TW200811108A - DHA esters and use thereof in treatment and prevention of cardiovascular disease - Google Patents

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200811108 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於二十二碳六烯酸(DHA)酯類，具有擇 自於該維生素B群或維生素原中之醇類諸如菸醇(B3)、泛醇 5 (B5)或肌醇(B7)、或異山梨醇或異山梨醇單硝酸酯，及特別 疋吡义基-3-亞甲基二十二碳六烯酸，及使用該物為一藥物 以治療及預防心灰管疾病。 t先前技術3 該Ω3多不飽和脂肪酸，特別是較佳地經純化及濃縮為 10乙烷基酯形式之EPA及DHA，係已知其等在某些心血管疾 病治療及在相關風險因素調節之潛在用途。特別是，已知 其等在高脂血症、高膽固醇血症及高血壓的治療。在患有 一心肌梗基之病患身上，以含有高濃度之EpA及DHA乙烷 基酯類之配方進行臨床試驗，顯示出其降低死亡率的有效 15性，特別是猝死。這些結果一部分可歸功於對心室心肌細 胞之細胞膜產生-穩定作用，其可預防存有局部缺血之肌 細胞出現惡性心律不整，這類細胞可見於梗塞後之病患或 重現相同條件之實驗模型上。 此外，依照已知之專利申請案W〇2〇〇4/〇47835

，DHA 2〇及EPA乙烧基賴可被使用在預防心房版纖維顏動。然 而’令人驚言牙地，該申請案之發明者發現到dha及EpA在 心房肌纖維顫動並無相同作用：在心房肌纖維顏動，DHA 比EPA有-更強大的作用。因此，單獨使用比使用 及EPA混合物在心房肌纖維顫動的治療為更佳地，且無容 6 200811108 置疑地，在極多數心血管疾病的治療。 該維生素B群及維生素原的優勢與其功能有關。特別 是，菸醇是來自菸酸(維生素B3)的醇類衍生，其可在人體 内迅速地轉換為於酸。 5 菸酸，亦稱做菸鹼酸，是一水溶性B群維生素，可自色 氨酸中合成。然而，以降低膽固醇及油脂為目的之有效治 療劑量係高過人體合成之數量。因此，以降低膽固醇及/或 甘油三酸酯為目標時，則必須提供一口服補充。 依據作用機制，係推測菸酸抑制游離脂肪酸自脂肪組 10織中釋出，導致脂肪酸到肝的供應下降。因為越少的脂肪 酸酯化成為甘油三酸酯，就越少量會被併入低密度脂蛋白 (LDL)裡，因此降低LDL膽固醇的濃度。菸酸亦曾被提過能 明顯地增加HDL膽固醇的濃度，極有可能藉由抑制HDL膽 固醇其形式之代謝。 15 特別是，菸酸有一強力周邊血管擴張劑的作用。因此， 靜脈注射的菸醇在其轉換成菸酸後，可導致血管擴張作用 而有利於降低動脈血壓。 於酸可廣泛地被使用在降低膽固醇及脂質的治療。 亦已知菸酸能與HMG-辅酵素A還原酵素抑制劑結 20合’諸如他汀類藥物（statins)，例如，在降低膽固醇的實例 中，只藉由這些HMG-輔酵素A還原酵素抑制劑是無法充分 證明之。當搜查各化合物其效用之益處時，特別是以他汀 類藥物降低LDL膽固醇及以菸酸提升HDL膽固醇，諸如這 樣之結合能帶來優勢。此外，菸酸適用於混合型血脂異常 7 200811108 的治療’且因此朗時影響膽固醇及甘油三咖旨的濃度。 泛醇是泛酸的醇類衍生物，泛酸即更為-般習知之維 ^伽。在體内’泛醇能轉化成為泛酸。泛酸接著變成化 合物輔酵素A其-重要部分，輔酵素A在細胞代謝上有特別 的影響。實際上’其參與油脂、碳水化合物及蛋白質的代 射作用。泛醇亦參與乙醯膽驗及腎上腺㈣醇的形成。其 亦作用在絲物的解毒及對傳染病的抵抗。 肌醇（維生素B7)使脂肪流通是藉由預防其堆集。其亦 有—消懼劑之作用’其能刺激神經系統及肝臟，其能降低 血液膽固醇濃度。其係與增加血管收縮素活動，控制細胞 内的#5離子》農度’維持細胞膜電位及細胞骨架集合有關。 異山梨醇，特別是異山梨醇單硝酸酯，為一強力的周 邊血管舒張劑。 令人驚訝地’該發明者發現到二十二碳六烯酸(DHA) 醋類，具有一擇自於該維生素B群或維生素原中之醇類，諸 如菸醇(B3)、泛醇(B5)及肌醇(B7)、或具有異山梨醇或異山 梨醇單硝酸酯，特別是吡啶基—3-亞甲基二十二碳六烯酸(二 十一碳六晞酸(DHA)酯’具有終醇），亦對心血管疾病有著 重大效力的影響。 C發明内容3 因此，本發明係有關於一種二十二碳六烯酸酯，具有 〜擇自於該維生素B群或維生素原中之醇類，較佳地包含 有： -菸醇，該化學式如下： 8 200811108 泛醇，該化學式如下： ΗΟ^ ?Η Η

CH3 Ο

.OH H3C 肌醇，該化學式如下：

或異山梨醇，該化學式如下：

或異山梨醇單頌酸酯，該化學式如下：

較佳地，依照本發明該酯係為吡啶基-3-亞甲基二十二 碳六烯酸，其化學通式（1)如下：

⑴ 9 200811108 本發明亦係與一種依照本發明製備該二十二碳六烯酸 酉旨之方法有關，特別是依照本發明之該吡啶基-3_亞甲基二 十二碳六烯酸（丨），為二十二碳六烯酸乙烷基酯類及一擇自 於包含下列群組中醇類作轉酯作用：菸醇、泛醇、異山梨 5醇、異山梨醇單硝酸酯及肌醇，與菸醇為較佳地。 轉_作用可由熟習該技術領域之人士以習知方法進 行。 依據本發明，轉酯作用之進行，在有一催化劑存在下 為較佳地。較佳地，催化劑為鹼金屬碳酸鹽或鹼土碳酸鹽， 1〇較佳地為K2C〇3。鹼金屬碳酸鹽或鹼土碳酸鹽及DHA乙烷 基酷之莫耳比，其較佳地範圍為1/1到6/1，更較佳地，菸醇 及DHA乙烷基酯之莫耳比的範圍為1/1到6/1。較佳地，轉酯 作用可在一溶劑中進行，較佳地擇自二氧雜環乙烷或 THF ;較佳地選擇為THF。THF可用氮起泡法排除。THF由 5氮起泡法除氣為較佳地。更較佳地，該反應混合物可用回 流法加熱，至少14個小時為較佳地。 在本發明之另一具體實施例中，該依照本發明該轉酯 乍用之方法中该催化劑為一脂肪酵素，較佳地為南極假絲 酵母(Candida Antarctica)脂肪酵素。特別是該脂肪酵素為固 疋形式。較佳地，該脂肪酵素是由諾和諾德(N〇v〇N〇rdisk) 所2之諾維信^>^(^027111#)。較佳地，該反應發生在一沒 有/合韌之介質，或在有一溶劑諸如孓甲醇_2_ 丁醇或乙腈， 李乂佳地’在柊軸例巾，係發生在—沒有溶劑之環境，及 在泛醇範例中有-溶劑存在。較佳地，在肌醇範例中，該 10 200811108 使用溶劑為一離子極性溶劑諸如卜丁基冬甲基味唾腦或 1 丁基3-甲基味峻(cn)2。該反應發生在一高於室溫之溫 度，較佳地為60°C。 較佳地，在該反應進行時移除乙醇，以真空乾燥機及 5氮起泡法為較佳地’用氮起泡法為更佳地。這樣一來可增 ； 加轉換率，加速反應及排除寄生的水解反應。 ; 肖純，_&DHAM絲之該莫耳比介於丨到5， 更較佳地，為介於1.5到4.5。 較佳地，該反應進行時間介於1到1〇〇個小時，介於工到 10 72個小時為較佳地，介於W8個小時為較佳地，介於即 個小時為更佳地。 在本發明之另一具體實施例中依照本發明之該方法， 該轉酯作用反應發生在一無水溶劑中，在一存有水阱的非 無水溶劑諸如，例如，氯化鋰、MgCl2或矽膠，或在無溶劑 15之乾燥環境中。如此一來可排除寄生的水解反應。 較佳地，該轉酯作用反應發生係與純化的二十二碳六 烯酸乙烷基酯（純度為至少95%，可買到商品化或由熟習該 技術領域之人士以習知方法從乙酸乙酯脂肪酸混合物中純 化）或與包含有至少10%莫耳DHA乙烷基酯之混合物。若是 20使用一混合物之DHA乙烷基酯，建議純化該酯以得到後續 之轉酯作用反應。 本發明亦係有關於一包含有依照本發明之該二十二碳 六烯酸酯之藥學組成物，特別是依照本發明之該U比啶基_3-亞甲基二十二碳六烯酸，及至少一種之藥學上可接受的賦 11 200811108 形劑。 依知本發明之該藥學組成物可配製以投藥於哺乳動 物包括人。依照治療及研究之疾病而劑量不同。這些組 成物/、製備去係依投藥如口腔、舌下、皮下、肌内、靜脈 内透膚局部或直腸途徑。在這種情況下，該有效成分 月匕依單位劑®形式或依傳統藥學上賴投藥於動物或人。 適二的單位劑量投藥形式包括有口服途徑形式諸如片劑、 轉膠襄、粉劑、顆粒及口服溶液或懸浮液，經舌下及口 服形式、皮下、局部、肌内、靜脈内、鼻内或眼内投藥形 10式及直腸投藥形式。 當一固態組成物以片劑形式製備時，該主要有效成分 係與一藥學的載劑，諸如明膠、澱粉、乳糖、硬脂酸鎂、 /月石’阿拉伯膠、矽石或類似物混合。片劑可包覆上蔗糖 或其匕適合之材料或以能延遲或延展效力的方式處理之， 口此匕們可持續地釋放有效劑量之預定量。 要得到一明膠膠囊配製品可混合該有效成分及一稀釋 劑’然後將該混合物灌人軟式或硬式明膠膠囊中。 糖聚或醜劑形式之製劑，可包含有該有效成分與甜 I劑、防腐劑在-起，亦可包含有—調味劑及一適合的著 20 色劑。 月匕刀政在水中之粉劑或顆粒，可包含有該有效成分之 此合物其含離散劑、濕潤劑或懸浮劑，亦可含味覺矯味劑 或甜味齊ij。 塞蜊，可與在直腸溫度融化之結合劑一起製備，例如， 12 200811108 諸如可可豆脂或聚乙二醇，可使用在直腸投藥。 使用在腸胃外（靜脈内、肌内等等）、鼻内或眼内之於 藥，係為包含有藥理上相容之離散劑及域濕_之水2 浮、等張鹽溶液或無菌可注射的溶液。 w 可任擇一或更 該有效成分亦可被配製為微膠囊形式 多之添加劑。 藥方式係經由 經靜脈内途徑 較佳地，依照本發明之該藥學組成物投 1=7腔或靜脈内途徑。在梗塞後治療範例時， 為較佳地。 10 15 20 依照本發明之該藥學組成物可包括其他有效成分以提 互補或可能之加乘效應。較佳地，該藥學組成物 括EPA酯。 本發明亦係與依照本發明之該二十二碳六稀酸醋有 特別是依照本發明之該《基_3_亞甲基二十二碳六稀 酸’或依照本發明之該藥學組成物，作為—藥物使用。 本發明亦係與依照本發明之該二十二碳六烯酸醋有 特別是依照本發明之該％卜定基_3_亞甲基二十二碳六稀 或依,’、、本發明之g㈣學組成物，作為_藥物使用以預 防^或治療心血管疾病，其較佳地擇自心房及/或心室心律 ^整、心搏過速及/或肌纖維顫動；在預防及/或治療如心肌 、、傳導失常；在預防及/或治療多種高風險因素的 古^疾病車又佳地擇自於高三甘油醋血症、高膽固醇症、 Z血塵、高錢症、血脂異常、較佳地混合血脂異常，及/ 5者在血液凝固時第七因素過度活動VII;治療及/或初級或 13 200811108 ^級預防心房及/或心室心律不整、心搏過速、肌纖維顏動 及或因心肌梗塞料之電流傳導失f，較佳地為猝死；及 /或為梗塞後治療。 最後，本發明係與依照本發明之該二十二碳六稀酸醋 有關’特別是舰本發明之舰^定基_3_亞甲基二十二碳> 稀酸’或依照本發明之該藥學組成物，作為— 預防及/或心房肌纖維顫動。 10 15 20 h無理論根據，依照本發明之該二十二碳六烯酸_，特 疋X比疋基_3_亞甲基二十二碳六稀酸，似乎是經由醋解 酵素作用，在體内釋放出醇類及DHA，特別是在魏基各 亞甲基二十二碳六烯酸範例中的菸醇及DHA。因此，依照 之Λ一十一$反六稀酸酯似乎與一DHA及醇類混合物 有樣之作用。因此，如果此醇係為一維生素Β群或維生素 原依妝本發明之該二十二碳六烯酸酯將與DHA及一維生 素群或、准生素原之混合物有相同之效用。在吼tT定基-3·亞 甲基一十一妷六烯酸範例中，其亦似乎有菸醇在體内轉換 為於酉夂目此’依照本發明之該。比唆基-3-亞甲基二十二碳 =_似乎是與DHA及㈣之—混合物有相同之作用。於 m官擴張劑效用的優點係為DHA在末梢區域最令人滿 思之刀佈’特別是在靜脈注射吡啶基-3-亞曱基二十二碳六 烯S夂*醇在轉換後變為終酸的範例中。 【货"施式】 較佳實施例之詳細說明 14 200811108 用下述參考資料的圖及實施例，以進一步了解本發明。 第1圖係描述在該轉酯作用反應期間，以DHA-EE消耗 百分比對時間作—函數，實施例3-1(開管）、3-2(在真空之下) 及3-3(在氮起泡法下），存有2〇〇 mg諾維信®(N〇v〇zyme®)， 5在60°C，醇類對自旨之比率為3。 下述為非特定之實施例。 實施例1 :使用K2C03合成吡啶基-3-亞甲基二十二碳六 烯酸 lg(2.8 mmol)的乙烷基二十二碳六烯酸（純度高於 10 95% ;由Interchim供應）被放置在5ml的THF中，在存有 1.53g(llmmol)K2C03及 1.06 ml(10.9mmol)菸醇（純度高於 95% ;由Acros提供）下，用氮起泡法除氣。該反應混合物係 在回流狀況下加熱7小時，然後加入0.76 g(5.5 mmol)K2C03 並再持續加熱7小時。 15 在冷卻後，將該反應混合物溶於水中，然後用乙酸乙 酯萃取。該有機相位用MgS〇4乾燥、過濾然後濃縮至無水。 所得之該濾渣用矽石快速色層分析法純化(CH2Cl2-> 90/10 CH2C12/乙烷基醋酸鹽，15分鐘梯度）。可分離到一透明油狀 物（〇.84g，產量71%)。 20 石夕石膠體 TLC 60 F 251 默克（Merck)，90/10 CH2Cl2/AcOEt，Rf=0.35 〇 實施例2:使用脂肪酵素合成吼啶基-3-亞甲基二十二碳 六稀酸 所有反應係在一不連續之混合反應器（磁性混合）中，在 15 200811108 各酵素之合適溫度下執行。 所使用之產品係為： -濃縮70%DHA乙烷基酯（DHA-EE)之一乙烷基醋類混 合物（禾大化學有限公司（CrodAChemical Ltd·)賣出），之後 5 稱為「70% DHA-EE酯混合物；」 -逢維# (Novozyme®) ’固定形式之南極假絲酵母脂 肪酵素，由諾和諾德(NovoNordisk)所賣； ^ _於醇。 該反應混合物亦係為·· 10 -無溶劑僅使用該受質之一介質；或 -使用各類溶劑之一有機介質。 使用在此有機介質之該溶劑係為： -2_甲醇-2-丁醇(2M2B)，為一溫和之極性溶劑，可使 諸如多不飽和的脂肪酸酯類之忌水性化合物及諸如於醇之 15 親水性化合物同時溶解；或 -乙腈，其理由與2M2B相同。 . 該反應條件係總結於下述第1表中： 第1表：70% DHA-EE酯類及終醇之轉酯作用之反應條件測試。 醇類 介質 [70%DHA-EE醋類] (M) ' [醇類] 總體積 (ml) 醇類/酯類 莫耳比 菸醇 有機的 (2M2B乙腈） 0.43 0.64 12 1.5 無溶劑 1.5 4.5 3.5 3 20 各條件係與mg的諾維信'Novozyme®)在60°C培 養。在2M2B中進行之反應係為在大氣中（在排氣罩下）測 16 200811108 試’在60C與200mg的諾維。 定期取出500// 1樣品直到該反應完成。抑制該反應之 方法係為用離心法，5分鐘，轉速13,000 rpm，以便將固定 酵素自71貝中移除。直到分析前’所有樣品存放在4。。。 5 同時進行無酵素之對照反應及無輔-受質（菸醇)之對照 反應。 分析之執行係依照下述參數，使用兩種HPLC方法（使 用Agilent 1100系列儀器）： 方法1 : 10 -2〇1^乂8丑_(1118管柱（4.6 111111\25(：111) -溫度：40 °C -流速：1 ml/min -溶析液：0.02%甲醇/醋酸 -測定：折射測定法 15 -運作期間：15分鐘 方法2 : -ZorbaxSB_C18 管柱(4.6mmx25cm) -溫度：40 °C -流速：3 ml/min 20 -溶析液：50/50乙腈/丙酮 -測定：折射測定法 -運行期間：15分鐘 在不同反應進行時取出之樣品，預先稀釋到低於100 mM之一濃度，稀釋液在方法丨範例中用〇·〇2〇/。甲醇/醋酸一 17 200811108 混合液’及在方法2範例中用丙酮來。 結果與討論 在該轉酯作用反應中出現二種類型。在分析條件下 在4.15分鐘時，第一種被沖提出，並相當於該酯水解作用 5產物，第二種是在4.85分鐘中提出。後者的化合物相者於 70% DHA-EE酯類及菸醇間轉酯作用之產物。這此，預^ : 有一種產物，如同菸醇只有一單獨一級羥基。 10 各類 2表： 的反應條件下所得到之轉換百分比表示在 下述第 第2表：70% DHA-EE酯類及菸醇之轉酯作用進行眭 轉換百分比（* :在範例中，f反應期間，該管為打開 终该乙醇產物蒸發。） 反應條件 DHA-EE 變成 DH ^ 之轉換百分比 乙腈 31 %在72小時 2M2B 47%在48小時 2M2B在大氣下 60%在118小時 無溶劑 11 %在72小時 無溶劑在大氣下 100%在72小時 當該反應在大氣中進行時，有較高轉換率；該乙醇產 15物条發而使得該反應之平衡趨向合成DHA-菸醇。這些轉酯 作用反應伴有该反應混合物大量變零。 當使用2M2B為反應溶劑時，水解作用產物會優先出 現。然而，-微弱的水解作用亦存在於一無溶劑之介質中。 因此，似乎係使用之菸醇仍存有水分或周 圍溼氣導致這寄 20 生反應。 70% DHA-EES旨類及柊醇之轉自旨作用反應的可行性已 18 200811108 被證明，而這樣的反應展現出接近或大於9〇%有利的轉換 率，特別是當該反應進行時，將乙醇產物自該反應混合物 中移除。然而，因為使用之該溶劑中存有水分及/或周圍澄 氣’使一寄生水解反應干擾了這些合成。 5 β因此，嘗試除掉該觀察到之寄生水解反應看起來似乎 疋有影響。例如，使用完全無水溶劑。其亦可以在存有一 水阱(例如，氯化鋰、MgC12或矽膠)下進行相同反應以排 除可能的水解。 在該菸醇-DHA酯合成反應中，該反應進行時乙醇產物 1〇似乎是限制該反應的一個要素。其移除可改變該反應之平 衡而趨向所欲之醋類合成。因此，使這個移除達最佳化係 為合適的，而值得注意地是在減壓狀態時的合成。這允許 乙醇快速蒸發並因此增加反應速率。 實施例3:使用脂肪分解酵素合成吡啶基_3_亞曱基二十 厌烯酸，轉酯作用最適化；該反應進行時乙醇產物之 療發作用及氧化烘焦之脫去作用 一與實施例2相似之合成反應，其執行為使用該同樣起 始產物(菸醇、i〇% DHA-EE酯混合物、諾維信 在’又有溶劑之介質，60°C時，在存有200 mg諾維信 20⑧(N〇V〇Zym#)，醇類與酯類比率為3。該使用之反應器與實 施例2相同，該分析方法亦相同。 實施例3.1 : 實施例2比較’唯一的差別係該反應是在一個開啟容器 (開管）中執行。 19 200811108 結果（第1圖）·· 該轉酯作用反應為「緩慢」，總需近乎8〇個小時。存有 氧化烘焦。存有「強烈的」寄生水解。 實施例3.2 : 與實施例2比較，唯-的差別係該反應是在真空之下執 行0 10 15 結果（第1圖）： 與實施例3.1比較，該反應為「加速度」，但仍為「緩 慢」，總需近乎48個小時。 此外，存有氧化烘焦及寄生水解。 實施例3.3 : 與實施例2崎，唯-的朗_反應是在氮起泡法下 執行。 結果（第1圖）： 該反應有非常顯著地速度増加，總需少於3個小時， 因能瞬間移除該反應進行中之乙醇產物及 記錄到無氧化烘焦。 寄生水解明顯地減少。 實施例4 :使用一脂肪酵素及 改良混合物 20 .^ 4醇以合成DHA酯類 該貫驗及分析條件與實施例2相门 反應條件係總結於下述第3表中· 除了下述差別外 醇類 介質 泛醇 有機的（2M2B 耷） [70%DHA-E£ _1M) 0.43 ][醇類] 總體積 醇類/S旨類 莫耳比 1.28 12 3 20 200811108 結果與討論： 、在分析條件下，有二種類型在3.9分鐘及4·Η分鐘被洗 脫而出/乏醇有一個-級醇。因此可預期有數個產品(最多 為三個）。然而，在無輔-受質（泛醇）的對照組中，出現該4.Μ 5分鐘的波峰。因此上述的波峰似乎對應乙院絲水解作 用，其係與所使用溶劑存有水分而有關連。這反應只見於 6亥酵素存在下。 結論為，只有第-波峰對應泛醇①腦旨合成。 各類的反應條件下所得到之轉換百分比 總結在下述第 10 4表： 轉換百刀比（·在中：在反應期間，該管為打開以允 反應條件 DHA-EE變成DHA-泛醇之轉換百分比 乙腈 - 68%在Π6小時 2M2B 76%在115小時 2M2B在大氣中 88%在96小時

15 當該反應在大氣中進行時，似乎是可增加70% DHA-EE 醋類之轉換百分比。實際上，在這條件下，該反應進行時 之該乙醇產物蒸發。因此，該反應之平衡趨向合成泛醇 -DHA酯類。此外，這些轉換數值確定是估計過低，因為有 2M2B溶劑之同時蒸發(介質濃縮效應）。這些轉酯作用反應 20 亦伴有該反應混合物大量變黑。 70% DHA-EE酯類及泛醇之轉酯作用反應的可行性已 被證明，而這樣的反應展現出接近或大於90%有利的轉換 率，特別是當該反應進行時，將乙醇產物自該反應混合物 21 200811108 中移除。然而，因為使用之該溶劑中存有水分及/或周圍漫 氣’使一寄生水解反應干擾了這些合成。 因此，嘗試除掉觀察到之該寄生水解反應看起來似乎 是有影響。例如，使用完全無水溶劑。其亦可以在存有_ 5 水阱(例如，氯化鋰、MgCU或矽膠)下進行相同反應，以排 除可能的水解。 在該泛醇-DHAS旨合成反應中，該反應進行時乙醇產物 似乎是限制該反應的一個要素。其移除可改變該反應之平 衡而趨向想要之合成酯類。因此，使這個移除達到最佳化 10係為可行的，而值得注意地是在減壓狀態時的合成。這允 許乙醇快速蒸發並因此增加反應速率。 實施例5 :比較EPA及DHA在超快速鉀電流(ultrarapid potassium current)及心房肌纖維顫動之作用結果 心臟動作電位係為激發之心臟細胞其基本電位單位， 5數種離子通道之動作係造成該動作電位不同階段的原因。 f同種類的動作電位對應不_心臟部位，因此允許這些 N立有順序及配合之動作。為此理由，Κν 15的_通道，由 =CNA5基因編碼，只表現在心κ織，係造成超快速卸電 的原因’其作用在心、室動作電位之再極化。這高度 M 15為實際上選擇治療心房肌纖維顫動之= 承。其病狀為可觀察到心房動作電位改變。 里 夂伙A^lkur效用。為此目的，將人類 15通道(hKv 1.5)以穩定的方式轉染到HEK 2人 胚胎腎臟）細胞裡，廿蚀用 也禋並使用一全細胞全自動膜片鉗 22 200811108 (patCh-clamp)技術來研究由這些通道動作所造成之電流。 材料與方法 細胞株之培養 HEK 293-hKvl.5細胞在標準條件下生長(沉，培養箱 5設為95% 〇2及5% C〇2)，在法可⑽嶋)培養盤中直到8〇%細 胞聚集（confluence)。然後將其移置到35mm培養皿中培養， 含有下述之培養基：DMEM(Invitrogen)、1〇%胎牛血清 (Invitrogen)、一 l00U/ml青黴素、丨㈨^^化丨鏈黴素及〇 25 mg/ml麩醯胺（Invitr〇gen)之混合物；及丨25mg/ml抗生素 10 G418(Geneticin®)以作為篩選用之抗生素。 電生理學 在室溫下（19-22 °〇,使用全細胞全自動膜片鉗技術研 究Ikur。該吸量管培養基含有：125 mM K-天門冬胺酸、20 mM KCI、10 mM EGTA、5 mM HEPES、5 mM Mg-ATP、1 15 mMMgCl2 ’ pH7.3(KOH)。該細胞外培養基含有·· MOmM NaCI、20 mM HEPES、5 mM D(+)-葡萄糖、5 mM KCI、2 mM CaCI2 ; 1 mM MgCl2，pH 7.4(NaOH)。 每15秒誘發Ikur，係用保持電位_8〇mV，時程300 ms、 去極化到+60mV之脈衝，接著用_5〇 mV再極化。該電流波 20 峰之振幅定義係為該去極化脈衝之最初100ms期間所得之 最大電流。其末端脈衝之電流振幅係為測定該去極化脈衝 之最後20ms。 試劑 DHA及EPA係由Sigma供應。用乙醇製備庫存溶液（1〇 23 200811108 mM)，該溶劑最終濃度為0.25%。 結果： 結果總結於下述第5表。 5 第5表：DHA與EPA在多種濃度下，其Ikur之抑制百分比。 濃度 DHA 波峰kin· 末端脈衝 樣品數 平均值 標準誤 平均值 標準誤 1//M 8.2 6.3 10.1 5.8 5 3.2//M 10.9 6.9 14.5 6.5 5 5.6//M 15.4 4.8 33.7 7.8 6 10//M 22.6 4.0 78.0 4.2 6 25 μ Μ 58.1 13.6 86.5 3.4 5 濃度 ΕΡΑ 波峰Ikui· 末端脈衝 樣品數 平均值 標準誤 平均值 標準誤 l^M 14.6 1.7 14.9 1.9 5 3.2//Μ 16.1 3.1 19.9 4.4 5 10//Μ 17.5 6.4 36.6 7.2 10 25# Μ 5.4 6.8 61.6 7.3 5 EPA些微地降低波峰Ikur之振幅（最大抑制為175 土 6.4%、11=1〇1<0.05在10#]^)及末端脈衝之電流振幅(61.6 10 ±7.3%、η=5、ρ<0·05在25 // M) 〇 DHA抑制波峰Ikur之振幅（最大抑制為581 ± 13·6%(η=5、ρ<0·05)及其末端脈衝之電流振幅86 5 土 3.4%(11=5、卩<0.005)在25//]^時。 結論： 15 這些結果顯示出在該申請案中以人類Κν 1_5通道轉染 ΗΕΚ 293細胞之超快速鉀電流lkur，DHA抑制係比ΕΡΑ更加 24 200811108 =地，且其方式為—濃度相關。DHA較佳地作用在末端 t衝之電流，暗示在Kvl.5通道上有—去活性效用。此外， k放用係伴Ik著DHA經由波峰U降（在ΕΡΑ有相反觀 測），DHA有效抑制Ikur。 在這Ukur上的效用’指出在心房肌纖維顫動上，dHA 可有一有益作用。 【圖式簡單說明】 第1圖係描述在該轉酯作用反應期間，以DHA-EE消耗 百分比對時間作一函數，實施例3-1 (開管）、3-2(在真空之下) 及3-3(在氮起泡法下），存有200 mg諾維信®(Novozyme®)， 在60°C，醇類對酯之比率為3。 【主要元件符號說明】 (無) 25

Claims (1)

1. 200811108 十、申請專利範圍： 1. 一種具有一擇自於該維生素B群或維生素原中之醇類的 二十二碳六烯酸酯，該醇類較佳地係由下述所構成：

   .OH

   HO. Η

   Η ΟΝΟ 2 〇 或異山梨醇單硝酸酯，該化學式如下： 10 2.如申請專利範圍第1項之二十二碳六烯酸酯，其中該酯 係為吡啶基-3_亞甲基二十二碳六烯酸，其通式（1)如

   chq (1) 3· —種製備如申請專利範圍第1項或第2項之二十二碳六 26 200811108 烯酸酯類之方法，該方法為將二十二碳六烯酸酯與醇類 作轉酯作用，該醇類係擇自於由下述所構成之群組中·· 菸醇、泛醇、異山梨醇、異山梨醇單硝酸酯及肌醇，較 佳地為於醇。 5 4.如申請專利範圍第3項之方法，其中所述方法在實施時 存有催化劑。 5.如申請專利範圍第4項之方法，其中該催化劑是脂肪分 解酵素，較佳地為假絲酵母脂肪酵素。 6·如申請專利範圍第5項之方法，其中乙醇在反應時會被 10 移除，較佳地藉由氮氣泡移除。 7.如申請專利範圍第5項或第6項之方法，其中該反應發生 在一無水溶劑或在無溶劑的乾燥大氣中。 8· —種包含有如申請專利範圍第1項或第2項之二十二碳 六烯酸酯的藥學組成物，較佳地為包含如申請專利範圍 15 第2項之吡啶基_3_亞甲基二十二碳六烯酸，以及至少一 種之藥學上可接受的賦形劑。 9· 一種如申請專利範圍第1項或第2項之二十二碳六烯酸 酯或如申請專利範圍第8項之一藥學組成物的用途，作 為一藥物使用。 20 10. —種如申請專利範圍第1項或第2項之二十二碳六烯酸 酯或如申請專利範圍第8項之一藥學組成物的用途，作 為一用以預防及/或治療心血管疾病的藥物，較佳地擇 自於心房及/或心室心律不整、心搏過速及/或肌纖維顫 動；作為一預防及/或治療如心肌細胞之電流傳導失常 27 200811108 的藥物；作為一預防及/或治療多種高風險因素的心血 管疾病的藥物，較佳擇自於高三甘油酯血症、高膽固醇 症、高血壓、高血脂症、血脂異常、較佳地混雜的血脂 異常，及/或者在血液凝固時第七因素過度活動VII ;作 5 為一治療及/或初級或次級預防心房及/或心室心律不 整、心搏過速、肌纖維顫動及/或電流傳導失常包含心 肌梗塞的藥物，較佳為猝死等延伸心血管疾病；並且/ 或者作為一梗塞後治療的藥物。 11. 一種如申請專利範圍第1項或第2項之二十二碳六烯酸 10 酯或如申請專利範圍第8項之一藥學組成物的用途，作 為一用以預防以及/或治療心房肌纖維顫動的藥物。 28