MC1475A1

MC1475A1 - Procede de preparation de derives de la purine a action anti-virale

Info

Publication number: MC1475A1
Application number: MC821601A
Authority: MC
Inventors: Howard John Schaeffer
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1981-08-11
Filing date: 1982-08-10
Publication date: 1983-06-17
Also published as: ES514877A0; NO822725L; AU569462B2; PH20148A; FI76086B; ZW16882A1; GR76891B; PL141198B1; PT75406B; DE3278501D1; ES8504802A1; NO158539B; EP0072027A1; DD202717A5; PL141281B1; EP0072027B1; DK154561B; CS594082A2; PL247393A1; JPH04989B2

Description

%

La présente invention concerne des dérivés antiviraux de la purine qui contiennent une chaîne latérale acyclique en position 9. L1 invention 'concerne également des procédés pour effectuer la synthèse de ces composés, des compositions phar-5 maceutiques et vétérinaires les contenant, et leur utilisation dans le traitement d'infections virales chez les mammifères.

Ogilvie et Gillen décrivent dans Tétrahedron Letters, 21 , 1980, pages 327-330, la synthèse des dérivés bis-(hydroxy-méthyl)méthoxyméthylés de l'adénine, mais aucune activité bio-10 logique n'est révélée. Dans cette référence, le composé a été testé avec de 1'adênosine-désaminase et l'on a trouvé qu'il constitue un substrat médiocre pour l'enzyme et un faible inhibiteur de compétition.

La [(hydroxy-2 hydroxyméthyl-1 éthoxy)méthy1]-9 guanine 15 et l'analogue amino-6 correspondant sont englobés dans la formule générale du brevet GB N° 1 523 865, mais il n'y sont pas décrits spécifiquement. Le brevet GB N° 1 523 865 décrit un groupe de nucléosides acycliques, en particulier les dérivés (hydroxy-2 éthoxyméthyl)-9 de la purine, qui se sont avérés 20 présenter de l'activité anti-virale, in vitro et chez l'être vivant, contre diverses classes de virus à ADN et à ARN. En particulier, ces composés possèdent de l'activité contre le groupe de virus de l'herpès, qui comprend H. simplex, H.zoster et H.varicella. Ces virus provoquent des maladies comme la 25 kératite herpétique, l'encéphalite herpétique, l'herpes a fri-gore, le zona et les infections génitales. Parmi les composés spécifiquement révélés dans le brevet GB N° 1.523.865, la (hydroxy-2 éthoxyméthyl)guanine, connue également sous le nom de "acyclovir", s'est avérée particulièrement active contre 30 de nombreuses infections dues à H. simplex,mais ce composé présente l'inconvénient d'être médiocrement soluble dans les systèmes aqueux.

Il vient d'être trouvé de façon inattendue que, contrairement à d'autres composés décrits dans le brevet GB N° 35 1 523 865 et essayés jusqu'à présent, les composés répondant

à la formule (I) ci<-dessous ont une utile activité anti-virale, suffisante pour traiter sur l'être vivant une rhinopneumonite équine. Dans des expériences sur des souris, on a également trouvé que les composés possèdent une activité avantageuse fP

10

contre l'encéphalite herpétique. En outre, ces composés ont l'avantage sélectif d'une plus grande solubilité dans l'eau en comparaison de acyclovir, ce qui améliore la possi-

t bilité de pouvoir obtenir des taux élevés du produit dans le plasma sans risques de complications rénales.

Selon la présente invention, celle-ci propose des composés de formule :

(I)

CH_XCHCH_OH

z I

CH2OH

15 (dans laquelle R est un groupe hydroxyle ou amino et X est un atome d'oxygène ou de soufre) et leurs sels et esters physiologiquement acceptables.

Des exemples de composés de formule (I) comprennent : la [(hydroxy-2 hydroxyméthyl-1 éthoxy)méthyl]9-guanine, et 20 la [(hydroxy-2 hydroxyméthyl-1 éthoxy)méthyl]-9 diamino-2,6 purine.

Comme mentionné ci-dessus, les composés de formule (I) ont l'avantage important de présenter une plus grande solubilité dans l'eau que acyclovir. Ainsi, les composés de 25 formule (I), dans laquelle X est un atome d'oxygène et X est un groupe hydroxyle ou un groupe amino, ont des solubilités de 0,4 à 0,5 % et de 2 à 3 % en poids/poids respectivement en comparaison d'une valeur de 0,14 % en poids/poids pour acyclovir.

30 Des sels des composés de formule (I), que l'on peut commodément utiliser dans un traitement, comprennent des sels physiologiquement acceptables d'acides organiques comme l'acide lactique, l'acide acétique, l'acide malique ou l'acide p-toluène-sulfonique, ainsi que les sels physiologiquement 35 acceptables d'acides minéraux comme l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.

Des esters des composés de formule (I) que l'on peut commodément utiliser dans un traitement comprennent ceux comportant un groupement formyloxy ou alcanoyloxv ayant 1 à 16 4 0 atomes de carbone, par exemple 1 à 6 atomes de carbone (par

if exemple acétoxy ou propionyloxy), aralcanoyloxy éventuellement substitué (par exemple phényl-alcanoyloxy dont le groupe alcanoyle comporte 1 à 4 atomes de carbone, comme phényla-

i cétoxy) ou aroyloxy éventuellement substitué (par exemple 5 benzoyloxy ou naphtoyloxy) ester sur l'une des positions terminales, ou sur les deux positions terminales de la chaîne latérale fixée en position 9 des composés de formule (I). Les groupes aralcanoyloxy et aroyloxy précités peuvent être substitués, par exemple par 1 ou plusieurs atomes d'halogène (par 10 exemple le chlore ou le brome) ou par des groupements amino, nitrile ou sulfamido, le fragment aryle du groupement contenant avantageusement 6 à 10 atomes de carbone.

La présente invention comporte également des bioprécurseurs des composés de formule (I) et leurs sels et esters 15 physiologiquement acceptables, c'est-à-dire des composés qui sont transformés dans l'être vivant en des composés de formule (I) et en leurs dérivés précités.

On peut préparer de façon classique les composés de formule (I) et leurs sels et esters par des procédés analo-20 gues à ceux de la préparation de composés de structure semblable comme les procédés décrits dans le brevet précité GB N° 1 523 865.

Dans un second aspect de la présente invention, celle-ci propose un procédé pour préparer des composés de formule 25 (I) et leurs sels et esters physiologiquement acceptables, procédé caractérisé en ce que :

a) on enlève le groupe de blocage d'un composé de formule (II) :

30

(II)

CH2XCHCH2OH CH OW 1

35 (dans laquelle X a la définition ci-dessus et W et W"*" représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe de blocage ; Y est un atome d'hydrogène ou un groupe de blocage et Z est un groupe de formule -OY ou -NHY dans laquelle Y a le sens défini ci-dessus, à la condition qu'au moins l'un des symboles

«

W, W et Y représente un groupe de blocage) pour former un composé de formule (I) ou un sel ou ester d'un tel composé ; b) on transforme un composé de formule (III) :

10

20

(III)

hî2XCHCH2OH iH2OH

(dans laquelle X a le sens défini ci-dessus et M est un groupe hydroxy-6 ou amino et G est un atome ou groupe pouvant être remplacé par un groupe amino ou transformé en un groupe amino, ou bien G est un groupe amino-2 et M est un atome ou groupe 15 pouvant être remplacé par un groupe amino ou hydroxyle ou transformé en un groupe amino ou hydroxyle), ou son sel ou ester, en un composé de formule (I) ou en son sel ou ester ; c) on réduit, par un procédé connu en soi, un composé de formule (IV) :

25

(IV)

CKLXCHCH-OH 2 l 2

CHO

(dans laquelle R et X ont le sens défini ci-dessus) ,ou un sel ou ester de ce composé ;

3 0 d) on fait réagir un composé de formule (V) :

6

(dans laquelle R a le sens défini ci-dessus et Q est un groupe ou atome pouvant être scindé) avec un composé de formule (VI) :

(VI)

A CH2 X CH CH2 OH

ch2 OH

10

15

20

25

30

35

40

(dans laquelle X a le sens défini ci-dessus et A est un groupe ou atome pouvant se scinder),

e) on effectue l'hydrolyse d'un composé de formule (VII) :

(VII)

c=o

(dans laquelle R et X ont le sens défini ci-dessus) et éven-teuellement, on effectue une ou plusieurs des transformations suivantes, dans n'importe quel ordre voulu :

i) lorsque le produit résultant est une base, on transforme la dite base en son sel d'addition d'acide physiologiquement acceptable ;

ii)lorsque le produit résultant est un sel d'addition d'acide, on transforme ce sel en la base apparentée ;

ili) lorsque le produit résultant est un composé de formule (I) ou son sel, on transforme ledit composé ou son sel en un ester physiologiquement acceptable de ce composé ou de ce sel ; et iv)lorsque le produit résultant est un ester d'un composé de formule (I), on transforme cet ester en le composé apparenté de formule (I), ou en son sel physiologiquement acceptable.

Dans le procédé a), les groupes de blocage W, W1 et Y peuvent être choisis par exemple parmi les groupes acyles comme des groupes alcanoyles ayant 1 à 4 atomes de carbone, par exemple des groupes acétyle, aroyles,par exemple benzoyle ;

?"

des groupes arylméthyles, par exemple benzyle ; ou tri-alkyl-

silyles (1 à 4 atomes de carbone dans le groupe alkyle), par exemple un groupe triméthylsilyle. Des groupes arylméthyles i

de blocage peuvent être enlevés par exemple par hydrogénolyse, 5 par exemple par hydrogénation en présence de nickel de Raney ou d'un catalyseur à base de palladium ou en utilisant du sodium dans de l'ammoniac liquide. Les groupements acyle6 de blocage peuvent être enlevés par exemple par hydrolyse en utilisant, par exemple une aminé comme la méthylamine ou la 10 triéthylamine, avantageusement dans un milieu aqueux. Des groupes trialkylsilyles de blocage peuvent être enlevés, par solvolyse, par exemple à l'aide d'ammoniac en milieu aqueux ou alcoolique ou par alcoolyse.

On peut effectuer de diverses façons la transforma-15 tion d'un composé de formule (III) en un composé de formule (I), par le procédé b). Par exemple M et/ou G peuvent représenter chacun un groupe azide qui peut être réduit en un groupe amino par hydrogénation catalytique lorsqu'on utilise un catalyseur convenable comme du palladium. En variante, M

2 0 et/ou G peuvent représenter chacun un atome d'halogène ou un groupe alkylthio ou alkylsulfonyle, que l'on peut transformer en un groupe amino par aminolyse en utilisant par exemple de l'ammoniac. Pour la préparation du composé de formule (I),

dans laquelle R est un groupe hydroxyle, on peut transformer 25 un composé de formule (III), dans laquelle M est un groupe amino, par exemple par traitement avec l'acide nitreux. En variante, on peut transformer un composé de formule (III),

dans laquelle M est un groupe mercapto ou alkylthio, en un composé de formule (I), dans laquelle R est un groupe hydroxyle,

3 0 par oxydation et hydrolyse réalisées de façon classique. De même,

peut transformer un composé de formule (III), dans laquelle M est un halogène, en un composé de formule (I), dans laquelle R est un groupe hydroxyle, par traitement avec du mercapto-2 éthanol et un alcoolate de métal alcalin, par exemple le 35 méthylate de sodium.

Ces procédés, ainsi que d'autres procédés classiques,

sont décrits dans "Fused Pyrimidines", partie II, Purines,

publié par D.J. Brown (1971) chez Wiley-Interscience. Dans une autre variante, on peut transformer un composé de formule

t

(III), dans laquelle M est un groupe amino, en un composé de formule (I), dans laquelle R est un groupe hydroxyle, par traitement avec une enzyme de désamination comme l'adénosine i

désaminase.

5 On peut effectuer, par exemple, la réduction d'un composé de formule (IV) dans le procédé c) par réaction avec un agent approprié de réduction en un aldéhyde comme du boro-hydrure de sodium, du cyanoboro-hydrure de sodium, du boro-hydrure de tétraméthylammonium, ou un système pyridine/dibo-10 rane/tétrahydrofuranne/acide trifluoracëtique.

Dans le procédé d), le groupe Q dans la formule (V) peut représenter, par exemple, un atome d'hydrogène, un groupe acyle, par exemple un groupe alcanoyle ayant 1 à 4 atomes de carbone, comme un groupe acétyle ou un groupe 15 aroyle comme un groupe benzoyle ; ou un groupe tri-alkylsi-lyle (1 à 4 atomes de carbone dans le groupe alkyle) comme un groupe triméthylsilyle. Dans la formule (VI), le symbole A peut représenter, par exemple, un atome d'halogène (par exemple du chlore) ou un groupe acyloxy dans lequel le frag-

2 0 ment acyle peut être, par exemple, un groupe alcanoyle ayant

1 à 4 atomes de carbone, comme acétyle, ou un groupe aroyle comme benzoyle. On peut commodément effectuer la réaction dans un solvant fortement polaire comme le diméthylformamide ou 11hexaméthylamide phosphorique, avantageusement en pré-25 sence d'une base comme la triéthylamine ou le carbonate de potassium. En variante, on peut effectuer une condensation thermique en chauffant les composés de formules (V) et (VI) en présence d'une quantité catalytique d'un acide fort, par exemple l'acide sulfurique.

3 0 Dans le procédé e), on peut effectuer une hydrolyse du composé de formule (VII), par exemple dans des conditions basiques, par exemple par traitement avec une aminé organique comme la méthylamine ou la triéthylamine.

Dans un procédé incorporant les procédés a) et b) ci-35 dessus, on peut traiter un composé de formule (VIII) :

9

(VIII)

5 ch2ow

(dans laquelle W, W"1", X et Z ont le sens défini ci-dessus et G représente un atome d'halogène) par de l'ammoniac en milieu alcoolique pour obtenir le produit final voulu de formule (I) .

10 On peut préparer de façon classique, par exemple par les modes opératoires décrits dans le brevet GB N° 1 523 865 précité, des composés de formules (II) à (VII) servant d'intermédiaires dans la synthèse des composés de formule (I). Ces procédés reposent sur des intermédiaires préparés à par-15 tir de purines simplement substituées, qui peuvent être disponibles dans le commerce ou préparées selon des techniques qui sont bien connues en elles-mêmes et qui sont décrites dans la littérature comme, par exemple, le manuel précité.

Ainsi, par exemple, on peut préparer de façon géné-20 raie des composés de formule (II) et (III) en utilisant un mode opératoire analogue à celui du procédé d), c'est-à-dire en faisant réagir une purine appropriée, dans laquelle les positions 2, 6 et/ou 9 sont éventuellement protégées, par exemple par des groupes acyles ou trialkylsilyles du type 25 décrit ci-dessus, avec un composé de formule (VI) dans laquelle les groupes hydroxyles terminaux sont éventuellement protégés par des groupes acyles ou trialkylsilyles du type décrit et, ensuite, selon ce qui est nécessaire et/ou souhaité, on peut enlever l'un quelconque desdits groupes pro-30 tecteurs, avant utilisation dans les procédés a) ou b). En variante, on peut préparer, par exemple, un composé de formule (II) dans laquelle W et W1 représentent chacun un groupement benzoyle de blocage, en traitant une bis-(chloromé-thyl)-9 méthoxy (ou thio) méthyl purine analogue correspon-35 dante par un agent de benzoylation, par exemple du benzoate de sodium, l'analogue de départ de la purine étant préparé par exemple par traitement d'un composé de formule (V) , éventuellement protégé sur les positions 2 et/ou 6, par un composé de formule :

\0

ACH„XCHCH„C1 A | L

CH2CL

I

(dans laquelle A et X ont le sens décrit ci-dessus).

5 On peut préparer de façon classique des composés de formule (IV), par exemple comme décrit ici dans l'exemple 3 de la présente invention, ou par des modes opératoires analogues.

La présente invention propose également des composés 10 de formule (I) et leurs sels et esters physiologiquement acceptables destinés à servir au traitement curatif ou prophylactique d'une maladie virale chez un animal, par exemple un mammifère et notamment l'être humain. Les composés sont particulièrement utiles pour le traitement curatif ou pro-15 phylactique de maladies causées par divers virus à ADN, comme les infections du type herpes, par exemple l'herpes simplex, la varicelle ou le zona, des cytomégalovirus aussi bien que des maladies causées par les virus de l'hépatite B ou d'Epstein-Barr. Les composés de formule (I) peuvent éga-2 0 lement servir pour le traitement curatif ou prophylactique du papillome ou des infections dues à des virus de verrues. En plus de leur utilisation dans un traitement médical des êtres humains, les composés de formule (I) peuvent être administrés à d'autres animaux pour le traitement curatif 25 ou prophylactique de maladies virales, par exemple chez d'autres mammifères. Par exemple, les composés de formule (I) sont particulièrement utiles pour le traitement de la rhino-pneumonite équine.

La présente invention propose également un procédé 30 pour le traitement curatif ou prophylactique d'une maladie virale chez un animal, par exemple un mammifère et notamment l'être humain, procédé qui consiste à administrer à l'animal une quantité anti-virale efficace d'un composé de formule (I) ou d'un sel ou ester de ce composé, physiologiquement 35 acceptable.

Les composés de formule (I) et leurs sels et esters physiologiquement acceptables (que l'on désigne collectivement ci-après comme étant les ingrédients actifs) peuvent être administrés par n'importe quelle voie appropriée à

0

l'état à traiter, des voies convenables comprenant une administration orale, rectale, nasale, topique (ce qui comprend une administration buccale sublinguale), vaginale et parentérale (ce qui comprend la voie sous-cutanée, 5 intra-musculaire, intraveineuse, intradermique, intra-thécale et épidurale). On comprendra que la voie préférée peut varier, selon, par exemple, l'état de la personne ou de l'animal que l'on traite.

10 ci-dessus, la quantité requise d'un ingrédient actif (selon la définition ci-dessus) va dépendre d'un certain nombre de facteurs comprenant la gravité de l'état à traiter et l'identité du malade ou de l'être à traiter, et, finalement, cette quantité dépendra du jugement du médecin ou du vété-15 rinaire chargé du traitement. En règle générale, cependant, pour, chacune de ces utilités et indications, une dose efficace et convenable se situera entre 0,1 et 250 mg par kilogramme de poids corporel de la personne ou de l'être vivant traité, par jour, de préférence entre 1 et 100 mg par kilo-20 gramme de poids corporel et par jour et encore mieux entre 5 et 20 mg par kilogramme de poids corporel et par jour ; une dose optimale est d'environ 10 mg par kilogramme de poids corporel et par jour, (sauf indication contraire, tous les poids de l'ingrédient actif sont calculés en composés de dé-25 part de formule (I) : pour leurs sels et esters, il convient d'augmenter proportionnellement les chiffres).

trois, quatre sous-doses ou davantage, administrées à des intervalles appropriés dans la journée. Ces sous-doses peuvent 30 être administrées sous forme de doses unitaires contenant, par exemple, 10 à 1000 mg, de préférence 20 à 500 mg et encore mieux 100 à 400 mg de l'ingrédient actif par dose unitaire.

actifs seuls, il est préférable de les présenter sous forme de 35 formulations pharmaceutiques. Les formulations, destinées à

l'usage vétérinaire et à l'usage humain, de la présente invention comprennent au moins un ingrédient actif, selon la définition ci-dessus, avec un ou plusieurs véhicules ou excipients acceptables et, éventuellement, d'autres ingrédients thér=>-

Pour chacune des utilités et indications précisée

La dose voulue est présentée de préférence en deux,

Bien qu'il soit possible d'administrer les ingrédients

peutiques. Le ou les excipients doivent être "acceptables" au sens qu'ils doivent être compatibles avec les autres ingrédients de la formulation et ne pas nuire à la personne i

ou à l'animal qui les reçoit.

5 Les formulations comprennent celles convenant pour une administration orale, rectale, nasale, topique (ce qui comprend une administration buccale et sublinguale), vaginale ou parentérale (ce qui comprend une administration sous-cutanée, intra-musculaire, intraveineuse, intradermique, 10 intrathécale et épidurale). Les formulations peuvent commodément être présentées sous forme de doses unitaires et elles peuvent être préparées par l'un quelconque des procédés bien connus dans l'art de la pharmacie. De tels procédés comprennent l'étape consistant à associer l'ingrédient actif avec 15 l'excipient ou véhicule qui constitue un ou plusieurs ingrédients accessoires. En général, on prépare les formulations en associant uniformément et intimement l'ingrédient actif à des véhicules liquides ou à des excipients ou véhicules solides finement divisés, ou les deux, et, si nécessaire, en 2 0 façonnant le produit.

Des formulations de la présente invention, convenant pour une administration orale, peuvent être présentées sous forme d'unités séparées comme des capsules, des cachets ou des comprimés, contenant chacun une quantité prédéterminée 25 de l'ingrédient actif ; sous forme d'une poudre ou de granules ; sous forme d'une solution ou d'une suspension dans un liquide aqueux ou un liquide non-aqueux ; ou sous forme d'une émulsion liquide du type huile dans eau ou d'une émulsion liquide du type eau dans huile. L'ingrédient actif peut aussi 30 être présenté sous forme d'une grosse pilule, d'électuaire ou de pâte.

On peut obtenir un comprimé par compression ou moulage, éventuellement avec un ou plusieurs ingrédients accessoires. On peut préparer des comprimés par compression, dans 35 une machine convenable, de l'ingrédient actif sous forme fluide comme une poudre ou des granules, éventuellement en mélange avec un liant, un lubrifiant, un diluant inerte, un agent de conservation, un tensio-actif ou un agent de dispersion. On peut obtenir des comprimés moulés en moulant, dans

*3

une machine convenable, un mélange du compose pulvérulent humecté d'un diluant liquide inerte. Les comprimés peuvent éventuellement être revêtus ou incisés, et ils peuvent être i

formulés de manière à assurer une libération lente ou réglée 5 de l'ingrédient actif qu'ils contiennent.

Pour des infections de l'oeil ou d'autres tissus externes, par exemple la bouche et la peau, on applique de préférence les formulations sous forme d'un onguent ou crème topique contenant l'ingrédient actif en une quantité de, par 10 exemple, 0,075 à 20 % en poids/poids, de préférence 0,2 à 15 % en poids/poids et encore mieux 0,5 à 10 % en poids/poids. Lorsqu'ils sont formulés dans un onguent, les ingrédients actifs peuvent servir avec une base d'onguent paraffinique ou miscible à l'eau. En variante, les ingrédients actifs peu-15 vent être formulés dans une crème avec une base pour crème du type huile dans eau.

Si on le désire, la phase aqueuse de la base pour crème peut comprendre, au moins 30 % en poids/poids d'un poly-alcool, c'est-à-dire un alcool comportant deux ou plu-2 0 sieurs groupes hydroxyles comme le propylène-glycol, le bu-tane-diol-3, le mannitol, le sorbitol, le glycérol et du polyéthylène glycol et leurs mélanges, les formulations topiques peuvent avantageusement inclure un composé qui amplifie l'absorption ou la pénétration de l'ingrédient actif 25 à travers la peau ou d'autres zones affectées. Des exemples de tels agents amplifiant la pénétration dermique comprennent du diméthylsulfoxyde et des analogues apparentés.

La phase huileuse des émulsions de la présente invention peut être constituée à partir d'ingrédients connus, 30 de façon connue. Alors que la phase peut comprendre tout simplement un émulsifiant, elle comprend de façon souhaitable un mélange d'au moins un émulsifiant avec une matière grasse ou une huile ou avec, à la fois, une matière grasse et une huile. De préférence, un émulsifiant hydrophile est 35 inclus avec un émulsifiant lipophile jouant le rôle de stabilisant. On préfère également inclure à la fois une huile et une matière grasse. Ensemble, le ou les émulsifiants,

avec ou sans stabilisant constituent ce que l'on appelle la cire d'émulsification, et la cire avec l'huile et/ou la

graisse ou matière grasse constitue ce que l'on appelle la base d'émulsification pour onguent, qui forme la phase huileuse dispersée des formulations de crèmes.

Des émulsifiants'et stabilisants pour émulsions qui 5 conviennent pour servir dans la formulation de la présente invention comprennent "Tween 60", "Span 80" de l'alcool cétostéarylique, de l'alcool myristylique, du monostéarate de glycéryle et du lauryl-sulfate de sodium.

Le choix des huiles ou graisses convenables pour la 10 formulation se fonde sur l'obtention des propriétés cosmétiques voulues, puisque la solubilité du composé actif dans la plupart des huiles que l'on risque vraisemblablement d'utiliser dans des formulations d'émulsions pharmaceutiques est très faible. Ainsi, la crème doit de préfé-15 rence être un produit non graisseux, qui ne tache pas et est lavable, présentant une consistance convenable pour éviter une fuite des tubes ou autres récipients. On peut utiliser des esters d'alkyles mono- ou di-basiques, linéaires ou ramifiés, comme du di-isoadipate, du stéarate 20 d'isocétyle, un diester de propylène-glycol d'acides gras de noix de coco, du myristate d1isopropyle, de l'oléate de décyle, du palmitate d'isopropyle, du stéarate de butyle, du palmitate d'éthyl-2 hexyie ou un mélange d'esters ramifiés comme "Crodamol CAP", les trois derniers étant des 25 esters préférés. On peut les utiliser isolément ou en combinaison, selon les propriétés requises. En variante, on peut utiliser des lipides à point de fusion élevé comme de la paraffine blanche molle et/ou de la paraffine liquide ou d'autres huiles minérales.

30 Des formulations convenant pour une administration topique à l'oeil comprennent également des gouttes dans lesquelles l'ingrédient actif est dissous ou en suspension dans un véhicule convenable, notamment un solvant aqueux de l'ingrédient actif. L'ingrédient actif est de préférence 35 présent dans de telles formulations en une concentration de 0,5 à 20 %, avantageusement 0,5 à 10 %, particulièrement environ 1,5 % en poids/poids.

Des formulations convenant pour une administration topique dans la bouche comprennent des pastilles comprenant

4

\$

l'ingrédient actif dans une base aromatisée, habituellement du saccharose et de la gomme arabique et adragante, des pastilles comprenant l'ingrédient actif dans une base inerte i

comme la gélatine et la glycérine, ou du saccharose et de la 5 gomme arabique ; et des bains de bouche comprenant 1'ingrédient actif dans un véhicule liquide convenable.

Des formulations pour administrations rectales peuvent être présentées sous forme d'un suppositoire comportant une base convenable comprenant, par exemple, du beurre de 10 cacao ou un salicylate.

Des formulations convenant pour une administration nasale, dans lesquelle l'excipient est un solide, comprennent une poudre grossière dont les particules se situent par exemple entre 20 et 500 microns, que l'on administre comme 15 une poudre à priser, c'est-à-dire par inhalation rapide à travers le conduit nasal à partir d'un récipient de la poudre maintenu près du nez. Des formulations convenables dans lesquelles le véhicule est un liquide, pour administration sous forme, par exemple, d'une pulvérisation nasale ou de 20 gouttes nasales, comprennent des solutions aqueuses ou huileuses de l'ingrédient actif.

Des formulations convenant pour une administration vaginale peuvent être présentées sous forme de pessaires, de tampons, de crèmes, de gels, de pâtes, de mousses ou de for-25 mulations pour pulvérisations contenant, en plus de l'ingrédient actif, des véhicules ou excipients connus en pratique comme étant appropriés.

Des formulations convenant pour une administration parentérale comprennent des solutions aqueuses et non aqueu-30 ses, stériles, pour injections, qui peuvent contenir des anti-oxygènes, des tampons, des bactério-statiques et des solutés qui rendent la formulation isotonique avec le sang de la personne ou de l'animal à traiter ; et des suspensions stériles aqueuses et non-aqueuses qui peuvent comporter des 35 agents de mise et maintien en suspension et des agents d'é-paississement, Les formulations peuvent être présentées dans des récipients correspondant à des doses unitaires ou à des doses multiples, par exemple dans des ampoules et fioles scellées,et elles peuvent être conservées à l'état lyophilisé

•fi?

<6

n'exigeant que l'addition du véhicule liquide stérile, par exemple de l'eau pour les injections, immédiatement avant utilisation. On peut préparer des solutions et suspensions i

pour injections extemporanées à partir de poudres stériles, 5 de granules et comprimés du genre décrit ci-dessus.

Les formulations pour doses unitaires préférées sont celles contenant une dose ou sous dose quotidienne,

comme indiqué ci-dessus, ou une fraction appropriée d'une telle dose, d'un ingrédient actif.

10 II va de soi qu'en plus des ingrédients particuliè

rement mentionnés ci-dessus, les formulations de la présente invention peuvent comprendre d'autres agents classiques,

dans le domaine du type de formulation en question, et, par exemple, les formulations convenant pour une administration 15 orale peuvent comprendre des agents d'arômatisation.

La présente invention propose en outre des compositions vétérinaires comprenant au moins un ingrédient actif, selon la définition ci-dessus, avec un excipient à usage vétérinaire. Des excipients vétérinaires sont des matières 20 utiles pour l'administration de la composition et ils peuvent être des matières solides, liquides ou gazeuses qui sont par ailleurs inertes ou acceptables dans l'art vétérinaire et sont compatibles avec l'ingrédient actif. Ces compositions vétérinaires peuvent être administrées par voie 25 orale, parentérale ou par tout autre voie voulue.

Pour l'administration orale, les compositions peuvent être sous forme d'un comprimé, de granules, d'une forte quantité de potion, d'une pâte, de cachets, de capsules ou d'un supplément pour l'alimentation. Des granules peuvent 30 être fabriquées par une technique bien connue de granulation par voie humide, de pré-compression ou de formation de magdaléons. Ils peuvent être administrés à des animaux dans un véhicule liquide inerte de façon à former une potion, ou dans une suspension avec une base aqueuse ou huileuse. De 35 préférence, on inclut d'autres ingrédients accessoires, comme un agent de formulation ou de libération. Ces formulations comprennent de préférence de 15 à 85 % de l'ingrédient actif.

On peut formuler une pâte en mettant l'ingrédient actif en suspension dans un diluant liquide. On peut inclure fC

Vf un agent d'épaississement ainsi qu'un agent de mouillage ou un humectant si le diluant liquide est de l'eau. S'il faut une pâte en émulsion, il convient avantageusement d'inclure un ou plusieurs agents te'nsio-actif s. L'ingrédient actif peut représenter de 25 à 80 % du poids de ces formulations en pâte.

Dans les suppléments pour aliments, l'ingrédient actif est généralement présent en de grandes quantités par rapport aux ingrédients accessoires, et les suppléments ou compléments peuvent être ajoutés directement ou après mélange ou dilution intermédiaire. Des exemples d'ingrédients accessoires pour de telles formulations comprennent des véhicules solides, ingestibles par voie orale comme de la farine de blé ou de maïs, de la farine de soja, du remoulage de blé, du gruau de soja, des matières végétales comestibles et des résidus de fermentation. L'ingrédient actif est habituellement incorporé dans un ou plusieurs des ingrédients accessoires et dispersés intimement et uniformément par broyage , culbutage au tonneau, ou agitation avec un appareil classique. Des formulations contenant 1 à 90 % en poids de l'ingrédient actif conviennent pour être ajoutées à des aliments.

Pour le traitement des infections du type herpes chez les chevaux, une dose orale ou parentérale de 0,1 à 250 mg par kilogramme de poids corporel par jour, de préférence 2 à 100 mg par kilogramme par jour, peut être nécessaire. La dose peut être subdivisée en des' unités séparées administrées à des intervalles réguliers au cours de la journée, et quotidiennement et de façon répétée durant jusqu'à 14 jours ou jusqu'à effacement de l'infection. Pour des infections virales chez d'autres animaux, la dose peut varier selon la taille et le métabolisme de l'animal. Les compositions peuvent être administrées sous forme de dose unitaire, comme un comprimé un petit nombre de fois par jour, en une quantité de 10 à 1000 mg par dose unitaire.

L'invention sera maintenant illustrée par référence aux exemples suivants.

Exemple 1

[(hydroxy-2 hydroxyméthyl-1 éthoxy)méthyl]-9 guanine

On fait passer du gaz chlorhydrique dans un mélange

M

refroidi (0°C) de 20,725 g de dibenzyloxy-1,3 propanol (J. Chem. Soc. 445 (1931) A. Fairbourne) et de 2,28 g de paraformaldéhyde dans 100 ml de dichlorométhane sec jus-

r qu'à ce que la solution soit saturée. On déshydrate la 5 solution trouble incolore sur des tamis moléculaires et du chlorure de calcium, on filtre et évapore le filtrat sous vide. Le bis-(benzyloxy)-1,3 (chlorométhoxy)-2 propane se forme comme une huile jaune résiduelle, et elle présente des spectres satisfaisants dans l'infrarouge (absence du 10 groupe OH) et de résonnance magnétique nucléaire de II.

On chauffe au reflux sous azote durant 18 heures un mélange de 13 mM de tris-triméthylsilyl-2,6,9 guanine, 5,45 g de bis-(benzyloxy)-1,3 (chlorométhoxy)-2 propane et de 4ml

(29mM) de triéthylamine anhydre dans 10ml de toluène anhy-15 dre. On évapore sous vide la solution de couleur ambre rou-geâtre et on la soumet, sur un bain de vapeur d'eau, à une digestion par du méthanol durant 3 0 minutes. On enlève le solvant par évaporation rapide et on purifie le résidu huileux par chromatographie sur une colonne de gel de silice ; 20 on obtient, par élution de la colonne avec de l'acétone et recristallisation dans 1'acétonitrile, la (benzyloxy-2 (benzyloxyméthyl)-1 éthoxyméthyl)-9 guanine contenant environ 10 % de l'isomère 7 ; point de fusion : 173-180°C.

A une suspension de 3,88 g de (benzyloxy-2 (benzy-25 loxyméthyl)-1 éthoxyméthyl)-9 guanine dans 300 ml d'ammoniac liquide à des températures de -45 à -30°C (bain d'acétone et neige carbonique) on ajoute, avec agitation magnétique ,en portions en une période de 15 minutes, 1,54 g de morceaux de sodium. On agite le mélange durant 3 0 minutes 3 0 encore et on détruit l'excès de sodium avec du méthanol. On enlève les solvants par évaporation sous vide, on dissout le résidu dans un minimum d'eau, on refroidit et l'on ajuste le pH à 6,0 avec de l'acide acétique glacial. On évapore à nouveau le mélange sous vide et on le fait cris-35 talliser deux fois à partir d'eau.

Une recristallisation finale à partir du méthanol donne de la (hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)-9 méthyl guanine, dont le point de fusion est de 250°C avec resolidification.

>3

Exemple 2

a) [benzoyloxy-2 benzoyloxyméthyl-1)éthoxyméthyl]-9 guanine A une solution froide (0°C) d'un mélange d'acétyla-

i tion (préparé en combinant 7 ml d'anhydride acétique, 3 ml 5 d'acide acétique cristallisable et 0,1 ml d'acide sulfurique concentré) on ajoute, avec agitation magnétique, 1,0 g de tétrabenzoyl -méthylène-bis-glycérol-2 A.T. Ness, R.M. Hann & C.S. Hudson, J. Amer. Chem. Soc, Nov. 1943, 2215.

On agite la solution à des températures de 3° à 10°C 10 durant 30 minutes, puis on la verse dans un mélange de 260 ml de glace et d'eau. On extrait ensuite trois fois la solution acide avec du chloroforme, puis on lave les extraits organiques avec de la saumure et on les déshydrate sur du sulfate de sodium.

15 On évapore sous vide la solution chloroformique fil trée et l'on purifie l'huile résiduelle par une chromatogra-phie sur colonne de gel de silice. Une élution avec du dichlo-rométhane donne l'O-fccétoxyméthyl)-2 bis(O-benzoyl)-1,3 glycéro] Les spectres de résonnance magnétique des protons et du car-20 bone 13 correspondent bien à la structure voulue.

On chauffe au reflux, tout en agitant durant 18 heures, un mélange de 0,49 g de diacétyl-2,9 guanine, 1,22 g de O-(acétoxyméthyl)-2 bis(O-benzoyl)-1,3 glycérol et de 0,013 g d'acide p-toluène sulfonique dans 3 0 ml de toluène anhydre. 25 On enlève le solvant par évaporation rapide et on dissout le résidu dans 35 ml de méthanol bouillant. On ajoute 1 ml de n-butanol et l'on chauffe le mélange au reflux durant 5 minutes pour hydrolyser le groupe acétamido-2. On évapore le mélange sous vide à une température de bain de 30°C et l'on 30 fait recristalliser une fois à partir de méthanol et une fois à partir de formamide pour obtenir la (benzoyloxy-2 benzoyloxyméthyl-1 ) éthoxyméthyl -9 guanine. L'analyse élémentaire montre que le produit contient 0,75 mole de formamide, et le spectre de résonnance magnétique correspond bien à la struc-35 ture. Une chromatographie en couche mince sur gel de silice avec du chloroforme à 20 % de méthanol donne une tache Rf = 0,49 ; point de fusion 220-222°C.

20

b) [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 guanine

On chauffe 0,6 g de (benzoyloxy - 2-(benzoyloxyméthyl) -1 éthoxyméthyl)-9 guanine dans un mélange (1:1) de méthanol et de méthylamine aqueuse sur un bain de vapeur d'eau durant 5 1 heure. On enlève les solvants sous vide et l'on fait recristalliser le résidu deux fois dans de l'eau pour obtenir, sous forme d'un hydrate, la [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1) méthyl]-9 guanine. Point de fusion (avec décomposition) 230°C.

10 Exemple 3

[(Hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 guanine

On chauffe au reflux, tout en agitant jusqu'à dissolution des solides, un mélange de 111,8 g de dichloro-1,4 butane diol-2,3, 42,2 g de paraformaldéhyde et 22 ml d'un complexe 15 éthéré de trifluorure de bore dans 460 ml d'acétonidrile anhydre. On ajoute des tamis moléculaires et on chauffe le mélange réactionnel au reflux durant 3 heures supplémentaires. On refroidit le mélange et on le déshydrate par l'addition d'un supplément de tamis, on filtre et évapore sous vide. 20 On ajoute le résidu huileux à 250 ml d'une solution saturée de bicarbonate de sodium, et l'on extrait trois fois avec des volumes égaux d'éther purifié. On déshydrate les extraits éthérés sur du sulfate de sodium, on les filtre et les évapore sous vide.

25 On distille le liquide résiduel avec la dépression d'une trompe à eau (pression correspondant à 16 mm) et l'on collecte la fraction bouillant à 99-109°C pour obtenir le bis-(chlorométhyl)-4,5 dioxolane-1,3 .

On agite tout en chauffant à la température de 142°C 30 durant 18 heures un mélange de 76,5 g de bis-(chlorométhyl) -4,5 dioxolane-1,3 et de 258 g de benzoate de sodium dans 1500 ml de diméthylformamide anhydre.

On refroidit le mélange, on le filtre et on lave les solides à l'éther. On évapore les liqueurs-mères et les li-35 quides de lavage à siccité sous vide et l'on soumet à partage entre du dichlorométhane et de l'eau, trois fois. On lave à l'eau les couches organiques et on les déshydrate sur du sulfate de sodium. Après filtration et évaporation rapide, on purifie le résidu par chromatographie rapide sur

24

du gel de silice dans du dichlorométhane pour obtenir sous forme d'une huile épaisse le bis-(benzoyloxyméthyl)-4,5 dioxolane-1,3. On obtient un échantillon analytique en lais-

t sant une partie aliquote de l'huile cristalliser dans l'air ; 5 point de fusion : 66,5-68°C.

acétique et de 0,3 ml d'acide sulfurique concentré, on ajoute par portions 114,2 g de bis-(benzoyloxyméthyl)-4,5 dioxolane-1,3 tout en maintenant une température interne de 0 à 5°C. On 10 laisse la solution revenir à la température ambiante puis on la chauffe durant 3 heures à la température d'un bain de vapeur d'eau (température interne : 92°C). Après refroidissement, on verse la solution sur 600 ml de glace et d'eau et on extrait trois fois avec de 1'éther purifié. On lave les ex-15 traits éthérés une fois avec de l'eau, une fois avec une solution à 5 % de bicarbonate de sodium et enfin avec de la saumure. On déshydrate (Na2SO^) les extraits éthérés et l'on filtre et évapore sous vide la solution ambre limpide pour obtenir le dibenzoate d'acétoxy-2 acétoxyméthoxy-3 butanediyle-1,4. 20 On obtient un échantillon analytique par recristallisation dans un système benzène-hexane. Point de fusion : 56-58°C.

eau, un mélange de 5,75 g de dichloro-2,6 purine et de 14,1 g de dibenzoate d'acétoxy-2 acétoxyméthoxy-3 butanediyle-1,4 25 jusqu'à ce que le mélange forme une masse liquide fondue. Après 10 minutes de chauffage supplémentaires, on refroidit le mélange réactionnel et l'on ajoute tout en agitant 150 mg d'acide p-toluène sulfonique. On recommence à chauffer durant 20 minutes sous la dépression d'une trompe à eau, puis on 30 refroidit la solution de réaction et on la soumet trois fois à un partage entre du dichlorométhane et de l'eau. On lave les extraits organiques une fois avec une solution saturée de bicarbonate de sodium, deux fois à l'eau et finalement une fois avec de la saumure. Après déshydratation sur du sulfate 35 de sodium, et filtration, on enlève le solvant par évaporation rapide et on purifie par chromatographie sur une colonne la mousse jaune résiduelle. Après élution avec du dichlorométhane pour enlever des sous-produits qui ne sont pas de la purine, une élution avec 5 0 % d'acétate d'éthyle dans de

A une solution refroidie (0°C) de 100 ml d'anhydride

On chauffe à 140°C, sous la pression d'une trompe à

2L2-

l'hexane donne, par évaporation, une huile incolore présentant un spectre de résonnance magnétique nucléaire satisfaisant pour le dibenzoate de [(acétoxy-2-(dichloro-2,6-9H-

t purine-yl-9) -3-méthoxyJ ^g-butanediyle-l,4.

5 On chauffe tout en agitant au reflux durant 4 heures un mélange de 11,5 g de dibenzoate d' acétoxy-2-(dic.hloro-2,6-9H-purine-yl-9)-3 mëthoxy-butanediyle-1,4 et de 2,6 g d'azo-ture de sodium dans 50 ml de mélange à 1:1 en volume/volume d'éthanol et d'eau.

10 On évapore sous vide le mélange hétérogène et l'on soumet le résidu à un partage entre de l'éther et de l'eau. On effectue deux lavages supplémentaires de la phase aqueuse et l'on évapore les extraits éthérés, déshydratés et combinés, ce qui donne le dibenzoate d'acétoxy-2-(diazido-2,6-9H-purine-15 yl-9)~3 méthoxy-butanediyle-1,4. Les spectres de résonnance magnétique nucléaire et d'infra rouges correspondent bien à la structure voulue.

On secoue sous une pression de 3,5 bars d'hydrogène à la température ambiante, durant 3 jours, une solution de 5,0 g 20 de dibenzoate d'acétoxy-2-(diazido-2,6-9H-purine-yl-9)métho-xy-3 butane-diyle-1,4 dans 200 ml de tétrahydrofuranne et 20 ml de méthanol contenant 190 mg d'un catalyseur à 5 % de palladium sur du charbon. On filtre le mélange sur un tampon de "Célite" et l'on évapore la solution sous vide. On fait 25 recristalliser le résidu sirupeux dans du méthanol pour obtenir le dibenzoate d'acétoxy-2-(diamino-2,6-9H-purine-yl-9)mé-thoxy-3) butanediyle-1,4 dont le point de fusion est de 192-194 °C.

On chauffe sur un bain de vapeur d'eau durant 1 heure 30 2,0 g de dibenzoate d'acétoxy-2-(diamino-2,6-9H-purine-yl-9)-méthoxy-3 butanediyle-1,4 dans 100 ml de méthanol et 35 ml de méthylamine aqueuse à 40 %, puis l'on évapore la solution sous vide. On triture le résidu avec de l'éther pour enlever le N-méthylbenzamide et l'on fait recristalliser dans de l'ëthanol 35 pour obtenir le (diamino-2,6-9H-purine-yl-9)-méthoxy-3 butane-triol-1,2,4 dont le point de fusion est de 167-169°C.

On agite à la température ambiante durant 3 heures 1/2 une solution de 0,7 g (2,4 mM) de (diamino-2,6-9H-purine-yl-9)-méthoxy-3 butanetriol-1,2,4 et de 0,6 g (2,8 mM) de perio-

date de sodium dans 50 ml d'eau. Un précipité se forme dans les 5 minutes qui suivent la mise en contact des deux corps destinés à réagir.

On refroidit le mélange, on le filtre et le lave à 5 l'eau, ce qui donne le[(amino-2 dihydro-1,6 oxo-6 9H-purine-yl-9)méthoxy]-2 hydroxy-3 propanai. Une analyse par spectre de masse de ce produit donne m/e M+ = 2 53.

A une suspension de 150 mg (0,592 mM) du dérivé aldé-hydique dans 20 ml d'eau on ajoute, par portions, 18 mg (0,47 10 mM) de borohydrure de sodium. On agite la solution durant 18 heures à la température ambiante, on la refroidit et l'on ajuste le pH à 6 avec de l'acide chlorhydrique aqueux 4H. On filtre le précipité résultant pour obtenir la [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl ] -9 guanine dont le point de 15 fusion est de 248-250°C.

Exemple 4

[(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 guanine

A une solution de 0,5 g de diamino-2,6 [(hydroxy-2-hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 purine dans 10 ml d'eau dou-20 blement distillée, on ajoute environ 600 jjl d'une suspension d'adénosine-désaminase de muqueuse intestinale de veau dans du sulfate d'ammonium (sigma). On fait incuber le mélange à 37°C et on le surveille par ultra violets jusqu'à ce que la réaction soit achevée (26 jours). A divers intervalles, on 25 évapore le mélange réactionnel sous vide à la température ambiante et on le redissout dans de l'eau pour enlever l'ammoniac formé et maintenir ainsi le pH de la solution entre 7 et 7,5.

On évapore la solution sous vide et on fait recris-30 talliser le résidu une fois à partir de méthanol et deux fois à partir d'eau pour obtenir la (hydroxy-2 hydroxyméthylétho-xy-1)méthyl -9 guanine sous forme d'un composé hydraté au quart ; point de fusion avec décomposition : 230°C.

Exemple 5

3 5 [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 diamino-2,6 purine a) [(benzoyloxy-2 benzoyloxyméthyléthoxy-1)méthyl ]-9 dichloro-2,6-purine

On chauffe avec agitation magnétique, sous la pression créée par une trompe à eau, à une température de bain d'huile 40 de 155°C durant environ 25 minutes un mélange de 1,16 g (6 mM)

ff

2V

de dichloro-2,6 purine et de 2,7 g (7,3 mM) de 0-(acétoxymé-thyl)-2 bis-(0-benzvl)-1,3 glycérol. On refroidit le liquide jaune limpide résultant et on dissout dans du benzène le verre i

jaune épais qui se forme, et l'on purifie par chromatographie 5 rapide sur une colonne de gel de silice (diamètre = 6 cm). Une élution initiale avec un mélange 1:1 de benzène et de dichlorométhane, et avec du dichlorométhane seul, enlève les sous-produits et l'on obtient la (benzoyloxy-2 benzoyloxyméthylé-thoxy-1)méthyl -9 dichloro-2,6 purine voulue par élution avec 10 un mélange 1:1 de dichlorométhane et d'éther (1,77 g). On élue un supplément de l'isomère 9, contaminé par de l'isomère 7, lorsqu'on utilise 100 % d'éther purifié.

Le spectre de résonnance magnétique des noyaux de H' et une chromatographie en couche mince (gel de silice dans du di-15 chlorométhane) montrent une légère quantité d'impuretés dans la charge principale qui est une mousse blanc-jaune, b) [(benzoyloxy-2 benzoyloxyméthyléthoxy-1)méthyl ]-9 diazido-2,6 purine

On chauffe au reflux avec agitation magnétique durant 20 3 heures un mélange hétérogène de 1,77 g (3,53 mM) de £(benzoy-loxy-2 benzoyloxyméthyl-1)éthoxyméthyl] -9 dichloro-2,6 purine et 0,45 g (6,88 mM) d'azoture de sodium dans 10 ml de mélange 1:1 en volume/volume d'eau et d'éthanol. On enlève les solvants par évaporation rapide et l'on triture l'huile résiduelle avec 25 de l'eau pour enlever le chlorure de sodium. On reprend l'huile dans de l'alcool chaud et on refroidit pour obtenir, après fil-tration, un solide blanc ayant une nuance rose après séchage. Point de fusion : 144-5°C. On obtient de la liqueur mère une récolte supplémentaire par évaporation et trituration avec de 30 l'éthanol pour obtenir une matière de pureté suffisante pour être combinée avec le précipité initial en vue de l'étape suivante. Les spectres de résonnance magnétique de noyaux et dans l'ultra violet correspondent bien à la structure prévue.

Crête dans l'ultra violet : pH 1,0 Xmax = 24 0, 3 05, 35 275 (épaulement).

PH 13,0 Amax = 300, 270 (épaulement)

H

c) [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 diamino-2,6 purine

On secoue un mélange de 1,68 g (3,26 mM) du produit i

de l'étape b) dans 120 ml d'un mélange à 1:1 en volume/volume 5 de tétrahydrofuranne et de méthanol, avec 118 mg d'un catalyseur à 5 % de palladium sur du charbon sous une pression initiale de 3,5 bars d'hydrogène durant 72 heures â la température ambiante. On filtre le mélange à travers un tampon de

" Il

*~elite et on enleve les solvants par évaporation rapide. On 10 reprend l'huile résiduelle dans un benzène chaud et de l'he-xane, ce qui provoque une solidification. Après refroidissement, on filtre le solide pour obtenir la [(benzoyloxy-2 benzoyloxyméthyl-éthoxy-1)méthyl]-9 diamino-2,6 purine qui donne un spectre de résonnance magnétique nucléaire (H) satis-15 faisant. On dissout le solide dans une quantité minimale de méthanol et l'on agite avec un volume égal de méthylamine aqueuse à 40 % à la température ambiante jusqu'à ce qu'une chromatographie en couche mince (gel de silice dans du dichlorométhane à 40 % de méthanol) montre qu'une hydrolyse 20 complète s'est produite. On évapore la solution sous vide et on fait recristalliser le résidu dans un système méthanol-acétone pour obtenir la [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1) méthyl]-9 diamino-2,6 purine, qui donne un spectre de résonnance magnétique des noyaux de H' et une analyse élémentaire 25 satisfaisants. Point de fusion : 182-184°C.

Exemple 6

Diamino-2,6 [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9-9H-purine

On chauffe au reflux, avec séparation de l'eau dans 3 0 un piège de Dean et Stark, un mélange de 3 3,6 g (0,2 mM) d'hydrate de diamino-2,6 purine dans 4 00 ml de xylène. On ajoute 63,84 g (0,625 M) d'anhydride acétique et l'on chauffe le mélange réactionnel pour chasser par distillation un mélange d'acide acétique et de xylène (température en tête : 35 115°C). On élève la température à 125°C à la fin d'une période de réaction de 4 heures.

On ajoute au mélange 0,95 g (0,005 M) d'hydrate d'acide paratoluène sulfonique et 74,47 g (0,3 M) de 0-(acé-toxyméthyl)-2 bis (O-acétyl)-1, 3 glycérol et l'on chauffe le

2£

mélange réactionnel pour chasser par distillation un mélange de xylëne et d'acide acétique à 125°C. On élève à 130°C la température de distillation à la fin d'une période de réaction de 3 heures. On refroidit le mélange réactionnel et l'on 5 obtient le produit brut par évaporation rapide et trituration du résidu avec de l'acétone. Une recristallisation à partir d'éthanol donne l'intermédiaire analytiquement pur diacétami-do-2,6 [(acétoxy-2 acétoxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 purine. On dissout le solide dans du méthanol et l'on chauffe avec un 10 volume égal de méthylamine aqueuse à 40 % durant 15 minutes sur un bain de vapeur d'eau. Une évaporation rapide et une recristallisation du résidu dans de l'éthanol donnent la diamino-2, 6- [ (hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9-9H-purine. Exemple 7

15 a) [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9-chloro-2-adénine

On chauffe dans une bombe à 85°C durant 20 heures une solution de 2,0 g (4 mM) de [(benzoyloxy-2-(benzoyloxyméthylé-thoxy-1)méthyl]-9-dichloro-2,6 purine dans 65 ml d'une solu-20 tion méthanolique saturée d'ammoniac. On évapore la solution sous vide et l'on fait recristalliser deux fois à partir d'éthanol pour obtenir la [(hydroxy-2-hydroxyméthyléthoxy-1) méthyl]-9 chloro-2-adénine analytiquement pure.

b) [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 chloro-2 25 hydroxy-6 purine hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 chloro-2 adénine dans 10 ml d'acide acétique cristallisable, on ajoute par portions, en une période de 45 minutes, 0,63 g (9,15 mM) de nitrite de 30 sodium. On agite le mélange réactionnel à la température ambiante durant 4 heures puis l'on évapore à siccité sous vide. On fait recristalliser le résidu une fois à partir d'eau et une fois à partir d'éthanol pour obtenir la [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1)méthyl]-9 chloro-2 hydro-35 xy-6 purine analytiquement pure.

c) [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy--1 ) méthyl]-9 guanine une solution de 0,274 g (1 mM) de [(hydroxy-2 hydroxyméthylé-thoxy-1)méthyl]-9 chloro-2 hydroxy-6 purine dans 60 ml d'une

A une solution de 500 mg (1,83 mM) de [(hydroxy-2

On chauffe à 120°C dans une bombe durant 25 heures

solution raéthanolique saturée d'ammoniac. On évapore sous vide la solution refroidie et fait recristalliser deux fois à partir de l'eau pour obtenir la C(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1 ) méthylJ-9 guanine analytiquement pure. Point de fu-5 sion : 220-222°C.

Exemple 8

a) Benzyloxy-5 dioxanne~1/3 one-2

On agite à la température ambiante durant deux jours une solution de 182 g (1 M) de 0-benzyl-2 glycérol (Carbohy-10 drate Research 9_1 (1981) 85-88 G. Chittenden) , 128 ml de lutidine-2,6 (1,1 M) et 550 ml (1,1 M) de toluène à 20 % de phosgène. On enlève le solvant sous vide et on purifie le résidu par distillation fractionnée pour obtenir 157 mg (75 %) de benzyloxy-5 dioxanne-1,3 one-2.

15 b) IIydroxy-5 dioxanne-1,3 one-2

On secoue une solution de 177 g (0,85 M) de benzyloxy-5 dioxane-1,3 one-2 dans 100 ml de tétrahydrofuranne-éthanol (1:1) avec 16 g d'un catalyseur à 5 % de palladium sur du carbone à la pression atmosphérique jusqu'à consommation de 20 la quantité théorique d'hydrogène. On sépare le catalyseur par filtration, on fait passer le filtrat à travers un tampon de "Célite" et l'on évapore sous vide pour obtenir 94,5 g (80 %) d'hydroxy-5 dioxanne-1,3 one-2.

c) Méthylënedioxy-5,5 bis(dioxanne l,3one-2)

25 On agite à la température ambiante un mélange de 59 g

(0,5 M) d'hydroxy-5 dioxanne-1,3one-2, de 45 g (0,5 M) de paraformaldéhyde et de 24 ml d'un complexe éthéré de trifluorure de bore dans 80 ml de tétrahydrofuranne anhydre, avec 30g d'un tamis moléculaire 3A durant 18 heures. 30 On filtre le mélange et l'on évapore le filtrat sous vide. On dissout par de l'éther l'huile résiduelle et l'on extrait deux fois avec une solution aqueuse à 5 % de bicarbonate de sodium et deux fois avec de l'eau. On déshydrate les extraits éthérés sur du sulfate de sodium, on les filtre et 35 les évapore pour obtenir la méthylènedioxy-5,5 bis(dioxane-1, 3 one-2).

d) Acétate de (oxo-2 dioxanne-1,3yl-5)oxyméthyle

A une solution refroidie (0°C) de 100 ml d'anhydride acétique et de 0,3 ml d'acide sulfurique concentré, on ajoute

23

par portions 100,4g(0,33 M) de méthylènedioxy-5,5 bis(dioxanne 1,3 one-2) tout en maintenant une température interne comprise entre 0 et 5°C. On agite ensuite la solution à la température ambiante durant 18 heures. On verse la solution de réaction 5 sur 600 ml de glace et d'eau, et l'on extrait trois fois avec un égal volume d'éther purifié. On déshydrate les extraits sur du sulfate de sodium, on les filtre et les évapore pour obtenir l'acétate de (oxo-2 dioxane-1,3 yl-5)oxyméthyle.

e) Acétamido-2 dihydro-1,9 [(oxo-2 dioxanne-1,3yl-5)oxyméthyl] 10 -9 purine-6-one

On chauffe au reflux, tout en agitant durant 18 heures, un mélange de 6,53 g (27,8 mM) de diacétyl guanidine, 0,217 g d'acide paratoluène sulfonique monohydraté et 9,16 g (48,2 mM) d'acétate de (oxo-2 dioxanne~l/3yl-5)-oxyméthyle dans 60 ml de 15 xylène anhydre. On enlève le solvant par évaporation sous vide et l'on purifie le résidu par chromatographie sur une colonne de gel de silice, en éluant, avec du dichlorométhane à 10 % de méthanol, l'isomère 9 séché. Une recristallisation à partir de méthanol donne 5,4 % (60 %) d'acétamido-2 dihydro-1,9 [(oxo-2 20 dioxan ne-1,3yl-5)oxyméthyl]-9 6H-purine-one-6.

f) [(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1 méthylj-9 guanine

On chauffe sur un bain de vapeur d'eau durant 1/2 heure une solution de 0,63 g (1,96 mM) d'acétamido-2 dihydro-1,9 [(oxo-2 dioxane-1,3 yl-5)oxyméthyl]-9 6H-purine-one-6 dans 25 30 ml de méthylamine aqueuse à 40 %, puis l'on évapore sous vide. On fait recristalliser le résidu à partir d'eau pour obtenir la [(hydroxy-2 hydroxyméthyl-1)éthoxyméthyl]-9 guanine.

Les exemples 9 à 13 suivants illustrent des formula-3 0 tions pharmaceutiques selon l'invention, dans lesquelles composé actif est un composé de formule (I) ou un sel ou ester physiologiquement acceptable de ce composé.

Exemple 9 : comprimés

35 Composé actif 100 mg

Lactose 200 mg

Amidon 50 mg

Polyvinylpyrrolidone 5 mg

Stéarate de magnésium 4 mg

35 9 mg

2$

On prépare à partir des ingrédients ci-dessus des comprimés par granulation humide puis compression.

Exemple 10 : solution injectable Composé actif 0,7 75 mg

Tampon de phosphate pour pH 7, sans pyrogènes,stérile,

pour compléter à 25 ml

Exemple 11 : solution ophtalmique Composé actif 1,0 g

Chlorure de sodium, qualité analytique 0,9 g

Thiomersal 0,001 g

Eau purifiée pour complétera 100 ml PH ajusté à 5,5-7,5

Exemple 12 : pâte à base d'huile

Kaolin (diluant solide) 20 % en poids/poids

Huile minérale" (diluant liquide) 60 % en poids/poids

Composé actif 20 % en poids/poids

On mélange les constituants pour obtenir une pâte de consistance uniforme.

"L'huile minérale est une fraction, à point élevé d'ébulli-tion, d'une huile de pétrole raffinée ne contenant pas moins de 96 % de matière non sulfonable.

Exemple 13 : supplément pour aliments ; pastilles Composé actif 1 %

Céréales de base 99 %

On mélange les deux ingrédients et l'on envoie ensuite le mélange vers une installation classique quelconque de pas-tillage d'aliments.

Exemple 14

Activité sur l'être vivant de la [(hydroxy-2 hydroxyméthylëtho-xy-1)méthyl]-9 guanine et de acyclovir contre le virus de la rh inopneumonite équine

(P

3ô

10

15

20

25

30

Méthode

On a mis en cage, par groupe de 5, des hamsters mâle de Syrie, à peine sevrés, de couleur crème, pesant 4 0 à 50 g et âgés de 21 à 24 jours,'et on leur a donné de l'eau et de la nourriture à volonté.

On a utilisé une souche de vaccin "Pneumabort", adaptée au hamster, contre le virus de la rhinopneumonite equine (EHV-1), on a dilué à 10 ^ le vaccin dans du fluide pour culture de tissus et on a conservé cette solution de réserve à -70°C, en des parties aliquotes de 1 ml dans des ampoules en verre scellées. Au jour 0, les hamsters à infecter ont reçu, par voie sous-cutanée dans le flanc gauche, 0,2 ml de virus de vaccin de réserve, dilué encore à 2 x 10 1 dans une solution saline tamponnée par des phosphates.

On a préparé la j~(hydroxy-2 hydroxyméthyléthoxy-1) méthyl]] -9 guanine (désignée ci-après par "759 U") et acyclovir sous forme de solutions aqueuses aux concentrations spécifiées ci-après, dans de l'eau distillée stérile.

Expérience 1

Administration intrapéritonéale : du jour 0 au jour 4, inclusivement, les hamsters ont reçu "759 U" ou acyclovir en des doses divisées deux fois par jour en solutions aqueuse, la concentration de "759 U" variant comme suit, à savoir : 5 mg/ ml pour obtenir une dose de 100 ou 5 0 mg/kg/jour ; 1,2 mg/ml pour 20 mg/kg/jour ; 0,18 mg/ml pour 4 mg/kg/jour et 0,036 mg/ ml pour 2 mg/kg/jour. Des hamsters témoins, non traités, ont reçu un volume équivalent d'eau distillée stérile.

Résultats

Les résultats obtenus sont présentés sur le tableau suivant.

M

5

10

Nombre d'animaux dans le groupe

Traitement intrapéritonéal (mg/kg/jour)1

Jour (mortalité cumulative)

2

3

4

5

6

7

10

50/acyclovir

0

1

2

5

6

10

100/acyclovir

0

1"

2"

2::

3<:

10

100 / 759 U

0

1"

10

50 / 759 U

0

10

20 / 759 U

0

10

4 / 759 U

0

10

2 / 759 U

0

10

sans traitemt..

0

5

9

10

15 "Morts qui ne sont pas spécifiquement dues au virus.

Conclusion

Une dose de traitement par acyclovir de 100 mg/kg/jour, administrée par voie intrapéritonéale durant 5 jours en commençant 5 heures avant l'infection a généralement été néces-

2 0 saire pour empêcher toute mortalité provoquée par le virus. A

titre comparatif "75 9 U" à. la dose intrapéritonéale de 2 mg/kg/

jour a permis une maîtrise complète.

Expérience 2 (a)

Administration orale de "759 U"

25 On a préparé, dans de l'eau distillée stérile, une solution de réserve de "759 U" à 0,304 mg/ml puis l'on a dilué au tiers par étapes jusqu'à 0,101 et 0,034 mg/ml. On a donné aux ham sters l'eau de boisson, comportant le médicament,durant 5 jours en commençant 5 heures avant infection. Un groupe témoin a reçu

3 0 de l'eau sans médicament.

Résultats obtenus

Nombre d'animaux dans le groupe

Traitement" "759 U" voie orale (mg/kg/jour)

Jour (mortalité cumulative)

2

3

4

5

6

7

10

39

0

10

13

0

10

3

0

1

10

Sans traitement

1

5

10

"Calculé à partir de l'ingestion quotidienne moyenne. Expérience 2 (b)

Administration orale de acyclovir

On a dissous, à 2 mg/ml, acyclovir dans de l'eau dis-5 tillée stérile, avec addition d'un peu d'hydroxyde de sodium et chauffage jusqu'à 42°C pour faciliter la dissolution. On a donné à des hamsters de l'eau de boisson comportant du médicament puisqu'elle contenait acyclovir à raison de 2 mg/ml, durant 5 jour en commençant 5 heures avant l'infection. Le 10 traitement oral a abouti à l'administration d'une dose d'environ 100 mg/kg/jour. Un groupe témoin a été constitué et a reçu de l'eau sans médicament.

Résultats obtenus

Nombre d'animaux dans le groupe

Traitement oral par acyclovir (mg/kg/jour)

Mortalité cumulative

"inn y-

2

3

4

5

6

12 12

100

sans traitemt.

0 0

2 6

5

12

7

12

8

12

Conclusion

Acyclovir a manifesté une efficacité médiocre contre EHV-1 par administration orale à 100 mg/kg/jour durant 5 jour, alors que "759 U" a été complètement efficace par voie orale 25 à 13 mg/kg/jour, avec une mortalité limitée seulement, à la dose de posologie de 3 mg/kg/jour.

Exemple 15

Comparaison des activités, chez l'être vivant, de "759 U" et 3 0 de son analogue amino-6 (457 U) contre le virus de la rhinopneumonite équine Matériels et méthodes Hamsters

On a mis en cage au hasard, en dix groupe de 5, 50 35 hamsters mâle de Syrie WO/CR, avec de l'eau et de la nourriture (mélange de graines) à volonté. On a pesé les hamsters aux jours -3, 0, 4 et/ou au jour de la mort ou du sacrifice. On a enregistré la consommation d'eau des jours -3 à 0, à 4.

H

Virus et infection

Pour l'infection, on a encore dilué, à 10 1 dans une solution saline tamponnée par des phosphates, la souche de r -1

vaccin "Pneumabort" EHV-1 conservée à une dilution de 10 5 Au jour 0, les hamsters du groupe 1 à 9 ont reçu 0,2 ml d'innoculum de virus par voie sous-cutanée dans le flanc gauche, ce qui équivaut à environ 2 x 105 unités de formation de plaques.

Composés et traitement

10 On a dissous "457 U" et "759 U", à 0,075 mg/ml dans de l'eau de boisson. En supposant une ingestion quotidienne moyenne de 134 mg/mg de poids corporel, cela aboutirait à une dose quotidienne d'environ 10 mg/kg. On a fourni de l'eau,

comportant du médicament, depuis environ 5 heures avant 11in-

15 fection, durant 9 6 heures, comme indiqué ci-après :

Groupe Traitement

1-3 "759 U"

4-6 "457 U"

7-9 Pas de traitement/infection

20 10 Pas de traitement/pas d'infec tion

Résultats obtenus

Les mortalités cumulatives sont résumées au tableau suivant. On a calculé l'ingestion du médicament à partir du poids des 25 animaux et de la consommation d'eau enregistrée au cours de la période de l'expérience.

Il y a eu seulement une mort par hépatite provoquée par le virus chez les 15 hamsters traités par "457 U", alors qu'il y a eu 14 morts sur les 15 témoins non-traités et pas de mort 30 chez les 15 hamsters ayant reçu "759 U".

35

TABLEAU

Groupe

Conc entration de "457 U" dans 1'eau (mg/ml)

Concentration de "l'S9 U" dans 11 eau (mg / ml)

Ingestion moyenne (mg/kg/jr)

Mortalité cumulative (sur 15) au jour :

2

3

4 et au-delà

1-3

_

0,075

6 , 6

0

4-6

0 ,075

-

CD

0

1

7-9

-

0

9

14

10"

-

0

Conclusions

Par administration orale dans de l'eau de boisson, à raison d'environ 7 mg/kg/jour, le composé "457 U", qui est le déri-15 vé de type diamino de "759 U" a complètement empêché chez des hamsters de Syrie la mortalité provoquée par EHV-1, cependant que "759 U" a complètement empêché la mortalité due à EHV-1.

Exemple 16

20 Activité au laboratoire (in vitro) de "759 U" contre Herpès simplex type 1

Méthode

On a ensemensé des boîtes en matière plastique de 60 mm, pour la culture des cellules,à l'aide d'une suspension de "VERO" 25 (6 ml comportant 2 x 10^ cellules/ml) dans du milieu de croissance de cellules "VERO", comprenant 5 % de sérum de foetus de veau, 10 % de milieu essentiel minimal de Eagles, 0,11 % de bicarbonate de sodium, 0,25 % de "Crystamycine". (50 000 unités/ ml de benzylpénicilline sodique B.P. et 50 mg/ml de sulfate de 30 streptomycine de B.P.). On a doucement secoué les boîtes pour garantir une dispersion complète des cellules, puis l'on a fait incuber les cultures â 37°C dans une atmosphère d'air contenant

5 % de CO2, durant une nuit (environ 18 heures) pour obtenir la confluence. On a alors remplacé le milieu de croissance par 35 2 ml d'innoculum de virus (herpes simplex type 1) dans une solution saline tamponnée par des phosphates. La concentration des virus a été celle permettant de provoquer la formation de 200 à 400 plaques/boîte ou plaque. On a laissé s'écouler une période d'une heure pour l'absorption du virus à 37°C dans de l'air U

comportant 5 % de CC>2, après quoi on a fait égouter les plaques des boîtes et l'on a ajouté à 42°C 8 ml d'un milieu de revêtement. Le milieu de revêtement a consisté en 0,6 % d'agarose ou l

gélose, 2 % de sérum de foetus de veau, 10 % de milieu essentiel 5 minimal de Eagle, 0,11 % de bicarbonate de sodium et 0,25 % de "Crystamycine".

On a préparé des dilutions de doublement en micromola-rité du composé actif, dans la couche de revêtement ou supérieure, et on l'on a fourni à des cultures, en double, la couche de 10 revêtement ou supérieure de milieu d'entretien contenant une gamme de concentrations du composé. On a également préparé des cultures témoins de virus, sans traitement, et des cultures non infectées. On a laissé la couche supérieure se solidifier à la température ambiante avant de faire revenir les cultures dans 15 l'incubateur à 37°C dans de l'air à 5 % de C02 durant 4 jours. On a ensuite fixé les cultures avec la solution saline, tamponnée par des phosphates et comportant 10 % de formaline, durant 3 0 minutes à 1 heure ; on a enlevé la couche supérieure et l'on a coloré les cellules avec 0,05 % en poids/volume de violet de 20 méthyle dans du méthanol à 20 I. On a compté les plaques résultantes et on les a exprimées en pourcentage du nombre des plaques pour les cultures témoins du virus sans traitement. On a ensuite reporté ces valeurs dans un graphique en fonction de log^Q de la concentration du composé, et on a lu, sur la courbe 25 résultante dose/réponse, les valeurs de CI^q (concentration inhibitrice moyenne) représentant la quantité du composé nécessaire pour réduire de 5 0 % le nombre des plaques trouvées. Résultats obtenus

759 U

Acyclovir

CI5Q yM

C15 0

Expérience 1

O

O KO

0,17

Expérience 2

0,05

0 ,075

Expérience 3

0,036

0,11

Moyenne

0,059

0 ,118

36

Conclusion

"759 U" présente "in vitro", au laboratoire, une plus grande activité que acyclovir contre herpes simplex type 1.

5 Exemple 17

Activité chez l'être vivant de "759 U" contre l'encéphalite herpétique

Préparation du virus de réserve

On a anesthésié avec de l'éther des souris suisse 10 pesant 12 à 15 g et on leur a innoculé, à l'intérieur du cerveau, 0,025 ml d'une préparation de culture de tissus du virus de 1'herpes type 1. On a examiné chaque jour les souris, pour déceler des signes d'encéphalite due à l'herpes, c'est-à-dire une irritation cérébrale conduisant à la paralysie, au coma et 15 à la mort. On a tué les souris lorsqu'elles montré des signes précoces d'irritation cérabrale. On a examiné les viscères des souris, en vue de déceler des signes d'infection par des bactéries ou d'autres agents et, si l'on n'a pas trouvé de caractéristiques anormales, on a enlevé aseptiquement les cerveaux, 20 que l'on a broyés pour obtenir une pâte lisse. On a remis en suspension ce produit homogénéisé dans 4 ml d'un milieu d'entretien de culture de cellules pour chaque cerveau, et l'on a mélangé avec du glycérol selon le rapport de 2:1. Le poids des cerveaux de souris était d'environ 400 mg, et la préparation 25 a ainsi représenté une dilution de 10 1.

On a titré sur des souris les stocks de virus ainsi préparés pour déterminer le titre de DL en innoculant dans le cerveau des souris des dilutions de 10 fois de la préparation de stocjcs ou de réserve du virus et l'on a ensuite examiné deux 30 fois par jour les souris pour déceler des signes d'infection. On a calculé le titre de DL^q par la méthode de Karber.

Méthode

On a infecté l'intérieur du cerveau de souris, par groupe de 5 souris, avec du virus de réserve dilué pour obtenir 35 une dose d'environ 300 x DL^g- On a administré par la voie orale, à la dose de 100 mg/kg, le composé d'essai deux fois par jour sous forme d'une suspension. On a examiné les animaux deux fois par jour et l'on a enregistré, à la demi-journée la plus proche, les temps de survivance. On a donné les doses durant I 5 jours, et la période totale d'observation a été de 14 jours. I

3f

Les temps de survivance ont été transformés en leurs inverses, et le temps moyen de survivance a été déterminé pour chaque groupe (L.Bauer, D.J., Br^-t. J.Exp. Path. , 1960 , •£!_, 130).

5

Acyclovir

"759 U"

Sans traitement

Moyenne de 1'inverse

du temps de survi

vance

0,26

0,15

0,33

10

Conclusion

L'activité de "759 U" observée en cas d'administration orale a des souris infectées par voie intracérébrale, a été bien plus grande que celle d'acyclovir dans les mêmes conditions.

15

Exemple 18

Comparaison, sur l'être vivant, de l'activité de "759 U" et de "457 U" contre l'encéphalite herpétique

On a testé sur l'être vivant "759 U" et "457 U" contre 20 l'encéphalite herpétique chez les souris, en comparaison de l'action de acyclovir et de son homologue amino-6, l'amino-2-(hydroxyméthoxyméthyl-2)-9 adénine ("134 U").

Matériels et méthodes Souris

25 On a obtenu, chez Charles River, Manston, Kent, (Grande

Bretagne) des souris CD.1 pesant 16 à 20 grammes. On a logé les animaux par groupe d'environ 10 et on leur a donné de la nourriture et de l'eau à volonté.

Composé antiviraux

30 On a préparé sous forme de suspensions ou de solutions dans de l'eau stérile, à la concentration de 20 mg/ml avant chaque expérience, les composés, à savoir acyclovir, "134 U" , "759 U" et "457 U", et on les a conservés à 4°C durant la période d'administration.

35 Virus

On utilisé pour toutes les expériences la souche ICI du virus de 1'herpes simplex de type 1, à la concentration de 3 00

5

DLj-q (10 unités de formation de plaques/ml) . On a préparé dans de la solution saline tamponnée par des phosphates "A" des dilu-

7

tions à partir des réserves de virus (10 unités de formation

n de plaques/ml).

Modes opératoires des essais

Le mode opératoire d'essai est analogue à celui décrit dans l'exemple 13.

5 On a effectué 3 expériences, dans lesquelles on a exa miné 3 voies d'administration des composés :

i) sous-cutanée ;

ii) orale ; et iii) intrapéritonéale.

10 On a administré les composés à raison de 100 mg/ml/dose deux fois par jour durant 4 jours et 1/2, en commençant 2 à 3 heures après l'infection.

Résultats obtenus

Le tableau suivant montre la moyenne des inverses des 15 temps de survivance après administration orale, sous-cutanée (SC) et intrapéritonéale (IP) des composés antiviraux.

Traitement des

Moyenne de 1 ' inverse du temps de survivance groupes

Adminis. orale

S.C.

I.P.

Témoin ayant reçu le virus (300 DL,-n)

D u

0,334

0,344

0,307

Acyclovir (100 mg/kg/dose) "134 U"

(100 mg/kg/dose)

0,237 0,222

'0,174 0,226

0,236 0,231

"759 U"

(100 mg/kg/dose

0,146

0,084

• 0,093

"457 U"

(100 mg/kg/dose)

0,155

0,102

- 0,077

Lorsqu'on compare les deux groupes de traitement, acyclovir et "134 U", d'une part, et "759 U" et "457 U", d'autre part, ce dernier groupe manifeste le plus grand effet anti-35 viral. Les différences entre les deux groupes sont très Importantes pour l'une quelconque des trois voies d'administration.

10

15

20

W

Claims

REVENDICATIONS 1. Procédé pour la préparation de composés de formule générale :

N/

UN N

(I)

CH XCIlCH^Ol!

CH 011

(dans laquelle R représente un groupe hydroxyle ou amino, et X représente un atome d'oxygène ou de soufre) et de leurs sels et esters physiologiquement acceptables, procédé caractérisé en ce que :

(a) on enlève le groupe de blocage d'un composé de formule (II)

z

(II)

CH OW

(dans laquelle X a le sens défini ci-dessus, et W et W1 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe de blocage ; 25 Y est un atome d'hydrogène ou un groupe de blocage ; et Z est un groupe de formule -OY ou -NHY, dans laquelle Y a le sens défini ci-dessus, à la condition qu'au moins l'un des symboles W, W^" et Y représente un groupe de blocage) pour former un composé de formule (I) ou un sel ou ester de ce composé ; 3 0 (b) on transforme un composé de formule (III)

35

(III)

cil XCUCIl.,011 !

cn2on

10

15

20

(dans laquelle X a le sens défini ci-dessus et M est un groupe hydroxy-6 ou amino-6 et G est un atome ou groupe pouvant être remplacé par un groupe amino ou transformé en un groupe amino, ou bien G est un groupe amino-2 et M est un atome ou groupe pouvant être remplacé par un groupe hydroxyle ou amino ou transformé en un groupe hydroxyle ou amino) ou un sel ou ester de ce composé en un composé de formule (I) ou en un sel ou ester de ce composé. ;

(c) on réduit, par un procédé connu, un composé de formule (IV)

(iv)

ch„xchc:ii on 2 , 2

cho

(dans laquelle R et X ont le sens défini ci-dessus) ou un sel ou ester de ce composé ;

(d) on fait réagir un composé de formule (V) :

R

25

(V)

30

(dans laquelle R a le sens défini ci-dessus et Q est un groupe ou atome pouvant se scinder) avec un composé de formule (VI)

ach2xchch2oh ch2oh

(VI)

(dans laquelle X a le sens défini ci-dessus et A est un groupe 35 ou atome pouvant se scinder) ;

(e) on effectue l'hydrolyse d'un composé de formule (VII) :

(VII)

c---o

- 0

(dans laquelle R et X ont le sens défini ci-dessus) ; et l'on

10 effectue éventuellement une ou plusieurs des transformations suivantes, dans un ordre quelconque voulu :

i) lorsque le produit résultant est une base, on transforme cette base en son sel d'addition d'acide physiologiquement acceptable ;

15 ii) lorsque le produit résultant est un sel d'addition d'acide, on transforme ce sel en la base apparentée ;

iii) lorsque le produit résultant est un composé de formule (I) ou son sel, on transforme ce composé ou son sel en un ester dudit composé ou sel, acceptable du point de vue physiologi-

20 que ; et éventuellement ou en variante :

iv) lorsque le produit résultant est un ester d'un composé de formule (I), on transforme ledit ester en le composé apparenté de formule (I) ou en un de ses sels physiologiquement acceptable.

25 2. Procédé selon la revendication 1(a), caractérisé en ce que les groupes de blocage WjW1 et Y sont choisis parmi des groupes alcanoyles (1 à 4 atomes de carbone), aroyles, arylméthyles et tri-alkylsilyles (1 à 4 atomes de carbone par groupe alkyle) de blocage.

30 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on effectue l'enlèvement du groupe de blocage par hydrolyse ou hydrogénolyse.

4. Procédé selon la revendication 1 (b), caractérisé en ce que M et, éventuellement ou en variante, G représentent cha-

35 cun un groupe azide qui est transformé en un groupe amino par hydrogénation catalytique.

5. Procédé selon la revendication 1(b), caractérisé en ce que M et, éventuellement ou en variante G, représentent chacun un atome d'halogène ou un groupe alkylthio ou alkylsulfonyle

«

qui est transformé en un groupe amino par aminolyse.

6. Procédé selon la revendication 1(d), caractérisé en ce que A représente un aÇome d'halogène ou un groupe acyloxy.

7. Procédé selon la revendication 1(d), caractérisé en 5 ce que Q représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle ou trialkylsilyle dont chaque groupe alkyle comporte 1 à 4 atomes de carbone.

8. Procédé selon l'une quelconque des revendications

1 (d), 6 et 7, caractérisé en ce que l'on effectue la réaction 10 en présence d'une base.

9. Procédé selon la revendication l(e), caractérisé en ce qu'on effectue l'hydrolyse dans des conditions basiques.

10. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que X représente un atome d'oxygène et R représente un grou-15 pe hydroxyle.

11. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que X représente un atome d'oxygène et R représente un groupe amino.