Luke MacFarlane (Thomas Luke Macfarlane Jr.) è un attore canadese, è nato il 19 gennaio 1980 a London (Canada). Luke MacFarlane ha oggi 45 anni ed è del segno zodiacale Capricorno.
Ha studiato alla Juilliard School di New York, dove ha iniziato a lavorare in diverse produzioni teatrali. Debutta al cinema nel 2004 in Kinsey, ma acquista popolarità grazie al ruolo ricorrente di Scotty Wandell in Brothers & Sisters.
Nel 2014 prende parte a una nuova miniserie, The Night Shift, in cui interpreta un capitano dell'esercito, oltre che alle serie L'album dei ricordi, Killjoys. Nel 2022 è protagonista insieme a Billy Eichner di BROS di Nicholas Stoller.