TWI874061B - 水系組成物及皮膚外用劑 - Google Patents

Abstract

一種水系組成物，其包含下述通式(1)所表示的維生素E糖苷、1,2-己二醇及水。在式(1)中，R ¹、R ²及R ³各自獨立地表示氫原子或甲基。Rx表示單糖。Ry表示由下述式(Ry-1)或(Ry-2)所表示的基。*表示與通式(1)中的Ry所結合的碳原子結合的鍵結鍵。此外，含有前述水系組成物的皮膚外用劑。

Description

水系組成物及皮膚外用劑

本發明是有關於一種水系組成物及皮膚外用劑。 本申請主張基於2022年12月23日於日本申請的日本專利特願2022-206769號的優先權，並將其內容併入本說明書。

專利文獻1記載將生育酚糖苷作為有效成分之抗過敏劑。作為生育酚糖苷的實例，列舉生育酚葡萄糖苷。 專利文獻2揭示將生育酚葡萄糖苷作為有效成分之遲延型過敏症預防治療劑、免疫球蛋白E抗體產生抑制劑及抗炎症劑。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本專利特開昭61-030594號公報 [專利文獻2]國際公開第1991/007179號

[發明所欲解決之課題]

由於維生素E(生育酚或生育三烯酚)的糖苷對水的溶解性顯著較低，因此難以將其調製為水系組成物。 因此，本發明的目的在於提供一種維生素E糖苷的水系組成物以及含有前述水系組成物的皮膚外用劑。 [用以解決課題之手段]

本發明包含以下的態樣。 [1]一種水系組成物，其包含下述通式(1)所表示的維生素E糖苷、1,2-己二醇及水。

[式中，R ¹、R ²及R ³各自獨立地表示氫原子或甲基。Rx表示單糖。Ry表示由下述式(Ry-1)或(Ry-2)所表示的基。]

[式中，*表示與前述通式(1)中的Ry所結合的碳原子結合的鍵結鍵。]

[2]如[1]之水系組成物，其包含0.01~2質量%之前述維生素E糖苷、0.5~20質量%之前述1,2-己二醇。 [3]如[1]或[2]之水系組成物，其中前述維生素E糖苷為維生素E葡萄糖苷。 [4]如[1]或[2]之水系組成物，其中前述維生素E糖苷為生育酚葡萄糖苷。 [5]一種皮膚外用劑，其含有如[1]~[4]中任一項之水系組成物。 [發明的效果]

根據本發明，提供一種維生素E糖苷的水系組成物及含有前述水系組成物的皮膚外用劑。

以下，對本發明的實施形態進行詳細說明。然而，本發明不限於以下所示的實施形態。

(水系組成物) 在一實施形態中，本發明提供一種水系組成物。本實施形態的水系組成物包含下述通式(1)所表示的維生素E糖苷、1,2-己二醇及水。

[式中，R ¹、R ²及R ³各自獨立地表示氫原子或甲基。Rx表示單糖。Ry表示由下述式(Ry-1)或(Ry-2)所表示的基。]

[式中，*表示與前述通式(1)中的Ry所結合的碳原子結合的鍵結鍵。]

＜維生素E糖苷＞ 在本說明書中，將結合有單糖的維生素E的化合物標示為維生素E糖苷。維生素E是生育酚及生育三烯酚，可以是單獨的生育酚或單獨的生育三烯酚，也可以是兩者化合物的混合物。更具體而言，維生素E糖苷是結合有單糖之生育酚或生育三烯酚的化合物。更具體而言，維生素E糖苷是在單糖的變旋異構位(anomeric position)的碳原子(不對稱碳原子)結合有生育酚或生育三烯酚的化合物。當前述通式(1)中的Ry為前述式(Ry-1)所表示的基時，維生素E糖苷為在單糖的變旋異構位的碳原子結合有生育酚的化合物(生育酚糖苷)。當前述通式(1)中的Ry為前述式(Ry-2)所表示的基時，維生素E糖苷為在單糖的變旋異構位的碳原子結合有生育三烯酚的化合物(生育三烯基糖苷)。維生素E糖苷可以是在單糖的變旋異構位的碳原子結合有生育酚的化合物，與在單糖的變旋異構位的碳原子結合有生育三烯酚的化合物的混合物。 生育三烯酚可能化學性質不穩定。相對於此，生育酚作為化學合成品可以容易入手，且化學性質更穩定。因此，當使用維生素E糖苷於皮膚外用劑等之用途時，較佳為以生育酚糖苷為主要成分，或由生育酚糖苷所構成。

生育酚是由下述通式(2)所表示的化合物。生育三烯酚是由下述通式(3)所表示的化合物。

[式中，R ¹、R ²及R ³各自獨立地表示氫原子或甲基。]

生育酚及生育三烯酚因上述通式(2)及(3)之R ¹、R ²及R ³，而存在有α-生育酚及α-生育三烯酚(R ¹、R ²、R ³=CH ₃)、β-生育酚及β-生育三烯酚(R ¹、R ³=CH ₃，R ²=H)、γ-生育酚及γ-生育三烯酚(R ¹=H，R ²、R ³=CH ₃)、δ-生育酚及δ-生育三烯酚(R ¹、R ²=H，R ³=CH ₃)。

生育酚可以是α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚中的任一種。生育三烯酚可以是α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚及δ-生育三烯酚中的任一種。

由於生育酚及生育三烯酚各自在色原烷環的2位上具有不對稱碳原子，因此存在有d體及l體之立體異構物，以及存在dl體。生育酚及生育三烯酚可以各自是該些立體異構物中的任一種。生育酚及生育三烯酚各自具有獨特的生理活性，但由於化學性質相似，因此有時將兩者的混合物視為維生素E，並且有時在作為生育酚流通之物含有少量的生育三烯酚。此外，有時在作為生育三烯酚流通之物含有少量的生育酚。

前述通式(1)中的Rx表示單糖。更具體而言，Rx是從單糖除去與變旋異構位的碳原子結合的羥基之一價基。作為單糖，例如可列舉：葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖等。單糖可以是D體，也可以是L體，也可以是該些的混合物。單糖可以是α體，也可以是β體。作為單糖，較佳為葡萄糖。將維生素E與葡萄糖結合的化合物稱為維生素E葡萄糖苷。此外，將生育酚與葡萄糖結合的化合物稱為生育酚葡萄糖苷。將生育三烯酚與葡萄糖結合的化合物稱為生育三烯基葡萄糖苷。

作為維生素E葡萄糖苷的具體例，將δ-生育酚與β-D-葡萄糖在變旋異構位結合的化合物如下述式(4)所表示。將δ-生育三烯酚與β-D-葡萄糖在變旋異構位結合的化合物如下述式(5)所表示。

維生素E糖苷可以使生育酚或生育三烯酚與糖苷衍生物，藉由已知的反應進行反應來合成。例如，如日本專利特開第2008-133275號等所記載的方法般，將生育酚或生育三烯酚、及過乙醯化糖在合適的酸催化劑的存在下進行反應。接著，獲得生育酚或生育三烯酚結合至過乙醯化糖的變旋異構位的衍生物。接著，藉由乙醯基的去保護反應，從該衍生物去除乙醯基，藉此合成維生素E糖苷。當用作維生素E的材料是生育酚及生育三烯酚的混合物時，獲得具有源自生育酚及生育三烯酚的結構的化合物的混合物作為維生素E糖苷。

＜1,2-己二醇＞ 1,2-己二醇可以使用能作為化妝品成分使用的等級之物。例如，可以使用感光社股份有限公司所市售之商品名KMO-6等。

＜水＞ 水為精製水等可以使用能用於化妝品的等級之物。

＜水系組成物＞ 所謂的「水系組成物」是指，將溶質溶解在將水作為主體之溶劑的組成物。在本實施形態的水系組成物中，維生素E糖苷作為溶質溶解在至少包含水及1,2-己二醇的混合溶劑中。水系組成物中，相對於混合溶劑的總質量，混合溶劑中的水的比例較佳為60質量%以上，更佳為70質量%以上，進一步較佳為80質量%以上，特別較佳為90質量%以上。 作為水系組成物中水的含量，相對於水系組成物的總質量，較佳為80質量%以上，更佳為90質量%以上，進一步較佳為95質量%以上。作為水系組成物中水的含量範圍，相對於水系組成物的總質量，較佳為80~99.4質量%，更佳為90~99質量%，更佳為95~98質量%。

本實施形態的水系組成物中維生素E糖苷的含量，相對於水系組成物的總質量，較佳為0.01~2質量%。維生素E糖苷的含量更佳為0.1~1.0質量%，進一步較佳為0.2~1.0質量%。

本實施形態的水系組成物中1,2-己二醇的含量，相對於水系組成物的總質量，較佳為0.5~20質量%。1,2-己二醇的含量更佳為1~10質量%，進一步較佳為2~5質量%。 作為本實施形態的水系組成物，利用1,2-己二醇的效果來溶解維生素E糖苷時，溶劑中可以包含1,2-己二醇以外的有機溶劑。前述有機溶劑可以根據水系組成物的用途適當選擇。例如，當前述有機溶劑為乙醇等水溶性醇時，在不損害1,2-己二醇的效果的程度，例如，相對於水系組成物的總質量，較佳為將水溶性醇的含量限制為5質量%以下(亦即，0~5質量%)。

當水系組成物中維生素E糖苷及1,2-己二醇的含量在上述較佳的範圍內時，維生素E糖苷會充分溶解，其結果，能充分發揮維生素E糖苷的生理活性。 當水系組成物中的1,2-己二醇的含量為20質量%以下時，則作為皮膚外用劑塗佈時，對適用部位產生刺激性等不良情況的風險進一步降低。因此，水系組成物中1,2-己二醇的含量較佳為20質量%以下。

本實施形態的水系組成物可以藉由將維生素E糖苷溶解在水及1,2-己二醇的混合溶劑中來製造。例如，可以藉由將水及1,2-己二醇的混合溶劑放入適當的容器中，進一步添加維生素E糖苷並攪拌以溶解維生素E糖苷，可以獲得水系組成物。本實施形態的水系組成物通常為無色透明的液體組成物。

關於本實施形態的水系組成物，本發明者等以包含生育酚葡萄糖苷的水系組成物用作一實例，測定瞬時受體電位香草酸4(Transient receptor potential vanilloid 4, TRPV4)基因的表現促進效果，發現其具有優異的表現促進效果。 TRPV4被發現是一種在低滲透壓下活化之滲透壓感受性受體的蛋白質。TRPV4具有作為水分蒸散感測器的功能，已有報告指出，藉由4α-佛波酯(4α-PDD)所致之活化，可抑制水分蒸散及使皮膚屏障功能亢進。 皮膚屏障功能與緊密型連結(TJ)密切相關。TJ是在上皮細胞的周圍形成帶狀的細胞間接著結構體。TJ藉由使相鄰的上皮細胞彼此緊密接觸並閉合間隙，防止物質通過細胞的間隙而進出。TJ於皮膚、氣管、腸管、血管等處活躍表現，起到不使組織內部的液體通過，或不使異物從外部進入之屏障的功能。作為局部存在於TJ的膜蛋白質，已知密連蛋白(CLDN)及閉塞素(OCL)等。已知密連蛋白具有24種成員，其中密連蛋白-1(CLDN1)負責TJ中絞索的形成，在皮膚表皮之細胞間屏障的形成中發揮重要的作用。 已有報告指出，藉由活化表皮中存在的TRPV4，可促進TJ的形成，提升皮膚屏障功能，有效改善皮膚皸裂及皮膚保溼。 本實施形態的水系組成物具有促進TRPV4基因、CLDN1基因及OCL基因的表現，增大TRPV4、OLDN1及OCL的量的作用。此外，本實施形態的水系組成物具有抑制經表皮水分蒸散量的作用。因此，本實施形態的水系組成物可以用作優異的皮膚皸裂改善劑及/或皮膚的保濕劑。

(皮膚外用劑) 在一實施形態中，本發明提供一種皮膚外用劑。本實施形態的皮膚外用劑含有前述水系組成物。

當本實施形態的水系組成物用作皮膚外用劑時，除前述水系組成物以外，還可以含有其他成分。作為其他成分，例如可列舉藥學上可接受的載體。 在本說明書中，所謂的「藥學上可接受的載體」是指，不抑制有效成分的生理活性，且對其給藥的對象不表現出實質毒性的載體。 尚且，所謂的「不表現出實質毒性」是指，該成分在通常使用的劑量下對投藥對象不表現出毒性。 作為藥學上可接受的載體，沒有特別限制，可列舉：賦形劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、穩定劑、稀釋劑、注射劑用溶劑、保濕劑、感觸提升劑、界面活性劑、高分子/增黏/凝膠化劑、溶劑、噴射劑、抗氧化劑、還原劑、氧化劑、螯合劑、酸、鹼、粉體、無機鹽、水、含金屬化合物、不飽和單量體、多元醇、高分子添加劑、潤濕劑、增黏劑、黏著賦予物質、油性原料、液體基質、脂溶性物質、高分子羧酸鹽等。 本實施形態的屏障功能改善用的組成物中，藥學上可接受的載體可以單獨使用1種，也可併用2種以上。

此外，作為其他成分可列舉：防腐劑、抗菌劑、紫外線吸收劑、美白劑、維生素類及其衍生物類、消炎劑、抗炎劑、生髮劑、血液循環促進劑、興奮劑、激素類、抗皺劑、抗老化劑、緊緻劑、冷感劑、溫感劑、創傷治癒促進劑、刺激緩解劑、鎮痛劑、細胞活化劑、植物/動物/微生物萃取物、種子油、止癢劑、角質剝離/溶解劑、止汗劑、清涼劑、收斂劑、酵素、核酸、香料、色素、著色劑、染料、顏料、消炎鎮痛劑、抗真菌劑、抗組織胺劑、催眠鎮靜劑、精神鎮靜劑、抗高血壓劑、降壓利尿劑、抗生素、麻醉劑、抗菌性物質、抗癲癇劑、冠狀血管擴張劑、生藥、止癢劑、角質軟化剝離劑、紫外線遮斷劑、殺菌劑、抗氧化物質、pH調整劑、添加劑、金屬石鹼等。作為該些成分的具體例，例如可列舉：國際公開公報第2016/076310號中所記載者等。該些成分可以單獨使用1種，也可併用2種以上。

本實施形態的皮膚外用劑可以按照常規方法(例如，日本藥局方中記載的方法)，藉由將前述水系組成物及任意的藥學上可接受的載體及其他成分混合並進行製劑化來製造。

本實施形態的皮膚外用劑可以是化妝料。作為化妝料的種類，例如可列舉：洗髮精、調理洗髮、祛屑用洗髮精、染髮用洗髮精、洗護一體洗髮劑、沖洗護髮素(rinse)、護理護髮素(treatment)、毛髮泡沫(hair foam)、毛髮摩絲、噴髮劑、毛髮噴霧(hair mist)、髮膠、水脂(water grease)、點燙藥水(setting lotion)、顏料洗液、生髮油、髮露、定型摩絲(hair blow)、分叉髮尾修復劑、永久性燙髮劑、燙直髮劑、氧化染髮劑、漂髮劑、髮色預處理、髮色後處理、永久性預處理、永久性後處理、染髮、生髮劑等毛髮用化妝料；洗面乳、洗面泡沫、皂粉、潔面粉、清潔霜、洗面乳、潔面凝膠(cleansing gel)、清潔面膜、化妝水、柔膚化妝水、收斂化妝水、清潔化妝水、多層式化妝水、乳液、潤膚露、保濕露、乳狀洗液、滋養露、滋養乳、護膚液、滋潤乳液、按摩露、潔膚露、防護乳液、防曬、防曬劑、UV防曬霜、防曬液、化妝露、角質平滑劑(smoother)、肘關節液(elbow lotion)、洗手露、身體乳、乳霜、滋潤霜、營養霜、滋養霜(nourishing cream)、雪花膏、保濕霜、晚霜、按摩霜、清潔霜、化妝霜、基本乳霜、妝前霜、防曬乳、曬斑霜、除毛霜、除臭霜、刮鬍霜、角質層軟化霜、凝膠、潔面凝膠、保濕凝膠、肥皂、化妝皂、透明皂、藥皂、液體肥皂、刮鬍皂、合成化妝皂、面膜(pack)、面膜(mask)、剝離型面膜、粉狀面膜、清潔面膜、油面膜、清潔面膜、精華、保濕精華、美白精華、紫外線防護精華、微脂體美容液、微脂體化妝水等基礎化妝料；白粉/打粉類、粉底類、隔離霜、口紅類、潤唇膏、胭脂類、眼線膏、睫毛膏、眼影、指甲油、琺瑯質去除劑、指甲護理等彩妝化妝料；香水、香水(perfume)、香料、淡香精、淡香水、古龍水、香膏、芳香粉、香水皂、身體乳、沐浴油等芳香化妝料；體用香波、身體清潔劑、身體粉、祛臭露、祛臭粉、除臭噴霧劑、祛臭棒、除臭化妝料、脫色劑、除毛/除毛劑、沐浴劑、防蟲噴霧、驅蟲劑等身體化妝料；軟膏劑、貼附劑、洗劑、擦劑、液體塗佈劑等。

(其他實施形態) 在一實施形態中，本發明提供一種保濕皮膚的方法、改善乾燥皮膚的方法或改善皮膚皸裂的方法，其包含將前述水系組成物塗佈於對象的皮膚的步驟。 在一實施形態中，本發明提供一種促進TRPV4、CLDN1及OCL1產生的方法，其包含將前述水系組成物塗佈於對象的皮膚的步驟。 在一實施形態中，本發明提供一種用於保濕皮膚、改善乾燥皮膚或改善皮膚皸裂的前述水系組成物。 在一實施形態中，本發明提供一種用於促進TRPV4、CLDN1及OCL1產生的前述水系組成物。 在一實施形態中，本發明提供一種前述水系組成物的用途，其用於製造用於保濕皮膚、改善乾燥皮膚或改善皮膚皸裂的皮膚外用劑。 在一實施形態中，本發明提供一種前述水系組成物的用途，其用於製造TRPV4、CLDN1及OCL1的產生促進劑。 在一實施形態中，本發明提供一種前述水系組成物的用途，其用於保濕皮膚、改善皮膚乾燥或改善皮膚皸裂。 在一實施形態中，本發明提供一種前述水系組成物的用途，其用於促進TRPV4、CLDN1及OCL1的產生。 [實施例]

以下，藉由實施例及比較例對本發明進行更具體的說明，但本發明並不限定於以下的實施例。

以下實驗所使用的D-δ-生育酚葡萄糖苷，是使用參考日本專利特開第2008-133275號公報等所記載的合成方法來合成之物。

[實驗例1] (生育酚葡萄糖苷的溶解性確認) 對D-δ-生育酚葡萄糖苷(以下，有時縮寫為「δ-TPG」)的溶解性進行研究。 如表1、表2所記載，將水及1,2-己二醇(以下，有時縮寫為「HD」)或乙醇(以下，有時縮寫為「EtOH」)進行混合，準備各實施例的混合物。將每個混合物9.9g放入各自的小瓶，將固體的δ-TPG 0.01g加入每個小瓶，在室溫下進行攪拌。攪拌1小時後，觀察各小瓶的狀態。基於以下的評價基準，從小瓶的觀察結果評價δ-TPG的溶解性。將其結果作為「溶解性評價」如表1、表2所示。 ＜評價基準＞ A：完全溶解並變得澄明。 B：產生沉澱、白濁。

表1顯示將δ-TPG 0.01g溶解在水及HD的各混合物中的結果(實施例1~4)。表2顯示將δ-TPG 0.01g溶解在水及EtOH的各混合物中的結果(比較例1、2)。

δ-TPG不溶解於水。然而，可完全溶解在EtOH或HD中。對水系組成物而言使用高濃度的EtOH或HD較不佳。因此，當該些化合物減少時，亦即，在含有低濃度EtOH或HD的水系組成物中調查δ-TPG的溶解性。當包含5質量%或10質量%的EtOH之混合物的情況下，δ-TPG不會溶解(表2)。相對於此，當使用HD調製混合物時，即使是HD濃度為0.5質量%程度之低濃度的混合物，δ-TPG會溶解，可以獲得澄明的水系組成物(表1)。

[實驗例2] (含有δ-TPG及HD的水系組成物的活性的確認：TRPV4基因的表現) 將正常人類表皮角化細胞(NHEK，倉敷紡織股份有限公司製)，以10000個/cm ²的接種密度接種在塑膠培養皿，在正常人類表皮角化細胞無血清增殖用培養基(倉敷紡織股份有限公司製)中培養24小時。 將水8.94g、HD 1.0g、δ-TPG 0.06g混合並攪拌以獲得水系組成物。將前述水系組成物以使δ-TPG的終濃度成為10μM的方式添加至培養24小時之上述的NHEK細胞的培養液中。 添加δ-TPG後，將前述培養液進一步培養48小時。之後，使用UVP公司的UVB照射裝置，照射60mJ/cm ²的UVB。之後，在前述培養液中添加新的正常人類表皮角化細胞增殖用培養基，進一步培養24小時。如此一來，獲得評價用細胞。

從上述所得到的評價用細胞中提取總RNA，合成cDNA。隨後，以上述的cDNA作為模板，進行即時定量PCR，並定量NHEK細胞中TRPV4基因的表現量。對甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)的表現量進行定量以作為內標基因。GAPDH是一種表現不會因化合物的添加而變動之管家基因。以NHEK細胞中GAPDH基因的表現量作為基準，將TRPV4基因的表現量進行標準化。作為GAPDH基因擴增用的引子，使用takara bio公司製的引子GAPDH(ID：HA067812)。作為TRPV4基因擴增用的引子，使用takara bio公司製的引子TRPV4(ID：HA186338)。

使用D-α-生育酚葡萄糖苷(以下，有時縮寫為「α-TPG」)、生育酚乙酸酯(富士膠片和光純藥股份有限公司；以下，有時縮寫為「TPA」)、δ-生育酚(Sigma-Aldrich；以下，有時縮寫為「δ-TP」)或α-生育酚(純正化學股份有限公司；以下，有時縮寫為「α-TP」)來替代δ-TPG，進行與上述相同的操作以獲得評價用細胞。對於該些評價用細胞，藉由與上述相同的操作測定TRPV4基因的表現量。

TRPV4基因的表現量，是將基準用細胞中TRPV4基因的表現量設為1時，作為相對值而求出。基準用細胞是藉由在細胞培養液中不添加試驗化合物，且不照射UVB來培養NHEK細胞而調製。將HD添加到基準用細胞的細胞培養液中，使得HD濃度與上述添加δ-TPG培養時的細胞培養液中的HD濃度相同。NHEK細胞的培養條件，除不添加δ-TPG且不照射UVB以外，與上述添加δ-TPG的情況相同。

藉由培養不向細胞培養液中添加試驗化合物，且照射UVB之NHEK細胞，以調製比較用細胞。將HD添加至比較用細胞的細胞培養液中，使得HD濃度與上述添加δ-TPG培養時的細胞培養液中的HD濃度相同。比較用細胞的培養條件，除不添加δ-TPG以外，與上述添加δ-TPG的情況相同。比較用細胞中TRPV4基因的表現量，藉由與上述相同的方法來求出。 儘管調製不含HD、含有生育酚葡萄糖苷的水系組成物，但生育酚葡萄糖苷並未充分溶解於該水系組成物中。因此，沒有進行評價用細胞的調製及TRPV4基因的表現量的測定。

結果如表3所示。

藉由UVB的照射，TRPV4基因的表現降低。另一方面，藉由在培養液中添加含有生育酚葡萄糖苷(δ-TPG、α-TPG)的水系組成物，UVB照射所致之TRPV4表現的降低被顯著抑制。此結果表明，在經UVB照射的細胞中，生育酚葡萄糖苷具有顯著的促進TRPV4基因表現的效果。生育酚葡萄糖苷所致之TRPV4基因表現的促進效果，顯著高於δ-TP、α-TP及TPA所致之TRPV4基因表現的促進效果。

[實驗例3] (δ-TPG及HD的水系組成物活性的確認：TJ相關基因表現的促進效果) 對於正常人類表皮角化細胞(NHEK，倉敷紡織股份有限公司製)，藉由與實驗例2相同的操作獲得評價用細胞。 從由此獲得的評價用細胞中提取總RNA，並合成cDNA。隨後，以上述的cDNA作為模板，進行即時定量PCR，並定量NHEK細胞中密連蛋白1(CLDN1)基因及閉塞素(OCL)基因的表現量。此外，對GAPDH的表現量進行定量以作為內標基因。以NHEK細胞中GAPDH基因的表現量作為基準，將CLDN1基因及OCL基因的表現量進行標準化。作為GAPDH基因擴增用的引子，使用takara bio公司製的引子GAPDH(ID：HA067812)。作為CLDN1基因擴增用的引子，使用takara bio公司製的引子CLDN1(ID：HA103348)。作為OCL基因擴增用的引子，使用takara bio公司製的引子OCL(ID：HA036753)。

使用α-TPG、TPA、δ-TP或α-TP來替代δ-TPG，進行與上述相同的操作以獲得評價用細胞。對於該些評價用細胞，藉由與上述相同的操作測定CLDN1基因及OCL基因的表現量。

各基因的表現量，是將基準用細胞中各基因的表現量設為1時，作為相對值而求出。基準用細胞是藉由與實驗例2中的基準用細胞同樣的操作而調製。

比較用細胞中CLDN1基因及OCL基因的表現量，藉由與上述相同的方法來求出。比較用細胞是藉由與實驗例2中的比較用細胞同樣的操作而調製。 儘管調製不含HD、含有生育酚葡萄糖苷的水系組成物，但生育酚葡萄糖苷並未充分溶解於該水系組成物中。因此，沒有進行評價用細胞的調製及CLDN1基因及OCL基因的表現量的測定。

結果如表4所示。

藉由UVB的照射，CLDN1基因及OCL基因的表現降低(「無UVB照射、添加試樣-」與「有UVB照射，添加試樣-」之間的比較)。另一方面，藉由在培養液中添加含有生育酚葡萄糖苷(δ-TPG、α-TPG)的水系組成物，CLDN1基因及OCL基因表現量顯著增加。生育酚葡萄糖苷所致之CLDN1基因及OCL基因表現的促進效果，顯著高於δ-TP、α-TP及TPA所致之CLDN1基因及OCL基因表現的促進效果。

[實驗例4] (TJ形成能力評價試驗) 將皮膚模型(型式「EP1-200」，倉敷紡織股份有限公司製)在37℃、5%CO ₂的條件下預培養1小時。隨後，將溶解在0.5質量%HD水溶液中的濃度為0.2質量%的δ-TPG添加至皮膚模型的表面，進一步培養24小時。隨後除去δ-TPG，以磷酸緩衝液洗滌3次後，測定經表皮水分蒸散量(TEWL)。TEWL的測定是使用旋風水分蒸散計(Nippon Ash股份有限公司製)。

使用TPA代替δ-TPG，進行與上述相同的操作，測定TEWL。

作為對照，使用不含δ-TPG的0.5質量%HD水溶液，代替溶解在0.5質量%HD水溶液中的δ-TPG，進行與上述相同的操作，測定TEWL。

使用以0.2質量%的濃度溶解於1質量%HD中的δ-TP，代替溶解於0.5質量%HD中的δ-TPG，進行與上述同樣的操作，測定TEWL。

表5顯示TEWL的測定結果。確認添加δ-TPG的群組中，TEWL受到抑制。此結果顯示，藉由δ-TPG促進TJ形成，藉此提高皮膚的保濕能力(水分保持功能)。

測定TEWL後，回收每個皮膚模型並包埋於石蠟中，使用切片製作裝置製作組織切片標本。 將組織切片標本進行脫蠟處理、脫水處理，得到皮膚組織試樣。對此皮膚組織試樣實施免疫抗體染色。作為1次抗體，使用兔子抗TRPV4抗體、兔子抗閉塞素抗體或兔子抗密連蛋白1抗體(均由Abcam公司製造)。將各抗體以兔子抗TRPV4抗體(1:100)、兔子抗閉塞素抗體(1:100)及兔子抗密連蛋白1抗體(1:100)的稀釋率，使用含有0.05質量%Tween-20的磷酸緩衝液中稀釋。2次抗體使用含有0.05質量%Tween-20的磷酸緩衝液，將源自辣根的過氧化物酶綴合的驢抗兔IgG抗體(Abcam公司製)稀釋為1:1000。經1次抗體與2次抗體的反應後，洗滌皮膚組織試樣。然後，使用過氧化物酶顯色基質3,3’-二胺基聯苯胺四鹽酸鹽(富士膠片和光純藥股份有限公司製)進行顯色反應。 以倒立顯微鏡(Nikon TS1)觀察各皮膚組織試樣並拍照。對於所獲得的3個獨立影像中，使用Image J軟體(NIH)對各自與蛋白質表現量相關的亮度值進行定量解析。

結果如表6所示。各例中的各基因的亮度值，是以將使用不含試驗化合物之0.5質量%HD水溶液的皮膚組織試樣中的各基因的平均亮度值設為1.00時所顯示的相對值。

在添加生育酚葡萄糖苷(δ-TPG、α-TPG)的群組中，確認TRPV4、CLDN1、OCL1的蛋白質量增加。該些結果表明，藉由生育酚葡萄糖苷，TRPV4的蛋白質量增加，藉此皮膚的水分蒸散量受到抑制。此外，藉由生育酚葡萄糖苷，CLDN1及OCL1的蛋白質量增加，藉此促進TJ的形成，其結果表示能提高皮膚的保濕能力。

以上，對本發明的較佳實施例進行說明，但本發明並不限定於該些實施例。在不脫離本發明的主旨的範圍內，可以對構成進行加成、省略、替換及其他變更。本發明不受前述說明的限制，而僅受所附申請專利範圍的限制。

Claims (4)

1. 一種水系組成物，其包含下述通式(1)所表示的維生素E糖苷、1,2-己二醇及水，

   

   式中，R¹、R²及R³各自獨立地表示氫原子或甲基；Rx表示葡萄糖；Ry表示由下述式(Ry-1)或(Ry-2)所表示的基；

   

   

   式中，*表示與前述通式(1)中的Ry所結合的碳原子結合的鍵結鍵。
2. 如請求項1之水系組成物，其包含0.01~2質量%之前述維生素E糖苷、0.5~20質量%之前述1,2-己二醇。
3. 如請求項2之水系組成物，其中前述維生素E糖苷為生育酚葡萄糖苷。
4. 一種皮膚外用劑，其含有如請求項1~3中任一項之水系組成物。