TW200814939A - Rebaudioside A composition and method for purifying rebaudioside A - Google Patents

Description

200814939 (1) 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明大致上關於多晶型及非晶型之甜菊糖雙苷A、 純化甜菊糖雙苷A之方法及製備多晶型及非晶型之甜菊糖 雙甘A之方法。更具體地說，本發明關於多晶型及非晶型 之甜菊糖雙苷A，及以含水有機溶劑或有機溶劑純化或結 晶甜菊糖雙苷A以獲得高產量及高純度之產物之方法。 【先前技術】 甜菊糖雙苷A係高甜度之二萜糖苷甜味劑，其具有下 列化學結構：

甜菊糖雙苷A及其他甜菊醇糖苷係自甜菊植物（ Stevia rebaudiana(Bertoni))(甜菊（stevia))中分 離及萃取，這些植物爲栽種於日本、新加坡、台灣、馬來 西亞、南韓、中國、以色列、印度、巴西、澳洲及巴拉圭 之經濟作物。甜菊糖雙苷A係替代性之無熱量甜味劑，其 功能及感觀特性優於許多高效甜味劑。加工過之甜菊的甜 -5- 200814939 (2) 度比糖高出70至400倍；然而，甜菊也含有苦味成分。 存在甜菊之4種主要的二萜糖苷甜味劑中，甜菊糖雙苷a 被認爲是苦味最少，持續餘味最輕的一種。苦味通常因萃 取物中之雜質而來。 甜菊糖雙苷A之製備純度通常$8 0%。主要的雜質包 括甜菊苷（stevioside)、甜菊醇二苷（steviolbioside) 、甜菊糖雙苷B、甜菊糖雙苷C、甜菊糖雙苷D、杜克苷 • A ( dxilcoside A)、甜菊糖雙苷F及其他甜菊醇糖苷類。 要提高高純度之甜菊糖雙苷A的回收率非常困難，因爲甜 菊糖雙苷A及雜質有類似的水溶性。 先前的硏究指出，自甜菊類雙苷A與甜菊苷之混合物 純化甜菊糖雙苷A需要經過多次重複純化步驟。美國專利 5,962,678號揭示利用無水甲醇溶液再結晶甜菊類雙苷a 以得到純度80%之甜菊糖雙苷A。以無水甲醇重複再結晶& 化數次，可將甜菊糖雙苷A之純度提高至超過95%。美國 ® 專利公開號2006/008383 8揭示以包含乙醇及介於，4至 1 5 %之水的溶劑再結晶化以純化甜菊糖雙苷A。日本專利 申S靑案55-23756揭不一'種純化甜菊糖雙音A及甜菊音之 方法，其藉由自含水乙醇（>70% )結晶以得到80%純度之 甜菊糖雙苷A。美國專利公開號200 7/0 082103揭示一種自 含水乙醇再結晶以純化甜菊糖雙苷A之方法，其主張自粗 甜菊糖雙苷（60% )進行二步驟再結晶化導致形成純度 >98%且產量達97%之甜菊糖雙苷。然而，這些先前技術之 方法無法利用單一再結晶步驟提供實質上純的甜菊糖雙苷 -6- 200814939 (3) A組成物。 因此，我們需要一種簡單、有效又經濟之產製實質上 純的甜菊糖雙苷A之方法。 【發明內容】 發明總結 本發明之示範性實施態樣藉由提供實質上純的甜菊糖 • 雙苷A、多晶型及非晶型之甜菊糖雙苷a、純化甜菊糖雙 苷A之方法及產製多晶型及非晶型之甜菊糖雙苷a之方 法來滿足上述需求。

在特定之實施態樣中，純化甜菊糖雙苷A之方法包含 簡單的結晶作用。在一實施態樣中，純化甜菊糖雙苷A之 方法包含組合粗甜菊糖雙苷A與含水有機溶劑以形成甜菊 糖雙苷A溶液（該含水有機溶液包含其量自約1 0%至終 25%之重量的水），及在單一步驟中自該粗甜菊糖雙苷A • 溶液結晶出純度高於約95%乾重之實質上純的甜菊糖雙苷 A 〇 在其他特定實施態樣中，本發明提供不同的多晶型及 非晶型之甜菊糖雙苷A及製備不同多晶型及非晶型之甜菊 糖雙苷A之方法。 本發明的其他目標、特色及益處將自下列詳細說明、 圖式說明及申請專利範圍中了解。除非另外定義，所有本 發明所使用之技術及科學用語及縮寫均與本發明相關領域 之一般技術人士所通常了解之意義相同。雖然與本發明所 200814939 (4) 描述之方法及組成物類似或相同之方法及組成物可被用於 實施本發明，本發明所描述之適當方法及組成物並非用於 令任何這類方法及組成物限制本發明。 本發明之詳細說明 甜菊糖雙苷A是一種天然的高甜度甜味劑，通常以一 般成本純化可得到$ 80%之純度，只有高成本之純化可得 # 到>80%之純度。甜菊糖雙苷A之商用樣品通常具有苦味 ，一般認爲這是因雜質所造成。因此，我們需要實質上純 的甜菊糖雙苷A，以及簡單又經濟之甜菊糖雙苷A純化方· 法，以獲得適合作爲天然高甜度甜味劑之實質上純的甜菊 糖雙苷A。 本發明所使用之「實質上」或「實質上純的」係指包 括至少約85%乾重之甜菊糖雙苷A之甜菊糖雙苷A組成槪 ，另一實施態樣至少約90%乾重，另一實施態樣自約95% ® 至約98%乾重及另一實施態樣自約99%至約100%乾重。 本發明之示範性實施態樣藉由提供一種純化粗甜菊糖| 雙苷A成爲實質上純的甜菊糖雙苷A之方法以滿足這些 需求’該法藉由自包含水（其量佔重量之自約10%至約 25%)之含水有機溶液中結晶粗甜菊糖雙苷A且於至少一 個步驟結晶實質上純的甜菊糖雙苷A。本發明之其它示範 性實施態樣包含實質上純的甜菊糖雙苷A之組成物及包含 一種（或一種以上）多晶型之甜菊糖雙苷A的組成物。本 發明之其他示範性實施態樣包含非晶型之甜菊糖雙苷A及 200814939 (5) 製備非晶型之甜菊糖雙苷A的方法。另一實施態樣提供將 一種多晶型轉換成另一種多晶型或非晶型之方法。以下詳 細說明本發明之示範性實施態樣並以圖1至1 1說明。 純化粗甜菊糖雙苷A混合物之方法 可自市面上購得之粗甜菊糖雙苷A產品包含純度自約 4 0 %至約9 5 %重量，約6 0 %至約8 5 %重量，或約7 0 %至約 # 85%重量之甜菊糖雙苷A。我們認爲自甜菊植物萃取出之 原始粗甜菊糖雙苷A可經再結晶方式純化。經高效液相層 析法分析出的主要雜質爲甜菊苷、甜菊糖雙苷B、甜菊糖 雙苷C及甜菊糖雙苷D。甜菊糖雙苷D雜質可藉由增加含 水有機再結晶溶劑中之水量加以移除；然而，結晶溶劑中 水量過多將導致甜菊糖雙苷A之回收率降低。甜菊糖雙苷 B雜質可藉由在有機溶劑或含水有機溶液中漿化粗甜菊糖 雙苷A或以陰離子交換樹脂處理粗甜菊糖雙苷A溶液而 ® 顯著降低。因此，純化方法將視存在於粗甜菊糖雙苷A開 始物質中之雜質而定。 在純化甜菊糖雙苷A之方法1 1 〇的示範性實施態樣中 (如圖1所示），粗甜菊糖雙苷A 1 1 2可與含水有機溶液 1 1 6組合1 1 4，以形成甜菊糖雙苷A溶液1 1 8。該含水有 機溶液116包含其量自約10%至約25%重量之水及至少一 種有機溶劑。或者，該含水有機溶液116可包含其量自約 1 5 %至約20%重量之水及至少一種有機溶劑。 本發明所使用之含水有機溶劑係指水與至少一種有機 -9- 200814939 (6) 溶劑之混合物。有機溶劑之非限制性實例包括醇、丙酮及 乙腈。本發明所使用之醇係指任何直鏈、分支或環狀之與 至少一個羥基團連接之經取代或未經取代之烷基、炔基或 嫌基。醇之非限制性實例包括乙醇、甲醇、異丙醇、1 -丙 醇、1 - 丁醇、2 - 丁醇、三級丁醇及異丁醇。 在示範性實施態樣中，該含水有機溶液1 1 6包含水與 至少一種有機溶劑之混合物。在另一示範性實施態樣中， Φ 至少一種有機溶劑包含醇，該醇包含乙醇、甲醇或彼等之 混合物。在其中該至少一種有機溶劑包含乙醇及甲醇之混 合物的示範性實施態樣中，該乙醇及甲醇可以介於約2 0: 份至約1份乙醇對約1份甲醇之重量比被組合於該含水有 機溶劑中。在另一示範性實施態樣中，該乙醇及甲醇可以 介於約3份至約1份乙醇對約1份甲醇之重量比被組合於 該含水有機溶劑中。 在示範性實施態樣中，該甜菊糖雙苷A溶液1 1 8包含 ® 含水有機溶劑1 1 6及粗甜菊糖雙苷八112，其重量比係介 於約1 〇至約4份之含水有機溶劑對約〗份之粗甜菊糖雙 苷A。在另一示範性實施態樣中，該甜菊糖雙苷a溶液 118包含含水有機溶劑116及粗甜菊糖雙苷A 112，其重 量比係介於約5至約3份之含水有機溶劑對約1份之粗甜 菊糖雙苷A。 在示範性實施態樣中，該方法110可於近室溫下進行 。在另一實施態樣中，該方法1 1 0進一步包含加熱1 20甜 菊糖雙苷A溶液1 1 8之步驟。在一實施態樣中，加熱1 2 〇 -10- 200814939 (7) 甜菊糖雙苷A溶液1 1 8之步驟包含加熱甜菊糖雙苷A溶 液至介於約2(TC至約70°C、介於約2〇°C至約60°C、介於 約20°C至約40°C、或介於約40°C至約60°C之溫度。在另 一實施態樣中，加熱120甜菊糖雙苷A溶液118之步驟包 含加熱該甜菊糖雙苷A溶液至約回流溫度。加熱120該甜 菊糖雙苷A溶液1 1 8之步驟包含加熱甜菊糖雙苷A溶液 約0.25小時至約8小時。在其中該純化甜菊糖雙苷A之 • 方法11〇包含加熱120該甜菊糖雙苷A溶液118之步驟的 另一實施態樣中，該法進一步包含冷卻1 22該甜菊糖雙苷 A溶液之步驟。在一實施態樣中，冷卻1 22該甜菊糖雙苷 A溶液118之步驟包含冷卻該甜菊糖雙苷人溶液至介於約 4 °C至約25 °C之溫度。該冷卻122該甜菊糖雙苷A溶液 1 1 8之步驟包含冷卻該甜菊糖雙苷A溶液約0.5小時至約 2 4小時。 純化甜菊糖雙苷A之方法110進一步包含在單一步驟 • 中自該甜菊糖雙苷A溶液118結晶124實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物126之步驟，該組成物包含其量高於約85% 乾重、高於約90%乾重、高於約95%乾重、高於約97%乾 重、高於約98%乾重或高於約99%乾重之甜菊糖雙苷A。 在單一結晶步驟中，該甜菊糖雙苷A溶液丨〗8可經攪拌或 未經攪拌。 在示範性實施態樣中，該方法1 1 〇可進一步包含可任 意選擇之添加晶種步驟1 2 8，其在適當溫度下添加足以促 進該甜菊糖雙甘A結晶以形成純甜菊糖雙苷a之實質上 •11 - 200814939 (8) 純的甜菊糖雙苷A晶體130至該甜菊糖雙苷A溶液118 中。足以促進結晶出實質上純的甜菊糖雙苷A 1 26之甜菊 糖雙苷A 130的量包含介於約〇· 〇〇 〇1 %至約1 %之甜菊糖雙 苷A的量（按存在於該溶液中該甜菊糖雙苷A之重量計 )。在另一實施態樣中，足以促進該甜菊糖雙苷A結晶以 形成實質上純的甜菊糖雙苷A組成物1 26之甜菊糖雙苷A 130的量包含介於約0.01 %至約1 %重量之甜菊糖雙苷A的 # 量。添加晶種步驟128之適當溫度包含介於約181C至約 3 5 °C之溫度。 在另一示範性實施態樣中，該方法進一步包含分離 1 32及清洗1 34該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物1 26之 步驟。該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物126可藉由多種 利用離心力之固液分離技術自含水有機溶液1 1 8中被分離 ，該技術包括但不限於立式及臥式多孔籃離心、固體轉筒 離心（solid bowl centrifuge)、傾析器離心（decanter _ centrifuge)、刮刀型離心（peeler type centrifuge)、活 塞推料離心（pusher type centrifuge )、海音克爾式離心 (Heinkel type centrifuge )、碟片式離心（disc stack centrifuge )及旋風分離法（cyclone separation )。此外 ，可藉任何加壓、真空、或重力過濾方法改善分離效果， 這些方法包括但不限於使用帶式（belt )、鼓式（drum ) 、那邱型（nutsche type )、葉片式、板式、羅森蒙德型 (Rosenmund type )、煙火型（sp arkl er ty p e )及袋式過 濾器及壓濾機。甜菊糖雙苷A固液分離之設備可以連續、 -12- 200814939 (9) 半連續或分批模式操作。該實質上純的甜菊糖雙苷A組成 物1 2 6亦可在分離機上利用各種含水有機溶劑1 3 6及彼等 之混合物清洗1 3 4。該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物 1 26可在分離機上利用任何數目之氣體（包括但不限於氮 氣或氬氣）部份或完全乾燥，以蒸發殘餘之液態溶劑1 3 6 。該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物126可利用液體、氣 體或機械方式將該固體溶解或維持該固體形式，以自動或 被動地自分離設備上移除。 在另一示範性實施態樣中，該方法1 1 0進一步包含乾 燥1 3 8該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物1 2 6之步驟。這: 些方法爲該領域之技術人員所熟知，包括但不限於使用旋 轉真空乾燥器、液態床式乾燥器、旋轉隧道式乾燥機、板 式乾燥機、盤式乾燥機、I&它型乾燥機（Nauta type dryer )、噴霧乾燥機、瞬間氣流乾燥機（flash dryer)、微米 乾燥機（micron dryer )、圓盤乾燥機、高速及低速漿葉 乾燥機（paddle dryer )與微波乾燥機。在示範性實施態 樣中，該乾燥步驟1 3 8包含利用氮氣或氬氣灌洗乾燥該實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物1 2 6以移除殘餘溶劑丨2 〇， 其係於介於約4 0 °C至約6 0 °C之溫度下灌洗約5小時至約 1 0 0小時。 在其中該粗甜菊糖雙苷A混合物1丨2實質上不包含甜 菊糖雙苷D雜質之另一實施態樣中，該方法110進一步包 含在乾燥1 3 8該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之前，以 有機溶劑或含水有機溶劑1 4 2漿化1 4 0該實質上純的甜菊 -13- 200814939 (10) 糖雙苷A組成物126之步驟。該漿液可爲包含固體及含水 有機溶劑或有機溶劑之混合物，其中該固體包含該實質上 純的甜菊糖雙苷 A組成物126且僅略溶（sparingly soluble )於該含水有機溶劑或有機溶劑142。在一實施態 樣中，該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物1 26及含水有機 溶劑或有機溶劑142可以介於約15至約1份含水有機溶 劑對約1份實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之重量比存在 • 於漿液中。在一實施態樣中，該漿液可維持於室溫下。在 另一實施態樣中，該漿化步驟1 40包含加熱該漿液至介於 約2 0°C至約40°C之溫度。該實質上純的甜菊糖雙苷A組 成物126可被漿化約0.5小時至約24小時。 在另一示範性實施態樣中，該方法進一步包含自該漿 液之含水有機溶劑142中分離132該實質上純的甜菊糖雙 苷A組成物126及清洗134該實質上純的甜菊糖雙苷A 組成物之步驟，之後爲乾燥1 3 8該實質上純的甜菊糖雙苷 ® A組成物之步驟。 如果想要進一步純化，可重複本發明所述之純化甜菊 糖雙苷A之方法1 1 0或可利用替代性純化方法進一步純化 該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物，諸如管柱層析法。 本發明所使用之純度係指在未加工或純化形式之甜菊 糖雙苷A組成物中所存有之甜菊糖雙苷A的重量百分比 。在一實施態樣中，甜菊糖雙苷A組成物包含特定純度之 甜菊糖雙苷A，且該組成物之其餘部份包含其他甜菊醇糖 /苷之混合物或任何非甜菊糖雙苷A之成分。該組成物之純 -14- 200814939 (11) 度可利用具備該領域一般技術之人士所熟知之方法測定。 這類方法之一包括高效液相層析法（HP LC )。具備該領 域一般技術之人士亦應了解檢體中之水份可影響純度測量 之準確性。因此，當測量純度時該組成物應爲實質上乾燥 。本發明所使用之實質上乾的組成物包含最高約1 0%重量 之水分。 # 甜菊糖雙苷A多晶型及非晶型 利用上述方法純化甜菊糖雙苷A將導致形成至少三種 不同多晶型之甜菊糖雙苷A :第1型，甜菊糖雙苷A水合 物；第2型，無水甜菊糖雙苷A;及第3型，甜菊糖雙苷 A溶劑化物。具備該領域一般技術之人士將了解到，本發 明所描述之含水有機溶液及純化方法之溫度皆可影響該實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物所形成之多晶型。 多晶性被定義爲物質以二或多種具有不同排列及/或 ^ 構型之晶格分子的結晶狀態存在之能力。約30%之有機化 合物被認爲具有多晶性（Z e 11，e t a 1 ·，T e t r a h e d r ο η 5 6 ( 3 6 )6603 - 1 6 ( 20 00 ))。多晶性對於調合醫藥劑、色素染 料、甜味劑、炸藥及農藥上很重要。多晶性可導致物理性 質諸如密度、熔點及溶解速度之改變。 甜菊糖雙苷A之多晶性係利用粉末X光繞射（XRPD )分析檢體確定，此技術爲該領域之技術人員所熟知。圖 3至11係自本發明所述之純化方法得到之實質上純的甜菊 糖雙苷A組成物之XRPD掃描結果。甜菊糖雙苷A多晶型 -15- 200814939 (12) 之XRPD掃描係以散射強度對散射角2Θ作圖產生。檢體 利用 XRPD進行分析，檢測儀器爲以銅靶爲輻射源之 Shimadzu XRD-6000 X光粉末繞射儀。此儀器配置長細焦 距之X光射線管。射線管之電位及電流分別設定於40千 伏及40毫安培。發散及散射狹縫設定於1度，接收狹縫 設定爲〇· 1 5毫米。使用碘化鈉閃爍偵測器偵測繞射輻射 。以3°/分鐘（0·4秒/ 0.02°步階）自2·5至4〇。20進行Θ- • 2Θ連續掃瞄。分析矽標準物以校準儀器。利用 xrd-60000 ν· 4·1收集並分析資料。圖譜顯示反射之解析度， 表示檢體係由晶體物質組成。 圖3顯示第1、2、3Α (甲醇溶劑化物）及3Β型（乙 醇溶劑化物）之代表圖譜。第2型之圖譜（最上者）顯著 異於其他圖譜。應注意的是在第1、2及3型之每個分類i 中可存在多種多晶型。 圖4強調第1及2型之間的差異。此外，第2型之二 • 種圖譜顯示在不同的再結晶多晶型之條件下產生不同多晶 型之再現性。 圖5顯示第3Α及3Β型 XRPD圖譜之間存在顯著相 似性。本發明並不想限制在任何理論，但這些多晶型可能 是等構造之溶劑化物，其中這些圖譜之間的差異僅在於因 溶劑特性改變導致特定高峰平移。若有需要，第3 A及3B 型之間的等構造關係可藉由指數化這些圖譜加以證實。星 號標示出第3A型圖譜中平移至右側約0.2度2Θ之高峰。 此外，第3 B型中數個高峰相較於第3 A型之對應高峰具有 -16- 200814939 (13) 更高之強度。舉例來說，第3 B型中5 · 5、1 1 · 0、1 4 · 2及 19.4度之高峰相較於第3A型具有較高之強度。 圖6比較第2型與圖5之第3A及3B型。第2型與第 3A型之相似度高於其與第3B型之相似度。雖然在第2型 之圖譜中並未觀察到圖5中3B型強度高於3A型之高峰， 第2型之圖譜中至少有三個顯示相反趨勢（也就是存在第 2型之高峰，於3A型中較小，3B型中較大）之高峰（在 • 該圖譜下以雙星號標示）。最後，在第3B型中17.6度之 大型高峰在第3 A型中似乎稍移向右側（17.9度），且在 第2型中移至更右（18.0度）。其它二組介於21及23度 之間的高峰亦顯示此平移。本發明並不希望被任何理論限 制，但這些高峰之平移可能表示第3A型爲部份去溶劑化 ，因此包含該溶劑化物及第2型晶體二者之混合物。 圖7至10分別爲得自上述純化方法之實質上純的甜: 菊糖雙苷A組成物之第1、2、3 A及3 B個別多晶型的 _ XRPD掃描。 如圖2所示，所形成之多晶型的種類將由~些因素決 定，諸如含水有機溶液之組成物、結晶步驟之溫度及乾燥 步驟期間之溫度。本發明並不希望被任何理論限制，但第 1型及第3型被認爲係於單一結晶步驟中形成，然而第2 型被認爲係於自第1型及第3型轉換後的乾燥步驟期間形 成。 結晶步驟期間的低溫（介於約20°C至約5〇t )及含水 有機溶劑中水對有機溶劑之低比率導致形成第3型。結晶 -17- 200814939 (14) 步驟期間的高溫（介於約50°C至約80°C)及含水有機溶劑 中水對有機溶劑之高比率導致形成第1型。第1型可藉由 在約室溫下以無水溶劑漿化約2至約1 6小時，或藉由在 約回流溫度下以無水溶劑漿化約0.5至約3小時而被轉換 成第3型。第3型可藉由在約室溫下以水漿化該多晶型約 16小時或在約回流溫度下漿化約2至約3小時而被轉換成 第1型。第3型可在乾燥法中被轉換成第2型；然而，提 φ 高實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之乾燥溫度至約70°C以 上或延長乾燥時間可導致甜菊糖雙苷A分解並增加實質上 純的甜菊糖雙苷A組成物中剩餘的甜菊糖雙苷B雜質。第’ 2型可藉由添加水而被轉換成第1型。 除了至少三種多晶型之甜菊糖雙苷A之外，純化甜菊 糖雙苷A可導致形成如圖1 1所示之甜菊糖雙苷A之非晶 型（第4型）。第4型具有寬廣之非晶型環（amorphousi halo )，此種圖譜定義組成物爲非晶型。 • 本發明所使用之非晶型描述非晶態之固體物質。非晶 型之甜菊糖雙苷A (第4型）相較於多晶型之甜菊糖雙苷 A (第1、2或3型）具有改善之溶解速率。具備該領域一 般技術之人士應了解到，甜味劑組成物之溶解速率對於固 態及液態甜味組成物之調合上可能很重要，該甜味組成物 之非限制性實例包括口香糖、烘焙產品及飮料。 如上所述，第4型可得自甜菊糖雙苷A之初步純化過 程，或利用該領域一般技術人士所熟知之方法直接得自任 何個別多晶型或多晶型之組合。此外，第4型可得自粗甜 -18- 200814939 (15) 菊糖雙苷A組成物或得自透過非上述之純化方法獲得之實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物。製備非晶型之甜菊糖雙苷 A之非限制性方法實例包括以球磨法、沉澱法、凍乾法、 凍磨法或噴霧乾燥法製備甜菊糖雙苷A組成物。 在特定實施態樣中，上述甜菊糖雙苷A之純化導致包 含第4型之非晶型甜菊糖雙苷A之組成物。具該領域一般 技術之人士應了解結晶方法之參數可被調整以提高第4型 • 之形成。 在另一特定之實施態樣中，第4型可藉由噴霧乾燥該 甜菊糖雙苷A組成物之溶液而自甜菊糖雙苷A組成物製 備。簡單地說，噴霧乾燥通常需要透過進料泵吸取甜菊糖 雙苷A溶液至噴嘴噴霧器，以使該溶液在固定流量之氮氣 /空氣的協助下被霧化成霧滴噴液。水份在乾燥室中受控 制的溫度條件及氣流條件下自霧滴中蒸發，導致形成非晶. 型甜菊糖雙苷A之乾燥顆粒。非晶型甜菊糖雙苷A之純 ® 度將視甜菊糖雙苷A溶液之純度而定。 在另一特定實施態樣中，第4型可藉由輾磨甜菊糖雙 苷A之非·非晶型以自甜菊糖雙苷a組成物製備。輾磨是 一種機械方法，其被認爲可產生局部能量以將甜菊糖雙苷 A之晶體形式轉變成非晶型。示範性輾磨技術包括球磨法 或氣流噴射磨粉法，二者均爲該領域一般技術人士所熟知 。簡單地說，非-非晶型之甜菊糖雙苷A以可有效形成非 晶型甜菊糖雙苷A之時間及速度輾磨。這些參數可由該領 域具一般技術人士決定。典型輾磨時間可介於約1 5分鐘 -19- 200814939 (16) 至約2小時，但亦可採用其他時間。 這三種甜菊糖雙苷A多晶型及甜菊糖雙苷A非晶型 之物質特性摘列於下表= 表1 :甜菊糖雙苷A多晶型及非晶型 第1型多晶型 第2型多晶型 第3型多型 第4型非晶型 25°C下於水中之 溶解速率 非常低(60分鐘 內 <0·2%) 中(5分鐘內 <30%) 高(5分鐘內 >30%) 高(5分鐘內 >35%) 醇含量 <0.5% <1% 1-3% <0.05% 水份含量 >5% <1% <3% <6% 上述之物質特性僅說明甜菊糖雙苷A多晶型及非晶型 之特定實施態樣。具該領域一般技術者應了解無水甜菊糖 雙苷A多晶型（第2型）、甜菊糖雙苷A溶劑化物多晶 型及非晶型甜菊糖雙苷A具吸濕性，且可吸收約10%乾重 之量的水分。 具該領域一般技術者應了解，甜菊糖雙苷A組成物可 能被修飾以得到所欲之甜菊糖雙苷A多晶型及非晶型之混 合物，視所欲之甜菊糖雙苷A組成物之性質而定（例如溶 解速度等）。在一實施態樣中，實質上純的甜菊糖雙苷A 組成物可包含其量介於約1%至約100%重量之特定多晶型 或非晶型之甜菊糖雙苷A。舉例來說，實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物可包含重量高於約25%之量的多晶型或非晶 型之甜菊糖雙苷A，更適宜者高於50%之重量，更適宜者 高於75%之重量，或甚至更適宜者高於約85%之重量。亦 可使用這些範圍內之適當量的甜菊糖雙苷A多晶型或非晶 -20- 200814939 (17) 型。在另一實施態樣中，實質上純的甜菊糖雙苷A 可包含特定多晶型及/或非晶型之甜菊糖雙苷A之魅 本發明進一步由下列實施例說明，這些實施例 方面均不應被視爲對本發明之範圍的限制。相反的 楚的了解各種其他實施態樣、修飾及彼等之相等物 不背離本發明之精神及/或所屬申請專利範圍之範 法，該領域一般技術人士在讀完其中之描述後將可 • 除非另外說明，百分比（％s )係按重量計。 【實施方式】 以下之實施例中所描述之甜菊糖雙苷A組成物 係由HPLC決定。進行HPLC分析之方法爲具備該 般技術之人士所熟知。簡單地說，HPLC分析係於 利用ZORBAX NH2管柱（150x4.6毫米，5微米） 移動相爲20%緩衝液（0.0125%醋酸及0.0125%醋 及80%乙腈之溶液，其流速爲1.5毫升/分鐘。取] 之各檢體重複注入二份，於210奈米處（4奈米頻 用紫外線偵測器檢測檢體，參考物於260奈米處（ 米頻寬）偵測。HPLC分析需要40至60分鐘之執 〇 0.0 125%醋酸及 0.0 125%醋酸銨之緩衝液係 0.125克之醋酸銨及125微升之冰醋酸於1公升之 製。甜菊糖雙苷B之滯留時間係藉由改變醋酸銨對 比但仍維持二者總共爲0.025 %來加以調整。增加 組成物 合。 在任何 ，應清 可具有 圍的方 理解。 之純度 領域一 3 0〇C 下 進行。 酸銨） [2微升 寬）利 100奈 行時間 由溶解 水中配 醋酸之 醋酸之 200814939 (18) 量縮短甜菊糖雙苷B之滯留時間。 移動相之製備係藉由混合緩衝溶液與乙腈以使甜菊糖 雙苷 A之滯留時間到達7.0：fc0.5分鐘。剛開始，此約爲 20%之緩衝液（緩衝液200毫升及乙腈800毫升）。增加 1至2%之乙腈的量延長約1分鐘之甜菊糖雙苷A之滯留 時間。 稀釋溶液之製備係藉由混合750毫升之乙腈及250毫 Φ 升之緩衝溶液。甜菊糖雙苷A標準液之製備係以4毫升之 稀釋溶液稀釋20.0±0·5毫克（紀錄至最接近的0.1毫克） 之甜菊糖雙苷Α標準物，以成爲約5000毫克/升之標準溶· 液。取10.8、1 1.4、12.6及13.2微升之甜菊糖雙苷人標 準溶液注入。每次製備標準液時以卡氏水份分析儀測定水 分含量，根據分析報告上之溶劑純度進行校正。或者，甜 菊糖雙苷A標準液係藉由以4毫升之稀釋溶液（水分及純 度經過校正）稀釋個別含18、19、21及22 (各:t0.2 )毫 • 克之甜菊糖雙苷A標準物之檢體以製備。個別製備之檢體 以相同於檢體之量（1 2微升）注入。 甜菊苷標準液之製備係以5毫升之稀釋溶液稀釋 12.5±0.5毫克（紀錄至最接近的〇.1毫克）之甜菊苷標準 物，以成爲約2500毫克/升之標準溶液（貯存液A)(水 分及純度經過校正）。接著用1 0毫升之稀釋液稀釋1毫 升之甜菊苷標準貯存液A，以產生250毫克/升之標準液（ 貯存液B)，且標準貯存液被稀釋成介於2 · 5至5 0毫克/ 升之最終濃度。 -22- 200814939 (19) 甜菊糖雙苷A組成物檢體之製備係以25毫升之稀釋 溶液稀釋125±2毫克（紀錄至最接近的〇.1毫克）之甜菊 糖雙苷A組成物，以成爲約5000毫克/升之檢體溶液（水 分經校正）。若檢體非立即進行分析，應以無瓶端空間儲 存於氮氣中且加以乾燥。 下表提供甜菊糖雙苷A及其他甜菊醇糖苷滯留時間（ RT )之指南。然而，具該領域一般技術人士應了解滯留時 間可視需要調整。 表2 : HPLC滯留指南 化合物 滯留時間（RT)(秒） 甜菊苷 4.53 甜菊糖雙苷C 5.21 甜菊糖雙苷F 5.62 甜菊糖雙苷A 7.07 甜菊糖雙苷D 15.79 甜菊醇二苷 18.35 甜菊糖雙苷B 35.8 3 A組實施例 表3 :實施例A1至3之總結 粗甜菊 糖雙苷A (克） 乙醇 (95%) ⑽升) 溶劑甲醇 (99%) (毫升） 水 (毫升) 加熱溫度 (°C) 乾燥溫度 (°C) 產量 (克） HPLC純度 (重量厘量％) A1 400 1200 400 320 50 50 130 98.9 A2 100 320 120 50 30-40 60 72 98.3 A3 50 160 60 25 〜30 60 27.3 98.2 -23- 200814939 (20) 實施例A 1 粗甜菊糖雙苷A (77.4%純度）混合物係得自商業來 源。雜質（6.2%甜菊苷、5.6%甜菊糖雙苷C、0.6%甜菊糖 雙苷F、1·0%其他甜菊醇糖苷、3·0%甜菊糖雙苷D、4.9% 甜菊糖雙苷Β、0·3%甜菊醇二苷）在乾態下（水分含量 4·7% )利用HPLC確認及定量。 組合粗甜菊糖雙苷A ( 400克）、乙醇（95%，1200 φ 毫升）'甲醇（99%，400毫升）及水（320毫升）並加熱 至50°C 10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 16小時。過 濾白色結晶並以乙醇清洗二次（2 X 2 0 0毫升，9 5 % )，在 真空烘箱中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時。 該實質上純的甜菊糖雙苷A之最終組成物（1 3 0克） 包含98.91%甜菊糖雙苷 A、0.06%甜菊苷、0.03%甜菊糖 雙苷 C、0.12%甜菊糖雙苷 F、0·13%其他甜菊醇糖苷、 0.1%甜菊糖雙苷D、0.49%甜菊糖雙苷Β及0.03%甜菊醇 邊I 二苷，所有均以重量表示。 實施例Α2 粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度）係得自商業來源。雜 質（6.22%甜菊苷、2.28%甜菊糖雙苷C、0·35%杜克苷A 、0.78%甜菊糖雙苷F、0.72%其他甜菊醇糖苷、3.33%甜 菊糖雙苷B、0.07%甜菊醇二苷）在乾態下（水分含量 3.4%)利用HPLC確認及定量。 組合粗甜菊糖雙苷A ( 100克）、乙醇（95%，320毫 -24- 200814939 (21) 升）、甲醇（99% ’ 120毫升）及水（50毫升）並加熱至 30至40 °C 1〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 16小時。 過濾白色結晶並以乙醇清洗二次（2x50毫升，95%)。該 潮濕濾餅（88克）在乙醇中（95%，1 320毫升）漿化16 小時、過濾、以乙醇清洗（95%，2x100毫升），並於真 空烘箱中以低壓（20毫米）60°C乾燥16至24小時。 該實質上純的甜菊糖雙苷A之最終組成物（72克） φ 包含98·29%甜菊糖雙苷A、0.03%甜菊苷、0.02%甜菊糖 雙苷 C、0.17%甜菊糖雙苷 F、0.06%甜菊糖雙苷 D及 1.09%甜菊糖雙苷B。HPLC未偵測到甜菊醇二苷。 實施例A3 粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度）係得自商業來源。雜 質（6.22%甜菊苷、2.28%甜菊糖雙苷C、0.3 5%杜克苷 A 、0.78%甜菊糖雙苷F、0.72%其他甜菊醇糖苷、3.33%甜 ^ 菊糖雙苷B、0.07%甜菊醇二苷）在乾態下（水分含量 3.4%)利用HPLC確認及定量。 組合粗甜菊糖雙苷A ( 50克）、乙醇（95%，160毫 升）、甲醇（99%，60毫升）及水（25毫升）並加熱至約 3 0°C 1〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 16小時。過濾白 色結晶並以乙醇清洗二次（2x25毫升，95% )。該潮濕濾 餅（4〇克）在甲醇中（99%，600毫升）漿化16小時、過 濾、以甲醇清洗（99%，2x25毫升），並於真空烘箱中以 低壓（20毫米）60 °C乾燥16至24小時。 -25- 200814939 (22) 該實質上純的甜菊糖雙苷A之最終組成物（27.3克） 包含98.22%甜菊糖雙苷A、0.04%甜菊苷、0.04%甜菊糖 雙苷 C、0.18%甜菊糖雙苷 F、0.08%甜菊糖雙苷 D及 1.03%甜菊糖雙苷8。11?1^€：未偵測到甜菊醇二苷。

B組實施例 表4 :實施例B1至19之總結 溶劑 粗甜菊糖 雙苷A(克) 乙醇(95%) (毫升） 有機共溶劑 (毫升） 水 (毫升) 清洗溶劑 產量 (克） HPLC 純度(％) B1 5 16 甲醇⑹ 2 乙醇/甲醇(4:L5v/v) 3.2 >97 B2 5 16 甲醇(4) 2 乙醇/甲醇(4:lv/v) 3.1 >97 B3 5 9.5 1-丁醇(9.5) 1 乙醇/1_ 丁醇(1:1V/V) 3.2 >95 B4 5 9.5 1-丁醇⑼ 1 乙醇/甲醇(1:W/V) 3.5 >96 B5 5 12.5 甲醇⑹ 2 *乙醇/甲醇(4:lv/v) 3.3 >97 B6 5 12.5 乙腈⑹ 1.5 *乙醇/乙腈(6:3v/v) 3.4 >95 B7 5 14.5 乙酸乙酯 (4) 4 *乙醇/乙酸乙酯(7:2v/v) 3.4 >95 B8 5 16 甲醇⑹ 2 乙醇/甲醇(4··1.5ν/ν) 3.2 >97 B9 5 16 甲醇(4) 2 乙醇/甲醇(4:1ν/ν) 3.1 >97 B10 5 14.5 甲醇(4) 1.5 乙醇/甲醇(7·.2ν/ν) 3.4 >97 B11 5 16 甲醇⑹ 1.5 乙醇/甲醇(8:3ν/ν) 3.2 >97 B12 5 16 甲醇⑹ 2 *乙醇/甲醇(8:3v/v) 3.2 >96 B13 5 16 甲醇⑹ 2 *乙醇/甲醇(8:3v/v) 3.4 >96 B14 5 15 甲醇(5) 2.5 乙醇/甲醇(3:lv/v) 3.2 >97 B15 5 15 甲醇(5) 3 乙醇/甲醇(3:lv/v) 2.7 >97 B16 5 15 甲醇⑹ 3.5 乙醇/甲醇(3:lv/v) 2.6 >99 B17 5 15 甲醇⑶ 4 乙醇/甲醇(3:lv/v) 2.3 >99 B18 5 16 甲醇⑹ 2.5 *乙醇/甲醇(8:3v/v) 3.0 >97 B19 5 16 甲醇⑹ 2.5 *乙醇/甲醇(8:3v/v) 3.2 >98 -26- 200814939 (23) 實施例B 1 組合粗甜菊糖雙苷A ( 77.4%純度，5克）、Z 9 5 %，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（2毫升）立 至回流溫度1 0分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C 1 6 /J 過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5毫升 1.5體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20 )5 0°C乾燥16至24小時，以產生3.2克之純化· >97%以 HPLC 分析）。 實施例B2 組合粗甜菊糖雙苷A ( 77.4%純度，5克）、Z 9 5 %，16毫升）、甲醇（4毫升）及水（2毫升）3 至回流溫度達10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C 。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5毫升 1體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20 | 5 0 °C乾燥1 6至24小時，以產生3 · 1克之純化產物（ 以HPLC分析）。 實施例B3 組合粗甜菊糖雙苷A ( 77.4%純度，5克）、乙 95%，9.5毫升）、：I-丁醇（9.5毫升）及水（！毫升 加熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 時。過濾白色結晶產物，以乙醇：1 - 丁醇混合液（ 升，1 : 1體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓 醇（ 加熱 .時。 ，4 : 毫米 物（ 醇（ 加熱 小時 ，4 : 米） >97% 醇（ )並 1 6小 5毫 (20 -27- 200814939 (24) 毫米）50°C乾燥16至24小時，以產生3.2克之純化產物 (>95%以 HPLC 分析）。 實施例B4 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.37%純度，5克）、乙醇（ 95%，9.5毫升）、甲醇（9毫升）及水（1毫升）並加熱 至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 1 6小時。 φ 過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5毫升，1 : 1 體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米） 5 (TC乾燥16至24小時，以產生3.5克之純化產物（>96% 以HPLC分析）。 實施例B5 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，12.5毫升）、甲醇（6毫升）及水（2毫升）並加 熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C。添加 10毫克之98%純甜菊糖雙苷A晶種至溶液中，令該混合 液於22°C下靜置1 6小時。過濾白色結晶產物，以乙醇： 甲醇混合液（·5毫升，4 : 1體積比）清洗二次，並於真空 烘箱中以低壓（20毫米）5(TC乾燥1 6至24小時，以產生 3.3克之純化產物（>97%以HPLC分析）。 實施例B6 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8 0.3 7%純度，5克）、乙醇（ -28- 200814939 (25) 95%，12·5毫升）、乙腈（6毫升）及水（1·5毫升）並加 熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C °添加 10毫克之98%純甜菊糖雙苷A晶種至溶液中，令該混合 液於22°C下靜置16小時。過濾白色結晶產物，以乙醇： 乙腈混合液（5毫升，6 : 3體積比）清洗二次，並於真空 烘箱中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時，以產生 3.4克之純化產物（>95%以HPLC分析）。 實施例B7 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，14.5毫升）、乙酸乙酯（4毫升）及水（1.5毫升） 並加熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至2 2 °c ° 添加10毫克之98%純甜菊糖雙苷A晶種至溶液中，令該 混合液於22 °C下靜置1 6小時。過濾白色結晶產物，以乙 醇：乙腈混合液（5毫升，7 : 2體積比）清洗二次，並於 # 真空烘箱中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時，以 產生3.4克之純化產物（>95%以HPLC分析）。 實施例B8 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 9 5 %，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（2毫升）並加熱 至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C 1 6小時。 過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5.5毫升’ 4 : 1 .5體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米 -29· 200814939 (26) )5 0°C乾燥16至24小時，以產生3.2克之純化產物（ >97%以 HPLC 分析）。 實施例B9 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8 0.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，1 6毫升）、甲醇（4毫升）及水（2毫升）並加熱 至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至2 2 °C 1 6小時。 Φ 過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5.0毫升，4 : 1體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米） 5 0°C乾燥16至24小時，以產生3·1克之純化產物（>97% 以HPLC分析）。 實施例Β 1 0 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，14.5毫升）、甲醇（4毫升）及水（1.5毫升）並加 熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 1 6小時 。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5 ·0毫升、7 ·· 2體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米 )5 0 °C乾燥1 6至2 4小時’以產生3 · 4克之純化產物（ >97%以 HPLC 分析）。 實施例Β 1 1 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80·37%純度’ 5克）、乙醇（ 95%，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（1.5毫升）並加 -30- 200814939 (27) 熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至2 2 °c 1 6小時 。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5 · 0毫升，8 :3體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米 )50°C乾燥16至24小時，以產生3.2克之純化產物（ >97%以 HPLC 分析）〇 實施例B 1 2 φ 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8〇·37%純度，5克）、乙醇（ 95%，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（2毫升）並加熱 至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C，並添加 10毫克之純甜菊糖雙苷A晶種（>98% )。靜置該混合液 於室溫下16小時。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混 合液（5 · 0毫升，8 : 3體積比）清洗二次，並於真空烘箱 中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時，以產生3.2 克之純化產物（>98%以HPLC分析）。 ⑩ 實施例B 1 3 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（2毫升）並加熱 至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C，並添加 10毫克之純甜菊糖雙苷A晶種（>98%)。於室溫下攪拌 該混合液1 6小時。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混 合液（5.0毫升，8 : 3體積比）清洗二次，並於真空烘箱 中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時’以產生3.4 -31 - 200814939 (28) 克之純化產物（>96%以HPLC分析）。 實施例B 1 4 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8 0.3 7%純度，5克）、乙醇（ 9 5 %，1 5毫升）、甲醇（5毫升）及水（2 · 5毫升）並加 熱至回流溫度1 0分鐘。在攪拌下令該清澈溶液冷卻至 2 2°C 1 6小時。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液 (5.0毫升，3 : 1體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以 低壓（20毫米）50t：乾燥16至24小時，以產生3.2克之 純化產物（>97%以HPLC分析）。 實施例B 1 5 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8 0.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，15毫升）、甲醇（5毫升）及水（3.0毫升）並施 熱至回流溫度1 0分鐘。在攪拌下令該清澈溶液冷卻至 2 2°C 16小時。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液 (5 · 0毫升，3 : 1體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以 低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時，以產生2·7克之 純化產物（>9 7%以HPLC分析）。 實施例B 1 6 組合粗甜菊糖雙苷A( 8 0.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，15毫升）、甲醇（5毫升）及水（3.5毫升）並加 熱至回流溫度1 0分鐘。在攪拌下令該清澈溶液冷卻至 -32- 200814939 (29) 2 2 °C 16小時。過濾白色結晶產物’以乙醇：甲醇混合液 (5.0毫升，3 : 1體積比）清洗二次’並於真空烘箱中以 低壓（20毫米）50 °C乾燥16至24小時’以產生2.6克之 純化產物（>99%以HPLC分析）° 實施例B 1 7 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80·37%純度，5克）、乙醇（ φ 9 5 %，1 5毫升）、甲醇（5毫升）及水（4 · 0毫升）並加 熱至回流溫度1 〇分鐘。在攪拌下令該清澈溶液冷卻至 22〇C 1 6小時。過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液: (5.0毫升，3 : 1體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以 低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時，以產生2·3克之 純化產物（>99%以HPLC分析）。 實施例Β 1 8 # 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（2.5毫升）並加 熱至回流溫度10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22°C。於室 溫下攪拌該混合液1 5至30分鐘，期間開始出現結晶。停 止攪拌’靜置該混合液於室溫下1 6小時。過濾白色結晶 產物’以乙醇：甲醇混合液（5. 〇毫升，8 : 3體積比）清 洗二次’並於真空烘箱中以低壓（2 0毫米）5 0 °C乾燥1 6 至24小時，以產生3.0克之純化產物（>97%以HP Lc分 析）。 •33- 200814939 (30) 實施例B 1 9 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95 %，16毫升）、甲醇（6毫升）及水（2.5毫升）並加 熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2小時 。期間開始出現結晶。於室溫下攪拌該混合液16小時。 過濾白色結晶產物，以乙醇：甲醇混合液（5.0毫升，8 : • 3體積比）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米） 5 〇°C乾燥16至24小時，以產生3.2克之純化產物（>98% 以HPLC分析）。

-34- 200814939 (31) C組實施例

表5 :實施例C1至9之總結 溶劑 粗甜菊糖雙 苷A(克） 有機溶劑 (毫升） 有機共溶劑 (毫升） 水 (毫升) 清洗溶劑 座里 (克） HPLC 純 度(％) C1 5 異丙醇(9.5) 甲醇(9.5) 1 異丙醇/甲醇 (l.lv/v) 3.85 >91 C2 5 二級丁醇(9.5) 甲醇(9.5) 1 甲醇/二級丁醇 (l.lv/v) 4.0 >91 C3 5 μ丙醇(9.5) 甲醇(9·5) 1 甲醇/1-丙醇 (1:1 v/v) 3.55 >91.2 C4 5 乙醇(9.5) 1-丙醇(9.5) 1 乙醇/1-丙醇 (1:1 v/v) 2.5 >94 C5 5 1· 丁醇(9·5) 甲醇(9.5) 1 甲醇/1-丁醇 (1:1 v/v) 3.7 >91.5 C6 5 乙醇(9.5) 2-丙醇(9.5) 1 乙醇/2_丙醇 (1:1 v/v) 2.4 >93.5 C7 5 乙醇(9.5) 二級丁醇(9.5) 1 乙醇/二級丁醇 (1:1 v/v) 2.9 >93 C8 5 三級丁醇(9.5) 甲醇(9.5) 1 甲醇/三級丁醇 (1:1 v/v) 3.9 >83 C9 5 乙醇(9.5) 二級丁醇(9.5) 1 乙醇/三級丁醇 (l:lv/v) 2.9 >88 實施例C 1 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.37%純度，5克）、甲醇（ 99%，9.5毫升）、異丙醇（9.5毫升）及水（1毫升）並 加熱至約4 0至5 0 °C 1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至2 2 °C 2 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過濾白色結晶產物、 以乙醇：甲醇混合液（5 · 0毫升，8 : 3體積比）清洗二次 ，並於真空烘箱中以低壓（2 0毫米）5 〇 °C乾燥1 6至2 4小 -35- 200814939 (32) 時，以產生3·85克之純化產物（>91.0%以HPLC分析） 實施例C2 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、甲醇（ 99%，9·5毫升）、二級丁醇（9.5毫升）及水（1毫升） 並加熱至約40至5 0°C 10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2小時，然後於室溫下攪拌 16小時。過濾白色結晶產物 、以甲醇：二級丁醇混合液（1 0.0毫升，1 : 1體積比） 清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米）50°C乾燥; 16至 24小時，以產生 4.0克之純化產物（>91.0%以 HPLC分析）。 實施例C3 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、甲醇（ 99%，9.5毫升）、1-丙醇（9·5毫升）及水、（1毫升）並 加熱至約40至5 0°C 10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過濾白色結晶產物、 以甲醇_· 丙醇混合液（1〇.〇毫升，1 : 1體積比）清洗二 次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米）50 °C乾燥1 6至24 小時，以產生3.55克之純化產物（>91.21 %以HPLC分析 實施例C4 -36- 200814939 (33) 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8 0.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，9·5毫升）、:I ·丙醇（9·5毫升）及水（1毫升）並 加熱至約40至5 0°C 10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過濾白色結晶產物、 以乙醇：1-丙醇混合液（10.0毫升，1 : 1體積比）清洗二 次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24 小時，以產生2.5克之純化產物（>94.0 %以HPLC分析） 實施例C 5 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、甲醇（ 9 9%，9·5毫升）、1-丁醇（9.5毫升）及水（1毫升）並 加熱至約40至5 0°C 10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過濾白色結晶產物、 以甲醇：1-丁醇混合液（10.0毫升，1 : 1體積比）清洗二 # 次，並於真空烘箱中以低壓（20毫米）50°C乾燥16至24 小時，以產生3.7克之純化產物（>91.5%以HPLC分析） 實施例C 6 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，5克）、乙醇（ 95%，9.5毫升）、2-丙醇（9·5毫升）及水（1毫升）並 加熱至約40至50°C 10分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過濾白色結晶產物、 -37- 200814939 (34) 以乙醇：2-丙醇混合液（10·0毫升，1 : 次，並於真空烘箱中以低壓（2 0毫米） 小時，以產生2.4克之純化產物（>93· 實施例C7 組合粗甜菊糖雙苷Α(77.4%純度 9 5%，9.5毫升）、二級丁醇（9·5毫升 並加熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過 以乙醇：二級丁醇混合液（10.0毫升 洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20 至24小時，以產生2.9克之純化產物 分析）。 _ 實施例C8 組合粗甜菊糖雙苷A (77.4%純度 9 9%，9.5毫升）、三級丁醇（9·5毫为 並加熱至約40至50 °C 10分鐘。令該清 2小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。遇 以甲醇（99%，7 ·0毫升）清洗二次， 低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小疾 純化產物（>83.0%以HPLC分析）。 1體積比）清洗二 5〇°C乾燥16至24 5%以HPLC分析）

，5克）、乙醇（ Ο及水（1毫升） 溶液冷卻至22°C 2 滤白色結晶產物、 ，1 : 1體積比）清 毫米）5 0 °C乾燥1 6 J ( >93.0%以 HPLC ，5克）、甲醇（ )及水（1毫升） 澈溶液冷卻至22°C 濾白色結晶產物、 並於真空烘箱中以 :，以產生3.9克之 -38- 200814939 (35) 實施例C9 組合粗甜菊糖雙苷A ( 77 ·4%純度，5克）、乙醇（ 95%，9.5毫升）、三級丁醇（9.5毫升）及水（1毫升） 並加熱至回流溫度1 〇分鐘。令該清澈溶液冷卻至22 °C 2 小時，然後於室溫下攪拌1 6小時。過濾白色結晶產物、 以乙醇（9 5 %，7.0毫升）清洗二次，並於真空烘箱中以 低壓（20毫米）50°C乾燥16至24小時，以產生2.9克之 _ 純化產物（>88.0%以HPLC分析）。

D組實施例 表6 :實施例D1至12之總結 溶劑 粗甜菊糖雙 苷(克） 有機溶劑 (毫升） 水 (毫升） 清洗溶劑 產量(克） HPLC 純度(％) D1 50 甲醇(180) 20 甲醇 29.8 96.2 D2 50 甲醇(160) 40 甲醇 31.2 95.5 D3 50 乙醇(188) 12 乙醇 37.3 93.4 D4 50 乙醇(184) 16 乙醇 31.7 95.3 D5 50 乙醇(180) 10 乙醇 35.7 94.7 D6 50 乙醇(176) 24 乙醇 38.2 97.3 D7 50 乙醇(172) 28 乙醇 32 98.1 D8 50 乙醇(160) 40 乙醇 19.8 99.5 D9 50 1-丙醇(180) 20 1-丙醇 27 92.9 D10 50 、 2-丙醇(180) 20 2-丙醇 34.9 91.4 D11 50 1-丁醇(180) 20 1-丁醇 40.6 93.1 D12 50 2-丁醇(180) 20 2-丁醇 40.4 90.5 實施例D 1 組合粗甜菊糖雙苷Α(77·4%純度，50克）、甲醇（ -39- 200814939 (36) 99%，180毫升）及水（20毫升）並加熱至回流 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時 結晶產物、以甲醇（99%，25毫升）清洗二次 烘箱中以低壓（20毫米）60°C乾燥16至24小B 29.8克之純化產物（96·2%以HPLC分析）。 實施例D2 φ 組合粗甜菊糖雙苷Α( 8 0.3 7%純度，50克： 99%，160毫升）及水（40毫升）並加熱至回流 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1周。過濾白名 、以甲醇（99%，25毫升）清洗二次，並於真2 低壓（2 0毫米）6 0 °C乾燥16至2 4小時，以產 之純化產物（95.5%以1^1^分析）。 實施例D3 φ 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8〇·37%純度，5〇克） 95 %，1 8 8毫升）及水（1 2毫升）並加熱至回流 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。 結晶產物、以乙醇（9 5 %，2 5毫升）清洗二次， 烘箱中以低壓（20毫米）60 °C乾燥16至24小 3 7.3克之純化產物（93·4%以HPLC分析）。 實施例D4 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8〇·3 7%純度，50克） 溫度3 0分 過濾白色 並於真空 ί，以產生 、甲醇（ 溫度3 0分 包結晶產物 Ε烘箱中以 生31.2克 、乙醇（ 溫度3 0分 過濾白色 並於真空 宇，以產生 、乙醇（ -40- 200814939 (37) 95%，1 84毫升）及水（1 6毫升）並加熱至回流名 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。 結晶產物、以乙醇（95%，25毫升）清洗二次， 烘箱中以低壓（20毫米）60 °C乾燥16至24小時 3 1.7克之純化產物（95· 3 %以HPLC分析）。 實施例D5 φ 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8〇·37%純度，50克） 9 5 %，1 8 0毫升）及水（2 0毫升）並加熱至回流名 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。 結晶產物、以乙醇（95%，25毫升）清洗二次， 烘箱中以低壓（20毫米）60 °C乾燥16至24小時 3 5.7克之純化產物（94.7%以HPLC分析）。 實施例D6 • 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.37%純度，50克） 95%，176毫升）及水（24毫升）並加熱至回流ί 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。 結晶產物、以乙醇（95%，25毫升）清洗二次， 烘箱中以低壓（20毫米）60°C乾燥16至24小時 3 8.2克之純化產物（97.3%以HPLC分析）。 實施例D7 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，50克） i度30分 過濾白色 並於真空 ，以產生 、乙醇（ I度30分 過濾白色 並於真空 ，以產生 、乙醇（ ί度3 0分 過濾白色 並於真空 ，以產生 、乙醇（ -41 - 200814939 (38) 95%，172毫升）及水（28毫升）並加熱至回流溫度30分 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。過濾白色 結晶產物、以乙醇（95%，25毫升）清洗二次，並於真空 烘箱中以低壓（20毫米）60°C乾燥16至24小時，以產生 32.0克之純化產物（98.1 %以HPLC分析）。 實施例D8 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，50克）、乙醇（ 95%，160毫升）及水（40毫升）並加熱至回流溫度30分 鐘。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。過濾白色 結晶產物、以乙醇（95%，25毫升）清洗二次，並於真空 烘箱中以低壓（20毫米）60 °C乾燥16至24小時，以產生 1 9.8克之純化產物（99.5%以HPLC分析）。 實施例D9 # 組合粗甜菊糖雙苷A(8〇·37%純度’ 50克）、1-丙醇 (1 8 0毫升）及水（20毫升）並加熱至回流溫度3 0分鐘 。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至2 4小時。過濾白色結 晶產物、以1 -丙醇（2 5毫升）清洗二次’並於真空烘箱 中以低壓（20毫米）6〇°(：乾燥16至24小時’以產生27.0 克之純化產物（92·9%以HPLC分析）。 實施例D 1 0 組合粗甜菊糖雙苷A ( 8 0.3 7%純度’ 50克）、2-丙醇 -42 - 200814939 (39) (1 8 0毫升）及水（2 0毫升）並加熱至回流溫度3 0 。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至2 4小時。過濾白 晶產物、以2-丙醇（25毫升）清洗二次’並於真空 中以低壓（2 0毫米）6 0 °C乾燥1 6至2 4小時，以產生 克之純化產物（91.4%以HPLC分析）。 實施例D 1 1 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，50克）、1. (180毫升）及水（20毫升）並加熱至回流溫度30 。令該混合液冷卻至環境溫度16至24小時。過濾白 晶產物、以1 -丁醇（25毫升）清洗二次，並於真空 中以低壓（20毫米）60 °C乾燥16至24小時，以產生 克之純化產物（93.1%以1^1^(：分析）。 實施例D 1 2 組合粗甜菊糖雙苷A ( 80.3 7%純度，50克）、2· (180毫升）及水（20毫升）並加熱至回流溫度30 。令該混合液冷卻至環境溫度1 6至24小時。過濾白 晶產物、以2-丁醇（25毫升）清洗二次，並於真空 中以低壓（20毫米）60°C乾燥16至24小時，以產生 克之純化產物（90.5%以HPLC分析）。 分鐘 色結 烘箱 34.9 丁醇 分鐘 色結 烘箱 40.6 丁醇 分鐘 色結 烘箱 40.4 -43 - 200814939 (40) E組實施例 裹__L :意导例E 1 , E!之總結 粗苷菊糖雙苷A 乙醇(95%) 有機共溶劑 水 甲醇漿液 產量 HPLC純度 (克） (毫升） (毫升） (毫升） (毫升） (克） (%) E1 50 160 甲醇(60) 25 200 12.7 >97 E2 50 _ 160 甲醇(60) 25 300 18.6 >97 E3 50 160 甲醇(60) 25 350 22.2 >97 實施例E 1 於22°C下藉攪拌組合粗甜菊糖雙苷a (41%純度，50 克）、乙醇（95%，160毫升）、甲醇（99.8%，60毫升） 及水（2 5毫升）。白色產物在5至2 0小時內結晶。繼續 攪拌該混合物48小時。過濾白色結晶產物，並以乙醇（ 95% ’ 25毫升）清洗二次。接著令白色結晶產物之濕餅在 甲醇中（99.8%，200毫升）漿化16小時、過濾、以甲醇 (99· 8% ’ 25毫升）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（ 2 〇毫米）6 0 °C乾燥1 6至2 4小時，以產生1 2 · 7克之純化 產物（>97%以HPlc分析）。 實施例E2 於22艺下藉攪拌組合粗甜菊糖雙苷A(48%純度，50 克）、乙醇（95%，160毫升）、甲醇（99.8%，60毫升） 及水（2 5毫升）。白色產物在3至6小時內結晶。繼續攪 拌該混合物4 8小時。過濾白色結晶產物，並以乙醇（9 5 % ，2 5毫升）清洗二次。接著令白色結晶產物之濕餅在甲醇 中（9 9 · 8 % ’ 3 0 0毫升）漿化16小時、過濾、以甲醇（ -44 - 200814939 (41) 99 · 8%，25毫升）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（20 毫米）60°C乾燥16至24小時，以產生18 · 6克之純化產物 (>97%以 HPLC 分析）。 實施例Ε3 於22°C下藉攪拌組合粗甜菊糖雙苷A (55%純度，50 克）、乙醇（95%，160毫升）、甲醇（99.8%，60毫升） φ 及水（2 5毫升）。白色產物在1 5至3 0分鐘內結晶。繼續 攪拌該混合物48小時。過濾白色結晶產物，並以乙醇（ 95%，25毫升）清洗二次。接著令白色結晶產物之濕餅在 甲醇中（99.8%，3 5 0毫升）漿化16小時、過濾、以甲醇 (99.8%，25毫升）清洗二次，並於真空烘箱中以低壓（ 20毫米）60 °C乾燥16至24小時，以產生22.2克之純化 產物（>97%以HPLC分析）。

_ 實施例F 利用上述純化技術製備實質上純的甜菊糖雙苷 A ( >97%純度，以HPLC分析），取其加入雙蒸餾水（12.5克 於50毫升中，濃度25% )並於40°C下攪拌該混合物5分 鐘以配置溶液。立刻用 Lab-Plant SD-04噴霧乾燥器（ Lab-Plant Ltd·，West Yorkshire，U.K·)將該清澈溶液噴 霧乾燥，以形成非晶型之甜菊糖雙苷Α。溶液透過進料泵 被吸取至噴嘴噴霧器，使甜菊糖雙苷A溶液在固定流量之 氮氣/空氣的協助下被霧化成霧滴噴液。水份在乾燥室受 -45- 200814939 (42) 控制之溫度條件（約9 0至約9 7 °C )及氣流條件下自霧滴 中蒸發，導致形成乾燥顆粒。此乾燥粉末（1 1至12克， 水分6.74%)被連續送出乾燥室並收集於罐中。在室溫下 之溶水性經測定爲>35.0%。 雖然本發明詳細說明特定實施態樣，應了解的是該領 域之技術人士一旦理解前述內容將可輕易地構想出這些實 施態樣之改變、變化及相等物。因此’本發明之範圍應被 φ 視爲其申請專利範圍及任何彼等相同物之範圍。 【圖式簡單說明】 圖1係本發明之實施態樣中純化甜菊糖雙苷A之方法 的圖示說明。 圖2係本發明之實施態樣中甜菊糖雙苷A、多晶型及 非晶型之甜菊糖雙苷A之形成及轉換圖示。 圖3係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 _ 2Θ作圖比較4種甜菊糖雙苷A多晶型（第1、2、3A及 3B型）之粉末X光繞射掃描結果。 圖4係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 2Θ作圖比較甜菊糖雙苷A多晶型（第1及2型）之粉末 X光繞射掃描結果。 圖5係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 2Θ作圖比較甜菊糖雙苷A多晶型（第3A及3B型）之粉 末X光繞射掃描結果。 圖6係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 -46— 200814939 (43) 2Θ作圖比較甜菊糖雙苷A多晶型（第2 ' 3A及3B型）之 粉末X光繞射掃描結果。 圖7係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 2Θ作圖顯示甜菊糖雙苷A多晶型第1型之粉末X光繞射 掃描結果。 圖8係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 2Θ作圖顯示甜菊糖雙苷A多晶型第2型之粉末X光繞射 ⑩ 掃描結果。 圖9係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射角 2Θ作圖顯示甜菊糖雙苷A多晶型第3A型之粉末X光繞射 掃描結果。 圖1 〇係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射 角2Θ作圖顯示甜菊糖雙苷a多晶型第3B型之粉末X光 繞射掃描結果。 圖1 1係於本發明之實施態樣中，以散射強度對散射 # 角2Θ作圖顯示甜菊糖雙苷A非晶型第4型之粉末X光繞 射掃描結果。 -47-

Claims (1)

1. 200814939 (1) 十、申請專利範圍 1 · 一種純化甜菊糖雙苷A之方法，該法包含下列步 驟： 組合粗甜菊糖雙苷A與含水有機溶劑以形成甜菊糖雙 苷A溶液（該含水有機溶液包含按重量計自約1 〇%至約 25%之量的水）；及 在單一步驟中自甜菊糖雙苷A溶液結晶出實質上純的 φ 甜菊糖雙苷A組成物，該組成物包含純度（按乾物質重量 計）高於約95 %之甜菊糖雙苷A。 2·如申請專利範圍第1項之方法，該法進一步包含 加熱該甜菊糖雙苷A溶液之步驟。 3 ·如申請專利範圍第2項之方法，該法進一步包含 冷卻該甜菊糖雙苷A溶液之步驟。 4 ·如申請專利範圍第〗項之方法，其中在單一結晶 步驟中之甜菊糖雙苷A溶液係經攪拌或未經攪拌。 φ 5 ·如申請專利範圍第1項之方法，該法進一步包含 在適當溫度下添加足以促進甜菊糖雙苷A結晶之量之甜菊 糖雙苷A至甜菊糖雙苷A溶液中之添加晶種步驟（可選 擇）。 6 ·如申請專利範圍第1項之方法，該法進一步包含 分離及清洗該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之步驟。 7 ·如申請專利範圍第6項之方法，該法進一步包含 乾燥該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之步驟。 8 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該粗甜菊糖 -48- 200814939 (2) 雙苷A實質上不包含甜菊糖雙苷D雜質，且該法進一步 包含於含水有機溶劑或有機溶劑中漿化該實質上純的甜菊 糖雙苷A組成物。 9 ·如申請專利範圍第8項之方法，該法進一步包含 分離及清洗該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之步驟。 1 0 ·如申請專利範圍第9項之方法，該法進一步包含 乾燥該實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之步驟。 • 1 1 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該含水有機 溶劑包含一種由至少一種有機溶劑與水組成之混合物。 1 2 ·如申請專利範圍第1 1項之方法，其中至少一種 有機溶劑包含一種醇。 1 3 ·如申請專利範圍第1 2項之方法，其中該醇包含 乙醇。 1 4 ·如申請專利範圍第1 2項之方法，其中該醇包含 甲醇。 • 1 5 ·如申請專利範圍第1 2項之方法，其中該醇包含 乙醇及甲醇之混合物。 1 6 .如申請專利範圍第1 5項之方法，其中該乙醇及 甲醇係以自約2 0份至約1份乙醇對約1份甲醇之重量比 存在於該含水有機溶液中。 1 7·如申請專利範圍第1 5項之方法，其中該乙醇及 甲醇係以自約3份至約1份乙醇對約1份甲醇之重量比存 在於該含水有機溶液中。 1 8 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該至少一種 -49- 200814939 (3) 含水有機溶劑包含選自丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、1 -丙醇 、異丙醇、1-丁醇、2-丁醇、三級丁醇及該等混合物之有 機溶劑。 1 9.如申請專利範圍第1項之方法，其中該含水有機 溶劑及該粗甜菊糖雙苷A係以自約4至約1 0份含水有機 溶劑對約1份粗甜菊糖雙苷A之重量比存在於該甜菊糖雙 苷A溶液中。 • 20.如申請專利範圍第1項之方法，其中該含水有機 溶劑及該粗甜菊糖雙苷A係以自約3至約5份含水有機溶 劑對約1份粗甜菊糖雙苷A之重量比存在於該甜菊糖雙苷 A溶液中。 2 1 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中含水有機溶 劑包含按重量計自約10%至約25%之量的水。 22.如申請專利範圍第1項之方法，其中該粗甜菊糖 雙苷A混合物包含純度自約40%至約95% (按重量計）之 _ 甜菊糖雙苷A。 23 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該粗甜菊糖 雙苷A混合物包含純度自約60%至約85% (按重量計）之 甜菊糖雙苷A。 24·如申請專利範圍第1項之方法，其中該粗甜菊糖 雙苷A混合物包含純度自約70%至約85% (按重量計）之 甜菊糖雙苷A。 25·如申請專利範圍第丨項之方法，其中該法係於近 室溫下進行。 -50- 200814939 (4) 26·如申請專利範圍第2項之方法，其中該加熱甜菊 糖雙苷Α溶液之步驟包含加熱甜菊糖雙苷a溶液至自約 2〇°C至約4〇°C之溫度範圍內。 27 ·如申請專利範圍第2項之方法，其中該加熱甜菊 糖雙苷A溶液之步驟包含加熱甜菊糖雙苷a溶液至自約 40°C至約6〇°c之溫度範圍內。 28·如申請專利範圍第2項之方法，其中該加熱甜菊 糖雙苷A溶液之步驟包含加熱甜菊糖雙苷a溶液至約回 流溫度。 2 9 ·如申請專利範圍第3項之方法，其中該冷卻甜菊· 糖雙苷A溶液之步驟包含冷卻甜菊糖雙苷a溶液至自約 4°C至約25Ί〇之溫度範圍內。 3 0.如申請專利範圍第3項之方法，其中該冷卻甜菊 糖雙苷Α溶液之步驟包含冷卻甜菊糖雙苷a溶液約0.5小 時至約24小時之時間。 • 3 1 ·如申請專利範圍第1項之方法，其中該實質上純 的甜菊糖雙苷A產物包含純度（按乾物質重量計）高於約 97°/。甜菊糖雙苷A之甜菊糖雙苷A。 32·如申請專利範圍第1項之方法，其中該實質上純 的甜菊糖雙苷A產物包含純度（按乾物質重量計）高於約 98 %甜菊糖雙苷A之甜菊糖雙苷A。 33 .如申請專利範圍第1項之方法，其中該實質上純 的甜菊糖雙苷A產物包含純度（按乾物質重量計）高於約 99%甜菊糖雙苷A之甜菊糖雙苷A。 -51 - 200814939 (5) 3 4 ·如申請專利範圍第1項之方法，該法進一步包含 下列步驟： 加熱甜菊糖雙苷A含水有機溶劑混合物； 冷卻甜菊糖雙苷A溶液； 分離及清洗實質上純的甜菊糖雙苷A組成物； 及 乾燥該貫質上純的甜菊糖雙昔A組成物。 φ 35· —種藉由申請專利範圍第1項之方法所製備之實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物，其中該實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物包含其X光繞射模式實質上類似圖7之多 晶型。 3 6 · —種藉由申請專利範圍第1項之方法所製備之實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物，其中該實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物包含其X光繞射模式實質上類似圖8之多 晶型。 φ 3 7 . —種藉由申請專利範圍第1項之方法所製備之實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物，其中該實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物包含其X光繞射模式實質上類似圖9之多 晶型。 3 8 . —種藉由申請專利範圍第1項之方法所製備之實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物，其中該實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物包含其X光繞射模式實質上類似圖1〇之多 晶型。 39. —種藉由申請專利範圍第1項之方法所製備之實 -52- 200814939 (6) 質上純的甜菊糖雙苷A組成物，其中該實質上純的甜菊糖 雙苷A組成物包含其X光繞射模式實質上類似圖1 1之非 晶型。 40.如申請專利範圍第1項之方法，該方法進一步包 含形成實質上純的甜菊糖雙苷A組成物之非晶型之步驟。 4 1·如申請專利範圍第3 8項之方法，其中該形成實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物之非晶型之步驟包含選自球 φ 磨法、沉澱法、凍乾法、凍磨法及噴霧乾燥法中之方法。 42 · —種藉由申請專利範圍第〗項之方法所製備之實 質上純的甜菊糖雙苷A組成物。

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