TW201024301A - Amino pyrazole compound - Google Patents

Description

201024301 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種適用於治療慢性骨髓增生性疾病及各 種癌症，例如：神經膠質母細胞瘤、乳癌、多發性骨髓 k 瘤、前列腺癌、及白血病之胺基α比D坐化合物。 ‘ 【先前技術】 詹納斯激酶（Janus k:inase)2(JAK2)係參與細胞介素信號傳 遞之酪胺酸激酶家族中之一員。JAK2在紅血球生成素 ❿ （EPO)信號傳遞途徑中具有至關重要的作用，其包括紅血 球分化及Stat5活化。近期的研究證實，患有慢性骨髓增生 性疾病（如紅血球增多症、原發性jk小板增多症、及併發 骨髓異常增生之骨髓硬化）及血栓疾病（如活化蛋白質C抗 性、内臟靜脈血栓症、巴德-希亞利症候群（Budd-Chiari Syndrome)、及肝門靜脈血栓症）之患者經常在JAK2中出現 活化突變。該突變（6 1 7位置胺基酸上之纈胺酸被苯丙胺酸 置換）經由未知機制導致組成性酪胺酸磷酸化活性。JAK2 突變株之組成性活性導致磷酸化JAK2、pSTAT5、及 STAT5之轉錄活性程度提高，造成骨髓增生性疾病及白血 、 病，如：非典型慢性骨髄性白血病之致病性。另外， JAK2被實體及血液性腫瘤中依賴介白素之自分泌環或其

W 它基因變化而活化，例如：神經膠質母細胞癌、乳癌、多 發性骨髓瘤、前列腺癌、原發性及次發性急性骨髓性白血 病、T-系及B-系急性淋巴胚細胞性白血病、骨髓發育不良 症候群。 144477.doc 201024301 已報導各種胺基D比β坐赂胺酸激酶抑制劑。參見（例 如）WO 06087538及 WO 2007064797。 【發明内容】 但是’仍需要可抑制酪胺酸激酶（如jAK2)之其他化合 物。本發明提供一種新穎胺基吡唑化合物，咸信其具有用 於治療其中JAK2信號途徑已活化或其中JAK/STAT信號調 節異常之骨髓增生性疾病上之臨床用途。 本發明提供3-(4-氣-2-氟节基）_2_曱基_N_(5_甲基_1H_n比 峻-3·基）_8-(嗎啉基甲基）咪唑并⑴叫噠嗪_6胺或其醫藥 上可接受的鹽。 本發明提供—種治療哺乳動物中選自由多發性骨髓瘤、 原發性血小板增多症、及伴隨骨髓異常增生之骨髓硬化組 成之群之慢性骨趙增生性疾病之方法，其包括對需要此等 治療之哺乳動物投與有效量之3_(4_氯_2_氟节基甲 基-n-(5_甲基·1Η^3_基）_8_(嗎琳基甲基）味嗤并⑴ 噠嗪-6-胺或其醫藥上可接受的鹽。 本發明亦提供-種治療患者之神經膠f母細胞瘤、 癌、多發性骨髓瘤、前列腺癌、及白血病，如：非血型, 性骨㈣白血病、原發性及次發性急性骨難白血2、 系及B-系急性淋巴胚細胞性白血病、骨髓發育不良以 群、及骨髓增生性疾病之方法，其包括對需要此等治療 患者投與有效量之3_(4_氣_2_氟节基甲基仰甲基 1H-吼唾-3·基）_8_(嗎琳基甲基）料并[〗， 醫藥上可接受的鹽。 豢6胺幻 144477.doc 201024301 本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含3-(4-氯-2-氟苄 基）-2-甲基-Ν-(5-曱基-1Η-°比唑-3-基）-8-(嗎啉基甲基）咪唑 并[l，2-b]噠嗪_6_胺或其醫藥上可接受的鹽，其醫藥上可接 受的載體、稀釋劑或賦形劑。 本發明亦提供3-(4-氣·2-氟苄基）_2_甲基_n-(5 -甲基-1H-吡唑-3-基）_8_(嗎啉基甲基）咪唑并噠嗪_6_胺或其醫

藥上可接觉的鹽，及醫藥上可接受的載體、稀釋劑或賦形 劑，其係與另一治療成份組合。 本發明亦提供用作藥劑之3_(4_氣_2_氟节基）_2_曱基氺 (5-曱基-1H-吡唑_3_基）_8·(嗎啉基甲基）咪唑并[i2b]^ 秦6胺或其醫藥上可接受的鹽。另外，本發明亦提供一種 以3-(4·氣-2-氟_基）_2_甲基_N_(5甲基-ΐΗ4 〇坐_3基）_8 (嗎琳基甲基）咪唾并n，2_b]建嗪领或其醫藥上可接受的 f於製造用於治療慢性骨髓增生性疾病之藥劑之用途。特 定言之，該等慢性骨髓增生性疾病係選自由以下組成之 群：多發性骨趙瘤、原發性血小板增多症、及伴隨骨聽異 常增生之骨趙硬化。再者’本發明提供—種用於治療選自 由以下組成之群之慢性骨趙增生性疾病之醫藥組合物：多 發性骨髓瘤、原發性血Μ —夕+ 小板增多症、及伴隨骨髓異常增生 之骨越硬化，該醫藥命人从λ 好 I樂組合物包含作為$性成份之3-(4- 2氣节基）_2· f基仰基）〜嗎淋基 f基)咪嗤开"，2姻嗪·6_胺或其醫藥上可接受的鹽。 習此相關技藝之讀者應捧紐， ‘…' 本發明化合物可形成鹽。 本發明化合物係胺且因此可 兴任何2：之無機及有機酸反 144477.doc 201024301 應，以形成醫藥上可接受的酸加成鹽。相關技術中已熟知 該醫藥上可接受的酸加成鹽及製備其等之常用方法。參見 (例如）P. Stahl等人·，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE (VCHA/ Wiley-VCH，2002) ; L.D. Bighley，S.M. Berge，D.C. Monkhouse, in 「Encyclopedia of Pharmaceutical Technology」o J. Swarbrick及 J.C. Boylan編輯，13卷，Marcel Dekker公 司，紐約，巴塞爾，香港，1995，453至499頁；S.M. Berge 等人.，「Pharmaceutical Salts」，Journal of Pharma-ceutical Sciences, 66卷，No. 1，January 1977 o 【實施方式】 以下製法及實例係利用ChemDraw Ultra，10.0版本命 名。 反應法1 : 製法1 1-(4_甲氧基苄基）-5-甲基-1H-吡唑-3-胺 方法1 : 在1 L圓底燒瓶中，使5-胺基-3 -甲基吼唑（22.8 g，234.8 mmol)與N-甲基吡咯烷酮（200 ml)組合。將燒瓶冷卻至〇。〇 並置於氮氣中。將氫氧化鈉（9.39 g，1.0當量（當量））添加 至燒瓶中並授拌30分鐘（min)。將含α-氣-4-甲氧基曱苯（31 ml，1.0當量）之Ν-曱基吡咯烷酮溶液逐滴添加至燒瓶。使 該反應慢慢回升至室溫（RT)過夜。用水稀釋該反應物，並 用乙酸乙醋（EA)萃取。用飽和氣化鈉水溶液沖洗該有機 144477.doc 201024301 層。在真空中濃縮。在矽石管柱上純化（己烷〜2:丨己烷： EA->3:2 己烧· EA->1:1 己垸：ΕΑ->1··2 己烧：EA—EA)。 濃縮所需之溶離份’得到標題化合物（10.8 g，21%)。 LCMS(4 min)=218.0(M+l)。 方法2 : ·> A. 2-(4 -甲氧基亞节基）骄叛酸（e)_第三丁西旨 於50°C時，以20 min將4-甲氧基苯甲醛（400 g，2.94

_ mol)添加至含肼基甲酸第三丁酯之曱苯溶液（75〇 ml)。以1 小時（h)加熱至回流，收集與曱苯共沸之水。不再收集到水 後，冷卻至60°C。添加己烷直到溶液中產物沉澱。進一步 將冷卻槽冷卻至20°C。過濾收集固體，用氮氣壓乾燥，得 到標題化合物（750.5 g，91%)。NMR[400 MHz，二甲基 亞砜-d6(DMSO-d6)] δ 10.6-10·8 (bs, 1H)，7.88-8.0 (S，1H)， 7.5-7.55 (d，2H)，6.95-7.0 (d，2H)，1.45 (s，9H)。ES/MS (m/z)，249[M-H]。 ❹ B. 2-(4-甲氧基苄基）肼羧酸第三丁酯 經由真空移液器添加含於Εα( 1〇〇 ml)中之10%把/碳（濕 重’ 20 g)漿液至密閉壓力反應器中。以最少量ea潤洗傳 ' 輸線。經由真空移液器將溶解於四氫呋喃（THF，1000 mL) 、 之2-(4_甲氧基亞苄基）肼羧酸（E)-第三丁酯（320 g，1.28 mol)饋入並以最少量thf潤洗通路。於20土10。(：時，以氫 氣加壓反應器至50 PSI，並混合反應器之内容物。於50 PSI時’維持氫氣壓繼續反應直至未進一步觀察到氫氣排 出。過渡反應溶液以去除觸媒並以THF(500 ml)清洗濾 H4477.doc 201024301 餅。將洗液添加至反應濾液。於真空中濃縮溶液，獲得油 狀標題化合物（337 g，86%)。1HNMR(400 HMz，D^ίSO-d6) δ 8.1-8.3 (s, 1H), 7.1-7.3 (d, 2H), 6.8-6.9 (d, 2H), 4.4-4.6 (bs, 1H), 3.7-3.8 (s, 2H), 3.6-3.7 (s, 3H), 1.3-1.5 (s, 9H)。 C. (4-曱氧基苄基）肼二鹽酸鹽 以1小時（h) ’將溶解於最少量二嗯炫中之2-(4-甲氧基节 基）肼羧酸第三丁酯（324 g’ 1.09 m〇l)慢慢添加至含4 ^^鹽 酸之二噁烷溶液（2000 m卜8.00 mol鹽酸）中。逐步形成沉 殿。可於20±5 C下授拌該溶液16 h。過滤枚集固體。將該 等固體於庚炫》(2000 ml)中調成毁液，並過濾、單離該等固 體。用氮氣壓乾燥固體得到標題化合物（242.3 g，ι.〇8 mol * 98%) 〇 NMR (400 HMz, DMSO-d6) δ 8.2-9.0 (bs9 5H)，7.3-7.4 (d，2H)，6.8-7.0 (d，2H)，4.0 (s，2H)，3.7 (s 3H)。 D. 1-(4-甲氧基苄基）-5 -曱基-1Η-»比唑-3-胺及1·(4_甲氧基节 基）-3-甲基-1Η-吡唑基-5-胺 於22°C下，使第三丁醇鉀（191.89 g，i.71 m〇1)與 THF(2000 ml)組合。混合直到獲得均質化溶液。冷卻至 5 C。以45 min，將乙腈（84.25 g，2.05 mol)與乙酸曱酯 (126.7 g，1.71 mol)之預混溶液添加至第三丁醇鉀溶液並 保持溫度低於10°C。添加完成後，反應物回升至2〇±51並 攪拌約2 h。以約5 min時間，分批添加（4_甲氧基苄基）二氫 氣化肼（250 g)至反應中，接著以保持溫度<3〇〇c之速度添 144477.doc 201024301 加4 N鹽酸之二噁烷溶液（262.5 g，1.00 mol)。添加完成 後’於25±5°C時，攪拌約16小時。過濾單離固體，並以 THF(500 ml)清洗。粗固體於二氣曱醇（DCM，4 L)及水（2 L)中調成漿液，並以5 N NaOH調整pH至>10。分層，並收 集該有機相。以DCM(2 L)清洗水相。使有機相組合，經無 水硫酸鈉乾燥，於真空中濃縮溶液形成固體，得到165 g 粗產物。粗產物於乙酸異丙酯（660 ml)中加熱回流，以使 盡可能多之固體溶解。冷卻至33。(：並以1 h慢慢添加己 烧。冷卻至1 (TC並維持1 〇。(：溫度1 〇 min。過濾單離固體， 以己院（200 ml)清洗，並用氮氣壓乾燥，得到標題化合物 之混合物（91.5 g，〇_4 mo卜 47%)。4 NMR (400 HMz， DMSO-d6) δ 7.2-7.3 (d，2H)，6.7-6.9 (d，2H)，5.1 (bs，2H)， 5.0 (s，1H)，4.9 (s，2H)，3.6-3.8 (s，3H)，1.9 (s，3H)。 備註：可藉由層析法分離該等中間產物，但在此情況 下’該等中間產物係呈混合物形式單離，且可用於以下最 終步驟中，包括去除苄基保護基，形成相同的產物。 製法2 2·氣-1-(4 -氯-2-氣苯基）乙綱 於1 L圓底燒瓶中組合4，_氯_2,_氟苯乙酮（4〇 g，2318 mmol)、庚燒（12〇 mL)、及曱醇（16 mL)。冷卻至〇°C並置 於氮氣下。將硫醯氣（21.5 mL)溶解於庚烷中（12〇 mL)並將 其等饋入至附加漏斗。以6〇 min逐滴添加至反應中。於 0 C下攪拌2.5 h ;在該時間内，有白色沉澱形成。然後將i Μ碳酸氫鈉（400 mL)饋入附加漏斗中，滴加至反應中。在 144477.doc 201024301 所有氣體放洩停止後，過渡兩相懸浮液，收集白色針形標 題化合物（38.18 g ’ 80%)。NMR (DMSO-d6) δ 5_00 (d， 2H, J=2.5 Hz), 7.43 (m, 1H), 7.63 (m, 1H), 7.89 (t, 1H, J=8.4 Hz)。 製法3 (E)-N’-(6-氣噠嗪_3_基）_n,N-二甲基乙醯亞胺.酿胺 於2 L圓底燒瓶中’組合3·氣-6-達嗪胺（43.2 g，333.5 mmol)、甲苯（500 mL)、及N，N-二甲基乙醯胺二甲基縮醛 (67·8 mL ’ 1.25當量）。附接回流冷凝器，然後加熱回流2 h。冷卻至RT。於真空中濃縮。粗產物與己烷磨製並過濾 單離淺棕色固體標題化合物（60.4 g，91%)。MS = 199.0 (M+1) ° 製法4 (4-氣-2-氟苯基）(6-氣-2-曱基咪唑并[1,2-b]噠嗪-3-基）甲酮 於圓底燒瓶中，組合（Ε)-Ν，·(6-氯噠嗪-3-基）-Ν,Ν-二甲基 乙醯亞胺醯胺（36.61 g，184.3 mmol)、2_ 氣-1-(4-氣-2-氟 苯基）乙酮（3 8· 15 g，1當量）、及二甲基曱醯胺（150 mL)。 置於氮氣中，然後於120°C下加熱4 h。冷卻至RT並攪拌過 夜。以EA(1 L)及水（5 00 mL)稀釋。依序以水及飽和氣化鈉 水溶液萃取有機相三次。以無水硫酸鎂乾燥有機相。真空 過濾並濃縮。經矽石管柱純化（己烷—4:1己烷：EA—3:1己 烷：EA—2:1己烷：EA—1:1己烷：EA)並分離淺綠色固體標題 化合物（33.8 g，57%)。LCMS(4 min=324.0，326.0， M+1) ° 144477.doc •10- 201024301 製法5 2-((6-氣-3-(4-氯-2-氟苯甲醯基）-2-甲基咪唑并[ij-b]噠 嗪-8-基）甲基）異吲哚啉-1，3-二酮 . 於附接滴加漏斗之圓底燒瓶中並置於氮氣下，組合（4_ 氯-2-氟苯基）(6-氣-2-甲基咪唑并[l，2-b]噠嗪-3-基）甲酮（5.6 g，17.3 mmol)、N-鄰苯二曱醯甘胺酸（6.0 g，1.7當量）、 乙腈（60 mL)、水（15 mL)、三氟乙酸（0·26 mL，0.2當量）、 ©及硝酸銀（294 mg，0.1當量）。加熱至70°C並於此溫度下保 持15 min。將過硫酸銨（7.1 g，ι·8當量）溶解於水（15 mL) 中並饋入滴加漏斗中。以大約20 min滴加至反應燒瓶中。 於70°C下加熱反應1 h。在此期間形成沉澱；經布氏漏斗 過濾，單離灰白色固體標題化合物粗產物（7.3 g，87%)。 LCMS(4 min)=483.0，485.0，M+1)。 製法6 (8-(胺基甲基）-6-氣-2-甲基咪唑并[l，2-b]噠嗪-3-基）(4-φ 氯-2-氟苯基）曱酮 於圓底燒瓶中並置於氮氣中，組合2-((6-氣-3-(4-氣-2-氟 苯曱酿基）-2-甲基η米唾并[1，2-b]哮唤-8-基）甲基）異>»弓丨》朵 啉-1,3-二酮（7.30 g，15.1 mmol)、乙醇（200 mL)、及肼 . (1.45 mL，3當量p於RT下擾拌2天。於50°C下加熱2 h， 然後於真空中濃縮反應。以EA稀釋。以1 N HC1(水溶液） 清洗有機相使產物進入水層。以1 N NaOH(水溶液）處理水 層呈鹼性並以EA萃取。以飽和氯化鈉水溶液清洗EA層， 並以無水硫酸鎂乾燥。於真空中過濾並濃縮，得到淺綠色 144477.doc -11 - 201024301 固體標題化合物粗產物（1.2 g，23%)。MS=3 55.0，355.0 (M+1)。 製法7 (4 -氣-2-氣本基）(6 -氣-2-曱基-8-(嗎琳基甲基）味唾并[1,2_b] 噠嗪-3-基）甲酮 於20 mL微波反應容器中’組合（8-(胺基曱基）_6_氣_2_曱 基咪唑并[l，2-b]噠嗪-3-基）(4-氣-2-氟笨基）甲酮（115 g， 3.3 mmol)、水（12 mL)、破酸钟（495 mg，1.1 當量）、及 2· 溴乙基醚（0.47 mL，1.1當量）。以螺旋蓋密封，然後於 20°C下’於微波反應器中加熱20分鐘。冷卻至尺丁並分溶在 EA與水之間。以飽和氯化鈉水溶液清洗ea層，並以無水 硫酸鎮乾燥。於真空中乾燥並濃縮。經矽膠純化（4:丨己 烷：EA—2:1己烷：ΕΑ—1:ι己烷：EA)得到淺黃色泡沫狀 標題化合物（0.43 g，31%)。LCMS(4 min)=423.0，425.0， M+1。 製法8 (4-氣-2-氟苯基）(6_氣_2_曱基_8_(嗎啉基甲基）咪唑并uj—b] 噠嗪-3-基）甲醇 於圓底燒瓶中，組合（4-氣-2·氟苯基）(6-氯-2-甲基-8_(嗎 琳基甲基）-咪唑并[l，2-b]噠嗪-3-基）甲酮（0.43 g，h() mmol)及甲醇（15 mL)。置於氮氣下並冷卻至〇cc。_次添 加全量氫硼化鈉（58 mg，1.5當量）❶於此溫度下攪拌5 min ’然後離開冷卻槽’並回升至rt β 15 min後，以水中 止反應，然後以EA萃取。依次以水及飽和氣化鈉水溶液 144477.doc 201024301 於真空中過濾並 。LCMS(4 min)= 清洗有機相。以無水硫酸鎂乾燥有機相。 濃縮’得到標題化合物（0.4 g，93%ι 425.0 ’ 427·〇，m+1 〇 製法9 4-((6-氣-3-(4-氯_2-氟苄其、7田甘， ^ 氣下暴）_2·甲基咪唑并[l，2-b]噠嗪-8-基） 甲基）嗎琳 於圓底燒瓶中並置於氮氣中’組合（4H氟苯基 氣_2_甲基_8·(嗎琳基甲基）_咪唾并Mb]健嗪-3-基）甲酵 (0.4 g ’ 0.94 mm〇i)、i，2_:氯乙烧（25㈣、三乙基石夕炫 (0.45 mL，3當量）、及三氟乙酸（〇 57机，8當量）。於 7〇〇C下加熱過夜。於真空中濃縮反應。裝載至 MegaElut® i 0 gram SCX離子交換卡管上（以甲醇預清洗）。 以甲醇溶離，去除非鹼性雜質。以2厘氨之曱醇溶液洗 /條。於真工中濃縮，得到標題化合物（Ο.% g，94%)。 LCMS(4 min)=409.0，411.0，M+1。 製法10 3-(4-氯-2-氟苄基）-Ν-(1-(4-甲氧基苄基）_5_甲基_1Η_〇Λ 唑-3-基）-2-甲基-8-(嗎啉基f基）咪唑并[ij — b]噠嗪_6_胺 於圓底燒瓶中，組合4-((6氣-3-(4-氣-2-氟苄基）-2-甲基 11米嗤并[l，2-b]噠嗓-8-基）甲基）嗎淋（0 36 g，0.88 mmol)、 1-(4-甲氧基苄基）-5_甲基-1 Η-〇比嗤-3 -胺（0.248 g，1.3當 量）、碳酸鉀（〇·30 g，2.5當量）、4,5-雙（二苯基膦基;)·9,9-二甲基咕噸(0.076 g，0.15當量）、水（2 mL)、及ι，4-二噁烷 (20 mL)。以氮氣徹底脫氣’然後添加二（二亞节基丙酮）把 144477.doc •13- 201024301 (0·10 g ’ 0.2當量）。附接回流冷凝器並置於氮氣中。於回 流下加熱反應過夜。反應經過矽藻土管柱。以E A清洗該 管柱。轉移至分液漏斗中’並以水清洗。以氣化鈉水溶液 清洗有機層，並以無水硫酸鎂乾燥。於真空中過濾並濃 縮。經矽膠純化（EA—10〇/〇曱醇：EA)，得到淺黃色固體標 題化合物。LCMS(4 min)=590.2，591.2，M+1。 實例1

3-(4-氣-2-氟苄基）-2-曱基·Ν-(5-甲基-1H·«比唑-3-基）-8-(嗎 啉基曱基）咪唑并[l，2-b]噠嗪-6-胺 於20 mL微波反應器試管中，組合3_(4_氯_2_氟苄基）_N_ (1-(4-甲氧基苄基）-5-甲基η-«比唑-3-基）-2-甲基-8-(嗎啉 基甲基）咪唑并[l，2-b]噠嗪-6-胺（0.447 g，0.76 mmol)及三 氟乙酸（10 mL)。以螺旋蓋密封，然後於12〇。(：微波反應器 中加熱20 min。分溶於EA與以過量NaOH水溶液調成鹼性 之水之間。依次以NaOH水溶液及飽和氣化鈉水溶液清洗 有機相三次。以無水硫酸鎂乾燥。於真空中過濾並濃縮。 經石夕膠純化（EA410%甲醇：EA)，得到淺黃色固體標題化 合物（0.246 g，0.52 mmol)。LCMS(8 min)=470.〇，M+1。 144477.doc 14 201024301 實例2

❹ ❹ 3-(4-氣-2·氟节基）_2_甲基仰wu-基)_8_(嗎 琳基甲基）咪唑并[l，2-b]噠嗪_6_胺鹽酸鹽 於梨型瓶令並置於氮氣下，組合3-(4-氣-2-氟苄基)_2_甲 基N (5甲基_1H“n3_基）_8·(嗎轉甲基）^^并[i，2_b] 噠秦6胺（G’l g ’ 〇 21 _〇1)及14_二。惡燒⑽叫。添加 鹽酸（4 Μ l4' — °惡烧溶液，0.053 mL，1·〇當量）並於尺丁 下，於氣氣中搜拌m。於真空中濃縮，然、後於真空中自 無水乙醇中蒸發兩次。於真空烘箱（⑼。c)乾燥過夜，得到 標題化合物（o.u g ’ 102%)。LCMS(8 min)=47〇 〇，_。 反應法2 : 製法11 (E)-N -(6·氣噠嗪_3_基）_N，N，_二甲基乙醢亞胺醯胺 組合 6-氣噠嗪 胺（1.500 kg，u 58 m〇1)、l sl_二甲氧 基-N，N_二甲基乙胺（2.313 kg，17.37 mol)及環戊基曱醚， 然後加熱至98°C，同時餾出所得甲醇副產物。4匕後，冷 卻反應混合物至室溫，並添加庚烷（11 2 mL)至反應溶液， 以結晶產物。過濾收集標題化合物並乾燥。（1 494 kg， 144477.doc 15· 201024301 64.95% ； mp=73〇C ) 製法12 2-氯-1-(4-氣-2-氟苯基）乙醇 攪拌庚烷（1.5 mL)、甲酵（〇·4 L)、及1-(4-氣-2-氟苯基） 乙醇之混合物並冷卻至<5°C。滴加硫醯氯（0.608 L，1.02 kg，7.5 5 mol)之庚烷（1·5 mL)溶液至混合物中，添加期間 保持反應溫度<15°C。2 h後，在周圍溫度下利用氫氧化鈉 (5 N ’ 2·0 L)調至pH=6中止反應。用二氣甲烷l)萃取該 反應混合物’並濃縮該萃取物，形成白色固體。過濾並乾 燥該固體。 製法13 (4 -氣-2 -敗苯基）(6 -氣-2-曱基》米唾并[i，2-b]璉嗪-3-基）曱酿I 於DMF(10.14 L)中，組合2-氣-1-(4-氯-2-氟苯基）乙醇 (1.5 kg，5.44 mol)、及（E)-N’-(6-氣噠嗪-3-基）-N，N'-二曱 基乙醯亞胺醯胺（1.19 kg，5.72 mol)並於120°C下加熱5 h。冷卻後，加水（30 L)並攪拌至產物結晶。收集過濾產 物，並以水（2xl2 L)及庚烷（2x12 L)清洗濾餅，然後於真 空下乾燥獲得標題化合物。（1.490 kg，84.44%， mp=160°C，M+=324)。 製法14 (4-氣-2-氟苯基）(6-氣-2-甲基- 8-(嗎琳基曱基）咪„坐并[i,2_b] 噠嗪-3-基）甲酮 將乙醇（12 mL)、（4-氣-2-氟苯基）(6-氣_2_甲基咪唾并 [l，2-b]達嗪-3-基）曱酮（897.70 g，2.77 mol)及雙（2,4-戊二 144477.doc • 16 - 201024301 醢基）氧代釩（IV)(146.81 g，553.67 mmol)添加至含氮氣氛 圍之反應容器。以150 min’滴加4-甲基嗎琳4-氧化物（3.89 kg’ 33.21 mol)之乙醇溶液（6 mL)並保持反應溫度於23-33 C下，然後於40°C下加熱反應48 h。冷卻反應並濃縮去 除溶劑（13 L) »過濾所得混合物，以己烷（1 L)清洗濾餅， 然後乾燥。（728 g ’ 66.25%，mp 145-147°C ; M+=423)。 製法15

❹ 4-((6-氣-3-(4-氯-2-氟苄基）_2_甲基咪唑并[i,2-b]噠嗪-8-基） 甲基）嗎啉鹽酸鹽 於26C下，組合二乙基石夕烧（no g，946 mmol)及（4-亂-2 -氟本基）（6 -氣-2-甲基- 8-(嗎琳基甲基）咪坐并[1，2_b]建 唤-3-基）甲酮（50.1 g，117.06 mmol)形成溶液。將三氟乙 酸（150 mL，1_98 mol)添加至反應混合物，然後於78〇c下 加熱24 h ^冷卻反應至周圍溫度，並分離混合物，去除上 層。以乙酸乙酯（1 L)溶解底層，並以氫氧化鈉（4 N，5〇0 mL)調整pH至11。分離有機層，並添加HC1(4 Μ乙趟溶液） 至有機層’形成HC1鹽。過濾並乾燥HCi鹽。（1〇〇 g (96%) ； mp=237-238〇C，M+=409)。 製法16 3-(4 -氣-2-氟苄基）-2 -甲基-N-(5 -甲基- lH-°比唾_3_基）_g_(嗎 啉基曱基）咪唑并[l，2-b]噠嗪-6-胺鹽酸鹽及游離驗 於DMF(25 mL)中組合氣化銘（160 mg，〇.9〇 mm〇i)與 4 5_ 雙（二苯基膦基）-9,9-二曱基咕噸（1.10 g，184 mm〇1)，製 成活性觸媒，並加溫形成溶液。將預製觸媒添加至含3_甲 144477.doc -17- 201024301

基 _1Η_° 比唾-5-胺（3·〇 g，29.65 mmol)、4-((6-氯-3-(4-氣-2-氣节基）-2-甲基咪唑并[ij-b]噠嗪-8-基）甲基）嗎啉鹽酸鹽 (9·〇 g ’ 20.19 mm〇i)、碳酸氫鉀（6.0 g，59.93 mmol)之 DMF(65 mL)溶液中，並加熱至i5〇°C 1 h。冷卻反應至60°C 並添加巯丙基官能化矽石（5〇〇 mg)並攪拌1 h，然後過濾去 除石夕石。冷卻至周圍溫度，添加2-甲基四氫呋喃（125 mL) 並以水萃取去除DMF。將hci添加至有機溶液中，形成 3-(4-氣-2_氟苄基）_2_甲基_N_(5_甲基_1H吡唑_3•基）8(嗎 啉基甲基）咪唑并[l，2-b]噠嗪-6-胺鹽酸鹽。將該HC1鹽」 g)添加至含氫氧化鈉（10 mL，！ N)之正丁醇（1〇 mL)溶液 中，並攪拌。過濾所得混合物，獲得〇 22 g游離鹼：3 [(4_ 氣-2-氟苯基）甲基]_2_曱基·N_(5_甲基·1H_eib峻小基）_8_(4_ 馬琳基曱基）咪。坐并[l，2_b]建嗪冬胺，（22%產率，Μ+ι = 470) 〇 3-(4-氣-2-氟节基)_2·曱基_Ν_(5·甲基_ιη-吡唑_3·基㈣嗎 啉基甲基）味唾并Π，2_bM嗅_6•胺之調配物 視需要使3♦氣_2_氟节基）_2_甲基_N_(5mH^ 唾冬基）冬(嗎琳基甲基）咪唾并Π，2姻噪冬胺與賦形劑 通過合適筛網。使用合適報筒(含有或不含有增強棒)或其 它合適混合裝置’將3-(4_氯I氟节基)·2-甲基·Ν♦甲 基-m-…:基嗎琳基甲基)咪唾并Μ懒唤冬 :粉t、及含^甲妙酮(—μ)之預糊化 粉，“並…或者，在現合期間，經由液體添加系統 144477.doc 201024301 添加二曱石夕酮（dimethicone)。用合適封裝裝置將經混合粉 末填入膠囊。在填充期間，監測重量之均一性及接近製程 中之參數（appropriate in-process parameter)。視需要藉由人工或自 動化處理最終膠囊之除塵或拋光。

基於JAK2 EPO-TF l/pStat5細胞之分析法_ Cellomics ArrayScan®HCS 基於JAK2 EPO-TFl/pStat5細胞之分析法係模擬分化紅 血球先驅細胞中之JAK2-STAT5之組成活性，其導致紅血 球過度產生，係紅血球增多症(PV)之標記物。 TF-1 (人類紅血病）細胞係保持於含10%胎牛血清（FBS)、 0.075%碳酸氫鈉、1 mM丙酮酸鈉、lx抗生素/抗黴劑 (Invitrogen，Carlsbad，CA)及 0.45。/〇 葡萄糖之 RPMI-1640 中（RPMI-1640 係由莫爾（Moore)等人於 Roswell Park Memorial Institute中發展。該調配物係基於利用碳酸氫鹽 緩衝液系統之RPMI-1630系列培養基，及並改變胺基酸與 維他命量）。在該培養基中補充GM-CSF(粒性巨噬細胞群 落刺激因子），最終濃度2 ng/mL。於37°C時，細胞保存於 5% C02中。細胞於無血清培養基中饑餓處理，以去除内源 性生長因子。計算TF-1細胞數，並收集2χ107個接種細 胞，於96-孔板中每孔接種2xl05個細胞。先以未補充之 RPMI 1640(含0.075%碳酸氫鈉、1 mM丙酮酸鈉、1χ抗生素/ 抗黴劑、及0.45葡萄糖之RPMI 1640)清洗細胞兩次後，以 含0·6% FBS之RPMI懸浮細胞，最後濃度為5xl05個細胞/ mL，。將稀釋後之細胞回加至組織培養瓶，並於37。(：培 144477.doc -19- 201024301 養過夜。於100% DMSO中，製備10 mM濃度測試化合物。 以100% DMSO將化合物系列稀釋1:3，製成1〇個點-200x濃 度效應範圍（4 mM-200 nM)。在另一個96深孔板中’將2·5 pL之200χ化合物溶液加至125 μι之含10% FBS之完全RPMI 1640培養基中，製成4χ濃度化合物分析板。 為進行分析’收集經血清饑俄細胞，並以未補充RPMI 1640培養基清洗一次。細胞懸浮於含10% FBS之完全RPMI 培養基中，最後濃度為8xl〇5個細胞/mL。取等分之25〇 μί 已稀釋細胞（2x1 〇5個細胞）加至4χ濃度化合物分析板之各孔 中。藉由渦轉混合細胞’分析板於37°C水浴中培養1〇 min。使用預熱之含10% FBS之完全RPME 1640培養基製備 6.4個單位/mL之促紅血球生成素（EPO)之新鮮4x操作溶 液。以化合物處理細胞10 min後’將125 pL EPO培養基添 加至各孔中並渴轉混合分析板。細胞於37°C水浴中培養20 min並在培養期間，每5 min混合一次。在0.5% DMSO最後 濃度下，在20 μΜ至1 nM之間製作最後10點濃度-效應範 圍，EPO為1.6 U/mL。在細胞處理完後，將500 μίΐ%曱醛 溶液（由磷酸鹽緩衝生理食鹽水（PBS)新鮮配製，並於37°C 保溫）添加至各孔中。將分析板密封並反轉混合8至10次。 將分析板置於37°C水浴中10 min。培養後，於室溫（RT) 下，細胞分析板在1200 rpm下離心5 min。吸取上澄液’保 留100 μ]：細胞（2X105個細胞）。藉由重複離心步驟渦轉混 合，並以800 pL PBS清洗兩次該細胞，且於最後清洗後， 留下100 μί含約2xl〇5個細胞。添加一份800 μι之90%冷曱 144477.doc -20- 201024301 醇至細胞中並置於-20°C過夜。離心分析板並去除甲醇。 以FACS缓衝液（含5% FBS及0.02%疊氮化鈉之PBS)清洗細 胞。取一份在螢光活化細胞分選（FACS)緩衝液中稀釋10倍 之 200 pL Alexa Fluor 647® 小鼠抗-pSTAT5 (pY694)添加至 細胞中。均勻混合細胞，並於RT及黑暗中培養2 h。以PBS 清洗細胞一次且留下100 μί細胞。以PBS製備2 gg/mL之 Hoechst(Acros Organics，Morris Plains，NJ)操作溶液。在 各孔中添加200 μί，細胞於RT及黑暗中培養10分鐘。以 PBS清洗細胞，並將50 mL Cytofix(BD Biosciences，San Jose，CA)加至細胞中。將細胞移至96孔黑色組織培養板 中並密封。離心該分析板。使用Cellomics Arrayscan® VTi 收集並分析平均螢光強度數據。比較化合物處理組與載體 處理組，以決定抑制百分比數據。兩種不同IC5〇之測試化 合物之間之最小顯著比（MSR)經測定為2.2。採用 ActivityBase 4.0之4參量邏輯曲線擬合分析計算相對IC5〇。 對於3-(4-氯-2-氟苄基）-2-曱基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基）-8-(嗎啉基甲基）咪唑并[l，2-b]噠嗪-6-胺，IC50=0.〇33 μΜ，n=4。該分析結果證明3-(4-氯-2-氟苄基）-2-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基）-8-(嗎啉基甲基）咪唑并[l，2-b]噠 嗪-6-胺係強效JAK2抑制劑。

基於JAK3 IL-2-NK-92/pSTAT5細胞之分析法-Cellomics ArrayScan® HCS IL-2會活化天然殺手（NK)細胞中之JAK3途徑，以驅動 NK及CD8淋巴球細胞增生。因此，基於IL-2所刺激 144477.doc -21- 201024301 NK92/pSTAT5細胞之分析法可於活體外分析JAK2化合物之 JAK3細胞活性。 NK-92(天然殺手）細胞（ATCC，Manassas，VA)係保持在 含15%胎牛血清、15%馬血清及lx抗生素/抗黴菌劑 (Invitrogen，Carlsbad，CA)之最基本培養基（MEM)Alpha 中。在該培養基中補充IL-2(R&D systems，Minneapolis， MN)，最終濃度為4 ng/mL。將細胞保存於37°C與5% C02 中。細胞於無血清培養基中饑餓處理，以去除内源生長因 子。計算NK-92細胞數並收集2xl07個接種細胞，於96-孔 板中每孔接種2χ105個細胞。以未補充之MEM Alpha(MEM Alpha)清洗細胞兩次後，以含0.6%血清之MEM Alpha(0.3% FBS、0·3 %馬血清）懸浮細胞，最後漢度為8 χ 105個細胞/ mL。將已稀釋細胞回加至組織培養瓶中，並於37°C下培 養過夜。於100% DMSO中，製備1 〇 mM濃度測試化合物。 以100% DMSO，將化合物系列稀釋1:3，製成10個點-200x 濃度-效應範圍（4 mM_2〇0 nM)。在另一個96深孔板内，將 2.5 之200x化合物溶液添加至125 pL含10% FBS之完全 RPMI 1640培養基中，製成4x濃度化合物分析板。

為進行分析，收集經血清饑餓處理之細胞並以未補充之 RPMI 1640培養基清洗一次。細胞懸浮在含1〇% FBS之完 全RPMI 164〇培養基中，最終濃度為8xl05個細胞/mL。將 一份250 μί已稀釋細胞（2xl05個細胞）添加至各孔中，製成 4x濃度化合物分析板。藉由渦轉混合細胞，且於37°C水浴 中培養分析板10 min。採用預熱之含1〇〇/0 FBS之完全RPMI 144477.doc •22- 201024301 培養基製備2 ng/mL之IL-2新鮮4x操作溶液。以化合物處 理細胞10 min後，將125 pL之IL-2培養基添加至各孔中。 藉由渦轉混合細胞。於37°C水浴中培養細胞20 min並在培 養期間，每5 min混合一次。最後10個點濃度-效應範圍係 在0.5%之DMSO之最後濃度下之20 mM至1 nM及0.5 ng/mL 之IL-2。在細胞處理完後，將500 pL之1%甲醛溶液（由磷 酸鹽緩衝生理食鹽水（PBS)新鮮配製並於37°C保溫）添加至 各孔中。密封分析板並翻轉混合8至10次。分析板置於 3 7°C水浴中10 min。在培養之後，細胞分析板於RT下，以 1200 rpm離心5 min。吸取上澄液，保留100 pL細胞（2 xlO5 個細胞）。藉由重複離心步驟渦轉混合細胞並以800 μί之 PBS清洗細胞兩次，且在最後清洗後，留下1〇〇 pL含約 2xl05個細胞。將一份800 pL冷90%甲醇添加至細胞並置 於-20°C過夜。離心分析板並去除甲醇。以FACS緩衝液（含 5% FBS及0.02%疊氮化鈉之PBS)清洗細胞。取一份在螢光 活化細胞分選（FACS)緩衝液中稀釋10倍之200 μί Alexa Fluor 647®小鼠抗-pSTAT5(pY694)添加至細胞中。均勻混 合細胞並於RT及黑暗中培養2 h。以PBS清洗細胞一次並留 下 100 pL 細胞。以 PBS 製備 2 pg/mL Hoechst(Acros Organics，Morris Plains ’ NJ)之操作溶液。取200 pL添加 至各孔中並於RT及黑暗中培養細胞10 min。以PBS清洗細 胞，並將 50 μΐ^ Cytofix®(BD Biosciences，San Jose，CA) 添加至細胞。將細胞移至96孔黑色組織培養板並密封。離 心該分析板。採用Cellomics Array scan® VTi收集並分析平 144477.doc -23- 201024301 均螢光強度數據。比較化合物處理組與載體處理組，以決 定抑制百分比數據。MSR經測定為2.06。採用Activity Base 4.0之4參量邏輯曲線擬合分析法計算相對ic5G。對於3-(4-氯-2-氟苄基）-2·曱基·Ν-(5-曱基-1H_"比唑-3-基）-8-(嗎啉基 甲基）口米0坐并[1，2-b]嚷唤-6-胺，IC50=0.94 μΜ，n=4。基於 JAK3 IL2-NK92-pSTAT5細胞之分析法之結果證明3-(4-氯-2-氟苄基）-2-甲基-N-(5-甲基-1Η-η比唑-3-基）-8-(嗎琳基 曱基）β米嗤并[l，2-b]璉唤-6-胺係JAK3之較低效抑制劑（當與 基於JAK2 EPO-TFl/pSTAT5細胞之分析法之結果比較時， Ι〇5〇=〇·〇33 μΜ)。由該等結果，JAK3/JAK2之比例，測得 ICso為28·5倍，證明3-(4-氣-2-氟苄基）-2-曱基-Ν-(5-曱基_ 1Η-吡唑-3-基）-8-(嗎啉基甲基）咪唑并[1，2-b]噠嗪-6-胺係相 較於JAK3優先選擇JAK2之選擇性抑制劑。

基於Ba/F3 JAK2V617F細胞之分析法之 Cellomics ArrayScan® HCS 藉由如Wernig等所報導之西方墨點分析法，於表現JAK2 V617F之Ba/F3中評估JAK2標靶抑制性（Wernig，等。 Efficacy of TG101348，a selective JAK2 inhibitor，in treatment of a murine model of JAK2V617F-induced polycythemia vera，Cancer Cell ’ Apr ; 13(4):311-20)。建 構一種培養基物料通過量細胞分析法來評估表現JAK2 V617F之Ba/F3細胞中JAK2標靶抑制性。可藉由該分析法 發現用於治療與JAK2V617F突變相關之病症之有效治療藥 劑0 144477.doc -24- 0 201024301 使表現JAK2V617F之Ba/F3(鼠類pro-B)細胞保持於含 10% FBS、0.07%碳酸氫鈉、1 mM丙酮酸鈉、lx抗生素/抗 黴菌劑（Invitrogen，Carlsbad，CA)及 0.45% 葡萄糖 (Sigma，St Louis，MO)之 RPMI 1640 中。將細胞保存於 37°C與5°/〇 C02中。於100% DMSO中，製備10 mM濃度之 測試化合物。以100% DMSO，將該化合物系列稀釋1:3， 製成10個點-200x濃度-效應範圍（4 mM-200 nM)。在另一 個96深孔板中，將2.5 pL之200x化合物溶液添加至125 μί 含10% FBS之完全RPMI 1640培養基中，製成4χ濃度化合 物分析板。 為進行分析，收集細胞並以未補充之RPMI 1640清洗兩 次。然後在含10% FBS之完全RPMI培養基中懸浮細胞，最 後濃度為4xl〇5/mL。接著，將500 μΐ^細胞（2χ105個細胞）移 至96深孔板中。最後，將25 μί(稀釋1:200)之化合物母液 添加至細胞中，並於3 7°C水浴中培養細胞60 min。

細胞處理完後，將500 pL之1%曱醛溶液（由磷酸鹽緩衝 生理食鹽水（PBS)新鮮配製並保溫於37°C )添加至各孔中。 密封各分析板並翻轉混合8至10次。將分析板置於37。(：水 浴中10 min。培養完後，於RT下，以1200 rpm離心細胞分 析板5 min。吸取上澄液，保留1〇〇 pL細胞（2xlO5個細 胞）。藉由重複離心步驟渦轉混合細胞並以800 pL之PBS清 洗細胞兩次，且在最後清洗之後，留下10〇 0含約2χ105 個細胞。將一份800 pL冷90%甲醇添加至細胞並置於-20°C 過夜。離心分析板並去除甲醇。以FACS緩衝液（含5% FBS 144477.doc -25- 201024301 及0.02%疊氮化鈉之PBS)清洗細胞。將在螢光活化細胞分 選（FACS)緩衝液中稀釋10倍之200 μί Alexa Fluor 647®之 小鼠抗pSTAT5(pY694)添加至細胞中。均勻混合細胞並於 RT及黑暗中培養2 h。以PBS清洗細胞一次並留下100 pL細 胞。以PBS製備2 pg/mL之Hoechst(Acros Organics，Morris Plains，NJ)操作溶液《將200 μι添加至各孔中並於RT及黑 暗中培養細胞10 min。以PBS清洗細胞，並將50 pL之 Cytofix®(BD Biosciences，San Jose，CA)添加至細胞。將 該細胞移至9 6孔黑色組織培養板並密封。離心該分析板。 採用Cellomics Arrayscan® VTi收集及分析平均螢光強度數 據。比較化合物處理組與載體處理組，以決定抑制百分比 數據。採用ActivityBase 4.0之4參量邏輯曲線擬合分析法 計算相對IC50。對於3-(4-氯-2-氟苄基）-2-曱基-N-(5-甲 基-1H-吡唑-3-基）-8-(嗎啉基甲基）咪唑并[l，2-b]噠嗪-6-胺，IC5〇=0.03 μΜ。該分析結果證明3-(4-氯-2-氟苄基）-2-曱基-N-(5-甲基-1H-«比唑-3-基）-8-(嗎啉基曱基）咪唑并[1，2-b]噠嗪-6-胺有效抑制表現JAK2V617F基因之Ba/F3細胞中 之 JAK2V617F 標靶。 本發明之化合物較佳係調配為經各種途徑投與之醫藥組 合物。最佳地，該組合物係經口投與。該等醫藥組合物及 製備其等之方法係此項技術中習知者。參見，例如，雷明 頓：藥物科學與操作法（REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICEOFPHARMACY)(A. Gennaro等人編輯，第 19版， Mack Publishing Co.，1995)。 144477.doc -26- 201024301 本發明化合物之一般有效劑量範圍廣泛。例如，每曰劑 量通常在約1 mg至約1000 mg之總日劑量範圍内，較佳5〇〇 mg至1〇〇〇 mg之總日劑量，更佳600 mg至1000 mg之總日 劑量。在某些實例中，低於上述範圍下限之劑量程度可能 . 較適當，而其他實例中可能採用更高劑量。以上劑量範圍 並不以任何方式限制本發明之範圍。應瞭解，化合物之實 際投藥量將由醫師根據相關條件决定：包括所治療病症， ❿㈣擇投藥途徑、實際投與之化合物或化合物群:、個別患 者之年齡 '體重及反應、及患者症狀嚴重性。 144477.doc •27·

Claims (1)

1. 201024301 七、申請專利範圍： ^ 一種3'(4m卡基）-2-甲基-N-(5-甲基_1H“比唑_3_ 基）-8-(嗎琳基甲基）咪唾并⑴叫建嗪_6胺或其醫藥 上可接受的鹽。 2·如請求項丨之化合物，其係3 (心氣_2_氟节基）_2_曱基 (5_甲基-1H_°比唾_3_基）-8-(嗎啉基曱基）咪唑并[l，2-bM 嗪-6-胺。 3.如請求項1之化合物，其係3_(4_氯_2_氟节基）_2_甲基-& (曱基比°坐-3-基）-8-(嗎淋基甲基）咪嗤并[i，2_b]建 嗪_6_胺鹽酸鹽。 4·種以3_(4_氣-2-氟苄基）-2-甲基-N-(5-甲基-1Η-»比唑_3_ 基）-8-(嗎啉基甲基）咪唑并[12 b]噠嗪_6胺或其醫藥上 可接文的鹽於製造用於治療哺乳動物之慢性骨髓增生性 疾病的藥物之用途，該等慢性骨髓增生性疾病係選自由 、.工血球增多症、原發性血小板增多症、及骨趙異常增生 之骨髓硬化組成之群。 5. 一種以3-(4-氣-2-氟节基）_2_曱基·N_(5_曱基_115_吡唑_3_ 基(嗎啉基甲基）咪唑并[12_b]噠嗪_6胺或其醫藥上 可接受的鹽於製造用於治療患者以下疾病之藥物之用 途：神經膠質母細胞瘤、乳癌、多發性骨髓瘤、前列腺 癌、及白血病（如非典型慢性骨髓細胞性白血病、原發性 及次發性急性骨髓性白血病、τ_系及B_系急性淋巴胚細 胞性白血病）、骨髓發育不良症候群、及骨髓增生性疾 病0 144477.doc 201024301 6.:::藥組合物，其包含如請求項卜⑻之化合物， 刺或碑形刺。 醫樂上可接受的載體、稀釋 7. :請求項卜2或3之化合物，或其醫藥上可接受的鹽， 其係用作藥物。 8. 如β求項1、2或3之化合物’或其醫藥上可接受的鹽， 其係用於治療神經膠質母細胞瘤、乳癌、多發性骨趟 病、前列腺癌、及白血病、Τ_系及Β_系急性淋巴胚細胞 改白血病、骨趙發育不良症候群、及骨趙增生性疾病。 9·如-月求項8之化合物’或其醫藥上可接受的鹽，其係用 於治療慢性骨髓增生性疾病。 10.種以如請求項1、2或3之化合物於製造用於治療患者 之一突變JAK2之活性相關病症的藥劑上之用途。 144477.doc 201024301 四、指定代表圖·· (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無） 144477.doc