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TW201138813A - Treatment or prevention of infection - Google Patents

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TW201138813A
TW201138813A TW100106637A TW100106637A TW201138813A TW 201138813 A TW201138813 A TW 201138813A TW 100106637 A TW100106637 A TW 100106637A TW 100106637 A TW100106637 A TW 100106637A TW 201138813 A TW201138813 A TW 201138813A
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Eric Charles Reynolds
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Oral Health Australia Pty Ltd
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Description

201138813 六、發明說明： L發明所屬技術領域3 發明領域 本發明係有關於治療或預防一個體中的疾病成濟乂 該疾病或病況係與一個體的口腔組織中存在一種微生物病 原體相關聯，及尤其但非僅僅有關於治療或預防斤# 單胞菌（P. gingiva/k)相關疾病或病況。 L· ^cl. mT ^ 發明背景 口腔是主要的感染部位。感染可導致令人衰弱的 > 組織疾病，及亦已在.口腔組織感染與其他生理構造房黨’ 疾病或病況之間觀察到明顯的關聯性。 慢性牙周炎係口腔組織疾病之一實例。其係牙齒支持 組織的一種炎性疾病及導致齒槽骨的吸收作用及最終牙截 脫落。該疾病係所有社會中的重要公共衛生問題，估計景夕 響高達15%的成年人口及5至6%罹患嚴重形式。 慢性牙周炎的發生與進程係與牙齦下的牙菌班中之特 定革蘭氏陰性細菌相關聯。在牙齦下的牙菌斑中存在牙齦 紫質單胞菌（尸g/ngiva/以），係與疾病具有強烈 的關聯性。 曾報導牙周炎病患之牙齦下的牙菌斑在治療（潔牙與 牙根整平術）後所持續存在的牙齦紫質單胞菌（尸· 係與進行性齒槽骨質流失顯著相關。而且，已 顯示牙齦下的牙菌斑中之牙齦紫質單胞菌⑷細 201138813 胞數目之增加，係與藉由附連喪失、牙周囊袋深度及探測 時的出血現象所測量之疾病嚴重性相關。 在小鼠、大鼠及非人類靈長類動物中，已顯示口腔感 染牙酿紫質單胞菌（尸.g/ng/va/⑻誘發牙周骨質流失。此 外，牙周病及牙齦紫質單胞菌（P： g/ag/va/ii)感染與心血管 疾病及特定癌症之連結性增加。 許多其他微生物病原體包括其他細菌、真菌、病毒及 原生動物已與口腔組織疾病相關聯，及部分的該等病原體 亦經由口腔組織感染而在其他生理構造房室中引發疾病。 前者的實例包括齒垢密螺旋體（7： 與福赛斯坦納 菌（7! /oriyi/i/ii)。A群键球菌感染係風濕熱與 風濕性心臟病之一病原因素。 所面臨的一個問題係在於一直不清楚如何在黏膜組織 已慢性發炎或因手術或其他牙科介入而發生黏膜組織急性 發炎之情況下，獲致對於一特定微生物病原體之強力保護 性反應。 說明書中對於任何先前技術之參考，並非及不應視為 認知或以任何形式暗示該先前技術構成澳洲或其他任何管 轄區域的一般常識之一部分或可合理地預期該先前技術係 經嫻熟技藝者確認、瞭解及視為相關。 【發明内容】 發明概要 在特定的實施例中，提供在一個體中降低一疾病或病況 的發病率或嚴重性之一種方法，該疾病或病況係與一個體的 201138813 口腔組織中存在一種微生物病原體相關聯，該方法包括： -治療一個體，藉此提供用於移除該個體口腔組織之實 質上所有微生物或其片段之條件；其後 -在該個體中提供一抗體，該抗體係用於保護該個體對 抗一微生物病原體，在口腔組織中存在該微生物病原體係 與一疾病或病況相關聯； 藉此在一個體中降低一疾病或病況的發病率或嚴重性。 在一實施例中，藉由對於該個體投予一種免疫原而在 該個體中提供抗體，該免疫原係用於保護該個體對抗一微 生物病原體。 在一實施例中，提供在一個體中降低一種牙齦紫質單 胞菌（P. g/ng/va/h)相關疾病或病況的發病率或嚴重性之一 種方法，該方法包括： -治療一個體，藉此移除該個體口腔組織之實質上所有 微生物或其片段；其後 -對於該個體投予用於誘發對於牙齦紫質單胞菌（P. ⑷的免疫反應之一種欲合或融合蛋白，該蛋白包括 直接或經由一連接子而與第二肽連接之第一肽，其中： (A)該第一肽包括： ⑴與序列辨識編號：1中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；或 (ii)與序列辨識編號：2中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；及 (B)該第二肽包括： 5 201138813 ⑴與牙齦紫質單胞菌（Ρ· Wng/va/k)的離胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 ⑴)與牙齦紫質單胞菌（尸· ⑷的精胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (Ui)與牙齦紫質單胞菌（P· 之HagA黏 連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 藉此在一個體中降低一疾病或病況的發病率或嚴重性。 在其他實施例中，提供一組成物或套組，其包括： -用於移除該個體口腔組織之實質上所有微生物或其 片段之抗微生物劑； 用於免疫接種該個體對抗一微生物病原體之一種免 疫原在α腔組織+存在該微生物病原體係與_疾病或病 況相關聯； 該組成物或套組係用於上述的一種方法中。 在特定的實施例中，提供在—㈣中降低—疾病或病況 的發病率或嚴重種方法，該疾病或病況係與一個體的 口腔組織中存在-種微生物病原體相_，該方法包括： -在-個體的口腔組織進行—手術療程；轉 :該個體，藉此提供用於移除該個體贈組織之實 質上所有微生物或其片段之條件； -在該個體中提供—抗 抗一微生物病原體，在口 體 ’該抗體係用於保護該個體對 腔組織中存在該微生物病原體係 201138813 與一疾病或病況相關聯； 藉此在一個體中降低一疾病或病況的發病率或嚴重性。 在一實施例中，該手術療程係一牙科療程。牙科療程 的實例包括清創術、潔牙及/或牙根整平術。 在一實施例中，本發明提供用於在一個體中降低一疾 病或病況的發病率或嚴重性之一組成物，該疾病或病況係 與一個體的口腔組織中存在一種微生物病原體相關聯，該 組成物包括如在此所述的一種抗微生物劑與如在此所述的 一種免疫原。 就另一方面而言，本發明提供本發明的一組成物在製 備用於在一個體中降低一疾病或病況的發病率或嚴重性之 一藥物之用途，該疾病或病況係與一個體的口腔組織中存 在一種微生物病原體相關聯。該等疾病的非限制性實例包 括牙菌斑、牙酿炎、牙周炎、慢性牙周炎、蛀牙、骨質流 失、齒槽骨質流失及冠狀動脈疾病。 在另一實施例中，本發明提供用於治療或預防牙周病 (及/或在此所指出之適於治療的其他病況）之一組成物，其 係由在此所述的抗微生物劑與在此所述的免疫原之一有效 成分所組成。 在另一實施例中，本發明提供用於在一個體中降低一 疾病或病況的發病率或嚴重性之一組成物，其包含在此所 述的抗微生物劑與在此所述的一種免疫原，該疾病或病況 係與一個體的口腔組織中存在一種微生物病原體相關聯。 在另一實施例中，本發明提供如在此所述的一組成 201138813 物’其係使用作為一藥物。 在另-實施例中，本發明提供_藥學組 一有效量之本發明的一組成物作為—主物，其包含 在-實施例中’提供用於形成對於1:: 體之一種抗體反應或用於形成—種Th2反 4的D腔病原 步驟包括： 〜之〜種方法，其 -提供一個體，在其體内待形成對抗一口 種抗體或Th2反應； 腔病原體之— -檢查該個體，以判定該個體的口腔纽織是 -在檢查揭露該個體的口腔組織未發炎之产否發炎； 種口腔病原體免疫接種該個體，藉此形成 兄下，以 丁於該個辨 腔病原體之一種抗體反應或Th2反應。 的 在一實施例中，在口腔組織發炎的-個體中用於形成 對於-口腔病原體之-龍體反應或形成—種加反應之 一免疫方法中，提供對於該個體投予一消炎劑之步驟藉 此在用於形成對於一口腔病原體的一種抗體反應或Th2反 應之S玄個體的免疫接種作用之前，減少口腔組織的發炎或 消除發炎。 在另一實施例中，提供用於調節口腔組織發炎的一個體 之一種方法，以在該病原體的免疫接種作用之際對於一口腔 病原體形成一種抗體反應或形成一種Th2反應，該方法的步 驟包括對於該個體投予一消炎劑，藉此在以一病原體免疫接 種該個體而形成對於一 口腔病原體的一種抗體反應或形成 一種Th2反應之前’減少口腔組織的發炎或消除發炎。 201138813 在又一實施例中，提供在口腔組織發炎的一個體中形 成對於—口腔病原體的一種抗體反應或形成一種Th2反應 之一種方法，其步驟包括： -提供口腔組織發炎的一個體； -對於該個體施用一治療，藉此消除口腔組織的發炎； 其後； -以一 口腔病原體免疫接種該個體，藉此在該個體中形 成對於該病原體的一種抗體反應或形成一種Th2反應。 在上述實施例中，在口腔組織未發炎或當發炎係亞臨 床性或無症狀性之時點，提供免疫作用。 在免疫接種作用之際所形成的一免疫反應，通常主要 是一種Th2反應，雖然其可能含有Thl反應之可偵測組分。 相關炎症通常為慢性牙周炎，尤其是與牙齦紫質單胞 菌（P. 感染相關聯之牙周炎。 當牙周炎係與牙齦紫質單胞菌（尸· ghg/va/⑷感染相關 聯時，用於免疫接種作用的一種免疫原通常為牙齦紫質單 胞菌（Ρ· 細胞、片段、代謝物或自其所衍生的重 組產物，諸如在此所述的嵌合肽（尤其是KASl-KsAl、KAS2-KLA1)。 如在此所界定之消炎劑或抗微生物劑，通常包括或由 消炎化合物、抗生素及抗生物膜劑中之一或多者所組成， 在此更詳細地說明其實例。 除非上下文另有要求，如用於此之“包含”一詞及該詞 的變體，諸如“包含(comprising)”、‘‘包含(comprises)’’及“包 9 201138813 含(comprised)”，並非意欲排除其他添加劑、組分、整數或 步驟》 圖式簡單說明 第1圖顯示重組Kgp蛋白之SDS-PAGE凝膠的考馬斯 (Coomassie)藍染色。第1道為KAS2-KLA卜第2道為KLA卜 第3道為KsAl，第4道為KASl-KsAl。分子量標準係以千道 爾頓表示。 第2圖顯示抗體對於KAS2肽與福馬林殺死型牙齦紫質 單胞菌（尸· 0«gi_va/i\y)W5O細胞之辨識作用。（A)在ELIS A 中’ KAS2肽係以對抗福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（尸· gi>igi_va/ii)W50 細胞（FK-W50)、重組蛋白 KASl-KsAl、 KAS2-KLA1及合成的KAS2-DT接合物及PBS之抗血清探 測。（B)在ELISA中，福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（/>. W50細胞係以對抗福馬林殺死型牙齦紫質單胞 菌（户· 細胞（FK-W50)、重組蛋白反八81-
KsAl、KAS2-KLA1、KLA1及PBS之抗血清探測。抗體反 應係以所得的ELIS A力價OD415減去二倍背景水平之形式表 示，而各力價代表三個數值的平均值±標準偏差。 第3圖顯示在經重組蛋白與重組嵌合蛋白、福馬林殺死 型牙齦紫質單胞菌（尸.⑷及僅佐劑(PBS、IFA)免疫 接種的小鼠或非口腔感染型（非刺激型）小鼠中，牙齦紫質單 胞菌CP.以·叩/⑽/⑷所誘發之大臼齒的水平骨質流失。在該 圖中 ’ KAS2-KLA1係不為 AS2-LA1，KLA1 係示為 LA1， KAS1- KsAl係示為ASl-sAl，KsAl係示為sAl。骨質流失 10 201138813 之測量值係自左側與右側上頜骨之各大臼齒頰側的牙骨質 釉質交界(CEJ)至齒槽骨嵴(ABC)所測得的面積之平均值， 及以平方毫米（mm2)為單位。藉由李文(Levene)變異數同質 性檢定測得數據為常態分佈，及係以平方毫米為單位之平 均值(η = 12)形式呈現，及使用單因子變異數分析與唐奈特氏 (Dunnett) Τ3檢定加以分析。*係指骨質流失顯著（Ρ<0.001) 低於對照（感染）組之組別。t係指骨質流失顯著(Ρ<0.001)高 於AS2-LA1組之組別。 第4圖顯示在牙周炎模式中之經免疫接種小鼠的血清 抗體亞型反應。血清係來自小鼠；經重組蛋白KsAl、 KLA1、KAS1- KsAl與KAS2-KLA1免疫接種之A(口腔接種 作用之前）與B(口腔接種作用之後）及福馬林殺死型牙齦紫 質單胞菌（戶· ⑷菌株W50係用於ELISA中，及以福馬 林殺死型牙齦紫質單胞菌（P. 0叩be；/⑷菌株W50作為所吸 附的抗原。抗體反應IgG(黑色線條）、igGl(灰色線條）、 IgG2a(白色線條）、IgG2b(橫紋線條）、igG3(斜紋線條），係 以所得的ELISA力價（i〇g2)減去背景水平之形式表示，而各 力價代表三個數值的平均值±標準偏差。 第5圖顯示肽特異性抗體對於代表KAS2肽序列433至 468的重疊肽之反應性之PEPSCAN分析。（A)以KAS1-KsAl(白色線條）、KAS2-KLA1(黑色線條）抗血清探測之 KAS2重疊肽(偏移卜重疊7)。（B)以KAS2-DT接合抗血清探 測之KAS2重疊狀(偏移，重疊7)。各線條係顯示抗體反應性 (於415奈米的光學密度[〇D])。 201138813 第6圖。在辨識牙齦紫質單胞菌（尸0全細胞與 RgpA-Kgp複合體之遠交品系小鼠中，嵌合體aS2-LA1誘發 一種抗體反應。CD1遠交品系小鼠係以嵌合體as2- LA1(50 毫克/小鼠）免疫接種，及所收集的血清係與八32丄八1(八）、 福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌菌株W5〇(B)用 於ELISA中，及以RgpA-Kgp複合體（〇作為所吸收的抗原。 在該圖中’ KAS2-KLA1係示為AS2-LA1。測定各同型免疫 球蛋白對於各抗原之力價，及數據係以所得ELIS A力價 (000)減去二倍背景水平之形式表示，而各力價代表三個數 值的平均值±標準偏差。 第7圖。Kgp蛋白酶之蛋白模式。KAS2[天冬醯胺酸433 至離胺酸468](A)，KAS4[天門冬胺酸388至纈胺酸395](B)， KAS5[天冬醯胺酸51〇至天門冬胺酸516](C)&KAS6[異白 胺酸570至色胺酸58〇](D)。 C實施方式3 較佳實施例之詳細說明 現在將詳細參照本發明的特定實施例。雖然本發明係 連同實施例說明，將瞭解其意圖並非將本發明侷限於該等 實施例。反之，本發明係意欲涵蓋由申請專利範圍所界定 之本發明的範圍内可包括之所有任擇方案、改質作用及等 效物。 嫻熟技藝者將認知與在此所述者類似或等效之可用於 施行本發明的多種方法與材料。本發明絕非受限於所述之 方法與材料。 12 201138813 將瞭解在本說明書中所揭露與界定之本發明，係擴及 二或多個所提及或自内文或圖式中明顯可見的個別特性之 所有任擇組合。所有的該等不同組合構成本發明的各種任 擇部分。 除非上下文另有要求，如用於此之“包含”一詞及該詞 的變體，諸如‘‘包含(comprising)”、“包含(comprises)”及“包 含(comprised)”，並非意欲排除其他添加劑、組分、整數或 步驟。 本案發明者發現，在組織中提供免疫力的授受性轉移 之前，或在組織中引起一免疫反應之際，藉由移除口腔組 織的實質上所有炎性刺激，可改善對於感染之反應，尤其 是改善抗體反應。在提供用於預防及/或治療口腔組織的疾 病及推而廣之用於預防及/或治療因口腔組織被微生物病 原體感染而在其他生理構造房室所發生之疾病方面，該項 發現特別有用。 因此在特定的實施例中，提供在一個體中降低一疾病 或病況的發病率或嚴重性之一種方法，該疾病或病況係與 一個體的口腔組織中存在一種微生物病原體相關聯，該方 法包括： -治療一個體，藉此提供用於移除該個體口腔組織中的 實質上所有微生物與其片段之條件；其後 -在該個體中提供一抗體，該抗體係用於保護該個體對 抗一微生物病原體，在口腔組織中存在該微生物病原體係 與一疾病或病況相關聯；
13 S 201138813 藉此在一個體中降低一疾病或病況的發病率或嚴重性。 在一實施例中，藉由對於該個體投予一種免疫原而在 該個體中提供抗體，該免疫原係用於保護該個體對抗一微 生物病原體。 在一實施例中，以協同性有效量提供一種用於治療一 個體的抗微生物劑組成物與免疫原，藉此提供用於移除該 個體口腔組織中的實質上所有微生物與其片段之條件。 該個體在此通常係指一動物，尤其是一哺乳類動物。 在一實施例中，該哺乳類動物係人類。在特定的實施例中， 該哺乳類動物可為一家畜或農場動物。家畜或農場動物之 實例包括馬、山羊、豬及家畜諸如牛與羊。在特定的實施 例中，該動物係一種伴侣動物，諸如狗、貓、兔或天竺鼠。 1.定義 ‘移除口腔組織的實質上所有微生物與其片段’之用 語，一般係指提供在該組織中所耗乏的微生物或片段或其 代謝物之一量係足以耗乏該組織的炎性刺激之條件，藉此 將該組織的一或多種發炎症狀實質上減少或降至最低。當 相關個體患有源自慢性感染之慢性組織發炎時正是如此。 一般而言，焦點係在於將組織發炎降至最低。因此，將瞭 解在相關治療步驟之後，可能仍留存一些微生物、片段及 其代謝物。 在其他實施例中，當該個體的組織並未發炎時，‘移除 口腔組織的實質上所有微生物與其片段’之用語，係指提供 實質上預防微生物、片段及其代謝物累積至將引起發炎的 14 201138813 一量之條件。當進行治療的個體係正常或在其他情況下並 無一疾病或病況的症狀時正是如此。當手術或牙科介入已 移除微生物，及目標在於確保提供實質上預防微生物累積 至將引起發炎的一量之條件時，亦是如此。在該等實施例 中，當焦點在於避免微生物量累積至可能引發炎症時，將 瞭解在相關治療步驟之後，可能仍有一些微生物、片段及 其代謝物累積。 ‘降低疾病或一病況之發病率’之用語，一般係指將一正 常或無症狀個體或具有早期形式的一疾病或病況之一個體 惡化至該疾病或病況的完全活躍形式之可能性降至最低。 在特定的實施例中，該用語係指預防一特定個體惡化至一 疾病或病況的完全活躍形式。 ‘降低疾病或一病況之嚴重性’之用語，一般係指將一或 多種症狀或徵象或一疾病或病況降至最低。在特定的實施 例中，該用語係指治療罹患一疾病或病況之一個體。 ‘免疫原’一般係指可產生或引起對於抗原的一免疫反 應之一分子，較佳為一種荷爾蒙或抗體反應，例如，一種 Th2反應。免疫原的實例包括肽與相關蛋白。 ‘協同性有效量’之用語，一般係指一種抗微生物性組成 物與免疫原的量所提供之一種治療或預防性或保護性效 應，係大於當組成物或免疫原各單獨使用時所能達成的效 應。在一實施例中，該抗微生物性組成物與免疫原的協同 性有效量支撐該組成物與免疫原之間的一種新穎的作用相 互關係，藉此該免疫原的保護性或治療性效用係遠大於當 15 201138813 ==用f發炎組織時所能達成者。相較於當單獨 I·生有^、日所達成者，微生物組絲與免疫原之協同 里料提供對於微生物病原體之較高力似/或較 尚的親和性抗體反應。 旦‘治療有效量，之用語—般係指本發明的一化合物之一 量:其(⑽療频m錢或疾患，⑼減緩、改善或消 耳/特疋疾病、病況或疾患的_或多種症狀，或⑽延緩在 斤述么之特定疾病、病況或疾患的一或多種症狀之初發。 療或〜療作用’等詞係指治療性療法，其中之目的 系咸緩(減幸二）種非所欲的生理變化或疾患。就本發明的目 的而。冑益或期望的臨床結果包括但不限於緩和症狀、 縮j疾病fcsi、穩定（亦即非惡化)疾病狀況、延遲或減緩疾 病進程、改善或緩和疾紐況及緩解(不論是部分或全面广 不响疋可檢測或不可檢測者。‘治療，亦可指延長存活時間， 相較於若未接受治療之存活時間而言。治療可能未必完全 清除感染’但可將感染的併發症與副作用及感染進程減少 或降至最低。可藉由該個體的身體檢查、細胞病理學、血 清DNA或她似檢測技術，監測該治療之成功與否。 預防’與‘預防作用’等詞，一般係指用於保護或預防尚 未患有一特定感染的相關併發症之一個體惡化至該併發症 之預防性或阻止性措施。需要預防作用之個體係包括該等 患有一感染者。 ‘藥學上可接受的’之用語，係指該物質或組成物必需在 化學上及/或毒物學上與構成一調配物之其他成分及/或經 201138813 其治療的哺乳類動物相容。 ‘仿單’一詞係用於指在治療性產品的商品包裝中所習 慣包括之說明書，其包含有關適應症、用途、劑量、投藥、 使用該治療性產品的禁忌及/或警示之資訊。
Thi反應一般係指涉及細胞介素諸如干擾素丫與1^1?之 一反應。
Th2反應一般係指涉及細胞介素諸如介白素_4、介白素 -5、介白素-6、介白素-ίο、介白素_13等之一反應。 2.治療方法 本發明的方法係適用於廣範圍的個體，包括該等並無 該疾病或病況的症狀者。該等個體的口腔或其他組織可能 不具有疾病症狀。更詳細地，該等個體的黏膜或其他口腔 組織可能並未發炎。在一實施例中，就隨機選擇的個體世 代而言，該等個體的口腔可能正常具有相當多的微生物病 原體。 在其他實施例中，該個體的口腔組織或其他生理構造 房室表現出一疾病或病況的亞臨床或臨床症狀。 該疾病或病況的症狀可在該個體的口腔組織中表現。 可能存在的急性發炎標記，係包括血漿與白血球自血液進 入損傷組織之移動增加。亦可能存在之牙齦急性感染的臨 床徵候包括發紅(rub〇r)、發熱(cai〇r)、腫脹(tUm〇r)、疼痛 (dolor)及功能喪失(functi〇laesa)。慢性發炎的特徵可在於白 血球細胞（單核白血球、巨噬細胞、淋巴球、血漿細胞）浸潤 作用。可能觀察到組織與骨質之流失。炎症的實例包括唇 17 201138813 炎(：：、牙齦炎、舌炎及口炎。 产例女實知例中，該個體的黏膜或其他口腔組織可能發 °亥個體可能患有急性口腔組織發炎。該等個體 的貫例包括該等^^ Α 寸θ進饤牙科或口腔手術包括清創術、潔牙 與牙根整平術者。 炎。在二，實施例中，該個體可能患有慢性口腔組織發 作用，實苑例中，該個體可能患有牙齦炎、齒槽骨吸收 及最終牙齒因進行性喪失牙齒與齒槽骨的膠原蛋白 附連而脫落。亦 在—A 』此發生黏膜或相關口腔組織的其他損傷。 &例中’ 6亥疾病或病況係口腔組織的一疾病或 病況。慢性牙两六 同灸係一個特別重要的實例。其他的疾病與 ; 括特徵在於損傷口腔黏膜者，如獲紅熱、鶴口瘡、 肉芽腫、白喉、結核病、梅毒、放線菌病、念珠菌 病、疮療性口炎。 冬瞭解。玄疾病或病况可為σ腔組織以外的一組織之— 疾病或病兄，諸如—器官或系統，例如心血管系統。在-實施例中，該疾病或㈣係心血管疾病。 I發明可適用於-範圍之微生物病原體，尤其是感染 口腔組織的該等微生物病原體。在—實施例中，該病原體 係選自由細菌、病毒及—所組成之群組。 細菌i*r、特佳選自由牙酿紫質單胞菌（户⑺爪⑽似 客/叩/似/⑷、齒垢密螺旋體（7>印⑽心仙·⑶⑷、福赛斯坦 納菌（Tannerella forsythia)所組成之群絚。 病原體的其他實例係示於下列第A表令。 18 201138813 第A表 生物 例示性科/屬 例示性物種 細菌 鏈球菌屬（Streptococci) 延鏈球菌 變種鏈球菌 J&L鍵球菌 肺炎鏈球菌 化膿性鏈球菌 和緩鏈球菌 奈瑟氏球菌屬(Neisseria) 腦膜炎雙球菌 乳酸桿菌屬(Lactobacilli) 胚芽乳酸桿菌 變形桿菌屬(Proteus) 類細菌屬（Bacteroides) 葡萄球菌屬(Staphylococci) 表皮葡萄球菌 金黃色葡萄球菌 假單胞菌屬（Pseudomonas) 綠膿桿菌 梭菌屬(Clostridium) 產氣莢膜梭菌 破傷風芽抱梭菌 棒狀桿菌屬（Corynebacteria) 腸球菌屬(Enterococci) 糞腸球菌 範永氏球菌屬(Veillonella) 螺旋體屬(Treponema) 齒垢密螺旋體 紫質單胞菌屬 (Porphyromonas) 牙齦紫質單胞菌 坦納菌屬（Tannerella) 福赛斯坦納菌 聚生桿菌屬（Aggregatibacter) 伴放線聚生桿菌 放射菌科(Actinomycetes) 螺旋體門(Spirochetes) 黴漿菌屬(Mycoplasmas) 真菌 念珠菌屬(Candida) 白色念珠菌 khmerensis metapsilosis 近平滑念珠菌 19 201138813 熱帶念珠菌 分枝孢子菌屬（Cladosporium) 白楊煤病菌 球孢枝孢菌 草本枝孢菌 極細枝孢黴 黑管狀黃柄黴菌屬 (Aureobasidium) 出芽短梗黴 酵母菌目（Saccharomycetales) 鐮菌屬（Fusarium) 黃色鐮孢菌 錘形黴菌 早熟禾鐮孢菌 # 菌屬(Aspergillus) 阿姆斯特丹麴菌 淺藍灰麴菌 黃麴菌 綠麴菌 帚狀麴菌 紅魏菌 炭角菌目（Xylariales) •嘯球菌屬（Glomus) 黃褐繡球菌 叢枝菌根菌 小球腔菌科 (Leptosphaeriaceae) 子囊菌(Ascomycete) 擔子菌(Basidiomycete) 長。彖殼菌屬(Ophiostoma) 絮狀長喙殼菌 pulvinisporum 外生菌根(Ectomycorrhiza) 青黴菌屬(Penicillium) 短密青黴菌 光滑青黴菌 小刺青黴菌 内寄生真菌 球囊菌綱(Glomeromycete) 交鏈孢黴屬(Alternaria) 極細交鏈孢黴 小麥葉疫病菌 20 201138813 隱球菌屬(Cryptococcus) 纖維素分解隱球菌 流散隱球菌 莖點病菌屬(Phoma) 馬鈐薯壞疽病菌 plurivora 酵母菌屬（Saccharomyces) 貝酵母菌 啤酒酵母菌 橢圓酵母菌 裂殖酵母菌屬 (Schizosaccharomyces) 曰本裂殖酵母菌 粟酒裂殖酵母菌 接合酵母菌屬 (Zygosaccharomyces) 假鲁氏接合酵母菌 鲁氏接合酵母菌 原生動物 内阿米巴屬（Entamoeba) 牙齦内阿米巴 滴蟲屬（Trichomonas) 口腔鞭毛滴蟲 利什曼原蟲屬(Leishmania) 巴西利什曼原蟲 病毒 范療病毒 第1至8型疱疹病毒 乳突狀病毒 人類乳突狀病毒(Human papilomavirus)(HPV)-l、HPV-3、HPV-27、HPV- 29及HPV-57 腸病毒 A16型柯薩奇氏病毒與71型腸 病毒 21 201138813 在一實施例中，對於該個體投予形成一種抗微生物劑 之一組成物，藉此移除該個體口腔組織之實質上所有微生 物或其片段。如下進一步討論實例。 在一實施例中，例如藉由對於該個體投予一種免疫原 而在個體中提供一抗體，其係在藉由機械清創術及/或施用 如在此所界定之一或多種抗微生物劑治療一受感染位址一 至二個星期之後發生。 可藉由檢測或測量來自一微生物的一種蛋白或其片 段，而測定微生物、其片段或代謝物之水平或存在與否。 在另一實施例中，可藉由自該個體取一試樣及測定一 特定蛋白存在與否或該試樣中之一特定蛋白的表現水平， 而測定一口腔組織中之微生物、其片段或代謝物的水平或 存在與否。可藉由任意數量的分析法檢測一蛋白之存在與 否或其水平。實例包括免疫分析、層析法及質譜法。特佳 的免疫分析法之一實例為FACS。 可用於檢測一標的蛋白是否存在於一試樣中之各種分 析法包括： 酵素結合免疫吸附分析法(ELISA):該方法涉及將含有 一標的蛋白、肽或其片段之一試樣，例如唾液或口腔組織， 固定至一表面諸如一微量滴定盤的一孔上。施用與一酵素 偶合之具標的蛋白特異性的抗體，及讓其與標的蛋白、肽 或其片段結合。藉由使用與該抗體偶合的酵素之一比色反 應，檢測與量化該抗體之存在。在該方法中所常用的酵素 包括辣根過氧化酶與鹼性磷酸酶。若校正良好及位於反應 22 201138813 的線性範圍内，該試樣中之標的蛋白、肽或其片段的存在 量係與所產生的顏色量成正比。一般使用標的蛋白、肽或 其片段標準品，以增進定量準確性。 西方墨點法：該方法涉及藉由丙烯醯胺凝膠將一標的 蛋白、肽或其片段與其他蛋白分離，接著將該蛋白、肽或 其片段轉移至一膜（如尼龍或PVDF)。藉由對於該標的蛋 白、肽或其片段具特異性之抗體檢測該標的蛋白、肽或其 片段之存在*該抗體則精由抗體結合試劑檢測。抗體結合 試劑例如可為蛋白A或其他抗體。抗體結合試劑可經放射性 標記或如上述與酵素結合。可藉由自動放射攝影、比色反 應或化學發光作用進行檢測。該方法係藉由電泳期間在丙 烯醯胺凝膠中的遷移距離所示之在該膜上的相對位置，得 以定量標的蛋白、肽或其片段之量及判定其身分。 放射免疫分析(RIA):在一形式中，該方法係涉及使用 固定在一種可沉澱性載體諸如瓊脂珠上的一種特異性抗體 與經放射性標記的抗體結合蛋白（如經碘125標記的蛋白 A)，將所欲的標的蛋白、肽或其片段沉澱。所沉澱的丸狀 物中的計數數值，係與標的蛋白、肽或其片段的量成正比。 在RIA的另一形式中，使用一種經標記的標的蛋白、肽 或其片段與一種未標記的抗體結合蛋白。含有未知量之一 標的蛋白、肽或其片段之一試樣係以不同的量添加。來自 經標記的標的蛋白、肽或其片段之沉澱計數之降低，係與 所添加的試樣中之標的蛋白、肽或其片段的量成正比。 螢光激活細胞分選技術(FACS):該方法係涉及藉由具 23 201138813 的蛋白狀或其片段特異性之抗體，而在細胞中原位檢 測一標的蛋白、肽或其片段。具標的蛋白、肽或其片段特 異丨生之抗體係與螢光團連結。藉由一種細胞分選機器，讀 取各細胞通過—光束時所發出的光之波長，而進行檢測。 該方法可同時使用二或多種抗體。 免疫組織化學分析：該方法係涉及藉由具標的蛋白' 肽或其片段特異性之抗體，在固定式細胞中原位檢測一標 的蛋白、肽或其片段。具標的蛋白、肽或其片段特異性之 抗體可與酵素結合或與螢光團連結。藉由顯微技術與主觀 或自動評估作用進行檢測。若使用酵素結合型抗體，則可 能需要一種比色反應。將瞭解在免疫組織化學法之後，通 常使用例如.蘇木素或姬姆薩氏(Giemsa)染劑進行細胞核的 對比染色。 原位活性分析··依據該方法，在含有一活性酵素的細胞 上施用一種發色受質，及該酵素催化一反應，其中該受質分 解而產生藉由一光學或螢光顯微鏡可見之—種發色產物。 試管内活性分析：在該等方法中，在自該細胞所萃取 的一種蛋白混合物中，測量一種特定酵素的活性。該活性 可在分光光S#儀中使用比色方法測量，或可在非變性丙稀 醯胺凝膠（亦即活性郷）中測量。在電泳錢，將該凝膠浸 泡在含有-受質與比色·之-溶液巾1產生的染色帶 狀係對應麟感興_蛋自之酵素雜。若校正良好及位 於反應的線性範圍内，該試樣中所存在的酵素量所產生的顏 色量成正比。一般使用一酵素椤進〇，丨、；& 砰I铩早以增進量化準確性。 24 201138813 此外，可藉由定量PCR測定細菌DNA的量，俾作為一 口腔組織中之微生物的存在與否或其水平之一指標。 可測定一蛋白或來.自牙齦紫質單胞菌（尸orp/iyromimai 納菌(Timnere//a/orsyi/u\2)的DNA之存在與否或其水平，及顯 示已移除一個體口腔組織中的實質上所有微生物或其片段。 該抗微生物劑及/或免疫原可以全身方式投藥，或直接 投藥至口腔組織，尤其直接地投藥至口腔黏膜。 在一實施例中，該個體之治療係移除該個體口腔組織 的實質上所有微生物或其片段，藉此將該個體口腔組織的 發炎降至最低。在另一實施例中，該個體之治療係移除該 個體口腔組織的實質上所有微生物或其片段，藉此將該個 體口腔組織的免疫反應降至最低。 可在用以移除該個體口腔組織的實質上所有微生物與 其片段之該個體的治療作用之後，對於該個體投予免疫原》 一般而言’如本發明，相關口腔組織並未發炎；或者 即使炎症存在，在免疫作用之際亦為無症狀性或亞臨床性。 在免疫作用之後’該個體主要展現一種Th2反應，其大 體上是一種荷爾蒙反應，及該個體具有可檢測水平的保護 性抗體。 3.組成物 在特定的實施例中，提供一組成物，其包括： -用於移除該個體口腔組織的實質上所有微生物與其 片段之抗微生物劑； 25 201138813 -用於免疫接種該個體對抗一微生物病原體之一種免 疫原，在口腔組織中存在該微生物病原體係與一疾病或病 況相關聯； 該組成物可用於上述的一種方法中。 3.組成物 在特定的實施例中，提供一組成物，其包括： -用於移除該個體口腔組織的實質上所有微生物與其 片段之抗微生物劑； -用於免疫接種該個體對抗一微生物病原體之一種免 疫原，在口腔組織中存在該微生物病原體係與一疾病或病 況相關聯； 該組成物可用於上述的一種方法中。 3.⑻抗微生物劑 抗微生物劑可為其投藥效應係用以耗乏炎性刺激之任 一藥劑。單獨或組合使用該等藥劑，在短期抑制發炎、牙 周病原體的再度出現例如生物膜形成作用及/或牙周骨吸 收作用方面具有效用。可單獨或組合施用該等藥劑，例如 在可能曾進行手術介入的一牙周位址局部施用一種緩釋型 牙周凝膠調配物，以預備該病患的免疫系統接受對抗牙周 病原體的疫苗接種。 在不受任一理論或作用模式約束之下，在受感染的牙 周位址之機械清創術與清潔作用之際，施用例如位於一種 牙周凝膠調配物中之在此所界定的一種抗微生物劑，據信 有助於預備免疫系統而容許產生一種傾向Th2的反應。傾向 26 201138813
Th2的該反應造成保護性抗體之產生，及預防牙周病原體再 度出現與預防疾病惡化。 在這種情況下，下列可為抗微生物劑：抗生素、免疫 抑制劑及殺菌劑。在特定的實施例中，該藥劑可為一種消 炎劑。消炎劑包括非類固醇類消炎藥(NSAID)。NSAID的實 例包括抑制一種環氧化酶之化合物。特定NSAID的實例包 括阿斯匹靈、布洛芬(ibUpr〇fen)及拿百疼(napr〇Xen)。消炎 劑的其他實例包括PAR-2拮抗劑，及其包括但不限於結合 PAR-2的抗體與抗體片段、與PAR-2結合及抑制其活性之其 他多肽、抑制PAR-2活性或表現作用之其他化合物及包括與 PA R - 2編碼核酸交互作用的小型有機化合物與抑制性核 酸。可封阻或置換一種内源性配體與PAR_2的結合作用及/ 或經由PAR-2的訊號傳導作用之例示性拮抗劑，包括該等述 於WO 2004/002418與WO 2006/023844者（如具有胺基酸序 列UGK或LIGKV之肽）。與PAR-2結合及阻止作用為一繫留 配體的PAR-2區域之蛋白分解性切開作用之拮抗劑，係例示 於 WO 2007/092640 中。 抑制、降低或封阻PAR_2的表現作用之拮抗劑，係包括 抑制性核酸，其包括但不限於核酶、三螺旋型寡核苷酸 (TFO)、促進藉由核糖核酸酶p的切開作用之外源指導序列 (EGS)，肽鏈核酸、反訊息DNA、siRNA及對於編碼PAR-2 的核酸具特異性之微型核糖核酸。 間接型拮抗劑”係藉由拮抗在正常情況下切開 PAR-2 而造成其活化作用之蛋白酶活性，而可間接地抑制PAR-2。 27 201138813 可切開PAR-2之蛋白酶包括牙齦菌蛋白酶、胰蛋白酶、類胰 蛋白酶及嗜中性白血球蛋白酶_3。適用於本發明的一種方 法或可用於本發明的一組成物中之間接型拮抗劑的實例， 係包括WO 93/14779中所揭露之胰蛋白酶抑制劑及w〇 〇2/ 47762中所揭露之類膜蛋白酶抑制劑。 個特佳的實施例中，該抗微生物劑係— 素°實例包_自由巨賴、四環黴素類、 ^ 反丁烯二酸還原酶抑制劑及抗微生物肽所組 木類、 生素，如下列第B表中所示。 鮮級之抗 28 201138813 第B表 抗感染劑 藥物 在澳洲之商品名（贊助廠商) 巨環類 羅紅徽素 碧西格(Biaxsig)(赛諾菲安萬特(sanofi-Aventis)公 (Roxithromycin)司） 羅薩(R〇xar)(西克瑪(Sigma)公司） 羅席德(Roxide)(山德士(Sandoz)公司） 羅西黴素(Roximycin)(愛爾發法瑪(Aiphapharm)公 司） 羅紅黴素(Roxithromycin)-RL(瑞爾（Real)-RL公司） 羅里德(Rulide)與羅里(Ruiie) d(赛諾菲安萬特公 司） 咪唑尼達 滅滴靈(Flagyl)(賽諾菲安萬特公司） (Metronidazole)滅滴靈S懸液劑(賽諾菲安萬特公司） 麥曲吉爾(Metrogyl)(愛爾發法瑪公司） 咪唑尼達(Metronidazole)凝膠劑(奥利安(〇Η〇η)公 司） 麥曲奈德(Metronide)(賽諾菲安萬特公司） 紅黴素 羅柴斯(R〇zex)(乳資劑與凝膠劑形式)(高德美 (Galderma)公司） DBL紅黴素(DBL Erythromycin)(赫士睿(Hospira)公 司） EES (林克(Link)公司） E-黴素(愛爾發法瑪公司(Alphpharm)) 克林達黴素 愛瑞克(Ei7c)膠囊(梅恩法瑪國際(Mayne Pharma (Clindamycin) International)公司） 麗歐迅(Cleocin)(輝瑞(Pfizer)公司） 特麗仙(Dalacin) C膠七(輝瑞公司） 螺旋黴素 ^剋(Duac)每曰一次型凝膠劑(史帝富(Stiefel)公
Zindaclin(晶化(Genepharm)公司） 羅威黴素(Rovamycine) 四環徽素類米諾環素 愛卡明(Akamin)(愛爾發法瑪公司） (Minocycline) 多西環素 多瑞克斯(Doryx)(梅恩法瑪國際公司） (Doxycyline) 戴席格(Doxsig)(西克瑪公司） 多西(Doxy)錠劑(晶化公司） 多西赫素(Doxyhexal)公司錠劑（山德士公司） 多西林(Doxylin)(愛爾發法瑪公司 弗拉卡斯(Frakas)(西克瑪公司）
GenRX多西環素(Doxycyciine)膠囊(奥貝泰克 (Apotex)公司） 、、 _ GenRX多西環素錠劑(奥貝泰克公司） 29 201138813 偉霸黴素(Vibramycin)(輝瑞公司） 殺菌劑 鹽酸氯已啶 沙威隆(Savlon)殺窗劑(利潔時(ReckittBenckiser)公 司） 葡萄糖酸氣已啶氣已啶與西曲溴胺含水灌洗劑(輝瑞公司） 氣已啶灌洗溶液劑(輝瑞公司） 得伏寧(Difflam)-C消炎性殺菌溶液劑(愛諾瓦 (iNova)公司） 具有0.05%氣已咬之2%利諾卡因(Lignocaine)凝膠 劑(輝瑞公司） 微席爾德(Microshield) 2(J&J醫藥公司） 微席爾德4(J&J醫藥公司） 微席爾德5(J&J醫藥公司） 微席爾德藥酒(J&J醫藥公司） 殺牙菌斑(Plaqacide)漱口水(歐樂B(OraNB)公司） 盤尼西林類 盤尼西林G 班盤(BenPen)(CSL公司） 盤尼西林V 亞柏西林(Abbocillin) V、亞柏西林(Abbocillin) VK(西克瑪公司） 西里卡因(Cilicaine)VK、西里卡因V(馮斯與麥卡儉 (Fawns & McAllen)公司） 西洛盤(Cilopen) VK(晶化公司） LPV(亞斯本(Aspen)公司） 盤赫素(Penhexal)VK(赫素(Hexal)公司） 安比西林 (Ampicillin) 以肌内或靜脈注射液劑形式投藥 阿莫西林 (Amoxycillin) 阿莫西林山德士膠囊與懸液劑(山德士公司） 阿莫西林山德士錠劑(山德士公司） 阿法莫斯(Alphamox)(愛爾發法瑪公司） 阿莫赫素(Amohexal)勝囊(赫素公司） 阿莫赫素糖漿劑(赫素公司） 阿莫西爾(Amoxil)雙效(葛蘭素史克 (GlaxoSmithK 丨 ine)公司） 阿莫西爾口服(葛蘭素史克公司） 安滅菌(Augmentin)(葛蘭素史克公司） 安滅菌雙效、安滅菌雙效錠(葛蘭素史克公司） 阿莫西林-DP(晶化公司） APO-阿莫西林膠囊(奥貝泰克公司） 比格萊明(Bgramin)(晶化公司） 千馬特(Chemmart)阿莫西林膠囊(奥貝桊克公司） 西拉麥斯(Cilamox)(西克瑪公司） 可拉麥佐(Clamoxy丨)丨25/31.25(愛爾發法瑪公司） 可拉麥佐雙效500/125、可拉麥佐雙效錠875/丨25(愛 爾發法瑪公司） 可拉弗林(Clavulin) 125糖漿劑(曼利與詹姆士 (Menley & James)公司） 30 201138813 可拉弗林雙效500/125與可拉弗林雙效錠(曼利與詹 姆士公司） 諾快寧(Curam)(山德士公司） GA-安可拉弗(Amclav)500/125、GA-安可拉弗 875/125錠劑（晶化公司） GenRx阿莫西林與克拉維酸875毫克/125毫克(奥貝 泰克公司） 克拉仙(Klacid) Hp7(亞培(Abbott)公司） 瑪沙莫斯(Maxamox)(山德士公司） 用於口服懸液劑之瑪沙莫斯散劑（山德士公司） 瑪沙辛(Moxacin) 口服製劑（山德士公司） 而ί適恩(Nexium) Hp7(阿斯特捷利康(AstraZeneca) 公司） 雷莫西(Ranmoxy)(蘭伯西(Ranbaxy)公司） 泰瑞懷特藥房(Terry White Chemists)阿莫西林膠囊 (奥貝泰克公司） 泰瑞懷特藥房阿莫西林懸液劑(奥貝泰克公司） 頭芽孢菌素類賜福力欣 (Cephalexin) 山德士賜福力欣(Cefalexin)(山德士公司） 依阿力斯(Ialex)(藍儂(Lennon)公司） 依比力斯(Ibilex)(愛爾發法瑪公司） 可弗力斯(Keflex)(亞斯本(Aspen)公司） 雷西弗(Rancef)(蘭伯西公司） 史波羅赫素(Sporahexal)(山德士公司） 泰瑞懷特藥房賜福力欣(奥貝泰克公司） 31 201138813 在一實施例中’該抗微生物劑係選自一或多種反丁稀 二酸還原酶抑制劑。適宜的抑制劑包括天然產物，其包括 但不限於紫花前胡素、verticipyrone、paecilaminol、來自鍵 黴菌屬（如^菌種之5-烯基-3,3(2H)-呋喃酮類、奈氣 瑞林(nafuredin)、曱反丁烯二酸、魚藤酮及其天然、半合成 與合成類似物。就另一方面而言，抑制劑可為合成化合物， 其包括但不限於：2-取代4,6-二硝苯酚類；酼基吡啶N-氧化 物；L-092,201(默沙東（Merck Sharpe and Dohme)公司）；石肖 基0米°坐類諸如非昔硝。坐(fexindazole)、美加。坐(megazol)、节 硝〇坐、MK-436、L-634,549、米索硝唾(misonidazole);或笨 并°米哇類諸如阿苯達吐（alben(jazole)、坎笨達嗤 (cambendazole)曱苯達唑（mebendaz〇le)、奥吩達唑 (oxfendazole)、帕苯達唑（parebendaz〇le)及噻苯達唑 (thiabendazole);或甲嘧烯酚或莫侖太爾（m〇rantel)。較佳的 抑制劑為甲嘲烯酚、莫侖太爾（m〇rantel)或噻笨達唑 (thiabendazole)。特佳的抑制劑為曱嘧烯酚。 爛熟技藝者將瞭解抑制劑的選擇係依決定該抑制劑是 否適用於臨床環境之數項臨床因子而定。 才/L生素對於該微生物病原體可直接具有細胞毒性。在其 他實施例中’抗生素係間接具有細胞毒性，例如抗生素可為 微生物生物膜製造作用或其他一些代謝作用之抑制劑。 _在實知例中’該抗生素係一種抗微生物肽。實例係 示於下列第C表中。 32 201138813 第c表 "充微生物劑 例示性參考文獻 包括〇tsr酿蛋白（11_23)之肽（序 列辨識編號：86) - 包括β-酪蛋白（193-209)之肽（序 列娀毺編號：87) - 包括κ-酪蛋白（109-137)之肽（序 列辨識煸號：88) - 包括β-酪蛋白（193-205)之肽（序 列辨識編號：89) - 包括Κ-酪蛋白（117·137)之肽（序 列辨識編號：90) - 非醣基化肽，例如衍生自κ-酪蛋 白 PCT/AU98/00972(如見第 1 表） 組成物，例如包括衍生自路蛋 白的一肽與一種二價陽離子 PCT/AU2004/001764 肽，例如衍生自Κ-酪蛋白 在PCT/AU98/00972中為肽的醣基化 形式，包括與一種二價陽離子同處於 一組成物中之該等肽 用以抑制一種牙齦紫質單胞菌 (P. gi·/!名/νβ/ί·5〇多肽之藥劑 PCT/AU2008/001017(如見一種反丁 婦二酸還原酶抑制劑，如曱嘴稀盼、 莫命太爾（morantel)或每苯達0坐 (thiabendazole)) 在一個特佳的實施例中，該抗微生物劑係微生物的生 物膜製造作用之一種抑制劑。其他較佳藥劑為反丁烯二酸 還原酶抑制劑。 在特定的實施例中，該抗微生物劑可為一種抗體。該 抗體可為一種多株或單株抗體。可使用的例示性單株抗體 係導向牙周病原體的分子（如蛋白酶與黏連蛋白）或宿主以 抑制發炎[如單獨或組合對抗腫瘤壞死因子(TNFoc)、介白素 -l(IL-l)、尿激酶型血纖維蛋白溶酶原活化劑（u-PA)、顆粒 性白血球巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞集落 刺激因子（M-CSF)及RANK配體(RANKL)之抗體]。該抗體 較佳係導向對抗不同病原體抗原與宿主發炎介質之單株抗 33 201138813 體的ad &物待用於萆巴向牙齦紫質單胞菌（/^rp/iyromcmiu 的較佳單株抗體，係該等導向Kgp與RgpA蛋白酶 的活性位址者及s亥等導向Kgp與RgpA蛋白酶之A1黏連蛋白 的結合基序者。 在一實施例中，該抗微生物劑係一種抗體模擬物。該 抗體模擬物可具有或不具有免疫球蛋白域的三級結構（如 Dimitrov於2009年期刊“河八以”第i期第26 28頁乙文）。抗體 模擬物可具有與一特定分子結合之特異性。抗體模擬物之 一實例係與人類載脂蛋白（lip0calin)相關之分子家族，其稱 作抗運轉蛋白（anticalin)(如Skerra於2007年期刊“Current Opinions in Biotechnology”第 18期第295-304頁乙文）。抗運 轉蛋白較佳導向來自牙齦紫質單胞菌似 ⑷的一蛋白，或特異性地與其結合。在一個較佳實 施例中，抗運轉蛋白係導向一種離胺酸_χ_蛋白酶或精胺酸 -X-蛋白酶諸如Kgp與RgpA蛋白酶的活性位址，或特異性地 與其結合。可使用抗運轉蛋白代替單株抗體’但約小8倍及 其尺寸約為180個胺基酸及質量約為2〇千道爾頓。抗運轉蛋 白的組織滲透作用係優於抗體，及在高達7〇。(：的溫度安定。 不同於抗體之處，係其等可在細菌細胞如大腸桿菌（石 中大量生產。 在特定的實施例中’抗微生物劑亦可為可抑制、降低 或阻止細菌生物膜形成或發育之一種抗生物膜劑。抗生物 膜劑可能具有生物膜碎裂活性’及可能造成生物膜粉碎。” 生物膜碎裂活性”在此係用於說明一組成物或藥劑造成細 34 201138813 菌自該生物卿出之性質。雜成物或藥财可但未必降 低-生物膜中的細菌之存活性。細菌自生物膜之，，釋出，，， 係包括將來自-生物膜的細g成為浮游狀態之數目增加， 藉此增加來自一生物膜的細菌對於殺細菌劑之感受性。殺 細菌劑在此係用於說明直接降低細菌存活性的一組成物、 藥劑、化合物、擬肽或肽之性質。 因此，在不受任一理論或作用模式約束之下，展現生 物膜碎裂活性之組成物絲_信未必降低—生物膜中的 、、田菌之存活f生，反之造成或引發細菌細胞自該生物膜釋 出在特疋的貫她例中，該等組成物或藥劑可造成或引發 一生物膜中的更多細菌成為浮游狀態。在其他實施例中， 該組成物或_可抑制或降低生物卿成作用。在特定的 貫施例中，邊組成物或藥劑可抑制或降低生物膜生長。在 其他貫施财，本發明的抗微生物#丨可抑制或降低生物膜 所展現之啟動或促進—個體的—疾病或病況之任 一特性。 在特疋的貫施例中’該肽或組成物可抑制或降低生物膜所 展現之啟動或促進—個體的—疾病或病況之任—特性而 毋需殺滅該生物膜中的細菌。 在特定的實施例中’一種抗微生物性組成物或藥劑係 指預防、抑制或降低一生物膜的一種可測量性參數之能 力。一生物膜的可測量性參數之非限制性實例，可為該生 物膜之總生物質量、平均厚度、表面相對於生物體積的比 例、粗糙係數或細菌組成物及其等的存活性。 3.(b)免疫原 35 201138813 所選擇的免疫原引起一種免疫反應，較佳是對於所關 切的微生物病原體之一種保護性抗體反應。 在一實施例中，該免疫原係以肽的形式提供，例如一 種重組肽。 在特別有關於牙齦紫質單胞菌（P. gingivalis)感染及相 關疾病與病況之一實施例中，該重組肽可為用於誘發對於 牙齦紫質單胞菌（P. 的免疫反應之一種欲合或融 合蛋白，該蛋白包括直接或經由一連接子而與第二肽連接 之第一肽，其中： (A) 該第一肽包括： ⑴與序列辨識編號：1中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；或 (ii)與序列辨識編號：2中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；及 (B) 該第二肽包括： ⑴與牙齦紫質單胞菌（尸.g/zig/va/k)的離胺酸 -X -蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (ii) 與牙齦紫質單胞菌（P. ghg/va/⑷的精胺酸 -X -蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (iii) 與牙齦紫質單胞菌（尸· g/ng/va/⑷之HagA黏 連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 如用於此之“肽”一詞係用於指一胺基酸序列，其具有 36 201138813 至多約40個胺基酸殘基及較佳自5至4〇個胺基酸殘基。 在一實施例中，使用一種多肽以替代“第二肽”，或換 言之並非使用“第二肽’\ “多肽’，_詞係用於指具有至少約 40個胺基酸殘基之一胺基酸序列。 因此，就另一方面而言，提供用於誘發對於牙齦紫質 單胞菌（户⑷的免疫反應之一種嵌合或融合蛋白， 該蛋白包括直接或經由一連接子而與一多肽連接之一肽， 其中： (A) 該肽包括： ⑴與序列辨識編號：1中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；或 (ii)與序列辨識編號：2中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；及 (B) 該多肽包括： (i) 與牙齦紫質單胞菌（jP· g/wgiVa/b)的離胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (ii) 與牙齦紫質單胞菌（尸.的精胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (沿)與牙齦紫質單胞菌（尸.以《以\(3/以)之出§八黏 連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 就另一方面而言，本發明提供用於誘發對於牙齦紫質 單胞菌（Ρ. giVigiva/!··?)的免疫反應之一肽，及其係選自由所 37 201138813 下列組成之群組： (i) 與序列辨識編號：64至66中之一者所示序列相同或 同源之一序列；及 (ii) 與序列辨識編號：67或68所示序列相同或同源之一 序列。 就本發明的一方面而言，當該肽具有序列辨識編號： 64至68之一序列時，該肽可以一種嵌合或融合蛋白的形式 提供’其中該肽係直接或經由一連接子而與第二肽連接。 在一實施例中，該嵌合或融合蛋白的第二肽包括： ⑴與牙齦紫質單胞菌（P· 的離胺酸-X-蛋白酶 之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部；或 (ii)與牙酿紫質單胞菌（戶· 的精胺酸-X-蛋白 酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全 部；或 (出)與牙酿紫質單胞菌（尸尽_1、/1_:?)之{^叩八黏連蛋白 域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 在上述實施例中，使用一種多肽以替代第二肽，或換 言之並非使用第二肽。因此，就另一方面而言，提供用於 誘發對於牙齦紫質單胞菌（P g/叩/⑽/⑷的免疫反應之一種 嵌合或融合蛋白，該蛋白包括直接或經由一連接子而與一 多肽連接之一肽，其中： (A)該肽包括： W與序列辨識編號：64至66中之一者所示序列 相同或同源之一序列；或 38 201138813 (ii)與序列辨識編號：67或68所示序列相同或 同源之一序列；及 (B)該多肽包括： ⑴與牙齦紫質單胞菌（尸· ⑷的離胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (ii) 與牙齦紫質單胞菌（R 的精胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (iii) 與牙齦紫質單胞菌（P. g/ng/vdi·*?)之HagA黏 連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 如用於此之一肽或多肽的一“同源物”，係指當藉由一 種BLAST演算法進行比較時，一肽或多肽所具有的一胺基 酸序列係與首述肽或多肽的胺基酸序列具同源性或與其同 源，或具有一致性，較佳至少90%的序列一致性，更佳至 少95%及甚至更佳至少98%的序列一致性，其中該演算法的 參數之選擇，係使得在個別的參考序列全長之個別序列之 間獲致最多的相符配對。序列一致性係指所比較之二個序 列的胺基酸之間完全相符。該同源物可衍生自牙齦紫質單 胞菌（P. 的離胺酸-X-蛋白酶或精胺酸-X-蛋白酶 之一種天然存在的變異體或分離物。任擇地，其可為來自 牙齦紫質單胞菌（P. g/wg/vd⑷的離胺酸-X-蛋白酶或精胺酸 -X-蛋白酶之一種肽或多肽的“保留性取代”變異體，其中已 改變一或多個胺基酸殘基及未更改該肽或.多肽的整體構形 39 201138813 與功能，包括但絕非限於以一性質相近者置換一胺基酸。 性質相近的胺基酸係技藝中眾所周知。例如，可互換的極 性/親水性胺基酸包括天冬醯胺酸、麩醯胺酸、絲胺酸、半 胱胺酸、蘇胺酸、離胺酸、精胺酸、組胺酸、天冬胺酸及 楚胺酸；可互換的非極性/疏水性胺基酸包括甘胺酸、丙胺 酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、酪胺酸、苯丙 胺酸、色胺酸及甲硫胺酸；可互換的酸性胺基酸包括天冬 胺酸及麩胺酸、及可互換的鹼性胺基酸包括組胺酸、離胺 酸及精胺酸。該等保留性取代變異體所具有的胺基酸變更較 佳少於20個，更佳少於15個，更佳少於1〇個及最佳少於5個。 可遵循說明書在此之教導，尤其有關於例示用於預測 出現在牙齦紫質單胞菌（尸· 上之供離胺酸-X-蛋白 酶所用之催化性位址的三維構形之方法之第7圖與第9例， 而'則疋牙齦紫質單胞菌（尸· 騰蛋白酶樣酵素中之 界定該酵素中用於切開肽鍵的一位址之一區域，該胰蛋白 酶樣酵素尤其是一種離胺酸-X-蛋白酶(Kgp)或精胺酸_χ_蛋 白酶(RgpA)。第10例提供用於精胺酸-X-蛋白酶的三維構形 模式化之方法論。 在特定的實施例中’該嵌合或融合蛋白或其第一或第 一肽組分可自一擬肽形成。擬肽係模擬一特定肽的一或多 種特性例如構形之一分子，及其係由胺基酸殘基所組成， 其十的一些胺基酸殘基可能並非天然存在者。 在辨識該催化性位址的免疫原區之後，本案發明者已 剛定可引起荷爾蒙反應之各種肽免疫原的序列。尤其，侧 40 201138813 臨或以其他方式界定該催化性位址之‘六’個區域係界定如 下：KAS1/RAS 卜 KAS2/RAS2、KAS3/RAS3、KAS4/ RAS4、 KAS5/RAS5及KAS6(見第1表）。在獲得該資訊後，本案發 明者已可查詢蛋白序列資料庫，以判定與側臨一催化性位 址的區域及因此代表牙齦紫質單胞菌上所發 現的免疫原性抗原決定基之胺基酸序列具同源性之肽。藉 由下列結構式辨識該等肽的序列： 第1表·側臨Kgp與Rgp A的活性位址之序列 區域 Kgp離胺酸-X (依據序列辨識 土號62之編號） Kgp離胺酸-X 共有序列 RgpA精胺酸-X(依 據序列辨識編號61 之編號） RgpA精胺酸-X 共有序列 PAS1K/ PAS1R PAS1K (432-453) LNTGVSFANYTA HGSETAWADP(序 列辨識編號：30) PAS1R (426-446) FNGGISLANYTG HGSETAWGT (序列辨識編號：34) KAS1/ RAS1 KAS1 (432-454) LNTGV[G/S]FANY TAHGSET[S/A]WA DP[S/L] (序列辨識編號：27) RAS1 (426-448) FNGGISL[V/A]NY TGHGSETAWGTS Η(序列辨識編號： 31) KAS2/ RAS2 KAS2 (433-468) NTGV[G/S]FANYT AHGSET[S/A]WA DP[S/L][L/V]T[A/T ][T/S]Q[V/L]KALT NK[D/N]K(序列辨 識編號：28) RAS2 (427-462) NGGISL[V/A]NYT GHGSETAWGTSH FGTTHVKQLTNS NQ(序列辨識編 號=32) KAS3/ RAS3 KAS3 (436-455) V[G/S]FANYTAHG SET[S/A]WADP[S/ L][L/V] (序列辨識編號：29) RAS3 (430-449) ISL[V/A]NYTGHG SETAWGTSHF (序列辨識編號：33) KAS4/ RAS4 KAS4 (388-395) D[S/Y][Y/S]WN[P/ S][K/Q][I/V] (序列辨識編號：64) RAS4 (379-386) EGGPSADN(序列 辨識編號：67) KAS5/ RAS5 KAS5 (510-516) NSYWGED (序列辨識編號：65) RAS5 (508-514) [N/D]Q[S/Y]WA[S/ P]P(序列辨識編 號：68) KAS6 KAS6 (570-580) IGN[V/I]THIGAHY (序列辨識編號：66) 41 201138813 本案發明者發現包括該等肽之嵌合蛋白具有數種效 用。例如，如在此所述’其中—些產生具高度保護性之荷 爾蒙反應，而可用於治療或預防在慢性牙周炎中所觀察到 的骨質流失。在賴分析巾亦可使㈣料，其中其等可 檢測或監測-個體血清中的特性，藉此顯示該個體是否受 _染’若受_㈣是以要治療，及若接料療則所 提供的該等治療是否有效。 將瞭解在牙齦紫質單胞菌(P細―⑻胰蛋白酶樣酵 素中’位於離胺酸或精胺酸咐端之用於界定該酵素中用於 切開肽鍵的-位址之-區域’並未包含離胺酸X蛋白酶或 精胺酸-X-蛋白酶的完整序列。 如用於此之“異源蛋白，，或“嵌合或融合蛋白，，一詞係用 於才曰-蛋白’其係、由衍生自不同來源之胺基酸的功能單元、 域、序列或區所組成’或錢自相同來源及經組合所具有的 -組織係與該單元、域、序列或區域自其所衍生或相關之一 分子中所觀察到者不同。本發明的嵌合或融合蛋白之共同 特性，係在於其等所含有的至少_肽係具有與牙齦紫質單 胞菌（P· g/ng/vd⑷胰蛋白酶樣酵素用於界定用於切開肽鍵 的一位址之一序列相同或具同源性之一胺基酸序列。 在一個較佳實施例中，其中第一肽包含來自Kgp[432_ 468]區之一肽，其較佳為⑴包含選自vSFANYT與VGFAN YT的一序列及更佳選自GVSFANYT、GVGFANYT、 VSFANYTA及VGFANYTA的一序列之一肽；或(ii)包含選自 ETAWAD、ETSWAD、TAWADP及TSWADP的一序列及較佳 42 201138813 選自 SETAWAD、SETSWAD、ETAWADP、ETSWADP、 TAWADPL及TSWADPL的一序列及更佳選自GSETAWAD、 GSETSWAD、SETAWADP、SETSWADP、ETAWADPL、 ETSWADPL、TAWADPLL及TSWADPLL的一序歹丨J 之一肽。 該肽更佳選自示於第1表中之KAS1 [432-454]、KAS2[433-468]及KAS3[436-455]肽。任擇地，第一肽可為PAS1K[432-453]肽，亦稱作PAS1(K48)，如第PCT/AU98/00311號國際專 利申請案(WO98/049192)所揭露。對應於該等肽的序列識別 號係示於第3表。 同樣地，在另一個較佳的實施例中，其中第一肽包含來 自RgpA[426-462]區之一肽，該肽較佳選自示於第1表中之 RAS1 [426-448]、RAS2[427-462]及RAS3[430-449]肽。任擇 地，第一肽可為PASlR[426-446]肽，亦稱作PAS1(R45)，如第 PCT/AU98/00311號國際專利申請案(WO98/049192)所揭露。 在本發明的嵌合或融合蛋白中，第二肽可為來自一種 牙齦紫質單胞菌（P.giTig/va/b)胰蛋白酶樣酵素諸如離胺酸 -X-蛋白酶(KgP)或精胺酸-X-蛋白酶(Rgp A)或HagA的黏連 蛋白域之一肽（見第2表）。該等域有時亦稱作血球凝集素。 在離胺酸-X-蛋白酶中，較佳的域係如第2表中所示之 ΚΑΙ、KA2、KA3、KA4、KA5。在精胺酸-X-蛋白酶中， 較佳的域係如第2表中所示之RA1、RA2、RA3及RA4。在 HagA中’較佳的域為HagAl、HagAl*及HagAl**。 43 201138813 第2表· Kgp與RgpA蛋白酶之黏連蛋白域 A1 sAI LA1 A2 A3 A4 A5 Kgp離胺酸 -X蛋白酶 序列辨識 編號62 KA 1(738-1099) 序列辨識編 號：35 KsA 1(759 -989) 序列辨識 編號：36 KLA 1(751 -1056) 序列辨識 編號：37 KA2(1157 -1275) 序列辨識 編號：40 KA3(I292 -1424) 序列辨識 編號：41 KA4(1427 -1546) 序列辨識 編號：42 ΚΑ5(1548 -1732) 序列辨識 編號：43 RgpA精胺 酸-X蛋白 酶序列辨 識編號61 RA 1(720-1081) 序列辨識編 號：38 RsA 1(831-971) 序列辨識 編號：39 RA2(1139- 1257) 序列辨識 編號：44 RA3(1274- 1404) 序列辨識 編號：45 RA4(1432 -1706) 序列辨識 編號：46 HagA序列 辨識編號 63 HagA 1(26-3 51) (序列辨識 編號：80), HagA 1 *(36 6-625) (序列辨識 編號：81)， HagAl **(8 20-1077)(序 列辨識編 號：82)或 HagAl **(1 272-1529)( 序列辨識編 號：82) 除了增進對於本發明的一肽諸如KAS1、KAS2、 KAS3、KAS4、KAS5及KAS6或者當在一種嵌合或融合蛋 白中包括該月大時之RAS1、RAS2與RAS3、RAS4與RAS5之 荷爾蒙反應之外，該黏連蛋白域亦含有免疫性抗原決定 基，因此導致產生多重特異性而引發一種保護性免疫原性 反應。當以本發明的嵌合或融合蛋白形式提供時，有關黏 連蛋白域的免疫性抗原決定基係保留趨近牙齦紫質單胞菌 (/>· ⑷胰蛋白酶樣酵素中的一形式之發現，係未預 期到的。 將瞭解在本發明的該等實施例中，該嵌合或融合蛋白 可含有選自 KAS1/RAS1、KAS2/RAS2、KAS3/RAS3、KAS4/ RAS4、KAS5/RAS5及KAS6/RAS6之任一或多種肽以及一種 44 201138813 牙齦紫質單胞菌（Ρ· 胰蛋白酶樣酵素的任一或多 種黏連蛋白域，尤其具有任一或多種的離胺酸X蛋白酶黏 連蛋白域(ΚΑΙ、KA2、KA3、KA4及KA5)或精胺酸-X-蛋 白酶黏連蛋白域（RA1、RA2、RA3及RA4)或HagA域 HagAl、HagAl*及HagAl**。 亦將瞭解該黏連蛋白域並非必定如一種牙齦紫質單胞 菌（尸· 胰蛋白酶樣酵素中所觀察到的一個完整 域。例如該黏連蛋白域可為該域的一片段；尤其，較佳的 片段係離胺酸-X-蛋白酶A1域的KsAl與KLA1域片段（見第2 表）。當該域係一黏連蛋白域的一片段時，其一般含有一或 多種黏連蛋白域特異性抗原決定基。 對應於黏連蛋白相關肽的序列識別號，係示於第3表。 在一實施例中，第二肽或多肽係包括序列辨識編號：69 至79中之一或多者或83至85中之一或多者所示之一序列。 本發明的嵌合或融合蛋白亦可包括選自離胺酸-X-蛋 白酶的Kgp[432-468]區之一或多種附加的肽及/或選自精胺 酸-X-蛋白酶的RgpA[426-462]區之一或多種附加的肽。 在本發明的較佳實施例中，該嵌合或融合蛋白包括 KAS1、KAS2、KAS3、KAS4、KAS5及KAS6中之一或多者 或RAS1、RAS2、RAS3、RAS4及RAS5中之一或多者以及 KsAl 或 KLA1。 因此在特定的實施例中，該嵌合或融合蛋白可包括至 少另一種肽，其中該另一種肽包括： ⑴與序列辨識編號：1中所示序列相同或同源之一序列 45 201138813 的部分或全部；或 (ii) 與序列辨識編號：2中所示序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (iii) 與牙酿紫質單胞菌（P. ⑷的離胺酸-X-蛋白 酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全 部；或 (iv) 與牙酿紫質單胞菌（R g/ng/va/k)的精胺酸-X-蛋白 酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全 部；或 (v) 與牙齦紫質單胞菌（P. 之HagA黏連蛋白 域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 可包括在此述之一種嵌合或融合蛋白中的域、單元、 序列或區之其他實例，係包括用於與受體或配體結合之域 諸如Fc結合區或Fc受體、用於增進半衰期之域諸如白蛋白或 用於促進該嵌合或融合蛋白的表現作用或純化作用之域。 就又一方面而言，本發明提供用於誘發對於牙齦紫質 單胞菌（P. ⑷的免疫反應之一肽，其包括序列辨識 編號：17、18、25及26中之一者所示之序列。在一實施例 中，該肽具有與序列辨識編號：17、18、25及26中之一者 同源之一序列。該肽的長度可為5至40個胺基酸。 就又一方面而言，本發明提供一核酸，其所編碼之一 肽係具有序列辨識編號：17、18、25及26中之一者所示的 一序列。 就又一方面而言，本發明提供具有序列辨識編號：17、 46 201138813 18、25及26中之一者所示的—序列之一肽， 肽具有序列辨識編號：Π、18、25及26中之 或所編碼之一 一者所示的一 序列之-㈣’在製造用於誘發對於牙酿紫質單胞菌（尸· gmgivd⑷的免疫反應之一種嵌合或融合蛋白之用途。 就又一方面而言，本發明提供具有序列辨識編號：17 18、25及26中之一者所示的 肽具有序列辨識編號：17、 —序列之一肽’或所編碼之一 18、25及26中之—者所示的一 序列之-核酸，在誘發對於牙齦紫f單胞神·▲) 的免疫反應之㈣。在-實施财，紐係與第二狀同時 或依序投予，該第二肽包括： ⑴與牙齦i質單胞邮滅_離胺酸X蛋白酶 之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部；或 (ii)與牙齦备、貪單胞菌（p· g/ng/va/⑷的精胺酸_χ蛋白 酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全 部；或 (出)與牙銀备、彦單胞菌（户.0/^_1；<2沿)之也8八黏連蛋白 域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 47 201138813 第3表
序列辨 識編號 胺基酸序列 片段 1 LNTGV[G/S]FANYTAHGSET[S/A]WADP[S/L][L/V]T[A Kgp[432- /T][T/S]Q[V/L]KALTNK[D/N]K 468] 2 FNGGISL[V/A]NYTGHGSETAWGTSHFGTTHVKQLT RgpA[426- NSNQ 462] 3 VSFANYT 4 VGFANYT 5 GVSFANYT 6 GVGFANYT 7 VSFANYTA 8 VGFANYTA 9 ETAWAD 10 ETSWAD 11 TAWADP 12 TSWADP 13 SETAWAD 14 SETSWAD 15 ETAWADP 16 ETSWADP 17 TAWADPL 18 TSWADPL 19 GSETAWAD 20 GSETSWAD 21 SETAWADP 22 SETSWADP 23 ETAWADPL 24 ETSWADPL 25 TAWADPLL 26 TSWADPLL 27 LNTGV[G/S]FANYTAHGSET[S/A]WADP[S/L] KAS1 28 NTGV[G/S]FANYTAHGSET[S/A]WADP[S/L][L/V]T[A/ T][T/S]Q[V/L]KALTNK[D/N]K KAS2 29 V[G/S]FANYTAHGSET[S/A]WADP[S/L][L/V] KAS3 30 LNTGVSFANYTAHGSETAWADP PAS IK 31 FNGGISL[V/A]NYTGHGSETAWGTSH RAS1 32 NGGISL[V/A]NYTGHGSETAWGTSHFGTTHVKQLTN SNQ RAS2 33 ISL[V/A]NYTGHGSETAWGTSHF RAS3 34 FNGGISLANYTGHGSETAWGT PAS1R 48 201138813 35 ANEAKVVLAADNVWGDNTGYQFLLDADHNTFGSVI PATGPLFTGTASSNLYSANFEYLIPANADPVVTTQNII VTGQGEVVIPGGVYDYCITNPEPASGKMWIAGDGG NQPARYDDFTFEAGKKYTFTMRRAGMGDGTDMEV EDDSPASYTYTVYRDGTKIKEGLTATTFEEDGVAAGN HEYCVEVKYTAGVSPKVCKDVTVEGSNEFAPVQNLT GSSVGQKVTLKWDAPNGTPNPNPNPNPNPGTTLSES FENGIPASWKTIDADGDGHGWKPGNAPGIAGYNSN GCVYSESFGLGGIGVLTPDNYLITPALDLPNGGKLTF WVCAQDANYASEHYAVYASSTGNDASNFTNALLEE TITA KA1 36 FLLDADHNTFGSVIPATGPLFTGTASSNLYSANFEYLI PANADPVVTTQNIIVTGQGEVVIPGGVYDYCITNPEP ASGKMWIAGDGGNQPARYDDFTFEAGKKYTFTMRR AGMGDGTDMEVEDDSPASYTYTVYRDGTKIKEGLT ATTFEEDGVAAGNHEYCVEVKYTAGVSPKVCKDVT VEGSNEFAPVQNLTGSSVGQKVTLKWDAPNGTPNP NPNPNPNPGTTLSESF KsAl 37 WGDNTGYQFLLDADHNTFGSVIPATGPLFTGTASSNL YSANFEYLIPANADPVVTTQNIIVTGQGEVVIPGGVY DYCITNPEPASGKMWIAGDGGNQPARYDDFTFEAGK KYTFTMRRAGMGDGTDMEVEDDSPASYTYTVYRD GTKIKEGLTATTFEEDGVAAGNHEYCVEVKYTAGVS PKVCKDVTVEGSNEFAPVQNLTGSSVGQKVTLKWD APNGTPNPNPNPNPNPGTTLSESFENGIPASWKTIDA DGDGHGWKPGNAPGIAGYNSNGCVYSESFGLGGIG VLTPDNYLITPALDLPNGG KLAl 38 SGQAEIVLEAHDVWNDGSGYQILLDADHDQYGQVI PSDTHTLWPNCSVPANLFAPFEYTVPENADPSCSPTN MIMDGTASVNIPAGTYDFAIAAPQANAKIWIAGQGPT KEDDYVFEAGKKYHFLMKKMGSGDGTELTISEGGG SDYTYTVYRDGTKIKEGLTATTFEEDGVATGNHEYC VEVKYTAGVSPKVCKDVTVEGSNEFAPVQNLTGSAV GQKVTLKWDAPNGTPNPNPNPNPNPNPGTTTLSESF ENGIPASWKTIDADGDGHGWKPGNAPGIAGYNSNG CVYSESFGLGGIGVLTPDNYLITPALDLPNGGKLTFW VCAQDANYASEHYAVYASSTGNDASNFTNALLEETITA RA1 39 DDYVFEAGKKYHFLMKKMGSGDGTELTISEGGGSD YTYTVYRDGTKIKEGLTATTFEEDGVATGNHEYCVE VKYTAGVSPKVCKDVTVEGSNEFAPVQNLTGSAVGQ KVTLKWDAPNGTPNPNPNPNPNPNPGTTTLSESF RsAl 40 ADFTETFESSTHGEAPAEWTTIDADGDGQGWLCLSS GQLDWLTAHGGSNVVSSFSWNGMALNPDNYLISKD VTGATKVKYYYAVNDGFPGDHYAVMISKTGTNAGD FTVVFEETPNGIN KA2 41 PQSVWIERTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYILLDDI QFTMGGSPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEED GVATGNHEYCVEVKYTAGVSPKKCVNVTVNSTQFN PVQNLTAEQAPNSMDAILKWNAPAS KA3 49 201138813 42 AEVLNEDFENGIPASWKTIDADGDGNNWTTTPPPGG SSFAGHNSAICVSSASYINFEGPQNPDNYLVTPELSLP GGGTLTFWVCAQDANYASEHYAVYASSTGNDASNF ANALLEEVLTA KA4 43 TVVTAPEAIRGTRAQGTWYQKTVQLPAGTKYVAFR HFGCTDFFWINLDDVVITSGNAPSYTYTIYRNNTQIA SGVTETTYRDPDLATGFYTYGVKVVYPNGESAIETAT LNITSLADVTAQKPYTLTVVGKTITVTCQGEAMIYD MNGRRLAAGRNTVVYTAQGGHYAVMVVVDGKSYV EKLAVK KA5 44 ADFTETFESSTHGEAPAEWTTIDADGDGQGWLCLSS GQLDWLTAHGGTNVVSSFSWNGMALNPDNYLISKD VTGATKVKYYYAVNDGFPGDHYAVMISKTGTNAGD FTVVFEETPNGIN RA2 45 PQSVWrERTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYILLDDI QFTMGGSPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEED GVATGNHEYCVEVKYTAGVSPKKCVNVTVNSTQFN PVKNLKAQPDGGDVVLKWEAPSA RA3 46 ANEAKVVLAADNVWGDNTGYQFLLDADHNTFGSVI PATGPLFTGTASSDLYSANFESLIPANADPVVTTQNIIV TGQGEVVIPGGVYDYCITNPEPASGKMWIAGDGGN QPARYDDFTFEAGKKYTFTMRRAGMGDGTDMEVE DDSPASYTYTVYRDGTKIKEGLTETTYRDAGMSAQS HEYCVEVKYTAGVSPKVCVDYIPDGVADVTAQKPY TLTVVGKTITVTCQGEAMIYDMNGRRLAAGRNTVV YTAQGGYYAVMVVVDGKSYVEKLAIK RA4
序列辨 識編號 核苷酸序列 47 GACCATGGCTCATCACCATCACCATCACAATACCGG AGTCAGCTTTGCA KAS2-FOR 48 GACTCGAGTTATTTGTCCTTATTAGTGAGTGCTTTC KAS2-REV 49 GACCATGGCTTGGGGAGACAATACGGGTTAC KLA1-FOR 50 GACTCGAGACCTCCGTTAGGCAAATCC KLA1-REV 51 CCGTATTGTCTCCCCATTTGTCCTTATTAGTGAGTGC KAS2-KLA TTTC 1-REV 52 CACTAATAAGGACAAATGGGGAGACAATACGGGTT KAS2-KLA AC 1-FOR 53 CATGGATCTGAGACCGCATGGGCTGATCCACTTTTC KASl-KsAl TTGTTGGATGCCGAT -FORI 54 CCATGGCTTTGAATACCGGAGTCAGCTTTGCAAAC KASl-KsAl TATACAGCGCATGGATCTGAGACCGCA -FOR2 55 CTCGAGGAATGATTCGGAAAGTGTT KASl-KsAl -REV 56 CCATGGCTGATTATAGCTGGAATTCCCAGGTAGTCA 多重FORI 50 201138813
GCTTTGCAAACTATACA 57 CTTTGCAAACTATACAGCGCATGGATCTGAGACCG CATGGGCTGATCCACTT 多重FOR2 58 ATGGGCTGATCCACTTCTGAATTCTTATTGGGGCGA GATCGGCAATATTACC 多重FOR3 59 GATCGGCAATATTACCCATATTGGTGCTCATTACGCT TGGGGAGACAATACG 多重FOR4 60 CTCGAGACCTCCGTTAGGCAAATCCAATGCCGGTG TTATCAGATAGTTGTCA 多重REV
序列辨 識編號 胺基酸序列 全長 61 MKNLNKFVSIALCSSLLGGMAFAQQTELGRNPNVRL LESTQQSVTKVQFRMDNLKFTEVQTPKGIGQVPTYT EGVNLSEKGMPTLPILSRSLAVSDTREMKVEVVSSKF IEKKNVLIAPSKGMIMRNEDPKKIPYVYGKTYSQNK FFPGEIATLDDPFILRDVRGQVVNFAPLQYNPVTKTL RIYTEITVAVSETSEQGKNILNKKGTFAGFEDTYKRM FMNYEPGRYTPVEEKQNGRMIVIVAKKYEGDIKDFV DWKNQRGLRTEVKVAEDIASPVTANAIQQFVKQEYE KEGNDLTYVLLIGDHKDIPAKITPGIKSDQVYGQIVG NDHYNEVFIGRFSCESKEDLKTQIDRTIHYERNITTED KWLGQALCIASAEGGPSADNGESDIQHENVIANLLT QYGYTKIIKCYDPGVTPKNIIDAFNGGISLANYTGHG SETAWGTSHFGTTHVKQLTNSNQLPFIFDVACVNGDF LFSMPCFAEALMRAQKDGKPTGTVAIIASTINQSWAS PMRGQDEMNEILCEKHPNNIKRTFGGVTMNGMFAM VEKYKKDGEKMLDTWTVFGDPSLLVRTLVPTKMQV TAPAQINLTDASVNVSCDYNGAIATISANGKMFGSAV VENGTATINLTGLTNESTLTLTVVGYNKETVIKTINTN GEPNPYQPVSNLTATTQGQKVTLKWDAPSTKTNATT NTARSVDGIRELVLLSVSDAPELLRSGQAEIVLEAHD VWNDGSGYQILLDADHDQYGQVIPSDTHTLWPNCS VPANLFAPFEYTVPENADPSCSPTNMIMDGTASVNIP AGTYDFAIAAPQANAKIWIAGQGPTKEDDYVFEAGK KYHFLMKKMGSGDGTELTISEGGGSDYTYTVYRDG TKIKEGLTATTFEEDGVATGNHEYCVEVKYTAGVSPK VCKDVTVEGSNEFAPVQNLTGSAVGQKVTLKWDAP NGTPNPNPNPNPNPNPGTTTLSESFENGIPASWKTIDA DGDGHGWKPGNAPGIAGYNSNGCVYSESFGLGGIG VLTPDNYLITPALDLPNGGKLTFWVCAQDANYASEH YAVYASSTGNDASNFTNALLEETITAKGVRSPEAMR GRIQGTWRQKTVDLPAGTKYVAFRHFQSTDMFYIDL DEVEIKANGKRADFTETFESSTHGEAPAEWTTIDAD GDGQGWLCLSSGQLDWLTAHGGTNVVSSFSWNGM ALNPDNYLISKDVTGATKVKYYYAVNDGFPGDHYAV MISKTGTNAGDFTVVFEETPNGINKGGARFGLSTEA DGAKPQSVWIERTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYI RgpA 51 201138813 LLDDIQFTMGGSPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETT FEEDGVATGNHEYCVEVKYTAGVSPKKCVNVTVNS TQFNPVKNLKAQPDGGDVVLKWEAPSAKKTEGSRE VKRIGDGLFVTIEPANDVRANEAKVVLAADNVWGD NTGYQFLLDADHNTFGSVIPATGPLFTGTASSDLYSA NFESLIPANADPVVTTQNIIVTGQGEVVIPGGVYDYCI TNPEPASGKMWIAGDGGNQPARYDDFTFEAGKKYT FTMRRAGMGDGTDMEVEDDSPASYTYTVYRDGTKI KEGLTETTYRDAGMSAQSHEYCVEVKYTAGVSPKV CVDYIPDGVADVTAQKPYTLTVVGKTITVTCQGEAM IYDMNGRRLAAGRNTVVYTAQGGYYAVMVVVDGK SYVEKLA1K 62 MRKLLLLIAASLLGVGLYAQSAKIKLDAPTTRTTCTN NSFKQFDASFSFNEVELTKVETKGGTFASVSIPGAFPT GEVGSPEVPAVRKLIAVPVGATPVVRVKSFTEQVYSL NQYGSEKLMPHQPSMSKSDDPEKVPFVYNAAAYAR KGFVGQELTQVEMLGTMRGVRIAALTINPVQYDVVA NQLKVRNNIEIEVSFQGADEVATQRLYDASFSPYFET AYKQLFNRDVYTDHGDLYNTPVRMLVVAGAKFKEA LKPWLTWKAQKGFYLDVHYTDEAEVGTTNASIKAFI HKKYNDGLAASAAPVFLALVGDTDVISGEKGKKTK KVTDLYYSAVDGDYFPEMYTFRMSASSPEELTNIIDK VLM YEKATMPDKS YLEKV LLIAG AD YS WNSQ VGQP TIKYGMQYYYNQEHGYTDVYNYLKAPYTGCYSHL NTGVSFANYTAHGSETAWADPLLTTSQLKALTNKDK YFLAIGNCCITAQFDYVQPCFGEVITRVKEKGAYAYI GSSPNSYWGEDYYWSVGANAVFGVQPTFEGTSMGS YDATFLEDSYNTVNSIMWAGNLAATHAGNIGNITHI GAHYYWEAYHVLGDGSVMPYRAMPKTNTYTLPAS LPQNQASYSIQASAGSYVAISKDGVLYGTGVANASG VATVSMTKQITENGNYDVVITRSNYLPVIKQIQVGEP SPYQPVSNLTATTQGQKVTLKWEAPSAKKAEGSREV KRIGDGLFVTIEPANDVRANEAKVVLAADNVWGDN TGYQFLLDADHNTFGSV1PATGPLFTGTASSNLYSAN FEYLIPANADPVVTTQNI1VTGQGEVVIPGGVYDYCIT NPEPASGKMWIAGDGGNQPARYDDFTFEAGKKYTF TMRRAGMGDGTDMEVEDDSPASYTYTVYRDGTKIK EGLTATTFEEDGVAAGNHEYCVEVKYTAGVSPKVCK DVTVEGSNEFAPVQNLTGSSVGQKVTLKWDAPNGT PNPNPNPNPNPGTTLSESFENGIPASWKT1DADGDGH GWKPGNAPGIAGYNSNGCVYSESFGLGGIGVLTPDN YLITPALDLPNGGKLTFWVCAQDANYASEHYAVYAS STGNDASNFTNALLEETITAKGVRSPKAIRGRIQGTW RQKTVDLPAGTKYVAFRHFQSTDMFYIDLDEVEIKA NGKRADFTETFESSTHGEAPAEWTTIDADGDGQGW LCLSSGQLDWLTAHGGSNVVSSFSWNGMALNPDNY LISKDVTGATKVKYYYAVNDGFPGDHYAVMISKTGT NAGDFTVVFEETPNGINKGGARFGLSTEANGAKPQS VWffiRTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYILLDDIQFT MGGSPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEEDGVAT GNHEYCVEVKYTAGVSPKKCVNVTVNSTQFNPVQN Kgp 52 201138813
LTAEQAPNSMDAILKWNAPASKRAEVLNEDFENGIP ASWKTIDADGDGNNWTTTPPPGGSSFAGHNSAICVS SASYINFEGPQNPDNYLVTPELSLPGGGTLTFWVCAQ DANYASEHYAVYASSTGNDASNFANALLEEVLTAKT VVTAPEAIRGTRAQGTWYQKTVQLPAGTKYVAFRHF GCTDFFWINLDDVVITSGNAPSYTYTIYRNNTQIASG VTETTYRDPDLATGFYTYGVKVVYPNGESAIETATL NITSLADVTAQKPYTLTVVGKTITVTCQGEAMIYDM NGRRLAAGRNTVVYTAQGGHYAVMVVVDGKSYVE KLAVK 63 MRKLNSLFSLAVLLSLLCWGQTAAAQGGPKTAPSVT HQAVQKGIRTSKAKDLRDPIPAGMARIILEAHDVWE DGTGYQMLWDADHNQYGASIPEESFWFANGTIPAGL YDPFEYKVPVNADASFSPTNFVLDGTASADIPAGTY DYVIINPNPGIIYIVGEGVSKGNDYVVEAGKTYHFTV QRQGPGDAASVVVTGEGGNEFAPVQNLQWSVSGQT VTLTWQAPASDKRTYVLNESFDTQTLPNGWTMIDA DGDGHNWLSTINVYNTATHTGDGAMFSKSWTASSG AKIDLSPDNYLVTPKFTVPENGKLSYWVSSQEPWTN EHYGVFLSTTGNEAANFTIKLLEETLGSGKPAPMNLV KSEGVKAPAPYQERTIDLSAYAGQQVYLAFRHFGCT GIFRLYLDDVAVSGEGSSNDYTYTVYRDNVVIAQNLT ATTFNQENVAPGQYNYCVEVKYTAGVSPKVCKDVT VEGSNEFAPVQNLTGSAVGQKVTLKWDAPNGTPNP NPGTTTLSESFENGIPASWKTIDADGDGNNWTTTPPP GGSSFAGHNSAICVSSASYINFEGPQNPDNYLVTPELS LPNGGTLTFWVCAQDANYASEHYAVYASSTGNDAS NFANALLEEVLTAKTVVTAPEAIRGTRVQGTWYQKT VQLPAGTKYVAFRHFGCTDFFWINLDDVEIKANGKR ADFTETFESSTHGEAPAEWTTIDADGDGQGWLCLSS GQLGWLTAHGGTNVVASFSWNGMALNPDNYLISKD VTGATKVKYYYAVNDGFPGDHYAVMISKTGTNAGD FTVVFEETPNGINKGGARFGLSTEANGAKPQSVWIE RTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYILLDDIQFTMGG SPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEEDGVATGNH EYCVEVKYTAGVSPKECVNVTVDPVQFNPVQNLTGS AVGQKVTLKWDAPNGTPNPNPGTTTLSESFENGIPAS WKTIDADGDGNNWTTTPPPGGTSFAGHNSAICVSSA SYINFEGPQNPDNYLVTPELSLPNGGTLTFWVCAQD ANYASEHYAVYASSTGNDASNFANALLEEVLTAKTV VTAPEAIRGTRVQGTWYQKTVQLPAGTKYVAFRHFG CTDFFWINLDDVEIKANGKRADFTETFESSTHGEAPA EWTTIDADGDGQGWLCLSSGQLDWLTAHGGTNVVA SFSWNGMALNPDNYLISKDVTGATKVKYYYAVNDG FPGDHYAVMISKTGTNAGDFTVVFEETPNGINKGGA RFGLSTEANGAKPQSVWIERTVDLPAGTKYVAFRHY NCSDLNYILLDDIQFTMGGSPTPTDYTYTVYRDGTKI KEGLTETTFEEDGVATGNHEYCVEVKYTAGVSPKEC VNVTVDPVQFNPVQNLTGSAVGQKVTLKWDAPNGT PNPNPGTTTLSESFENGIPASWKTIDADGDGNNWTTT PPPGGTSFAGHNSAICVSSASYINFEGPQNPDNYLVTP HagA 53 201138813
ELSLPNGGTLTFWVCAQDANYASEHYAVYASSTGND ASNFANALLEEVLTAKTVVTAPEAIRGTRVQGTWYQ KTVQLPAGTKYVAFRHFGCTDFFWINLDDVEIKANG KRADFTETFESSTHGEAPAEWTTIDADGDGQGWLCL SSGQLGWLTAHGGTNVVASFSWNGMALNPDNYLIS KDVTGATKVKYYYAVNDGFPGDHYAVMISKTGTNA GDFTVVFEETPNGINKGGARFGLSTEANGAKPQSVW 正 RTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYILLDDIQFTMG GSPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEEDGVATGN HEYCVEVKYTAGVSPKECVNVTINPTQFNPVQNLTA EQAPNSMDAILKWNAPASKRAEVLNEDFENGIPASW KTIDADGDGNNWTTTPPPGGSSFAGHNSAICVSSASY INFEGPQNPDNYLVTPELSLPGGGTLTFWVCAQDAN YASEHYAVYASSTGNDASNFANALLEEVLTAKTVVT APEAIRGTRVQGTWYQKTVQLPAGTKYVAFRHFGCT DFFWINLDDVVITSGNAPSYTYTIYRNNTQIASGVTE TTYRDPDLATGFYTYGVKVVYPNGESAIETATLNITS LADVTAQKPYTLTVVGKTITVTCQGEAMIYDMNGR RLAAGRNTVVYTAQGGHYAVMVVVDGKSYVEKLA VK 序列辨 識編號 胺基酸序列 片段 64 D[S/Y] [ Y/S] WN[P/S] [K/Q] [I/V] KAS4 65 NSYWGED KAS5 66 IGN[V/I]THIGAHY KAS6 67 EGGPSADN RAS4 68 [N/D]Q[S/Y]WA[S/P]P RAS5 69 PVSNLTATTQGQKVTLKWDAPST ABM1- RgpAcat 70 PVSNLTATTQGQKVTLKWEAPSA ABM1- Kgpcat 71 PVQNLTGSSVGQKVTLKWDAPST ABMl- KgpAl 72 PVQNLTGSAVGQKVTLKWDAPNG ABM1-RgpAl 與 RgpAA3 73 PVKNLKAQPDGGDVVLKWEAPSA ABMl- HagAAl*/** 74 PVQNLTAEQAPNSMDAILKWNAP ABM1-KgpA3 與 HagAA3 75 PVQNLTQWSVSGQTVTLTWQAPAS ABM2- HagAAl 76 YTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEEDGVA ABM2- ABM2- 54 201138813
RgpAA4 77 YTYTVYRDNVVIAQNLTATTFNQENVA ABM2- HagAl* 78 YTYTVYRDGTKIKEGLTA/ETTFEEDGVA ABM2所有其 他黏連蛋白 79 PNGTP(NP) n6GTT(T)LSESF ABM3-所有 黏連蛋白 80 GGPKTAPSVTHQAVQKGIRTSKAKDLRDPIPAGMARI ILEAHDVWEDGTGYQMLWDADHNQYGASIPEESFW FANGTIPAGLYDPFEYKVPVNADASFSPTNFVLDGTA SADIPAGTYDYVIINPNPGIIYIVGEGVSKGNDYVVEA GKTYHFTVQRQGPGDAASVVVTGEGGNEFAPVQNL QWSVSGQTVTLTWQAPASDKRTYVLNESFDTQTLPN GWTMIDADGDGHNWLSTINVYNTATHTGDGAMFSK SWTASSGAKIDLSPDNYLVTPKFTVPENGKLSYWVS SQEPWTNEHYGVFLSTTGNEAANFTIKLLEETLGSG HagAl [26-351] 81 APAPYQERTIDLSAYAGQQVYLAFRHFGCTGIFRLYL DDVAVSGEGSSNDYTYTVYRDNVVIAQNLTATTFNQ ENVAPGQYNYCVEVKYTAGVSPKVCKDVTVEGSNE FAPVQNLTGSAVGQKVTLKWDAPNGTPNPNPGTTTL SESFENGIPASWKTIDADGDGNNWTTTPPPGGSSFAG HNSAICVSSASYINFEGPQNPDNYLVTPELSLPNGGTL TFWVCAQDANYASEHYAVYASSTGNDASNFANALL EEVLTA HagAl* [366-625] 82 PQSVWIERTVDLPAGTKYVAFRHYNCSDLNYILLDDI QFTMGGSPTPTDYTYTVYRDGTKIKEGLTETTFEED GVATGNHEYCVEVKYTAGVSPKECVNVTVDPVQFN PVQNLTGSAVGQKVTLKWDAPNGTPNPNPGTTTLSE SFENGIPASWKTIDADGDGNNWTTTPPPGGTSFAGH NSAICVSSASYINFEGPQNPDNYLVTPELSLPNGGTLT FWVCAQDANYASEHYAVYASSTGNDASNFANALLE EVLTA HagAl **[8 20-1077]或 HagAl ** [1272-1529] 83 PYQPVSNLTATTQGQ ABM 1 [436 -450] 84 EGLTATTFEEDGVAA ABM2[672 -686] 85 GTPNPNPNPNPNPNPGT ABM3[455 -471] 55 201138813 在本發明的嵌合或融合蛋白中，第一肽的(：端殘基可與 一黏連蛋白域多肽的N端殘基共價連結，或第—肽的N端殘 基可與一黏連蛋白域多肽的C端殘基共價連結。在該配置 中，第一肽係與黏連蛋白域多肽“直接地連結”或“相鄰”。 在其他實施例中，該嵌合或融合蛋白包括用於連結第一 肽與一黏連蛋白域多肽之一連接子。連接子可為可連接一肽 與—多肽之任一連接子，包括胺基酸與非胺基酸連接子。該 連接子較佳為非免疫原性。適宜的連接子之長度可高達15 個胺基酸，雖然較佳少於5個胺基酸。連接子之作用可使得 第—肽與黏連蛋白域多肽所處的空間配置，係比一般在一種 牙齦紫質單胞菌（尸騰蛋白酶樣酵素中所觀察到 者更靠近。任擇地，其可將第一肽與黏連蛋白域多肽隔開。 可藉由重組表現系統(諸如重組DNA技術）或藉由化學 合成作用（諸如固相肽合成作用）’製造本發明的嵌合或融合 蛋白。該等技術係技藝中眾所周知。 該異源或嵌合蛋白係特別有利，因其增進所得的荷爾 蒙反應而優於單獨使用該嵌合或融合蛋白的第一或第二肽 組分所得者。 本案發明者發現包括該等肽之嵌合蛋白具有數種效 用。例如，如在此所述，其中一些產生具高度保護性之荷 爾蒙反應，而可用於治療或預防在慢性牙周炎中所觀察到 的骨質流失。在診斷分析中亦可使用該等肽，其等可檢測 或監測一個體血清中的特性’藉此顯示該個體是否受到感 染’若受到感染則是否需要治療，及若接受治療則所提供 56 201138813
荷爾蒙反應。在特定的實施例中， 的該等治療是否有效。 大—杳仏»
#月包m㈣*·_域染相關聪沾έ士^—\ ' 尔貝平肥_ (尸· 感染 該保護性免疫反應主要是一種 例中，該保護性免疫反應亦包 括一種細胞反應。 本發明亦提供包括如上所概述的一種嵌合或融合蛋白 之組成物。邊組成物通常為抗原性或免疫原性。更詳細 地，本發明提供適用於引發對抗牙齦紫質單胞菌（ρ. gingiva/b)感染的一保護性或治療性免疫反應之一組成 物’其包括該嵌合或融合蛋白，及選擇性地組合一佐劑。 該組成物亦可包括用於調節或增效該免疫反應之另一組 分。在一實施例中，該組成物係一疫苗之形式。 一種較佳的組成物係包括對於牙周病原體牙齦紫質單 胞菌、齒垢密螺旋體（7>epo«ema deni/co/a)及福賽斯坦納菌/(orjyi/z/a)產生一免疫 反應之免疫原。免疫原可為減毒的全細胞疫苗’或一種純 化抗原疫苗，或更佳為一種重組抗原疫苗；其中該組成物 含有對抗該三種牙周病原體中的一或多者之抗原。可形成 與牙齦紫質單胞菌（Ρ· '齒垢密螺旋體（Γ· 心W⑺⑷及福賽斯坦納菌（Γ. /orWi/l⑷感染相關的免疫原 之適宜的肽之其他實例，係示於第0至？表。 57 201138813 第D表 細菌 例示性免疫原 例示性參考文獻~~~~ 牙齦紫質單胞菌 (Porphyromonas gingivcilis) 蛋白酶或其片段 第6,017,532號美國專利(57^ 序列表） 序列表中所列舉之蛋 白酶或其片段 5,475,097(如見序列表） PrtK48 ' PrtR45 ' PrtR44 ' PrtK39 ' PrtK44、PrtR27、 PrtR17、PrtK15及 PrtR15或其片段 PCT/AU96/00673 Agl、Ag2、Ag3及Ag4 或其片段 PCT/AU97/002i2(如見第3 頁 之表） 來自半胱胺酸蛋白酶 與黏連蛋白之肽 PCT/AU98/00311(如見第 1 表） 多肽與其片段 PCT/AU1998/00311 (如見第 1、2或3表及序列表） PrtR-PrtK蛋白酶-黏連 蛋白複合體與其片段 第6,962,706號美國專利(iX 余1表或序列表） r-RgpA44與r- Kgp39及 其片段 PCT/AU00/01588(如見序歹 表） PG32與PG33及其片段 PCT/AU01/00482(如見第 3表 或序列表） 多聚型複合體 PCT/AU2005/001463 多肽與其片段 PCT/AU2007/000890 (如見 第2表） 多肽與其片段 PCT/AU2008/001018 (如見 第4表） 多肽與其片段 PCT/US2004/025778 (如見第 2表或序列表） 黏連蛋白與其片段 US 2005/0288866 (如見第5表） 所岔f、純化或萃取的 細齒叙劑 齒垢密螺旋體 (Treponema denticola) 多肽與其片段 揭露於Veith等人於2009年期 刊 “Biochmica et Biophysica Acta.” 第 1794期第 1421-1432 頁乙文及列於第E表中。 所分離、純化或窣取的 細菌i劑 福赛斯坦納菌 (Tannerella forsythia) 多肽與其片段 揭露於Veith等人於期刊 “Journal of Proteome Research” (2009牟)第 8期第 4279-4292頁乙文+之第1、2 與3表及列於第F表中。 多肽與其片段 Yoo等人於期刊“Microbiol. Lett.”(2007 年)第 275 期第 344-352頁乙文 所分離、純化或萃取的 細菌製劑 PCT/IB2004/003310 58 201138813 第E表 1登錄 1蛋白定義 TDE0017 保留型假設性蛋白 TDE0018 LysM域蛋白 TDE0019 曱酸-四氣葉酸鹽連接酶(fhs) TDE0042 磷酸乙醯轉移酶(pta) TDE0046 亞胺曱基轉移酶-環化去胺酶家族蛋白 TDE0047 丙酸°米α坐綱酶(hutl) TDE0048 假設性蛋白 TDE0051 酒精去氫酶，含鐵 TDE0068 肽酶，M20/M25/M40家族 TDE0102 環核苷酸結合蛋白 TDE0117 脂蛋白，推定性 TDE0139 假設性蛋白 TDE0153 輔酶A二硫化物還原酶，推定性 TDE0167 ABC轉運蛋白，ATP結合蛋白 TDE0182 ABC轉運蛋白，ATP結合蛋白 TDE0186 假設性蛋白 TDE0231 第三型DNA聚合酶，β次單元(dnaN) TDE0240 甘胺酸還原酶複合蛋白GrdC(grdC) TDE0249 核黃氧化還原蛋白，推定性 TDE0251 色胺酸酶(tnaA) TDE0296 亞胺曱基轉移酶，推定性 TDE0300 細胞溶質胺基肽酶家族蛋白 TDE0311 胸苷酸合成酶互補家族蛋白 TDE0313 TrkA域蛋白 TDE0325 假設性蛋白 TDE0337 葡萄糖胺-6-填酸異構酶(nagB) TDE0340 第I類果糖-雙磷酸醛醇縮酶 TDE0351 L-乳酸去氫酶(ldh) TDE0354 一般逆境蛋白14 TDE0386 ABC轉運蛋白，周質受質結合蛋白 TDE0389 (R)-2-羥基戊二醯基-CoA脱水酶，β次單元，推定性 TDE0398 寡肽/二肽ABC轉運蛋白，周質肽結合蛋白 TDE0405 主要外鞘蛋白 59 201138813 TDE0407 TDE0434 TDE0444 TDE0449 TDE0451 TDE0456 TDE0463 TDE0467 TDE0525 TDE0576 TDE0585 TDE0588 TDE0603 TDE0610 TDE0628 TDE0648 TDE0664 TDE0665 TDE0677 TDE0679 TDE0704 TDE0731 TDE0743 TDE0744 TDE0748 TDE0754 TDE0758 TDE0761 TDE0765 TDE0816 TDE0823 TDE0829 TDE0842 TDE0845 TDE0855 麩胺酸合成酶(NADPH)，同質四聚體(gUA) 紅素氧化還原蛋白 麵醯胺酸轉醯胺酶I類域蛋白 鐵蛋白，推定性 精胺酸去亞胺酶(arcA) 吡哆醇生物合成蛋白 嘌呤核苷磷酸化酶(deoD) 假設性蛋白 假設性蛋白 麵胺醯基-tRNA(Gln)轉醯胺酶，A次單元(gatA) 假設性蛋白 組胺酸解氨酶(hutH) 保留型假設性蛋白 3-羥基醯基-CoA去氫酶，推定性 伴護蛋白DnaK(dnaK·) 蛋白麩胺酸甲酯酶(cheB)
OmpA家族蛋白 丙酮酸鐵氧化還原蛋白/黃素氧化還原蛋白氧化還原酶家族蛋白 保留型假設性蛋白 ' 第V類轉胺酶 SPFH域/帶7家族蛋白 假設性蛋白 硫氧化還原蛋白還原酶(trxB) 硫氧化還原蛋白(trxA) 鐵化合物ABC轉運蛋白，周質鐵化合物結合蛋白，推定性 假設性蛋白 鐵化合物ABC轉運蛋白，周質鐵化合物結合蛋白，推定性 蛋白酶複合體關聯多肽(prcA) ^ 轉譯延長因子Tu(tuf) 肽酶，M20/M25/M40家族 (3R)-羥基肉豆蔻醯基-(醯基載體蛋白)脱水酶，推定性 天冬胺醯基胺基肽酶，推定性 胞質絲蛋白A(cfpA) 保留型假設性蛋白TIGR00266 DNA結合反應調控子 60 201138813 TDE0911 第二型限制性核酸内切酶Tdelll(tdelllR) TDE0925 肽酶 T(pepT) TDE0929 鳥胺酸甲胺醯基轉移酶(argF) TDE0939 脂蛋白，推定性 TDE0947 轉譯延長因子G，推定性 TDE0949 稀醇酶(eno) TDE0951 脂蛋白，推定性 TDE0985 寡肽/二肽ABC轉運蛋白，周質肽結合蛋白，推定性 TDE1000 3-羥酸去氫酶家族蛋白 TDE1001 乳清酸磷酸核糖基轉移酶(pyrE) TDE1004 鞭毛絲核心蛋白 TDE1041 聚核糖核苷酸核苷酸基轉移酶(pnp) TDE1049 轉譯延長因子G(fusA-2) TDE1050 假設性蛋白 TDE1071 肽ABC轉運蛋白，肽結合蛋白OppA(oppA) TDE1072 脂蛋白，推定性 TDE1078 金屬β内醯胺酶家族蛋白 TDE1090 蘇胺醯基tRNA合成酶(thrS) TDE1118 酪胺酸酚裂解酶(tpl) TDE1127 TPR域蛋白 TDE1149 假設性蛋白 TDE1175 伴護蛋白(chaperonin)，60千道爾頓(groEL) TDE1195 脯胺醯基内肽酶 TDE1231 假設性蛋白 TDE1236 丙醣磷酸異構酶(tpiA) TDE1237 假設性蛋白 TDE1246 脂蛋白，推定性 TDE1247 假設性蛋白 TDE1252 脂蛋白，推定性 TDE1273 寡肽/二肽ABC轉運蛋白，肽結合蛋白 TDE1283 細胞外細胞外溶質結合脂蛋白，推定性 TDE1292 TldD/PmbA家族蛋白 TDE1301 DNA修復蛋白 RecN(recN) TDE1308 轉酮醇酶(tkt) TDE1310 DNA促旋酶家族蛋白的調節子 61 201138813 TDE1356 脂蛋白，推定性 TDE1357 醛醣1-表異構酶(galM) TDE1371 RNB樣家族蛋白 TDE1372 假設性蛋白 TDE1398 保留型假設性蛋白 TDE1408 鞭毛絲外層蛋白FlaA，推定性 TDE1409 鞭毛絲外層蛋白FlaA，推定性 TDE1413 胞苷醯基轉移酶/填烯醇丙酮酸磷變位酶，推定性 TDE1415 第V類核苷酸基轉移酶/轉胺酶 TDE1426 轉胺酶，DegT/DnrJ/EryCl/StrS 家族 TDE1440 葡萄糖-1-磷酸胸苷醯基轉移酶(rfbA) TDE1475 鞭毛絲核心蛋白 TDE1477 鞭毛絲核心蛋白 TDE1482 肽酶，M24家族蛋白 TDE1488 甘油酿-3-填酸去氫酶，第I型(gap) TDE1491 趨化蛋白CheA(cheA) TDE1492 趨化蛋白CheW(cheW-l) TDE1493 趨化蛋白CheX(cheX) TDE1494 趨化蛋白CheY(cheY) TDE1499 腺苷醯琥珀酸裂解酶，推定性 TDE1511 病原體特異性表面抗原，推定性 TDE1520 水裂解酶，酒石酸鹽/反丁烯二酸鹽家族，α次單元 TDE1558 YD重複蛋白 TDE1584 脂蛋白，推定性 TDE1589 嘌呤結合性趨化蛋白(cheW-2) TDE1598 ABC轉運蛋白、ATP結合蛋白 TDE1624 甘胺酸切開系統P蛋白，次單元2(gcvP2) TDE1625 甘胺酸切開系統P蛋白，次單元l(gcvPl) TDE1626 甘胺酸切開系統Η蛋白(gcvH) TDE1627 甘胺酸切開系統T蛋白(gcvT) TDE1629 二氫硫辛醯胺去氫酶(丨pdA) TDE1631 檸檬酸裂解酶，α次單元(citF) TDE1632 檸檬酸裂解酶，β次單元(citE) TDE1642 保留型假設性蛋白 TDE1658 鹼性膜蛋白，推定性 62 201138813 TDE1663 TDE1664 TDE1669 TDE1671 TDE1682 TDE1697 TDE1712 TDE1715 TDE1717 TDE1727 TDE1728 TDE1754 TDE1848 TDE1857 TDE1862 TDE1915 TDE1950 TDE2028 TDE2049 TDE2055 TDE2056 TDE2058 TDE2069 TDE2085 TDE2104 TDE2120 TDE2132 TDE2140 TDE2164 TDE2188 TDE2194 TDE2200 TDE2211 TDE2217 TDE2234
OmpA家族蛋白 保留型域蛋白 溶血素 誘發因子(tig) V型腺苷三磷酸酶，B次單元(atpB) 填酸甘油酸變位酶(gpm) 鞭毛絲外層蛋白(fl a A) 磷酸甘油酸激酶(pgk) 假設性蛋白 保留型假設性蛋白 假設性蛋白 脫硫鐵氧化還原蛋白/neelaredoxin 假設性蛋白 保留型假設性蛋白 保留型域蛋白 酒精去氫酶，含鐵 膜脂蛋白TmpC，推定性
OmpA家族蛋白 細菌胞外溶質結合蛋白，第5家族 氣化血紅素結合蛋白B(hbpB) 外膜氣化企紅素結合蛋白A 保留型假設性蛋白 内切核醣核酸酶L-PSP，推定性 胺基酸激酶家族蛋白 假設性蛋白 甘胺酸還原酶複合體原蛋白GrdE2(grdE-2) 鈷ABC轉運蛋白、ATP結合蛋白，推定性 蛋白酶II(ptrB) 假設性蛋白 假設性蛋白 8-胺基-7-氧壬酸合成酶，推定性 曱硫胺酸γ裂解酶(megL) 假設性蛋白 半乳糖/葡萄糖結合脂蛋白(mglB) 鐵化合物ABC轉運蛋白，周質鐵化合物結合蛋白，推定性 63 201138813 TDE2235 曱基天冬胺酸解氨酶 TDE2236 曱基天冬胺酸變位酶，E次單元(glmE) TDE2242 抗原，推定性 TDE2257 5-核苷酸酶家族蛋白 TDE2290 轉錄調控子，推定性 TDE2300 胰蛋白酶域/PDZ域蛋白 TDE2315 保留型假設性蛋白TIGR00044 TDE2337 胺基肽酶 TDE2353 鞭毛鉤關聯蛋白3 TDE2369 保留型域蛋白 TDE2390 假設性蛋白 TDE2391 肽基-脯胺醯基順反異構酶 TDE2392 假設性蛋白 TDE2405 保留型假設性蛋白 TDE2406 TldD/PmbA家族蛋白 TDE2422 核糖體蛋白L7/L12(rplL) TDE2433 螺旋體膜蛋白，推定性 TDE2439 保留型假設性蛋白 TDE2480 伴護蛋白HtpG(htpG) TDE2489 肽鏈釋放因子l(prfA) TDE2508 假設性蛋白 TDE2540 脂蛋白，推定性 TDE2567 假設性蛋白 TDE2584 二肽酶 TDE2589 胺基肽酶，推定性 TDE2601 表面抗原，推定性 TDE2602 外膜蛋白，推定性 TDE2606 尿刊酸水合酶(hutU) TDE2639 寡内肽酶F(pepF) TDE2647 硫辛醯基轉移酶與硫辛酸蛋白連接酶家族蛋白 TDE2665 肉苷-5-單填酸去氫酶(guaB) TDE2668 絲胺酸羥基曱基轉移酶(gly A) TDE2693 錨蛋白重複蛋白 TDE2699 抗原，推定性 TDE2712 假設性蛋白 64 201138813 TDE2716 TDE2730 TDE2734 HAD超級家族水解酶，亞家族IA 水解酶，TatD家族 假設性蛋白 TDE2738 TDE2754 TDE2776 TDE2779 寡内肽酶F，推定性 鳥胺酸環化去胺酶(arcB) 脯胺酸亞胺基肽酶(pip) 假設性蛋白 1.登錄與定義係來自TIGR(現今為JCVI，www.tigr.org)。定義係來自TIGR之基因體的自 動化註解。 65 201138813
第F表 登錄a 蛋白之說明a、縮寫15 TF0071 HP-C TF0299 HP TF0324 HP-C TF0399 HP TF0436 保留型假設性蛋白 TF0508 HP-C TF0706 可能的OM運輸蛋白 TF0761 HP-C TF0773 OM排出蛋白 TF0810 可能的OM排出蛋白 TF1015 HP-C TF1038 HP-C TF1059 可能的黃原膠裂解酶 TF1300 HP-C TF1331 Omp TF1409 OmpTolC TF1441 HP-C TF1443 HP TF1444 HP-C ;可能的氣化血紅素受體 TFI476 TF1793 OmpP49 聚磷酸鹽選擇性孔蛋白0 TF1822 OM脂蛋白silC前驅物_ TF1959 HP-C TF2123 HP-C ; TPR-重複蛋白 TF2450 Omp TF2595 HP-C TF2613 HP-C TF2734 HP-C TF2852 HP-C TF2901 HP-C TF3007 HP-C TF3114 HP TF0041 Omp，TDR 66 201138813
TF0063 HP-C TF0064 HP-C TF0301 Omp » TDR TF0318 Omp，TDR TF0875 OM受體，TonB連結型 TF0980 OMTDR TF2096 可能的OmpA，OM相關蛋白 TF2124 HP-C ;可能的TDR TF2778 Omp，TDR TF3087 HP-C TF0045 Omp，TDR TF0044 HP-C TF0093 Omp'TDR TF0092 Omp TF0111 Omp TF0112 Omp TF0237 Omp，TDR TF0238 Omp TF0275 Omp TF0277 Omp TF0313 Omp，TDR TF0312 Omp TF0424 OM受體，TonB連結型 TF0425 Omp TF0482 OM受體 TF0483 OM受體 TF0588 Omp TF0587 Omp TF0640 Omp，TDR TF0641 Omp TF0654 OM受體，TonB連結型 TF0655 Omp TF0682 Omp，TDR TF0683 HP-C TF0778 Omp，TDR 67 201138813
TF0779 可能的Omp TF0976 OM受體，Ton連結型 TF0977 可能的Omp TF1053 OM受體，TonB連結型 TF1052 HP-C TF1057 可能的OM受體，TonB連結型 TF1056 HP-C TF1207 OM受體，TonB依賴型 TF1206 HP-C TF1318 OM受體 TF1319 Omp TF1415 Omp > TDR TF1416 Omp TF1506-73 OM受體，TonB依賴型 TF1505 HP-C TF1535 可能的OM受體蛋白 TF1534 HP-C TF1605 Omp，TDR TF1606 Omp TF1989 Omp，可能的TDR TF1990 Omp TF2032 Omp，TDR TF2031 HP-C TF2193 Omp，TDR TF2192 可能的Omp TF2301 Omp，TDR TF2302 HP-C，可能的Omp TF2347-8U Omp，可能涉及營養素的結合作用 TF2349 HP-C TF2403 Omp’，TDR TF2402 Omp，可能涉及營養素的結合作用 TF2412 Omp TF2411 Omp TF2417 Omp > TDR TF2416 HP-C 68 201138813
TF2597 OM受體蛋白；可能的TDR TF2596 HP-C，可能的LP TF2605 Omp，TDR TF2606 HP-C TF2725 TF2726-7a Omp，TDR Omp，可能涉及營養素的結合作用 TF2728 Omp，TDR TF2729 可能的Omp TF2801 Omp，TDR TF2802 可能的Omp TF3011 Omp，TDR TF3012 可能的Omp TF3104 Omp，TDR TF3103 Omp TF_extra NotinLANL TF0015 Omp(可能的免疫性脂蛋白） TF0090 HP-C TF0091 Omp ' TF0220 HP-C TF0304 肽基-脯胺醯基順反異構酶 TF0305 肽基-脯胺醯基順反異構酶 TF0322 可能的YngK蛋白 TF0348 HP TF0365 HP TF0368 HP ：TF0447 HP TF0546 HP-C TF0652 HP-C TF0661 HP TF0749 蛋白酶II TF0750 HP-C TF0765 HP-C TF0945 HP-C ;可能的表面蛋白 TF1033 内皮素轉化酵素，内肽酶 TF1055 HP 69 201138813
TF1158 涉及抗銅性之OMLP、MpE TF1342 可能的脂蛋白 TF1404 HP-C TF1440 HP TF1525 HP-C TF1565 多醣輸出蛋白，BexD/CtrA/VexA家族 TF1733 HP-C TF1755 周質蛋白酶 TF1940 含有TPR重複之蛋白 TF2016 HP TF2035 HP-C TF2206 HP-C ;可能的糖磷酸異構酶/表異構酶 TF2207 外切型α唾液酸酶(神經胺酸酶） TF2214 肽基-脯胺醯基順反異構酶 TF2327 HP-C ;可能的脂蛋白 TF2414 HP TF2415 HP TF2447 脂蛋白 TF253I 可能的二肽基肽酶in TF2804 HP-C TF2806 HP-C TF2843 HP-C ;可能的脂蛋白 TF2925 β-Ν-乙醯基葡萄醣胺酶 TF3013 HP-C TF3024 周質蛋白酶 TF3165 酼基二硫鍵轉換蛋白 TF0955 HP-C TF1032 可能的内化素相關蛋白 TF1259 HP TF1741 HP-C TF1843 表面抗原BspA** TF2116 HP-C ;可能的血球凝集素/溶血素 TF2320 HP TF2339 HP TF2592 HP-C 70 201138813 TF2646 HP-C TF2661-2a 表層蛋白A TF2663 表層蛋白B TF2998 表面抗原BspA** TF3080 HP-C TF3163 HP-C TF1478 膜融合排出蛋白 TF0454 黃°票呤/尿0f咬通透酶家族蛋白 TF1351 HP-C TF1970 草醯乙酸去羧酶，β次單元 TF2574 前蛋白移位酶Sec Υ TF0477 二肽/三肽通透酶，POT家族 TF0789 前蛋白移位酶’ secDF家族 TF3036 葡萄糖/半乳糖轉運蛋白 TF0797 HP-C TF0813 醣苷基水解酶，分泌型 TF1201 可能的前蛋白移位酶 TF1245 LemA蛋白 TF2333 訊息肽酶I TF2924 DNA結合反應調控子/感應組胺酸激酶 TF3099 HP-C TF0334 HP TF0743 HP-C ;TF1039 HP-C TF1101 ABC轉運蛋白、ATP結合蛋白 TF1964 MotA/TolQ/ExbB質子通道家族 TF0405 HP-C TF2920 HP-C TF3137 鈉離子轉移型NADH-醌還原酶，次單元E TF1413 、可能“跨膜蛋白 TF0959 周質蛋白酶 TF1775 氧化還雇酶，Gfo/Idh/MocA家族 TF2330 HP-C TF1897 HP-C ;可能的胺基肽酶 TF0421 α-L-海藻糖苷酶 71 201138813
TF2803 可能的NADH依賴型去氫酶 TF0183 HP-C TF0216 50S核糖體蛋白L20 TF0217 50S核糖體蛋白L35 TF0439 鈉離子轉移型NADH :泛醌氧化還原酶，次單元1 TF0841 NADH去氫酶/NAD(P)H硝基還原酶 TF1123 醣苷基轉移酶 TF1150 丙酮酸-甲酸裂解酶 TF1151 HP-C TF1193 醣苷基轉移酶，第1群組家族 TF1325 L-海藻糖異構酶 TF1575 DNA結合反應調控子 TF1595 HP-C TF2190 HP-C TF2421 殺細胞性毒素蛋白 TF2551 30S核糖體蛋白S10 TF2552 50S核糖體蛋白L3 TF2560 30S核糖體蛋白S3 TF2566 50S核糖體蛋白L5 TF2569 50S核糖體蛋白L6 TF2579 30S核糖體蛋白S4 TF2649 琥珀酸去氫酶，黃素蛋白次單元 TF2650 破珀酸去氫酶，鐵-硫次單元 TF2838 HP-C TF3006 轉錄調控子RprY 登錄號與蛋白之說明係來自歐羅甘(Oralgen)網站(www. Oralgen.lanl.gov)。具有連字符 號的登錄號係指資料庫中的二個相鄰基因係對應於一個單一蛋白，如體蛋白庫與同源 性數據二者所示。 72 201138813 已知與疫苗組成物一起使用之各種佐劑。該佐劑所提 供之助益’係藉由調節免疫反應及使用比該疫苗抗原單獨 投予時較少的疫苗抗原量或較小劑量而達到更持久與較^ 的免疫力水平。佐劑的實例包括佛氏(Freund)不完全佐劑 (IFA);佐劑65(含有花生油、單油酸二縮甘露醇醋及單硬脂 酸鋁）；油乳化液；里比（Ribi)佐劑；普朗尼克(plur〇nic)多 元醇類；聚胺類；阿夫立定(Avridine);奎爾（Quii) a ;息素. MPL ; QS-21 ;礦物凝膠類諸如鋁鹽與鈣鹽；奈米粒子諸如 羥構石灰、填酸#5、鋁鹽；寡聚糖與聚糖諸如聚甘露糖、 聚葡萄胺糖。其他實例包括水中油乳化液，諸如、 SAF-0、MF59、赛比克(Seppic) ISA720 ;及其他特定佐劑 諸如15(!!0^/181^與15(^〇]^ matrix™。其他的佐劑實例之廣、、乏 但非窮舉的清單，係列於Cox與Coulter於1992年乙文[美國 佛州博卡拉頓(Bocca Raton)的CRC出版公司於1992出版之
Wong WK所編輯的“動物寄生蟲防治使用技術（Animais parasite control utilizing technology)’’乙書第49-112頁]中。 除了佐劑之外，當適宜時，該疫苗組成物可包括習用之藥學 上可接受的載劑、賦形劑、填料、緩衝劑或稀釋劑。可預防 性地投予含有佐劑的該疫苗組成物之一或多個劑量，以預防 牙周炎；或治療性地投藥用於治療現存的牙周炎。在_實施 例中，所用佐劑之選擇，係用以促進一種傾向7匕_2的反應之 產生。其中一貫例為十一水合硫酸紹鉀(Alum)。 在一種較佳組成物令，該嵌合或融合蛋白係與—種黏膜 佐劑組合，及經由口、頰或鼻途徑投藥。黏膜佐劑的實例為 73 201138813 奈米粒子、纽毒讀獨熱性大腸桿,毒素、該 等毒素的無雜B切元、鮮毒素之錄較低絲因突變 體。可用於經口 /頰/鼻的方式輸送抗原性蛋白之其他方法， 係包括藉由晴化作用將該蛋白納入或吸收至生物可降 解性聚合物（諸如叫_«__雜或奈辣子(諸 中或之上，以協助自胃腸道或其他黏膜表面 攝取Μ球體及保護該等蛋白免於降解作用。脂質體、 况⑽、水凝膠類係其他可能方法之實例，可藉由納入 用於將該抗原性蛋白輸送至制免«統4向分子諸如 LTB、CTB或凝集素，而進—步增進該等方法。除了抗原性 蛋白與賴佐劑或輸送系統之外，當適宜時，該疫苗組成物 ^包括㈣之樂學上可接受的載劑、賦形劑、填料、膜衣、 分散介質、抗細菌或抗真菌劑及緩衝劑或稀釋劑。 已知用於將一疫苗組成物投藥至-個體之多種方法， 包括但不限於皮内、肌内、腹膜内、靜脈内、皮下、鼻内、 舌下、頰及口服投藥作用。料投藥途徑係期適用於疫 苗接種。 就另一方面而言，本發明提供一核酸分子，其所包括 的一核苦酸序列係編碼如上所廣泛說明之—種嵌合或融合 蛋白，及選擇性地在運作上與至少一種調控元素連結。在 一實施例中，該核酸係以分離或實質上純化形式提供。 該核酸分子例如可嵌插至一種適宜的表現載體中，及 藉由將該表現載體置入一原核或真核宿主細胞，而用於製 造一種重組蛋白形式的嵌合蛋白。若要成功地表現該重組 74 201138813 蛋白，則該表現載體需含有轉錄 控元素，及該等調控元素係用於表現的=:需的調 所相容及所_。可使用多種宿主細 ^糸統 蛋白，其等包括但不限於以，體載體、=組 黏接質體DNA轉形的細菌；含 違體载體或 有真菌載，的真菌;受病毒(如桿狀病： = 含 系；及經質體或病毒表現載體轉染或受重组:細胞 症病毒、腺病毒、腺相關病毒、反轉錄病毒二 物細胞系。 ；J _礼頬動 使用分子生物學技藝中所知的方法，可在表 納入各種㈣動子與增料，㈣ ^體中 用:舰於所増加之胺基酸序列表現作用，係與=: 特定伯主細胞系統相容(例如無毒性）。 啟動子之選擇將依所用的表現系統而定。啟動子 度亦即促進轉錄作用的能力Μ。—般而言，最好使用— 種強力啟動子，以獲致高水平的蝙碼财酸序列轉錄作用 及重組蛋白表現作用。例如，在包仏啟動子，啟動子、 recA啟動子、核糖體麵啟動子、Ml啟動子、_ν5、 〇mPF、bla、lpp等之包括大腸桿叫⑽)在内的_種宿主 細胞系統中，已觀察到技藝中所知之細菌、_或質體 啟動子的高轉錄水平，及其等可•提供所餘之編碼胺 基酸序列的核苷酸序列之轉錄作用。 供有效率的轉錄或轉譯作用所用之其他控制元素，係 包括增強子及調節訊息。增強子序列仙NA元素，其似乎 75 201138813 等鄰近的1碼核聽序列之相對位置及定_ :-方式増加轉錄致率。因此，== 現載體系統而定，妁伯主細胞表 游或下*、 Μ子可置於所嵌插的一序列之上 —增加轉錄效率。其他調節位址 轉譯起始訊^ π於調節該編碼序列的表現=轉錄或 在另-貫施例中，該載體可為—種病毒或細菌疫苗載 豆，及用於提供一種重組病毒疫苗 、重組細菌疫苗；、重組 魅細岐苗或杨化重組赫疫苗。牛“細技藝中 最著名的感病毒實例，其經設計而表現衍生自其他生 物體的疫苗抗原。經鱗或以其他方式處理而藉此其本身 不引發疾病之重組型活牛痘病毒，係用以免疫接種宿主。 該重組病毒在宿主内的後續複製作用，提供疫苗抗原對於 免疫系統的持續刺激作用’藉此提供長效免疫力。 其他的活疫苗載體包括：腺病毒、細胞巨大病毒及較 佳痘病毒諸如牛痘[Paoletti與Panicali於第4,603,112號美國 專利]及減毒沙門桿菌（Sa/mo/id/a)菌株[Stocker等人於第 5,210,035號、第4,837,151號及第4,735,801號美國專利；及 Curtiss等人於1988年期刊“Vaccine”第6期第155-160頁乙 文]。活疫苗係特別有利的，因其等持續地刺激免疫系統而 可賦予實質上長效的免疫力。當該免疫反應係保濩免於後 續的牙齦紫質單胞菌（尸· 以·Vfl/⑷感染時’活疫苗本身可 用於一種預防性疫苗中，以對抗牙齦务、質單胞菌（户· ㈣加㈣。尤其，該活疫苗可以片利共生式棲居於口腔中 的-細菌為基礎。可使用具有4組欲合蛋白的—載體將該 76 201138813 細菌轉形，然後用於植入口腔及尤其口腔黏膜中。一旦植 入口腔黏膜中之後，該重組蛋白之表現將刺激黏膜相關淋 巴組織產生中和抗體。為進一步說明該實施例，使用技藝 中眾所周知的分子生物技術，將編碼本發明的嵌合蛋白之 核苷酸序列嵌插至牛痘病毒基因體DNA中，其嵌插位址係 容許抗原決定基的表現作用，但不損及牛痘病毒載體的生 長或複製作用。所得的重組病毒可使用作為一疫苗調配物 中的免疫原。除了重組病毒係不活化之外，該相同方法可 用於建構一種不活化重組病毒疫苗調配物，諸如藉由技藝 中所知的化學方式，及其係在使用作為一種免疫原之前及 實質上不影響所表現的免疫原之免疫原性。該不活化重組 疫苗可調配一種適宜的佐劑，以增強對於疫苗抗原的免疫 反應。 本發明亦提供包括編碼本發明的一種嵌合或融合蛋白 之一核苷酸序列之一核酸分子直接作為疫苗調配物之用 途。可直接導入與一或多種調控元素運作連結之編碼該嵌 合蛋白的核苷酸序列，以接種一個體(“直接基因轉移”)對抗 牙齦紫質單胞菌（尸.心)的病原性菌株。藉由技藝中 的技術，諸如藉由靜脈内注射一種表現質體：陽離子性脂 質體複合體[Zhu等人於1993年期刊“Science”第261期第 209- 211頁乙文]，已證實在一個經接種的個體中之直接基 因轉移作用，造成經接種個體的細胞諸如血管内皮細胞以 及主要器官的組織表現該基因物質。用於將載體DNA輸送 進入一標的細胞中之其他有效方法係技藝中所知。在一實 77 201138813 施例中’已使用含有病毒基因的純化重組質體DNA來接種 (不論以非經腸方式、黏骐方式或經由基因搶免疫作用）疫 苗，以誘發一種保護性免疫反應[Fynan等人於1993年期刊 “Proc Natl Acad Sci USA”第 9〇期第 11478-11482頁乙文]。在 另一實例中，可藉由技藝中所知的標準程序，將自一個體 所移除的細胞轉染或電穿孔，而將重組載體DNA引入標的 細胞中。然後可使用技藝中所知的方法’諸如藉由使用該 載體所表現的一選擇標記，挑選含有該重組載體DNA的細 胞，然後可將所挑選的細胞再度導入該個體中，以表現該 重組蛋白。 在其他實施例中，提供包括如上述的一種抗微生物劑 與免疫原之一藥學組成物。該組成物可進一步包括稀釋 劑、賦形劑或載劑或用於治療與口腔感染相關的—病況或 疾病之化學治療劑，及可適用於口服投藥。可將本發明的 組成物納入含片或納入口香糖或其他產物中，如藉由攪拌 置入溫熱的原膠中或塗覆一原膠的外表面，其等的例證為 杰路頓(jelutong)膠、膠乳、乙烯基樹脂等，最好連同習用 的塑化劑或軟化劑、糖或其他甜味劑或諸如葡萄糖、山梨 糖醇等。 可製備本發明之含有上述藥學組成物的口服組成物， 及以可施用至口腔的各種形式使用，諸如潔齒劑包括牙 膏、牙粉及液態潔齒劑、漱口水、糖錠、口香糖、牙科用 糊劑、牙齦按摩膏、漱口錠劑、乳製品及其他食物。依特 定口服組成物之類型與形式而定，如本發明之—種口服組 78 201138813 成物可進一步包括眾所周知的附加成分。 在本發明的一些較佳形式中，該口服組成物可為實質 上液態I"生貝’諸如一種漱口水或漱洗液。在該種製劑中， 載劑通常為一種水_酒精混合物，及有利地包括如後述的一 種保濕劑。水相對於酒精的重量比係一般位於約1 : 1至約 20 . 1之範圍。在該類型製劑中的水-酒精混合物之總量， 係通常位於該製劑之約7〇至約99.9重量％的範圍。該酒精通 常為乙醇或異丙醇。其中較佳為乙醇。 本發明的液劑與其他製劑之pH值，係一般位於約5至約 9之範圍’及通常約5 〇至7〇。能以酸(如檸檬酸或苯甲酸）或 驗(如氬氧化鈉）控制pH值，或加以緩衝(如以檸檬酸鈉、笨 甲酸鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉等）。 在本發明的其他有利形式中，該藥學組成物可為實質 上固態或糊狀性質，諸如牙粉、一種牙科用錠劑或一種牙 膏（牙科用乳膏劑）或凝膠式潔齒劑。該固態或糊狀口服製劑 之載劑，係一般含有牙科上可接受的拋光物質。 在牙膏中’該液態載劑可包含水與保濕劑，其量通常 為該製劑之約10重量％至約8〇重量％。甘油、丙二醇、山梨 糖醇及聚丙二醇係例示性的適宜保濕劑/載劑。水、甘油及 山梨糖醇的液態混合物亦為有利的。在透明凝膠情況下， 折射率係一重要考量，及較佳使用約2.5至30%重量/重量的 水、0至約70%重量/重量的甘油及約2〇至8〇%重量/重量的山 梨糖醇。 牙膏、乳膏劑及凝膠通常含有一種天然或合成的增稠 79 201138813 劑或膠凝劑’其比例係約0.1至約10及較佳約0.5至約5%重 量/重量。一種適宜的增稍劑係合成水輝石、一種合成的膠 態鎂驗金屬矽酸鹽複合體黏土及其例如能以拉波特工業 (Laporte Industries Limited)有限公司所銷售之拉波奈特 (Laponite)(如CP、SP2002、D)形式取得。拉波奈特d包含約 為58.00重量％的二氧化矽、25.40重量％的氧化鎂、3.05重 量％的氧化鈉、0.98重量％的氧化鋰及一些水與微量金屬。 其真比重為2.53，及其在8%濕度之表觀總體密度為丨.〇克/ 毫升8 其他的適宜增稠劑包括愛爾蘭紅藻、角叉菜膠、黃蓍 樹膠、澱粉、聚乙烯吡咯啶酮、羥基乙基丙基纖維素、羥 基丁基甲基纖維素、羥基丙基曱基纖維素、羥基乙基纖維 素（如能以納丘索（Natrosol)形式取得）、羧曱基纖維素鈉及 膠態氧化矽諸如細磨型席洛德(Syloid)(如244)。亦可包括助 溶劑，諸如保濕劑多元醇類諸如丙二醇、二丙二醇及己二 醇；赛璐蘇(cellosolve)類諸如曱基赛璐蘇與乙基赛璐蘇； 在一直鏈中含有至少約12個碳之植物油類與蠟類，諸如橄 欖油、蓖麻油，及石墩脂與酯類諸如乙酸戊酯、乙酸乙酯 及苯甲酸苄酯。 將瞭解依據慣例’該口服製劑通常在經適宜標示的包 裂中販售或以其他方5U肖售。因此，—瓶的口腔漱洗液實 際上將具有說明其作為口雌洗液絲口水之標示，及具 有使用說明’及牙膏n劑或凝膠將通常置於__種可擠 軟管中’通常為紹管、有襯裡㈣管或塑膠管或用於調節 80 201138813 控制内容物之其他擠壓、料或加壓分配器，其等實際上 具有說明其作為牙膏、凝膠或牙制乳膏劑之標示。…τ、 可在本發明的組成物中使用有機表面活性劑，以增加 預防性作帛’協助達成紐性劑在整個σ㈣之徹底與* ㈣分散仙，及使㈣等組絲之錢上㈣接受度= 高。有機表面活性物質的性質較佳為陰離子性、非離子性 或兩性’及較佳不與活性劑交互作用。較佳使用賦予該组 成物清潔與發泡性質之-種清_物質，作為表面活性 劑。陰離子性表面活性_適宜㈣為高級脂騎單甘油 醋單硫酸鹽的水溶性鹽類，諸如氫化椰子油脂肪酸的單硫 酸化單甘油酯之鈉鹽；高級烷基硫酸鹽類，諸如月桂基硫 酸鈉；烷基芳基磺酸鹽類，諸如十二基苯磺酸鈉；高 基磺乙酸酯類；1，2-二羥基丙烷磺酸酯的高級脂肪酸酯類； 及低級脂族胺基羧酸化合物之實質上飽和的高級脂族醯基 醯胺類，諸如該等在脂肪酸、烷基或醯基自由基等中具有 12至16個碳者。最後所提及的醯胺類之實例，係應實質上 無皂之Ν-月桂酿基肌胺酸及Ν-月桂醯基、Ν-肉豆寇醯基或 Ν-棕櫚醯基肌胺酸的鈉、鉀與乙醇胺鹽類或類似的高級脂 肪酸物質。適用的水溶性非離子性表面活性劑之實例，係 環氧乙烷與具有長疏水鏈（如具有約12至20個碳原子的脂 族鏈）的各種反應性含氫化合物之縮合產物，該縮合產物 (“ethoxamers”)含有親水性聚氧乙烯部分，諸如聚(環氧乙院) 與脂肪酸類、脂肪醇類、脂肪醯胺類、多元醇類(如單硬脂酸 去水山梨醇酯)及聚環氧丙烷(如普朗尼克物質）之縮合產物。 201138813 表面/舌性劑的存在量通常約為0.1至5重量％。值得注意 之處在於表面活㈣|可能有助於溶解本發明的活性劑，及 藉此減少助溶性保濕劑的所需量。 在本發明的口服製劑中可納入各種其他物質，諸如增 白劑、防腐劑、聚⑪氧類、葉綠素化合物及/或氨化物質諸 如尿素、磷酸二敍及其混合物。當該等佐劑存在時，其等 在5玄製劑中的納人量係、實質上不損及所期望性質與特性。 亦可使用任一適宜的調味劑或甜化物質。適宜的調味 組分之實例為調味油類，如綠薄荷、薄荷、冬青、黃樟、 丁香、鼠尾草、桉葉、馬_、肉桂、檸檬與橘子的油及 柳酸曱S旨。適宜的甜味劑包括隸、乳糖、麥芽糖、山梨 糖醇、木糖醇、環己胺磺酸鈉、紫蘇糖、AMP(天冬胺醯基 苯基丙胺酸曱基酯）' 糖精等。適宜地，調味劑與甜味劑可 各自或一起構成該製劑之約〇1%至5%以上。 可依據技藝中所知用於製造藥學組成物之任一方法，製 備規劃供口服用的組成物，及該組成物可含有選自由甜味 劑、調味劑、著色劑及防腐劑所組成之群組之一或多種作用 劑，以提供藥學上優質與適口的製劑。鍵劑含有與適用於製 造錠劑之藥學上可接受的無毒性賦形劑摻合之有效成分。該 等賦形劑可為例如惰性稀釋劑，諸如礙酸約、碳酸鈉、乳糖、 磷酸鈣或磷酸鈉；粒化與崩解劑例如玉米澱粉或褐藻酸；黏 合劑例如殿粉、明膠或阿拉伯朦；及潤滑劑例如硬脂酸鎂、 硬脂酸或滑石。該等錠劑可未經塗覆或可藉由已知技術塗 覆，以延緩在胃腸道或牙周囊袋中的崩解與吸收作用，及藉 82 201138813 此提供長時間的持續作用。例如可使用一種延時物質，諸如 單硬脂酸甘油醋或二硬脂酸甘油醋。 供口服用的調配物亦可能以硬質明膠膠囊的形式存 在，其中該有效成分係與一種惰性固態稀釋劑例如碳酸 鈣、磷酸鈣或高嶺土混合；或以軟質明膠膠囊形式存在， 其中該有效成分係與水或一種油介質例如花生油、液態石 蠟或橄欖油混合。 含水的懸液劑係含有活性物質及摻合適用於製造含水 懸液劑的賦形劑。該等賦形劑為懸浮劑，例如羧曱基纖維 素納、曱基纖維素、經丙基甲基纖維素（hydropropyl methylcellulose)、褐藻酸納、聚乙稀°比°各咬酮、黃蓍樹膠 及阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑可為一種天然存在的磷脂， 例如卵攝脂；或一種環氧烧與脂肪酸的縮合產物，例如聚 氧乙烯硬脂酸酯；或環氧乙烷與長鏈脂族醇類的縮合產 物，例如十七碳乙烯氧鯨蠟醇；或環氧乙烷與衍生自脂肪 酸與己糖醇的偏酯之縮合產物，諸如聚氧乙烯山梨糖醇單 油酸酯；或環氧乙烷與衍生自脂肪酸與己糖醇酐的偏酯之 縮合產物，例如聚乙稀去水山梨醇單油酸S旨。 含水的懸液劑亦可含有一或多種防腐劑或抗微生物 劑，例如苯曱酸酯類諸如乙基或正丙基對-羥基苯曱酸酯， 另一實例為葡萄糖酸氣已。定；一或多種著色劑、一或多種 調味劑及一或多種甜味劑諸如嚴糖或糖精。 可藉由將有效成分懸浮於一種植物油類例如花生油、 橄揽油、芝麻油或椰子油中，或懸浮於一種礦物油諸如液 83 201138813 =Μ’而配製含油懸液劑。該含油懸液劑可含有增稠 Α例如蜂螺、硬石蠛絲壤醇。甜味劑係如上所說明 及可添加調味劑以提供適口性口服製劑。可藉“ ’ 化劑諸如抗壞錢，而保存料㈣物。 ' 4.套組 在特定的實施例中，提供—套組，其包括： -用於移除該個體口腔組織的實f上所有微生兑 片段之抗微生物劑； 一产、 -用於免疫接種該個體對抗—微生翻原體之—種免 疫原’在口腔組織中存在該微生物病原體係、與 況相關聯，· '扃次病 5亥套組係適用於上述方法中。 該套組可包括： 以-種抗微生物劑與免疫原中之一或多者的形式裝 有—治療組成物之一容器； 具有使用說明之一標籤或仿單。 當用於此述的一種方法或用途 在特定的實施例中 時’提供一套組。 在特定的實施例中，該套組可包含用於治療一疾病或 病況之-或多種其他活性要素或成分。 一套組可包含—容器及置於該容器上或伴隨該容器的 二籤或仿單。適宜的容器包括例如瓶、管形觀、注射器、 乳泡包裝等。該等容器可自多種物質諸如玻璃或塑膠形 成°5亥谷ϋ裝有-種有效用於治療該病況的治療組成物， 84 201138813 及可具有一個無菌存取孔（例如該容器可為具有皮下注射 針頭可刺穿的塞子之一種靜脈内溶液袋或—管形版）。該桿 戴或仿单表明該治療組成物係用於治療所選擇的病、、兄。在 貫施例中’該標籤或仿單包括使用說明及表明該治療組 成物可用於治療特定疾病或病況。 該套組可包含(a) —治療組成物；及作)其中含有一種第 二活性要素或成分之第二容器。本發明的該實施例中之套 組可進一步包含一仿單，其表明該活性要素與其他活性要 素可用於治療源自一特定感染之一疾患或預防—併發症。 任擇地或附加地，該套組可進一步包括—個第二（或第三) 容器’其中包含-種藥學上可接受的緩衝劑，諸如注射用 的抑菌水(BWFI)、M酸鹽緩衝的食鹽水、林格氏⑻n㈣ 溶液及右旋葡萄糖溶液。其可進_步包括自商業與使用者 觀點而言有利的其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過 濾器、針頭及注射器。 藉由下列實例進-步說明本發明，該等實例之納入係 為了例證而非限制本發明。 第1例 方法與材料 細菌菌株與生長條件。牙齦紫質單胞菌(/w却 —㈣聊的冷凌乾燥培養物，係在增補5微克/毫升的 氣高鐵血紅素、0.5微克/毫升的半胱胺酸之溶胞馬血王复脂平 皿上’以厭氧方式於3rc生長(HB瓊脂，<1〇繼代培養）。在 3至4天後’使用菌落接種含有5微克/毫升的氣高鐵血紅 85 201138813 素、0.5微克/毫升的半胱胺酸之腦心浸出物培養基⑴。批 式培養物係以厭氧方式在MK3厭乳工作站（Anaerobic
Workstation)(澳洲阿德萊德（Adelaide)的唐惠特利科技(Don
Whitley Scientific Ltd.)有限公司）中生長。在厭氧工作站 中，在指數生長期之期間，藉由離心作用（於4。〇與7500 g 進行30分鐘）採收細胞’及以PG緩衝液清洗二次(5〇 mM Tris 鹽酸鹽、150 mM氣化鈉、5 mM氣化鈣及5 mM半胱胺酸-鹽酸’ pH 8.0)。使用一種分光光譜儀㈤金埃爾默(perkin-Elmer)公司之型號295E)，在650奈米監測批式培養物之生 長。藉由格蘭氏(Gram)染色法、顯微鏡檢查及依據sl〇ts(2) 使用多種生物化學試驗，例行地檢驗培養物純度。 含有黏連蛋白序列與N端添加Kgp蛋白酶序列的黏連 蛋白序列之pET28建構物的建構作用。代表活性位址（as) 與KgpAl黏連蛋白（A1)域的肽與嵌合肽之Kgp殘基，係使用 pET表現載體(諾凡基(Novagen)公司）而在大腸桿菌（五 中以具有六組胺酸標藏的重組(r)蛋白形式過度表現。所表 現的r-蛋白為rKAS2與rKLAl，及r-嵌合蛋白為rKAS2-KLA1、RKASl-KsAl 及 rKAS4-KAS3-KAS5-KAS6-KLAl (亦稱作多重KAS-KLA1)。代表不同的A1與AS域之胺基酸 序列，係述於第1與2表中。 使用第4表中所列之引子、TaqDNA聚合酶（英杰 (Invitrogene)公司）及一種PC-960熱循環器（柯貝特（Corbett Research Technologies)公司），分別自 pNSl(pUC18 中之 3.5kb的BamHI 片段）或牙齦紫質單胞菌（尸· 基 86 201138813 因體DNA ’擴增基因的各種KAS與ΚΑΙ域。採用下列的 反應條件’使用引子對KAS2-FOR與KAS2-REV及KLA1-FOR與KLA1-REV，而分別產生編碼KAS2與KLA1的PCR片 段：於94°C達3分鐘；接著28個於94。(：達45秒（變性）、於62°C 達40秒（黏合）及於72t達20秒（延伸）之循環；接著一個於 72°C達5分鐘之最終循環。 藉由如下之重疊延伸的基因剪接法（S0Eing)，產生 KAS2-KLA1嵌合PCR產物：採用上述條件，使用引子對 KAS2-FOR 與 KAS2-KLA1-嵌合體-REV 及 KAS2-KLA1-欲 合體-FOR與KLA1-REV，產生PCR產物。然後將PCR產物 黏合’及以引子KAS2-FOR與KLA1 -REV進行最終的PCR(於 94°C達2分鐘’接著28個於94°C達30秒、於5(TC達30秒及於 72°C達40秒之循環，接著一個於72°C達5分鐘之最終循環。 為製備KASl-KsAl PCR產物，接連使用KASl-KsAl-REV引子與KASl-KsAl-FOR引子1與2中之各者，而進行二 個連續的PCR(反應條件係於94°C達2分鐘及接著35個於94 °〇達15秒、於63°C達30秒及於72°C達2分鐘之循環），以產 生KASl-KsAl PCR產物。KASl-KsAl-FORl與KASl-KsAl- FOR2引子具有重疊前一個PCR產物的5’之3’延伸作用。 為製備多重KAS-KLA1 PCR片段，接連使用多重rev 引子與多重FOR引子1、2、3及4中的各者，進行4個連續的 PCR(反應條件係於95°C達2分鐘及接著35個於95°C達20 秒、於68°C達1.5分鐘之循環），以產生多重KAS-KLA1 PCR 產物。各個多重FOR引子具有重疊前一個PCR產物的5,之3,
87 S 201138813 延伸作用。 依照製造廠商的操作程序，使用PCR純化管柱（凱傑 (Qiagen)公司）將編碼KAS2、KLA卜 KAS2-KLA卜 KAS1-KsAl及多重KAS-KLA1的所有PCR片段純化，接合至TA選 殖載體pGem-T Easy(普洛麥格(Promega)公司）中，及轉形至 大腸桿菌（五.co/i) JM109中。依照製造薇商之說明，以Ncol 與Xhol分解純化後的重組pGemT-Easy建構物，及定向植入 經Ncol/Xhol分解的pET28b(諾凡基(Novagen)公司）中，及轉 形至非表現型大腸桿菌（E. cW/) JM109 [DH5a]中。將重組 pET28建構物純化及轉形至大腸桿菌（五.α//)表現宿主BL2 i (DE3) [HMS174(DE3)](諾凡基(Novagen)公司）中，及在含有 50微克的康黴素之LB上進行篩選。藉由DNA序列分析，確 認各嵌插物之完整性。 养核苷酸引子（第4表）係經設計在需要之處納入限制酵 素位址、終止密碼子及六組胺酸標籤，用於rKAS2、RKLA1 及rKAS2-KLA 1的引子之設計，係限制卜蛋白中所納入的外 來編碼序列不超過三個胺基酸加上該六組胺酸標籤。 rKASl與rKLAl之设δ·|·係分別在n端與c端含有一個六組胺 酸標籤’藉此其等可直接與在Ν端與c端均具有—個六組胺 酸標籤之rKAS2-KLAl比較。在汉规尺^與多重KAS_ KLA1中’組胺酸標籤係位於匚端。 88 201138813 第4表編碼Kgp A1與AS的各種片段與嵌合體之核苷酸序 列的擴增作用所用之寡核苷酸引子 重』且上） 蛋白 寡 序列(5’_3’） 特性 *(5’-3’） rKAS2 KAS2- FOR GACCATGGCTCATCACCAT CACCATCACAATACCGGAG TCAGCTTTGCA (序列辨識編號：47) GA緩衝液-Ncol(包括 ATG 起始）-CT-(His)6-AS(核苷鹺 1992- 2(il2) KAS2- REV GACTCGAGTTATTTGTCCT TATTAGTGAGTGCTTTC (序列辨識編號：48) GA 緩衝液-XhoI-TTA 終止-KAS1(核苷酸 2099-2075) rKLAl KLA1- FOR GACCATGGCTTGGGGAGA CAATACGGGTTAC (序列辨識編號：49) GA緩衝液-Ncol(包括 ATG 起始）-CT- A1 (核 苷酸 2946- 2966) KLA1- REV GACTCGAGACCTCCGTTA GGCAAATCC (序列辨識編號：50) GA 緩衝液-Xh〇I-Al (核苷酸 3863-3845) rKAS2- KLA1 KAS2- KLA1- REV CCGTATTGTCTCCCCATTT GTCCTTATTAGTGAGTGCT TTC (序列辨識編號：51) Al(核苷酸2961-2946)-KASl(核苷酸 2099-2075) KAS2- KLA1- FOR CACTAATAAGGACAAATGG GGAGACAATACGGGTTAC (序列辨識編號：52) KAS 1(核苷酸 2084-2099)-Α1(核苷酸 2946-2966) rKASl- KsAl KAS1- KsAl- FOR1 CATGGATCTGAGACCGCAT GGGCTGATCCACTTTTCTT GTTGGATGCCGAT (序列辨識編號：53) AS(核苷酸2025-2057)-A 1(核苷酸 2970-2987)- KAS1- KsAl- FOR2 CCATGGCTTTGAATACCGG AGTCAGCTTTGCAAACTAT ACAGCGCATGGATCTGAG ACCGCA (序列辨識編號：54) NcoI-CT-AS(核苷酸 1989-2042) KAS1- KsAl- REV CTCGAGGAATGATTCGGA AAGTGTT (序列辨識編號：55) XhoI-Al(核苷酸 3663-3644) r多重 KAS-KLA1 多重 FORI CCATGGCTGATTATAGCTG GAATTCCCAGGTAGTCAGC TTTGCAAACTATACA (序列辨識編號：56) NcoI-CT-KAS4(核苷酸 1857-1880)- KAS3(核 苷酸 2001- 2021) 多重 FOR2 CTTTGCAAACTATACAGCG CATGGATCTGAGACCGCAT GGGCTGATCCACTT (序列辨識編號：57) KAS3(核苷酸 2006-2057) 多重 FOR3 ATGGGCTGATCCACTTCTG AATTCTTATTGGGGCGAGA TCGGCAATATTACC (序列辨識編號：58) KAS3(核苷酸 2042-2060)-KAS5(核苷酸 2223-2240)-KAS6(核 苷酸 2403-2417) 多重 FOR4 GATCGGCAATATTACCCAT ATTGGTGCTCATTACGCTT GGGGAGACAATACG (序列辨識編號：59) G-KAS6(核苷酸 2403-2435)-GCT (Ala 間隔區）-A 1(核苷酸 2946- 2960) 多重 REV CTCGAGACCTCCGTTAGGC AAATCCAATGCCGGTGTTA TCAGATAGTTGTCA (序列辨識編號：60) Xho-Al(核苷酸 3863-3818) *來自具離胺酸特異性的半胱胺酸蛋白酶基因序列登錄號U75366之核苷酸 (nt)序列號 89 201138813 重組蛋白之表現作用與純化作用。藉由異丙基β-D-硫 代半乳糖苷酶(IPTG)的誘導作用，自pET28::KLAl(KAS2、 KAS2-LA1、KAS1-SA1、多重KAS-KLA1)建構物表現重組 蛋白。所產生的所有重組蛋白係6-組胺酸標籤融合蛋白之 形式’及在變性條件下，以鎳-NTA純化系統（英杰 (Invitrogene)公司）純化。簡而言之，在37°C，使用大腸桿菌 (£· co//)(DE3)單菌落轉形體，接種含有50微克/毫升的康黴 素之20毫升的盧瑞亞-貝爾塔尼(LuriaBertani)(LB)培養基， 及置於軌道式振盪器上過夜。然後使用該接種體接種含有 50微克/毫升的康黴素之1公升LB。讓該培養物的〇D6()()達到 0.5至0.7(對數中期），然後在37°C及200 rpm的振盪作用下， 以0.1 mM的異丙基IPTG誘發蛋白表現作用2小時。採收 (7，500g)細胞及再懸浮於一種變性結合緩衝液(8M尿素、pH 8.0的20 mM峨酸鈉及500 mM氣化鈉）中’及使用微端設定 為3之一種必能信（Branson)超音波(Sonifier) 250型細胞破 碎機（美國康乃迪克州丹伯里（Danbury)之必能信超音波 (Branson Ultronics)公司）’在冰上以30秒間隔進行3x15秒破 裂之音波處理，然後在4°C及39,000 g離心30分鐘。藉由將 上清液添加至一個預先平衡的鎳-NTA瓊脂管柱，然後以變 性清洗緩衝液(8M尿素、pH 6.0的20 mM磷酸鈉及500 mM 氣化鈉）清洗而洗提出未結合的蛋白，藉此自上清液純化重 組蛋白。然後使用10倍體積的結合緩衝液B清洗該管柱，及 以變性洗提緩衝液(8M尿素、pH 6.0的20 mM磷酸鈉、500 mM氣化鈉及0.5M咪唑）洗提該重組蛋白。以2M尿素_PBS透 201138813 析經純化的蛋白，及儲存於-80°C。 重組蛋白試樣係藉由SDS-PAGE分析，及使用線上的
ProtPararn(http.//au.expasy.org/tools/pr〇tparam.html)測定並 等的分子質量。藉由使用BSA作為一標準品之伯瑞(Bi〇_Rad) 蛋白分析法’測定所有試樣的蛋白質濃度。 免疫作用與小鼠牙周炎模式。如先前所述(3)進行小鼠 牙周炎實驗’及獲得墨爾本大學的動物實驗倫理委員會之 核准。安置在微隔離箱之6至8星期大的BALB/c小鼠（每組12 隻小鼠），係以皮下（皮下注射100微升）方式，以5〇微克之重 組蛋白或RgpA-Kgp複合體中之一者、2X1 〇9個牙齦紫質單胞 菌（P_ 菌株W50的福馬林殺死型細胞或pBS進行 免疫接種；各抗原係在佛氏(Freund)不完全佐劑（ifa)中乳 化。30天之後’在小鼠中補強抗原（皮下注射位於IFA中的 乳化形式）’然後在12天後自延髓後血管叢放血_。在第二次 免疫接種之4天後’對於小鼠投予置於隨意取用的去離子水 中之1毫克/毫升的康黴素(澳洲新南威爾斯的西克瑪艾爾迪 希（Sigma-Aldrich)公司）達7天。在抗生素治療之3天後(放血 之2天後），每隔2天以位於含有2%(重量/體積）叛甲基纖維素 (CMC ;澳洲新南威爾斯的西克瑪艾爾迪希公司）的pg緩衝 液(50 mM Tris鹽酸鹽、150 mM氣化鈉、5 mM氣化辦及5 mM 半胱胺酸鹽酸鹽，pH8.0)中之Ιχίο10個活的牙齦紫質單胞菌 (P. gi·邮να⑻W50 (25微升)接種小鼠四次，及一對照組係 以僅含有2%(重量/體積）CMC的PG緩衝液假感染。在厭氧 操作箱中製備接種體’及立即施用至大臼齒的牙齦緣。二 91 201138813 個星期之後’小鼠領受另夕卜4個劑量（間隔2天）之位於含有 2%(重置/體積）CMC的PG緩衝液中之ιχι〇ιο個活的牙齦紫 質單胞菌（P· 0叩/vW⑷W50細胞(25微升）。藉由在血液瓊脂 上之δ十數，而驗έ登各接種體中的活菌數目。小鼠係飯食一 種軟質粉狀飼料（澳洲的巴拉斯多（Barast〇ck)公司），及安置 在裝配有提高的金屬絲網底部以避免接觸襯墊之籠中。在 最後劑量之4個星期後，小鼠自延髓後血管叢放血及犧牲， 及移除上頜骨及將其對切，其巾-半(右半)仙於測量齒槽 骨質流失，及另一半（左半）係用於即時PCR。 在去離子水中蒸煮右半邊的上頜骨（1分鐘），以機械方 式除肉，及浸泡於2%(重量/體積）的氫氧化鉀（於25。〇達16 小時）。然後清洗半邊的上頜骨（以去離子水清洗二次），及 浸泡於3%(重量/體積）的過氧化氫(於25它達6小時半邊的 上領骨在清洗（以去離子水清洗二次)之後，錢1%(重量/ 體積）的含水甲基藍染色，及使用奥立西亞（〇1^幻八)第32 版生物報導(BioReport)軟體(澳洲新南威爾斯之澳洲奥林巴 斯(CMympus)私人有限公司），以裝在解剖顯微鏡上的奥林巴 斯(Olympus) DPH數位相機拍攝各半邊上領骨的頻面觀之 數位影像，崎估水平骨質流失。水平f該錢發生在 垂直於齒槽骨察廳)的水平面，而造錢高度降低之流 I將各半邊的上頜骨對齊’藉此將各牙齒影像的 大臼齒 頻阜與舌阜重#;及該影㈣在框上的微米尺度存在下拍 攝，藉此可標準化各f彡像之測量。使料立西亞(〇lysia) 第3.2版生物報導(BioRepon)軟體的成像軟體，測量各大白 92 201138813 齒自牙骨質釉質交界至ABC之面積。骨質流失測量係由單 一審查人使用一種隨機化盲式操作程序測定二次。 藉由ELISA測定亞型抗體。以三重複方式進行酵素結 合免疫吸附分析法（ELISA)而測定小鼠血清的亞型抗體反 應’其係使用位於含有0.1%(體積/體積）妥文（Tween) 20 (PBST)及pH 7.0的經磷酸鹽緩衝的食鹽水(pBs)(0·〇!μ磷酸 氫二鈉、1.5 mM麟酸二氫鉀、0.15Μ氣化鈉）中之福馬林殺 死型牙齦紫質單胞菌（ρ·"叩/⑽/的W50的5微克/毫升溶 液’塗佈平底式聚乙烯基微量滴定盤的孔（美國維吉尼亞州 麥克林(McLean)的戴納泰克實驗室（Dynatech Laboratories) 公司）。在移除該塗佈溶液之後’在孔中添加含有2%(重量/ 體積)脱脂奶粉之PBST，以在室溫中封阻未塗佈的塑料1小 時。以PBST清洗各孔四次之後，在各孔中添加小鼠血清在 含有0.5%(重量/體積）脱脂奶（SK-PBST)的PBST中之系列稀 釋液，及於室溫中培養16小時。以PBST清洗各孔六次之 後，在51^?6511中添加經1/2,〇〇〇稀釋作用之對抗小鼠1§]^、 IgA、IgG卜IgG2a、IgG2b或IgG3的山羊IgG(澳洲新南威爾 斯的西克瑪公司）’及讓其在室溫中結合2小時。以pbst清 洗平皿六次’在各孔中添加位於SK-PBST中之經1/5,〇〇〇稀 釋作用的辣根過氧化酶接合型兔抗山羊免疫球蛋白（澳洲 新南威爾斯的西克瑪公司），及在室溫中培養1小時。aPBST 清洗各孔六木之後’藉由在各孔中添加100微升的abts受 質[pH 4.0之位於含有0·005%(體積/體積)過氧化氫的8〇 mM 擰檬酸中之0.9mM的2,2，-聯氮基-雙-(3_乙基苯并噻唑啉_6) 93 201138813 磺酸]，而檢測結合抗體。使用一種微量平孤讀數器（伯瑞 (Bio-Rad)微量平皿讀數器塑號45〇) ’測量在415奈米的光學 密度。 SDS-PAGE凝膠電泳及西方墨點法。使用XCdl Surelock小型槽式電泳系統，分析重組蛋白（1〇微克）。重組 蛋白係與20微升的還原型試樣緩衝液（10%[重量/體積] SDS、0.05%[重量/體積]漠酚藍、25%[體積/體積]甘油及 0.05%[體積/體積]2-巯基乙醇）混合。以丨5M Tris鹽酸鹽將 pH值調整至pH 8.0 ’然後該溶液在1〇〇它加熱5分鐘◊將重 組蛋白（10微克7道）添加至諾維科斯（Novex) 12%(重量/體 積）Tris-甘胺酸預製小型凝膠上，及使用一種諾維科斯 (Novex)電泳系統（美國加州聖地牙哥的諾維科斯(N〇vex)公 司）’使用30至50毫安培的電流及125伏特的電位差進行電 泳。使用0.25%重量/體積的考馬斯(c〇〇massie)藍R25〇，而 使蛋白顯現。
KgP蛋白酶活性位址肽（KAS-2)序列之抗原決定基分 析。藉由使用Fmoc化學之準固相肽合成程序，在一種多中 心型肽合成作用系統（澳洲墨爾本的開隆技術（Chiron Technologies)公司）上，合成n端生物素化的重疊性八殘基 肽(偏移一個殘基及重疊七個殘基)(澳洲墨爾本的開隆技術 公司）’而測定用於具離胺酸特異性的蛋白酶活性位址肽 KAS2(序列辨識編號：28的433至468)之抗體結合位址。位 於pH 7.4的0.1M PBS中之生物素化肽(5微克/毫升），係於4 C與經鍵破印白素塗佈的平皿_ (澳洲新南威爾斯的能肯 94 201138813 (Nunc)公司）結合過夜。以pBST清洗各孔四次之後，依據開 隆技術公司之說明，使用位於含有〇 i %體積/體積妥文 (Tween) 20 (SK-PBST)之pH 7.4的0.1M PBS之 1%重量/體積 的無脂肪脱脂奶粉中之經i : 1〇〇〇稀釋作用的小鼠血清，藉 由ELISA進行平皿結合型肽的抗原決定基之圖譜製作。以 PBST清洗各孔六次之後’在SK_pBST^添加經1/2 〇〇〇稀釋 作用之對抗小鼠IgG的山羊igG(澳洲新南威爾斯的西克瑪 公司），及讓其在室溫中結合2小時。以PBST清洗平皿六次， 在各孔中添加位於SK-PBST中之經1/5,000稀釋作用的辣根 過氧化酶接合型兔抗山羊免疫球蛋白（澳洲新南威爾斯的西 克瑪公司）’及在室溫中培養！小時。以PBST清洗各孔六次 之後，藉由在各孔中添加1〇〇微升的ABTS受質[pH 4.0之位 於含有0.005%(體積/體積）過氧化氫的8〇 mM擰檬酸中之0.9 mM的2,2’-聯氮基-雙-(3-乙基苯并〇塞唾琳_6)續酸]，而檢測結 合抗體。使用一種微量平皿讀數器（伯瑞(Bi〇_ Rad)微量平皿 讀數器型號450)，測量在415奈米的光學密度。 統計分析。使用單因子變異數分析(ANOVA)與唐奈特 氏（Dunnett) T3檢定（供視窗（Windows)使用之SPSS第12 版），進行骨質流失數據之統計分析。使用採用SPSS軟體(供 視窗使用之SPSS第12版)之學生t檢定，統計分析IgA、igM 及IgG亞型抗體力價。 第2例 重組蛋白（KsAl、KLA1、KAS1- KsAl及KAS2-KLA1) 之特徵分析與純化作用。為進行Kgp黏連蛋白A1域片段及 95 201138813 嵌合體Kgp蛋白酶與Kgp黏連蛋白A1域片段對抗牙齦紫質 單胞菌（尸· 感染的保護能力之特徵分析，吾等表 現與純化下列重組蛋白：KsA1、KLA1、KAS 1 -KsA1及KAS2-KLA卜使用鎳螯合親和力層析法，自包涵體純化重組蛋白 (KsAl與KLA1)及組嵌合體蛋白（KASl-KsAl與KAS2-KLA1);及藉由SDS-PAGE分析純化後的蛋白（第丨圖）。各個 純化後的重組蛋白係構成具有對應於KAS2-KLA1、 KLA1、KsAl 及 KASl-KsAl 的分子量 40、36、31 及 32 千道 爾頓之一個主要的蛋白帶狀，及該等重量係對應於使用 ProtParam所計算之組胺酸標籤重組蛋白的分子質量。為進 行重組蛋白的免疫原性之特性分析，使用KsAl、KLA1、 KASl-KsAl及KAS2-KLA1免疫接種小鼠，及使用血清來探 測經KAS2肽塗佈的平jul及經福馬林殺死型牙齦紫質單胞 菌（P· Wngiva/i\s)W50細胞塗佈的平皿（第2圖）。發現重組嵌 合體蛋白KASl-KsAl與KAS2-KLA1抗血清辨識KAS2肽（第 2A圖），及其水平係與KAS2特異性抗血清(KAS2-白喉類毒 素接合物）以及福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（/3. W50細胞相近（第2B圖）。然而，對抗重組蛋白KLA1的抗血 清僅辨識殺死型牙齦紫質單胞菌（尸· ⑷W50細胞 (第2B圖）。 第3例 重組蛋白（KsAl、KLA1、KASl-KsAl及KAS2-KLA1) 的免疫接種作用在小鼠牙周炎模式中對於牙齦紫質單胞菌 (尸· gingiva/⑷所誘發的齒槽骨質流失之效應。使用以Baker 96 201138813 等人的報導(4)為基礎之一種牙周骨質流失的改良式小鼠模 式，使用重組蛋白 KsAl、KLA1、KASl-KsAl 及 KAS2-KLA1、福馬林殺死型牙酿紫質單胞菌（/>.裒/叹丨⑽仏）菌株 W50及RgpA-Kgp複合體，以測定與比較所引發對抗牙酿紫 質單胞菌（P. gingival)誘發型齒槽骨質流失之保護作用。 以重組蛋白 KsAl、KLA1、KASl-KsAl 或 KAS2-KLA1、 RgpA-Kgp複合體或福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（尸· g/«g/va仏)菌株W50(FK-W50)細胞或僅PBS佐劑免疫接種小 鼠（第0天與第30天）’然後以口服方式進行活的牙齦紫質單 胞菌（尸· ⑷W50之刺激。以重組抗原、RgpA-Kgp複 合體及FK-W50細胞中之所有者所進行之免疫接種作用，保 護BALB/c小鼠免於牙酿紫質單胞菌（ρ· ghg/vWs)所誘發的 齒槽骨質流失，因該等動物所展現的骨質流失係顯著（p< 0.001)低於經PBS免疫接種組（第3圖）。然而，經KAS2-KLA1 免疫接種的小鼠之骨質流失，係顯著低於經KLAl(p< 0_01)、KsAl(p<0.001)、RgpA-Kgp複合體(p<〇.〇〇i)、fk-W50 細胞(P<0.001)免疫接種的小鼠及非刺激型小鼠(P<0.001)。 經KAS2-KLA1與KASl-KsAl免疫接種的小鼠之間，其等的 骨質流失並無顯著差異。而且，經KASl-KsAl免疫接種的 小鼠所展現之骨質流失，係顯著低於非刺激型小鼠(p<0.01) 與經RgpA-Kgp複合體免疫接種的小鼠（p<〇.〇5)，但與經 KsAl、KLA1與FK-W50免疫接種的小鼠並無顯著不同。在 經KsA卜KLA卜RgpA-Kgp複合體及FK_w5〇免疫接種的小 鼠之間，其等的骨質流失並無顯著不同。 97 201138813 第4例 在小鼠牙周炎模式中藉由重組蛋白（KsAl、KLA卜KAS1-KsAl及KAS2-KLA1)的免疫接種作用所引發的抗體亞型反 應。在口腔接種活的牙齦紫質單胞菌（户· 仏)細胞之刺 激之前與之後，將小鼠放血及藉由離心作用收集血清。第4 圖顯示在小鼠牙周炎模式中，就各免疫原（KsAl ' KLA1、 KAS1 -KsA1或KAS2-KLA1或福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌 (尸· g//20va/⑷菌株W50(FK-W50)細胞）而言之對於福馬林殺 死型牙齦紫質單胞菌（P. 細胞的抗體亞型反 應性。所有的保護性免疫原皆誘發對於FK-W50的高IgG抗體 力價。而且，各保護性免疫原所誘發的主要抗體亞型為 IgGl，及僅微弱的免疫反應性IgG2a、IgG2b及IgG3 FK-W50-特異性抗體（第4圖）。各免疫原在口腔接種之前（第4A圖）與 口腔接種之後（第4B圖）所誘發的主要抗體亞型為IgGl。 第5例 KAS2(433-468)之抗原決定基圖譜製作。合成用於 KAS2(433至468)的重疊性生物素化八殘基肽（偏移一個殘 基及重疊七個殘基），及用於塗覆經鏈黴卵白素塗佈的平 皿。然後使用來自經KASl-KsAl、KAS2-KLA1及KAS2-白 喉類毒素接合物免疫接種的小鼠之抗血清，辨識抗體結合 抗原決定基（第5圖將光學密度(415奈米）高於背景之二倍 增加，視為陽性抗體反應(OD閾值）。抗血清係辨識衍生自 序列辨識編號28的下列肽序列：即KASl-KsAl辨識肽 435-442、436-443、445-452、446-453 及 447-454(OD 閾值 98 201138813 =0.07，第 5A圖），而 KAS2-KLA1辨識肽435-442、447-454 及448-455(閾值ID=0.07，第5A圖）。其暗示辨識數個最小抗 原決定基，即肽436-442(VSFANYT及其變異體VGFAN YT)、肽447-452(ETAWAD及其變異體ETSWAD)及肽448-453(TAWADP及其變異體TSWADP)。包含肽436-442抗原決 定基之肽係包括GVSFANYT、GVGFANYT、VSFANYTA及 VGFANYTA。包含肽447-452及/或448-453抗原決定基之肽 係包括 SETAWAD、SETS WAD、ETAWADP、ETSWADP、 TAWADPL及TSWADPL，更詳細地GSETAWAD、GSETSW AD、SETAWADP、SETSWADP、ETAWADPL、ETSWADPL、 TAWADPLL及 TSWADPLL。 第6例 用於與一蛋白接合的KAS與RAS肽之合成作用 肽係以手動方式或使用一種CEM微波肽合成器合成。 全程使用供Fmoc化學所用之標準固相肽合成程序。使用林 克(Rink)連接子所衍生的AM-sure樹脂（美國肯塔基州的愛 波泰克(AAPPTEC)公司），將肽組合成羧基醯胺形式。使用 4當量的Fmoc-胺基酸與6當量的DIPEA，藉由HBTU/HOBt 活化作用而完成偶合作用。藉由位於1M HOBt/DMF中的 20%β底。定移除Fmoc基。 帶有KAS或RAS肽之樹脂係在DMF中膨脹，及藉由位 於含有2%體積/體積的哌啶之DMF中之2%體積/體積的 DBU，移除N端Fmoc基。然後使用5當量的SAMA-Opfp與5 當量的HOBt，以S-乙醯基酼基乙酸(SAMA)基衍生N端胺 99 201138813 基。藉由三硝基苯磺酸(TNBSA)試驗監測該反應。當TNBSA 試驗為陰性時’清洗樹脂（5xDMF、3xDCM及3x二乙醚）。 然後在真空中乾燥樹脂。依肽的精胺酸含量而定，使用 TFA :笨酚：TIPS : EDT :水(92 : 2 : 2 : 2 : 2)切開雞尾酒 2.5小時或4小時’而將肽自樹脂載體切開。在切開之後’ 藉由過濾作用移除樹脂，及在氮氣流下將濾液濃縮至約1毫 升。肽產物在冷的乙醚中沉澱之後，將其等離心及清洗三 次。將肽沉澱物溶於含有〇. 1%體積/體積的TFA之5至10毫升 的水中，及藉由離心移除不溶性殘餘物。藉由RP-HPLC純 化該等肽。 可使用數種不同的化學部分而衍生用於與蛋白接合之 肽’其等將引入反應性基團諸如自化物（溴代基、氣代基及 峨代基）、馬來醯亞胺基、琥珀酿亞胺基、肼基、將、硫醇， 其等然後可經由其本有的半胱胺酸殘基或已衍生具有之容 許化學接合作用進行的互補性反應基團，將所衍生的肽與 一蛋白諸如KgpAl接合，而形成一種肽_蛋白接合物。 SAMA-肽與KA1之接合作用。在含有位於經磷酸鹽緩衝 的食鹽水(0.1M填酸納、0.9%氣化鈉及pH 7.4)中之10毫克/毫 升之RgpA-Kgp複合體的重組KA1或其他黏連蛋白域之一溶 液中，添加0.1毫升之位於DMF中的間-馬來醯亞胺基苯曱醯 基-N-羥基琥珀醯亞胺酯(MBS)之1%重量/體積溶液。在3〇分 鐘後，移除未反應的MBS ,及使用在接合緩衝液(〇1M磷酸 鈉、5mMEDTA及卩116.0)中平衡之一個1)1：)1〇管柱(澳洲新南 威爾斯的法瑪西亞(Pharmacia)公司），藉由凝膠過濾作用收集 100 201138813 經MBS改質的ΚΑΙ。將純化後的SAMA-肽（1.3微莫耳)溶於含 有0.5M Tris及pH 6.0的2 mM EDTA之200微升的6M鹽酸胍 中；及以800微升的MilliQ水稀釋，及藉由添加溶於MimQ水 中之25微升的2M羥胺(40當量）而在原地進行去保護作用。所 收集的MBS-ΚΑΙ立即與經去保護的SAMA-肽反應，及在室 溫攪;摔1小時。使用在pH 7.4的PBS中平衡之一個PD 10管柱， 藉由凝膠過濾作用將肽-KA1接合物與未反應的肽分離，及加 以冷凍乾燥。使用愛爾曼氏(Ellmans)試驗監測該反應。 第7例 抗體之製備作用。藉由皮下投予的蛋白之免疫接種作 用，在小鼠中產生對於重組蛋白之多株抗血清。在第〇天以 佛氏(Freund)不完全佐劑中的25微克蛋白及在第30天以佛 氏(Freund)不完全佐劑中的25微克蛋白免疫接種小鼠。使用 標準程序進行免疫接種作用。獲得具有對抗該蛋白的高力 價之多株抗血清。若需要，則使用標準程序獲得以特異性 方式對抗重組蛋白之單株抗體。 第8例 用於產生抗體之免疫作用。6至8星期大的BALB/c小鼠 或CD1(瑞士遠交系小鼠)(每組10隻小鼠），係以皮下方式投 予（皮下注射100微升）的50微克KAS2-LA1嵌合體免疫接 種，及抗原係在佛氏(Freund)不完全佐劑（IFA)中乳化。30 天之後，在小鼠中補強抗原（皮下注射位於IFA中的乳化形 式），及在12天犧牲小鼠及自心臟放血而收集血清。 藉由ELISA測定亞型抗體。以三重複方式進行酵素結 101 201138813 合免疫吸附分析法（ELIS A)而測定小鼠血清的亞型抗體反 應，其係使用位於含有0.1%(體積/體積）妥文（Tween) 20 (PBST)及pH 7.0的經磷酸鹽緩衝的食鹽水(PBS)(0.01M磷酸 氫二鈉、1.5 mM磷酸二氫鉀、0.15M氣化鈉）中之KAS2-LA1 嵌合體或福馬林殺死型牙酿紫質單胞菌（P. W50 或RgpA-Kgp複合體的5微克/毫升溶液，塗佈平底式聚乙烯 基微量滴定盤的孔（美國維吉尼亞州麥克林(McLean)的戴 納泰克實驗室（Dynatech Laboratories)公司）。在移除該塗佈 溶液之後，在孔中添加含有2%(重量/體積）脱脂奶粉之 PBST，而在室溫中封阻未塗佈的塑料1小時。以PBST清洗 各孔四次之後，在各孔中添加小鼠血清在含有0.5%(重量/ 體積）脱脂奶（SK-PBST)的PBST中之系列稀釋液，及於室溫 中培養16小時。以PBST清洗各孔六次之後，在SK-PBST中 添加經1/2,000稀釋作用之對抗小鼠igM、IgA、IgGl、 IgG2a、IgG2b或IgG3的山羊IgG(澳洲新南威爾斯的西克瑪 公司），及讓其在室溫中結合2小時。以PBST清洗平ja六次， 在各孔中添加位於SK-PBST中之經1/5,000稀釋作用的辣根 過氧化酶接合型兔抗山羊免疫球蛋白（澳洲新南威爾斯的 西克瑪公司），及在室溫中培養1小時。以PBST清洗各孔六 次之後，藉由在各孔中添加1〇〇微升的ABTS受質[pH 4_0之 位於含有0.005%(體積/體積）過氧化氫的80 mM檸檬酸中之 0.9 mM的2,2’-聯氮基-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6)磺酸]，而檢 測結合抗體。使用一種微量平皿讀數器（伯瑞(Bio_Rad)微量 平孤讀數器型號450)，測量在415奈米的光學密度。 102 201138813 藉由重組蛋白KAS2-KLA1的免疫接種作用所誘發之 抗體亞型反應。CD1(瑞士）小鼠係經KAS2-LA1嵌合體免疫 接種，放血及藉由離心收集血清。第6圖顯示對於KAS2-LA1 嵌合體、福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（P. W50 細胞及RgpA-Kgp複合體之抗體亞型反應性。KAS2-LA1嵌 合體誘發強力的IgG抗體及其主要的IgGl抗體反應係辨識 KAS2-LA1嵌合體，及與福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（P. g/ngiVWi) W50細胞及RgpA-Kgp複合體強烈地交叉反應 (第6圖）。而且，KAS2-LA1後合體僅誘發弱的免疫反應性 IgG2a、IgG2b及IgG3抗原特異性抗體（第6圖）。 第9例 建立Kgp結構模式及識別可達活性位址表面之序列 吾等的研究已顯示Kgp蛋白酶活性位址肽係具有高度 免疫原性’及引發對抗牙酿紫質早胞菌（R 所誘 發的骨質流失之高水平保護作用。為試圖識別出作為疫苗 候選者之其他蛋白酶活性位址肽，使用Sybyl7.3内的 Orchestrar軟體組，建立Kgp的催化域模式（第7圖）。該模式 係以來自牙齦紫質單胞菌（尸.之RgpB蛋白酶的 PDB結構lcrv為基礎，該蛋白所具有的成對一致性為 23.58%及Z分數為25_09(—種高信賴度模式）。Meta-PPisp蛋 白交互作用伺服器預測Kgp的二個蛋白-蛋白交互作用表 面：受質結合表面（如在RgpB中者）及Kgp所特有的第二表 面。RgpB與Kgp模式之間的主要差異，係在於在Kgp中無法 模式化之構成第二交互作用表面的環及一個具有19個殘基 103 201138813 的間隙（纈胺酸526至苯丙胺酸545)係落在第二交互作用表 面内。第7圖顯示Kgp模式，其中較厚的帶狀係顯示之 蛋白S#活性位址周圍的可達表面序列，發現該等可達表面 序列係天門冬胺酸388-麵醯胺394、白胺酸421-丙胺酸423、 丙胺酸443-麩胺酸447與丙胺酸451、天冬醯胺酸510-色胺酸 513及異白胺酸570-甘胺酸577與酪胺酸58(^自該模式（第6 圖）明顯可見’連同KAS2(A)的其他三種序列KAS4(天門冬胺 酸388-纈胺酸395)(8)、1(^5(天冬醯胺酸51〇-天門冬胺酸 516)(C)及KAS6(異白胺酸570-色胺酸580)(D)係顯著的，及 其長度足以作為疫苗標的。因此，可產生一種重組嵌合體蛋 白，其依序具有該等肽中的各者及連接至KLA1的N端，以 產生多重KAS-KLA1 ’其可用於引發一免疫反應及因此保護 對抗牙酿紫質單胞菌（P· 的相關疾病或病況。 第10例 用於模式化精胺酸-X-蛋白酶來識別側臨催化性位址的免 疫原性區域之方法 依據Eichinger A、Beisel HG、Jacob U、Huber R、 Medrano FJ、Banbula A、Potempa J、Travis J、Bode W.於 1999年10月15日期刊“EMBO J.”第18(20)期第5453-62頁之 “牙齦菌蛋白酶R之晶體結構：具有一種凋亡蛋白酶樣摺疊 之一種精胺酸特異性細菌半胱胺酸蛋白酶(Crystal structure of gingipain R: an Arg-specific bacterial cysteine proteinase with a caspase-like fold)”乙文中之方法，測定精胺酸-X蛋白 酶的三維結構。 104 201138813 第11例 下列係一種含有抗體的牙膏調配物之一實例 成分 %重量/重量 磷酸二鈣二水合物 50.0 甘油 20.0 羧曱基纖維素鈉 1.0 月桂基硫酸鈉 1.5 月桂醯基肌胺酸納(Sodium lauroyl sarconisate) 0.5 調味劑 1.0 糖精鈉 0.1 葡萄糖酸氣已啶 0.01 葡聚糖酶 0.01 含有特異性抗體之山羊血清 0.2 水 餘量 第12例 下列係一種牙膏調配物之一實例 〇 成分 %重量/重量 磷酸二鈣二水合物 50.0 山梨糖醇 10.0 甘油 10.0 羧曱基纖維素鈉 1.0 月桂基硫酸鈉 1.5 月桂醯基肌胺酸鈉 0.5 調味劑 1.0 糖精鈉 0.1 單氟填酸納 0.3 葡萄糖酸氣已啶 0.01 葡聚糖酶 0.01 含有特異性抗體之牛血清 0.2 水 餘量 105 201138813 第13例 下列係一種牙膏調配物之一實例。 成分 %重量/重量 磷酸二鈣二水合物 50.0 山梨糖醇 10.0 甘油 10.0 羧曱基纖維素鈉 1.0 月桂醯基二乙醇醯胺 1.0 蔗糖單月桂酸酯 2.0 調味劑 1.0 糖精納 0.1 單氟磷酸鈉 0.3 葡萄糖酸氣已啶 0.01 葡聚糖酶 0.01 含有特異性抗體之牛乳Ig 0.1 水 餘量 第14例 下列係一種牙膏調配物之一實例 〇 成分 %重量/重量 山梨糖醇 22.0 愛爾蘭紅藻 1.0 氫氧化鈉(50%) 1.0 甲基乙烯基醚-馬來酸酐共聚物(Gantrez) 19.0 水(去離子） 2.69 單氟磷酸鈉 0.76 糖精納 0.3 焦磷酸鹽 2.0 水合氧化鋁 48.0 調味油 0.95 小鼠單株抗體 0.3 月桂基硫酸鈉 2.0 106 201138813 第15例 下列係一種液態牙膏調配物之一實例。 成分 %重量/重量 聚丙稀酸納 50.0 山梨糖醇 10.0 甘油 20.0 調味劑 1.0 糖精鈉 0.1 單氟填酸納 0.3 葡萄糖酸氣已啶 0.01 乙醇 3.0 含有特異性抗體之馬Ig 0.2 亞油酸 0.05 水 餘量 第16例 下列係一種漱口水調配物之一 實例。 成分 %重量/重量 乙醇 20.0 調味劑 1.0 糖精鈉 0.1 單氟磷酸鈉 0.3 葡萄糖酸氣已啶 0.01 月桂醯基二乙醇醯胺 0.3 含有特異性抗體之兔Ig 0.2 水 餘量 107 201138813 第17例 下列係一種漱口水調配物之一實例。 成分 %重量/重量 曱基乙稀基醚-馬來酸酐共聚物(Gantrez) S-97 2.5 甘油 10.0 調味油 0.4 單氟磷酸鈉 0.05 葡萄糖酸氣已咬 0.01 月桂醯基二乙醇醯胺 0.2 小鼠單株抗體 0.3 水 餘量 第18例 下列係一種含片調配物之一實例 〇 成分 %重量/重量 糖 75-80 玉米糖漿 1-20 調味油 1-2 氟化鈉 0.01-0.05 小鼠單株抗體 0.3 硬脂酸酯鎂 1-5 水 餘量 第19例 下列係一種牙齦按摩膏調配物之一實例。 成分 %重量/重量 白礦脂 8.0 丙二醇 4.0 硬脂醇 8.0 聚乙二醇4000 25.0 聚乙二醇400 37.0 蔗糖單硬脂酸酯 0.5 葡萄糖酸氣已0定(Chlorohexidine gluconate) 0.1 小鼠單株抗體 0.3 水 餘量 108 201138813 第20例 下列係一種口香糖調配物之一實例。 成分 %重量/重量 原膠 30.0 碳酸鈣 2.0 結晶型山梨糖醇 53.0 甘油 0.5 調味油 0.1 小鼠單株抗體 0.3 水 餘量 第21例 下列係一種藥學調配物之一實例 〇 成分 %重量/重量 人化特異性單株抗體 10 經磷酸鹽緩衝的無菌食鹽水 90 第22例 下列係一種牙周凝膠調配物之一 實例。 成分 %重量/重量 普朗尼克F127 20.0 硬脂醇 8.0 特異性抗體 3.0 膠態二氧化矽(愛洛矽(Aerosil) 200) 1.0 葡萄糖酸氮已α定 0.1 水 餘量 109 201138813 第23例 下列係一種牙周凝膠調配物之一實例。 成分 %重量/重量 普朗尼克F127 20.0 硬脂醇 8.0 特異性抗體 3.0 膠態二氧化石夕(愛洛石夕(Aerosi丨）200) 1.0 雙羥萘酸甲嘧烯酚 0.1 水 餘量 應瞭解雖然在此已詳細說明本發明，該等實例僅用於 說明之目的。該等嫻熟分子生物學、牙科診斷及相關學科 技藝者所顯而易見之本發明實施例的其他改質作用，係意 欲涵蓋於本發明的範圍内。 將瞭解在本說明書中所揭露與界定之本發明，係擴及 二或多個所提及或自内文或圖式中明顯可見的個別特性之 所有任擇組合。所有的該等不同組合構成本發明的各種任 擇部分。 參考文獻 1. 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Arch Oral Biol 39:1035-1040. 將瞭解在本說明書中所揭露與界定之本發明，係擴及 二或多個所提及或自内文或圖式中明顯可見的個別特性之 所有任擇組合。所有的該等不同組合構成本發明的各種任 擇部分。 【圖式簡單說明】 第1圖顯示重組Kgp蛋白之SDS-PAGE凝膠的考馬斯 (Coomassie)藍染色。第 1道為 KAS2-KLA1，第 2道為 KLA1， 第3道為KsAl，第4道為KASl-KsAl。分子量標準係以千道 爾頓表示。
第2圖顯示抗體對於KAS2肽與福馬林殺死型牙齦紫質 單胞菌（尸.ghg/va/⑷W50細胞之辨識作用。（A)在ELISA 111 201138813 中’ KAS2狀係以對抗福馬林殺死型牙銀紫質單胞菌（户 客細胞（FK-W50)、重組蛋白 KASl-KsAl、 KAS2-KLA1及合成的KAS2-DT接合物及PBS之抗血清探 測。（B)在ELISA中，福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（p gi’ng/va/k)W50細胞係以對抗福馬林殺死型牙齦紫質單胞 菌（P_ g/«giva//‘〇W50 細胞（FK-W50)、重組蛋白1<：八51-KsAl、KAS2-KLA1、KLA1及PBS之抗血清探測。抗體反 應係以所得的ELISA力價OD4,5減去二倍背景水平之形式表 示，而各力價代表三個數值的平均值±標準偏差。 第3圖顯示在經重組蛋白與重組嵌合蛋白、福馬林殺死 型牙齦紫質單胞菌（尸.⑷及僅佐劑(PBS、IFA)免疫 接種的小鼠或非口腔感染型（非刺激型）小鼠中，牙齦紫質單 胞菌（尸.gingiva/⑷所誘發之大臼齒的水平骨質流失。在該 圖中 ’ KAS2-KLA1係示為 AS2-LA1，KLA1係示為 LA1， KAS1- KsAl係示為ASl-sAl，KsAl係示為sAl。骨質流失 之測量值係自左側與右側上頜骨之各大臼齒頰側的牙骨質 釉質交界(CEJ)至齒槽骨嵴(ABC)所測得的面積之平均值， 及以平方毫米（mm2)為單位。藉由李文(Levene)變異數同質 性檢定測得數據為常態分佈，及係以平方毫米為單位之平 均值(n=12)形式呈現，及使用單因子變異數分析與唐奈特氏 (Dunnett) T3檢定加以分析。*係指骨質流失顯著（ρ〈〇.〇〇ι) 低於對照（感染）組之組別。t係指骨質流失顯著(P<0.001)高 於AS2-LA1組之組別。 第4圖顯示在牙周炎模式中之經免疫接種小鼠的血清 112 201138813 抗體亞型反應。血清係來自小鼠；經重組蛋白KsAl、 KLA1、KAS1- KsAl與KAS2-KLA1免疫接種之a(口腔接種 作用之前）與B(口腔接種作用之後）及福馬林殺死型牙齦紫 質單胞菌（尸菌株W50係用於ELISA中，及以福馬 林殺死型牙齦紫質單胞菌（尸.菌株W50作為所吸 附的抗原。抗體反應IgG(黑色線條）、IgGl(灰色線條）、 IgG2a(白色線條）、IgG2b(橫紋線條）、IgG3(斜紋線條），係 以所得的ELISA力價（log2)減去背景水平之形式表示，而各 力價代表三個數值的平均值±標準偏差。 第5圖顯示肽特異性抗體對於代表KAS2肽序列433至 468的重疊肽之反應性之PEPSCAN分析。（A)以KAS1-KsAl(白色線條）、KAS2-KLA1(黑色線條）抗血清探測之 KAS2重疊肽(偏移卜重疊7)。（B)以KAS2-DT接合抗血清探 測之KAS2重疊肽(偏移，重疊7)。各線條係顯示抗體反應性 (於415奈米的光學密度[〇D])。 第6圖。在辨識牙齦紫質單胞菌（P·#邮似⑼全細胞與 RgpA-Kgp複合體之遠交品系小鼠中，嵌合體八幻丨八丨誘發 一種抗體反應。CD1遠交品系小鼠係以搬合體as2- LA1(50 毫克/小鼠）免疫接種，及所收集的血清係與AS2-LA1(A)、 福馬林殺死型牙齦紫質單胞菌（尸0叩菌株W5〇(B)用 於ELISA中’及以RgpA-Kgp複合體(Q作為所吸收的抗原。 在該圖中，KAS2-KLA1係示為AS2-LA1。測定各同型免疫 球蛋白對於各抗原之力價，及數據係以所得ELISA力價 (‘000)減去二倍背景水平之形式表示，而各力價代表三個數 113 201138813 值的平均值±標準偏差。 第7圖。Kgp蛋白酶之蛋白模式。KAS2[天冬醯胺酸433 至離胺酸468](A)，KAS4[天門冬胺酸388至纈胺酸395](B)， KAS5[天冬醯胺酸510至天門冬胺酸516](C)及KAS6[異白 胺酸570至色胺酸580](D)。 【主要元件符號說明】 (無） 114 201138813 序列表 <110> 口腔健康澳洲(〇「a| Health Australia)私人有限公司 <120> 感染的治療或預防(Treatment 〇r prevention of infection)
<130> 81860014TPG <150> AU2010900846 <151 > 2010-02-26 <160> 90 <170> Patentln(第 3.5 版）
<210> 1 <211> 37 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(porphyr〇monas gingivalis) <220> <221 > <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> 其他崎性 (6)-(61
X可為G或S
其他特性 Μ或A 其他特性
miUL 其他特性 v 其他特性 (26)..(26) X可為A或T 其他特性
跤f?或S 其他特性 W或L 其他特性
或N <400> 1
Leu Asn Thr Gly Val Xaa Phe Ala Asn Tyr Thr Ala His Gly Ser Glu
ThrXaa
Trp Asp
Pro Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Gin Xaa 25
Ly!〇A la Leu
Thr Asn
Xaa Lys 201138813
<210> 2 <211> 37 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220 <221>其他#性 <222> (8)..(8)
<223> X可為V或A <400> 2
Phe Asn Gly Gly ll| Ser Leu Xaa Asn Tyf^hr Gly His Gly Ser Glu^
Leu 30
Thr Ala Trp G^Thr Ser His Phe ^ly Thr Thr His Val Lys Gin
Thr Asn Ser Asn Gin 35
<210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 3
Val Ser Phe Ala Asn Tyr Thr 1 5 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 4
Val Gly Phe Ala Asn Tyr Thr <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 5
Giy
Val Ser Phe Asn Tyr Thr
<210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 6
Gly Val Gly Phe Ala Asn Tyr Thr <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 7 201138813
Val Ser Phe Ala Asn Tyr Thr Ala 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 8
Val Gly Phe Ala Asn Tyr Thr Ala 1 5 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 9 Glu Thr Ala Trp Ala Asp <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 10
Glu Thr Ser Trp Ala Asp 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌丨Porphyromonas gingivalis) <400> 11
Thr Ala Tr 1 p Ala As^ Prc <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 12
Thr Ser Trp Ala As^)
Pro <210> 13 <211> 7 <212> PRT . ·、 <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 13
Ser Glu Thr Ala
Trg Ala Asp <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) 3 201138813 <400> 14
Ser Glu Thr Ser
Tr^» Ala As
P
<210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 15
Glu Thr Ala Trp Ala Asp Pro 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 16
Glu Thr Ser Trp Ala Asp Pro 1 5 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 17
Pro Leu
Thr Ala Trp Ala As呈
<210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 18
Thr Ser
Trp Ala As^)
Pro Leu
<210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 19
Gly Ser Glu Thr Ala Trp Ala Asp
<210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 20
Gly Ser Glu Thr Ser Trp Ala Asp <210> 21 <211> 8 201138813 <ΖΊ^> κΚΤ <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 21
Ser Glu Thr Ala Trp Ala Asp Pro
<210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 22
Ser Glu Thr Ser
Tr|) Ala Asp Pro
<210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 23
Glu Thr Ala Trp Ala Asp Pro Leu 1 5 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 24
Glu Thr Ser Trp Ala Asp Pro Leu 1 5 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 25
Pro Leu Leu
Thr Ala Trp Ala As^
<210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 26
Thr Ser 1
Trp Ala As^)
Pro Leu Leu
<210> 27 <211> 23 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <221 >其他特性 <222> (6)..(6)
<223> X可為G或S 5 201138813 <220>
<221 >其他特性 <222> (18)..(18) <223> X可為S或A <220>
<221 >其他特性 <222> (23)..(23) <223> X可為S或L <400> 27
Leu Asn Thr Gly Val Xaa Phe Ala Asn Tyr Thr Ala His Gly Ser Glu Thr Xaa Trp /^a Asp Pro Xaa
<210> 28 <211> 36 <212> PRT <5l3> 牙奴紫質單胞菌(p〇rphyromonas gingivalis) <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222>
Is 鼸
或A 22m
<223> X可為S或L <220> <221 > <222> <223> 其他特性 M)或v
<220> <221 >其他特性 <222> (25)..(25) <223> X可為A或T <220> <221 >其他特性 <222> (26)..(26) <223> X 计4丁 或S <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223>
其他特性 其他特性 (35)..(35) X可為D或N X可為 <400> 28 Asn Thr Gly Val Xaa Phe Ala Asn Tyr Thr Ala His Gly Ser Glu Thr 1 5 10 15
Xaa Trp Ala Asp Pro Xaa Xaa Thr Xaa Xaa Gin Xaa Lys Ala Leu Thr 20 25 30 6 201138813
Asn Lys X|a Lys
<210> 29 <211> 20 <212> PRT <213> 牙也紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221 > <222> <223> <220> <221> <222> <223>
父可為G或S
x可為S或A 其他特性 (19)..(19)
X可為S或L *他特性 M)或v <400> 29
Val Xaa Phe Ala Asn Tyr Thr Ala His ^ly Ser Glu Thr Xaa Trp Ala^
Asp Pro Xaa Xaa 20
<210> 30 <211> 22 <212> PRT <213> 牙叙紫質單胞菌(poephyromonas gingivalis) <400> 30
Leu Asn Thr Gly Val Ser Phe Ala Asn Tyr Thr Ala His Gly Ser Gli^
Thr Ala Trp Ala〇Asp Pro
<210> 31 <211> 23 <212> PRT <213> 牙故紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <223> k 可或 A <400> 31
Phe Asn Gly Gly lie Ser Leu Xaa Asn Tyr^Thr Gly His Gly Ser Glu^
Thr Ala Trp G^Thr Ser His 201138813
<210> 32 <211> 36 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <221 > <222> <223>
其他崎性 —V
或A <400> 32
Asn G.y G.y ..e Ser Leu Xaa Asn Tyr Thr G.y His Gly Ser Glu Th^ A.a Trp G.y Thr〇Ser His Phe G.y Thr Thr His Va. Lys G.n Leu Thr
Asn Ser Asn Gin 35
<210> 33 <211> 20 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <221 > <222> <223> 其他舞
性 V或A <400> 33 he Ser Leu Xaa A^i Tyr Thr Gly His Gly Ser Glu Thr Ala Trp Gly^
ThrSerHisP5e
<210> 34 <211> 21 <212> PRT <2Ί§> 牙故紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 34
Phe Asn Gly Gly lie Ser Leu Ala Asn Tyr Thr Gly His Gly Ser Glu ^
Thr Ala
Trp Gg〇Thr <210> <211> <212> <213>
35 362 PRT 牙艱紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 35
Ala Asn
Glu Ala Val Val Leu Ala Ala Asp Asn Val Trp Gly As|^
Asn Thr Gly Tyr Gin Phe Leu Leu Asp Ala Asp His Asn Thr Phe Gly 201138813 20 25 30
Ser Val lie Pro Ala Thr Gly Pro Leu Phe Thr Gly Thr Ala Ser Ser 35 40 45
Asn Leu Tyr Ser Ala Asn Phe Glu Tyr Leu lie Pro Ala Asn Ala Asp 50 55 60
Pro Val Val Thr Thr Gin Asn lie lie Val Thr Gly Gin Gly Glu Val 65 70 75 80
Val lie Pro Gly Gly Val Tyr Asp Tyr Cys lie Thr Asn Pro Glu Pro 85 90 95
Ala Ser Gly Lyjs Met Trp lie Ala Gly As^yGly Gly Asn Gin Pro /Ma Arg Tyr As^Asp Phe Thr Phe Gly Lys Lys Tyr Th^Phe Thr
Met Ar^Arg Ala Gly Met G,VJ Asp Gly Thr Asp Met Val Glu Asp 160
Asg Ser Pro Ala Ser Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Ar^Asp Gly Thr Lys lie Lys Glu Gly Leu Thr Ala Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala 165 170 175
Ala Gly Asn His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val 180 185 190
Ser Pri o Lr| Val Cys Lys Asp Val Thr Va, Glu G.y Ser Asn G.u Phe
Ala Pro Val Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ser Val Gly Gin Lys Val Thr 210 215 220
Leu Lys Trp Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro 225 230 235 240
Asn Pro Asn Pro (|I^Thr Th「Leu Ser Glu_§§「Phe Glu Asn Gly ljp_ 250 255
Pro Ala Ser T^Lys Thr lie Asp Ala ^s^Gly Asp Gly His
Lys Pro ^I^Asn Ala Pro Gly lie A^GIy Tyr Asn Ser Asn^ly Cys
Val T^r Ser Glu Ser Phe Gly^Leu Gly Gly Ne Gly Va. Leu Thr Pro
Asp Asn Tyr Leu lie Thr Pro Ala Leu Asp Leu Pro Asn Gly Gly Lys 305 310 315 320 9 201138813
Leu Thr Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His 325 330 335
Tyr Ala Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Thr 340 345 350
Asn Ala Leu Leu Glu Glu Thr lie Thr Ala 355 360
<210> 36 <211> 231 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 36
Phe Leu Leu Asp Ala Asp His Asn Thr Phe^Gly Ser Val lie Pro Ala
Thr Gly Pro Leu Phe Thr Gly Thr Ala Ser Ser Asn Leu Tyr Ser Ala 20 25 30
Asn Phe Glu Tyr Leu He Pro AlaAsn Ala Asp Pro Val Val Thr Thr
Gin Asn lie lie Val Thr Gly Gin Gly Glu Val Val lie Pro Gly Gly 50 55 60
Val Tyr Asp Tyr Cys lie Thr Asn Pro Glu Pro Ala Ser Gly Lys Met 65 70 75 80
Trp lie Ala Gly Asp Gly Gly Asn Gin Pro Ala Arg Tyr Asp Asp Phe 85 90 95
Thr Phe
Glu AlaJBIy Lys Lys Tyr Thr Ph^e Thr Met Arg Arg Gly
Met Gly Asp^ly Thr Asp Met Glu Val Glu Asp Asp Ser Pro Ala Ser
Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Gly Thr Lys lie Lys Glu Gly Leu 130 135 140
Thr Ala Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Ala Gly Asn His Glu 145 150 155 160 175
Tyr Cys Val Glu V^^ys Tyr Thr Ala Gly y^|〇Ser Pro Lys Val Cys
Lys Asp Val Thr Val Glu Gly Ser Asn Glu Phe Ala Pro Val Gin Asn 180 185 190
Leu Thr qi^Ser Ser Val Gly Glr^l^s Val Thr Leu Lys T^)〇gsp Ala
Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly 210 215 220 10 201138813
Thr Thr Leu Ser Glu Ser Phe 225 230 <210> 37 <211> 306 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 37
Trp Gly Asp Asn Thr Gly Tyr Gin Phe Leu Leu Asp Ala Asp His Asn
Thr Phe Gly Ser Val lie Pro Ala Thr Gly Pro Leu Phe Thr Glv Thr 20 25 30
Ala Ser Ser Asn Leu Tyr Ser Ala Asn Phe Glu Tyr Leu lie Pro Ala 35 40 45
Asn Ala Asp Pro Val Val Thr Thr Gin Asn lie lie Val Thr Gly Gin 50 55 60 80 160
Gly Glu Val Val lie Pro Gly Gly Val Tyr Asp Tyr Cys lie Thr Asn 65 70 75
Pro Glu Pro Ala Ser Gly Lys Met Trp lie Ala Gly Asp Gly Gly Asn 85 90 95
Gin Pro Ala A|j^Tyr Asp Asp Phe Thr Phe Glu Ala Gly Lys Thr Phe T^r^Met Arg Arg Ala ^ly^Met Gly Asp Gly Thr A^Met Glu
Val Glu Asp Asp Ser Pro Ala Ser Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp 130 135 140 ^^Thr Lys lie Lys GIUiC|lg Leu Thr Ala ThrThj^he Glu Glu Asp
Gly Val Ala Ala Gly Asn His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr 165 170 175
Ala Gly Val Ser^Pro Lys Val Cys Lys Αξξ Val Thr Val Glu G,y^er
Asn Glu Phe Ala Pro Val Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ser Val Gly Gin 195 200 205
Lys Val Thr Leu Lys Trp Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn 210 215 220
Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Leu Ser Glu Ser Phe Glu 225 230 235 240
Asn Gly lie Pro Alg瑟r Trp Lys Thr lie As^合la Asp Gly Asp Gly挪 11 201138813
His Gly Trp L%gro Gly Asn Ala Progg lie Ala Gly Tyr Asn^j·
Asn Gly Val Tyr Ser Glu Ser^Phe Gly Leu Gly Gly lle Gly Val 280 285
Leu Thr Pro Asp Asn Tyr Leu lie Thr Pro Ala Leu Asp Leu Pro Asn 290 295 300
Gly Gly 305 <210> 38 <211> 362 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 38 Ser Gly Gin Ala Glu lie Val Leu Glu Ala His Asp Val Trp Asn Asp 15 10 15
Gly Ser Gly T私Gin lie Leu Leu Asp 為a Asp His Asp Gin Tg〇Gly
Gin Val lie Pro Ser Asp Thr His Thr Leu Trp Pro Asn Cys Ser Val 35 40 45
Pro Ala Asn Leu Phe Ala Pro Phe Glu Tyr Thr Val Pro Glu Asn Ala 50 55 60
Asp Pro Ser Cys Ser Pro Thr Asn Met lie Met Asp Gly Thr Ala Ser 65 70 75 80
Val Asn He Pro A.aG.y Thr Tyr Asp Phe Ala Ne Ala A.a Pro G.n ^
Ala Asn Ala he Trp lie Ala Gly Gln^Gly Pro Thr Lys Glu As^
Asp Tyr Val Phe Glu Ala Gly Lys Lys Tyr His Phe Leu Met Lys Lys 115 120 125
Met 〒%Ser Gly Asp Gly Th|^^|lu Leu Thr lie Ser Gly Gly
Ser Asp Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Gly Thr Lys lie Lys Glu 145 150 155 160 Gly Leu Thr Ala Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly Asn 165 170 175 His Glu Tyr Cy|^/al Glu Val Lys Tyr Ala Gly Val Ser Pr〇i游
Val Cys L役5ASP Val Thr Val G、澈
Ser Asn Glu Phe Ala Pro Val 205 12 201138813
Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ala Val Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys Trp 210 215 220
Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn 225 230 235 240
Pro Asn Pro Gly Thr Thr Thr Leu Ser Glu Ser Phe Glu Asn Gly lie 245 250 255
Pro Ala Ser T^^ys Thr lie Asp Ala A^GIy Asp Gly His GI^Trp
Lys Pro Gl^sn Ala Pro Gly lie Tyr Asn Ser Asn^Bly Cys
Val Tyr Ser Glu Ser Phe Gly Leu Gly Gly lie Gly Val Leu Thr Pro 290 295 300 320
Asn Tyr Leu lie Th^^o Ala Leu Asp Leu 纟gAsn Gly Gly Lys
Leu Thr Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His 325 330 335
Tyr Ala Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Thr 340 345 350
Asn Ala Leu Leu Glu Glu Thr lie Thr Ala 355 360
<210> 39 <211> 141 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 39
Asp Asp Tyr Val Phe Glu Ala Gly Lys Lys^yr His Phe Leu Met L^s
Lys Met Gly Se^r Gly Asp Gly Thr Glu^Leu Thr lie Ser Glu
Gly Ser Tyr Thr Tyr Thr Val^r Arg Asp Gly Thr L%lle Lys
Glu Gl^ Leu Thr Ala Thr Thr^Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly
Asn His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro 65 70 75 80
Lys Val Cys Lys As^ Val Thr Val Glu Gly Ser Asn Glu Phe Ala Pro
Val Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ala Val Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys 100 105 11(/ 13 201138813
Trp Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro 115 120 125
Asn Pro Asn Pro G.y Thr Thr Thr Leu Ser G.u Ser Phe <210> 40 <211> 119 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 40
Ala Asp Phe Thr Glu Thr Phe Glu Ser Ser Thr His Gly Glu Ala Pro 15 10 15
Ala Glu Trp T^Thr lie Asp Ala Asp Asp Gly Gin Gly Trl^Leu
Cys Leu Ser Ser Gly Gin Leu Asp^Trp Leu Thr Ala His Gly Ser
Asn Val Val Ser Ser Phe Ser Trp Asn Gly Met Ala Leu Asn Pro Asp 50 55 60
Asn Tyr Leu lie Ser Ly^Asp Val Thr Gly Ala Thr Lys Val Lys Tyr 即 Tyr Tyr Ala Val Asn^Asp Gly Phe Pro Gly Asp His Tyr Ala Val Met^ lie Ser Lys Thr Gly Thr Asn Ala Gly As^Phe Thr Val Val Phe Glu
Glu Thr Pro Asn Gly lie Asn <210> 41 <211> 133 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 41
Pro Gin Ser Val Tri lie Glu Arg Thr Val Asg
Leu Pro Ala Gly Thr 15
Lys Tyr Val Ala^Phe Arg His Tyr Asn^s Ser Asp Leu Asn T^r lie
Leu Leu
Asp Asp lie Gin Phe Th^et Gly Gly Ser Pro Thr Pro Thr
Asp 品r Thr Tyr Thr Val Tygrg Asp Gly Thr Lys 11|士ys Glu Gly
Leu Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly Asn His 65 70 75 80
Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro Lys Lys 14 201138813 85 90 95
Cys Val Asn Val Thr Val Asn Ser Thr Gin Phe Asn Pro Val Gin Asn 100 105 110
Leu Thr Ala Glu Gin Ala Pro Asn Ser Met Asp Ala lie Leu Lys Trp 115 120 125
Asn Ala Pro Ala Ser 130
<210> 42 <211> 120 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 42
Ser Ser Ala Ser Tyr lie Asn Rie Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn 80 T^r Leu Val Thr Pro Glu Leu Ser Leu Pro Gly Gly Thr Leu Thr Phe Trp Val Cys Gin Asp Ala Asn Tyr^Ala Ser Glu His Tyr Ala^
Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Ala Asn Ala 100 105 110
Leu Leu Glu Glu Val Leu Thr Ala 115 120
<210> 43 <211> 185 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 43 15
Thr Val Val Thr Ala Pro Glu Ala lie Arg ^I^Thr Arg Ala Gin Gly Thr Trp Tyr Gp〇Lys Thr Val Gin Leu 岛o Ala Gly Thr Lys Ty^ Val
Ala Phe
Ar^ His Phe Gly Cys Thr^Asp Phe Phe Trp lie Asn Leu Asp
Asp Val Val lie Thr Ser Gly Asn Ala Pro Ser Tyr Thr lle 15 201138813
Tvr Arg Asn Asn Thr Gin lie Ala Ser Gly Val Thr Glu Thr Thr Tyr 65 70 75 80
Arg Asp Pro Asp Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Thr Tyr Gly Val Lys Val 85 90 95
Val Tyr Pro Asn Gly Glu Ser Ala lie Glu Thr Ala Thr Leu Asn lie 100 105 110
Thr Ser Leu Ala Asp Val Thr Ala Gin Lys Pro Tyr Thr Leu Thr Val 115 120 125
Val Gly Lys Thr lie Thr Val Thr Cys Gin Gly Glu Ala Met lie Tyr 130 135 140 160
Asg Met Asn Gly Arg Ar^Leu Ala Ala Gly Arg Asn Thr Val Val Tyr
Thr A, Gin G, G.^His Tyr A,a Va. Met V, Va, Val Asp G,
Ser Tyr Val Glu Lys Leu Ala Val Lys 180 185
<210> 44 <211> 119 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <4〇〇> 44
Ala Asp Phe Thr Glu Thr Phe Glu Ser Ser Thr His Gly Glu Ala Pro 15 10 15
Ala Glu Trp Thr^Thr lie Asp Ala Asp Asp Gly Gin Gly Tr|D Leu
Cys Leu Ser Ser Gly Gin Leu A^Trp Leu Thr Ala His Gly Thr
Asn Val Val Ser Ser Phe Ser Trp Asn Gly Met Ala Leu Asn Pro Asp 50 55 60
Asn Tyr Leu lie Ser Lys Asp Val Thr Gly Ala Thr Lys Val Lys Tyr 65 70 75 80
Tyr Tyr Ala Val Asn^Asp Gly Phe Pro Gly Asp His Tyr Ala Val Met^
Phe Thr Val Val Phe Glu lie Ser Lys Thj品ly Thr Asn Ala Gly
Glu Thr Pro Asn Gly lie Asn 115 <210> 45 <211> 131 16 15201138813 wi «d> κΚΤ <213> 牙酿紫質單胞菌(p〇rphyromonas gingivalis) <400> 45
Pro Gin Ser Val Tπ lie Glu Arg Thr Val Asg Leu Pro Ala Gly Thr
Lys Tyr Val Ala^Phe Arg His Tyr Asn^s Ser Asp Leu Asn T^r lie Leu Leu Asp Asp lie Gin Phe Thr^/let Gly Gly Ser Pro Thr Pro Thr Asp 益r Thr Tyr Thr Val Tygrg Asp Gly Thr Lys 丨丨|士ys Glu Gly
Leu Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly Asn His 65 70 75 80
Glu Tyr Cys Val ^ki^Val Lys Tyr Thr Ala Glj Val Ser Pro Lys Lys 95
Cys Val Asn Val Thr Val Asn Ser Thr Gin Phe Asn Pro Val Lys Asn 100 105 110
Leu Lys Ala^GIn Pro Asp Gly Gly^Asp Val Val Leu Lys
Ala
Pro Ser Ala 130 <210> 46 <211> 275 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 46 Ala Asn Glu Ala Val Val Leu Ala Ala Asp Asn Val Trp Gly As^
Asn
Thr Gly T^r Gin Phe Leu Leu As^Ala Asp His Asn Thr Phe Gly
Ser Val lie Pro Ala Thr Gly Pro Leu Phe Thr Gly Thr Ala Ser Ser 35 40 45
Asp Leu Tyr Ser Ala Asn Phe Glu Ser Leu lie Pro Ala Asn Ala Asp 50 55 60 P.V3.V3. Thr Thr G,hash ..e..eVa.ThrG,G.nG,G,Va.
Val lie Pro Gly Gly Val Tyr Asp Tyr Cys lie Thr Asn Pro Glu Pro 85 90 95
Ala Ser Gly Lyrs Met Trp lie Ala Gly As^yGly Gly Asn Gin 17 80 201138813
Arg Tyr Asjp^Asp Phe Thr Phe ^^Ala Gly Lys Lys Tyr Thr^Phe Thr
Met Ar^Arg Ala Gly Met Glyj Asp Gly Thr Asp Met Glu Val Glu Asp
Asg Ser Pro Ala Ser Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Ar^Asp Gly Thr Lys lie Lys Glu Gly Leu TTir Glu Thr Thr Tyr Ar^ Asp Ala Gly Met
Ala Gin Ser His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val 180 185 190
Ser Pro Lys Val Cys Val Asp Tyr lie Pro Asp Gly Val Ala Asp Val 195 200 205
Thr Ala Gin Lys Pro Tyr Thr Leu Thr Val Val Gly Lys Thr lie Thr 210 215 220
Val Thr Cys Gin Gly Glu Ala Met lie Tyr Asp Met Asn Gly Arg Arg 225 230 235 240 255
Leu Ala Ala Gly Ai^会sn Thr Val Val Tyr "^r〇Ala Gin Gly Gly Tyr
Tyr Ala Val Me^Val Val Val Asp Gly ^er Tyr Val Glu Ly^Leu
Ala lie Lys 275
<210> 47 <211> 49 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 47 49 36 gaccatggct catcaccatc accatcacaa taccggagtc agctttgca
<210> 48 <211> 36 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 48 gactcgagtt atttgtcctt attagtgagt gctttc
<210> 49 <211> 31 <212> DNA <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 49 gaccatggct tggggagaca atacgggtta c 31
<210> 50 <211> 27 <212> DNA 18 201138813 丨。^ τ 銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 50 gactcgagac ctccgttagg caaatcc
<210> 51 <211> 41 <212> DNA <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 51 ccgtattgtc tccccatttg tccttattag tgagtgcttt c
<210> 52 <211> 37 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 52 cactaataag gacaaatggg gagacaatac gggttac
<210> 53 <211> 51 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 53 catggatctg agaccgcatg ggctgatcca cttttcttgt tggatgccga t
<210> 54 <211> 62 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 54 ccatggcttt gaataccgga gtcagctttg caaactatac agcgcatgga tctgagaccg ca
<210> 55 <211> 25 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 55 ctcgaggaat gattcggaaa gtgtt
<210> 56 <211> 53 <212> DNA <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 56 ccatggctga ttatagctgg aattcccagg tagtcagctt tgcaaactat aca
<210> 57 <211> 52 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 57 ctttgcaaac tatacagcgc atggatctga gaccgcatgg gctgatccac tt
<210> 58 <211> 52 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) 52 201138813 <400> 58 atgggctgat ccacttctga attcttattg gggcgagatc ggcaatatta cc
<210> 59 <211> 52 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 59 52 gatcggcaat attacccata ttggtgctca ttacgcttgg ggagacaata eg
<210> 60 <211> 52 <212> DNA <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 60 52 ctcgagacct ccgttaggca aatccaatgc cggtgttatc agatagttgt ca
<210> 61 <211> 1706 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 61
Met Lys Asn Leu Asn Lys Phe Val Ser lie Ala Leu Cys Ser Ser Leu 15 10 15
Leu Gly Gly Met Ala Phe Ala Gin Gin Thr Glu Leu Gly Arg Asn Pro 20 25 30
Asn Val Arg Leu Leu Glu Ser Thr Gin Gin Ser Val Thr Lys Val Gin 35 40 45
Phe gg Met Asp Asn Leu L^| Phe Thr Glu Val Glr^fhr Pro Lys Gly lie Gly Gin Val Pro Thr Tyr Thr Glu Gly Val Asn Leu Ser Glu Lys 65 70 75 80
Gly Met Pro Thr Leu Pro lie Leu Ser Arg Ser Leu Ala Val Ser Asp 85 90 95
Thr Arg Glu Met Lys Val Glu Val Val Ser Ser Lys Phe lie Glu Lys 100 105 110
Lys Asn Val Leu lie Ala Pro Ser Lys Gly Met lie Met Arg Asn Glu 115 120 125
Asp Pg Lys Lys lie Pro TyrTyr Gly Lys Thr Tyggr Gin Asn
Lys Phe Phe Pro Gly Glu lie Ala Thr Leu Asp Asp Pro Phe lie Leu 145 150 155 160
Arg Asp Val Arg G%gln Val Val Asn Phe]今宫 Pro Leu Gin Tyr
Pro Val Thr Lys Thr Leu Arg lie Tyr Thr Glu lie Thr Val Ala Val 20 240201138813 180 185 190
Ser Glu Thr Ser Glu Gin Gly Lys Asn lie Leu Asn Lys Lys Gly Thr 195 200 205
Phe Ala Gly Phe Glu Asp Thr Tyr Lys Arg Met Phe Met Asn Tyr Glu 210 215 220
Pro Gly Arg Tyr Thr Pro Val Glu Glu Lys Gin Asn Gly Arg Met lie 225 230 235
Val lie Val Ala *-ysJ^s Tyr Glu Gly Asp Asp Phe Val Asp 255
Trp Lys Asn Gin Arg Gly Leu Arg Thr Glu Val Lys Val Ala Glu Asp 260 265 270 lie Ala Ser Pro Val Thr Ala Asn Ala lie Gin Gin Phe Val Lys Gin 275 280 285
Glu T^GIu Lys Glu Gly Asn Asp Leu Thr Tyr Val lie Gly I»
As| His Lys Asp lie Pro^Aja Lys lie Thr Pro Gl^lle Lys Ser Asp 310 315 320
Gin Val Tyr Gly Gin lie Val Gly Asn Asp His Tyr Asn Glu Val Phe 325 330 335 lie Gly Arg Ph|jer Cys Glu Ser Lys^lg Asp Leu Lys Thr Gg&le Asp Arg ThMIe His Tyr Glu Arg Asn lie Thr Thr Glu Asp^L^s Trp
Leu
Gly Gin Ala Leu Cys lie Ala Ser Ala Glu Gly Gly Pro Ser Ala 370 375 380 400
Asp Asn Gly Glu Ser Asp lie Gin His Glu Asn Val lie Ala Asn Leu 385 390 395 415
Leu Thr Gin Tyr Gy〇^yr Thr Lys lie lie Ly^i〇^s Tyr Asp Pro Gly
Val Thr Pro L^s Asn lie lie Asp Ala Phe Asn Gly Gly lie Ser Leu 425 430
Ala Asn T
Thr G.y His Gly SerGlu Thr Ala Trp Gly Thr Ser His
Phe Gly Thr Thr His Val Lys Gin Leu Thr Asn Ser Asn Gin Leu Pro 450 455 460 480
Phe lie Phe Asp Val AlaCj.s Val Asn Gly Asp Phe Leu Phe Ser Met 21 201138813
Pro Cys Phe Ala Glu Ala Leu Met Arg Ala Gin Lys Asp Gly Lys Pro 485 490 495 Thr Gly Thr Val Ala lie lie Ala Ser Thr lie Asn Gin Ser Trp Ala 500 505 510
Ser Pro Met Arg Gly Gin Asp Glu Met Asn Glu lie Leu Cys Glu Lys 515 520 525
His Pro Asn Asn lie Lys Arg Thr Phe Gly Gly Val Thr Met Asn Gly 530 535 540 Phe Ala Met Val Tyr Lys Lys Asp Glu Lys Met Leu 560
Asp Thr Trp Thr Val Phe Gly Asp Pro Ser Leu Leu Val Arg Thr Leu 565 570 575
Val Pro Thr Lys Met Gin Val Thr Ala Pro Ala Gin lie Asn Leu Thr 580 585 590
Asp Ala Ser Val Asn Val Ser Cys Asp Tyr Asn Gly Ala lie Ala Thr 595 600 605 lie Ser Ala Asn Gly Lys Met Phe Gly Ser Ala Val Val Glu Asn Gly 610 615 620
Thr Ala Thr lie Asn Leu Thr Gly Leu Thr Asn Glu Ser Thr Leu Thr 625 630 635 640
Leu Thr Val Val Gly Tyr Asn Lys Glu Thr Val lie Lys Thr lie Asn 645 650 655
Thr Asn Gly Glu Pro Asn Pro Tyr Gin Pro Val Ser Asn Leu Thr Ala 660 665 670
Thr Thr Gin Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys Trp Asp Ala Pro Ser Thr 675 680 685 Lys Thr^Asn Ala Thr Thr Asn Thr Ala Arg Ser Val Asg^Gly lie Arg Glu Leu Val Leu Leu Ser Val Ser Asp Ala Pro Glu Leu Leu Arg Ser 705 710 715 Gly Gin Ala Glu lle^gl Leu Glu Ala His Agyal Trp Asn Asp Gly^^ Ser Gly Tyr Leu Leu Asp Ala 令His Asp Gin Tyr Gl^^ln 720
Val lie Pro Ser Asp Thr His Thr Leu Trp Pro Asn Cys Ser Val Pro 755 760 765
Ala Asn Leu Phe Ala Pro Phe Glu Tyr Thr Val Pro Glu Asn Ala Asp 770 775 780 22 800 201138813
Pro Ser Cys Ser Pro Thr Asn Met lie Met Asp Gly Thr Ala Ser Val 785 790 795
Asn lie Pro Ala Gly Thr Tyr Asp Phe Ala lie Ala Ala Pro Gin Ala 805 810 815
Asn Ala Lys ll|2*^rp lie Ala Gly Gin Glg^ro Thr Lys Glu Asp
His Phe Leu Met L^s^.ys Met
Tyr Val Phe^Glu Ala Gly Lys *-ys^T^r
Gly Ser^Gly Asp Gly Thr Gli^Leu Thr lie Ser Glu ^I^GIy Gly Ser 880 含|| Tyr Thr Tyr Thr Va J各r Arg Asp Gly Thr L各|gle Lys Glu Gly
Leu Thr Ala Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly Asn His 885 890 895
Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro Lys Val 900 905 910
Cys Lys As^ Val Thr Val Glu Gly Ser Asn Glu Phe Ala Pro_Val Gin 920 925
Asn Leu Thr Gly Ser Ala Val Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys Trp Asp 930 935 940
Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro Asn Pro 945 950 955
Asn Pro Gly Thr Thr Thr Leu Ser Glu Ser Phe Glu Asn Gly lie Pro 965 970 975
Ala Ser Trp Ln^hr lie Asp Ala Asp g^Asp Gly His Gly TrPg^gs
Pro 960
GlyAsn5AlaProGlyl,eAla Asn Ser Asn Glj.CysVal
Tyr Ser〇Glu Ser Phe Gly Leu〇i Gly Gly lie Gly Va. Leu Thr Pro
Asp Asn Tyr Leu lie Thr Pro Ala Leu Asp Leu Pro Asn Gly Gly 1025 1030 1035
Lys Leu Thr Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser 1040 1045 1050
Glu His_^Tyr Ala Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn As^Ala Ser 1055 1060
Asn Phe Thr Asn Ala Leu Leu Glu Glu Thr lie Thr Ala Lys Gly 23 201138813 1075 1080
Val Arg Ser Pro Glu Ala Met Arg Gly Arg lie Gin Gly ThrTrp 1085 1090 1095
Arg Gin Lys Thr Val Asp Leu Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala 1100 1105 1110
PheArg His Phe Gin Ser Thr Asp Met Phe Tyr lie Asp Leu Asp 1115 1120 1125
Glu Va,〇Glu He Lys Ala Asni Lys Arg A.a Asp PheThr Glu
Thr Phe Glu Ser Ser Thr His 1145 s Gly Glu Ala Pro Ala Glu Trp Thr 1150 1155
Thr lie ^ Asp Ala Asp Gly Asp^^Bly Gin Gly Trp Leu Leu Ser
Ser Gly Gin Leu Asp Trp Leu Thr Ala His Gly Gly ThrAsnVal 1175 1180 1185
Val Ser Ser Phe Ser Trp Asn Gly Met Ala Leu Asn Pro Asp Asn 1190 1195 1200
Tyr Leu lie Ser Lys Asp Val Thr Gly Ala Thr Lys Val Lys Tyr 1205 1210 1215
Ala Val
Tyr Tyr Ala Val Asn Asp Gly Phe Pro Gly Asp His Tyr 1220 1225 1230
Met lie Ser Lys Thr Gly Thr Asn Ala Gly Asp Phe Thr Val Val 1235 1240 1245
Phe G.u〇 Glu Thr Pro Asn lie Asn Lys Gly Gly 1 A^〇Arg Phe
Gly Leu Ser Thr Glu Ala Asp Gly Ala Lys Pro Gin Ser Val Trp 1265 1270 1275 lie Glu Arg Thr Val Asp Leu Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala 1280 1285 1290
Phe His Tyr Asn Cys Ser λ Asp Leu Asn Tyr lie J_eu Leu Asp 1300 1305
Asp lle^ Gin Phe Thr Met G.^ Gly Ser Pro Thr Pro ^hr Asp Tyr
Thr T^^Thr Val Tyr Arg Asp^ ^ Gjy Thr Lys lle Lys Leu
Thr Glu4〇Thr Thr Phe Glu Glu^Asp Gly Val Ala Thr 1 Gljj Asn His
Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro Lys 24 201138813 1360 1365 1380
Lys Cys Val Asn Val Thr Val Asn Ser Thr Gin Phe Asn Pro Val 1370 1375
Lys Asn Leu Lys Ala Gin Pro Asp Gly Gly Asp Val Val Leu Lys 1385 1390 1395
TrpGIu Ala Pro Ser Ala Lys Lys Thr Glu Gly Ser Arg Glu Val 1400 1405 1410 1425
Lys Arp^ lie Gly Asp Gly Leu Val Thr lie Glu Pro Ala Asn
Asp Val Arg Ala Asn Glu Ala Lys Val Val Leu Ala Ala Asp Asn 1430 1435 1440
Val
Trp Gly Asp Asn Thr Gly Tyr Gin Phe Leu Leu Asp Ala Asp 1445 1450 1455
His Asn Thr Phe Gly Ser Val lie Pro Ala Thr Gly Pro Leu Phe 1460 1465 1470
Thr Gly Thr Ala Ser Ser Asp Leu Tyr Ser Ala Asn Phe Glu Ser 1475 1480 1485
Leu lie Pro Ala Asn Ala Asp Pro Val Val Thr Thr Gin Asn lie 1490 1495 1500 lie Val Thr Gly Gin Gly Glu Val Val lie Pro Gly Gly Val Tyr 1505 1510 1515
Asp Tyr Cys lie Thr Asn Pro Glu Pro Ala Ser Gly Lys Met Trp 1520 1525 1530 lie Ala Gly Asp Gly Gly Asn Gin Pro Ala Arg Tyr Asp Asp Phe 1535 1540 1545
Thr Phe Glu Ala Gly Lys Lys Tyr Thr Phe Thr Met Arg Arg Ala 1550 1555 1560
Gly Gly Asp Gly Thr As^^Met Glu Val Glu Asp^A|p Ser Pro Ala 驾^Tyr Thr Tyr Thr Val】5為「Arg Asp Gly Thr L^s^jle Lys
Glu G^^Leu Thr Glu Thr Thr__Tyr Arg Asp Ala Gly Met Ser Ala 1600 1605
Gin Ser His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val 1610 1615 1620
Ser Pro 1625
Lys Val Cys Val Asj^jyr He Pro Asp Gly Asp 25 201138813
ValThr Ala Gin Lys Pro Tyr Thr Leu Thr ValVal GlyLysThr 1640 1645 1650 lie Thr Val Thr Cys Gin Gly Glu Ala Met lie Tyr Asp Met Asn 1655 1660 1665
Thr Ala
Gly Arg Arg Leu Ala Ala Gly Arg Asn Thr Val Val Tyr' 1670 1675 1680
Gin Gly Gly Tyr Tyr Ala Val Met Val Val Val Asp Gly Lys Ser 1685 1690 1695
Tyr Val Glu Lys Leu Ala lie Lys 1700 1705
<210> 62 <211> 1732 <212> PRT <2l3> 牙銀紫質單胞諸(Porphyromonas gingivalis) <400> 62
Met Arg Lys Leu Leu Leu Leu lie Ala Ala Ser Leu Leu Gly Val Gl^
Leu Tyr Ala Gin Ser Ala Lys lie Lys Leu Asp Ala Pro Thr Thr Arg 20 25 30
Thr Thr Cys Thr Asn Asn Ser Phe Lys Gin Phe Asp Ala Ser Phe Ser 35 40 45
Phe Asn Glu Val Glu Leu Thr Lys Val Glu Thr Lys Gly Gly Thr Phe 50 55 60
Ala Ser Val Ser lie Pro 65
Gly Ala
Phe Pro Thr
Gj^Glu Val Gly Ser 80
Pro Glu Val Pro Ala Val Arg Lys Leu lie Ala Val Pro Val Gly Ala 85 90 95
Thr Pro Val Val Arg Val Lys Ser Phe Thr Glu Gin Val Tyr Ser Leu 100 105 110
Asn Gin Tyr Gly Ser Glu Lys Leu Met Pro His Gin Pro Ser Met Ser 115 120 125
Lys Ser^Asp Asp Pro Glu Lys^Val Pro Phe Val Tyr Asn Ala Ala Ala
Arg Lys Gly Phg品al Gly Gin Glu Leu T^GIn Val Glu Met
Leu
Gly Thr Met Gly Val Arg lie Ala Ala Leu Thr lie Asn Pro 170 175
Val Gin Tyr Asp Val Val Ala Asn Gin Leu Lys Val Arg Asn Asn lie 180 185 190 26 160 201138813
Glu lie Glu Val Ser Phe Gin Gly Ala Asp Glu Val Ala Thr Gin Arg 195 200 205
Leu Tyr Asp Ala Ser Phe Ser Pro Tyr Phe Glu Thr Ala Tyr Lys Gin 210 215 220
Leu Phe Asn Arg Asp Val Tyr Thr Asp His Gly Asp Leu Tyr Asn Thr 225 230 235 240 255
Pro Val Arg Met Leu Val Val Ala Gly Ala l^^Phe Lys Glu Ala Leu
Lys Pro Trp LeuJ"hr Trp Lys Ala Gin L^s Gly Phe Tyr Leu As^al
His Tyr Thr Asp Glu Ala Glu Val Gly Thr Thr Asn Ala Ser lie Lys 275 280 285
Ala Phelle His Lys Lys Tyr Asn Asp Gly Leu Ala Ala〇Ser Ala Ala
Pro Val Phe Leu Ala Leu Val Gly Asp Thr Asp Val lie Ser Gly Glu 305 310 315 320
Lys Gly Lys Lys Thr Lys Lys Val Thr Asp Leu Tyr Tyr Ser Ala Val 325 330 335
Asp Gly Asp Tyr^Phe Pro Glu Met Thr Phe Arg Met Ser A^Ser
Ser Pro Glu Glu Leu Thr Asn lie lie Asp Lys Val Leu Met Tyr Glu 355 360 365
Lys Ala Thr Met Pro Asp Lys Ser Tyr Leu Glu Lys Val Leu Leu lie 370 375 380 400
Ala Gly Ala Asp Tyr Ser Trp Asn Ser Gin Val Glv Gin Pro Thr lie 385 390 395
Lys Tyr Gly Met Gin Tyr Tyr Tyr Asn Gin Glu His Gly Tyr Thr Asp 405 410 415
Val Tyr Asn ^^Leu Lys Ala Pro Tyr Thr Gly Cys Tyr Ser His Leu
Asn Thr Gly Val Ser Phe Ala Asn Tyr Thr Ala His Gly Ser Glu Thr 435 440 445
Ala Trp Ala Asp Pro Leu Leu Thr Thr Ser Gin Leu Lys Ala Leu Thr 450 455 460
Asn Lys Asp Lys Tyr Phe Leu Ala lie Gly Asn Cys Cys lie Thr Ala 465 470 475 480
Gin Phe Asp Tyr Val Gin Pro Cys Phe Gly Glu Val lie Thr Arg Val 485 490 495 27 s 201138813
Lys Glu Lys G&^la Tyr Ala Tyr lie G^〇|er Ser Pro Asn Ser^y〇r
Trp Gly Glu Asp Tyr TyrTrp Ser Val Gly Ala Asn Ala Val Phe Gly 515 520 525
Val Gin Pro Thr Phe Glu Gly Thr Ser Met Gly Ser Tyr Asp Ala Thr 530 535 540 560
Phe Leu Glu Asp Ser Tyr Asn Thr Val Asn Ser lie Met Trp Ala Gly 545 550 555
Asn Leu Ala Ala Thr His Ala Gly Asn lie Gly Asn 565 570 lie Thr His lie 575
Gly Ala His T^^yr Trp Glu Ala Tyr Hg|^/al Leu Gly Asp Glyggr
Pro
Val Met Pro Tyr Arg Ala Met Pro Lys Thr Asn Thr Tyr Thr Leu 595 600 605
Ala Ser Leu Pro Gin Asn Gin Ala Ser Tyr Ser lie Gin Ala Ser Ala 610 615 620 640 器^ Ser Tyr Val Ala lie Lys Asp Gly Val Le^^r Gly Thr Gly
Val Ala Asn Ala Ser Gly Val Ala Thr Val Ser Met Thr Lys Gin lie 645 650 655
Leu 670
Thr Glu Asn Gl^sn Tyr Asp Val VaM^e Thr Arg Ser Asn Tyr
Pro Val lie Lys Gin lie Gin Val Gly Glu Pro Ser Pro Tyr Gin Pro 675 680 685
Val Ser Asn Leu Thr Ala Thr Thr Gin Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys 690 695 700 720 T^GIu Ala Pro Ser Lys Ala Glu Gly Ser Arg Glu Val Lys
Arg lie Gly Asp Gygu Phe Val Thr lie Gji^gro Ala Asn Asp Val^^
Arg Ala Asn Glu Ala Lys Val Val Leu Ala Ala Asp Asn Val Trp Gly 740 745 750
Asp Asn Thr Gly Tyr Gin Phe Leu Leu Asp Ala Asp His Asn Thr Phe 755 760 765
Gly Ser Val lie Pro Ala Thr Gly Pro Leu Phe Thr Gly Thr Ala Ser 770 775 780
Ser Asn Leu Tyr Ser Ala Asn Phe Glu Tyr Leu lie Pro Ala Asn Ala 785 790 795 28 800 201138813
Asp Pro Val Val Thr Thr Gin Asn lie lie Val Thr Gly Gin Gly Glu 805 810 815
Val Val lie Prc^gjy Gly Val Tyr Asp T^gys lie Thr Asn Pro
Pro Ala Ser Gly Lys Met Trp lie Ala〇G.y Asp Gly Gly AsnGIn Pro
Ala
Ar^Tyr Asp Asp Phe T^Phe Glu Ala Gly Lys L^s Tyr Thr Phe 880
Thr Met Arg Arg Ala Gl^ Met Gly Asp Gly Thr As^ Met Glu Val Glu
Asp Asp Ser Pro Ala Ser Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Gly Thr 885 890 895
Lys lie Lys Glu Gly Leu Thr Ala Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val 900 905 910
Ala Ala Gly Asn His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly 915 920 925
Val
Ser Pro Lys Val Cys Lys Asp Val Thr Val Glu Gly Ser 930 935 940
Asn Glu 960
Phe Ala Pro Val Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ser Val Gly Gin Lys Val 945 950 955
Thr Leu Lys Trp Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Asn 965 970 975
Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Leu Ser Glu Ser Phe Glu Asn Gly 980 985 990 lie Pro Al|晶er Trp Lys Thr lie 个甜。Ala Asp Gly Asp Ws Gly
Trp Lys Pro Gly Asn Ala Pro Gly lie Ala Gly Tyr Asn Ser Asn T010 1015 1020
Gly Cys Val Tyr Ser Glu Ser Phe Gly Leu Gly Gly lie Gly Val 1025 1030 1035
Leu Thr ^ Pro Asp Asn Tyr Leu Jle Thr Pro Ala Leu ^ A|g Leu Pro 1040 1045
Asn GIV ^ LeU Τ'Γ Phie060TrP Va，^ A'a 〇Ιηΐ0^5Ρ A，a ASn
Tyr Ala7〇Ser Glu His Tyr Ala^Val Tyr Ala Ser Ser ThrGly Asn
Asp Ala Ser Asn Phe Thr Asn Ala Leu Leu Glu Glu Thr lie Thr 29 201138813 1090 1095
Ala Lys Gly Val Arg Ser Pro Lys Ala lie Arg Gly Arg lie 1100 1105 1f10
Gin
Gly Thr Trp Arg Gin Lys Thr Val Asp Leu Pro Ala Gly Thr Lys 1115 1120 1125
Tyr Val Ala Phe Arg His Phe Gin Ser Thr Asp Met Phe Tyr lie 1130 1135 1140
Asp Leu Asp Glu Val Glu lie Lys Ala Asn Gly Lys Arg Ala Asp 1145 1150 1155
Phe Thr Glu Thr Phe Glu Ser Ser Thr His Gly Glu Ala Pro Ala 1160 1165 1170
Glu Tr^^Thr Thr lie Asp Ala^Asp Gly Asp Gly Gin
Leu
Cys Leu Ser Ser Gly Gin Leu Asp Trp Leu Thr Ala His Gly Gly 1190 1195 1200
Ser Asn Val Val Ser Ser Phe Ser Trp Asn Gly Met Ala Leu Asn 1205 1210 1215
Pro
Val
Asp Asn Tyr Leu lie Ser Lys Asp Val Thr Gly Ala Thr Lys 1220 1225 1230 L^^Tyr Tyr Tyr Ala Val Asp Gly Phe Pro ^GI^Asp His
Tyr Ala Val Met lie Ser Lys Thr Gly Thr Asn Ala Gly Asp Phe 1250 1255 1260 Thr Val Val Phe Glu Glu Thr Pro Asn Gly lie Asn Lys Gly Gly 1265 1270 1275 Ala Arg Phe Gly Leu Ser Thr Glu Ala Asn Gly Ala Lys Pro Gin 1280 1285 1290 Ser Val Trp lie Glu Arg Thr Val Asp Leu Pro Ala Gly Thr Lys 1295 1300 1305
Tyr Val Ala Phe Arg His Tyr Asn Cys Ser Asp Leu Asn Tyr lie 1310 1315 1320
Leu Leu Asp Asp lie Gin Phe Thr Met Gly Gly Ser Pro Thr Pro 1325 1330 1335
Thr ◊银〇 Tyr Thr Tyr Thr Val, 3^r Arg Asp Gly Thr il^s〇lle Lys
Glu Gly Leu Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr 1355 1360 1365 30 201138813
Gly Asn His Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val 1370 1375 1380
Ser Pro Lys Lys Cys Val Asn Val Thr Val Asn Ser Thr Gin Phe 1385 1390 1395
Asn Pro Val Gin Asn Leu Thr Ala Glu Gin Ala Pro Asn Ser Met 1400 1405 1410
Asp Ala lie Leu Lys Trp Asn Ala Pro Ala Ser Lys ArgAlaGlu 1415 1420 1425
Val Leu Asn Glu Asp Phe Glu Asn Gly lie Pro Ala Ser Trp Lys 1430 1435 1440
Thr lie le 4 Asp Ala Asp G.y Asp^ Gly Asn Asn Trp Thr ^Thr Thr Pro
Pro Pro Gly Gly Ser Ser Phe Ala Gly His Asn Ser Ala lie Cys 1460 1465 1470
Val Ser Ser Ala Ser Tyr lie Asn Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro 1475 1480 1485
Asp Asn Tyr Leu Val Thr Pro Glu Leu Ser Leu Pro Gly Gly Gly 1490 1495 1500
Thr Leu Thr Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser 1505 1510 1515
Glu 丁y「Ala Val Ty「Ala 15$|「Se「Thr Gly Asn As^Ala Ser
Asn Phe Ala Asn Ala Leu Leu Glu Glu Val Leu Thr Ala Lys Thr 1535 1540 1545
Val Val Thr Ala Pro Glu Ala lie Arg Gly Thr Arg Ala Gin Gly 1550 1555 1560
Thr Gin Lys Thr Val^GIn Leu Pro Ala Gly ThM_ysTyr
Val 1|8〇phe Arg His Phe Gl^58呈ys Thr Asp Phe lie Asn
LeU ASP Val Val lle Τ，Ίΐ6〇〇ΘΓ G，y ASn A，a Pr〇 1605TyrThr Tyr qI1© Tyr Arg Asn Asn^ ^Thr Gin lie Ala Ser Gl^al Thr G|u IJI^Thr Tyr Arg Asp Pr^63含sp Leu Ala Thr Gly Tyr Thr
Tyr i^oVal Lys Val Val Tyr) 6$〇 Asn Gly Glu Ser Glu 31 201138813
Thr Ala Thr Leu Asn lie Thr Ser Leu Ala Asp Val Thr Ala Gin 1655 1660 1665
Lys Pro Tyr Thr Leu Thr Val Val Gly Lys Thr lie Thr Val Thr 1670 1675 1680
Cys Gin Gly Glu Ala Met lie Tyr Asp Met Asn Gly ArgArgLeu 1685 1690 1695
Ala Ala Gly Arg Asn Thr Val Val Tyr Thr Ala Gin Gly Gly His 1700 1705 1710
Tyr Ala^Val Met Val Val Val^Asp Gly Lys Ser Tyr y3\0>\\i Lys
Leu Ala Val Lys 1730
<210> 63 <211> 2164 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 63
Met Arg Lys Leu Asn Ser Leu Phe Ser Leu Ala Val Leu Leu Ser Leu 15 10 15
Leu Cys Trp Gl^ Gin Thr Ala Ala Ala Gn Gly Gly Pro Lys Th^Ala
Pro Ser Val Thr His Gin A.a Val G.n Lys Gly He Arg Thr^er Lys lie lie
Ala L# Asp Leu Arg Asp Prglle Pro Ala Gly Met Ag Arg gu Glu Ala His Asp Glu Asp Gly Thr 势 Tyr Gin
Met Leu 80
Trp Asp Ala Asp H^| Asn Gin Tyr Gly Ala^^r lie Pro Glu Glu Se^
Phe Trp Phe Ala Asn Gly Thr lie Pro Ala Gly Leu Tyr Asp Pro Phe 100 105 110
Glu Tyr Lys Val Pro Val Asn Ala Asp Ala Ser Phe Ser Pro Thr Asn 115 120 125
Phe Val Leu Asp Gly Thr Ala Ser Ala Asp lie Pro Ala Gly Thr Tyr 130 135 140
Asg Tyr Val lie lie Asn Pro Asn Pro Gly lie lie T^,le Val Gly 175
Glu Gly Val Ser Lyg言ly Asn Asp Tyr Va丨激Glu Ala Gly Lys Τ' 32 160 201138813
Tyr His Phe Thr Val Gin Arg Gin Gly Pro Gly Asp Ala Ala Ser Val 180 185 190
Val Val Thr Gly Glu Gly Gly Asn Glu Phe Ala Pro Val Gin Asn Leu 195 200 205
Gin Trj^Ser Val Ser Gly Gln Thr Val Thr Leu Thr Trp Gin Ala Pro 215 rp Ul 220
Ala Ser Asp Lys Arg Thr Tyr Val Leu Asn Glu Ser Phe Asp Thr Gin 225 230 235 240
Thr Leu Pro Asn ^^"rp Thr Met lie Asp A^Asp Gly Asp Gly His 255
Asn Trp Leu Ser Thr lie Asn Val Tyr Asn Thr Ala Thr His Thr Gly 260 265 270
Asp Gly Ala Met Phe Ser Lys Ser Trp Thr Ala Ser Ser Gly Ala Lys 275 280 285
Asp Leu Ser Pro Asp Asn Tyr Leu Val Thr Pro Lys Phe Thr Val 290 295 300
Pro Glu Asn Gly Lys Leu Ser Tyr Trp Val Ser Ser Gin Glu Pro Trp 305 310 315 320
Thr Asn Glu His Tyr Gly Val Phe Leu Ser Thr Thr Gly Asn Glu Ala 325 330 335 Ala Asn Phe Thr lie Lys Leu Leu Glu Glu Thr Leu Gly Ser Gly Lys 340 345 350 Pro Ala Pro Met Asn Leu Val Lys Ser Glu Gly Val Lys Ala Pro Ala 355 360 365 Pr0 *^r〇Gln Glu Arg Thr lie 令Leu Ser Ala Tyr Al|品ly Gin Gin Va^Tyr Leu Ala Phe Ar^His Phe Gly Cys Thr G^lle Phe Arg Leu 400
Tyr Leu Asp Asp Val^la Val Ser Gly Glu Ser Ser Asn Asp T^r 415
Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Asn Val Val lie Ala Gin Asn Leu Thr 420 425 430 Ala Thr Thr Phe Asn Gin Glu Asn Val Ala Pro Gly Gin Tyr Asn Tyr 435 440 445 Cys Va^Glu Val Lys Tyr Thr4^ Gly Val Ser Pro Lys^al Cys Lys
Asp Val Thr Val Glu Gly Ser Asn Glu Phe Ala Pro Val Gin Asn Leu 465 470 475 480 33 201138813
Thr Gly Ser Ala Val Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys Trp Asp Ala Pro 485 490 495
Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Thr Leu Ser Glu Ser 500 505 510
Phe Glu Asn Gly lie Pro Ala ^er TVg Lys Thr lie Asp Ala5Asp Gly
Asp Gly Asn Asn Trp Thr Thr Thr Pro Pro Pro Gly Gly Ser Ser Phe 530 535 540
Ala Gly His Asn Ser Ala lie Cys Val Ser Ser Ala Ser Tyr 545 550 555 lie Asn 560
Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn Tyr Leu Val Thr Pro Glu Leu 565 570 575
Ser Leu Pro Asn Gly Gly Thr Leu Thr Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp 580 585 590
Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His Tyr Ala Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly 595 600 605
Asn Asp Ala Ser Asn Phe Ala Asn Ala Leu Leu Glu Glu Val Leu Thr 610 615 620
Ala Lys Thr Val Val Thr Ala Pro Glu Ala lie Arg Gly Thr Arg Val 625 630 635 640
Gin Gly Thr Trp T^GIn Lys Thr Val Gin l^j^Pro Ala Gly Thr Lys 655
Tyr Val Ala Phe Arg His Phe Gly Cys Thr Asp Phe Phe Trp lie Asn 660 665 670
Leu Asp Asg Val Glu lie Lys Ala^sn Gly Lys Arg Ala As|3 F
Phe Thr
Glu Thr Phe Glu Ser Ser Thr His Gly Glu Ala Pro Ala Glu Trp Thr 690 695 700 Thr lie Asp Ala Asp Gly Gin Gly Trp Leu^Cys Leu Ser Ser 720
Gly Gin Leu Gly Tr^Leu Thr Ala His Gly Asn Val Val Ala 735
Ser Phe Ser Trp Asn Gly Met Ala Leu Asn Pro Asp Asn Tyr Leu lie 740 745 750 Ser Lys /^^Val Thr Gly Ala Thr^l^ Val Lys Tyr Tyr Ty^^a Val
Asn Asp Gly Phe Pro Gly Asp His Tyr Ala Val Met lie Ser Lys Thr 34 800201138813
f fU 775 780
Gly Thr Asn Ala Gly Asp Phe Thr Val Val Phe Glu Glu Thr Pro Asn 785 790 795 815
Gly lie Asn Lys Gl基gy Ala Arg Phe Gly l^ji^Ser Thr Glu Ala Asg
Gly Ala Lys Pro Gin Ser Val Trp lie Glu Arg Thr Val Asp Leu Pro 820 825 830
Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala Phe Arg His Tyr Asn Cys Sei^Asp Leu
Asn Tyr lie Leu Leu Asp Asp lie Gin Phe Thr Met Gly Gly Ser Pro 850 855 860 880
Thr Pro Thr Asp Tyr Thr Val Tyr Arg A|^ Gly Thr Lys lie
Lys Glu Gly Leu Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr 885 890 895
Gly Asn His C^Jyr Cys Val Glu Va丨这I Tyr Thr Ala Gly Va^Sgr
Pro Lys Glu Cys Val Asn Val Thr Val Asp Pro Val Gin Phe Asn Pro 915 920 925
Val Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ala Val Gly Gin Lys Val Thr Leu Lys 930 935 940 960
Trp Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Thr 945 950 955
Leu Ser Glu Ser Phe Glu Asn Gly lie Pro Ala Ser Trp Lys Thr lie 965 970 975
Asp Ala Asp (|l^〇Asp Gly Asn Asn Tr^^hr Thr Thr Pro Pro Pro Gly
Gly Thr Ser Phe Ala Gly His Asn Ser Ala lie Cys Val Ser Ser Ala 995 1000 1005
Ser
Tyr lie Asn Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn Tyr Leu 1010 1015 1020
Val Thr Pro Glu Leu Ser Leu Pro Asn Gly Gly Thr Leu Thr Phe 1025 1030 1035
Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His Tyr Ala 1040 1045 1050
Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Ala Asn 1055 1060 1065 35 201138813
Ala Leu Leu Glu Glu Val Leu Thr Ala Lys Thr Val Val Thr Ala 1070 1075 1080 Pro Glu Ala lie Arg Gly Thr Arg Val Gin Gly Thr TrpTyr Gin 1085 1090 1095 Lys Thr Val Gin Leu Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala Phe Arg 1100 1105 1110 His Phe Gly Cys Thr Asp Phe Phe Trp lie Asn Leu Asp Asp Val 1115 1120 1125
Glu lie Lys Ala Asn Gly Lys Arg Ala Asp Phe Thr Glu 1130 1135 1140
Glu Thr Phe
Glu Ser Ser Thr His Gly Glu Ala Pro Ala Glu Trp Thr Thr lie 1145 1150 1155
Asp Asp Gly Asp Gly Gjri ^Gly Trp Leu Cys Leu ^ Ser Ser Gly
Gin Leu Asp Trp Leu Thr Ala His Gly Gly Thr Asn Val Val Ala 1175 1180 1185
Ser Phe Ser Trp Asn Gly Met Ala Leu Asn Pro Asp Asn Tyr Leu 1190 1195 1200 lie Ser Lys Asp Val Thr Gly Ala Thr Lys Val Lys Tyr Tyr Tyr 1205 1210 1215
Ala Val Asn Asp Gly Phe Pro Gly Asp His Tyr Ala Val Met lie 1220 1225 1230
Ser Lys Thr Gly Thr Asn Ala Gly Asp Phe Thr Val Val Phe Glu 1235 1240 1245 Glu Thr Pro Asn Gly lie Asn Lys Gly Gly Ala Arg Phe Gly Leu 1250 1255 1260
Ser Thr Glu Ala Asn Gly Ala Lys Pro Gin Ser Val Trp 1265 1270 1275 lie Glu
Arg Thr Val Asp Leu Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala Phe Arg 1280 1285 1290 His Tyr Asn Cys Ser Asp Leu Asn Tyr lie Leu Leu Asp Asp lie T295 1300 1305
Gin Phe〇 Thr Met Gly Gly Ser^ Pro Thr Pro Thr Asp Thr Tyr
Thr Val /al Tyr Arg Asp Gly Thr Lys lie Lys Glu Gly Leu Thr Glu 1325 1330 i 335
Thr Thr 1340
Phe Glu Glu Asp Val Ala Thr Gly Asn 1 His Glu Tyr 36 201138813
Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro Lys Glu Cys 1355 1360 1365
Val Asn Val Thr Val Asp Pro Val Gin Phe Asn Pro Val Gin Asn 1370 1375 1380
Leu Thr 5 Gly Ser A.a Val Gly^GIn Lys Val Thr Leu ^^sTrp Asp
Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Thr Leu 1400 1405 1410
Ser Glu Ser Phe Glu Asn 1415
Gly lie Pro Ala Ser Trp Lys Thr lie 1420 1425
Asp Ala Asp Gly Asp Gly Asn Asn Trp Thr Thr Thr Pro Pro Pro 1430 1435 1440
Gly Gly Thr Ser Phe Ala Gly His Asn Ser Ala lie Cys Val Ser 1445 1450 1455
Ser Ala Ser Tyr lie Asn Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn r 1460 1465 1470
Tyr Leu Val Thr Pro Glu Leu Ser Leu Pro Asn Gly Gly Thr Leu i· 1475 1480 1485
Thr Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His 1490 1495 1500
Tyr Ala Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe 1505 1510 1515
Ala Asn Ala Leu Leu Glu Glu Val Leu Thr Ala Lys Thr Val Val 1520 1525 1530
Thr Ala ^I^Pro Glu Ala lie Arg Thr Arg Val Gin C^l^^hr Trp
Tyr Gln5〇Lys Thr Va, Gin Leu^ Pro Ala Gly Thr Lys T^r Val Ala
PheAra His Phe Gly Cys Thr Asp Phe Phe Trp lie Asn Leu Asp 1565 1570 1575
Asp Val Glu lie Lys Ala Asn Gly Lys Arg Ala Asp Phe Thr Glu 1580 1585 1590
Thr Phe Glu Ser Ser Thr His Gly Glu Ala Pro Ala Glu Trp Thr 1595 1600 1605
Thr Asp Ala Asp Gly Asf) ^ C3ly Gin Gly Trp Leu Leu Ser
Ser
Gly Gin Leu Gly Trp Leu Thr Ala His Gly Gly Thr Asn Val 1625 1630 1635 37 201138813
ValAla SerPheSerTrp Asn Gly Met Ala Leu Asn Pro Asp Asn 1640 1645 1650
TyrLeu lie Ser Lys Asp Val Thr Gly Ala Thr Lys ValLysTyr 1655 1660 1665
Ala Val
Tyr T^^AIa Val Asn Asp GI^_Phe Pro Gly Asp His ^ T^r
Met lie Ser Lys Thr Gly Thr Asn Ala Gly Asp Phe Thr Val Val 1685 1690 1695
Phe
Phe Glu Glu Thr Pro Asn Gly lie Asn Lys Gly Gly Ala Arg 1700 1705 1710
Gly Leu Ser Thr Glu Ala Asn Gly Ala Lys Pro Gin SerValTrp 1715 1720 1725 lie Glu Arg Thr Val Asp Leu Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala 1730 1735 1740
Phe Ar^ His Tyr Asn Cys Ser _ Asp Leu Asn Tyr lie _Leu Leu Asp 1750 1755
Asp lie Gin Phe Thr Met Gly Gly Ser Pro Thr Pro Thr Asp Tyr 1760 1765 1770
Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Gly Thr Lys lie Lys Glu Gly Leu 1775 1780 1785
Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly Asn His 1790 1795 1800
Glu Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro Lys 1805 181(3 1815
Glu Cys Val Asn Val Thr lie Asn Pro Thr Gin Phe Asn Pro Val 1820 1825 1830
Gin Asn Leu Thr Ala Glu Gin Ala Pro Asn Ser Met Asp Ala lie 1835 1840 1845
Leu Lys Trp Asn Ala Pro Ala Ser Lys Arg Ala Glu Val Leu Asn 1850 1855 1860
Glu Asp Phe Glu Asn Gly lie Pro Ala Ser Trp Lys Thr lie Asp 18B5 1870 1875
Ala Asp Gly Asp Gly Asn Asn Trp Thr Thr Thr Pro Pro Pro Gly 1880 1885 1890
Gly Ser^Ser Phe Ala Gly Hisg Asn Ser Ala He Cys Valuer Ser
Ala Ser Tyr lie Asn Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn Tyr 38 201138813 iy.iu 1915 1920
Leu Val Thr Pro Glu Leu Ser Leu Pro Gly Gly Gly Thr Leu Thr 1925 1930 1935
Phe Trp Val Cys Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His Tyr 1940 1945 1950
Ala Val Tyr Ala Ser Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Ala 1955 1960 1965
Asn Ala Leu Leu Glu Glu Val Leu Thr Ala Lys Thr Val Val Thr 1970 1975 1980
Ala Pro Glu Ala lie Arg Gly Thr Arg Val Gin Gly Thr Trp Tyr 1985 1990 1995
Gin Lys Thr Val Gin Leu Pro Ala Gly Thr Lys Tyr Val Ala Phe 2000 2005 2010
Arg His Phe Gly Cys Thr Asp Phe Phe Trp lie Asn Leu Asp Asp 2015 2020 2025
Val Val lie Thr Ser Gly Asn Ala Pro Ser Tyr Thr Tyr Thr lie 2030 2035 2040
Tyr Arg Asn Asn Thr Gin lie Ala Ser Gly Val Thr Glu Thr Thr 2045 2050 2055
Tyr Pro Asp Leu Gly Phe Tyr Gly Val
Lys Val Val Tyr Pro Asn Gly Glu Ser Ala lie Glu Thr Ala Thr 2075 2080 2085
Leu Asn lie Thr Ser Leu Ala 2090 a Asp 2095
Val Thr Ala Gin ^L^Pro Tyr
Thr Leu〇5 Thr Val Va, Gly Lys^ Thr He Thr Val Thr C^s Gin Gly
Glu A,a2〇Met He Tyr Asp Met^ Asn Gly Arg Arg Leu Ala Gly 2T&AlaVal
ArgAsn5ThrValVa,TyrThr2iAlaGlnGlyG,yHis
Met Val 〇 Val Val Asp Gly Lys^Ser Tyr Val Glu Lys ^eu Ala Val
Lys <210> 64 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) 39 201138813
ΛΛΛΛ ΛΛΛΛ ΛΛΛ> ΛΛΛΛ U123 0123 0123 0123 >4222 2222 2222 2222 N222 2222 2222 2222 VVVV VVVV VVVV VVVV
s 或 性 p 為 他)·(可 其(6x
Q 或 f±K ® 其(7X 择8)為 τ 他u可4aa 其(8x64x a > > > > >Ka 0123 o > 2222 ο p 2222 4 52 \/ v w v w A 4 r.v a xa a xa a xa as5
<210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 65
Asn SerTyrTrp Glu Asp <210> 66 <211> 11 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonasgingivalis) <220> <221>其他辞性 <222> (4)..(4)
<223> X可為V或I <400> 66
lie Gly Asn Xaa Th^ His lie Gly Ala His Tyr^ <210> 67 <211> 8 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 67
Glu Gly Gly Pro Ser Ala Asp Asn <210> 68 <211> 7 <212> PRT 40 201138813 ν1'3〉·Τ齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223>
或D
:或Y <220> <221 > <222> <223> 其他特
或P <400> 68
Xaa Gin Xaa Trp Ala Xaa Pro 1 5
<210> 69 <211> 23 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(p〇rphyr〇monas gingivalis) <400> 69
Pro Val Ser Asn Leu Thr Ala Thr Thr Gin Gly Gin Lys Val Thr Leu 1 5 10 15
Lys Trp Asp Ala Pro Ser Thr 20
<210> 70 <211> 23 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(p〇rphyromonas gingivalis) <400> 70
Pro Val Ser Asn Leu Thr Ala Thr Thr Gin Gly Gin Lys Val Thr Leu 15 10 15
Lys Trp Glu Ala Pro Ser Ala 20
<210> 71 <211> 23 <212> PRT <2β> 牙故紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 71
Pro Val Gin Asn Leu Thr Gly Ser Ser Val Gly Gin Lys Val Thr Leu 1 5 10 15
Lys Trp Asp Ala Pro Ser Thr
<210> 72 <211> 23 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 72 41 201138813
Pro Val G.n Asn Leu Thr Gly Ser Ala Va. G.y Gin Lys Va, Thr Le^
Lys Trp Asp Ala Pro Asn Gly 20
<210> 73 <211> 23 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 73
Pro Val Lys Asn Leu Lys Ala Gin Pro Asp^Gly Gly Asp Val Val Leu
Lys Trp Glu Ala Pro Ser Ala 20
<210> 74 <211> 23 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 74
Pro Val Gin Asn Leu Thr Ala Glu Gin Ala Pro Asn Ser Met Asp Ala 15 10 15 lie Leu Lys Tr^Asn Ala Pro
<210> 75 <211> 24 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 75
Pro Val Gin Asn Leu Thr Gln Trp Ser Val Ser G.y Gin Thr Val Th^
Leu Thr Trp Gin Ala Pro Ala Ser 20
<210> 76 <211> 27 <212> PRT <2Ί3> 牙0紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 76
Tyr Thr Tyr Thr Va^Tyr Arg Asp Gly Thr L^s lie Lys Glu Gly Leu
Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala 20 25
<210> 77 <211> 27 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 77 42 15 201138813 Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Asn Val Val lie Ala Gin Asn Leu 15 10 15 Thr Ala Thr Thr Phe Asn Gin Glu Asn Val Ala 20 25 <210> 78 <211> 28 <212> PRT <213> 牙銀紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 78
Tyr Thr Tyr Thr Va^Tyr Arg Asp Gly Thr lie Lys Glu Gly Leu 15
Thr Ala Glu Thr^Thr Phe Glu Glu Asj^Gly Val Ala <210> 79 <211> 16 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <220> <221 >其他特性 <222> (6)..(7) <223> X 可為 NP 或 NPNP 或 NPNPNP 或 NPNPNPNP 或 NPNPNPNPNP 或 NPNPNrkir'k,^'K,r'
JPNPNPNP <400> 79
Pro Asn Gly Thr Pro Xaa Xaa Gly Thr Thr Thr Leu Ser Glu Ser Phe 15 10 15 <210> 80 <211> 325 <212> PRT <213> 牙齟紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 80 Gly Gly Pro Lys Tl^r Ala Pro Ser Val Thr His Gin Ala Val Gin Lys 15
Gly lie Arg Thr Ser Lys Ala Lys Asp Leu Arg Asp Pro lie Pro Ala 20 25 30 Gly Met Ala Arg lie lie Leu Glu AJa His Asp Val Trp Glu^sp Gly
Thr
Tyr Gin Met Leu Tr^ Asp Ala Asp His Asn Qn Tyr Gly Ala
Ser l.e Pro Glu Glu Ser^he Trp Phe Ala Asn Thr lie Pro Ala
Gly Leu Tyr Asp P晶 Phe Glu Tyr Lys Valero Val Asn Ala Asp A晶
Ser Phe Ser Pro Thr Asn Phe Val Leu Asp Gly Thr Ala Ser Ala Asp 100 105 110 43 80 160 201138813 lie Pro Ala Gly Thr Tyr Asp Tyr Val lie lie Asn Pro Asn Pro Gly 115 120 125 lie lie Val Gly Glu GlVj ^al Ser Lys Gly Asn As^Tyr Val
Val Glu Ala Gly Lys Thr Tyi 145 150 rHis Phe Thr Val Gl
In Arg 155
Gin Gly Pro
Gly Asp Ala Ala Ser Val Val Val Thr Gly Glu Gly Gly Asn Glu Phe 165 170 175
Ala Pro Val Gin Asn Leu Gin Trp Ser Val Ser Gly Gin Thr Val Thr 180 185 190
Leu Thr Trp Gin Ala Pro Ala Ser Asp Lys Arg Thr Tyr Val Leu Asn 1§5 200 205
Glu Ser Phe Asp Thr Gin Thr Leu Pro Asn Gly Trp Thr Met lie Asp 210 215 220 240
Ala Asp Gly Asp Gly His Asn Trp Leu Ser Thr lie Asn Val Tyr Asn 225 230 235
Thr Ala Thr His Thr Gly Asp Gly Ala Met Phe Ser Lys Ser Trp Thr 245 250 255
Ala Ser Ser
Gly Ala Lys lie Asp Leu Ser Pro Asp Asn Tyr Leu Val 260 265 270
Thr Pro Lys Phe Thr Val Pro Glu Asn Gly Lys Leu Ser Tyr Trp Val 275 280 285
Ser Ser Gin Glu Pro Trp Thr Asn Glu His Tyr Gly Val Phe Leu Ser 290 295 300
Thr Thr Gly Asn Glu Ala Ala Asn Phe Thr lie Leu Leu Glu Glu 305 310 320 5
Thr Leu Gly Ser
<210> 81 <211> 260 <212> PRT <213> 牙酿紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 81 15
Ala Pro Ala Pro Ty| Gin Glu Arg Thr lie Asg Leu Ser Ala Tyr Ala
Gly Gin Gin Va^Tyr Leu Ala Phe ArgJHis Phe Gly Cys Thr lie
Phe Arg Leu Tyr Leu Asp Asp Va^Ala Val Ser Gly Glu Ser Ser 44 201138813
Asn Asp Tyr Thr Tyr Thr Val Tyr Arg Asp Asn Val Val lie Ala Gin 50 55 60
Asn Leu Thr Ala Thr Thr Phe Asn Gin Glu Asn Val Ala Pro Gly Gin 65 70 75 80
Tyr Asn Tyr Cys Val Glu Val Lys Tyr Thr Ala Gly Val Ser Pro Lys 85 90 95
Val Cys Lys Asp Val Thr Val Glu Gly Ser Asn Glu Phe Ala Pro Val 100 105 110
Gin Asn ^eu Thr Gly Ser Ala Gin Lys Val Thr Leu Lys Trp
Asp Ala Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Thr Leu 130 135 140
Ser Glu Ser Phe Glu Asn Gly lie Pro Ala Ser Trp Lys Thr lie Asp 145 150 155 160 75
Ala Asp Gly Asp Gig^sn Asn Trp Thr Thr^r Pro Pro Pro Gly Gj^y v,. Ser Ser Phe Ala Gly His Asn Ser Ala lie Cys Val Ser Ser Ala Ser 180 185 190
Tyr lie Asn Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn Tyr Leu Val Thr 195 200 205
Pro Glu Leu Ser Leu Pro Asn Gly Gly Thr Leu Thr Phe Trp Val Cys 210 215 220 240
Ala Gin Asp Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His Tyr Ala Val Tyr Ala Ser 225 230 235
Ser Thr Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Ala Asn Ala Leu Leu Glu Glu 245 250 255
Val Leu Thr Ala 260
<210> 82 <211> 258 <212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 82 Pro Gin Ser Val Tri lie Glu Arg Thr Val Asg Leu Pro Ala Gly Thr 15
Lys Tyr Val Ala^Phe Arg His Tyr Asn^s Ser Asp Leu Asn T^r lie
Leu Leu A|p Asp lie Gin Phe Th^et Gly Gly Ser Pro Thr Pro Thr 45 201138813
Asp Tgr Thr Tyr Thr Val 令rg Asp Gly Thr Lys ll|&ys Glu Gly
Leu Thr Glu Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Thr Gly Asn His 65 70 75 80 95
Glu Tyr Cys Val Gk^Val Lys Tyr Thr Ala Val Ser Pro Lys Glu
Cys Val Asn Val Thr Val Asp Pro Val Gin Phe Asn Pro Val Gin Asn 100 105 110
LeuTI hr (^l&Ser Ala Val Gly Gin
Val Thr Leu
Lys Trj^Asp
Ala
Pro Asn Gly Thr Pro Asn Pro Asn Pro Gly Thr Thr Thr Leu Ser Glu 130 135 140
Ser Phe Glu Asn Gly lie Pro Ala Ser Trp Lys Thr lie Asp Ala Asp 145 150 155 160
Gly Asp Gly Asn Asn Trp Thr Thr Thr Pro Pro Pro Gly Gly Thr Ser 165 170 175
Phe Ala Gly His Asn Ser Ala lie Cys Val Ser Ser Ala Ser Tyr lie 180 185 190
Asn Phe Glu Gly Pro Gin Asn Pro Asp Asn Tyr Leu Val Thr Pro Glu 195 200 205
Leu Ser Leu Pro Asn Gly GI^Thr Leu Thr Phe Trp Val Cys A.a Gin 240
Asg Ala Asn Tyr Ala Ser Glu His Tyr Ala Val T&A.a Ser Ser Thr
Gly Asn Asp Ala Ser Asn Phe Ala Asn Ala Leu Leu Glu Glu Val Leu 245 250 255
Thr Ala
<210> 83 <211> 15 <212> PRT <2*l3> 牙奴紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 83
Pro Tyr Gin Pro Val Ser Asn Leu Thr Ala Thr Thr Gin Gly Gin
<210> 84 <211> 15 <212> PRT <213> 牙#紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 84 46 15 201138813
Glu Gly Leu Thr Ala Thr Thr Phe Glu Glu Asp Gly Val Ala Ala 15 10 15 <210> 85 <211> 17
<212> PRT <213> 牙齦紫質單胞菌(Porphyromonas gingivalis) <400> 85 1 5 Thr <210> 86 <211> 13 <212> PRT <213> 歐洲牛(Bos taurus) <400> 86 10
Pro C3ly
Leu Pro Gin Glu Val Leu Asn Glu Asn Leu Leu Arg Phe 1 5 10
<210> 87 <211> 17 <212> PRT <213> 歐洲牛(bos taurus) <400> 87
Tyr Gin Glu Pro Val Leu Gly Pro Val Arg Gly Pro Phe Pro lie lie 15 10 15
Val <210> 88 <211> 29 <212> PRT <213> 歐洲牛(Bos taurus) <400> 88
Pro Pro Lys Lys Asn Gin Asp Lys Thr Glu lie Pro Thr lie Asn Thr 15 10 15 lleAlaSerGI^GIuProThrSerThrProThrThrGlu
<210> 89 <211> 13 <212> PRT <213> 歐洲牛(bos taurus) <400> 89
Tyr Gin Glu Pro Val Leu
Gly Pro Val Arg Pro Phe
<210> 90 <211> 21 <212> PRT 47 (!i 201138813 <ΐνά> 歐洲牛(Bos taurus) <400> 90
Thr Glu lie Pro Thr lie Asn Thr lie Ala Ser Gly Glu Pro Thr Ser 15 10 15
Thr Pro Thr Thr Glu 20 48

Claims (1)

  1. 201138813 七、申請專利範圍： 1. 一種在一個體中用於形成對於口腔病原體的一種抗體 反應之方法，其步驟包括： -提供在其中待形成對於口腔病原體的一種抗體反 應之一個體； -檢查該個體，以判定該個體的口腔組織是否發炎； -當檢查揭露該個體的口腔組織未發炎之情況下， 以一口腔病原體免疫接種該個體，藉此在該個體中形成 對於一口腔病原體的一種抗體反應。 2. —種在口腔組織發炎的一個體中用於形成對於一口腔 病原體的一種抗體反應之免疫接種方法，其在免疫接種 該個體以形成對於一口腔病原體的一種抗體反應之 前，包括對於該個體投予一消炎劑之步驟，藉此減少口 腔組織的發炎或消除發炎。 3. —種用於調節口腔組織發炎的一個體之方法，以在免疫 接種該病原體之際形成對於一口腔病原體之一種抗體 反應，該方法在以一病原體免疫接種該個體而形成對於 一口腔病原體的一種抗體反應之前，係包括對於該個體 投予一消炎劑之步驟，藉此減少口腔組織的發炎或消除 發炎。 4. 一種在口腔組織發炎的一個體中形成對於一口腔病原 體的一種抗體反應之方法，其步驟包括： -提供口腔組織發炎的一個體； -對於該個體施用一治療，藉此消除口腔組織的發 201138813 炎；其後 乂 口腔病原體免疫接種該個體，藉此在該個體 中形成對於該病原體的一種抗體反應。 5‘如申請專利範圍第丨至4項中任一項之一種方法或免疫 接種方法，其中係在當口腔組織未發炎或當發炎係亞臨 生或無症狀性之時點，提供該免疫接種作用或免疫接 種步驟。 6·如申請專鄕圍第⑴項巾任-項之―種方法或免疫 接種方法，其中在免疫接種之際所形成的抗體反應主要 是一種Th2反應，雖然其可能含有一種Thl反應之可偵測 組分。 7·如申請專利範圍第1至6項中任-項之-種方法或免疫 接種方法，其中該炎症係慢性牙周炎。 8. 如申請專利範圍第7項之—種方法或免疫接種方法 ，其中 X牙周係與牙民紫質單胞菌（ρ·尽㈣心⑻感染相關聯。 9. 如申料利範圍第項巾任—項之一種方法或免疫 接種方法，其巾祕免錢種作狀免疫原係—種牙酿 1質單胞菌（W邮滅β細胞、片段、代謝物或自其所 衍生的重組產物。 10. 如申請專·圍第9項之—種方域倾接種方法，其 中衍生自牙齦紫質單胞菌（尸· ⑷的重組產物係— 種嵌合肽或融合蛋白。 11. 如申請專職圍第1G項之—種方法或免疫接種方法，其 中5玄嵌合或融合蛋白係用於誘發該個體對於牙齦紫質 201138813 單胞菌（尸.的免疫反應，該蛋白包括直接或經 由一連接子而與第二肽連接之第一肽，其中： (A) 該第一肽包括： ⑴與序列辨識編號：1中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；或 (ii)與序列辨識編號：2中所示序列相同或同源 之一序列的部分或全部；及 (B) 該第二肽包括： ⑴與牙酿紫質單胞菌（P. 的離胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (ii)與牙酿紫質單胞菌（尸· giTzgZva/⑷的精胺酸 -X-蛋白酶之黏連蛋白域的序列相同或同源之一序 列的部分或全部；或 (出)與牙齦紫質單胞菌（尸.07^><2仏)之1^旦八黏 連蛋白域的序列相同或同源之一序列的部分或全部。 11. 如申請專利範圍第11項之一種方法或免疫接種方法，其 中該嵌合肽或融合蛋白係在此所述之KASl-KsAl或 KAS2-KLA1。 12. 如申請專利範圍第2或3項之一種方法或免疫接種方 法，其中該消炎劑係包括消炎化合物、抗生素及抗生物 膜劑中之一或多者。 3
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