TWI283181B - Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies - Google Patents

Description

1283181 (Ο 玖、發明說明 …一、 (發明說明麟明··發明所屬之技術領域、先前技術、内容、實施方式及圖式簡單說明) 本案主張2002年1月21日在35U.S.C· § 119(a)申請之加拿 大專利申請案No· 2,368,656號之權利，該案之全文以引用 的方式併入本文中。

本案進一步主張在35 U.S.C· § 119(e)申請之下列專利案 之權利：U.S·臨時申請案No· 60/一，一，，其由2002年1月22 曰申請之U.S·專利案號No· 10/051，381依據37 C.F.R· § 1.53((〇(2)(〇而轉換；2002年1月28曰申請之1^臨時申請案 號No. 60/351,427 ; 2002年3月18日申請之U.S·臨時申請案號

No· 60/364,620 ; 2002年4月15日申請之U.S·臨時案號No. 60/372,106及2002年8月2日申請之U · S ·臨時案號No· 60/400,857，以上之全文均以引用方式併入本文中。 發明所屬之技術領域 本發明是有關具有生物活性之三度空間合成的及半合 成的組合物，及彼在治療及/或預防哺乳動物患者中各種 失調症上之用途。較特別地是有關合成的及半合成實體之 製劑及用途，其在引入患者體内時可產生有益的抗炎’器 官保護性及免疫調節性作用。本發明也是有關纾緩發炎及 自體免疫疾病及其症狀之治療及組合物。 先前技術 參考文獻 1. U.S. Patent No. 4,485,054, issued November 21, 1984, to Mezei et al. 2. U.S. Patent No. 4,496,787, issued January 29, 1985, to Touchais et al. -6- 1283181 (2) 發明說明績頁 3· U.S. Patent No· 4,812,314，issued March 14，1989，to Barenholz. 4. U.S. Patent No. 4,938,763, issued July 3, 1990, to Dunn et al. 5. U.S. Patent No. 4,946,787, issued August 7, 1990, to Eppstein et al. 6. U.S. Patent No. 5,188,951, issued February 23, 1993，to Tremblay et al. 7. U.S. Patent No. 5,252,263, issued October 12, 1993, to Hope et al. 8. U.S. Patent No. 5,376,452, issued December 27, 1994, to Hope et al. 9. U.S. Patent No· 5,736，157，issued April 7，1998，to Williams· 10. U.S. Patent No. 5,741,514, issued April 21, 1998, to Barenholz et al. 11. U.S. Patent No. 5,746,223, issued May 5, 1998, to Williams. 12. U.S. Patent No. 5,843,474, issued December 1, 1998，to Williams. 13. U.S. Patent No· 5,858,400，issued January 12，1999，to Williams. 14. U.S. Patent No. 6,297,870, issued October 2, 2001, to Nanba. 15. U.S. Patent No. 6,312,719, issued November 6, 2001, to Hope et al. 16. International Publication No. WO 01/66785， published September 13, 2001. 1283181 (3) 發明說啁禳馬 17. International Patent Application PCT/CA02/01398 to Vasogen Ireland Limited. 18. Lehniger, Biochemistry (1970) 19. Barenholz et al. “Liposomes as Pharmaceutical Dosage Forms” 20. New. R.C. “Liposomes: A Practical Approach’’，IRL Press at Oxford University Press (1990). 21. Richard Harrigan- 1992 University of British Columbia PhD Thesis “Transmembrane pH gradients in liposomes (microform): drug-vesicle interactions and proton flux’’，published by National Library of Canada，(1993); University Microfilms order no. UMI00406756; Canadian no. 942042220, ISBN 0315796936. 22. Griffin WST et al. “Brain interleukin 1 and-S-100 immunoreactivity are elevated in Down Syndrome and Alzheimer Disease·’’ Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 86: 761 1-7615 (1989). 23. Bliss, T.V.P·，et al· “A synaptic model of memory: long- term potentiation in the hippocampus.,5 Nature. 361: 31-39 (1993). 24. Murray, C.A·，et al. “Evidence that increase hippocampal expression of the cytokine interleukin-IB is a common trigger for age and stress-induced impairments in long-term potentiation.55 J. Neuroscience. 18: 2974-2981 (1998). 25· Mogi，M·，et al· “Interleukin (IL)-l beta，IL-1，IL-4, IL-6 and transforming growth factor-alpha levels are elevated in 1283181 (4) 發明說明續:頁 ventricular cerebrospinal fluid in juvenile parkinsonism and Parkinson’s Disease.” Neuroscience Letters. 21 1: 13-16 (1996). 26. Giannessi D，Del Ry S，Vitale RL “The role of endothelins and their receptors in heart failure.” Pharmacol Res 2001 Feb 43:2 111-26. 27. Van de Stolpe A，Van der Saag PT，“Intercellular adhesion molecule-1” J. Mol. Med. (1996) 74:1 12-33· 所有上述的刊物，專利案及專利說明書均以全文納入本 案參考，如同個別刊物，專利案及專利說明書特異且個別 地以全文列入參考一般。 專門的抗原-呈現細胞（APCs)，包括樹突細胞（DCs)及巨噬 細胞（Mph)，可活躍地捕獲及處理抗原（Ags)，清除細胞殘屑 ，並移去感染性有機體及瀕死細胞，包括得自瀕死細胞之 殘留物。在此過程中，APCs可刺激任一發炎性Thl發炎原 細胞動素之產製（IL-12，IL-1，INF-γ，TNF-α，等）；或調節 性Th2/Th3細胞動素（如IL_10，TGF-β，IL-4等）支配之反應； 依抗原（Ag)或呑噬的物質之本質及APC成熟作用/活化作 用之水平而定。 APCs可移去細胞殘屑，其中某些係衍生自體之細胞膜， 某些來自細菌及寄生蟲感染及共生的有機體，如腸道菌。 此細胞殘屑中某些雖可啟動發炎原反應，但某些仍可啟動 保護性及抗炎反應。 正常有功能的免疫系統可區別外來侵入有機體之抗原 (非自身的）及由“自身”衍生之組織或殘屑，並展開僅拮抗 1283181 _ (5) 發明說明續頁 外來抗原之免疫反應。當病人之免疫系統無法區別自身及 非自身時，即可生成自體免疫失調症。 發明内容 本發明是有關以下的發現，即藥學上可接受之實體，如 脂質體，珠粒或類似粒子，其含有磷酸-甘油基，一旦投 予至哺乳動物病人體内可引起抗炎作用，且因此可用來治 療各種疾病。這些實體可進一步含不活性組份為次要組份 ，及/或經由不同機制而具活性之組份。

在一個較佳具體實例中，本發明是有關可於哺乳動物活 體内產製抗炎反應之實體之組合物，該組合物含有藥學上 可接受之實體，且大小由約20毫微米（nm)至5 00微米（μιη) ，包括許多可轉化至此基團之磷酸-甘油基。較好，實體 基本上無非脂質之藥學活性實體。較好，磷酸-甘油基占 實體上活性基團之60%-100%。在投予至哺乳動物後，此 實體經由磷酸·甘油基咸信可與免疫系統交互作用。結果 當投予時可誘生抗炎反應。 在另一具體實例中，本發明是有關三度空間合成的或半 合成的實體，不然在此稱為藥學上可接受之實體，具有由 20毫微米至500微米之大小範圍，且經修飾含有充作主組 份之至少一種抗炎促進性配體，其中該配體具有磷酸-甘 油基。 又在另一具體實例中，本發明是有關三度空間之合成的 及半合成的實體，不然在此稱為藥學上可接受之實體，具 有大小在由2 0毫微米至5 0 0微米，且在其表面有磷酸-甘油 -10- ⑽ 3181 (6) 發明 基 之〜方面，本發明是有關治療由τ-細胞調介之失調症 上可 匕方去包括對哺乳動物患者投予有效劑量之藥取

及/劣、+ 髌（其攜有有效數量之磷酸-甘油基），以抑劍 气减少、τ a , W 太 〜田胞功能調升之失調症之進行。 +發明進_牛Η 括對串、 .疋有關治療發炎失調症之方法，此方法包 數量投予有效劑量之藥學上可接受實體（其攜有有t 里 < 磷酸_甘 F4攻 行。 /由基），以抑制及/或減少發炎失調症之進 又本發明另一 ，此古、土 — 具體實例是治療内皮功能失調症之方 此万法包括對4 ^ 乂万法 受實體（其攜有有^ 投予有效劑量之藥學上可接 少内皮功能夫調症之酸-甘油基)’以抑制及/或減 疫失調症：：：是:療特徵為不適當細胞動素表現之免 藥學上可接受實：法包括對哺乳動物投予有效劑量之 又貫體（其攜有有效勃I >诚祕 抑制及/或減少& 故"甘油基），以 ^免疫失調症之進 本發明進〜I η 之方法，此疫之mr:預防哺乳動物心臟失調症 QT-c間隔有延長而得知，=:性可由觀察病人心電圖上 者，其或罹患此疾或、此万法包括對哺乳動物患 A务感染此疾，投+ 4 之生物可相容的合成或半 。有藥學上可接受 上可接受實體，及藥 。心貫#豆，不然在A稱為藥學 -部份具有由二:二接受之載劑，其中該實體至少 20毛锨未至500微米之大 八」、I&圍，丑其中 -11 . 1283181 ⑺ 發明說明續頁 該實體表面經修飾攜有充作主組份之至少一種抗炎促進 基團，該基團是磷酸-甘油。 本發明另一具體實例是一種呈單位劑型之藥學組合物 ，可投予至哺乳動物患者，其中含藥學上可接受之實體及 藥學上可接受載劑，其中實體至少一部份之大小在由約20 毫微米至500微米，且其中該實體表面含有磷酸-甘油基或 可轉化至磷酸-甘油基之基團，該單位劑量含有由約5 0 0 至約2.5 X 109個實體。 本發明進一步具體實例是一種藥學組合物，其含有藥學 上可接受之生物可相容的合成的或半合成的實體（不然在 此指藥學上可接受之實體）及藥學上可接受之載劑，其中 該實體至少一部份具有由約20毫微米至500微米之大小， 且其中該實體表面經過修飾含有充作主要組份的至少一 種抗炎促進基，其中該基團是磷酸-甘油。 本發明又進一步具體實例是醫藥組合物，其中含有藥學 上可接受之生物可相容之合成或半合成的實體（不然在此 稱為藥學上可接受之實體）及藥學上可接受之載劑，其中 該實體至少一部分具有由約20毫微米至500微米之大小， 且含有心磷脂（cardiolipin)。 .視所需的，上述之實體可另外含有不活性組份表面基團 及/或組份表面基團（其可經由另一機制而具活性），如磷 脂酸基絲胺酸（如見 Fadok et al·，International Publication Wo 01/66785)。 在另一具體實例中，本發明是有關攜有磷酸-甘油基或 -12- !283181 (8) I發明說明續頁 可=化至嶙^甘；由基之基團之^東乾♦上可接受 <實體’&含有經冷㈣燥實體之套組’實體中含有麟酸 •甘油基，或可轉化成鱗酸-甘油基之基團，套組中並含有 藥學上可拉^、 J接文艾載劑。 在另一方面，本發明是有關治療τ-細胞功能調介之失 調症之方法，此方法包括對罹患或有罹患T-細胞功能調介 失調症危險性之哺乳動物患者投予有效劑量之含有藥學 上可接受實體之組合物，且此實體具有由約20毫微米至約 500微米之大小，並在其表面含有許多的磷酸-甘油基或可 轉化成該磷酸-甘油基之基團，如此一旦投藥則T-細胞功 %调介之失調症之進行可受抑制及/或減缓。 又本發明另一具體實例是有關治療内皮功能失調症之 万法’此方法包括對罹患或有罹患内皮功能失調症危險性 之哺乳動物患者投予有效劑量之含有藥學上可接受實體 之組合物，此實體具有由約20毫微米至約5〇0微米之大小 ’並在其表面含有許多的鱗酸-甘油基，或可轉化成該磷 酸甘油基之基團，如此一旦投藥内皮功能失調症之進行 可交抑制及/或減緩。 *本發明另一具體實例是有關治療有免疫失調症或有罹 患此疾危險性之哺乳動物患者之免疫失調症之方法，此方 $包括對該哺乳動物患者投予有效劑量之含有治療有效 實體之組合物，此實體之大小由約20毫微米^至約5〇〇微米 ’且在其表面含有許多磷酸甘海基，或可轉化成該磷酸-甘油基之基團，如此-旦投藥，哥】免疫失铜症之進行玎被 -13. 1283181 ⑼ 發明說明續頁 抑制及/或減緩。 本發明另一具體實例是有關治療有發炎失調症 發炎失調症危險性之哺乳動物患者之發炎免疫症 ，此方法包括對該哺乳動物投予有效劑量之含有藥 接受實體之組合物，此實體大小在約2 0毫微米至# 米，在其表面含有許多磷酸-甘油基或可轉化成磷丨 基之基團，如此一旦投藥，發炎失調症之進行可被 /或減緩。 本發明也可由另一方面總覽，即充作哺乳動物免 上細胞之受體（如巨噬細胞），其係可與磷酸-甘油 地結合。本發明涵蓋含有配體及可與此受體結合之 實體，且因此可產生抗炎反應。因此，本發明可定 有配體或其活性基團之實體，其經由呈現抗原之細 與此中所述之表現磷酸·甘油之實體之結合或攝入 精藝者可容易地決定特定的實體是否可如此競爭， 簡易的實驗。例如，實體可利用易得的單核細胞 U937細胞，予以測試。在第一實驗中，U937細胞可 的螢光標記之PG脂質體共培育，而在另外實驗中 胞於螢光標記之PG脂質體及不同量之受試化合物 培育。若與第一實驗比較，在另一實驗中螢光標 脂質體之攝入有所減少，則受試化合物可與之競爭 受體之結合，且是本發明範圍内之化合物。 實施方式 依據本發明，對病人投予藥學上可接受之實體， 表面攜有磷酸-甘油基。為不欲為任一理論所縛， 或罹患 之方法 學上可 勺5 0 0微 & -甘油 抑制及 疫系統 基特異 基團之 義為含 胞，可 比美。 即進行 株，如 與單獨 U937 細 存在下 参己之PG 與特異 且其在 咸信這 -14- !283181 (1G) 發明說明續頁: 些實體可與病人之免疫系統交互作用，並有伴隨之益處如 \舌把内抑制發炎原細胞動素，及/或促進抗炎細胞動素 反ι±細胞可為免疫細胞，如專門的或非專門的抗原呈 · 現細胞，内皮細胞，調控細胞如NK_T細胞及其他。 沒些藥學上可接受之實體包括合成的及半合成的實體 ，其形狀通常包括球狀、筒狀、橢圓體、包括扁圓球及扁 長球S +曲線、蠶旦形等，且大小在由約2 〇毫微米至約 500微米直徑，較好沿其最長軸測量，且在其表面含有磷 塵 酸-甘油基。 车子上可接文之實體在其外表面具有預定特性之磷酸— 甘油基不各乂為任一理論所縛，咸信這些基團可於活體内 與在抗原呈現細胞上適合的受體（並不僅限於PS受體）交 互作用。這些基團之結構可合成地改變，且包括原先磷酸 -甘油基所有，邵份或經修飾之版本。例如，磷酸_甘油基 中磷酸基上負電荷之氧，可轉化成磷酸酯基（如，L-0P(0)(0R’)(0R”）’其中L是磷酸甘油基之其餘部份，r是 ，且R”是由1至4個碳原子之烷基或2至4 φ 個碳原子之羥基取代的烷基，及1至3個羥基，限制條件為 Rn在活體内之水解較R·基更容易；或轉化成二磷酸基包括 二磷酸酯（如L-0P(0)(0R，）0P(〇）（0R”)2，其中L及R，如上文所 定義，且各Rπ是獨立的氫，由1至4個碳原子之烷基，或 由2至4個碳原子之羥基取代之烷基及1至3個羥基，限制條 件為第二個磷酸基[-P(0)(0R”)2]在活體内之水解較R，基更 容易；或轉化成三磷酸基包括三磷酸酯（如乙-0P(0)(0R’)0P(0)(0R”)0P(0)(0R”)2,其中 L及 R，如上文所定義 -15- 1283181 (ίο 發明說明績頁 ’且各R”是獨立的氫，由1至4個碳原子之烷基，或有2至 4個礙原子及1至3個羥基之羥基取代的烷基，限制條件為 第二及第二個磷酸基較R，基更易於活體内被水解；及其他 。此合成改變之磷酸-甘油基可於活體内表現磷酸-甘油， 且因此此已改變之基團為磷酸-甘油可轉化基團。 磷脂醯甘油是已知化合物。其產生可利用如磷脂酶D處 理自然生成之磷脂醯甘油之二聚型-心磷脂。其也可由如 磷脂酶D自磷脂醯膽鹼酵素合成而製備，如見&孓patent 5，188,951 Tremblay，et al.。就化學而言，其有磷酸.甘油基及 一對類似但不同的Cl8_c20脂肪酸鏈。 如此中所用的“PG”指攜有磷酸_甘油基之磷脂類，有至 少一個脂肪酸鏈之大範圍的磷酸-甘油基，限制條件為生 成之PG實體可以脂質體結構組份般參與。較好，此pG化 合物可以式I代表： R-C0-0-CH2 | R1-CO-0-CH 〇 I ι

CH2—0 -〇 CH2CH(OH)CH2OH o* 其中R及R獨立選自Ci-C24fe鍵，飽和或不飽和，直鏈或 含有限量之分支，其中至少一鏈有10至24個碳原子。基本 上，脂質鏈R及R1形成脂質體之結構組份，而非活性組份 。因此，其可予以變化以包括二或一個此種脂質鏈，可相 同或不同，只要可符合結構功能即可。較好，脂質鏈可長 約1 0至約2 4個破原子’飽和’單一不飽和或多重不飽和， 直鏈或有有限量之分支。月桂酸酯（C12)，肉豆蔻酸酿（C14) •16- 1283181 __ (12) P發明說明ϊϊ ，棕櫚酸酯（C16)，硬脂酸酯（C18)，花生酸（C2〇)，山荼酸酯 (C22)及木蠟酸酯（C24)為可用於本發明之PG有用的飽和脂 質鏈實例。棕櫚油酸酯（C16)，油酸酯（C18)為適合的單一 不飽和脂質鏈實例。亞麻油酸酯（C18)，亞麻脂酸酯（C18) 及花生四晞酸酯（C20)為可用於本發明脂質體中pG之有用 且適合的多重不飽和脂質鏈實例。具有單一此種脂質鏈之 磷脂類，也可用於本發明，如已知之溶血磷脂類。本發明 也欲涵蓋脂質體之用途，其中活性組份是P G之二聚型式 ，即心磷脂，但如式I之其他二聚型也是適合的。較好， 此二聚型無法與合成之交聯劑，如馬來醯亞胺，合成地交 聯，但可如所述經由移去甘油單位而交聯，如Lehniger， Biochemistry, p. 525 (1970)及下反應中所示： R-CO-Ο-CH2 R1-CO——Ο——CH Ο

CH2—·Ο——P——Ο-CH2CH(OH)CH2OH σ

PG Τ CO-0—ch2 ch2—·〇 CH-〇 I CO-〇-CH 〇 I II c 〕 1 II ch2—〇—P一 1 —o.ch2ch(oh)ch2o— D———〇-- 1 -ch2 U u 心麟月旨

-CO -CO-

HOCH2CH(OH)CH2OH -17- 1283181

發明說明續頁: 其中各R及R1獨立地如上文所定義。 如上示且再次地不欲為任一理論所限，咸信P G基團及 其二聚型為一種配體，因為咸信其可與蛋白質或其他分子 (“PG受體”）上之特異位置結合，且因此該磷脂醯甘油分子 (及其二聚型）有時在此稱為“配體”或“結合基”。咸信，此 結合係經由磷酸-甘油基-o-p(=o)(oh)-o-ch2-ch(oh)-ch2- 0H而發生，其有時在此稱為“頭基”、“活性基”或“結合基” 。基於上述，參見“結合”，“結合基”或“配體”在此並不指 任何作用機制或模式。然而，咸信上述之磷酸-甘油基出 現在本發明實體之外表面，以可與病人免疫系統之組份交 互作用。可注意到，此種交互作用和自食細胞與抗原呈現 細胞上磷脂醯絲胺酸受體之特異交互作用並不相同。 而“磷酸·膽鹼，，指-o-p(=o)(oh)-o-ch2-ch2-n+(ch3)3基團 ，其黏附至脂質其餘部份，如以下結構所示： R2-C0-0-CH2

I R3-C0——0——CH 0 -Q-CH2-CH:-N(CH3)3

CH2-0-

OH 及其鹽類，其中R2及R3獨立選自C^C24烴鏈，飽和或不飽和 ，直鏈或含有限量之分支，其中至少一鏈有10-24個碳原 子。 “三度空間實體部份”或“藥學上可接受之實體”之實例 包括生物可相容之合成或半合成之實體，如脂質體，固體 珠粒，中空珠粒，實心珠粒，粒子，顆粒及微球，有生物 可相容的，自然的或合成的材質，如藥學工業中所常用的 - 18- 1283181 (14) 發明說明續頁

。珠粒可為實心或中空的，或充填有生物可相容物質。而‘ 生物可相容”一詞指所應用之量下為無毒的或具有可接受 之毒性輪廓之物質，如此其於活體内使用時是可被接受的 。另外“藥學上可接受的”如用於“藥學上可接受實體”時指 由一種以上為藥學上可接受的且適於活體内遞送之物質 所組成之實體。此實體包括由脂類形成之脂質體，其一者 是PG。另外，藥學上可接受實體可為固體珠粒，中空珠粒 ，實心珠粒，粒子，顆粒及微球之生物可相容物質，其含 有一種或一種以上生物可相容物質，如聚乙二醇，聚（甲 基異丁晞酸酯），聚乙烯吡咯啶酮，聚苯乙婦及各種的其 他天然，半合成及合成物質，其上並黏附有磷酸-甘油基。

如上示，有經修飾之活性基之f粦脂驢甘油同系物，其也 可與抗原呈現細胞上之PG受體交互作用，經由如PG或它 者相同的受體路徑，生成受者體内之抗炎反應，此均包涵 在磷脂醯甘油一倍之範圍内。不欲受限地，此包括其中一 個以上的羥基及/或磷酸基似衍生而來，或呈鹽型之化合 物。此種化合物有許多一旦投予或接下來被投予，可於活 體内形成自由態羥基，且因此含有可轉化之PG基團。 此種較佳的組合物是脂質體，其由各種脂質所組成。然 而，較好脂質中無一者是正電荷。在脂質體例子中，磷脂 醯基甘油PG可構成脂質體層或壁之主要部份或整個部份 ，其方位使其磷酸·甘油基部份是向外呈現，以充作結合 基團，且脂質鏈形成結構壁。 脂質體或脂質囊為封閉的袋，在微米或次微米範圍，其 -19- 1283181 (15) 發明說明績頁： 壁（單層或多層）含有適合的親兩性基團。其通常含水性介 質，雖然就本發明而言内部内容物是不重要的，且通常無活 性。因此，在較佳的具體實例，脂質體以及其他藥學上可 接受之實體，基本上無非脂質之藥學上活性之實體（如 < 1 %)，且較佳無非脂質之藥學上可接受之實體。此脂質 體如此製備及處理，以致活性基團在脂質體上係面向外。 因此本發明較佳具體實例之脂質體，其上之PG可充作配 體及脂質體本身之結構組份。 因此，本發明之較佳具體實例是提出脂質體，其可曝露 出或可經處理或誘導曝露出其表面上一個以上的磷酸-甘 油基以充作結合基。磷脂醯甘油是一種較佳的P G配體， 且此脂質應含有由10%-100%脂質體，其餘部份是無活性組 份，如磷脂醯膽鹼P C，或可經由不同機制作用者，如磷 脂醯絲胺酸PS，或其混合物。以無活性之共組份如PC為 較佳。 如此中所用的，“PS”涵蓋磷脂醯絲胺酸及其同系物/衍 生物，限制條件為此同系物/衍生物可加強或刺激磷脂醯 基絲胺酸受體之活性。 此脂質體至少10%按重計是由PG組成，較好至少50%， 又較好由60-100%又最好由70-90%，而單一最佳具體實例 是約7 5 %按重計之P G。 也可使用PG脂質體加上無活性脂質體及/或磷脂之脂質 體之混合物，其經由不同機制作用，限制條件為PG之總 量仍保持在總混合物最少約1 0%以上，且較好60%以上。 -20- 1283181 (16) 發明說明續頁 關於可用於本發明之非脂質體實體，此中可提及的包括 生物可相容之適合大小之實心或中空珠粒。生物可相容之 非-脂質體合成的或半合成實體可選自聚乙二醇，聚（甲基 異丁綿酸酯），聚乙晞吡咯啶酮，聚苯乙烯及其他各種天 然，半合成及合成物質，其表面並黏附有磷酸-甘油基。 此物質包括生物可降解之聚合物，如Dunn，et al· U.S· Pat.

No. 4,938,763所揭示的，並以全文引入方式作為參考。

生物可降解之聚合物揭示於技藝中，且包括如直鏈聚合 物，如聚交酯，聚乙交酯，聚己内酯，聚酐，聚醯胺，聚 氨酯類，聚酯醯胺，聚原酸酯，聚二嘮烷酮，聚縮醛，聚 碳酸酯，聚原碳酸酯，聚磷腈，聚羥丁酸酯，聚羥戊酸酯 ，聚草酸烷撐二酯，聚琥珀酸烷撐二酯，聚（蘋果酸），聚 (胺基酸），聚乙晞吡咯啶酮，聚乙二醇，聚羥基纖維素， 幾丁質，脫乙醯殼多糖及其共聚物，三元共聚物及其混合 物。其他生物可降解之聚合物包括如明膠，膠原蛋白等。

可供衍生化以黏附磷脂，或其有基團或黏附基之部份至 三度空間實體之適合物質可買得到，如購自Polysciences Inc.，400 Valley Road，Warrington，PA 18976,或 Sigma Aldrich Fine Chemicals。用於其衍生化之方法是技藝中已知的。此方法 特殊較佳實例揭示於 International Patent Application PCT/CA02/01398 Vasogen Ireland Limited，此已列為本案參考。 希望病人為哺乳動物，包括人類及家畜，如牛，馬，豬 ，狗，描等，但不限於此。 磷脂類為親兩性分子（即親兩性分子），表示化合物所含 -21 - 1283181 (17) 發明說明續頁 之分子具有一個黏附至水不溶性烴鏈之極性水溶性基團 。充作基質層之親兩性分子有明確的極性及非極性區域。 親兩性分子除了本發明中之PG之外，包括其他單獨使用 之自然生成的脂質，其中磷脂上攜有活性基團，或與它者 呈混合物型式。充作脂質體層之親兩性分子，可以是惰性 ，結構-授予之合成化合物，如聚氧乙烯烷基醚，聚氧乙 晞烷基酯及糖二酯類。 製備大小適合之脂質體之方法是技藝中已知的，且不構 成本發明一部份。參見各種關於主題之教科書及文獻，如 可總覽 Yechezkel Barenholz and Daan J. A.之 “Liposomes as Pharmaceutical Dosage Forms”，及此中之文獻，如 New，R. C. “Liposomes: A Practical Approach’’，IRL Press at Oxford University Press (1990) o 本發明較佳具體實例之脂質體，以及其他藥學上可接受 實體之直徑是由約20毫微米至約500微米，較好由約20毫 微米至約1000毫微米，又較好由約50毫微米至約500毫微 米，且最好由約80毫微米至約120毫微米（較好沿其最長軸 測量）。在一個具體實例中，脂質體之直徑是由60毫微米 至5 0 0微米。 藥學上可接受之實體可懸浮在藥學上可接受之載劑内 ，如生理無菌食鹽水，無菌水，無熱原水，等滲無菌食鹽 水及磷酸鹽緩衝之無菌溶液（如含有磷酸鹽緩衝溶液之無 菌水溶液），以及可用於藥學調和物之其他無毒性可相容 物質，如佐劑，緩衝物質，保藏劑等。較好，藥學上可接 -22- 1283181 (18) 發明說明續:頁ΐ 受之實體可在無菌生物可相容液體中構成液體懸液，如經 緩衝之無菌食鹽水，並以任何適合的路徑投予至病人，此 路徑是可將其曝露於免疫系統的一個以上組份之下，如動 脈内，靜脈内或最好是肌内或皮下。 希望藥學上可接受實體可被冷凍乾燥，或凍結乾燥，如 此可於投藥時才懸浮。本發明也是有關一種套組，其部份 含有經凍結乾燥或冷凍乾燥之攜有結合基之實體及藥學 上可接受載劑，如生理上無菌食鹽水，無菌水，無熱原水 ，等滲食鹽水，及磷酸鹽緩衝溶液（如含有鱗酸鹽緩衝溶 液之無菌水性溶液劑），以及其他無毒的藥學調和物中所 用之可相容物質，如佐劑，緩衝溶液，保藏劑等。用於冷 凍乾燥之保護劑也是技藝中已知的，如可包括乳糖或蔗 糖。 將藥學上可接受實體投予至病人之較佳方式是注射過 程，每天投予，每週數次，每週一次或每月一次，歷一週 至數月之久。投藥過程之頻率及期間依病人而異，且依被 治療之狀況，其嚴重度，及治療是為預防、治療或治癒目 的。其設計及最佳狀況為主治醫師技術範圍之内。以肌内 注射為最佳，尤其是經由臀肌。在本發明至少某些適應症 上特殊之注射程序是於第1天以適量之實體經由臀肌注射 ，進一步在第2天，進一步注射在第14天，之後若適當時 以每月為間隔“追加”注射。 有建議指出在本發明許多具體實例中，在其表面含有 PG基團充作結合基團的藥學上可接受實體，可充作病人 -23- 1283181 (19) 發明說明續頁 免疫系統之修飾子，其方式和疫苗類似。因此，其用量及 投予方法，可使實體在引入位置有足夠的局部濃度。此實 體適於免疫系統修飾之量，並不與受者之身體大小直接成 比例，且因此可由藥物劑量中明顯區分，其經過設計使活 性物質在病人血流及組織中有治療水平。因此藥物劑量似 乎較免疫系統修飾劑量的還高。 脂質體重量及脂質體數目間之相互關係，可由精於脂質 體調和物人士可接受之知識所衍生，即1 00毫微米直徑之 雙層囊，每個囊有81，230個脂質分子，在層間之分佈約為 50:50 (見 Harrigan-1992 University of British Columbia PhD Thesis u Trans membrane pH gradients in liposomes (microform): drug-vesicle interactions and proton flux,?? published by National Library of Canada, Ottawa, Canada (1993); University Microfilms order no. UMI00406756; Canada no· 942042220, ISBN 0315796936)。由此吾 等可估計，如5 x 108胞囊之劑量用於以下特異的活體内實 例中係相當於4.06 X 1013個脂質分子，針對脂質分子數在克 分子（莫耳）時之6·023 X 1023，吾等可決定此代表6.74 X 10-11 莫耳，其在729之PG分子量時大約是3.83xl(T8克，或針對 此劑量是38.3毫微克PG。 可投予之藥學上可接受實體之量，依欲治療之哺乳動物 失調症本質及病人之本質及特性而定。較好，藥學上可接 受實體有效劑量係對病人無毒的，且不致劑量太大而打擊 免疫系統。當藥學上可接受實體之無菌水性懸液採用動脈 内，靜脈内，皮下或肌内方式投藥時，較好投予如由約 -24- 1283181 _ (20) 發明說明續頁 0.1-50毫升之液體，其中實體含量通常相當於在相當全血 量中尋常可見之白血球數目之10%-1000°/〇。較好，每次投 予至人類患者之實體數目在由約500至約2.5 X 109範圍内 (<250毫微克之實體，在脂質體例子中，針對實體其他具 體實例之密度差異而預先評定），較好是由約1，000至約 1，500,000,000，甚至較好10,000至約100,000,000，且最好由約 200,000至約 2,000,000 〇 由於藥學上可接受之實體在本發明方法中作用如免疫 系統修飾劑，就疫苗本質，此實體投予至注射位置之數目 於各次投藥可能較病人每單位體重下實體之數目或重量 更具意義。基於相同理由，就重體比例，目前希望對小型 動物而言之實體有效劑量或數目無法針對較大型動物（即 大於5公斤）直接轉譯。 本發明可用於各種哺乳動物失調症之預防及/或治療， 此失調症中係涉及T-細胞功能，發炎，内皮功能障礙及不 適當的細胞動素表現。罹患有或疑似罹患有此種失調症之 病人可被選出來治療。“治療”指症狀之減輕，如特定疾病 症狀嚴重度或次數之減少，或限制症狀進一步的進行。 關於T-細胞功能（T-細胞調介）失調症，這些失調症包括 至少部份為T -細胞所調介之任何及所有失調症，例如潰瘍 ，受傷及自體免疫疾病，包括糖尿病，硬皮病，乾癖及類 風濕性關節炎，但不限於此。 本發明適應症有發炎之過敏反應，器官及細胞移植反應 失調症，及造成發炎反應之微生物感染。也可用於預防性 -25- (21) 1283181 發明說明續瓦 U氧化應力及/或絕血再灌流傷害，毒物之攝入，曝露 在4性化學藥品下’輕射傷害’及曝露於以空氣傳播及水 傳播之刺激物質下I ’其彳造成受損發炎。it應症也包括 發炎性，過敏性及T_細胞調介之内部器官之失調症，如腎 ，肝，心臟等。

關於本發明所適用之涉及不適當細胞動素表現之失調 症，此中包括涉及不適當細胞動素表現之任何的及所有的 失凋症’且包括如神經退化性疾病。神經退化性疾病，如 Down’s症候群，阿滋海默氏病及巴金森氏病，與某些細胞 動素水平增加有關，包括間白素]β (見Griffill WST et al· (1989); Mogi Μ· et al. (1996))。也有示出，几-Ιβ可抑制海 馬中長期之加強作用（Murray，c. A. et al· (1998))。在海馬中 長期的加強作用是一種胞突接合成形性型式，且通常被視 為是1己憶及學習適當的模式（Bliss，T.V.P. et al. (1993))。因此 ，在腦中不適當的細胞動素表現目前咸信和神經退化性疾 病及神經發炎性失調症之發展及行進有關。 因此，本發明可用於治療及預防各種哺乳動物神經退化 性及其他神經失绸症’包括Down’s症候群，阿滋海默氏病 ，巴金森氏症’老年痴呆症，抑鬱，亨丁頓氏症，周邊神 經病變，Guillain Barr症候群，脊拄疾病，神經病變之關節 疾病，慢性發炎性髓鞘脫失病，神經病變包括單神經病變. ，多神經病變，對稱性遠端感覺神經病變，神經肌肉接合 失調症，肌無力及肌萎縮性側索硬化（ALS)。這些神經退 化性疾病之治療及預防代表本發明特佳之具體實例，如以 -26- 1283181 (22) 發明說明續頁 治療阿滋海默氏病，巴金森氏病及AL S為特佳。 關於涉及内皮功能障礙之失調症，本發明可用於治療及 預防此種哺乳動物各種的失調症，包括至少部份為内皮功 能障礙所調介之任何及所有的失調症，如心血管疾病，如 動脈粥樣硬化，周邊動脈或動脈閉鎖疾病，充血性心衰竭 ，腦血管疾病（中風），心肌梗塞，心絞痛，高血壓等，血 管痙攣性失調症，如雷諾氏病，心臟症候群X，偏頭痛等 ，及由絕血所致之傷害（絕血傷害或絕血-再灌注傷害）。 總而言之，可為其中病理學涉及不適當功能性内皮之任何 失調症。 本發明組合物及方法所應用之進一步適應症包括治療 病人以促進其傷口癒合及潰瘍癒合之速率，及在外科手術 前先行治療病人以促進其自手術中之恢復速率，包括手術 傷口及切口之癒合速率。 關於“心臟之失調症”，本發明可用於治療及預防各種的 此類哺乳動物失調症，包括與心臟有關之任何及所有的失 調症，如心室心律不整（心室心跳過速或纖維顫動）及由於 心臟疾病之痒死。易患心臟失調症之患者，如心律不整及 心臟之痒死，常可由心跳節律中QT-c間隔之延長而示出。 咸信，依據本發明較佳具體實例投予組合物後，可減短哺 乳動物病人之QT-c間隔，使心律不整及心臟痒死之易罹患 性減低。 就說明目的，本發明在以下未限制實例中進一步說明。 -27- 1283181 (23) 發明說明續夏 實例 在以下實例中，以下縮寫有以下意義。若縮寫未明定， 其通常有可接受之定義。 pg =微克 pL =微升 μιη =微米 μΜ =微莫耳濃度 CHS =接觸性過敏 cm = 公分 DMSO =二甲亞颯 DNFB = 2,4-二硝基氟苯 DHS =延緩型過敏 EtOH =乙醇 g = 克 hr s = 小時

Hz = 赫 IM =肌内 IP =腹膜内 kg =公斤 LPS =月旨多醣 LTP =長期加強作用 mg = 毫克 min = 分鐘 ml = 毫升 -28- 1283181 (24) 發明說明續頁 mM =毫莫耳濃度 ms = 毫秒 ng =毫微克 nm = 毫微米 nM =毫微莫耳濃度 PBS =磷酸鹽-緩衝之食鹽水 PCR =聚合酶連鎖反應

POPS = 1-棕橺醯基-2-油醯基-sn-甘油基-3-[磷酸基-L-絲 胺酸]，在此中實例稱為P S POPG = 1 -棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油基-3-[磷酸基 •rac-(l·甘油）]]，在此中實例稱為PG POPC = 1 -棕搁酸基-2 ·油醯基-sn-甘油基-3 -磷酸膽驗，在 此中實例稱為P C RPM =每分鐘之轉數 S =秒 除非另有所示.，用於實驗中脂質之精確型式如上示的為 POPS，POPG及POPC。 實例1 依據技藝中已知之標準方法，製備有以下組成且平均直 徑為100±20毫微米之脂質體： A 組-100% PS B 組-100% PG C組-對照組，無脂質體 每毫升含有4.8 X 1014脂質體之各脂質體組合物之貯存懸 -29- 1283181 (25) 發明說明續頁 液，以PBS稀釋以生成每毫升含6 X 106粒子之注射懸液。 脂質體懸液注入6 - 8週大且重1 9 - 2 3克之雌性BALB/c老鼠 體内（Jackson Laboratories)，以決定在鼠類接觸過敏（CHS)模 式中對耳朵腫脹之影響。CHS模式是測試Thl-調介之發炎 反應。 動物分成三組，每組5隻動物。A及B組接受約3 X 105上 述鑑知之脂質體（即分另4為100% PC及100% PG)，體積約50 微升。C組為對照組，不接受脂質體。 策略 進行以下實驗：

表I 組別 脂質體 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天 (24小時) A 100% PS 注入再引 注入 注入 注入 注入 注入再 測量 起過敏 施藥 耳朵 B 100% PG 注入再引 注入 注入 注入 注入 注入再 測量 起過敏 施藥 耳朵 於第1-6天，A及B組老鼠分別注入脂質體製劑。約300,000 個脂質體在5 0微升體積内經由IM注入，在整個測試期間 之總投藥為約1，800,000個脂質體。對照組老鼠（C組）不接受 脂質體，但被敏化，施藥並如A及B組般以相同方式測試。 敏感化作用 於第1天，於注入脂質體後，老鼠經由IP注射0.2毫升5 毫克/毫升戊巴比妥鈉以麻醉。老鼠腹部皮膚噴上7 0 % -30- 1283181 (26) 發明說明績頁

EtOH，再使用小刀除去腹部約1英吋直徑之毛髮。已刮毛 處再塗以25微升於4: 1丙酮：橄欖油中之〇.5% 2,4-二硝基氟 苯（DNFB)，利用吸量管尖端。 施藥 在第6天注入脂質體後，老鼠施以DNFB，係以吸量管尖 塗10微升0·2% DNFB於右耳背表面，而左耳則以吸量管尖 塗1 0微升之溶媒。 結果 在第7天，施藥後24小時，各隻動物以氟烷（Halothane)， 麻醉，再以有卩⑽⑶仏彈簧之微量計測出耳朵之厚度。以經 處理右耳之厚度與經溶媒處理之左耳厚度間之差異表示 數據。在相類似動物上重複三次實驗。以耳朵腫脹之增加 作為CHS反應之測度。由雙尾之史都頓t-檢定（two-tailed student’s t-test)來決定數據顯著性。P值<0.05被視為顯著。 結果示於圖1，其中槓狀圖示出三次耳朵腫脹實驗之平 均值，以微米報告。 圖1示出依據本發明注入脂質體可達成耳朵腫脹極顯著 之減少。而以100% PG脂質體達成之減少實質上較由1〇〇% p S脂質體來得多。 製備具以下組成且平均直 依據技藝中已知之標準方法， 徑為100±20毫微米之脂質體：

A 組-100% pg B 組-75% PG，25% PC 1283181 _ (27) 發明說明續頁 C 組-50% PG，50% PC D 組-25% PG，75% PC E組-僅有PBS F組-未注射 每毫升含4.8 X 1014脂質體之各脂質體貯存懸浮液，稀釋 以生成每毫升含有12 X 106脂質體之注射懸浮液。將脂質體 懸液注入老鼠以決定其在老鼠CHS模式中對耳朵腫脹上 之影響，而此生物系統係用來分析Th 1 -調升之發炎反應。 於這些實驗中，使用6-8週大且19-23克重之雌性BALB/c老 鼠。 動物分成6組（上述，A - F組），而各組有1 0隻動物。也包 括對照組，其不接受注射（F組）或注入無脂質體之PBS (E 組）。於A-D組之動物注入50微升上述之脂質體懸浮液， 各含有約6 X 105個脂質體。 策略 試驗中涉及以潛在引起發炎之物質敏化（Sens)，在受試 動物中注入脂質體（Inj)，或在對照組注入PBS，並施以 (Chal)潛在可引起發炎之物質，再測量（Meas)以決定脂質體 之注入是否可有效地拮抗由施藥所致之發炎的發展。 進行以下實驗： -32- 1283181 (28) 發明說明續頁 組別 脂質體 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天 A 100% PG Sens & Inj Inj Inj Inj Inj Chal & Inj Meas B 75% PG Sens & Inj Inj Inj Inj Inj Chal & Inj Meas C 50% PG Sens & Inj Inj Inj Inj Inj Chal & Inj Meas D 25% PG Sens & Inj Inj Inj Inj Inj Chal & Inj Meas E 無（僅PBS) Sens & Inj Inj Inj Inj Inj Chal & Inj Meas F 無 Sens Chal Meas 於第1 -6天，老鼠如上文所示注入各別的脂質體。脂質 體經由IM注射以50微升體積注入，即每次注射有600,000 個脂質體，在試驗期間之總投藥為3,600,000個脂質體。對 照組老鼠不接受脂質體，但仍予以敏化，施藥及如下述其 他各組老鼠般相同方式地測試。 敏感化作用（Sens) 於第1天，在注入脂質體後，老鼠經由IP注射以0.2毫升 5毫克/毫升戊巴比妥鈉麻醉。老鼠之腹部皮膚噴上70% EtOH，再以刀刃除去腹部約1英吋直徑之毛髮。裸露區域 利用吸量管尖塗以25微升於4: 1丙酮：橄欖油中之0.5% 2,4-二硝基氟苯（DNFB)。 施藥（Chal) 於第6天，於注入脂質體後，老鼠施以（Chal) DNFB，方 式如下：10微升0.2% DNFB塗佈在右耳背表面，利用吸量 管尖進行，而左耳則是塗佈1 0微升之溶媒。 結果 在第7天，即施藥後24小時，各動物以氟烷麻醉，再利 -33- 1283181 (} 明驗 用Peacock有彈簧之微量計測量（Meas)厚度。以耳腫脹之捭 加作為C H S反應之測度。數據以經處理之右耳厚度減去以 落媒處理之左耳厚度之差異表示。而二組間之顯著性以雙 尾史都頓氏t-檢定來決定。<0·05之ρ值被視為顯著。 結果圖示於圖2，槓狀圖示出按微米計之耳朵腫脹。以 個別實驗所得之平均值以編輯圖表。 圖2 π出以1 0 〇及7 5 % P G可達成耳朵腫脹顯著的減少， 顯π此二種濃度可保護拮抗因過敏物質，DNFB接觸所致 之發炎之發展。50%及25% PG脂質體與二種對照組比較下 也示出有所減輕，但在此實驗中差異並未達到統計上之顯 著性。 依據技藝中已知之標準方法製備由7 5 % p G及2 5 % p c組 成之平均直徑100±20毫微米之脂質體。如前文般使用每毫 升含有4·8 X 1014脂質體之貯存懸浮液，並以pBS稀釋生成 以下脂質體濃度之注液·· 、组別脂質體

A

75% PG, 25% PC 濃度 每注射之 脂質體 組別之 動物

B

C

F 75% PG，25% PC 無（僅PBS)

75% PG，25% PC 75% PG，25% PC 75% PG，25% PC

6 x 10] 6 X 10 丨 6 X 107 6 X 10( 6 X 10* 10 10 16 16 16 -34- 1283181 (30) 發明說職續 BALB-c老氣分成六組（A-F組）’包括不接受脂質體但注 入5 0微升PB S之對照組（F組）。老鼠在側腹敏化，在同一天 如敏化作用般（第1天）由右腿肌内注入所選定之脂質體劑 量，而後於第2，3，4及5天亦進行。第6天，如實例1所述 般均注射及在耳上施藥。施藥後2 4小時，如所述測量耳厚 度。 結果（圖3 )顯示，在對照組（F組）及C組間（每毫升12 X 108 脂質體），對照組及D組間（12 X 107脂質體）及對照組及e組間 (12 X 106脂質體）有顯著的差異。而對照組及a或B組間（分別 是12 X 1011及12 X 109脂質體/每毫升）則少有顯著，推知此中 有最適宜之脂質體濃度，則越過此點則有益作用減少。在 其他實驗，若脂質體低於每毫升12 X 1〇4脂質體時，也可觀 察到作用之減弱。 實例4 依據標準方法製備平均大小為1〇〇±2〇毫微米之調和物 100%PG之脂質體。敏化每組10隻動物（A_D組），並依實例 3所述之步驟及程序注射及施藥，在5 〇微升懸液中遞送以 下數字之100% PG脂質體： A 組-6 X 107 B 組-6 X 106 C 組-6 X 105 D 組-6 X 104 結果，加上實例4之P B S對照組，示於圖*類似之槓狀圖 中。於各受試組中均可注意到與對照組比較下，耳朵腫脹 1283181

發明說明續頁 有顯著的減少，但各組間差異極小。 實例5 以標準方法製備平均直徑為5〇，1〇〇，2〇〇，4〇〇毫微米且 由75% PG，25% PC組成之脂質體。在鼠類CHS模式中測試 ’如在貫例3及4中’於各次注射使用6 X 1 〇5脂質體於5 0微 升懸液，並採用如實例3之敏化-注射-施藥程序及步驟。 各組如下： A組-5 0毫微米脂質體 B組-1 0 0毫微米脂質體 C組-2 0 0毫微米脂質體 D組-4 0 0毫微米脂質體 E組-無脂質體 結果示於圖5。D組之結果利用4 〇 〇毫微米直徑之脂質體 ’與對照組（E組）並無顯著的不同，顯示在此模式中一個 可能的大小範圍臨界條件。 f例上 將每毫升含有4.8 X 1〇14脂質體，且平均直徑為1〇〇±2〇毫 微米之7 5 % PG脂質體之貯存懸液稀釋，以生成每毫升含6 X 105個脂質體之注射懸液。脂質體懸液可用來注入老鼠， 以決定在鼠D H S模式中對耳朵腫脹之作用。如在實例1， 使用6-8週大且克重之雌的balB/c老鼠（Jackson Laboratories) 〇 動物分成3組，各組1〇隻動物。對照組（c組）僅接受PBS 注射。A及B組動物注入50微升含有6 x 105脂質體之懸浮液。 1283181 (32) 發明說明續頁 策略 在第1 3 -1 8天，老鼠如上示注入7 5 % P G脂質體。脂質體 經由IM注射注入50微升體積，即，每次注射600,000脂質體 ，在整個試驗期間共投予3,600,000脂質體。敏化及施藥如 實例2所述進行。 曰期 治療 1 敏化 6 施藥 7 測量 12 施藥 13 測量&注射 14 注射 15 注射 16 測量&注射 17 注射 18 注射&施藥 19 測量 結果 結果圖示於圖6，且顯示在第二次施藥後接著第三次注 射後24小時，即在第16天，75% PG在DHS模式中是有效 的。 實例7 以標準方法製備平均直徑為100±20毫微米，且由100%心 磷脂（CL)組成之脂質體。在如實例6所述之鼠DHS模式中 -37- 1283181 (33) 發明說明續頁 使用每次注射5 〇微升6 X 1〇5脂質體之劑量。由注入CL脂質 體動物所得之資料（A組；1 〇隻動物）與只接受P B S之動物 之資料（B組；1 〇隻動物）比較。如實例2所述進行敏化，注 射及施藥步驟。在第6次注射後2 4小時，即第1 9天所得之 耳朵厚度測量結果，示於圖7中。結果顯示在C L -注射試 驗内耳朵腫脹有顯著的減少（A組）。 -實例 以標準方法製備含有1 〇 〇 %心磷脂或7 5 %心磷脂及2 5 % PC且平均直徑為1〇〇毫微米之脂質體。1〇隻老鼠分3組 (A-C組）於第1天時敏化。對照組在第卜2及6天時接受PBS 之注射（C組）。另二組依據相同流程接受6 X 105 100%心磷 脂脂質體（A組）或6 X 105 75°/。心磷脂脂質體（B組）之注射， 每次注射脂質體係在5 〇微升中。老鼠在第7天時施藥，測 里耳木厚度’如先前所述。 圖8示出各組之平均測度。接受cl脂質體的二組與對照 組比較，CHS之遏止具統計顯著性。 實例9 使用長期加強作用（Long-Term Potentiation; LTP)動物模式 研死細胞及分子機制基礎下之認識力功能。LTP是突觸接 合成形型式，發生在已推知為學習及記憶生物受質之海馬 形成中（Bliss et al· Nature 361:31-39 (1990))。大鼠之 LTP 可利 用精藝者熟知之電氣生理方法追踪。動物犧牲後再研究海 馬組織中之生化變化。電氣生理學數據與生化變化結果比 較’可決定出基礎LTP如何在罹患與神經發炎相關疾病或 -38 - 1283181 (34) 發明諫明續頁 一 失碉症（此類型如老化，壓力，阿滋海默氏病及細菌感染） 之哺乳動物細胞中變化。 脂多醣（LPS)是革蘭氏陰性菌的一種細胞壁組份，其全 身技藥後經由誘導原發炎細胞動素（如IL-Ιβ)增加，可引起 免疫系統活化。如上示，由LPS及IL-Ιβ所謗導之神經元缺 失是海馬中LTP受損的一個實例。LTP之指示劑是群體興 奮性突觸後電勢（population excitatory p0St_Synaptic p〇tentia卜 縮寫成epsp)之平均斜率。一旦強直刺激，epsp斜率（％)會 又然增加，顯示胞突活性有所增加。由L p s -謗導之L T P抑 制作用可減緩斜率之增加，及/或使epSp斜率可較快速地回 到基線，顯示所增加之胞突活性是短命的。因此，可以強 直刺激後在時間間隔下epsp斜率（％)之測定來反映腦之海 馬經發炎刺激以及發炎後其記憶力及記憶力之喪失。 依據技藝中已知之標準方法製備平均直徑為1〇〇土2〇毫 微米之脂質體，且其由75% PG及25% PC所組成。每毫升 含有約2.9 X 1〇14脂質體之脂質體貯存懸液，以PBS稀釋以 生成每毫升含約1·2 X 107脂質體之注射懸液。此再用於注 入大鼠，以決定LTP在LPS-謗生之損傷上之作用。在這些 貫.¾中使用重約300克之雄性Wistar大鼠（BioResources Unit， Trinity College，Dublin) 〇 動物分成四組，各組8隻以下列處理： A組·食鹽水+對照組 B組-食鹽水+PG C組-LPS +對照組 -39- 1283181 p J I發明說明績耳、

D 組-LPS + PG 上述製劑各150微升經由IM於第！，13及14天時注入。B 及D組共接文5,400,〇〇〇脂質體（每次注射以⑼山⑼脂質體）。 在第0天進行LTP步驟及組織製備步·驟。 LTP步驟 大鼠以IP注入胺基甲酸酯（1·5克/公斤）而麻醉。大鼠接 受LPS (100微克/公斤）或食鹽水，經由腹膜内注入。三小 時後’將偶極刺激電極及單極記錄電極分別置穿通路徑及 齒回背細胞區中。給予0.033赫之測試震盪，並在高頻刺激 之前及之後45分鐘記錄反應達1 〇分鐘（3連串刺激以3 〇秒 間隔遞送，250 Hz歷200毫秒）。 大鼠斷頸犧牲。海馬，經強直及未強直之齒回，皮質及 鼻内皮質在冰上解剖’切片再冷來於1毫升Krebs溶液（Krebs 按mM計之組成：NaCl 136，KC1 2.54，ΚΗ2Ρ04 1.18，MgS04.7H20 118，NaHC03 16，葡萄糖 10，CaCl2 1.13)其中含 10% DMSO。 ΐϋ 結果示於圖9。圖中顯示出在顆粒細胞細胞體中興奮性 突觸後電勢（epsp)之差異。示出之數據是各處理組中7至8 次觀察之平均，且以每30秒epsp斜率中平均百分比變化表 示’此中就強直刺激前5分鐘之平均值常態化之。圖9示出 經由PG脂質體預處理，可克服在通過經一顆粒細胞突觸中 ’由LPS-所謗導之LTP抑制作用。實心三角形代表a組（食 鹽水+對照組），空心三角形代表B組（食鹽水+PG)，實心 正方形代表C組（LPS+對照組），空心正方形代表〇組 -40- (36) 1283181 發明說明續頁 (lps+pg)。 圖10示出強直刺激40_45分鐘後平均值之分析，此中示 出對照組-LPS組（空心槓）群體epsp斜率會減低，且pG脂質 體(处虛線槓）顯著地反轉此作用（*ρ<(Μ)1)β至於記憶及學習 功能之指纟，在此實例中證明LTp耐受性改進顯示治療癡 呆症之適合性，如阿滋海默氏病及記憶力受損。 實例1 0 IL-4是由淋巴細胞Th2亞類所分泌的許多細胞動素之一 ，且已知具抗炎作用。圖U示出海馬中α·4濃度於LPS組 有顯著的增加，而此組係經]?(}脂質體預處理過（*p<〇 〇5) 圖中空心相表示對照組（E組）’虛線槓表示經p 〇處理（ρ 、’且）。以£1^18八測11^-4’並以每愛克總蛋白質之1乙-4之？〇表 示。腦中抗炎性細胞動素IL-4之正向調控，可作為本發明 較佳具體實例之過程及組合物在治療各種神經發炎性失 _症用法上之指示，此種失調症包括巴金森氏症，ALS， 發炎性脫髓疾病CIPD及Guillain Barr症候群。 實例11 IL-Ιβ是由淋巴細胞Thl亞群分泌的許多細胞動素之一 。來自動物的脾，如實例9之C及D群，予以萃取再收集脾 細胞。其如下製備： 圖1 2示出脾細胞中IL -1 β濃度在L P S組中顯著地減低，而 此組係先以PG脂質體預處理過（*Ρ<〇·05)。以ELISA測量 IL-Ιβ，並以每毫克總蛋白質之IL-Ιβ微微克表示。此顯示本 發明較佳具體實例之方法及組合物具有全身性抗炎作用。 -41 - (37) 1283181 發明說明續頁 實例1 2 U937疋種單細胞白血病細胞株，經投予大戟二萜醇酯 後可分化成巨噬細胞。以革蘭氏陰性菌細胞壁之組份一脂 多醋（LPS)處理，可刺激細胞中之發炎反應，使許多發 火为子（包括TNFa)之表現可正向調控。此模式可對抗炎治 療（4估提供一個實驗系統。巨噬細胞可在疑似抗炎組合 物之存在下；培養基中生長，再偵測了腳以之表現。 。依據技藝中已知標準方法製備平均直徑為ι〇〇±2〇毫微 米之爿日貝把’且有75 %磷脂醯基甘油（pG)，25 %磷脂醯基 膽驗（pc)。脂質體之貯液濃度約4()瘦脂質，且在分析中 稀釋至以下終濃度： 100 μΜ鱗脂酸基甘油（pQ_)

40 μΜ PG 10 μΜ PG

4.0 μΜ PG 1 μΜ PG

U937細胞之培養是在RPMI培養基中（GIBCO BRL)，其中添 加10%胚牛血清（FBS)及1%青黴素/鏈霉素，並在37〇c，含 有5/i>C〇2之大氣中生長。將5χΐ〇5細胞種入6_孔洞盤之各 孔洞内，並以150 ηΜ大戟二萜醇肉豆蔻醋酸酯（ΡΜΑ)處理 2-3天以分化成巨噬細胞。細胞培養基再於U93ww胞已完 全分化成嗤菌細胞後’以完全培養基取代之。細胞再培育 24小時，以將因PMA處理所致之多效作用減少至最少。 細胞再與任一者共培育： -42- 1283181 (38) 發眼說明績頁

A組 磷酸鹽緩衝之食鹽水（PBS)-充作負對照組 B組 10毫微克/毫升LPS-充作正對照組 C組 10毫微克/毫升LPS + 100 μΜ PG D組 1 0毫微克/毫升LPS+40 μΜ PG Ε組 10毫微克/毫升LPS+10 μΜ PG F組 1 0毫微克/毫升LPS+4.0 μΜ PG，或 G組 10毫微克/毫升LPS + 1 μΜ PG 細胞如上述般在3 7°C，5% C02下培育。1 8小時後，收集各 處理組之上清液，再以標準的Quantikine酵素-鏈結之免疫 吸附分析（ELISA)套組（R&D systems，Minneapolis，USA)分析。 圖13示出每毫升PG中所分泌之TNF-α含量。結果證明， 由U937-分化之巨噬細胞在正常條件下表示之TNF-α極低 。然而，一旦曝於LPS下，其可分泌大量TNF-α至周圍培 養基’其為發生細胞壓力之指示。將細胞與p G脂質體培 育可以與劑量-有關之方式抑制TNF-a之分泌，其中1〇〇 _ 足最高濃度可造成98%減少，甚至低至1 μΜ之濃度也有 5 8 %之減少。 為了決定本發明較佳具體實例中PG脂質體對内皮功能 之作用，内皮素·1 (ΕΤ-1)在老鼠耳中之含量予以決定，且 此老鼠係如實例3所述般接受CHS研究。内皮素·丨是一種 強力的血管收縮劑，具有影響收縮及促有絲分裂作用，可 調控鹽及水之體内平衡，且在維持血管強力及血壓上扮演 -43. 1283181 (39) 發明說明續頁 角色。各種證據線索指出，内源Ε τ -1可致力於與持續血 管收縮有關狀況之病理學上，如心衰竭。在心衰竭時，可 觀察到循環的ET-1及big-ΕΤ-Ι之水平升高fGiannessi D, Del Rv 亙，Vitale RL. 'The role of endothelins and their receptors in heart failure.” Pharmacol Res 2001 Feb 43:2 1 1 1-26)。因此，ET-1 是内 皮功能之標幟，且組織中ET- 1產量增加可作為内皮功能 受損之指示。 為了決定ET-1表現，取得施以CHS實驗後24小時之老鼠 耳朵（右側施藥之耳朵）。取自老鼠之耳以肌内注射PB S達6 天（A組），而老鼠則肌内注射75% PG/25% PC脂質體（600,000 脂質體/注射；B組）。耳朵貯存在-2 0 °C下之RNAlater，直到 萃取RNA為止。萃取RNA，且利用反轉錄酶（RT)加上ET-1-特異的引子產生cDNA為内部對照組，也利用β-肌動蛋白-特異之引子進行PCR。PCR產物在1.5%瓊脂糖凝膠上解析， DNA帶再以密度計分析定量。估計出ET-1/β-肌動蛋白之比 例0 PCR製劑： PCR混合物（ΕΤ-1) 5微升PCR緩衝溶液（10χ) 1·5微升 MgCl2 (50 mM) 1微升 dNTP (10 mM) 〇·5微升引子1 (25 uM) 〇·5微升引子2 (25 uM)

0.25微升 TAQ PCR混合物（β-肌動蛋白） 5微升PCR緩衝溶液（10χ) 1·5微升 MgCl2 (50 mM) 1微升 dNTP (10 mM) 1微升引子1(10 uM) 1微升引子2 (10 uM)

0.25微升 TAQ -44- 1283181 發明說明續頁

2.5微升 cDNA 2.5微升 cDNA 3 8微升水 共5 0微升 37.75微升水 共50微升 引子： ET-(lr) 5'-CAG CAC TTC TTG TCT TTT TGG-31 ET-l(f) 5，-CCA AGG AGC TCC AGA AAC AG-3' β-月几動蛋白（F) 5，-GTG GGC CGC TCT AGG CAC CAA-3， β-肌動蛋白（r) 5’-CTC TTT GAT GTC ACG CAC GAT TTC-3, PCR指示： 94°C -5分鐘

/ 厶 i U V 7 2 °C -1 0 分鐘 4°C-浸潰 經過6天注射75% PG脂質體後，和在相同注射療程下接 受PBS之對照組老鼠比較下，前者ET-1水平減少36%。結 果圖示於圖1 4。此減少顯示出，因注射本發明較佳具體實 例之脂質體，造成對哺乳動物内皮功能上之有益作用，此 乃經由Th 1調介之發炎減少作用。 實例1 4 細胞間黏附分子-1 (ICAM-1)是由許多細胞型式所表現之 細胞表面分子，包括白血球及内皮細胞。其涉及單核細胞 -45- 1283181

發明說明續頁 . * 黏附至内皮細胞，並在發炎過程及τ _細胞調升之宿主防禦 系統上扮演角色。ICAM-1之表現可能可導致各種疾病之臨 床表徵，最主要是經由干擾正常免疫功能。在此中有惡性 腫瘤（如黑色素瘤及淋色瘤），許多發炎失調症（如氣喘及 自體免疫失調症），動脈粥樣硬化，絕血，某些神經學失 調症，及同種器官移植（Van de Stolpe A，van der Saag PT， “Intercellular adhesion molecule-1” J· Mol. Med· (1996) 74:1 13-33) 0 人類臍靜脈内皮細胞（HUVECs)是内皮細胞的初生細胞 株，其如下述分離自臍帶靜脈。 準備T75燒瓶，係以0.2%明膠塗佈（5-7毫升/瓶）最少 1 5 /2 0分鐘或一夜。再移去過多部份。臍帶在進行前先以 7 0 °/〇乙醇噴灑，再切除任何仍與臍帶相連之胎盤。臍帶再 切成5-6英吋長。臍帶有二條動脈，其有厚壁，而又一靜 脈則較大且薄壁。定出靜脈，再施加有鋸齒緣之阻止夾。 再使用約2 0公分之細帶綁緊臍帶於阻止夾上。 腾帶再以磷酸鹽緩衝之食鹽水（pBS)充份洗滌數次，直 到PBS流出液澄清為止。之後，在臍帶中加入ι5_2〇毫升 膠原蛋白酶溶液；其以錫箔包覆，再於37〇c下培育。培育 後綁冢的一端切下，再將膠原蛋白酶引流至5 〇毫升之試 雀内膠原蛋白酉琢再次流過臍帶，臍帶稍按摩以鬆^散内皮 =胞，再流過PBS，並收集至含有膠原蛋白酶溶液之相同 管中。此再於1600 rpm下離心，移出上清液，團塊再懸浮 於10-12毫升之M199完全培養基中。最後，將含有細胞之 培養基加至已明膠化之燒瓶内。 -46- 發明說明續頁 1283181 (42) 依據技藝中已知之標準方法製備平均直徑為1〇0土20毫 微米之脂質體，且有75 %嶙脂醯甘油（PG)，25 %磷脂疏膽 驗（PC)之組成。脂質體之貯存濃度為40 mM脂質，再稀釋 至100 μΜ以應用於分析中。 HUVECs分成許多組織培養燒瓶，令其可黏附至燒瓶表 面，再如下處理： A組 -P B S -充作負對照組， B組 -500毫微克/毫升LPS-充作正對照組，

C組 -500毫微克/毫升LPS+100 μΜ PG

D組 -500毫微克/毫升LPS+100 μΜ PC 細胞在37°C，5% C02下培育。18小時後，收集得自各 處理組之上清液，利用標準的ELISA套組（得自Assay Designs) 分析ET-1，且回收細胞如下分析ICAM-1。 細胞先以PBS洗滌，再與細胞解離緩衝溶液於37°C下培 育25-30分鐘。細胞再以離心洗滌，並與抗-CD54 (ICAM-1) 抗體共培育3 0分鐘。再加入二次FITC抗體，並如上述般與 細胞共培育。最後，再懸浮於1毫升PB S中，並於流體細 胞計數器上分析螢光。 結果示於圖1 5，圖中示於在個別培養物中，對ICAM-1 呈陽性之細胞百分比。也應注意到，在含有P G脂質體培 養物中，染成陽性之細胞數減少至負對照組水平，且較對 知、組水平低許多。 實例1立 培養小神經膠質細胞（腦巨噬細胞），再測出其TNF-α之 -47- 1283181 _ (44) 發明說明續頁 (EPSP)斜率百分比變化，其可作為在長期加強作用（LTP) 上影響之指示，實例9。 圖1 0以槓狀圖型式呈現上實例9，於圖9中所示之數據。 圖1 1示出在上實例1 0中，於對照組及處理組動物海馬中 抗炎細胞動素IL-4濃度之差異。 圖1 2示出上實例1 1中，對照組及處理組動物脾細胞單一 細胞懸液中，原-發炎細胞動素IL-Ιβ濃度之差異。 圖1 3示出上實例1 2中，以不同濃度75% PG脂質體處理之 U937單核細胞株中，TNF-α濃度之差異。 圖1 4是上實例1 3結果之圖示，是依本發明較佳具體實例 處理之老鼠，其耳中内皮素-1含量對對照組之圖示。 圖1 5是實例1 4結果之圖示，係本發明較佳具體實例組合 物存在與不存在下，來自HUVEC培養物之ICAM-1陽性細胞。 -49-

Claims (1)

1283 ^^^10123i 號專利申請声一《— — r—一~^ 中文申請專__叫(„t告本

1· 一種可於哺乳動物活體内產生抗炎反應的組合物，該組 合物包括大小約2 0毫微米（nm)至500微米的藥學上可接 受實體，包括許多磷酸-甘油基或可轉化成磷酸-甘油基 之基團，該實體基本上不含非脂質之藥學上活性成份（entities) 〇 2.根據申請專利範圍第1項之組合物，其中的實體是脂質 體。 3·根據申請專利範圍第2項之組合物，其中該脂質體大小 約20-1000毫微米。 4.根據申請專利範圍第3項之組合物，其中該組合物基本 上無非脂質的藥學上可接受成份。 5·根據申請專利範圍第4項之組合物，其中該組合物無非 脂質的藥學上可接受成份。 6. 根據申請專利範圍第3項之組合物，其中該磷酸-甘油基 佔該實體上之基團約60-100%。 7. 根據申請專利範圍第4項之組合物，其中該磷酸-甘油基 佔該實體上之基團約60-100%。 8·根據申請專利範圍第5項之組合物，其中該磷酸-甘油基 佔該實體上之基團約60-100〇/〇。 9·根據申請專利範圍第6項之組合物，其中該磷酸-甘油基 佔該實體上之基團約75%。 10.根據申請專利範圍第7項之組合物，其中該磷酸-甘油基 佔該實體上之基團約75%。 83253-960410.doc

1283181 11. 根據申請專利範圍第8項之組合物，其中該磷酸-甘油基 佔該實體上之基團約75%。 12. 根據申請專利範圍第6-1 1項中任一項之組合物，其中其 餘的基團包括磷酸-膽鹼。

13. —種治療由T-細胞功能-所調介之失調症之醫藥組合物 ，其包括有效劑量之實體，其包括有效數量的磷酸-甘 油基以抑制及/或減少T-細胞功能-所調介之失調症的 進行，且該組合物基本上不含非脂質之藥學上活性成份 (entities) 0 14. 根據申請專利範圍第1 3項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 15. 根據申請專利範圍第1 4項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小由約20-1000毫微米。 16. 根據申請專利範圍第1 5項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上的基團約60-100%。

17. 根據申請專利範圍第1 6項之醫藥組合物，其中的磷酸· 甘油基佔該實體上的基團約75%。 18. —種治療發炎失調症之醫藥組合物，其包括有效劑量之 實體，其含有效數量的磷酸-甘油基以抑制及/或減少發 炎失調症之進行，且該組合物基本上不含非脂質之藥學 上活性成份（entities)。 19. 根據申請專利範圍第1 8項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 20. 根據申請專利範圍第1 9項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約20-1000毫微米。 83253-960410.doc

1283181 21. 根據申請專利範圍第20項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 22. 根據申請專利範圍第2 1項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 23. —種治療選自週邊動脈閉塞疾病、充血性心臟衰竭、心 室心律不整、心臟之猝死、中風、心肌梗塞、心紋痛、 高血壓、血管痙攣性失調症、局部缺血損傷及局部缺血 -再灌注損傷之内皮功能失調症之醫藥組合物，其包括 有效劑量之實體，其含有效數量之磷酸-甘油基以抑制 及/或減少内皮功能失調症之進行。 24. 根據申請專利範圍第23項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 25. 根據申請專利範圍第24項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約20-1000毫微米。 26. 根據申請專利範圍第2 5項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 27. 根據申請專利範圍第26項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 28. 根據申請專利範圍第24項之醫藥組合物，其中該有效劑 量之實體包含約5 0 0至約2.5 X 1 09個實體。 29. —種治療特徵在於不適當細胞動素表現之免疫失調症 之醫藥組合物，其包括有效劑量之實體，其含有效數量 之磷酸-甘油基以抑制及/或減少免疫失調症之進行。 30. 根據申請專利範圍第29項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 83253-960410.doc

1283181 31. 根據申請專利範圍第30項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約20-1000毫微米。 32. 根據申請專利範圍第3 1項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 33. 根據申請專利範圍第3 2項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 34. —種治療T-細胞功能-所調介之失調症之醫藥組合物， 其包括投予有效劑量之組合物，組合物包括大小約20 毫微米至約500微米之藥學上可接受實體，其表面含許 多磷酸·甘油基，或可轉化成該磷酸-甘油基之基團，該 組合物基本上不含非脂質之藥學上活性成份（entities) ，如此一旦投藥則T-細胞功能-調介之失調症之進行可 被抑制及/或減少。 35. 根據申請專利範圍第34項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 36. 根據申請專利範圍第3 5項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約20-1000毫微米。 37. 根據申請專利範圍第3 6項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 38. 根據申請專利範圍第3 7項之醫藥組合物，其中的磷酸- 甘油基佔該實體上之基團約75%。 " 39. —種治療選自週邊動脈閉塞疾病、充血性心臟衰竭、心 室心律不整、心臟之猝死、中風、心肌梗塞、心紋痛、 高血壓、血管痙攣性失調症、局部缺血損傷及局部缺血 -再灌注損傷之内皮功能失調症之醫藥組合物，其包括 83253-960410.doc 1283181 有效劑量之組合物，其包括大小約20毫微米至約500微· 米之藥學上可接受實體，在其表面含許多磷酸-甘油基 . ，或可轉化成該磷酸-甘油基之基團，如此一旦投藥則 内皮功能失調症之進行可被抑制及/或減少。 40. 根據申請專利範圍第3 9項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 41. 根據申請專利範圍第40項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約20-1000毫微米。 42. 根據申請專利範圍第4 1項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 43. 根據申請專利範圍第42項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 44. 根據申請專利範圍第40項之醫藥組合物，其中該有效劑 量之醫藥上可接受實體包含約500至約2.5X109個實體 〇 45. —種治療罹患免疫失調症之醫藥組合物，其包括有效劑 量之組合物，其包括大小約20毫微米至約500微米之藥 學上可接受實體，在其表面含許多磷酸-甘油基，或可 轉化成該磷酸-甘油基之基團，如此一旦投藥，免疫失 調症之進行可被抑制及/或減少。 46. 根據申請專利範圍第45項之醫藥組合物，其中該實體是 脂質體。 47. 根據申請專利範圍第46項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約10· 1000毫微米。 48. 根據申請專利範圍第47項之醫藥組合物，其中的磷酸- 83253-960410.doc

1283181 甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 49. 根據申請專利範圍第4 8項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 50. —種治療發炎失調症之醫藥組合物，其包括有效劑量之 組合物，組合物中包括大小約2 0毫微米至約5 0 0微米之 藥學上可接受實體，其在表面上含有許多的磷酸-甘油 基，或可轉化成該磷酸-甘油基之基團，該組合物基本 上不含非脂質之藥學上活性成份（e n t i t i e s)，如此一旦投 藥則發炎失調症之進行可被抑制及/或減少。 51. 根據申請專利範圍第50項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 52. 根據申請專利範圍第5 1項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約20-1000毫微米。 53. 根據申請專利範圍第52項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 54. 根據申請專利範圍第53項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 55. —種治療或預防哺乳動物心臟失調症之醫藥組合物，此 失調症之存在或感受性可由觀察病人心電圖上延長的 QT-c間隔而測及，其包括有效劑量之藥學上可接受實體 及藥學上可接受載劑，其中該實體表面含有效數量的磷 酸-甘油基以抑制及/或減少心臟失調症之進行。 56. 根據申請專利範圍第5 5項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 57. 根據申請專利範圍第5 6項之醫藥組合物，其中該脂質體 83253-960410.doc 1283181 大小約20-1000毫微米。 · 58. 根據申請專利範圍第5 7項之醫藥組合物，其中的磷酸-* 甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 59. 根據申請專利範圍第5 8項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 60. 根據申請專利範圍第1 3 · 5 9項中任一項之醫藥組合物， 其中的實體基本上無非脂質藥學上可接受成份。 61. 根據申請專利範圍第1 3 · 5 9項中任一項之醫藥組合物， 其中的實體無非脂質藥學上可接受成份。 Φ 62. 根據申請專利範圍第16、21、26、32、37、42、48、53 及58項中任一項之醫藥組合物，其中其餘的基團包括磷 酸-膽驗。 63. 根據申請專利範圍第17、22、27、33、38、43、49、54 及5 9項中任一項之醫藥組合物，其中其餘的基團包括磷 酸-膽驗。 64. —種可投予至哺乳動物患者呈單位劑量型式之醫藥組 合物，其包括藥學上可接受實體及藥學上可接受載劑， H 且基本上不含非脂質之藥學上活性成份（entities)，其中 實體至少有一部分大小在約20毫微米至500微米，且其 中該實體表面含有磷酸-甘油基或可轉化成磷酸-甘油 基之基團，該單位劑量含有約500至約2.5 X 109個實體。 65. 根據申請專利範圍第64項之醫藥組合物，其中的實體是 脂質體。 66. 根據申請專利範圍第64項之醫藥組合物，其中的脂質體 大小約20-1000毫微米。 83253-960410.doc 1283181 67. 根據申請專利範圍第66項之醫藥組合物，其中的組合物 基本上無非脂質之藥學上可接受成份。 68. 根據申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中的組合物 無非脂質之藥學上可接受成份。 69. 根據申請專利範圍第66項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 70. 根據申請專利範圍第67項之醫藥組合物，其中的磷酸· 甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 71. 根據申請專利範圍第68項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約60-100%。 72. 根據申請專利範圍第69項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 73. 根據申請專利範圍第70項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 74. 根據申請專利範圍第7 1項之醫藥組合物，其中的磷酸-甘油基佔該實體上之基團約75%。 75. 根據申請專利範圍第69-74項中任一項之醫藥組合物， 其中其餘的基團包括磷酸-膽鹼。 76. —種用於治療動脈粥樣硬化、呈單位劑量型式之醫藥組 合物，其包含具有效數量之磷酸-甘油基之實體，該單 位劑量含有約5 0 0至約2 · 5 X 1 09個實體，以抑制及/或降 低動脈粥樣硬化之進行。 77. 根據申請專利範圍第76項之醫藥組合物，其中該實體是 脂質體。 78. 根據申請專利範圍第77項之醫藥組合物，其中該脂質體 83253-960410.doc 1283181 大小約2 0 - 1 0 0 0毫微米。 79. 根據申請專利範圍第78項之醫藥組合物，其中該磷酸· 甘油基佔該實體上基團約60- 1 00%。 80. 根據申請專利範圍第79項之醫藥組合物，其中該磷酸-甘油基佔該實體上基團約7 5 %。 81. —種用於治療動脈粥樣硬化、呈單位劑量型式之醫藥組 合物，其包含大小約20毫微米至500微米之醫藥上可接 受實體，在其表面含許多磷酸-甘油基，或可轉化為該 磷酸-甘油基之基團，該單位劑量含有約5 0 0至約2.5 X 1 09個實體，如此一旦投藥則動脈粥樣硬化之進行可被 抑制及/或降低。 82. 根據申請專利範圍第8 1項之醫藥組合物，其中該實體是 脂質體。 83. 根據申請專利範圍第82項之醫藥組合物，其中該脂質體 大小約2 0 · 1 0 0 0毫微米。 84. 根據申請專利範圍第83項之醫藥組合物，其中該磷酸-甘油基佔該實體上基團約6 0 · 1 0 0 %。 85. 根據申請專利範圍第84項之醫藥組合物，其中該磷酸-甘油基佔該實體上基團約7 5 %。 83253-960410.doc