formulation sur la voie d'administration de médicaments, on sait qu'avec des solutions injectées par voie intraveineuse, 1'isotonicité prend moins d'importance, pourvu que l'administration soit assez lente pour permettre 25 une dilution ou un ajustement de la concentration dans le sang (voir par exemple P.P. DeLuca et J.C. Boylan, "Formulation of Small Volume Parenterals in Pharmaceutical Dosage Forms", Parenteral Médications Vol. 1, p. 140, Eds.

[Ca]

[HCl]

PH

Molalité

% d'isotonicité

0

0,11

7,50

0,491

164

0,0375

0,087

7,40

0,558

186

0,060

0,072

7,35

0,595

198

0,070

0,065

7,35

0, 606

202

Les données du tableau 9 montrent que les kits,

32

K.E. Avis, L. Lachman, et H.A. Lieberman, publié par Marcel Dekker Inc., N.Y. (1984)).

Exemple 11 : méthode D

Afin de déterminer les effets aigus de 153Sm-Na-5 EDTMP et de 153Sm-(Ca/Na)-EDTMP sur le rythme cardiaque, le pouls et les concentrations de calcium dans le sérum, peu après une injection par voie I.V. à des chiens Beagle, on réalise l'expérience suivante. On a également déterminé les effets du débit de perfusion.

10 On prépare le 153SmrNa-EDTMP, échantillon VIII, à

partir de 630 mg d'EDTMP et de 414 mg de NaOH, et après lyophilisation et stérilisation, on le reconstitue avec une solution stérile de Sm 3.10~4M dans HCl 0,1M.

On prépare le 153Sm-(Ca/Na)-EDTMP, échantillon IX, 15 à partir de 630 mg d'EDTMP, 245 mg de NaOH et 95 mg de Ca(OH)2, et après lyophilisation et stérilisation, on le reconstitue avec une solution stérile de Sm 3.10~4M dans HCl 0,01M.

On prépare chaque complexe utilisé pour l'injection 20 en ajoutant 18,0 ml de solution de Sm à la formulation d'EDTMP lyophilisée concernée. La concentration finale de la formulation vaut 35 mg/ml du complexe Sm-EDTMP. Les formulations sont utilisées dans les 15 minutes suivant leur préparation, les restes des solutions étant congelés 25 aux fins d'analyse. L'analyse des formulations utilisées pour les injections confirme que les solutions injectées présentaient bien les concentrations visées.

33

On utilise des chiens Beagle, jeunes adultes mâles âgés d'environ 33 semaines et pesant de 8,1 à 10,9 kg. On soumet les chiens à un examen physique complet par un vétérinaire, on les laisse s'acclimater à l'environnement 5 du laboratoire pendant au moins 3 0 jours, et on les revaccine contre la maladie de Carré, l'hépatite à adénovirus de type 2, le virus parainf luenza et le parvovirus, à l'aide d'Adenoimmune®-7-L (fabriqué par Tech

I

America, Biologics Corp.)» Les chiens sont identifiés 10 individuellement grâce à un numéro unique tatoué dans l'oreille par le fournisseur. Les chiens sont traités dans les limites des protocoles établis par 1'American Association for the Accréditation of Laboratory Animal Care). Le laboratoire utilisé pour les essais est 15 accrédité.

Un unique chien mâle à jeun, choisi au hasard, reçoit par voie I.V. une dose de 30 mg/(kg de poids corporel) de l'échantillon VIII ou IX, au moyen d'un cathéter inséré dans la veine céphalique. Le site 20 d'injection a été rasé et préparé à l'aide d'une solution antiseptique, avant l'introduction du cathéter. Le débit d'injection vaut environ 2,0 ml/min (70 mg/min), de sorte que l'injection prend environ quatre minutes.

Deux autres chiens Beagle mâles reçoivent la même 25 dose de l'échantillon VIII ou IX, aussi rapidement que possible, c'est-à-dire avec un débit d'environ 15 ml/min. Les protocoles de perfusion sont ceux indiqués ci-dessus.

I

On effectue ceci environ 2 semaines après la première injection, pour vérifier les résultats donnés précédemment, concernant le débit de perfusion.

On prélève, dans la veine jugulaire, des 5 échantillons de sang destinés aux dosages du calcium et de l'ensemble des protéines dans le sérum, immédiatement avant l'injection et après la fin de l'injection, ainsi qu'environ 5, 15, 30 et 45 minutes et 1, 2 et 4 heures après l'injection. La face ventrale du cou est rasée et 10 préparée avec une solution antiseptique, comme ci-dessus. On surveille les effets cliniques chez le chien pendant ce laps de temps, et on enregistre le rythme cardiaque et le pouls à chacun de ces instants.

Comme chaque chien, pris individuellement, est 15 soumis à un régime de traitement particulier, un tableau global semble inapproprié. Toutefois, les injections I.V. lentes, à un débit de 2,0 ml/min (70 mg/min) du complexe Sm-EDTMP) , à une dose de 30 mg/ (kg de poids corporel) de l'un ou l'autre des échantillons VIII et IX ne produisent 20 aucun signe clinique. Le rythme cardiaque augmente de 7 à 10% pour chacune des formulations ; toutefois, on considère que ce résultat ne représente qu'une réponse à une excitation, puisque le rythme cardiaque canin peut varier nettement en réponse à des stimulations provenant de 25 l'environnement. Bien que l'on observe des variations minimes du taux global de calcium dans le sérum, il est difficile d'attribuer ces variations au traitement.

35

Quand on augmente le débit d'injection à la limite de ce qui est praticable (environ 15 ml/min) , on observe des signes cliniques avec chacun des échantillons. Chez le chien qui reçoit l'échantillon VIII, on observe des 5 mouvements musculaires involontaires, essentiellement de petits tremblements de tous les muscles, accompagnés d'une respiration précipitée et de gémissements. On observe ces effets pour la première fois environ 2 0 secondes après le début de l'injection, et ils durent environ 2 minutes. Le 10 chien a l'air normal environ 5 minutes après l'injection. Pendant ce même laps de temps, le rythme cardiaque augmente de plus de 50%. Le taux global de calcium dans le sérum diminue pendant ce laps de temps ; toutefois, cette diminution est relativement faible et s'accompagne de 15 variations semblables de la concentration totale de protéines dans le sérum. Il est impossible d'attribuer à l'injection un quelconque effet définitif sur le taux global de calcium.

Bien que le chien recevant l'échantillon IX 20 présente également des signes cliniques, il n'est pas certain que ces mouvements soient involontaires, comme cela semble être le cas pour le chien recevant l'échantillon VIII, car ces mouvements sont caractéristiques d'une résistance à une contrainte. La période d'activité accrue 25 du chien ne dure qu'environ 30 secondes, et le chien semble normal environ 100 secondes après l'injection. Le rythme cardiaque n'augmente que d'environ 13%. Le taux de calcium

36

dans le sérum augmente au cours de la période suivant l'injection, mais des variations concomitantes du taux global de protéines rendent ce résultat difficile à interpréter.

5 En résumé, les chiens recevant 3 0 mg/kg de l'échantillon VIII ou IX par injection I.V. lente ne présentent pas d'effets que l'on puisse attribuer à l'injection. Quand l'injection est administrée rapidement, on observe des signes cliniques dans le cas de chaque 10 échantillon. Ces effets sont, plus prononcés dans le cas de l'échantillon VIII que dans celui de l'échantillon IX.

D'autres modes de réalisation de l'invention seront évidents pour l'homme de l'art, à la lecture de cette description ou lors de la mise en pratique de cette 15 invention. Il est bien entendu que la présente description,

ainsi que les exemples, ne doivent être considérés qu'à

!

titre d'exemple et que le cadre et l'esprit de l'invention sont indiqués par les revendications annexées.

37

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé de préparation d'une formulation de produit radiopharmaceutique, caractérisé en ce qu'il comporte la réaction d'un radionucléide avec un ligand ou ses sels physiologiquement acceptables, la congélation du complexe obtenu, puis la décongélation du complexe avant utilisation.

2. Procédé conforme à la revendication 1, caractérisé en ce que la congélation est effectuée à l'aide d'azote liquide.

3. Procédé conforme à la revendication 1, caractérisé en ce que la congélation est effectuée à l'aide de carboglace.

4. Procédé conforme à la revendication 1, caractérisé en ce que la congélation est effectuée à l'aide d'un mélange d'acétone et de carboglace.

5. Procédé conforme à la revendication 1, caractérisé en ce que le radionucléide est du samarium-153, du holmium-166, de 1'ytterbium-175, du lutetium-177, de l'yttrium-90 ou du gadolinium-159.

6. Procédé conforme à la revendication 5, caractérisé en ce que le radionucléide est du samarium-153 ou du holmium-166.

7. Procédé conforme à la revendication 6, caractérisé en ce que le radionucléide est du samarium-153.

8. Procédé conforme à l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le ligand

38

est de l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique, de l'acide diéthylènetriaminepentaméthy lènephosphonique, de 1'acide hydroxyéthyléthylènediaminetriméthylène-

phosphonique, de l'acide nitrilotriméthylènephosphonique, de l'acide tris(2-aminoéthyl)aminehexaméthylène-

phosphonique, de l'acide 1-carboxyéthylènediaminetétra-méthylènephosphonique, de l'acide bis(aminoéthylpipérazine) -tétraméthylènephosphonique, ou de l'acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécanetétraméthylènephosphonique, ou leurs sels physiologiquement acceptables.

9. Procédé conforme à la revendication 8, caractérisé en ce que le ligand est de l'acide éthylène-diaminetétraméthylènephosphonique, de l'acide diéthylène-triaminepentaméthylènephosphonique, de l'acide hydroxy-éthyléthylènediaminetriméthylènephosphonique, de l'acide tris(2-aminoéthyl)aminehexaméthylènephosphonique, de 1 ' acide 1-carboxyéthylènediaminetétraméthy lènephosphonique, de l'acide bis(aminoéthylpipérazine)tétraméthylènephosphonique, ou de l'acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécane-tétraméthylènephosphonique, ou leurs sels physiologiquement acceptables.

10. Procédé conforme à la revendication 9, caractérisé en ce que le ligand est de l'acide éthylène-diaminetétraméthylènephosphonique ou ses sels physiologiquement acceptables.

11. Procédé conforme à la revendication 10, caractérisé en ce que le radionucléide est du samarium-153.

39

12. Procédé conforme à la revendication 10, caractérisé en ce que le radionucléide est du holmium-166.

13. Procédé conforme à l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'un métal

5 divalent a été ajouté, selon l'un quelconque des protocoles suivants :

A) addition d'un métal divalent à un complexe ligand-métal radioactif, tel que revendiqué dans la revendication 1, avant la congélation de la formulation ;

10 ou

B) congélation, puis décongélation d'un complexe ligand-métal radioactif, tel que revendiqué dans la revendication 1, puis addition du métal divalent ; ou

C) recongélation, puis décongélation de la 15 formulation du protocole B ; ou

D) addition d'un métal divalent à une solution d'un ion métallique radioactif, puis addition d'un ligand à la solution radioactive pour former le complexe, congélation du complexe et décongélation avant utilisation ; ou

20 E) addition d'un métal divalent, sous forme de son chlorure ou de son hydroxyde, à un ligand, puis ajustement du pH avec une base, lyophilisation de la solution pour former une formulation lyophilisée de ligand-métal divalent, reconstitution de la formulation à l'aide d'une 25 solution acide1 contenant l'ion métallique radioactif, congélation du complexe, puis décongélation avant utilisation.

40

14. Procédé de préparation d'une formulation de produit radiopharmaceutique contenant un métal divalent et un radionucléide complexé avec un ligand, caractérisé en ce qu'il comporte l'un quelconque des protocoles suivants :

5 A) addition d'un métal divalent à un complexe ligand-métal radioactif tel que revendiqué dans l'une quelconque des revendications 1 à 12 ; ou

B) addition d'un métal divalent à une solution d'un ion métallique radioactif, puis addition d'un ligand à la

10 solution radioactive pour former le complexe ; ou

C) administration simultanée, à un animal, d'une formulation de produit radiopharmaceutique et d'une solution d'ion métallique divalent, grâce à deux injections séparées réalisées à peu près au même moment ; ou

15 D) addition d'un métal divalent, sous forme de son chlorure ou de son hydroxyde, à un ligand, puis ajustement du pH avec une base ; ou

E) lyophilisation de la solution du protocole D pour former une formulation lyophilisée de ligand-métal

20 divalent, et reconstitution de la formulation à l'aide d'une solution acide contenant l'ion métallique radioactif.

15. Procédé conforme à la revendication 14, caractérisé en ce que le métal divalent est Fe2+, Mn2+, ou un ion de métal alcalino-terreux.

25

16. Procédé conforme à la revendication 15,

caractérisé en ce que l'ion de métal alcalino-terreux est Be2+, Mg2+, Ca2+, Sr2+ ou Ba2+.

41

17. Procédé conforme à la revendication 16, caractérisé en ce que l'ion de métal alcalino-terreux est Ca2+.

I

18. Procédé conforme à l'une quelconque des 5 revendications 14 à 17, caractérisé en ce que le ligand est de 1'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique.

19. Procédé conforme à la revendication 18, caractérisé en ce que le rapport molaire du métal divalent à l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique vaut de

10 0,25 à 1.

20. Procédé conforme à la revendication 19, caractérisé en ce que le rapport molaire du métal divalent à l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique vaut de 0,5 à 1.

15

21. Procédé conforme à la revendication 20,

caractérisé en ce que le rapport molaire du métal divalent à l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique vaut de 0,75 à 1.

22. Procédé conforme à la revendication 21,

20 caractérisé en ce que le rapport molaire du métal divalent

à l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique vaut de 0,9 à 1.

23. Procédé conforme à la revendication 22, caractérisé en ce que le métal divalent est Ca2+.

25

24. Procédé conforme à la revendication 14,

caractérisé en ce que l'on suit le protocole E et que la solution acide présente une concentration d'acide

42

chlorhydrique valant de 0,001 à IN.

25. Procédé conforme à la revendication 24, caractérisé en ce que la solution acide présente une concentration d'acide chlorhydrique valant de 0,01 à 0,1N.

5

26. Procédé conforme à la revendication 14,

caractérisé en ce que le radionucléide est du samarium-153, du holmium-166, de l'ytterbium-175, du lutétium-177, de l'yttrium-90 ou du gadolinium-159.

27. Procédé conforme à la revendication 26, 10 caractérisé en ce que le radionucléide est du Samarium-153

ou du holmium-166.

28. Procédé conforme à la revendication 27, caractérisé en ce que le radionucléide est du samarium-153.

29. Procédé conforme à l'une quelconque des 15 revendications 14 à 28, caractérisé en ce que le ligand est de l'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique, de l'acide diéthylènetriaminepe'ntaméthylènephosphonique, de 1'acide hydroxyéthyléthylènediaminetriméthylène-

phosphonique, de l'acide nitrilotriméthylènephosphonique, 20 de l'acide tris(2-aminoéthyl)aminehexaméthylène-

phosphonique, de l'acide 1-carboxyéthylènediaminetétra-méthylènephosphonique, de l'acide bis(aminoéthylpipérazine) tétraméthylènephosphonique ou de l'acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécanetétraméthylènephosphonique, 25 ou leurs sels physiologiquement acceptables.

30. Procédé conforme à la revendication 29, caractérisé en ce que le ligand est de l'acide

43

éthylènediaminetétraméthylènephosphonique, de l'acide diéthylènetriaminepentaméthylènephosphonique, de l'acide hydroxyéthyléthylènediaminetriméthy lènephosphonique, de

1 ' acide tris (2-aminoéthyl) aminehexaméthylènephosphonique, 5 de l'acide 1-carboxyéthylènediaminetétraméthylène-

phosphonique, de l'acide bis(aminoéthylpipérazine)tétraméthylènephosphonique, ou de l'acide 1,4,7,10-tétraazacyclododécanetétraméthylènephosphonique, ou leurs sels physiologiquement acceptables.

10

31. Procédé conforme à la revendication 30,

caractérisé en ce que le ligand est de l'acide éthylène-diaminetétraméthylènephosphonique ou ses sels physiologiquement acceptables.

32. Procédé conforme à la revendication 14,

15 caractérisé en ce que l'on utilise le complexe de samarium-

153 et d'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique ou ses sels physiologiquement acceptables.

33. Procédé conforme à la revendication 14, caractérisé en ce que l'on utilise le complexe de Holmium-

20 166 et d'acide éthylènediaminetétraméthylènephosphonique ou de l'un de ses sels physiologiquement acceptables.