TW200819060A - Culture improvement of lepista nuda and cultivation method thereof - Google Patents

Description

200819060 九、發明說明：

之技術領域】 關於一種紫丁香蘑品種之改良。 【先别技術】

長，其中， 現代科技搭配農業生產的技術水準不斷進步提 教化農業的生產力、消費力更是以驚人的速度成 飲食生產業十分重 及食用菌_ 各式菇類菌種培養技術已是目前精緻化農業、 十分重要的技術之一，而一般所見的姑類產°口 產品便十分的需要優良的菌株或品種，以及培 養技：的搭配，以達商業生產之規模。由於菌種培養技術

姑體為免$色且具有特殊的香氣而得名，在法國被認為是 上等食物’是十大受喜愛的食用菌之一。本菌屬腐生可食 性真菌’秋冬時節在闊葉混交林及林緣草地上可發現其蹤 跡’主要分佈在歐洲、北美和亞洲等地區，因其菇形像廚 師的圓盤帽而被稱為Wood Blewit或Blewit。子實體初呈 免紫色或丁香紫色，後期顏色變淡，傘肉厚，脆嫩可口， 亚有濃郁的香氣’在歐洲地區每年產量可it 250-300公嘲。 曰氣的成刀主要以菇醇（卜octen-3-ol )為主，其中以菌褶 5 200819060 的含量最多，菌柄和菌傘則較少。紫丁香蘑之子實體含有 維生素A1 ’其他的營養成分則有待進一步的分析。另外， 它對小白鼠肉瘤及艾氏癌亦達到90%以上的抑制率，具有 開發成為防癌、抗癌等保健食品的價值。然新鮮菇體含有 某種成分可分解紅血球，需進一步烹調後才可中和其毒性。 早期栽培紫丁香蘑是以山毛櫸和蘋果葉為栽培基質， 出菇時間很長，約需6個月，再加上出菇所需的溫度較低， 栽培不易。因此，本發明主要在進行紫丁香蘑品種之改良， 以師選產置1¾且出姑時間短之品糸。 【發明内容】 本發明之主要目的在於進行紫丁香蘑品種之改良，以 育成具獨特食用口感之紫丁香蘑微生物，並配合栽培生產 方法，有效提高紫丁香蘑生產產量及提高紫丁香蘑菇體品 為達上述目的，本案利用雜交雙核體培養技術，以 LNE2及LNG兩菌株為雜交親本進行雜交，並由雜交後代 選拔優良之紫丁香蘑新品系。而本發明所育成之紫丁香蘑 食用微生物已寄存於食品工業發展研究所，其寄存編號為 BCRC 930083。該紫丁香蘑具有生長速度快、菇形豐滿粗 大、組織堅實細嫩、食用口感具彈性的優點。 本發明之紫丁香蘑之育成方法包含步驟：（1)進行雜交 親本原原種之培養繁殖及保存；(2)進行雜交親本之栽培； (3)進行擔孢子之單孢分離及單孢菌株之確認與培養；（4) 6 200819060 進行單孢菌株間之雜交與雜交雙核體之確認、培養及保 存；（5)進行雜交雙核體之首次栽培出菇篩選；以及（6)進行 優異雜交雙核體之再栽培及出菇特性調查。其中，步驟（1) 更包含a·原種之製作；b·雜交母本品系之栽培；以及c·擔 孢子之收集等步驟。 本發明之紫丁香蘑之栽培方法則包含步驟：（1)母種培 養；（2)堆肥製作；（3)下種及下種後之管理；（4)覆土及出菇 刺激操作；（5)採收及包裝。其中，該堆肥係為一稻草堆肥， 其可採用傳統洋菇稻草堆肥製作法製得或於隧道式發酵室 内發酵而得。 【實施方式】 體現本案特徵與優點的一些典型實施例將在後段的說 明中詳細敘述。應理解的是本案能夠在不同的態樣上具有 各種的變化，其皆不脫離本案的範圍，且其中的說明及圖 式在本質上係當作說明之用，而非用以限制本案。 為進一步改良紫丁香蘑品種，本案發明人自法國引進 四個紫丁香蘑品系，分別為LNE2、LNP、LNG及LNB， 觀察這四個品系在洋菇堆肥中之產菇情形，發現LNE2、 LNP及LNG三品系均能產菇，而LNB品系卻僅有菌絲生 長。其中以LNE2出菇最早，產量亦最高，平均每袋為435.4 克/2公斤堆肥，至於LNP及LNG兩品系則無顯著性差異， 然因LNG品系之菇體較為大型，因此選取LNE2及LNG 兩品系進行單孢雜交，來篩選出優良之新品系。 7 200819060 關於本案 細說明如下。 紫丁香料祕线之育成方法將進—步詳 (1) 進行雜交親本原原種之培養繁殖及保存： 、雜交親本LNE2及LNG兩騎分別以堆肥玉米洋〜立 養基（其配方為風乾堆肥25克、碎玉米1〇〇克、洋 克及蒸财i公升）做定期移培養，在試管培養基以％ 定溫培養約一個月後，再移入5它定溫箱作保存。 (2) 進行雜交親本之栽培： a.原種之製作：採用麥粒原種，小麥（向飼料行講得） 以清水洗淨置於冷水中，經煮沸2〇分鐘後，滹除水分，並 添加1%碳酸鈣，待冷卻後裝入四角瓶（ 6 3x3 5xl5cm)内 且塞好棉塞，然後於高溫高壓蒸氣鍋殺菌（12rc，1 2 kg/cm2) i小時，冷卻後將培養於堆肥培養基之紫丁香蘑菌 絲塊接種至四角瓶中，於24。(：定溫培養3〇天後，即為麥 粒菌種。 、6 ·雜父母本π口糸之栽培·將購買之洋兹堆肥（其配方 為風乾稻草5000公斤、雞糞500公斤、石灰4〇公斤、過 磷酸鈣100公斤、石膏125公斤、硫酸銨1⑽公斤、黃豆 粉50公斤及米糠200公斤），秤取15公斤裝入塑膠框中， 並均勻混合上述兩品系之麥粒菌種，溫度設定24°C，相對 微度95 % ’二氧化碳濃度3000ppm，待菌絲長滿後覆土， 並將出菇溫度降至13t，二氧化碳濃度降至500ppm，白 天照光8小時。 c·擔孢子之收集：供收孢子用之紫丁香蘑子實體先在 8 200819060 無塵無菌過濾箱内以殺菌過之鑷子 利刀切除菌柄’以菌褶朝下插在殺菌過：：：皮，並利用 環架突出之鐵絲上，其下置一殺 =型培養皿之鐵 之用。以上裝置移入 濾紙，供孢子掉落 子有相當量掉落於遽紙心以 =小心到下擔抱切，並裝人殺g過之=㈣二接種 移入5 C定溫箱保存備用。 土破璃试管内， ⑶進㈣抱子之μ㈣ 採用抱子稀釋培養分離法分離單==確認與培養： 存之雜交親本_之擔孢子以無8 =株、’即將收集保 均句塗佈於9em之培養皿之麥芽酵母洋=適當濃度後’ 基配方為麥芽抽出物2G公克、酵母養基上（培養 ，===::個r僅看到單獨： 兮、 亚此確5忍然其他孢子竣菌茇少 二植針小心移出含以上菌落之洋菜塊’ 再淳用並， 35 I刀囷、、糸以棉監（e〇ttonblue)染色後 二通賴鏡檢查菌絲上有無扣子體，若有則非單孢 生無扣子體’而8絲在堆肥玉米培養基斜面試管上 長逮度正常，應是單孢菌株。 上 及保進行單抱8株間之雜交與雜交雙核體之確認、培養 後传之單孢菌株經繁殖於堆肥玉米培養基斜面試管 9 200819060 後，兩雜交親本之單孢菌株以相隔〇·5至1公分距離同時 接種於同一試管培養基上，置於25°C定溫培養20至25天 後，以肉眼觀察兩雜交單孢菌株菌落之變化，若兩菌落相 互融合且均失去其個體性而無法區別，亦即兩菌落間無任 何界線，即顯示兩單孢菌株間可能有親和性，此時分別於 兩菌落融合處或接觸處之最上方及最下方各取出菌絲鏡 檢，取出之菌絲若有扣子體，則可確定雜交成功，此時可 0 將雜交成功之菌絲體移出培養於新培養基，並以前述方法 做定期移植及保存。 (5)進行雜交雙核體之首次栽培出菇篩選： 經雜交雙核體之確認後，製作其麥粒原種，每雙核體 各接種3框，所使用之栽培基質配方與栽培親本之配方相 同，從不同雙核體比較，篩選產菇效率高、菇體外觀佳、 菇體組織結實度良好及出菇早而整齊者，供做再進一步栽 培試驗比較。 • (6)進行優異雜交雙核體之再栽培及出菇特性調查： 從首次栽培試驗篩選獲得較優異之雙核體，再製作成 栽培用菌種，每雙核體各栽培10框，以每框為一單位進行 出菇早晚、出菇整齊度、菇體特性、產量與產菇效率之比 較，以選取具有特色與栽培經濟價值高之雜交雙核體，再 擴大栽培規模，多次與雜交親本或目前商業栽培品種做比 較，以獲得最優異之紫丁香蘑食用微生物。 值得一提的是，在進行雜交親本原原種之培養繁殖及 保存時，為期菌種之永久保存與遺傳特性之穩定可靠，可 200819060 採用液態氮保存方式，並利用程式降溫控制儀，將欲保存 之紫丁香蘑菌種以每分鐘降低l°c之速度從室溫降至-4〇t： 後，急降至-100°C，再立即投入液態氮内保存。此外，欲 做液態氮保存之菌種可先培養於殺菌過之小米内，經定溫 培養20天後，於無塵無菌過濾箱内小心移入殺菌過之耐超 低溫玻璃安瓶（1.2ml，硼矽酸玻璃材質）或塑膠瓶（2ml) 内。 φ 同樣在使用安瓶時，封瓶後應確認有無密封，否則容 易發生安瓶爆炸。菌種放入安瓶或塑膠瓶時，可以10%之 甘油水溶液做抗凍保護劑。菌種取出解凍時，可直接將從 液態氮桶取出之菌種安瓶投入37t：至38t：之溫水内解 凍，菌種解凍後移入堆肥玉米洋菜培養基培養即可。在進 行雜交親本之栽培時，當菇體長至約3公分高，而擔孢子 尚未產生前，為避免其他紫丁香蘑子實體孢子或雜菌與病 原菌孢子之混_合污染，可選取菇形佳之栽培瓶予以套袋處 φ 理，待紫丁香蘑成熟至菌褶發育良好時，採收供擔孢子收 集之用。另一方面，在進行菌株之栽培及擔孢子收集操作 時，不同品種最好在不同出菇室單獨栽培，且不要同一天 在同一無菌無塵過濾箱内操作，以減少不同品種孢子相互 污染之機會。 本發明所育成之紫丁香蘑之栽培管理方式與栽培親本 菌株相同，在出菇後應調查出菇早晚、出菇整齊度、小菇 多少、菌柄粗細與組織結實情形等，待菇體成熟後，再調 查菇體外觀，包括菇柄表面顏色、粗細、長短及組織堅實 11 200819060 度，菌傘大小、顏色、表面有無長疣狀瘤或菌絲團塊等， 並觀察菇體有無萎黃現象及記錄每框菇體重量，並且計算 每雙核體之生物效率（生物效率是以菇體鮮重除以栽培基 質在接種時之乾重所得之百分比）。 經由上述育成方法之重複試種及篩選，本發明選拔出 一紫丁香蘑之優異品系，命名為台農1號紫丁香蘑（L卬 心（ARI-LN1))，且於95年4月25曰寄存於台灣新竹之 φ 食品工業發展研究所，寄存編號為BCRC 930083。台農1 號紫丁香蘑的菇形豐滿粗大、微生物堅實細嫩、食用口感 具彈性，且具有香氣濃郁、傘肉滑嫩、耐於運輸及保鮮期 長等特性，故有相當大的市場競爭性。 下列表一至三係本發明所育成之紫丁香蘑新品系 ARI-LN1與親本品系LNE2、LNG之菌絲生長特性比較、 子實體大小比較及出菇特性比較。 • 表一、紫丁香蘑新品系ARI-LN1和親本品系(LNE2、LNG)之 菌絲生長特性之比較 菌絲生長特性 S 紫丁香蘑品系 LNE2 LNG ARI-LN1 菌絲顏色 透明 透明 透明 菌絲表面顏色 淡紫色 淡紫色 淡紫色 溫度適應性(°c) 5-25 5-30 5-25 菌絲最適生長溫度rc) 25 20 20-25 菌絲體在不同溫度之 生長量（mm/day) 0.62 0.32 0.62 12 200819060 10°c ——------ 1.08 1.03 1.08 15°C 1.50 1.56 L68 20°C 1.91 1.99 2.08 25〇C 1.93 1.94 2.08 30°C 0 0.04 0 表二、紫丁香蘑新品系ARI_LN1和親本品系(LNE2、LNG)之 平均子實體大小之比較

子實體大小 紫丁香蘑品系 (cm) LNE2 LNG ARI-LN1 傘長 8.09 7.91 7.85 傘寬 7.44 7.19 7.42 傘高 1.81 1.99 1.66 菌褶長度 2.93 2.93 2.80 菌褶寬度 0.74 0.72 0.61 傘肉厚度 1.14 L25 1.44 菌柄長度 8.31 10.67 8.38 菌柄寬度 2.81 2.74 2.89 衫卜 (麗2、LNG)之 紫丁香蘑 品糸 平均產量 (公斤/床） 生物效率 (%) 從覆土至出菇 戶斤雲士叙 LNE2 9933.75 52.72 35.75 LNG 8754.00 46.46 39.50 ARI-LN1 11009.25 58.43 34.25 4氺 16kg compost 3% spawn(3/4/5*16Kg c〇mpost)，每_ 口糸 戶 複Η)床，每-床面積W，堆肥64公斤，堆肥|^|74Gf6&’母一重 13 200819060 表三之二、紫丁香蘑新品系ARI-LN1和親本品系(LNE2、LNG)之 出兹特性之比較 紫丁香蘑 品系 LNE2

LNG ARI-LN1 平均產量 ί公斤％j ^298833^ 1916.83 3177.67 生物效率 從覆土至出菇 (%) 所需天數 63.44 35.67 〜 40.70 46.17 67.46 35Ό0 f積58*39cm，堆肥16公斤 堆肥含水量為70.56%。同上_批

.A、二可知，本發明所育成之紫丁香薦新品 親本品系LNE2、lng，有較高之產量、 及較短之出兹天數，確實較親本品系優 ㈣嫩：：育成之紫丁香蘑的菇形豐滿粗大、微生物 (二發食用微生物之生長條件為: 听，不可超過15/。、長 =為24°c ’益體發育溫度為 之含水量以65-67%為宜，Γί .發酵完成之堆肥在未下種 相對濕度保持在90-93%^、、生長及益體發育階段之空氣 線，出絲:生長時不需， 不需要特別通風，二氧、曲 才（）通風.走囷時 菇及菇體發育需通厠“厌'辰又控制在300〇PPm左右，出 ppm。錢良好’二氧切濃度維持在谓 以下將進一步說明本發明之紫丁香磨食用微生物之栽 14 200819060 培生產方法如下。 (1)母種培養步驟·· 將本發明之紫丁香磨菌種u—— (ARI_LN1)) 疋期移植至堆肥玉米洋菜培養基，接著在無菌操作台上將 培養於堆肥玉米洋菜培養基内的紫丁香蘑菌絲塊接種於經 高壓蒸汽殺菌過的瓶裝麥粒栽培基質内，再以24〇c的溫度

培養至紫丁香蘑菌絲長滿瓶内基質為止，至此乃得到紫丁 香磨母種。 (2)堆肥製作過程： a·材料及份量：每5000公斤之風乾稻草添加誦 斤雞真、80公斤硫酸銨、150公斤過磷酸鈣、1〇〇八斤 酸約、250公斤石膏、50公斤黃豆粉及200公斤米^。 制作作過程:堆肥製作可採用傳軸稻草堆 衣作法或現代的隧道式稻草堆肥室内發酵法。 …+ 草堆肥製作法係在戶外進行前發酵，再於室内進= 酵，而本發明係採用隧道式稻草堆肥室内 兮古、、1 丁 取并/女’啟况 下。將城一料之風乾财充分加水後，r Γί其天’再添加上述之材料，，堆機細 勺勾。私入隧道式發酵室内進行前發酵。當堆 二天’移出堆肥’添加已發酵良好無雜^ ㈣比例為5%左右），經堆肥搜拌機充分混 制-定為^道式發酵室，繼續進行後發酵。溫度. 待堆肥溫度達机以上時，進行六小時之低 15 200819060 將堆肥溫度調降至52°C維持一天，再調降至48-50X：維持 三天，最後調降至45-48°C維持二天，若堆肥無氨氣產生， 即可再降溫至35°C，次日即可移出堆肥進行紫丁香蘑之下 種0 (3) 下種及下種後之管理·· 堆肥發酵完成後，當堆肥溫度降至25°C左右時，即可 下種。下種前應先將堆肥翻鬆，下種量為堆肥量的3 % (w/w) ，將麥粒菌種和堆肥混合均勻，再將表面整平。下種後 之走菌期間，保持堆肥溫度在24°C。 (4) 覆土及出菇刺激操作： 堆肥下種後，當麥粒菌種之菌絲長滿堆肥時即可覆上 l-2cm之泥碳土（pH 7.0)，並進行降溫及大量通風，在刺 激出菇期間，約隔二至三天對菇床表面進行少量補水，以 維持菇床濕度。 (5) 採收及包裝步驟： 菇體發育至適當階段，菌傘平展，且邊緣未向上反捲 前採下，採收時應留意勿干擾周圍成長中之菇體，並將帶 有泥碳土的菇腳部分切除，予以包裝冷藏銷售。每一週期 採收結束後，菇床需適當補土及補水，以利下一週期菇體 的形成。 藉由上述步驟的搭配運作，可以大量生產具有較佳品 質之食用微生物，且可以有效刺激出菇速度，不但使出菇 成品整齊，更具有較高的生物效率。運用上述五個步驟， 可以增加產量，且配合適當的出菇管理，可以有效控制每 16 200819060 一週期所生產的菇體，確保生產品質及產量之穩定。 本發明不僅可以讓紫丁香蘑生產產量大幅增加達 10%，且少用人工、降低生產成本，並能提高紫丁香蘑生 產品質，使紫丁香蘑的菇形豐滿粗大、微生物堅實細嫩、 食用口感具彈性。又，紫丁香蘑在歐洲如法國等地是相當 高級之食用菇類，價格為洋菇的5-10倍，故未來具有很大 的市場潛力，因此，本發明確實提供一種十分具產業競爭 0 力的紫丁香蘑新品種，且具相當高之栽培經濟價值。而所 栽培出之紫丁香蘑可更進一步加工利用，例如新鮮菇體可 以做成各式各樣的料理，製成真空包裝，微波加熱後即可 食用。另外也可以殺青，冷卻後加入適當的調味料製成罐 裝，可以放在冰箱中，隨時可以拿出來當涼拌菜餚。此外， 兹體可以烘乾製成禮盒，加水泡開後，兹傘脆嫩度依然保 持，且柄咬起來更加有韌度。 綜上所述，本發明運用雜交優勢育成紫丁香蘑新品 φ 種，所育成之紫丁香蘑微生物具獨特食用口感，且配合栽 培生產方法能有效提高紫丁香蘑生產產量及提高紫丁香蘑 菇體品質。因此，本發明極具產業利用之價值，爰依法提 出申請。 本案得由熟知此技術之人士任施匠思而為諸般修飾， 然皆不脫如附申請專利範圍所欲保護者。 17 200819060 【圖式簡単說明】

【主要元件符號說明】

Claims (1)

1. 200819060 .j 十、申請專利範圍： 1. 一種食用真菌微生物，其係具有寄存於食品工業發展研 究所，寄存編號為BCRC 930083之菌株之辨識特徵者。 2·如申請專利範圍第1項所述之食用真菌微生物，其係為 一紫丁香蘑。 3· —種紫丁香辱，之育成方法，其係利用雜交雙核體培養技 術，以LNE2及LNG兩菌株為雜交親本進行雜交，並由雜 ⑩ 交後代選拔出具有寄存於食品工業發展研究所，寄存編號 為BCRC 930083之菌;^辨識特徵者。 4·如申請專利範圍第3項所述之紫丁香蘑之育成方法，其 中該育成方法包含步驟： (1) 進行雜交親本原原種之培養繁殖及保存； (2) 進行雜交親本之栽培； (3) 進行擔孢子之單孢分離及單孢菌株之確認與培養； ， （4)進行單孢菌株間之雜交與雜交雙核體之確認、培養 m w 及保存； (5) 進行雜交雙核體之首次栽培出菇篩選；以及 (6) 進行優異雜交雙核體之再栽培及出菇特性調查。 5·如申請專利範圍第4項所述之紫丁香蘑之育成方法，其 中步驟（1)更包含步驟： a.原種之製作； b·雜交母本品系之栽培；以及 c.擔孢子之收集。 19 200819060 $ Ψ 6. —種紫丁香蘑之栽培方法，該紫丁香蘑係具有寄存於食 品工業發展研究所，寄存編號為BCRC 930083之菌株之辨 識特徵者，該栽培方法包含步驟： (1) 母種培養； (2) 堆肥製作； (3) 下種及下種後之管理； (4) 覆土及出兹刺激操作； • (5)採收及包裝。 7·如申請專利範圍第6項所述之紫丁香蘑之栽培方法，其 中該堆肥係為一稻草堆肥。 8·如申請專利範圍第6項所述之紫丁香蘑之栽培方法，其 中該堆肥係於隧道式發酵室内發酵而得。 9.如申請專利範圍第6項所述之紫丁香磨之栽培方法，其 中該堆肥係於戶外進行前發酵，再於室内進行後發酵而得。 20 200819060 七、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：第 圖 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明:

   八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化 學式= 200819060 f綷mjm正補九 發明專利說明書 (本說明書格式、順序及粗體字，請勿任意更動，※記號部分請勿填寫） ※申請案號：幻" ※申請日期：Θ·"以 .1 PC分類： 一、 發明名稱：（中文/英文） 紫丁香蘑及其育成與栽培方法/ CULTURE IMPROVEMENT OF LEPISTANUDA AND CULTIVATION METHOD THEREOF 二、 申請人：（共1人） 姓名或名稱：（中文/英文）（簽章）ID : 行政院農業委員會農業試驗所/AGRICULTURAL RESEARCH INSTITUTE □指定 為應受送達人 代表人:（中文/英文）（簽章)林俊義/LIN，CHUN ΥΙ 住居所或營業所地址：（中文/英文） 台中縣霧峰鄉萬豐村中正路189 f/189Chimg-ChengRd.，Wufeng Taichung，Taiwan 413, R.O.C· 國籍：（中文/英文)中華民國/TW 電話/傳真/手機：04-23302301 e-mail ： 三、 發明人：（共4人） 姓名：（中文/英文) ID : 1 ·陳錦桐/ CHEN，JIN TONG 2·陳美杏/CHEN，MEEIHSING 3·彭金騰/PENG，JINT〇RNG 〆 4·林俊義/ LI& CHIE^YIH 國籍：（中文/英文） 1 -4·中華民國/TW 1